SI20922A - Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe - Google Patents
Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe Download PDFInfo
- Publication number
- SI20922A SI20922A SI200100132A SI200100132A SI20922A SI 20922 A SI20922 A SI 20922A SI 200100132 A SI200100132 A SI 200100132A SI 200100132 A SI200100132 A SI 200100132A SI 20922 A SI20922 A SI 20922A
- Authority
- SI
- Slovenia
- Prior art keywords
- antibody
- cathepsin
- activity
- seq
- elevated
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 102000005600 Cathepsins Human genes 0.000 title 1
- 108010084457 Cathepsins Proteins 0.000 title 1
- 102000004225 Cathepsin B Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 108090000712 Cathepsin B Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 14
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000002852 cysteine proteinase inhibitor Substances 0.000 description 5
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- DLELKZFCVLJXKZ-GOTSBHOMSA-N Z-Arg-Arg-NHMec Chemical compound N([C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC1=CC=2OC(=O)C=C(C=2C=C1)C)C(=O)OCC1=CC=CC=C1 DLELKZFCVLJXKZ-GOTSBHOMSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 4
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 3
- 108050004038 cystatin Proteins 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- TXEXNDVIPVMQEA-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethyl-1,3-thiazole;3,5-diphenyl-2h-tetrazol-3-ium;bromide Chemical compound [Br-].CC1=CSC(C)=N1.C1=CC=CC=C1C1=[NH+]N(C=2C=CC=CC=2)N=N1 TXEXNDVIPVMQEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000012622 synthetic inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LTLYEAJONXGNFG-HBNTYKKESA-N (2r,3r)-3-[[(2s)-1-[4-(diaminomethylideneamino)butylamino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]oxirane-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCCCNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1O[C@H]1C(O)=O LTLYEAJONXGNFG-HBNTYKKESA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYFYSTBFFDOVJW-UHFFFAOYSA-L 2-[4-[4-(3,5-diphenyltetrazol-2-ium-2-yl)phenyl]phenyl]-3,5-diphenyltetrazol-2-ium;dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC(=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 WYFYSTBFFDOVJW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 235000000832 Ayote Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000003908 Cathepsin D Human genes 0.000 description 1
- 108090000258 Cathepsin D Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 235000009854 Cucurbita moschata Nutrition 0.000 description 1
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 description 1
- 235000009804 Cucurbita pepo subsp pepo Nutrition 0.000 description 1
- 102000015833 Cystatin Human genes 0.000 description 1
- 108010061641 Cystatin A Proteins 0.000 description 1
- 108010061635 Cystatin B Proteins 0.000 description 1
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 description 1
- 102100031237 Cystatin-A Human genes 0.000 description 1
- 102100026891 Cystatin-B Human genes 0.000 description 1
- 102100026897 Cystatin-C Human genes 0.000 description 1
- 206010061819 Disease recurrence Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000898449 Homo sapiens Cathepsin B Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000010631 Kininogens Human genes 0.000 description 1
- 108010077861 Kininogens Proteins 0.000 description 1
- 206010050017 Lung cancer metastatic Diseases 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010037211 Psychomotor hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 102000019259 Succinate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010012901 Succinate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940019748 antifibrinolytic proteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000053907 human CTSB Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000013038 irreversible inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- -1 pH 7.5 Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015136 pumpkin Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036964 tight binding Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Predloženi izum se nanaša na monoklonsko protitelo, ki je sposobno nevtralizirati katepsin B. Še zlasti se predloženi izum nanaša na uporabo takšnega protitelesa za zdravljenje ali detekcijo bolezni, povezanih s prekomerno ekspresijo in/ali prekomerno aktivnostjo katepsina B, kot je rak ali artritis.ŕ
Description
Krka, tovarna zdravil, d.d., Novo mesto
Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe
Tehnično področje izuma
Predloženi izum se nanaša na monoklonsko protitelo, ki je sposobno nevtralizirati aktivnost katepsina B. Še zlasti se predloženi izum nanaša na uporabo takšnega protitelesa za zdravljenje in detekcijo bolezni, povezanih s prekomerno ekspresijo in/ali prekomerno aktivnostjo katepsina B, kot je rak ali artritis.
Ozadje izuma
Izkazalo se je, da je lizosomska cisteinska proteinaza katepsin B udeležena v procesih tumorske rasti, invazije in metastaziranja. (Kos, J. in Lah, T.T. Oncology Reports 5:1349-1361, 1996). Pokazalo seje, daje tumorski katepsin B lahko translociran na plazemski membrani ali pa se izloča bodisi kot prekurzor ali kot aktivni encim iz tumorskih celic, kjer sodeluje v razgradnji komponent ekstracelulamega matriksa in bazalne membrane, kar je ključna stopnja procesa metastaziranja (Sloane, et al., Biochemical and Molecular Aspects of Selected Cancers, T.G. Pretlow and T.P. Pretlow eds., Academic Press, New York, str. 411-465, 1994). Aktivnost katepsina B značilno kontrolirajo endogeni inhibitorji cisteinskih proteinaz - kot sta intracelulami stefin A in B ter ekstracelulami cistatini, kininogeni in a2-makroglobulin. Izkazalo se je, da povišan nivo tumorskega katepsina B ni uravnotežen z ustreznim povišanjem inhibitorjev cisteinskih proteinaz, kar lahko vodi do nekontrolirane proteolize ekstracelulamega matriksa. V kliničnih študijah raka prsi, glave in vratu, črevesnega in pljučnega raka je povišana aktivnost Cat B v tumorskem tkivu in povišana koncentracija proteinov korelirala z bolj agresivnim obnašanjem tumorjev, z zgodnejšo ponovitvijo bolezni in krajšim celokupnim preživetjem (Kos, J. in Lah, T.T.
Oncology Reports 5: 1349-1361, 1996). Znatno povišani nivoji Cat B so bili ugotovljeni tudi v serumih bolnikov z rakom prsi, črevesnim rakom, rakom jeter, trebušne slinavke in melanomom (Kos et al., Int. J. Biol. Markers, 15: 84-89, 2000).
Po drugi strani pa so menili, da tudi zmanjšanje inhibitome sposobnosti prispeva k neustrezni kontroli katepsina B pri napredovanju raka. Na primer, stefin A, očiščen iz humanega sarkoma, je izražal nižjo inhibitomo aktivnost v primerjavi s stefinom A, izoliranim iz jeter (Lah et al., Biochim. Biophys. Acta 993: 63-73, 1989). V pljučnem tumorskem tkivu je bil katepsin B bolj odporen na inaktivacijo z E-64 kot katepsin B iz kontrolnega pljučnega tkiva (Krepela et al., Int. J. Cancer 61: 44-53, 1995). Poleg tega je katepsin B iz bolj metastatskih pljučnih celic izražal drugačne nivoje inhibicije z E-64 kot encim iz celičnih linij manj metastatskega pljučnega raka. (Spiess et al., J. Histochem. Cytochem. 42: 917-929, 1994). Izkazalo se je, da je nivo kompleksa katepsinB/cistatin C nižji v serumih bolnikov s pljučnim in črevesnim rakom v primerjavi s tistimi z benignimi boleznimi ali z zdravimi kontrolami (Zore et al., Biol. Chem. 382: 2001).
Trenutno izgleda, da je pri bolnikih z rakom sposobnost endogenih inhibitorjev cisteinskih proteinaz, da bi učinkovito uravnotežili prekomerno ekspresijo in/ali prekomerno s tumorji povezano aktivnost cisteinskih proteinaz, zmanjšana. Sicer ni neposrednega dokaza za s tumorji povezane faktorje, ki bi vplivali na inhibicijo katepsina B in vivo, vendar obstaja več in vitro študij, ki poročajo o s tumorji povezanih post-translacijskih modifikacijah katepsina B, spremembah v stabilnosti pH, prisotnosti aktivatorjev ali vezavi glikozaminoglikanov (GAG-ov), ki vsi lahko spremenijo konformacijo aktivnega mesta katepsina B in posledično vezavo inhibitorjev (Zore etal., Biol. Chem. 382: 2001).
Ker bi inhibitorji cisteinskih proteinaz lahko zagotovili terapevtsko orodje za zdravljenje raka, smo pripravili različne naravne proteinske inhibitorje, pa tudi njihove sintetične analoge, ter jih testirali na anti-tumorski učinek. Na žalost pa specifičnost naravnih inhibitorjev ni omejena le na posamezen encim. Nadalje se je izkazalo, da so majhni sintetični inhibitorji, reverzibilni in ireverzibilni, v višjih koncentracijah citotoksični. Posledično, v stroki obstaja potreba po dodatnih orodjih za zdravljenje raka in drugih motenj, povezanih s prekomerno ekspresijo in/ali prekomerno aktivnostjo katepsina B, kot so artritis, avtoimune bolezni, astma, nevrodegenerativne bolezni, periodontalna bolezen, mišična distrofija, osteoporoza itd..
Povzetek izuma
V teku intenzivnih študij, ki so vodile do predloženega izuma, so tukajšni izumitelji ugotovili, da nevtralizirajoča monoklonska protitelesa, usmerjena proti katepsinu B, zagotavljajo dodatno možnost za specifično inhibicijo omenjene proteolitske aktivnosti navedenega encima.
Torej predloženi izum po prvem vidiku zagotavlja nevtralizirajoča monoklonska protitelesa usmerjena proti katepsinu B, tako da se zmanjša njegova biološka aktivnost.
Po še eni izvedbi izum zagotavlja monoklonsko protitelo, ki prepozna katepsin B in zmanjša njegovo biološko aktivnost, pri čemer protitelo obsega glodalske variabilne regije in humane konstantne regije (kimemo protitelo).
Po še nadaljnjem vidiku predloženi izum zagotavlja humanizirana monoklonska protitelesa z gornjimi karakteristikami.
Predloženi izum zagotavlja tudi polipeptidne fragmente, ki obsegajo le del strukture primarnega protitelesa in ki posedujejo eno ali več imunoglobulinskih aktivnosti (miniprotitelesa).
Po še enem vidiku predloženi izum zagotavlja hibridomsko celično linijo, ki izraža takšno monoklonsko protitelo, in ki je bila deponirana pri Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Nemčija, dne 17.5.2001 in je dobila pristopno številko DSM ACC2506. DSMZ ima status mednarodnega depozitamega organa po Budimpeštanski pogodbi.
Predloženi izum zagotavlja tudi uporabo tukaj opisanih protiteles za zdravljenje in/ali diagnosticiranje bolezni, povezanih s prekomerno ekspresijo katepsina B in/ali njegovo prekomerno aktivnostjo. Takšna bolezen je še zlasti rak ali artritis.
Podroben opis izuma
Na slikah je:
Sl. 1 prikazuje rezultate izoelektričnega fokusiranja monoklonskih protiteles 2A2. Niz prog smo fokusirali v območju pl med 6,55 in 7,2, ki kaže monoklonalnost protitelesa.
Sl. 2 prikazuje rezultate inhibicije aktivnosti katepsina B na BODIPYL FL kazeinskem substratu z uporabo nevtralizirajočih anti-katepsin B protiteles. Kot pozitivno kontrolo smo uporabili katepsin B.
Sl. 3A - 3E prikazujejo rezultate inhibicije invazije MCF-10A neoT celic skozi Matrigel z monoklonskim protitelesom (Mab) v smislu izuma (sl. 3A) in, za primerjavo, rezultate inhibicije z ireverzibilnim inhibitorjem E-64 (sl. 3B), CLIK-148 (sl. 3C), kokošjim cistatinom (sl. 3D) in SQAPI-podobnim inhibitorjem (sl. 3E). Za določitev molame koncentracije monoklonskega protitelesa 2A2, smo le-tega tretirali kot dvovalenti inhibitor.
Sl. 4 in 4A prikazujeta shemo za konstruiranje kimeme težke verige.
Sl. 5 in 5A prikazujeta shemo za konstruiranje kimeme lahke verige.
Sl. 6 prikazuje zaporedje nukleotidov variabilne regije težke verige monoklonskega protitelesa 2A2 (v sekvenčni listi predstavljeno kot SEQ ID NO:1). Izvedena regija amino kislin je prikazana v zgornji vrstici (v sekvenčni listi predstavljena kot SEQ ID NO: 2).
Sl. 7: prikazuje zaporedje nukleotidov variabilne regije lahke verige monoklonskega protitelesa 2A2 (v sekvenčni listi predstavljeno kot SEQ ID NO: 3). Izvedena regija amino kislin je prikazana v zgornji vrstici (v sekvenčni listi predstavljena kot SEQ ID NO: 4)
Protitelesa, ki so opisana tukaj in za katera je zahtevana zaščita, imajo sposobnost, da nevtralizirajo katepsin B. V kontekstu tega izuma je izraz nevtraliziranje definiran tako, da pomeni poslabšanje biološke aktivnosti. Ob upoštevanje tega smo ugotovili, da to poslabšanje verjetno prispeva k lastnosti predmetnih protiteles, da v bistvu ustavijo napredovanje metastaz.
Protitelesa v smislu predloženega izuma lahko pripravimo v katerikoli živali, ki je primerna za proizvodnjo protiteles, kot je miš, kunec ali kokoš. Vendar pa so, kadar jih uporabimo pri ljudeh, takšna protitelesa imunogena tako da posameznik, ki ga zdravimo, razvije imunski odziv proti dodanim protitelesom. Zaradi tega lahko protitelesa spremenimo, kot na primer s pomočjo kimerizacije. V ta namen nemodificirane ne-humane variabilne domene s pomočjo rekombinantne genske tehnologije povežemo s humanimi konstantnimi regijami lahke verige in težkih verig ter proizvedemo kimemo protitelo v ustreznih celicah. Na ta način se ohrani vezavna afiniteta originalnega ne-humanega protitelesa, medtem ko se imunogenost znatno zmanjša.
V naslednji stopnji lahko protitelo tudi humaniziramo. Za doseganje te naloge variabilne regije ne-humanega dela protitelesa prilagodimo humanim konformacijam. Tehnike za pripravo humaniziranih protiteles so v stroki dobro znane, kot je npr. navedeno v Hurle in Gross, Curr. Opin. Biotechnol. 5: 428-433, 1994.
Z ozirom na predhodno, gre izraz protitelo interpretirati kot da obsega živalska protitelesa, kimema protitelesa, humanizirana protitelesa, pa tudi miniprotitelesa prej omenjenih tipov, prednostno fragmente kot so Fab, Fv in/ali scFv deli.
Protitelesa, modificirana na način, kot je opisan zgoraj, lahko proizvedemo v ustreznih celicah kot so E. coli, kvasovke ali sesalčje celice. Vendar pa so zaradi konformacijskih in imunogenskih razlogov prednostne sesalčje celice, ker lahko zagotovijo glikozilacijski vzorec, ki posnema vzorec normalnih humanih celic.
Po prednostni izvedbi predloženega izuma so variabilne regije težke verige in lahke verige monoklonskega protitelesa v smislu predloženega izuma takšne, kot so prikazane v priloženi sekvenčni listi in podane kot SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 in SEQ ID NO: 4.
Hibridomska celična linija, sposobna izraziti protitelo v smislu predloženega izuma, je bila deponirana 17.5.2001 pri Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Nemčija in je prejela pristopno številko DSM ACC2506. Ta hibridomska celična linija prav tako predstavlja predmet predloženega izuma.
Pokažemo lahko, da protitelesa v smislu predloženega izuma znatno zmanjšajo invazijo tumorskih celic skozi Matrigel, pri čemer umetni matriks posnema normalno tkivo. Torej lahko protitelesa v smislu predloženega izuma uporabimo za zdravljenje in/ali diagnosticiranje bolezni, povezanih s povečano koncentracijo in/ali aktivnostjo katepsina B, kot je rak ali artritis. Še zlasti lahko s protitelesom v smislu predloženega izuma dobro zdravimo rak, kot je npr. rak dojke, možgan, črevesni rak, pljučni rak, rak glave in vratu, rak prostate, ovarijev, melanom. Z uporabo nevtralizirajočega protitelesa v smislu predloženega izuma pa lahko zaviramo tudi tumorsko angiogenezo.
Presenetljivo se je izkazalo, da je katepsin B verjetno udeležen pri pojavu in razvoju artritisa. Potemtakem lahko tudi v tem primeru uporabimo protitelesa v smislu predloženega izuma.
Protitelesa lahko formuliramo v kakršnikoli galenski obliki, ki velja kot ustrezna, kot je raztopina ali prašek za raztopino za parenteralen vnos, t.j. subkutano, intramuskularno ali intravensko. Uporabimo lahko katerekoli sisteme za vnos zdravil, kot so liposomi, stealth liposomi, trdni nanodelci za intranazalno ali druge intervencije. Protitelesa lahko uporabimo skupaj s katerimikoli snovmi kot so toksini, radionukleotidi, druga monoklonska protitelesa, kemoterapevtiki in imunosupresivna sredstva, ki lahko pospešijo njihovo učinek ciljanja in terapevtski učinek.
Torej se predloženi izum nanaša tudi na farmacevtski sestavek, ki obsega protitelo, kot je opisano tukaj. Jasno je, da bo v odvisnosti od načina uporabe farmacevtski sestavek vseboval običajno uporabljane nosilce in ekscipiente. Poleg tega se pričakuje, da bo lečeči zdravnik izbral ustrezen način uporabe ob upoštevanju ustreznega stanja bolezni, ki jo zdravi.
Predloženi izum je ponazorjen z naslednjimi neomejujočimi primeri
Primer
1. Imunizacija
Z namenom pripraviti specifična monoklonska protitelesa, smo miši imunizirali z dobro očiščenim rekombinantnim humanim katepsinom B, izraženim v E. coli (Kuhelj et al., Eur. J. Biochem. 229: 533-539, 1996). Štiri BALB/c miši smo imunizirali subkutano s katepsinom B (25pg/miš), emulgiranem v kompletnem Freund-ovem adjuvansu, čemur so na 14., 28. in 42. dan sledile intraperitonealne injekcije enake količine antigena v nekompletnem Freund-ovem adjuvansu. 49. dan smo odvzeli testne krvne vzorce in z uporabo ELISA testa na imobiliziranemu antigenu določili titer anti-katepsin B specifičnih protiteles. Miši z najvišjim titrom smo dali na 56. in 57. dan intraperitonealno poživilno injekcijo katepsina B (30 μg/miš) v fiziološki solni raztopini in na 59. dan uporabili za fuzijo.
Priprava hibridomov
Za pripravo hibridomov smo 9,5 x 106 splenocitov in 5,6 χ 106 mielomskih celic (NS-l/l-Ag4-l) zlili z uporabo PEG (Koehler in Milstein, Nature 256: 495-497, 1975). Po fuziji smo hibridomske celice gojili na mikrotitrskih ploščah s 96 vdolbinicami ob uporabi gojišča DMEM, dopolnjenega s HAT. Po HAT selekciji smo supematante hibridomskih celic testirali na produkcijo protiteles, specifičnih za katepsin B, z uporabo ELISA testa na imobiliziranemu antigenu.
Presejavanje (screening) hibridomskih celic, ki proizvajajo nevtralizirajoča antikatepsin B protitelesa
Supematante hibridomov, pozitivnih na produkcijo protiteles proti katepsinu B, smo nadalje testirali na inhibitomo aktivnost proti katepsinu B z uporabo fluorimetričnega testa in sintetičnega substrata Z-Arg-Arg-AMC (Bachem, Švica). Presejavanje smo izvedli na fluorimetričnih mikrotitrskih ploščah s 96 vdolbinicami. Katepsin B (10 μΐ, 5xl0'8 M), aktivacijski pufer (30 μΐ, 4,5 mM cistein) in supematante (50 μΐ) smo predinkubirali 30 minut, nato dodali substrat (10 μΐ, 5 μΜ) in dodatno inkubirali 15 minut. Reakcijo smo ustavili z dodatkom jodacetata (100 μΐ, 1 mM). Katepsin B je razgradil Z-Arg-Arg-AMC v fluorescentni produkt 7-amino-4-metilkumarin. Njegovo prisotnost smo detektirali v fluorimetru z uporabo vzbujevalne valovne dolžine 370 nm in emisijske valovne dolžine 460 nm. V kontrolnem vzorcu smo uporabili DMEM. 24 klonov, ki so izražali najvišji inhibitomi učinek, smo subklonirali v mikrotitrskih ploščah s 24 vdolbinicami.
Po 10. dneh smo supematante iz posameznih klonov testirali na Z-Arg-Arg-AMC pri enakih pogojih, kot je opisano zgoraj. 10 klonov z najvišjo inhibicijo aktivnosti katepsina B smo prenesli najprej v 25 cm2 in nato v 75 cm2 plastenke za tkivne kulture. Protitelesa smo izolirali od supematantov z uporabo afinitetne kromatografije na protein A sefarozi.
Očiščena protitelesa smo testirali na inhibitomo aktivnost proti katepsinu B, najprej z uporabo Z-Arg-Arg-AMC, kot je opisano zgoraj, in nato z uporabo fluorescentnega BODIPY FL kazeina (Molecular Probes, ZDA). Za zadnjega smo katepsin B (20 μΐ, 1x107M) najprej predinkubirali z aktivatorjem (10 mM cistein v MES pufru, pH 6,0) 15 minut. Nato smo dodali monoklonska protitelesa (50 μΐ, ΙχΙΟ'7 M) in substrat (100 μΐ, 10 μg/ml) ter zmes inkubirali 1 uro na ploščnem stresalniku pri 20°C, zaščiteno pred svetlobo. Vsebnost sproščenih fluorescentnih BODIPY FL peptidov je ustrezala nivoju aktivnega katepsina B. Fluorescentne peptide smo detektirali z vzbujevalno/emisijsko valovno dolžino 485/538 nm. Kot pozitivno kontrolo smo uporabili katepsin B, inkubiran brez protiteles. Zmanjšanje fluorescence, izmerjeno v vzorcih v prisotnosti protiteles, je kazalo inhibitomo aktivnost izoliranih protiteles.
2. Biokemijska karakterizacija izbranih inhibitornih protiteles
Inhibicija invazije tumorskih celic z nevtalizirajočimi protitelesi
Epitelijska celična linija, pridobljena iz humanih prsi MCF10A neoT, je bila izpeljana iz starševske (parentalne) nesmrtne (imortalizirane) celične linije MCF10A (Soule et al., Cancer Res. 50: 6075-6086, 1990) s transfekcijo ob uporabi plazmida, ki je vseboval gen, rezistenten na neomicin, in humani T-24 mutirani Ha-ra.v onkogen (Ochieng et al., Invasion Metastasis 11:38-47, 1991), in je bila dobljena pri prof. B. Sloane-u, Wayne State University, Detroit.
Celice smo kultivirali do 80 % konfluentnosti kot enojno plast v 75 cm2 plastenkah za tkivne kulture (Flacon, ZDA) v gojišču DMEM/F12 (1:1), dopolnjenem z 12,5 mM HEPES (Sigma, ZDA), 5 % fetalnim telečjim serumom (Hyclone, ZDA), 10 μg/nll hidrokortizona, 0,02 μg/ml epidermalnega rastnega faktorja (vsi Sigma, ZDA) in antibiotiki (penicilin, streptomicin, Krka, d.d. Slovenija) pri 37°C in 5 % CO2. Za subkultivacijo smo celice odlepili z 0,05 % tripsinom in 0,02 % etilendiamintetracetatom (EDTA) v fosfatnem pufru (PBS). Pred uporabo v testih invazivnosti in viabilnosti smo celice odlepili z 0,4 % EDTA in 0,1 % govejim
-1010 serumskim albuminom (BSA) v PBS, pH 7,4. Viabilnost celic, uporabljenih v poizkusih, je bila vsaj 90 %, kar smo določali z barvanjem z nigrosinom. Celice smo gojili v prisotnosti fetalnega telečjega seruma, kateremu smo odstranili inhibitorje cisteinskih proteinaz z afmitetno kromatografijo na koloni s CM papain-sefarozo (Kos et al., 1992). Na kratko, 20 ml seruma, razredčenega 1:2 v/v z 0,02 M PBS pufra, pH 7,4, smo inkubirali z 10 ml CM papain-sefaroze (Pharmacia, Švedska) 20 minut in z njo napolnili kolono. Frakcije (3 ml) smo testirali na preostalo inhibitorno aktivnost z BANA (Bz-DL-Arg-2-Nnap, Serva, Nemčija) in shranili pri -20°C do uporabe.
Celice smo prešteli z MTT kolorimetričnim testom kot je opisan (Mosmann, J. Immunol. Methods 65: 55-63, 1983). Test temelji na razgradnji rumene tetrazolijeve soli, 3-4,5 dimetiltiazol-2,5 difenil tetrazolijevega bromida (MTT) (Sigma, ZDA), v kristale formazana, ki so netopni v vodi, z mitohondrij skim encimom sukcinatdehidrogenazo, ki je prisoten v živih celicah. Kristale formazana smo raztopili z izopropanolom in izmerili optično gostoto na ELISA čitalniku (SLT, Rainbow) pri 570 nm, referenčni filter 690 nm.
Učinek nevtralizirajočih monoklonskih protiteles smo primerjali s tistim za naslednje naravne in sintetične inhibitorje cisteinskih proteinaz:
1. Ireverzibilni inhibitor E-64, trans-epoksisukcinil-L-levcilamido-(4gvanidino)butan (Sigma, ZDA) - splošni inhibitor cisteinskih proteinaz (Barret etal., Biochem. J. 201:189-198, 1982)
2. Reverzibilni proteinski inhibitor s tesno vezavo, kokošji cistatin - splošni inhibitor cisteinskih proteinaz (Kos et al., Agents Actions 38: 331-339, 1992)
3. CLIK-148 - epoksisukcinilni peptidni derivat (Premzl et al., Biol. Chem. 382: 2001), zagotovil prof. Nobuhiko Katunuma, Tokushima Burni University, Japonska - inhibitor katepsina L
4. Pepstatin A (Sigma, ZDA) - inhibitor katepsina D
5. SQAPI - podoben inhibitor - proteinski inhibitor katepsina D, izoliran iz buče, Cucurbitapepo (Christeller et al., Eur. J. Biochem. 254: 160-167, 1998).
-1111
Citotoksičnost nevtralizirajočih monoklonskih protiteles in inhibitorjev smo testirali, kot je opisano (Holst-Hansen in Briinner, Celi Biology, A Laboratory Handbook 2nd ed. (Academic Press) str. 16-18, 1998). Na kratko, dodali smo celice s končno koncentracijo 5 χ 104 celic/200 μΐ na vdolbinico mikrotitrske plošče s 96 vdolbinicami (Costar, ZDA). Dodali smo ustrezne koncentracije monoklonskega protitelesa, inhibitorja ali kontrolnega gojišča. Plošče smo inkubirali 24 ur pri 37°C in 5 % CO2. Gojišče smo previdno odstranili, dodali 200 μΐ 0,5 mg/ml MTT in inkubirali tri ure pri 37°C in 5 % CO2. Gojišče smo odstranili, raztopili kristale formazana v 200 μΙ/vdolbinico izopropanola. Absorbanco smo izmerili kot je opisano zgoraj. Vse teste smo izvedli v štirih paralelkah.
Učinke monoklonskega protitelesa in proteinaznih inhibitorjev na invazijo smo testirali z uporabo modificirane metode kot je opisana (Holst-Hansen et al., Ciin. Exp. Metastasis 14: 297-307, 1996). Uporabili smo Transwell plošče (Costar, USA) z 12 mm polikarbonatnimi filtri, velikosti por 12 pm. Na spodnjo stran filtrov smo nanesli 25 μΐ 100 pg/ml fibronektina (Sigma, ZDA) in jih pustili eno uro v sterilni komori, da so se posušili. Zgornjo stran filtrov smo prekrili s 100 μΐ 1 mg/ml Matrigela (Becton Dickinson, ZDA) in dodali 100 μΐ DMEM/F12. Matrigel smo preko noči sušili pri sobni temperaturi v sterilni komori in rekonstruirali z 200 μΐ gojišča eno uro pri 37°C. Zgornje oddelke smo napolnili z 0,5 ml celične suspenzije, končna koncentracija 4 χ 105 celic/ml, ki je vsebovala ustrezno koncentracijo inhibitorja. Spodnje oddelke smo napolnili z 1,5 ml gojišča, ki je vseboval enako koncentracijo inhibitorja. Plošče smo inkubirali 24 ur pri 37°C in 5 % CO2. H končni koncentraciji 0,5 mg/ml smo v zgornje in spodnje oddelke dodali MTT in plošče inkubirali nadaljnje 3 ure. Gojišča iz obojih oddelkov smo ločeno prenesli v Eppendorfove epruvete in centrifugirali pri 6200 vrt/min 5 minut. Supematante smo zavrgli in preostale kristale formazana raztopili v 1 ml izopropanola. Intenziteto barve smo merili kot je opisano zgoraj. Kot kontrole smo celice inkubirali z gojiščem, ki je vseboval ustrezne volumne metanola, destilirane vode in 50 mM NaHCO3, 0,3 M NaCI, pH 7,5, topil, uporabljenih za pripravo koncentriranih raztopin monoklonskega protitelesa, in inhibitorjev. Invazijo smo zabeležili kot odstotek celic, ki so prešle
-1212 skozi filtre, prekrite z Matrigelom, v primerjavi s kontrolami in jo izračunali kot ODspodnji/ODspodnji+ ODzgornji x 100. Vse teste smo izvedli v treh paralelkah.
3. Konstruiranje in ekspresija kimernega protitelesa
Priprava celotne RNA iz hibridomov, ki proizvajajo monoklonsko protitelo (MAb) proti katepsinu B
Celotno RNA smo izolirali iz 1,58 χ ΙΟ8 2A2 hibridomske celične linije z uporabo gvanidinijeve metode.
Sinteza prve verige cDNA cDNA smo sintetizirali z RT-PCR.
Pomnoževanje genov VL in VH MAb s PCR in določitev njihovih zaporedij
Za PCR smo uporabili dva para primerjev:
Za lahko verigo:
A
Začetni primer (SEQ ID NO: 5):
NK4: 5'-GATGGATATCGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGG-3 '
Povratni primer (SEQ ID NO: 6):
NK3: 5'-GTGCCTCGAGTCGACTTAGCACTCATTCCTGTTGAATCTT-3 '
B
Začetni primer (SEQ ID NO: 7):
L5V: 5'-GTGTGCACTCTGATATTGTGATG-3 '
-1313
Povratni primer (SEQ ID NO: 8):
L3V: 5'-GGTGCAGCCACAGTCCGTTTTATTTC-3 '
Za težko verigo:
A
Začetni primer (SEQ ID NO: 9):
NK-HD5: 5'-GTGAGAGCTCSAGGTSMARCTGCAGSAGTCT-3 ' Povratni primer (SEQ ID NO: 10): nH3V: 5'-GGTGGTCGACGCTGAGGAGACGGT-3 '
B
Začetni primer (SEQ. ID NO: 11):
H5V: 5'-GTGTGCACTCTGAGGTGCAGCTG-3 '
Povratni primer (SEQ. ID NO: 12):
H3V: 5'-TGGTCGACGCTGAGGAGACGGT-3 '
PCR smo izvedli v GeneAmp PCR System 2400 (PERKIN ELMER) s primerjem za lahko verigo (primer NK4 in NK3) oziroma primerjem za težko verigo (primer NK-HD-5 in nH3V) znotraj 30 ciklusov pri naslednjih pogojih: pred-denaturacija pri 95°C 5 minut; denaturacija pri 95°C 30 sekund; prileganje pri 50°C 30 sekund in ekstenzija pri 72°C eno minuto. Produkte PCR smo prekontrolirali na 1 % agaroznem gelu in izrezali za nadaljnje čiščenje s kompletom GENELEAN.
Produkta PCR za lahko verigo in za težko verigo smo klonirali v pUC 19 oziroma pGEM-T Easy vektor. Njuna zaporedja smo določili z aparaturo ABI PPISM 310 Genetic Analyzer (PERKIN ELMER).
-1414
Konstruiranje kimerne lahke in težke verige
Skonstruirali smo kimemo lahko verigo oziroma kimemo težko verigo. Mišji Vl in Vh smo združili s konstantno regijo humanega IgG (Ck oz. Chi) in nato vstavili v ekspresijski vektor pcDNA3.
Lahka veriga
Po pomnoževanju fragmenta Vl s primerjema L5V in L3V pri naslednjih pogojih: pred-denaturacija pri 95°C 5 minut; denaturacija pri 95°C 30 sekund; prileganje pri 55°C 30 sekund in ekstenzija pri 72°C eno minuto, smo produkt PCR subklonirali v pUC/hCK, ki je vseboval humani CK gen. Najprej smo kimemo lahko verigo subklonirali v pUTSEC vektor, ki smo ga dizajnirali zato, da smo zagotovili rekombinantne kimerne verige z začetnim peptidom, potrebne za sekrecijo proteinov (Li, E., et al., 1997). Na koncu smo kimemo lahko verigo in genomsko sekvenco s 163 bp, ki kodira sekrecijski signal težke verige mišjega imunoglobulina, klonirali v evkariotski ekspresijski vektor pcDNA3. Sekveniranje smo izvedli v vsakem vektorju, tako da smo potrdili pravilni vstavek.
Težka veriga
Po pomnoževanju fragmenta Vh s primerjema H5V in H3V pri naslednjih pogojih: pred-denaturacija pri 95°C 5 minut; denaturacija pri 95°C 30 sekund; prileganje pri 55°C 30 sekund in ekstenzija pri 72°C eno minuto, smo VH domeno produkta PCR subklonirali v pUTSEC vektor in nato subklonirali v pUC/hlgGl vektor, ki je vseboval gen za humano Cyl regijo. Prav tako smo kimemo težko verigo klonirali v evkariotski ekspresijski vektor pcDNA3. Sekveniranje smo izvedli v vsakem vektorju, tako da smo potrdili pravilno zaporedje vstavka.
-1515
Transfekcija rekombinantne lahke verige in težke verige v Sp 2/0 celice mišjega mieloma ali celice ovarijev hrčka (CHO)
Približno 1 χ 107 Sp 2/0 celic mišjega mieloma ali celic CHO smo resuspendirali v 0,5 ml hladnega PBS (10,1 mM Na2HPO4, 1,8 mM KH2PO4, 137 mM NaCl, 3 mM KCI, pH 7,2) in dali v kiveto za elektroporacijo z elektrodno režo 0,4 cm; k celicam smo dodali 10 pg Bgl II-lineariziranih plazmidov (čistilni plazmidi lahke verige -pcDNA3 in težke verige -pcDNA3) in izvedli elektroporacijo z enojnim pulzom pri 960 μΡ, 290 V, v Bio-Rad genskem pulzatorju, opremljenim z ojačevalnikom kapacitete. Po elektroporaciji smo celice hranili 5-10 minut na ledu, jih sprali, resuspendirali v 10 ml gojišča z 10 % FCS RPMI 1640 in zasejali v 10 cm petrijevke z gostoto 3-4 χ 105 celic/petrijevko.
Po 24 urah smo dodali selektivno gojišče, ki je vsebovalo G-418 s končno koncentracijo 400 pg/ml. Supematante izbranih klonov smo pregledali z ELISA na ploščah, prekritih s katepsinom B in detektirali prisotnost izločenega kimemega MAb. Za preverjanje ekspersijskega produkta in afinitete kimemih MAb-jev smo uporabili tudi Westem - blot (prepivke).
Kimerno protitelo smo izolirali in testirali na inhibicijo invazije tumorskih celic kot je opisano zgoraj za glodalska protitelesa.
-1616
Sekvence:
V tej prijavi so vsebovane naslednje sekvence:
| SEQIDNO: 1: | nukleotidna sekvenca variabilne regije težke | verige |
| monoklonskega protitelesa 2A2 | ||
| SEQ ID NO: 2: | aminokislinska regija, izvedena iz nukleotidne sekvence variabilne regije težke verige monoklonskega protitelesa 2A2 | |
| SEQID NO: 3: | nukleotidna sekvenca variabilne regije lahke monoklonskega protitelesa 2A2 | verige |
| SEQ ID NO: 4: | aminokislinska regija, izvedena iz nukleotidne variabilne regije lahke verige monoklonskega protitelesa | sekvence 2A2 |
| SEQ ID NO: 5: | začetni primer za lahko verigo - NK4 | |
| SEQ ID NO: 6: | povratni primer za lahko verigo - NK3 | |
| SEQ ID NO: 7: | začetni primer za lahko verigo- L5V | |
| SEQ ID NO: 8: | povratni primer za lahko verigo - L3 V | |
| SEQ ID NO: 9: | začetni primer za težko verigo - NK-HD5 | |
| SEQ ID NO: 10: | povratni primer za težko verigo - nH3 V | |
| SEQIDNO: 11: | začetni primer za težko verigo - H5V | |
| SEQ ID NO: 12: | povratni primer za težko verigo - H3 V |
-1717
Sekvenčna lista
SEQ ID NO: 1
CAGGTCCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAGGTCAGGGGCCTCAATCAAGTTGTCCT
GCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGAACAG
GGCCTGGAGTGGATTGGATGGATTGATCCTGAGAATGGTGATACTGAATATGCCCCGAAGTTCC
GGGGCAAGGCCACTATGACTGCAGACACATCCTCCAAAACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCT
GACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTAATGCGAGAAGGCATGGGTACTATGAAATGGACT
ACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 2
QVQLQQSGAELVRSGASIKLSCTASGFNIKDYYMHWVKQRPEQGLEWIGWIDPENGDTEYAPKFRG
KATMTADTSSKTAYLQLSSLTSEDTA\/YYCNARRHGYYEMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO: 3
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCTATCTCT
TGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTATATAGTAATGGAAAAACCTATTTGAATTGGTTATTACAGAGG
CCAGGCCAGTCTCCAAAGCGCCTAATCTATCTACTGTCTAAACTGGACTCTGGAGTCCCTGACAG
GTTCACTGGCAGTGGATCAGGAACAGATTTTACACTGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATT
TGGGAGTTTATTACTGCGTGCAAGGTACACATTTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCT
GGAAATAAAA
SEQ ID. NO.:4
DIVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLLSKLDSGVPDRFTG
SGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCVQGTHFPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO: 5
NK4: 5'-GATGGATATCGTGCTGACCCAATCTCCAGCTTCTTTGG-3 '
SEQ ID NO: 6
NK3: 5'-GTGCCTCGAGTCGACTTAGCACTCATTCCTGTTGAATCTT-3 '
SEQ ID NO: 7
LAV: 5'-GTGTGCACTCTGATATTGTGATG-3 '
-1818
SEQ ID NO: 8
L3V: 5'-GGTGCAGCCACAGTCCGTTTTATTTC-3 '
SEQ ID NO: 9
NK-HD5: 5'-GTGAGAGCTCSAGGTSMARCTGCAGSAGTCT-3 '
SEQ ID NO: 10 nH3V: 5'-GGTGGTCGACGCTGAGGAGACGGT-3 '
SEQIDNO: 11
H5V: 5'-GTGTGCACTCTGAGGTGCAGCTG-3 '
SEQ ID NO 12:
H3V; 5'-TGGTCGACGCTGAGGAGACGGT-3 '
Za
Krka, tovarna zdravil, d.d., Novo mesto:
Claims (14)
- Patentni zahtevki1. Nevtralizirajoče monoklonsko protitelo usmerjeno proti katepsinu B.
- 2. Protitelo po zahtevku 1, označeno s tem, da protitelo obsega glodalske variabilne regije in humane konstantne regije (kimemo protitelo).
- 3. Protitelo po zahtevku 2, označeno s tem, da so variabilne regije težke verige in lahke verige monoklonskega protitelesa kot so prikazane s SEQ ID NO: 1 in SEQ ID NO: 3.
- 4. Protitelo po kateremkoli od predhodnih zahtevkov, označeno s tem, da je protitelo humanizirano.
- 5. Protitelo po zahtevku 1, označeno s tem, daje protitelo miniprotitelo.
- 6. Celica, ki izraža monoklonsko protitelo po kateremkoli od predhodnih zahtevkov.
- 7. Celica po zahtevku 6, ki je bila deponirana 17.5.2001 pri Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH pod pristopno št. DSM ACC2506.
- 8. Farmacevtski sestavek, označen s tem, da vsebuje protitelo po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5.
- 9. Protitelo po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5 za uporabo v zdravljenju in/ali diagnosticiranju bolezni, povezane s povišano aktivnostjo katepsina B.
- 10. Protitelo po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5 za uporabo v zdravljenju in/ali diagnosticiranju bolezni, povezane s povišano aktivnostjo katepsina B, označeno s tem, da aktivnost izhaja iz povišane koncentracije katepsina B.-2020
- 11. Protitelo po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5 za uporabo v zdravljenju in/ali diagnosticiranju bolezni, povezane s povišano aktivnostjo katepsina B, označeno s tem, daje bolezen rak ali artritis.
- 12. Uporaba protitelesa po kateremkoli od zahtevkov 1 do 5 za izdelavo zdravila za zdravljenje in/ali diagnosticiranje bolezni, povezane s povišano aktivnostjo katepsina B.
- 13. Uporaba po zahtevku 12, kjer povišana aktivnost izhaja iz povišane koncentracije katepsina B.
- 14. Uporaba po kateremkoli od zahtevkov 12 ali 13, kjer je bolezen rak ali artritis.
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI200100132A SI20922A (sl) | 2001-05-18 | 2001-05-18 | Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe |
| US10/477,950 US20050260207A1 (en) | 2001-05-18 | 2002-04-02 | Monoclonal antibody neutralising cathepsin b activity and uses thereof |
| PCT/SI2002/000013 WO2002094881A2 (en) | 2001-05-18 | 2002-04-02 | Monoclonal antibody neutralising cathepsin b activity and uses thereof |
| EP02707392A EP1390409A2 (en) | 2001-05-18 | 2002-04-02 | Monoclonal antibody neutralising cathepsin b activity and uses thereof |
| CA002447313A CA2447313A1 (en) | 2001-05-18 | 2002-04-02 | Monoclonal antibody neutralising cathepsin b activity and uses thereof |
| JP2002592355A JP2005507373A (ja) | 2001-05-18 | 2002-04-02 | カテプシンｂ活性を中和するモノクロナール抗体及びその使用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SI200100132A SI20922A (sl) | 2001-05-18 | 2001-05-18 | Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SI20922A true SI20922A (sl) | 2002-12-31 |
Family
ID=20432896
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SI200100132A SI20922A (sl) | 2001-05-18 | 2001-05-18 | Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20050260207A1 (sl) |
| EP (1) | EP1390409A2 (sl) |
| JP (1) | JP2005507373A (sl) |
| CA (1) | CA2447313A1 (sl) |
| SI (1) | SI20922A (sl) |
| WO (1) | WO2002094881A2 (sl) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2089383B1 (en) | 2006-11-09 | 2015-09-16 | Probiodrug AG | 3-hydr0xy-1,5-dihydr0-pyrr0l-2-one derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase for the treatment of ulcer, cancer and other diseases |
| US9126987B2 (en) | 2006-11-30 | 2015-09-08 | Probiodrug Ag | Inhibitors of glutaminyl cyclase |
| EP2481408A3 (en) | 2007-03-01 | 2013-01-09 | Probiodrug AG | New use of glutaminyl cyclase inhibitors |
| WO2008128985A1 (en) | 2007-04-18 | 2008-10-30 | Probiodrug Ag | Thiourea derivatives as glutaminyl cyclase inhibitors |
| WO2010083417A1 (en) | 2009-01-16 | 2010-07-22 | Angros Lee H | Encapsulated reagents and methods of use |
| CA2772488C (en) | 2009-09-11 | 2018-04-17 | Probiodrug Ag | Heterocyclic derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
| JP6026284B2 (ja) | 2010-03-03 | 2016-11-16 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼの阻害剤 |
| NZ602312A (en) | 2010-03-10 | 2014-02-28 | Probiodrug Ag | Heterocyclic inhibitors of glutaminyl cyclase (qc, ec 2.3.2.5) |
| JP5945532B2 (ja) | 2010-04-21 | 2016-07-05 | プロビオドルグ エージー | グルタミニルシクラーゼの阻害剤としてのベンゾイミダゾール誘導体 |
| EP2686313B1 (en) | 2011-03-16 | 2016-02-03 | Probiodrug AG | Benzimidazole derivatives as inhibitors of glutaminyl cyclase |
| ES2812698T3 (es) | 2017-09-29 | 2021-03-18 | Probiodrug Ag | Inhibidores de glutaminil ciclasa |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992019756A1 (fr) * | 1991-05-02 | 1992-11-12 | Idemitsu Kosan Company Limited | Anticorps monoclonal specifique de la cathepsine l, hybridome produisant cet anticorps et procede d'utilisation de cet anticorps |
| JPH05105635A (ja) * | 1991-10-16 | 1993-04-27 | Banyu Pharmaceut Co Ltd | 抗ウイルス剤 |
| JPH07309895A (ja) * | 1994-05-20 | 1995-11-28 | Idemitsu Kosan Co Ltd | 新規タンパク質、その検出方法及び診断薬 |
-
2001
- 2001-05-18 SI SI200100132A patent/SI20922A/sl not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-04-02 EP EP02707392A patent/EP1390409A2/en not_active Withdrawn
- 2002-04-02 CA CA002447313A patent/CA2447313A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-02 JP JP2002592355A patent/JP2005507373A/ja active Pending
- 2002-04-02 US US10/477,950 patent/US20050260207A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-02 WO PCT/SI2002/000013 patent/WO2002094881A2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2002094881A3 (en) | 2003-11-27 |
| JP2005507373A (ja) | 2005-03-17 |
| EP1390409A2 (en) | 2004-02-25 |
| WO2002094881A2 (en) | 2002-11-28 |
| CA2447313A1 (en) | 2002-11-28 |
| US20050260207A1 (en) | 2005-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101855381B1 (ko) | 면역 관련 질병의 치료를 위한 신규한 조성물 및 방법 | |
| KR100512819B1 (ko) | 종양 치료용 조성물 및 방법 | |
| EP0766745B1 (en) | Monoclonal antibody specific for human 4-1bb and cell line producing same | |
| JP6955721B2 (ja) | ＲＧＭａ結合タンパク質及びその使用 | |
| KR20210013165A (ko) | GUCY2c에 특이적인 항체 및 이의 용도 | |
| US20060069025A1 (en) | Survivin, a protein that inhibits cellular apoptosis, and its modulation | |
| KR20090080979A (ko) | 항-Ｎｏｔｃｈ3 작동제 항체 및 Ｎｏｔｃｈ3 관련 질환을 치료하는 데에 있어서의 그의 용도 | |
| KR20080100806A (ko) | 항ｃｄ40 항체의 용도 | |
| KR20040044408A (ko) | 항 ｔｒａｉｌ-ｒ 항체 | |
| UA74330C2 (uk) | СПОСОБИ ВИКОРИСТАННЯ РОЗЧИННОГО РЕЦЕПТОРА BR43x2 | |
| JP2003518514A (ja) | マクロファージ活性を阻害するための組成物 | |
| MX2010011147A (es) | Anticuerpos novedosos usados para tratar el cancer. | |
| SI20922A (sl) | Monoklonsko protitelo, ki nevtralizira aktivnost katepsina B, in njegove uporabe | |
| EP4286412A1 (en) | Novel binding molecule and use thereof | |
| EP3288977B1 (en) | Methods of mediating cytokine expression with anti ccr4 antibodies | |
| KR101604877B1 (ko) | 항ａｄａｍ－１５항체 및 그의 이용 | |
| TWI449710B (zh) | A monoclonal antibody having an immunosuppressive activity or an antigen-binding fragment thereof | |
| JP2005537786A (ja) | Ｆｇｆｒ５のポリペプチドおよび遺伝子の発現の変調剤および阻害剤 | |
| JPWO1997031109A1 (ja) | メルトリン | |
| US7083791B2 (en) | Methods for enhancing immune responses by fibroblast growth factor receptor 5 polypeptides | |
| US20240109973A1 (en) | Cd40 binding molecules and uses thereof | |
| US20160185835A1 (en) | Immune system mediator | |
| CA2383690A1 (en) | 29 human secreted proteins | |
| EP1467752A1 (en) | HUMAN MAST CELL&minus;EXPRESSED MEMBRANE PROTEINS | |
| CA2984608C (en) | Methods of mediating cytokine expression |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF | Valid on the event date | ||
| KO00 | Lapse of patent |
Effective date: 20070122 |