SE1330045A1 - Komposition innefattande fosfatidylalkanol för QNMR - Google Patents

Abstract

Den föreliggande uppfinningen visar en komposition innefattande en förening enligt formel I samt ett deutererat lösningsmedel. Det deutererade lösningsmedlet är blandbart med vatten i vilket förhållande som helst vid en temperatur från 20 till 25 °C och innefattar mindre än 5 % kvarvarandeH-isotoper. Koncentrationen av föreningen enligt formel I kan på ett fördelaktigt sätt bestämmas genomH-QNMR.Även framställningsförfaranden för kompositionen och salter av föreningar enligt formel I beskrivs.(Publiceras med fig. 8)

Description

15 20 25 30 2 Zheng et al. (Clinica Chimica Acta, 2011, 1428-1435) beskriver ett LC- ESI-MS(/MS)-förfarande för samtidig kvalitativ och kvantitativ bestämning av PEth- formeri helblodprover. Kommersiellt tillgänglig eller syntetiskt framställd PEth- _ 16:0/18:1, PEth-16:0/18:2, deuteriummärkt PEth-16:0/18:1, deuteriummärkt PEth- 1610/1822 och fosfatidylpropanol (PProp-18:1/18:1) användes som referensmateri- al eller interna standarder för kvalitativ och/eller kvantitativ bestämning av olika PEth-homologer.

WO2012005680 A1 beskriver förfaranden för utvärdering av tidigare etanolexponering genom att ta reda på ett förhållande mellan en eller flera biopre- kursorer för PEth och en eller flera PEth-homologer i ett prov. Förfaranden som innefattar steget av avlägsnande av karboxylsyrarester från PEth genom selektiv hydrolys eller selektiv transförestring följt av kvantifiering av de resulterande re- spektive produkterna beskrivs också.

Kvantitativ kärnmagnetisk resonans (QNMR)-spektroskopi är allmänt accepterad som ett kvalitativt och kvantitativt analysverktyg. QNMR kan användas som ett alternativ till, eller som en kompletterande teknik för, traditionella analys- metoder, såsom t.ex. metoder som är beroende av kromatografisk separering av organiska föreningar, för kvantifiering av en eller flera föreningar av intresse. En stor fördel med QNMR, ijämförelse med de flesta traditionella analysmetoder, är avsaknaden av krav på ett identiskt standardreferensmaterial för kvantitativ be- stämning av en organisk förening av intresse i lösning. Användbara kärnor för kvantitativ bestämning med utnyttjande av QNMR-tekniker inkluderar 1H (1H- QNMR), “P (MP-QNMR) eeh ”F (wF-QNMR), av virke den företa i regel är den mest användbara, beroende på en utbredd* förekomst i kombination med för det mesta tydliga signaler, från vilka önskat noggranna och exakta rådata kan samlas in.

JPH11174139 A1 beskriver ett förfarande för kvantitativ bestämning av en blandning innefattande ett ytaktivt medel som använder 1H-QNMR med utnytt- jande av en intern standard. _ Kärnmagnetisk resonans (NMR)-analys av 1H-(1H-NMR)- och 13C-(13C- NMR)-kärnorna hos lipofila lipider, inklusive PEth, dess mindre lipofila huvudpre- kursor fosfatidylkolin (PC) och den strukturellt besläktade fosfatidyletanolaminen (PE), utförs vanligast i fettlösande lipofila lösningsmedel, typiskt deutererad Kloro- 10 15 20 25 30 3 form (CDCI3), med en valfri tillsats av deutererad metanol (CD3OD) som en mindre beståndsdel i fallet av t.ex. PC.

Kihara et al. (Chem. Pharm. Bull., 1994, 289-292) använde CDCl3 som lösningsmedel för iH-NMR-analys av PE-16:O/18:2 (förening 12) och natriumsaltet av 1-palmitoyl-2-linoleoylfosfatidylmetanoI (förening 13), av vilka den senare är strukturellt och fysiokemiskt mycket lik PEth-16:0/18:2.

Willmann et al. (Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2011, 1-8) använde en 2:1-b|andning av CDCI3 och deutererad metanol (CD3OD) för 1H- och ”C-NMR-analys av olika fosfatidylkoliner (PC:er).

Lehnhardt et al. (NMR Biomed. 2001, 307-317) använde deutererat vat- ten (D20) som lösningsmedel och 3-(trimetylsilyl)propionsyra som intern standard vid kvantitativ bestämning genom 1H-QNMR av olika fosfolipider, även om de inte inkluderade PEth eller någon annan alkylanalog därav. Kvantitativ bestämning av sådana lipider med utnyttjande av “P-QNMR i en matris innefattande en 8:2- blandning av vatten och D20, Na-cholat och EDTA, med användande av fosfono- metyl-glycerol som intern referens, beskrivs också där.

I Vyssotski et al. (Lipids, 2009, 381-389) beskriver kvantitativ bestämning av olika lipider, inklusive PEth och alkylanaloger, med utnyttjande av “P-QNMR i en matris innefattande en 8:2-blandning av vatten och D20, Na-cholat och EDTA, med användande av fosfonometylglycin som intern referens.

Lancée-Hermkens et al. (Biochimica et Biophysica Acta, 1977, 141- 151) beskriver ”C-NMR-analys av PC-biskikt med olika fettsyra- och sterolsam- mansättning. NMR-spektra kördes i en DgO-baserad matris. Man observerade att kolesterol interagerade med PC, vilken interaktion för det mesta visade sig som-en ökad linjebreddning av ”C-NMR-signalerna för den hydrofoba delen av PC-et.

Detta resultat antyder att 1H-NMR-signalerna för liknande lipider, t.ex. PEth, kan bli bredare i närvaron av anda amfifila komponenter, såsom t.ex. Na-cholat eller lik- nande, i ett polärt lösningsmedel.

För närvarande är alla LC-MS-baserade metoder som utnyttjas för kvantitativ bestämning av fosfatidylalkanoler, såsom t.ex. PEth i blodprover, inklu- sive de nämnda här ovan, beroende av referenslösningar för analys, typiskt lös- ningar innefattande en enda fosfatidylalkanol eller -analog i vilka koncentrationen därav är känd, för utarbetande av standardkurvor för kvantifiering och/eller kvanti- tativ instrumentkalibrering. Den vanliga laboratorietekniken som används för fram- 10 20 25 30 4 _ ställning av sådana referenslösningar involverar exakt vägning av referensför- eningen, följd av tillsättande till en exakt volym av ett lämpligt lösningsmedel. Felet i slutkoncentration hos referensen är beroende av faktorer som inkluderar t.ex. vägningsfel, fel vid antagande om referensmaterialets renhet, fel vid mätning av lösningsmedelsvolymen och fel relaterade till ofullständig upplösning av referens- materlalet. Dessutom och nog så viktigt är att felet i slutkoncentration hos referen- sen omvandlas till ett fel i den bestämda koncentrationen av fosfatidylalkanolen, såsom t.ex. PEth, l det analyserade provet.

Förbättrade kompositioner innefattande fosfatidylalkanolen såsom t.ex. en förbättrad referenslösning av en fosfatidylalkanol, är därför önskvärda för en förenklad, mera exakt och/eller mera noggrann bestämning av fosfatidylalkanoler, såsom t.ex. PEth, i prover, såsom t.ex. humana blodprover.

SAMMANFATTNING Med tanke på nackdelarna nämnda ovan är ett syfte med den förelig- gande uppfinningen att tillhandahålla en komposition innefattande en fosfatidylal- kanol, i vilken koncentrationen därav kan bestämmas genom en teknik som inte är beroende av exakt vägning av denna fosfatidylalkanol vid framställningen av kom- positionen. ' Ett annat syfte med den föreliggande uppfinningen är att tillhandahålla en komposition innefattande en fosfatidylalkanol, i vilken koncentrationen därav kan bestämmas genom en teknik som inte är beroende av kunskap om den exakta renheten hos denna fosfatidylalkanol före framställningen av kompositionen.

Ett ytterligare syfte med den föreliggande uppfinningen är att tillhanda- hålla en komposition innefattande en fosfatidylalkanol, vilken komposition är blandbar med vatten eller vattenhaltiga lösningar för att medge framställning ge- nom* spädning av vattenhaltiga referenslösningar för analys med en känd koncent- ration av fosfatidylalkanolen utan behov av avlägsnande av ett lösningsmedel som inte är blandbart med vatten.

Enligt en aspekt av den föreliggande uppfinningen har dessa och andra syften, som kommer att framgå från den efterföljande beskrivningen, nu uppnåtts med en komposition som innefattar en förening enligt formel I 10 15 20 25 /RZ O Oyya A R1/ P Rs Ho/ ,°o (l) eller vilket salt, vilken diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke- racemisk blandning eller isotopiskt berikad form därav som helst, samt ett deutere- rat lösningsmedel, varvid R1 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R2 är vald från gruppen be- stående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A- Q, R3 är -C1-6 alkyl, A är en länkgrupp som innefattar 2 till 20 kolatomer, Q är en spektrofotometriskt eller fluorometriskt detekterbar molekyldel som innefattar minst en aromatisk karbocykel eller heterocykel, varvid summan av föreningen enligt formel l och vilken saltform, diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke- racemisk blandning och isotopiskt berikad form därav som helst överskrider 0,05 mmol/gav kompositionen och varvid det deutererade lösningsmedlet är blandbart med vatten i vilket förhållande som helst vid en temperatur från 20 till 25 °C och innefattar mindre än 5 % kvarvarande 1H-isotoper.

Koncentrationen av föreningen enligt formel I hos den föreliggande kompositionen kan fördelaktigt bestämmas genom QNMR, inklusive 1H-QNMR och 31P- QNMR. Sådana QNMR-tekniker medger dessutom icke-förstörande peri- odisk kontroll av koncentrationen utan att ens behöva öppna den behållare i vilken kompositionen förvararas, förutsatt att denna behållare är ett lämpligt NMR-rör.

Följaktligen kan den analytiska kemisten lätt kontrollera sina referenslösningar för analys när dessa föreliggeri form av den föreliggande kompositionen.

Enligt en annan aspekt av den föreliggande uppfinningen kan förening- en enligt formel I vara isotopiskt berikad med deuterium, eller vilken annan lämplig tung isotop som helst som är känd inom teknikområdet. 15 20 25 30 6 Molekylvikten hos en sådan isotopiskt berikad förening enligt formel l är högre än för den motsvarande föreningen som inte är isotopiskt berikad, varige- nom analytisk differentiering med utnyttjande av t.ex. LC-MS(/MS) medges. En sådan isotopiskt berikad förening enligt formel I kan till exempel därför på ett för- delaktigt sätt användas som analysreferens genom att spetsa prover, i vilka den icke-isotopiskt berikade föreningen enligt formel l håller på att kvantifieras, med en känd mängd.

Enligt ännu en annan aspekt av den föreliggande uppfinningen kan det deutererade lösningsmedlet ha en kokpunkt överstigande 100 °C vid atmosfärs- tryck.

En sådan relativt hög kokpunkt resulterar på ett fördelaktigt sätt i en re- lativt låg självavdunstning av det deutererade lösningsmedlet från kompositionen när den förvaras i en öppen behållare vid omgivningstemperatur. Förändringen i koncentration av föreningen enligt formel I i kompositionen minimeras på så sätt, till exempel vid upprepad öppning och stängning av förvaringsbehållaren vid av- lägsnande av alikvoter för användning vid t.ex. kvantitativ kalibrering av analysin- strument.

Enligt ännu en annan aspekt av den föreliggande uppfinningen kan kompositionen dessutom innefatta ett amfifilt tillsatsmedel i en mängd som över- skrider 1 mg/g av kompositionen. Det amfifila tillsatsmedlet kan vara en detergent vald från gruppen bestående av anjoniska, katjoniska, nonjoniska och zwitter- joniska detergenter.

Fördelar med närvaron av ett amfifilt tillsatsmedel iden föreliggande kompositionen inkluderar ökning av lösligheten hos föreningen enligt formel l.

Kompositionen kan följaktligen innefatta en relativt hög koncentration av förening- en enligt formel I, varigenom bestämningen av koncentrationen genom t.ex.

QNMR underlättas och kan göras med en större noggrannhet. Dessutom minime- ras risken för utfällning av föreningen enligt formel vid tillsättande av komposition- en till en vattenhaltig matris beroende på det amfifila tillsatsmedlets kemiska inter- aktion. 10 15 20 25 30 7 Enligt ännu en annan aspekt av den föreliggande uppfinningen kan kompositionen dessutom innefatta en intern referens, varvid den interna referen- sen finns närvarande i en mängd för att medge detektering genom NMR inom en tidsperiod som är väsentligen lika lång som eller kortare än den tidsperiod som behövs för detektering genom NMR av föreningen enligt formel I och frambringar minst en NMR-signal som hänför sig till en undersökt kärna, vilken NMR-signal är lämplig/för integrering och är väsentligen åtskild från alla NMR-signaler för före- ningen enligt formel l som hänför sig till samma undersökta kärna vid generering av ett NMR-spektrum för kompositionen.

Fördelar med en intern referens inkluderar den kommersiella lättillgäng- ligheten av lämpliga interna referenser som är validerade för användning vid QNMR. Följaktligen behövs ingen separat validering av en ytterligare komponent hos kompositionen som frambringar minst en lämplig NMR-referenssignal.

Enligt ytterligare en annan aspekt av uppfinningen kan kompositionen dessutom innefatta ett tillsatsmedel valt från gruppen bestående av starka lös- . ningsmedel, polära modifieringsmedel, antioxidanter, konserveringsmedel, pH- reglerande medel, färgämnen och torkmedel.

Ett sådant tillsatsmedel, i synnerhet starka lösningsmedel och polära modifieringsmedel, kan på ett fördelaktigt sätt flytta skiftet något eller förbättra lin- jeformen eller upplösningen hos NMR-signalerna för föreningar enligt formel I, så att integraler av dessa kan samlas in med en större noggrannhet i QNMR- tillämpningar. Ett sådant tillsatsmedel, isynnerhet antioxidanter, konserverings- medel, pH-reglerande medel, färgämnen och torkmedel, kan ytterligare öka stabili- teten hos föreningen enligt formel I, varigenom minskningen i koncentration över tiden minimeras.

Enligt ännu en ytterligare aspekt av den föreliggande uppfinningen till- handahålls ett salt av en förening enligt formel l 10 20 25 30 eller vilken diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke- racemisk blandning eller isotopiskt berikad form därav som helst, varvid R1 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R2 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R3 är etyl, A är en länkgrupp som innefattar 2 till 20 kolatomer, Q är en spektrofotometriskt eller fluorometriskt detek- terbar molekyldel som innefattat minst en aromatisk karbocykel eller heterocykel och varvid saltet är valt från gruppen bestående av ammoniumsalter, alkyl- ammoniumsalter, dialkylammoniumsalter i vilka alkylgrupperna är alkylgrupper valda oberoende av varandra och trialkylammoniumsalter i vilka alkylgrupperna är alkylgrupper valda oberoende av varandra. l motsats till den protonerade ursprungsformen av föreningar enligt for- mel I, som tenderar till att föreligga i form av tjocka, klibbiga siraper, har sådana salter en större tendens till att föreligga i en fast amorf eller kristallin form som är lättare att hantera vid framställningen av t.ex. den föreliggande kompositionen.

Enligt ytterligare en annan aspekt av den föreliggande uppfinningen till- handahålls ett framställningsförfarande för kompositionen, som innefattar stegen: (i) att behandla föreningen enligt formel l med det deutererade lösningsmedlet tills all förening enligt formel l eller en del därav är löst i det deutererade lösningsmed- let, för att erhålla en första intermediär komposition, samt (ii) att, om den första in- termediära kompositionen innehåller heterogent material, valfritt avlägsna det heterogena materialet genom filtrering eller dekantering, Detta framställningsförfarande resulterar på ett fördelaktigt sätt i en komposition med låg risk för att bli övermättad med avseende på föreningen enligt formel I. Risken för efterföljande utfällning av en del av föreningen enligt formel l, varigenom koncentrationen av föreningen enligt formel I i kompositionen sjunker, minimeras på så sätt. 10 20 25 30 Enligt ännu en ytterligare aspekt av den föreliggande uppfinningen till- handahålls ett framställningsförfarande för kompositionen, som innefattar stegen: (i) att behandla föreningen enligt formel l med ett starkt lösningsmedel tills all före- ning enligt formel I eller en del därav är löst i det starka lösningsmedlet, för att er- hålla en andra intermediär komposition, (ii) att blanda den andra intermediära i kompositionen med det deutererade lösningsmedlet, för att erhålla en tredje inter- mediär komposition, (iii) att avlägsna mera än 95 % av det starka lösningsmedlet från den tredje intermediära kompositionen genom destillation eller indunstning, för att erhålla en fiärde intermediär komposition, samt (iv) att, om den fjärde inter- mediära kompositionen innehåller heterogent material, valfritt avlägsna det heterogena materialet genom filtrering eller dekantering, varvid det starka lös- ningsmedlet har en kokpunkt som är minst 20 °C lägre än kokpunkten hos nämnda deutererade lösningsmedel och i vilket lösligheten av föreningen enligt formel l är minst 1 mg/ml av det starka lösningsmedlet vid en temperatur om 25 °C.

Detta framställningsförfarande är på ett fördelaktigt sätt relativt snabbt i jämförelse med andra förfaranden som är beroende av upplösningskinetiken för föreningen enligt formel l i det deutererade lösningsmedlet. Dessutom resulterar spårmängder av inneboende kvarvarande starkt lösningsmedel i slutkomposition- en i en förskjutning nedåt fältet av 1H-NMR-signaler från protoner som ligger närmast fosforatomen hos föreningar enligt formel 1. Denna förskjutning nedåt fäl- tet kan på ett fördelaktigt sätt resultera i en enklare integrering av dessa signaler i 1H-QNMR-tillämpningar jämfört med fallet när inga spårmängder av det starka lös- ningsmedlet finns närvarande.

Enligt ännu en annan aspekt av den föreliggande uppfinningen tillhan- dahålls ett förfarande för bestämning av koncentrationen av en förening enligt for- mel l i kompositionen genom QNMR, som innefattar stegen: (i) att samla in minst två NMR-signaler som hänför sig till en undersökt kärna hos kompositionen, (ii) att samla in integralen för minst en isolerad NMR-signal frambringad av föreningen enligt formel I och minst en isolerad NMR-signal frambringad av en bestämnings- komponent, samt (iii) att beräkna koncentrationen av föreningen enligt formel l ut- gående från integralerna insamlade i steg (ii), varvid mängden av bestämnings- 10 15 20 25 30 10 komponenten eller koncentrationen av bestämningskomponenten i kompositionen är känd, varvid bestämningskomponenten är vald från gruppen bestående av kvarvarande protonerat lösningsmedel i det deutererade lösningsmedlet när den undersökta kärnan hos kompositionen är 1H, det amfifila tillsatsmedlet, den interna referensen, en extern referens och tillsatsmedlet.

Bestämning av koncentrationen med utnyttjande av QNMR-tekniker medger icke-förstörande periodisk kontroll av koncentrationen utan att ens behöva öppna den behållare i vilken kompositionen förvaras, förutsatt att denna behållare är ett lämpligt NMR-rör. Följaktligen kan den analytiska kemisten lätt kontrollera sina referenslösningar för analys när dessa föreligger i form av den föreliggande kompositionen.

Ytterligare särdrag hos uppfinningen och dess utföringsformer anges i de bilagda patentkraven.

KORTFATTAD BESKRIVNING AV F IGURERNA Områden av särskilt intresse hos 1H-NMR-spektra, körda i en 400 MHz- spektrometer, för PEth-16:0/18:1, en förening enligt formel l, i sin protonerade ur- sprungsform, i sin trimetylaminsaltform eller i sin ammoniumsaltform, i olika lös- ningsmedel och med eller utan amfifila tillsatsmedel och/eller interna referenser, avbildas ifigurerna 1 till 11 nedan. Signalerna som härrör från olika väteatomer hos PEth-16:0/18:1 är markerade i figurerna 1 till 11 såsom visas på ritningen ne- dan och de som härrör från ett amfifilt tillsatsmedel eller en intern referens med Hadd respektive Href. Signalerna markerade med Hadd representerar signaler för det amfifila tillsatsmedlet som kan användas som 1H-QNMR-referensignaler för kvantifiering av föreningen enligt formel l, i synnerhet när åtskilda från alla signaler för föreningen enligt formel I, enligt olika utföringsformer av uppfinningen. Signa- lerna som är markerade i figurerna 1 till 11 såsom visas på ritningen nedan repre- senterar signaler som kan användas som 1H-QNMR-representativa signaler för föreningar enligt formel I för kvantifiering av föreningen enligt formel l, i synnerhet när åtskilda från alla övriga signaler för kompositionen, enligt olika utföringsformer av uppfinningen. Om inget annat anges är den interna referensen, för vilken den motsvarande signalen (Href) visas i figurerna 1 till 11, dimetylsulfon (CAS-nr: 67- 71-0). 10 15 20 25 11 HOlefifl o* \ H cH HE / (cHzí l x CH o (cH2)7 H (CHQMYOY-NO oÄcHs O H H x H H O O I 1 H it \ H HM H [H, HNMea Or HNH3] A2 B C lndikerade protongrupper hos den protonerade formen, trimetylaminsaltformen och ammoniumsaltformen av PEth-16:0/18:1.

Andra aspekter, särdrag och fördelar som uppfinningen kan ha kommer att bli uppenbara och förklaras av den efterföljande beskrivningen av icke- begränsande utföringsformer av den föreliggande uppfinningen, varvid det hänvi- sas till de bilagda figurerna, där fig. 1 visar 1H-NMR-spektra för den protonerade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 i: (A) en blandning av CDCI3 (CAS-nr: 865-49-6) och CD3OD (CAS-nr: 811-98-3) (411, v:v) och (B) CDClg, vid en koncentration om 10 mg/ml, (C) CDC|3 vid en koncentration om 1 mg/ml, fig. 2 visar 1H-NMR-spektra för den protonerade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 i: (A) DMSO-d6 (CAS-nr: 2206-27-1) med spår av CDC|3 vid en koncentration om ungefär 3 mg/ml framställd genom avlägsnande genom destillat- ion under vakuum av mera än 95 % av CDCl3:en från en lösning av den protone- rade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 i en blandning av DMSO-d6 och CDCI3 (1 :2, v:v), enligt en utföringsform, (B) DMSO-d6 vid en koncentration om ungefär 2 mg/ml och (C) en blandning av DMSO-d6 och CD3OD (4:1, v:v), vid en koncentrat- ion om ungefär 2 mg/ml, fig. 3 visar 1H-NMR-spektra för den protonerade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 i: (A) aceton-d6 (CAS-nr: 666-52-4) vid en koncentration om unge- fär 3 mg/ml och (B) en blandning av aceton-d6 och CD3OD (4:1, v:v) vid en kon- centration om ungefär 2 mg/ml, 10 15 20 25 30 12 fig. 4 visar lH-NMR-spektra för den protonerade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 i: (A) en lösning av SDS (CAS-nr: 151-21-3) (16 mg/ml) i DMSO- d6 med spår av CDCI3 framställd genom avlägsnande genom destillation under vakuum av mera än 95 % av CDC|3:en från en lösning av den protonerade ur- l sprungsformen av PEth-16:0/18:1 och SDS i en blandning av DMSO-d6 och CDCl3 (112, v:v), enligt en utföringsform, och (B) en lösning av SDS (5 mg/ml) i en blandning av DMSO-d6 och CDClg (122, v:v), fig. 5 visar 1H-NMR-spektra för den protonerade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 i: (A) en blandning av DMF-d7 (CAS-nr: 4472-41-7) och CDSOD (411, v:v), (B) en blandning av MeCN-d3 (CAS-nr: 2206-26-0) och CD3OD (3:1, v:v), (C) en blandning av aceton-d6 och THF-d8 (CAS-nr: 1693-74-9) (1 :1, v:v) och (D) THF-d8 vid en koncentration om ungefär 4 mg/ml, fig. 6 visar 1H-NMR-spektra för olika saltformer av PEth-16:0/18:1: (A) ammoniumsaltformen i CDCI3 vid en koncentration om ungefär 1 mg/ml och (B) trimetylammoniumsaltformen i CDCI3 vid en koncentration om ungefär 1 mg/ml, fig. 7 visar 1H-NMR-spektrumet för en lösning av trimetylammoniumsalt- formen av PEth-16:0/18:1 i DMSO-d6 (ungefär 3 mg/ml) erhållen genom skakning av ett överskott av trimetylammoniumsaltformen av PEth-16:0/18:1 i DMSO-d6 vid 38 °C under 15 min, följt av avkylning till 22 °C och dekantering, enligt en utfö- ringsform, fig. 8 visar 1H-NMR-spektra för olika saltformer av PEth-16:0/18:1; (A) ammoniumsaltformen i en lösning av SDS (34 mg/ml) i DMSO-d6, (B) trimety- lammoniumsaltformen i en lösning av SDS (6 mg/ml) i DMSO-d6 med spår av CHZCIZ framställd genom avlägsnande genom destillation under vakuum av mera än 95 % av CH2Cl2:en från en lösning av trimetylammoniumsaltformen av PEth- 16:0/18:1 och SDS i en blandning av DMSO-d6 och CH2Cl2 (114, v:v), enligt en ut- föringsform, (C) trimetylammoniumsaltformen i en lösning av SDS (6 mg/ml) i DMSO-d6 erhållen genom skakning av ett överskott av trimetylammoniumsaltfor- men av PEth-16:0/18:1 med SDS i DMSO-d6 vid 38 °C under 15 min, följt av av- kylning till 22 °C och dekantering, enligt en utföringsform, och (D) trimetylammoni- umsaltformen ien lösning av SDS (29 mg/ml) i DMSO-d6 med spår av CH2Cl2 framställd genom avlägsnande genom destillation under vakuum av mera än 95 % av CH2Cl2:en från en lösning av trimetylammoniumsaltformen av PEth-16:0/18:1 15 20 25 30 13 och SDS i en blandning av DMSO-d6 och CHgClg (124, v:v), enligt en utförings- form, fig. 9 visar 1H-NMR-spektra för lösningar av trimetylammoniumsaltfor- men av PEth-16:0/18:1 i DMSO-d6 med spår av CHzClgi närvaro av olika amfifila tillsatsmedel erhållna genom avlägsnande genom destillation under vakuum av mera än 95 % av CHgClzzen från en lösning av trimetylammoniumsaltformen av PEth-16:0/18:1 och det amfifila tillsatsmedlet i en blandning av DMSO-d6 och CHZCIZ (114, v:v), enligt olika utföringsformer: i (A) är det amfifila tillsatsmedlet Na- AOT (CAS-nr: 577-11-7) med en koncentration om 80 mg/ml, i (B) är det amfifila tillsatsmedlet Triton- X 100 (CAS-nr: 9002-93-1) med en koncentration om 46 mg/ml och i (C) är det amfifila tillsatsmedlet Tween 20 (CAS-nr: 9005-64-5) med en koncentration om 42 mg/ml, _ fig. 10 visar 1H-NMR-spektra för olika saltformer av PEth-16:0/18:1: (A) trimetylammoniumsaltformen i aceton-d6, (B) trimetylammoniumsaltformen i en blandning av aceton-d6 och CD3OD (5:1, v:v) och (C) ammoniumsaltformen i en blandning av aceton-d6 och CD3OD (3211, v:v), samt fig. 11 visar 1H-NMR-spektrumet för en lösning av trimetylammoni- umsaltformen av PEth-16:0/18:1 iTHF-d8 vid en koncentration om ungefär 1 mg/ml.

DETALJERAD BESKRIVNING Definitioner Termen "additionssalt" eller "salt" är avsedd att betyda salter bildade genom reaktion med en bas eller genom byte med en annan katjon, där en nega- tivt laddad form av ursprungsföreningen binds vid en positivt laddad form av basen eller katjonen. Termen "additionssa|t" eller "salt" innefattar även hydrater och ad- ditionsformer med lösningsmedel, såsom hydrater och alkoholater, såväl som komplex, såsom komplex med aminer i deras neutrala eller protonerade, positivt laddade form.

"A|kyl", använd ensam eller som ett suffix eller prefix, är som den an- vänds här avsedd att omfatta både förgrenade och rakkedjiga mättade alifatiska kolvätegrupper med från 1 till 25 kolatomer, eller om ett specificerat antal av kola- tomer ges avses i så fall detta specifika antal. Till exempel betecknar "C1-6 a|ky|" alkyl med 1, 2, 3, 4, 5 eller 6 kolatomer. När den specifika siffran som betecknar 10 15 20 25 30 14 alkylgruppen är heltalet O (noll) är en väteatom avsedd som substituent vid posit- ionen för alkylgruppen. Till exempel är "N(CO alkyl)2" ekvivalent med "NH2" (amino).

Exempel på alkyl inkluderar, men är ej begränsade till, metyl, etyl, n- propyl, i-propyl, n-butyl, i-butyl, sec-butyl, t-butyl, pentyl och hexyl.

"Rak alkyl", använd ensam eller som ett suffix eller prefix, är som den används här avsedd att omfatta rakkedjiga, mättade alifatiska kolvätegrupper med från 1 till 25 kolatomer, eller om ett specificerat antal av kolatomer ges avses i så fall detta specifika antal. Till exempel betecknar "rak C1-6 alkyl" alkyl med 1, 2, 3, 4, 5 eller 6 kolatomer.

Exempel på rak alkyl inkluderar, men är ej begränsade till, metyl, etyl, n-propyl, n-butyl, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl och n-oktyl.

"Alkenyl", använd ensam eller som ett suffix eller prefix, är som den an- vänds här avsedd att omfatta både förgrenade och rakkedjiga olefiniska kolväte- grupper med från 2 till 25 kolatomer och minst en dubbelbindning, eller om specifi- cerade antal av kolatomer och dubbelbindningar ges avses isåfall detta specifika antal. Till exempel betecknar "C17-19z1-4 alkenyl" alkenyl med 17, 18 eller 19 ko- latomer och 1, 2, 3 eller 4 dubbelbindningar.

"Rak alkenyl", använd ensam eller som ett suffix eller prefix, är som den används här avsedd att omfatta rakkedjiga olefiniska kolvätegrupper med från 2 till 25 kolatomer och minst en dubbelbindning, varvid dubbelbindningarna oberoende av varandra är av cis-konfiguration (Z-konfiguration) eller trans-konfiguration (E- konfiguration) och ett flertal därav är åtskilda från varandra av en mellanliggande kolatom, eller om specificerade antal av kolatomer och dubbelbindningar ges av- ses i så fall detta specifika antal. Till exempel betecknar "rak C17-19:1-4 alkenyl" rakkedjig alkenyl med 17, 18 eller 19 kolatomer och 1, 2, 3 eller4 dubbelbindning- ar som var och en oberoende av varandra kan vara av E- eller Z-konfiguration.

"Rak Z-alkeny|", använd ensam eller som ett suffix eller prefix, är som den används här avsedd att omfatta rakkedjiga olefiniska kolvätegrupper med från 2 till 25 kolatomer och minst en dubbelbindning, varvid alla dubbelbindningar är av cis-konfiguration (Z-konfiguration) och ett flertal därav är åtskilda från varandra av en mellanliggande kolatom, eller om specificerade antal av kolatomer och dubbel- bindningar ges avses i så fall detta specifika antal. Till exempel betecknar "rak 15 20 25 30 15 C17-19:1-4 Z-alkenyl" rakkedjig alkenyl med 17, 18 eller 19 kolatomer och 1, 2, 3 eller 4 Z-dubbelbindningar. _ Termen "aryl" eller "aromatisk karbocykel" avser som den används här en ringstruktur, som innefattar minst en aromatisk ring, uppbyggd av från 5 till 14 kolatomer. Ringstrukturer som innehåller 5, 6, 7 och 8 kolatomer skulle vara aro- matiska grupper med enkelring, till exempel fenyl. Ringstrukturer som innehåller 8, 9, 10, 11, 12, 13 eller 14 kolatomer skulle vara polycykliska, till exempel naftyl.

Den aromatiska ringen kan vara substituerad vid en eller flera ringpositioner. Ter- men "aryl" eller "aromatisk karbocykel" omfattar även .polycykliska ringsystem med två eller flera cykliska ringar där två eller flera kol är gemensamma för två angrän- sande ringar (ringarna är "sammansmälta ringar"), varvid minst en av ringarna är aromatisk.

"Heteroaryl", "hetaryl" eller "heterocykel" avser som de används här en aromatisk heterocykel, som har minst en ring med aromatisk karaktär (t.ex. 6 de- lokaliserade elektroner) eller minst två konjugerade ringar med aromatisk karaktär (t.ex. 4n + 2 delokaliserade elektroner, där "n" är ett heltal) och som innefattar upp till ungefär 14 kolatomer och har minst en ringmedlem som är en heteroatom, såsom svavel, syre eller kväve. Heteroaryl-, hetaryl- eller heterocykelgrupper om- fattar monocykliska och bicykliska system (t.ex. med 2 sammansmälta ringar).

Den aromatiska ringen hos heteroaryl-, hetaryl- eller heterocykelgruppen kan vara substituerad vid en eller flera ringpositioner.

Exempel på heteroaryl- eller hetarylgrupper inkluderar utan begräns- ning pyridyl (dvs. pyridinyl), pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, triazinyl, furyl (dvs. furanyl), kinolyl, tetrahydrokinolyl, isokinolyl, tetrahydroisokinolyl, tienyl, imidazolyl, tiazolyl, indolyl, pyrryl, oxazolyl, bensofuryl, bensotienyl, benstiazolyl, isoxazolyl, pyrazolyl, triazolyl, tetrazolyl, indazolyl, 1,2,4-tiadiazolyl, isotiazolyl, bensotienyl, bensimidazolyl, indolinyl och liknande.

Termen "substituerbar" avser som den används här en atom till vilken ett väte kan bindas kovalent och på vilken en annan substituent kan finnas närva- rande i stället för vätet. Ett icke-begränsande exempel på substituerbara atomer inkluderar kolatomerna hos en etylgrupp.

Termen "isotopiskt berikad" avser som den används här en förening el- ler grupp ivilken en isotop av en eller flera av atomerna som den består av finns närvarande i en mängd som är markant större än den motsvarande naturligt före- 15 20 25 30 16 kommande mängden. Icke-begränsande exempel på isotopiskt berikade förening- ar och grupper inkluderar, till exempel, CDCl3, dimetylsulfoxid-d6 och -CDHCH3, i vilka en eller flera av de substituerbara atomerna bär på zH-isotopen av väte i stäl- let för den vanligare naturligt förekommande “H-isotopen.

Utförinqsformer av uppfinningen Utföringsformer av den föreliggande uppfinningen kommer att beskrivas mera detaljerat nedan med hänvisning till de bilagda figurerna för att fackmän inom området ska kunna utöva uppfinningen. Uppfinningen kan dock ges många olika former och ska inte tolkas som om begränsad till de utföringsformer som anges här. Dessa utföringsformer ges snarare så att denna beskrivning ska bli V grundlig och fullständig och kommer att låta fackmän inom området förstå ramen för uppfinningen fullständigt. Utföringsformerna begränsar inte uppfinningen, utan uppfinningen begränsas endast av de bilagda patentkraven. Dessutom är den terminologi som används i den detaljerade beskrivningen av de specifika utförings- formerna illustrerade på de bilagda ritningarna inte avsedd att vara begränsande för uppfinningen.

Nedan kommer utföringsformer av den föreliggande uppfinningen nu att beskrivas med hänvisning till figurerna 1 till 11.

Kompositionen enligt uppfinningen innefattar i huvudsak en fosfatidylal- kanol och ett polärt, vattenblandbart deutererat lösningsmedel. Man har överras- kande funnit att NMR-signalerna, i synnerhet 1H-NMR-signaler men ej begränsat därtill, i regel är bättre lämpade för QNMR än i motsvarande kompositioner enligt den kända tekniken baserade på lipofila lösningsmedel, såsom t.ex. CDClg, som huvudbeståndsdel. Signaler av särskilt intresse, dvs. föredragna signaler, hos fos- fatidylalkanolerför1H-QNMR är de som relativt okänsliga för förväntade förore- ningar, dvs. som är åtskilda från signalerna för de föroreningar som kan bildas vid » nedbrytning av fosfatidylalkanolen. Sådana signaler inkluderar, men är ej begrän- sade till: o olefiniska signaler (här kallade "Hoiefin") och allyliska signaler för omättade fettsyrasidokedjor hos fosfatidylalkanolen, som i regel är väl åtskilda från 10 15 20 25 30 17 t.ex. föroreningar resulterande från ljus- och syreinducerad allylisk oxidation därav, o signaler härrörande från väten bundna till glycerolskelettet (här kallade för "HM "HA2", "HB" och "HC"), av vilka i regel minst en är väl åtskild från för- oreningar resulterande från hydrolytiskt avlägsnande av en eller båda av fettsyrasidokedjorna eller fosfatet eller alkanolgruppen buren av fosfatet, o signaler härrörande från de väten som är bundna till alkanolgruppen, i synnerhet de som ligger intill P-O-molekyldelen (här kallade "HEi"). som i regel är väl åtskilda från alkanolföroreningar resulterande från hydrolytiskt avlägsnande av fosfatet eller alkanolgruppen buren av fosfatet.

Samma tänkesätt gäller för andra NMR-detekterbara kärnor, såsom till exempel “P och 13C. Deuteriumet hos den föreliggande kompositionen kan, till exempel, på ett fördelaktigt sätt användas för att låsa NMR-spektrometern när den ställs in för registrering av 1H, “P och 13C. Fördelar med den föreliggande kompo- sitionen inkluderar, till exempel, separering och isolering av minst tre av signalerna "H0|efin", "HA1", "HA2", "HB" och "HC", till en grad där integrering som duger för QNMR-kvantifiering kan genomföras. Dessutom förbättras i regel kurvformen och högupplösningen för minst en av dessa signaler ijämförelse med jämförbara kom- positioner enligt den kända tekniken, vilket leder till förbättrad QNMR-kvantifiering (jämför till exempel fig. 1C med 2B, eller 1B eller 1C med 4A).

Enligt en utföringsform kan kompositionen innefatta en förening enligt formel I eller vilket salt, vilken diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke-racemisk blandning eller isotopiskt berikad form därav som helst, samt ett deutererat lösningsmedel. R1 kan vara vald från gruppen bestående av rak - u C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q. R2 kan vara 10 15 20 25 30 18 vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6.aI- kenyl och -C(=O)-A-Q. R3 kan vara -C1-6 alkyl, såsom t.ex. metyl eller etyl. A kan vara en länkgrupp som innefattar 2 till 20 kolatomer, såsom t.ex. en rak alkylen- grupp som innefattar 4 till 8 kolatomer, såsom 4 kolatomer. Q kan vara en spektro- fotometriskt eller fluorometriskt detekterbar molekyldel som in nefattat minst en aromatisk karbocykel eller heterocykel, såsom t.ex. en ytterligare substituerad eller osubstituerad fenylgrupp. Summan av föreningen enligt formel I och vilken salt- form, diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke-racemisk blandning och isotopiskt berikad form därav som helst kan överskrida 0,05 mmol/g, såsom ligga inom intervallet från 0,5 mmol/g till 10 mmol/g, av nämnda komposition. Ett sådant intervall är optimalt med hänsyn till samtidigt enkel 1H-QNMR och minimerad risk för utfällning av föreningen enligt formel I. Det deutererade lösningsmedlet kan vara blandbart med vatten i vilket förhållande som helst vid en temperatur såsom 20 till 25 °C. Det kan innefatta mindre än 5 % kvarvarande 1H-isotoper, såsom - mindre än 1, 0,5 eller 0,1 % kvarvarande 1H-isotoper, t.ex. för att möjliggöra enkla 1H-QNMR-mätningar.

Enligt en utföringsform kan R3 vara etyl och R1 och R2 kan represen- tera den förestrade formen av endogena karboxylsyror valda oberoende av varandra från gruppen bestående av mättade fettsyror, w-3-omättade fettsyror, w- 6-omättade fettsyror, w-7-omättade fettsyror och w-Q-'omättade fettsyror.

Enligt en utföringsform kan föreningen enligt formel I representera en- dogena PEth-homologer, såsom de som bildas i människan vid exponering för etanol, som är välkända inom teknikområdet.

Enligt en utföringsform kan föreningen enligt formel I vara isotopiskt be- rikad med deuterium eller vilken annan lämplig isotop som helst, som är välkänd inom teknikområdet. En sådan berikad förening kan fördelaktigt användas som ett referensmaterial i t.ex. analytiska MS- eller MS/MS-tillämpningar. Icke- begränsande exempel på isotopiskt berikade föreningar enligt formel I inkluderar föreningar i vilka alkanolgruppen, t.ex. en etanolgrupp, är fullständigt deutererad och föreningar som innefattar ett flertal ”C-isotoper. 10 15 20 25 30 19 Enligt en utföringsform kan det deutererade lösningsmedlet vara ett aprotiskt polärt lösningsmedel. Icke-begränsande exempel på sådana lösnings- medel inkluderar aceton-d6, acetonitril-d3, dimetylsulfoxid-d6, N-N- dimetylformamid-d7 (DMF-d7), N-metyl-2-pyrrolidon-d9, tetrahydrofuran-d8, pyridin-d5, 1,4-dioxan-d8 och diglym-d14. Ytterligare lämpliga deutererade, apro- tiska polära lösningsmedel är välkända inom teknikområdet och kan väljas av fackmannen utgående från den information som visas här.

Enligt en utföringsform kan det deutererade lösningsmedlet vara en ' blandning av deutererade, polära aprotiska lösningsmedel.

Enligt en utföringsform kan det deutererade lösningsmedlet ha en kok- punkt som är minst 80 °C, såsom minst 100 °C till 150 °C, företrädesvis minst 150 °C, vid atmosfärstryck.

Enligt en utföringsform kan det deutererade lösningsmedlet vara ett lät- tillgängligt och relativt billigt lösningsmedel såsom t.ex. dimetylsulfoxid-d6 (DMSO- d6), DMF-d7 eller aceton-d6.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen dessutom innefatta ett amfifilt tillsatsmedel. Ett sådant amfifilt tillsatsmedel har som ett hu- vudsyfte att hjälpa till med upplösningen av föreningen enligt formel l i en polär or- ganisk eller vattenhaltig matris. Icke-begränsande exempel på amfifila tillsatsme- del inkluderar detergenter valda från gruppen bestående av anjoniska, katjoniska, nonjoniska och zwitterjoniska detergenter. Lämpliga amfifila tillsatsmedel valda från dessa grupper, eller andra lämpliga amfifila tillsatsmedel, kan väljas av fack- mannen utgående från huvudsakligen följande egenskaper: o Förmåga att hjälpa till med upplösning av en lipofil förening i en polär miljö utan gelbildning eller ur ett NMR-perspektiv olämplig micellbild- ning. o Minsta möjliga störande signaler i det motsvarande NMR-spektrumet. o Minsta möjliga störande uppträdande i MS- och/eller MS/MS- tillämpningar. 20 Den föreliggande kompositionen kan innefatta ett amfifilt tillsatsmedel i en mängd som överskrider 1 mg/g av kompositionen, såsom 5 till 80 mg/ml av kompositionen. lcke-begränsande exempel på lämpliga amfifila tillsatsmedel inklu- derar SDS, Na-AOT, Triton-X 100, Tween 20. Ytterligare lämpliga amfifila tillsats- 5 medel inkluderar analoger och homologer av de tidigare nämnda amfifila tillsats- medlen, såsom avbildas i schemat här, varvid summan av w, x, y och z, av vilka var och en representerar ett heltal, kan ligga inom intervallet från 15 till 25, varvid heltalet n kan ligga inom intervallet från 5 till 15, R4 kan vara C8-25 alkyl, R5 kan vara C8-25 alkyl och M+ kan vara en alkalimetallkatjon eller ammonium. 10 o i Vfiwo R4 0 OH o oH OM \{\/\o,)N/\/ Z OH HO/KÄO OÅÅY/ 0 O Rs\ || _ 0 o-fi-o IW O 0 43% 0 O |_O M4- 15 Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen innefatta SDS, eller en motsvarande analog eller homolog som nämns här, som ett amfifilt tillsatsmedel, inom ett intervall av konoentrationer valda från 5 till 60, såsom 5 till 51, eller företrädesvis 25 till 35 mg/ml av kompositionen. Ett sådant intervall är op- timalt med avseende på en balans mellan att kunna köra 1H-QNMR och löslighet 20 hos föreningen enligt formel l. i 15 20 25 30 21 Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen innefatta Na-AOT, eller en motsvarande analog eller homolog som nämns här, som ett am- fifilt tillsatsmedel, inom ett intervall av koncentrationer valda från 5 till 100, såsom 19 till 80, eller företrädesvis 25 till 50 mg/ml av kompositionen. Ett sådant intervall är optimalt med avseende på en balans mellan att kunna köra 1H-QNMR och lös- lighet hos föreningen enligt formel l.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen innefatta Triton-X 100, eller en motsvarande analog eller homolog som nämns här, som ett amfifilt tillsatsmedel, inom ett intervall av koncentrationer valda från 5 till 80, såsom 8 till 46, eller företrädesvis 20 till 40 mg/ml av kompositionen. Ett sådant in- tervall är optimalt med avseende på en balans mellan att kunna köra 1H-QNMR_ och löslighet hos föreningen enligt formel I.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen innefatta Tween 20, eller en motsvarande analog eller homolog som nämns här, som ett amfifilt tillsatsmedel, inom ett intervall av koncentrationer valda från 5 till 80, såsom 5 till 42, eller företrädesvis 20 till 40 mg/ml av kompositionen. Ett sådant in- tervall är optimalt med avseende på en balans mellan att kunna köra 1H-QNMR och löslighet hos föreningen enligt formel l.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen dessutom innefatta en intern referens, för ändamålet att fungera som en kvantitativ QNMR- referens. Den interna referensen kan finnas närvarande i en mängd för att medge detektering genom NMR inom en tidsperiod som är väsentligen lika lång som eller kortare än den tidsperiod som behövs för detektering genom NMR av föreningen enligt formel I. Den interna referensen kan dessutom frambringa minst en NMR- signal som hänför sig till en undersökt kärna, vilken NMR-signal är lämplig för in- tegrering och är väsentligen åtskild från alla NMR-signaler för föreningen enligt formel l som hänför sig till samma undersökta kärna vid generering av ett NMR- spektrum för kompositionen. Valet av en lämplig intern referens görs lätt av fack- mannen som kan välja en förening, som företrädesvis är kommersiellt tillgänglig och validerad för QNMR-tillämpningar, vilken ger en signal som är lämplig för inte- 10 15 20 25 30 22 grering i ett ledigt område hos NMR-spektra och vilken signal inte ligger långt åt- skild från minst en av signalerna av intresse för föreningen enligt formel l.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen dessutom innefatta ett starkt lösningsmedel. Ett sådant starkt lösningsmedel är i regel lipofilt och kan flytta skiftet för en eller flera av NMR-signalerna av intresse till ett mera lämpligt område för integrering, såväl som öka upplösningen och finuppdelningen hos desamma (jämför till exempel fig. 2A med fig. 2B eller fig. 8B med fig. 8C).

Icke-begränsande exempel på lämpliga starka lösningsmedel inkluderar CHgClg, CD2Cl2, CHCl3 och CDCl3. Ytterligare starka lösningsmedel kan väljas av fack- mannen utgående från lipofilicitet och minsta möjliga störning av NMR-spektra och, för ändamålet av en sådan kompositions framställningsbarhet, även utgående från kokpunkt. Koncentrationen av det starka lösningsmedlet i kompositionen kan fininställas för att åstadkomma en optimal effekt. Ett lämpligt koncentrationsinter- vall kan vara 0,1 till 10, såsom 0,7 till 3,5, eller företrädesvis 0,5 till 5 mg/ml av kompositionen.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen dessutom innefatta ett polärt modifieringsmedel. Ett sådant polärt modifieringsmedel är i re- gel ett polärt protiskt lösningsmedel och kan flytta skiftet för en eller flera av NMR- signalerna av intresse till ett mera lämpligt område för integrering, såväl som öka upplösningen och finuppdelningen hos desamma (jämför till exempel fig. 2C med fig. 1A eller 2B, eller 10B med 10A). Icke-begränsande exempel på lämpliga starka lösningsmedel inkluderar korta alifatiska alkoholer, såsom metanol, företrä- desvis i en deutererad form. Koncentrationen av det polära modifieringsmedlet i kompositionen kan fininställas för att åstadkomma en optimal effekt. Ett lämpligt koncentrationsintervall kan vara 1 till 50, såsom 3 till 25, eller företrädesvis 10 till 20 volym-% av kompositionen.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen dessutom innefatta ett skyddande tillsatsmedel. Ett sådant skyddande tillsatsmedel kan skydda föreningen enligt formel l från nedbrytning, såsom luft- och/eller ljusmedie- rad nedbrytning och/eller hydrolytisk nedbrytning. Icke-begränsande exempel på 15 20 25 23 skyddande tillsatsmedel inkluderar antioxidanter, såsom t.ex. BHT eller sesamol, konserveringsmedel, pH-reglerande medel, färgämnen och torkmedel.

Enligt en utföringsform tillhandahålls ett salt av en förening enligt formel /RZ O oßm ,o\ R1” P Rs Ho/ °o Ü) eller vilken diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke-racemisk bland- ning eller isotopiskt berikad form därav som helst. Saltformen kan vara vald från gruppen bestående av ammoniumsalter, t.ex. ammoniumsaltet, alkylammonium- salter, såsom t.ex. metylammonium- eller etylammoniumsaltet, dialkylammoni- ' umsalter i vilka alkylgrupperna är alkylgrupper valda oberoende av varandra, såsom t.ex. dimetyl-, diisopropyl- eller dietylammoniumsaltet, samt trialkyl- ammoniumsalter i vilka alkylgrupperna är alkylgrupper valda oberoende av varandra, såsom t.ex. trimetyl-, diisopropylmetyl- eller trietylammoniumsaltet. Sal- tet kan även vara ett kvartenärt tetraalkylammoniumsalt. R1 kan vara vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q. R2 kan vara vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2-25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q. R3 kan vara -C1-6 alkyl, såsom t.ex. metyl eller etyl. A kan vara en länkgrupp som innefattar 2 till 20 kolatomer, såsom t.ex. en rak alkylengrupp som innefattar4 till 8 kolatomer, såsom 4 kolato- mer. Q kan vara en spektrofotometriskt eller fluorometriskt detekterbar molekyldel som innefattar minst en aromatisk karbocykel eller heterocykel, såsom t.ex. en yt- terligare substituerad eller osubstituerad fenylgrupp. R1 och R2 kan även repre- sentera den förestrade formen av endogena karboxylsyror valda oberoende av varandra från gruppen bestående av mättade fettsyror, w-S-omättade fettsyror, w- 6-omättade fettsyror, w-Y-omättade fettsyror och w-Q-omättade fettsyror. l0 15 20 25 30 24 Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen innefatta saltet av en förening av formel I, samt ett deutererat lösningsmedel, såsom polära och lipofila lösningsmedel exemplifierade av DMSO-d6 eller aceton-d6 eller THF-d8 respek- tive CDCI3. Man fann oväntat att en sådan saltform gav förbättrade 1H-NMR- spektra ijämförelse med kompositioner enligt den kända tekniken (jämför till ex- empel fig. 7 med 1B eller 2B, 10A med 1B eller 4A, 11 med 1A eller 5D, samt 1C med 6A eller 6B).

Enligt en utföringsform tillhandahålls ett framställningsförfarande för kompositionen, som innefattar stegen: (i) att behandla föreningen enligt formel I med det deutererade lösningsmedlet tills all förening enligt formel I eller en del h därav är löst i det deutererade lösningsmedlet, för att erhålla en första intermediär komposition, samt (ii) att, om den första intermediära kompositionen innehåller heterogent material, valfritt avlägsna det heterogena materialet genom filtrering el- ler dekantering.

Enligt en utföringsform tillhandahålls ett framställningsförfarande för kompositionen, som innefattar stegen: (i) att behandla föreningen enligt formel I med ett starkt lösningsmedel tills all förening enligt formel I eller en del därav är löst i det starka lösningsmedlet, för att erhålla en andra intermediär komposition, (ii) att blanda den andra intermediära kompositionen med det deutererade lös- ningsmedlet, för att erhålla en tredje intermediär komposition, (iii) att avlägsna mera än 95 % av det starka lösningsmedlet, såsom tills det starka lösningsmedlet utgör mindre än 10 mg/ml, från den tredje intermediära kompositionen genom d-es- tillation eller indunstning, för att erhålla en fjärde intermediär komposition, samt (iv) att, om den fjärde intermediära kompositionen innehåller heterogent material, val- fritt avlägsna det heterogena materialet genom filtrering eller dekantering, varvid det starka lösningsmedlet har en kokpunkt som är minst 20 °C lägre än kokpunk- ten hos nämnda deutererade lösningsmedel och i vilket lösligheten av föreningen enligt formel I är minst 1 mg/ml, såsom mera än 5 mg/ml, av det starka lösnings- medlet vid en temperatur om 25 °C.

Enligt en utföringsform tillhandahålls ett förfarande för bestämning av koncentrationen av en förening enligt formel I i kompositionen genom QNMR, 15 20 25 såsom 1H-, 31P- och ”C-QNMR, som innefattar stegen: (i) att samla in minst två NMR-signaler som hänför sig till en undersökt kärna hos kompositionen, (ii) att samla in integralen för minst en isolerad NMR-signal frambringad av föreningen enligt formel I och minst en isolerad NMR-signal frambringad av en bestämnings- komponent, samt (iii) att beräkna koncentrationen av föreningen enligt formel I ut- gående från integralerna insamlade i steg (ii), varvid mängden av bestämnings- komponenten eller koncentrationen av bestämningskomponenten i kompositionen kan vara känd, varvid bestämningskomponenten kan vara vald från gruppen be- stående av kvarvarande protonerat lösningsmedel i det deutererade lösningsmed- let när den undersökta kärnan hos kompositionen är 1H, det amfifila tillsatsmedlet, den interna referensen, en extern referens och tillsatsmedlet.

Enligt en utföringsform kan den föreliggande kompositionen användas för framställning av en standardlösning för analys. Kompositionen kan, till exem- pel, spädas i en vattenhaltig lösning, såsom t.ex. utgångsblandningen använd vid gradient-LC-MS(/MS), till en önskad koncentration, varigenom en sådan standard- lösning erhålls.

Föredragna kombinationer, som var och en representerar en utförings- form av uppfinningen, i formen av en förening enligt formel l, det deutererade lös- ningsmedlet, den interna referensen, det starka lösningsmedlet, det polära modifi- eringsmedlet och det amfifila tillsatsmedlet hos kompositionen enligt uppfinningen, finns angivna i tabellen här (utföringsform nr. 1 till 29). 26 .. .. _. _. .. n .. ._ MwÉZ mn mm .___ m~ mmm _. _. ._ _, z ._ 2.2 ä .<.w fiwå ._ _. _. _. _. _. ._ R _. .. ow _52 øoßu im ams ._ ._ ._ 3 ,. .. ,. _. m __: md åâ a=fiøš .Nää aøfu ,. _. . 9 mm __: mN mom y ._ _. ._ ß ßuáëo ._ å _. g _. .. ._ ._ .__ = z m~ OV :EON 09., Xåfløth _.. .. ._ ._ x _. .. NN ._ _. du wwmc. _. _. wÉEfl $=w :wmE _. _. ä mm ___” m N man _. ._ ,. ._ .. _. _. o~ du ÉwE _. _. _. ,. .. _.. mmäz 3 _. . o~ .___ 3 860 _. ._ =0__=m_ams_u ._ _. S mm .___ mw mmm du HmmE ._ .. ._ .. _. S _. = o~ __: 2 nøåu .. ._ x _. = 8 ._ .. _. _. _. ._ m=qëfi ä=w cum: _ muèofimum _. B ow :w øN con xèocš du HwmE _. _. .. ._ _. 3 ._ . . ._ .<.m ä? . ._ = 2 ._ _. oN ___» om aomcu .. _. _. .. _. ~« .. _. = ._ m ___” md MÜQU :Ev mÜIu .NÜÅÜ aÜmIu w _. _. S ._ = .. ._ _. _. 1 _. mIZ 3 m m __: wN mom ,. _. _. _. ._ _. _. m = ._ du mås _. ._ .. _. _. m 2 .E 2 Sm :saw _. ._ = .. .. ._ ._ ~ .. _. .. ._ .<.m_ Hmm... _. ._ .. m. , .. oN :Ez 8.3 ._ ._ .. ._ ._ m _. _. .. _. _. ._ _. mwEZ v mm __: mm mmm _. ._ _. ._ .. ._ _. m _. . 1 ._ m .___ md McS ašåïw .äßö .åfu ._ .. ._ ~ ow .E o~ oc. xåâå. .<.m mums. du wmuc. cozsmwåwëä. wuómëa z m _ 3 ^._E\mE_ 3.32 . Gïoà Éö _» =:._\m:=_._ _w _muwëmmc_1cmm_ wcm._mcw_ Eflwšmmcmcmmm . ø_~w==_=oEEn_»EE_: E ._o »mm .mvwfcmwmmšu mäå: EmwEEEnoE nuëmmf; mwEmm:_cmm_ Utmfi :_35 fiüwhünwm Hmu2zm___~m..=:_coEE@ :CO :Etta :EÉÉ :Eon .wšuoë 615m .fz .E._o=vc:_m . LuD >< .ucox >m 0:3. tfloa >m .ucox numëomokm i. tmcto.

.Eu wficwö* mo; :tom 10 15 20 25 27 Exempel på föreningar En utföringsform av uppfinningen avser ett förfarande för framställning av salter av en förening enligt formel I genom kromatografi av den motsvarande föreningen enligt formel I i sin protonerade ursprungsform eller i vilken saltform som helst med användning av en eluent som innefattar en flyktig fri bas för det motsvarande saltet som ska erhållas. Andra utföringsformer av uppfinningen avser specifika saltformer av föreningar enligt formel l, såsom t.ex. ammonium-, alkyl-Å ammonium-, dialkylammonium- och trialkylammoniumsaltformer därav, såsom ex- emplifieras här genom icke-begränsande specifika exempel.

Föreningsexempel 1 - Trimetylammoniumsaltet av PEth-16:0/18:1 PEth-1620/18:1-NMe3 3 En cylindriskt formad kiseldioxidgelkolonn, med en höjd om 85 mm och med en diameter om 50 mm, gjordes i ordning genom att låta en uppslamning av kiseldioxidgel sätta sig i densamma genom tyngdkraften i en första blandning av CH2Cl2, toluen, abs. etanol och 13 vikt-% trimetylamin i THF (79:9:10:2, v:v:v:v). 400 mg av den protonerade ursprungsformen av PEth-16:0/18:1 (PEth-16:0/18:1- H) applicerades därefter på toppen av kolonnen. Eluering utfördes därefter med utnyttjande av en gradient som började med den första blandningen och avsluta- des med en andra blandning bestående av CHgClg, toluen, abs. etanol och 13 vikt-% trimetylamin i THF (70:8:20:2, v:v:v:v). Uppsamlade fraktioner (50 ml) kon- trollerades genom TLC med användning av den andra blandningen för eluering och en blandning av 4-anisaldehyd (1 ml), konc. H2SO4 (1 ml) och ättiksyra (0,5 ml) i abs. etanol (30 ml) förframkallning av fläckarna. Fraktioner som innefattade 5 10 20 28 titelföreningen, som bedömt med användning av PEth-16:O/18:1-H som TLC- referens, sammanfördes och koncentrerades under vakuum för att ge 362 mg av PEth-16:O/18:1-NMe3 som en benvit fast substans. Exempel på 1H-NMR-spektra i olika matriserför det erhållna PEth-16:O/18:1-NMe3 visas i figurerna 6B, 7, 88, 8C, 8D, 9A, 9B, 9C, 10A,1OB och 11.

Föreningsexempe/ 2 - Ammoniumsaltet av PEth-16:0/18:1 PEth-16:0/18Z1-NH3 En cylindriskt formad kiseldioxidgelkolonn, med en höjd om 50 mm och med en diameter om 50 mm, gjordes i ordning genom att låta en uppslamning av kiseldioxidgel sätta sig i densamma genom tyngdkraften i en första blandning av CH2Cl2, toluen, abs. etanol och 25 vikt-% vattenhaltig) ammoniak (80:9:10:1, v:v:v:v). 70 mg av PEth-16:O/18:1-NMe3 applicerades därefter på toppen av ko- lonnen. Eluering utfördes därefter med utnyttjande av en gradient som började med den första blandningen och avslutades med en andra blandning bestående av CHzClg, toluen, abs. etanol och 25 vikt-% vattenhaltig ammoniak (74:8:17:1, v:v:v:v). Uppsamlade fraktioner (50 ml) kontrollerades genom TLC med använd- ning av den andra blandningen för eluering och en blandning av 4-anisaldehyd _(1 ml), konc. H2SO4 (1 ml) och ättiksyra (0,5 ml) i abs. etanol (30 ml) för framkallning av fläckarna. Fraktioner som innefattade titelföreningen, som bedömt med an- vändning av PEth-16:O/18:1- NMe3 som TLC-referens, sammanfördes och kon- centrerades under vakuum för att ge 38 mg av PEth-16:O/18:1-NH3 som en benvit, 15 20 25 29 vaxartad fast substans. Exempel på “H-NMR-spektra i olika matriser för det er- hållna PEth-16:0/18:1-NH3 visas i figurerna 6A, 8A och 10C.

Exempel på kompositioner Kompositionsexempel 1 - Framställning från lösning genom koncentrat- ion under vakuum En 10 ml flaska med en pilformad botten fylldes med föreningen enligt formel I PEth-16:0/18:1-H (7,5 mg), den interna referensen dimetylsulfon (1,3 mg), det amfifila tillsatsmedlet (0 mg), följt av tillsats av det starka lösningsmedlet CDCI3 (1,5 ml). Efter skakning av blandningen till upplösning tillsattes det deutere- rade lösningsmedlet DMSO-d6 (0,75 ml) och flaskan monterades på en roterande indunstare, arbetande vid 200 varv/min under vakuum, vid 22 °C över natten. Den erhållna lösningen överfördes till ett NMR-rör genom dekantering, följt av lH-NMR- registrering för att ge spektrumet visat i fig. 2A.

Kompositionsexemplen 1 till 11 genomfördes i analogi med Komposit- ionsexempel 1 beskrivet här ovan, såsom sammanfattas i tabellen här. Uppskatt- ning av slutkoncentrationen av föreningen enligt formel I och koncentrationen av det inneboende starka lösningsmedlet i det deutererade lösningsmedlet gjordes genom jämförelse av deras 1H-NMR-integraler med “H-NMR-integralen för den in- terna referensen.

Kompositionsexemplen 1 till 11 visar tydligt att närvaron av ett amfifilt tillsatsmedel ökar lösligheten av föreningar enligt formel l i det deutererade lös- ningsmedlet i jämförelse med fallet när ett sådant tillsatsmedel är frånvarande. 30 m :EBEV wåâæ .acc m _ Ewräa Éw wcmänzw >m 9.9. wwfimxmnan asus. wsâs så . _mcwEmwc.cwæ_ ztâm wncmwfizzw >m .ucox umbnxwnab u» .mm ä .x S ._33 ._ ._ ._ ._ 3 å a: 9:52 .vâzkh _. _. ._ _. 8 w .__ Q: xéoë» _. ._ ._ _. m ä a: Sïoøåz ,_ ._ _. _. w ä Cnäæz _. _. _. ,. ß å .wa m2. S» , ._ ._ _. _.. å a: ß x wow . _. ._ _. n zšï ä? ._ ._ Nöfu ~.,..zz.fl2\°"8.._.~.. q å ämm ._ ._ ._ _. m .å .wa 2 .\ 8» .. .. .. = ~ <~ ä... >§2ä üš =o==mWa2§u ßuówza »_80 zémQaøvc~ä H Eâäwnw :EEEV Éwävm: .www .mn _ Mwßho.. n ïnš 522-? 0:9” Emä: Emm5cmo_ oâwm .Em wcmënnw wxwmcob .må ššåm v så... fiofiïöv. sfi=cwws< Efiwflön 35% 15 20 31 Kompositionsexempe/ 12 - Framstä/Ining av komposition "AA55" genom skakning Till en 15 ml flaska fylld med SDS (505,6 mg) tillsattes DMSO-d6 (10 ml), följt av upplösning genom skakning. Totalvikten hos lösningen (lösning A) var 11,7894 g. PEth-16:0/18:1- NMe3 (30 mg) och antioxidanten BHT (2,6-di-tert- butyl-4-metylfenol, CAS-nr: 128-37-0, 1,7 mg) tillsattes därefter till lösning A, följt av tillslutning av flaskan och försiktig skakning av denna under 4 timmar vid om- givningstemperatur (22 °C). Den resulterande lösningen dekanterades från heterogent material och filtrerades genom en bomullsplugg för att ge en komposit- ion kallad "AA55" enligt uppfinningen, innefattande PEth-16:0/18:1- NMe3, deter- genten SDS och antioxidanten BHT i det deutererade lösningsmedlet DMSO-dö.

AA55 placerades under Ng och förvarades i mörker vid omgivningstemperatur.

Den befanns vara stabil vid dessa betingelser en längre tid, över flera veckor. Fem alikvoter (inom intervallet 460,3 till 475,4 mg) uttogs av AA55 och blandades var för sig med fem individuellt beredda lösningar i DMSO-d6 av QNMR-verifierad, kommersiellt tillgänglig dimetylsulfon (Sigma-Aldrich, nr 8012968580; 238,5 till 239,1 mg; 0,523 till 0,544 mg/g). 1H-QNMR-spektra samlades in för var och en av de resulterande blandningarna. Signalerna relaterade till PEth-16:0/18:1- NMe3 vid 5,06-5,12 ppm (HB), 4,26-4,31 ppm (HA1) och 4,06-4,12 ppm (HAZ), samt sig- nalen relaterad till dimetylsulfon vid 2,99 ppm integrerades. Den resulterande lis- tan med integraler användes för att beräkna koncentrationen av PEth-16:0/18:1- NMe3 i "AA55", såsom sammanfattas i ritningen här. 32 KOMPOSITION "AA55" - koncentration av ingående komponenter S .ti-r Q n :f JH w! CPEmfirn-wfl-meafl -2 “matig (090 mgfg) *i H 0 \ _ I I .Ü H Hu H u H2: Ifcs-:z Peru-ae runner-mura: Q g_ä_fi' Cæ§=41 fflgfg O Nå; SDB ÛH CBHT=1 mglg Kompositionsexempel 13 - Framstäl/ning genom skakning och upp- värmning En blandning av PEth-16:0/18:1- NMe3 (15 mg), dimetylsulfon (0,4 mg) i och DMSO-d6 (O,75 ml) skakades vid 38 °C under 15 minuter. Blandningen fick 10 därefter uppnå omgivningstemperatur (22 °C) och hölls vid denna temperatur un- der 1 timme. Lösningen separerades därefter från en glasartad fäilning genom de- kantering och överfördes till ett NMR-rör. Koncentrationen av PEth-16:0/18:1- NMe3 i lösningen uppskattades till att vara ungefär 3 mg/ml genom jämförelse av “H-NMR-irrtegraler i iH-NMR-spekrrumel (fig. 7) för signaler från PErh-1e:o/1s;1- 15 NMe3 och signalen för dimetylsulfon.

Såsom framgår vid jämförelse av slutkoncentrationen av PEth- 16:0/18:1- NMe3 i den resulterande kompositionen enligt Kompositionsexempel 12 10 15 20 25 33 med den resulterande kompositionen enligt Kompositionsexempel 13 resulterar uppvärmning av den skakade blandningen i en högre slutkoncentration jämfört med fallet när den skakade blandningen inte värms upp, även i några fall när den icke-uppvärmda blandningen innefattar en detergent. Det kan antas att den er- _ hållna koncentrationen vid utnyttjande av uppvärmnings-/kylningsproceduren (Kompositionsexempel 13) avspeglar den termodynamiskt kontrollerade löslig- hetsgränsen, medan den erhållna koncentrationen vid utnyttjande av den enkla skakningsproceduren (Kompositionsexempel 13) är kinetiskt begränsad.

Kompositionsexempel 14 - Framstä/lning genom skakning och upp- värmning En blandning av PEth-16:0/18:1- NMe3 (15 mg), dimetylsulfon (0,4 mg), SDS (4,5 mg) och DMSO-d6 (0,75 ml) skakades vid 38 °C under 15 minuter.

Blandningen fick därefter uppnå omgivningstemperatur (22 °C) och hölls vid denna temperatur under 1 timme. Lösningen separerades därefter från en glasartad fäll- ning genom dekantering och överfördes till ett NMR-rör. Ett inzoomat område av 1H-NMR-spektrumet visas i fig. 8C.

Termen "innefattar/innefattande" i patentkraven utsluter inte närvaron av andra element eller steg. Även om de anges individuellt kan dessutom ett flertal medel, element eller förfarandesteg implementeras med t.ex. en enda enhet eller processor. Även om individuella särdrag kan ingå i olika patentkrav så kan dessa dessutom eventuellt kombineras på ett fördelaktigt sätt och medtagandet i olika patentkrav innebär inte att en kombination av särdrag inte är möjlig och/eller för- delaktig. Dessutom utesluter inte hänvisningar till ental ett flertal. Termerna "en", "ett", "första", "andra" osv. utesluter inte ett flertal. Hänvisningsbeteckningar i pa- tentkraven tillhandahålls endast som ett klargörande exempel och ska inte tolkas som om de begränsar omfånget för patentkraven på något sätt.

Claims (17)

15 20 25 30 1 PATENTKRAV

1. Komposition, innefattande en förening enligt formel I ,R2 O ojvm o\ , R1” P* Rs Ho' °o (l) eller vilket salt, vilken diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke- racemisk blandning eller isotopiskt berikad form därav som helst, samt ett deutere- rat lösningsmedel, varvid R1 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2- 25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R2 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2- 25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R3 är -C1-6 alkyl, A är en länkgrupp som innefattar 2 till 20 kolatomer, Q är en spektrofotometriskt eller fluorometriskt detekterbar molekyldel som inne- fattar minst en aromatisk karbocykel eller heterocykel, varvid summan av nämnda förening enligt formel I och vilken saltform, diastereo- mer, enantiomer, racemisk blandning, icke-racemisk blandning och isotopiskt beri- kad form därav som helst överskrider 0,05 mmol/g av nämnda komposition och varvid nämnda deutererade lösningsmedel är blandbart med vatten i vilket förhål- lande som helst vid en temperatur från 20 till 25 °C och innefattar mindre än 5 % kvarvarande 1H-isotoper.

2. Komposition enligt patentkrav 1, varvid R3 är etyl och R1 och R2 representerar den förestrade formen av endogena karboxylsyror valda oberoende av varandra från gruppen bestående av mättade fettsyror, w-3- omättade fettsyror, w-G-omättade fettsyror, w-Y-omättade fettsyror och 00-9- omättade fettsyror. 10 15 20

3. Komposition enligt patentkrav 1 eller 2, varvid nämnda förening enligt formel _l är isotopiskt berikad med deuterium.

4. Komposition enligt något av de föregående patentkraven, varvid nämnda deute- rerade lösningsmedel är ett aprotiskt lösningsmedel valt från gruppen bestående av aceton-d6, acetonitril-d3, dimetylsulfoxid-dö, N-N-dimetylformamid-d7, N-metyl- ,2-pyrro|idon-d9, tetrahydrofuran-d8, pyridin-d5, 1,4-dioxan-d8 och digIym-d14.

5. Komposition enligt något av de föregående patentkraven, varvid nämnda deute- rerade lösningsmedel har en kokpunkt överstigande 100 °C vid atmosfärstryck.

6. Komposition enligt något av de föregående patentkraven, varvid nämnda deute- rerade lösningsmedel är dimetylsulfoxid-d6 eller DMF-d7.

7. Komposition enligt något av de föregående patentkraven, dessutom innefat- ' tande ett amfifilt tillsatsmedel i en mängd som överskrider 1 mg/g av nämnda komposition, varvid nämnda amfifila tillsatsmedel är en detergent vald från grup- pen bestående av anjoniska, katjoniska, nonjoniska och zwitterjoniska detergen- ter.

8. Komposition enligt patentkrav 7, varvid nämnda detergent är vald från gruppen bestående av o OVfiWoÅm o OÅÅX/OH O/\/)Y/OH ego/Kval 15 20 25 varvid summan av w, x, y och z, av vilka var och en representerar ett heltal, ligger inom intervallet från 15 till 25, heltalet n ligger inom intervallet från 5 till 15, R4 är C8-25 alkyl, R5 är C8-25 alkyl, samt M+ är en alkalimetallkatjon eller ammonium.

9. Komposition enligt något av de föregående patentkraven, dessutom innefat- tande en intern referens, varvid nämnda interna referens: finns närvarande i en mängd för att medge detektering genom NMR inom en tids- period som är väsentligen lika lång som eller kortare än den tidsperiod som be- hövs för detektering genom NMR av nämnda förening enligt formel l, samt frambringar minst en NMR-signal som hänför sig till en undersökt kärna, vilken NMR-signal är lämplig för integrering och är väsentligen åtskild från alla NMR- signaler för nämnda förening enligt formel I som hänför sig till samma undersökta kärna vid generering av ett NMR-spektrum för nämnda komposition.

10. Komposition enligt något av de föregående patentkraven, dessutom innefat- tande ett tillsatsmedel valt från gruppen bestående av starka lösningsmedel, pol- ära modifieringsmedel, antioxidanter, konserveringsmedel, pH-reglerande medel, färgämnen och torkmedel.

11. Salt av en förening enligt formel I ,R2 O o\V/l\V,o\ ,o\ R1” P Rs |+o/ °o Ü) eller vilken diastereomer, enantiomer, racemisk blandning, icke-racemisk bland- ning eller isotopiskt berikad form därav som helst, varvid 10 15 20 25 30 4 R1 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2- 25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R2 är vald från gruppen bestående av rak -C(=O)-C2-25 alkyl, rak -C(=O)-C2- 25:1-6 alkenyl och -C(=O)-A-Q, R3 är etyl, “ A är en länkgrupp som innefattar 2 till 20 kolatomer, Q är en spektrofotometriskt eller fluorometriskt detekterbar molekyldel som inne- fattar minst en aromatisk karbocykel eller heterocykel, varvid nämnda salt är valt från gruppen bestående av ammoniumsalter, alkyl- ammoniumsalter, dialkylammoniumsalter i vilka alkylgrupperna är alkylgrupper valda oberoende av varandra och trialkylammoniumsalter i vilka alkylgrupperna är alkylgrupper valda oberoende av varandra.

12. Salt enligt patentkrav 11, varvid R1 och R2 representerar den förestrade formen av endogena karboxylsyror valda oberoende av varandra från gruppen bestående av mättade fettsyror, w-3- omättade fettsyror, w-G-omättade fettsyror, w-T-omättade fettsyror och w-9- omättade fettsyror.

13. Framställningsförfarande för en komposition enligt något av patentkraven 1 till 10, innefattande stegen: (i) att behandla nämnda förening enligt formel l med nämnda deutererade lös- ningsmedel tills all förening enligt formel I eller en del därav är löst i nämnda deu- _ tererade lösningsmedel, för att erhålla en första intermediär komposition, samt (ii) att, om nämnda första intermediära komposition innefattar heterogent material, valfritt avlägsna nämnda heterogena material genom filtrering eller dekantering.

14. Framställningsförfarande för en komposition enligt något av patentkraven 5 till 10, innefattande stegen: (i) att behandla nämnda förening enligt formel l med ett starkt lösningsmedel tills all förening enligt formel I eller en del därav är löst i nämnda starka lösningsmedel, för att erhålla en andra intermediär komposition, (ii) att blanda nämnda andra intermediära komposition med nämnda deutererade lösningsmedel, för att erhålla en tredje intermediär komposition, 10 20 25 30 5 (iii) att avlägsna mera än 95 % av nämnda starka lösningsmedel från nämnda tredje intermediära komposition genom destillation eller indunstning, för att erhålla en fjärde intermediär komposition, samt (iv) att, om nämnda fiärde intermediära komposition innehåller heterogent materi- al, valfritt avlägsna nämnda heterogena material genom filtrering eller dekantering, i varvid nämnda starka lösningsmedel har en kokpunkt som är minst 20 °C lägre än kok- punkten hos nämnda deutererade lösningsmedel och ivilket lösligheten av nämnda förening enligt formel I är minst 1 mg/ml av nämnda starka lösningsmedel vid en temperatur om 25 °C.

15. Förfarande för bestämning av koncentrationen av en förening enligt formel I i en komposition enligt något av patentkraven 1 till 10 genom QNMR, innefattande stegen: (i) att samla in minst två NMR-signaler som hänför sig till en undersökt kärna hos nämnda komposition, (ii) att samla in integralen för minst en isolerad NMR-signal frambringad av nämnda förening enligt formel l och minst en isolerad NMR-signal frambringad av .en bestämningskomponent, samt (iii) att beräkna nämna koncentration av nämnda förening enligt formel I utgående från integralerna insamlade i steg (ii), varvid mängden av nämnda bestämningskomponent eller koncentrationen av nämnda bestämningskomponent i nämnda komposition är känd, varvid nämnda bestämningskomponent är vald från gruppen bestående av kvarva- rande protonerat lösningsmedel i nämnda deutererade lösningsmedel när den un- dersökta kärnan hos nämnda komposition är1H, nämnda amfifila tillsatsmedelj nämnda interna referens, en extern referens och nämnda tillsatsmedel.

16. Förfarande enligt patentkrav 15, varvid nämnda undersökta kärna är vald från gruppen bestående av 1H, “P och 13C. 6

17. Användning av en komposition enligt något av patentkraven 1 till 10 eller ett salt enligt något av patentkraven 11 eller 12 för framställning av en standardlös- ning för analys.