SK111199A3

SK111199A3 - Aqueous pharmaceutical composition comprising an active ingredient which is highly insoluble in water

Info

Publication number: SK111199A3
Application number: SK1111-99A
Authority: SK
Inventors: Giovanni Cavallo; Leonardo Marchitto
Original assignee: Acraf
Priority date: 1997-02-20
Filing date: 1998-02-12
Publication date: 2000-06-12
Also published as: JP4299369B2; EA002281B1; HUP0000910A3; CZ292699A3; ZA981354B; DK0973505T3; KR100515249B1; ATE257374T1; HU225594B1; US6337087B1; KR20000075480A; DE69821001D1; GEP20022751B; ITMI970363A1; CA2285985A1; IL131354A; EP0973505B1; DE69821001T2; IT1289939B1; AU6398798A

Description

VODNÝ FARMACEUTICKÝ PRÍPRAVOK OBSAHUJÚCI AKTÍVNU LÁTKU, KTORÁ JE VYSOKO NEROZPUSTNÁ VO VODE

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka vodného farmaceutického prípravku zahrňujúceho aktívnu látku, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode. Obzvlášť sa vzťahuje na farmaceutický prípravok, v ktorom je aktívna látka dispergovaná v lipozómoch.

Doterajší stav techniky

Značná časť výskumného úsilia je venovaná nájdeniu nových lipozomálnych prípravkov vo farmaceutickej oblasti. Objavuje sa však veľa problémov, najmä v súvislosti s aktívnymi látkami, ktoré sú vysoko nerozpustné vo vode. Predovšetkým tými, ktorých rozpustnosť vo vode je rovná alebo menšia ako 0,01 % (hmotnosť/ objem).

V súčasnosti používaný postup prípravy lipozómov obsahujúcich účinné látky s malou rozpustnosťou vo vode v skutočnosti zahrňuje:

a) rozpúšťanie účinnej látky a vopred zvolených fosfolipidov vo vhodnom organickom rozpúšťadle, napríklad chloroforme,

b) odparenie tohto rozpúšťadla za zníženého tlaku, aby sa získal film aktívna látka/fosfolipid,

c) pridanie druhého organického rozpúšťadla, napríklad terc.-butylalkoholu,

d) zmrazenie získaného roztoku pri teplote kvapalného dusíka,

e) lyofilizáciu zmrazeného roztoku,

f) hydratáciu lyofilizovaného roztoku roztokom pufra, aby sa získala suspenzia multilamelárnych lipozómov (MLV), a

g) vystavenie tohto roztoku pôsobeniu ultrazvuku, aby sa získala suspenzia menších lipozómov (SUV).

273/B

NÁHRADNÁ STRANA

Príklad tohto spôsobu prípravy popísal A. Sharma a kol., Pharmaceutical Research, 2, 6, 889 - 896 (1994).

Tento postup však má tú nevýhodu, že je veľmi prácny a má za následok prítomnosť stopových množstiev organických rozpúšťadiel v lipozómoch.

Uvedení autori však uvádzajú, že skúmali rôzne postupy prípravy MLV lipozómov ako je hydratácia suchých lipidových filmov (potrepávaním v ruke), rozmrazovanie zo zmrznutého stavu a rôznymi postupmi ako je extrúzia a vystavenie pôsobeniu ultrazvuku, aby sa znížila následná (po spracovaní) veľkosť lipozómov (MLV -> SUV) a dospievajú k záveru, že vyššie detailne popísaný spôsob a zahrňujúci uvedené fázy a) až g) sa preukázal ako najprijateľnejší (loc. cit., str. 890, pravý stĺpec, riadky 51 až 57). Uvedení autori však neukazujú, ako sa uvedený prvý postup prípravy MLV lipozómov a uvedený druhý postup prípravy, ktorým možno znížiť veľkosť lipozómov, navzájom spojili.

WO-A-96/40064, EP-A-0 578 629, DE-A-4 038 075 a DE-A-4 430 593 uvádzajú farmaceutické prípravky, kde aktívna látka nerozpustná vo vode je dispergovaná v lipozómoch. Takouto aktívnou látkou je cyklosporín A, melatonín a taxol.

Žiaden z vyššie uvedených dokumentov však neopisuje spôsob prípravy vodného lipozómového prípravku, ktorý kombinuje techniku mrazenia a topenia s extrúziou.

Podstata vynálezu

V súčasnosti sa s prekvapením zistilo, že technika mrazenia a topenia kombinovaná s extrúziou umožňuje prípravu vodného lipozómového prípravku s aktívnou látkou s rozpustnosťou vo vode rovnou alebo menšou ako 0,01 % (hmotnosť/objem) bez použitia akéhokoľvek organického rozpúšťadla.

V tomto popise a v patentových nárokoch uvedených nižšie, sú účinné látky s rozpustnosťou vo vode rovnou alebo menšou ako 0,01 % (hmotnosť/objem) definované ako „vysoko nerozpustné vo vode,,.

JMAHRÄDNŕsÍTONA

Prvým predmetom tohto vynálezu je poskytnúť farmaceutický prípravok podľa nároku 1.

Nasledujú typické príklady účinných látok, ktoré sú vysoko nerozpustné vo vode: lonidamín (rozpustnosť: 3x10·® g/ml), melatonín („prakticky nerozpustný,,, G.

S. Shida a kol., J. Pineal Res., 16,198 - 201 (1994)), cyklosporín A („nerozpustný vo vode,,, monografia o cyklosporíne A v„Analytical Profiles of Drug Substances,,, 16, 163 (1987)) a bindarit (rozpustnosť: 1 x 10⁴ g/ml).

Lipozómy z kompozícií podľa tohto vynálezu sa výhodne dosiahnu zo zložiek, ktoré sú zvolené zo skupiny zahrňujúcej fosfoglyceridy, glyceridy, diglyceridy, triglyceridy, fosfolipidy, galaktozyllipidy a glukozyllipidy, cholesterol a jeho deriváty, sfingolipidy a ich zmesi. Najvýhodnejšie sú vytvorené z fosfolipidov.

Typické príklady lipozomálneho prípravku podľa tohto vynálezu zahrňujú fosfatidylcholín, lyzofosfatidylcholín, N-acylfosfatidylcholín, fosfatidyletanolamín, fosfatidylserín, sfingomyelín, nepoláme lipidy, triglyceridy, voľné mastné kyseliny a DL-alfa-tokoferol.

Výhodný lipozomálny prípravok podľa tohto vynálezu obsahuje:

Zložka	% hmotnostné
fosfatidylcholín	85-97
lyzofosfatidylcholín	0-5
N-acyl-etanolamín	0-4
fosfatidyletanolamín	0-10
triglyceridy	0-4
voľné mastné kyseliny	0-3
DL-alfa-tokoferol	0-1

Obzvlášť výhodný lipozomálny prípravok podľa tohto vynálezu obsahuje:

273/B

NÄfWOÍÄSTRANÄ

Zložka	% hmotnostné
fosfatidylcholín	94
lyzofosfatidylcholín	3
N-acyl-etanolamín	1
fosfatidyletanolamín	0,1
triglyceridy	1
voľné mastné kyseliny	0,75
DL-alfa-tokoferol	0,15

Veľkosť lipozómov podľa tohto vynálezu je zvyčajne menšia ako 500 nm. Výhodne je v rozmedzí od 50 do 250 nm.

Druhý predmet tohto vynálezu posskytuje spôsob prípravy vodného farmaceutického prípravku podľa nároku 6.

Trvanie fázy c) závisí od množstva účinnej látky, ktorá je vysoko nerozpustná vo vode, ktorá má byť v lipozómoch zachytená. Odborník v odbore sa teda nestretne so žiadnymi problémami, pretože niekoľko málo jednoduchých rutinných experimentov stačí na určenie správneho času pre každý typ účinnej látky a lipozomálnej zmesi.

Vodná fáza bude najlepšie vytvorená zvodného roztoku chloridu sodného v koncentráciách v rozmedzí 0,05 až 0,9 % (hmotnosť/objem).

Typicky bude množstvo použitého lipidu v rozmedzí 0,01 až 0,4 dielov hmotnostných na každý hmotnostný diel vodného roztoku. Na druhej strane, množstvo účinnej látky je typicky v rozmedzí 0,01 až 0,3 dielov hmotnostných na každý diel hmotnostný lipidu.

273/B

Dispergátorom je zvyčajne homogenizátor typu Ultraturrax™.

Extrúzia sa typicky vykonáva za použitia stlačeného vzduchu alebo inertného plynu zvoleného zo skupiny zahrňujúcej dusík, hélium a argón, ako extrúzneho plynu. Výhodným inertným plynom je hélium. Tlak vextrúznej fáze je výhodne v rozmedzí od 500 do 5 500 kPa a teplota je v rozmedzí od 20 do 75 °C a výhodnejšie od 40 do 60 °C. Typickými príkladmi vhodných extrúznych prístrojov sú prístroje typu Lipex Biomembranes Thermobarrel alebo Emulsiflex CC Avestin s filtrami s polykarbonátovou membránou Costar™ s pórmi medzi 50 až 600 nm.

Fáza h) sa typicky vykonáva najmenej dvakrát a nie viac ako osemkrát. Výhodne sa vykonáva šesťkrát.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady ilustrujú vynález bez toho, aby ho akokoľvek obmedzovali.

Príklad 1

100 mg melatonínu bolo dispergovaných v 1 g fosfolipidu pri teplote 30 °C po dobu 10 minút za použitia homogenizátora typu Ultraturrax™. Ihneď potom bola táto disperzia suspendovaná v 10 ml vodného roztoku chloridu sodného s koncentráciou 0,9 % (hmotnosť/objem) za použitia uvedeného homogenizátora a potom zahrievaná na vodnom kúpeli pri teplote 55 °C po dobu 20 minút.

Týmto spôsobom získaná suspenzia bola podrobená nasledujúcemu cyklu ochladzovania a zahrievania:

- ochladzovanie v kvapalnom dusíku po dobu 1 minútu,

- zahrievanie na 55 °C, kým fosfolipidy neboli celkom tekuté.

Tento cyklus sa opakoval šesťkrát.

Táto suspenzia bola dvakrát pretlačená filtrom s priemerom pórov 0,6 pm za použitia prístroja Lipex Biomembranes.

273/B

NÁHRABNÄ^TRÄNA

Tým sa teda získala suspenzia „multilamelárnych veľkých vezikúl,, (Multilamellar Large Vesicles - MLV), ktorá bola vystavená 6 cyklom kontinuálnych extrúzií za použitia 10 ml extrudéra typu Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel s polykarbonátovým filtrom Costar™ s priemerom pórov 0,1 gm pri teplote 55 °C za použitia hélia ako extrúzneho plynu pri tlaku v rozmedzí hodnôt 1 000 až 4 800 kPa.

Podľa postupu uvedeného vyššie boli pripravené tri šarže produktu (LM/186, LM/188 a LM/190).

So šaržami sa vykonajú nasledujúce testy:

* množstvo melatonínu vo vodnom lipozomálnom prípravku (HPLC analýza), * veľkosť lipozómu, * množstvo melatonínu zachyteného v lipozómoch.

Nasledujúca tabuľka ukazuje zistené parametre a ich význam:

Parametre	Význam
veľkosť lipozómu	- stabilita v dobe formovania - meranie „fúzie,, vezikúl
množstvo melatonínu	- koncentrácia melatonínu vo vodnom lipozomálnom prípravku - stabilita v dobe formovania

Získané údaje sú uvedené v tabuľke 1, ktorá ukazuje: koncentrácia melatonínu získaného vo vodnom lipozomálnom prípravku bola, vyjadrená ako priemerná hodnota pre dané tri šarže, 8,05 x 10'³ g/ml, priemerná veľkosť lipozómov z troch šarží bola 93 nm, množstvo zachytenej látky, vyjadrené ako priemerná hodnota pre tri šarže, bolo 80,5 gg/mg, prípravok nevykazoval žiadne prejavy agregácie lipozómov.

273/B

NÄHRABNÁrSTRANA

Tabuľka 1

	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo (μθ/mg)*
LM/186	7,8	85	78
LM/188	8,46	97	84,6
LM/190	7,9	98	79

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

Pre HPLC analýzu sa použil nasledujúci postup:

pevná fáza: stĺpec v inverznej fáze PKB-100 (250 x 4,6 mm , 5 pm Supelco), mobilná fáza: voda : acetonitril 80 : 20 (objemovo), detekcia: UV 254 nm.

Na analýzu priemernej veľkosti lipozómov sa použijú dva prístroje:

1. DELSA440 Coulter

2. NICOMP merač veľkostí submikronických častíc model 370.

Postup bol nasledujúci:

a) pre testy vykonávané prístrojom 1), 1 ml lipozomálnej suspenzie bol nariedený 10 ml vodného roztoku chloridu sodného s koncentráciou 0,9 % (hmotnosť/objem),

b) pre testy vykonávané prístrojom 2), 0,5 ml roztoku a) bolo nariedených 10 ml vodného roztoku chloridu sodného s koncentráciou 0,9 % (hmotnosť/objem).

Príklad 2

Postupuje sa tak, ako je popísané vyššie v príklade 1, namiesto 1 g fosfolipidu a 100 mg melatonínu sa však použijú 2 g fosfolipidu a 50 mg melatonínu.

273/B

NÁHRADNTérSTRÄNÄTak boli pripravené tri šarže produktu (LM/195, GN/1L a GN/2L). Získané údaje sú uvedené v tabuľke 2, ktorá udáva:

koncentrácia lonidamínu vo vodnom prípravku narástla z počiatočnej rozpustnosti s hodnotou 3 x 10’⁶ g/ml na priemernú hodnotu z troch šarží 3,83 x 10'³ g/ml, priemerná veľkosť lipozómov z troch šarží bola 79,6 nm, množstvo zachytenej účinnej látky, vyjadrené ako priemerná hodnota z troch šarží, bola 19,2 pg/mg, prípravky nevykazovali žiadne prejavy agregácie lipozómov.

Tabuľka 2

Šarže	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo (pg/mg)‘
LM/195	3,66	103	18,3
GN/1L	3,31	53	16,5
GN/2L	4,54	76	22,7

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

Príklad 3

Postupuje sa tak, ako je popísané vyššie v príklade 1, namiesto 1 g fosfolipidu a 100 mg melatonínu sa však použili 2 g fosfolipidu a 200 mg melatonínu.

Tak boli pripravené tri šarže produktu (GN/1M, GN/2M a GN/3M). Získané údaje sú uvedené v tabuľke 3, ktorá udáva:

koncentrácia melatonínu vo vodnom lipozomálnom prípravku, vyjadrená ako priemerná hodnota z troch šarží, bola 13,5 x 10'³ g/ml, priemerná veľkosť lipozómov z troch šarží bola 92,6 nm,

273/B

NÁyRADMÄ-STRÄŇA množstvo zachytenej účinnej látky, vyjadrené ako priemerná hodnota z troch šarží, bolo 67,6 pg/mg, prípravky nevykazovali žiadne prejavy agregácie lipozómov.

Tabuľka 3

Šarže	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo (pg/mg)*
GN/1M	10,66	104	53,3
GN/2M	13,90	76	69,5
GN/3M	16,03	98	80,15

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

Príklad 4

Postupuje sa ako bolo popísané vyššie v príklade 2, s tým rozdielom, že extrúzia sa vykonáva cez polykarbonátovú membránu s priemerom pórov 0,2 pm namiesto 0,1 pm.

Tak boli pripravené tri šarže produktu (GN/3L, GN/4L a GN/5L).

Získané údaje sú uvedené v tabuľke 4, ktorá udáva, že zvýšením dávky lonidamínu z 20 mg na 50 mg, množstva fosfolipidu z 1 na 2 g a extrúziou pomocou membrány s priemerom pórov 0,2 pm namiesto 0,1 pm sa v príklade 2 dosiahlo významné zvýšenie koncentrácie lonidamínu vo vodnom prípravku zmesi. V skutočnosti bola pre koncentráciu lonidamínu získaná priemerná hodnota 4,47 x 10'³g/ml.

273/B •NÁHRÄDNÁSIRANA

Tabuľka 4

Šarže	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo (pg/mg)*
GN/3L	4,23	134	21,15
GN/4L	4,44	129	22,20
GN/5L	4,75	109	23,75

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

Príklad 5 mg cyklosporínu A bolo dispergovaných v 1 g fosfolipidu pri teplote 30 °C po dobu 10 minút za použitia homogenizátora typu Ultraturrax™. Hneď potom bola táto disperzia suspendovaná vo vodnom roztoku chloridu sodného s koncentráciou 0,9 % (hmotnosť/objem) za použitia uvedeného homogenizátora a potom 20 minút zahrievaná na vodnom kúpeli pri teplote 65 ’C.

Týmto spôsobom získaná suspenzia bola vystavená nasledujúcemu cyklu ochladzovania a zahrievania:

chladenie v kvapalnom dusíku po dobu 1 minútu, zahrievanie na 65 °C, kým fosfolipidy celkom sa nestanú tekutými.

Tento cyklus sa opakoval šesťkrát.

Suspenzia bola dvakrát pretlačená filtrom s veľkosťou pórov 0,6 pm pomocou prístroja Lipex Biomembranes.

Tak sa získala suspenzia „multilamelárnych veľkých vezikúl„ (Multilamellar Large Vesicles - MLV), ktorá bola vystavená 6 cyklom kontinuálnej extrúzie za použitia 10 ml extrudéra typu Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel s polykarbonátovým filtrom Costar™ s priemerom pórov 0,1 pm pri 65 ’C za použitia hélia ako extrúzneho plynu a pri tlaku v rozmedzí hodnôt 1 000 až 4 800 kPa.

273/B

NÄHRABNÁ-STRANÄ

Tak boli pripravené tri šarže produktu (LM/416A, LM/416B a LM/416C).

Získané údaje sú uvedené v tabuľke 5, ktorá udáva:

koncentrácia cyklosporínu A vo vodnom lipozomálnom prípravku, vyjadrená ako priemerná hodnota z troch šarží, bola 0,96 x 10'³ g/ml, priemerná veľkosť lipozómov z troch šarží bola 103 nm, množstvo zachytenej účinnej látky, vyjadrené ako priemerná hodnota z troch šarží, bola 9,6 pg/mg, prípravky nevykazovali žiadne prejavy agregácie lipozómov.

Tabuľka 5

Šarže	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo Wmg)*
LM/416A	0,96	103	9,6
LM/416B	0,94	99	9,4
LM/416C	0,98	107	9,8

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

Príklad 6

Postupuje sa tak, ako je popísané vyššie v príklade 1, namiesto 1 g fosfolipidov a 100 mg melatonínu sa však použili 2 g fosfolipidov a 50 mg bindaritu

Tiež sa pripravili tri šarže produktu (LM/356, LM/357 a LM/358):

Získané údaje sú uvedené v tabuľke 6, ktorá udáva:

koncentrácia bindaritu vo vodnom lipozomálnom prípravku narástla z počiatočnej rozpustnosti s hodnotou 1 x 10⁴ g/ml na priemernú hodnotu z troch šarží 4 mg/ml,

273/B

J4ÁHRADNÁ-SŤRANA—' priemerná veľkosť lipozómov z troch šarží bola 108,3 nm, množstvo zachytenej účinnej látky vyjadrené ako priemerná hodnota z troch šarží bolo 20,2 pg/mg, prípravky nevykazovali žiadne prejavy agregácie lipozómov.

Tabuľka 6

Šarže	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo (pg/mg)*
LM/356	4,1	109,4	20,5
LM/357	4,0	109,7	20,0
LM/358	4,0	106,0	20,0

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

Príklad 7 mg cyklosporínu A bolo dispergovaných v 2 g fosfolipidu pri teplote 30 °C po dobu 10 minút za použitia homogenizátora typu Ultraturrax™. Hneď potom bola táto disperzia suspendovaná vo vodnom roztoku chloridu sodného s koncentráciou 0,9 % (hmotnosť/objem) za použitia uvedeného homogenizátora a nechala sa stáť 24 hodín pri teplote miestnosti. Potom sa získala suspenzia 20 minút zahrievaná na vodnom kúpeli pri teplote 65 °C.

chladenie v kvapalnom dusíku po dobu 1 minútu, zahrievanie na 65 °C, kým fosfolipidy sa celkom nestanú tekutými.

Tento cyklus sa opakoval šesťkrát.

Suspenzia bola dvakrát pretlačená flitrom s veľkosťou pórov 0,6 pm pomocou prístroja Lipex Biomembranes.

273/B

-NÁHRÄDNÄ~STRANA—

Tak sa získala suspenzia „multilamelárnych veľkých vezikúl,, (Multilamellar Large Vesicles MLV), ktorá bola vystavená 6 cyklom kontinuálnej extrúzie za použitia 10 ml extrudéra typu Lipex Biomembranes Extruder Thermobarrel s polykarbonátovým filtrom Costar™ s priemerom pórov 0,1 pm pri 65 °C za použitia hélia ako extrúzneho plynu a pri tlaku v rozmedzí hodnôt 1 000 až 4 800 kPa.

Tiež boli pripravené tri šarže produktu (LM/422a, LM/422b a LM/422c).

Získané údaje sú uvedené v tabuľke 7, ktorá udáva:

koncentrácia cyklosporínu A vo vodnom lipozomálnom prípravku, vyjadrená ako priemerná hodnota z troch šarží, bola 3 mg/ml, priemerná veľkosť lipozómov z troch šarží bola 119,5 nm, množstvo zachytenej účinnej látky, vyjadrené ako priemerná hodnota z troch šarží, bolo 15 pg/mg, prípravky nevykazovali žiadne prejavy agregácie lipozómov.

Tabuľka 7

Šarže	HPLC množstvo (mg/ml)	Priemerná veľkosť (nm)	Zachytené množstvo (gg/mg)*
LM/422a	3,2	121,5	16
LM/422b	3,0	117,9	15
LM/422C	2,8	119,0	14

(*) vyjadrené ako pg lieku na mg použitých fosfolipidov

273/B

71/ ///Λ näi-iradnA strana

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Vodný farmaceutický prípravok, v ktorom účinná látka majúca rozpustnosť vo vode nie vyššiu ako 0,01 % (hmotnosť/objem) je dispergovaná v lipozómoch, vyznačujúci sa tým, že touto aktívnou látkou je lonidamín alebo bindarit.

2. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že lipozómy pozostávajú zo zložiek zvolených zo skupiny látok zahrňujúcej fosfoglyceridy, glyceridy, diglyceridy, triglyceridy, fosfolipidy, galaktozyllipidy a glukozyllipidy, cholesterol a jeho deriváty, sfingolipidy a ich zmesi.

3. Prípravok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že lipozómy pozostávajú zo zložiek zvolených zo skupiny látok zahrňujúcej fosfatidylcholín, lyzofosfatidylcholín, N-acylfosfatidylcholín, fosfatidyletanolamín, fosfatidylserín, sfingomyelín, nepoláme lipidy, triglyceridy, voľné mastné kyseliny a DL-alfa-tokoferol.

4. Prípravok podľa niektorého z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že množstvo lipidov je v rozmedzí hodnôt 0,01 až 0,4 dielu hmotnostného na každý diel hmotnostný vody.

5. Prípravok podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že množstvo aktívnej látky je v rozmedzí hodnôt 0,01 až 0,3 dielu hmotnostného na každý diel hmotnostný lipidov.

6. Spôsob prípravy vodného farmaceutického prípravku s aktívnou látkou majúcou rozpustnosť vo vode nie vyššiu ako 0,01 % (hmotnosť/objem) dispergovanou v lipozómoch, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje nasledujúce fázy:

a) aktívna látka sa disperguje v lipidoch pri teplote v rozmedzí 20 až 30 °C,

b) táto disperzia sa suspenduje vo vodnej fáze,

31 273/B

-náhräUňä s i rana—

c) táto suspenzia sa nechá stáť pri teplote miestnosti po dobu v rozmedzí 0 až

48 hodín,

d) zahrieva sa na 30 až 75 °C po dobu 10 až 40 minút,

e) zmrazí sa na -150/-200 °C,

f) fázy d) a e) sa opakujú prinajmenšom dvakrát a nie viac ako osemkrát,

g) filtruje sa filtračnou membránou s pórmi s priemerom 500 až 1 000 nm,

h) extruduje sa membránou s pórmi s priemerom 50 až 400 nm, a súčasne

i) sa odstraňuje akákoľvek aktívna látka, ktorá nie je zachytená.

7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že vodnú fázu tvorí vodný roztok chloridu sodného s koncentráciami v rozmedzí hodnôt 0,05 až 0,9 % (hmotnosť/objem).

8. Spôsob podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že množstvo použitých lipidov je v rozmedzí hodnôt 0,01 až 0,4 dielu hmotnostného na každý hmotnostný diel vody.

9. Spôsob podľa niektorého z nárokov 6 až 8, vyznačujúci sa tým, že množstvo použitej aktívnej látky je v rozmedzí hodnôt 0,01 až 0,3 dielu hmotnostného na každý diel hmotnostný lipidov.

10. Spôsob podľa niektorého z vyššie uvedených nárokov 6 až 9, vyznačujúci sa tým, že vo fáze h) sa ako extrúzny plyn použije plyn zvolený zo skupiny zahrňujúcej vzduch, dusík, hélium a argón.

11. Spôsob podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že extrúzny plyn má tlak v rozmedzí hodnôt 500 až 5 500 kPa.

12. Spôsob prípravy podľa niektorého z vyššie uvedených nárokov 6 až 11, vyznačujúci sa tým, že fáza h) prebieha pri teplote v rozmedzí hodnôt 20 až 75 °C.

31 273/B

NÁII RADNÁ 3TRANA

13. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že teplota je v rozmedzí hodnôt 40 až 65 ^eC.

14. Spôsob podľa niektorého z vyššie uvedených nárokov 6 až 12, vyznačujúci sa tým, že fáza h) sa opakuje aspoň dvakrát a nie viac ako osemkrát.