SK145398A3

SK145398A3 - Pyrazinone thrombin inhibitors

Info

Publication number: SK145398A3
Application number: SK1453-98A
Authority: SK
Inventors: Philip E Sanderson; Terry A Lyle; Bruce D Dorsey; Richard J Varsolona
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1996-04-23
Filing date: 1997-04-18
Publication date: 1999-05-07
Also published as: CZ340898A3; PE13399A1; JP3140790B2; NZ331993A; CA2252964A1; IL126404A0; EP0900207B1; WO1997040024A1; DE69709727T2; JP2000508334A; BG102948A; HRP970211A2; TR199802133T2; AU714985B2; NO984928D0; PL329441A1; DE69709727D1; EE9800353A; NO984928L; EP0900207A1

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka zlúčeniny inhibujúcej úbytok krvných doštičiek, vytváranie agregátov krvných doštičiek, tvorbu fibrínu, vytváranie trombu a embólií u cicavcov.

Doterajší stav techniky

Trombín je serínová proteáza prítomná v krvnej plazme vo forme prekurzora, protrombínu. Trombín má kľúčovú úlohu v mechanizme koagulácie krvi premenou rozpusteného proteínu plazmy fibrinogénu na nerozpustný fibrín.

Edward a ďalší, J. Amer. Chem. Soc., (1992) diel 114, str. 1854 - 63, opisuje peptid a-ketobenzoxazoly, ktoré sú reverzibilné inhibítory serínových proteáz ľudskej leukocytovej elastázy a prasačej pankreatickej elastázy.

Európska zverejnená prihláška 363 284 opisuje analózy peptidových substrátov, v ktorých bol atóm dusíka odštiepiteľnej amidovej skupiny peptidového substrátu nahradený atómom vodíka alebo substituovanou karbonylovou skupinou.

Austrálska zverejnená prihláška 86245677 opisuje aj inhibítory peptidáz s aktivovanou elektrofilnou ketónovou skupinou ako sú fluórmetylénketón alebo a-ketokarboxylové deriváty.

R. J. Brown a ďalší, J. Med. Chem., diel 37, str. 1259 až 1261 (1994) opisuje orálne aktívne nepeptidové inhibítory ľudskej leukocytovej elastázy, ktoré obsahujú trifluórmetylketónové a pyridinónové skupiny.

H. Mack a ďalší, J. Enzýme Inhibition, diel 9, str. 73 až 86 (1995) opisuje rigídne amidino-fenylalanínové trombínové inhibítory, ktoré obsahujú pyridinónovú skupinu ako centrálnu štruktúru jadra.

-2Podstata vynálezu

Vynález sa týka zlúčeniny inhibujúcej úbytok krvných doštičiek, vytváranie agregátov krvných doštičiek, tvorbu fibrínu, vytváranie trombu a embóliu u cicavcov, farmaceutického prostriedku obsahujúceho zlúčeninu podľa vynálezu spolu s farmaceutický prijateľným nosičom. Tieto prostriedky môžu prípadne obsahovať antikoagulanty, prostriedky pôsobiace proti doštičkám a trombolytické prostriedky. Prostriedky môžu byť na dosiahnutie požadovaného inhibičného účinku pridávané do krvi, krvných produktov alebo cicavčích orgánov.

Vynález tiež zahrnuje prostriedok na prevenciu alebo na liečenie nestabilnej angíny, refraktérnej angíny, infarktu myokardu, prechodných ischemických záchvatov, fibrilácie siení, mŕtvice na báze trombózy, mŕtvice na báze embólie, trombózy hlbokých žíl, roztrúsenej intravaskulárnej koagulácie, tvorby fibrínu v oku a reoklúzie alebo restenózy spriechodnených ciev u cicavcov, ktoré obsahujú zlúčeninu podľa vynálezu vo farmaceutický prijateľnom nosiči. Tieto prostriedky môžu prípadne obsahovať antikoagulanty, prostriedky pôsobiace proti krvným doštičkám a trombolytické prostriedky.

Vynález tiež zahrnuje spôsob zníženia trombogenicity povrchu u cicavcov naviazaním zlúčeniny podľa vynálezu kovalentne alebo nekovalentne na povrch.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú použiteľné ako inhibítory trombínu a majú terapeutický význam, napríklad pri prevencii ochorení srdcových tepien a vyznačujú sa nasledujúcou štruktúrou:

N'

H

O kde

Wje atóm vodíka

R¹OCO,

-3R¹CO,

R¹(CH₂)_nNHCO alebo (R¹)₂CH(CH₂)nNHCO, kde n je 0 až 4;

R¹ je R²,

R²(CH2)mC(R¹²)2, kde m je O až 3 a každá skupina R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, (R²)(OR²)CH(CH₂)_P, kde p je 1 až 4,

R²C(R¹²)2(CH2)m, kde m je 0 až 3 a každá R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, kde (R¹²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde C znamená C^cykloalkyl,

R²CH2C(R¹²)2(CH₂)_q, kde q je 0 až 2 a každá R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, kde (R¹²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde C znamená C₃.₇cykloalkyl, (R²)2CH(CH2)r, kde r je 0 až 4 a každá R² môže byť rovnaká alebo rôzna a kde (R²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde CH znamená C3.₇cykloalkyl, C₇_i₂bicyklický alkyl, C10-16 tricyklický alkyl alebo 5- až 7-členný mono- alebo bicyklický heterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje od jedného do troch heteroatómov, zvolených zo skupiny N, O a S,

R²O(CH₂)_P, kde p je 1 až 4 alebo

R²(COOR³)(CH₂)_r, kde r je 1 až 4;

R² a R¹⁴ sú nezávisle fenyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami Ci.₄alkyl, Ci_₄alkoxy, halogén, hydroxy, COOH, CONH₂ alebo SO₂NH₂, naftyl, bifenyl,

5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný bicyklický heterocyklický kruh alebo neheterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, kde heterocyklický kruh obsahuje od jedného do štyroch heteroatómov zvolených zo skupiny N, O a Sa kde heterocyklický alebo neheterocyklický kruh je nesubstituovaný alebo substituovaný skupinami halogén alebo hydroxy,

Ci.₇alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

-4COOH, amino, aryl.

C₃.7cykloalkyl, cf₃,

N(CH₃)_2iCi.₃alkylaryl, heteroaryl, alebo heterocykloalkyl,

CF₃,

C₃.7cykloalkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný arylom, C₇.i2bicyklický alkyl alebo Cio-i6tricyklický alkyl;

R³ je atóm vodíka,

Ci.₄alkyl,

C₃.7cykloalkyl alebo trifluórmetyl;

X je atóm vodíka alebo halogén;

A je zvolené z nasledujúcich radikálov:

kde Y¹ a Y² sú nezávisle atóm vodíka, Ci-₄alkyl, Ci-4alkoxy, C₃-7cykloalkyl, halogén alebo

x.’.V'-ip h.·.- r ’

-5trifluórmetyl;

R⁴ je atóm vodíka,

CMalkyl,

Cualkoxy, halogén,

-OCH₂CF₃,

-OCH2CN,

-COOH,

-OH,

-COOR⁶, kde R⁶ je Ci-4alkyl,

-CONR⁷R⁸, kde R⁷ a R⁸ sú nezávisle atóm vodíka alebo Ci.₄alkyl,

-(CH₂)_mOH,

-CH₂NHC(O)CH₃,

-CH₂NHC(O)CF_3i

-ch₂nhso₂ch₃,

-so₂nh₂,

-(CH₂)i.₄SO₂NR⁷R⁸,

-(CH₂)^SO₂R⁶,

5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný bicyklický heterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje od jedného do štyroch heteroatómov zvolených zo skupiny N, O a S,

-ZCH₂CO₂H,

-ZCH₂CO₂CH₃,

-zch₂r¹⁴,

-ZCH₂C0₂(CH₂)₁.₃CH_3i

-ZÍCHR^vaCÍOJNR¹⁰ alebo R¹¹, kde

R⁹ je H alebo CMalkyl,

R¹⁰ a R¹¹ sú nezávisle atóm vodíka,

C₃.₇cykloalkyl,

-6aryl, heteroaryl, heterocykloalkyl,

-(CH₂)₁.₂NCH₂CH₃,

Ci-₄alkyl nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami:

hydroxy,

COOH, amino, aryl, heteroaryl alebo heterocykloalkyl alebo

R¹⁰ a R¹¹ sú spojené za vytvorenia stvor- až sedemčlenného cykloalkylového kruhu nesubstituovaného alebo substituovaného skupinami hydroxy, amino alebo aryl, kde Z je O, S alebo CH₂;

R⁵ atóm vodíka, halogén,

C₁.₄alkyl,

Ci.₄alkoxy,

CF₃,

CN alebo CO₂NH₂ a

R¹² je atóm vodíka, fenyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami Ci_₄alkyl, Ci.₄alkoxy, halogén, hydroxy, COOH, CONH₂, naftyl, bifenyl,

-Ί Ci^alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

COOH, amino, aryl, heteroaryi, aelbo heterocykloalkyl,

CF₃,

C3-7cykloalkyl,

C₇.i2bicyklický alkyl alebo Cio-i6tricyklický alkyl;

a ich farmaceutický prijateľné soli.

V jednej triede zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných solí znamená R³Ci.₄alkyl.

V podtriede tejto triedy zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných solí A je zvolené z nasledujúcich radikálov:

kde Y¹ a Y² sú nezávisle atóm vodíka alebo Ci-₄alkyl; R⁴ je atóm vodíka, halogén,

-OCH2CN,

-OH,

-ZCH2CO2H,

-Z(CHR⁹)₁.₃C(O)NR¹⁰R¹¹, kde

R⁹ je H alebo Ci_₄alkyI,

-8R¹⁰ a R¹¹ sú nezávisle atóm vodíka,

C₃.₇cykloalkyl,

-(CH₂)i-2NCH₂CH₃, alebo Ci.₄alkyl, kde Z je O, S alebo CH₂;

R⁵ je atóm vodíka, halogén alebo CF₃.

V skupine tejto podtriedy zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných solí Wje H alebo R¹.

V podskupine tejto skupiny zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných solí R¹je

R²,

R²(CH2)mC(R¹²)2, kde m je 0 až 3 a každá skupina R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna,

R²C(R¹²)2(CH2)m, kde m je 0 až 3 a každá R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, kde (R¹²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde C znamená C₃.7cykloalkyl, (R²)2CH(CH2)r, kde r je 0 až 4 a každá R² môže byť rovnaká alebo rôzna a kde (R²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde CH znamená C₃.₇cykloalkyl, C₇_i₂bicyklický alkyl, C₁₀-i6 tricyklický alkyl alebo 5- až 7-členný mono- alebo bicyklický heterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje od jedného do troch heteroatómov, zvolených zo skupiny N, O a S,

R²O(CH₂)_P, kde p je 1 až 4;

R² a R¹⁴ sú nezávisle fenyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami Ci-₄alkyl, C^alkoxy, halogén, hydroxy alebo SO₂NH₂,

5- až 7-členný mono- alebo 9- až 10-členný bicyklický heterocyklický kruh alebo neheterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený, kde heterocyklický kruh obsahuje od jedného do štyroch heteroatómov zvolených zo skupiny N, O a S a kde heterocyklický alebo neheterocyklický kruh je nesubstituovaný alebo substituovaný skupinami halogén alebo hydroxy,

-9Ci.₇alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

COOH,

C3-7cykloalkyl,

CF₃,

N(CH₃)₂,

Ci.₃alkylaryl, heteroaryl, alebo heterocykloalkyl,

CF₃, alebo

C₃-7cykloalkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný aryiom; a R¹² je atóm vodíka,

Ci_4alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

COOH, amino, aryl, heteroaryl, aelbo heterocykloalkyl.

V rodine tejto podskupiny zlúčenín a ich farmaceutický prijateľných solí,

A je i)

kde

R⁵ je H, fluór, chlór a

-10R¹⁰ a R¹¹ sú nezávisle zvolené zo skupín atóm vodíka,

C2H5,

CáH₅, (CH₂)₂N(CH₃)₂,

Ci.₃cykloalkyl,

ch₃^^^NH2 /7

-11 kde R⁴ je OH, chlór, H, -OCH2CN, fluór, -OCH2COOH, a R⁵ je chlór alebó CF3, vi)

R³ je CH₃, alebo CH₂CH₃;

X je H alebo chlór; a Wje PhCH₂CH₂, (CH₃)₃C-,

HOOCCH₂,

CF₃CH₂, (CH₃)₂N(CH₂)_2i

PhCH₂O(CH₂)₂,

PhCH(CH₃),

PhCH₂CH(COOH),

CH₃(CH₂)₅,

PhCH₂,

H,

CH₃(CH₂)₄,

CH₃CH₂CH(CH₃)CH_2i (Ph)₂CHCH₂,

PhCH₂CH(CH₃),

PhCH₂C(CH₃)₂,

PhCH(CH₃)CH₂, (CH₃)₂CH,

PhCH(OH)CH₂,

PhC(CH₃)CH₂.

(Ph)₂CHCH₂,

-12>—l.

O~CH_{2 t} £>-ch₂ch₂

(CH^g

O

S ch₂

0·^%

(CH₂)₂ ,

^J-o-(ch2)₂ ^ho_O^^(ch2)2

H₃c—(CH^

%^(^ch2)₂ ,

Ιΐ C(CH₃)₂CH₂

CHoNH/VCH₂C(CH₃)

C(CH₃)₂CH₂

CH₂CH(CH₃)

(CH2)₂ , (CH2)₂

F

OMe

y

Príklady tejto rodiny sú vymenované v nasledujúcich tabuľkách 1 až 4 a zahrnujú (metylová skupina je označovaná tak ako je obvyklé, jednoduchou väzbou pripojenou na kruh):

Ν

Η

Ο

Konkrétnym príkladom je zlúčenina 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón a jej farmaceutický prijateľné soli. Konkrétnou soľou tejto zlúčeniny je dihydrochlorid 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu. Túto soľ je možné pripraviť v jednej z dvoch kryštalických polymorfných formách, ktoré budú ďalej označované ako „typ A“ a „typ B“ (viď príklad V).

Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu obsahovať centrá chirality a vyskytujú sa ako racemáty, racemické zmesi a ako jednotlivé diastereoméry alebo enantioméry, pričom všetky izomérne formy sú zahrnuté v rámci predkladaného vynálezu. Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu môžu tiež mať polymorfné kryštalické formy, kde všetky polymorfné kryštalické formy sú zahrnuté v rámci predkladaného vynálezu.

Ak sa v akejkoľvek zložke alebo vo vzorci I vyskytuje akákoľvek premenná viac ako raz, jej definícia pri každom výskyte je nezávislá na jej definícii pri každom ďalšom výskyte. Tiež kombinácie substituentov a/alebo premenných sú prípustné len v tých prípadoch, ak tieto kombinácie vedú k stabilným zlúčeninám.

- 18Ďalej sú uvedené niektoré skratky, ktoré sa môžu v prihláške vyskytnúť.

Skratky:

Označenie	Ochranná skupina
BOC (Boe) CBZ (Cbz) TBS (TBDMS)	t-butyloxykarbonyl benzyloxykarbonyl (karbobenzoxy) t-butyl-dimetylsilyl

Aktivačná skupina

HBT (HOBT alebo HOBt) 1-hydroxybenzotriazolhydrát

Označenie	Väzbové činidlo
činidlo BOP	benzotriazol-1 -yloxytris-(dimetylaminofosfónium hexafluórfosfát
BOP-CI	bis(2-oxo-3Oxazolidinyl)fosfínchlorid
EDC	1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid hydrochlorid

Ďalšie
(BOC)₂O(BOC₂O) n-Bu₄N+F- nBuLi (n-Buli) DMF	di-t-butyl dikarbonát tetrabutylamóniumfluorid n-butyllítium dimetylformamid
Et₃N (TEA) EtOAc	trietylamín etylacetát
TFA	kyselina trifluóroctová
DMAP	dimetylaminopyridín
DME	dimetoxyetán
NMM	N-metylmorfolín
DPPA	difenylfosforylazid
THF	tetrahydrofurán
DIPEA	diizopropyletylamín

- 19Aminokyseliny lle

Fe

Pro

Ala

Val izoľeucín fenylalanín prolín alanín valín

Ako sa tu používa „alkyl“ má zahrnovať tak priame ako aj rozvetvené nasýtené alifatické uhľovodíkové skupiny s udaným počtom atómov uhlíka (Me je metyl, Et je etyl, Pr je propyl, Bu je butyl); „alkoxy“ označuje priamu alebo rozvetvenú alkylovú skupinu s uvedeným počtom atómov uhlíka pripojenú kyslíkovým mostíkom; „halogén“, ako sa tu používa, znamená fluór, chlór, bróm a jód; a „protiión“ (counterion) sa používa na označenie malého iónu s jedným negatívnym nábojom, ako je chlorid, bromid, hydroxid, acetát, trifluóroacetát, perchlorát, nitrát, benzoát, maleát, sulfát, tartrát, hemitartrát, benzénsulfonát a podobne.

Termín „C3-7cykloalkyľ má označovať cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl a podobne.

Termín „C7-i2bicyklický alkyl“ má označovať bicyklo[2.2.1 jheptyl (norbornyl), bicyklo[2.2.2]oktyl, 1,1,3-trimetylbicyklo[2.2.1 jheptyl(bornyl) a podobne.

Termín „aryl“, ako sa tu používa, znamená v prípadoch, kde nie je uvedené inak, stabilný 6- až 10-členný mono- alebo bicyklický kruhový systém ako je fenyl alebo naftyl. Arylový kruh môže byť nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami Ci.₄nižší alkyl; hydroxy; alkoxy; halogén; amino. Termín „heteroaryl“ znamená 5- až 7-členný nenasýtený kruh obsahujúci jeden alebo dva heteroatómy zvolené z O, N alebo S.

Termín „heterocyklyľ alebo „heterocyklický kruh“, ako sa tu používa, znamená okrem prípadov, kde nie je uvedené inak, stabilný 5- až 7-čfenný monoalebo bicyklický alebo stabilný 7- až 10-členný bicyklický heterocyklický kruhový systém, ktorého ktorýkoľvek kruh môže byť nasýtený alebo nenasýtený, a ktorý sa skladá z atómov uhlíka a z jedného až štyroch heteroatómov zvolených zo skupiny N, O a S a kde heteroatómy dusíka a síry môžu byť prípadne oxidované a

-20heteroatóm dusíka môže. byť prípadne kvarternizovaný a vrátane akejkoľvek bicyklickej skupiny, v ktorej je akýkoľvek z vyššie definovaných heterocyklických kruhov fúzovaný k benzénovému kruhu. Zvlášť užitočné sú kruhy, obsahujúce jeden atóm kyslíka alebo síry, jeden až štyri atómy dusíka alebo jeden atóm kyslíka alebo síry kombinovaný s jedným alebo dvoma atómami dusíka. Heterocyklický kruh môže byť napojený na akomkoľvek heteroatóme alebo atóme uhlíka, ak touto väzbou vznikne stabilná štruktúra. Príklady takýchto heterocyklických skupín sú piperidinyl, piperazinyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperidinyl, 2-oxopyrolidinyl, 2oxoazepinyl, azepinyl, pyrolyl, 4-piperidinyl, pyrolidinyl, pyrazolyl, pyrazolidinyl, imidazolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, pyrazolyl, pyrazolidinyl, imidazolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, oxazolyl, oxazolidinyl, izoxazolyl, izoxazolidinyl, morfolín, tiazolyl, tiazolidinyl, izotiazolyl, chinuklidinyl, izotiazolidinyl, indolyl, chinolinyl, izochinolinyl, benzimidazolyl, tiadiazoyl, benzpyrazyl, benztiazolyl, benzoxazolyl, furyl, tetrahydrofuryl, tetra hyd ropy ranyl, tetrazol, tienyl, benztienyl, tiamorfolinyl, tiamorfolinylsulfoxid, tiamorfolinylsulfón a oxadiazolyl. Morfolino má rovnaký význam ako morfolinyl.

Farmaceutický prijateľné soli zlúčenín vzorca I (vo forme vo vode alebo v oleji rozpustných alebo dispergovateľných produktov) zahrnujú bežné netoxické soli ako sú soli odvodené od anorganických kyselín, ako je napríklad kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, sulfámová, fosforečná, dusičná a podobne alebo kvartérne amoniové soli, ktoré sú vytvorené napríklad z anorganických alebo organických kyselín alebo báz. Príklady kyslých adičných solí zahrnujú acetát, adipát, alginát, aspartát, benzoát, benzénsulfonát, bisulfát, butyrát, citrát, gafronan, gáforsulfonát, cyklopentánpropionát, diglukonát, dodecylsulfát, etánsulfonát, fumarát, glukoheptanoát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyetánsulfonát, laktát, maleát, metžánsulfonát, naftalénsulfonát, nikotinát, nitrát, oxalát, pamoát, pektinát, persulfát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, sulfát, tartrát, tiokyanát, tosylát a undekanoát. Bázické soli zahrnujú soli amónne, soli alkalických kovov, ako sú soli sodné a draselné, soli kovov alkalických zemín ako sú soli vápenaté a horečnaté, soli s organickými bázami ako sú soli dicyklohexylamónne, N-metyl-D-glukamínové a soli s aminokyselinami ako je arginín, lyzín a podobne. Skupiny obsahujúce

-21 bázický dusík môžu byť kvarternizované takými činidlami ako sú nižšie alkylhalogenidy ako sú metyl, etyl, propyl a butylchloridy, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty ako je dimetyl, dietyl, dibutyl; a diamylsulfáty, halogenidy s dlhýmn reťazcom ako sú decyl, lauryl, myristyl a stearylchloridy, bromidy a jodidy, aralkyl halogenidy ako je benzyl a fenetylbromidy a ďalšie.

Trombínové inhibítory - terapeutické použitie - spôsob použitia

Liečenie antokoagulantami je indikované na liečenie a prevenciu radu trombotických stavov, najmä ochorení koronárnych tepien a cerebrovaskulárnych ochorení. Odborníkom v danej oblasti techniky budú okolnosti vyžadujúce terapiu antikoagulantami ihneď zrejmé. Termín „pacient“, ako sa tu používa, má znamenať cicavce ako sú primáti, vrátane ľudí, oviec, koní, hovädzieho dobytka, ošípaných, psov, mačiek, potkanov a myší.

Inhibícia trombínu nie je využiteľná len pri koagulačnej terapii jednotlivcov s trombotickými stavmi, ale je použiteľná kdekoľvek sa požaduje inhibícia koagulácie krvi ako v prípade prevencie koagulácie skladovanej úplnej krvi a na zabránenie koagulácie u iných biologických vzoriek na testovanie alebo skladovanie. Trombínové inhibítory môžu byť teda pridávané alebo uvádzané do styku s akýmkoľvek médiom, ktoré obsahuje alebo u ktorého sa predpokladá, že obsahuje trombín a u ktorého sa požaduje inhibícia koagulácie krvi, napríklad pri styku cicavčej krvi s materiálmi zo skupiny cievnych štepov, stentov, ortopedických protéz, srdcových protéz a systémov mimotelového obehu.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú použiteľné na liečenie alebo na prevenciu cievnej tromboembólie (upchatie alebo uzáver cievy uvoľneným trombom; upchatie alebo uzáver pľúcnej tepny uvoľneným trombom), kardiogénnej tromboembólie (napríklad upchatie alebo uzáver srdca usadeným trombom), tepnové trombózy (napríklad vytváranie trombu vo vnútri tepny, ktoré môže spôsobiť infarkt tkaniva zásobovanej touto tepnou), aterosklerózy (napríklad artériosklerózy charakterizovanej nepravidelne rozloženými usadeninami tukov) u cicavcov a na zníženie náchylnosti zariadenia, ktoré prichádzajú do styku s krvou na zrážanie krvi.

- 22 Príklady žilovej tromboembólie, ktoré môžu byť liečené alebo predchádzané zlúčeninami podľa vynálezu, zahrnujú uzáver žily, uzáver pľúcnej artérie (pľúcnej embólie), trombózu hlbokých žíl, trombózu spojenú s rakovinou a chemoterapiou rakoviny’ trombózu v súvislosti s geneticky podmienenými trombofilnými ochoreniami ako je deficiencia proteínu C, deficiencia proteínu S, deficiencia antitrombínu III a faktora V Leiden a trombózu v dôsledku získaných trombofilných porúch ako je systemický lupus erytematosus (zápalové ochorenie spojivového tkaniva). V súvislosti so žilovou tromboembóliou sú zlúčeniny podľa vynálezu použiteľné tiež na udržanie priechodnosti vsunutých katétrov.

Príklady kardiogénnej tromboembólie, ktorá môže byť liečená alebo predchádzaná zlúčeninami podľa vynálezu, zahrnujú tromboembolickú mŕtvicu (odtrhnutý trombus spôsobujúci neurologické poškodenie spôsobené obmedzením dodávky krvi do mozgu), kardiogénnu tromboembóliu spojenú s fibriláciou sieňovej (rýchle nepravidelné sťahy svalových fibril hornej srdcovej komory), kardiogénnu tromboembóliu, spojenú s umelými chlopňami, ako sú mechanické srdcové chlopne a kardiogénnu tromboembóliu spojenú s ochorením srdca.

Príklady tepnovej trombózy zahrnujú nestabilnú angínu (ťažké bolesti na hrudi srdcového pôvodu), infarkt myokardu (odumieranie buniek srdcového svalu v dôsledku nedostatočného zásobovania krvou), ischemická srdcová choroba (miestna anémia v dôsledku obštrukcie (ako je zúženie tepien) dodávky krvi), znovuuzáver v priebehu alebo po perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike, restenózu po perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike, uzáver štepov po bypase a okluzívne cerebrovaskulárne ochorenie. Taktiež v súvislosti s tepnovou trombózou sú zlúčeniny podľa vynálezu použiteľné pri zachovaní priechodnosti artériovenóznych kanyl.

Príkladom aterosklerózy je artérioskleróza.

Príklady zariadenia, ktoré prichádzajú do styku s krvou, sú cievne štepy, stenty, ortopedické protézy, srdcové protézy a systémy mimotelového obehu.

Trombínové inhibítory podľa vynálezu môžu byť podávané v orálnych formách ako sú tablety, kapsuly (obe formy zahrnujú prostriedky s oneskorením uvoľňovaním alebo uvoľňovaním v určitom čase), pilulky, prášky, granuly, elixíry, tinktúry, suspenzie, sirupy a emulzie. Podobne môžu byť podávané v intravenóznej

-23(jednorázovej alebo infúznej), intraperitoneálnej, subkutánnej alebo intramuskulárnej forme, pričom všetky tieto formy sú odborníkom vo farmácii dobre známe. Ako prostriedok proti agregácii môže byť^použité účinné ale nie toxické množstvo požadovanej zlúčeniny. Na liečenie tvorby fibrínu v oku môžu byť zlúčeniny podávané do oka alebo miestne, rovnako ako orálne alebo parenterálne.

Trombínové inhibítory môžu byť podávané vo forme depotnej injekcie alebo implantátu, ktorý môže byť formulovaný takým spôsobom, aby umožnil predĺžené uvoľňovanie aktívnej zložky. Aktívna zložka môže byť zlisovaná do granúl alebo malých valčekov a implantovaná subkutánne alebo intramuskulárne ako depotná injekcia alebo implantáty. Implantáty môžu obsahovať inertné materiály, ako sú biodegradovateľné polyméry alebo syntetické silikóny, napríklad Silastic, silikónový kaučuk alebo iné polyméry vyrobené firmou Dow-Corning Corporation.

Trombínové inhibítory môžu byť tiež podávané vo forme dodávacieho systému s lipozómami, ako sú malé jednomembránové vačky, veľké jednomebránové vačky a viacmembránové vačky. Lipozómy môžu byť tvorené radom fosfolipidov ako je cholesterol, stearylamín alebo fosfatidylcholín.

Trombínové inhibítory môžu byť tiež dodávané použitím monoklonálnych protilátok ako individuálnych nosičov, na ktoré sú molekuly zlúčenín naviazané. Inhibítory trombínu môžu byť tiež spojené s rozpustnými polymérmi ako cielenými nosičmi liečiv. Týmito polymérmi môžu byť polyvinylpyrolidón, pyránový kopolymér, polyhydroxy-propylmetakrylamid-fenol, polyhydroxyetyl-aspartamidfenol alebo polyetylénoxid-polylyzín substituované palmitoylovými zvyškami.

Inhibítory trombínu môžu byť ďalej naviazané na triedu biodegradovateľných polymérov použiteľných na dosiahnutie riadeného uvoľňovania liečiva, napríklad kyselinu polymliečnu, polyglykolovú, kopolyméry kyseliny polymliečnej a polyglykolovej, polýepsilónkaprolaktón, polyhydroxybutyrát, polyortoestery, polyacetály, polydihydropyrány, polykyanoakryláty a zosietené amfipatické blokové kopolyméry hydrogélov.

Dávkovací režim využívajúci inhibítory trombínu sa volí podľa radu faktorov, vrátane typu, druhu, veku, hmotnosti, pohlavia a zdravotného stavu pacienta; závažnosti liečeného stavu; cesty podávania; pečeňovej a obličkovej funkcie pacienta; a konkrétnej použitej zlúčeniny alebo jej soli. Lekár alebo veterinárny lekár

-24so zvyčajnou skúsenosťou v danej oblasti techniky môže ľahko určiť a predpísať účinné množstvo liečiva na prevenciu, boja proti ochoreniu alebo zastaveniu postupu ochorenia.

Orálne dávky trombínových inhibítorov pri použití na dosiahnutie uvedených účinkov sa budú pohybovať medzi približne 0,01 mg na kg telesnej hmotnosti na deň (mg/kg/deň) až približne 30 mg/kg/deň, výhodne 0,025 až 7,5 mg/kg/deň, výhodnejšie 0,1 až 2,5 mg/kg/deň a najvýhodnejšie 0,1 až 0,5 mg/kg/deň (pokiaľ nie je uvedené inak, množstvo aktívnych zložiek je vztiahnuté na voľnú bázu). Napríklad pacient s hmotnosťou 80 kg by dostal približne 0,8 mg/deň až 2,4 g/deň a najvýhodnejšie 8 až 40 mg/kg/deň. Výhodne pripravený liek na podávanie raz za deň by teda obsahoval medzi 0,8 mg až 2,4 g, s výhodou medzi 2 mg až 600 mg, výhodnejšie medzi 8 mg až 200 mg a najvýhodnejšie 8 mg až 40 mg, napríklad 8 mg, 10 mg, 20 mg a 40 mg: Výhodne budú trombínové inhibítory podávané v rozdelených dávkach dvakrát, trikrát alebo štyrikrát za deň. Na podávanie dvakrát denne bude výhodne pripravený liek obsahovať medzi 0,4 mg až 4 g, výhodne medzi 1 mg až 300 mg,, výhodnejšie medzi 4 mg až 100 mg a najvýhodnejšie medzi 4 mg až 20 mg, napríklad 4 mg, 5 mg, 10 mg a 20 mg.

Intravenózne bude pacient dostávať aktívnu zložku v množstve dostatočnom na dodávanie medzi 0,025 až 7,5 mg/kg/deň, výhodne 0,1 až 2,5 mg/kg/deň a výhodnejšie 0,1 až 0,5 mg/kg/deň. Tieto množstvá budú podávané vhodnými spôsobmi, napríklad veľké objemy s nízkymi koncentráciami aktívnej zložky v priebehu jedného predĺženého časového obdobia alebo niekoľkokrát za deň, nízke objemy s vysokými koncentráciami aktívnej zložky krátkodobo, napríklad raz za deň. Typicky je možné pripraviť bežný intravenózny prostriedok obsahujúci koncentráciu aktívnej zložky medzi približne 0,01 až 1,0 mg/ml, napríklad 0,1 mg/ml, 0,3 mg/ml a 0,6 mg/ml a podávať ho v denných dávkach medzi 0,01 ml/kg hmotnosti pacienta a 10,0 ml/kg hmotnosti pacienta, napríklad 0,1 ml/kg, 0,2 ml/kg, 0,5 ml/kg. V jednom príklade dostane pacient s hmotnosťou 80 kg 8 ml intravenózneho prostriedku s koncentráciou aktívnej zložky 0,5 mg/ml, dvakrát za deň, a dostane teda celkom 8 mg aktívnej zložky za deň. Ako pufre môžu byť použité kyselina glukurónová, kyselina L-mliečna, kyselina octová, kyselina citrónová alebo akákoľvek farmaceutický prijateľná kyselina/konjugovaná zásada s dostatočnou pufračnou

-25kapacitou v rozmedzí pH prijateľnom na intravenózne podávanie. Pri voľbe vhodného pufra a pH prostriedku by mal byť braný ohľad tiež na rozpustnosť liečiva v závislosti na pH. Voľbu vhodného pufra a pH prostriedku môže ľahko určiť osoba s bežnou skúsenosťou v danej oblasti techniky.

Zlúčeniny môžu byť tiež podávané v intravenóznej forme miestnym použitím vhodných intranazálnych nosičov alebo transdermálnymi cestami s použitím odborníkom v danej oblasti techniky známych transdermálnych kožných náplastí. Pri podávaní vo forme transdermálneho dodávacieho systému bude podávanie v priebehu dávkovacieho režimu samozrejme skôr trvalé než prerušované.

Trombínové inhibítory sa typicky podávajú ako aktívne zložky v zmesi s vhodnými farmaceutickými riedidlami, pomocnými látkami alebo nosičmi (súhrne nazývanými „nosné“ materiály), výhodne zvolenými s ohľadom na zamýšľanú formu podávania, t.j. orálne tablety, kapsuly, elixíry, sirupy a podobne a v súlade s bežnou farmaceutickou praxou.

Napríklad na orálne podávanie vo forme tablety alebo kapsuly bude aktívna zložka lieku kombinovaná s orálnym netoxickým farmaceutický prijateľným inertným nosičom ako je laktóza, škrob, sacharóza, glukóza, metylcelulóza, stearan horečnatý, dikalciumfosfát, kalciumsulfát, manitol, sorbitol a podobne; na orálne podávanie v kvapalnej forme môžu byť zložky lieku na orálne podávanie kombinované s akýmkoľvek orálnym netoxickým farmaceutický prijateľným inertným nosičom, ako je etanol, glycerol, voda a podobne. Tam kde je to žiadúce alebo nutné, môžu byť naviac do zmesi pridané vhodné spojivá, klzné látky, dezintegračné látky a farbivá. Vhodnými spojivami sú škrob, želatína, prírodné cukry ako je glukóza alebo β-laktóza, kukuričné sladidlá, prírodné a syntetické gumy ako je akácia, tragakant alebo alginát sodný, karboxymetylcelulóza, polyetylénglykol, vosky a podobne. Medzi klzné látky, používané v týchto dávkovacích formách patrí oleát sodný, stearát sodný, stearát horečnatý, benzoan sodný, octan sodný, chlorid sodný a podobne. Medzi dezintegračné látky patrí bez obmedzenia metylcelulóza škrobu, agar, bentonit, xantánová guma a podobne.

Typické jadrá tabliet vhodné na podávanie inhibítorov trombínu sú bez obmedzenia zložené s nasledujúcich množstiev štandardných zložiek:

-26Navrhnuté zloženie zmesi pre nepoťahované jadrá tabliet

Excipient	všeobecné rozmedzie (%)	Výhodné rozmedzie (%)	Najvýhodnejšie rozmedzie (%)
manitol	10-90	25-75	30-60
mikrokryštalická celulóza	10-90	25-75	30-60
stearan horečnatý	0,1 -5,0	0,1-2,5	0,5-1,5

Manitol, mikrokryštalická celulóza a stearan horečnatý môžu byť nahradené alternatívnymi farmaceutický prijateľnými pomocnými látkami.

Trombínové inhibítory môžu byť tiež spoločne podávané s vhodnými prostriedkami pôsobiacimi proti doštičkám vrátane bez obmedzenia antagonistov fibrinogénového receptora (napríklad na liečenie alebo na prevenciu nestabilnej angíny alebo na prevenciu znovuuzáveru po angioplastike a restenóze), antikoagulantami ako je aspirín, trombolityckými prostriedkami ako sú aktivátory plazminogénu alebo streptokináza na dosiahnutie synergických účinkov pri liečení rôznych patologických stavov ciev alebo prostriedkov na zníženie hladiny lipidov vrátane antihypercholesterolemických prostriedkov (napríklad inhibítory HMG CoA reduktázy, ako je lovastatín, inhibítory HMG CoA syntázy atď.) na liečenie alebo na prevenciu aterosklerózy. Napríklad u pacientov trpiacich ochorením koronárnych artérií a u pacientov po angioplastike bude výhodné spoločné podávanie antagonistov fibrinogénového receptora a inhibítorov trombínu. Trombínové inhibítory tiež zvyšujú trombolytickú reperfúziu sprostredkovanú aktivátorom tkanivového plazminogénu. Trombínové inhibítory môžu byť podávané po vytvorení trombu a aktivátor tkanivového plazminogénu alebo iného plazminogénu sa podáva potom.

Typické dávky trombínových inhibítorov podľa vynálezu v kombinácii s ďalšími prostriedkami pôsobiacimi proti krvným doštičkám, antikoagulačnými prostriedkami alebo trombolytickými prostriedkami môžu byť rovnako ako dávky trombínových inhibítorov bez spolupodávania s ďalšími prostriedkami pôsobiacimi proti krvným doštičkám, antikoagulačnými prostriedkami alebo trombolytickými

- 27 prostriedkami, alebo môžu byť podstatne menšie dávky trombínových inhibítorov podávané bez spoločného podávania ďalších prostriedkov pôsobiacich proti krvným doštičkám, antikoagulačných prostriedkov alebo trombolytických prostriedkov v závislosti na potrebách liečby pacienta.

Na výrobu zlúčenín podľa predkladaného vynálezu môžu byť použité nasledujúce spôsoby syntézy:

Nasledujúce príklady ilustrujú vynález tak, ako bol zamýšľaný autormi a nemali by byť pokladané za obmedzujúce podstatu alebo myšlienku predkladaného vynálezu.

Spôsob 1 (dokumentovaný príkladom 1)

Východiskový alylamín sa kondenzuje v kroku A s acetaldehydom a kyanidom za získania aminonitrílu. Ten reaguje v kroku B s oxalylchloridom podľa metódy Hoornaert (J. Heterocyclic. Chem., 20, 919, (1983) za získania pyrazinónu. Olefín je oxidačné štepený oxidom ruténovým a získaný aldehyd sa premieňa na kyselinu oxidáciou oxidačným činidlom ako je kyselina chrómová v kroku C. Skupina 3-chlór je potom zamenená amóniovým ekvivalentom, v prípade p-metoxybenzylamínu v kroku E a v kroku F sa odstráni p-metoxybenzylová skupina pôsobením silnej kyseliny ako je TFA. Nakoniec, v ktorku G, reaguje kyselina s vhodným amínom, v tomto prípade etyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxyacetamidom za poskytnutia konečného produktu (spôsob výroby tohto amínu je uvedený nižšie).

CH₃CHU KCN, HCl EtQH, HgO

HN (COCI)₂

C₆H₄C1₂

Krok A

Krok B

i. RUCI3, NalO₄ cci* ch₃cn, h₂o , 9' ii. CrO₃, H₂SO₄, acetón q

Krok C Cľ^Y'^N'^'OH

O

4-MeOPhCH₂NH₂,

Et₃N_v dioxan

Krok D

OH

TFA

OH

Krok F

Krok E

RaNi, NaOH

OH

-29Krok G

H₂N

O

EDC, HOBT NMM, DMF

O

Cl

Amidové väzby, napríklad v kroku G, na vytvorenie zlúčenín podľa vynálezu, môžu byť uskutočnené karbodiimidovou metódou s činidlami ako je dicyklohexylkarbodiimid alebo 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid. Ďalšie spôsoby vytvárania amidovej alebo, peptidovej väzby zahrnujú bez obmedzenia spôsoby syntézy cez chlorid, azid, zmesný anhydrid alebo aktivovaný ester kyseliny. Typicky sa vytvárajú amidové väzby vo fáze rozpúšťadla, ale môžu byť tiež použité syntézy na tuhej fáze s použitím klasických Merrifieldových techník. Typickou praxou je tiež prídavok alebo odstránenie jednej alebo viacerých ochranných skupín.

Modifikáciou tejto metódy bude umožnená prítomnosť odlišných skupín W, R³, X a A, ktoré sú v rámci širšieho nároku nižšie vyrobených použití vhodných činidiel alebo vhodne substituovaného východiskového materiálu v uvedenom kroku syntézy. Napríklad východiskový aldehyd v kroku A môže mať ako bočný reťazec etyl, izopropyl, cyklopropyl, trifluórmetyl a podobne, na dosiahnutie rôznych významov skupiny R³. Podobne je možné použitím vhodného amínu v kroku D dosiahnuť rôzne skupiny W. Rozdielne skupiny X môžu byť prítomné vynechaním kroku E a použitím činidla ako je oxalylbromid v kroku B. Vhodná voľba amínu v kroku G umožní získanie rôznych variantov A. Variácie a modifikácie tejto metódy vedúcej k vytvoreniu zrejmých variantov budú odborníkom v danej oblasti techniky jasné.

-30Spôsob výroby etyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxyacetamidu

Cl Cl

A OHC-^Y OH	NH₂OH.HCI Na₂CO₃, EtOH/H₂O	ή rV	Hj. Rh/C EíOH,H₂SO₄ Krok B
Krok A	H<
	OH
	Cl			Cl
	e		(BOC)₂O NMM. DMF	ή	BrCH₂CO₂Et Cs₂CO₃, DMF	Krok D
r	V		Krok C [f
nh₂ oh		BOCNH	OH

Krok F

EDC, EtNH₂.HCl HOBT, NMM, DMF

CONHEt

Krok G

TFA, CH2CI2

- 31 Modifikácia tohto spôsobu umožní prítomnosť odlišných skupín R⁴ a R⁵v rámci širokých nárokov nižšie použitím vhodného činidla alebo vhodne substituovaného východiskového materiálu v uvedenom kroku syntézy. Napríklad vhodná voľba amínu v kroku F umožní dosiahnutie rôznych významov skupín R¹⁰ a R¹¹. Zrejmé variácie a modifikácie spôsobu, vedúce k vytvoreniu podobných a zrejmých variantov budú odborníkom v danej oblasti techniky jasné.

Krok A: 4-chlórsalicaldehydoxím

Roztok hydroxylamínhydrochloridu (16,7 g, 0,24 mol) a uhličitanu sodného (12,7 g, 0,12 mol) vo vode (120 ml) bol pridaný k miešanému roztoku 4chlórsalicaldehydu (25,0 g, 0,16 mol) v etanole (160 ml) a získaný roztok bol varený pod spätným chladičom. Po 1 hodine bola reakčná zmes ochladená, bola pridaná voda (320 ml) a získaná kryštalická zrazenina bola izolovaná filtráciou. Podobne bol získaný druhý podiel a spojené tuhé podiely boli sušené za získania v názve uvedenej zlúčeniny:

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 6,92 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 2,6 a 8,8 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 8,16 (s, 1 H), 9,71 (s, 1H).

Krok B: 2-hydroxy-5-chlórbenzylamín

Zmes 4-chlórsalícaldehydoxímu (10 g, 58,3 mmol) a 5% Rh/C (2,0 g) v etanole (100 ml) obsahujúca koncentrovanú kyselinu sírovú (10 ml) bola trepaná v Parrovom prístroji v atmosfére H₂ (413 kPa) 24 Hodín. Bola pridaná voda (100 ml) a zmes bola prefiltrovaná cez celit. Filtrát bol koncentrovaný až do kryštalizácie produktu z roztoku. Tuhá látka bola oddelená filtráciou a filtrát bol ďalej koncentrovaný a bola pridaná voda za získania druhého podielu, ktorý bol spojený s prvým a po sušení bola získaná v názve uvedená zlúčenina ako síran:

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 4,07 (s, 2H), 6,88 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,25 (dd, J = 2,6 a 8,6 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 2,6 Hz, 1H).

Krok C: N-t-butoxykarbonyl-2-hydroxy-5-chlórbenzylamín

Zmes 2-hydroxy-5-chlórbenzylamínu (1,22 g, 4,77 mmol za predpokladu bisulfátovej soli), (BOC)₂O (1,56 g, 7,16 mmol) a N-metylmorfolínu (1,05 ml, 9,54

-32mmol) v DMF (10 ml) bola miešaná 5 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes bola rozdelená medzi vodu a etylacetát a organická vrstva bola premytá 5% roztokom KHSO4 (2x), roztokom hydrogénuhličitanu sodného a roztokom soli, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za získania tuhej látky. Surový produkt bol rekryštalizovaný zo zmesi etylacetát/hexány (1:5, 12 ml) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny:

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,44 (s, 9H, t-Bu), 4,17 (d, J = 6, 8 Hz, 2H, CH₂), 5,22 (br t, 1H, NH), 6,87 (d, J = 8,6 Hz, 1 H, H-3), 7,03.(d, J '2,6 Hz, 1H, H-6), 7,15 (dd, J = 2,6 a 8,6 Hz, 1H, H-4).

Krok D: Etyl-2-t-butoxykarbonylaminometyl-4-chlórfenoxyacetát

Zmes N-t-butoxykarbonyl-2-hydroxy-5-chlórbenzylamínu (730 mg, 2,83 mmol), Cs₂CO₃ (923 mg, 2,83 mmol) a etylbrómacetátu (0,314 ml, 2,83 mmol) v DMF (5 ml) bola miešaná 2 hodiny. Surová reakčná zmes bola rozdelená medzi etylacetát a vodu a organická vrstva bola premytá roztokom soli, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu na olej, ktorý bol použitý v ďalšom kroku.

Krok E: Kyselina 2-t-butoxykarbonylaminometyl-4-chlórfenoxyoctová

Produkt z kroku D bol suspendovaný v zmesi 1:1:1 metanol/THF/voda (9 ml) a bol pridaný hydrát hydroxidu lítneho (126 mg, 3,0 mmol). Po 16 hodinách boli vo vákuu odstránené prchavé látky a roztok bol zriedený vodou a premytý etylacetátom, pričom bolo pridané dostatočné množstvo roztoku soli na dispergáciu emulzie. Vodná vrstva bola okyslená 5% roztokom KHSO₄ a extrahovaná metylénchloridom, ktorý bol potom sušený (Na₂SO₄) a odparený vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako tuhej látky:

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,44 (s, 9H, t-Bu), 4,35 (br s, 2H, NCH₂), 4,62 (s, 2H, OCH₂j, 5,04 (br s, 1H, NH), 6,74 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-3), 7,20 (d, J = 2,6 Hz, 1H, H-6), 7,24 (d veľmi slabý 1H, H-4).

Krok F: Etyl-2-t-butoxykarbonylaminometyl-4-chlórfenoxyacetamid

EDC hydrochlorid (249 mg, 1,3 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi kyseliny 2-t-butoxykarbonylaminometyl-4-chlórfenoxyoctovej (316 mg, 1,0 mmol), HOBT

-33(176 mg, 1,3 mmol), etylamínhydrochloridu (106 mg, 1,3 mmol) a N-metylmorfolínu (0,396 ml, 3,6 mmol) v DMF (4 ml) a zmes bola miešaná 16 hodín. Reakčná zmes bola rozdelená medzi etylacetát a 5% roztok KHSO4, vodu, roztok NaHCO₃ a roztok soli, sušená bola (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu na tuhú látku (333 mg), ktorá bola použitá v ďalšom kroku.

Krok G: Etyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxyacetamid

Etyl-2-t-butoxykarbonylaminometyl-4-chlórfenoxyacetamid z kroku F bol rozpustený v zmesi 2:1 metylénchlorid/TFA (3 ml) a po 15 minútach bolo rozpúšťadlo odparené vo vákuu. Zvyšok bol rozpustený vo vode a roztok bol dvakrát premytý metylénchloridom. Vodná vrstva bola potom zalkalizovaná nasýteným roztokom uhličitanu sodného a bol pridaný NaCI až do saturácie. Zmes bola extrahovaná etylacetátom a organická vrstva bola sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej látky:

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 1,12 (t, J = 7,3 Hz, 3H, Me), 1,54 (s, 9H, t-Bu),

3,31 (kvintet, J = 7,3 Hz, 2H, CH₂Me), 3,90 (s, 2H, NCH₂), 4,58 (s, 2H, OCH₂), 6,80 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-3), 7,19-7,23 (m, 2H, H-4, H-6), 8,01 (br s, 1H, CONH).

Spôsob 2 (dokumentovaný príkladom 3)

Alternatívny spôsob výroby zlúčenín podľa predkladaného vynálezu je dokumentovaný príkladom 2.

Kyslina zo spôsobu 1, krok C sa naviaže na zodpovedajúci amín, v tomto prípade 2-t-butoxykarbonylamino-5-aminometyl-6-metylpyridín (spôsob výroby tohto amínu je uvedený nižšie) v kroku A. Skupina 3-chlór sa potom nahradí zodpovedajúcim amínom, v tomto prípade fenetylamínom v kroku B s skupina BOC sa potom odstráni v kroku C za poskytnutia konečného produktu.

-34Spôsob 2 (dokumentovaný príkladom 2)

1, EDC, HOBT NMM, DMF

Krok A

PhCH₂CH₂NH₂, EUN, dioxan .

Krok B

Cl

Modifikácia tohto spôsobu umožní prítomnosť rôznych skupín W, R³, X a A uvažovaných v rámci širšieho nároku nižšie použitím vhodných reagencii alebo vhodne substituovaného východiskového materiálu v uvedenom syntetickom kroku. Odborníkom v danej oblasti techniky budú zrejmé rôzne variácie a modifikácie tohto spôsobu za vytvorenia jeho podobných a zrejmých variantov.

-35Spôsob výroby 2-t-butoxykarbonylamino-5-aminometyl-6-metylpyridínu

Výroba 2-amino-5-kyano-6-metylpyridínu

Zmes 6-amino-3-bróm-2-metylpyridínu (20,0 g, 0,107 mol) (Maybridge) a kyanidu med’ného (11,0 g, 0,123 mol) v DMF (25 ml) bola zahrievaná 4 hodiny pod spätným chladičom. DMF bol odparený vo vákuu a zvyšok bol rozdelený medzi etylacetát a 10% roztok kyanidu sodného. Organická vrstva bola premytá 10% roztokom kyanidu sodného a soľou, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu na hnedú tuhú látku. Táto látka bola rozpustená v minimálnom množstve etylacetátu a produkt bol zrážaný prídavkom hexánov. Zmes bola filtrovaná za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako hnedého prášku:

¹H NMR (CDCI₃): Ô 2,56 (s, 3H), 4,97 (br s, 2H), 6,33 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,54 (d, J = 8,6 Hz, 1 H).

Výroba 2-t-butoxykarbonylamino-5-kyano-6-metylpyridínu

Zmes 2-amino-5-kyano-6-metylpyridínu (10,0 g, 75,1 mmol), (BOC)₂O (16,39 g, 75,1 mmol), trietylamínu (11,5 ml, 82,6 mmol) a DMAP (0,92 g, 7,5 mmol) v metylénchloride (200 ml) bola miešaná 3 hodiny. Bol pridaný ďalší trietylamín (4,22 ml) a (BOC₂)O (1,64 g) a po 16 hodinách bola reakčná zmes zriedená etylacetátom a premytá 1M AcOH (trikrát), sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za poskytnutia tmavohnedej tuhej látky. Surový produkt bol čistený bleskovou kolónovou chromatografiou (10 % etylacetát/hexány) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky:

¹H NMR (CDCI3): δ 1,52 (s, 9H), 2,62 (s, 3H), 7,46 (br s, 1H), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,8 Hz, 1H).

Výroba 2-t-butoxykarbonylamino-5-aminometyl-6-metylpyridínu

Zmes 2-t-butoxykarbonylamino-5-kyano-6-metylpyridínu (14,68 g, 62,9 mmol) a 10% Pd/C (1,5 g) v ľadovej kyseline octovej (150 ml) bola trepaná v Párovom prístroji pri tlaku 413 kPa po dobu 88 hodín. Reakčná zmes bola filtrovaná cez celit a odparená vo vákuu. Zvyšok bol rozpustený vo vode a roztok bol premytý metylénchloridom (dvakrát), potom zalkalizovaný uhličitanom sodným a extrahovaný

-36etylacetátom (dvakrát). Spojené etylacetátové vrstvy boli sušené (Na₂SO₄) a odparené vo vákuu na tuhú látku. Surový produkt bol rekryštalizovaný (etylacetát/hexány) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny:

¹H NMR (CDCb): δ 1,50 (s, 9H), 2,43 (s, 3H), 3,81 (s, 2H), 7,23 (br s, H), 7,57 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,3 Hz, 1H).

Modifikácia tohto spôsobu umožní získanie odlišných skupín Y¹predpokladaných v rámci širšieho nároku nižšie použitím vhodných činidiel alebo vhodne substituovaných východiskových materiálov v uvedenom kroku syntézy. Ďalšie variácie a modifikácie tohto spôsobu za získania podobných zrejmých variantov budú odborníkom v danej oblasti techniky jasné.

Spôsob 3 (dokumentovaný príkladom 5)

Ester glycínu v tomto prípade benzylester, sa kondenzuje s acetaldehydom a kyanidom v kroku A za získania aminonitrilu. Ten reaguje v kroku B s oxalylchloridom za poskytnutia pyrazinónu. Skupina 3-chlór je potom nahradená vhodným amínom, v tomto prípade fenetylamínom v kroku C. ester sa hydrolyzuje v kroku D a zvyšný chlór sa potom odstráni hydrogenolýzou v kroku E. Kyselina sa potom naviaže v kroku F na zodpovedajúci amín, v tomto prípade 2-amino-5-aminometyl6-metylpyridín (spôsob jeho výroby je ukázaný nižšie) za získania konečného produktu.

i. CH₃CHO

O TMSCN, 0Η₂0Ι₂ ^Ν(:γ^χ q (GOCl)₂

H₂NxJt_0Bn — - HnJL_0B() c₆H_tCi;

Krok B

OBn

Ph(CH2)₂NH₂

EtOAc

Krok C

-37UOH, H₂0 MeOH, THF

Krok D

H₂, Pd/C KOH

OH

i. EDC, HOBT NMM, DMF ii. HCI, EtOH

Krok F

-38Výroba 2-amino-5-aminometyl-6-metylpyridín dihydrochloridu

Zmes 2-arhino-5-kyano-6-metylpyridínu (4,0 g, 30,0 mmol) a 10% Pd/C (3,08

g) v etanole (80 ml), metanole (30 ml), koncentrovanej kyseline HCI (6 ml) a vode (10 ml) bola trepaná v Párovom prístroji pri tlaku 413 kPa 25 hodín, reakčná zmes bola prefiltrovaná cez celit, s opláchnutím zmesou 1:1 etanol/metanol a bola odparená vo vákuu za získania tuhej látky, ktorá bola rozotrená zo zmesi etylacetát/etanol 5:1 za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny (5,95 g, 94 %):

¹H NMR (CD₃OD): δ 2,58 (s, 3H), 4,12 (s, 2H), 6,92 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 9,2 Hz, 1 H).

Odborníkom v danej oblasti techniky budú jasné ďalšie zrejmé variácie a modifikácie tohto spôsobu za vytvorenia podobných a zrejmých variantov.

Spôsob 4

Produkt z kroku E, spôsob 3, sa naviaže na zodpovedajúci chránený amín, napríklad 2-t-butoxykarbonylamino-5-aminometyl-6-metylpyridín a potom sa odstránia ochranné skupiny za získania konečného produktu. Odborníkom zdanej oblasti .techniky budú zrejmé ďalšie variácie a modifikácie tohto spôsobu vedúce k vytvoreniu podobných a zjavných variantov.

Spôsob 5 (dokumentovaný príkladom 82)

Východiskový alylamín sa kondenzuje s acetaldehydom a kyanidom v kroku A za získania aminonitrilu. Ten reaguje v kroku B s oxalylchloridom spôsobom podľa Hoornaerta (J, Heterocyclic. Chem., 20, 919, (1983)) za získania pyrazinónu. Olefín sa oxidačné štiepi oxidom ruténovým a získaný aldehyd sa premení na kyselinu oxidačným činidlom ako je kyselina chrómová v kroku C. Skupina 3-chlór sa potom nahradí zodpovedajúcim amínom, v tomto prípade fenetylamínom v kroku B a zvyšný chlór sa potom odstráni v kroku E Raneyovým niklom. Kyselina sa potom naviaže v kroku F na vhodný amín, v tomto prípade 3-aminometyl-6_BOC-amino-2metylpyridín a skupina BOC sa odstráni použitím silnej kyseliny ako je plynný HCI v kroku G za získania konečného produktu.

-39CH₃CHO KCN, HCI EtOH, H₂0

NC (COCl)₂

CgH4CI₂

ΝΗ'

HN

Krok A

Krok B

1. RuCI₃, NalO₄CCI₄, CH3CN, h₂o ii. CrO₃, H₂SO₄, acetón

Krok C

OH

Krok E

RaNi, NaOH

1.EDC, HOBT NMM, DMF

Krok F

HCI, EtOAc

Krok G

NHBOC

Amidová väzba môže byť vytvorená napríklad v kroku F za vytvorenia zlúčenín podľa vynálezu karbodiimidovou metódou s činidlami ako je dicyklohexylkarbodiimid alebo 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid. Ďalšie spôsoby vytvárania amidovej alebo peptidovej väzby zahrnujú bez obmedzenia syntetické cesty cez chlorid, azid, zmesný anhydrid alebo aktivovaný ester kyseliny. Typicky sa amidové väzby vytvárajú vo fáze roztoku, ale môže byť tiež použitá klasická syntéza na tuhej fáze podľa Merrifielda. V typickej praxi môže byť tiež pridaná a odstránená jedna alebo viac ochranných skupín.

Modifikácia tohto spôsobu umožní prítomnosť rôznych skupín W, R³, X a A predpokladaných v rámci širšieho nároku nižšie použitím vhodného činidla alebo vhodne substituovaného východiskového materiálu v uvedenom syntetickom kroku. Napríklad východiskový aldehyd v kroku A môže mať na dosiahnutie rôznych významov skupiny R³ vo svojom bočnom reťazci skupiny ako je etyl, izopropyl, cyklopropyl, trifluórmetyl a podobne. Podobne môžu byť prítomné rozdielne skupiny W pri použití vhodného amínu v kroku D. Rozdielne skupiny X môžu byť prítomné pri vynechaní kroku E a použitím činidla ako je oxalylbromid v kroku B. Vhodná voľba amínu v kroku F umožní dosiahnutie rôznych významov skupiny A. Ako je teda dokumentované v príklade 6, produkt kroku E sa naviaže na deriváty 2hydroxybenzylamínu, v tomto prípade na etyl-(2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamid za získania konečného produktu. Odborníkom v danej oblasti techniky budú jasné variácie a modifikácie tohto spôsobu za vytvorenia podobných a zrejmých variantov.

-41 Nasledujúce príklady ilustrujú vynález tak, ako bol autormi myslený a nemali sa byť pokladané za obmedzujúce rozsah a myšlienku predkladaného vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Výroba 3-amino-6-metyl-1-[etyl-(2-metylkarboxamidometyl-4-chlórfenoxy)-acetami-

Krok A: a-(alylamino)-propionylnitril hydrochlorid

Koncentrovaná HCI (20 ml, 0,24 mol) bola pridaná k miešanému roztoku alylamínu (36 ml, 0,48 mol) vo vode (100 ml) a etanolu (60 ml) pri 0 °C. Potom bol pridaný kyanid draselný (15 g, 0,23 mol) a acetaldehyd (11,2 ml, 0,20 mol) a zmes bola varená pod spätným chladičom. Po 15 hodinách boli prchavé podiely odstránené vo vákuu a zvyšný roztok bol nasýtený NaCI a extrahovaný metylénchloridom (trikrát). Spojené extrakty boli sušené (Na2SO₄) a odparené vo vákuu na olej, ktorý bol rozpustený v 1M HCI (200 ml). Roztok bol odparený vo vákuu a azeotrópne destilovaný zo zmesi 1:1 toluén/metanol za poskytnutia tuhej látky, ktorá bola varená pod spätným chladičom v etylacetáte (200 ml), ochladená, filtrovaná a sušená za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako soli s HCI:

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 1,72 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH₃), 3,78 - 3,90 (m, 2H, CH₂), 4,63 (q, J = 7,0 Hz, a-CH), 5,56 - 5,66 (m, 2H, CHCHA 5,91 - 6,02 (m, 1H, CHCH₂).

-42Krok B: 1-alyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinón

Miešaná zmes oxalylchloridu (30,5 ml, 0,35 mol) a a-(alylamino)-propionitril hydrochloridu (10,26 g, 70 mmol) v o-dichlórbenzénu (100 ml) bola zahrievaná na 100 °C i5 hodín. Rozpúšťadlo bolo odparené vo vákuu a zvyšný čierny olej bol čistený bleskovou chromatografiou na kolóne silikagélu (elúcia zmesou 30% etylacetát/hexány) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako žltohnedej kryštalickej tuhej látky:

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 2,48 (s, 3H, CH₃), 4,75 (m, 2H, NCH₂), 5,18 (m, 1H, CHCHaHb), 5,33 (m, 1H, CHCHaHb), 5,85 - 5,92 (m, 1H, CHCH_AH_B).

Krok C: 3,5-dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinón

Hydrát chloridu rutenitého (114 mg, 0,547 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 1-alyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu (5,45 g, 24,88 mmol) a jodistanu sodného (21,82 g, 0,102 mol) vo vode (75 ml), acetonitrilu (50 ml) a chloridu uhličitého (50 ml). Po 3 hodinách bola reakčná zmes extrahovaná metylénchloridom (štyrikrát) a spojené extrakty boli sušené (Na2SO₄) a odparené vo vákuu na sirup.

¹H NMR (CDCI₃) tohto materiálu ukázala, že ide o zmes 1:1 kyseliny a aldehydu. Surová zmes bola rozpustená v acetóne (50 ml) a bolo pridávané Jonesovo činidlo (2,7 M), pokiaľ nezostala reakčná zmes oranžová. Reakčná zmes bola potom extrahovaná do etylacetátu, ktorý bol potom premytý roztokom soli, sušený (Na₂SO₄) a odparený vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako žltohnedej tuhej látky:

¹H NMR (400 MHz, DMSO):Ô 2,41 (s, 3H, Me), 4,86 (s, 2H, CH₂).

Krok D: 3-(4-metoxybenzylamino)-5-chlór-6-metyl-1 -karboxymetyl-pyrazinón

4-metoxybenzylamín (0,83 ml, 6,33 mmol) bol pridaný k miešanému roztoku 3,5 dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu (0,50 g, 2,11 mmol) v dioxáne (6 ml) a získaná zmes bola zahrievaná na 60 °C. Po 16 hodinách bola reakčná zmes rozdelená medzi chloroform a 10% roztok kyseliny citrónovej a organická vrstva bola sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu. Surový produkt bol čistený bleskovou chromatografiou na kolóne (elúcia zmesou 2% metanol/chloroform/2% kyselina

-43octová) a po azeotrópnom sušení zmesou toluén/metanol bola získaná v názve uvedená zlúčenina ako biela tuhá látka:

¹H. NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 2,27 (s, 3H, CCH₃), 3,76 (s, 3H, OCH₃), 4,46 (s, 2H, CH₂), 4,87 (s, 2H, CH₂), 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 1H, arylová H), 7,27 (d, J =é 8,8 Hz, 1 H, arylová H).

Krok E: 3-(4-metoxybenzylamino)-6-metyl-1 -karboxymetyl-pyrazinón

Zliatina Raneyovho niklu (2 g) bola pridaná k miešanému roztoku 3-(4metoxybenzylamino)-5-chlór-6-metyl-1-karboxylmetylpyrazinónu (448 mg, 1,33 mmol) v zmesi 1:1 metanol/1M NaOH (50 ml). Po 2 hodinách bola reakčná zmes filtrovaná cez celit, premytá zmesou 1:1 metanol/voda a filtrát bol odparený vo vákuu na bielu tuhú látku. Anorganické soli boli odstránené preparatívnou HPLC (C 18, voda/acetonitril/0,1 % TFA gradient) za poskytnutia soli TFA v názve uvedenej zlúčeniny ako peny:

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 2,15 (s, 3H, CCH₃), 3,81 (s, 3H, OCH₃), 4,63 (s, 4H, 2x CH₂), 6,57 (s, 1H, pyrazínový H), 6,91 (d, J = 8,7 Hz, 1H, aryl H's), 7,30 (d, J = 8,7 Hz, 1H, arylové H).

Krok F: 3-amino-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinón

Miešaný roztok 3-(4-metoxybenzylamoni)-6-metyl-1 -karboxymetylpyrazinónu (387 mg, 0,927 mmol) v THF (8 ml) bol varený pod spätným chladičom 6 hodín. Reakčná zmes bola odparená vo vákuu s azeotrópnou destiláciou zo zmesi metylénchloridu a etylacetátu. K surovému produktu bol pridaný metanol a získaná tuhá látka bola filtrovaná a sušená za poskytnutia soli TA v názve uvedenej zlúčeniny:

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 2,21 (s, 3H, CH₃), 4,81 (s, 2H, CH₂), 6,56 (s, 1H, pyrazinónový H).

Krok G: 3-amino-6-metyl-1 -[etyl-(2-metylkarboxamidometyl-4-chlórfenoxy)-acetamÍdo]-2-pyrazinón

Hydrochlorid EDC (67 mg, 0,35 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 3-amino6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu (80 mg, 0,27 mmol), HOBT (47 mg, 0,35 mmol), í

l·

-44etyl-(2-aminometyl-4-chlórfenoxy)-acetamidu (85 mg, 0,35 mmol) a N-metylmorfolínu (0,11 ml, 0,97 mmol) v DMF (1 ml) a zmes bola miešaná 16 hodín. K reakčnej zmesi bola pridaná voda a vyzrážaná tuhá látka bola oddelená filtráciou a sušená vo vákuu. Surový produkt bol suspendovaný v etylacetáte, ktorý bol potom varený pod spätným chladičom, ochladený a filtrovaný za poskytnutia, po vysušení v názve uvedenej zlúčeniny ako bielej kryštalickej látky s teplotou topenia >200 °C:

¹H NMR (300 MHz, DMSO): δ 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH₂CH₃), 2,02 (s, 3H, CH₃), 3,09 (kvintet, J = 6,8 Hz, 2H, CFbCHs), 4,37 (d, J = 5,6 Hz, 2H, CONHCH₂), 4,47 (s, 2H, CH₂CO), 4,63 (s, 2H, CH₂CO), 6,30 (br s, 2H, NH₂), 6,51 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 6,94 (d, J = 9,3 Hz, 1H, H-6) skupiny fenoxy), 7,28 (m, 2H, zvyšok), 7,98 (br t, 1 H, NH), 8,67 (br t, 1 H, NH); MS (FAB) 408 (M+1)⁺.

Príklad 2

Výroba 3-amino-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola pripravená ako soľ HCI z 3-amino-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a 2-aminometyl-6-metylpyridín hydrochloridu za použitia postupu z príkladu 1, krok G, teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 303 (M+1)⁺.

Príklad 3

Výroba 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

Cl

NH₂

Krok A: 3,5-dichlór-6-metyl-1-(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón

Hydrochlorid EDC (249 mg, 1,3 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 3,5φ dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu (237 mg, 1,0 mmol), HOBT (176 mg, 1,3 mmol), 5-aminometyl-2-t-butoxykarbonylamino-6-metylpyridínu (237 mg, 1,0 mmol) a N-metylmorfolínu (0,25 ml, 2,3 mmol) v DMF (4 ml) a zmes bola miešaná 2 hodiny. Reakčná zmes bola zriedená etylacetátom a premytá 10% roztokom kyseliny citrónovej, vodou, roztokom hydrogénuhličitanu sodného a soli, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako peny;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,51 (s, 9H, t-Bu), 2,39 (s, 3H, CH₃), 2,59 (s, 3H, CH₃), 4,37 (d, J = 5,5 Hz, NHCH₂), 4,71 (s, 2H, CH₂CO), 6,76 (br t, 1H, NHCH₂), 7,14 (s, 1H, NHBOC), 7,44 (d, J = 8,3 Hz, pyridinónový H-3), 7,66 (d, J = 8,3 Hz, pyridinónový H-3).

Krok B: 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1-(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón

Fenetylamín (0,10 ml, 0,80 mmol) bol pridaný k miešanému roztoku 3,5dichlór-6-metyl-1-(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu (182 mg, 0,40 mmol) dioxáne (0,8 ml) a získaný roztok bol zohriaty na 60 °C. Po 16 hodinách bola reakčná zmes rozdelená medzi vodu a chloroform. Organická vrstva bola sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu. Surový produkt bol čistený bleskovou chromatografiou na kolóne silikagélu (gradient etylacetát/hexány, 40 až 75 % etylacetát) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny;

I

-46¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 1,51 (s, 9H, t-Bu), 2,36 (s, 3H, CH₃), 2,41 (s, 3H, CH₃), 2,92 (t,' J = 7,1 Hz, PhCH₂), 3,66 (q, J = 7,1 Hz, PhCH₂CH₂), 4,35 (d, J = 5,4 Hz, 2H, CONHCH₂), 4,63 (s, 2H, CH₂CO), 6,05 (br t, 1H, NH), 6,54 (br t, 1H, NH), 7,14 (s, 1H, NHBOC), 7,21 - 7,31 (m, 5H, Ph), 7,43 (d, J = 8,3 Hz, 1H, pyridinónový H-3), 7,69 (d, J = 8,3, Hz, 1H, pyridinónový H-4).

Krok C: 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón

Plynný HCI bol prebublávaný roztokom 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu (83 mg, 0,153 mmol) v etylacetáte (10 ml) pri 0 °C 10 minút. Reakčná zmes bola zahriata na teplotu miestnosti a po 1 hodine bol roztok odplynený argónom za poskytnutia bielej zrazeniny, ktorá bola oddelená filtráciou a sušená za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako soli HC.

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 2,26 (s, 3H, CH₃), 2,50 (s, 3H, CH₃), 2,91 (t, J = 7,0 Hz, PhCH₂), 3,60 (t, J = 7,0 Hz, PhCH₂CH₂), 4,29 (s, 2H, CONHCH₂), 4,74 (s, 2H, CH₂CO), 6,82 (d, J = 9,0 Hz, 1H, pyridín H-3), 7,18 - 7,29 (m, 5H, Ph), 7,83 (d, J = 9,0 Hz, 1H, pyridínový H-4); MS (FAB) 441 (m+1)⁺.

Príklad 4

Výroba 3-benzylamino-5-chIór-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamido-metylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako soľ TFA z 3,5-dichlór-6-metyl1-(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinó-47nu z benzylamínu s použitím postupu podľa príkladu 3, kroky B a C; MS (FAB) 428 (M+1)⁺.

Príklad 5

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamido-metylpyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: benzyl-N-(1-kyanoetyl)glycín hydrochlorid

TMSCN (18,8 ml, 141 mmol) bol opatrne pridaný (reakcia je exotermická) k miešanému roztoku voľnej bázy benzylglycínu (23,3 g, 141 mmol - získaná zo soli HCI rozdelením medzi EtOAc a roztok soli zalkalizovaný nasýteným roztokom Na₂CO₃) a acetaldehydu (7,88 ml, 141 mmol) v metylénchloride (50 ml). Po 4 hodinách boli prchavé podiely odstránené vo vákuu a zvyšok bol prenesený do EtOAc a premytý roztokom soli, sušený (Na2SO₄) a odparený vo vákuu na olej. Olej bol znova rozpustený v EtOAc a bol pridaný 9,9M HCI c EtOH (15,25 ml, 151 mmol) za získania kryštalickej zrazeniny, ktorá bola izolovaná filtráciou a premytá EtOAc a Et₂O za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny;

^!H NMR (CD₃OD): δ 1,70 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH₃), 4,16 (d, J = 16,8 Hz, 1H, CHaHb), 4,21 (d, J = 16,8 Hz, 1H, CH_aHb), 4,64 (q, J = 7,0 Hz, a-CH), 5,31 (s, 2H, CH₂O), 7,35-7,44 (m, 5H, Ph).

Krok B: 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinón

Miešaná zmes oxalylchloridu (40,4 ml, 463 mmol) a benzyl-N-(1-kyanoetyl)glycín hydrochloridu (29,51 g, 116 mmol) v 1,2-dichlórbenzéne (110 ml) bola zahrievaná na 100 °C 15 hodín. Prchavé podiely boli odparené vo vákuu a zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou na silikagéli (elúcia zmesou hexánov a

-48 potom zmesou 30 % etylacetát/hexány) za získania tuhej látky, ktorá bola varená pod spätným chladičom v zmesi 2:5 EtOAc/hexány (140 ml), ochladená a oddelená filtráciou za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako svetložltej tuhej látky;

¹H NMR (CDCb): δ 2,35 (s, 3H, CH₃), 4,88 (s, 2H, CH₂), 5,24 (s, 2H, CH₂), 7,38 (m, 5H, Ph).

Krok C: 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1 -(benzyloxykarbonylmetyl)-pyrazinón

Fenetyamín (15,07 ml, 120 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu (13,09 g, 40 mmol) v EtOAc (80 ml) a výsledná zmes bola zahrievaná pod spätným chladičom v atmosfére argónu. Po 2 hodinách bola reakčná zmes ochladená, zriedená chloroformom (500 ml) a premytá 5% roztokom kyseliny citrónovej a soli, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej látky;

^!H NMR (CDCb): δ 2,21 (s, 3H, CH₃), 2,93 (t, J = 7,1 Hz, 2H, PhCH₂), 3,67 (q, J = 6,7 Hz, 2H, CH₂NH), 4,79 (s, 2H, CH₂), 5,21 (s, 2H, CH₂), 6,10 (br t, 1H, NH), 7,20-7,39 (m, 10H,2Ph).

Krok D: 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1 -karboxymetyl-pyrazinón

LiOH.H₂O (3,36 g, 80 mmol) bol pridaný k miešanej suspenzii produktu z kroku C v zmesi 3:3:1 THF/MeOH/H₂O (280 ml) pri 0 °C a zmes bola zahriata na teplotu miestnosti. Po 16 hodinách boli prchavé podiely odparené vo vákuu a roztok bol zriedený vodou (500 ml) a premytý EtOAc. Vodná vrstva bola nasýtená NaCI a okyslená 20% roztokom KHSO₄ (20 ml) za poskytnutia zrazeniny, ktorá bola extrahovaná do zmesi 1:1 etylacetát/THF (400 ml). Organická vrstva bola sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za získania tuhej látky, ktorá bola varená pod spätným chladičom v zmesi 1:1 etylacetát/hexány, ochladená a oddelená filtráciou za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej tuhej látky;

¹H NMR (DMSO-de): δ 2,21 (s, 3H, Me), 2,86 (t, J = 7,4 Hz, 2H, PhCH₂), 3,47 (dt, J = 5,9 a 7,4 Hz, 2H, CH₂NH), 4,72 (s, 2H, CH₂CO₂), 7,18 - 7,31 (m, 5H, Ph), 7,46 (t, J = 5,9 Hz, 1H, NH), 13,30 (br s, 1H, COOH).

-49Krok E: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-karboxymetyl-pyrazinón

3-(2-fenetýlamino)-5-chlór-6-metyl-1-karboxymetyl-pyrazinón (1,66 g, 36,2 mmol) bol pridaný k miešanému roztoku hydroxidu draselného (86 % hmotnostných, 6,10 g, 93,5 mmol) vo vode (400 ml). Po odplynení získaného roztoku argónom bolo pridané 10% Pd/C (3,48 g) a zmes bola miešaná v atmosfére vodíka dodávaného z balónika. Po 16 hodinách bola zmes odplynená dusíkom, bolo pridané ďalšie 10% Pd/C (3,0 g) a zmes bola miešaná v atmosfére vodíka z balónika ďalších 7 hodín, filtrovaná cez celit, koláč bol premytý vodou (200 ml). Filtrát bol okyslený roztokom KHSO₄ (7,8 g, 57,3 mmol) vo vode (35 ml) a získaná zrazenina bola oddelená filtráciou, premytá vodou (200 ml) a sušená 16 hodín vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej látky;

¹H NMR (DMSO-de): δ 2,07 (d, J = 0,7 Hz, 3H, Me), 2,84 (t, J = 7,4 Hz, 2H, PhCH₂), 3,47 (dt, J = 5,9 a 7,4 Hz, 2H, CH₂NH), 4,66 (s, 2H, CH₂CO₂), 6,67 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 6,88 (br t, J = 5,9 Hz, 1 H, NH), 7,17 - 7,32 (m, 5H, Ph).

Krok F: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón

EDC.HCI (0,962 g, 5,02 mmol) bol pridaný k miešanému roztoku 3-(2fenetylamino)-6-metyl-1-karboxymetyl-pyrazinónu (1,20 g, 4,18 mmol), 2-amino-5aminometyl-6-metylpyridín dihydrochloridu (0,874 g, 4,16 mmol), HOBT.H₂O (0,678 g, 5,02 mmol) a N-metylmorfolínu (2,30 ml, 20,9 mmol) v suchom DMF (10 ml). Po 16 hodinách boli prchavé podiely odparené vo vákuu a zvyšok bol rozdelený medzi etylacetát a 1M roztok HCI. pH vodnej vrstvy bolo nastavené na 10 nasýteným roztokom uhličitanu sodného a zrazenina bola oddelená filtráciou, premytá vodou a etanolom za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako voľnej bázy.

Materiál voľnej bázy bol použitý ako východiskový materiál na vytvorenie 3(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón dihydrochloridu (krok G1), 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinón dihydrochloridu typ A monohydrátu (krok G2, tiež označovaný ako „polymorfná kryštalická forma monohydrátu typu A'j alebo 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-50pyridinyl)-pyrazinón dihydrochloridu monohydrátu typu B (krok G3, označovaný tiež ako „polymorfná kryštalická forma monohydrátu typu B“).

Všeobecne zahrnuje výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2~amino-6-metyl5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinón dihydrochloridu monohydrátu typu A kroky a) rozpustenie 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu v kyseline octovej a prídavok vodného HGI; b) oddelenie získanej tuhej fázy; c) odstránenie rozpúšťadla zo získanej tuhej fázy. V jednom uskutočnení tohto spôsobu je množstvo pridaného vodného HCI v kroku a) také, že konečný obsah vody v kyseline octovej je medzi 1 až 5 % hmotnostnými.

Všeobecne zahrnuje výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinón dihydrochloridu monohydrátu typu B kroky a) rozpustenie 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu v kyseline chlorovodíkovej; b) oddelenie získanej tuhej fázy; a c) odstránenie rozpúšťadla z tejto tuhej fázy.

Krok G1: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón dihydrochlorid

Voľná báza 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu bola suspendovaná v etanole (20 ml) a za miešania bol pridaný etanolický HCI (9,9M, 8,36 mmol) pri 0 °C. Soľ bis-HCI rýchlo kryštalizuje zo zmesi a po 30 minútach bola oddelená filtráciou, premytá etanolom a sušená 16 hodín pri 67 Pa za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny;

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 2,10 (s, 3H, CH₃), 2,91 (t, J = 7,6 Hz, PhCH₂), 3,63 (br q, CH₂NH), 4,17 (d, J = 5,5 Hz, 2H, CONHCH₂), 4,62 (s, 2H, CH₂CO), 6,68 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 6,81 (d, J - 9,0 Hz, 1H, pyridínový H-3), 7,21 - 7,31 (m, 5H, Ph), 7,76 (veľmi slabý d, 1H, pyridínový H-4), 7,77 (br s, 2H, NH₂), 8,81 (br t, J = 5,5 Hz, 1H, CONH).

Krok G2: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón dihydrochlorid monohydrát typu A

- 51 Voľná báza 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu (680 g) bola rozpustená v 6,0 I kyseliny octovej a zmes bola za zahrievania miešaná pri 60 °C na získanie roztoku. Zmes bola filtrovaná a filter bol premytý 7,6 I kyseliny octovej a k ochladeniu roztoku bol pri teplote 28 °C pridaný vodný HCI (734 ml 5N HCI a 147 ml vody). Zmes bola zaočkovaná a zohriata na 73 °C za získania jemného očkovacieho lôžka a potom bola ochladená v priebehu niekoľkých hodín na 20 °C a prefiltrovaná a filtračný koláč bol premytý kyselinou octovou a potom 190 proof etanolom a sušený pri 60 °C vo vákuovej sušiarni za premývania dusíkom za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny.

Zlúčenina typu A je charakterizovaná odlišnou krivkou diferenciálnej skenovacej kalorimetrie (DSC); pri rýchlosti zahrievania 5 °C/minútu v otvorenom tégliku za prechodu dusíka prebublávaného vodou pri 5 °C vykazuje endoterm s extrapolovanou teplotou nástupu približne 102 °C a teplotou vrcholu približne 112 °C s teplom premeny približne 115 J/g; potom nasleduje endoterm s extrapolovanou teplotou nástupu približne 171 °C, teplotou vrcholu približne 194 °C a s teplom premeny 83 J/g. Endoterm pri nižšej teplote nastáva v dôsledku straty hydratačnej vody a endoterm pri vyššej teplote v dôsledku tavenia s rozkladom zvyšnej bezvodej fázy. Rôntgenový difrakčný obraz je charakterizovaný vzdialenosťami d 1,306, 1,216, 0,740, 0,571,0,492, 0,448, 0,440, 0,363, 0,307, 0,298, 0,286 a 0,262 nm.

Krok G3: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón dihydrochlorid monohydrát typu B

Do 100 I nádoby bolo vložených 8,12 I 2N kyseliny chlorovodíkovej (HCI) a potom bolo pri teplote pridaných 1,62 I deionizovanej vody. Do nádoby bola pridaná voľná báza 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu (3,30 kg) a obsah bol zahrievaný na 82 °C. Po zretí po dobu 15 minút bol pridaný Solka Flok (24 g) a získaný roztok bol filtrovaný pomocou zvyškového vákua za sebou zaradenými prietokovými filtrami (20 a 5 μιτι). Použitá nádoba bola opláchnutá 3,25 I deionizovanej vody (pri teplote miestnosti), ktorá bola spojená s pôvodným filtrátom a zahriata na 72 °C. Roztok bol ochladený na 53 °C,

-52zaočkovaný a ochladzovanie pokračovalo v priebehu 3 hodín na teplotu 25 °C. V priebehu 30 minút bola do kaše po kvapkách pridávaná koncentrovaná kyselina chlorovodíková (1,30 I). Kaša bola ochladená na 20 °C a tuhé podiely boli izolované vákuovou filtráciou. Koláč bol premytý 6,48 I 1N HCI. Koláč bol sušený vo vákuu pri teplote miestnosti za získania v názve uvedenej zlúčeniny.

Zlúčenina typu B je charakterizovaná krivkou diferenciálnej skenovacej kalorimetrie (DSC); pri rýchlosti zahrievania 5 °C/min v otvorenom tégliku za prechodu dusíka prebublávaneho vodou pri 5 °C vykazuje endoterm s extrapolovanou teplotou nástupu približne 120 °C a teplotou vrcholu približne 132 °C a teplom premeny približne 123 J/g nasledovaný endotermom s extrapolovanou teplotou nástupu približne 160 .°C, teplotou vrcholu približne 191 °C a teplom premeny približne 78 J/g. Endoterm pri nízkej teplote je spôsobený stratou hydratačnej vody a endoterm pri vyššej teplote tavením s rozkladom zvyšnej bezvodej fázy. Obraz róntgenovej práškovej difrakcie je charakterizovaný vzdialenosťami d 1,298, 1,191, 0,724, 0,598, 0,490, 0,446, 0,423, 0,399, 0,375, 0,361, 0,341, 0,294, 0,285 a 0,261 nm.

Príklad 6

3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-[etyl-(2-metylkarboxamidometyl-4-chlórfenoxy)-acetamido]-2-pyrazinón

Cl

EDC hydrochlorid (56 mg, 0,29 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 3-(2fenetylamino)-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu (91 mg, 0,23 mmol), HOBT (40 mg, 0,29 mmol) etyl-(2-aminometyl-4-chlórfenoxy)-acetamid hydrochloridu (82 mg,

-530,29 mmol) a N-metylmorfolínu (0,13 ml, 1,17 mmol) v DMF (1 ml) a zmes bola miešaná 16 hodín. Reakčná zmes bola rozdelená medzi etylacetát a vodu a bolo pridané dostatočné množstvo roztoku soli na dispergáciu emulzie. Kalná organická vrstva bola oddelená a tuhé podiely boli rozpustené prídavkom chloroformu a metanolu a roztok bol sušený a odparený do sucha. Surový produkt bol suspendovaný v etylacetáte a filtrovaný, premytý vodou a potom etylacetátom za získania, po vysušení v názve uvedenej zlúčeniny, ako bielej kryštalickej tuhej látky s teplotou topenia >200 °C;

¹H NMR (400 MHz, DMSO): δ 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH₂CH₃), 2,03 (s, 3H, CH₃), 2,83 (t, J = 7,4 Hz, 2H, PhCH₂), 3,09 (kvintet, J = 6,7 Hz, 2H, CH₂CH₃), 3,47 (q, J = 6,9 Hz, 2H, PhCH₂CH₂), 4,37 (d, J = 5,7 Hz, 2H, CONHCH₂), 4,64 (s, 2H, CH₂CO), 6,63 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 6,77 (br t, 1H, NH), 6,94 (d, J = 8,4 Hz, 1H, H-6 skupiny fenoxy), 7,16-7,30 (m, 7H, zvyšok), 7,98 (br t, 1H, NH), 8,67 (br t, 1H, NH); MS (FAB) 512 (M+1)⁺.

Príklad 7

Výroba (R)-3-(1-fenyl-2-propylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a (R)-1-fenyl-2-propylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 421 (M+1)⁺.

Príklad 8

Výroba (S)-3-(1-fenyl-2-propylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

νη₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a (S)-1-fenyl-2-propylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 421 (M+1)⁺.

Príklad 9

Výroba 3-(1 -fenyl-2-metyl-2-propylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 1 -fenyl-2-metyl-2-propylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 435 (M+1)⁺.

Príklad 10

Výroba 3-(2-metyl-2-propylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-metyl-2-propylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 358 (M+1)⁺.

Príklad 11

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-4,6-dimetyl-5-metylkarbox-amido-metylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3-(2-fenetylamino)6-metyl-1-metylkarboxypyrazinónu a 2-amino-5-aminometyl-4,6-dimetylpyridín dihydrochloridu s použitím postupu z príkladu 5, krok F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 421 (M+1)⁺.

Príklad 12

Výroba (R,S)-3-(2-fenyl-1-propylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a rac-2-fenyl-1-propylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 421 (M+1)⁺.

Príklad 13

Výroba 3-(2-propylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-propylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 345 (M+1)⁺.

Príklad 14

Výroba 3-(2-fenoxyetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamido-metylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCl soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-fenoxyetylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 423 (M+1)⁺.

Príklad 15

Výroba 3-[2-(4-hydroxyfenyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

í.

t

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCl soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-(4-hydroxyfenyl)-etylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia 195 až 199 °C; MS (FAB) 423 (M+1)⁺.

Príklad 16

Výroba 3-cyklopropylamino-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

νη₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a cyklopropylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 343 (M+1)⁺.

Príklad 17

Výroba 3-cykIopropylmetylamino-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a cyklopropylmetylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 357 (M+1)⁺.

Príklad 18

Výroba (S)-3-(2-hydroxy-2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

ΝΗ₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a (S)-2-hydroxyfenetylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 423 (M+1)⁺.

Príklad 19

Výroba (R)-3-(2-hydroxy-2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a (R)-2-hydroxyfenetylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 423 (M+1)⁺.

Príklad 20

Výroba 3-(2-cyklopropyletylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: 4-ftalimido-1-butén

Zmes 4-bróm-1-butánu (1,01 ml, 10,0 mmol) a ftalimidu draselného (1,85 g, 10,0 mmol) v DMF (10 ml) bola miešaná pri 100 °C 3 hodiny. Výsledná zmes bola ochladená a rozdelená medzi etylacetát a vodu. Organická vrstva bola premytá vodou a roztokom soli, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu na kryštalickú tuhú látku. Surový produkt bol čistený bleskovou chromatografiou na silikagéli (elúcia zmesou 20 % etylacetát/hexány) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej tuhej látky;

¹H.NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 2,45 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,78 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 5,04 (m, 2H), 5,76 (m, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,84 (m, 2H).

Krok B: 2-ftalimidoetylcyklopropán

4-ftalimid-1-butén bol cyklopropanovaný za použitia postupu podľa Suda (Synthesis, 1981, 714) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej tuhej látky;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 0,05 (m, 2H), 0,42 (m, 2H), 0,69 (m, 1H), 1,58 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,77 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 7,71 (m, 2H), 7,84 (m, 2H).

Krok C: 2-cyklopropyletylamín

Zmes 2-ftalimidoetylcyklopropánu (1,40 g, 6,50 mmol) a hydrátu hydrazínu (0,32 ml, 6,50 mmol) v etanolu (10 ml) bola miešaná pod spätným chladičom 1 hodinu. Zmes bola ochladená a bola pridaná cHCI (0,54 ml, 6,50 mmol) za získania hustej zrazeniny. Zmes bola odparená vo vákuu a zvyšok bol suspendovaný v 1M roztoku HCI (10 ml) a zohrievaný na 50 °C 5 minút, ochladený a prefiltrovaný. Filtrát

-61 bol premytý metylénchloridom a potom bol odparený vo vákuu a azeotrópne destilovaný so zmesou toluén/etanol za získania HCI soli v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej tuhej látky;

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 0,15 (m, 2H), 0,54 (m, 2H), 0,74 (m, 1H), 1,55 (q, J = 7,3 Hz, 2H), 3,01 (t, J = 7,3 Hz, 2H).

Krok D: 3-(2-cyklopropyletylamino)-5-chlór-6-metyl-1-(benzyloxykarbonylmetyl-pyrazinón

Zmes 2-cyklopropyletylamín hydrochloridu (73 mg, 0,60 mmol), 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu (164 mg, 0,50 mmol) a hydrouhličitanu sodného (101 mg, 1,20 mmol) v toluéne (1 ml) a vode (0,5 ml) bola miešaná pri 80 °C 3 hodiny, reakčná zmes bola potom ochladená a rozdelená medzi metylénchlorid a 10% roztok kyseliny citrónovej. Organická vrstva bola sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako kryštalickej tuhej látky;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 0,10 (m, 2H), 0,47 (m, 2H), 0,74 (m, 1H), 1,53 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,21 (s, 3H, CH₃), 3,49 (q, J = 6,6 Hz, 2H), 4,80 (s, 2H), 5,22 (s, 2H), 6,18 (br t, 1 H), 7,33 - 7,40 (m, 5H).

Krok E: 3-(2-cyklopropyletylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinón

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(2-cyklopropyletylamino)-5chlór-6-metyl-(benzyloxykarbonylmetyl)pyrazinónu za použitia postupu z príkladu V, kroky D až F, teplota topenia >200 °C: MS (FAB) 371 (M+1)⁺.

Príklad 21

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-etyl-1-(2-aminO“6-metyl“5-metylkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

ΝΗ₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z propiónaldehydu za použitia postupu z príkladu 5; MS (FAB) 421 (M+1)⁺.

Príklad 22

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3-(2-fenetylamino)6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 2-amino-5-aminometylpyridínu s použitím postupu z príkladu 5, krok F; teplota topenia >220 °C; MS (FAB) 393 (M+1)⁺.

Príklad 23

Výroba 3-(5-indanylmetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

ΝΗ₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 5-indanylmetylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 434 (M+1)⁺

Príklad 24

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-{etyl-(2-metylkarboxamidometylfenoxy)-acetamido]-pyrazinónu

NHEt

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a etyl-2-aminometylfenoxyacetamidu s použitím postupu z príkladu 6; MS (FAB) 478 (M+1)⁺.

Príklad 25

Výroba 3-(4-metoxybenzylamino)-6-metyl-1-{etyl-(2-metylkarboxamido-metyl-4chlórfenoxy)-acetamido]-pyrazinónu

MeO

NHEt

Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5dichlór-6-metylpyrazinónu a 4-metoxybenzylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až F, nasledovaného postupom z príkladu 6, teplota topenia >200 °C; MS (FAB) 528 (M+1)⁺. .

Príklad 26

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(metylkarboxamidometyl-2-hydroxy-5-chlórfenyl)-pyrazinónu

Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a 2-aminometyl-4-chlórfenolu s použitím postupu z príkladu 6; MS (FAB) 427 (M+1)⁺.

Príklad 27

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-[etyl-(2-metylkarboxamido-4-chlórfenoxy)-acetyl]-pyrazinónu

,OEt

Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a etyl-2-aminometylmetyl-4-chlórfenoxyacetátu s použitím postupu z príkladu 6; MS (FAB) 513 (M+1)⁺.

Príklad 28

Výroba 3-(2-metyl-2-propylamino)-6-metyl-1-[etyl-(2-metylkarboxamidometyl-4chlórfenoxy)-acetamido]-pyrazinónu

Cl

NHEt

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 3-(2-metyl-2propylamino)-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu s použitím postupu z príkladu 6; teplota topenia 64 až 70 °C; MS (FAB) 464 (M+1)⁺.

Príklad 29

Výroba rac-trans-3-(2-fenylcyklohexylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola Vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a rac-trans-2-fenylcyklohexylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až E, nasledovaného postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 461 (M+1)⁺.

Príklad 30

Výroba rac-cis-3-(2-fenylcyklohexylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a rac-cis-2-fenylcyklohexylamínu s použitím postupu z príkladu 5, kroky C až E, nasledovaného postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 461 (M+1f.

Príklad 31

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-4-metylkarboxamidometylpyridinyl)pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCl soľ z 3-(2-fenetylamino)6-metyl-1-metylkarboxypyrazinónu a 2-amino-4-aminometylpyridínu s použitím postupu z príkladu 5, krok F; MS (FAB) 393 (M+1)⁺.

Príklad 32

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-3-metyl-4-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: 2-t-butyloxykarbonylamino-3-metylpyridín-N-oxid

K roztoku 1,0 g (4,8 mmol) 2-t-butoxykarbonylamino-3-metylpyridínu v 25 ml

CH2CI2 bolo pri 0 °C pridaných 25 ml 5% NaHCO3. K rýchlo miešanej zmesi bolo v priebehu 20 minút pridaných päť dávok 1,73 g (5 mmol) kyseliny 3chlórperoxybenzoovej. Studený kúpeľ bol ponechaný zrieť cez noc a reakcia bola zastavená 10% Na2SO₄. Po miešaní počas 5 minút bola vodná vrstva extrahovaná CH₂CI₂, sušená nad Na₂SO₄, bolo pridané aktívne uhlie a rozpúšťadlá boli odstránené za vzniku oleja, ktorý bol chromatograficky čistený na 50 g jemného

-68SiO₂ s použitím zmesi 98:2 až 96:4 CHCI3-CH3OH za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako belavej tuhej látky;

¹H NMR (CDCI3): δ 8,23 (s, 1H), 8,12 (d, 1H, 6,6 Hz), 7,15 (d, 1H, 6,8 Hz),

6.98 (t, 1 H, 6,3 Hz), 2,36 (s, 3H), 1,52 (s, 9H).

Krok B:: 2-t-butyloxykarbonylamino-3-metyl-1-metoxypyridínium metylsuifát

K miešanému roztoku 620 mg (0,29 mmol) 2-t-butyloxykarbonylamino-3metylpyridín-N-oxidu v 8 ml CH₂CI₂ Ar bolo pridaných 262 μΙ (0,3 mmol) dimetylsulfátu. CH₂CI₂ bol ponechaný, aby sa odparil v pomalom prúde Ar cez noc za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako svetlej žltohnedej tuhej látky;

¹H NMR (DMSO-d₆): δ 10,8 (s, 1 H), 9,32 (d, 1H, 6,6 Hz), 8,50 (d, 1H, 7,8 Hz),

7.98 (t, 1H, 7,1 Hz), 4,28 (s, 3H), 3,37 (s, 3H), 2,41 (3H), 1,49 (s, 9H).

Krok C: 2-t-butyloxykarbonylamino-4-kyano-3-metylpyridín

Produkt z predchádzajúcej reakcie bol zahrievaný so 651 mg (10 mmol) kyanidu draselného v 4,5 ml vody pri 50 °C cez noc. Reakčná zmes bola zriedená vodou a 10% NaCC>3, extrahovaná 3 x CHCI₃, spojená organická vrstva bola premytá roztokom soli, sušená nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlá boli odstránené za poskytnutia tmavého oleja, ktorý bol rozpustený v CHCI₃ a nanesený na kolónu 20 g jemného SiO₂. Kolóna bola eluovaná zmesou 1:4 až 1:3 EtOAc-hexán za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako bezfarebnej tuhej látky;

¹H NMR (CDCI3): δ 7,64 (d, 1H, 7,7 Hz), 7,44 (d, 1H, 7,7 Hz), 6,80 (s, 1H), 2,38 (s, 3H), 1,52 (s, 9H).

Krok D: 4-aminometyl-2-t-butyloxykarbonylamino-3-metylpyridín

Roztok 175 mg (0,75 mmol) 2-t-butyloxykarbonylamino-4-kyano-3-metylpyridínu a 88 μΙ (1,5 mmol) kyseliny octovej v 10 ml MeOH bol hydrogenovaný na 75 mg 10% Pd/C pri tlaku 379 kPa cez noc na Parrovom prístroji. Katalyzátor bol odstránený filtráciou, zmes bola koncentrovaná za zníženého tlaku a zvyšok bol rozdelený medzi CHCI3 a 10% Na₂CO3. Vodná vrstva bola extrahovaná CHCI3 a

-69spojené organické vrstvy boli sušené nad Na₂SO4 a koncentrované za poskytnutia 150 mg v názve uvedenej zlúčeniny ako bezfarebného oleja;

¹H NMR (CDCI₃): δ 7,48 (d, 1H, 7,7 Hz), 7,02 (d, 1 H, 7,7 Hz), 6,69 (s, 1H), 3,88 (s, 2H), 2,28 (s, 3H), 1,51 (s, 9H).

Krok E: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-3-metyl-4-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 3-(2-fenetylamino)6-metyl-1 -karboxymetylpyrazinónu a 4-aminometyl-2-t-butyloxykarbonylamino-3metylpyridínu za použitia postupu podľa spôsobu 4; MS (FAB) 407 (M+1)⁺.

Príklad 33

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-rnetyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxymetylpyrazinónu a 2-(2-pyridyletyl)amínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, kroky E a F, teplota topenia 209,5 až 212 °C; MS (FAB) 408 (M+1)⁺.

Príklad 34

Výroba 3-(1-pentylamino)-5-chlór-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazínónu

-70Cl

nh₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3,5-dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a pentylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok F; MS (FAB) 407 (M+1)⁺.

Príklad 35

Výroba 3-[2-(4-morfolino)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxymetylpyrazinónu a 2-(4-morfolinoetyl)amínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4;

Analýza pre C20H29N7O3 . 3.7HCI. 3,05Η₂Ο vypočítané: C 39,69, H 646, N 16,20 % nájdené: C 39,69, H 6,46, N 15,95 %.

-71 Príklad 36

Výroba 3-[2(S)-metyl-1 -butylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3,5-dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 2(S)-metyl-1-butylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, kroky E a F, teplota topenia 188,5 až 193,5 °C.

Príklad 37

Výroba 3-(1-pentylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamido-metylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3,5-dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 1-pentylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, kroky E a F, teplota topenia 115 až 118 °C.

Príklad 38

Výroba 3-(2,2-difenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamido-metyl-pyridinyl)-pyrazinónu

ΝΗ₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a 2,2-difenetylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4; Analýza pre C28H30N6O2.2,0HCI. 0,50H₂0 vypočítané: C 59,96, H 5,89, N 14,89 % nájdené: C 59,53, H 5,72, N 14,59 %.

Príklad 39

Výroba 3-cyklohexylamino-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a cyklohexylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia 221 až 227 °C.

Príklad 40

Výroba 3-(2-indanylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyi-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a 2-aminoindánu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4. Analýza pre C23H26N6O2.2.0HCI. 10H₂O . 0,35EtOAc vypočítané: C 54,25, H 6,12, N 15,56 % nájdené: C 54,20, H 5,85, N 15,54%.

Príklad 41

Výroba 3-[2(R)-hydroxy-1 (S)-indanylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3,5-dichlór-6-metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 2(R)-hydroxy-1(S)-aminoindánu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia 280 až 283 °C.

-74Príklad 42

Výroba 3-[2-(3,4-metyléndioxyfenetylamino)]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometyl-pyridinyO-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a 2-(3,4-metyléndioxyfenyl)-etylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4.

Analýza pre C23H26N6O4 . 3.0HCI. 0,30EtOAc vypočítané: C 49,57, H 5,40, N 14,33 % nájdené: C 49,94, H 5,25, N 14,48%.

Príklad 43

Výroba 3-[2-(4-fIuórfenetylamino)]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyi-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a 2-(4-fluórfenyl)etylamínu za použitia postupu

-75z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 425 (M+1)⁺.

Príklad 44

Výroba 3-[2-(4-pyridyl)etylamino)]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a 2-(4-pyridyl)-etylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia 220 až 226 °C; MS (FAB) 408 (M+1)⁺.

Príklad 45

Výroba rac-3-(1-índanylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

N'

H

O

-76V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxy-metylpyrazinónu a rac-1-aminoindánu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4. Analýza pre C23H26N6O2.2,0HCI. 1,0H₂O vypočítané: C 54,22, H 5,94, N 16,50 % nájdené: C 54,12, H 5,65, N 16,45 %.

Príklad 46

Výroba rac-3-[2-(2-tetrahydropyranyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

Krok A: rac-2-kyanometylpyrán

Zmes rac-2-brómmetylpyránu (3,0 g, 16 mmol) a kyanidu sodného (1,6 g, 33 mmol) v DMF (50 ml) bola zahrievaná pri 100 °C cez noc. Rozpúšťadlo bolo potom odstránené vo vákuu a zvyšok bol rozdelený medzi metylénchlorid a vodu. Organická fáza bola sušená nad síranom sodným. Odstránenie rozpúšťadla a chromatografia zvyšku (4:1 hexán/etylacetát) poskytla v názve uvedenú zlúčeninu;

¹H NMR (CDCI3): δ 1,35 - 1,91 (m, 6H), 2,50 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 3,59 (m, 2H), 4,01 (m, 1H).

Krok B: rac-2-aminoetylpyrán

Zmes rac-2-kyanometylpyránu (4,2 g) a 10% Pd/C (4,0 g) v zmesi 1:1 etanol/kyselina octová (150 ml) bola hydrogenovaná pri 379 kPa cez noc. Reakčná zmes bola prefiltrovaná cez celit a rozpúšťadlá boli potom odstránené vo vákuu. Zvyšok bol rozdelený medzi chloroform a 10% roztok uhličitanu sodného. Organická

-77fáza bola sušená nad síranom sodným. Odstránenie rozpúšťadla poskytlo v názve uvedenú zlúčeninu;

¹H NMR (CDCb): δ 1,32 - 1,84 (m, 5H), 3,06 (m, 2H), 3,44 (m, 2H), 3,98 (m, 1H).

Krok C: rac-3-[2-(2-tetrahydropyranyl)etylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-(2-tetrahydropyranyl)etylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E, nasledovaného postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 415 (M+1)⁺.

Príklad 47

Výroba 3-[2-(3-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 3,5-dichlór-6-metyl1-karboxymetylpyrazinónu a 2-(3-pyridyl)etylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia >250 °C; MS (FAB) 408 (M+1)⁺.

Príklad 48

Výroba 3-[2-(4-imidazolyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

ΝΗ₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a histamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E a postupu podľa spôsobu 4; MS (FAB) 397 (M+1)⁺.

Príklad 49

Výroba 3-[2-(3-indolyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5dichlór-6-metylpyrazinónu a tryptamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E a postupu podľa spôsobu 4, teplota topenia 195 až 197 °C; MS (FAB) 446 (M+1)⁺.

Príklad 50

Výroba 3-{2-[3-(6-fluór)-indolyl]etylamino}-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

-79Η

N

F

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 6-fluórtryptamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E a postupu podľa spôsobu 4; MS (FAB) 464 (M+1)⁺.

Príklad 51

Výroba 3-(2-cyklopentyletylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCl soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-cyklopentyletylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E a postupu podľa spôsobu 4; MS (FAB) 399 (M+1)⁺.

Príklad 52

Výroba 3-[2-(4-metylfenyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu ?'·* ·'·

nh₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-(4-metylfenyl)ety lamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E a postupu podľa spôsobu 4, teplota topenia 254,5 až 60 °C; MS (FAB) 421 (M+1)⁺.

Príklad 53

Výroba 3-[2-(2-tienyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-amíno-6-metyl-5-metyl-karbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3,5-dichlór-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a 2-(2-tienyl)etylamínu za použitia postupu z príkladu 1, krok D, nasledovaného postupom z príkladu 5, krok E a postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia 245,5 až 249,5 °C; MS (FAB) 413 (M+1)⁺.

Príklad 54

Výroba rac-3-[1-(3-pyridyl)-2-propylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

νη₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 1-(3-pyridyl)-2-propylamínu (ktorý bol vyrobený postupom podľa Burger a ďalší, J. Org. Chem., 1957, 22, 143) za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E a postupu podľa spôsobu 4; MS (FAB) 422 (M+1)⁺.

Analýza pre C22H27N7O2.4,1 HCI. 1,OEtOAc vypočítané: C 47,38, H 5,98, N 14,88 % nájdené: C 47,37, H 6,11, N 14,88 %.

Príklad 55

Výroba rac-3-[2-(3-pyridyI)-1 -propylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: 2-(3-pyridyl)-1-nitropropán

K roztoku bezvodého CeCI₃ (8,63 g, 35,0 mmol) v 200 ml bezvodého THF, ochladeného na 0 °C, bol po kvapkách pridaný MeMgBr (1,0M v éteri, 11,7 ml, 35,0 mmol). Po miešaní počas 1,5 hodiny bol roztok ochladený na -40 °C a po kvapkách bol v priebehu 15 minút pridaný roztok 3-(2-nitroetenyl)pyridínu (dostupný od firmy TCI-USA) (1,50 g, 10,0 mmol) v 5 ml THF. Po 5 minútach bola reakcia

-82ukončená ľadovým AcOH (1 ml) a koncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol rozpustený v metylénchloride (200 ml) a premytý NaOH (1 x 50 ml, 1N) a vodou (1 x 50 ml), sušený nad Na₂SO₄, prefiltrovaný a koncentrovaný vo vákuu, zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou (30 x 150 mm kolóna SiO₂, EtOAc/CH₂CI₂ (1:3) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako oleja;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,40 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 3,62 - 3,71 (m, 1H), 4,53-4,62 (m, 2H), 7,26-7,36 (m, 1H), 7,54-7,59 (m, 1H), 8,48-8,53 (m, 2H).

Krok B: 2-(3-pyridyl)-1-propylamín

K roztoku 2-(3-pyridyl)-1 -nitropropánu (0,91 g, 5,48 mmol) v 20 ml etanolu a 0,1 ml 12N HCI bolo pridané 10% Pd/C (1,00 g) pod argónom. Roztok bol evakuovaný a premytý niekoľkokrát vodíkom, umiestnený do atmosféry vodíka a dôkladne miešaný. Po 14 hodinách bola zmes evakuovaná a premytá niekoľkokrát argónom, prefiltrovaná cez celit a premytá 200 ml etanolu. Prchavé podiely boli odstránené vo vákuu za získania zvyšku, ktorý bol rozdelený medzi metylénchlorid (100 ml) a NaOH (50 ml, 10%) a vodná vrstva bola extrahovaná metylénchloridom (2 x 100 ml). Spojené organické vrstvy boli sušené nad MgSO₄, filtrované, koncentrované vo vákuu a zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou (20 x 150 mm kolóna SiO₂, CH₂CI₂/CH₂CI₂ nasýtený zmesou NH₃/MeOH 60:39:1) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako oleja;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 2,74 - 2,85 (m, 1H), 2,87 - 2,92 (m, 2H), 7,23 - 7,26 (m, 1 H), 7,51 - 7,54 (m, 1 H), 8,47 - 8,49 (m, 2H).

Krok C: ra c-3-[2-(3-py rid y I)-1 -propylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-(3-pyridyl)-1-propylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až F;

Analýza pre C₂₂H₂₇N₇O₂.0,1 H₂O vypočítané: C 62,42, H 6,48, N 23,10% nájdené: C 62,08, H 6,28, N 23,55 %.

Príklad 56

Výroba 3-[2-metyl-2-(2-pyridyl)-1 -propylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: 2-metyl-2-(2-pyridyl)-propionitril

K roztoku 2-pyridylacetonitrilu (1,00 g, 8,44 mmol) v bezvodom DMF (20 ml) ochladenému na 0 °C bol po častiach pridaný NaH (0,743 g, 18,58 mmol), 60 % hmotnostných ako disperzia v minerálnom oleji). Po 10 minútach bol pridaný jódmetán (1,31 ml, 21,11 mmol) pomocou striekačky v priebehu 15 minút. Po 1 hodine bola zmes zriedená do etylacetátu (200 ml) a premytá vodou (5 x 20 ml) a roztokom soli (1 x 20 ml) a sušená nad MgSO₄. Roztok bol prefiltrovaný, prchavé látky boli odstránené vo vákuu a olej bol čistený bleskovou chromatografiou (30 x 150 mm kolóna S1O2, elúcia gradientom EtOAc/hexán 1:4 až 1:3) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako bezfarebného oleja;

^!H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,77 (s, 6H), 7,22 - 7,27 (m, 1H), 7,59 (dd, J =

7,8 a 0,9 Hz, 1H), 7,71 - 7,75 (m, 1H), 8,59 - 8,61 (m, 1H).

Krok B: 2-metyl-2-(2-pyridyl)-1-propylamín

K roztoku 2-metyl-2-(pyridyl)-propionitrilu (1,018 g, 6,97 mmol) v 25 ml bezvodého dietyléteru v atmosfére argónu bol po častiach pridaný LiAIH₄ (0,538 g, 14,17 mmol). Po 1 hodine bola reakcia ukončená prídavkom vody (1 ml), NaOH (1,0 ml, 1 N), vody (8 ml), potom dietyléteru (20 ml) a zmes bola miešaná 10 hodín. Roztok bol prefiltrovaný cez lôžko celitu a premytý zmesou dietyléter: MeOH (1:1) (200 ml). Filtrát bol koncentrovaný vo vákuu a zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou (30 x 150 mm kolóna S1O2, CH2CI2/CH2CI2 nasýtený NH₃/MeOH,

-84gradientová elúcia 60:39:1 až 60:38:2 až 60:37:3) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako živice;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,21 (br s, 2H), 1,38 (s, 6H), 2,98 (s, 2H), 7,05 -7,14 (m, 1H), 7,34-7,38 (m, 1H), 7,60-7,64 (m, 1H), 8,59-8,61 (m, 1H).

Krok C: 3-[2-metyl-2-(2-pyridyl)-1 -propylamino]-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-metyl-2-(2-pyridyl)-1propylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 436 (M+1)⁺;

Analýza pre C23H29N7O2 . 3.0HCI. 0,3EtOAc vypočítané: C 50,87, H 6,07, N 17,16% nájdené: C 50,52, H 5,76, N 16,88 %.

Príklad 57

Výroba rac-3-{1-[5-(2-metylaminopyridyl)]-2-propylamino}-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: metyl-6-(t-butoxykarbonylamino)-nikotinát

K roztoku kyseliny 6-aminonikotínovej (2,00 g, 14,48 mmol) rozpustenej v zmesi chloroform/MeOH (90 ml:30 ml) bol pridaný (trimetylsilyl)diazometán (2,0M v hexánoch, 25 ml). Po 15 minútach bola pridaná kyselina octová (0,1 ml) a roztok bol koncentrovaný vo vákuu na zvyšok. Rozotrenie so zmesou EtOAc/hex (2:1) poskytlo metyl-6-aminonikotinát ako svetložltú tuhú látku po filtrácii. Tento materiál bol priamo použitý v nasledujúcom kroku. K roztoku metyl-6-aminonikotinátu (1,86

-85g, 12,22 mmol) rozpustenému v metylénchloride (90 ml) bol pridaný di-tbutyldikarbonát (2,69 g, 12,34 mmol), 4-dimetylaminopyridín (0,15 g, 1,22 mmol) a trietylamín (2,00 ml, 14,66 mmol). Po 14 hodinách bola reakčná zmes zriedená EtOAc (400 ml) a premytá kyselinou citrónovou (1 x 50 ml, 10%), vodou (1 x 50 ml) a roztokom soli (1 x 50 ml) a bola sušená nad MgSO₄, filtrovaná a koncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou (40 x 150 mm kolóna SiO₂, EtOAc/hex, gradientová elúcia 1:6,1:5,1:3) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako bielej tuhej látky;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,56 (s, 9H), 3,91 (s, 3H), 8,06 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,24-8,27 (m, 1H), 8,57 (br s, 1H), 8,93 (dd, J = 0,7 a 2,4 Hz, 1H).

Krok B: 2-(t-butoxykarbonylamino)-5-pyridínkarboxaldehyd

K roztoku metyl-6-(terc.butoxykarbonylamino)nikotinátu (2,20 g, 8,72 mmol) v bezvodom THF (50 ml), ochladenému na -30 °C bol po kvapkách pridaný DIBALH (1,0M v hexáne, 34,8 ml, 34,8 mmol). Po 1 hodine bolo pridaných 40 ml nasýteného roztoku vínanu sodnodraselného a roztok bol dôkladne miešaný 10 hodín. Prchavé podiely boli odstránené vo vákuu a vodná vrstva bola extrahovaná metylénchloridom (3 x 50 ml). Organická vrstva bola premytá vodou (1 x 50 ml) a roztokom soli (1 x 50 ml), sušená nad MgSO₄, filtrovaná a koncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol použitý priamo v nasledujúcom kroku. K roztoku oxalylchloridu (4,12 f,

32,46 mmol) v metylénchloride (30 ml), ochladenému na -78 °C bol po kvapkách pridaný DMSO (2,54 g, 32,46 mmol) rozpustený v metylénchloride (9 ml). Po 20 minútach bol pridaný surový alkohol (1,82 g, 8,11 mmol) rozpustený v 35 ml metylénchloride a potom bol pridaný trietylamín (4,92 g, 48,66 mmol). Ľadový kúpeľ bol odstránený a reakčná zmes bola miešaná 1 hodinu pri teplote miestnosti a potom bola pridaná voda (30 ml). Vrstvy boli oddelené a vodná vrstva bola extrahovaná metylénchloridom (2 x 50 ml). Organická vrstva bola premytá vodou (1 x 50 ml) a roztokom soli (1 x 50 ml), sušená nad MgSO₄, filtrovaná a koncentrovaná vo vákuu. Zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou (30 x 150 mm kolóna SiO₂, EtOAc/metylénchlorid 1:11) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako bezfarebnej tuhej látky;

-86¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,55 (s, 9H), 7,79 (br s, 1H), 8,13 - 8,14 (m, 2H), 8,71 (dd, J = 1,1 a 1,8 Hz, 1H), 9,96 (s, 1H).

Krok C: 2-(t-butoxykarbonylamino)-5-[1-(2-nitropropenyl)]-1-pyridín

K roztoku 2-(t-butoxykarbonylamino)-5-pyridínkarboxaldehydu (1,20 g, 5,40 mmol) rozpusteného v N-metylmorfolíne (40 ml) bol pridaný nitroetán (2,20 g, 27,0 mmol), fluorid draselný (0,144 g, 2,49 mmol) a 18-crown-6 (0,036 g). Po 1 hodine bol pridaný acetanhydrid (2,20 g, 21,6 mmol) a katalytické množstvo 4dimetylaminopyridínu (0,05 g). Reakcia bola skončená po 12 hodinách vliatím do 200 ml ľadu. Vodná vrstva bola extrahovaná metylénchloridom (3 x 75 ml) a spojené organické vrstvy boli premyté vodou (2 x 50 ml) a roztokom (1 x 50 ml), sušené nad MgSO₄, filtrované a koncentrované vo vákuu. Zvyšok bol rozotrený s metylénchloridom a tuhý podiel bol oddelený filtráciou za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako svetložltej tuhej látky;

^!H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,54 ((s, 9H), 2,47 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 7,41 (br s, 1H), 7,76 (dd, J = 2,3 a 8,8 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,05 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 8,33 (d, J = 2,4 Hz, 1H).

Krok D. rac-1-[5-(2-metylaminopyridyl)]-2-propylamín

K roztoku 2-(t-butoxykarbonylamino)-5-[1-(2-nitropropenyl)]-1 -pyridínu (0,20 g, 0,716 mmol) rozpusteného vTHF (8 ml), ochladenému na 0 °C, bol pridaný boranový komplex sTHF (4,30 ml, 1,0M v THF, 4,30 mmol). Ľadový kúpeľ bol odstránený a bol pridaný NaBH₄ (0,0135 g, 0,358 mmol) a reakčná zmes bola zohriata na 65 °C. Po 24 hodinách bola reakčná zmes vliata do ľadu (50 ml), okyslená na pH 2 3N HCI a zohrievaná 2 hodiny na 65 °C. pH bolo nastavené na 8 vodným roztokom NaOH (1N) a rozpúšťadlo bolo odstránené vo vákuu. Vodná vrstva bola extrahovaná metylénchloridom (3 x 75 ml) a spojené organické vrstvy boli premyté vodou (2 x 50 ml) a roztokom soli (1 x 50 ml), sušené nad MgSO₄, filtrované a koncentrované vo vákuu. Zvyšok bol čistený bleskovou chromatografiou (15 x 150 mm kolóna SiO₂, CH₂CI₂/CH₂CI₂, nasýtená zmes NH₃/MeOH 60:37:3) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako oleja;

-87¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,09 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 2,37 - 2,42 (m, 1H),

2,54 (dd, J = 5,5 a 13,7 Hz, 1H), 2,90 (d, J = 4,9 Hz, 3H), 3,03 - 3,09 (m, 1H), 4,62 (br s, 1H), 6,34 - 6,37 (m, 1H), 7,26-7,33 (m, 1H), 7,89 - 7,92 (m, 1H).

Krok E: rac-3-{1-[5-(2-metylaminopyridyl)]-2-propylamino}-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karbox-amidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a rac-1-[5-(2-metylaminopyridyl)]-2-propylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 451 (M+1)⁺;

Analýza pre C₂₃H₃oN₈0₂.2,45HCI. 1,25CH₂CI₂ vypočítané: C 45,08, H 5,45, N 17,35% nájdené: C 45,03, H 5,48, N 17,37%.

Príklad 58

Výroba 3-(2-metyl-2-fenyl-1 -propylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-metyl-2-fenyl-1-propylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až F, teplota topenia 179 až 181 °C; MS (FAB) 435 (M+1)⁺.

Príklad 59

Výroba 3-[2-metyl-2-(3,4-metyléndioxyfenyl)-1-propylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6metyl-5-metyl-kar-boxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

-88<

νη₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-metyl-2-(3,4-metyléndioxyfenyl)-1-propylamínu (vyrobený z 3,4-metyléndioxyfenylacetonitrilu za použitia postupu z príkladu 56, kroky A a B) za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 479 (M+1)⁺.

Analýza pre C25H30N6O4.2.10HCI. 0,7H₂O vypočítané: C 52,88, H 5,95, N 14,80 % nájdené: C 52,88, H 5,96, N 14,51 %.

Príklad 60

Výroba rac-3-[1-(3,4-metyléndioxyfenyl)-2-propylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl5-metyl-kar-boxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

Krok A: rac-1-(3,4-metyléndioxyfenyl)-2-propylamín

K roztoku 1-(3,4-metyléndioxyfenyl)-2-nitropropénu (0,938 g, 4,53 mmol) rozpusteného v absolútnom etanole (40 ml), metanolu (8 ml) a HCI (4N, 4 ml) v atmosfére argónu bolo pridané Pd/C (10%, 0,902 g). Zmes bola umiestnená do

T-JA·.·

-89atmosféry vodíka (balónik, 0,1 MPa) a miešaná 14 hodín. Reakčná zmes bola filtrovaná cez celit, premytá etanolom (200 ml) a koncentrovaná vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako hnedastej tuhej látky;

¹H NMR (400 MHz, CDCI₃): δ 1,35 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 2,76 (dd, J = 8,6 a 13,5 Hz, 1H), 3,09 (dd, J = 5,9 a 13,5 Hz, 1H), 3,41 - 3,49 (m, 1H), 5,94 (s, 2H), 6,27-6,77 (m, 3H).

Krok B; rac-3-[1-(3,4-metyléndioxyfenyl)-2-propylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-kar-boxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 1 -(3,4-metyléndioxyfenyl)2-propylaminu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 465 (M+1)⁺.

Analýza pre C24H28N6O4.2.40HCI. 0,65EtOAc vypočítané: C 52,43, H 5,89, N 13,79 % nájdené: C 52,39, H 5,57, N 13,82 %.

Príklad 61

Výroba 3-[2-(4-sulfónamidofenyl)-etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkar-boxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 4-(2-aminoetyl)benzénsulfónamidu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia 214 až 221 °C; MS (FAB) 486 (M+1)⁺.

-90Príklad 62

Výroba 3-[2-(3,4-difluórfenyl)-etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-(3,4-difluórfenyl)-etylamínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia >235 °C; MS (FAB) 443 (M+1)⁺.

Príklad 63

Výroba 3-(3,4-metyléndioxybenzylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH₂

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 3,4-metyléndioxybenzyl-amínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia >255 °C; MS (FAB) 437 (M+1)⁺.

-91 Príklad 64

Výroba 3-(1-fenýl-1-cyklobutánmetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

NH2

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 1 -fenyl-1 -cyklobután-metylamínu (vyrobený z 1-fenyl-1-cyklobutánkarbonitrilu za použitia postupu z príkladu 56, krok B) za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4, teplota topenia 252 až 259 °C; MS (FAB) 447 (M+1)⁺.

Príklad 65

Výroba 3-(1-fenyl-1-cyklopropánmetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylkar-boxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako HCI soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 1 -fenyl-1 -cyklopropán-metylamínu (vyrobený z 1-fenyl-1-cyklopropánkarbonitrilu za použitia postupu z príkladu

-9256, krok B) za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až E nasledovaného postupom podľa spôsobu 4; MS (FAB) 433 (M+1)⁺.

Príklad 66

Výroba 3-[2-(2,5-difluórfenyl)-etylamino]-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metyl-karboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená ako TFA soľ z 1-benzyloxykarbonylmetyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu a 2-(2,5-difluórfenyl)-etyl-amínu za použitia postupu z príkladu 5, kroky C až F; MS (FAB) 447 (M+1)⁺.

Príklad 67

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-5-chlór-6-metyl-1-[etyl-(2-metyl-karboxamidometyl4-chlóiíenoxy)-acetamido]-2-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3,5-dichlór-6-metyl-1-[etyl-(2metylkarboxamidometyl-4-chlórfenoxy)-acetamido]pyrazinónu (ktorý bol vyrobený za použitia postupu z príkladu 3, krok A, z 3,5-dichlór-6-metyl-1 -karboxymetyl-93pyrazinónu a etyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)-acetamidu]) a 2-(2-pyridyl)etylamínu za použitia postupu z príkladu 3, krok B, teplota topenia 207 až 209 °C.

Príklad 68

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-[etyl-(2-metylkar-boxamidometyl-4-chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

NHEt

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a etyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 195 až 197 °C.

Príklad 69

Výroba 3-[2-(4-morfolino)etylamino]-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamidometyl-4-chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

0^

- 94V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(4-morfolino)etylamino]-6metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a cyklopropyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu zapoužitia postupu z príkladu 5, krok F,

Analýza pre C25H33N6O5CI. 0,45H₂O vypočítané: C 55,49, H 6,31, N 15,53 % nájdené: C 55,14, H 6,16, N 16,13%.

Príklad 70

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamÍdometyi-4-chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6metyl-1 -karboxymetylpyrazinónu a cyklopropyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 196 až 199 °C; MS (FAB) 525 (M+1)⁺.

Príklad 71

Výroba 3-[2(S)-butylamino]-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamidometyl-4chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

H

Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2(S)-metyl-butylamino]-6metyl-1 -karboxymetylpyrazinónu a cyklopropyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 195 až 198 °C; MS (FAB) 490 (M+1)⁺.

Príklad 72

Výroba 3-(1-pentylamino)-6-metyl-1-[etyl-(2-metylkarboxamido-metyl-4-chlórfenoxy)-acetamido]-2-pyrazinónu

-95Cl

NHEt

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(1-pentylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a etyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 125 až 127 °C.

Príklad 73

Výroba 3-(2,2-difenetylamino)-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamidometyl-4chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(1-pentylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrázinónu a cyklopropyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 153 až 159 °C; MS (FAB) 600 (M+1)⁺.

Príklad 74

Výroba 3-(cyklohexylamino)-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamidometyl-4chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

V názve uvedená, zlúčenina bola vyrobená z 3-(cyklohexylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a cyklopropyl-2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 114 až 121 °C; MS (FAB) 502 (M+1)⁺.

Príklad 75

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-(2,5-dichlórbenzylacetamido)-2-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 2,5-dichlórbenzylamínu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 188 až 191 °C; MS (FAB) 446 (M+1)⁺.

Príklad 76

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-(3-chlórbenzylacetamido)-2-pyrazinónu

- 97Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 3-chlórbenzylamínu za použitia postupu

.. z príkladu 5, krok F, teplota topenia 201 až 207 °C; MS (FAB) 412 (M+1)⁺.

Príklad 77

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-(3-chlór-6-(kyanometoxybenzylacetamido)-2-pyrazinónu

Cl

-98V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6metyl-1-karboxýmetylpyrazinónu a 3-chlór-6-(kyanometoxy)benzylamínu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 207 až 211 °C.

Príklad 78

Výroba 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-(2-fluór-5-(trifluórmetyl)benzylacet-amido)-2-pyrazinónu

CP₃

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(2-pyridyl)etylamino]-6metyl-1-karboxymetylpyrazinónu a 2-fluór-5-(trifIuórmetyl)benzylamínu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 181 až 184 °C.

Príklad 79

Výroba 3-[2-(4-pyridyl)etylamino]-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamidometyl4-chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

Cl

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(4-pyridyl)etylamino]-6metyl-1 -karboxýmetylpyrazinónu a cyklopropyl-(2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za'použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 190 až 192,5 °C; MS (FAB) 525 (M+1)⁺.

-99Príklad 80

Výroba 3-[2-(3,4-metyléndioxyfenyl)etylamino]-6-metyl-1-[cyklopropyl-(2-metylkarboxamidometyl-4-chlórfénoxy)acetamido]-2-pyrazinónu

V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-[2-(3,4-metyléndioxy-fenyl)etylamino]-6-metyl-1 -karboxymetylpyrazinónu a cyklopropyl-(2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetamidu za použitia postupu z príkladu 5, krok F, teplota topenia 202 až 204 °C; MS (FAB) 568 (M+1)⁺.

Príklad 81

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-[3-chlór-6-(karboxymetoxy)benzylacetamido]2-pyrazinónu

- 100 V názve uvedená zlúčenina bola vyrobená z 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1karboxymetylpyrazinónu a etyl-(2-aminometyl-4-chlórfenoxy)acetátu za použitia postupu -z príkladu 5, krok F, s následnou hydrolýzou s použitím postupu podľa príkladu 5, krok D; MS (FAB) 485 (M+1)⁺.

Príklad 82

Výroba 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylén-karboxamidometylpyridinyl)-2-pyrazinónu

Krok A: a-(alylamino)-propionitril hydrochlorid

Koncentrovaná HCI (20 ml, 0,24 mol) bola pridaná k miešanému roztoku alylamínu (36 ml, 0,48 mol) vo vode (100 ml) a etanolu (60 ml) pri 0 °C. Potom bol pridaný kyanid draselný (15 g, 0,23 mol) a acetaldehyd (11,2 ml, 0,20 mol) a zmes bola zahrievaná pod spätným chladičom. Po 15 hodinách boli prchavé látky odstránené vo vákuu a zvyšný roztok bol nasýtený NaCI a extrahovaný metylénchioridom (trikrát). Spojené extraky boli sušené (Na₂SO₄) a odparené vo vákuu na olej, ktorý bol rozpustený v 1M HCI (200 ml). Roztok bol odparený vo vákuu a azeotrópne destilovaný so zmesou 1:1 toluén/metanol za poskytnutia tuhej látky, ktorá bola zahrievaná pod spätným chladičom v etylacetáte (200 ml), ochladená, filtrovaná a sušená za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako soli

HCI;

¹H NMR (400 MHz, CD₃OD): δ 1,72 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH₃), 3,78 - 3,90 (m,

2H, CH₂), 4,63 (q, J = 7,0 Hz, a-CH), 5,56 - 5,66 (m, 2H, CHCH₂), 5,91 - 6,02 (m 1H, CHCH₂).

-101 Krok B: 1-alyl-3,5-dichlór-6-metyl-pyrazinón

Miešaná zmes oxalylchloridu (30,5 ml, 0,35 mol) a a-(alylamino)-propionitril hydrochloridu (10,26 g, 70 mmol) a o-dichlórbenzénu (100 ml) bola zahrievaná na 100 °C 15 hodín. Rozpúšťadlo bolo odparené vo vákuu a zvyšný čierny olej bol čistený bleskovou chromatografiou na silikagéli (s elúciou 30% zmesi etylacetáthexány) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako svetlohnedej kryštalickej látky;

Krok C: 3,5-dichlór-6-metyl-1-metylénkarboxypyrazinón

Hydr8t chloridu rutenitého (114 mg, 0,547 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 1-alyl-3,5-dichlór-6-metylpyrazinónu (5,45 g, 24,88 mmol) a jodistanu sodného (21,82 g, 0,102 mol) vo vode (75 ml), acetonitrilu (50 ml) a tetrachlórmetáne (50 ml). Po 3 hodinách bola reakčná zmes extrahovaná metylénchloridom (štyrikrát) a spojené extrakty boli sušené (Na₂SO₄) a odparené vo vákuu na sirup. ¹H NMR (CDCI₃) tohto materiálu ukázala, že ide o zmes kyseliny a aldehydu v pomere 1:1. Surová zmes bola rozpustená v acetóne (50 ml) a Jonesovom činidle (2,7M) a pridávaná, pokiaľ reakčná zmes nezostala oranžová. Reakčná zmes bola potom extrahovaná do etylacetátu, ktorý bol potom premytý roztokom soli, sušený (Na₂SO₄) a odparený vo vákuu za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako žltohnedej tuhej látky;

¹H NMR (400 MHz, DMSO): δ 2,41 (s, 3H, Me), 4,86 (s, 2H, CH₂).

Krok D: 3-(2-fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1 -metylénkarboxypyrazinón

Fenetylamín (0,80 ml, 6,33 mmol) bol pridaný k miešanému roztoku 3,5dichlór-6-metyl-1-metylénkarboxypyrazinónu (0,50 g, 2,11 mmol) v dioxáne (6 ml) a získaný roztok bol zohriaty na 60 °C. Po 16 hodinách bola reakčná zmes rozdelená medzi metylénchlorid a 10% roztok kyseliny citrónovej. Organická vrstva bola sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu za poskytnutia žltohnedej tuhej látky, ktorá bola čistená bleskovou chromatografiou (elúcia gradientom metanol/chloroform/2%

- 102kyselina octová, 2 až 5 % metanolu) a po azeotrópnom sušení toluénom bola získaná v názve uvedená zlúčenina ako biela tuhá látka;

¹H NMR (300 MHz, DMSO): δ 2,19 (s, 3H, Me), 2,84 (t, J = 7,0 Hz, 2H, PhCH₂), 3,45 (q, J = 7,0 Hz, 2H, CH₂NH), 4,70 (s, 2H, CH₂CO₂), 7,18 - 7,31 (m, 5H, Ph), 7,46 (br t, 1H, NH).

Krok E: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-metylénkarboxypyrazinón

Zliatina Raneyovho niklu (1 g) bola pridaná k miešanému roztoku 3-(2fenetylamino)-5-chlór-6-metyl-1-metylénkarboxypyrazinónu (158 mg, 0,49 mmol) v zmesi 1:1 metanol/1M NaOH (24 ml). Po 2 hodinách bola reakčná zmes prefiltrovaná cez celit, premytá 1:1 metanol/voda a filtrát bol odparený vo vákuu na bielu tuhú látku, tento surový produkt, ktorý bol kontaminovaný anorganickými soľami, bol čistený preparatívnou HPLC (C18, voda/acetonitril/0,1 % TFA gradient) za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako peny;

¹H NMR (400 MHz, DMSO): δ 2,11 (s, 3H, Me), 2,87 (t, J = 7,6 Hz, 2H, PhCH₂), 3,53 (br s, 2H, CH₂NH), 4,68 (s, 2H, CH₂CO₂), 6,68 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 7,20 - 7,31 (m, 5H, Ph), 8,16 (br s, 1H, NH).

Krok F: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinón

EDC hydrochlorid (56 mg, 0,29 mmol) bol pridaný k miešanej zmesi 3-(2fenetylamino)-6-metyl-1-metylénkarboxypyrazinónu (91 mg, 0,23 mmol), HOBT (40 mg, 0,29 mmol), 5-aminometyl-2-t-butoxykarbonylamino-6-metylpyridínu (70 mg, 0,29 mmol) a N-metylmorfolínu (0,13 ml, 1,17 mmol) v DMF (1 ml) a zmes bola miešaná 16 hodín. Reakčná zmes bola zriedená etylacetátom a bola premytá vodou, sušená (Na₂SO₄) a odparená vo vákuu. Surový produkt bol čistený bleskovou chromatografiou na kolóne silikagélu (gradient etylacetát/hexány, 80 až 100 % etylacetát), za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny;

¹H NMR (300 MHz, CDCI₃): δ 1,51 (s, 9H, t-Bu), 2,26 (s, 3H, CH₃), 2,36 (s,

3H, CH₃), 2,93 (t, J = 7,0 Hz, PhCH₂), 3,65 (q, J = 7,0 Hz, PhCH₂CH₂), 4,36 (d, J =

5,6 Hz, 2H, CONHCH₂), 4,61 (s, 2H, CH₂CO), 5,91 (br t, 1H, NH), 6,65 (br t, 1H,

- 103 NH), 6,77 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 7,12 (s, 1H, NHBOC), 7,21 - 7,32 (m, 5H, Ph), 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1H, pyridínový H-3), 7,68 (d, J = 8,5 Hz, 1H, pyridínový H-4).

Krok G: 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylén-karboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinón

Plynný HCI bol prebublávaný miešanou suspenziou 3-(2-fenetylamino)-6metyl-1-(2-t-butoxykarbonylamino-6-metyl-5-metylén-karboxamidometylpyridinyl)pyrazinónu (85 mg, 0,17 mmol) v etylacetáte (10 ml) pri 0 °C až do vytvorenia roztoku, ktorý bol nasýtený HCI. Po 2 hodinách pri teplote miestnosti bola zmes odplynená dusíkom a filtrovaná za poskytnutia v názve uvedenej zlúčeniny ako bis soli vo forme bielej kryštalickej tuhej látky, teplota topenia >200 °C;

¹H NMR (300 MHz, CD₃OD): δ 2,18 (s, 3H, CH₃), 2,52 (s, 3H, CH₃), 3,00 (t, J = 7,4 Hz, PhCH₃), 3,68 (t, J = 7,4 Hz, PhCH₂CH₂), 4,33 (d, J = 5,4 Hz, 2H, CONHCH₂), 4,76 (s, 2H, CH₂CO), 6,55 (s, 1H, pyrazinónový H-5), 6,84 (d, J = 9,3 Hz, 1H, pyridínový H-3), 7,23-7,31 (m, 5H, Ph), 7,86 (d, J = 9,3 Hz, 1H, pyridínový H-4); MS (FAB) 407 (M+1)⁺.

Test in vitro na stanovenie inhibície proteinázy

Testy ľudského α-trombínu a ľudského trypsínu boli uskutočnené spôsobmi v podstate rovnakými ako bolo opísané vThrombosis Research, No. 70, str. 173 (1993), S. D. Lewis a ďalší.

Testy boli uskutočnené pri 25 °C v 0,05M pufri TRIS pH 7,4, 0,15M NaCI, 0,1 % PEG. Testy na trypsín tiež obsahovali 1mM CaCI₂. V testoch, kde boli určované rýchlosti hydrolýzy substrátu p-nitroanilidu (pna), bolo použité zariadenie Thermomax na odčítanie 96-jamkových doštičiek na meranie (pri 405 nm) na čase závislého vzniku p-nitroanilínu. Na testovanie ľudského a-trombínu bolo použité sarPR-pna (K_m =125 μΜ) a bovinného trypsínu (K_m = 125 μΜ). Koncentrácia substrátu p-nitroanilidu bola určená z merania absorbancie pri 342 nm s použitím extinkčného koeficienta 8270 cm¹ M'¹.

- 104 V niektorých štúdiách s veľmi silnými inhibítormi (K, < 10 nM), kde bol vysoký stupeň inhibície trombínu, bol použitý citlivejší test na aktivitu. V tomto teste bola stanovená rýchlosť hydrolýzy fluorogénneho substrátu ZGPR-afc (K_m = 27 μΜ) katalyzovaná trombínom z prírastku fluorescencie pri 500 nm (excitácia pri 400 nm) spojená s tvorbou 7-amino-4-trifluórmetylkumarínu. Koncentrácie zásobných roztokov Z_GPR-afc boli stanovené zmerania absorbancie po úplnej hydrolýze alikvótu zásobného roztoku trombínom.

Testy na aktivitu boli uskutočňované zriedením zásobného roztoku substrátu aspoň desaťkrát na konečnú koncentráciu <0,1 K_m do roztoku obsahujúceho enzým alebo enzým ekvilibrovaný s inhibítorom. Doby potrebné na dosiahnutie ekvilibrácie medzi enzýmom a inhibítorom boli určené pri kontrolných experimentoch. Boli merané počiatočné rýchlosti tvorby produktu v neprítomnosti (V_o) alebo prítomnosti inhibítora (V,). Za predpokladu kompetitívnej inhibície a za predpokladu, že jednotka je zanedbateľná v porovnaní s K_m/[S], [l]/e, [l]/e (kde [S, [I] a e znamenajú celkové koncentrácie substrátu, inhibítora a enzýmu), môže byť získaná rovnovážna konštanta (K,) na disociáciu inhibítora od enzýmu zo závislosti pomeru V₀/Vi na [I] uvedené v rovnici 1.

V₀/Vi = 1 + [l]/Ki (1)

Aktivity ukázané týmto testom naznačujú, že zlúčeniny vynálezu sú terapeuticky použiteľné na liečenie rôznych stavov u pacientov trpiacich nestabilnou angínou, refraktérnou angínou, infarktom myokardu, prechodnými ischemickými záchvatmi, fibriláciou siení, trombotickou mŕtvicou, embolickou mŕtvicou, trombózou hlbokých žíl, intravaskulárnou koaguláciou a znovauzáverom alebo znovuzúžením spriechodnených ciev. Inhibičná aktivita zlúčenín podľa vynálezu proti ľudského trombínu vyjadrená konštantou K, je menšie ako 24 nM. Tieto zlúčeniny sú selektívnymi inhibítormi, ako je dokázané ich inhibičným účinkom proti ľudskému trypsínu (vyjadreným konštantou Kí), ktorá je aspoň 1000 nM.

- 105 Nasledujúce tabuľky ilustrujú ďalšie zlúčeniny v rámci predkladaného vynálezu. Inhibičhý účinok znázornený ako označuje K, väčšie alebo rovné 1 nM, alebo ako „ označuje K, menšie ako 1 nM.

Tabuľka 1

X_Y_Ki

H	NHC₂H_s
H	NHC₃H_s
H	NH(CH₂)₂N(CH₃)2
F	nhc₂h₅
F	nhc₃h₅
F	NH(CH₂)₂N(CH₃)₂

Tabuľka 2

CoH_s

C₃H₅CH₂ t-C₄H₉

HO₂CCH₂ cf₃ch₂ (CH₃)₂N(CH₂)₂

-106 Tabuľka 3

R_Ki

PhCH₂C(CH₃)₂

PhCHCHa

PhCH₂CHCO₂H n-C₆H₁₃

Tabuľka 4

R

PhCH₂C(CH₃)₂

PhCHCH₃

PhCH₂CHCO₂H η-ΟβΗι₃

Ďalšie príklady zlúčenín podľa vynálezu so spojeným inhibičným účinkom zlúčenín proti ľudskému trombínu (predstavovaným Kj) sú ukázané nižšie. Rovnako

-107 ako vo vyššie uvedených tabuľkách je inhibičný účinok znázornený „ označujúci K, väčšie alebo rovné 1 nM, alebo označujúci K, menšie ako 1 nM.

Cl

NH, h₂n

N

O ^XN

Á nh₂

-108 -

Ο

-109-

N

II

ΗΟ

N

NH₂

-110-

Η

-111 P f

I t

i i

C

NH:

irr □Ľ 2

-112-

-113-

ΝΗ

ΝΗ₂

ΝΗ

-114-

-115-

ΝΗ

I-J

ζτ

ο

Ο

Ν

Η νη₂

- 116-

117-

ί 18 -

Ci

- 119

-120-

Cl

- 121 -

CI

- 122 -

Príklad 83

Štúdie in vivo na meranie trombotických uzáverov

Na určenie aktivity inhibítorov trombínu podľa vynálezu in vivo boli použité štúdie 3-(2-fenyletylamíno)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylénkarboxamido-metyl-pyridinyl)pyridinónu za použitia nasledujúceho testu na potkanoch s chloridom železitým v podstate podľa opisu VThrombosis Research, No. 60, str. 269 (1990), Kurtz a ďalší. Samci potkanov Malé Sprague-Dawley (telesná hmotnosť 200 až 350

g) boli anestetizované roztokom dial-uretán (0,1 ml/100 g telesnej hmotnosti i.p.) a do laterálnej chvostovej žily bola zavedená kanyla s ihlou číslo 23 pripojená hadičkou PR50 s dĺžkou 40 cm. Hadička bola pripojená na trojcestný kohút pomocou adaptéra. Katétrom zavedeným do chvostovej žily bol podľa potreby podaný fyziologický roztok (kontrola) alebo testovaná zlúčenina. Bola uskutočnená tracheostómia hadičkou PE205 s dĺžkou 19 mm. Bola vypreparovaná pravá krčnica a bola do nej zavedená Dopplerova prietoková sonda s priemerom 1,3 mm. Telesná teplota bola udržovaná na 37 °C s použitím vyhrievacej lampy.

- 123 Šesť potkanov bolo náhodne vybratých na kontinuálnu intravenóznu infúziu fyziologického roztoku alebo testovanej zlúčeniny podávaných chvostovou žilou. Testovaná zlúčenina bola podávaná rýchlosťou 10 pg/kg/minútu. Infúzie boli začaté 60 minút pred priložením štvorcového kúsku filtračného papiera Whatman No. 1 s hranou 3 mm na vypreparovanú krčnicu distálne vzhľadom k prietokovej sonde. Infúzie pokračovali ďalších 90 minút po aplikácii FeCI₃ (celková doba trvania infúzie 150 minút), ak nedošlo k trombotickému uzáveru, alebo boli ukončené 30 minút po trombotickom uzávere cievy. Čas potrebný, aby došlo k uzáveru bol definovaný ako čas aplikácie FeCI₃ do vytvorenia trombotického uzáveru cievy. Pri ukončení štúdie (90 minút po aplikácii FeCI₃ u zvierat, u ktorých nedošlo k vytvoreniu uzáveru, alebo 30 minút po trombotickom uzávere) boli srdcovou punkciou odobraté vzorky krvi 3 ml do 0,3 ml 3,8% citrátu sodného.

Výsledky tejto štúdie ukázali, že testovaná zlúčenina bola plne účinná. Žiaden z potkanov, ošetrený testovanou zlúčeninou, neprejavil známky trombotického uzáveru.

Príklad 84

Výroba tabliet

Pripravia sa tablety, obsahujúce 25,0, 50,0 a 100,0 mg nasledujúcich aktívnych zlúčenín, ako je ukázané nižšie (prostriedky A až I):

3-(2-fenyletylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometylpyridinyl)-2-pyridnón (aktívna látka I)

3-(2-fenyletylamino)-6-metyl-1-[etyl-(2-metylén-karboxamidometyl-4-chlórfenoxy)acetamido]-2-pyrazinón (aktívna látka II) a

3-amino-6-metyl-1-[etyl-(2-metylénkarboxamidometyl-4-chlórfenoxy)acetamido]-2pyrazinón (aktívna látka III).

-124 Tabuľky pre dávky 25 až 100 mg aktívnej zlúčeniny

Množstvo - mg
Zložka	A	B	C	D	E	F	G	H	I
Aktívna látka I	25	50	100	-	-	-	-	-	-
Aktívna látka II	-	-	-	25	50	100	-	-	-
Aktívna látka III	-	-	-	-	-	-	25	50	100
Mikrokryštalická celulóza	37,25	100	200	37,25	100	200	37,25	100	200
Škrob¹	37,25	4,25	8,5	37,25	4,25	8,5	37,25	4,25	8,5
Stearan horečnatý	0,5	0,75	1,5	0,5	0,75	1,5	0,5	0,75	1,5

¹ Modifikovaný potravinársky kukuričný škrob

Všetky aktívne zlúčeniny, celulóza a časť kukuričného škrobu sa zmiešajú a granulujú za vytvorenia 10% pasty kukuričného škrobu. Získaný granulát sa preoseje, suší a zmieša sa zo zvyškom kukuričného škrobu a stearanom horečnatým. Výsledný granulát sa potom lisuje do tabliet obsahujúcich 25,0, 50,0, prípadne 100,0 mg aktívnej zložky na tabletu.

Príklad 85

Výroba tabliet

V nasledujúcej tabuľke sú uvedené príklady tabliet prostriedkov, obsahujúcich 3-(2-fenyletylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinón dihydrochlorid monohydrát typu A (aktívna látka IV):

Zložka	0,25 mg	2 mg	10 mg	50 mg
Aktívna látka IV	0,500 %	1,000 %	5,000 %	14,29 %
Manitol	49,50 %	49,25 %	47,25 %	42,61 %
Mikrokryštalická celulóza	49,50 %	49,25 %	47,25 %	42,61 %
Stearan horečnatý	0,500 %	0,500 %	0,500 %	0,500 %

- 1252, 10 a 50 mg tablety boli potiahnuté filmom vodnou disperziou hydroxypropylcelulózy, hydroxypropylmetylcelulózy a oxidu titaničitého, čím došlo k prírastku menovitej hmotnosti 2,4 %.

Výroba tabliet priamym lisovaním

Aktívna látka IV, manitol a mikrokryštalická celulóza boli preosiate sitami so stanovenou veľkosťou (všeobecne 250 až 750 pm) a spojené vo vhodnom nosiči. Zmes bola potom miešaná (typicky 15 až 30 minút) až do rovnomerného rozdelenia liečiva vo výslednej suchej práškovej zmesi. Do miesiča bol pridaný preosiaty stearan horečnatý a zmes bola ďalej miešaná (typicky 2 až 20 minút) za získania predbežnej zmesi na lisovanie, predbežná zmes na lisovanie bola potom lisovaná použitím sily typicky v rozmedzí 0,5 až 2,5 x 10³ kg dostatočnej na získanie tabliet s dostatočnou fyzikálnou pevnosťou s prijateľnými dobami rozpadu (špecifikácie sa budú líšiť s veľkosťou a obsahom účinnej látky zlisovanej tablety). V prípade obsahov 2, 10 a 5 mg boli tablety odprášené a poťahované filmom pomocou vodnej disperzie vo vode rozpustných polymérov a pigmentu.

Príprava tabliet suchou granuláciou

Alternatívne je možné lisovať suchú práškovú zmes za použitia miernej sily a získaný materiál rozomlieť za získania granúl so špecifickou veľkosťou častíc. Granuly sa potom zmiešajú so stearanom horečnatým a tabletujú sa ako je uvedené vyššie.

Príklad 86

Intravenózna formulácia

Všeobecnými postupmi intravenóznej formulácie boli pripravené intravenózne prostriedky s obsahom 3-(2-fenyletylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6-metyl-5-metylénkarboxamidometyl-pyridinyl)-pyrazinón dihydrochlorid monohydrát typu A (aktívna látka IV):

- - Λ'-,

-126-

Zložka	Približné rozmedzie
Aktívna látka IV	0,12 až 0,61 mg
Kyselina; D-glukurónová	0,5 až 5 g
Manitoi NF	50 až 53 mg
1N hydroxid sodný do	pH 3,9 až 4,1
Voda pre injekcie do	1,0 ml

Príklady farmaceutických prostriedkov A až C majú nasledujúce zloženie:

Zložka	A	B	C
Aktívna látka IV	0,61 mg	0,30”	0,15
Kyselina D-glukurónová	1,94 mg	1,94 mg	1,94 mg
Manitoi NF	51,2 mg	51,2 mg	51,2 mg
1N hydroxid sodný do	pH 4,0	pH 4,0	pH 4,0
Voda pre injekcie do	1,0 ml	1,0 ml	1,0 ml

0,50 mg voľná bázy **0,25 mg voľná bázy ***

0,12 mg voľná baza

Kyselina glukurónová môže byť nahradená ďalšími pufrujúcimi kyselinami, ako je kyselina L-mliečna, octová, citrónová alebo akoukoľvek farmaceutický prijateľnou kyselinou/konjugovanou bázou s dostatočnou pufračnou kapacitou v rozmedzí pH prijateľnom na intravenózne podávanie.

Claims

1. Pyrazinónové zlúčeniny vzorca kde

Wje atóm vodíka,

R¹,

R¹OCO,

R¹CO,

R¹(CH₂)_nNHOO alebo (R¹)₂CH(CH₂)nNHCO, kde n je 0 až 4;

R¹ je R²,

R²(CH2)mC(R¹²)2, kde m je 0 až 3 a každá skupina R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, (R²)(OR²)CH(CH₂)_p, kde p je 1 až 4,

R²C(R¹²)2(CH2)m, kde m je 0 až 3 a každá R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, kde (R¹²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde C znamená C3-7cykloalkyl,

R²CH2C(R¹²)2(CH₂)_q, kde q je 0 až 2 a každá R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, kde (R¹²)₂ môže tiež vytvárať kruh, kde C znamená C₃.7cykloálkyl, (R²)2CH(CH2)r, kde r je 0 až 4 a každá R² môže byť rovnaká alebo rôzna a kde (R²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde CH znamená C₃.7cykloalkyl, C₇-i₂bicyklický alkyl, C₁₀-i6 tricyklický alkyl alebo 5- až 7-členný mono- alebo bicyklický heterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje od jedného do troch heteroatómov, zvolených zo skupiny N, O a S,

R²O(CH₂)_P, kde p je 1 až 4 alebo

-128 R²(COOR³)(CH₂)r, kde r je 1 až 4;

R² a R¹⁴ sú nezávisle fenyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami Ci.₄alkyľ; Ci.₄alkoxy, halogén, hydroxy, COOH, CONH₂ alebo SO₂NH₂, naftyl, bifenyl,

C^alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

COOH, amino, aryl,

C₃-7cykloalkyl,

CF₃,

N(CH₃)_2iCi-₃alkylaryl, heteroaryl, alebo heterocykloalkyl,

CF₃,

C₃-₇cykloalkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný arylom,

C₇-i₂bicyklický alkyl alebo

Cio-i6tricyklický alkyl;

R³ je atóm vodíka,

Ci.₄alkyl,

C₃.₇cykloalkyl alebo trifluórmetyl;

X je atóm vodíka alebo

- 129halogén;

A je zvolené z nasledujúcich radikálov:

kde Y¹ a Y² sú nezávisle atóm vodíka,

Ci.₄alkyl,

C-|.₄alkoxy,

C₃.₇cykloalkyl, halogén alebo trifluórmetyl;

R⁴ je atóm vodíka,

C^alkyl,

C i ^alkoxy, halogén,

-OCH₂CF₃,

-OCH₂CN,

-COOH,

-OH,

-COOR⁶, kde R⁶ je C^alkyl, -CONR⁷R⁸, kde R⁷ a R⁸ sú nezávisle atóm vodíka alebo C^alkyl, -(CH₂)_mOH,

-CH₂NHC(O)CH_3i

-CH₂NHC(O)CF_3i

-ch₂nhso₂ch₃,

-so₂nh₂,

-(CH₂)i.₄S0₂NR⁷R⁸,

- 130 -(CH₂)mSO₂R⁶,

5- až 7-člénný mono- alebo 9- až 10-členný bicyklický heterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje od jedného do štyroch heteroatómov zvolených zo skupiny N, O a S,

-ZCH₂CO₂H,

-ZCH2CO2CH3,

-ZCH₂R¹⁴,

-ZCH₂CO₂(CH₂)i-3CH₃,

-Z(CHR⁹)₁_₃C(O)NR¹⁰ alebo R¹¹, kde

R⁹ je H alebo Ci.₄alkyI,

R¹⁰ a R¹¹ sú nezávisle atóm vodíka,

C₃.7cykloalkyl, aryl, heteroaryl, heterocykloalkyl,

-(CH₂)i-2NCH₂CH₃,

Ci_₄alkyl nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami:

hydroxy,

COOH, amino, aryl, heteroaryl, heterocykloalkyl alebo

R¹⁰ a R¹¹ sú spojené za vytvorenia štvor- až sedemčlenného cykloalkylového kruhu nesubstituovaného alebo substituovaného skupinami hydroxy, amino alebo aryl, kde Z je O, S alebo CH₂;

R⁵ atóm vodíka, halogén,

- 131 CMalkyl,

Ci.₄alkoxý,

CF₃,

CN alebo

CO2NH2 a R¹² je atóm vodíka, fenyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami CMalkyl, Ci-₄alkoxy, halogén, hydroxy, COOH, CONH₂, naftyl, bifenyl,

CMalkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

COOH, amino, aryl, heteroaryl, aelbo heterocykloalkyl, cf₃,

C₃.₇cykloalkyl,

C₇.i2bicyklický alkyl alebo

Cio-i6tricyklický alkyl; a ich farmaceutický prijateľné soli.

2. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 a jej farmaceutický prijateľné soli, kde R³ je C_M.alkyl.

3. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 2 a jej farmaceutický prijateľné soli, kde A je zvolené z nasledujúcich radikálov:

- 132 - kde Y¹ a Y² sú nezávisle atóm vodíka alebo C^alkyl; R⁴ je atóm vodíka, halogén,

-OCH2CN,

-OH,

-ZCH2CO2H, alebo

-Z(CHR⁹)i.₃C(O)NR¹⁰R¹¹, kde

R⁹ je H alebo Ci^alkyl,

R¹⁰ a R¹¹ sú nezávisle atóm vodíka, C₃.7cykloalkyl, -(CH₂)i-2NCH₂CH₃, alebo Ci-₄alkyl, kde Z je O, S alebo CH₂;

R^{5 * *} je atóm vodíka, halogén alebo CF₃.

4. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 3 a jej farmaceutický prijateľné soli, kde W je H alebo R¹.

5. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 4 a jej farmaceutický prijateľné soli, kde

R¹ je R²,

- 133 R²(CH2)mC(R¹²)2, kde m je O až 3 a každá skupina R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna,

R²C(R¹²)2(CH2)m, kde m je 0 až 3 a každá R¹² môže byť rovnaká alebo rôzna, kde (R¹²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde C znamená C3.₇cykloalkyl, (R²)2CH(CH2)r, kde r je 0 až 4 a každá R² môže byť rovnaká alebo rôzna a kde (R²)2 môže tiež vytvárať kruh, kde CH znamená C₃.₇cykloalkyl, C₇.₁₂bicyklický alkyl, Cio-i6tricyklický alkyl alebo 5- až 7-členný mono- alebo bicyklický heterocyklický kruh, ktorý môže byť nasýtený alebo nenasýtený a ktorý obsahuje od jedného do troch heteroatómov, zvolených zo skupiny N, O a S,

R²O(CH₂)_P, kde p je 1 až 4;

Ci-₇alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami hydroxy,

COOH,

C₃.₇cykloalkyl,

CF₃,

N(CH₃)₂,

Ci_₃alkylaryl, heteroaryl, alebo heterocykloalkyl,

CF₃, alebo

C₃.₇cykloalkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný arylom; a R¹² je atóm vodíka,

- 134 Ci.₄alkyl, nesubstituovaný alebo substituovaný jednou alebo viacerými skupinami .·- hydroxy,

COOH, amino, aryl, heteroaryl, aelbo heterocykloalkyl.

6. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 5 a jej farmaceutický prijateľné soli, kde A je

i) kde R⁵ je H, fluór, chlór a

R¹⁰ a R¹¹ sú nezávisle zvolené zo skupín atóm vodíka,

C₂H₅, c₃h₅, (CH₂)₂N(CH₃)₂,

C^cykloalkyl, ii)

-135ίίί) ^iv) CK

V) nh₂ ch₃ nh₂ kde R⁴ je OH, chlór, H, -OCH2CN, fluór, -OCH2COOH, a R⁵ je chlór alebo CF3 vi)

CH

R³ je CH₃₎ alebo CH₂CH₃; X je H alebo chlór; a Wje PhCH₂CH₂, (CH₃)₃C-, hoocch₂, cf₃ch₂, (CH₃)₂N(CH₂)₂,

PhCH₂O(CH₂)₂,

PhCH(CH₃),

PhCH₂CH(COOH),

CH₃(CH₂)₅,

PhCH₂,

CH₃(CH₂)₄,

CH₃CH₂CH(CH₃)CH₂,

-136 (Ph)₂CHCH₂,

PhCH₂CH(CH₃),

PhCH₂C(CH₃)₂,

PhCH(CH₃)CH₂, (CH₃)₂CH,

PhCH(OH)CH₂,

PhC(CH₃)CH₂.

(Ph)₂CHCH₂,

OH, [>—CH₂ ' [>-ch₂ch₂ (CH₂)₂ .

/—\

O N-(CH₂)₂ \_y

-137 -

-138- ο°(CHjh

HO (CH₂)₂ ,

H,C-( HCH₂)₂ íl \ ^_s>^-(CH₂)₂ ,

CH,CH(CH₃)

CH(CH₃)CH₂ (ŕ

C(CH3)₂CH₂

- 139-

-1407. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 6 a jej farmaceutický prijateľné soli, zvolené zo skupiny:

- 141

Η

Ct

- 142

-143-

ΝΗ₂

Cl

NH,

-144-

Cl

-145-

-146-

- 147-

- 148 -

HCl·

N

H

O

- 149 _A N o I

NH₂

-150

- 151 -

- 152-

NH'

N'

Η ‘N

NH'

-153 -

Cl

- 154

Cl

NHEt

Cl

-155-

Cl

- 156 -

Cl

- 157-

ΝΗ₂ νη₂

8. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku ktoré sú zvolené zo skupiny ⁷ a jej farmaceutický prijateľné soli

- 158-

-1599. Pyrazinónová zlúčenina podľa nároku 8 a jej farmaceutický prijateľné soli, ktorou je 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)'-pyrazinón.

10. Soľ podľa nároku 9, ktorou je dihydrochlorid 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu.

11. Soľ podľa nároku 10, ktorá je v polymorfnej kryštalickej forme monohydrátu typu A.

12. Soľ podľa nároku 11, ktorá je charakterizovaná krivkou diferenciálnej skenovacej kalorimetrie, ktorá pri rýchlosti zahrievania 5 °C/minútu v otvorenom tégliku za prechodu dusíka prebublávaného vodou pri 5 °C vykazuje endoterm s extrapolovanou teplotou nástupu približne 102 °C a teplotou vrcholu približne 112 °C s teplom premeny približne 115 J/g nasledovaný endotermom s extrapolovanou teplotou nástupu približne 171 °C, teplotou vrcholu približne 194 °C a s teplom premeny 83 J/g a rôntgenovým difrakčným obrazom charakterizovaným vzdialenosťami d 1,306, 1,216, 0,740, 0,571, 0,492, 0,448, 0,440, 0,363, 0,307, 0,298, 0,286 a 0,262 nm.

13. Soľ podľa nároku 10, ktorá je v polymorfnej kryštalickej forme monohydrátu typu B.

14. Soľ podľa nároku 13, ktorá je charakterizovaná krivkou diferenciálnej skenovacej kalorimetrie, ktorá pri rýchlosti zahrievania 5 °C/minútu v otvorenom tégliku za prechodu dusíka prebublávaného vodou pri 5 °C vykazuje endoterm s extrapolovanou teplotou nástupu približne 120 °C a teplotou vrcholu približne 132 °C s teplom premeny približne 123 J/g nasledovaný endotermom s extrapolovanou teplotou nástupu približne 160 °C, teplotou vrcholu približne 191 °C a s teplom premeny 78 J/g a rôntgenovým difrakčným obrazom charakterizovaným

- 160 vzdialenosťami d 1,298, 1,191, 0,724, 0,598, 0,490, 0,446, 0,423, 0,399, 0,375, 0,361, 0,341, 0,294, 0,285 a 0,261 nm.

15. Farmaceutický prostriedok na inhibíciu vytvárania trombu v krvi, vyznačujúci sa tým, že obsahuje pyrazinónovú zlúčeninu podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.

16. Spôsob výroby dihydrochloridu 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu monohydrátu typu A, v y z n ačujúci sa tým, že zahrnuje kroky:

a) rozpustenie 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu v kyseline octovej a pridanie vodného HCI;

b) oddelenie vzniknutej tuhej fázy a

c) odstránenie rozpúšťadla z tejto tuhej fázy.

17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že množstvo vodnej HCI je také, že konečný obsah vody v kyseline octovej je medzi 1 a 5 % hmotnostnými.

18. Spôsob výroby dihydrochloridu 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1-(2-amino-6metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu monohydrátu typu B, v y z n ačujúci sa tým, že zahrnuje kroky:

a) rozpustenie 3-(2-fenetylamino)-6-metyl-1 -(2-amino-6-metyl-5-metylkarboxamidometylpyridinyl)-pyrazinónu v kyseline chlorovodíkovej;

b) oddelenie vzniknutej tuhej fázy a

c) odstránenie rozpúšťadla z tejto tuhej fázy.

19. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu žilovej tromboembólie a pľúcnej embólie u cicavca.

20. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu trombózy hlbokých žil u cicavcov.

- 161

21. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu kardiogénnej tromboembólie u cicavcov.

22. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu tromboembolickej mŕtvice u ľudí a iných cicavcov.

23. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu trombózy spojenej s rakovinou a chemoterapiou rakoviny u cicavcov

24. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu nestabilnej angíny u cicavca.

25. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu infarktu myokardu u cicavcov.

26. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu kardiogénnej tromboembólie spojenej s fibriláciou siení u cicavca.

27. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu kardiogénnej tromboembólie spojenej s umelými srdcovými chlopňami u cicavca.

28. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu kardiogénnej tromboembólie spojenej s ochorením srdca u cicavca.

29. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu aterosklerózy u cicavca.

30. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu trombózy u cicavca s geneticky podmienenými trombofilnými ochoreniami ako je deficiencia proteínu C, deficiencia proteínu S, antitrombínu III a faktora V Leiden.

- 16231. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu trombózy u cicavca so získanými trombofilnými poruchami ako je systémový lupus erythematosus.

32. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu ischemickej srdcovej choroby u cicavca.

33. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu reoklúzie u cicavca v priebehu alebo po perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike.

34. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu restenózy u cicavca po perkutánnej transluminálnej koronárnej angioplastike.

35. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu uzáveru štepov pri bypase koronárnej artérie u cicavca.

36. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na liečenie alebo prevenciu okluzívneho cerebrovaskulárneho ochorenia u cicavca.

37. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na zachovanie priechodnosti artériovenóznych kanyl zavedených cicavcovi.

38. Pyrazinónové zlúčeniny podľa nároku 1 na použitie na zachovanie priechodnosti zavedených katétrov u cicavca.

39. Použitie pyrazinónových zlúčenín podľa nároku 1 alebo ich farmaceutický prijateľných solí na výrobu farmaceutického prostriedku na inhibíciu trombínu, inhibíciu vytvárania trombu, liečenie tvorby trombu alebo na prevenciu vytvárania trombu u cicavcov.

·. . · t·'

- 16340. Spôsob zníženia nebezpečenstva tvorby krvnej zrazeniny v zariadení prichádzajúcom do kontaktu s krvou, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje poťahovánie zariadenia farmaceutickým prostriedkom podľa nároku 15.

41. Spôsob inhibície trombínu v krvi, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje pridávanie farmaceutického prostriedku podľa nároku 15 do krvi.

42. Spôsob inhibície tvorby agregátov krvných doštičiek v krvi, vyznačujúci sa t ý m, že zahrnuje pridávanie farmaceutického prostriedku podľa nároku 15 do krvi.

43. Spôsob inhibície tvorby trombu v krvi, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje pridávanie farmaceutického prostriedku podľa nároku 15 do krvi.

44. Spôsob inhibície tvorby trombu v krvi, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje pridávanie pyrazinónovej zlúčeniny podľa nároku 1 s antagonistom fibrinogénového receptora do krvi.