SI22865A - Peptid uroaktivin kot aktivator encima urokinaze - Google Patents
Peptid uroaktivin kot aktivator encima urokinaze Download PDFInfo
- Publication number
- SI22865A SI22865A SI200800224A SI200800224A SI22865A SI 22865 A SI22865 A SI 22865A SI 200800224 A SI200800224 A SI 200800224A SI 200800224 A SI200800224 A SI 200800224A SI 22865 A SI22865 A SI 22865A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- peptide
- amino acid
- acid sequence
- acute
- seq
- Prior art date
Links
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 title claims abstract description 42
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 title claims abstract description 42
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 239000012190 activator Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 206010014513 Embolism arterial Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000002528 coronary thrombosis Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 11
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 claims description 33
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 claims description 30
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 claims description 3
- 241001631457 Cannula Species 0.000 claims description 2
- 206010011091 Coronary artery thrombosis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 claims 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims 2
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 claims 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 claims 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 claims 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 abstract description 23
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 abstract description 13
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 abstract description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 abstract 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 abstract 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 23
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 23
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 20
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 20
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 20
- 230000033885 plasminogen activation Effects 0.000 description 18
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 7
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 102100023972 Keratin, type II cytoskeletal 8 Human genes 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 6
- 108010070511 Keratin-8 Proteins 0.000 description 5
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000760337 Homo sapiens Urokinase plasminogen activator surface receptor Proteins 0.000 description 3
- 102100033421 Keratin, type I cytoskeletal 18 Human genes 0.000 description 3
- 108010066327 Keratin-18 Proteins 0.000 description 3
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 102100024689 Urokinase plasminogen activator surface receptor Human genes 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 2
- QRVPEKJBBRYISE-XUXIUFHCSA-N Val-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C(C)C)N QRVPEKJBBRYISE-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 102000009816 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040001269 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 59096-14-9 Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1[14C](O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-FOQJRBATSA-N 0.000 description 1
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- 102100035991 Alpha-2-antiplasmin Human genes 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 102100038910 Alpha-enolase Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005552 B01AC04 - Clopidogrel Substances 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000043139 CK2 family Human genes 0.000 description 1
- 108090000201 Carboxypeptidase B2 Proteins 0.000 description 1
- 102100035023 Carboxypeptidase B2 Human genes 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710101803 DNA-binding protein J Proteins 0.000 description 1
- 206010014522 Embolism venous Diseases 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 description 1
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 description 1
- 108010058861 Fibrin Fibrinogen Degradation Products Proteins 0.000 description 1
- 101710196208 Fibrinolytic enzyme Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 1
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 1
- 101000975474 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000801481 Homo sapiens Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100023970 Keratin, type I cytoskeletal 10 Human genes 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150038998 PLAUR gene Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004179 Plasminogen Activator Inhibitor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000614 Plasminogen Activator Inhibitor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100039418 Plasminogen activator inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 1
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 1
- 101710145796 Staphylokinase Proteins 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 108010039185 Tenecteplase Proteins 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010023795 VLDL receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100039066 Very low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 108090000183 alpha-2-Antiplasmin Proteins 0.000 description 1
- 229960003318 alteplase Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 229960004676 antithrombotic agent Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001484 arginines Chemical class 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N clopidogrel Chemical compound C1([C@H](N2CC=3C=CSC=3CC2)C(=O)OC)=CC=CC=C1Cl GKTWGGQPFAXNFI-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 229960003009 clopidogrel Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229960002768 dipyridamole Drugs 0.000 description 1
- IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N dipyridamole Chemical compound C=12N=C(N(CCO)CCO)N=C(N3CCCCC3)C2=NC(N(CCO)CCO)=NC=1N1CCCCC1 IZEKFCXSFNUWAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007922 dissolution test Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000208 fibrin degradation product Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009093 first-line therapy Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 239000002628 heparin derivative Substances 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 1
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 1
- 229940106780 human fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 101150084157 lrp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 229940099990 ogen Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 108010051412 reteplase Proteins 0.000 description 1
- 229960002917 reteplase Drugs 0.000 description 1
- 108010073863 saruplase Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000216 tenecteplase Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000004043 venous thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 229940019333 vitamin k antagonists Drugs 0.000 description 1
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 1
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
V teku intenzivnih študij ki so vodile do predloženega izuma so tukajšnji izumitelji ugotovili da peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO veže in poveča encimsko aktivnosturokinaze in tkivnega plazminogenskega aktivatorja Torej predloženi izum po prvem vidiku zagotavlja aminokislinsko zaporedje peptida uroaktivin SEQ ID NO Predloženi izum zagotavlja tudi uporabo peptida uroaktivina za uspešnejše zdravljenje bolezni oz stanj pri katerih je indicirana uporaba trombolitikov takšna stanja so zlasti akutne koronarne tromboze akutni miokardni infarkt akutne ishemične možganske kapi akutne pljučnetromboembolije globinske venske tromboze akutnearterijske tromboembolije akutne arterijske tromboze kot tudi za zagotavljanje prehodnosti arteriovenskih kanul in intravenskih katetrov
Description
PEPTID UROAKTIVIN, KOT AKTIVATOR ENCIMA UROKINAZE
OPIS IZUMA
A. PODROČJE TEHNIKE, NA KATEREGA SE IZUM NANAŠA
Predloženi izum se nanaša na peptid uroaktivin, ki se veže na urokinazni plazminogenski aktivator (urokinazo) in poveča njegovo encimsko aktivnost. Še zlasti se predloženi izum nanaša na uporabo takšnega peptida za zdravljenje vseh bolezni, pri katerih se uporablja rekombinantni tkivni ali urokinazni plazminogenski aktivator, to je pri vseh indikacijah uporabe trombolitikov. Navedeni izum se nanaša v splošnem na trombolitike, še posebej tkivni in urokinazni aktivator plazminogena.
B. PRIKAZ PROBLEMA, KI GA REŠUJE IZUM
Nezaželen nastanek strdkov v žilah (tromboza) je eden glavnih kardiovaskularnih zapletov. Nastanek strdka (trombusa) lahko povzroči zmanjšanje ali popolno prekinitev (okluzijo) pretoka krvi skozi žilo. Prekinitev pretoka krvi lahko vodi v akutni miokardni infarkt, ishemično možgansko kap, vensko tromboembolijo ali pljučno embolijo. Za preprečevanje nastajanja strdkov se uporabljajo antitrombotiki med katere spadajo antikoagulanti (antagonisti vitamina K), zaviralci agregacije trombocitov (acetilsalicilna kislina, heparin in heparinski derivati, hirudin, klopidogrel, dipiridamol) in trombolitiki (oz. fibrinolitiki). Strdki v venah, kjer je pretok krvi počasnejši, so sestavljeni večinoma iz premreženega fibrina in manj iz trombocitov, zato je primarna terapija z antikoagulanti tipa varfarina in heparina. Strdki v arterijah, kjer je pretok krvi hitrejši vsebujejo več trombocitov in manj fibrina, zato se kot preventiva uporablja acetilsalicilna kislina, v primeru okluzije pa trombolitične učinkovine. Antikoagulanti in zaviralci agregacije trombocitov preprečujejo nastajanje novih in povečevanje že obstoječih strdkov, medtem ko se trombolitiki uporabljajo za čimhitrejšo razgradnjo (lizo) obstruktivnih strdkov, pri tem pa ne preprečijo eventualnega nastajanja novih strdkov.
Fiziološka fibrinoliza
Fibrinoliza je normalen proces v telesu, ki poteka sočasno s koaguacijo in omogoča hemostazo ter preprečuje nastajanje krvnih strdkov, ki bi povzročali omejitve krvnega pretoka. Pri procesu koagulacije iz fibrinogena pod vplivom trombina nastajajo monomeri fibrina, ki polimerizirajo in tvorijo protofibrile, zgrajene iz dveh antiparalelnih ne-kovalentno povezanih verig. Znotraj ene verige so monomeri fibrina povezani kovalentno. Glavni fibrinolitični encim je serinska proteaza plazmin, ki nastane iz plazminogena s pomočjo aktivatorjev. Plasminogen vsebuje motive sekundarne strukture, ki se specifično vežejo na lizin in arginin fibrin(ogen)a in se pri nastajanju strdka vgradi med verige fibrina. V procesu fibrinolize se plazminogen pretvori v aktivno obliko in cepi fibrin C-terminalno glede na vezane lizine in arginine. Pri svojem delovanju plasmin sprva ustvari vrzeli v fibrinu, nadaljna razgradnja pa povzroči solubilizacijo fibrina. (Walker in Nesheim, 1999).
Primarna aktivatorja plazminogena sta tkivni aktivator plazminogena (tPA) in urokinazni aktivator plazminogena (uPA, urokinaza). tPA se sprošča iz endotelijskih celic žil, urokinaza pa iz fibroblastov, endotelijskih celic in monocitov. Proces fibrinolize uravnava veliko število inhibitorjev (inhibitor plazminogenskega aktivatorja-lin -2, PAI-1, PAI-2; alfa2-antiplasmin; alfa2-makroglobulin; serpin; TAFI), kar zagotavlja, daje liza lokalno omejena..
Trombolitične učinkovine in njihove indikacije
Fibronilzo je mogoče sprožiti farmakološko s t.im. trombolitično (oz. fibrinolitično) terapijo. Najpogosteje uporabljeni trombolitiki za sistemsko uporabo so:
- alteplaza (rekombinantni tPA)
- aniztreplaza
- streptokinaza in
- urokinaza.
Poleg omenjenih se ponekod uporablja še druge trombolitične učinkovine:
- stafilokinaza (bakterijski rekombinantni protein)
- duteplaza (tPa sestavljen iz dveh proteinskih verig)
- reteplaza (tPA podoben protein s daljšim razpolovnim časom eliminacije) in
- tenekteplaza (tPA z dvema spremenjenima aminokislinama).
Trombolitične učinkovine se zaradi proteinske narave aplicirajo samo parenteralno. Najpomembnejše pri izboru trombolitične terapije je, da mora temeljiti na ovrednotenju individualnega trombotičnega zapleta, posameznikovega stanja in njegove anamneze. Pri uporabi trombolitikov je potrebno upoštevati ravnotežje med potencialno koristjo in tveganjem za krvavitve, ki so glavni neželeni učinek pri trombolizi.
Trombolitiki se uporabljajo za zdravljenje:
- akutne koronarne tromboze (akutni miokardni infarkt)
- akutne ishemične možganske kapi
- akutne pljučne tromboembolije
- globinske venske tromboze
- akutne arterijske tromboembolije
- akutne arterijske tromboze.
Trombolitiki se uporabljajo za zagotavljanje prehodnosti:
- arteriovenskih kanul
- intravenskih katetrov.
Urokinaza in njeno delovanje
Urokinaza je 411 aminokislin velik protein, sestavljen iz treh domen: C-terminalne katalitične domene, ki vsebuje aktivno mesto serinske proteaze, N-terminalna kringlova domena in domena, homologna epidermalnemu rastnemu dejavniku, s katero se veže na receptor UPAR/CD87.
Urokinaza se sintetizira v obliki zimogena (prourokinaza, pro-uPA in enoverižna urokinaza, sc-uPA) in se aktivira s proteolitično cepitvijo med Lys[158]-Ile[l59]. Nastali verigi ostaneta povezani preko disulfidne vezi.
Urokinaza neposredno cepi peptidno vez Arg[560]-Val[561] v plazminogenu, pri tem nastane plazmin in se aktivira fibrinolitični sistem. Plazmin razgrajuje fibrin, fibrinogen in druge plazemske proteine v strdkih, med drugim tudi koagulacijska faktorja V in VIII.
Eno- in dvo-verižne oblike urokinaze se vežejo na receptorje na plazemski membrani: uPAR/CD87 in receptorje LDL receptorske družine: LDLR-relativni protein, receptor alfa2makroglobulina (LRP/a2-MR) in receptor VLDL. Afiniteta vezave urokinaze na receptorje LDL receptorske družine (Kd~ (1-2)-10-8 M) je velikostni razred nižja od vezave na uPAR/CD87. Poleg tega pa se urokinaza lahko veže tudi na nekatere druge receptorje preko proteazne ter kringlove domene.
Multidomenska struktura omogoča polifunkcionalno delovanje urokinaze, saj vsebuje številna mesta za vezavo tako substratov kot tudi različnih celičnih receptorjev.
Tkivni plazminogenski aktivator in njegovo delovanje
Tkivni plazminogenski aktivator (tPA) je serinska proteaza in jo uvrščamo, enako kot urokinazo, v družino Sl A serinskih proteaz. Normalno se nahaja na površini endotelijskih celic ven, kapilar, pljučnih arterij, srca in maternice in se izloča po poškodbi žile.
tPA se sintetizira kot enoverižni polipeptid in se po delovanju plazmina ali tripsina (cepitev vezi Arg-Ile) razcepi v dvoverižni polipeptid, povezan z disulfidno vezjo. Težka veriga tPA se nahaja na N-terminalnem delu (Mr 39.000), lahka veriga pa je na C-terminalnem koncu (Mr 33.000). tPA je sestavljen iz petih različnih strukturnih domen: domena homologna fibronektinski fmger-like strukturi, domena homologna epidermalnemu rastnemu dejavniku, kringlovi domeni 1 in 2 (kot se nahajata v urokinazi, plazminogenu, trombinu, dejavniku XII) se nahajajo na težki verigi ter aktivno mesto serinske proteaze, ki se nahaja na lahki verigi.
Tkivni plazminogenski aktivator pretvarja plazminogen v plazmin. Specifičnost ativacije je odvisna od afinitete tPA do fibrina in tvorbe ternarnega kompleksa med tPA, plazminogenom in fibrinom, kar povzroči močno povečanje aktivacijske hitrosti plazminogena na površini fibrina. Funkcionalne domene tPA, ki so odgovorne za afiniteto do fibrina in povečanja aktivnosti tPA se nahajajo znotraj N-terminalne regije (težka veriga), najverjetneje v fingerlike domeni (Binyai) in v drugi kringlovi domeni (van Zooneveld).
Vloga citokeratinov pri aktivaciji plazminogena
Aktivacija plazminogena na celični površini je veliko hitrejša v primerjavi z aktivacijo v raztopini, saj interakcija plazminogena z vezavnimi proteini povzroči spremembo konformacije plazminogena, kije bolj odprta za proteolizno delovanje (Ellis, 1991). Citokeratin 8 je poglavitni vezavni protein plazminogena na membrani celic raka dojke. Citokeratin 8 je intermediatni filamentni protein, ki v paru z citokeratinom 18 tvori netopni strukturni citoplazemski skelet. C-terminalni del citokeratina 8 penetrira skozi celično membrano (Hembrough, 1995; Ditzel, 1997) in veže plazminogen (Kralovich, 1998). Aktivacija plazminogena je pospešena z vezavo tkivnega plazminogenskega aktovatorja (tPA), ki se lahko veže bodisi na citokeratin 8 ali na citokeratin 18 (Kralovich, 1998)
Zaporedje peptida uroaktivin ustreza aminokislinskemu zaporedju, ki se nahaja v Cterminalnem delu citokeratinov 1, 2, 8, 10 in 18 kot močno ohranjena regija citokeratinov. Predvidevamo, da prav ta regija predstavlja vezalno mesto za tPA kot tudi za urokinazo.
C. PODATI O STANJU TEHIKE
Stanje tehnike na področju uporabe urokinaze za razgradnjo neželenih strdkov v telesu (fibrinolizo) opisujejo naslednji viri, vendar po do sedaj znanih podatkih, aktivatorji urokinaze še niso patentirani:
- Banyai L, Varadi A, Patthy L. Common evolutionary origin of the fibrin-binding structures of fibronectin and tissue-type plasminogen activator. FEBS Lett. 1983 Oct 31 ;163(1):37-41.
- Ditzel H, Garrigues U, Andersen C, Larsen M, Garrigues H, Svejgaard A, Hellstrom I, Hellstrom K, Jensenius J: Modified cytokeratins expressed on the surface of carcinoma celiš undergo endocytosis upon binding of human monoclonal antibody and its recombinant Fab fragment. Proč Natl Acad Sci U S A 1997, 94(15):8110-8115.
- Ellis V, Behrendt N, Dano K: Plasminogen activation by receptor-bound urokinase. A kinetic study with both cell-associated and isolated receptor. J Biol Chem 1991, 266(19):12752-12758.
- Hembrough T, Vasudevan J, Allietta M, Glass Wn, Gonias S: A cytokeratin 8-like protein with plasminogen-binding activity is present on the extemal surfaces of hepatocytes, HepG2 celiš and breast carcinoma celi lines. J Celi Sci 1995, 108 (Pt 3):1071-1082.
- Kralovich KR, Li L, Hembrough TA, Webb DJ, Kams LR, Gonias SL. Characterization of the binding sites for plasminogen and tissue-type plasminogen activator in cytokeratin 8 and cytokeratin 18. J Protein Chem. 1998 Nov;17(8):845-54.
- Van Zonneveld A J, Veerman H, Pannekoek H. Autonomous functions of structural domains on human tissue-type plasminogen activator. Proč Natl Acad Sci USA. 1986 Jul;83(13):4670-4.
Walker JB, Nesheim ME. The molecular weights, mass distribution, chain composition, and structure of soluble fibrin degradation products released from a fibrin clot perfused with plasmin. J Biol Chem. 1999 Feb 19;274(8):5201 -12.
United States Patent 6,861,054; Higazi. March 1, 2005, suPAR stimulating activity of tcuPA-mediated fibrinolysis and different uses thereof.
United States Patent 4,996,050; Tsukada, et al. February 26, 1991: Fibrinolytic activity enhancer.
D. OPIS SKIC IZUMA
Skica 1 prikazuje rezultate vezave peptida uroaktivina na urokinazni plazminogenski aktivator, dobljene s pomočjo površinske plazmonske resonance. Krivulje predstavljajo vezavo urokinaznega plazminogenskega aktivatorja na imobiliziran uroaktivin in njegovo disocijacijo pri koncentracijah 10 nM, 20 nM and 50 nM (od spodaj navzgor).
Skica 2 prikazuje aktivacijo plazminogena ob prisotnosti peptida uroaktivina. Aktivacijo plazminogena smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm v prisotnosti 500 pM urokinaznega plazminogenskega aktivatorja, 500 nM plazminogena, specifičnega substrata za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter naraščajočih koncentracij peptida. Fluorescenco smo odčitali po 90 min.
Skica 3 prikazuje kinetiko aktivacije plazminogena ob prisotnosti peptida uroaktivina. Aktivacijo plazminogena smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm v prisotnosti 500 pM urokinaznega plazminogenskega aktivatorja, 500 nM plazminogena, specifičnega substrata za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter naraščajočih koncentracij peptida. Fluorescenco smo spremljali 100 min.
Skica 4 prikazuje aktivacijo plazminogena ob prisotnosti peptida uroaktivina. Aktivacijo plazminogena smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm v prisotnosti 500 pM tkivnega plazminogenskega aktivatorja, 500 nM plazminogena, specifičnega substrata za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter naraščajočih koncentracij peptida. Fluorescenco smo odčitali po 90 min.
Skica 5 prikazuje kinetiko aktivacije plazminogena ob prisotnosti peptida uroaktivina. Aktivacijo plazminogena smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm v prisotnosti 500 pM tkivnega plazminogenskega aktivatorja, 500 nM plazminogena, specifičnega substrata za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter naraščajočih koncentracij peptida. Fluorescenco smo spremljali 100 min.
Skica 6 prikazuje kontrolni poizkus aktivacije plazminogena ob prisotnosti peptida uroaktivina in v odsotnosti plazminogenskega aktivatorja (uPA ali tPA). Aktivacijo plazminogena smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm v prisotnosti 500 nM plazminogena, specifičnega substrata za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter naraščajočih koncentracij peptida. Fluorescenco smo odčitali po 90 min.
Skica 7 prikazuje kontrolni poizkus aktivacije plazminogena ob prisotnosti undekapeptida. Aktivacijo plazminogena smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm v prisotnosti 500 pM urokinaznega plazminogenskega aktivatorja, 500 nM plazminogena, specifičnega substrata za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter naraščajočih koncentracij undekapeptida. Fluorescenco smo odčitali po 90 min.
Skica 8 prikazuje poizkus razgradnje fibrinskega strdka ob prisotnosti peptida uroaktivina. Razgradnjo fibrinskega strdka smo sledili z merjenjem absorbance pri 405 nm v prisotnosti 500 nM plazminogena, urokinaznega plazminogenskega aktivatorja (250 pM, 500 pM ter 1 nM) in naraščajočih koncentracij uroaktivina. Absorbanco smo spremljali do popolne razgadnje fibrinskega strdka.
E. IZVEDBENI PRIMERI
Predloženi izum je ponazorjen z naslednji neomejujočimi primeri:
1. Načrtovanje peptida
Aminokislinsko zaporedje citokeratinov 1, 2, 8, 10 in 18 izvira iz proteinske baze NCBI Protein Database (1346343, 547754, 225702, 40354192 in 30311). Zaporedja smo uredili s pomočjo programa ClustalW multiple sequence alignment software (www.ch.embnet.org) in na osnovi urejenih zaporedij načrtovali zaporedje peptida uroaktivin, ki ne ustreza nobenemu zaporedju omenjenih citokeratinov. Prav tako zaporedja uroaktivina ni v bazi podatkov Blast do sedaj znanih aminokislinskih zaporedij kakršnihkoli živih bitij.
2. Sinteza peptida
Peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO: 1 je bil sintetiziran pri Biosynthesis Inc. (Denver, TX, USA). Njegova čistost je bila 85,6 % določena s HPLC in masno analizo.
3. Testiranje vezave uroaktivina na plazminogenski aktivator s površinsko plazmonsko resonanco
Vezavo urokinaze na uroaktivin smo določali s sistemom Biacore X (Biacore, Švedska). Poizkus je potekal na CM5 senzorskem čipu (BR-1003-98 BIAcore). Uroaktivin smo imobilizirali pri pretoku 1 pL/min 10 minut (300 RU). Pretočno celico smo nato izprali s 5 pL 10 mM glicinskega pufra (pH 2.2) pri pretoku 30 pL/min. Drugo pretočno celico smo uporabili kot referenčno celico. Enak postopek spiranja smo uporabili za regeneracijo površine dodekapeptida med posameznimi injiciranji različnih koncentracij peptida. uPA smo raztopil v PBST pufru (PBS z 0.05% Tween 20).
Vezani uroaktivin smo tretirali z različnimi koncentracijami plazminogenskega aktivatorja. V primeru urokinaznega plazminogenskega aktivatorja smo uporabili 10 nM, 20 nM and 50 nM.
Vse meritve so potekale pri 25°C in pretoku 1 pL/min v 1% PBST pufru. 5 pL uPA smo injicirali v posamezni meritvi. Krivulje asociacije in disociacije urokinaznega plazminogenskega aktivatorja na peptid uroaktivin so prikazane na skici 1. Z metodo premikajoče bazne linije - programski paket Biacore smo določili Ka = 9.8 nM .
4. Aktivacija plazminogena
Pospešeno aktivacijo plazminogena ob prisotnosti peptida uroaktivina smo sledili z merjenjem fluorescence pri 470 nm, in sovpada s povečanim nastajanjem plazmina. V testu smo uporabili 500 pM urokinazni ali tkivni plazminogenski aktivator, 500 nM plazminogen in 0,5 mM specifični substrat za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC. Količina nastalega plazmina v 90 min in kinetika njegovega nastanka kažeta na močno povečano nastajanje ob prisotnosti peptida uroaktivina. Nastanek plazmina je odvisno od koncentracije peptida uroaktivina (skice 2-5). V kontrolnih poskusih, kjer plazminogenski aktivator ni bil prisoten, do nastanka plazmina ni prišlo.
uPA
Urokinazni plazminogenski aktivator (uPA) (500pM) smo raztopili v fosfatnem pufru, pH 7.4 in dodali 50 pl/ vodnjaček. Dodali smo različne koncentracije uroaktivina (0.1 μΜ, 0.25 μΜ, 0.5 μΜ, 1 μΜ, 2.5 μΜ ter 5 μΜ) ter inkubirali na 37°C 30 min. Nato smo dodali specifični fluorogeni substrat za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter nazadnje plazminogen (500 nM) (vsi od Sigma, St. Louis, MD) v posamezne vodnjačke mikrotiterske plošče in sledili nastanek plazmina 1.5 ure pri 37°C (Ex = 370 nm in Em = 470 nm) s pomočjo fluorescenčnega čitalca mikrotiterskih ploščic (Safire 2, Tecan). V kontrolnem poiskusu smo dodali undekapeptid oz. dodekapeptid z drugačnim zaporedjem. Izvedli smo tudi kontrolni poskus, kjer nismo dodali uPA. Rezultat je reprezentativen trem neodvisnim poizkusom. Podane so povprečne vrednosti štirih paralelk ± standardna deviacija.
tPA
Tkivni plazminogenski aktivator (tPA) (500pM) smo raztopili v fosfatnem pufru, pH 7.4 in dodali 50 μΐ/ vodnjaček. Dodali smo različne koncentracije uroaktivina (0.1 μΜ, 0.25 μΜ, 0.5 μΜ, 1 μΜ, 2.5 μΜ ter 5 μΜ) ter inkubirali na 37°C 30 min. Nato smo dodali specifični fluorogeni substrat za plazmin D-Ala-Lev-Lys-AMC (0.5 mM) ter nazadnje plazminogen (500 nM) (vsi od Sigma, St. Louis, MD) v posamezne vodnjačke mikrotiterske plošče in sledili nastanek plazmina 1.5 ure pri 37°C (Ex = 370 nm in Em = 470 nm) s pomočjo fluorescenčnega čitalca mikrotiterskih ploščic (Safire 2, Tecan). V kontrolnem poiskusu smo dodali undekapeptid oz. dodekapeptid z drugačnim zaporedjem. Izvedli smo tudi kontrolni poskus, kjer nismo dodali tPA. Rezultat je reprezentativen trem neodvisnim poizkusom. Podane so povprečne vrednosti štirih paralelk ± standardna deviacija.
5. Test raztapljanja fibrinskega strdka
Fibrinski strdek smo naredili z dodatkom 50 μΐ človeškega trombina (0.3 U/ml, končna koncentracija) (1NIH U = 0.324 ± 0.073 pg trombina) in CaCl2 (20 mM) 50 μΐ človeškemu fibrinogenu (2 mg/ml, končna koncentracija) v plošči s 96 vodnjački. Tvorba strdka je potekala 3 ure na sobni temperaturi. Nato smo dodali 50 μΐ 1 μΜ plazminogena ter 50 μΐ urokinaznega plazminogenskega aktivatorja (500 pM, 1.0 nM, 2.0 nM) z dodanim uroaktivinom (20 μΜ, 10 μΜ, 5 μΜ, 0 M). Spremembe v motnosti strdka smo spremljali z merjenjem spremembe absorbance v času pri 405 nm pri 25 °C na mikrotiterskem čitalcu. Meritve smo izvajali v štirih paralelkah za vsako koncentracijo ter poizkus trikrat ponovili.
Ί2>
SEQUENCE LISTING <110> OBERMAJER Nataša, DOLJAK Bojan, KOS Janko, UNIVERSITY OF LJUBLJANA <120> Peptide uroaktivin, as activator of enzyme urokinase (Peptid uroaktivin, kot aktivator encima urokinaze) <140> P-200800224 <141> 2008-09-25 <160> 1 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220>
<223> Designed peptide based on highly homologous region of OKI, CK2, CK8, CK10 and CK18.
<400> 1
Val Lys Ile Ala Leu Glu Val Glu Ile Ala Thr Tyr
Claims (11)
1. Zaporedje aminokislin v uroaktivinu (peptidu z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO. 1) in iz zaporedja izhajajoči peptidomimetiki.
2. Farmacevtski sestavek, označen s tem, da vsebuje uroaktivin ali iz njega izhajajoče peptidomimetike.
3. Farmacevtska oblika, označena s tem, da vsebuje uroaktivin in iz njega izhajajoče peptidomimetike po kateremukoli zahtevku 1-2, ki omogoča parenteralni vnos.
4. Medicinski pripomoček, označen s tem, da vsebuje uroaktivin in iz njega izhajajoče peptidomimetike po kateremukoli zahtevku 1-2, ki se uporablja pri posrednem ali neposrednem preprečevanju strjevanja krvi, še posebej pri katetrih in žilnih vsadkih.
5. Peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO.l ali iz njega izhajajoči peptidomimetiki po zahtevku 1 za uporabo kot aktivator encimov, ki pospešijo proces fibrinolize.
6. Peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO.l ali iz njega izhajajoči peptidomimetiki po zahtevku 1, za uporabo kot aktivator urokinaznega plazminogenskega aktivatorja.
7. Peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO. 1 ali iz njega izhajajoči peptidomimetiki po zahtevku 1, za uporabo kot aktivator tkivnega plazminogenskega aktivatorja.
8 . Peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO.l ali iz njega izhajajoči peptidomimetiki po zahtevku 1 za uporabo kot zdravilo.
9. Farmacevtski sestavek, ki vsebuje peptid uroaktivin z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO. 1 ali iz njega izhajajoče peptidomimetike po zahtevku 1, za uporabo kot aktivator encimov, ki pospešijo proces fibrinolize, kot aktivator urokinaznega plazminogenskega aktivatorja ali kot aktivator tkivnega plazminogenskega aktivatorja.
10. Uporaba peptida uroaktivina z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO. 1 ali iz njega izhajajočih peptidomimetikov po zahtevku 1, za izdelavo farmacevtskega sestavka za zdravljenje bolezni ali stanj, pri katerih je indicirana uporaba trobmolitikov.
11. Uporaba peptida uroaktivina z aminokislinskim zaporedjem SEQ ID NO. 1 ali iz njega izhajajočih peptidomimetikov po zahtevku 1, za izdelavo farmacevtskega sestavka za zdravljenje akutne koronarne tromboze (akutnega miokardnega infarkta), akutne ishemične možganske kapi, akutne pljučne tromboembolije, globinske venske tromboze, akutne arterijske tromboembolije, akutne arterijske tromboze, kot tudi za zagotavljanje prehodnosti arteriovenskih kanul in intravenskih katetrov.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI200800224A SI22865A (sl) | 2008-09-25 | 2008-09-25 | Peptid uroaktivin kot aktivator encima urokinaze |
| PCT/EP2009/006899 WO2010034490A1 (en) | 2008-09-25 | 2009-09-24 | Peptide uroaktivin, as an activator of the enzyme urokinase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI200800224A SI22865A (sl) | 2008-09-25 | 2008-09-25 | Peptid uroaktivin kot aktivator encima urokinaze |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SI22865A true SI22865A (sl) | 2010-03-31 |
Family
ID=41227264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SI200800224A SI22865A (sl) | 2008-09-25 | 2008-09-25 | Peptid uroaktivin kot aktivator encima urokinaze |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| SI (1) | SI22865A (sl) |
| WO (1) | WO2010034490A1 (sl) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MX2014004655A (es) | 2011-10-19 | 2015-03-05 | Theratechnologies Inc | Compuestos peptídicos derivados de melanotransferrina y usos de estos. |
| CA2928759A1 (en) | 2013-11-04 | 2015-05-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions and methods for administration of an enzyme to a subject's airway |
| EP3756680A1 (en) * | 2019-06-26 | 2020-12-30 | Universitat de Lleida | Intermediate filament-derived peptides and their uses |
| WO2022117724A1 (en) | 2020-12-04 | 2022-06-09 | Univerza V Ljubljani | 8-hydroxyquinoline cysteine protease inhibitors for use in the prevention and/or treatment of a corona virus disease |
| CN115785191A (zh) * | 2022-11-24 | 2023-03-14 | 潍坊医学院 | 一种尿激酶多肽抑制剂及其制备方法 |
-
2008
- 2008-09-25 SI SI200800224A patent/SI22865A/sl not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-09-24 WO PCT/EP2009/006899 patent/WO2010034490A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2010034490A1 (en) | 2010-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Weisel et al. | The biochemical and physical process of fibrinolysis and effects of clot structure and stability on the lysis rate | |
| Nagashima et al. | An inhibitor of activated thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor potentiates tissue-type plasminogen activator-induced thrombolysis in a rabbit jugular vein thrombolysis model | |
| Dobrovolsky et al. | The fibrinolysis system: regulation of activity and physiologic functions of its main components | |
| Hudson | Biophysical mechanisms mediating fibrin fiber lysis | |
| Blombäck | Fibrinogen and fibrin–proteins with complex roles in hemostasis and thrombosis | |
| Mueller et al. | Thrombolysis in myocardial infarction (TIMI): comparative studies of coronary reperfusion and systemic fibrinogenolysis with two forms of recombinant tissue-type plasminogen activator | |
| Kwon et al. | S100A10, annexin A2, and annexin a2 heterotetramer as candidate plasminogen receptors | |
| Steinmetzer et al. | Fibrinolysis inhibitors: Potential drugs for the treatment and prevention of bleeding | |
| SI22865A (sl) | Peptid uroaktivin kot aktivator encima urokinaze | |
| Flight et al. | Comparison of textilinin-1 with aprotinin as serine protease inhibitors and as antifibrinolytic agents | |
| Weisel et al. | Mechanisms of fibrinolysis and basic principles of management | |
| Da Silva et al. | Anti-platelet effect of cumanastatin 1, a disintegrin isolated from venom of South American Crotalus rattlesnake | |
| Vaughan et al. | Recombinant plasminogen activator inhibitor-1 reverses the bleeding tendency associated with the combined administration of tissue-type plasminogen activator and aspirin in rabbits. | |
| Haj‐Yehia et al. | Urokinase‐derived peptides regulate vascular smooth muscle contraction in vitro and in vivo | |
| Meretoja et al. | Thrombolytic therapy in acute ischemic stroke-basic concepts | |
| Conard et al. | Theoretic and practical considerations on laboratory monitoring of thrombolytic therapy | |
| Nieuwenhuizen | Fibrinogen and its specific sites for modulation of t-PA induced fibrinolysis | |
| Guimarães et al. | Fibrinolytic efficacy of Amediplase, Tenecteplase and scu-PA in different external plasma clot lysis models | |
| Talbot et al. | Proteolytic modulation of factor Xa–antithrombin complex enhances fibrinolysis in plasma | |
| KR20060133031A (ko) | 트롬빈 유도체 및 그것을 포함하는 의약 조성물 | |
| Bachmann | Fibrinolytic agents | |
| Ren et al. | Study on the activity of recombinant mutant tissue-type plasminogen activator fused with the C-terminal fragment of hirudin | |
| De Caterina et al. | Cellular effects of thrombin: pharmacology of the receptor (s) in various cell types and possible development of receptor antagonists | |
| Mahmoud-Alexandroni et al. | Sensitive and direct assays for functionally active plasminogen activators (tissue-type and urokinase-type) in plasma | |
| Abdelouahed et al. | Comparative effects of recombinant staphylokinase and streptokinase on platelet aggregation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OO00 | Grant of patent |
Effective date: 20100412 |
|
| KO00 | Lapse of patent |
Effective date: 20130507 |