SK112399A3

SK112399A3 - Methods and compositions for reducing the incidence of necrotizing enterocolitis

Info

Publication number: SK112399A3
Application number: SK1123-99A
Authority: SK
Inventors: Susan E Carlson; Debra L Ponder; Michael B Montalto; Margaret H Dohnalek; John D Benson; David A Borror; David V Diodato
Original assignee: Abbott Lab; Univ Tennessee Res Corp
Priority date: 1997-02-21
Filing date: 1998-02-19
Publication date: 2000-12-11
Also published as: NZ337039A; ES2219871T3; HUP0300236A3; CA2281706A1; CA2281706C; PT1039892E; BR9807443A; WO1998036745A3; PL343902A1; TR199902023T2; CN1200701C; IL131126A0; HUP0300236A2; TWI230607B; EP1039892B1; RU2199317C2; AU6176998A; NO994052D0; EP1039892A2; AU732903B2

Description

Prípravky na obmedzenie výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy a spôsob ich výroby

Oblasť techniky

Vynález sa všeobecne týka enterálnych prípravkov, ktoré obsahujú polynenasýtené mastné kyseliny s dlhým reťazcom (PUFA), a spôsobu prípravy uvedených enterálnych prípravkov a spôsobu zníženia výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy. Zvlášť vynález opisuje enterálne prípravky, ktoré poskytujú PUFA arachidónové kyseliny (AA) a dokozahexaénové kyseliny (DHA) s dlhým reťazcom v podstate bez cholesterolu a ktoré je možné získať z lipidov vaječného žĺtka. PUFA s dlhým reťazcom získané z vaječného žĺtka sa prevažne vyskytujú vo forme fosfolipidov. Spôsob prípravy takej kompozície umožňuje zlepšiť jej organoleptické vlastnosti a stabilitu. Enterálna aplikácia takých kompozícií môže redukovať výskyt nekrotizujúcej enterokolitídy.

Doterajší stav techniky

PUFA s dlhým reťazcom obsiahnuté vo formuláciách a prípravkoch sa opisujú v rôznej literatúre. Napríklad U.S. patent č. 4,670,285 („Clandinin,,) opisuje špecifickú tukovú zmes, ktorú je možné použiť v prípravkoch pre kojencov. Tuková zmes podľa Clandinina obsahuje aspoň jednu mastnú kyselinu C20 alebo C22n-6 a C20 alebo C22n-3. O týchto mastných kyselinách sa uvádza, že keď sa vyskytujú v určitom definovanom množstve, zabraňujú nežiaducim účinkom u kojencov, ktorí sú kŕmení zmesou tukov. C20 alebo C2211-6 mastné kyseliny sú prítomné v celkovom množstve približne 0,13 až 5,6 hmotnostných % všetkých mastných kyselín v produkte. C20 alebo C2211-3 mastná kyselina, ak je prítomná, tvorí približne 0,013 až 3,33 hmotnostných % všetkých mastných kyselín v produkte. Clandinin opisuje použitie vaječných lipidov s cieľom dodania n-6 a n-3 mastných kyselín; vaječné lipidy, ktoré používa Clandinin, tiež obsahujú vysoké množstvo cholesterolu. Ďalej sa v tejto publikácii opisuje použitie 75 až 95 hmotnostných dielov lipidov vaječného žĺtka a zvyšok oleja tvorí kokosový alebo sójový olej. Tu sa používa názvoslovie mastných kyselín, ako ho používa Cland i n i n

V publikácii WO 93/20717 sa opisuje prípravok pre kojencov, ktorý obsahuje voľné mastné kyseliny s dlhým reťazcom (C ig až C22) a triglyceridy v množstve nie vyššom než subiritačnom. Táto prihláška tiež uvádza, že prítomnosť nižších alkylesterov, ako sú etylestery, uvedených mastných kyselín, v prípravkoch pre kojencov eliminuje tendenciu voľnej mastnej kyseliny poškodzovať črevný epitel kojencov, ale umožňuje absorpciu a spracovanie mastnej kyseliny.

US patent č. 4,918,063 (Lichtenberger) opisuje prípravky obsahujúce špecifické zmesi fosfolipidov a neutrálnych lipidov na prevenciu alebo ošetrenie vredov a zápalového ochorenia hrubého čreva. V tomto patente sa uvádza, že zmesi nasýtených alebo nenasýtených fosfolipidov spolu s nasýtenými alebo nenasýtenými triglyceridmi a/alebo sterolmi preukazujú na zvieracích modeloch ochranný protivredový účinok. Ďalej sa v tomto patente opisuje zahrnutie viacmocných katiónov alebo antioxidantov do zmesí lipidov kvôli zvýšeniu aktivity.

Publikácia č. WO 96/10922 (Kohn et al.) opisuje zmes tukov vhodnú pre prípravky pre kojencov, pre ktorú je charakteristické, že v zmesi sa vyskytuje kyselina arachidónová a dokozahexaénová vo forme fosfolipidov.

V publikácii prihlášky európskeho patentu č. 0 376 628 BI sa opisujú plne rastlinné kompozície oleja, ktoré používajú randomizovaný palmový olej alebo olein randomizovaného palmového oleja ako jediný zdroj oleja kyseliny palmitovej. Tiež sa uvádza, že plne rastlinné tukové prípravky sú obzvlášť vhodné pri použití v prípravkoch určených pre predčasne narodených kojencov (alebo kojencov s nízkou pôrodnou váhou). Tukové prípravky pre predčasne narodených kojencov opísané v tejto prihláške zahrnujú triglyceridy so stredne dlhým reťazcom (MCT) s randomizovaným olejom palmitovej kyseliny, olejom kyseliny laurovej, olejom kyseliny olejovej a olejom kyseliny linolovej.

Aj keď boli vyššie uvedené publikácie značným prínosom, stále existuje potreba prípravkov pre kojencov, ktoré obsahujú vaječné fosfolipidy ako zdroj PUFA s dlhým reťazcom v koncentráciách vhodných pre výživu. Ďalej je nutné vyvinúť spôsoby prípravy enterálnych prípravkov obsahujúcich vaječné f'osfolipidy tak, aby prípravky mali prijateľne organoleptickc vlastnosti. Také prípravky nachádzajú konkrétne uplatnenie v prípravkoch pre kojencov a/alebo pre predčasne narodených novorodencov, ktorých potreba PUFA s dlhým reťazcom je uznávaná pre správny neurálny vývoj a vývoj ostrosti zraku. Naviac môžu vykazovať ochranný účinok na črevá.

Nekrotizujúca enterokolitída (NEC) je vážnym problémom u kojencov, ktorých pôrodná váha je nižšia ako približne 1500 gramov. Navzdory takmer trom desaťročiam štúdia zostáva presná etiológia a patofyziológia NEC nejasná. NEC je ochorenie ohrozujúce život, charakterizované ischemickou nekrózou príslušných štruktúr zažívacieho traktu a pneumatosis intestinalis, ktorej častým výsledkom je perforácia hrubého čreva. Predčasne narodení kojenci trpiaci NEC vykazujú klinický obraz kolísavej teploty, letargie, gastrickej retencie, zvracania, abdominálnej distenzie, makroskopickej alebo skrytej krvi v stolici a rádiografického dôkazu pneumatosis intestinalis, vzduchu v portálnych cievach alebo v pneumoperitoneu. Objavujú sa záchvaty zástavy dýchania, šoku a skleredému a bežne môže nastať aj smrť.

Rad autorov uskutočnil pozorovania v rôznych podmienkach a stanovil faktory ovplyvňujúce toto ochorenie (Nue, Pediatr. Clin. North. Am., Apríl, 1996, 43(2): 409-32). Príklady pozorovaní a faktorov:

• Flageole et al., Necrotizing Enterocolitis of the Newborn, Review for the Clinician. Union-Med-Can. 1991 Sept-Okt.; 120(5): 334-8. V tejto publikácii sa naznačuje, že patogenéza NEC zahrnuje mezenterickú ischémiu, nezrelosť gastrointestinálneho traktu, enterálnu výživu a dokonca je možná infekcia.

• Caplan et al.. Role of Platelet Activating Factor and Tumor Nccrosis Factor-Alpha in Neonatal Necrotizing Enterocolitis, Journal of Pediatrics. Jún 1990, 960-964 Táto publikácia opisuje, že u pacientov s ochorenim NEC sa zvyšuje množstvo doštičky aktivujúceho faktora a nádor nekrotizujúceho faktoru-alfa.

• Kliegman et al., Clostridia as Pathogens in Neonatal Necrotizing Ente- rocolitis, The Journal of Pediatrics, August 1979, 287-289.

V publikácii sa opisuje izolácia baktérie Clostridia perfringens u dieťaťa s neonatálnou NEC.

• Ostertag et al., Early Enteral Feeding Does Not Affect the Incidence of Necrotizing Enterocolitis, Pediatrics, Vol. 77, NO. 3, Marec 1986, 275-280. Táto publikácia ukazuje, že riedené kalórie aplikované do čriev negatívne neovplyvňujú výskyt NEC.

• Beli et al., Neonatal Necrotizing Enterocolitis, Annals of Surgery, Vol. 187, Január 1978, No. 1, 1-7. Táto publikácia naznačuje možnosť použitia kombinácie antimikrobiálnej terapie pri liečbe kojencov s NEC.

• Eyal et al., Necrotizing Enterocolitis in the Very Low Birth Weight Infant: Expressed Breast Milk Feeding Compared with Parenteral Feeding, Archives of Disease in Childhood, 1982, 57, 274-276. Táto publikácia opisuje, že výskyt ochorenia NEC u kojencov s nízkou pôrodnou váhou sa znížil po započatí s enterálnou výživou.

• Finer et al., Vitamín E and Necrotizing Enterocolitis, Pediatrics, Vol. 73, No. 3, Marec 1984. Táto publikácia naznačuje, že aplikácia vitamínu E s cieľom zníženia výskytu ťažkých následkov retrolentálnej fibroplázie môže byť spojená so zvýšením výskytu ochorenia NEC.

• Brown et al., Preventing Necrotizing Enterocolitis in Neonates, JAMA, Nov. 24, 1978, Vol. 240, No. 22, 2452-2454. Táto publikácia opisuje, že ochorenie NEC sa môže eliminovať použitím pomaly postupujúceho režimu kŕmenia.

• Kosloske, Pathogenesis and Prevention of Necrotizing Enterocolitis: A Hypothesis Based on Personál Observation and a Review of the Literatúre, Pediatrics, Vol. 74, No. 6, Dec 1984. 1086-1092. Publikácia uvádza hypotézu, že ochorenie NEC sa diagnostikuje pri výskyte dvoch z troch patologických rysov: (1) intestinálna ischéinia, (2) kolonizácia patogénnych baktérií a (3) nadbytok proteínového substrátu v intestinálnom lúmene.

• Kosloske, Pathogenesis and Prevention of Necrotizing Enterocolitis: A Hypothesis Based on Personál Observation and a Review of the Literatúre, Pediatrics, Vol. 74, No. 6, Dec. 1984, 1086-1092. Ďalej sa v publikácii uvádza, že ochorenie NEC sa zriedkavo vyskytuje u kojencov, ktorí sú kŕmení materským mliekom. U ľudí materské mlieko hraje dôležitú úlohu pri pasívnej imunizácii neonatálneho čreva a obsahuje faktory, ktoré podporujú v intestinálnej flóre rast organizmu Hifidohacterium. Tiež sa opisuje, že výhodné zloženie materského mlieka sa môže negatívne ovplyvniť mrazením, pasterizáciou alebo skladovaním.

Etiológia a liečba ochorenia NEC sa diskutuje v oveľa viac publikáciách a stále je nutné vyvinúť kompozície a spôsoby, ktoré lepšie umožnia liečiť a/alebo redukovať výskyt týchto poškodzujúcich a často fatálnych stavov.

Podstata vynálezu

Vynález zahrnuje rad aspektov. Vynález opisuje spôsob obmedzenia výskytu nekrotizujúcej enterokolitidy u kojencov, ktorí sú náchylní na toto ochorenie, pričom uvedený spôsob zahrnuje aplikáciu účinného množstva aspoň jednej PUFA s dlhým reťazcom vybranej zo skupiny zahrnujúcej C2on-6 mastné kyseliny, C22n-3 mastné kyseliny a C,>2«>-3 mastné kyseliny. Zistilo sa, že účinná je napríklad kyselina arachidónová (n-6 mastná kyselina). Aplikácia sa môže uskutočniť enterálnou alebo parenterálnou cestou. Uprednostňuje sa kombinácia n-6 a n-3 mastných kyselín, napríklad arachidónová kyselina a dokozahexaénová kyselina. Enterálna aplikácia sa uskutočňuje v množstve aspoň 1,0 mg n-6 mastných kyselín na jeden kilogram váhy kojenca za deň. Výhodnejšie uskutočnenie vynálezu je použitie kombinácie n-6 a n-3 mastných kyselín v hmotnostnom pomere približne 2:1 až približne 4:1 a aplikuje sa aspoň 5,0 mg n-6 mastných kyselín s dlhým reťazcom za deň.

Tento spôsob sa môže uskutočniť aplikáciou dostatočného množstva enterálnej kompozície, ktorá obsahuje kyselinu arachidónovú a dokozahexaénovú, čo je 1,0 až približne 60 mg na jeden kilogram za deň v prípade kyseliny arachidônovej a približne 0,25 až 35 mg na kilogram za deň v prípade kyseliny dokozahexaénovej. Viac typické je množstvo okolo 5 až približne 40 mg kyseliny arachidónovej a približne 1,5 až približne 20 mg kyseliny dokozahexaénovej na kilogram za deň. Uprednostňuje sa, aby hmotnostný pomer kyseliny arachidónovej a dokozahexaénovej bol v rozmedzí od približne 2 do približne 4. Uprednostňuje sa, aby polynenasýtené mastné kyseliny s dlhým reťazcom boli vo forme fosfolipidov, obzvlášť fosfatidylcholínu. Také fosfolipidy sú prítomné vo vysokých koncentráciách vo vaječnom lecitine a vo vaječných fosfatidoch.

Ďalej vynález poskytuje spôsob zníženia výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy u kojenca, pri ktorom sa kojencovi podáva enterálna výživná zmes, obsahujúca proteíny, uhľohydráty a fosfolipidy v množstve dostatočnom na dodanie aspoň 1,0 mg polynenasýtených mastných kyselín n-6 s dlhým reťazcom za deň. Výživa ďalej výhodne poskytuje aspoň 0,5 mg polynenasýtených mastných kyselín n-3 za deň, a to vo forme arachidónovej, resp. dokozahexaénovej kyseliny.

Ďalej vynález poskytuje spôsob zníženia výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy u ľudského kojenca, pri ktorom sa kojencovi podávajú fosfolipidy v množstve účinnom na zníženie výskytu nekrotizujúcej enterokolitidy. V typickom prípade sa uvedené fosfolipidy aplikujú tak, aby poskytovali medzi asi 60 a asi 2400 pmol, výhodne medzi asi 200 a asi 1500 pmol a najmä medzi asi 400 a asi 1000 pmol fosfolipidov na kilogram a deň. Zdroj fosfolipidov nie je rozhodujúci; podľa vynálezu sú vhodné fosfolipidy získané z vaječného lecitínu. Fosfolipidy je možné tiež získať zo zvieracích membrán, kam patrí tiež membrána globúl mliečneho tuku. Iné zdroje bohaté na fosfolipidy sú sójový olej a ďalšie oleje získané zo semien. Keď sa použijú fosfolipidy vaječného lecitínu, preferované množstvo aplikované enterálne je potom dostatočné, aby kojenec dostal denne aspoň 1,0 mg n-6 mastných kyselín s dlhým reťazcom. Uprednostňuje sa, aby vaječné fosfolipidy dodávali arachidónovú kyselinu ako významnú časť n-6 mastných kyselín a výhodne tiež kyselinu dokozahexaénovú a/alebo iné n-3 mastné kyseliny s dlhým reťazcom vo vyššie uvedených pomeroch. To môže mať synergický účinok. Jc však nutne poznamenať, že dĺžka a nasýtenosť mastných kyselín pripojených na kostru glycerolu nie je v tomto „fosfolipidovom“ znaku vynálezu rozhodujúca a môžu sa použiť aj iné mastné kyseliny ako LCPUFA.

Ďalej vynález zahrnuje spôsob zníženia výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy u ľudského kojenca, zahrnujúci aplikáciu cholínu v množstve, ktoré je účinné pri redukcii výskytu nekrotizujúcej cnterokolitídy. V typickom prípade sa uvedený cholín aplikuje tak, aby kojenec získal medzi približne 60 a približne 1 800 mikromólov, výhodnejšie medzi približne 150 a približne 1 200 mikromólmi cholínu na kilogram a deň. Zdroj cholínu nie je limitujúci. Môže sa výhodne podľa vynálezu použiť fosfatidylcholín získaný z vaječného lecitínu. Iné zdroje, ktoré sú bohaté na cholín alebo fosfatidylcholín zahrnujú sójový olej a oleje iných semien. Keď sa použije cholín z vaječného lecitínu, preferuje sa aplikácia v kombinácii s n-6 a/alebo n-3 mastnými kyselinami, aby kojenec dostal aspoň 1,0 mg n-6 mastných kyselín s dlhým reťazcom za deň. Uprednostňuje sa, aby vaječný lecitín poskytol arachidónovú kyselinu ako podstatnú časť n-6 mastných kyselín a tiež dokozahexaénovú kyselinu a/alebo iné n-3 mastné kyseliny s dlhým reťazcom vo vyššie uvedenom pomere. To môže mať synergický účinok. Vzhľadom na aspekt fosfolipidov dĺžka a nasýtenosť mastných kyselín pripojených na glycerolovú kostru ľubovoľného fosfatidylcholínu užívaného podľa vynálezu nie je limitujúca. Môžu sa v súlade s vynálezom použiť tiež iné mastné kyseliny ako uvedené LCPUFA. V inom prípade sa môže použiť iný nefosfolipidový zdroj cholínu.

Naviac vzhľadom k pozitívnym účinkom, ktoré je možné vidieť u kojencov náchylných k enterokolitide, je dobre možné, že sa tieto účinky objavia tiež u dospelých. Potom ďalším predmetom vynálezu je použitie ľubovoľnej vyššie v texte uvedenej kompozície pri liečbe a prevencii vredovej kolitídy a príbuzných intestinálnych stavov u dospelých Samozrejme dávkovanie je možné prispôsobiť hmotnosti dospelého pacienta a faktorom, ktoré sú známe v odbore.

Ďalej vynález opisuje enterálne prípravky a spôsoby ich prípravy. Ďalším predmetom vynálezu je napríklad spôsob produkcie enterálneho prípravku obsahujúceho fosíblipidy vaječného žĺtka, ktorý zahrnuje:

(a) získanie suchého prášku vaječného fosfatidu, v podstate bez cholesterolu, (b) dispergovanie uvedenej fosfolipidovej frakcie vo vodnej fáze s cieľom vytvorenia fosfolipidovej disperzie a (c) kombinovanie uvedenej fosfolipidovej disperzie so suspenziami ďalších zložiek uvedeného enterálneho prípravku.

Podľa tohto spôsobu poskytuje disperzie vo vodnej fáze vaječný fosfatid v množstve asi 2 až asi 15 % a práškový vaječný fosfatid sa k vode pridáva výhodne pri asi 20 až 50 °C. Tento aspekt môže byť použitý pri príprave kojeneckej výživy, obsahujúcej kyselinu arachidónovú a dokozahexaénovú vo forme fosfolipidov, spôsobom podľa vynálezu.

Ďalej vynález poskytuje prípravok vhodný pre výživu kojencov, ktorý obsahuje proteíny, sacharidy a lipidy, ktorého podstata podľa vynálezu spočíva v lipidovej zmesi zahrnujúcej triglyceridy so stredne dlhým reťazcom a vaječný fosfolipid, kde uvedený vaječný fosfolipid je prítomný v množstve asi 1 až asi 40 % hmotn. lipidovej zmesi a uvedený vaječný fosfolipid je v podstate bez cholesterolu. V typickom prípade je vaječný fosfolipid v lipidovej zmesi prítomný v množstve od 5 do 30 % hmotn. a arachidónová kyselina jc v koncentrácii od asi 10 do asi 3 1 mg na 100 kcal. Výhodnejšie je, keď prípravok tiež zahrnuje dokozahexaénovú kyselinu v koncentrácii od asi 3 do asi 16 mg na 100 kcal a arachidónová a dokozahexaénová kyselina sa tu vyskytuje v pomere asi 4:1 až asi 2:1.

Všeobecná terminológia

Mastné kyseliny sú uhľovodíkové reťazce rôznej dĺžky, ktoré majú na svojom jednom konci karboxylovú kyselinu, takže tieto oblasti sú trochu polárne a hydrofilné, zatiaľ čo inak sú hydrofóbne a ich hydrofóbicita dosahuje rôzny stupeň v závislosti od dĺžky uhľovodíkového reťazca. Mastné kyseliny sa delia do kategórii podľa dĺžky uhľovodíkového reťazca. Napríklad reťazce s menej ako asi 6 uhlíkov sa považujú za „krátke“, reťazce s dĺžkou asi 6 až 18 uhlíkov sú „stredne dlhé“ a reťazce s 20 alebo viac uhlíkmi sa považujú za „dlhé“. Mastné kyseliny môžu mať tiež jednu alebo viac dvojitých väzieb, ktoré sú miestom „ncnasýtenosti“ uhľovodíkového reťazca. Termín „PUFA s dlhým reťazcom“ znamená mastnú kyselinu s dvadsiatimi alebo viac atómami uhlíka, ktorá má aspoň dve dvojité väzby uhlík-uhlík (polynenasýtenú). Počet a poloha dvojitých väzieb u mastných kyselín sa označujú podľa nomenklatúrnej konvencie. Napríklad kyselina arachidónová („AA„ alebo ,,ARA„) má dĺžku reťazca 20 uhlíkov a obsahuje 4 dvojité väzby počínajúc pri šiestom uhlíku od metylového konca. Výsledkom je označenie „C2o:4n-6„. Podobne dokozahexaénová kyselina („DHA“) má v reťazci 22 uhlíkov so šiestimi dvojitými väzbami, ktoré začínajú pri treťom uhlíku od metylového konca, a označuje sa „C22 :6n-3„. Sú tiež známe menej obvyklé PUFA s dlhým reťazcom a niektoré sú uvedené v tabuľke I a IV (ďalej v texte).

„Glyceridy,, sú komplexné lipidy, kde glycerolová kostra je esterifikovaná mastnými kyselinami. „Triglycerid,, (to znamená „triacylglycerol,,) vykazuje tri esterifikované mastné kyseliny, na každom mieste hydroxylovej skupiny glycerolovej kostry jednu. Di- a monoglyceridy vykazujú dve, resp. jednu esterifikovanú mastnú kyselinu. Fosfoglycerid (to znamená „fosfolipid,, alebo „fosfatid,,, môžu sa medzi sebou zameniť) sa odlišuje od triglyceridu tým, že má maximálne dve esterifikované mastné kyseliny, zatiaľ čo tretia pozícia glycerolovej kostry je esterifikovaná kyselinou fosforečnou a vzniká „fosfatidová“ kyselina. V prírode je kyselina fosfatidová obvykle spojená s alkoholom, ktorý dodáva silnú polaritu. Dva také alkoholy, ktoré sa bežne vyskytujú v prírode, sú cholín a ctanolamin. „Lecitín,, je fosfatidová kyselina spojená s aminoalkoholom „cholínom“ a je známa tiež ako „fosfatidylcholín,,. Lecitiny sa líšia podľa obsahu komponentu mastnej kyseliny a ich zdrojom sú napríklad vajcia a sója. Cefalín (ľosľatidyletanolamín), fosfatidylserín a ľosľatidylinozitol sú ďalšie fosfoglyceridv

Fosfolipidy sa bežne nachádzajú v membránach všetkých živých systémov. Tradičné zdroje fosfolipidov sú vaječný žĺtok a sójový olej. Fosfolipidy je tiež možné získať z mozgu cicavcov, obličiek, srdca a pľúc alebo z membrán globúl mliečneho tuku. Môžu sa tiež použiť zdroje mikrobiálneho pôvodu (oleje jedinej bunky), ako sú oleje z rias a húb, obzvlášť potom mastných kyselín AA a DHA, ktoré sú komponenty fosfolipidov. Slepačie vajcia sú relatívne bohatým zdrojom lipidov. Približne 33 % žĺtka slepačích vajec je lipid, z ktorého približne 67 % je triglycerid, 28 % je fosfolipid a zvyšok väčšinou tvorí cholesterol (percentá sú hmotnostné percentá). Tieto čísla sú približné a líšia sa v závislosti od potravy, od chovu a podmienok chovu sliepok. Približne 75 % fosfolipidovej frakcie tvorí fosfatidylcholin, približne d'alších 20 % je fosfatidyletanolamin. Cholín tvorí až približne 15 až 30 % každej fosfolipidovej molekuly v závislosti od určitej mastnej kyseliny, ktorá je pripojená. Potom obsah cholínu vaječných fosfolipidov môže kolísať od približne 10 % do približne 25 % (hmotnostné percentá) alebo na základe celkového vaječného fosfolipidu je obsah cholínu približne 3 až 7 hmotnostných %.

Prípravky

Prípravky použiteľné podľa vynálezu obsahujú PUFA n-6 a/alebo n-3 s dlhým reťazcom. Zdroj PUFA s dlhým reťazcom nie je obmedzujúci. Známe zdroje PUFA s dlhým reťazcom zahrnujú rybí a morský olej, lipidy z vaječného žĺtka a fosfolipidy, olej z jednobunkových organizmov (ide napríklad o olej z rias a z húb). Ako je známe v odbore, niektoré zdroje sú lepšie než iné, pretože obsahujú väčšie množstvo špecifických PUFA s dlhým reťazcom. V odbore sú dobre známe ďalšie jedlé, čiastočne alebo celkom čistené zdroje PUFA s dlhým reťazcom. Nové zdroje l’UFA s dlhým reťazcom sa môžu vyvinúť pomocou génových manipulácii zeleniny a olejnatých rastlín a použitie takých rekombinantných produktov je tiež predmetom vynálezu.

PUFA s dlhým reťazcom môžu byť v prípravkoch obsiahnuté vo forme esterov voľných mastných kyselín, mono-, di- a triglyccridov, fosfoglyceridov vrátane lecitinov a/alebo ich zmesi. Výhodné môže byť, aby PUFA s dlhým reťazcom boli vo forme fosfolipidov, obzvlášť potom vo forme fosfatidylcholinu. V súčasnosti preferovaným zdrojom, aspoň ak je spracovaný tak, aby boli organoleptické vlastnosti a množstvo cholesterolu prijateľné, sa zdajú byť fosfolipidy vaječného žĺtka, k čomu pravdepodobne prispieva vysoký obsah fosfolipidov a/alebo fosfatidylcholinu spojený s PUFA získanými z vajec.

n-6 a/alebo n-3 PUFA s dlhým reťazcom sa môže aplikovať vo forme intravenózneho roztoku (to znamená parcnterálne) rovnako ako cholín a fosfatidylcholin. Intravenózny roztok bude výhodne obsahovať účinné množstvo PUFA, fosfolipid a/alebo cholín v primeranej dennej dávke parenterálneho roztoku. Presná koncentrácia preto kolíše v závislosti od predpokladaného objemu, ktorý je prijatý, a je podstatne viac koncentrovaný vo forme bolusu alebo v malom objeme parenterálneho roztoku, ako v hydratačnom alebo nutričnom parenterálnom produkte. Parenterálne kompozície budú vo všeobecnom prípade zahrnovať farmaceutický prijateľné nástroje a excipienty, ako sú pufre, konzervačné činidlá a podobne.

n-6 a/alebo n-3 PUFA s dlhým reťazcom a cholín a fosfolipidy sa môžu v inom prípade aplikovať vo forme enterálnej kompozície. Enterálna kompozícia obsahujúca PUFA s dlhým reťazcom, cholín alebo fosfolipid sa môže vyskytovať vo forme roztoku alebo emulzie aktívnej látky alebo ako nutričná matrica obsahujúca proteíny, sacharidy, iné tuky, minerály a vitamíny. Enterálne kompozície obsahujúce aktívne komponenty sa môžu pripravovať buď ako doplnková alebo celková nutričná podpora. Koncentrácia PUFA s dlhým reťazcom v enterálnej kompozícii môže byť v rozmedzí od približne 100 hmotnostných % (ako v prípade bolusovej emulzie) do 0,5 hmotnostných % (ako je to v prípade nutrične kompletného prípravku) prípravku v závislosti od spôsobu aplikácie a účelu aplikácie. V úplných nutričných prípravkoch môže byť koncentrácia dokonca nižšia, ak sa aplikuje dostatok prípravku tak, že sa zavedie účinné množstvo PUFA s dlhým reťazcom.

Obzvlášť preferované uskutočnenie tohto vynálezu sa týka zlepšenia nutrične úplného prípravku, ktorý je vhodný na kŕmenie kojencov, obzvlášť potom predčasne narodených kojencov. Taký preferovaný prípravok obsahuje proteín, sacharidy a lipidy, kde približne 6 až 40 hmotnostných percent celkového lipidn tvorí vaječný fosfolipid, ktorý v podstate neobsahuje voľný cholesterol. Termín „v podstate neobsahuje,, znamená, že obsah cholesterolu vaječného fosfolipidu je menší než OJ hmotnostných percent a výhodne je nižší než 0,05 hmotnostných percent celkového lipidu.

Pre odborníkov v odbore je zrejmé, čo sa mysli pojmom detská výživa. Keď sa riedi alebo rekonštituuje, ak je na začiatku v koncentrovanej alebo práškovej forme, do štádia, ktoré je možné aplikovať, potom typická detská výživa obsahuje približne 10 až 35 gramov proteínu na liter výživy, 20 až 50 gramov lipidov na liter výživy, 60 až 110 gramov sacharidov na liter výživy a ďalšie komponenty, ako sú vitamíny, minerály, vláknina, emulgátory a podobne. S cieľom vysvetlenia komponentov detskej výživy a spôsobu ich produkcie sú tu uvedené nasledujúce US patenty : I) US patent č. 5,492,899 (Masor et al.,); 2) US patent 5,021,245 (Borschel et al.,) 3) US patent č. 5,234,702 (Katz et al., ) a 4) US patent č. 5,602,109 (Masor et al.,) a 5) US patent č. 4,670,268 (Mahmoud). Toto uskutočnenie vynálezu zahrnuje detskú výživu obsahujúcu približne 40 až 50 gramov lipidu na liter výživy, kde lipid obsahuje zmes triglyceridov so stredným reťazcom a vaječný fosfolipid, ktorý v podstate neobsahuje cholesterol. V typickom prípade zmes lipidov obsahuje približne 1 až 40 hmotnostných percent, výhodne približne 5 až 30 hmotnostných % vaječných fosfolipidov. Toto uskutočnenie vynálezu je obzvlášť vhodné na prípravu PUFA s dlhým reťazcom vybraných z n-3 mastných kyselín a n-6 mastných kyselín, fosfolipidov a/alebo cholínu v množstve, ktoré je pre kojencov výhodné.

Spôsob prípravy

Pretože žĺtky vajec od sliepok zahrnujú ako triglyceridy tak i fosfalidy, preferuje sa spracovanie vaječných žĺtkov s použitím organických rozpúšťadiel spôsobom, ktorý oddeľuje fosfatidy od triglyceridov, sterolov (napríklad cholesterolu) a iných komponentov. Pri tejto separácii je možné aspoň v laboratórnom meradle použiť rôzne spôsoby uvedené v literatúre. V inom prípade takéto vaječné fosfatidy, ktoré sú v podstate bez cholesterolu, sú bežne dostupné v podobe suchého prášku u firmy Pfanstichl, lnc. (Waukegan , IL; katal. č. P-l23).

Vaječný fosfatid sa potom zamieša do entcrálneho prípravku podľa vynálezu. Vzhľadom k obsahu lipidov sa predpokladá, žc začlenenie vaječných fosfatidov do enterálneho prípravku jc ľahké v olejovej Táže. Prekvapujúco sa zistilo, žc tieto disperzie lipid-lipid sú neprijateľné a že príprava vodnej disperzie vaječného fosfatidu vedie ku zlepšeniu produktu. Vodné disperzie obsahujúce približne 2 až 15 hmotnostných percent, uprednostňuje sa približne 3 až 8 hmotnostných percent, sa pripravujú vo vode, ktorej teplota je približne 20 až 25 °C, tak sa dosiahne najlepší výsledok. V teplejšej vode sa nedosiahnu natoľko prijateľné organoleptické vlastnosti.

Pripraví sa kaša obsahujúca sacharidy, proteiny a lipidy, ktoré slúžia ako makronutričný zdroj. Táto kaša sa mieša pri teplote asi 130 až 140 °C. Tesne pred homogenizáciou sa fosfatidová disperzia zmieša so zostávajúcim prípravkom.

Vo obzvlášť preferovaných prípadoch sa pred pridaním fosfatidovej disperzie ku zmesi konečného produktu (tesne pred homogenizáciou) z disperzie odsaje vzduch pri miernom vákuu. Odsatie vzduchu sa môže uskutočniť ľubovoľným mechanizmom, ale uspokojivé výsledky poskytuje rozprašovací deaerátor pri približne 375 mm (15 palcov) ortuťového stĺpca. Ukázalo sa, že tento dodatočný krok zlepšuje organoleptické a olfaktorické vlastnosti konečného produktu dokonca viac ako filtrácia na aktívnom uhlí alebo ich kombinácia (viď príklad 3).

Pri príprave parenterálnych kompozícii použiteľných podľa vynálezu sa môže použiť bežná sterilná parenterálna technológia výroby. V tomto prípade môže byť výhodné vyhnúť sa vaječným fosfátidom a namiesto nich použiť triglyceridovc oleje alebo estery mastných kyselín, ktoré sa môžu nachádzať v rekombinantných alebo jednobunkových zdrojoch oleja.

Priemyselná využiteľnosť

Prípravky podľa vynálezu sa môžu použiť ako nutričný doplnok kojencov a/alebo dospelých. Prídavok PUFA s dlhými reťazcami, najmä n-6 a n-3 mastných kyselín a obzvlášť potom AA a DHA, sa všeobecne považuje za prínosný pre neurálny vývoj a ostrosť zraku u kojencov, hoci v literatúre sa našli aj konfliktné údaje.

Prípravky použiteľné podľa vynálezu zahrnujú zmesi obsahujúce ľubovoľnú alebo všetky z nasledujúcich zložiek:

(a) PUFA s dlhým reťazcom vybrané z n-6 a n-3 mastných kyselín, v typickom prípade vo fosfolipidovej alebo fosfatidylcholinovej forme, (b) polárne fosfolipidy, bez ohľadu na podstatu alebo dĺžku pripojených mastných kyselín, (c) cholín, výhodne fosfatidylcholín.

Napríklad výživa obohatená vaječnými fosfolipidmi opísaná podrobne v príkladoch poskytuje vyššie množstvo každého zo špecifikovaných komponentov a prekvapujúco sa zistilo, že sa podstatne redukuje výskyt NEC u populácie kojencov, ktorí sú náchylní na ochorenie NEC. U viac špecifického uskutočnenia vynálezu je spôsob redukujúci výskyt NEC sprevádzaný aplikáciou kyseliny arachidónovej (AA, 20:4 n-6) alebo výhodnejšia je aplikácia AA v kombinácii s dokozahexaénovou kyselinou (DHA, 22:6 n-3).

Vynález opisuje spôsob redukcie výskytu nekrotizujúcej enterokolitidy u kojencov, ktorí sú náchylní na toto ochorenie. Uvedená metóda zahrnuje aplikáciu účinného množstva aspoň jednej PUFA s dlhým reťazcom zo skupiny C_2liii-6 mastných kyselín, C₂₂n-6 mastných kyselín, C_2lln-3 mastných kyselín. Aplikácia sa uskutočňuje v množstve aspoň 1,0 mg n-3 mastných kyselín na kilogram váhy kojcnca za deň. Výhodnejšie uskutočnenie vynálezu je použitie kombinácie n-6 a n-3 mastných kyselín v hmotnostnom pomere približne 2:1 až približne 4:1.

Ďalej sa tu opisuje spôsob zníženia výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy u kojcncov, pričom uvedená metóda zahrnuje aplikáciu vaječných fosfolipidov v množstve, kedy výsledkom je aspoň 1,0 mg n-6 mastných kyselín s dlhým reťazcom za deň. Je výhodné, aby vaječné fosfolipidy dodávali ΛΛ, ako podstatnú časť n-6 mastných kyselín, a tiež je výhodné, aby dodávali DHA a/alebo iné n-3 mastné kyseliny s dlhým reťazcom vo vyššie uvedenom pomere.

Ďalej vynález opisuje enterálnu aplikáciu fosfolipidov, obzvlášť fosfolipidov, ktoré obsahujú AA a/alebo DHA a ktoré v porovnaní s prípravkami obsahujúcimi triglyceridy AA a DHA často zvyšujú množstvo AA a DHA v krvnom sére.

Správnejšia miera aplikácie prípravkov podľa vynálezu je denný príjem v jednotkách miligram na kilogram telesnej váhy. Nasledujúca tabuľka A udáva preferované a ideálne cieľové rozmedzie každej z kompozície podľa vynálezu.

Tabuľka A

Denný príjem (vztiahnuté na kilogramy hmotnosti kojenca)

Zložka	Minimálne množstvo	Výhodné množstvo	Výhodnejšie množstvo	Najvýhodnejšie množstvo
AA (mg)	1	2 až 60	5 až 40	10 až 30
DHA (mg)	0,25	0,5 až 35	1,5 až 20	3 až 15
AA/DHA pomer	0,25	0,5 až 10	1 až 8	2 až 4
Fosfolipidy (μιηοΐ)	50	60 až 2 400	150 až 1 200	400 až 1 000
Cholín (μιηοΙ)	50	60 až 1 800	150 až 1 200	300 až 900

Existuje tu široké rozpätie, čo spôsobuje skutočnosť, že nie všetci kojenci budú konzumovať rovnaké objemy výživy. Tí, ktorí konzumujú menej, dostávajú tiež menej každej zložky. Predpokladá sa, že ideálne cieľové rozmedzie je približne 100 kcal. Dochádza tiež ku sporu, aký zvoliť postup pre odhad obsahu cholínu.

(>

Z tabuľky A možno vidieť, že najvýhodnejšie je, aby výživa obsahovala približne 2 krát až 4 krát viac A A než DIIA. Je tiež zrejmé, že minimálne množsa všetky fosfolipidy poskytnú vo forme fosfatidylcholínu. Ako je cholín nahradzovaný inými nitrogénnymi alkoholmi (napríklad etanolamín, serín alebo inozitol) relatívne množstvo cholínu vzhľadom k celkovému množstvu fosfolipidov klesá.

AA a /alebo DHA je možné aplikovať jednotlivo ako oddelené zložky alebo spoločne alebo v kombinácii s inými zložkami, ako sú bielkoviny, tuky, sacharidy, vitamíny a minerály. Nutričná podpora pre novorodencov s nízkou pôrodnou váhou môže byť parenterálna (vnútrožilová výživa) alebo enterálna. Tak sa môže príslušné množstvo PUFA s dlhým reťazcom pridať do parenterálneho nutričného roztoku alebo do bežnej enterálnej výživy vhodnej pre novorodencov s nízkou pôrodnou hmotnosťou. Najvýhodnejšie je, keď sa spôsob podľa vynálezu uskutoční enterálnou aplikáciou detskej výživy, ktorá je určená pre novorodencov s nízkou pôrodnou hmotnosťou a obsahuje AA a DHA. Taká detská výživa ďalej obsahuje správne množstvo sacharidov a proteinov a vhodnú kombináciu minerálov a vitamínov. Ako príklad detskej výživy podľa vynálezu slúži modifikovaná výživa Similac Special Čare® (Ross Product Division of Abbott Laboratories, Columbus, Ohio), ktorá sa opisuje detailnejšie v príklade 2.

Ďalej vynález opisuje spôsob zvýšenia množstva kyseliny arachidónovej a dokozahexaénovej v krvnom sére. Uvedená metóda zahrnuje aplikáciu enterálnej výživy, ktorá obsahuje AA a DHA vo forme fosfolipidov.

Isté štúdie ukazujú, že aplikácia PUFA s dlhým reťazcom kojencom náchylným k NEC bude znižovať výskyt NĽC a môže tiež znížiť stupeň a obťažnosť ochorenia NEC. Ďalej sa zistilo, že aplikácia fosfolipidov pochádzajúcich zo zvierat alebo zo zeleniny je tiež účinná pri znížení výskytu ochorenia NEC u populácie kojencov, ktorí sú náchylní na ochorenie NEC.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad I

Fosfatid vaječného žĺtka sa získal od firmy Pfanstiehl, Inc. (Waukegan, IL; katalógové číslo P-123) a jeho použitie sa opisuje v nasledujúcom príklade. Profil mastných kyselín a cholesterolu uvedeného vaječného fosfatidu sa uvádza v tabuľke I. Ďalej sa tu uvádza súčet všetkých n-3 a všetkých n-6 PUFA s dlhým reťazcom.

Tabuľka 1: Profil mastných kyselín a obsah cholesterolu v lecitíne vaječného žĺtka

Mastná kyselina	V gramoch na 100 gramov vzorky
C14:0	0,08
C16:0	18,83
C16:1 n-7	0,82
016:4	0,21
C18:0	6,72
C18:1 n-9	17,36
C18:2 n-6	9,8
C20:l n-9	0,11
C20:2 n-6	0,24
020:3 n-6	0,3
C20:4 η-6-kys. arachidónová	4,93
022:0	0,07
C22:4 n-6	0,3
C22:5 n-6	1,45
022:5 n-3	0,09
022:6 η-3-kys. dokozahexaénová	1,24
cholesterol	<0,05
Celkom LOPUFA n-6	7 ΊΊ ' 1 “ “
Celkom LOPUFA n-3	1,JJ

Odborníkovi je zrejmé, žc konkrétne množstvo rôznych mastných kyselín obsiahnutých v lipidoch vaječného žĺtka bude kolísať v závislosti od chovu, kŕmenia a veku sliepok. Naviac postup extrakcie, ktorý používa Pfanstiehl, na prípravu fosfatidu používaného v príkladoch vedie ku vzniku materiálu, ktorý obsahuje extrémne nízke množstvo cholesterolu, zatiaľ čo vykazuje profil mastných kyselín, ktorý je vysoko využiteľný pri výžive.

Príklad 2

V tomto príklade sa pripravili kontrolné a experimentálne kojenecké výživy, ktoré neobsahujú respektíve obsahujú vaječný fosfatid podľa príkladu 1. Kontrolným prípravkom je výživa Similac Special Čare® (Ross Products Division of Abbott Laboratories, Columbus, Ohio) a pripravila sa s použitím nasledujúceho zoznamu zložiek, čo vedie ku vzniku výživy so zložením, ktoré uvádzajú tabuľky 11 až IV ďalej v texte:

Voda (Kosher), netučné mlieko, hydrolyzovaný kukuričný škrob, laktóza, frakcionovaný kokosový olej (triglyceridy so stredne dlhými reťazcami), srvátkový proteínový koncentrát, sójový olej, kokosový olej, fosforečnan trivápenatý, citrát draselný, citrát sodný, chlorid horečnatý, kyselina askorbová, mono- a diglyceridy, sójový lecitín, uhličitan vápenatý, karagenan, chlorid cholínu, síran železnatý, m-inozitol, taurín, niacinamid, L-karnitín, alfa-tokoferolacetát, síran zinočnatý, pantotenát vápenatý, chlorid draselný, síran meďnatý, riboflavín a palmitát vitamínu A, tiamínchloridhydrochlorid, pyridoxínhydrochlorid, biotin, kyselina listová, síran manganatý, ľylochinón, vitamín D₃. seliničitan sodný a kyá nokobalamin.

Vo všeobecnom prípade sa suspenzie proteínov, sacharidov, lipidov, vitamínov a minerálov pripravujú oddelene a potom sa pred homogenizáciou zmiešajú, ako sa uvádza v predchádzajúcich US patentoch, ktoré sa vzťahujú k výrobe kojeneckej výživy.

‘1

Pri experimentálnej výžive bol vaječný fosfatid podľa príkladu I pridaný do výživy počas výroby. Najskôr sa vaječný fosfatid dispergoval vo vode pri teplote 25 °C, čim sa vytvorila 8 % disperzia. Tesne pred homogenizáciou sa fosfatidová disperzia zmiešala s proteinmi, sacharidmi, vitamínmi, minerálmi a inými lipidmi za vzniku experimentálnej výživy, ktorá vykazuje zloženie uvedené v tabuľke II až IV Množstvá každej zložky sa udávajú vzťahované na liter a na kilokalórie, pretože v odbore je známe pripravovať kojenecké výživy s vyššou alebo nižšou kalorickou hustotou ako je štandardných 20 kcal na 34 ml (20 kcal na objemovú uncu).

Tabuľka 11: zložky kontrolných a experimentálnych prípravkov

	Preferované rozmedzie
Živina	Jednotky/1*	Jednotky/100 kcal
Proteín (g)	21,9 - 23,4	2,61 - 2,88
Tuk (g) (ako sa opisuje v tabuľke III)	40,0 - 46,0	5,24 - 5,67
Sacharidy (g)	84,0 - 88,0	10,00 - 10,84
[popol] (g)	6,7 - 8,0	0,80 - 0,99
Celkové pevné látky (g)	158,6 - 165,0	18,88 - 20,32
Kyselina linolová (g)	5,6 - 12,2	0,67 - 1,50
Vápnik (mg)	1 300 - 1 700	154,76 - 209,36
Fosfor (mg)	720 - 970	85,71 - 1 19,46
Horčík (mg)	100 - 700	1 1,90 - 20,94
Sodík (mg)	349 - 389	41,55 - 47,91
Draslík (mg)	1 000 - 1 420	1 19,05 - 174,88
Chlorid (mg)	650 - 770	77,38 - 94,83
Železo (mg)	3,0 - 5,5	0,36 - 0,68
Zinok (mg)	12,0 - 14,6	1,43 - 1,80
Meď (mg)	2,0 - 3,0	0,24 - 0,37
Mangán (pg)	100 - 500	1 1,90 - 61,58
Jód (mg)	0,05 - 0,30	0,01 - 0,04
Selén (pg)	12-29	1,43 - 3,57

Vitamín A (IU)	6 000 - 8 000	714,29 - 985,22
Vitamín D (IU)	1 200 - 1 580	142,86 - 194,58
Vitamín E (IU)	35,0 - 45	4,17 - 5,54
Vitamín K\| (pg)	100 - 140	I 1,90 - 17,24
Vitamín C (mg)	350 - 450	41,67 - 55,42
Tiamín (Bi) (mg)	2,66 - 4,6	0,32 - 0,57
Riboflavin (B2) (mg)	5,03 - 9,0	0,60 - 1,11
Pyridoxín (B₆)(mg)	2,6 - 3,4	0,31 - 0,42
Vitamín B_!2 (pg)	4,47 - 9,5	0,53 - 1,17
Kyselina pantoténová (mg)	15,4 - 24,0	1,83 - 2,96
Kyselina listová (pg)	340 - 450	40,48 - 55,42
Niacín (mg)	40,6 - 65	4,83 - 8,00
Biotín (pg)	350 - 460	41,67 - 56,65
Cholín (mg)	81 - 243	9,64 - 29,93
m-inozitol (mg)	44,7 - 61	5,32 - 7,51
L-karnitín (mg)	35-60	4,17 - 7,39
Taurín (mg)	60 -80	7,14 - 9,85
Energia (kcal)	812 - 840

*predpokladá sa 24 kcal na 34 ml (24 kcal na objemovú uncu))

V nasledujúcej tabuľke III sa uvádza obsah lipidov (jediná premenná) použitých v kontrolnom a experimentálnom produkte. Možno vidieť, že výživy vykazujú rovnaké celkové množstvo lipidov, ale podstatne sa líšia v zámene vaječných fosfolipidov častí triglyceridov so stredne dlhým reťazcom. Táto substitúcia prináša vyššie množstvo fosfolipidov a cholínu, rovnako ako ďalšie PUFA s dlhým reťazcom.

Tabuľka III: lipidy kontrolných a experimentálnych prípravkov

ingrediencia	Kontrolný prípravok	experimentálny prípravok
Zmes lipidov	Hmotnostné %	Hmotnostné %
MCT	50	41
Kokosový olej **	30	30
Sójový olej	20	20
Vaječné fosfolipidy ako cholin ako etanolamin	0	9(4,0 g/l) 75 % z 9% 20 % z 9 %
Sójový lecitín	0,45 g/l	0,0 g/l
Cholesterol	ND	ND
Celkové lipidy (g/l)	44,1	44,1

MCT triglyceridy so stredne dlhým reťazcom ** frakcionovaný

ND nebol detegovaný

Tabuľka č. 4 uvádza profil mastných kyselín v kontrolných a experimentálnych výživách. To reprezentuje súčet zložiek mastných kyselín vaječného lecitínu a výživy Similac Special CarcúO.

Tabuľka IV: Priemerné profily mastných kyselín udávané v hmotnostných percentách.

Mastná kyselina	Kontrolné	Experimentálne
miesto nenasýtenosti	n-3	iné	n-6	n-3	iné	n-6
6:0 kaprónová		0,71			0,27
8:0 kaprylová		30,56			23,1 1
10:0 kaprinová		19,61			16,44
12:0 laurová		9,69			10,24
14:0 myristová		3,85			4,08
15:0 a 14:1		0,04			0,01

16:0 palmitolejová		5.51			7,65
16:1 palmitolejová		0,03			0,12
16:2					-
1 7:0 margarová		0,04			0,09
16:3		-
16:4
1 8:0 steárová		2,68			3,89
18:1 n-9 olejová		8,31			1 1,25
18:2 n-6 linolová			16,36			18,87
18:3 n-6 linolénová			2,3
18:3 n-3	2,24			2,45
18:4 n-6						0,02
20:2 arachidová		0,12			0,14
20:1 n-9		0,04			0,09
20:2 n-9		0,02			0,02
20:3 n-9					0,05
20:4 n-6 AA						0,41
20:4 n-3	-
20:5 n-3
22:0 behénová		0,07			0,12
22:5 n-6						0,07
22:5 n-3				0,07
22:6 n-3 DHA				0,14
24:0		0,04			0,07
Celkové LC PUFA n-3	0			0.21
Celkové LC PUFA n-6			0			0,48
Celkom n-3	2,24			2,66
Celkom n-6			18,66			19,37

Inklúzia vaječného fosfatidu vedie k tomu, že 0,21 hmotnostných percent celkovej zmesi lipidov tvoria n-3 mastné kyseliny s dlhým reťazcom a 0,48 hmotnostných percent tvoria n-6 mastné kyseliny s dlhými reťazcami. Špecific kcjšic, 0,14 hmotnostných percent celkovej zmesi tukov tvorí DHA a 0,41 hmotnostných percent tvorí AA. Na základe aplikácie 100 kcal/kg/deň na hmotnosť I kg kojenca táto výživa poskytuje približne 22 mg AA a približne 7 mg DIIA za deň. To je samozrejme len jedno z možných uskutočnení pomeru podľa vynálezu.

Príklad 3

V tomto experimente sa hodnotili premenné procesu s cieľom obmedziť organoleptickú spätnú väzbu spojenú s použitím vaječných fosfolipidov. Izolácia vaječných fosfolipidov, ktorú je možné použiť podľa vynálezu, často vedie ku vzniku vaječného fosfatidu, ktorý vykazuje nevyhovujúce organoleptické vlastnosti pre prípad použitia v kojencckej výžive. Tieto vlastnosti sa môžu ďalej vylepšiť, aby vznikol produkt, ktorý je vyhovujúci ako pre kojencov, tak aj pre osobu, ktorá túto výživu aplikuje. Tento postup ako zdokonaliť konečný produkt sa opisuje ďalej v texte.

Pripravil sa rad nutričných prípravkov, ktoré sú podobné ako ten opísaný v príklade 2, s tou výnimkou, že 6 hmotnostných percent vaječného fosfolipidu sa vopred upravilo s použitím rôznych postupov. Vaječné fosfolipidy sa dispergovali v časti olejovej zmesi, ktorá sa opisuje v príklade 2 alebo v časti vody. Olejové disperzie sú neprijateľné a nemožno ich použiť ani dokonca po zahriati na teplotu okolo 95 °C. Disperzia fosfolipidov vo vode so zvyšujúcou sa teplotou sa pripravila jednoducho a táto metóda je preferovaným spôsobom prípravy vodnej disperzie.

Hlavná vsádzka 3 % (hmotnostné percentá ) disperzie vaječných fosfolipidov sa pripravila miešaním fosfolipidov vo vode s teplotou 90 °C počas 1 hodiny. Časť tejto disperzie prešla cez (1) samotný deaerátor; (2) samotnú jednotku filtrácie na aktívnom uhlí; (3) cez kombináciu deaerátora a filtračnej jednotky alebo (4) sa d'alej neupravovala.

Jednotka filtrácie na aktívnom uhli obsahuje 80 gramov aktívneho uhlia a deaerátorová jednotka pracovala pri miernom vákuu (375 mm ortuťového stĺp ca). Časti vsádzky prešli 3 krát filtračnou jednotkou a raz cez deaerátor. Keď sa použili obe techniky, časť prešla najskôr filtráciou, potom deaerátorom. Upravené časti sa potom pridali do nutričného prípravku tesne pred homogenizáciou a balením vzorky.

U vzoriek sa potom hodnotili stopy pachov (organoleptické vlastnosti) niekoľkými skúsenými osobami. Výsledky sú uvedené v tabuľke V.

Tabuľka V: Detská výživa s fosfolipidmi vaječného žĺtka

Výsledky testov organoleptických vlastností

f Úprava disperzie	Počiatočná AA	AAL po troch mesiacoch
Samotná deaerácia	AA	1 - 2,5	AAL	2,5
Samotná filtrácia na aktívnom uhli	AA	1,5 - 2	AAL	2,5
Deaerácia/filtrácia na aktívnom uhli	AA	2	AAL	2,5
Neupravuje sa	AA	2,5 - 3	AAL	3

AA kyselina arachidónová

AAL dlho pretrvávajúca kyselina arachidónová

Meradlo: 0,5 1	veľmi slabá slabá
1.5	slabá až mierna
2	mierna
2,5	mierna až silná
.1	silná

Prekvapujúco najmenej aromatická vzorka bola tá, ktorá obsahovala disperziu, ktorá prešla iba dcareátorom. Disperzia, ktorá sa upravovala na deareátore a filtráciou na aktívnom uhlí vykazuje najhoršie hodnotenie okrem kontroly (ktorou je neupravená fosfolipidová disperzia).

Príklad 4

Prípravky pripravené podľa príkladov 2 a 3 sa podávali kojencom v rámci štúdie, ktorá sa uskutočnila v inštitúcii Neonatal Nursery of tlie University of Tennessee Newborn Center pod vedením Dr. Susan E. Carlson a za finančnej podpory Ross Products Division of Abbott Laboratories (Study AE78), NICHD grantu RO1-HD3I329 a grantu ROI-EY08770 National Eye Inštitúte. Skúmané parametre zahrnujú rast, neurálny vývoj a ostrosť zraku. Má sa za to, že PUFA s dlhým reťazcom sú fyziologicky dôležité pri vývoji mozgu a očí a rýchlo sa akumulujú vo fetálnom tkanive v poslednom trimestri tehotenstva. Predčasne narodení kojenci potom v porovnaní s deťmi donosenými neprijímajú normálne množstvo PUFA s dlhým reťazcom.

Kritérium zaradenia do štúdie:

Podmienkou zaradenia do tejto klinickej štúdie je „nízka“ pôrodná hmotnosť, to znamená nižšia než 1500 gramov (rozmedzie 750 až 1375 gramov), nesmú sa prejavovať príznaky kardiálneho, respiračného, gastrointestinálneho alebo iného systémového ochorenia. U novorodenca nesmela byť zistená asfyxia alebo klinické komplikácie spojené s inkompatibilitou krvnej skupiny. Matka novorodenca nesmela prekonať prenatálnu infekciu s preukázaným nežiaducim účinkom na plod. Zneužívanie drog matkou bolo dôvodom k vylúčeniu zo štúdie. Všetci novorodenci sa začali kŕmiť orálne v 7. dni života.

Počas klinickej štúdie sa do nej zaradilo celkom 120 novorodencov v prvých 7 dňoch života. S výnimkou jedného novorodenca, ktorý sa previezol do inej nemocnice krátko po tom, čo bol zaradený do štúdie (ako kontrola), všetci novorodenci (n-119) boli v rovnakej nemocnici. Novorodenci sa zaradili (naslepo náhodne) do troch skupín, pričom dve z nich dostávali počas hospitalizácie kontrolný prípravok a jedna skupina dostala experimentálny prípravok (viď príklad 2). Straty novorodencov počas hospitalizácie sa nahradili inými novorodencami, ktorí sa zaradili do rovnakej ošetrovanej skupiny. Vzhľadom k návrhu štúdie viac novorodencov dostávalo kontrolný prípravok. Celkový po čet jedincov kŕmených kontrolným prípravkom zodpovedal viac ako dvojnásobku detí kŕmených experimentálnym prípravkom.

Zistenie.

. Neočakávaným zistením bolo, že vyšší výskyt nekrotizujúcej enterokoíitífe dy (NEC) bol u kontrolných skupín v porovnaní s experimentálnou skupinou.

• Tabuľka VI ukazuje celkový počet novorodencov podľa druhu ošetrenia (kontrolné verzus experimentálne) a uvádza počet novorodencov v každej skupine, u ktorých sa vyvinulo ochorenie NEC. Ako výskyt ochorenia NEC alebo podozrenia naň sa hodnotí, ak sú s ním konzistentné klinické znaky a príznaky, ako je abdominálne rozšírenie, gastrické zvyšky, biliózne zvracanie, stolica pozitívna na krv, prítomnosť hlienu v stolici a prítomnosť C-reaktívneho proteínu v koncentrácii vyššej alebo rovnej 0,05 mg/dl (Pourcyrous et al., „Significance of Seriál C-reactive Protein Responses in Neonatal Infection and Other Diseases“, Pediatr., 1993, 92: 431-435). Výskyt ochorenia NEC bol potvrdený u 15 kontrolných novorodencov a iba u 1 novorodenca z experimentálnej skupiny.

Tabuľka VI: Výsledky klinickej štúdie

	Kontrolné	Experimentálne
NEC*	15	1
Bez NEC	70	J J
celkom	85	34

*alebo podozrenie výskytu NEC

Štatistická analýza týchto dát s použitím Fisherovho presného testu ukazuje, že počet novorodencov, u ktorých sa preukázalo ochorenie NEC v kontrolnej skupine(ách) je významne vyšší (p=0,039) než počet novorodencov v experimentálnej skupine, u ktorých sa prejavilo ochorenie NEC..

Príklad 5

V tomto experimente sa hodnotí zahrnutie AA a DHA do parenterálnej (intravenózna výživa) aplikácie výživy. Parenterálny roztok môže obsahovať rôzne komponenty, v odbore známe, pričom AA a DHA sa dodávajú vo forme » fosfolipidov, triglyceridov alebo metylesterov. AA a DHA môžu byť ako jediné aktívne zložky zmiešané s bežným parenterálnym vehikulom a excipientom alebo výhodne sú AA a DHA zahrnuté do parenterálneho prípravku, určeného na doplnenie alebo dodanie celkovej výživy pre novorodenca. Typické parenterálne nutričné roztoky obsahujú lipidy v množstve poskytujúcom asi 2g/kg/deň. Množstvo AA a DHA v zmesi lipidov by malo výhodne vyústiť do aplikácie 10 až 30 mg/kg/deň v prípade AA a 3 až 15 mg/kg/deň v prípade DHA.

Príklad 6

V tomto experimente sa vaječný lecitín v experimentálnom prípravku podľa príkladu 2 nahradí sójovým lecitinom približne v desaťnásobnom množstve ako obsahuje kontrolný prípravok. Sójový lecitín, podobne ako ostatné fosfolipidy získané z rastlinných zdrojov, neobsahuje žiadne polynenasýtené kyseliny s dlhým reťazcom; polárny charakter fosfolipidov a ich schopnosť ľahkého zabudovania do črevnej sliznice môže poskytovať ochranný účinok na črevnú výstelku, a tak poskytovať výsledky porovnateľné s experimentálnym prípravkom pod- • ľa príkladu 2. Naviac sójový lecitín obsahuje kyselinu linolovú (18:2n-6, nutrične významnú mastnú kyselinu, ktorá je prekurzorom AA) a kyselinu linoleovú (18:3n-3, nutrične významnú mastnú kyselinu, ktorá je prekurzorom DHA).

Príklad 7

V tomto experimente sa porovnáva použitie fosfolipidov obsahujúcich AA a DHA a triglyceridov obsahujúcich AA a DHA. Prípravok podľa príkladu 2 sa porovnáva s podobným prípravkom pre novorodencov, kde vaječný fosfolipid sa nahradí zmesou triglyceridov jednobunkových mikróbov, ktoré obsahujú porovnateľné množstvo AA a DHA.

Zdraví, donosení novorodenci boli zahrnutí v klinickom hodnotení, pri ktorom sa meralo množstvo AA a DHA v krvnom sérc po enterálnej aplikácii. Očakáva sa, že novorodenci, ktorí sú kŕmení fosfolipidovým prípravkom, dosiahnu množstvo AA a DHA v krvnom sére, bližšie sa podobajúceho obsahu zistenému u kojených novorodencov než v prípade prípravku, ktorý obsahuje AA a DHA vo forme triglyceridov. Tento experiment by mal ukázať, že fosfolipidy obsahujúce AA a DHA sú preferovanou formou aplikácie v porovnaní s triglyceridmi, ktoré obsahujú AA a DHA. Vynález teda zahrnuje zdokonalené enterálne prípravky a spôsoby zvýšenia množstva AA a DHA v krvnom sére.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použitie jednej alebo viacerých zložiek vybraných zo skupiny pozostávajúcej z

a) aspoň jednej n-6 polynenasýtenej mastnej kyseliny,

b) poprípade aspoň jednej n-3 polynenasýtenej mastnej kyseliny,

c) aspoň jedného fosfolipidu a

d) cholínu na prípravu prípravku na obmedzenie výskytu nekrotizujúcej enterokolitídy u kojenca, ktorý je voči nekrotizujúcej enterokolitíde náchylný, kde uvedená zložka je prítomná v účinnom množstve v dennej dávke tohto prípravku.
2. Použitie podľa nároku 1, kde uvedená aspoň jedna n-6 polynenasýtená mastná kyselina zahrnuje kyselinu arachidónovú a uvedená prípadná n-3 polynenasýtená mastná kyselina zahrnuje kyselinu dokosahexaénovú.
3. Použitie podľa nároku 1 alebo 2, kde sa jedná o enterálny prípravok.
4. Použitie podľa nároku 1 alebo 2, kde sa jedná o parenterálny prípravok.
5. Použitie podľa nároku 3, kde sa jedná o enterálny prípravok obsahujúci kyselinu arachidónovú a kyselinu dokosahexaénovú v množstve účinnom na dodanie asi 1,0 až asi 60 mg/kg/deň kyseliny arachidónovej a asi 0,25 až asi 35 mg/kg/deň kyseliny dokosahexaénovej.
6. Použitie podľa nároku 3, kde hmotnostný pomer kyseliny arachidónovej ku kyseline dokosahexaénovej je v rozmedzí asi 2 až asi 4.

.
7. Použitie podľa nároku 1, kde uvedená n-6 polynenasýtená mastná kyselina a uvedená n-3 polynenasýtená mastná kyselina sú mastné kyseliny s dlhým š reťazcom nezávisle vybrané z jedného alebo viacerých zdrojov vybraných zo skupiny zahrnujúcej vaječný lecitín, oleje húb, oleje rias a morské oleje.
8. Použitie podľa nároku 1 alebo 2, kde uvedená n-6 polynenasýtená mastná kyselina a uvedená n-3 polynenasýtená mastná kyselina sú použité vo forme fosfolipidov.
9. Použitie podľa nároku 4, kde uvedený parenterálny roztok obsahuje v jednom litri aspoň 20 mg kyseliny arachidónovej a aspoň
10 mg kyseliny dokosahexaénovej a výhodne obsahuje v jednom litri asi 20 až 200 mg kyseliny arachidónovej a asi 10 až 50 mg kyseliny dokosahexaénovej.

* 10. Použitie podľa nároku 1, kde uvedený prípravok ďalej zahrnuje , bielkoviny, uhľohydráty a fosfolipidy v množstve dodávajúcom dennú dávku aspoň 2,0 mg n-6 polynenasýtených mastných kyselín na kilogram a deň a aspoň 0,5 mg uvedených prípadných n-3 polynenasýtených mastných kyselín na kilogram a deň.
11. Použitie podľa nároku 10, kde prípravok poskytuje aspoň 2,0 mg kyseliny arachidónovej a aspoň 0,5 mg kyseliny dokosahexaénovej na kilogram a deň.
12. Použitie podľa nároku 11, kde uvedená enterálna kompozícia zahrnuje vaječný fosfolipid.
13. Použitie podľa nároku 1, zahrnujúce použitie fosfolipidov v uvedenom prípravku v dennom účinnom množstve na dodanie medzi 60 a 2 400 i pmol fosfolipidov na kilogram a deň, výhodne medzi asi 200 a asi 1 500 μ mol fosfolipidov na kilogram a deň.

14. Použitie podľa nároku vaječného lecitínu. 13, kde uvedené fosfolipidy sú odvodené z 15. Použitie podľa nároku 14, kde uvedené fosfolipidy sa používajú v kombinácii s jednou alebo viacerými polynenasýtenými mastnými

kyselinami vybranými zo skupiny zahrnujúcej kyselinu arachidónovú a kyselinu dokosahexaénovú, výhodne tak, že poskytujú asi 200 až 1 500 μ mol fosfolipidu, asi 5,0 mg až 40 mg kyseliny arachidónovej a asi 1,5 mg až asi 20 mg kyseliny dokosahexaénovej na kilogram a deň.
16. Použitie podľa nároku 1, kde sa v uvedenom prípravku použije cholín v účinnom množstve poskytujúcom medzi asi 60 a asi 1 800 μπιοΙ cholínu na kilogram a deň.
17. Použitie podľa nároku 16, kde uvedený cholín je vo forme fosfatidylcholínu, výhodne odvodeného z vaječného lecitínu.
18. Použitie podľa nároku 1, kde uvedený cholín sa používa v kombinácii s jednou alebo viacerými polynenasýtenými mastnými kyselinami vybranými zo skupiny zahrnujúcej kyselinu arachidónovú a kyselinu dokosahexaénovú, výhodne tak, že poskytuje asi 150 až asi 1 200 μπιοί cholínu, asi 5,0 mg až 40 mg kyseliny arachidónovej a asi 1,5 mg až asi 20 mg kyseliny dokosahexaénovej na kilogram a deň.
19. Spôsob výroby enterálneho prípravku obsahujúceho fosfolipidy vaječného žĺtku, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

a) získanie suchého prášku vaječného fosfatidu v podstate bez cholesterolu.

b) dispergáciu uvedenej fosfolipidovej frakcie vo vodnej fáze za vzniku fosfolipidovej disperzie a

c) kombinovanie uvedenej fosfolipidovej disperzie so suspenziami ďalších komponentov uvedeného enterálneho prípravku.
20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že uvedená disperzia vo vodnej fáze poskytuje asi 2 až asi 15 hmotnostných percent vaječného fosfatidu.
21. Spôsob podľa nároku 20, vyznačujúci sa tým, že uvedená dispergácia vo vodnej fáze zahrnuje pridanie prášku vaječného fosfatidu do vody pri teplote asi 20 až 50 °C.
22. Zdokonalený enterálny prípravok obsahujúci kyselinu arachidónovú a kyselinu dokosahexaénovú, vyznačujúci sa tým, že kyselina arachidónová a dokosahexaénová sú vo forme fosfolipidov, pričom prípravok je získaný spôsobom, ktorý zahrnuje:

a) prípravu 2 až 15% hm. vodnej disperzie uvedeného fosfolipidu,

b) deaeráciu uvedenej disperzie,

c) kombinovanie uvedenej deaerovanej disperzie s aspoň jedným členom vybraným zo skupiny zahrnujúcej bielkoviny, uhľohydráty, vitamíny a minerály za vzniku uvedeného enterálneho prípravku a

d) homogenizáciu uvedeného enterálneho prípravku.
23. Prípravok vhodný na kŕmenie kojencov zahrnujúci bielkoviny, uhľohydráty, vyznačujúci sa tým, že lipidová zmes obsahuje triglyceridy so stredne dlhým reťazcom a vaječný fosfolipid, pričom uvedený vaječný fosfolipid je prítomný v množstve v rozmedzí približne 1 až 40 hmotnostných percent lipidovej zmesi a uvedený vaječný fosfolipid je v podstate bez cholesterolu.
24. Prípravok podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že vaječný fosfolipid je prítomný v množstve 5 až 30 hmotnostných percent lipidovej zmesi.
25. Prípravok podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje arachidónovú kyselinu v koncentrácii asi 10 až asi 31 mg na 100 kcal.
26. Prípravok podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje kyselinu dokosahexaénovú v koncentrácii asi 3 až asi 16 mg na 100 kcal.
27. Prípravok podľa nároku 26, vyznačujúci sa tým, že uvedená kyselina arachidónová a kyselina dokosahexaénová sú prítomné v pomere asi 4:1 až asi 2:1.