RU2830948C1 - Crystalline form of thiophene derivative and method for obtaining thereof - Google Patents
Crystalline form of thiophene derivative and method for obtaining thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2830948C1 RU2830948C1 RU2023130956A RU2023130956A RU2830948C1 RU 2830948 C1 RU2830948 C1 RU 2830948C1 RU 2023130956 A RU2023130956 A RU 2023130956A RU 2023130956 A RU2023130956 A RU 2023130956A RU 2830948 C1 RU2830948 C1 RU 2830948C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- crystalline form
- compound
- diffraction pattern
- formula
- present
- Prior art date
Links
- 150000003577 thiophenes Chemical class 0.000 title abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 154
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 claims abstract description 46
- 238000001757 thermogravimetry curve Methods 0.000 claims description 21
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 claims description 20
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 12
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 abstract description 11
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 44
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 42
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 24
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 20
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 18
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 17
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 12
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 12
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 11
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 9
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 8
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 5
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 5
- 229960003459 allopurinol Drugs 0.000 description 5
- OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N allopurinol Chemical compound OC1=NC=NC2=C1C=NN2 OFCNXPDARWKPPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 5
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 5
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- DQXKOHDUMJLXKH-PHEQNACWSA-N (e)-n-[2-[2-[[(e)-oct-2-enoyl]amino]ethyldisulfanyl]ethyl]oct-2-enamide Chemical compound CCCCC\C=C\C(=O)NCCSSCCNC(=O)\C=C\CCCCC DQXKOHDUMJLXKH-PHEQNACWSA-N 0.000 description 4
- 101150078067 SLC22A12 gene Proteins 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 4
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 4
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical class O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- SGUAFYQXFOLMHL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-5-{1-hydroxy-2-[(4-phenylbutan-2-yl)amino]ethyl}benzamide Chemical compound C=1C=C(O)C(C(N)=O)=CC=1C(O)CNC(C)CCC1=CC=CC=C1 SGUAFYQXFOLMHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- QGJOPFRUJISHPQ-UHFFFAOYSA-N Carbon disulfide Chemical compound S=C=S QGJOPFRUJISHPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- JLRGJRBPOGGCBT-UHFFFAOYSA-N Tolbutamide Chemical compound CCCCNC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 JLRGJRBPOGGCBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 229960005101 febuxostat Drugs 0.000 description 3
- BQSJTQLCZDPROO-UHFFFAOYSA-N febuxostat Chemical compound C1=C(C#N)C(OCC(C)C)=CC=C1C1=NC(C)=C(C(O)=O)S1 BQSJTQLCZDPROO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 229960001632 labetalol Drugs 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 3
- 229960005371 tolbutamide Drugs 0.000 description 3
- KZPYGQFFRCFCPP-UHFFFAOYSA-N 1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene Chemical compound [Fe+2].C1=CC=C[C-]1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=C[C-]1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KZPYGQFFRCFCPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LIFAQMGORKPVDH-UHFFFAOYSA-N 7-ethoxycoumarin Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(OCC)=CC=C21 LIFAQMGORKPVDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 2
- 102000003849 Cytochrome P450 Human genes 0.000 description 2
- 206010018634 Gouty Arthritis Diseases 0.000 description 2
- 101001017818 Homo sapiens ATP-dependent translocase ABCB1 Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- NXQGGXCHGDYOHB-UHFFFAOYSA-L cyclopenta-1,4-dien-1-yl(diphenyl)phosphane;dichloropalladium;iron(2+) Chemical compound [Fe+2].Cl[Pd]Cl.[CH-]1C=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1.[CH-]1C=CC(P(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=C1 NXQGGXCHGDYOHB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 2
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N potassium tert-butoxide Chemical compound [K+].CC(C)(C)[O-] LPNYRYFBWFDTMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000004467 single crystal X-ray diffraction Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic anhydride Chemical compound FC(F)(F)C(=O)OC(=O)C(F)(F)F QAEDZJGFFMLHHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 108010074922 Cytochrome P-450 CYP1A2 Proteins 0.000 description 1
- 102000008144 Cytochrome P-450 CYP1A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010026925 Cytochrome P-450 CYP2C19 Proteins 0.000 description 1
- 108010000543 Cytochrome P-450 CYP2C9 Proteins 0.000 description 1
- 108010001237 Cytochrome P-450 CYP2D6 Proteins 0.000 description 1
- 102100029363 Cytochrome P450 2C19 Human genes 0.000 description 1
- 102100029358 Cytochrome P450 2C9 Human genes 0.000 description 1
- 102100021704 Cytochrome P450 2D6 Human genes 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034170 Disorder of purine metabolism Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000006390 HLA-B Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233805 Phoenix Species 0.000 description 1
- 206010037211 Psychomotor hyperactivity Diseases 0.000 description 1
- 239000007868 Raney catalyst Substances 0.000 description 1
- NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N Raney nickel Chemical compound [Al].[Ni] NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000564 Raney nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical class [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940083914 URAT1 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 210000000544 articulatio talocruralis Anatomy 0.000 description 1
- 229960002529 benzbromarone Drugs 0.000 description 1
- WHQCHUCQKNIQEC-UHFFFAOYSA-N benzbromarone Chemical compound CCC=1OC2=CC=CC=C2C=1C(=O)C1=CC(Br)=C(O)C(Br)=C1 WHQCHUCQKNIQEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Chemical compound BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N cyanuric chloride Chemical compound ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 MGNCLNQXLYJVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- RDYMFSUJUZBWLH-UHFFFAOYSA-N endosulfan Chemical compound C12COS(=O)OCC2C2(Cl)C(Cl)=C(Cl)C1(Cl)C2(Cl)Cl RDYMFSUJUZBWLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N ethyl n-ethoxycarbonylcarbamate Chemical compound CCOC(=O)NC(=O)OCC PQVSTLUFSYVLTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 229960003838 lesinurad Drugs 0.000 description 1
- FGQFOYHRJSUHMR-UHFFFAOYSA-N lesinurad Chemical compound OC(=O)CSC1=NN=C(Br)N1C(C1=CC=CC=C11)=CC=C1C1CC1 FGQFOYHRJSUHMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium hydroxide monohydrate Substances [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940040692 lithium hydroxide monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000878 metatarsophalangeal joint Anatomy 0.000 description 1
- NSPJNIDYTSSIIY-UHFFFAOYSA-N methoxy(methoxymethoxy)methane Chemical group COCOCOC NSPJNIDYTSSIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IUBSYMUCCVWXPE-UHFFFAOYSA-N metoprolol Chemical compound COCCC1=CC=C(OCC(O)CNC(C)C)C=C1 IUBSYMUCCVWXPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002237 metoprolol Drugs 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- VWPOSFSPZNDTMJ-UCWKZMIHSA-N nadolol Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)CC2=C1C=CC=C2OCC(O)CNC(C)(C)C VWPOSFSPZNDTMJ-UCWKZMIHSA-N 0.000 description 1
- 229960004255 nadolol Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000011170 pharmaceutical development Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 208000016839 purine metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
- 239000003064 xanthine oxidase inhibitor Substances 0.000 description 1
Abstract
Description
[1] Настоящая заявка испрашивает приоритет следующих заявок:[1] This application claims priority from the following applications:
CN202110472705.3, дата подачи: 29 апреля 2021 г.CN202110472705.3, Filing date: April 29, 2021
CN202111112439.X, дата подачи: 18 сентября 2021 г.CN202111112439.X, filing date: September 18, 2021
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ AREA OF TECHNOLOGY
[2] Настоящее изобретение относится к кристаллической форме производного тиофена и способу ее получения, в частности, к кристаллической форме формулы (I) и способу ее получения.[2] The present invention relates to a crystalline form of a thiophene derivative and a process for its preparation, in particular to a crystalline form of formula (I) and a process for its preparation.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИLEVEL OF TECHNOLOGY
[3] Подагрический артрит представляет собой распространенный и сложный тип артрита. Когда концентрация мочевой кислоты в крови человека превышает 7 мг/дл, мочевая кислота откладывается в суставах, хрящах и почках в виде мононатриевой соли, что приводит к сверхактивности (чувствительности) иммунной системы, тем самым вызывая болезненное воспаление. Типичными областями поражения являются плюснефаланговый сустав, голеностопный сустав, коленный сустав и т.д. Гиперурикемия является основной патологической причиной подагрического артрита. Гиперурикемия относится к нарушению метаболизма пуриновых веществ в организме человека, приводящему к повышению синтеза мочевой кислоты или понижению ее выведения, что приводит к аномально высокому уровню содержания мочевой кислоты в крови. На международном уровне стандарты диагностики гиперурикемии (HUA) определяются как: при нормальных в отношении пуринов условиях питания уровни мочевой кислоты в крови натощак, измеренные дважды в разные дни, превышают 400 мкмоль/л (6,8 мг/дл) у мужчин и 360 мкмоль/л (6 мг/дл) у женщин. Ее можно категоризировать на три типа, недостаточная экскреция мочевой кислоты, избыточная выработка мочевой кислоты или смешанный тип. Клиническое исследование указывает на то, что 90% первичной гиперурикемии подпадает под категорию недостаточной экскреции мочевой кислоты.[3] Gouty arthritis is a common and complex type of arthritis. When the concentration of uric acid in a person's blood exceeds 7 mg/dL, uric acid is deposited in the joints, cartilage and kidneys as monosodium salt, which leads to overactivity (sensitivity) of the immune system, thereby causing painful inflammation. Typical affected areas are the metatarsophalangeal joint, ankle joint, knee joint, etc. Hyperuricemia is the main pathological cause of gouty arthritis. Hyperuricemia refers to the disorder of purine metabolism in the human body, resulting in increased synthesis of uric acid or decreased excretion of uric acid, resulting in abnormally high levels of uric acid in the blood. Internationally, the diagnostic standards for hyperuricemia (HUA) are defined as: under normal purine nutritional conditions, fasting blood uric acid levels measured twice on different days are greater than 400 μmol/L (6.8 mg/dL) in men and 360 μmol/L (6 mg/dL) in women. It can be categorized into three types, under-uric acid excretion, over-uric acid production, or mixed type. Clinical research indicates that 90% of primary hyperuricemia falls under the under-uric acid excretion category.
[4] Гиперурикемия неразрывно связана с подагрой и является независимым фактором риска метаболических заболеваний [таких как диабет, метаболический синдром (MS), гиперлипидемия], хронического заболевания почек, сердечно-сосудистого заболевания и инсульта. Следовательно, снижение уровня мочевой кислоты в организме человека может способствовать не только лечению или предупреждению гиперурикемии и подагры, но и снижению риска других осложнений, ассоциированных с гиперурикемией.[4] Hyperuricemia is inextricably linked with gout and is an independent risk factor for metabolic diseases [such as diabetes, metabolic syndrome (MS), hyperlipidemia], chronic kidney disease, cardiovascular disease and stroke. Therefore, lowering uric acid levels in the human body may not only help treat or prevent hyperuricemia and gout, but also reduce the risk of other complications associated with hyperuricemia.
[5] В организме человека существует два источника пуринов: эндогенные пурины, возникающие в результате внутреннего синтеза или распада нуклеиновых кислот (примерно 600 мг/день), и экзогенные пурины, получаемые в результате поступления пуринов с пищей (примерно 100 мг/день). В нормальных условиях запас мочевой кислоты в организме составляет 1200 мг, при этом ежедневно вырабатывается приблизительно 700 мг мочевой кислоты. Из них 2/3 выводится через почки, 1/3 - через кишечник и очень небольшое количество выводится через потовые железы. Следовательно, обычно применяемые в клинической практике лекарственные средства, снижающие уровень мочевой кислоты, включают ингибиторы ксантиноксидазы (XO) (такие как аллопуринол и фебуксостат), которые подавляют выработку мочевой кислоты, и ингибиторы Urat1, которые способствуют экскреции мочевой кислоты (такие как бензбромарон и лесинурад).[5] There are two sources of purines in the human body: endogenous purines resulting from the internal synthesis or breakdown of nucleic acids (approximately 600 mg/day) and exogenous purines obtained from dietary purines (approximately 100 mg/day). Under normal conditions, the body stores uric acid about 1200 mg, and approximately 700 mg of uric acid is produced daily. Of this, 2/3 are excreted through the kidneys, 1/3 through the intestines, and a very small amount is excreted through the sweat glands. Therefore, uric acid-lowering drugs commonly used in clinical practice include xanthine oxidase (XO) inhibitors (such as allopurinol and febuxostat), which suppress uric acid production, and Urat1 inhibitors, which promote uric acid excretion (such as benzbromarone and lesinurad).
[6] Ксантиноксидаза представляет собой фермент с низкой специфичностью; он может катализировать превращение гипоксантина в ксантин и впоследствии в мочевую кислоту, а также напрямую катализировать превращение ксантина в мочевую кислоту. Ингибиторы ксантиноксидазы представляют собой препараты первой линии для лечения гиперурикемии, при этом аллопуринол и фебуксостат являются основными лекарственными препаратами, представленными на рынке. Однако, такие лекарственные средства не отвечают клиническим потребностям всех пациентов и обладают заметными побочными эффектами. Аллопуринол является единственным доступным во всем мире терапевтическим средством, снижающим уровень мочевой кислоты, однако он может приводить к серьезным неблагоприятным явлениям со стороны кожи. Тяжелые реакции повышенной чувствительности, связанные с аллопуринолом, тесно ассоциированы с человеческим лейкоцитарным антигеном (HLA)-B*5801, при этом китайское население характеризуется более высокой частотой положительного результата в отношении HLA-B*5801 (6%-8%) по сравнению с европеоидами (приблизительно 2%), что увеличивает риск реакций повышенной чувствительности. Фебуксостат характеризуется превосходным эффектом снижения уровня мочевой кислоты по сравнению с аллопуринолом, но даже при высоких дозах, составляющих 80 мг в день, 40%-52% пациентов не достигают ожидаемого целевого уровня снижения мочевой кислоты, и это может увеличить частоту возникновения острых приступов подагры.[6] Xanthine oxidase is an enzyme with low specificity; it can catalyze the conversion of hypoxanthine to xanthine and subsequently to uric acid, and directly catalyze the conversion of xanthine to uric acid. Xanthine oxidase inhibitors are the first-line treatment for hyperuricemia, with allopurinol and febuxostat being the main drugs on the market. However, such drugs do not meet the clinical needs of all patients and have significant side effects. Allopurinol is the only uric acid-lowering therapy available worldwide, but it can cause serious adverse skin events. Severe hypersensitivity reactions associated with allopurinol are closely associated with human leukocyte antigen (HLA)-B*5801, with the Chinese population having a higher rate of HLA-B*5801 positivity (6%-8%) compared to Caucasians (approximately 2%), increasing the risk of hypersensitivity reactions. Febuxostat has a superior uric acid-lowering effect compared with allopurinol, but even at high doses of 80 mg daily, 40%-52% of patients do not achieve the expected uric acid-lowering target, and this may increase the incidence of acute gout attacks.
[7] На рынке все еще существует неудовлетворенная клиническая потребность в безопасных и эффективных лекарственных средствах, снижающих уровень мочевой кислоты.[7] There is still an unmet clinical need in the market for safe and effective uric acid-lowering drugs.
СОДЕРЖАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯCONTENTS OF THE INVENTION
[8] В настоящем изобретении предусмотрена кристаллическая форма А соединения формулы (I), где кристаллическая форма A характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 12,35±0,20°, 15,05±0,20°, 18,19±0,20°, 20,10±0,20°, 23,05±0,20°, 25,05±0,20°, 25,87±0,20°, 27,16±0,20°,[8] The present invention provides a crystalline form A of the compound of formula (I), wherein the crystalline form A is characterized by an X-ray powder diffraction pattern comprising characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 12.35±0.20°, 15.05±0.20°, 18.19±0.20°, 20.10±0.20°, 23.05±0.20°, 25.05±0.20°, 25.87±0.20°, 27.16±0.20°,
. .
[9] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы A характеризуется характеристическими дифракционными пиками при следующих значениях угла 2θ: 10,89±0,20°, 12,35±0,20°, 13,42±0,20°, 15,05±0,20°, 18,19±0,20°, 20,10±0,20°, 21,82±0,20°, 23,05±0,20°, 25,05±0,20°, 25,87±0,20°, 27,16±0,20°, 30,28±0,20°.[9] In some embodiments of the present invention, the powder X-ray diffraction pattern of crystalline Form A is characterized by characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 10.89±0.20°, 12.35±0.20°, 13.42±0.20°, 15.05±0.20°, 18.19±0.20°, 20.10±0.20°, 21.82±0.20°, 23.05±0.20°, 25.05±0.20°, 25.87±0.20°, 27.16±0.20°, 30.28±0.20°.
[10] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы A характеризуется характеристическими дифракционными пиками при следующих значениях угла 2θ: 6,72°, 8,94°, 10,89°, 12,35°, 13,42°, 15,05°, 17,26°, 18,19°, 18,70°, 20,10°, 21,82°, 23,05°, 24,28°, 25,05°, 25,87°, 27,16°, 29,41°, 30,28°, 30,89°, 33,58°, 36,29°, 37,29°, 38,99°.[10] In some embodiments of the present invention, the powder X-ray diffraction pattern of crystalline Form A is characterized by characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 6.72°, 8.94°, 10.89°, 12.35°, 13.42°, 15.05°, 17.26°, 18.19°, 18.70°, 20.10°, 21.82°, 23.05°, 24.28°, 25.05°, 25.87°, 27.16°, 29.41°, 30.28°, 30.89°, 33.58°, 36.29°, 37.29°, 38.99°.
[11] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма А характеризуется дифрактограммой XRPD, по сути показанной на фигуре 1.[11] In some embodiments of the present invention, crystalline Form A is characterized by an XRPD diffraction pattern substantially as shown in Figure 1.
[12] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные анализа из дифрактограммы XRPD кристаллической формы A являются такими, как показано в таблице 1.[12] In some embodiments of the present invention, the XRPD diffraction pattern analysis data of crystalline Form A are as shown in Table 1.
[13][13]
[14] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма A характеризуется кривой термогравиметрического анализа с потерей веса 1,96% при 200°C±3°C.[14] In some embodiments of the present invention, crystalline Form A is characterized by a thermogravimetric analysis curve with a weight loss of 1.96% at 200°C±3°C.
[15] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма А характеризуется термограммой TGA, показанной на фигуре 2.[15] In some embodiments of the present invention, crystalline Form A is characterized by the TGA thermogram shown in Figure 2.
[16] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма А характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, содержащей эндотермический пик с началом при 244,3°C±2°C.[16] In some embodiments of the present invention, crystalline Form A is characterized by a differential scanning calorimetry curve containing an endothermic peak with an onset at 244.3°C±2°C.
[17] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма А характеризуется термограммой DSC, показанной на фигуре 3.[17] In some embodiments of the present invention, crystalline Form A is characterized by the DSC thermogram shown in Figure 3.
[18] В настоящем изобретении предусмотрена кристаллическая форма B соединения формулы (I), где кристаллическая форма A характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 23,93±0,20°, 24,73±0,20°, 26,58±0,20°,[18] The present invention provides a crystalline form B of the compound of formula (I), wherein the crystalline form A is characterized by an X-ray powder diffraction pattern containing characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 23.93±0.20°, 24.73±0.20°, 26.58±0.20°,
. .
[19] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы B характеризуется характеристическими дифракционными пиками при следующих значениях угла 2θ: 13,02±0,20°, 14,68±0,20°, 16,44±0,20°, 19,50±0,20°, 22,69±0,20°, 23,93±0,20°, 24,73±0,20°, 26,58±0,20°.[19] In some embodiments of the present invention, the powder X-ray diffraction pattern of crystalline form B is characterized by characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.02±0.20°, 14.68±0.20°, 16.44±0.20°, 19.50±0.20°, 22.69±0.20°, 23.93±0.20°, 24.73±0.20°, 26.58±0.20°.
[20] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы B характеризуется характеристическими дифракционными пиками при следующих значениях угла 2θ: 13,02±0,20°, 14,68±0,20°, 16,44±0,20°, 19,50±0,20°, 22,69±0,20°, 23,93±0,20°, 24,73±0,20°, 25,87±0,20°, 26,58±0,20°, 28,98±0,20°, 29,34±0,20°, 31,86±0,20°.[20] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form B is characterized by characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.02±0.20°, 14.68±0.20°, 16.44±0.20°, 19.50±0.20°, 22.69±0.20°, 23.93±0.20°, 24.73±0.20°, 25.87±0.20°, 26.58±0.20°, 28.98±0.20°, 29.34±0.20°, 31.86±0.20°.
[21] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы B характеризуется характеристическими дифракционными пиками при следующих значениях угла 2θ: 5,37°, 11,72°, 13,02°, 14,68°, 15,44°, 16,05°, 16,44°, 16,94°, 18,68°, 19,50°, 20,69°, 21,13°, 21,32°, 21,70°, 22,41°, 22,69°, 23,46°, 23,93°, 24,73°, 25,87°, 26,58°, 27,78°, 28,98°, 29,34°, 29,66°, 30,07°, 31,26°, 31,38°, 31,86°, 32,73°, 33,71°, 34,02°, 34,68°, 35,41°, 36,64°, 37,30°, 37,86°, 38,30°.[21] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form B is characterized by characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 5.37°, 11.72°, 13.02°, 14.68°, 15.44°, 16.05°, 16.44°, 16.94°, 18.68°, 19.50°, 20.69°, 21.13°, 21.32°, 21.70°, 22.41°, 22.69°, 23.46°, 23.93°, 24.73°, 25.87°, 26.58°, 27.78°, 28.98°, 29.34°, 29.66°, 30.07°, 31.26°, 31.38°, 31.86°, 32.73°, 33.71°, 34.02°, 34.68°, 35.41°, 36.64°, 37.30°, 37.86°, 38.30°.
[22] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма B характеризуется дифрактограммой XRPD, по сути показанной на фигуре 4.[22] In some embodiments of the present invention, crystalline Form B is characterized by an XRPD diffraction pattern substantially as shown in Figure 4.
[23] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные анализа из дифрактограммы XRPD кристаллической формы B являются такими, как показано в таблице 2.[23] In some embodiments of the present invention, the XRPD diffraction pattern analysis data of crystalline Form B are as shown in Table 2.
[24][24]
[25] В настоящем изобретении предусмотрен кристалл соединения формулы (I), где кристалл характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,28±0,30°, 15,34±0,30°, 25,14±0,30°, [25] The present invention provides a crystal of a compound of formula (I), wherein the crystal is characterized by an X-ray powder diffraction pattern comprising characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 13.28±0.30°, 15.34±0.30°, 25.14±0.30°,
. .
[26] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,30°, 13,28±0,30°, 15,34±0,30°, 18,16±0,30°, 22,06±0,30°, 25,14±0,30°, 26,75±0,30°, 27,25±0,30°.[26] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of the crystal comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 9.11±0.30°, 13.28±0.30°, 15.34±0.30°, 18.16±0.30°, 22.06±0.30°, 25.14±0.30°, 26.75±0.30°, 27.25±0.30°.
[27] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,30°, 11,21±0,30°, 13,28±0,30°, 15,34±0,30°, 18,16±0,30°, 22,06±0,30°, 23,15±0,30°, 25,14±0,30°, 25,97±0,30°, 26,75±0,30°, 27,25±0,30°, 30,82±0,30°.[27] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of the crystal comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11±0.30°, 11.21±0.30°, 13.28±0.30°, 15.34±0.30°, 18.16±0.30°, 22.06±0.30°, 23.15±0.30°, 25.14±0.30°, 25.97±0.30°, 26.75±0.30°, 27.25±0.30°, 30.82±0.30°.
[28] В настоящем изобретении предусмотрен кристалл соединения формулы (I), где кристалл характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 25,07±0,20°,[28] The present invention provides a crystal of the compound of formula (I), wherein the crystal is characterized by an X-ray powder diffraction pattern comprising characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 25.07±0.20°,
. .
[29] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 25,07±0,20°, 26,66±0,20°, 28,38±0,20°, 30,70±0,20°.[29] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of the crystal comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 25.07±0.20°, 26.66±0.20°, 28.38±0.20°, 30.70±0.20°.
[30] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристалла содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,03±0,20°, 11,13±0,20°, 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 25,07±0,20°, 26,66±0,20°, 28,38±0,20°, 29,41±0,20°, 30,70±0,20°, 38,53±0,20°.[30] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of the crystal comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.03±0.20°, 11.13±0.20°, 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 25.07±0.20°, 26.66±0.20°, 28.38±0.20°, 29.41±0.20°, 30.70±0.20°, 38.53±0.20°.
[31] В настоящем изобретении предусмотрена кристаллическая форма C соединения формулы (I), где кристаллическая форма C характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,20±0,20°, 18,08±0,20°, 25,07±0,20°,[31] The present invention provides a crystalline form C of the compound of formula (I), wherein the crystalline form C is characterized by an X-ray powder diffraction pattern comprising characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 13.20±0.20°, 18.08±0.20°, 25.07±0.20°,
. .
[32] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 25,07±0,20°, 26,66±0,20°, 28,38±0,20°, 30,70±0,20°.[32] In some embodiments of the present invention, the powder X-ray diffraction pattern of crystalline form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 25.07±0.20°, 26.66±0.20°, 28.38±0.20°, 30.70±0.20°.
[33] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 25,07±0,20°, 25,38±0,20°, 26,66±0,20°, 30,70±0,20°.[33] In some embodiments of the present invention, the powder X-ray diffraction pattern of crystalline form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 25.07±0.20°, 25.38±0.20°, 26.66±0.20°, 30.70±0.20°.
[34] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,03±0,20°, 11,13±0,20°, 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 25,07±0,20°, 26,66±0,20°, 28,38±0,20°, 29,41±0,20°, 30,70±0,20°, 38,53±0,20°.[34] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.03±0.20°, 11.13±0.20°, 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 25.07±0.20°, 26.66±0.20°, 28.38±0.20°, 29.41±0.20°, 30.70±0.20°, 38.53±0.20°.
[35] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,03±0,20°, 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 25,07±0,20°, 25,38±0,20°, 26,66±0,20°, 28,38±0,20°, 29,41±0,20°, 30,70±0,20°, 38,53±0,20°.[35] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.03±0.20°, 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 25.07±0.20°, 25.38±0.20°, 26.66±0.20°, 28.38±0.20°, 29.41±0.20°, 30.70±0.20°, 38.53±0.20°.
[36] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,03±0,20°, 11,13±0,20°, 13,20±0,20°, 15,26±0,20°, 18,08±0,20°, 21,99±0,20°, 24,09±0,20°, 25,07±0,20°, 25,38±0,20°, 26,66±0,20°, 27,17±0,20°, 28,38±0,20°, 29,41±0,20°, 30,70±0,20°, 31,02±0,20°, 38,53±0,20°.[36] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.03±0.20°, 11.13±0.20°, 13.20±0.20°, 15.26±0.20°, 18.08±0.20°, 21.99±0.20°, 24.09±0.20°, 25.07±0.20°, 25.38±0.20°, 26.66±0.20°, 27.17±0.20°, 28.38±0.20°, 29.41±0.20°, 30.70±0.20°, 31.02±0.20°, 38.53±0.20°.
[37] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,20±0,20°, 25,07±0,20° и в качестве альтернативы при 18,08±0,20°, и/или 9,03±0,20°, и/или 11,13±0,20°, и/или 15,26±0,20°, и/или 18,92±0,20°, и/или 21,99±0,20°, и/или 24,09±0,20°, и/или 25,38±0,20°, и/или 26,66±0,20°, и/или 27,17±0,20°, и/или 28,38±0,20°, и/или 29,41±0,20°, и/или 30,70±0,20°, и/или 31,02±0,20°, и/или 33,67±0,20°, и/или 35,40±0,20°, и/или 36,35±0,20°, и/или 37,26±0,20°, и/или 38,53±0,20°.[37] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.20 ± 0.20°, 25.07 ± 0.20°, and alternatively at 18.08 ± 0.20° and/or 9.03 ± 0.20° and/or 11.13 ± 0.20° and/or 15.26 ± 0.20° and/or 18.92 ± 0.20° and/or 21.99 ± 0.20° and/or 24.09 ± 0.20° and/or 25.38 ± 0.20° and/or 26.66 ± 0.20° and/or 27.17±0.20°, and/or 28.38±0.20°, and/or 29.41±0.20°, and/or 30.70±0.20°, and/or 31.02±0.20°, and/or 33.67±0.20°, and/or 35.40±0.20°, and/or 36.35±0.20°, and/or 37.26±0.20°, and/or 38.53±0.20°.
[38] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,03°, 11,13°, 13,20°, 15,26°, 18,08°, 18,92°, 21,99°, 24,09°, 25,07°, 25,38°, 26,66°, 27,17°, 28,38°, 29,41°, 30,70°, 31,02°, 33,67°, 35,40°, 36,35°, 37,26°, 38,53°.[38] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.03°, 11.13°, 13.20°, 15.26°, 18.08°, 18.92°, 21.99°, 24.09°, 25.07°, 25.38°, 26.66°, 27.17°, 28.38°, 29.41°, 30.70°, 31.02°, 33.67°, 35.40°, 36.35°, 37.26°, 38.53°.
[39] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы C содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 5,66°, 9,03°, 11,13°, 13,20°, 13,70°, 15,26°, 17,25°, 18,08°, 18,92°, 20,88°, 21,99°, 23,41°, 24,09°, 25,07°, 25,38°, 25,99°, 26,66°, 27,17°, 28,38°, 29,41°, 29,98°, 30,70°, 31,02°, 31,72°, 33,67°, 35,40°, 36,35°, 36,74°, 37,26°, 38,53°, 39,80°.[39] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form C comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 5.66°, 9.03°, 11.13°, 13.20°, 13.70°, 15.26°, 17.25°, 18.08°, 18.92°, 20.88°, 21.99°, 23.41°, 24.09°, 25.07°, 25.38°, 25.99°, 26.66°, 27.17°, 28.38°, 29.41°, 29.98°, 30.70°, 31.02°, 31.72°, 33.67°, 35.40°, 36.35°, 36.74°, 37.26°, 38.53°, 39.80°.
[40] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма C характеризуется дифрактограммой XRPD, по сути показанной на фигуре 5.[40] In some embodiments of the present invention, crystalline Form C is characterized by an XRPD diffraction pattern substantially as shown in Figure 5.
[41] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные анализа из дифрактограммы XRPD кристаллической формы C являются такими, как показано в таблице 3.[41] In some embodiments of the present invention, the XRPD diffraction pattern analysis data of crystalline Form C are as shown in Table 3.
[42][42]
[43] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма C характеризуется кривой термогравиметрического анализа с потерей веса 1,21% при 200°C±3°C.[43] In some embodiments of the present invention, crystalline form C is characterized by a thermogravimetric analysis curve with a weight loss of 1.21% at 200°C±3°C.
[44] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма C характеризуется термограммой TGA, показанной на фигуре 6.[44] In some embodiments of the present invention, crystalline Form C is characterized by the TGA thermogram shown in Figure 6.
[45] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма C характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, содержащей эндотермический пик с началом при 250,0°C±2°C.[45] In some embodiments of the present invention, crystalline form C is characterized by a differential scanning calorimetry curve containing an endothermic peak with an onset at 250.0°C±2°C.
[46] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма C характеризуется термограммой DSC, как показано на фигуре 7.[46] In some embodiments of the present invention, crystalline Form C is characterized by a DSC thermogram as shown in Figure 7.
[47] В настоящем изобретении предусмотрена кристаллическая форма D соединения формулы (I), где кристаллическая форма D характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 6,71±0,20°, 11,87±0,20°, 25,21±0,20°,[47] The present invention provides a crystalline form D of the compound of formula (I), wherein the crystalline form D is characterized by an X-ray powder diffraction pattern comprising characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 6.71±0.20°, 11.87±0.20°, 25.21±0.20°,
. .
[48] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы D содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 6,71±0,20°, 11,87±0,20°, 13,39±0,20°, 15,44±0,20°, 20,77±0,20°, 22,16±0,20°, 25,21±0,20°, 27,05±0,20°.[48] In some embodiments of the present invention, the powder X-ray diffraction pattern of crystalline Form D comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 6.71±0.20°, 11.87±0.20°, 13.39±0.20°, 15.44±0.20°, 20.77±0.20°, 22.16±0.20°, 25.21±0.20°, 27.05±0.20°.
[49] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы D содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 6,71±0,20°, 11,87±0,20°, 13,39±0,20°, 15,44±0,20°, 16,32±0,20°, 17,90±0,20°, 20,77±0,20°, 22,16±0,20°, 24,31±0,20°, 25,21±0,20°, 27,05±0,20°, 27,41±0,20°.[49] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form D comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 6.71±0.20°, 11.87±0.20°, 13.39±0.20°, 15.44±0.20°, 16.32±0.20°, 17.90±0.20°, 20.77±0.20°, 22.16±0.20°, 24.31±0.20°, 25.21±0.20°, 27.05±0.20°, 27.41±0.20°.
[50] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы D содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 6,45°, 6,71°, 9,22°, 10,40°, 11,61°, 11,87°, 12,53°, 13,39°, 13,82°, 15,44°, 16,32°, 17,37°, 17,90°, 18,27°, 19,07°, 19,67°, 19,90°, 20,77°, 22,16°, 24,31°, 25,21°, 26,10°, 27,05°, 27,41°, 28,50°, 29,59°, 30,10°, 30,89°, 31,17°, 32,81°, 33,77°, 34,17°, 35,52°, 36,57°, 38,20°, 38,68°.[50] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form D comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 6.45°, 6.71°, 9.22°, 10.40°, 11.61°, 11.87°, 12.53°, 13.39°, 13.82°, 15.44°, 16.32°, 17.37°, 17.90°, 18.27°, 19.07°, 19.67°, 19.90°, 20.77°, 22.16°, 24.31°, 25.21°, 26.10°, 27.05°, 27.41°, 28.50°, 29.59°, 30.10°, 30.89°, 31.17°, 32.81°, 33.77°, 34.17°, 35.52°, 36.57°, 38.20°, 38.68°.
[51] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма D характеризуется дифрактограммой XRPD, по сути показанной на фигуре 8.[51] In some embodiments of the present invention, crystalline Form D is characterized by an XRPD diffraction pattern substantially as shown in Figure 8.
[52] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные анализа из дифрактограммы XRPD кристаллической формы D являются такими, как показано в таблице 4.[52] In some embodiments of the present invention, the XRPD diffraction pattern analysis data of crystalline Form D are as shown in Table 4.
[53][53]
[54] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма D характеризуется кривой термогравиметрического анализа с потерей веса 1,14% при 200°C±3°C.[54] In some embodiments of the present invention, crystalline Form D is characterized by a thermogravimetric analysis curve with a weight loss of 1.14% at 200°C±3°C.
[55] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма D характеризуется термограммой TGA, показанной на фигуре 9.[55] In some embodiments of the present invention, crystalline Form D is characterized by the TGA thermogram shown in Figure 9.
[56] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма D характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, содержащей эндотермический пик с началом при 251,4°C±2°C.[56] In some embodiments of the present invention, crystalline Form D is characterized by a differential scanning calorimetry curve containing an endothermic peak with an onset at 251.4°C±2°C.
[57] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма D характеризуется термограммой DSC, как показано на фигуре 10.[57] In some embodiments of the present invention, crystalline form D is characterized by a DSC thermogram as shown in Figure 10.
[58] В настоящем изобретении предусмотрена кристаллическая форма E соединения формулы (I), где кристаллическая форма E характеризуется порошковой рентгеновской дифрактограммой, содержащей характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,28±0,20°, 15,34±0,20°, 25,14±0,20°,[58] The present invention provides a crystalline form E of the compound of formula (I), wherein the crystalline form E is characterized by an X-ray powder diffraction pattern comprising characteristic diffraction peaks at the following 2θ angle values: 13.28±0.20°, 15.34±0.20°, 25.14±0.20°,
. .
[59] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,20°, 13,28±0,20°, 15,34±0,20°, 18,16±0,20°, 22,06±0,20°, 25,14±0,20°, 26,75±0,20°, 27,25±0,20°.[59] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11±0.20°, 13.28±0.20°, 15.34±0.20°, 18.16±0.20°, 22.06±0.20°, 25.14±0.20°, 26.75±0.20°, 27.25±0.20°.
[60] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,20°, 12,43±0,20°, 13,28±0,20°, 15,34±0,20°, 18,16±0,20°, 22,06±0,20°, 23,15±0,20°, 25,14±0,20°.[60] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11±0.20°, 12.43±0.20°, 13.28±0.20°, 15.34±0.20°, 18.16±0.20°, 22.06±0.20°, 23.15±0.20°, 25.14±0.20°.
[61] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,20°, 11,21±0,20°, 13,28±0,20°, 15,34±0,20°, 18,16±0,20°, 22,06±0,20°, 23,15±0,20°, 25,14±0,20°, 25,97±0,20°, 26,75±0,20°, 27,25±0,20°, 30,82±0,20°.[61] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11±0.20°, 11.21±0.20°, 13.28±0.20°, 15.34±0.20°, 18.16±0.20°, 22.06±0.20°, 23.15±0.20°, 25.14±0.20°, 25.97±0.20°, 26.75±0.20°, 27.25±0.20°, 30.82±0.20°.
[62] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,20°, 11,21±0,20°, 12,43±0,20°, 13,28±0,20°, 15,34±0,20°, 18,16±0,20°, 22,06±0,20°, 23,15±0,20°, 25,14±0,20°, 25,97±0,20°, 26,75±0,20°, 27,25±0,20°.[62] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11±0.20°, 11.21±0.20°, 12.43±0.20°, 13.28±0.20°, 15.34±0.20°, 18.16±0.20°, 22.06±0.20°, 23.15±0.20°, 25.14±0.20°, 25.97±0.20°, 26.75±0.20°, 27.25±0.20°.
[63] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 13,28±0,20°, 25,14±0,20° и в качестве альтернативы при 15,34±0,20°, и/или 9,11±0,20°, и/или 10,94±0,20°, и/или 11,21±0,20°, и/или 12,43±0,20°, и/или 18,16±0,20°, и/или 22,06±0,20°, и/или 23,15±0,20°, и/или 23,35±0,20°, и/или 24,19±0,20°, и/или 25,97±0,20°, и/или 26,75±0,20°, и/или 27,25±0,20°, и/или 28,45±0,20°, и/или 29,49±0,20°, и/или 30,82±0,20°, и/или 33,74±0,20°, и/или 36,39±0,20°, и/или 37,34±0,20°, и/или 38,57±0,20°.[63] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 13.28±0.20°, 25.14±0.20°, and alternatively at 15.34±0.20° and/or 9.11±0.20° and/or 10.94±0.20° and/or 11.21±0.20° and/or 12.43±0.20° and/or 18.16±0.20° and/or 22.06±0.20° and/or 23.15±0.20° and/or 23.35±0.20° and/or 24.19±0.20°, and/or 25.97±0.20°, and/or 26.75±0.20°, and/or 27.25±0.20°, and/or 28.45±0.20°, and/or 29.49±0.20°, and/or 30.82±0.20°, and/or 33.74±0.20°, and/or 36.39±0.20°, and/or 37.34±0.20°, and/or 38.57±0.20°.
[64] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11±0,20°, 10,94±0,20°, 11,21±0,20°, 12,43±0,20°, 13,28±0,20°, 15,34±0,20°, 18,16±0,20°, 22,06±0,20°, 23,15±0,20°, 23,35±0,20°, 24,19±0,20°, 25,14±0,20°, 25,97±0,20°, 26,75±0,20°, 27,25±0,20°, 28,45±0,20°, 29,49±0,20°, 30,82±0,20°, 33,74±0,20°, 36,39±0,20°, 37,34±0,20°, 38,57±0,20°.[64] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11±0.20°, 10.94±0.20°, 11.21±0.20°, 12.43±0.20°, 13.28±0.20°, 15.34±0.20°, 18.16±0.20°, 22.06±0.20°, 23.15±0.20°, 23.35±0.20°, 24.19±0.20°, 25.14±0.20°, 25.97±0.20°, 26.75±0.20°, 27.25±0.20°, 28.45±0.20°, 29.49±0.20°, 30.82±0.20°, 33.74±0.20°, 36.39±0.20°, 37.34±0.20°, 38.57±0.20°.
[65] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения порошковая рентгеновская дифрактограмма кристаллической формы E содержит характеристические дифракционные пики при следующих значениях угла 2θ: 9,11°, 10,94°, 11,21°, 12,43°, 13,28°, 15,34°, 17,39°, 18,16°, 20,18°, 18,94°, 20,95°, 22,06°, 23,15°, 23,35°, 24,19°, 25,14°, 25,97°, 26,75°, 27,25°, 28,45°, 29,49°, 30,16°, 30,82°, 33,74°, 35,45°, 36,39°, 37,34°, 38,57°.[65] In some embodiments of the present invention, the X-ray powder diffraction pattern of crystalline Form E comprises characteristic diffraction peaks at the following 2θ values: 9.11°, 10.94°, 11.21°, 12.43°, 13.28°, 15.34°, 17.39°, 18.16°, 20.18°, 18.94°, 20.95°, 22.06°, 23.15°, 23.35°, 24.19°, 25.14°, 25.97°, 26.75°, 27.25°, 28.45°, 29.49°, 30.16°, 30.82°, 33.74°, 35.45°, 36.39°, 37.34°, 38.57°.
[66] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма E характеризуется дифрактограммой XRPD, по сути показанной на фигуре 11.[66] In some embodiments of the present invention, crystalline form E is characterized by an XRPD diffraction pattern substantially as shown in Figure 11.
[67] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения данные анализа из дифрактограммы XRPD кристаллической формы E являются такими, как показано в таблице 5.[67] In some embodiments of the present invention, the XRPD diffraction pattern analysis data of crystalline Form E are as shown in Table 5.
[68][68]
[69] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма E характеризуется кривой термогравиметрического анализа с потерей веса 0,79% при 200°C ± 3°C.[69] In some embodiments of the present invention, crystalline form E is characterized by a thermogravimetric analysis curve with a weight loss of 0.79% at 200°C ± 3°C.
[70] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма E характеризуется термограммой TGA, показанной на фигуре 12.[70] In some embodiments of the present invention, crystalline form E is characterized by the TGA thermogram shown in Figure 12.
[71] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма E характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии, содержащей эндотермический пик с началом при 250,4°C ± 2°C.[71] In some embodiments of the present invention, crystalline form E is characterized by a differential scanning calorimetry curve containing an endothermic peak with an onset at 250.4°C ± 2°C.
[72] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения кристаллическая форма E характеризуется термограммой DSC, как показано на фигуре 13.[72] In some embodiments of the present invention, crystalline form E is characterized by a DSC thermogram as shown in Figure 13.
[73] В настоящем изобретении также предусмотрено применение кристаллических форм A, B, C, D и E соединения формулы (I) в изготовлении лекарственного препарата для лечения подагры и гиперурикемии.[73] The present invention also provides the use of crystalline forms A, B, C, D and E of the compound of formula (I) in the manufacture of a medicinal product for the treatment of gout and hyperuricemia.
[74] Технический эффект [74] Technical effect
[75] Соединение формулы (I) характеризуется устойчивыми кристаллическими свойствами и отсутствием гигроскопичности, демонстрируя хорошие перспективы для фармацевтической разработки.[75] The compound of formula (I) is characterized by stable crystalline properties and absence of hygroscopicity, showing good prospects for pharmaceutical development.
[76] Определение и описание [76] Definition and Description
[77] Если не указано иное, следующие термины и выражения, применяемые в данном документе, имеют следующие значения. Конкретное выражение или термин при отсутствии точного определения не следует считать неопределенными или неясными, а следует понимать в соответствии с общепринятым значением. Если в данном документе встречается торговое название, то предполагается, что оно относится к соответствующему продукту или его активному ингредиенту.[77] Unless otherwise specified, the following terms and expressions used in this document have the following meanings. A particular expression or term, in the absence of a precise definition, is not to be considered as vague or unclear, but is to be understood in accordance with the generally accepted meaning. Where a trade name appears in this document, it is assumed that it refers to the corresponding product or its active ingredient.
[78] Промежуточные соединения по настоящему изобретению могут быть получены посредством различных способов синтеза, известных специалистам в данной области техники, в том числе посредством конкретных вариантов осуществления, перечисленных ниже, вариантов осуществления, образованных путем их объединения с другими способами химического синтеза, и эквивалентных альтернатив, известных специалистам в данной области техники, при этом предпочтительные варианты осуществления включают без ограничения примеры настоящего изобретения.[78] The intermediate compounds of the present invention can be prepared by various synthetic methods known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, embodiments formed by combining them with other chemical synthetic methods, and equivalent alternatives known to those skilled in the art, with preferred embodiments including, but not limited to, the examples of the present invention.
[79] Химические реакции конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения завершаются в подходящем растворителе, при этом растворитель должен быть подходящим для химических изменений по настоящему изобретению и необходимых для этого реагентов и материалов. Для получения соединения по настоящему изобретению специалистам в данной области техники иногда необходимо модифицировать или выбирать способы синтеза или схемы реакций на основе существующих вариантов осуществления.[79] The chemical reactions of certain embodiments of the present invention are completed in a suitable solvent, wherein the solvent must be suitable for the chemical changes of the present invention and the reagents and materials necessary therefor. In order to obtain a compound of the present invention, those skilled in the art sometimes need to modify or select synthetic methods or reaction schemes based on existing embodiments.
[80] Настоящее изобретение описано более подробно с помощью примеров ниже, но примеры не являются ограничительными в отношении настоящего изобретения.[80] The present invention is described in more detail by means of examples below, but the examples are not limiting to the present invention.
[81] Все растворители, используемые в настоящем изобретении, являются коммерчески доступными и не требуют дополнительной очистки перед использованием.[81] All solvents used in the present invention are commercially available and do not require further purification before use.
[82] Соединения по настоящему изобретению названы в соответствии с традиционными принципами номенклатуры в данной области техники или с помощью программного обеспечения ChemDraw®, а для коммерчески доступных соединений используют названия согласно каталогу поставщика.[82] The compounds of the present invention are named according to conventional nomenclature principles in the art or using ChemDraw® software, and for commercially available compounds, supplier catalog names are used.
[83] Структура соединений по настоящему изобретению может быть подтверждена общепринятыми способами, известными специалистам в данной области техники, и если настоящее изобретение включает абсолютную конфигурацию соединения, то абсолютная конфигурация может быть подтверждена с использованием общепринятых методик из данной области техники. Например, в случае рентгеновской дифракции монокристаллов (SXRD) абсолютная конфигурация может быть подтверждена путем сбора данных об интенсивности дифракции выращенного монокристалла с применением дифрактометра Bruker D8 Venture с источником излучения CuKα в качестве источника света и следующим режимом сканирования: сканирование ϕ/ω, и после сбора соответствующих данных структура кристалла может быть дополнительно проанализирована прямым способом (Shelxs97).[83] The structure of the compounds of the present invention can be confirmed by conventional methods known to those skilled in the art, and if the present invention includes an absolute configuration of the compound, the absolute configuration can be confirmed using conventional methods in the art. For example, in the case of single crystal X-ray diffraction (SXRD), the absolute configuration can be confirmed by collecting diffraction intensity data of a grown single crystal using a Bruker D8 Venture diffractometer with a CuKα radiation source as a light source and the following scanning mode: ϕ/ω scanning, and after collecting the corresponding data, the crystal structure can be further analyzed by a direct method (Shelxs97).
[84] Применяемые в настоящем изобретении растворители являются коммерчески доступными. В настоящем изобретении используются следующие сокращения: -OMOM обозначает группу метоксиметилового эфира; HPE обозначает 100% активность ингибирования; ZPE обозначает 0% активность ингибирования; DPBS обозначает фосфатно-солевой буферный раствор Дульбекко.[84] The solvents used in the present invention are commercially available. The following abbreviations are used in the present invention: -OMOM refers to methoxymethyl ether group; HPE refers to 100% inhibition activity; ZPE refers to 0% inhibition activity; DPBS refers to Dulbecco's phosphate buffered saline.
[85] Рентгеновский порошковый дифрактометр (XRPD), используемый в настоящем изобретении [85] The X-ray powder diffractometer (XRPD) used in the present invention
[86] Модель прибора: рентгеновский дифрактометр Bruker D2 PHASER[86] Instrument model: Bruker D2 PHASER X-ray diffractometer
[87] Подробные параметры для XRPD указаны ниже.[87] Detailed parameters for XRPD are listed below.
[88] Источник излучения: Cu, k-альфа (λ = 1,54184Å). [88] Radiation source: Cu, k-alpha (λ = 1.54184Å).
[89] Напряжение на трубке: 30 кВ.[89] Tube voltage: 30 kV.
[90] Ток на трубке: 10 мА.[90] Tube current: 10 mA.
[91] Щель расходимости: 0,6 мм.[91] Divergence gap: 0.6 mm.
[92] Щель Соллера в основном оптическом приборе: 2,5°.[92] Soller slit in the main optical instrument: 2.5°.
[93] Щель Соллера во вспомогательном оптическом приборе: 2,5°.[93] Soller slit in auxiliary optical instrument: 2.5°.
[94] Щель детектора: 5,827°.[94] Detector slit: 5.827°.
[95] Противорассеивающая щель: 0 мм.[95] Anti-scatter gap: 0 mm.
[96] Ось сканирования: θs-θd.[96] Scanning axis: θs-θd.
[97] Размер шага: 0,02 град.[97] Step size: 0.02 deg.
[98] Время на шаг: 0,2 секунды.[98] Time per step: 0.2 seconds.
[99] Область сканирования: 3-40 град.[99] Scanning area: 3-40 deg.
[100] Дифференциальный сканирующий калориметр (DSC), используемый в настоящем изобретении [100] The differential scanning calorimeter (DSC) used in the present invention
[101] Модель прибора: дифференциальный сканирующий калориметр TA Q2000.[101] Instrument model: TA Q2000 differential scanning calorimeter.
[102] Способ тестирования: образец (приблизительно 1 мг) отбирают и помещают в алюминиевый тигель для DSC с целью проведения тестирования. В условиях 50 мл/мин и. N2 образец нагревают от 30°C (комнатная температура) до 250°C со скоростью 10°C/мин.[102] Test method: A sample (approximately 1 mg) is taken and placed in an aluminum crucible for DSC to be tested. Under the conditions of 50 ml/min and N 2, the sample is heated from 30°C (room temperature) to 250°C at a rate of 10°C/min.
[103] Термогравиметрический анализатор (TGA), используемый в настоящем изобретении [103] Thermogravimetric analyzer (TGA) used in the present invention
[104] Модель прибора: термогравиметрический анализатор DISCOVERY 5500.[104] Instrument model: DISCOVERY 5500 thermogravimetric analyzer.
[105] Способ тестирования: образец (2-5 мг) отбирают и помещают в платиновый тигель для TGA с целью проведения тестирования. В условиях 25 мл/мин. и N2 образец нагревают от комнатной температуры до 300°C со скоростью 10°C/мин.[105] Test method: A sample (2-5 mg) is taken and placed in a platinum crucible for TGA for testing. Under the conditions of 25 ml/min and N 2, the sample is heated from room temperature to 300°C at a rate of 10°C/min.
[106] Динамическая сорбция паров (DVS), используемая в настоящем изобретении [106] Dynamic Vapor Sorption (DVS) used in the present invention
[107] Модель прибора: анализатор динамической сорбции паров Intrinsic.[107] Instrument model: Intrinsic dynamic vapor sorption analyzer.
Условия тестирования: образец (10-30 мг) отбирают и помещают в лоток для образцов DVS для проведения тестирования.Test conditions: Sample (10-30mg) is collected and placed in the DVS sample tray for testing.
[108] Подробные параметры для DVS указаны ниже.[108] Detailed parameters for DVS are listed below.
[109] Температура: 25°C.[109] Temperature: 25°C.
[110] Равновесие: dm/dt = 0,002%/мин. (минимум: 10 минут, максимум: 180 минут).[110] Equilibrium: dm/dt = 0.002%/min. (minimum: 10 minutes, maximum: 180 minutes).
[111] Тестовое приращение RH (%): 10 (90-0-90%), 5 (90-95%).[111] Test RH increment (%): 10 (90-0-90%), 5 (90-95%).
[112] Диапазон тестового приращения RH (%): 0%-95%-0%.[112] RH test increment range (%): 0%-95%-0%.
[113] Оценка и классификация гигроскопичности показаны в таблице 6.[113] The assessment and classification of hygroscopicity are shown in Table 6.
[114][114]
[115] Примечание: ΔW% указывает на увеличение веса образца за счет поглощения влаги при 25 ± 1°C и RH 80 ± 2%.[115] Note: ΔW% indicates the increase in weight of the sample due to moisture absorption at 25 ± 1°C and RH 80 ± 2%.
[116] КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ[116] BRIEF DESCRIPTION OF GRAPHIC MATERIALS
[117] Фигура 1 представляет собой дифрактограмму XRPD Cu-Kα-излучения кристаллической формы А соединения формулы (I).[117] Figure 1 is a Cu-Kα XRPD diffraction pattern of crystalline Form A of the compound of formula (I).
[118] Фигура 2 представляет собой термограмму TGA кристаллической формы А соединения формулы (I).[118] Figure 2 is a TGA thermogram of crystalline Form A of the compound of formula (I).
[119] Фигура 3 представляет собой термограмму DSC кристаллической формы А соединения формулы (I).[119] Figure 3 is a DSC thermogram of crystalline Form A of the compound of formula (I).
[120] Фигура 4 представляет собой дифрактограмму XRPD Cu-Kα-излучения кристаллической формы B соединения формулы (I).[120] Figure 4 is a Cu-Kα XRPD diffraction pattern of crystalline form B of the compound of formula (I).
[121 Фигура 5 представляет собой дифрактограмму XRPD Cu-Kα-излучения кристаллической формы C соединения формулы (I).[121 Figure 5 is a Cu-Kα XRPD diffraction pattern of crystalline form C of the compound of formula (I).
[122] Фигура 6 представляет собой термограмму TGA кристаллической формы C соединения формулы (I).[122] Figure 6 is a TGA thermogram of crystalline form C of the compound of formula (I).
[123] Фигура 7 представляет собой термограмму DSC кристаллической формы C соединения формулы (I).[123] Figure 7 is a DSC thermogram of crystalline form C of the compound of formula (I).
[124] Фигура 8 представляет собой дифрактограмму XRPD Cu-Kα-излучения кристаллической формы D соединения формулы (I).[124] Figure 8 is a Cu-Kα XRPD diffraction pattern of crystalline form D of the compound of formula (I).
[125] Фигура 9 представляет собой термограмму TGA кристаллической формы D соединения формулы (I).[125] Figure 9 is a TGA thermogram of crystalline form D of the compound of formula (I).
[126] Фигура 10 представляет собой термограмму DSC кристаллической формы D соединения формулы (I).[126] Figure 10 is a DSC thermogram of crystalline form D of the compound of formula (I).
[127] Фигура 11 представляет собой дифрактограмму XRPD Cu-Kα-излучения кристаллической формы E соединения формулы (I).[127] Figure 11 is a Cu-Kα XRPD diffraction pattern of crystalline Form E of the compound of formula (I).
[128] Фигура 12 представляет собой термограмму TGA кристаллической формы E соединения формулы (I).[128] Figure 12 is a TGA thermogram of crystalline Form E of the compound of formula (I).
[129] Фигура 13 представляет собой термограмму DSC кристаллической формы E соединения формулы (I).[129] Figure 13 is a DSC thermogram of crystalline Form E of the compound of formula (I).
[130] Фигура 14 представляет собой термограмму DVS кристаллической формы C соединения формулы (I).[130] Figure 14 is a DVS thermogram of crystalline form C of the compound of formula (I).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВАРИАНТА ОСУЩЕСТВЛЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED IMPLEMENTATION OPTION
[131] Настоящее изобретение описано более подробно с помощью примеров ниже, но это не означает, что существуют какие-либо противоречащие ограничения в отношении настоящего изобретении. В данном документе подробно описано настоящее изобретение, а также раскрыты его конкретные варианты осуществления; для специалистов в данной области техники очевидно, что осуществление модификаций и улучшений по отношению к вариантам осуществления настоящего изобретения происходит без отступления от сущности и объема настоящего изобретения.[131] The present invention is described in more detail by means of examples below, but this does not mean that there are any contradictory limitations with respect to the present invention. In this document, the present invention is described in detail, and specific embodiments thereof are disclosed; it is obvious to those skilled in the art that modifications and improvements can be made with respect to the embodiments of the present invention without departing from the spirit and scope of the present invention.
[132] Пример 1. Получение кристаллической формы А соединения формулы (I) [132] Example 1. Preparation of crystalline form A of the compound of formula (I)
[133] Стадия 1. Синтез соединения I-2 [133] Step 1. Synthesis of compound I-2
[134] К диметилсульфоксиду (1200 мл) добавляли трет-бутоксид калия (234,26 г, 2,09 моль). Смесь перемешивали при комнатной температуре до прозрачности. К полученному по каплям добавляли раствор соединения I-1 (200 г, 1,49 моль) в диметилсульфоксиде (500 мл) при 15-20°C. После добавления смесь перемешивали в течение еще 40 минут. Затем к полученному по каплям добавляли сероуглерод (113,54 г, 1,49 моль, 90,11 мл) и поддерживали температуру реакционной смеси не выше 20°C. После добавления смесь перемешивали в течение еще 20 минут. В смесь медленно добавляли трет-бутоксид калия (100,40 г, 894,70 ммоль), поддерживали температуру между 15 и 20°C и смесь перемешивали в течение 30 минут. Затем к полученному по каплям добавляли этилбромацетат (498,05 г, 2,98 моль, 329,83 мл). Температуру смеси поддерживали при между 15 и 20°C и смесь перемешивали в течение 1,5 часа при той же температуре. К полученному добавляли карбонат калия (206,09 г, 1,49 моль), а реакционную смесь нагревали до 60°C и перемешивали в течение еще 1,5 часа. К реакционной смеси добавляли 1 л воды, добавляли 6 M водный раствор хлористоводородной кислоты для доведения pH до значения между 3 и 4 и смесь экстрагировали этилацетатом (1,5 л × 2). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (200 мл × 3) и высушивали при пониженном давлении для удаления органического растворителя. К полученному в результате неочищенному продукту добавляли изопропанол (200 мл), смесь перемешивали до однородного состояния, оставляли отстаиваться в течение 15 часов, фильтровали и высушивали под вакуумом при 45°C в течение 1 часа с получением соединения I-2. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 4,32 (q, J = 7,2 Гц, 2H), 4,19 (q, J = 7,2 Гц, 2H), 3,56 (s, 2H), 3,25 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 3,19 (t, J = 14,4 Гц, 2H), 2,26 - 2,17 (m, 2H), 1,37 (t, J = 7,2 Гц, 3H), 1,27 (t, J = 7,2 Гц, 3H). MS масса/заряд = 364,8 [M+H]+.[134] Potassium tert-butoxide (234.26 g, 2.09 mol) was added to dimethyl sulfoxide (1200 mL). The mixture was stirred at room temperature until clear. A solution of compound I-1 (200 g, 1.49 mol) in dimethyl sulfoxide (500 mL) was added dropwise to the resulting mixture at 15-20 °C. After the addition, the mixture was stirred for another 40 minutes. Then, carbon disulfide (113.54 g, 1.49 mol, 90.11 mL) was added dropwise to the resulting mixture and the temperature of the reaction mixture was maintained at no more than 20 °C. After the addition, the mixture was stirred for another 20 minutes. Potassium tert-butoxide (100.40 g, 894.70 mmol) was slowly added to the mixture, the temperature was maintained between 15 and 20 °C, and the mixture was stirred for 30 minutes. Then, ethyl bromoacetate (498.05 g, 2.98 mol, 329.83 ml) was added dropwise to the obtained mixture. The temperature of the mixture was maintained between 15 and 20 °C, and the mixture was stirred for 1.5 hours at the same temperature. Potassium carbonate (206.09 g, 1.49 mol) was added to the obtained mixture, and the reaction mixture was heated to 60 °C and stirred for another 1.5 hours. 1 L of water was added to the reaction mixture, 6 M aqueous hydrochloric acid was added to adjust the pH to a value between 3 and 4, and the mixture was extracted with ethyl acetate (1.5 L × 2). The combined organic phases were washed with saturated brine (200 ml × 3) and dried under reduced pressure to remove the organic solvent. Isopropanol (200 ml) was added to the resulting crude product, the mixture was stirred until homogeneous, left to stand for 15 hours, filtered and dried under vacuum at 45°C for 1 hour to obtain compound I-2 . 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.19 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.56 (s, 2H), 3.25 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.19 (t, J = 14.4 Hz, 2H), 2.26 - 2.17 (m, 2H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 3H). MS m/z = 364.8 [M+H] + .
[135] Стадия 2. Синтез соединения I-3 [135] Step 2. Synthesis of compound I-3
[136] Соединение I-2 (282 г, 773,82 ммоль) растворяли в этаноле (3,5 л) и к полученному добавляли никель Ренея (99,45 г, 1,16 моль). Реакционную систему трижды заменяли азотом, перемешивали и обеспечивали прохождение реакции при 85°C в течение 48 часов под давлением водорода, составляющим 2,5 МПа. Затем реакционную смесь охлаждали и фильтровали через диатомит в атмосфере азота. Фильтрат высушивали при пониженном давлении для удаления растворителя и получали соединение I-3. Полученное в результате соединение непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 7,09 (s, 1H), 4,26 (q, J = 7,2 Гц, 2H), 3,20 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 3,12 (t, J = 14,4 Гц, 2H), 2,20 - 2,10 (m, 2H), 1,30 (t, J = 6,8 Гц, 3H). MS масса/заряд = 247,0 [M+H]+.[136] Compound I-2 (282 g, 773.82 mmol) was dissolved in ethanol (3.5 L), and Raney nickel (99.45 g, 1.16 mol) was added thereto. The reaction system was replaced with nitrogen three times, stirred, and reacted at 85°C for 48 h under a hydrogen pressure of 2.5 MPa. Then, the reaction mixture was cooled and filtered through diatomite under a nitrogen atmosphere. The filtrate was dried under reduced pressure to remove the solvent to give compound I-3. The resulting compound was directly used in the next step without further purification. 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.09 (s, 1H), 4.26 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.20 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 14.4 Hz, 2H), 2.20 - 2.10 (m, 2H), 1.30 (t, J = 6.8 Hz, 3H). MS m/z = 247.0 [M+H] + .
[137] Стадия 3. Синтез соединения I-4 [137] Step 3. Synthesis of compound I-4
[138] Соединение I-3 (40,00 г, 162,42 ммоль) растворяли в метаноле (200 мл). К полученному добавляли 200 мл водного раствора гидроксида натрия (12,99 г, 324,84 ммоль), а реакционную смесь нагревали до 50°C и перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь высушивали при пониженном давлении для удаления органического растворителя. К остатку добавляли 150 мл воды и добавляли 6 M водный раствор хлористоводородной кислоты, чтобы довести pH до значения между 2 и 3, что приводило в результате к осаждению большого количества белого твердого вещества. Смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали 100 мл воды и 50 мл петролейного эфира и высушивали при пониженном давлении при 50°C в течение 3 часов с получением соединения I-4. 1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ: 7,38 (s, 1H), 3,33 - 3,17 (m, 4 H), 2,28 - 2,21 (m, 2H).[138] Compound I-3 (40.00 g, 162.42 mmol) was dissolved in methanol (200 mL). To the resulting mixture was added 200 mL of aqueous sodium hydroxide solution (12.99 g, 324.84 mmol), and the reaction mixture was heated to 50 °C and stirred for 2 hours. The reaction mixture was dried under reduced pressure to remove the organic solvent. To the residue was added 150 mL of water, and 6 M aqueous hydrochloric acid was added to adjust the pH to between 2 and 3, resulting in the precipitation of a large amount of white solid. The mixture was filtered. The filter cake was washed with 100 mL of water and 50 mL of petroleum ether and dried under reduced pressure at 50 °C for 3 hours to give compound I-4 . 1 H NMR (400 MHz, CD 3 OD) δ: 7.38 (s, 1H), 3.33 - 3.17 (m, 4 H), 2.28 - 2.21 (m, 2H).
[139] Стадия 4. Синтез соединения I-5 [139] Step 4. Synthesis of compound I-5
[140] Соединение I-4 (35,0 г, 160,39 ммоль) растворяли в тетрагидрофуране (200 мл). К полученному добавляли карбонилдиимидазол (33,81 г, 208,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота, затем добавляли аммиачную воду (31,23 г, 240,58 ммоль, 34,32 мл) и смесь перемешивали в течение еще 15 часов. Смесь высушивали при пониженном давлении для удаления органического растворителя. К полученному в результате остатку добавляли 300 мл воды, остаток перемешивали в течение 10 минут и фильтровали. Осадок на фильтре промывали 100 мл воды, высушивали при пониженном давлении при 55°C в течение 2,5 часа с получением соединения I-5. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 7,09 (s, 1H), 5,72 (brs, 2H), 3,30 - 3,18 (m, 4H), 2,29 - 2,19 (m, 2H).[140] Compound I-4 (35.0 g, 160.39 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (200 mL). Carbonyldiimidazole (33.81 g, 208.51 mmol) was added thereto. The reaction mixture was stirred for 2 h under nitrogen atmosphere, then ammonia water (31.23 g, 240.58 mmol, 34.32 mL) was added and the mixture was stirred for another 15 h. The mixture was dried under reduced pressure to remove the organic solvent. To the resulting residue, 300 mL of water was added, the residue was stirred for 10 min and filtered. The filter cake was washed with 100 mL of water and dried under reduced pressure at 55 °C for 2.5 h to give compound I-5 . 1H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.09 (s, 1H), 5.72 (brs, 2H), 3.30 - 3.18 (m, 4H), 2.29 - 2.19 (m, 2H).
[141] Стадия 5. Синтез соединения I-6 [141] Step 5. Synthesis of compound I-6
[142] Соединение I-5 (31 г, 142,70 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (200 мл). К полученному медленно порциями добавляли N-бромсукцинимид (27,94 г, 156,97 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение еще 2 часов. Реакционную смесь медленно выливали в 600 мл перемешанной воды, что приводило в результате к осаждению большого количества твердого вещества. После перемешивания в течение 10 минут смесь фильтровали. Осадок на фильтре промывали 200 мл воды и 100 мл петролейного эфира, затем высушивали под вакуумом при 50°C в течение 2 часов с получением соединения I-6. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 5,62 (brs, 2H), 3,25 (t, J = 7,2 Гц, 2H), 3,04 (t, J = 14,0 Гц, 2H), 2,26 - 2,18 (m, 2H).[142] Compound I-5 (31 g, 142.70 mmol) was dissolved in N,N-dimethylformamide (200 mL). To the resulting mixture was slowly added N-bromosuccinimide (27.94 g, 156.97 mmol) in portions. The reaction mixture was stirred at 20 °C for another 2 hours. The reaction mixture was slowly poured into 600 mL of stirred water, which resulted in the precipitation of a large amount of solid. After stirring for 10 minutes, the mixture was filtered. The filter cake was washed with 200 mL of water and 100 mL of petroleum ether, then dried under vacuum at 50 °C for 2 hours to give compound I-6 . 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 5.62 (brs, 2H), 3.25 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.04 (t, J = 14.0 Hz, 2H), 2.26 - 2.18 (m, 2H).
[143] Стадия 6. Синтез соединения I-7 [143] Step 6. Synthesis of compound I-7
[144] К этилацетату (250 мл) добавляли соединение I-6 (48 г, 162,09 ммоль) и триэтиламин (32,80 г, 324,18 ммоль, 45,12 мл). Смесь охлаждали до 0°C в атмосфере азота, а затем к полученному по каплям добавляли трифторуксусный ангидрид (44,26 г, 210,72 ммоль, 29,31 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при той же температуре, затем нагревали до 20°C и перемешивали в течение еще 0,5 часа. Реакционную смесь разбавляли 250 мл этилацетата, последовательно промывали водой (100 мл × 2), насыщенным раствором бикарбоната натрия (150 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и высушивали при пониженном давлении для удаления органического растворителя. Таким образом получали соединение I-7, которое непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 3,13 - 2,97 (m, 4H), 2,30 - 2,20 (m, 2H).[144] The compound was added to ethyl acetate (250 ml).I-6(48 g, 162.09 mmol) and triethylamine (32.80 g, 324.18 mmol, 45.12 mL). The mixture was cooled to 0 °C under nitrogen atmosphere, and then trifluoroacetic anhydride (44.26 g, 210.72 mmol, 29.31 mL) was added dropwise to the resulting mixture. The reaction mixture was stirred for 1 hour at the same temperature, then warmed to 20 °C and stirred for another 0.5 hour. The reaction mixture was diluted with 250 mL of ethyl acetate, washed successively with water (100 mL × 2), saturated sodium bicarbonate solution (150 mL), and saturated brine (100 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and dried under reduced pressure to remove the organic solvent. Thus, the compoundI-7, which was directly used in the next step without further purification.1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.13 - 2.97 (m, 4H), 2.30 - 2.20 (m, 2H).
[145] Стадия 7. Синтез соединения I-8 [145] Step 7. Synthesis of compound I-8
[146] К диметоксиэтану (60 мл) и воде (12 мл) добавляли соединение I-7 (6,0 г, 21,57 ммоль), соединение I-7-1 (7,60 г, 23,73 ммоль) и безводный фосфат калия (9,16 г, 43,15 ммоль). К полученному добавляли Pd(dppf)Cl2 (394,64 мг, 539,34 мкмоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали до 85°C в атмосфере азота и перемешивали в течение еще 15 часов. Реакционную смесь охлаждали, добавляли 20 мл воды и 100 мл этилацетата, смесь перемешивали в течение 10 минут и фильтровали. Органическую фазу отделяли от фильтрата. Водную фазу экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и высушивали при пониженном давлении для удаления органического растворителя. К полученному в результате неочищенному продукту добавляли этилацетат (80 мл) и последовательно добавляли активированный уголь (4 г) и диоксид кремния (4 г). Смесь нагревали до 80°C, перемешивали в течение 1 часа, затем охлаждали, фильтровали через диатомит и высушивали при пониженном давлении для удаления органического растворителя. Полученный в результате неочищенный продукт последовательно суспендировали трет-бутилметиловым эфиром (25 мл) при 25°C в течение 0,5 часа и фильтровали, а полученный в результате осадок на фильтре высушивали под вакуумом при 45°C в течение 1 часа с получением соединения I-8. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 11,18 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 7,01 (d, J = 1,6 Гц, 1H), 6,92 - 6,90 (m, 1H), 3,24 (t, J = 14,4 Гц, 2H), 3,12 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 2,36 - 2,26 (m, 2H), 1,64 (s, 9H).[146] Compound I-7 (6.0 g, 21.57 mmol), compound I-7-1 (7.60 g, 23.73 mmol) and anhydrous potassium phosphate (9.16 g, 43.15 mmol) were added to dimethoxyethane (60 mL) and water (12 mL). To the resulting mixture, Pd(dppf)Cl 2 (394.64 mg, 539.34 μmol) was added under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was heated to 85 °C under nitrogen atmosphere and stirred for another 15 h. The reaction mixture was cooled, 20 mL of water and 100 mL of ethyl acetate were added, the mixture was stirred for 10 min and filtered. The organic phase was separated from the filtrate. The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (30 mL × 3). The combined organic phases were washed with saturated brine (30 mL), dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and dried under reduced pressure to remove the organic solvent. To the resulting crude product was added ethyl acetate (80 mL), and activated carbon (4 g) and silica (4 g) were added successively. The mixture was heated to 80 °C, stirred for 1 hour, then cooled, filtered through diatomite and dried under reduced pressure to remove the organic solvent. The resulting crude product was successively suspended with tert-butyl methyl ether (25 mL) at 25 °C for 0.5 hour and filtered, and the resulting filter cake was dried under vacuum at 45 °C for 1 hour to give compound I-8 . 1H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 11.18 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.92 - 6.90 (m, 1H), 3.24 (t, J = 14.4 Hz, 2H), 3.12 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.36 - 2.26 (m, 2H), 1.64 (s, 9H).
[147] Стадия 8. Синтез кристаллической формы A соединения формулы (I) [147] Step 8. Synthesis of crystalline form A of the compound of formula (I)
[148] Соединение I-8 (32 г, 81,75 ммоль) добавляли к трифторуксусной кислоте (250 мл) и реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 1 часа. Трифторуксусную кислоту удаляли при пониженном давлении и к полученному остатку добавляли воду (300 мл). Смесь суспендировали при комнатной температуре в течение 20 минут до полного диспергирования и фильтровали. Осадок на фильтре промывали водой (200 мл) и высушивали при пониженном давлении при 45°C в течение 1 часа с получением кристаллической формы A соединения формулы (I). 1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ: 8,03 - 7,96 (m, 1H), 7,12 - 7,06 (m, 2H), 3,36 - 3,29 (m, 2H), 3,16 - 3,07 (m, 2H), 2,44 - 2,30 (m, 2H) Дифрактограмма XRPD кристаллической формы A показана на фигуре 1, ее термограмма TGA показана на фигуре 2 и ее термограмма DSC показана на фигуре 3.[148] Compound I-8 (32 g, 81.75 mmol) was added to trifluoroacetic acid (250 mL) and the reaction mixture was stirred at 20 °C for 1 hour. Trifluoroacetic acid was removed under reduced pressure and water (300 mL) was added to the resulting residue. The mixture was suspended at room temperature for 20 minutes until completely dispersed and filtered. The filter cake was washed with water (200 mL) and dried under reduced pressure at 45 °C for 1 hour to give crystalline form A of the compound of formula (I) . 1 H NMR (400 MHz, CD 3 OD) δ: 8.03 - 7.96 (m, 1H), 7.12 - 7.06 (m, 2H), 3.36 - 3.29 (m, 2H), 3.16 - 3.07 (m, 2H), 2.44 - 2.30 (m, 2H) The XRPD diffraction pattern of crystal Form A is shown in Figure 1, its TGA thermogram is shown in Figure 2, and its DSC thermogram is shown in Figure 3.
[149] Пример 2. Получение соединения формулы (I) [149] Example 2. Preparation of a compound of formula (I)
[150] Стадия 1. Синтез соединения I-4 [150] Step 1. Synthesis of compound I-4
[151] Соединение I-3 (2,5 г, 10,15 ммоль) растворяли в метаноле (10 мл), а затем к полученному добавляли воду (10 мл) и гидроксид натрия (1,62 г, 40,61 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь помещали на масляную баню при 40°C и перемешивали в течение 2 часов. Затем реакционную смесь упаривали наполовину при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (5 мл). После перемешивания к смеси добавляли 6 M хлористоводородную кислоту, чтобы довести pH до значения между 2 и 3, что приводило к осаждению большого количества белого твердого вещества. Твердое вещество посредством фильтрования и высушивали при пониженном давлении при 50°C в течение 3 часов с получением соединения I-4. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 7,28 (s, 1H), 3,30 (t, J = 7,0 Гц, 2H), 3,22 (t, J = 14,3 Гц, 2H), 2,25 (tt, J = 6,8, 13,4 Гц, 2H).[151] Compound I-3 (2.5 g, 10.15 mmol) was dissolved in methanol (10 ml), and then water (10 ml) and sodium hydroxide (1.62 g, 40.61 mmol) were added thereto. The resulting reaction mixture was placed in an oil bath at 40 °C and stirred for 2 hours. Then, the reaction mixture was evaporated by half under reduced pressure, and water (5 ml) was added to the residue. After stirring, 6 M hydrochloric acid was added to the mixture to adjust the pH to a value between 2 and 3, which resulted in the precipitation of a large amount of white solid. The solid was filtered and dried under reduced pressure at 50 °C for 3 hours to give compound I-4 . 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.28 (s, 1H), 3.30 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 14.3 Hz, 2H), 2.25 (tt, J = 6.8, 13.4 Hz, 2H).
[152] Стадия 2. Синтез соединения I-5 [152] Step 2. Synthesis of compound I-5
[153] Соединение I-4 (500 мг, 2,29 ммоль) растворяли в дихлорметане (5 мл), а затем к полученному добавляли карбонилдиимидазол (445,83 мг, 2,75 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали, обеспечивали прохождение реакции в течение 1 часа в атмосфере азота и выливали в энергично перемешиваемую аммиачную воду (2,87 г, 22,91 ммоль, 3,15 мл, содержание 28%) в тетрагидрофуране (5 мл). Реакционную смесь перемешивали и обеспечивали прохождение реакции в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении при 25°C. Остаток экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Органические фазы объединяли, а затем высушивали на роторном испарителе с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (этилацетат/петролейный эфир = 0-45%) с получением соединения I-5. 1H ЯМР (400 MГц, CDCl3) δ: 7,10 (s, 1H), 5,58 (br s, 2H), 3,28 (t, J = 6,9 Гц, 2H), 3,21 (t, J = 14,4 Гц, 2H), 2,24 (tt, J = 6,9, 13,4 Гц, 2H).[153] Compound I-4 (500 mg, 2.29 mmol) was dissolved in dichloromethane (5 mL), and then carbonyldiimidazole (445.83 mg, 2.75 mmol) was added thereto. The resulting reaction mixture was stirred, reacted for 1 h under nitrogen atmosphere, and poured into vigorously stirred ammonia water (2.87 g, 22.91 mmol, 3.15 mL, content 28%) in tetrahydrofuran (5 mL). The reaction mixture was stirred and reacted for 30 min. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure at 25 °C. The residue was extracted with ethyl acetate (20 mL × 3). The organic phases were combined and then dried on a rotary evaporator to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography (ethyl acetate/petroleum ether = 0-45%) to give compound I-5 . 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.10 (s, 1H), 5.58 (br s, 2H), 3.28 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.21 (t, J = 14.4 Hz, 2H), 2.24 (tt, J = 6.9, 13.4 Hz, 2H).
[154] Стадия 3. Синтез соединения 2-4 [154] Step 3. Synthesis of compound 2-4
[155] Соединение I-5 (320 мг, 1,47 ммоль) растворяли в DMF (3 мл) и полученный раствор охлаждали до 0°C, а затем к полученному добавляли цианурхлорид (298,81 мг, 1,62 ммоль). Конечную реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов в атмосфере азота (в течение этого времени осаждалось большое количество белого твердого вещества). Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (50 мл), а затем промывали водой (10 мл × 3) и насыщенным солевым раствором (10 мл). Органическую фазу высушивали над подходящим количеством безводного сульфата натрия и фильтровали, чтобы удалить любое высушивающее средство. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении для удаления растворителя и получения неочищенного продукта 2-4, который непосредственно применяли на следующей стадии. 1H ЯМР: (400 MГц, CDCl3) δ: 7,25 (s, 1H), 3,21 (t, J = 14,3 Гц, 2H), 3,09 (t, J = 6,9 Гц, 2H), 2,28 (tt, J = 6,8, 13,2 Гц, 2H).[155] Compound I-5 (320 mg, 1.47 mmol) was dissolved in DMF (3 mL) and the resulting solution was cooled to 0 °C, followed by the addition of cyanuric chloride (298.81 mg, 1.62 mmol). The resulting reaction mixture was stirred for 2 h under nitrogen atmosphere (during which time a large amount of white solid precipitated). The reaction mixture was diluted with ethyl acetate (50 mL) and then washed with water (10 mL × 3) and saturated brine (10 mL). The organic phase was dried over an appropriate amount of anhydrous sodium sulfate and filtered to remove any drying agent. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove the solvent and give crude product 2-4 , which was directly used in the next step. 1 H NMR: (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 7.25 (s, 1H), 3.21 (t, J = 14.3 Hz, 2H), 3.09 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.28 (tt, J = 6.8, 13.2 Hz, 2H).
[156] Стадия 4. Синтез соединения 2-5 [156] Step 4. Synthesis of compound 2-5
[157] Соединение 2-4 (290 мг, 1,46 ммоль) растворяли в уксусной кислоте (2 мл), а затем к полученному добавляли жидкий бром (348,94 мг, 2,18 ммоль, 112,56 мкл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 25°C (комнатная температура) в течение 15 часов. Реакционную смесь затем высушивали на роторном испарителе и к остатку добавляли этилацетат (30 мл). К смеси добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия, чтобы довести pH до значения между 7 и 8, а органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью этилацетата (30 мл ). Органические фазы объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии (этилацетат/петролейный эфир = 0-5%) с получением соединения I-7. 1H ЯМР: (400 MГц, CDCL3) δ: 3,10-2,99 m, 4H), 2,32-2,19 (m, 2H).[157] Compound 2-4 (290 mg, 1.46 mmol) was dissolved in acetic acid (2 ml), and then liquid bromine (348.94 mg, 2.18 mmol, 112.56 μl) was added to the resulting mixture. The resulting reaction mixture was stirred at 25 °C (room temperature) for 15 h. The reaction mixture was then dried on a rotary evaporator and ethyl acetate (30 ml) was added to the residue. A saturated aqueous sodium carbonate solution was added to the mixture to adjust the pH to a value between 7 and 8, and the organic phase was separated. The aqueous phase was extracted with ethyl acetate (30 ml). The organic phases were combined and concentrated under reduced pressure to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography (ethyl acetate/petroleum ether = 0-5%) to give compound I-7 . 1 H NMR: (400 MHz, CDCL 3 ) δ: 3.10-2.99 m, 4H), 2.32-2.19 (m, 2H).
[158] Стадия 5. Синтез соединения 2-6 [158] Step 5. Synthesis of compound 2-6
[159] К диоксану (3 мл) и воде (0,6 мл) добавляли соединение I-7 (140 мг, 503,39 мкмоль), борат 2-5A (178,39 мг, 553,73 мкмоль) и карбонат калия (139,14 мг, 1,01 ммоль), а затем к полученному добавляли [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) (Pd(dppf)Cl2) (36,83 мг, 50,34 мкмоль). Затем смесь перемешивали и обеспечивали прохождение реакции на масляной бане при температуре 105°C в течение 15 часов в атмосфере азота. Реакционную смесь высушивали на роторном испарителе с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/петролейный эфир = 0-25%) с получением соединения 2-6. 1H ЯМР: (400 MГц, CHCl3) δ: 7,87 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 7,28 (d, J = 1,6 Гц, 1H), 7,10 (dd, J = 1,6, 8,0 Гц, 1H), 5,0 (s, 2H), 3,3 (s, 3H), 3,55(s, 3H), 3,23 (t, J = 14,4 Гц, 2H), 3,13 (t, J = 6,8 Гц, 2H), 2,39 - 2,24 (m, 2H).[159] Compound I-7 (140 mg, 503.39 μmol), borate 2-5A (178.39 mg, 553.73 μmol), and potassium carbonate (139.14 mg, 1.01 mmol) were added to dioxane (3 mL) and water (0.6 mL), and then [1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]dichloropalladium(II) (Pd(dppf)Cl 2 ) (36.83 mg, 50.34 μmol) was added thereto. Then, the mixture was stirred and reacted in an oil bath at 105°C for 15 hours under nitrogen atmosphere. The reaction mixture was dried on a rotary evaporator to obtain the crude product. The crude product was purified by silica gel column chromatography (ethyl acetate/petroleum ether = 0-25%) to give compound 2-6 . 1 H NMR: (400 MHz, CHCl 3 ) δ: 7.87 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 5.0 (s, 2H), 3.3 (s, 3H), 3.55(s, 3H), 3.23 (t, J = 14.4 Hz, 2H), 3.13 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.39 - 2.24 (m, 2H).
[160] Стадия 6. Синтез соединения 2-7 [160] Step 6. Synthesis of compound 2-7
[161] Соединение 2-6 (105 мг, 266,90 мкмоль) растворяли в тетрагидрофуране (2 мл), а затем к полученному добавляли водный раствор моногидрата гидроксида лития (2 M, 533,80 мкл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 25°C (комнатная температура) в течение 15 часов. Реакционную смесь высушивали при 40°C на роторном испарителе для удаления тетрагидрофурана. К остатку добавляли 2 M хлористоводородную кислоту, чтобы довести pH до значения между 2 и 3, что приводило к осаждению большого количества твердого вещества. К полученному добавляли этилацетат (50 мл) и смесь перемешивали. Затем этилацетат отделяли и смесь высушивали на роторном испарителе с получением соединения 2-7, а неочищенный продукт непосредственно применяли на следующей стадии.[161] Compound 2-6 (105 mg, 266.90 μmol) was dissolved in tetrahydrofuran (2 mL), and then aqueous lithium hydroxide monohydrate solution (2 M, 533.80 μL) was added to the resulting mixture. The resulting reaction mixture was stirred at 25 °C (room temperature) for 15 h. The reaction mixture was dried at 40 °C on a rotary evaporator to remove tetrahydrofuran. 2 M hydrochloric acid was added to the residue to adjust the pH to between 2 and 3, which resulted in the precipitation of a large amount of solid. Ethyl acetate (50 mL) was added to the resulting mixture, and the mixture was stirred. Then, ethyl acetate was separated and the mixture was dried on a rotary evaporator to give compound 2-7 , and the crude product was directly used in the next step.
[162] Стадия 7. Синтез соединения формулы (I) [162] Step 7. Synthesis of a compound of formula (I)
[163] Соединение 2-7 (105 мг, 276,77 мкмоль) растворяли в метаноле (1 мл) и к полученному добавляли хлористоводородную кислоту (60,55 мг, 1,66 ммоль, 59,36 мкл). Реакционная смесь становилась мутной, и ее перемешивали при 25°C в течение 3 часов. Реакционную смесь высушивали на роторном испарителе при 40°C и полученный остаток очищали посредством препаративной HPLC (хроматографическая колонка: Venusil ASB Phenyl 150 * 30 мм * 5 мкм; подвижная фаза: [вода(0,05%HCl)-ACN]; ACN%: 60%-90%, 9 минут) с получением соединения формулы (I). 1H ЯМР (400 MГц, CD3OD) δ: 8,00 (d, J = 8,0 Гц, 1H), 7,13 - 7,04 (m, 2H), 3,35-3,32 (m, 2H), 3,12 (t, J = 7,2 Гц, 2H), 2,45 - 2,30 (m, 2H); MS (ESI) масса/заряд: 334,02 [M-H]-.[163] Compound 2-7 (105 mg, 276.77 μmol) was dissolved in methanol (1 mL), and hydrochloric acid (60.55 mg, 1.66 mmol, 59.36 μL) was added thereto. The reaction mixture became cloudy, and it was stirred at 25 °C for 3 hours. The reaction mixture was dried on a rotary evaporator at 40 °C, and the obtained residue was purified by preparative HPLC (chromatography column: Venusil ASB Phenyl 150 * 30 mm * 5 μm; mobile phase: [water (0.05% HCl)-ACN]; ACN%: 60%-90%, 9 minutes) to give the compound of formula (I) . 1 H NMR (400 MHz, CD 3 OD) δ: 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 3.35-3.32 (m, 2H), 3.12 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.45 - 2.30 (m, 2H); MS (ESI) m/z: 334.02 [MH] - .
[164] Пример 3. Получение кристаллической формы B соединения формулы (I) [164] Example 3. Preparation of crystalline form B of the compound of formula (I)
[165] К дихлорметану (1 мл) добавляли кристаллическую форму A (20 мг, 0,06 ммоль) соединения формулы (I) и смесь перемешивали при 25°C в течение 120 часов. Смесь фильтровали. Осадок на фильтре высушивали при пониженном давлении при 50°C в течение 2-5 часов с получением кристаллической формы B соединения формулы (I). Дифрактограмма XRPD кристаллической формы B показана на фигуре 4.[165] Crystalline Form A (20 mg, 0.06 mmol) of the compound of formula (I) was added to dichloromethane (1 mL) and the mixture was stirred at 25 °C for 120 h. The mixture was filtered. The filter cake was dried under reduced pressure at 50 °C for 2-5 h to obtain Crystalline Form B of the compound of formula (I). The XRPD pattern of Crystalline Form B is shown in Figure 4.
[166] Пример 4. Получение кристаллической формы C соединения формулы (I) [166] Example 4. Preparation of crystalline form C of the compound of formula (I)
[167] К смеси растворителей этилацетата (5 мл) и гептана (5 мл) добавляли кристаллическую форму A (1,0 г, 2,98 ммоль) соединения формулы (I), затем смесь перемешивали при 25°C в течение 72 часов. Смесь фильтровали. Осадок на фильтре высушивали при пониженном давлении при 45°C в течение 2 часов с получением кристаллической формы C соединения формулы (I). Дифрактограмма XRPD кристаллической формы C показана на фигуре 5, ее термограмма TGA является такой, как показано на фигуре 6, и ее термограмма DSC показана на фигуре 7.[167] Crystalline Form A (1.0 g, 2.98 mmol) of the compound of formula (I) was added to a solvent mixture of ethyl acetate (5 mL) and heptane (5 mL), and the mixture was then stirred at 25°C for 72 hours. The mixture was filtered. The filter cake was dried under reduced pressure at 45°C for 2 hours to obtain crystalline Form C of the compound of formula (I). The XRPD diffraction pattern of crystalline Form C is shown in Figure 5, its TGA thermogram is as shown in Figure 6, and its DSC thermogram is shown in Figure 7.
[168] Пример 5. Получение кристаллической формы D соединения формулы (I) [168] Example 5. Preparation of crystalline form D of the compound of formula (I)
[169] К смеси растворителей тетрагидрофурана (0,4 мл) и воды (0,4 мл) добавляли 20 мг навески кристаллической формы A соединения формулы (I). Смесь перемешивали при 50°C до растворения всех твердых веществ, охлаждали до 13°C и перемешивали в течение 72 часов. Смесь фильтровали. Осадок на фильтре высушивали при пониженном давлении при 45°C в течение 2 часов с получением кристаллической формы D соединения формулы (I). Дифрактограмма XRPD кристаллической формы D показана на фигуре 8, ее термограмма TGA показана на фигуре 9 и ее термограмма DSC показана на фигуре 10.[169] To a solvent mixture of tetrahydrofuran (0.4 ml) and water (0.4 ml) was added 20 mg of a weighed portion of crystalline Form A of the compound of formula (I). The mixture was stirred at 50 °C until all solids were dissolved, cooled to 13 °C and stirred for 72 hours. The mixture was filtered. The filter cake was dried under reduced pressure at 45 °C for 2 hours to obtain crystalline Form D of the compound of formula (I). The XRPD diffraction pattern of crystalline Form D is shown in Figure 8, its TGA thermogram is shown in Figure 9 and its DSC thermogram is shown in Figure 10.
[170] Пример 6. Получение кристаллической формы E соединения формулы (I) [170] Example 6. Preparation of crystalline form E of the compound of formula (I)
[171] К смеси растворителей тетрагидрофурана (3,3 мл) и воды (6,6 мл) добавляли кристаллическую форму A (1,0 г, 2,98 ммоль) соединения формулы (I). Полученную смесь перемешивали при 25°С в течение 72 часов. Смесь фильтровали. Осадок на фильтре высушивали при пониженном давлении при 45°C в течение 2 часов с получением кристаллической формы E соединения формулы (I). Дифрактограмма XRPD кристаллической формы E показана на фигуре 11, ее термограмма TGA показана на фигуре 12 и ее термограмма DSC показана на фигуре 13.[171] Crystalline Form A (1.0 g, 2.98 mmol) of the compound of formula (I) was added to a solvent mixture of tetrahydrofuran (3.3 mL) and water (6.6 mL). The resulting mixture was stirred at 25 °C for 72 hours. The mixture was filtered. The filter cake was dried under reduced pressure at 45 °C for 2 hours to obtain crystalline Form E of the compound of formula (I). The XRPD diffraction pattern of crystalline Form E is shown in Figure 11, its TGA thermogram is shown in Figure 12 and its DSC thermogram is shown in Figure 13.
[172] Пример 7. Исследование гигроскопичности соединения формулы (I) [172] Example 7. Study of the hygroscopicity of the compound of formula (I)
[173] Экспериментальные материалы:[173] Experimental materials:
[174] анализатор динамической сорбции паров DVS Intrinsic.[174] DVS Intrinsic dynamic vapor sorption analyzer.
[175] Способы проведения эксперимента:[175] Methods of conducting the experiment:
[176] 10-30 мг кристаллической формы C соединения формулы (I) отбирали и помещали в лоток для образцов DVS для проведения тестирования.[176] 10-30 mg of crystalline form C of the compound of formula (I) were collected and placed in a DVS sample tray for testing.
[177] Результаты эксперимента:[177] Experiment results:
[178] спектр DVS для кристаллической формы C соединения формулы (I) является таким, как показано на фигуре 14, при этом ΔW равняется 0,196%.[178] The DVS spectrum for crystalline form C of the compound of formula (I) is as shown in Figure 14, with ΔW equal to 0.196%.
[179] Заключение по итогам эксперимента: [179] Conclusion of the experiment:
[180] соединение формулы (I) в кристаллической форме C не проявляет гигроскопичности, при этом гигроскопический прирост веса составляет 0,196% при 25°C и 80% RH.[180] The compound of formula (I) in crystalline form C does not exhibit hygroscopicity, with a hygroscopic weight gain of 0.196% at 25°C and 80% RH.
[181] Пример 8. Тест на стабильность в твердом состоянии соединения формулы (I) в кристаллической форме C [181] Example 8. Solid state stability test of the compound of formula (I) in crystalline form C
[182] На основании "Руководства по тестированию стабильности фармацевтических ингредиентов и составов" (Китайская фармакопея, издание 2015 г., общее правило 9001) стабильность соединения формулы (I) в кристаллической форме C изучали при высокой температуре (60°C, в открытом состоянии), высокой влажности (комнатная температура/относительная влажность 92,5%, в открытом состоянии) и сильном воздействии света (5000 люкс, в герметично закрытом состоянии).[182] Based on the “Guideline for Stability Testing of Pharmaceutical Ingredients and Formulations” (Chinese Pharmacopoeia, 2015 Edition, General Rule 9001), the stability of the compound of formula (I) in crystalline form C was studied under high temperature (60°C, in the open state), high humidity (room temperature/relative humidity 92.5%, in the open state) and strong light exposure (5000 lux, in the sealed state).
[183] Двенадцать порций соединения формулы (I) в кристаллической форме C взвешивали параллельно, при этом каждая порция составляла примерно 1,5 г, и помещали в плоские сосуды для взвешивания (70 * 35 мм) или одноразовые чашки Петри, распределяя тонким слоем. Их по отдельности помещали в стабильные условия высокой температуры (60°C), высокой влажности (25°C/влажность 92,5%), комбинированной высокой температуры и высокой влажности (40°C/влажность 75%) и воздействия света. Для образца, помещенного в условия высокой температуры и высокой влажности, сосуд герметично закрывали алюминиевой фольгой, в которой пробивали небольшие отверстия, чтобы обеспечить полный контакт образцов с окружающим воздухом; образец, помещенный под сильное воздействие света, герметично закрывали крышкой из кварцевого стекла. Образцы, помещенные в условия высокой температуры (60°C) и высокой влажности (влажность 92,5%, комнатная температура), отбирали для тестирования на 5-е и 10-е сутки (внешний вид, сопутствующие вещества и содержание). Образцы, помещенные в условия комбинированной высокой температуры и высокой влажности (40°C/влажность 75%), отбирали для тестирования в 1-й, 2-й и 3-й месяцы (внешний вид, сопутствующие вещества и содержание). Образцы, помещенные в условия воздействия света, отбирали для тестирования, когда общее воздействие света достигало 1,2×106 люкс⋅ч. Результаты исследования сравнивали с исходными результатами тестирования в день 0 и результаты теста показаны в таблице 7 ниже.[183] Twelve portions of the compound of formula (I) in crystalline form C were weighed in parallel, each portion being approximately 1.5 g, and placed in flat weighing vessels (70 x 35 mm) or disposable Petri dishes, spreading them in a thin layer. They were individually placed under stable conditions of high temperature (60°C), high humidity (25°C/92.5% humidity), combined high temperature and high humidity (40°C/75% humidity) and exposure to light. For the sample placed under high temperature and high humidity conditions, the vessel was sealed with aluminum foil in which small holes were punched to ensure complete contact of the samples with the surrounding air; the sample placed under strong exposure to light was sealed with a quartz glass lid. Samples exposed to high temperature (60°C) and high humidity (92.5% humidity, room temperature) conditions were collected for testing on days 5 and 10 (appearance, substances, and content). Samples exposed to combined high temperature and high humidity (40°C/75% humidity) conditions were collected for testing on months 1, 2, and 3 (appearance, substances, and content). Samples exposed to light were collected for testing when the total light exposure reached 1.2× 10 lux⋅h. The test results were compared with the baseline test results on day 0, and the test results are shown in Table 7 below.
[184][184]
[185] Заключение: соединение формулы (I) в кристаллической форме C демонстрирует хорошую стабильность под воздействием таких факторов, как высокая температура, высокая влажность, сильное воздействие света и условия ускоренного хранения.[185] Conclusion : The compound of formula (I) in crystalline form C exhibits good stability under the influence of factors such as high temperature, high humidity, strong exposure to light and accelerated storage conditions.
[186] Данные биологического анализа [186] Biological analysis data
[187] Экспериментальный пример 1. Тест на ингибирующую активность в отношении ксантиноксидазы [187] Experimental Example 1. Test for Xanthine Oxidase Inhibitory Activity
[188] 1. Цель эксперимента [188] 1. The purpose of the experiment
[189] Оценить уровень ингибирования активности ксантиноксидазы соединением.[189] To evaluate the level of inhibition of xanthine oxidase activity by the compound.
[190] 2. Реагенты[190] 2. Reagents
[191] В число основных реагентов, используемых в данном исследовании, входит ксантин (Sigma, номер по каталогу: X4002-1G, номер партии: SLBB5664V) и ксантиноксидаза (Sigma, номер по каталогу: X4376-5UN, номер партии: SLBQ1518V). [191] Key reagents used in this study included xanthine (Sigma, catalog number: X4002-1G, lot number: SLBB5664V) and xanthine oxidase (Sigma, catalog number: X4376-5UN, lot number: SLBQ1518V).
[192] 3. Приборы[192] 3. Devices
[193] Основным прибором, применяемым в данном исследовании является многомодельный микропланшетный ридер. [193] The main instrument used in this study is a multi-model microplate reader.
[194] 4. Способы проведения эксперимента[194] 4. Methods of conducting the experiment
[195] 1) В лунку с фоновым контролем соединения и лунку HPE (со 100% активностью ингибирования) с положительным контролем добавляли 50 мкл фосфатно-солевого буферного раствора Дульбекко (DPBS). [195] 1) 50 µl of Dulbecco's phosphate-buffered saline (DPBS) was added to the background compound control well and the HPE (100% inhibitory activity) positive control well.
[196] 2) 2 Ед./мл ксантиноксидазы разбавляли DPBS, получая в результате концентрацию 0,04 Ед./мл, а в лунку для тестирования активности соединения и лунку для отрицательного контроля ZPE (с активностью ингибирования 0%) добавляли 50 мкл ксантиноксидазы. [196] 2) 2 U/mL xanthine oxidase was diluted with DPBS to give a concentration of 0.04 U/mL, and 50 μL of xanthine oxidase was added to the compound activity testing well and the ZPE negative control well (with 0% inhibition activity).
[197] 3) Проводили серийное разведение соединения с использованием 3-кратного градиента по 8 точкам данных DMSO, а затем дополнительно разбавляли DPBS, добавляя по 50 мкл в каждую лунку в трех повторностях. В каждую лунку положительного контроля HPE (степень ингибирования 100%) и лунку отрицательного контроля ZPE (степень ингибирования 0%) добавляли по 50 мкл DPBS. [197] 3) Compound was serially diluted using a 3-fold gradient over 8 data points in DMSO and then further diluted with DPBS by adding 50 μl to each well in triplicate. 50 μl of DPBS were added to each well of the positive control HPE (100% inhibition rate) and the negative control ZPE (0% inhibition rate).
[198] 4) 200 мМ ксантина разбавляли DPBS до 300 мкМ. В каждую лунку добавляли 100 мкл ксантина и обеспечивали протекание реакции при комнатной температуре в течение 30 минут, что приводило в результате к получению конечной концентрации 0,01 Ед./мл ксантиноксидазы и конечной концентрации 0,5% DMSO в каждой лунке. Лунка положительного контроля HPE (активность ингибирования 100%) содержала ксантин, но не содержала ксантиноксидазу. Лунка отрицательного контроля ZPE (активность ингибирования 0%) содержала как ксантин, так и ксантиноксидазу. Лунка фонового контроля соединения содержала различные концентрации соединения и ксантина, но не содержала ксантиноксидазы. [198] 4) 200 mM xanthine was diluted with DPBS to 300 μM. 100 μL of xanthine was added to each well and the reaction was allowed to proceed at room temperature for 30 min, resulting in a final concentration of 0.01 U/mL xanthine oxidase and a final concentration of 0.5% DMSO in each well. The positive control well HPE (100% inhibition activity) contained xanthine but no xanthine oxidase. The negative control well ZPE (0% inhibition activity) contained both xanthine and xanthine oxidase. The background control well of compound contained varying concentrations of compound and xanthine but no xanthine oxidase.
[199] 5) Значения поглощения измеряли при 290 нм с применением спектрофотометра. [199] 5) Absorption values were measured at 290 nm using a spectrophotometer.
[200] 6) Анализ данных. Скорость ингибирования ксантиноксидазы для каждой лунки рассчитывали по следующей формуле:[200] 6) Data analysis. The rate of xanthine oxidase inhibition for each well was calculated using the following formula:
[201] * ODтестовый образец относится к значению оптической плотности в отношении лунок для тестирования активности соединения, которые содержали соединение, ксантин и ксантиноксидазу;[201] * OD test sample refers to the optical density value in relation to the compound activity test wells, which contained the compound, xanthine and xanthine oxidase;
[202] ODконтроль соединения относится к значению фоновой оптической плотности для различных концентраций лунок тестируемого соединения, которые содержали соединение и ксантин, но не ксантиноксидазу;[202] OD control compound refers to the background optical density value for different concentrations of test compound wells that contained the compound and xanthine but not xanthine oxidase;
[203] ODZPE представляет собой среднее значение оптической плотности в отношении контрольной лунки с нулевой ингибирующей активностью, которая содержала 0,5% DMSO, ксантин и ксантиноксидазу;[203] OD ZPE is the mean optical density relative to a control well with zero inhibitory activity, which contained 0.5% DMSO, xanthine, and xanthine oxidase;
[204] ODHPE представляет собой среднее значение оптической плотности контрольной лунки со 100% ингибирующей активностью, которая содержала 0,5% DMSO и ксантин, но не ксантиноксидазу.[204] OD HPE is the mean optical density of the 100% inhibitory activity control well, which contained 0.5% DMSO and xanthine but not xanthine oxidase.
[205] 7) С применением программного обеспечения GraphPad Prism данные в отношении степени ингибирования (степень ингибирования в %) соединений подвергали анализу нелинейной аппроксимации кривой с использованием способа "логарифм(агонист) против ответа -- переменный угловой коэффициент", позволяющий определить значение IC50 для соединения, при этом эмпирическое уравнение выглядит следующим образом:[205] 7) Using GraphPad Prism software, the inhibition rates (inhibition rates in %) of the compounds were subjected to non-linear curve fitting analysis using the log(agonist) versus response -- variable slope method to determine the IC 50 value for the compound, with the empirical equation being:
[206] Y = нижнее значение + (верхнее значение - нижнее значение)/(1 + 10^((LogIC50 - X) * угловой коэффициент Хилла)).[206] Y = lower value + (upper value - lower value)/(1 + 10^((LogIC 50 - X) * Hill slope)).
[207] 5. Результаты эксперимента [207] 5. Experimental results
[208] Результаты экспериментов показаны в таблице 8.[208] The experimental results are shown in Table 8.
[209][209]
[210] Заключение: соединение по настоящему изобретению проявляет подходящую ингибирующую активность в отношении ксантиноксидазы.[210] Conclusion: The compound of the present invention exhibits favorable xanthine oxidase inhibitory activity.
[211] Экспериментальный пример 2. Тестирование ингибирующей активности соединения в отношении поглощения мочевой кислоты [211] Experimental Example 2. Testing the Inhibitory Activity of the Compound on Uric Acid Absorption
[212] 1. Цель эксперимента [212] 1. The purpose of the experiment
[213] В настоящем исследовании использовали стабильную трансфицированную линию клеток Urat1 человека для оценки ингибирующей активности тестируемого соединения в отношении поглощения мочевой кислоты.[213] In the present study, a stable transfected human Urat1 cell line was used to evaluate the inhibitory activity of the test compound on uric acid uptake.
[214] 2. Материалы для эксперимента [214] 2. Materials for the experiment
[215] 2.1 Клеточная линия[215] 2.1 Cell line
[216] Стабильная трансфицированная линия клеток Urat1 человека была сконструирована компанией Wuxi APPTEC (Shanghai) Co., Ltd. Стабильная трансфицированная линия клеток Urat1 человека (Urat1-MDCK) была получена путем трансфекции клеток MDCK геном Urat1 человека с последующей селекцией с помощью G418. Линию клеток культивировали в MEM, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 100 Ед./мл пенициллина, 100 г/мл стрептомицина, 2 мМ L-глутамина, 1% заменимых аминокислот и 250 г/мл G418.[216] A stable transfected human Urat1 cell line was constructed by Wuxi APPTEC (Shanghai) Co., Ltd. A stable transfected human Urat1 cell line (Urat1-MDCK) was generated by transfecting MDCK cells with the human Urat1 gene followed by selection with G418. The cell line was cultured in MEM containing 10% fetal bovine serum (FBS), 100 U/mL penicillin, 100 g/mL streptomycin, 2 mM L-glutamine, 1% nonessential amino acids, and 250 g/mL G418.
[217] 2.2 Реагенты[217] 2.2 Reagents
[218] В число основных реагентов, используемых в настоящем исследовании, входила 14C-мочевая кислота (ARC, номер по каталогу: ARC-0513, номер по каталогу: 200122).[218] The essential reagents used in this study included 14C-uric acid (ARC, catalog number: ARC-0513, catalog number: 200122).
[219] 2.3 Приборы[219] 2.3 Devices
[220] Основным прибором, применяемым в настоящем исследовании, являлся жидкостный сцинтилляционный анализатор (Perkin Elmer, Tri-Carb 4910TR).[220] The primary instrument used in this study was a liquid scintillation analyzer (Perkin Elmer, Tri-Carb 4910TR).
[221] 3. Способы проведения эксперимента [221] 3. Methods of conducting the experiment
[222] 3.1 Посев клеток[222] 3.1 Cell seeding
[223] 3.1.1 Клетки Urat1-MDCK, культивированные во флаконах T150 для культивирования клеток, расщепляли 0,25% трипсином, а затем разбавляли свежей культуральной средой, что в результате приводило к получению суспензии с концентрацией 200000 клеток/мл.[223] 3.1.1 Urat1-MDCK cells cultured in T150 cell culture flasks were digested with 0.25% trypsin and then diluted with fresh culture medium, resulting in a suspension with a concentration of 200,000 cells/mL.
[224] 3.1.2 Клетки высевали в 48-луночный планшет для культивирования клеток по 0,5 мл на лунку, в результате чего конечная плотность составляла 100000 клеток/лунку.[224] 3.1.2 Cells were seeded in a 48-well cell culture plate at 0.5 ml per well, resulting in a final density of 100,000 cells/well.
[225] 3.1.3 Планшет для культивирования клеток помещали в инкубатор при 37°C и 5% CO2 и культивировали в течение ночи.[225] 3.1.3 The cell culture plate was placed in an incubator at 37°C and 5% CO2 and cultured overnight.
[226] 3.2 Обработка и тестирование соединения[226] 3.2 Connection Processing and Testing
[227] 3.2.1 Соединение разводили в DMSO с 5-кратным градиентом для 4 точек, при этом разбавленные концентрации в 200 раз превышали конечную концентрацию для тестирования. Затем соединение разбавляли в 10 раз буфером HBSS.[227] 3.2.1 Compound was diluted in DMSO with a 5-fold gradient over 4 points, with dilutions being 200 times the final testing concentration. Compound was then diluted 10-fold in HBSS buffer.
[228] 3.2.2 10 мМ концентрированный исходный раствор 14C-мочевой кислоты разбавляли до 1 мМ с использованием буфера HBSS.[228] 3.2.2 10 mM concentrated 14C-uric acid stock solution was diluted to 1 mM using HBSS buffer.
[229] 3.2.3 После инкубации планшета для культивирования клеток в течение ночи среду для культивирования клеток удаляли из планшета, и клетки трижды промывали буфером HBSS, после чего в каждую лунку добавляли по 90 мкл буфера HBSS.[229] 3.2.3 After incubating the cell culture plate overnight, the cell culture medium was removed from the plate and the cells were washed three times with HBSS buffer, after which 90 μl of HBSS buffer was added to each well.
[230] 3.2.4 В каждую лунку добавляли 5 мкл разбавленного соединения, и клетки помещали в инкубатор при 37°C, 5% CO2 в течение 20 минут. Каждая лунка содержала 0,5% DMSO. Тестируемое соединение (10 мкМ) применяли в качестве контроля 100% степени ингибирования, а 0,5% DMSO применяли в качестве контроля 0% степени ингибирования.[230] 3.2.4 5 μl of the diluted compound was added to each well and the cells were incubated at 37°C, 5% CO 2 for 20 min. Each well contained 0.5% DMSO. The test compound (10 μM) was used as a 100% inhibition control, and 0.5% DMSO was used as a 0% inhibition control.
[231] 3.2.5 В каждую лунку планшета для клеток добавляли 5 мкл разбавленной 14С-мочевой кислоты с конечной концентрацией мочевой кислоты, составляющей 50 мкM в каждой лунке. Клетки помещали в инкубатор при 37°C, 5% CO2 в течение 15 минут. Затем клетки трижды промывали предварительно охлажденным буфером HBSS.[231] 3.2.5 5 μl of diluted 14C-uric acid was added to each well of the cell plate to give a final uric acid concentration of 50 μM in each well. The cells were placed in an incubator at 37°C, 5% CO2 for 15 min. The cells were then washed three times with pre-chilled HBSS buffer.
[232] 3.2.6 В каждую лунку добавляли 150 мкл 0,1 M NaOH для лизирования клеток в течение 10 минут.[232] 3.2.6 150 µl of 0.1 M NaOH was added to each well to lyse the cells for 10 minutes.
[233] 3.2.7 Клеточный лизат собирали во флаконы для жидкостного сцинтилляционного тестирования, при этом в каждый флакон для тестирования добавляли дополнительно по 2 мл сцинтилляционной жидкости.[233] 3.2.7 Cell lysate was collected into liquid scintillation count vials, with an additional 2 ml of scintillation fluid added to each test vial.
[234] 3.2.8 Содержание 14C в каждом образце определяли с применением жидкостного сцинтилляционного анализатора.[234] 3.2.8 The 14C content of each sample was determined using a liquid scintillation analyzer.
[235] 3.2.9 Анализ данных.[235] 3.2.9 Data analysis.
Степень ингибирования, % = (HC-CPD)/(HC-LC) × 100% *Degree of inhibition, % = ( HC-CPD )/( HC - LC ) × 100% *
[236] * CPD представляет собой значение радиоактивного сигнала для лунки с соединением;[236] * CPD is the radioactive signal value for the well containing the compound;
[237] HC представляет собой среднее значение радиоактивного сигнала для контрольной лунки с 0% ингибированием;[237] HC represents the mean radioactive signal for the control well with 0% inhibition;
[238] LC представляет собой среднее значение радиоактивного сигнала для контрольной лунки с 100% ингибированием.[238] LC represents the mean radioactive signal for the control well with 100% inhibition.
[239] 3.2.10 В программном обеспечении GraphPad Prism нелинейная регрессия выполняется с использованием способа "логарифм(ингибитор) против ответа -- переменный угловой коэффициент". Кривую зависимости "доза-эффект" аппроксимируют в соответствии со следующей формулой и определяют значения IC50 и IC90 для соединения.[239] 3.2.10 In GraphPad Prism software, nonlinear regression is performed using the log(inhibitor) versus response -- variable slope method. The dose-response curve is approximated according to the following formula, and the IC 50 and IC 90 values for the compound are determined.
[240] Y = нижнее значение + (верхнее значение - нижнее значение)/(1 + 10^((LogIC50 - X) * угловой коэффициент Хилла))[240] Y = lower value + (upper value - lower value)/(1 + 10^((LogIC 50 - X) * Hill slope))
[241] 4. Результаты эксперимента [241] 4. Experimental results
[242] Результаты экспериментов показаны в таблице 9.[242] The experimental results are shown in Table 9.
[243][243]
[244] Заключение: соединение по настоящему изобретению проявляет хорошую ингибирующую активность в отношении поглощения мочевой кислоты.[244] Conclusion: The compound of the present invention exhibits good uric acid absorption inhibitory activity.
[245] Экспериментальный пример 3. Исследование печеночной метаболической стабильности (HMS) в клетках печени [245] Experimental Example 3. Study of Hepatic Metabolic Stability (HMS) in Liver Cells
[246] 1. Цель эксперимента [246] 1. The purpose of the experiment
[247] Проверить метаболическую стабильность тестируемого соединения в клетках печени человека и крысы.[247] To test the metabolic stability of the test compound in human and rat liver cells.
[248] 2. Материалы для эксперимента [248] 2. Materials for the experiment
[249] 2.1 Тестируемое соединение (10 мМ), контрольные соединения: 7-этоксикумарин (30 мМ), 7-гидроксикумарин (контроль, 30 мМ).[249] 2.1 Test compound (10 mM), control compounds: 7-ethoxycoumarin (30 mM), 7-hydroxycoumarin (control, 30 mM).
[250] 2.2 Клетки[250] 2.2 Cells
[251] Информация о клетке показана в таблице 10.[251] Cell information is shown in Table 10.
[252] Таблица 10. Информация о клетке[252] Table 10. Cell information
[253] 2.3 Буферная система[253] 2.3 Buffer system
[254] Среда для размораживания: среда Вильямса Е, которая содержала 5% фетальной бычьей сыворотки и 30% раствора перколла наряду с другими вспомогательными средствами.[254] Thawing medium: Williams E medium, which contained 5% fetal bovine serum and 30% Percoll solution along with other excipients.
[255] Инкубационная среда: среда Вильямса Е (без фенолового красного), которая содержала 2 мМ L-глутамина и 25 мМ HEPES.[255] Incubation medium: Williams E medium (without phenol red) containing 2 mM L-glutamine and 25 mM HEPES.
[256] Раствор для остановки реакции: ацетонитрил, который содержал 200 нг/мл толбутамида и лабеталола в качестве внутренних стандартов.[256] Stop solution: acetonitrile containing 200 ng/mL tolbutamide and labetalol as internal standards.
[257] Растворитель для разбавления: сверхчистая вода.[257] Diluent: ultrapure water.
[258] 3. Способы проведения эксперимента [258] 3. Methods of conducting the experiment
[259] 1) 30 мМ раствор получали путем растворения точного количества соединения положительного контроля в диметилсульфоксиде (DMSO).[259] 1) A 30 mM solution was prepared by dissolving an exact amount of the positive control compound in dimethyl sulfoxide (DMSO).
[260] 2) В 96-луночном планшете 10 мМ тестируемое соединение и 30 мМ соединение положительного контроля разбавляли до 1 мМ и 3 мМ соответственно, используя DMSO.[260] 2) In a 96-well plate, 10 mM test compound and 30 mM positive control compound were diluted to 1 mM and 3 mM, respectively, using DMSO.
[261] 3) Ацетонитрил использовали для дальнейшего разведения 1 мМ тестируемого соединения и 3 мМ соединенияположительного контроля до получения растворов для количественного анализа с конечными концентрациями 100 мкМ и 300 мкМ соответственно.[261] 3) Acetonitrile was used to further dilute 1 mM test compound and 3 mM positive control compound to obtain assay solutions with final concentrations of 100 μM and 300 μM, respectively.
[262] 4) Хранившиеся клетки размораживали, отделяли и суспендировали в культуральных средах. Затем эти клетки разбавляли до концентрации 0,5×10^6 клеток/мл с использованием предварительно нагретых культуральных сред.[262] 4) Stored cells were thawed, separated and suspended in culture media. These cells were then diluted to a concentration of 0.5×10^6 cells/mL using pre-warmed culture media.
[263] 5) В 96-луночный планшет добавляли 198 мкл предварительно нагретой клеточной суспензии.[263] 5) 198 µl of pre-warmed cell suspension was added to a 96-well plate.
[264] 6) В предварительно помеченный набор 96-луночных планшетов переносили 100 мкл раствора для остановки реакции (ацетонитрил, содержащий 200 нг/мл толбутамида и 200 нг/мл лабеталола в качестве внутренних стандартов).[264] 6) 100 µl of stop solution (acetonitrile containing 200 ng/ml tolbutamide and 200 ng/ml labetalol as internal standards) were transferred to a pre-labeled set of 96-well plates.
[265] 7) В двух повторностях в каждую лунку 96-луночного планшета добавляли по 2 мкл 100 мкМ тестируемого соединения или 300 мкМ раствора положительного контроля.[265] 7) In duplicate, 2 μl of 100 μM test compound or 300 μM positive control solution were added to each well of a 96-well plate.
[266] 8) Образцы Т0 перемешивали примерно в течение одной минуты для получения гомогенной суспензии, после чего немедленно переносили по 20 мкл каждого образца в лунки, содержащие 100 мкл охлажденного на льду раствора для остановки реакции, и их перемешивали.[266] 8) The T0 samples were mixed for approximately one minute to obtain a homogeneous suspension, after which 20 µl of each sample were immediately transferred to wells containing 100 µl of ice-cold stop solution and mixed.
[267] 9) Все планшеты инкубировали при 37°C в инкубаторе с 95% увлажненной атмосферой при 5% CO2, и реакцию инициировали постоянным встряхиванием со скоростью примерно 600 об/мин.[267] 9) All plates were incubated at 37°C in a 95% humidified incubator with 5% CO 2 , and the reaction was initiated by constant shaking at approximately 600 rpm.
[268] 10) Через 15, 30, 60 и 90 минут образцы смешивали, а затем по 20 мкл каждого образца в каждый момент времени переносили в лунки, содержащие 100 мкл охлажденного на льду раствора для остановки реакции, и их перемешивали.[268] 10) After 15, 30, 60 and 90 minutes, the samples were mixed and then 20 µl of each sample at each time point was transferred to wells containing 100 µl of ice-cold stop solution and mixed.
[269] 11) Планшеты для образцов контроля со средой (MC) для T0 и T90 получали путем добавления тех же компонентов, что и в другие лунки, за исключением клеточной суспензии, и помечали как T0-MC и T90-MC. Была составлена итоговая таблица концентраций.[269] 11) Medium control (MC) sample plates for T0 and T90 were prepared by adding the same components as the other wells except the cell suspension and labeled T0-MC and T90-MC. A final concentration table was generated.
[270] 12) В каждый соответствующий момент времени реакцию останавливали, вынимая планшеты из инкубатора и смешивая их содержимое со 100 мкл охлажденного на льду раствора для остановки реакции.[270] 12) At each appropriate time point, the reaction was stopped by removing the plates from the incubator and mixing their contents with 100 µl of ice-cold stop solution.
[271] 13) Немедленное встряхивание планшетов проводили при 500 об/мин. на мешалке с платформой в течение 10 минут. Впоследствии все планшеты с образцами центрифугировали при 3220 x g в течение 20 минут при 4°C.[271] 13) Immediate shaking of the plates was performed at 500 rpm on a platform mixer for 10 minutes. Subsequently, all sample plates were centrifuged at 3220 x g for 20 minutes at 4°C.
[272] 14) После центрифугирования 35 мкл супернатанта на лунку из планшетов для образцов переносили в другой набор предварительно помеченных 96-луночных планшетов, содержащих 70 мкл сверхчистой воды.[272] 14) After centrifugation, 35 µl of supernatant per well from the sample plates was transferred to another set of pre-labeled 96-well plates containing 70 µl of ultrapure water.
[273] 15) Аналитические планшеты запечатывали и хранили при 4°C до анализа LC-MS-MS.[273] 15) Assay plates were sealed and stored at 4°C until LC-MS-MS analysis.
[274] По следующей формуле рассчитывали значения остаточного содержания тестируемого соединения и контрольного соединения.[274] The residual content values of the test compound and the control compound were calculated using the following formula.
[275] Константу скорости элиминации k для тестируемого соединения и контрольного соединения в гепатоцитах рассчитывали путем построения графика зависимости логарифма остаточного содержания от времени. Период полувыведения (T1/2) и скорость собственного клиренса (CLint) определяли на основе константы скорости выведения k. Формула выглядит следующим образом.[275] The elimination rate constant k for the test compound and the control compound in hepatocytes was calculated by plotting the logarithm of the residual content versus time. The half-life (T 1/2 ) and intrinsic clearance rate (CL int ) were determined from the elimination rate constant k . The formula is as follows.
[276] T1/2 = 0,693 / k [276] T 1/2 = 0.693 / k
[277] CLint (hep) = k / количество клеток на миллилитр (миллион клеток/мл)[277] CL int (hep) = k / number of cells per milliliter (million cells/mL)
[278] CLint (liver) = CLint (hep) × соотношение веса печени к весу тела × количество гепатоцитов на грамм печени[278] CL int (liver) = CL int (hep) × liver to body weight ratio × hepatocyte count per gram of liver
[279] Параметры для каждого вида в формуле показаны в таблице 11 ниже.[279] The parameters for each species in the formula are shown in Table 11 below.
[280] Таблица 11. Параметры для каждого вида
[280] Table 11. Parameters for each type
[281] 4. Результаты эксперимента [281] 4. Experimental results
[282] Результаты показаны в таблице 12.[282] The results are shown in Table 12.
[283][283]
[284] Заключение: соединение по настоящему изобретению проявляет умеренную степень клиренса в клетках печени человека и высокую степень клиренса в клетках печени крысы.[284] Conclusion: The compound of the present invention exhibits a moderate clearance rate in human liver cells and a high clearance rate in rat liver cells.
[285] Экспериментальный пример 4. Тест на проницаемость мембраны MDR1 [285] Experimental Example 4. MDR1 Membrane Permeability Test
[286] 1. Цель эксперимента [286] 1. The purpose of the experiment
[287] Клетки MDR1-MDCK II представляют собой клетки почек собаки Мадин-Дарби, трансфицированные геном MDR1 человека, обеспечивающим стабильно высокую экспрессию P-gp. Целью настоящего исследования является проверка двунаправленной проницаемости соединения в модели клеток MDR1-MDCK II и оценка его потенциала в отношении эффлюксного переноса.[287] MDR1-MDCK II cells are Madin-Darby canine kidney cells transfected with the human MDR1 gene, which provides stable high expression of P-gp. The aim of this study was to test the bidirectional permeability of the compound in the MDR1-MDCK II cell model and evaluate its potential for efflux transport.
[288] 2. Культура клеток [288] 2. Cell culture
[289] Клетки MDR1-MDCK II (полученные от Piet Borst из Нидерландского института рака) высевали на мембраны из полиэтилентерефталата (PET) в 96-луночную систему с вкладышем с плотностью 2,5×105 клеток/мл. Клетки культивировали до тех пор, пока они не образовывали сливающийся монослой в течение 4-7 дней.[289] MDR1-MDCK II cells (obtained from Piet Borst, Netherlands Cancer Institute) were seeded on polyethylene terephthalate (PET) membranes in a 96-well insert system at a density of 2.5× 105 cells/mL. Cells were cultured until they formed a confluent monolayer over 4–7 days.
[290] 3. Способы проведения эксперимента [290] 3. Methods of conducting the experiment
[291] Тестируемые соединения разбавляли в буфере для переноса (HBSS, содержащем 10 мМ Hepes с DMSO, pH 7,4) до концентрации 2 мкМ (DMSO <1%) и наносили либо на апикальную, либо на базолатеральную сторону клеточного монослоя. Повторные измерения тестируемого соединения проводили как в направлениях A-B, так и B-A. Дигоксин также тестировали в обоих направлениях при концентрации 10 мкМ, тогда как надолол и метопролол тестировали при 2 мкМ в направлении А-В. Планшет инкубировали в инкубаторе с CO2 при 37±1°C и 5% CO2 в среде с насыщенной влажностью в течение 2,5 часа без встряхивания. Кроме того, измеряли значения коэффициента оттока для каждого соединения и количественно определяли как тестируемые, так и эталонные соединения на основе отношения площадей пиков аналита к IS с помощью анализа LC/MS/MS. После анализа переноса целостность клеточного монослоя определяли с использованием анализа исключения Люцифера желтого. Буфер удаляли как из апикальной, так и из базолатеральной камер, после чего добавляли 75 мкл 100 мкМ флуоресцеина в буфере для переноса в апикальную камеру и 250 мкл буфера для переноса как в апикальную, так и базолатеральную камеры. Планшет инкубировали при 37°C и 5% CO2 и при насыщенной влажности в течение 30 минут без встряхивания. Через 30 минут инкубации 20 мкл образца флуоресцеина экстрагировали из апикальной камеры и к полученному добавляли 60 мкл буфера для переноса. Затем 80 мкл образца флуоресцеина собирали с базолатеральной стороны клетки. Относительные единицы флуоресценции (RFU) для флуоресцеина измеряли при 425/528 нм (возбуждение/испускание) с использованием микропланшет-ридера Envision.[291] Test compounds were diluted in transfer buffer (HBSS containing 10 mM Hepes with DMSO, pH 7.4) to a concentration of 2 μM (DMSO < 1%) and applied to either the apical or basolateral side of the cell monolayer. Repeated measurements of the test compound were performed in both the AB and BA directions. Digoxin was also tested in both directions at a concentration of 10 μM, while nadolol and metoprolol were tested at 2 μM in the A-B direction. The plate was incubated in a CO 2 incubator at 37 ± 1 °C and 5% CO 2 in a saturated humidity environment for 2.5 h without shaking. In addition, the efflux ratio values were measured for each compound and both test and reference compounds were quantified based on the peak area ratio of the analyte to IS using LC/MS/MS analysis. Following the transfer assay, the integrity of the cell monolayer was determined using the Lucifer Yellow exclusion assay. The buffer was removed from both the apical and basolateral chambers, after which 75 μL of 100 μM fluorescein in transfer buffer was added to the apical chamber and 250 μL of transfer buffer to both the apical and basolateral chambers. The plate was incubated at 37°C and 5% CO2 and saturated humidity for 30 min without shaking. After 30 min of incubation, 20 μL of fluorescein sample was extracted from the apical chamber and 60 μL of transfer buffer was added to the resulting solution. Then, 80 μl of fluorescein sample was collected from the basolateral side of the cell. Relative fluorescence units (RFU) for fluorescein were measured at 425/528 nm (excitation/emission) using an Envision microplate reader.
[292] 4. Расчет данных [292] 4. Data calculation
[293] Коэффициент кажущейся проницаемости (Papp, см/с.), коэффициент оттока и степень высвобождения рассчитывали по следующим формулам.[293] The apparent permeability coefficient (P app , cm/s), outflow coefficient and release rate were calculated using the following formulas.
[294] Коэффициент кажущейся проницаемости (Papp, см/с.) рассчитывают следующим образом.[294] The apparent permeability coefficient (P app , cm/s) is calculated as follows.
[295] Papp = (dCr/dt) × Vr / (A × C0),[295] P app = (dC r /d t ) × V r / (A × C 0 ),
[296] где dCr/dt представляет собой кумулятивную концентрацию соединения на приемном конце в единицу времени (М/с.); Vr представляет собой объем принимающего раствора (объемы апикального и базолатерального растворов составляют 0,075 мл и 0,250 мл соответственно); A представляет собой относительную площадь поверхности клеточного монослоя (0,0804 см2); и C0 представляет собой исходную концентрацию тестируемого соединения (нМ) или отношение площадей пиков контроля.[296] where dC r /d t is the cumulative concentration of the compound at the receiving end per unit time (M/s); V r is the volume of the receiving solution (the volumes of the apical and basolateral solutions are 0.075 ml and 0.250 ml, respectively); A is the relative surface area of the cell monolayer (0.0804 cm 2 ); and C 0 is the initial concentration of the test compound (nM) or the ratio of the peak areas of the control.
[297] Коэффициент оттока рассчитывают по следующей формуле.[297] The outflow coefficient is calculated using the following formula.
[298] Коэффициент оттока = Papp (BA) / Papp (AB)[298] Churn rate = P app (BA) / P app (AB)
[299] Степень высвобождения рассчитывают по следующей формуле.[299] The degree of release is calculated using the following formula.
[300] Степень высвобождения, % = 100 × [(Vr × Cr) + (Vd × Cd)] / (Vd × C0),[300] Release rate, % = 100 × [(V r × C r ) + (V d × C d )] / (V d × C 0 ),
[301] где C0 представляет собой исходную концентрацию (нМ) тестового соединения или отношение площадей пиков контроля; Vd представляет собой объем на дозирующем конце (апикальная сторона - 0,075 мл, а базолатеральная сторона - 0,250 мл); Cd и Cr представляют собой конечные концентрации (нМ) тестового соединения на дозирующей и принимающей сторонах соответственно или отношение площадей пиков контроля.[301] where C 0 is the initial concentration (nM) of the test compound or the ratio of the peak areas of the control; V d is the volume at the dispensing end (apical side - 0.075 ml and basolateral side - 0.250 ml); C d and C r are the final concentrations (nM) of the test compound at the dispensing and receiving ends, respectively, or the ratio of the peak areas of the control.
[302] Долю в процентах флуоресцеина в базолатеральных лунках рассчитывают по следующей формуле.[302] The percentage of fluorescein in the basolateral wells is calculated using the following formula.
[303] в которой RFUApical и RFUBasolateral представляют собой относительные единицы флуоресценции флуоресцеина в апикальных и базолатеральных лунках соответственно; VApical и VBasolateral представляют собой объемы апикальных и базолатеральных лунок соответственно (0,075 мл и 0,25 мл). Доля в процентах флуоресцеина должна составлять менее 2%.[303] in which RFU Apical and RFU Basolateral represent the relative fluorescence units of fluorescein in the apical and basolateral wells, respectively; V Apical and V Basolateral represent the volumes of the apical and basolateral wells, respectively (0.075 ml and 0.25 ml). The percentage of fluorescein should be less than 2%.
[304] 5. Результаты эксперимента [304] 5. Experimental results
[305] Результаты показаны в таблице 13.[305] The results are shown in Table 13.
[306][306]
[307] Заключение: соединение по настоящему изобретению характеризуется высокой проницаемостью.[307] Conclusion: The compound of the present invention is characterized by high permeability.
[308] Экспериментальный пример 5. Тестирование ингибирующей активности в отношении изофермента цитохрома P450 [308] Experimental Example 5. Testing the inhibitory activity against the cytochrome P450 isoenzyme
[309] 1. Цель эксперимента [309] 1. The purpose of the experiment
[310] Определить ингибирующую активность тестируемого соединения в отношении различных подтипов изоферментов цитохрома Р450 человека.[310] To determine the inhibitory activity of the test compound against various subtypes of human cytochrome P450 isoenzymes.
[311] 2. Способы проведения эксперимента [311] 2. Methods of conducting the experiment
[312] Получали тестируемые соединения, стандартные ингибиторы (при 100× конечной концентрации) и рабочие растворы смешанных субстратов; микросомы (приобретенные у Corning Inc.), хранившиеся при -80°C, вынимали и размораживали. В соответствующие лунки добавляли по 20 мкл тестируемого соединения и растворов стандартного ингибитора. Тем временем 20 мкл соответствующего растворителя добавляли в контрольные лунки без ингибитора (NIC) и лунки холостого контроля. Затем в соответствующие лунки добавляли по 20 мкл раствора смешанного субстрата за исключением пустых лунок, в которые добавляли 20 мкл фосфатного буфера (PB). Получали раствор микросом печени человека (возвращали в холодильник сразу после отметки о дате использования). Затем во все лунки добавляли по 158 мкл этого раствора. Планшет с образцами помещали на водяную баню с температурой 37°C для предварительной инкубации. Затем сразу же получали раствор фактора кофермента (NADPH). Через 10 минут во все лунки добавляли по 20 мкл раствора NADPH. Планшет с образцами встряхивали для перемешивания и помещали обратно на водяную баню при 37°C для инкубации еще в течение 10 минут. В соответствующие моменты времени реакцию останавливали посредством добавления 400 мкл холодного раствора ацетонитрила (внутренний стандарт в концентрации 200 нг/мл толбутамида и лабеталола). Планшет с образцами тщательно перемешивали, а затем центрифугировали при 4000 об/мин. в течение 20 минут для осаждения белков. Отбирали 200 мкл супернатанта и смешивали со 100 мкл воды, после чего его отправляли на анализ LC/MS/MS.[312] Test compounds, standard inhibitors (at 100× final concentration), and mixed substrate working solutions were prepared; microsomes (purchased from Corning Inc.) stored at -80°C were removed and thawed. 20 μl of test compound and standard inhibitor solutions were added to the corresponding wells. Meanwhile, 20 μl of the corresponding solvent was added to the no inhibitor control (NIC) wells and the blank control wells. Then, 20 μl of the mixed substrate solution were added to the corresponding wells except for the blank wells, to which 20 μl of phosphate buffer (PB) was added. Human liver microsome solution was prepared (returned to the refrigerator immediately after marking the use date). Then, 158 μl of this solution were added to all wells. The sample plate was placed in a 37°C water bath for pre-incubation. The coenzyme factor (NADPH) solution was then prepared immediately. After 10 min, 20 μL of the NADPH solution was added to all wells. The sample plate was vortexed to mix and placed back in the 37°C water bath to incubate for another 10 min. At the appropriate time points, the reaction was stopped by adding 400 μL of cold acetonitrile (internal standard at 200 ng/mL tolbutamide and labetalol). The sample plate was mixed thoroughly and then centrifuged at 4000 rpm for 20 min to precipitate the proteins. 200 μL of the supernatant was collected and mixed with 100 μL of water and sent for LC/MS/MS analysis.
[313] 3. Результаты эксперимента [313] 3. Experimental results
[314] Результаты показаны в таблице 14.[314] The results are shown in Table 14.
[315] Таблица 14. Значения IC50 соединения для ингибирования изоферментов P450[315] Table 14. IC 50 values of the compound for inhibition of P450 isoenzymes
[316] Заключение: соединение по настоящему изобретению проявляет чрезвычайно низкую ингибирующую активность в отношении CYP1A2, CYP2C19, CYP2D6 и CYP3A4-M и умеренную ингибирующую активность в отношении CYP2C9.[316] Conclusion: The compound of the present invention exhibits extremely low inhibitory activity against CYP1A2, CYP2C19, CYP2D6 and CYP3A4-M and moderate inhibitory activity against CYP2C9.
[317] Пример 6. Фармакокинетика у крыс SD in vivo [317] Example 6. Pharmacokinetics in SD rats in vivo
[318] 1. Цель эксперимента [318] 1. The purpose of the experiment
[319] Проверить фармакокинетику соединения на крысах SD in vivo. [319] To test the pharmacokinetics of the compound in SD rats in vivo.
[320] 2. Экспериментальные материалы [320] 2. Experimental materials
[321] Крысы Sprague Dawley (самцы, 180-350 г, возраст 6-10 недель, Beijing Vital River).[321] Sprague Dawley rats (male, 180-350 g, 6-10 weeks old, Beijing Vital River).
[322] 3. Способы проведения эксперимента [322] 3. Methods of conducting the experiment
[323] Соединение смешивали с 5% DMSO/10% солютола/85% воды, перемешивали и встряхивали с получением прозрачного раствора 0,6 мг/мл для введения в группе, получавшей инъекцию. Затем раствор фильтровали через микропористую мембрану для последующего использования. Соединение смешивали с 5% DMSO/10% солютола/85% воды, перемешивали и встряхивали с получением прозрачного раствора 1 мг/мл для перорального введения. Шесть самцов крыс SD разделяли на две группы. В первой группе животным однократно внутривенно вводили инъекцию в дозе 3 мг/кг, используя в качестве растворителя смесь 5% DMSO/10% солютола/85% воды, при этом объем дозирования составлял 5 мл/кг. Во второй группе животные получали однократную пероральную дозу, вводимую через желудочный зонд, тестируемого соединения в дозе 10 мг/кг. Растворитель для перорального применения представлял собой 5% DMSO/10% солютола/85% воды, при этом объем дозирования составлял 10 мл/кг. Образцы цельной крови собирали через 0 (только для группы приема через желудочный зонд), 0,083 (только для группы приема путем внутривенной инъекции), 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 и 24 часа после введения. Цельную кровь центрифугировали при 3200 g в течение 10 минут при 4°C с получением плазмы крови. Значения концентрации соединения и мочевой кислоты (только для группы приема через желудочный зонд) в плазме крови измеряли с применением способа LC/MS/MS. Фармакокинетические параметры, такие как пиковая концентрация, время достижения пиковой концентрации, скорость клиренса, период полувыведения, площадь под кривой и биологическая доступность, рассчитывали с применением программного обеспечения Phoenix WinNonlin.[323] The compound was mixed with 5% DMSO/10% Solutol/85% water, stirred and vortexed to obtain a clear solution of 0.6 mg/mL for administration in the injection group. The solution was then filtered through a microporous membrane for subsequent use. The compound was mixed with 5% DMSO/10% Solutol/85% water, stirred and vortexed to obtain a clear solution of 1 mg/mL for oral administration. Six male SD rats were divided into two groups. In the first group, the animals were given a single intravenous injection of 3 mg/kg using 5% DMSO/10% Solutol/85% water as a diluent with a dosing volume of 5 mL/kg. In the second group, the animals received a single oral dose of 10 mg/kg of the test compound via gavage. The oral vehicle was 5% DMSO/10% Solutol/85% water, and the dosing volume was 10 ml/kg. Whole blood samples were collected at 0 (gavage group only), 0.083 (intravenous injection group only), 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, and 24 hours after administration. Whole blood was centrifuged at 3200 g for 10 minutes at 4°C to obtain plasma. The plasma concentrations of the compound and uric acid (gavage group only) were measured using the LC/MS/MS method. The pharmacokinetic parameters such as peak concentration, time to peak concentration, clearance rate, half-life, area under the curve, and bioavailability were calculated using Phoenix WinNonlin software.
[324] Результаты показаны в таблице 15 ниже.[324] The results are shown in Table 15 below.
[325][325]
[326] Заключение: соединения по настоящему описанию характеризуются предпочтительными фармакокинетическими свойствами и высокой биологической доступностью при пероральном приеме, где C0 представляет собой исходную концентрацию, T1/2 представляет собой период полувыведения, Vdss представляет собой кажущийся объем распределения в установившемся состоянии, Cl представляет собой общую скорость клиренса, AUC0-last представляет собой площадь под кривой зависимости концентрации в плазме крови от времени от момента времени 0 до последней поддающейся количественному измерению точки времени, AUC0-inf представляет собой площадь под кривой зависимости концентрации в плазме крови от момента времени 0, экстраполированной до бесконечности, Cmax представляет собой пиковую концентрацию, а Tmax представляет собой время достижения пиковой концентрации.[326] Conclusion: The compounds of the present description are characterized by favorable pharmacokinetic properties and high bioavailability when administered orally, where C 0 is the initial concentration, T 1/2 is the half-life, Vd ss is the apparent volume of distribution at steady state, Cl is the total clearance rate, AUC 0-last is the area under the plasma concentration-time curve from time 0 to the last quantifiable time point, AUC 0-inf is the area under the plasma concentration-time curve extrapolated to infinity, C max is the peak concentration, and T max is the time to peak concentration.
Claims (20)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110472705.3 | 2021-04-29 | ||
| CN202111112439.X | 2021-09-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2830948C1 true RU2830948C1 (en) | 2024-11-26 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010044403A1 (en) * | 2008-10-15 | 2010-04-22 | キッセイ薬品工業株式会社 | 5-membered heteroaryl derivative and use thereof for medical purposes |
| RU2733750C2 (en) * | 2015-09-02 | 2020-10-06 | Саншайн Лейк Фарма Ко., Лтд. | Derivatives of carboxy-substituted (hetero)aromatic rings, method of synthesis and use thereof |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010044403A1 (en) * | 2008-10-15 | 2010-04-22 | キッセイ薬品工業株式会社 | 5-membered heteroaryl derivative and use thereof for medical purposes |
| RU2733750C2 (en) * | 2015-09-02 | 2020-10-06 | Саншайн Лейк Фарма Ко., Лтд. | Derivatives of carboxy-substituted (hetero)aromatic rings, method of synthesis and use thereof |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Sarma B. et al. Solid formation of pharmaceuticals: Polymorphs, salt and cocrystals. Korean J.Chem.Eng., 2011, 28(2), p.315-322;. Narayan Variankaval; et al. From form to function: Crystallization of active pharmaceutical ingredients, AlChE, 2008, vol.54(7), p.1682-1688. Дж. Бернштейн. Полиморфизм молекулярных кристаллов. Москва, Наука, 2007, гл. 7.3.2. Биодоступность, с.324-330. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109134448B (en) | Heterocyclic compound and salt thereof, preparation method, use and medicine | |
| CN111285851A (en) | Compounds targeting degrading focal adhesion kinase and their application in medicine | |
| EP4349838A1 (en) | Wee1 inhibitor and use thereof | |
| US8946249B2 (en) | Compound, certain novel forms thereof, pharmaceutical compositions thereof and methods for preparation and use | |
| CN111386268B (en) | Crystal form of URAT1 inhibitor and preparation method thereof | |
| WO2009021748A2 (en) | Polymorphs of a compound for the treatment of duchenne muscular dystrophy | |
| CN115746023B (en) | Heterocyclic macrocyclic compound containing indazole structure as protein kinase inhibitor and preparation method thereof | |
| RU2830948C1 (en) | Crystalline form of thiophene derivative and method for obtaining thereof | |
| WO2021023194A1 (en) | Crystal forms c and e of pyrazin-2(1h)-one compound and preparation method therefor | |
| CA3142625A1 (en) | Synthesis method of furoimidazopyridine compound, crystal form of furoimidazopyridine compound, and crystal form of salt thereof | |
| EP4286386A1 (en) | Salt form and crystal form of pyrazole substituted imidazo[1,2- a]quinoxaline derivative | |
| JP7362916B2 (en) | Thiophene derivatives and their use as xanthine oxidase inhibitors | |
| US20240239763A1 (en) | Crystal form of thiophene derivative and preparation method therefor | |
| CN109384788A (en) | Purine series derivates and its preparation method and application | |
| KR102660247B1 (en) | Crystal form, salt form and method for preparing the same of 4-(naphthalen-1-yl)-4H-1, 2, 4-triazole compound | |
| JP2025528074A (en) | Crystalline forms and preparation methods of fused tricyclic derivatives | |
| CN115448874B (en) | Cyclin-dependent kinase 9 inhibitors in solid form and uses thereof | |
| Erkin et al. | 2-(2-Amino-6-methylpyrimidin-4-yl)-4-arylmethylidene-5-methyl-2, 4-dihydro-3H-pyrazol-3-ones: Design, synthesis, structure, in vitro anti-tubercular activity, and molecular docking study | |
| JP2852538B2 (en) | [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyrimidine derivatives | |
| AU2020355384B2 (en) | Crystalline form of capsid protein assembly inhibitor containing N hetero five-membered ring, and application thereof | |
| CN116768881B (en) | 4- (3-Indolyl) -1, 3-thiazole compound and preparation method and application thereof | |
| WO2021164789A1 (en) | Crystal form of pyrazolopyrimidine compound and use thereof | |
| WO2023227139A1 (en) | Fused pyrimidine derivative and application thereof | |
| EP3753942A1 (en) | Crystal form of 3,4-dihydrothieno[3,2-d]pyrimidine compound and preparation method therefor | |
| EA050378B1 (en) | METHOD FOR SYNTHESIS OF A FUROIMIDAZOPYRIDINE COMPOUND, CRYSTAL FORM OF A FUROIMIDAZOPYRIDINE COMPOUND AND CRYSTAL FORM OF ITS SALT |