RU2837786C1 - Bacterial strain lactobacillus reuteri salr01, having suppressive action on helicobacter pylori - Google Patents
Bacterial strain lactobacillus reuteri salr01, having suppressive action on helicobacter pylori Download PDFInfo
- Publication number
- RU2837786C1 RU2837786C1 RU2024108396A RU2024108396A RU2837786C1 RU 2837786 C1 RU2837786 C1 RU 2837786C1 RU 2024108396 A RU2024108396 A RU 2024108396A RU 2024108396 A RU2024108396 A RU 2024108396A RU 2837786 C1 RU2837786 C1 RU 2837786C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- reuteri
- salr01
- strain
- pylori
- lactobacillus reuteri
- Prior art date
Links
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 title claims abstract description 71
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 title claims abstract description 7
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 title claims abstract description 6
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 title abstract description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title description 10
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 17
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 claims description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 15
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 11
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 8
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 208000036649 Dysbacteriosis Diseases 0.000 description 6
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 6
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 6
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 5
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 208000023652 chronic gastritis Diseases 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 4
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 4
- 101150013736 gyrB gene Proteins 0.000 description 4
- 230000000622 irritating effect Effects 0.000 description 4
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000535428 Lactobacillus reuteri DSM 20016 Species 0.000 description 3
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 3
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 3
- 241000699684 Meriones unguiculatus Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 3
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 3
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 3
- 229960000381 omeprazole Drugs 0.000 description 3
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 3-Hydroxypropionaldehyde Chemical compound OCCC=O AKXKFZDCRYJKTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 241000194026 Streptococcus gordonii Species 0.000 description 2
- 241000194019 Streptococcus mutans Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 229940016907 amoxicillin 1000 mg Drugs 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940084436 clarithromycin 500 mg Drugs 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 2
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 2
- 229940113433 esomeprazole 20 mg Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 2
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- USPHRMIDXYGOBA-HQUFOCMISA-N (2r)-1-[(e)-dec-2-enoyl]-5-hydroxy-4-(1-hydroxyethyl)-2-(2-methylpropyl)pyrrolidin-3-one Chemical compound CCCCCCC\C=C\C(=O)N1C(O)C(C(C)O)C(=O)[C@H]1CC(C)C USPHRMIDXYGOBA-HQUFOCMISA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010060934 Allergic oedema Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 206010011469 Crying Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 206010013911 Dysgeusia Diseases 0.000 description 1
- 206010015137 Eructation Diseases 0.000 description 1
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 1
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical class OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 241000699694 Gerbillinae Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 1
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000588749 Klebsiella oxytoca Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001468155 Lactobacillaceae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010061308 Neonatal infection Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- QHXAUDQIMHYILR-UHFFFAOYSA-N Reutericyclin Natural products CCCCCCCC=CC(=O)N1C(CC(C)C)C(=O)C(=C1O)C(=O)C QHXAUDQIMHYILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241001134658 Streptococcus mitis Species 0.000 description 1
- 241000239292 Theraphosidae Species 0.000 description 1
- 230000028654 Type IV pili-dependent aggregation Effects 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 208000027687 belching Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000007382 columbia agar Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 206010013864 duodenitis Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000024798 heartburn Diseases 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008991 intestinal motility Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 238000007433 macroscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000011586 mongolian gerbil model Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000002644 neurohormonal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 208000011906 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011644 potassium salts of orthophosphoric acid Substances 0.000 description 1
- 235000019858 potassium salts of orthophosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940126409 proton pump inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000000612 proton pump inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 1
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 description 1
- -1 trealose Chemical compound 0.000 description 1
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSJRDSLPNMGNFG-UHFFFAOYSA-H trizinc;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylate;trihydrate Chemical compound O.O.O.[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O.[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O VSJRDSLPNMGNFG-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 229940085658 zinc citrate trihydrate Drugs 0.000 description 1
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИAREA OF TECHNOLOGY
[0001] Настоящие изобретение относится к области биотехнологии и медицины, а именно к использованию штамма Lactobacillus reuteri SALR01, подходящего для создания пробиотиков и метабиотиков за счет антагонистического действия в отношении Helicobacter pylori. [0001] The present invention relates to the field of biotechnology and medicine, namely to the use of the Lactobacillus reuteri SALR01 strain, suitable for the creation of probiotics and metabiotics due to the antagonistic effect against Helicobacter pylori .
Уровень техникиState of the art
[0002] Активность бактерий Helicobacter pylori (далее H. pylori, или Нр) является одной из основных причин возникновения патологических процессов, приводящих к заболеваниям желудочно-кишечного тракта. Тем не менее, эрадикационное лечение H. pylori-ассоциированных заболеваний является лишь временной мерой, так как остается высокий риск заразится H. pylori вновь [1]. Также стало известно, что большинство людей, зараженных H. pylori, не имеют вышеназванных заболеваний [2]. Это и привело к выводу о том, что причина Hp-ассоциированных заболеваний лежит не в наличии H. pylori у пациента, а в повышенной активности данного патогена, вызванной в том числе дисбактериозом. Сейчас направлены большие усилия на разработку препаратов, которые могли бы помочь пациентам поддерживать баланс микробиоты желудочно-кишечного тракта, тем самым снизив проявление заболеваний. В составе пробиотиков для терапии Hp-ассоциированных заболеваний, таких как гастрит, дуоденит, язвенная болезнь и т.д., часто используют бактерии Lactobacillus reuteri (далее L. reuteri) и их метаболиты, в виду их неоднократно показанного антихеликобактерного действия [3]. L. reuteri представляют собой вид факультативных анаэробных грамположительных неспорообразующих молочнокислых бактерий, относящихся к нормальной микрофлоре толстой кишки человека и ряда животных. L. reuteri не является патогенным микроорганизмом [4]. [0002]Bacterial activityHelicobacter pylori(furtherH. pylori, or Hp) is one of the main causes of pathological processes leading to gastrointestinal diseases. However, eradication treatmentH. pylori-associated diseases is only a temporary measure, as there remains a high risk of infectionH. pyloriagain [1]. It also became known that most people infectedH. pylori, do not have the above-mentioned diseases [2]. This led to the conclusion that the cause of Hp-associated diseases does not lie in the presence ofH. pyloriin the patient, but in the increased activity of this pathogen, caused, among other things, by dysbacteriosis. Now great efforts are directed at developing drugs that could help patients maintain the balance of the gastrointestinal tract microbiota, thereby reducing the manifestation of diseases. Bacteria are often used in probiotics for the treatment of Hp-associated diseases, such as gastritis, duodenitis, peptic ulcer, etc.Lactobacillus reuteri(furtherL. reuteri) and their metabolites, due to their repeatedly demonstrated anti-Helicobacter activity [3].L. reuteriare a type of facultative anaerobic gram-positive non-spore-forming lactic acid bacteria that belong to the normal microflora of the large intestine of humans and a number of animals.L. reuteriis not a pathogenic microorganism [4].
[0003] Микроорганизмы семейства Lactobacillaceae выделяют бактериоцины в качестве метаболитов [5]. Они представляют собой катионные и амфипатические малые молекулы с антагонистической активностью против микроорганизмов, тесно связанных со штаммом-продуцентом. Эти метаболиты принадлежат в основном к семействам органических кислот, кетонов, спиртов, аминокислот и моносахаридов. Среди наиболее распространенных бактериальных молекул-метаболитов известны лактат, маннит, глицин, бетаин, ацетат, этанол, фенилаланин, формиат, уридин и изолейцин, а также аланин и валин. Одними из отличительных бактериоцинов L. reuteri являются противомикробные соединения реутерин и реутерициклин, подавляющие рост вредных грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также некоторых видов плесени, дрожжей и простейших [6]. L. reuteri секретирует реутерин в количествах, достаточных для ингибирования роста вредных микроорганизмов в ЖКТ, но при этом не оказывающих влияние на остальную микрофлору [7]. [0003] Microorganisms of the Lactobacillaceae family secrete bacteriocins as metabolites [5]. They are cationic and amphipathic small molecules with antagonistic activity against microorganisms closely related to the producer strain. These metabolites belong mainly to the families of organic acids, ketones, alcohols, amino acids, and monosaccharides. Among the most common bacterial metabolite molecules are lactate, mannitol, glycine, betaine, acetate, ethanol, phenylalanine, formate, uridine, and isoleucine, as well as alanine and valine. Some of the distinctive bacteriocins of L. reuteri are the antimicrobial compounds reuterin and reutericyclin, which inhibit the growth of harmful gram-positive and gram-negative bacteria, as well as some types of mold, yeast, and protozoa [6]. L. reuteri secretes reuterin in quantities sufficient to inhibit the growth of harmful microorganisms in the gastrointestinal tract, but without affecting the rest of the microflora [7].
[0004] В данном изобретении предлагается новый штамм, относящийся к виду L. reuteri. [0004] The present invention provides a new strain belonging to the species L. reuteri .
[0005] Известно множество штаммов вида L. reuteri: ATCC РТА 4660, ATCC РТА 4964, ATCC PTA 5289, ATCC 55730, DSM 17938, DSM 20016, DSM17648, NCIMB 30242, SD-RD830-FR, YLR001. В патенте RU 2 435 844 C2 (опубл.: 10.12.2011; МПК: C12N1/20; A61K35/74; A61P1/06; A61K47/44; C12R1/225) описан пробиотический продукт для терапии колик у новорожденных младенцев, полученного с использованием штамма L. reuteri DSM 17938 в качестве активного ингредиента. Полученный пробиотический продукт, полученный с использованием L. reuteri, уменьшал ежедневное время плача у младенцев, снижая избыточную активацию моторики кишечника путем стимуляции IL-10. [0005] Many strains of the species L. reuteri are known: ATCC PTA 4660, ATCC PTA 4964, ATCC PTA 5289, ATCC 55730, DSM 17938, DSM 20016, DSM17648, NCIMB 30242, SD-RD830-FR, YLR001. Patent RU 2 435 844 C2 (published: 10.12.2011; IPC: C12N1/20; A61K35/74; A61P1/06; A61K47/44; C12R1/225) describes a probiotic product for the treatment of colic in newborn infants, obtained using the L. reuteri strain DSM 17938 as an active ingredient. The resulting probiotic product, derived from L. reuteri , reduced daily crying time in infants by reducing excessive intestinal motility activation through IL-10 stimulation.
[0006] В настоящее время существует необходимость в расширении арсенала штаммов L. reuteri, обладающих антихеликобактерным действием. [0006] Currently, there is a need to expand the arsenal of L. reuteri strains with anti-Helicobacter activity.
Термины и сокращенияTerms and abbreviations
[0007] Дисбактериоз — это качественное и/или количественное изменение бактериальной микрофлоры в организме, перемещение различных ее представителей в несвойственные им места обитания, сопровождающееся метаболическими и иммунными нарушениями. Причем указанные нарушения не исчезают после устранения неблагоприятного фактора, вызвавшего дисбактериоз. Чаще всего под дисбактериозом подразумевают нарушение микрофлоры кишечника [8]. [0007] Dysbacteriosis is a qualitative and/or quantitative change in the bacterial microflora in the body, the movement of its various representatives to habitats that are not typical for them, accompanied by metabolic and immune disorders. Moreover, these disorders do not disappear after the elimination of the unfavorable factor that caused dysbacteriosis. Most often, dysbacteriosis means a violation of the intestinal microflora [8].
[0008] Живые микроорганизмы — вегетативные клетки и споры, если микроорганизмы спорообразующие или клетки неспорообразующих микроорганизмов, сохраняющие возможность осуществлять основные жизненные процессы. [0008] Living microorganisms are vegetative cells and spores, if the microorganisms are spore-forming or cells of non-spore-forming microorganisms that retain the ability to carry out basic life processes.
[0009] Культуральная жидкость — жидкая среда, получаемая при культивировании различных про- и эукариотических клеток in vitro и содержащая остаточные питательные вещества и продукты метаболизма этих клеток [9]. [0009] Culture fluid is a liquid medium obtained during the cultivation of various pro- and eukaryotic cells in vitro and containing residual nutrients and metabolic products of these cells [9].
[0010] Метабиотики — вещества, являющиеся структурными компонентами пробиотических микроорганизмов и/или их метаболитов, которые способны оптимизировать физиологические функции, метаболические, эпигенетические, информационные, регуляторные, транспортные, иммунные, нейрогормональные, и/или поведенческие реакции, связанные с деятельностью симбиотической (индигенной) микрофлоры организма-хозяина [10]. [0010] Metabiotics are substances that are structural components of probiotic microorganisms and/or their metabolites, which are capable of optimizing physiological functions, metabolic, epigenetic, informational, regulatory, transport, immune, neurohormonal, and/or behavioral reactions associated with the activity of the symbiotic (indigenous) microflora of the host organism [10].
[0011] Микрофлора (микробиота) — совокупность различных видов микроорганизмов, населяющих определенную среду обитания. Постоянно живущие в симбиозе с хозяином микроорганизмы называются нормальной, или симбиотической, микрофлорой [11]. В данном тексте термин «микрофлора» относится к микрофлоре желудочно-кишечного тракта. [0011] Microflora (microbiota) is a collection of different types of microorganisms that inhabit a particular environment. Microorganisms that constantly live in symbiosis with the host are called normal, or symbiotic, microflora [11]. In this text, the term "microflora" refers to the microflora of the gastrointestinal tract.
[0012] Пробиотики — функциональный пищевой ингредиент в виде полезных для человека непатогенных и нетоксикогенных живых микроорганизмов, обеспечивающий при систематическом употреблении в пищу в виде препаратов или в составе пищевых продуктов благоприятное воздействие на организм человека в результате нормализации состава и/или повышения биологической активности нормальной микрофлоры кишечника [12]. [0012] Probiotics are a functional food ingredient in the form of non-pathogenic and non-toxicogenic live microorganisms that are beneficial to humans and that, when systematically consumed in food in the form of preparations or as part of food products, have a beneficial effect on the human body as a result of normalizing the composition and/or increasing the biological activity of normal intestinal microflora [12].
[0013] Ультрафильтрация — процесс мембранного разделения, а также фракционирования и концентрирования веществ, осуществляемый путем фильтрования жидкости под действием разности давлений до и после мембраны. При этом размер выделяемых частиц (т.е. частицы какого размера не проходят через фильтр, а остаются в концентрате) составляет приблизительно 0,001 – 0,05 мкм (5 – 500 кДа). [0013] Ultrafiltration is a process of membrane separation, as well as fractionation and concentration of substances, carried out by filtering a liquid under the action of a pressure difference before and after the membrane. In this case, the size of the separated particles (i.e. particles of what size do not pass through the filter, but remain in the concentrate) is approximately 0.001 - 0.05 µm (5 - 500 kDa).
[0014] ЖКТ — желудочно-кишечный тракт. [0014] GIT - gastrointestinal tract.
[0015] КОЕ — колониеобразующая единица. [0015] CFU - colony forming unit.
[0016] ПЦР — полимеразная цепная реакция. [0016] PCR - polymerase chain reaction.
[0017] B. subtilis — Bacillus subtilis. [0017] B. subtilis - Bacillus subtilis .
[0018] H. pylori — Helicobacter pylori. [0018] H. pylori - Helicobacter pylori .
[0019] L. reuteri — Lactobacillus reuteri. [0019] L. reuteri - Lactobacillus reuteri .
Сущность изобретенияThe essence of the invention
[0020] Задачей настоящего изобретения является выделение нового штамма бактерий L. reuteri для создания пробиотиков и метабиотиков для лечения и/или профилактики Hp-ассоциированных заболеваний. [0020] The objective of the present invention is to isolate a new strain of L. reuteri bacteria for the creation of probiotics and metabiotics for the treatment and/or prevention of Hp-associated diseases.
[0021] Данная задача решается заявленным изобретением за счет достижения такого технического результата, как возможность применения нового штамма L. reuteri SALR01 для создания пробиотиков и метабиотиков для лечения и/или профилактики Hp-ассоциированных заболеваний. [0021] This problem is solved by the claimed invention by achieving such a technical result as the possibility of using the new strain of L. reuteri SALR01 to create probiotics and metabiotics for the treatment and/or prevention of Hp-associated diseases.
[0022] Заявленный технический результат достигается за счет антагонистического действия штамма L. reuteri SALR01 в отношении H. pylori, а также адаптацией штамма L. reuteri SALR01 для культивирования в лабораторных и промышленных питательных средах. [0022] The claimed technical result is achieved due to the antagonistic action of the L. reuteri SALR01 strain in relation to H. pylori , as well as the adaptation of the L. reuteri SALR01 strain for cultivation in laboratory and industrial nutrient media.
Описание чертежейDescription of drawings
[0023] Объект притязаний по настоящей заявке описан по пунктам и чётко заявлен в формуле изобретения. Упомянутые выше задачи, признаки и преимущества изобретения очевидны из нижеследующего подробного описания, в сочетании с прилагаемыми чертежами, на которых показано: [0023] The subject matter of the present application is described in paragraphs and clearly stated in the claims. The above-mentioned objects, features and advantages of the invention are apparent from the following detailed description, taken in conjunction with the accompanying drawings, which show:
[0024] На Фиг. 1 представлены результаты исследования по оценке эффективности применения заявленной композиции при лечении хеликобактериоза на модели монгольских песчанок. [0024] Fig. 1 shows the results of a study to evaluate the effectiveness of using the claimed composition in the treatment of Helicobacter pylori infection using a Mongolian gerbil model.
Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention
[0025] В приведенном ниже подробном описании реализации изобретения перечислены многочисленные детали реализации, призванные обеспечить отчетливое понимание настоящего изобретения. Однако квалифицированному в предметной области специалисту очевидно, каким образом можно использовать настоящее изобретение, как с данными деталями реализации, так и без них. В других случаях хорошо известные методы, процедуры и компоненты не описаны подробно, чтобы не затруднять излишне понимание особенностей настоящего изобретения. [0025] In the following detailed description of the embodiment of the invention, numerous implementation details are listed in order to provide a clear understanding of the present invention. However, it will be obvious to one skilled in the art how the present invention can be used with or without these implementation details. In other instances, well-known methods, procedures, and components have not been described in detail in order not to unnecessarily obscure the features of the present invention.
[0026] Кроме того, из приведенного изложения ясно, что изобретение не ограничивается приведенной реализацией. Многочисленные возможные модификации, изменения, вариации и замены, сохраняющие суть и форму настоящего изобретения, очевидны для квалифицированных в предметной области специалистов. [0026] Furthermore, it is clear from the above disclosure that the invention is not limited to the embodiment provided. Numerous possible modifications, changes, variations and substitutions that retain the essence and form of the present invention are obvious to those skilled in the art.
[0027] Заявленный штамм L. reuteri SALR01 депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина, обособленного подразделения Федерального исследовательского центра «Пущинский научный центр биологических исследований Российской Академии наук» под регистрационным номером ВКМ В-3734D. [0027] The declared strain L. reuteri SALR01 is deposited in the All-Russian Collection of Microorganisms of the G.K. Skryabin Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms, a separate division of the Federal Research Center “Pushchino Scientific Center for Biological Research of the Russian Academy of Sciences” under registration number VKM B-3734D.
[0028] Заявленный штамм выделен из содержимого кишечника человека. При этом заявленный штамм получил название L. reuteri SALR01. Следует понимать, что названия «L. reuteri ВКМ В-3734D» и «L. reuteri SALR01» обозначают один и тот же штамм. [0028] The claimed strain was isolated from the contents of the human intestine. The claimed strain was named L. reuteri SALR01. It should be understood that the names " L. reuteri VKM B-3734D" and " L. reuteri SALR01" refer to the same strain.
[0029] Штамм L. reuteri SALR01 является диким штаммом с неизменными свойствами. Заявленный штамм представляет собой грамположительные, неподвижные короткие изогнутые палочки (2,0 – 5,0 x 0,7 – 1,0 мкм) с округлыми концами, расположенные одиночно, парно или в коротких цепочках. Спор не образуют, при глубинном посеве на полужидкую питательную среду образуют крошкообразные колонии диаметром 1 – 2 мм. Оптимальная температура роста + 37℃. [0029] L. reuteri strain SALR01 is a wild strain with unchanged properties. The declared strain is gram-positive, non-motile, short curved rods (2.0 – 5.0 x 0.7 – 1.0 µm) with rounded ends, located singly, in pairs or in short chains. They do not form spores; when deep seeded on a semi-liquid nutrient medium, they form crumbly colonies with a diameter of 1 – 2 mm. The optimal growth temperature is + 37℃.
[0030] Штамм L. reuteri SALR01 может расти при 37±2℃ в анаэробной атмосфере на модифицированной питательной среде MRS для лактобактерий и рН 6,8 – 6,9. Заявленный штамм обладает следующими биохимическими признаками: факультативный анаэроб, облигатно гетероферментативный. Ферментирует глюкозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, арабинозу, рибозу. Не ферментирует ксилозу, треалозу, маннозу, целлобиозу. [0030] The strain L. reuteri SALR01 can grow at 37±2℃ in an anaerobic atmosphere on a modified MRS nutrient medium for lactobacilli and a pH of 6.8 – 6.9. The claimed strain has the following biochemical characteristics: facultative anaerobe, obligate heterofermentative. Ferments glucose, galactose, maltose, sucrose, arabinose, ribose. Does not ferment xylose, trealose, mannose, cellobiose.
[0031] В рамках заявленного изобретения штамм L. reuteri SALR01 был адаптирован под культивирование в лабораторных и промышленных питательных средах. В одном варианте реализации штамм L. reuteri SALR01 культивируют на твердой питательной среде. При этом может быть использована среда MRS для лактобактерий с добавлением агар-агара в количестве 15 г/л. При этом культивирование штамма на твердой питательной среде проводят посевом с использованием метода штрихов. [0031] Within the framework of the claimed invention, the L. reuteri SALR01 strain has been adapted for cultivation in laboratory and industrial nutrient media. In one embodiment, the L. reuteri SALR01 strain is cultivated on a solid nutrient medium. In this case, the MRS medium for lactobacilli with the addition of agar-agar in an amount of 15 g/l can be used. In this case, the cultivation of the strain on a solid nutrient medium is carried out by seeding using the streak method.
[0032] В другом варианте реализации штамм L. reuteri SALR01 культивируют в жидкой питательной среде. При этом жидкая среда для культивирования штамма L. reuteri SALR01 может иметь исходный рН 6,8 – 6,9. В состав жидкой питательной среды входят: пептон, дрожжевой экстракт, сахароза, мясо-пептонный бульон, аммоний лимоннокислый, сульфат магния, хлорид кальция, сульфат марганца, калиевые соли ортофорсфорной кислоты, ацетат натрия, гидроксид натрия и вода. [0032] In another embodiment, the L. reuteri SALR01 strain is cultured in a liquid nutrient medium. In this case, the liquid medium for culturing the L. reuteri SALR01 strain may have an initial pH of 6.8 - 6.9. The liquid nutrient medium contains: peptone, yeast extract, sucrose, meat-peptone broth, ammonium citrate, magnesium sulfate, calcium chloride, manganese sulfate, potassium salts of orthophosphoric acid, sodium acetate, sodium hydroxide and water.
[0033] В одном варианте реализации питательная среда может дополнительно включать факторы роста и/или специальные добавки. В предпочтительном варианте реализации питательная среда не включает дополнительных компонентов. [0033] In one embodiment, the nutrient medium may further comprise growth factors and/or special additives. In a preferred embodiment, the nutrient medium does not comprise additional components.
[0034] Способ хранения штамма L. reuteri SALR01 периодическими пересевами с хранением культуры в холодильнике при 4 – 6℃, либо в лиофилизированном состоянии. [0034]Method of storing the strainL. reuteriSALR01 periodic reseeding with storage of the culture in a refrigerator at 4–6℃, or in a lyophilized state.
[0035] Способ получения инактивированных клеток штамма L. reuteri SALR01 включает следующие этапы. Штамм L. reuteri SALR01 культивируют в жидкой питательной среде. После завершения культивирования культуру охлаждали до 10°С, затем культуральную суспензию подвергают центрифугированию на проточной центрифуге. Полученные клетки инактивируют нагреванием при 80℃ в течение 40 минут. [0035] The method for obtaining inactivated cells of the L. reuteri SALR01 strain includes the following steps. The L. reuteri SALR01 strain is cultured in a liquid nutrient medium. After completion of the cultivation, the culture is cooled to 10°C, then the culture suspension is centrifuged in a flow centrifuge. The obtained cells are inactivated by heating at 80℃ for 40 minutes.
[0036] Штамм L. reuteri SALR01 может применяться для получения пробиотиков и/или метабиотиков, действие которых основано на подавлении активности H.pylori. Тем не менее, применимость данного штамма не ограничивается только лечением хеликобактериоза, но может быть использован для подавления других патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов. [0036] The L. reuteri SALR01 strain can be used to obtain probiotics and/or metabiotics whose action is based on the suppression of H.pylori activity. However, the applicability of this strain is not limited to the treatment of Helicobacter pylori, but can be used to suppress other pathogenic and/or opportunistic microorganisms.
ПРИМЕРЫ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯEXAMPLES OF IMPLEMENTATION OF THE INVENTION
[0037] Пример 1. Генетический анализ [0037] Example 1. Genetic analysis L. reuteri L. reuteri SALR01SALR01 ..
[0038] Для идентификации заявленного штамма было проведено выделение ДНК из культуры клеток L. reuteri SALR01 [13]. Затем на приборе GeneAmp PCR System 2700 («Applied Biosystems», США) методом ПЦР амплифицировали фрагмент гена gyrB с использованием универсальных праймеров Up1F и UP2R. Определение нуклеотидной последовательности продукта ПЦР проводили с помощью набора реактивов ABI PRISM® BigDye™ Terminator v. 3.1 с праймером Up1S и последующим анализом продуктов реакции на автоматическом секвенаторе Applied Biosystems 3730 DNA Analyzer. Нуклеотидную последовательность фрагмента гена gyrB заявленного штамма L. reuteri SALR01 сравнивали с нуклеотидными последовательностями аналогичных фрагментов гена gyrB штаммов Lactobacillus reuteri DSM 20016, Limosilactobacillus reuteri strain reuteri (CP045049), Limosilactobacillus reuteri SD-RD830-FR (CP080621), Limosilactobacillus reuteri YLR001 (CP065540). Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей фрагментов гена gyrB выполняли в программе BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Определение филогенетического положения штаммов и процента сходства проводили с использованием программы «TaxonDC 1.3.1» [14]. Филогенетический анализ показал высокое сходство заявленного штамма L. reuteri SALR01 со всеми вышеперечисленными штаммами: для Lactobacillus reuteri DSM 20016 99,95% гомологии, для Limosilactobacillus reuteri strain reuteri (CP045049), Limosilactobacillus reuteri SD-RD830-FR (CP080621), Limosilactobacillus reuteri YLR001 (CP065540) — 100% (Таблица 1). [0038] To identify the declared strain, DNA was isolated from a cell culture of L. reuteri SALR01 [13]. Then, on a GeneAmp PCR System 2700 (Applied Biosystems, USA), a fragment of the gyrB gene was amplified by PCR using the universal primers Up1F and UP2R. The nucleotide sequence of the PCR product was determined using the ABI PRISM® BigDye™ Terminator v. 3.1 reagent kit with the Up1S primer, followed by analysis of the reaction products on an Applied Biosystems 3730 DNA Analyzer automated sequencer. The nucleotide sequence of the gyrB gene fragment of the declared L. reuteri strain SALR01 was compared with the nucleotide sequences of similar gyrB gene fragments of Lactobacillus reuteri DSM 20016, Limosilactobacillus reuteri strain reuteri (CP045049), Limosilactobacillus reuteri SD-RD830-FR (CP080621), and Limosilactobacillus reuteri YLR001 (CP065540). Phylogenetic analysis of the nucleotide sequences of the gyrB gene fragments was performed using the BLAST program ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov ). The phylogenetic position of the strains and the percentage of similarity were determined using the TaxonDC 1.3.1 program [14]. Phylogenetic analysis showed a high similarity of the declared strain L. reuteri SALR01 with all the above-mentioned strains: for Lactobacillus reuteri DSM 20016 99.95% homology, for Limosilactobacillus reuteri strain reuteri (CP045049), Limosilactobacillus reuteri SD-RD830-FR (CP080621), Limosilactobacillus reuteri YLR001 (CP065540) — 100% (Table 1).
[0039] [0039]
[0040] Пример 2. Получение инактивированных клеток штамма [0040] Example 2. Obtaining inactivated cells of the strain L. reuteri L. reuteri SALR01, высушенных на мальтодекстрине.SALR01, dried on maltodextrin.
[0041] Для получения инактивированных клеток, извлеченных из культуральной жидкости, использовали штамм L. reuteri SALR01. Выращивание культуры проводили при температуре 36 ± 1°С в течение 24 ч. До начала культивирования с помощью щелочи доводили рН питательной среды до 6,8 – 7,0. Культивирование проводили в ферментере АНКУМ 210 в объеме питательной среды 10 л. Общее время накопления биомассы в реакторе 18 ч. Завершением процесса культивирования считали отсутствие падения pH от заданного. [0041] The L. reuteri SALR01 strain was used to obtain inactivated cells extracted from the culture fluid. The culture was grown at a temperature of 36 ± 1°C for 24 h. Before the start of the cultivation, the pH of the nutrient medium was adjusted to 6.8–7.0 using alkali. The cultivation was carried out in an ANKUM 210 fermenter in a nutrient medium volume of 10 l. The total time of biomass accumulation in the reactor was 18 h. The completion of the cultivation process was considered to be the absence of a drop in pH from the specified value.
[0042] После завершения культивирования культуру охлаждали до 10°С. Титр клеток в культуре составил 6х109 КОЕ/мл. Далее проводили разделение культуральной жидкости на проточной ультрацентрифуге GF105B. После процесса ультрацентрифугирования получили осадок. Титр в осадке составил 2,5х1010 КОЕ/мл. Осадок смешали со стерильной дистиллированной водой, получили суспензию клеток. Клетки инактивировали нагреванием при 80°С в течение 40 минут. Физиологически допустимый носитель — мальтодекстрин — смешивали с дистиллированной водой. К полученной смеси добавляли инактивированные клетки. Анализ КОЕ перед лиофилизацией показал отсутствие жизнеспособных клеток. Лиофилизацию смеси носителя и инактивированных клеток проводили на установке TG-50 при стандартных параметрах лиофилизации. На выходе получили инактивированные клетки, извлеченные из культуральной жидкости, высушенные на мальтодекстрине, с влажностью 2%. [0042] After completion of cultivation, the culture was cooled to 10°C. The cell titer in the culture was 6x10 9 CFU/ml. The culture fluid was then separated in a GF105B flow ultracentrifuge. A sediment was obtained after the ultracentrifugation process. The titer in the sediment was 2.5x10 10 CFU/ml. The sediment was mixed with sterile distilled water to obtain a cell suspension. The cells were inactivated by heating at 80°C for 40 minutes. A physiologically acceptable carrier, maltodextrin, was mixed with distilled water. Inactivated cells were added to the resulting mixture. CFU analysis before lyophilization showed the absence of viable cells. Lyophilization of the mixture of carrier and inactivated cells was carried out in a TG-50 unit with standard lyophilization parameters. The output was inactivated cells extracted from the culture fluid, dried on maltodextrin, with a moisture content of 2%.
[0043] Пример 3. Оценка антихеликобактерного эффекта композиций, полученных с использованием штамма [0043] Example 3. Evaluation of the anti-Helicobacter effect of compositions obtained using the strain L. reuteri L. reuteri SALR01, на модели монгольских песчанок.SALR01, based on Mongolian gerbils.
[0044] Монгольские песчанки представляют собой эффективную модель изучения патогенеза H. pylori, отражающую многие черты воспаления тканей желудка, вызываемых H. pylori у человека. Животных заражали двукратным (через день) внутрижелудочным введением бактериальной суспензии H. pylori. После двукратного заражения за животными наблюдали в течение 11-ти недель. К 12-й неделе после заражения у животных наблюдалось развитие гастрита и язвенных поражений тканей желудка. С 12-й недели начинали введение исследуемых субстанций в соответствии со схемой (Таблица 2). Исследуемая субстанция представляла собой смесь инактивированных клеток штамма L. reuteri SALR01 и физиологически допустимого носителя. [0044] Mongolian gerbils are an effective model for studying the pathogenesis of H. pylori , reflecting many features of gastric tissue inflammation caused by H. pylori in humans. Animals were infected with a double (every other day) intragastric administration of a bacterial suspension of H. pylori . After double infection, the animals were observed for 11 weeks. By the 12th week after infection, the animals developed gastritis and ulcerative lesions of the gastric tissue. From the 12th week, the administration of the studied substances began in accordance with the scheme (Table 2). The studied substance was a mixture of inactivated cells of the L. reuteri strain SALR01 and a physiologically acceptable carrier.
[0045] Физиологически допустимым носителем являлся крахмал в количестве 1% мас. В качестве позитивного контроля использовали препараты стандартной эрадикационной терапии H. pylori у человека, которая включает в себя ингибитор протонной помпы омепразол и антибиотики кларитромицин и амоксициллин. В качестве негативного контроля использовали просто носитель. Также исследовали воздействие указанной субстанции в сочетании с препаратами позитивного контроля. [0045] The physiologically acceptable carrier was starch in an amount of 1% by weight. The drugs of standard eradication therapy for H. pylori in humans, which includes the proton pump inhibitor omeprazole and the antibiotics clarithromycin and amoxicillin, were used as a positive control. The carrier alone was used as a negative control. The effect of the said substance in combination with the positive control drugs was also studied.
[0046] [0046]
+ носитель L. reuteri
+ carrier
+ позитивный контрольSubstance
+ positive control
+ носитель L. reuteri
+ carrier
[0047] Носитель, препараты позитивного контроля и исследуемую субстанцию вводили песчанкам внутрижелудочно, поскольку этот способ является аналогом перорального способа применения у человека. По окончании эксперимента животных выводили из эксперимента для гистологического исследования тканей желудка и двенадцатиперстной кишки. Оценка состояния желудка проводилась по следующим параметрам: площадь воспаления; макроскопические изменения слизистой; морфологические изменения (степень воспаления; активность воспаления; атрофия желудочных желёз; метаплазия; обсеменение слизистой оболочки H. pylori). Для морфологической оценки степени выраженности патологии использовали визуально-аналоговые шкалы, предложенные в Сиднейской системе. В данном случае применяли балльную систему оценки: 0 – норма; 1 – слабо выраженная; 2 – умеренная; 3 – выраженная. [0047] The vehicle, positive control preparations, and the test substance were administered to gerbils intragastrically, since this method is analogous to the oral route of administration in humans. Upon completion of the experiment, the animals were removed from the experiment for histological examination of the stomach and duodenum tissues. The condition of the stomach was assessed based on the following parameters: area of inflammation; macroscopic changes in the mucosa; morphological changes (degree of inflammation; inflammation activity; atrophy of the gastric glands; metaplasia; colonization of the mucosa with H. pylori ). Visual analogue scales proposed in the Sydney system were used for morphological assessment of the severity of pathology. In this case, a point assessment system was used: 0 - normal; 1 - mild; 2 - moderate; 3 - severe.
[0048] При макроскопической оценке тканей желудка и двенадцатиперстной кишки во всех экспериментальных группах видимых патологических изменений не обнаружили. Результаты микроскопических гистологических исследований приведены в Таблице 3. [0048] Macroscopic evaluation of the stomach and duodenum tissues in all experimental groups revealed no visible pathological changes. The results of microscopic histological studies are presented in Table 3.
[0049] [0049]
[0050] Медиана, верхний и нижний квартиль (Me (Q1; Q3)) указаны в белых ячейках, сумма баллов в группе указана в серых ячейках; а – достоверное отличие от интактной группы мышей, (p<0,05); b – достоверное отличие от группы негативного контроля (p<0,05). В интактной группе мышей, не подвергавшихся заражению и лечению, строение стенки желудка соответствовало норме. В группе негативного контроля у всех животных были выявлены морфологические изменения слизистой оболочки желудка, характерные для катарального гастрита различной степени выраженности: от слабого до умеренного, с тенденцией к хронизации процесса. Развитие инфекции у животных группы негативного контроля привело к формированию преимущественно пангастрита (площадь воспаления 3, средний балл 15, Таблица 3). В данной группе отмечали достоверное увеличение степени выраженности патологических изменений, степени и активности воспаления, атрофии желудочных желез и обсеменения слизистой оболочки желудка H. pylori по сравнению с интактной группой (p<0,05). В группе позитивного контроля происходило значимое снижение показателей по всем исследованным критериям по сравнению с группой негативного контроля. [0050]Median, upper and lower quartile (Me (Q1; Q3)) are indicated in white cells, the sum of points in the group is indicated in gray cells; a – reliable difference from the intact group of mice, (p<0.05); b – reliable difference from the negative control group (p<0.05). In the intact group of mice that were not exposed to infection and treatment, the structure of the stomach wall corresponded to the norm. In the negative control group, all animals showed morphological changes in the gastric mucosa characteristic of catarrhal gastritis of varying severity: from mild to moderate, with a tendency to chronicity of the process. The development of infection in animals of the negative control group led to the formation of predominantly pangastritis (inflammation area 3, average score 15, Table 3). In this group, a reliable increase in the severity of pathological changes, the degree and activity of inflammation, atrophy of the gastric glands and seeding of the gastric mucosa was notedH. pyloricompared to the intact group (p<0.05). In the positive control group, there was a significant decrease in indicators for all the studied criteria compared to the negative control group.
[0051] На Фиг.1 представлены диаграммы размаха суммарных показателей выраженности патологических симптомов для исследуемых субстанций. Негативному контролю соответствует бокс-плот 1. Позитивному контролю соответствует бокс-плот 2. Субстанции (L. reuteri + носитель) соответствует бокс-плот 3. Сочетание субстанции и позитивного контроля отвечает бокс-плоту 4. По оси ординат высота диаграмм соответствует суммарной выраженности патологических симптомов в баллах визуально-аналоговой шкалы. Указаны средние значения и медиана экспериментов, по семь повторов в каждом эксперименте. [0051] Fig. 1 shows the range diagrams of the total indices of the severity of pathological symptoms for the studied substances. Box plot 1 corresponds to the negative control. Box plot 2 corresponds to the positive control. Box plot 3 corresponds to the substance ( L. reuteri + carrier). Box plot 4 corresponds to the combination of the substance and the positive control. The height of the diagrams along the ordinate axis corresponds to the total severity of pathological symptoms in points of the visual analogue scale. The mean values and median of the experiments are indicated, with seven repetitions in each experiment.
[0052] При монотерапии субстанцией (L. reuteri + носитель) наблюдалось достоверное снижение большинства исследованных показателей: площади и активности воспаления, морфологических изменений желудка и степени обсеменения слизистой оболочки желудка H. pylori по сравнению с негативным контролем. При этом не наблюдалось достоверных отличий между группой позитивного контроля и монотерапией субстанцией. Монотерапия субстанцией уступала позитивному контролю только по снижению степени воспаления. [0052] With monotherapy with the substance ( L. reuteri + carrier), a reliable decrease in most of the studied parameters was observed: the area and activity of inflammation, morphological changes in the stomach and the degree of colonization of the gastric mucosa with H. pylori compared with the negative control. At the same time, no reliable differences were observed between the positive control group and monotherapy with the substance. Monotherapy with the substance was inferior to the positive control only in reducing the degree of inflammation.
[0053] Комбинированная терапия субстанцией вместе с препаратами позитивного контроля превосходила позитивный контроль по некоторым показателям. Так, добавление исследуемой субстанции к препаратам позитивного контроля более эффективно снижало активность воспаления, выраженность атрофии желудочных желез, а также степень обсеменения слизистой оболочки желудка H. pylori (Таблица 3). [0053] Combination therapy with the substance together with positive control drugs was superior to the positive control in some respects. Thus, the addition of the test substance to positive control drugs more effectively reduced the activity of inflammation, the severity of gastric gland atrophy, and the degree of colonization of the gastric mucosa with H. pylori (Table 3).
[0054] Полученные данные показывают, что композиция, включающая L. reuteri, может снижать проявления инфекции H. pylori в монотерапии, а также увеличивает эффективность лечения препаратами стандартной эрадикационной терапии H. pylori. [0054] The obtained data show that the composition including L. reuteri can reduce the manifestations of H. pylori infection in monotherapy, and also increases the effectiveness of treatment with standard H. pylori eradication therapy drugs.
[0055] Пример 4. Оценка эффективности применения композиции на основе инактивированных клеток штамма [0055] Example 4. Evaluation of the effectiveness of using a composition based on inactivated cells of the strain L. reuteri L. reuteri SALR01 в терапии у пациентов с хроническим гастритом или функциональной диспепсией, ассоциированных с инфекцией SALR01 in therapy of patients with chronic gastritis or functional dyspepsia associated with infection H. pyloriH. pylori ..
[0056] В данном примере проводили открытое рандомизированное проспективное контролируемое исследование эффективности и безопасности заявленной композиции с участием пациентов с функциональной диспепсией и/или хроническим гастритом, ассоциированных с инфекцией H. pylori. Использованная в примере композиция включала инактивированные клетки пробиотического штамма L. reuteri SALR01, комплекс метаболитов пробиотического штамма B. subtilis ВКМ B-3536D, и физиологически допустимый носитель, включающий цитрат тригидрата цинка, а также фруктоолигосахариды. В исследование было включено 40 пациентов обоих полов в возрасте от 18 до 65 лет включительно с подтверждённым диагнозом функциональная диспепсия или хронический гастрит, и с положительным анализом на наличие ДНК H. pylori в кале методом ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR). Отдельным требованием для пациентов было отсутствие в анамнезе ранее проведённой эрадикационной терапии менее чем за год до скрининга. [0056] In this example, an open, randomized, prospective, controlled study of the efficacy and safety of the claimed composition was conducted involving patients with functional dyspepsia and/or chronic gastritis associated with H. pylori infection. The composition used in the example included inactivated cells of the probiotic strain L. reuteri SALR01, a complex of metabolites of the probiotic strain B. subtilis VKM B-3536D, and a physiologically acceptable carrier including zinc citrate trihydrate, as well as fructooligosaccharides. The study included 40 patients of both sexes aged 18 to 65 years inclusive with a confirmed diagnosis of functional dyspepsia or chronic gastritis, and with a positive analysis for the presence of H. pylori DNA in feces using real-time PCR. A separate requirement for patients was the absence of a history of previously administered eradication therapy less than a year before screening.
[0057] Все пациенты были поровну разбиты на экспериментальную группу 1 и контрольную группу 2. Пациенты из экспериментальной группы 1 в течение 14 дней получали заявленную композицию 2 раза в сутки утром и вечером после еды дополнительно к стандартной трёхкомпонентной эрадикационной терапии первой линии (эзомепразол 20 мг перорально 2 раза в сутки утром и вечером после еды, амоксициллин 1000 мг 2 раза в сутки утром и вечером после еды, кларитромицин 500 мг 2 раза в сутки утром и вечером после еды). Следующие 14 дней после окончания терапии пациенты данной группы получали заявленную композицию 2 раза в сутки утром и вечером после еды в качестве монопрепарата. Пациенты из контрольной группы 2 получали в течение 14 дней эрадикационную терапию, включающую эзомепразол 20 мг перорально 2 раза в сутки утром и вечером после еды, амоксициллин 1000 мг перорально 2 раза в сутки утром и вечером после еды, кларитромицин 500 мг перорально 2 раза в сутки утром и вечером после еды. Выраженность симптомов, характерных для хронического гастрита или функциональной диспепсии оценивали с помощью опросников, которые все пациенты заполняли перед началом эксперимента и через 28 дней от начала эксперимента (Таблица 4). [0057] All patients were equally divided into experimental group 1 and control group 2. Patients from experimental group 1 received the claimed composition 2 times a day in the morning and evening after meals for 14 days in addition to the standard three-component first-line eradication therapy (esomeprazole 20 mg orally 2 times a day in the morning and evening after meals, amoxicillin 1000 mg 2 times a day in the morning and evening after meals, clarithromycin 500 mg 2 times a day in the morning and evening after meals). For the next 14 days after the end of therapy, patients in this group received the claimed composition 2 times a day in the morning and evening after meals as a monotherapy. Patients from control group 2 received eradication therapy for 14 days, including esomeprazole 20 mg orally 2 times a day in the morning and evening after meals, amoxicillin 1000 mg orally 2 times a day in the morning and evening after meals, clarithromycin 500 mg orally 2 times a day in the morning and evening after meals. The severity of symptoms characteristic of chronic gastritis or functional dyspepsia was assessed using questionnaires that all patients filled in before the start of the experiment and 28 days after the start of the experiment (Table 4).
[0058] [0058]
[0059] Статистическое сравнение эффектов терапии в экспериментальной и контрольной группах показало, что применение заявленной композиции достоверно облегчало такие симптомы, как избыточное отхождение газов, урчание в животе и склонность к диарее. При этом в экспериментальной группе частота данных симптомов снизилась после курса терапии по сравнению с моментом начала терапии. В то же время в контрольной группе указанные симптомы стали встречаться чаще после прохождения терапии, чем вначале. Это свидетельствует о том, что стандартная эрадикационная терапия нарушает работу ЖКТ. Вероятнее всего, это связано с дисбактериозом, вызванным антибиотиками широкого спектра. При этом применение заявленной композиции вместе с препаратами стандартной эрадикационной терапии снижало частоту практически всех симптомов после прохождения терапии. Это может быть связано с облегчением или предотвращением дисбактериоза, благодаря благотворному влиянию заявленной композиции на представителей нормальной микрофлоры кишечника в условиях принятия антибиотиков. [0059] Statistical comparison of the effects of therapy in the experimental and control groups showed that the use of the claimed composition reliably alleviated such symptoms as excessive gas, rumbling in the abdomen and a tendency to diarrhea. At the same time, in the experimental group, the frequency of these symptoms decreased after the course of therapy compared to the start of therapy. At the same time, in the control group, these symptoms began to occur more often after the therapy than at the beginning. This indicates that standard eradication therapy disrupts the functioning of the gastrointestinal tract. Most likely, this is due to dysbacteriosis caused by broad-spectrum antibiotics. At the same time, the use of the claimed composition together with standard eradication therapy drugs reduced the frequency of almost all symptoms after the therapy. This may be due to the relief or prevention of dysbacteriosis, due to the beneficial effect of the claimed composition on representatives of the normal intestinal microflora under conditions of taking antibiotics.
[0060] Пример 5. Изучение воздействия штамма [0060] Example 5. Study of the effect of the strain L. reuteri L. reuteri SALR01 на ингибирование роста патогенной и условно-патогенной микрофлоры.SALR01 for inhibition of growth of pathogenic and opportunistic microflora.
[0061] В данном примере изучали способность штамма L. reuteri SALR01 подавлять рост индикаторных культур. Исследование проводили с использованием адаптированного метода стандартных дисков для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Использованные в данном примере индикаторные культуры представлены патогенными и условно-патогенными для человека микроорганизмами различной исходной локализации (кишечник, ротовая полость, кожа, урогенитальный тракт). Для реализации метода индикаторные культуры помещали на поверхность агаризованной питательной среды Луриа-Бертани в чашке Петри в количестве 107 КОЕ. После застывания чашки Петри подсушивали в течение 15 минут при 37°С. Затем на поверхность питательной среды с индикаторными культурами в виде капель диаметром 5±1 мм наносили по 10 мкл культуры штамма L. reuteri SALR01, выращенной в жидкой питательной среде. [0061] In this example, the ability of the L. reuteri SALR01 strain to suppress the growth of indicator cultures was studied. The study was conducted using an adapted standard disk method for determining the sensitivity of microorganisms to antibiotics. The indicator cultures used in this example are represented by pathogenic and opportunistic microorganisms for humans of various initial localizations (intestine, oral cavity, skin, urogenital tract). To implement the method, the indicator cultures were placed on the surface of the agarized Luria-Bertani nutrient medium in a Petri dish in an amount of 10 7 CFU. After solidification, the Petri dishes were dried for 15 minutes at 37°C. Then, 10 μl of the L. reuteri SALR01 strain culture grown in a liquid nutrient medium were applied to the surface of the nutrient medium with the indicator cultures in the form of drops with a diameter of 5±1 mm.
[0062] Чашки Петри с нанесенными растворами оставляли при комнатной температуре до полного впитывания капель и затем инкубировали при 370С в течение 24 – 48 часов. Детекцию результатов проводили путем определения наличия зоны задержки роста индикаторных культур вокруг области нанесения культуры L. reuteri SALR01. Появление зон, свободных от индикаторных культур, вокруг области нанесения культуры свидетельствуют об антагонистической активности L. reuteri SALR01 в отношении индикаторных культур, указанных в Таблице 5. [0062] Petri dishes with applied solutions were left at room temperature until the drops were completely absorbed and then incubated at 37 0 C for 24 - 48 hours. Detection of the results was carried out by determining the presence of a zone of growth inhibition of indicator cultures around the area of application of the L. reuteri SALR01 culture. The appearance of zones free of indicator cultures around the area of application of the culture indicate the antagonistic activity of L. reuteri SALR01 with respect to the indicator cultures indicated in Table 5.
[0063] Из Таблицы 5 видно, что штамм L. reuteri SALR01 способен подавлять рост ряда патогенных и условно-патогенных бактерий различной локализации. Среди них условно-патогенный штамм Enterococcus faecium, клинические изоляты патогена Staphylococcus aureus, два специфических патогена женского урогенитального тракта вида Streptococcus agalactiae, относящиеся к наиболее опасным возбудителям неонатальных инфекций, патогенные штаммы ротовой полости Streptococcus mutans и Streptococcus gordonii, участвующие в патогенезе кариеса и пародонтита. Эти данные показывают наличие у штамма L. reuteri SALR01 разнообразного спектра антагонистической активности, обеспечивающего его эффективность в профилактике различных инфекционных заболеваний. [0063] Table 5 shows that the L. reuteri SALR01 strain is capable of suppressing the growth of a number of pathogenic and opportunistic bacteria of various localizations. Among them are the opportunistic strain Enterococcus faecium , clinical isolates of the pathogen Staphylococcus aureus , two specific pathogens of the female urogenital tract of the species Streptococcus agalactiae , which are among the most dangerous pathogens of neonatal infections, and pathogenic strains of the oral cavity Streptococcus mutans and Streptococcus gordonii, which are involved in the pathogenesis of caries and periodontitis. These data demonstrate that the L. reuteri SALR01 strain has a diverse spectrum of antagonistic activity, ensuring its effectiveness in the prevention of various infectious diseases.
[0064] [0064]
Примечание:Note:
* отсутствие задержки роста * no growth retardation
** наличие зоны подавления роста индикаторной культуры (бактерицидное действие)** presence of a zone of inhibition of growth of the indicator culture (bactericidal action)
*** неполное подавление роста индикаторной культуры (бактериостатическое действие)*** incomplete suppression of indicator culture growth (bacteriostatic effect)
[0065] Пример 6. Исследование безвредности, токсичности, аллергенности и токсигенных свойств штамма [0065] Example 6. Study of the harmlessness, toxicity, allergenicity and toxigenic properties of the strain L. reuteri L. reuteri SALR01.SALR01.
[0066] Для определения безвредности культуру бактерий L. reuteri SALR01 вводили перорально белым мышам (10 самок массой 14 – 16 г) в дозе 0,5 мл. Наблюдение за животными в течение 5 суток показало, что введение штамма молочнокислых бактерий L. reuteri SALR01 не вызывало гибели животных, признаков интоксикации и снижения групповой массы тела животных по сравнению с исходной. Таким образом, результаты показали, что исследуемый штамм молочнокислых бактерий является непатогенным и безвредным для лабораторных животных. [0066] To determine the harmlessness of the L. reuteri SALR01 bacterial culture, it was administered orally to white mice (10 females weighing 14–16 g) at a dose of 0.5 ml. Observation of the animals for 5 days showed that the administration of the L. reuteri SALR01 lactic acid bacteria strain did not cause death of the animals, signs of intoxication, or a decrease in the group body weight of the animals compared to the initial one. Thus, the results showed that the studied lactic acid bacteria strain is nonpathogenic and harmless for laboratory animals.
[0067] Для определения токсикогенности культуру бактерий L. reuteri SALR01 вводили крысам (10 животных одного пола массой 250 – 300 г) подкожно в дозе 0,5 мл, в качестве контроля использовали стерильный физиологический раствор, который вводили так же в дозе 0,5 мл. Наблюдение за животными проводили в течение 14 суток. В период наблюдения не было выявлено гибели животных. Таким образом, результаты показали, что исследуемый штамм молочнокислых бактерий L. reuteri SALR01 не обладает токсикогенными свойствами. [0067]To determine the toxicogenicity of the bacterial cultureL. reuteriSALR01 was administered to rats (10 animals of the same sex weighing 250–300 g) subcutaneously at a dose of 0.5 ml; sterile saline was used as a control, which was also administered at a dose of 0.5 ml. The animals were observed for 14 days. No deaths were observed during the observation period. Thus, the results showed that the studied strain of lactic acid bacteriaL. reuteriSALR01 does not have toxicogenic properties.
[0068] Для определения токсичности инактивированную нагреванием культуру бактерий L. reuteri SALR01 вводили белым крысам (10 животных одного пола массой 250 – 300 г) внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. За животными вели наблюдение в течение 7 дней. В течение всего срока наблюдения гибель подопытных животных и признаки интоксикации отсутствовали; групповая масса тела животных по сравнению с исходной не снижалась. В связи с этим, нами сделано заключение, что исследуемый штамм молочнокислых бактерий L. reuteri SALR01 в дозе 1010 убитых клеток не обладает токсичностью. [0068] To determine toxicity, heat-inactivated culture of L. reuteri SALR01 bacteria was administered to white rats (10 animals of the same sex weighing 250–300 g) intraperitoneally in a volume of 0.5 ml. The animals were observed for 7 days. During the entire observation period, there were no deaths of the experimental animals or signs of intoxication; the group body weight of the animals did not decrease compared to the initial value. In this regard, we concluded that the studied strain of lactic acid bacteria L. reuteri SALR01 at a dose of 10 10 killed cells is not toxic.
[0069] Для определения аллергенности культуру бактерий L. reuteri SALR01 наносили однократно на боковую поверхность туловища крыс одного пола (10 животных массой 250 – 300 г) в дозе 0,02 мл. Реакцию учитывали визуально через 24 часа. В период наблюдения не выявлено аллергических отеков и эритемы тканей на месте нанесения бактерий у животных, что свидетельствует об отсутствии аллергенности. [0069]To determine the allergenicity of bacteria cultureL. reuteriSALR01 was applied once to the lateral surface of the body of rats of one sex (10 animals weighing 250–300 g) at a dose of 0.02 ml. The reaction was recorded visually after 24 hours. During the observation period, no allergic edema or erythema of the tissues at the site of application of the bacteria were detected in animals, which indicates the absence of allergenicity.
[0070] Для определения раздражающего действия на кожные покровы культуру бактерий L. reuteri SALR01 наносили однократно на кожу крыс (10 животных массой 180 – 200 г) в дозе 0,1 мл. Реакция кожи регистрировалась по окончании экспозиции, через 1 час и через 16 часов после однократного нанесения. В течение всего срока наблюдения признаки раздражающего действия- эритема и отек кожи животных в месте нанесения испытуемого препарата образца отсутствовали. [0070]To determine the irritating effect of bacterial culture on the skinL. reuteriSALR01 was applied once to the skin of rats (10 animals weighing 180–200 g) at a dose of 0.1 ml. The skin reaction was recorded at the end of exposure, 1 hour and 16 hours after a single application. During the entire observation period, signs of an irritating effect - erythema and edema of the skin of the animals at the site of application of the test preparation of the sample were absent.
[0071] В другой модели определяли раздражающее действие на конъюнктиву изучаемого штамма L. reuteri SALR01 путем однократного нанесения культуры бактерий в конъюнктивальный мешок глаза крыс (10 животных массой 180 – 200 г) в дозе 0,02 мл. Состояние слизистой оболочки глаза наблюдали ежедневно в течение 14 дней. В течение всего срока наблюдения признаки раздражающего действия — отек, гиперемия и другие изменений слизистой оболочки глаза животных — не были зафиксированы. [0071] In another model, the irritant effect of the studied strain L. reuteri SALR01 on the conjunctiva was determined by a single application of the bacterial culture to the conjunctival sac of the eye of rats (10 animals weighing 180–200 g) at a dose of 0.02 ml. The condition of the mucous membrane of the eye was observed daily for 14 days. During the entire observation period, signs of irritant effect — edema, hyperemia, and other changes in the mucous membrane of the eye of the animals — were not recorded.
[0072] Пример 7. Изучение антихеликобактерной коагрегационной активности [0072] Example 7. Study of anti-Helicobacter coaggregation activity in vitroin vitro штамма strain L. reuteri L. reuteri SALR01.SALR01.
[0073] Изучение способности к коагрегации между L. reuteri SALR01 и H. pylori проводили по адаптированной методике теста на коаггрегацию в искусственном желудочном соке [15]. [0073] The study of the ability to coaggregate between L. reuteri SALR01 and H. pylori was carried out using an adapted method of the coaggregation test in artificial gastric juice [15].
[0074] Использовались клинические изоляты, полученные от больных с патологией желудка H. pylori-362 и H. pylori-420. Пассирование штаммов H. pylori осуществляли на кровяной питательной среде (5 – 7% лошадиная кровь, основа агара Columbia, 1 % IsoVitalex (Becton Dickinson, USA)). Инкубацию посевов осуществляли в микроаэрофильных условиях при содержании кислорода около 5 %, используя анаэростаты системы GasPak100 (BBL CampyPak System, Becton Dickinson, USA). Для создания в анаэростате микроаэрофильных условий использовали систему атмосферной генерации для in vitro диагностики CampyGen 2.5 L (Oxoid LTD, UK). После загрузки анаэростаты размещали в термостате при температуре 37°С, оптимальной для роста H. pylori. Длительность инкубирования штаммов H. pylori с образованием минимального количества коккоидных форм составила 3-4 суток. [0074] Clinical isolates obtained from patients with gastric pathology H. pylori -362 and H. pylori -420 were used. Passage of H. pylori strains was carried out on a blood nutrient medium (5-7% horse blood, Columbia agar base, 1% IsoVitalex (Becton Dickinson, USA)). Incubation of crops was carried out under microaerophilic conditions at an oxygen content of about 5%, using GasPak100 anaerostats (BBL CampyPak System, Becton Dickinson, USA). To create microaerophilic conditions in the anaerostat, the CampyGen 2.5 L atmospheric generation system for in vitro diagnostics (Oxoid LTD, UK) was used. After loading, the anaerostats were placed in a thermostat at a temperature of 37°C, optimal for H. pylori growth. The duration of incubation of H. pylori strains with the formation of a minimum number of coccoid forms was 3-4 days.
[0075] В качестве положительного и отрицательного контроля использовали лиофилизированные инактивированные субстанции штаммов L. reuteri DSM17648 и L. plantarum SALP01, соответственно. В качестве тестируемых образцов использовали инактивированные разными способами субстанции штамма L. reuteri SALR01, высушенные по разной технологии. Навески лиофилизатов ресуспендировали в буфере PBS и инкубировали 2 ч при комнатной температуре для регидратации. Клетки промывали и ресуспендировали в буфере PBS с получением раствора с OD600 = 4,0. [0075] Lyophilized inactivated substances of L. reuteri DSM17648 and L. plantarum SALP01 strains were used as positive and negative controls, respectively. Substances of L. reuteri SALR01 strain inactivated by different methods and dried using different technologies were used as test samples. Samples of lyophilisates were resuspended in PBS buffer and incubated for 2 h at room temperature for rehydration. Cells were washed and resuspended in PBS buffer to obtain a solution with OD 600 = 4.0.
[0076] Далее тест проводили согласно указанной методике. Ни один из исследованных штаммов и образцов не показал автоагрегации, что свидетельствует о качественной подготовке образцов для теста. Тесты показали одинаковые результаты с обоими использованными штаммами H. pylori-362 и H. pylori-420. Обобщенные результаты 3 независимых экспериментов показаны в Таблице 6. [0076] The test was then carried out according to the specified method. None of the tested strains and samples showed autoaggregation, which indicates high-quality sample preparation for the test. The tests showed identical results with both used strains H. pylori-362 and H. pylori-420 . The generalized results of 3 independent experiments are shown in Table 6.
[0077] [0077]
Примечания:Notes:
Т°С — инактивация температурой;T°C – temperature inactivation;
Н2О2 — инактивация перекисью водорода; H2O2 - inactivation with hydrogen peroxide ;
Л — лиофильная сушка;L - lyophilization;
Р — сушка распылением;P - spray drying;
* — образец оценивали в одном эксперименте.* — the sample was evaluated in one experiment.
[0078] Образцы штаммов негативного и позитивного контроля показали ожидаемые результаты, что свидетельствует о корректности проведения эксперимента. Образцы штамма L. reuteri SALR01 показали результаты сравнимые с позитивным контролем. Это доказывает, что высушенные инактивированные клетки штамма L. reuteri SALR01 проявляют антихеликобактерную коагрегационную активность. [0078] The negative and positive control strain samples showed the expected results, indicating that the experiment was conducted correctly. The L. reuteri SALR01 strain samples showed results comparable to the positive control. This proves that dried inactivated L. reuteri SALR01 strain cells exhibit anti-Helicobacter coaggregation activity.
[0079] В настоящих материалах заявки представлено предпочтительное раскрытие осуществления заявленного технического решения, которое не должно использоваться как ограничивающее иные, частные воплощения его реализации, которые не выходят за рамки испрашиваемого объема правовой охраны и являются очевидными для специалистов в соответствующей области техники. [0079] The present application materials present a preferred disclosure of the implementation of the claimed technical solution, which should not be used as limiting other, particular embodiments of its implementation that do not go beyond the scope of the requested scope of legal protection and are obvious to specialists in the relevant field of technology.
Источники информации:Sources of information:
1. Циммерман Я.С. Нерешенные и спорные проблемы современной гастроэнтерологии. – М.: МЕДпресс-информ, 2013. – 224 с.1. Zimmerman Ya.S. Unresolved and controversial issues of modern gastroenterology. – M.: MEDpress-inform, 2013. – 224 p.
2. Algood H.M., Cover T.L. Helicobacter pylori persistence: an overview of interactions between H. pylori and host immune defenses. Clin Microbiol Rev, 2006, 19(4): 597-613.2. Algood H.M., Cover T.L. Helicobacter pylori persistence: an overview of interactions between H. pylori and host immune defenses. Clin Microbiol Rev, 2006, 19(4): 597-613.
3. Kandler O., Stetter K., Kohl R. Lactobacillus reuteri sp. nov. a new species of heterofermentative lactobacilli. ZBL. Bakt. Hyg. Abt. Orig., 1980, C1: 264–9.3. Kandler O., Stetter K., Kohl R. Lactobacillus reuteri sp. nov. a new species of heterofermentative lactobacilli. ZBL. Bakt. Hyg. Abt. Orig., 1980, C1: 264–9.
4. Dore M.P., Cuccu M., Pes G.M. et al. Lactobacillus reuteri in the treatment of Helicobacter pylori infection. Intern Emerg Med 9, 2014, 649–654.4. Dore M.P., Cuccu M., Pes G.M. et al. Lactobacillus reuteri in the treatment of Helicobacter pylori infection. Intern Emerg Med 9, 2014, 649–654.
5. Cotter P., Ross R., Hill C. Bacteriocins — a viable alternative to antibiotics? // Nat Rev Microbiol, 2012, 11, 95–105.5. Cotter P., Ross R., Hill C. Bacteriocins - a viable alternative to antibiotics? // Nat Rev Microbiol, 2012, 11, 95–105.
6. Talarico T.L., Dobrogosz W.J. Chemical characterization of an antimicrobial substance produced by Lactobacillus reuteri. // Antimicrob Agents Chemother 33, 1989.6. Talarico T.L., Dobrogosz W.J. Chemical characterization of an antimicrobial substance produced by Lactobacillus reuteri. // Antimicrob Agents Chemother 33, 1989.
7. Casas I.A., Dobrogosz W.J. Validation of the Probiotic Concept: Lactobacillus reuteri Confers Broad-spectrum Protection against Disease in Humans and Animals. // Microbial Ecology in Health and Disease, 2000, 12:4, 247-285.7. Casas I.A., Dobrogosz W.J. Validation of the Probiotic Concept: Lactobacillus reuteri Confers Broad-spectrum Protection against Disease in Humans and Animals. // Microbial Ecology in Health and Disease, 2000, 12:4, 247-285.
8. Хурса Р.В., Месникова И.Л., Микша Я.С. Кишечная микрофлора: роль в поддержании здоровья и развитии патологии, возможности коррекции: учеб.-метод. пособие. Минск : БГМУ, 2017, 36 с.8. Khursa R.V., Mesnikova I.L., Miksha Ya.S. Intestinal microflora: role in maintaining health and developing pathology, correction possibilities: teaching aid. Minsk: BSMU, 2017, 36 p.
9. Тарантул В.З. и др. Словарь биотехнологических терминов. Москва: ИНИЦ Роспатента, 2005, 126 с.9. Tarantula V.Z. and others. Dictionary of biotechnological terms. Moscow: INITs Rospatent, 2005, 126 p.
10. Шендеров Б.А., Ткаченко Е.И., Лазебник Л.Б., Ардатская М.Д., Синица А.В., Захарченко М.М. Метабиотики - новая технология профилактики и лечения заболеваний, связанных с микроэкологическими нарушениями в организме человека. // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2018, 151(3), 83-92.10. Shenderov B.A., Tkachenko E.I., Lazebnik L.B., Ardatskaya M.D., Sinitsa A.V., Zakharchenko M.M. Metabiotics - a new technology for the prevention and treatment of diseases associated with microecological disturbances in the human body. // Experimental and Clinical Gastroenterology, 2018, 151(3), 83-92.
11. Фирсов Н.Н. Микробиология: словарь терминов. Москва: Дрофа, 2026, 256 с.11. Firsov N.N. Microbiology: dictionary of terms. Moscow: Bustard, 2026, 256 p.
12. ГОСТ Р 52349-2005 Продукты пищевые. Продукты пищевые функциональные. Термины и определения (с Изменением N 1) // ГОСТ Р от 31 мая 2005 г. № 52349-2005.12. GOST R 52349-2005 Food products. Functional food products. Terms and definitions (with Amendment No. 1) // GOST R of May 31, 2005 No. 52349-2005.
13. Ausubel F.M. et al. Current Protocols in Molecular Biology. Wiley, New York (1994).13. Ausubel F.M. et al. Current Protocols in Molecular Biology. Wiley, New York (1994).
14. Tarlachkov S.V., Starodumova I.P. TaxonDC: calculating the similarity value of the 16S rRNA gene sequences of prokaryotes or ITS regions of fungi. // Journal of Bioinformatics and Genomics, 2017, 3(5).14. Tarlachkov S.V., Starodumova I.P. TaxonDC: calculating the similarity value of the 16S rRNA gene sequences of prokaryotes or ITS regions of fungi. // Journal of Bioinformatics and Genomics, 2017, 3(5).
15. Holz, C., Busjahn, A., Mehling, H., Arya, S., Boettner, M., Habibi, H., & Lang, C. Significant Reduction in Helicobacter pylori Load in Humans with Non-viable Lactobacillus reuteri DSM17648: A Pilot Study. // Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2015, 7(2), 91–100.15. Holz, C., Busjahn, A., Mehling, H., Arya, S., Boettner, M., Habibi, H., & Lang, C. Significant Reduction in Helicobacter pylori Load in Humans with Non-viable Lactobacillus reuteri DSM17648: A Pilot Study. // Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2015, 7 (2), 91–100.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2024/050332 WO2025206977A1 (en) | 2024-03-29 | 2024-12-25 | Lactobacillus reuteri strain for suppressing helicobacter pylori activity |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2837786C1 true RU2837786C1 (en) | 2025-04-04 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2435844C2 (en) * | 2006-06-05 | 2011-12-10 | Биогайа Аб | BACTERIA Lactobacillus reuteri STRAIN FOR MAKING PROBIOTIC PRODUCT, AND PROBIOTIC PRODUCT CONTAINING IT |
| RU2509478C2 (en) * | 2008-12-05 | 2014-03-20 | Нестек С.А. | Probiotic composition intended for babies with low body weight at birth |
| RU2723687C2 (en) * | 2014-10-29 | 2020-06-17 | Биогаиа Аб | Using lactobacillus reuteri for recovering microbiota after dysbiosis at early stages of development |
| RU2806313C1 (en) * | 2023-04-07 | 2023-10-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) | Method for preventing erosive and ulcerative lesions of stomach and duodenum during chemotherapy |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2435844C2 (en) * | 2006-06-05 | 2011-12-10 | Биогайа Аб | BACTERIA Lactobacillus reuteri STRAIN FOR MAKING PROBIOTIC PRODUCT, AND PROBIOTIC PRODUCT CONTAINING IT |
| RU2509478C2 (en) * | 2008-12-05 | 2014-03-20 | Нестек С.А. | Probiotic composition intended for babies with low body weight at birth |
| RU2723687C2 (en) * | 2014-10-29 | 2020-06-17 | Биогаиа Аб | Using lactobacillus reuteri for recovering microbiota after dysbiosis at early stages of development |
| RU2806313C1 (en) * | 2023-04-07 | 2023-10-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Астраханский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Астраханский ГМУ Минздрава России) | Method for preventing erosive and ulcerative lesions of stomach and duodenum during chemotherapy |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2021333530B2 (en) | Bifidobacterium breve 207-1 and use thereof | |
| Gunyakti et al. | Lactobacillus gasseri from human milk with probiotic potential and some technological properties | |
| Yang et al. | Oral administration of live Bifidobacterium substrains isolated from healthy centenarians enhanced immune function in BALB/c mice | |
| CN106350468B (en) | A kind of acidophilic lactobacillus | |
| CN110577912B (en) | Lactobacillus gasseri and application thereof in preparing fermented milk | |
| Mansour et al. | Inhibition of Clostridium difficile in mice using a mixture of potential probiotic strains Enterococcus faecalis NM815, E. faecalis NM915, and E. faecium NM1015: novel candidates to control C. difficile infection (CDI) | |
| RU2580002C1 (en) | Method of producing autoprobiotic containing living bifidus bacteria and lactic acid bacilli | |
| RU2460778C1 (en) | Method for producing autoprobiotic of enterocuccus faecium being representative of indigenic host intestinal microflora | |
| Xu et al. | Probiotic characterization and comparison of broiler-derived lactobacillus strains based on technique for order preference by similarity to ideal solution analysis | |
| CN113444656A (en) | Strain with anti-aging function and application thereof | |
| RU2391393C1 (en) | Lactobacillus delbrueckii TS1-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES | |
| EP4209579A1 (en) | Bifidobacterium inhibiting expression of muscle atrophy gene | |
| JP4457364B2 (en) | New lactic acid bacteria and various products processed using the lactic acid bacteria | |
| KR101098946B1 (en) | Novel Lactobacillus salivarius strains and feed additive composition containing the same | |
| RU2837786C1 (en) | Bacterial strain lactobacillus reuteri salr01, having suppressive action on helicobacter pylori | |
| RU2546253C2 (en) | Method of obtaining personified autoprobiotic product and method of treating syndrome of irritable bowl with thereof application | |
| JP4308481B2 (en) | Antiallergic agent | |
| CN119015203B (en) | A fermented Lactobacillus mucilaginosus strain A21038 with antioxidant, anti-aging and anti-tumor activities and its application | |
| KR101201337B1 (en) | A feed additive containig novel Lactobacillus spp. complex | |
| WO2025206977A1 (en) | Lactobacillus reuteri strain for suppressing helicobacter pylori activity | |
| RU2391395C1 (en) | Lactobacillus fermentum TS3-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES | |
| TWI600758B (en) | Immunnomodulatory Lactobacillus plantarum and use thereof | |
| CN116987645A (en) | Lactobacillus plantarum (Lactiplantibacillus plantarum) HEPRO-185 and application thereof | |
| RU2616899C1 (en) | Anti-inflammatory pharmaceutical compositions based on bacterial strain | |
| KR100720025B1 (en) | Probiotic Lactobacillus and Compositions Comprising the Same |