RU2827992C1

RU2827992C1 - Соль гликопептидного антибиотика и фармацевтические композиции на ее основе

Info

Publication number: RU2827992C1
Application number: RU2023110664A
Authority: RU
Inventors: Андрей Егорович Щекотихин; Людмила Николаевна Лысенкова; Елена Николаевна Бычкова; Наталья Михайловна Малютина; Елена Игоревна Моисеенко; Ольга Александровна Омельчук; Светлана Евгеньевна Соловьева
Filing date: 2023-04-25
Publication date: 2024-10-04

Abstract

Изобретение относится к области фармацевтики и медицины, а именно к соли телаванцина с изетионовой кислотой, содержащей от 12 до 20% (вес.) изетионовой кислоты. Изобретение также включает лиофилизированные фармацевтические композиции, содержащие терапевтически эффективное количество изетионата телаванцина формулы 1, которые могут быть использованы для лечения инфекций, вызванных грамположительными бактериями, чувствительными к телаванцину. Соль телаванцина с изетионовой кислотой обладает отличными физико-химическими характеристиками, хорошей растворимостью в воде и меньше подвержена процессам деструкции по сравнению с гидрохлоридом в процессе получения, очистки и хранения, обладает высокой антибактериальной активностью. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 5 табл., 10 пр.

Description

Область техники

Изобретение включает новую солевую форму и фармацевтическую композицию, содержащую в качестве антибактериального лекарственного средства телаванцин, полусинтетическое производное ванкомицина. Телаванцин - липогликопептидный антибиотик, применяемый внутривенно один раз в сутки для лечения нозокомиальной пневмонии, осложненных инфекций кожи и мягких тканей, вызванных грамположительными возбудителями. Телаванцин по активности превосходит ванкомицин в отношении биопленок, сформированных метициллин-чувствительными штаммами стафилококка (MSSA). и метициллин-резистентными штаммами стафилококка (MRSA). Кроме того, телаванцин активен в отношении ванкомицин-устойчивых штаммамов стафилококка (VRSA) и штаммов с промежуточной чувствительностью к ванкомицину (VISA) [Jalali V., Zeitlinger М. Clin Pharmacokinet. 2018, 57:797-816].

Уровень техники

Телаванцин - первый представитель группы липогликопептидов, был выпущен на рынок под названием «Вибатив» (Theravance and Astellas Pharma Inc.) в 2009 году. Антибиотик описан в патенте US 6392012 (от 21.05.2002), раскрывающем методы модификации гликопептидных антибиотиков, в том числе и ванкомицина, а также фармацевтические композиции на их основе. Известен патент US 6635618 (от 21.10.2003), представляющий методы синтеза гликопептидов, которые замещены одним или более заместителями, которые могут содержать одну или более фосфоновых групп и фармацевтические композиции, содержащие такие производные. Патент US 6858584 (от 22.02.2003) раскрывает метод синтеза телаванцина и фармацевтические композиции на его основе или его соли. Наиболее близким по постановке проблемы является патент US 6858584 (от 22.02.2003), в котором описана схема синтеза телаванцина и получение его лиофилизированной фармацевтической композиции, включающей телаванцин гидрохлорид с содержанием от одного до трех мольных эквивалентов хлороводородной кислоты в пересчете на свободное основание телаванцина. Заявленная в патенте фармацевтическая композиция содержит гидроксипропил-β-циклодекстрин от 1 до 90% (вес.) и маннит в количестве от 1 до 10% (вес.). В вышеуказанной композиции гидроксипропил-β-циклодекстрин используется в качестве эксципиента (вспомогательного компонента), увеличивающего растворимость и биодоступность лекарственного вещества, а также стабильность лекарственной композиции. Данная лекарственная форма представляет собой стерильный порошок для приготовления инфузионного раствора непосредственно перед применением.

Также известен патент US 7531623 (от 12.05.2009), включающий соли телаванцина и соляной кислоты, имеющие содержание хлорид-ионов примерно от 2,4 до 4,8% (вес.), которые обладают улучшенной стабильностью при хранении.

Все перечисленные фармацевтические композиции содержат в качестве основного действующего вещества гидрохлорид телаванцина. Основным недостатком фармацевтической субстанции в виде соли с хлороводородной кислотой является ее склонность к образованию примесей, как во время последних стадий синтеза телаванцина, так и в процессе хранения из-за лабильности структуры молекулы. Кроме того, определенные трудности возникают в процессе приготовления композиции телаванцина с дополнительным содержанием соляной кислоты, необходимым для получения растворимой формы препарата.

Телаванцин, получают из ванкомицина в результате 7-стадийного синтеза. Очевидно, что качество субстанции телаванцин зависит от чистоты исходного ванкомицина и, что пути деградации телаванцина и ванкомицина имеют сходную природу. Главные ограничения использования ванкомицина и телаванцина в противомикробной терапии связаны с возможными побочными эффектами: нефротоксичностью, ототоксичностью, псевдоаллергическими и дерматологическими реакциями, вызывающими например, «синдромом красного человека». Ванкомицин - исходный антибиотик для синтеза телаванцина может содержать: дехлорванкомицин, дидехлорванкомицин, дезванкозаминилванкомицин, агликон ванкомицина и, кроме того, примеси неустановленного строения, общее содержание примесей может достигать 12% [Diana J., Visky D., Roets E., Hoogmartens J. J Chromatogr A, 2003, 996, 115; Jiang Z. et al. The Journal of Antibiotics, 2017, 70, 158]. Полагают, что лечебный эффект и частота возникновения побочных реакций после терапии ванкомицином в большой степени зависят от степени его очистки [Zamoner W. et al. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology, 2019, 46/4, 292; Butler M. S. et al. The Journal of Antibiotics, 2014, 67, 631]. Часть примесей в ванкомицине являются родственными примесями, образующимися в ходе его биосинтеза. В то же время известно, что молекула ванкомицина особенно чувствительна к ионному состоянию молекулы и при слишком низком и высоком значении рН (рН4 или рН9) в водной среде может происходить дезамидирование остатка аспарагиновой кислоты полипептидного кора и образование циклического имида [Antipas A., Vander Velde D., Jois D. Journal of Pharmaceutical Sciences, 2000, 89 (6), 742-750].

Телаванцин, кроме продуктов дегликозилирования и дезамидирования может содержать и примесь, образующуюся при отщеплении фосфоновой кислоты [https://www.ema.europa.eu/en/documents/assessment-report/vibativ-epar-public-assess report en.pdf]. Таким образом, цель изобретения заключалась в создании устойчивой при хранении и доступной при изготовлении новой солевой формы телаванцина. Поэтому, ключевой задачей настоящего изобретения стал поиск новой, фармацевтически приемлемой соли телаванцина, обеспечивающей соблюдение требований фармакопеи к стабильности и растворимости лекарственного средства.

Создание новых фармацевтических композиций на основе альтернативных солевых форм, обладающих конкурентными преимуществами, например содержанием эксципиентов, улучшенной стабильностью и растворимостью в фармацевтически приемлемом инертном носителе, остается актуальной задачей современной фармацевтики. Данная задача была решена в рамках настоящего изобретения путем разработки оригинального состава фармацевтически приемлемой соли телаванцина с изетионовой кислотой (2-гидроксиэтансульфоновой кислотой), а также фармацевтической композиции, содержащей вспомогательные эксципиенты, например гидроксипропил-β-циклодекстрин, маннит, цитрат натрия.

Телаванцин представляет собой полифункциональное химическое соединение, относящееся к классу липогликопептидных антибиотиков. Телаванцин получают из ванкомицина путем введения дециламиноэтильного липофильного заместителя по аминогруппе ванкозамина и гидрофильной фосфонометиламинометильной группы в ароматическое кольцо дигидроксифенилглицина [Leadbetter M.R., Adams. S.M., Bazziniet В. et al. J. Antibiot., 2004, 57 (5), 326]. Телаванцин, вследствие своего строения, имеет как гидрофобные, так и гидрофильные фрагменты и содержит как кислотные, так и основные группы. Таким образом, телаванцин представляет собой амфотерное амфифильное соединение, которое при нейтральном значении рН плохо растворимо в воде. Большей растворимостью в воде обладают соли телаванцина, например, описанный ранее гидрохлорид телаванцина, однако его растворимость в отсутствие солюбилизаторов недостаточна для парентерального применения.

Исследование растворимости телаванцина в водных растворах фармацевтически приемлемых кислот (включая серную, соляную, фосфорную, янтарную, адипиновую, лимонную, фумаровую, метансульфоновую, п-толуолсульфоновую и изетионовую кислоту), содержащих от 2 до 4 эквивалентов кислоты по отношению к телаванцину, показало, что телаванцин в большинстве случаев мало растворим в водных растворах перечисленных кислот, причем добавка солюбилизаторов, таких как гидроксипропил-β-циклодекстрин и поливинилпирролидон, не приводит к повышению их растворимости (Пример 1, Таблица 1). Исключение составили соляная, метансульфокислота и изетионовая кислоты, соли которых с телаванцином хорошо растворимы в воде и дают стабильные растворы. На основании полученных исследований в качестве кислотных компонентов для соли телаванцина были отобраны изетионовая и метансульфокислота, поскольку алкансульфонаты малотоксичны и биоразлагаемы. Однако, несмотря на хорошую растворимость метансульфоната телаванцина, эта соль оказалась мало устойчива в условиях эксперимента «ускоренного старения» (Пример 2, Таблица 2). Добавление солюбилизатора поливинилпирролидона или гидроксипропил-β-циклодекстрина в композицию, содержащую метансульфонат телаванцина, не обеспечило стабильность лекарственной формы при хранении (Пример 3, Таблица 3). Неожиданно было обнаружено, что соли телаванцина с изетионовой (2-гидроксиэтансульфоновой) кислотой обладают высокой стабильностью и растворимостью в воде. Фармацевтически приемлемая 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, способная образовываться эндогенно из таурина в результате ферментативного дезаминирования. Изетионовая кислота, являясь нетоксичным соединением, отвечает параметрам и требованиям фармакопеи, а ее соль с телаванцином достаточно стабильна при хранении в твердом виде и в водном растворе. Кроме того, молекулы 2-гидроксиэтансульфоновой кислоты обладают свойствами поверхностно-активного соединения и, в результате взаимодействия с функциональными группами телаванцина в водной среде, выполняют роль анионного сурфактанта.

Поэтому предметом настоящего изобретения является изетионат телаванцина, содержащий телаванцин и от 12 вес.% до 20 вес.% изетионовой кислоты. Изетионат телаванцина может быть получен растворением телаванцина или его соли, например трифторацетата, в водном растворе изетионовой кислоты известной концентрации с последующей лиофилизацией полученного раствора. Типичные варианты получения солей телаванцина с изетионовой кислотой с процентным содержанием от 12 вес.% до 20 вес.% кислоты приведены в Примерах 4-7. Ввиду того, что трифторуксусная кислота обладает более высокой летучестью и меньшей кислотностью (рКа=0,56), чем изетионовая кислота рКа=1,44 [Isethionic acid (PAMDB001641)], лиофилизация полученного раствора приводит к обмену трифторацетата на изетионат.Трифторацетат телаванцина, может быть получен по методике, представленной в работе [Leadbetter M.R., et al. J. Antibiot, 2004, 57 (5), 326]. В другом варианте изобретения изетионат телаванцина может быть получен обменной реакцией соли телаванцина (например, гидрохлорида) и изетионовой кислоты (например, изетионата натрия). Полученный изетионат телаванцина для обессоливания и/или удаления избытка изетионовой кислоты может быть дополнительно очищен обращенно-фазовой хроматографией (Пример 5).

Настоящее изобретение описывает также фармацевтические композиции для парентерального применения, содержащие изетионат телаванцина. Фармацевтические композиции для парентерального введения обычно являются водными или неводными стерильными изотоническими растворами для инъекций, которые, помимо терапевтически эффективного количества лекарственного средства, содержат фармакологически приемлемый носитель (растворитель), а также различные эксципиенты (вспомогательные вещества). Фармацевтические композиции могут являться как жидкими готовыми растворами для инъекций, так и суспензиями, стерильными порошками или лиофилизированными композициями, для применения которых необходимо добавление стерильного растворителя (например, «воды для инъекций») непосредственно перед использованием. Методы получения парентеральных лекарственных композиций хорошо известны из уровня техники.

В качестве носителя (растворителя) для приготовления жидких фармацевтических композиций при реализации настоящего изобретении может быть использована «вода для инъекций», «физиологический раствор», «раствор глюкозы» или другие носители, включая водные изотонические солевые растворы или растворы электролитов.

Помимо лекарственного средства и носителя, фармацевтические композиции могут содержать один или несколько известных из уровня техники фармацевтически приемлемых эксципиентов. Так, растворимость изетионата телаванцина, а также стабильность его фармацевтических композиций и их эффективность могут быть повышены за счет одного или нескольких эксципиентов, выбранных независимо из группы сорастворителей, солюбилизаторов, наполнителей, эмульгаторов, консервантов, антиоксидантов, буферных солей и веществ для поддержания изотоничности. Эти хорошо известные компоненты фармацевтических композиций, описанные в ряде источников [Modern Pharmaceutics (Fourth Edition) G. Banker et al. (eds.), 2002, 864; Remington's Pharmaceutical Sciences (21th Edition) D B. Troy, P. Beringer (ed.), 2006, 2393, A.J. Spiegel et al. J. Pharm. Sci., 1963, 52 (10), 917-927], способствуют улучшению их потребительских или полезных свойств за счет облегчения применения, повышения стабильности, регулирования значения рН.

Количество изетионата телаванцина в фармацевтической композиции не ограничивается, но предпочтительно составляет от 0,5 вес.% до 10 вес.%, более предпочтительно от 1 вес.% до 5 вес.%. Количество растворителя (наполнителя или разбавителя) не ограничивается, но может достигать до 99 вес.% в расчете на общую массу композиции, как хорошо известно в технологии приготовления готовых лекарственных форм.

Количество солюбилизатора в композиции не ограничивается и может варьироваться, например, от 1 вес.% до 1000 вес.%. Количество стабилизатора и антиоксиданта в композиции не ограничивается, но может достигать, например, от 0,01 до 5 вес.%. Количество агента для поддержания изотоничности в композиции не ограничивается, но может достигать, например, от 0,5 до 10 вес.%. Количество консерванта не ограничивается и может составлять, например, от 0,005 до 1 вес.%.

В качестве солюбилизаторов, повышающих растворимость изетионата телаванцина, его фармацевтические композиции могут содержать один или несколько фармакологически приемлемых солюбилизирующих агентов, хорошо знакомых специалистам в области фармацевтики, такие как (без ограничения перечисленным) гидроксиалкилированые β-циклодекстрины или γ-циклодекстрины, поливинилпирролидон (ПВП), декстран, полисорбат 80 (твин 80), кремофор ЕН, и т.п. Из общего уровня техники известно, что гидроксипропил-β-циклодекстрины стабилизируют раствор соли телаванцина, а также способствуют ее растворению при комнатной температуре. Поэтому в предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения для приготовления жидких фармацевтических композиций для парентерального применения изетионата телаванцина, являющихся предметом настоящего изобретения, может быть использован гидроксипропил-β-циклодекстрин, ПВП, твин 80, кремофор ЕН, полиэтиленгликоли. Содержание солюбилизатора в фармацевтической композиции может варьироваться от 1 вес.% до 1000 вес.%.

В качестве вспомогательных буферных компонентов в фармацевтических композициях настоящего изобретения могут быть предпочтительно использованы кислоты (например, изетионовая, лимонная, уксусная, фосфорная и др.) или их соли с щелочными металлами (например, изетионат, цитрат, ацетат или дигидрофосфат натрия и др.), или их сочетания (например, изетионовая кислота и цитрат натрия). Ионная сила буферного раствора, используемого как компонент жидкой композиции в настоящем изобретении, не ограничивается и может быть, например, на уровне 0,01-0,6.

В качестве консервантов в настоящем изобретении могут быть применены различные вещества, хорошо знакомые специалистам в области фармацевтики, такие как сульфиты, бензиловый спирт, хлорбутанол, сорбит, ксилит, сорбиновая кислота, бензойная кислота, тимеросал, парабены и их различные соли.

В качестве антиоксидантов могут быть использованы, например, глюкоза, аскорбиновая кислота, метабисульфит натрия, бисульфит натрия, сульфит натрия и др. соединения известные из уровня техники.

В предпочтительном варианте изобретения фармацевтическая композиция, содержащая изетионат телаванцина, является сухой (как, например, лиофилизированной) композицией, которая может быть восстановлена, ресуспендирована или регидратирована для получения стабильной жидкой композиции фармацевтического вещества. Так, путем лиофилизации жидких композиций получен ряд лиофилизированных препаратов, обладающих превосходной лекарственной стабильностью в процессе приготовления и хранения и легко восстанавливающихся в жидкую композицию при добавлении водного растворителя. Соответственно, настоящее изобретение также включает лиофилизированные композиции, содержащие терапевтически эффективное количество изетионата телаванцина.

В некоторых вариантах осуществления композиция может быть промежуточной жидкой (как, например, водной) композицией, которую можно высушить (как, например, лиофилизировать) или жидкой (как, например, водной) композицией, полученной посредством восстановления или ресуспендирования сухой композиции.

В одном из вариантов приготовления фармацевтических композиций изетионата телаванцина и необходимые эксципиенты (например, солюбилизирующие или стабилизирующие агенты, буферные соли, антиоксиданты и т.п.) растворяют или суспендируют в подходящем фармакологически приемлемом носителе (например, в дистиллированной воде или «воде для инъекций») с выдерживанием смеси при температуре от 20 до 40°С до полного растворения всех ингредиентов. После образования раствора рН композиции доводят до значения 4-7, более предпочтительно рН 5-6, с помощью подходящего буфера (например, изетионовой кислоты и цитрата натрия и др.). Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр, для удаления нерастворимых примесей и пирогена. Жидкую композицию изетионата телаванцина заливают в жесткий сосуд, такой как стерильная ампула, флакон или пузырек и подвергают лиофилизации традиционным способом. Количество жидкого препарата, которым заполняют сосуд, составляет, например от 5 до 50% (об./об.) от объема сосуда, особенно предпочтительно 10-25% (об./об.). Внешнюю температуру при лиофилизации предпочтительно поддерживают от -70 до 0°С, особенно предпочтительно от -60 до -40°С, и применяемое давление для сублимации растворителя предпочтительно составляет от 0,01 до 0,2 мм рт.ст., более предпочтительно от 0,01 до 0,1 мм рт.ст. Предпочтительно скорость лиофилизации регулируется таким образом, чтобы растворитель (в расчете на раствор) сублимировался со скоростью от 10 мкл до 500 мкл на 1 см² площади поверхности, с которой сублимируется растворитель в течение 1 ч (Пример 10).

В случае лиофилизации жидкой композиции, особенно содержащей декстран и/или маннит и др., защита от разрушения сосудов обеспечивается введением в жидкий препарат сульфатов щелочных металлов (сульфата натрия, сульфата калия и др.). Кроме того, лиофилизируемые композиции могут содержать дополнительные криозащитные компоненты, предотвращающие осаждение лекарственного соединения, такие как поверхностно-активные вещества, смачивающие или эмульгирующие агенты (как, например, лецитин, полисорбат 80, полиоксиэтиленстеарат). Содержание указанных эксципиентов может составлять 0,01-10% от веса лекарственного препарата.

Сухие фармацевтические композиции (например, лиофилизированная), как известно из уровня техники, перед использованием могут быть восстановлены или разбавлены посредством прибавления стерильного фармацевтически приемлемого растворителя с получением необходимой концентрации терапевтического агента. В качестве носителя (растворителя) для приготовления жидкой фармацевтической композиции в настоящем изобретении может использоваться «раствор глюкозы» («изотонический раствор глюкозы (5%) для внутривенных инъекций»). Кроме «раствора глюкозы», для приготовления жидкой лекарственной формы могут быть применены и другие менее предпочтительные носители, например «изотонический раствор натрия хлорида, 9%», раствор Рингера и др. Это дает возможность, при необходимости, легко приготовить стерильную жидкую композицию для парентерального применения изетионата телаванцина, которая может быть непосредственно введена пациенту.

Ряд примеров лиофилизированных композиций, являющихся предметом настоящего изобретения, приготовленных, как указано далее, обладает отличными свойствами в отношении стабильности действующего вещества (изетионат телаванцина) в процессе приготовления или хранения.

Лиофилизированные формы, могут быть упакованы в стерильные флаконы, ампулы или пузырьки для однократного или многократного применения. Флакон может содержать лекарственную субстанцию телаванцина достаточную для суточной дозы препарата из расчета 10-20 мг на килограмм массы реципиента, предпочтительны варианты 250 мг и 750 мг общего количества телаванцина для последующего растворения в жидком носителе 150 мл и 250 мл. Более конкретно терапевтические дозы устанавливает специалист в этой области.

Фармацевтические композиции, содержащие от 0,1 до 10 вес.% изетионата телаванцина, могут быть применены парентерально (например, внутривенно, внутриартериально, внутримышечно) для лечения инфекционных заболеваний, вызванных чувствительными к телаванцину грамположительными бактериями, включая заболевания, осложненные резистентностью к другим антибактериальным лекарственным средствам. Как было сказано ранее телаванцин используется в случаях тяжелых кожных инфекций, вызванных грамположительными бактериями и для лечения нозокомиальных и госпитальных форм пневмоний, устойчивых к другим антибиотикам.

Лиофилизированная форма телаванцина диизетионата предназначена для приготовления раствора достаточного для однократного введения в течение срока, установленного специалистом в этой области, что исключает необходимость хранить лекарственное средство в восстановленной, т.е. растворенной форме. Стабильность лиофилизированной формы телаванцина изетионата с различным содержанием изетионовой кислоты определяли методом «ускоренного старения» в сравнении с гидрохлоридом телаванцина.

Сравнительное исследование стабильности солей телаванцина в условиях ускоренного хранения продемонстрировало высокую стабильность изетионата телаванцина с содержанием изетионовой кислоты около 18 вес.%. Эксперименты показали, что предложенная субстанция телаванцина изетионата выдерживает испытание методом «ускоренного старения» и сохраняет отличные физико-химические характеристики после срока хранения протяженностью 30 дней при температуре 45°С (Пример 8, Таблица 4).

С целью подтверждения соответствия спектра антимикробной активности телаванцина изетионата референсному значению были проведены микробиологические испытания в опытах in vitro (Пример 9, Таблица 5). Антибактериальную активность изетионата телаванцина (18 вес.% изетионовой кислоты) определяли в сравнении со степенью подавления роста чувствительных микроорганизмов под действием гидрохлорида телаванцина (препарат «Вибатив»), взятого в качестве референсного образца. Сравнительный анализ и определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) телаванцина выполняли методом серийных микроразведений в соответствии с рекомендациями, изложенными в CLSI (M100-S25) [M100-S25: Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; Twenty-Fifth Informational Supplement. http://file.qums.ac.ir/repository/mmrc/CLSI2015.pdf.] и Методическими рекомендациями: «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам» Версия 2021-01 [Рекомендации «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам Версия 2021-01». Межрегиональная ассоциация по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии. https://www.antibiotic.ru/files/321/clrec-dsma2021.pdf].

Для получения достоверных результатов использовали тест-организмы, чувствительные к антибиотику телаванцин. Результаты проведенного микробиологического исследования изетионата телаванцина соответствуют значениям МПК и критическим показателям качества лекарственного препарата «Телаванцин».

Термин «фармацевтическая композиция» в контексте данного изобретения означает смесь биологически активного соединения, в данном случае антибиотика телаванцина с фармацевтически приемлемой кислотой, а конкретно изетионовой кислотой, и любыми вспомогательными веществами, необходимыми для приготовления лекарственного средства, для использования в медицинской практике.

Термин «фармацевтически приемлемая кислота» подразумевает органическую или неорганическую кислоту, разрешенную к применению в данной отрасли медицинской практики, образующую соль с телаванцином и не изменяющую первоначальных лечебных свойств телаванцина.

Термин «фармакологически приемлемый носитель» в настоящем изобретении означает один или несколько совместимых жидких или твердых разбавителей или наполнителей, которые подходят для введения млекопитающему, предпочтительно человеку. Предпочтительно в качестве фармацевтически приемлемого носителя в фармацевтических композициях по изобретению используются протон-содержащие среды, более предпочтительно водные среды.

Термин «фармацевтически приемлемый эксципиент» подразумевает вспомогательное вещество в жидком или твердом виде, то есть вещество любой физической консистенции, которое является нетоксичным, разрешенным к применению и не нарушает лечебные свойства исходной фармацевтической композиции.

Концентрация терапевтического агента в фармацевтической композиции составляет определенное значение, обеспечивающее введение терапевтически эффективного количества лекарственного средства, которое зависит от скорости абсорбции, инактивации и выведения из организма препарата, а также от тяжести состояния пациента или от других факторов, известных специалистам в данной области техники.

«Эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» соединения в настоящем изобретении означает количество телаванцина изетионата, которое вызывает эрадикацию патогена, вызывающего инфекционное заболевание субъекта, подвергающегося лечению. Определение терапевтически эффективного количества относится к компетенции специалиста в данной области техники.

Терапевтически эффективное количество или дозировка соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, может меняться в широких пределах и может определяться способом, известным в данной области техники. Для конкретного реципиента соответствующий курс лечения подбирается с учетом индивидуальной потребности и мнения врача, который вводит фармацевтические композиции пациенту или назначает введение фармацевтических композиций. Суточную дозу терапевтического агента можно вводить однократно в виде разовой дозы или многократно в виде разделенных доз, которые вводят через определенные периоды времени, или, при парентеральном введении, ее можно вводить путем непрерывного вливания. Таким образом, необходимое количество терапевтического агента, например необходимое терапевтически эффективное количество, определяет специалист в данной области медицины. Например, доза терапевтического агента может варьироваться в зависимости от возраста, веса тела или условий в интервале от приблизительно 1 мг до приблизительно 20 мг в расчете на телаванцин или на килограмм массы тела реципиента в сутки.

Нижеприведенные неограничивающие примеры даны для демонстрации предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения.

Примеры

В примерах, представленных ниже, использовали следующие методы анализа: ВЭЖХ-анализ проводили на хроматографе Shimadzu (Япония) LC-20 AD с УФ детектором на колонке Kromasil (Швеция) С18 размером 4×250 мм, с зернением 5 мкм. Концентрация вводимого раствора - 0,1 мг/мл; объем петли - 20 мкл. Хроматографирование проводили в системе, состоящей из 0,15% трифторуксусной кислоты (рН 2,3) и ацетонитрила. Элюцию проводили в режиме линейного градиента с увеличением концентрации ацетонитрила от 25 до 40% за 30 мин при скорости потока 1 мл/мин.

Масс-спектры высокого разрешения ESI регистрировали на спектрометре micrOTOF-Q II (Bruker Daltonics GmbH). Точность измерений 0,25-0,38 в интервале масс 118.086255-2721.894829. Положительно заряженные ионы детектировали в следующих условиях: напряжение на капилляре 4 кВ, давление азота в распылителе 40 кПа, скорость потока осушающего газа 4 л/мин, температура источника 180°С. Растворы образцов (0,1 мг/мл в смеси CH₃CN-H₂O) прямо вводили в ECI-источник с помощью шприцевого насоса со скоростью потока 3 мкл/мин и анализировали положительно и отрицательно заряженные ионы при следующих условиях детектирования: напряжение на капилляре 4 кВ, давление азота в небулайзере 0,4 Бар (5.8 psi), скорость потока осушающего газа 4,0 л/мин и температура источника 180°С.

ИК-спектр) регистрировали с использованием ИК-Фурье спектрометра Nicolet-iSlO (детектор DTGS, светоделитель KBr) с приставкой Smart Performer, оснащенной ZnSe кристаллом (Nicolet, Madison, WI, USA) при разрешении 4 см^-1; зона спектра 4000 - 650 см^-1. Спектр обрабатывали с использованием программы OMNIC - 7.0. УФ-спектр регистрировали на спектрометре Hitachi-U2000. В синтезе использовали ванкомицин гидрохлорид (Sigma-Aldrich) и коммерчески доступные реагенты (Sigma-Aldrich, Abcr и др.) без дополнительной очистки. При приготовлении фармацевтических композиций использовали гидроксипропил-β-циклодекстрин Cavitron W5 НР5 или W7 НР7 Pharma HPBCD (Ashland).

Пример 1

Исследование растворимости солей телаванцина

Для исследования растворимости телаванцина в водных растворах кислот, по 10 мг телаванцина растворяли в пенициллиновом флаконе в водном растворе (2 мл) соответствующей кислоты без солюбилизатора или с добавлением 100 мг солюбилизатора, после лиофилизации добавляли 2 мл воды и визуально оценивали растворимость субстанции.

Эксперимент продемонстрировал наилучшую растворимость солей телаванцина с соляной, метансульфоновой и изетионовой кислотой по сравнению с солями других кислот.

Пример 2

Исследование стабильности гидрохлорида и метансульфоната телаванцина

Для исследования устойчивости солевых форм телаванцина три серии по 5 мг телаванцина трифторацетата в каждом флаконе растворяли в соответствующей кислоте требуемой концентрации и лиофилизировали. Опытные образцы во флаконах, закрытых резиновыми пробками и алюминиевыми крышками, выдерживали при температуре 45±1°С в течение месяца, оценивая стабильность соли методом ВЭЖХ на следующий день, через неделю и месяц.

Результаты данного эксперимента выявили низкую физико-химическую стабильность метансульфоната телаванцина по сравнению с гидрохлоридом.

Пример 3

Исследование стабильности метансульфоната телаванцина в присутствии солюбилизаторов

Для исследования устойчивости метансульфоната телаванцина в присутствии различных солюбилизаторов три серии телаванцина трифторацетата по 5 мг растворяли в 1 мл раствора метансульфоновой кислоты требуемой концентрации с добавлением солюбилизаторов и без солюбилизатора и лиофилизировали. Опытные образцы во флаконах, закрытых резиновыми пробками и алюминиевыми крышками, выдерживали в термостате при температуре 45±1°С, стабильность оценивали методом ВЭЖХ на следующий день и через неделю.

Экспериментом показано, что добавление указанных солюбилизаторов к лекарственной субстанции метансульфоната телаванцина не обеспечивает его физико-химическую стабильность.

Пример 4

Получение диизетионата телаванцина (12 вес.% изетионовой кислоты)

Телаванцин дитрифторацетат получали по методике, представленной в работе [Leadbetter M.R., et al. J. Antibiot., 2004, 57 (5), 326]. Телаванцин дитрифторацетат (100 мг, 0,050 ммоль) растворяли в водном растворе (концентрация 3,1 мг/мл) изетионовой кислоты (6,1 мл, 0,150 ммоль). Раствор замораживали при -70°С и лиофилизировали 24 ч при -40-60°С, применяемое давление для сублимации растворителя от 0,01 до 0,2 мм рт.ст. Лиофилизацию продолжали 24 ч. Получали 105 мг телаванцина изетионата в виде пористого лиофилизированного порошка бледно-розового цвета.

Пример 5

Очистка диизетионата телаванцина методом обращенно-фазовой хроматографии

Лиофилизат телаванцина изетионата (Пример 4) растворяли в 7 мл 0,5% раствора уксусной кислоты и хроматографировали на сорбенте для обращенно-фазовой хроматографии (элюент: А - 0,5% уксусная кислота, элюент В - ацетонитрил; градиент В, 0-20%). Контроль фракций проводили методом ТСХ (Silicagel 60 F254, Merck, элюент этилацетат-н-пропанол-25%-аммиак, 3:3:4, Rf=0,37). Фракции, содержащие целевое вещество, объединяли и концентрировали на роторном испарителе. Продукт осаждали прибавлением метанола (5 мл) и диэтилового эфира (5 мл), фильтровали, получали аморфный порошок бледно-розового цвета, который высушивали в эксикаторе над оксидом фосфора в вакууме. Выход 70 мг, чистота телаванцина диизетионата 97,6% (ВЭЖХ). Получили телаванцин диизетионат моногидрат, с содержанием около 12 вес.% изетионата.

Физико-химические свойства: ИК-спектр, ν_max, см^-1: 3297, 2927, 2854, 1669, 1584, 1489, 1423, 1391, 1226, 1178, 1126, 1061, 1002, 890, 892, 720.

Элементный анализ телаванцина диизетионата моногидрата.

Вычислено: C₈₄H₁₂₀O₂N₁₁O₃₆PS₂, Молекулярный вес 2025,9188

Элементный анализ: Вычислено: С, 49.80; Н, 5.97; N, 7.61.

Найдено, %: С, 49,1; Н, 5,44; N, 7,66

Масс-спектр, m/z (HRMS ESI). Найдено: 1794,6055 [M+Na+H₂O]⁺, Для основания телаванцина [М] 1753,6374 вычислено 1794,6372 [M+Na+H₂O]⁺.

Пример 6

Получение лиофилизата телаванцина триизетионата с содержанием 18 вес.% изетионовой кислоты

Телаванцин диизетионат моногидрат (70 мг, 0,034 ммоль), приготовленный по примеру 5, растворяли в дистиллированной воде (15 мл), прибавляли раствор (3,1 мг/мл) изетионовой кислоты (1,4±0,05 мл, 0,034 ммоль) до рН раствора 3,5-4. Раствор телаванцина изетионата лиофильно высушивали как описано в примере 4. Получали лиофильно высушенный изетионат телаванцина (18 вес.% изетионовой кислоты) в виде аморфного пористого порошка белого цвета.

Пример 7.

Телаванцин изетионат лиофилизат, содержащий 20 вес.% изетионовой кислоты изетионовой кислоты

Телаванцин диизетионат моногидрат (70 мг, 0,034 ммоль), приготовленный по примеру 5, растворяли в дистиллированной воде (15 мл) и прибавляли порциями раствор (3,1 мг/мл) изетионовой кислоты (2,1±0,05 мл, 0,052 ммоль), до рН раствора 3,5. Раствор телаванцина изетионата лиофильно высушивали, как описано в примере 4. Получали лиофильно высушенный изетионат телаванцина (20 вес.% изетионовой кислоты) в виде аморфного пористого бесцветного порошка.

Пример 8

Изучение стабильности лиофилизированной формы изетионата телаванцина, содержащего 18 вес.% изетионовой кислоты, в сравнении с лекарственной формой телаванцина Vibativ

Композицию, состоящую из телаванцина изетионата (5 мг, 12 вес.% изетионовой кислоты) и гидроксипропил-β-циклодекстрина (50 мг W5 НР5 или W7 НР7), помещали в пенициллиновые флаконы по три серии для каждого испытания. Лекарственные композиции растворяли в необходимом количестве водного раствора изетионовой кислоты (3,1 мг/мл) так, чтобы содержание изетионовой кислоты в телаванцине соответствовало 18 вес.%, композиции лиофильно высушивали, как описано в примере 4. Образцы изетионата телаванцина и телаванцина гидрохлорида (Vibativ) в пенициллиновых флаконах, закрытых резиновой пробкой и закатанных алюминиевой крышкой, помещали в термостат при температуре 45±1°С. Образцы выдерживали 1 месяц в термостате, оценивая физико-химические характеристики (внешний вид, чистота методом ВЭЖХ) каждой серии в нулевой точке (день закладки на хранение), на следующий день, неделю и через 1 месяц.

Все образцы после испытания сохранили исходные внешние характеристики, оставаясь слабо окрашенными, слегка кремовыми пористыми порошками и высокие физико-химические показатели.

Сравнительная оценка содержания телаванцина в образцах методом ВЭЖХ свидетельствует о высокой стабильности изетионата телаванцина 18 вес.% изетионовой кислоты в композиции с гидроксипропил-β-циклодекстрином в условиях приведенного эксперимента. Растворимость и стабильность лекарственной композиции практически не зависит от модификации гидроксипропил-β-циклодекстрина для W7 НР5 и W7 НР7.

Пример 9

Сравнительное исследование антимикробной активности in vitro гидрохлорида телаванцина (препарат Vibativ) и изетионата телаванцина (18 вес.% изетионовой кислоты)

МПК определяли с помощью процедуры серийных микроразведений в 96-луночных планшетах для микротитрования. Телаванцин изетионат (18 вес.% изетионовой кислоты) и препарат «Vibativ» растворяли и разводили в соответствии с рекомендациями CLSI (Институт клинических и лабораторных стандартов, 2014). Вещества растворяли в ДМСО в стеклянном флаконе для получения начальной исходной концентрации 1600 мкг/мл и разбавляли раствор ДМСО в соответствии со схемой разбавления, изложенной в таблице 8 В стандарта M100-S25 (Институт клинических и лабораторных стандартов, 2015). Раствор телаванцина в ДМСО дополнительно разбавляли (1:100) в бульоне Мюллера-Хинтон, в который прибавляли полисорбат Р-80 (Твин 80, соотношение 0,002% по объему), чтобы свести к минимуму связывание телаванцина с пластиковыми поверхностями. Аликвоты (100 мкл) конечных концентраций телаванцина (в диапазоне от 0,004 мкг/мл до 4 мкг/мл) распределяли по 96-луночным планшетам, планшеты инкубировали при 35±1°С, в течение 18±2 ч. Значения МПК для образцов телаванцина, протестированных в отношении S. aureus АТСС 29213 и Е. faecalis АТСС 29212, с использованием одобренных CLSI требований, может находится в пределах 0,03-0,12 мкг/мл [Ross J.E., Mendes R.E., Jones R.N. et al. J Clin Microbiol. 2014 Sep.; 52 (9): 3399-3401].

*0,002% в среде Мюллера - Хинтон (в соответствии с ниже указанными методическими рекомендациями).

Критерии чувствительности по CLSI (M100-S25), Методические рекомендации: «Определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам» Версия 2021-01:

- S. aureus АТСС 29213 - 0,03-0,12;

- MRSA ≤0,015-8;

- Е. faecalis АТСС 29212 - 0,03-0,12;

- VSE- ≤0,015-0,5.

Полученные расхождения значений МПК не превышали одного-двух разведений, что соответствует допустимым значениям для данного метода. Сравнение активности испытуемого препарата с контрольным образцом телаванцина гидрохлорида («Vibativ») указывает на полное соответствие значений МПК требуемым величинам.

Пример 10

Приготовление лиофилизированной фармацевтической композиции телаванцина изетионата

К раствору изетионата телаванцина (18 вес.% изетионовой кислоты, приготовленному, как описано в примере 6) в дистиллированной воде прибавляли гидроксипропил-β-циклодекстрин и/или другие вспомогательные вещества таким образом, чтобы соотношение соли телаванцина и циклодекстрина составляло от 1:1 до 1:10. Раствор очищали микрофильтрацией в стерильных условиях через мелкопористый фильтр для удаления нерастворимых примесей и клеток микроорганизмов. Полученный раствор стерильной фармацевтической композиции доводили до необходимого объема стерильной водой и в асептических условиях разливали в стерильные флаконы, закрывали стерильными марлевыми тампонами и замораживали при -70°С. Флаконы помещали в установку для лиофильной сушки и выдерживали 24 ч при -40-60°С и давлении 0,01 мм рт.ст.

Иллюстративные рецептуры лекарственных композиций для приготовления инфузионных растворов приведены ниже (представлен состав лекарственной композиции телаванцина изетионата из расчета на один флакон объемом 50 мл). Лекарственные композиции стабильны при хранении в твердом виде при температуре +5°С, при необходимости легко восстанавливаются в исходный гомогенный раствор в течение пяти минут, разведением приемлемым разбавителя до объема 150-200 мл.

Состав 1. Телаванцин изетионат (700 мг, 18 вес.% изетионовой кислоты), гидроксипропил-β-циклодекстрин (7000 мг), твин 80 (10 мг).

Состав 2. Телаванцин изетионат (700 мг, 18 вес.% изетионовой кислоты), гидроксипропил-β-циклодекстрин (7000 мг), цитрат натрия (35 мг).

Состав 3. Телаванцин изетионат (700 мг, 18 вес.% изетионовой кислоты), гидроксипропил-β-циклодекстрин (5000 мг), маннит (500 мг), твин 80 (10 мг), цитрат натрия (30 мг).

Claims

1. Соль телаванцина с изетионовой кислотой формулы I, содержащая от 12 вес.% до 20 вес.% изетионата.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальной активностью в отношении бактерий Staphylococcus spp. и Enterococcus spp., включающая терапевтически эффективное количество изетионата телаванцина по п. 1, фармакологически приемлемый носитель и один или несколько эксципиентов, выбранных из сорастворителей, солюбилизаторов, наполнителей, эмульгаторов, консервантов, антиоксидантов, буферных соединений, веществ для поддержания изотоничности.

3. Фармацевтическая композиция изетионата телаванцина по п. 2, в которой эксципиентом является один или несколько солюбилизаторов, выбранных из производного β-циклодекстрина, поливинилпирролидона, полисорбата, кремофора, декстрана.

4. Фармацевтическая композиция по п. 2, в которой эксципиентом является гидроксипропил-β-циклодекстрин.

5. Фармацевтическая композиция по пп. 2-4, в которой фармакологически приемлемый носитель содержит воду.

6. Фармацевтическая композиция по пп. 2-5, полученная путем лиофилизации.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальной активностью в отношении бактерий Staphylococcus spp. и Enterococcus spp., включающая терапевтически эффективное количество изетионата телаванцина по п. 1, полученная растворением композиции по п. 6 в водной среде.

8. Способ лечения бактериальной инфекции, вызванной чувствительным к телаванцину штаммом бактерий Staphylococcus spp. или Enterococcus spp., предусматривающий парентеральное введение нуждающемуся пациенту фармацевтической композиции по пп. 2-7 или терапевтически эффективного количества соли телаванцина с изетионовой кислотой по п. 1.

9. Способ лечения бактериальной инфекции по п. 8, вызванной патогеном, имеющим лекарственную резистентность в отношении других антибактериальных средств.