SE502495C2 - Antimikrobiellt, antiallergent och detoxifierande medel och användningen därav i hud- eller slemhinnebehandlingsprodukt, byggmaterial, papper och ytbehandlingsmaterial - Google Patents

Description

15 20 25 30 35 502 495 effekt och kolofonium utnyttjas som mediator för uttransport av zinkjoner till vävnaden och i häftmassan dessutom för sina adhesiva egenskaper.

En nackdel med häftmassor som innehåller zinkförening i kombi- nation med kolofonium är att de framkallar allergiska reaktio- ner hos många människor, vilket har minskat användningen av dessa häftmassor. Visserligen neutraliseras eller inaktiveras större delen kolofonium av zinken i häftmassan vid dennas an- vändning men de allergena reaktionerna kvarstår dock i stor utsträckning.

Uppfinningens mål Uppfinningens mål var att försöka undanröja nackdelarna med kända zink-kolofonium-baserade häftmassor och ta fram en häft- massa, som samtidigt är starkt bakteriehämmande och ej ger starka allergiska reaktioner.

Beskrivning av uppfinningen Detta mål uppnås enligt uppfinningen överraskande genom att tillsammans med zinkförening i stället för kolofonium använda en eller flera i huvudsak rena hartssyror såsom abietinsyra. dehydroabietinsyra. neoabietinsyra, pimarsyra, levopimarsyra, isopimarsyra och palustrinsyra eller hartssyraderivat såsom dehydroabietylamin. Det har, såsom närmare visas nedan, visat sig att en sådan kombination uppvisar utmärkta antimikrobiella och att såväl den allergena som toxiska effekten tillbaka. Utläckaget eller fri- häfta till serum förmedlat av egenskaper helt eller i hög grad trängs sättningen av zink från t ex syran förbättras dessutom.

Detta var överraskande, eftersom ju samma syror ehuru i oren form och tillsammans med andra ämnen ingår i kolofonium, som ju visat starkt allergena och toxiska effekter. Man kan ej ge någon enkel förklaring härtill men uppenbart är att syrornas renhet är av betydelse för den goda effekten. Syran eller syr- 10 15 20 25 30 35 3 502 495 orna som ingår skall vara i huvudsak rena, vilket innebär att de ska vara minst 98% rena, helst minst 99% rena. Av hartssyr- orna har, såsom framgår nedan av försöksrapport. dehydroabie- tinsyra visat sig fungera allra bäst genom att tillsammans med zink ge den bästa bakteriehämmande, toxicitetssänkande lågal- lergena effekten. Zinkkomponenten kan ingå i medlet i form av någon förening. som avger Zn2+-joner vid sårbehandligen. Zn O utgör den vanligaste föreningen men även salter med organ- iska syror, såsom Zn S04 och Zn C12 kan användas med samma effekt.

Proportionerna mellan zinkkomponenten och syrakomponenten i medlet enligt uppfinningen bör vara minst ca 1:2 och högst ca 20:l. räknat på vikten av zinkkomponenter som Zn O och på ren syrakomponent. Vid ett större förhållande än ca 20:l blir sy- rakomponentens inverkan på medlet vid sårbehandlingen alltför svag medan vid lägre förhållanden än ca 1:2 medlet ej ger någ- on ytterligare förbättrad effekt, medlet blir onödigt dyrt ge- nom att syran är avsevärt dyrare än zinkkomponenten och fri- sättningen av zink förmedlat av syran påverkas negativt; Medlet enligt uppfinningen är genom sina ovannämnda egenskaper synnerligen väl lämpligt för användning i olika hudbehand- men även slem- lingsprodukter. såsom sårbehandlingsprodukter, hinnebehandlingsprodukter. såsom mun-, mag- och tarmslemhinn- or. Uppfinningen avser därför även användningen av medlet för framställning av en sådan produkt, t ex en sårbehandlings- vid vars framställning produkt. En sådan är t ex en sårhäfta. konventionellt använda ingredienser utnyttjas, som t ex ett lösningsmedel, míneralolja, gummilösning mm. Medlet kan här- utöver även utnyttjas i byggmaterial (träfiberplattor), isole- ringsmaterial. papper och ytbehandlingsmaterial (såsom färg), varigenom sådana produkter är klart förbättrade med avseende på antímikrobiella. antiallergena såväl som detoxifierade ef- fekter. Därvid kan även joner av Ca och Mg ingå och spela sam- ma roll som Zn-jonerna. 10 15 20 25 30 35 502 495 Uppfinningen belyses nu närmare nedan i anslutning till bifog- ade ritningsfigurer.

Bifogade ritningsfigurer visar i Fig. la) den antimikrobiella effekten i form av hämningszoner i mm som funktion av tiden för känd kombination av zink och kolofonium.

Fig. lb) samma för enbart zink i olika koncentrationer utan någon syrakomponent.

Fig. lc) samma för sju olika hartssyror använda enligt uppfin- ningen.

Fig. ligt ld) samma för kombinationen zinkoxid och abietinsyra en- uppfinningen i olika viktförhållanden. och Fig. le) samma för kombinationen zinkoxid och dehydroabietin- syra enligt uppfinningen i blandningsförhållandet 16:l. . . . 51 N .

Fig. 2 cytotoxicitet uttryckt som Cr-lackage som funktion av mängden dehydroabietinsyra (DHAA) med och utan närvaro av zinkkomponent.

Antimikrobiell (antíbakteriel1)effekt: Försökets utförande: O.l ml av en suspension (l.l05 bakterier/ml) av bakterier (Staphylococcus Aureus S-209) i log-fas-tillväxt spreds med hjälp av glaskulor ut över en agarplatta i ett plasttråg så att en jämn växt uppstod. Häftmassa i form av häftbitar appli- cerades mot agargel medelst sterila pincetter i ett cirkulärt Inkubation företogs i värmeskåp vid 37°C. Avläsning 24. mönster. av hämningszoner företogs för full försöksserie efter 12. 48 och 72 timmar medelst mm-graderad linjal lagd mot plast- 10 15 20' 25 30 35 502 495 trågets kanter och med ett ögonavstånd till tråget om ca 40 cm med en noggrannhet av 0,5 mm. a) Först testades häftmassa av den kända produkten MEZINC (Mölnlycke AB) innehållande zinkoxid (2,3 mg/cmz). kolofon- ium (3,04 mg/cmz) och naturgummi (2.2B mg/cmz). Resultatet av avläsningen framgår av Fig. la). b) En häftmassa testades innehållande Zn O i olika koncen- trationer men utan någon hartssyrakomponent alls. Resultatet framgår av Fig. lb). c) Sju olika häftmassor testades innehållande var och en 1,258 mg/cmz neoabie- tinsyra, av abietinsyra. dehydroabietinsyra. isopimarsyra respektive lc). pimarsyra, levopimarsyra, palustrinsyra. Resultaten framgår av Fig. d) En häftmassa innehållande zinkoxid och abietinsyra i vikt- förhållandena 2:1. 4:1. 8:1, l6:l. 32:l och 64:l. Resultatet framgår av Fig. ld). e) En häftmassa testades innehållande Zn O och dehydroabietin- syra i viktförhållandet l6:l. Resultatet framgår av Fig. le).

Slutsats: Resultaten av försöken visar att enbart Zn O ej ger någon sär- skilt hög antibakteriell effekt, att de enskilda syrorna ger en betydligt högre antibakteriell effekt och att kombinationen av syra i högren form och zinkoxid ger an antibakteriell ef- fekt som är minst lika hög som den hos en häftmassa innehål- lande kolofonium och zinkoxid.

Allergisk effekt: S k patch-test utfördes med användning av Finn Manual of COntact Dermatitis. 2nd 7l-81) på totalt 14 patienter Försöksmetod: ® Chambers (Fregert S. ed. Copenhagen: Munksgaard 1981; 10 15 20 25 30 35 502 495 med känd kontaktallergi mot kolofonium. Högrena hartssyror, nämligen abietinsyra (90-95% ren), dehydroabietinsyra (> 99%) och isopimarsyra (> 99%) (från Helix Biotech Ltd. Richmond, B.C.. Canada) testades. Reaktionerna mot själva häftmassan _ ® . . (samma som 1 MEZINC ), mot zinkoxiden och mot de rena hartssyrorna fastställdes och framgår av nedanstående tabell l.

Slutsats: Försöken med allergitest visar att av de 14 testade patienterna, som var kontaktallergiska mot kolofonium visade mycket få samma reaktion mot de högrena enskilda syrorna och zínkoxid. Detta visar den överlägsna effekten hos ett medel enligt uppfinningen.

Toxisk effekt: Den cytotoxiska effekten in vitro studerades för dehydroabie- tinsyra, en representativ förening använd enligt uppfinningen, på humana polymorfonukleära leukocyter (PMN-celler) med an- vändning av uppmätning av läckage av 5lCr från märkta celler 5lCr infördes i PM-celler.

Cellmenbranskada visar sig i ök- ad plasmamembranpermeabilitet medförande ett förhöjt läckage av cytoplasmiskt lokaliserat 5lCr.

Framställning av celler för bedömning av cytotoxicitet: Venöst blod från frivilliga vuxna erhölls i syra-citrat-dextros-rör.

Granulocyterna isolerades från erytrocyterna genom dextran- sedimentation i huvudsak (Cline M J (ed): 198121-38). rifugerades vid l60xg under lO minuter vid 4°C. övervätskan enligt metoden av Babior och Cohen New York: Churchill- Den leukocytiska cellplasman cent- Leukocyte function, -Livingstone. kastades bort och kvarvarande erytrocyter eliminerades genom tillsats av iskallt destillerat vatten och efter 30 sekunder återställdes toxíciteten med iskyld 0,6 M Na Cl. Cellerna 5 minuter vid 4°C) och disper- 7 10 tvättades tre gånger (160 xg. gerades slutligen i iskall RPMI, celler/ml. Cellsuspen- sionen bestod av 90% PMN-celler. 51 Cellsuspensionen ínkuberades med Na Cr RO4 (90 u Ci/ml, 10 15 20 25 30 35 502 495 du Pont de Nemours, Dreieich. Västtyskland) under 60 minuter vid 37°C, tvättades fyra gånger (l60xg, 5 minuter vid 4°C) och dispergerades i modifierad GBSS (se nedan) till 107 cell- er/ml.

Som zinkkälla användes ett filtrat av Zn 0 framställd genom att bereda en zinkoxidsuspension av 179 mg Zn 0 (Merck, Darm- stadt. Västtyskland) och 100 ml modifierad Gey's lösning (modifierad GBSS bestående av 8 g Na Cl, 0,37 g KCl. 0.07 g MgSO4. 7H2O, 0,21 g MgCl2, 6H2O. 0,22 g CaCl2.H2O. 1,0 g glukos och 2,38 g HEPES försatt med 1000 ml vatten. pH 7,3), genom ett 0.2 um membranfilter och filtratet användes för som omrördes 20 timmar vid 37°C. Suspensionen matades experimentet. Dehydroabietinsyra (DHAA) användes i form av en förrâdslösning av DHAA (renhet > 99% från Helix Biotech Ltd, Vancouver, Canada) beredd genom att lösa 100 mg DHAA i 1 ml 99% etanol.

Testlösningarna iordningställdes 30 minuter före tillsats av PMN-cellerna och bestod av DHAA; 0-500 ug/ml, 300 umol/l. med och utan zinkoxid som ovannämnda filtrat. 50 ul 5lCr-märkta PMN-celler blandades med 100 ul av testlösningarna på en vävnadsodlingsplatta med 96 fördjupning- ar (Linbro Flow Lab) i trippeluppsättningar. På varje platta användes sex fördjupningar utan DHAA-tillsats med eller utan zinkoxidfiltrat som kontrollprov. Efter att ha fyllts på med testlösningarna inkuberades plattorna i 60 minuter vid 37°C, centrifugerades 500xg i 5 minuter och radioaktiviteten (counts per 120 s) mättes i 75 ul övervätska i en gamma-scintilla- tionsspektrometer (Auto-gamma Scintillašion Spectrometer Pack- Cr. framräknades med ekvationen: ard). Den procentuella utsöndningen av indikerande cellmembranskada. läckage - läckage spontant % cytotoxitet = 100 läckage max - läckage spontant Det spontana läckaget översteg aldrig 10% av maximalt läckage. 10 502 495 Resultat: Resultatet framgår av Fig. 2. Toxiska effekter på PMN-cellerna iakttogs vid låga koncentrationer av DHAA (20 ug/ml). En markant ökning i toxicitet erfors sedan upp till 250 ug/ml DHAA. När zinkoxidfiltratet användes tillsam- mans med DHAA uppmättes ingen toxisk effekt av DHAA upp till 100 ng/ml. Från ca 125 ng/ml registrerades endast en svag toxicitet.

Sammanfattningsvis uppvisar sålunda mediet enligt uppfinningen utmärkta. oväntade egenskaper. som gör medlet mycket väl läm- pat att använda i olika hud- och slemhinnebehandlingsprodukter och i produkter såsom byggmaterial (träfiberskivor och isoler- ingsmaterial), papper och ytbehandlingsmaterial (färg och dy- likt).

Claims (8)

10 15 20 25 30 35 502 495 Patentkrav

1. Medel med antimikrobiell effekt och ringa eller helt upp- hävd tendens att framkalla kontaktallergiska reaktioner eller toxiska effekter, k ä n n e t e c k n a t av att det väs- entligen består av en blandning av a) en Zn2+-joner av- givande förening och b) en eller flera i renast möjliga form föreliggande hartssyror såsom abietinsyra, dehydroabietinsyra, neoabietinsyra, pimarsyra, levopimarsyra, isopimarsyra och palustrinsyra eller hartssyraderivat såsom dehydroabietylamin.

2. Medel enligt krav 1 för användning i en hud- eller sår- behandlingsprodukt såsom ett sårförband, en spollösning för medicinskt bruk eller för munhåle/tandbehandling.

3. Medel enligt krav 1 eller 2, k ä n n e t e c k n a t av 2+ att den zn -joner avgivande föreningen är zn 0.

4. Medel enligt krav 1-3, k ä n n e t e c k n a t av att komponenten b) utgöres av dehydroabietinsyra.

5. Medel enligt något av föregående krav, k ä n n e t e c k - n a t av att komponenterna a) och b) ingår i medlet i ett viktförhållande av mellan 1:2 och 20:1. räknat på Zn2+ som Zn O och på ren syrakomponent.

6. Användning av medlet enligt krav 1 i hud- och särbehand- lingsprodukt, såsom ett sårförband. en spollösning för medi- cinskt bruk eller för munhåle/tandbehandling. _ »

7. Användning av medlet enligt krav 1 i produkter såsom iso- leringsmaterial, byggmaterial, papper, ytbehandlingsmaterial, färger, limmer, rengöringsmedel, desinfektionsmedel, kosmetika och liknande produkter, som konventionellt innehåller olika typer av hartser.

8. Användning enligt krav 6 eller 7, varvid även joner av kalcium och/eller magnesium ingår.