RU2826991C2

RU2826991C2 - Белок, связывающийся с nkg2d, cd16 и с опухолеспецифическим антигеном

Info

Publication number: RU2826991C2
Application number: RU2019142715A
Authority: RU
Inventors: Грегори П. ЧАН; Энн Ф. ЧЕУНГ; Уилльям Хани; Брэдли М. ЛУНДЕ; Бьянка Принц
Original assignee: Драгонфлай Терапьютикс, Инк.
Priority date: 2017-05-23
Filing date: 2018-05-23
Publication date: 2024-09-19

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым полиспецифическим белкам, которые способны к специфическому связыванию с рецептором NKG2D, CD16 и опухолеспецифическим антигеном CD19. Изобретение может быть использовано в медицинской практике в качестве терапевтического агента при лечении злокачественного новообразования, клетки которого сверхэкспрессируют CD19. 6 н. и 29 з.п. ф-лы, 13 пр., 15 табл., 39 ил.

Description

Перекрестные ссылки на связанные заявки

[0001] Эта заявка испрашивает преимущество и приоритет Предварительной патентной заявки США No. 62/510173, поданной 23 мая, 2017 г.; Предварительной патентной заявки США № 62/539396, поданной 31 июля 2017 г.; Предварительной патентной заявки США № 62/539416, поданной 31 июля 2017 г.; Предварительной патентной заявки США № 62/539419, поданной 31 июля 2017 г.; Предварительной патентной заявки США № 62/546292, поданной 16 августа 2017 г.; Предварительной патентной заявки США № 62/546296, поданной 16 августа 2017 г.; и Предварительной патентной заявки США No. 62/552146, поданной 30 августа 2017 г., содержание каждой из которых настоящим включено в в качестве ссылки в полном объеме и для всех целей.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Настоящая заявка содержит список последовательностей, который представлен в электронном виде в формате ASCII и включен в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 21 мая 2018 года, называется DFY-022WO.txt и имеет размер 212 КБ.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с NKG2D, CD16 и опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0004] Злокачественное новообразование продолжает оставаться серьезной проблемой для здоровья, несмотря на значительные исследовательские усилия и научные достижения для лечения этого заболевания, о которых сообщается в литературе. Злокачественные новообразования крови и костного мозга часто диагностируется, включая множественные миеломы, лейкоз и лимфомы. Существующие методы лечения этих видов злокачественных новообразований не эффективны для всех пациентов и/или могут иметь существенные побочные эффекты. Другие виды злокачественных новообразований также остаются сложными для лечения с использованием существующих методов лечения.

[0005] Противоопухолевая иммунотерапия желательна, потому что она высокоспецифична и может способствовать разрушению опухолевых клеток с использованием собственной иммунной системы пациента. Слитые белки, такие как биспецифичные белки, рекрутирующие T-клетки, представляют собой противоопухолевые иммунотерапевтические средства, описанные в литературе, которые связываются с опухолевыми клетками и T-клетками для облегчения разрушения опухолевых клеток. Антитела, которые связываются с определенными опухолеспецифическими антигенами и с определенными иммунными клетками, описаны в литературе. См., например, WO 2016/134371 и WO 2015/095412.

[0006] Клетки-натуральные киллеры (NK) являются компонентом врожденной иммунной системы и составляют приблизительно 15% циркулирующих лимфоцитов. NK-клетки проникают практически во все ткани, и первоначально характеризовались своей способностью эффективно уничтожать опухолевые клетки без необходимости предварительной сенсибилизации. Активированные NK-клетки уничтожают клетки-мишени с помощью средств, аналогичных цитотоксическим Т-клеткам, то есть с помощью цитолитических гранул, которые содержат перфорин и гранзимы, а также посредством путей рецепторов клеточной смерти. Активированные NK-клетки также секретируют воспалительные цитокины, такие как IFN-γ и хемокины, которые способствуют рекрутингу других лейкоцитов в ткани-мишени.

[0007] NK-клетки реагируют на сигналы через различные активирующие и ингибирующие рецепторы на своей поверхности. Например, когда NK-клетки встречают здоровые аутоклетки, их активность ингибируется активацией иммуноглобулино-подобных рецепторов (KIR) клеток-киллеров. Альтернативно, когда NK-клетки встречают чужеродные клетки или опухолевые клетки, они активируются через свои активирующие рецепторы (например, NKG2D, NCR, DNAM1). NK-клетки также активируются константной областью некоторых иммуноглобулинов через рецепторы CD16 на их поверхности. Общая чувствительность NK-клеток к активации зависит от суммы стимулирующих и ингибирующих сигналов.

[0008] CD37, член суперсемейства тетраспанинов, антигенов клеточной поверхности, экспрессируется практически на всех зрелых В-лимфоцитах, но не на про-В или плазматических клетках. Это специфичный для линии В-клеточный антиген, который отсутствует или минимально экспрессируется на нормальных Т-клетках, тимоцитах, моноцитах, гранулоцитах, тромбоцитах, клетках-натуральных киллерах (NK) и эритроцитах. Кроме того, CD37 экспрессируется при злокачественных новообразованиях, происходящих из зрелых периферических В-клеток, таких как В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), волосатоклеточный лейкоз (HCL), неходжкинская лимфома и острый миелоидный лейкоз.

[0009] CD20 представляет собой активированный гликозилированный фосфопротеин, экспрессируемый на поверхности В-клеток во время дифференцировки В-клеток от фазы про-В-клеток до созоевания. Он играет роль в развитии и дифференцировке В-клеток в плазматические клетки. CD20 также обнаруживается при хроническом лимфоцитарном лейкозе, неходжкинской лимфоме, фолликулярной лимфоме и В-клеточных злокачественных новообразованиях.

[0010] CD19 представляет собой трансмембранный гликопротеин, экспрессируемый на поверхности В-лимфоцитов от самых ранних узнаваемых клеток В-линии в процессе развития до В-клеточных бластов. В первую очередь он действует как корецептор В-клеток в сочетании с CD21 и CD81. CD19 экспрессируется при многих злокачественных новообразованиях, таких как хронический лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, острый лимфобластный лейкоз, множественная миелома, В-клеточные злокачественные новообразования и острый миелоидный лейкоз.

[0011] CD22, ограниченный В-клетками фосфогликопротеин, экспрессирующийся на поверхности зрелых В-клеток и в меньшей степени на некоторых незрелых В-клетках. Он функционирует как ингибирующий рецептор для передачи сигналов B-клеточного рецептора (BCR). Кроме того, CD22 экспрессируется в опухолевых клетках, таких как клетки хронического лимфоцитарного лейкоза, неходжкинской лимфомы, фолликулярной лимфомы, острого лимфобластного лейкоза, В-клеточных злокачественных новообразований и волосатоклеточного лейкоза.

[0012] CD30 представляет собой член суперсемейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNFR), в частности TNFR8. CD30 экспрессируется на активированных лимфоцитах и некоторых других нормальных клетках. Его передача сигналов активирует фактор транскрипции NF-κB, что приводит к плейотропной регуляции функции генов. CD30 является характерным маркером классической лимфомы Ходжкина, анапластической крупноклеточной лимфомы и эмбрионально-клеточной карциномы, и он экспрессируется на подгруппе агрессивных Т- и В-клеточных новообразований. Его ограниченная экспрессия на нормальных клетках делает его привлекательным кандидатом для направленной терапии.

[0013] CAMPATH-1, также известный как кластер дифференцировки 52 (CD52), представляет собой пептид из 12 аминокислот, связанный с гликозилфосфатидилинозитолом (GPI). CD52 экспрессируется на клеточной мембране зрелых В- и Т-лимфоцитов, моноцитов и дендритных клеток, но не на стволовых клетках, из которых были получены эти лимфоциты. Кроме того, CD52 обнаружен в мужских половых путях и присутствует на поверхности зрелых сперматозоидов. CD52 связан с некоторыми видами злокачественных новообразований, включая хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), кожную Т-клеточную лимфому, периферическую Т-клеточную лимфому и Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования, неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, анапластическую крупноклеточную лимфому, Т-клеточный лейкоз-лимфому взрослых, новообразования зрелых Т-клеток/клеток-натуральных киллеров (NK) и тимому.

[0014] CD133 представляет собой трансмембранный гликопротеин пентаспан, в основном идентифицированный в человеческих гемопоэтических стволовых клетках и в клетках-предшественниках. В настоящее время физиологическая роль этого поверхностного рецептора остается неясной. Однако CD133 был идентифицирован в качестве маркера опухолевых стволовых клеток при различных карциномах, включая рак молочной железы, толстой кишки, простаты, печени, поджелудочной железы, легких, почек, матки и рак половых клеток яичка, острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, глиому, глиобластому и плоскоклеточный рак головы и шеи. CD133 может взаимодействовать с p85, чтобы активировать сигнальные пути PI3K/AKT/mTOR в опухолевых стволовых клетках, и эта активация, следовательно, провоцирует опухолевые стволовые клетки для стимулирования онкогенной способности.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0015] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D, рецептором CD16 и опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. Такие белки могут рекрутировать более чем один тип NK-активирующих рецепторов, и могут блокировать связывание природных лигандов с NKG2D. В некоторых вариантах осуществления эти белки могут выступать агонистами NK-клеток у человека. В некоторых вариантах осуществления белок может быть агонистом NK-клеток у человека и у других видов, таких как грызуны и яванские макаки. Различные аспекты и варианты осуществления изобретения описаны более подробно ниже.

[0016] Соответственно, один аспект изобретения относится к белку, который включает первый антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D; второй антигенсвязывающий сайт, который связывается с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52, и CD133; и Fc-домен антитела, его часть, достаточную для связывания с CD16, или третий антигенсвязывающий сайт, который связывается с CD16.

[0017] Каждый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи антитела и вариабельный домен легкой цепи антитела (например, расположенный как в антителе или слитый вместе с scFv), или один или более антигенсвязывающих сайтов могут быть однодоменным антителом, таким как антитело V_HH, такое как верблюжье антитело, или антитело V_NAR, подобное тем, которые обнаружены у хрящевых рыб.

[0018] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D, рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах и с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. NKG2D-связывающий сайт включает вариабельный домен тяжелой цепи, по меньшей мере на 90% идентичный аминокислоной последовательности, выбранной из: SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:85, и SEQ ID NO:93.

[0019] Первый антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D, в некоторых вариантах осуществления может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 1, как например, благодаря присутствию аминокислотной последовательности по меньшей мере на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%), идентичной SEQ ID NO: 1, и/или включая аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 105), CDR2 (SEQ ID NO: 106) и CDR3 (SEQ ID NO: 107) SEQ ID NO: 1. Вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 1, может быть связан с различными вариабельными доменами легкой цепи с образованием NKG2D-связывающего сайта. Например, первый антигенсвязывающий сайт, который включает вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 1, может дополнительно включать вариабельный домен легкой цепи, выбранный из любой из последовательностей, связанных с SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 40. Например, первый антигенсвязывающий сайт включает вариабельный домен тяжелой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичными SEQ ID NO: 1, и вариабельный домен легкой цепи с аминокислотными последовательностями, по меньшей мере, на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичными любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36 и 40.

[0020] Альтернативно, первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 41, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 42. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 41 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 43), CDR2 (SEQ ID NO: 44) и CDR3 (SEQ ID NO: 45) SEQ ID NO: 41. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 42 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 46), CDR2 (SEQ ID NO: 47) и CDR3 (SEQ ID NO: 48) SEQ ID NO: 42.

[0021] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 49, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 50. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 49 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 51), CDR2 (SEQ ID NO: 52) и CDR3 (SEQ ID NO: 53) SEQ ID NO: 49. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 50 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 54), CDR2 (SEQ ID NO: 55) и CDR3 (SEQ ID NO: 56) SEQ ID NO: 50.

[0022] Альтернативно, первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 57, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 58, например, путем наличия аминокислотных последовательностей, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 57 и SEQ ID NO: 58, соответственно.

[0023] В одном варианте осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 59, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO:60, как например вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть благодаря присутствию аминокислотной последовательности по меньшей мере на 90% (например, на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%), идентичен SEQ ID NO: 59, и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 324), CDR2 (SEQ ID NO: 325) и CDR3 (SEQ ID NO: 326) SEQ ID NO: 59. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 60 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 327), CDR2 (SEQ ID NO: 328) и CDR3 (SEQ ID NO: 329) SEQ ID NO: 60.

[0024] Первый антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D, в некоторых вариантах осуществления может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 61, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 62. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 61 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 63), CDR2 (SEQ ID NO: 64) и CDR3 (SEQ ID NO: 65) SEQ ID NO: 61. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 62 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 66), CDR2 (SEQ ID NO: 67) и CDR3 (SEQ ID NO: 68) SEQ ID NO: 62. В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 69, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 70. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 69 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 71), CDR2 (SEQ ID NO: 72) и CDR3 (SEQ ID NO: 73) SEQ ID NO: 69. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 70 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 74), CDR2 (SEQ ID NO: 75) и CDR3 (SEQ ID NO: 76) SEQ ID NO: 70.

[0025] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 77, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 78. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 77 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 79), CDR2 (SEQ ID NO: 80) и CDR3 (SEQ ID NO: 81) SEQ ID NO: 77. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 78 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 82), CDR2 (SEQ ID NO: 83) и CDR3 (SEQ ID NO: 84) SEQ ID NO: 78.

[0026] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 85, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 86. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 85 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 87), CDR2 (SEQ ID NO: 88) и CDR3 (SEQ ID NO: 89) SEQ ID NO: 85. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 86 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 90), CDR2 (SEQ ID NO: 91) и CDR3 (SEQ ID NO: 92) SEQ ID NO: 86.

[0027] В других вариантах осуществления первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 93, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 94. Например, вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 93 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 95), CDR2 (SEQ ID NO: 96) и CDR3 (SEQ ID NO: 97) SEQ ID NO: 93. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 94 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 98), CDR2 (SEQ ID NO: 99) и CDR3 (SEQ ID NO: 100) SEQ ID NO: 94.

[0028] В некоторых вариантах осуществления, первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 101, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 102, например, путем наличия аминокислотных последовательностей, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 101, и по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 102, соответственно. В некоторых вариантах осуществления, первый антигенсвязывающий сайт может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 101, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 103, например, путем наличия аминокислотных последовательностей, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 104, и по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 103, и по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичных SEQ ID NO: 104, соответственно.

[0029] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD37, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 109, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 113. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 109 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 110), CDR2 (SEQ ID NO: 111) и CDR3 (SEQ ID NO: 112) SEQ ID NO: 109. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 113 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 114), CDR2 (SEQ ID NO: 115) и CDR3 (SEQ ID NO: 116) SEQ ID NO: 113.

[0030] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD37, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 117, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 121. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 117 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 118), CDR2 (SEQ ID NO: 119) и CDR3 (SEQ ID NO: 120) SEQ ID NO: 117. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 121 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 122), CDR2 (SEQ ID NO: 123) и CDR3 (SEQ ID NO: 124) SEQ ID NO: 121.

[0031] Второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD37, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 125, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 129. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 125 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 126), CDR2 (SEQ ID NO: 127) и CDR3 (SEQ ID NO: 128) SEQ ID NO: 125. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 129 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 130), CDR2 (SEQ ID NO: 131) и CDR3 (SEQ ID NO: 132) SEQ ID NO: 129.

[0032] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD20, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 134, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 138. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 134 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 135), CDR2 (SEQ ID NO: 136) и CDR3 (SEQ ID NO: 137) SEQ ID NO: 134. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 138 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 139), CDR2 (SEQ ID NO: 140) и CDR3 (SEQ ID NO: 141) SEQ ID NO: 138.

[0033] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD20, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 142, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 146. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 142 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 143), CDR2 (SEQ ID NO: 144) и CDR3 (SEQ ID NO: 145) SEQ ID NO: 142. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 146 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 147), CDR2 (SEQ ID NO: 148) и CDR3 (SEQ ID NO: 149) SEQ ID NO: 146.

[0034] Второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD20, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 150, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 154. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 150 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 151), CDR2 (SEQ ID NO: 152) и CDR3 (SEQ ID NO: 153) SEQ ID NO: 150. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 154 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 155), CDR2 (SEQ ID NO: 156) и CDR3 (SEQ ID NO: 157) SEQ ID NO: 154.

[0035] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD20, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 158, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 162. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 158 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 159), CDR2 (SEQ ID NO: 160) и CDR3 (SEQ ID NO: 161) SEQ ID NO: 158. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 163 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 163), CDR2 (SEQ ID NO: 164) и CDR3 (SEQ ID NO: 165) SEQ ID NO: 162.

[0036] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD20, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 166, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 170. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 166 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 167), CDR2 (SEQ ID NO: 168) и CDR3 (SEQ ID NO: 169) SEQ ID NO: 166. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 170 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 171), CDR2 (SEQ ID NO: 172) и CDR3 (SEQ ID NO: 173) SEQ ID NO: 170.

[0037] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD19, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 175, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 179. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 175 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 176), CDR2 (SEQ ID NO: 177) и CDR3 (SEQ ID NO: 178) SEQ ID NO: 175. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 179 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 180), CDR2 (SEQ ID NO: 181) и CDR3 (SEQ ID NO: 182) SEQ ID NO: 179.

[0038] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD19, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 183, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 187. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 183 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 184), CDR2 (SEQ ID NO: 185) и CDR3 (SEQ ID NO: 186) SEQ ID NO: 183. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 187 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 188), CDR2 (SEQ ID NO: 189) и CDR3 (SEQ ID NO: 190) SEQ ID NO: 187.

[0039] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD19, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 191, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 195. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 191 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 192), CDR2 (SEQ ID NO: 193) и CDR3 (SEQ ID NO: 194) SEQ ID NO: 191. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 195 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 196), CDR2 (SEQ ID NO: 197) и CDR3 (SEQ ID NO: 198) SEQ ID NO: 195. Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD19, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 199, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 203. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 199 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 200), CDR2 (SEQ ID NO: 201) и CDR3 (SEQ ID NO: 202) SEQ ID NO: 199. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 203 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 204), CDR2 (SEQ ID NO: 205) и CDR3 (SEQ ID NO: 206) SEQ ID NO: 203.

[0040] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD22, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 208, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 212. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 208 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 209), CDR2 (SEQ ID NO: 210) и CDR3 (SEQ ID NO: 211) SEQ ID NO: 208. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 212 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 213), CDR2 (SEQ ID NO: 214) и CDR3 (SEQ ID NO: 215) SEQ ID NO: 212.

[0041] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD22, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 216, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 220. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 216 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 217), CDR2 (SEQ ID NO: 218) и CDR3 (SEQ ID NO: 219) SEQ ID NO: 216. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 220 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 221), CDR2 (SEQ ID NO: 222) и CDR3 (SEQ ID NO: 223) SEQ ID NO: 220. Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD22, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 224, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 228. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 224 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 225), CDR2 (SEQ ID NO: 226) и CDR3 (SEQ ID NO: 227) SEQ ID NO: 224. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 228 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 229), CDR2 (SEQ ID NO: 230) и CDR3 (SEQ ID NO: 231) SEQ ID NO: 228.

[0042] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD30, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 233, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 237. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 233 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 234), CDR2 (SEQ ID NO: 235) и CDR3 (SEQ ID NO: 236) SEQ ID NO: 233. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 237 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 238), CDR2 (SEQ ID NO: 239) и CDR3 (SEQ ID NO: 240) SEQ ID NO: 237.

[0043] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD30, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 241, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 245. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 241 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 242), CDR2 (SEQ ID NO: 243) и CDR3 (SEQ ID NO: 244) SEQ ID NO: 241. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 245 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 246), CDR2 (SEQ ID NO: 247) и CDR3 (SEQ ID NO: 248) SEQ ID NO: 245.

[0044] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD30, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 249, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 253. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 249 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 250), CDR2 (SEQ ID NO: 251) и CDR3 (SEQ ID NO: 252) SEQ ID NO: 249. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 253 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 254), CDR2 (SEQ ID NO: 255) и CDR3 (SEQ ID NO: 256) SEQ ID NO: 253.

[0045] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD30, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 257, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 261. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 257 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 258), CDR2 (SEQ ID NO: 259) и CDR3 (SEQ ID NO: 260) SEQ ID NO: 257. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 261 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 262), CDR2 (SEQ ID NO: 263) и CDR3 (SEQ ID NO: 264) SEQ ID NO: 261.

[0046] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD30, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 265, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 269. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 265 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 266), CDR2 (SEQ ID NO: 267) и CDR3 (SEQ ID NO: 268) SEQ ID NO: 265. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 269 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 270), CDR2 (SEQ ID NO: 271) и CDR3 (SEQ ID NO: 272) SEQ ID NO: 269.

[0047] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD52, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 274, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 278. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 274 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 275), CDR2 (SEQ ID NO: 276) и CDR3 (SEQ ID NO: 277) SEQ ID NO: 274. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 278 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 279), CDR2 (SEQ ID NO: 280) и CDR3 (SEQ ID NO: 281) SEQ ID NO: 278.

[0048] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD52, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 282, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 286. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 282 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 283), CDR2 (SEQ ID NO: 284) и CDR3 (SEQ ID NO: 285) SEQ ID NO: 282. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 286 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 287), CDR2 (SEQ ID NO: 288) и CDR3 (SEQ ID NO: 289) SEQ ID NO: 286.

[0049] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD133, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 291, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 295. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 291 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 292), CDR2 (SEQ ID NO: 293) и CDR3 (SEQ ID NO: 294) SEQ ID NO: 291. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 295 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 296), CDR2 (SEQ ID NO: 297) и CDR3 (SEQ ID NO: 298) SEQ ID NO: 295.

[0050] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD133, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 299, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 303. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 299 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 300), CDR2 (SEQ ID NO: 301) и CDR3 (SEQ ID NO: 302) SEQ ID NO: 299. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 303 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 304), CDR2 (SEQ ID NO: 305) и CDR3 (SEQ ID NO: 306) SEQ ID NO: 303.

[0051] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD133, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 307, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 311. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 307 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 308), CDR2 (SEQ ID NO: 309) и CDR3 (SEQ ID NO: 310) SEQ ID NO: 307. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 311 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 312), CDR2 (SEQ ID NO: 313) и CDR3 (SEQ ID NO: 314) SEQ ID NO: 311.

[0052] Альтернативно, второй антигенсвязывающий сайт, связывающийся с CD133, может включать вариабельный домен тяжелой цепи, связанный с SEQ ID NO: 315, и вариабельный домен легкой цепи, связанный с SEQ ID NO: 319. Например, вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 315 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 316), CDR2 (SEQ ID NO: 317) и CDR3 (SEQ ID NO: 318) SEQ ID NO: 315. Аналогично, вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта может быть, по меньшей мере, на 90% (например, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%) идентичен SEQ ID NO: 319 и/или включает аминокислотные последовательности, идентичные последовательностям CDR1 (SEQ ID NO: 320), CDR2 (SEQ ID NO: 321) и CDR3 (SEQ ID NO: 322) SEQ ID NO: 319.

[0053] В некоторых вариантах осуществления второй антигенсвязывающий сайт включает вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи, присутствующей в первом антигенсвязывающем сайте.

[0054] В некоторых вариантах осуществления белок включает часть Fc-домена антитела, достаточную для связывания CD16, где Fc-домен антитела содержит шарнирные и CH2-домены и/или аминокислотные последовательности, по меньшей мере, на 90% идентичные аминокислотной последовательности 234-332 последовательности человеческого антитела IgG.

[0055] Предложены составы, содержащие любой из белков, описанных в настоящем документе; клетки, содержащие одну или более нуклеиновых кислот, экспрессирующих эти белки, и способы усиления смерти опухолевых клеток с использованием этих белков.

[0056] Другой аспект изобретения относится к способу лечения злокачественного новообразования у пациента. Способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества описанного в настоящем документе полиспецифичного связывающего белка. Злокачественные новообразования, подлежащие лечению с использованием CD37-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любое злокчественное новообразование, которое экспрессирует CD37, например, B-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), волосато-клеточный лейкоз (HCL), неходжкинская лимфома и острый миелоидный лейкоз. Злокачественные новообразования, подлежащие лечению с использованием CD20-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включают любое злокачественное новообразование, которое экспрессирует CD20, например, хронический лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома и В-клеточные злокачественные новообразования. Злокачественные новообразования, подлежащие лечению с использованием CD19-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включают любое злокачественное новообразование, которое экспрессирует CD20, например, хронический лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, острый лимфобластный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования, множественная миелома и острый миелоидный лейкоз. Злокачественное новообразование, подлежащее лечению с использованием CD22-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любое злокачественное новообразование, которое экспрессирует CD22, например, хронический лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, острый лимфобластный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования и волосатоклеточный лейкоз. Злокачественное новообразование, подлежащее лечению с использованием CD30-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любое злокачественное новообразование, которое экспрессирует CD30, например, лимфому Ходжкина, анапластическую крупноклеточную лимфому, кожную Т-клеточную лимфому, периферическую Т-клеточную лимфому, Т-клеточный лейкоз-лимфому взрослых, диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, неходжкинскую лимфому и эмбрионально-клеточную карциному. Злокачественное новообразование, подлежащее лечению с использованием CD52-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любое злокачественное новообразование, которое экспрессирует CD52, например, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), кожную Т-клеточную лимфому, периферическую Т-клеточную лимфому и Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования, неходжкинскую лимфому, лимфому Ходжкина, анапластическую крупноклеточную лимфому, Т-клеточный лейкоз-лимфому взрослых, новообразования зрелых Т-клеток/клеток-натуральных киллеров (NK) и тимому. Злокачественное новообразование, подлежащее лечению с использованием CD133-нацеленных полиспецифических связывающих белков, включает любое злокачественное новообразование, которое экспрессирует CD133, например рак молочной железы, рак толстой кишки, рак предстательной железы, рак печени, рак поджелудочной железы, рак легких, рак яичников, рак почки, рак матки, рак половых клеток яичка, острый миелобластный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, глиома, глиобластома, плоскоклеточный рак головы и шеи.

Краткое описание чертежей

[0057] ФИГ. 1 представляет гетеродимерное полиспецифическое антитело. ФИГ. 1 представляет гетеродимерное полиспецифическое антитело. В некоторых вариантах осуществления NKG2D- и антигенсвязывающие домены могут иметь общую легкую цепь.

[0058] ФИГ. 2 представляет гетеродимерное полиспецифическое антитело. Либо NKG2D-связывающий домен, либо связывающий домен антигена, выбранного из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52, и CD133, может принимать формат scFv (правое плечо).

[0059] ФИГ. 3 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным NKG2D человека в анализе ИФА.

[0060] ФИГ. 4 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным NKG2D яванской макаки в анализе ИФА.

[0061] ФИГ. 5 представляет собой линейные графики, демонстрирующие аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным NKG2D мыши в анализе ИФА.

[0062] ФИГ. 6 представляет собой гистограммы, демонстрирующие с помощью проточной цитометрии связывание NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с клетками EL4, экспрессирующими NKG2D человека, демонстрируя кратное превышение средней интенсивности флуоресценции (MFI) относительно фона.

[0063] ФИГ. 7 представляет собой гистограммы, демонстрирующие с помощью проточной цитометрии связывание NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с клетками EL4, экспрессирующими NKG2D мыши, демонстрируя кратное превышение средней интенсивности флуоресценции (MFI) относительно фона.

[0064] ФИГ. 8 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом ULBP-6.

[0065] ФИГ. 9 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным человеческим NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом MICA.

[0066] ФИГ. 10 представляет собой линейные графики, демонстрирующие специфическую аффинность связывания NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) с рекомбинантным мышиным NKG2D-Fc путем конкуренции с природным лигандом Rae-1 дельта.

[0067] ФИГ. 11 представляет собой гистограммы, показывающие активацию человеческого NKG2D посредством NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) путем количественного определения процента TNF-альфа-положительных клеток, которые экспрессируют слитые белки человеческий NKG2D-CD3 дзета.

[0068] ФИГ. 12 представляет собой гистограммы, показывающие активацию мышиного NKG2D с помощью NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) путем количественного определения процента TNF-α-положительных клеток, которые экспрессируют слитые белки мышиный NKG2D-CD3 дзета.

[0069] ФИГ. 13 представляет собой гистограммы, показывающие активацию человеческих NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).

[0070] ФИГ. 14 представляет собой гистограммы, показывающие активацию человеческих NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).

[0071] ФИГ. 15 представляет собой гистограммы, показывающие активацию мышиных NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).

[0072] ФИГ. 16 представляет собой гистограммы, показывающие активацию мышиных NK-клеток NKG2D-связывающими доменами (перечислены в виде клонов).

[0073] ФИГ. 17 представляет собой гистограммы, показывающие цитотоксический эффект NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов) в отношении опухолевых клеток.

[0074] ФИГ. 18 представляет собой гистограммы, показывающие температуру плавления NKG2D-связывающих доменов (перечисленных в виде клонов), измеренную с помощью дифференциальной сканирующей флуориметрии.

[0075] ФИГ. 19А-19С представляет собой гистограммы синергетической активации NK-клеток с использованием связывания CD16 и NKG2D. ФИГ. 19А демонстрирует уровень CD107a; ФИГ. 19В демонстрирует уровень IFN-γ; ФИГ 19С демонстрирует уровень продуцирования CD107a и IFN-γ. Графики показывают среднее (n=2) ± SD. Данные представляют пять независимых экспериментов с использованием пяти разных здоровых доноров.

[0076] ФИГ. 20 представляет собой TriNKET в форме Triomab, которое представляет собой трифункциональное биспецифичное антитело, которое поддерживает IgG-подобную форму. Эта химера состоит из двух половинных антител, каждое с одной легкой и одной тяжелой цепью, которые происходят от двух родительских антител. Форма Triomab может представлять собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 1/2 антитела крысы и 1/2 антитела мыши.

[0077] ФИГ. 21 представляет собой TriNKET в форме общей легкой цепи (LC) KiH, которая включает технологию «выступы-во-впадины» (KIH). KiH представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab, связывающихся с мишенью 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. TriNKET в формате KiH может представлять собой гетеродимерную конструкцию с 2 Fab, связывающимися с мишенью 1 и мишенью 2, и содержит 2 различных тяжелых цепи и общую легкую цепь, которая спаривается с обеими тяжелыми цепями.

[0078] ФИГ. 22 представляет собой TriNKET в форме иммуноглобулина с двумя вариабельными доменами (DVD-Ig™), который объединяет домены, связывающиеся с мишенью двух моноклональных антител через гибкие встречающиеся в природе линкеры с получением четырехвалентной IgG-подобной молекулы. DVD-Ig™ представляет собой гомодимерную конструкцию, в которой вариабельный домен, нацеленный на антиген 2, слит с N-концом вариабельного домена Fab, нацеленного на антиген 1. Конструкция содержит нормальный Fc.

[0079] ФИГ. 23 представляет собой TriNKET в форме интерфейса ортогонального Fab (Орто-Fab), который представляет собой гетеродимерную конструкцию, которая содержит 2 Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, слитых с Fc. Спаривание LC-HC обеспечивается ортогональным интерфейсом. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.

[0080] ФИГ. 24 представляет собой TrinKET в формате 2-в-1 Ig.

[0081] ФИГ. 25 представляет собой TriNKET в форме ES, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 различных Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями электростатической регуляции в Fc.

[0082] ФИГ. 26 представляет собой TriNKET в форме с обменом Fab-фрагментами: антитела, которые обмениваются Fab-фрагментами путем замены тяжелой цепи и присоединенной легкой цепи (полу-молекулы) с парой тяжелых-легких цепей из другой молекулы, с получением биспецифичных антител. KiH представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab, связывающихся с мишенью 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации.

[0083] ФИГ. 27 представляет собой TriNKET в форме SEED Body, который представляет собой гетеродимер, содержащий 2 Fab-фрагмента, связывающихся с мишенью 1 и 2, и FC, стабилизированный мутациями гетеродимеризации.

[0084] ФИГ. 28 представляет собой TriNKET в форме LuZ-Y, в котором домен лейциновой застежки используется для индуцирования гетеродимеризации двух различных HC. LuZ-Y форма представляет собой гетеродимер, содержащий 2 разных scFab, связывающихся с мишенью 1 и 2, слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается благодаря мотивам лейциновой застежки, слитым с С-концом Fc.

[0085] ФИГ. 29 представляет собой TriNKET в форме Cov-X-Body.

[0086] ФИГ. 30A-30B - представляют собой TriNKET в формах κλ-Body, которые представляют собой гетеродимерные конструкции с двумя различными Fab, слитыми с Fc, стабилизированными мутациями гетеродимеризации: Fab 1, нацеленный на антиген 1, содержит каппа LC, а второй Fab, нацеленный на антиген 2, содержит лямбда LC. ФИГ. 30А является иллюстративным изображением одной формы κλ-Body; ФИГ.30В является иллюстративным изображением другой формы κλ-Body.

[0087] ФИГ. 31 представляет собой гетеродимерную конструкцию Oasc-Fab, которая включает Fab, связывающийся с мишенью 1, и scFab, связывающийся с мишенью 2, слитые с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.

[0088] ФИГ. 32 представляет собой DuetMab, который представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 разных Fab, связывающихся с антигеном 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. Fab 1 и 2 содержат различные SS-мостики, которые обеспечивают правильное спаривание легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (HC).

[0089] ФИГ. 33 представляет собой CrossmAb, который представляет собой гетеродимерную конструкцию с 2 различными Fab, связывающимися с мишенью 1 и 2, слитыми с Fc, стабилизированным гетеродимеризацией. Домены CL и CH1 и домены VH и VL переключаются, например, CH1 сливается в одной линии с VL, в то время как CL сливается в одной линии с VH.

[0090] ФИГ. 34 представляет собой Fit-Ig, который представляет собой гомодимерные конструкции, в которых Fab, связывающийся с антигеном 2, слит с N-концом HC Fab, который связывается с антигеном 1. Конструкция содержит Fc дикого типа.

[0091] ФИГ. 35 представляет собой гистограмму, показывающую связывание CD20-нацеленных TriNKET с NKG2D, экспрессируемыми на клетках EL4. Неокрашенные клетки EL4 использовали в качестве отрицательного контроля сигнала флуоресценции. Не окрашено: окрашено; F04-TriNKET-CD20: сплошная линия; CD26-TriNKET-CD20: пунктирная линия.

[0092] ФИГ. 36 представляет собой гистограмму, показывающую связывание CD20-нацеленных TriNKET с CD20, экспрессируемым на клетках лимфомы человека Raji. Неокрашенные клетки использовали в качестве отрицательного контроля сигнала флуоресценции. Не окрашено: окрашено; F04-TriNKET-CD20: сплошная линия; CD26-TriNKET-CD20: пунктирная линия.

[0093] ФИГ. 37 представляет собой столбчатую диаграмму, показывающую, что человеческие NK-клетки активировались TriNKET, когда они совместно культивировались с CD20+клетками В-клеточной лимфомы Raji, на что указывает увеличение количества дважды положительных клеток по CD107a/IFN-γ.

[0094] ФИГ. 38 представляет собой линейный график, демонстрирующий TriNKET-опосредованную цитотоксическую активность человеческих NK-клеток в отношении CD20-экспрессирующих клеток В-клеточной лимфомы Raji.

[0095] ФИГ. 39 представляет собой линейный график, демонстрирующий, что TriNKET опосредует более высокую цитотоксичность NK-клеток в отношении CD20-экспрессирующих клеток В-клеточной лимфомы Raji, чем родительское моноклональное антитело против CD20.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0096] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D, рецептором CD16 и опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки дополнительно включают дополнительный антигенсвязывающий сайт, который связывается с опухолеспецифическим антигеном. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие полиспецифические связывающие белки, и к терапевтическим способам, использующим такие полиспецифические белки и фармацевтические композиции, для таких целей, как лечение злокачественного новообразования. Различные аспекты изобретения изложены ниже в разделах; однако аспекты изобретения, описанные в одном конкретном разделе, не должны быть ограничены каким-либо конкретным разделом.

[0097] Чтобы облегчить понимание настоящего изобретения, ряд терминов и выражений определены ниже.

[0098] Термин в единственном числе, используемый в настоящем описании, означает «один или более» и включают множественное число, если контекст не является неподходящим.

[0099] Используемый в настоящем описании термин «антигенсвязывающий сайт» относится к части молекулы иммуноглобулина, которая участвует в связывании антигена. В антителах человека антигенсвязывающий сайт образуется аминокислотными остатками N-концевых вариабельных («V») областей тяжелой («H») и легкой («L») цепей. Три сильно расходящихся участка в V-областях тяжелой и легкой цепей называются «гипервариабельными областями», которые расположены между более консервативными фланкирующими участками, известными как «каркасные области» или «FR». Таким образом, термин «FR» относится к аминокислотным последовательностям, которые естественным образом обнаруживаются между гипервариабельными областями иммуноглобулинов и рядом с ними. В молекуле человеческого антитела три гипервариабельные области легкой цепи и три гипервариабельные области тяжелой цепи располагаются относительно друг друга в трехмерном пространстве с образованием антигенсвязывающей поверхности. Антигенсвязывающая поверхность комплементрана трехмерной поверхности связанного антигена, и три гипервариабельные области каждой из тяжелой и легкой цепей называются «оболастями, определяющими комплементарность» или «CDR». У некоторых животных, таких как верблюды и хрящевые рыбы, антигенсвязывающий сайт образован одной цепью антитела, обеспечивая «однодоменное антитело». Антигенсвязывающие сайты могут существовать в интактном антителе, в антигенсвязывающем фрагменте антитела, которое сохраняет антигенсвязывающую поверхность, или в рекомбинантном полипептиде, таком как scFv, с использованием пептидного линкера для соединения вариабельного домена тяжелой цепи с вариабельным доменом легкой цепи в одном полипептиде.

[0100] Используемый в настоящем описании термин «опухолеспецифический антиген» означает любой антиген, включая, но не ограничиваясь этим, белок, гликопротеин, ганглиозид, углевод, липид, который ассоциирован со злокачественным новообразованием. Такой антиген может экспрессироваться на злокачественных клетках или в микроокружении опухоли, как например, на кровеносных сосудах, ассоциированных с опухолью, внеклеточном матриксе, мезенхимальной строме или иммунных инфильтратах.

[0101] Используемые в настоящем описании термины «субъект» и «пациент» относятся к организму, подлежащему лечению способами и композициями, описанными в настоящем документе. Такие организмы предпочтительно включают, но не ограничиваются ими, млекопитающих (например, мышей, обезьян, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, собак, кошек и тому подобное) и, более предпочтительно, включают человека.

[0102] Используемый в настоящем описании термин «эффективное количество» относится к количеству соединения (например, соединения по настоящему изобретению), достаточному для достижения полезных или желаемых результатов. Эффективное количество может быть введено за одно или более введений, применений или дозировок и не предназначено для ограничения конкретным составом или путем введения. Используемый в настоящем описании термин «лечение» включает любой эффект, например уменьшение, снижение, модуляцию, улучшение или устранение, которое приводит к улучшению состояния, заболевания, расстройства и т. п. или ослаблению его симптома.

[0103] Используемый в настоящем описании термин «фармацевтическая композиция» относится к комбинации активного агента с носителем, инертным или активным, что делает композицию особенно подходящей для диагностического или терапевтического применения in vivo или ex vivo.

[0104] Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к любому из стандартных фармацевтических носителей, таких как фосфатно-буферный солевой раствор, вода, эмульсии (например, такие как эмульсии масло/вода или вода/масло) и различные типы смачивающих агентов. Композиции также могут включать стабилизаторы и консерванты. Примеры носителей, стабилизаторов и адъювантов см., например, в Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975].

[0105] Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к любой фармацевтически приемлемой соли (например, кислоты или основания) соединения по настоящему изобретению, которая при введении пациенту способна обеспечить соединение по настоящему изобретению или активный метаболит или его остаток. Как известно специалистам в данной области техники, «соли» соединений по настоящему изобретению могут быть получены из неорганических или органических кислот и оснований. Примеры кислот включают, но не ограничиваются ими, соляную, бромводородную, серную, азотную, хлорную, фумаровую, малеиновую, фосфорную, гликолевую, молочную, салициловую, янтарную, толуол-п-сульфоновую, винную, уксусную, лимонную, метансульфоновую, этансульфоновую, муравьиную, бензойную, малоновую, нафталин-2-сульфоновую, бензолсульфоновую кислота и тому подобное. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, хотя сами по себе они не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы при получении солей, полезных в качестве промежуточных соединений при получении соединений по изобретению и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей.

[0106] Примеры оснований включают, но не ограничиваются ими, гидроксиды щелочных металлов (например, натрия), гидроксиды щелочноземельных металлов (например, магния), аммиак и соединения формулы NW₄ ⁺, где W представляет собой C_1-4алкил и тому подобное.

[0107] Примеры солей включают, но не ограничиваются ими: ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, флукогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилпропионат, пикрат, пивалат, пропионат, сукцинат, тартрат, тиоцианат, тозилат, ундеканоат и тому подобное. Другие примеры солей включают анионы соединений по настоящему изобретению, соединенные с подходящим катионом, таким как Na⁺, NH₄ ⁺ и NW₄ ⁺ (где W представляет собой C_1-4алкильную группу), и тому подобное.

[0108] Для терапевтического применения соли соединений по настоящему изобретению рассматриваются как фармацевтически приемлемые. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения.

[0109] Во всем описании, где композиции описаны как имеющие, включающие или содержащие конкретные компоненты, или где процессы и способы описаны как имеющие, включающие или содержащие конкретные стадии, предполагается, что дополнительно существуют композиции по настоящему изобретению, которые состоят по существу или состоят из перечисленных компонентов и что существуют процессы и способы согласно настоящему изобретению, которые состоят по существу или состоят из перечисленных стадий обработки.

[0110] Как правило, если в композиции указан процент, то это процент по массе, если не указано иное. Кроме того, если переменная не сопровождается определением, то предыдущее определение переменной является приоритетным.

I. Белки

[0111] Изобретение относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D, рецептором CD16 и опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. Полиспецифические связывающие белки пригодны в фармацевтических композициях и терапевтических способах, описанных в настоящем документе. Связывание полиспецифических связывающих белков с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетке-натуральном киллере усиливает активность клетки-натурального киллера в отношении разрушения опухолевых клеток, экспрессирующих антиген CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52, или CD133. Связывание полиспецифического связывающего белка с клетками, экспрессирующими CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52, или CD133, приводит к тому, что опухолевые клетки приближаются к клетке-натуральному киллеру, что облегчает прямое и косвенное разрушение опухолевых клеток клеткой-натуральным киллером. Дальнейшее описание некоторых примеров полиспецифических связывающих белков приведено ниже.

[0112] Первый компонент полиспецифических связывающих белков связывается с клетками, экспрессирующими рецептор NKG2D, которые могут включать, но не ограничиваются ими, NK-клетки, γδ T-клетки и CD8⁺ αβ T-клетки. При NKG2D-связывании полиспецифические связывающие белки могут блокировать природные лиганды, такие как ULBP6 и MICA, от связывания с NKG2D и активации рецепторов NKG2D.

[0113] Второй компонент полиспецифических связывающих белков связывается с CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 или CD133. CD37-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, среди клеток В-клеточного хронического лимфоцитарного лейкоза (CLL), волосато-клеточного лейкоза (HCL), неходжкинской лимфомы и острого миелоидного лейкоза. CD20-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, среди клеток хронического лимфоцитарного лейкоза, неходжкинской лимфомы, фолликулярной лимфомы и В-клеточных злокачественных новообразований. CD19-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при хроническом лимфоцитарном лейкозе, неходжкинской лимфоме, фолликулярной лимфоме, остром лимфобластном лейкозе, В-клеточных злокачественных новообразованиях, множественной миеломе и остром миелобластном лейкозе. CD22-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при хроническом лимфоцитарном лейкозе, неходжкинской лимфоме, фолликулярной лимфоме, остром лимфобластном лейкозе, В-клеточных злокачественных новообразованиях и волосатоклеточном лейкозе. CD30-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, при лимфоме Ходжкина, анапластической крупноклеточной лимфоме, кожной Т-клеточной лимфоме, периферической Т-клеточной лимфоме, Т-клеточном лейкозе-лимфоме взрослых, диффузной В-клеточной лимфоме, неходжкинской лимфоме и эмбрионально-клеточной карциноме. CD52-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, но не ограничиваясь этим, при хроническом лимфоцитарном лейкозе (CLL), кожной Т-клеточной лимфоме, периферической Т-клеточной лимфоме и Т-клеточном пролимфоцитарном лейкозе, В-клеточных злокачественных новообразованиях, неходжкинской лимфоме, лимфоме Ходжкина, анапластической крупноклеточной лимфоме, Т-клеточном лейкозе-лимфоме взрослых, новообразованиях зрелых Т клеток/клеток-натуральных киллеров (NK) и тимоме. CD52-экспрессирующие клетки могут быть обнаружены, например, среди прочего, при раке молочной железы, раке толстой кишки, раке предстательной железы, раке печени, раке поджелудочной железы, раке легкого, раке почки, раке матки, раке половых клеток яичка, остром миелобластном лейкозе, остром лимфобластном лейкозе, глиоме, глиобластоме и плоскоклеточном раке головы и шеи.

[0114] Третий компонент для полиспецифических связывающих белков связывается с клетками, экспрессирующими CD16, Fc-рецептор на поверхности лейкоцитов, включая клетки-натуральные киллеры, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, тучные клетки и фолликулярные дендритные клетки.

[0115] Описанные в настоящем документе полиспецифические связывающие белки могут принимать различные форматы. Например, один формат представляет собой гетеродимерное полиспецифическое антитело, которое включает первую тяжелую цепь иммуноглобулина, первую легкую цепь иммуноглобулина и вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и вторую легкую цепь иммуноглобулина (ФИГ. 1). Первая тяжелая цепь иммуноглобулина включает первый Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), первый вариабельный домен тяжелой цепи и необязательный первый домен CH1 тяжелой цепи. Первая легкая цепь иммуноглобулина включает первый вариабельный домен легкой цепи и первый константный домен легкой цепи. Первая легкая цепь иммуноглобулина вместе с первой тяжелой цепью иммуноглобулина образует антигенсвязывающий сайт, который связывается с NKG2D. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина содержит второй Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), второй вариабельный домен тяжелой цепи и, необязательно, второй домен CH1 тяжелой цепи. Вторая легкая цепь иммуноглобулина включает второй вариабельный домен легкой цепи и второй константный домен легкой цепи. Вторая легкая цепь иммуноглобулина вместе со второй тяжелой цепью иммуноглобулина образует антигенсвязывающий сайт, который связывается с CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 или CD133. Первый Fc-домен и второй Fc-домен вместе могут связываться с CD16 (ФИГ.1). В некоторых вариантах осуществления первая легкая цепь иммуноглобулина идентична второй легкой цепи иммуноглобулина.

[0116] Другой примерный формат включает гетеродимерное полиспецифическое антитело, включающее первую тяжелую цепь иммуноглобулина, вторую тяжелую цепь иммуноглобулина и легкую цепь иммуноглобулина (ФИГ. 2). Первая тяжелая цепь иммуноглобулина включает первый Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), слитый либо через линкер, либо за счет шарнира антитела, с одноцепочечным вариабельным фрагментом (scFv), состоящим из вариабельного домена тяжелой цепи и вариабельного домена легкой цепи, которые спариваются и связываются с NKG2D или связываются с антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина включает второй Fc-домен (шарнир-CH2-CH3), второй вариабельный домен тяжелой цепи и, необязательно, домен тяжелой цепи CH1. Легкая цепь иммуноглобулина включает вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи. Вторая тяжелая цепь иммуноглобулина соединяется с легкой цепью иммуноглобулина и связывается с NKG2D или с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. Первый Fc-домен и второй Fc-домен вместе могут связываться с CD16 (ФИГ. 2).

[0117] Один или более дополнительных мотивов связывания могут быть слиты с С-концом домена СН3 константной области, необязательно через линкерную последовательность. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий сайт может представлять собой одноцепочечную или стабилизированную дисульфидной цепью вариабельную область (scFv), или может образовывать четырехвалентную или трехвалентную молекулу.

[0118] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме Triomab, который представляет собой трифункциональное биспецифичное антитело, которое поддерживает IgG-подобную форму. Эта химера состоит из двух половинных антител, каждое с одной легкой и одной тяжелой цепью, которые происходят от двух родительских антител.

[0119] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок представляет собой форму с общей легкой цепью (LC) KiH, в которой используется технология «выступы во впадины» (KIH). KIH включает сконструированные домены CH3 для создания либо «выступа», либо «впадины» в каждой тяжелой цепи для содействия гетеродимеризации. Концепция технологии Fc «выступы-во-впадины (KiH)» заключалась в том, чтобы ввести «выступ» в одном домене CH3 (CH3A) путем замены небольшого остатка на объемный (например, T366W_CH3A в нумерации EU). Чтобы приспособить «выступ», на другом домене CH3 (CH3B) была создана комплементарная поверхность «впадины» путем замены ближайших соседних к выступу остатков на меньшие (т. е. T366S/L368A/Y407V_CH3B). Мутация «впадины» была оптимизирована путем структурно-управляемого скрининга фаговой библиотеки (Atwell S, Ridgway JB, Wells JA, Carter P., Stable heterodimers from remodeling the domain interface of a homodimer using a phage display library, J. Mol. Biol. (1997) 70(1):26-35). Рентгенокристаллические структуры вариантов KiH Fc (Elliott JM, Ultsch M, Lee J, Tong R, Takeda K, Spiess C, et al.,Antiparallel conformation of knob and hole aglycosylated half-antibody homodimers is mediated by a CH2-CH3 hydrophobic interaction. J. Mol. Biol. (2014) 426(9):1947-57; Mimoto F, Kadono S, Katada H, Igawa T, Kamikawa T, Hattori K. Crystal structure of a novel asymmetrically engineered Fc variant with improved affinity for FcγRs. Mol. Immunol. (2014) 58 (1): 132-8) продемонстрировали, что гетеродимеризация термодинамически поддерживается гидрофобными взаимодействиями, обусловленными стерической комплементарностью в коровом интерфейсе между CH3-доменами, тогда как интерфейсы выступ-выступ и впадина-впадина не благоприятствуют гомодимеризация вследствие стерических помех и нарушения благоприятных взаимодействий, соответственно.

[0120] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме иммуноглобулина с двумя вариабельными доменами (DVD-Ig™), который объединяет домены связывания мишеней двух моноклональных антител через гибкие природные линкеры с получением четырехвалентной IgG-подобной молекулы.

[0121] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме ортогонального Fab-интерфейса (Орто-Fab). В подходе орто-Fab IgG (Lewis SM, Wu X, Pustilnik A, Sereno A, Huang F, Rick HL, et al.,Generation of bispecific IgG antibodies by structure-based design of an orthogonal Fab interface. Nat. Biotechnol. (2014) 32 (2): 191-8), региональный дизайн на основе структуры вводит комплементарные мутации в интерфейсе LC и HCVH-CH1 только в одном Fab без каких-либо изменений в другом Fab.

[0122] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок имеет формат 2-в-1 Ig. В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме ES, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 различных Fab, связывающихся с мишенью 1 и мишенью 2, слитых с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями электростатической регуляции в Fc.

[0123] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме (λ-Body, которая представляет собой гетеродимерные конструкции с 2 различными Fab, слитыми с Fc, стабилизированными мутациями гетеродимеризации: Fab1, нацеленный на антиген 1, содержит каппа-LC, тогда как второй Fab, нацеленный на антиген 2, содержит лямбда LC. ФИГ. 30А является иллюстративным изображением одной формы κλ-Body; ФИГ.30В является иллюстративным изображением другой формы κλ-Body.

[0124] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме с обменом Fab-фрагментов (антитела, которые обмениваются Fab-фрагментами путем замены тяжелой цепи и присоединенной легкой цепи (полу-молекулы) на пару тяжелых-легких цепей из другой молекулы, что приводит к получению биспецифичных антител).

[0125] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок имеет форму SEED Body. Сконструированная доменная платформа с обменом цепей (SEED) была разработана для генерирования асимметричных и биспецифичных антителоподобных молекул, что позволяет расширять терапевтические применения природных антител. Эта платформа, сконструированная белками, основана на обмене структурно родственных последовательностей иммуноглобулина в консервативных доменах СН3. Конструкция SEED позволяет эффективно генерировать гетеродимеры AG/GA, в то же время препятствуя гомодимеризации доменов AG и GA SEED CH3.(Muda M. et al., Protein Eng. Des. Sel. (2011, 24(5):447-54)).

[0126] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме LuZ-Y, в которой домен лейциновой застежки используется для индуцирования гетеродимеризации двух разных HC. (Wranik, BJ. et al., J. Biol. Chem. (2012), 287:43331-9).

[0127] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме Cov-X-Body. В биспецифических CovX-Body два разных пептида соединяются вместе с использованием разветвленного азетидинонового линкера и сливаются с каркасным антителом в мягких условиях сайтспецифичным образом. В то время как фармакофоры отвечают за функциональную активность, каркас антител обеспечивает длительный период полужизни и Ig-подобное распределение. Фармакофоры могут быть химически оптимизированы или заменены другими фармакофорами для получения оптимизированных или уникальных биспецифичных антител. (Doppalapudi VR et al., PNAS (2010), 107(52);22611-22616).

[0128] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в гетеродимерной форме Oasc-Fab, которая включает Fab, связывающийся с мишенью 1, и scFab, связывающийся с мишенью 2, слитые с Fc. Гетеродимеризация обеспечивается мутациями в Fc.

[0129] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме DuetMab, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию, содержащую 2 различных Fab, связывающихся с антигеном 1 и 2, и Fc, стабилизированный мутациями гетеродимеризации. Fab 1 и 2 содержат дифференциальные SS-мостики, которые обеспечивают правильное спаривание LC и HC.

[0130] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме CrossmAb, которая представляет собой гетеродимерную конструкцию с 2 различными Fab, связывающимися с мишенью 1 и 2, слитыми с Fc, стабилизированными гетеродимеризацией. Домены CL и CH1 и домены VH и VL переключаются, например, CH1 сливается в одной линии с VL, в то время как CL сливается в одной линии с VH.

[0131] В некоторых вариантах осуществления полиспецифический связывающий белок находится в форме Fit-Ig, которая представляет собой гомодимерные конструкции, где Fab, связывающийся с антигеном 2, слит с N-концом HC Fab, который связывается с антигеном 1. Конструкция содержит Fc дикого типа.

[0132] В Таблице 1 перечислены пептидные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с NKG2D. NKG2D-связывающие домены могут различаться по своей аффинности связывания с NKG2D, тем не менее, все они активируют человеческие NKG2D и NK-клетки.

Таблица 1
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи
ADI-27705	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:1) CDR1 (SEQ ID NO:105) -GSFSGYYWS CDR2 (SEQ ID NO:106) - EIDHSGSTNYNPSLKS CDR3 (SEQ ID NO:107) - ARARGPWSFDP	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:2)
ADI-27724	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:3)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:4)
ADI-27740 (A40)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:5)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYHSFYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:6)
ADI-27741	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQSNSYYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:8)
ADI-27743	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:9)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:10)
ADI-28153	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWGFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:11)	ELQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISSYLNWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDSATYYCQQSYDIPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:12)
ADI-28226 (C26)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:13)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYGSFPITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:14)
ADI-28154	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:15)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQSKEVPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:16)
ADI-29399	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:17)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSFPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:18)
ADI-29401	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:19)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDIYPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:20)
ADI-29403	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:21)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDSYPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:22)
ADI-29405	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:23)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYGSFPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:24)
ADI-29407	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:25)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYQSFPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:26)
ADI-29419	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:27)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSSFSTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:28)
ADI-29421	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:29)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYESYSTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:30)
ADI-29424	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:31)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDSFITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:32)
ADI-29425	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:33)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYQSYPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:34)
ADI-29426	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:35)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYHSFPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:36)
ADI-29429	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:37)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYELYSYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:38)
ADI-29447 (F47)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:39)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYDTFITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:40)
ADI-27727	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGDSSIRHAYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:41) CDR1 (SEQ ID NO:43) - GTFSSYAIS CDR2 (SEQ ID NO:44) - GIIPIFGTANYAQKFQG CDR3 (SEQ ID NO:45) - ARGDSSIRHAYYYYGMDV	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPITFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:42) CDR1 (SEQ ID NO:46) - KSSQSVLYSSNNKNYLA CDR2 (SEQ ID NO:47) - WASTRES CDR3 (SEQ ID NO:48) - QQYYSTPIT
ADI-29443 (F43)	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGSDRFHPYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:49) CDR1 (SEQ ID NO:51) - GSISSSSYYWG CDR2 (SEQ ID NO:52) - SIYYSGSTYYNPSLKS CDR3 (SEQ ID NO:53) - ARGSDRFHPYFDY	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSRYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQFDTWPPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:50) CDR1 (SEQ ID NO:54) - RASQSVSRYLA CDR2 (SEQ ID NO:55) - DASNRAT CDR3 (SEQ ID NO:56) - QQFDTWPPT
ADI-29404 (F04)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIDHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARARGPWSFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:57)	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCEQYDSYPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:58)
ADI-28200	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARRGRKASGSFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:59) CDR1 (SEQ ID NO:324) - GTFSSYAIS CDR2 (SEQ ID NO:325) - GIIPIFGTANYAQKFQG CDR3 (SEQ ID NO:326) - ARRGRKASGSFYYYYGMDV	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKPLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYSYPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:60) CDR1 (SEQ ID NO:327) - ESSQSLLNSGNQKNYLT CDR2 (SEQ ID NO:328) - WASTRES CDR3 (SEQ ID NO:329) - QNDYSYPYT
ADI-29379 (E79)	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGAPNYGDTTHDYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:61) CDR1 (SEQ ID NO:63) - YTFTSYYMH CDR2 (SEQ ID NO:64) - IINPSGGSTSYAQKFQG CDR3 (SEQ ID NO:65) - ARGAPNYGDTTHDYYYMDV	EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYDDWPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:62) CDR1 (SEQ ID NO:66) - RASQSVSSNLA CDR2 (SEQ ID NO:67) - GASTRAT CDR3 (SEQ ID NO:68) - QQYDDWPFT
ADI-29463 (F63)	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTGEYYDTDDHGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:69) CDR1 (SEQ ID NO:71) - YTFTGYYMH CDR2 (SEQ ID NO:72) - WINPNSGGTNYAQKFQG CDR3 (SEQ ID NO:73) - ARDTGEYYDTDDHGMDV	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQDDYWPPTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:70) CDR1 (SEQ ID NO:74) - RASQSVSSNLA CDR2 (SEQ ID NO:75) - GASTRAT CDR3 (SEQ ID NO:76) - QQDDYWPPT
ADI-27744 (A44)	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDGGYYDSGAGDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:77) CDR1 (SEQ ID NO:79) - FTFSSYAMS CDR2 (SEQ ID NO:80) - AISGSGGSTYYADSVKG CDR3 (SEQ ID NO:81) - AKDGGYYDSGAGDY	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSYPRTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:78) CDR1 (SEQ ID NO:82) - RASQGIDSWLA CDR2 (SEQ ID NO:83) - AASSLQS CDR3 (SEQ ID NO:84) - QQGVSYPRT
ADI-27749 (A49)	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGAPMGAAAGWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:85) CDR1 (SEQ ID NO:87) - FTFSSYSMN CDR2 (SEQ ID NO:88) - SISSSSSYIYYADSVKG CDR3 (SEQ ID NO:89) - ARGAPMGAAAGWFDP	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGVSFPRTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:86) CDR1 (SEQ ID NO:90) - RASQGISSWLA CDR2 (SEQ ID NO:91) - AASSLQS CDR3 (SEQ ID NO:92) - QQGVSFPRT
ADI-29378 (E78)	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREGAGFAYGMDYYYMDVWGKGTTVTVSS (SEQ ID NO:93) CDR1 (SEQ ID NO:95) - YTFTSYYMH CDR2 (SEQ ID NO:96) - IINPSGGSTSYAQKFQG CDR3 (SEQ ID NO:97) - AREGAGFAYGMDYYYMDV	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSDNWPFTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:94) CDR1 (SEQ ID NO:98) - RASQSVSSYLA CDR2 (SEQ ID NO:99) - DASNRAT CDR3 (SEQ ID NO:100) - QQSDNWPFT

[0133] Альтернативно, вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO: 47, может спариваться с вариабельным доменом легкой цепи, определенным SEQ ID NO: 48, с образованием антигенсвязывающего сайта, который может связываться с NKG2D, как проиллюстрировано в патенте США 9273136.

SEQ ID NO:101

QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIRYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRGLGDGTYFDYWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO:102

QSALTQPASVSGSPGQSITISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGKAPKLLIYYDDLLPSGVSDRFSGSKSGTSAFLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVL

[0134] Альтернативно, вариабельный домен тяжелой цепи, определенный SEQ ID NO: 103, может спариваться с вариабельным доменом легкой цепи, определенным SEQ ID NO: 104, с образованием антигенсвязывающего сайта, который может связываться с NKG2D, как проиллюстрировано в патенте США 7879985.

SEQ ID NO:103

QVHLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSDDSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGHISYSGSANYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCANWDDAFNIWGQGTMVTVSS

SEQ ID NO:104

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK

[0135] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD37. В Таблице 2 перечислены некоторые примерные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации, могут связываться с CD37.

Таблица 2
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи
CD37 антитело (Патент США No. 8333966)	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTGYNMNWVRQMPGKGLEWMGNIDPYYGGTTYNRKFKGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARSVGPFDSWGQGTLVTVSSG (SEQ ID NO:109) CDR1 (SEQ ID NO:110) - GYSFTGY CDR2 (SEQ ID NO:111) - DPYYGG CDR3 (SEQ ID NO:112) - SVGPFDS	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASENVYSYLAWYQQKPGQAPRLLIYFAKTLAEGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHHSDNPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:113) CDR1(SEQ ID NO:114) - ENVYSYLA CDR2 (SEQ ID NO:115) - FAKTLAE CDR3 (SEQ ID NO:116) - QHHSDNPWT
CD37 антитело (Патент США No. 9346887)	QVQVQESGPGLVAPSQTLSITCTVSGFSLTTSGVSWVRQPPGKGLEWLGVIWGDGSTNYHPSLKSRLSIKKDHSKSQVFLKLNSLTAADTATYYCAKGGYSLAHWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:117) CDR1 (SEQ ID NO:118) - FSLTTSGVS CDR2 (SEQ ID NO:119) - VIWGDGSTNYHPSLKS CDR3 (SEQ ID NO:120) - GGYSLAH	DIQMTQSPSSLSVSVGERVTITCRASENIRSNLAWYQQKPGKSPKLLVNVATNLADGVPSRFSGSGSGTDYSLKINSLQPEDFGTYYCQHYWGTTWTFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:121) CDR1 (SEQ ID NO:122) - ENIRSNLA CDR2 (SEQ ID NO:123) - NVATNLA CDR3 (SEQ ID NO:124) - QHYWGTTWT
CD37 антитело (Заявка на патент США No. 14/447209)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSPYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARRAGDFDYWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:125) CDR1 (SEQ ID NO:126) - GSFSPYYWS CDR2 (SEQ ID NO:127) - EINHSGSTNYNPSLKS CDR3 (SEQ ID NO:128) - RAGDFDY	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYIFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:129) CDR1 (SEQ ID NO:130) - RASQSISSWLA CDR2 (SEQ ID NO:131) - KASSLES CDR3 (SEQ ID NO:132) - QQYNSYI

[0136] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD37, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 133.

SEQ ID NO:133

MSAQESCLSLIKYFLFVFNLFFFVLGSLIFCFGIWILIDKTSFVSFVGLAFVPLQIWSKVLAISGIFTMGIALLGCVGALKELRCLLGLYFGMLLLLFATQITLGILISTQRAQLERSLRDVVEKTIQKYGTNPEETAAEESWDYVQFQLRCCGWHYPQDWFQVLILRGNGSEAHRVPCSCYNLSATNDSTILDKVILPQLSRLGHLARSRHSADICAVPAESHIYREGCAQGLQKWLHNNLISIVGICLGVGLLELGFMTLSIFLCRNLDHVYNRLARYR

[0137] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD20. В Таблице 3 перечислены некоторые примерные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации, могут связываться с CD20.

Таблица 3
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи
Ритуксимаб	QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSAA (SEQ ID NO:134) CDR1 (SEQ ID NO:135) - GYTFTSY CDR2 (SEQ ID NO:136) - YPGNGD CDR3 (SEQ ID NO:137) - STYYGGDWYFNV	QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO:138) CDR1(SEQ ID NO:139) - SSVSYIH CDR2 (SEQ ID NO:140) - ATSNLAS CDR3 (SEQ ID NO:141) - QQWTSNPPT
Обинутузумаб	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYAFSYSWINWVRQAPGQGLEWMGRIFPGDGDTDYNGKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARNVFDGYWLVYWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:142) CDR1 (SEQ ID NO:143) - GYAFSYS CDR2 (SEQ ID NO:144) - FPGDGD CDR3 (SEQ ID NO:145) - NVFDGYWLVY	DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLVSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO:146) CDR1 (SEQ ID NO:147) - KSLLHSNGITYLY CDR2 (SEQ ID NO:148) - QMSNLVS CDR3 (SEQ ID NO:149) - QMSNLVS
Офатумумаб	EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYAMHWVRQAPGKGLEWVSTISWNSGSIGYADSVKGRFTISRDNAKKSLYLQMNSLRAEDTALYYCAKDIQYGNYYYGMDVWGQGTTVTVSSA (SEQ ID NO:150) CDR1 (SEQ ID NO:151) - GFTFNDY CDR2 (SEQ ID NO:152) - SWNSGS CDR3 (SEQ ID NO:153) - DIQYGNYYYGMDV	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPITFGQGTRLEIKR (SEQ ID NO:154) CDR1 (SEQ ID NO:155) - QSVSSYLA CDR2 (SEQ ID NO:156) - DASNRAT CDR3 (SEQ ID NO:157) - QQRSNWPIT
Велтузумаб	QVQLQQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYNMHWVKQAPGQGLEWIGAIYPGMGDTSYNQKFKGKATLTADESTNTAYMELSSLRSEDTAFYYCARSTYYGGDWYFDVWGQGTTVTVSSA (SEQ ID NO:158) CDR1 (SEQ ID NO:159) - GYTFTSY CDR2 (SEQ ID NO:160) - YPGMGD CDR3 (SEQ ID NO:161) - STYYGGDWYFDV	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGKAPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO:162) CDR1 (SEQ ID NO:163) - SSVSYIH CDR2 (SEQ ID NO:164) - ATSNLAS CDR3 (SEQ ID NO:165) - QQWTSNPPT
Окрелизумаб	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:166) CDR1 (SEQ ID NO:167) - GYTFTSY CDR2 (SEQ ID NO:168) - YPGNGD CDR3 (SEQ ID NO:169) - VVYYSNSYWYFDV	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:170) CDR1 (SEQ ID NO:171) - SSVSYMH CDR2 (SEQ ID NO:172) - APSNLAS CDR3 (SEQ ID NO:173) - QQWSFNPPT

[0138] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD20, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 174.

SEQ ID NO:174

MTTPRNSVNGTFPAEPMKGPIAMQSGPKPLFRRMSSLVGPTQSFFMRESKTLGAVQIMNGLFHIALGGLLMIPAGIYAPICVTVWYPLWGGIMYIISGSLLAATEKNSRKCLVKGKMIMNSLSLFAAISGMILSIMDILNIKISHFLKMESLNFIRAHTPYINIYNCEPANPSEKNSPSTQYCYSIQSLFLGILSVMLIFAFFQELVIAGIVENEWKRTCSRPKSNIVLLSAEEKKEQTIEIKEEVVGLTETSSQPKNEEDIEIIPIQEEEEEETETNFPEPPQDQESSPIENDSSP

[0139] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD19. В Таблице 4 перечислены прмеры пептидных последовательностей вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с CD19.

Таблица 4
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
Блинатумомаб	QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSSG (SEQ ID NO:175) CDR1 (SEQ ID NO:176) - GYAFSSY CDR2 (SEQ ID NO:177) - WPGDGD CDR3 (SEQ ID NO:178) - RETTTVGRYYYAMDY	DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:179) CDR1(SEQ ID NO:180) - QSVDYDGDSYLN CDR2 (SEQ ID NO:181) - DASNLVS CDR3 (SEQ ID NO:182) - QQSTEDPWT
Инебилизумаб (Патент США No. 8323653)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSSWMNWVRQAPGKGLEWVGRIYPGDGDTNYNAKFKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARSGFITTVRDFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:183) CDR1 (SEQ ID NO:184) - GFTFSSS CDR2 (SEQ ID NO:185) - YPGDGD CDR3 (SEQ ID NO:186) - SGFITTVRDFDY	EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCRASESVDTFGISFMNWFQQKPDQSPKLLIHEASNQGSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCQQSKEVPFTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:187) CDR1 (SEQ ID NO:188) - ESVDTFGISFMN CDR2 (SEQ ID NO:189) - EASNQGS CDR3 (SEQ ID NO:190) - QQSKEVPFT
CD19 антитело (Патент США No. 8524867)	EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:191) CDR1 (SEQ ID NO:192) - GYTFTSY CDR2 (SEQ ID NO:193) - NPYNDG CDR3 (SEQ ID NO:194) - GTYYYGTRVFDY	DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIKR (SEQ ID NO:195) CDR1 (SEQ ID NO:196) - KSLQNVNGNTYLY CDR2 (SEQ ID NO:197) - RMSNLNS CDR3 (SEQ ID NO:198) -MQHLEYPIT
CD19 антитело (Патент США No. 7968687)	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISTSGMGVGWIRQHPGKGLEWIGHIWWDDDKRYNPALKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARMELWSYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:199) CDR1 (SEQ ID NO:200) - GGSISTSGM CDR2 (SEQ ID NO:201) - WWDDD CDR3 (SEQ ID NO:202) - MELWSYYFDY	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSYMHWYQQKPGQAPRLLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDVAVYYCFQGSVYPFTFGQGTKLEIKR (SEQ ID NO:203) CDR1 (SEQ ID NO:204) - SSVSYMH CDR2 (SEQ ID NO:205) - DTSKLAS CDR3 (SEQ ID NO:206) - FQGSVYPFT

[0140] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD19, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 207.

SEQ ID NO:207

MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLVVKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR

[0141] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD22. В Таблице 5 перечислены прмеры пептидных последовательностей вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с CD22.

Таблица 5
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
Эпратузумаб (Патент США No. 5789554)	QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWLHWVRQAPGQGLEWIGYINPRNDYTEYNQNFKDKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAFYFCARRDITTFYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:208) CDR1 (SEQ ID NO:209) - GYTFTSY CDR2 (SEQ ID NO:210) - NPRNDY CDR3 (SEQ ID NO:211) - RDITTFY	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTMSCKSSQSVLYSANHKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCHQYLSSWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO:212) CDR1(SEQ ID NO:213) - QSVLYSANHKNYLA CDR2 (SEQ ID NO:214) - WASTRES CDR3 (SEQ ID NO:215) - HQYLSSWT
Инотузумаб (Патент США No.7355011)	QLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYRFTNYWIHWVRQAPGQGLEWIGGINPGNNYATYRRKFQGRVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCTREGYGNYGAWFAYWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:216) CDR1 (SEQ ID NO:217) - GYRFTNY CDR2 (SEQ ID NO:218) - NPGNNY CDR3 (SEQ ID NO:219) - EGYGNYGAWFAY	DVQVTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLANSYGNTFLSWYLHKPGKAPQLLIYGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQGTHQPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:220) CDR1 (SEQ ID NO:221) - QSLANSYGNTFLS CDR2 (SEQ ID NO:222) - GISNRFS CDR3 (SEQ ID NO:223) - LQGTHQPYT
Пинатузумаб (Патент США No. 8394607)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYEFSRSWMNWVRQAPGKGLEWVGRIYPGDGDTNYSGKFKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGSSWDWYFDVWGQGTLVTVSSA (SEQ ID NO:224) CDR1 (SEQ ID NO:225) - GYEFSRS CDR2 (SEQ ID NO:226) - YPGDGD CDR3 (SEQ ID NO:227) - DGSSWDWYFDV	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSIVHSVGNTFLEWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQGSQFPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:228) CDR1 (SEQ ID NO:229) - QSIVHSVGNTFLE CDR2 (SEQ ID NO:230) - KVSNRFS CDR3 (SEQ ID NO:231) - FQGSQFPYT

[0142] Антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD22, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 232.

SEQ ID NO:232

MHLLGPWLLLLVLEYLAFSDSSKWVFEHPETLYAWEGACVWIPCTYRALDGDLESFILFHNPEYNKNTSKFDGTRLYESTKDGKVPSEQKRVQFLGDKNKNCTLSIHPVHLNDSGQLGLRMESKTEKWMERIHLNVSERPFPPHIQLPPEIQESQEVTLTCLLNFSCYGYPIQLQWLLEGVPMRQAAVTSTSLTIKSVFTRSELKFSPQWSHHGKIVTCQLQDADGKFLSNDTVQLNVKHTPKLEIKVTPSDAIVREGDSVTMTCEVSSSNPEYTTVSWLKDGTSLKKQNTFTLNLREVTKDQSGKYCCQVSNDVGPGRSEEVFLQVQYAPEPSTVQILHSPAVEGSQVEFLCMSLANPLPTNYTWYHNGKEMQGRTEEKVHIPKILPWHAGTYSCVAENILGTGQRGPGAELDVQYPPKKVTTVIQNPMPIREGDTVTLSCNYNSSNPSVTRYEWKPHGAWEEPSLGVLKIQNVGWDNTTIACAACNSWCSWASPVALNVQYAPRDVRVRKIKPLSEIHSGNSVSLQCDFSSSHPKEVQFFWEKNGRLLGKESQLNFDSISPEDAGSYSCWVNNSIGQTASKAWTLEVLYAPRRLRVSMSPGDQVMEGKSATLTCESDANPPVSHYTWFDWNNQSLPYHSQKLRLEPVKVQHSGAYWCQGTNSVGKGRSPLSTLTVYYSPETIGRRVAVGLGSCLAILILAICGLKLQRRWKRTQSQQGLQENSSGQSFFVRNKKVRRAPLSEGPHSLGCYNPMMEDGISYTTLRFPEMNIPRTGDAESSEMQRPPPDCDDTVTYSALHKRQVGDYENVIPDFPEDEGIHYSELIQFGVGERPQAQENVDYVILKH

[0143] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD30. В Таблице 6 перечислены прмеры пептидных последовательностей вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с CD30.

Таблица 6
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
CD30 антитело (Патент США No. 7090843)	QIQLQQSGPEVVKPGASVKISCKASGYTFTDYYITWVKQKPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNEKFKGKATLTVDTSSSTAFMQLSSLTSEDTAVYFCANYGNYWFAYWGQGTQVTVSAA (SEQ ID NO:233) CDR1 (SEQ ID NO:234) - GYTFTDYYIT CDR2 (SEQ ID NO:235) - YPGSGN CDR3 (SEQ ID NO:236) - YGNYWFAY	DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDFDGDSYMNWYQQKPGQPPKVLIYAASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO:237) CDR1(SEQ ID NO:238) - QSVDFDGDSYMN CDR2 (SEQ ID NO:239) - AASNLES CDR3 (SEQ ID NO:240) - QQSNEDPWT
CD30 антитело (WO2016177846)	QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTTYTIHWVRQRPGHDLEWIGYINPSSGYSDYNQNFKGKTTLTADKSSNTAYMQLNSLTSEDSAVYYCARRADYGNYEYTWFAYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:241) CDR1 (SEQ ID NO:242) - GYTFTTYTIH CDR2 (SEQ ID NO:243) - YINPSSGYSDYNQNFKG CDR3 (SEQ ID NO:244) - RADYGNYEYTWFAY	DIVMTQSPKFMSTSVGDRVTVTCKASQNVGTNVAWFQQKPGQSPKVLIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFCQQYHTYPLTFGGGTKLEIN (SEQ ID NO:245) CDR1 (SEQ ID NO:246) - QNVGTNVA CDR2 (SEQ ID NO:247) - SASYRYS CDR3 (SEQ ID NO:248) - QQYHTYPLT
CD30 антитело (Патент США No. 8207303)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSAYYWSWIRQPPGKGLEWIGDINHGGGTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLNSVTAADTAVYYCASLTAYWGQGSLVTVSS (SEQ ID NO:249) CDR1 (SEQ ID NO:250) - AYYWS CDR2 (SEQ ID NO:251) - DINHGGGTNYNPSLKS CDR3 (SEQ ID NO:252) - LTAY	DIQMTQSPTSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLTWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYDSYPITFGQGTRLEIK (SEQ ID NO:253) CDR1 (SEQ ID NO:254) - RASQGISSWLT CDR2 (SEQ ID NO:255) - AASSLQS CDR3 (SEQ ID NO:256) - QQYDSYPIT
CD30 антитело (Патент США No. 8207303)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVASGFTFSNSWMSWVRQAPGKGLEWVANINEDGSEKFYVDSVKGRFTFSRDNAENSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVHWYFHLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:257) CDR1 (SEQ ID NO:258) - NSWMS CDR2 (SEQ ID NO:259) - NINEDGSEKFYVDSVKG CDR3 (SEQ ID NO:260) - VHWYFHL	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:261) CDR1 (SEQ ID NO:262) - RASQSVSSSYLA CDR2 (SEQ ID NO:263) - GASSRAT CDR3 (SEQ ID NO:264) - QQYGSSPWT
CD30 антитело (Патент США No. 8207303)	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTKYTPSLKSRVTISVDTSKHQFSLKLSSVTAADTAVYYCARETVYYFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO:265) CDR1 (SEQ ID NO:266) - GYYWS CDR2 (SEQ ID NO:267) - EINHSGSTKYTPSLKS CDR3 (SEQ ID NO:268) - ETVYYFDL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARLSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:269) CDR1 (SEQ ID NO:270) - RASQSVSSNLA CDR2 (SEQ ID NO:271) - DASNRAT CDR3 (SEQ ID NO:272) - QQRSNWPWT

[0144] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD30, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 273.

SEQ ID NO:273

MRVLLAALGLLFLGALRAFPQDRPFEDTCHGNPSHYYDKAVRRCCYRCPMGLFPTQQCPQRPTDCRKQCEPDYYLDEADRCTACVTCSRDDLVEKTPCAWNSSRVCECRPGMFCSTSAVNSCARCFFHSVCPAGMIVKFPGTAQKNTVCEPASPGVSPACASPENCKEPSSGTIPQAKPTPVSPATSSASTMPVRGGTRLAQEAASKLTRAPDSPSSVGRPSSDPGLSPTQPCPEGSGDCRKQCEPDYYLDEAGRCTACVSCSRDDLVEKTPCAWNSSRTCECRPGMICATSATNSCARCVPYPICAAETVTKPQDMAEKDTTFEAPPLGTQPDCNPTPENGEAPASTSPTQSLLVDSQASKTLPIPTSAPVALSSTGKPVLDAGPVLFWVILVLVVVVGSSAFLLCHRRACRKRIRQKLHLCYPVQTSQPKLELVDSRPRRSSTQLRSGASVTEPVAEERGLMSQPLMETCHSVGAAYLESLPLQDASPAGGPSSPRDLPEPRVSTEHTNNKIEKIYIMKADTVIVGTVKAELPEGRGLAGPAEPELEEELEADHTPHYPEQETEPPLGSCSDVMLSVEEEGKEDPLPTAASGK

[0145] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD52. В Таблице 7 перечислены прмеры пептидных последовательностей вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с CD52.

Таблица 7
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
CD52 антитело (Патент США No. 5846534)	QVQLQESGPGLVRPSQTLSLTCTVSGFTFTDFYMNWVRQPPGRGLEWIGFIRDKAKGYTTEYNPSVKGRVTMLVDTSKNQFSLRLSSVTAADTAVYYCAREGHTAAPFDYWGQGSLVTVSSA (SEQ ID NO:274) CDR1 (SEQ ID NO:275) - GFTFTDF CDR2 (SEQ ID NO:276) - RDKAKGYT CDR3 (SEQ ID NO:277) - EGHTAAPFDY	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYNTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCLQHISRPRTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO:278) CDR1(SEQ ID NO:279) - QNIDKYLN CDR2 (SEQ ID NO:280) - NTNNLQT CDR3 (SEQ ID NO:281) - LQHISRPRT
CD52 антитело (Патент США No. 9321841)	EVHLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYGMSWVRQAPGKGLELVAMMKTKGGRTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAIYYCASDGYYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO:282) CDR1 (SEQ ID NO:283) - RYGMS CDR2 (SEQ ID NO:284) - MMKTKGGRTYYPDSVKG CDR3 (SEQ ID NO:285) - DGYY	DVVMTQTPLSLSVTLGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLNWLQQRPGQSPRRLIYLVSKLDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCWQGTHLWTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO:286) CDR1 (SEQ ID NO:287) - KSSQSLLHSDGKTYLN CDR2 (SEQ ID NO:288) - LVSKLDS CDR3 (SEQ ID NO:289) - WQGTHLWT

[0146] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD52, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 290.

SEQ ID NO:290

[0147] В одном аспекте настоящее раскрытие относится к полиспецифическим связывающим белкам, которые связываются с рецептором NKG2D и рецептором CD16 на клетках-натуральных киллерах, и с антигеном CD133. В Таблице 8 перечислены прмеры пептидных последовательностей вариабельных доменов тяжелой цепи и вариабельных доменов легкой цепи, которые в комбинации могут связываться с CD133.

Таблица 8
Клоны	Аминокислотная последовательность вариабельного домена тяжелой цепи	Аминокислотная последовательность вариабельного домена легкой цепи
CD133 антитело (Патент США No. 8722858)	MDWTWSILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDFEMHWVRQAPGQGLEWMGDIDPGTGDTAYNLKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCALGAFVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:291) CDR1 (SEQ ID NO:292) - DFEMH CDR2 (SEQ ID NO:293) - DIDPGTGDTAYNLKFKG CDR3 (SEQ ID NO:294) - GAFVY	MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMADVVMTQSPLSLPVTFGEPASISCRSSQSLANSYGNTYLSWYLQKPGQSPQLLIYGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQGTHQPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:295) CDR1(SEQ ID NO:296) - RSSQSLANSYGNTYLS CDR2 (SEQ ID NO:297) - GISNRFS CDR3 (SEQ ID NO:298) - LQGTHQPYT
CD133 антитело (Патент США No. 8722858)	MDWTWSILFLVAAATGAHSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDFEMHWVRQAPGQGLEWMGDIDPGTGDTAYNLKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCALGAFVYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:299) CDR1 (SEQ ID NO:300) - DFEMH CDR2 (SEQ ID NO:301) - DIDPGTGDTAYNLKFKG CDR3 (SEQ ID NO:302) - GAFVY	MKYLLPTAAAGLLLLAAQPAMADVVMTQSPLSLPVTFGEQASISCRSSQSLANSYGNTYLSWYLQKPGQSPQLLIYGISNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQGTHQPYTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO:303) CDR1 (SEQ ID NO:304) - RSSQSLANSYGNTYLS CDR2 (SEQ ID NO:305) - GISNRFS CDR3 (SEQ ID NO:306) - LQGTHQPYT
CD133 антитело (WO2016154623)	METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIDLNNYNMQWVRQAPGKGLEWIGATFGSDSIYYATWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGGLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO:307) CDR1 (SEQ ID NO:308) - GIDLNNYNMQ CDR2 (SEQ ID NO:309) - ATFGSDSIYYATWA CDR3 (SEQ ID NO:310) - GGL	MDTRAPTQLLGLLLLWLPGVTFAQVLTQTASPVSAAVGATVTINCQSSQSVYNNNYLAWFQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVSSRFKGSGSGTQFALTISGVQCDDAGTYYCQGEFSCDSADCAAFGGGTEVVVKG (SEQ ID NO:311) CDR1 (SEQ ID NO:312) - QSSQSVYNNNYL CDR2 (SEQ ID NO:313) - RASTLAS CDR3 (SEQ ID NO:314) - QGEFSCDSADCAA
CD133 антитело (WO2016154623)	METGLRWLLLVAVLKGVQCQSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSRYAMSWVRQAPGKGLDWIGYIDIGGGAYYASWAKGRFTISETSTTVYLKVNSPTTEDTATYFCARGVANSDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO:315) CDR1 (SEQ ID NO:316) - GFSLSRYAMS CDR2 (SEQ ID NO:317) - YIDIGGGAYYASWA CDR3 (SEQ ID NO:318) - GVANSDI	MDTRAPTQLLGLLLLWLPGARCALVMTQTPSPVSAAVGGTVTINCQSSQSVFNNKWLSWYQQKPGQPPKLLIYFVSTLASGVPSRFKGSGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCQGSDYSSGWYSPFGGGTEVVVEG (SEQ ID NO:319) CDR1 (SEQ ID NO:320) - QSSQSVFNNKWLS CDR2 (SEQ ID NO:321) - FVSTLAS CDR3 (SEQ ID NO:322) - QGSDYSSGWYSP

[0148] Альтернативно, новые антигенсвязывающие сайты, которые связываются с CD133, могут быть идентифицированы путем скрининга на связывание с аминокислотной последовательностью, определенной SEQ ID NO: 323.

SEQ ID NO:323

MALVLGSLLLLGLCGNSFSGGQPSSTDAPKAWNYELPATNYETQDSHKAGPIGILFELVHIFLYVVQPRDFPEDTLRKFLQKAYESKIDYDKPETVILGLKIVYYEAGIILCCVLGLLFIILMPLVGYFFCMCRCCNKCGGEMHQRQKENGPFLRKCFAISLLVICIIISIGIFYGFVANHQVRTRIKRSRKLADSNFKDLRTLLNETPEQIKYILAQYNTTKDKAFTDLNSINSVLGGGILDRLRPNIIPVLDEIKSMATAIKETKEALENMNSTLKSLHQQSTQLSSSLTSVKTSLRSSLNDPLCLVHPSSETCNSIRLSLSQLNSNPELRQLPPVDAELDNVNNVLRTDLDGLVQQGYQSLNDIPDRVQRQTTTVVAGIKRVLNSIGSDIDNVTQRLPIQDILSAFSVYVNNTESYIHRNLPTLEEYDSYWWLGGLVICSLLTLIVIFYYLGLLCGVCGYDRHATPTTRGCVSNTGGVFLMVGVGLSFLFCWILMIIVVLTFVFGANVEKLICEPYTSKELFRVLDTPYLLNEDWEYYLSGKLFNKSKMKLTFEQVYSDCKKNRGTYGTLHLQNSFNISEHLNINEHTGSISSELESLKVNLNIFLLGAAGRKNLQDFAACGIDRMNYDSYLAQTGKSPAGVNLLSFAYDLEAKANSLPPGNLRNSLKRDAQTIKTIHQQRVLPIEQSLSTLYQSVKILQRTGNGLLERVTRILASLDFAQNFITNNTSSVIIEETKKYGRTIIGYFEHYLQWIEFSISEKVASCKPVATALDTAVDVFLCSYIIDPLNLFWFGIGKATVFLLPALIFAVKLAKYYRRMDSEDVYDDVETIPMKNMENGNNGYHKDHVYGIHNPVMTSPSQH

[0149] Внутри Fc-домена связывание CD16 опосредуется шарнирной областью и доменом CH2. Например, в человеческом IgG1 взаимодействие с CD16, главным образом, сосредоточено на аминокислотных остатках Asp 265 - Glu 269, Asn 297 - Thr 299, Ala 327 - Ile 332, Leu 234 - Ser 239 и углеводном остатке N-ацетил-D -глюкозамин в домене СН2 (см. Sondermann et al., Nature, 406 (6793): 267-273). На основе известных доменов мутации могут быть выбраны для усиления или уменьшения аффинности связывания с CD16, например, с использованием представленных на фаге библиотек или библиотек кДНК, представленных на поверхности дрожжей, или могут быть сконструированы на основе известной трехмерной структуры взаимодействия.

[0150] Сборка гетеродимерных тяжелых цепей антител может быть осуществлена путем экспрессии двух разных последовательностей тяжелых цепей антител в одной и той же клетке, что может привести к сборке гомодимеров каждой тяжелой цепи антитела, а также сборке гетеродимеров. Содействие преимущественной сборке гетеродимеров может быть достигнуто путем включения различных мутаций в домен СН3 каждой константной области тяжелой цепи антитела, как показано в US13/494870, US16/028850, US11/533709, US12/875015, US13/289934, US14/773418, US12/811207, US13/866756, US14/647480 и US14/830336. Например, могут быть сделаны мутации в домене CH3 на основе человеческого IgG1 и включения различных пар аминокислотных замен в первом полипептиде и втором полипептиде, которые позволяют этим двум цепям селективно гетеродимеризоваться друг с другом. Положения аминокислотных замен, показанные ниже, пронумерованы в соответствии с индексом EU, как в Kabat.

[0151] В одном сценарии аминокислотная замена в первом полипептиде заменяет исходную аминокислоту более крупной аминокислотой, выбранной из аргинина (R), фенилаланина (F), тирозина (Y) или триптофана (W) и, по меньшей мере, одна аминокислотная замена во втором полипептиде заменяет исходную аминокислоту(аминокислоты) меньшей аминокислотой(аминокислотами), выбранной из аланина (A), серина (S), треонина (T) или валина (V), так что более крупная аминокислотная замена (выпуклость) вписывается в поверхность более мелких аминокислотных замен (полость). Например, один полипептид может включать замену T366W, а другой может включать три замены, включая T366S, L368A и Y407V.

[0152] Вариабельный домен тяжелой цепи антитела по изобретению необязательно может быть связан с аминокислотной последовательностью, по меньшей мере, на 90% идентичной константной области антитела, такой как константная область IgG, включая шарнирные домены, домены СН2 и СН3 с доменом СН1 или без него. В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность константной области, по меньшей мере, на 90% идентична константной области человеческого антитела, такой как константная область человеческого IgG1, константная область IgG2, константная область IgG3 или константная область IgG4. В некоторых других вариантах осуществления аминокислотная последовательность константной области, по меньшей мере, на 90% идентична константной области антитела другого млекопитающего, такого как кролик, собака, кошка, мышь или лошадь. Одна или более мутаций могут быть включены в константную область по сравнению с константной областью человеческого IgG1, например, в Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411 и/или K439. Типичные замены включают, например, Q347E, Q347R, Y349S, Y349K, Y349T, Y349D, Y349E, Y349C, T350V, L351K, L351D, L351Y, S354C, E356K, E357Q, E357L, E357W, K360E, K360W, Q362E, S364K, S364E, S364H, S364D, T366V, T366I, T366L, T366M, T366K, T366W, T366S, L368E, L368A, L368D, K370S, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F, K392D, K392E, T394F, T394W, D399R, D399K, D399V, S400K, S400R, D401K, F405A, F405T, Y407A, Y407I, Y407V, K409F, K409W, K409D, T411D, T411E, K439D, и K439E.

[0153] В некоторых вариантах осуществления мутации, которые могут быть включены в CH1 константной области человеческого IgG1, могут находиться в аминокислоте V125, F126, P127, T135, T139, A140, F170, P171 и/или V173. В некоторых вариантах осуществления мутации, которые могут быть включены в Cκ константной области человеческого IgG1, могут находиться в аминокислоте E123, F116, S176, V163, S174 и/или T164.

[0154] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в Таблице 9.

Таблица 9
	Первый полипептид	Второй полипептид
Набор 1	S364E/F405A	Y349K/T394F
Набор 2	S364H/D401K	Y349T/T411E
Набор 3	S364H/T394F	Y349T/F405A
Набор 4	S364E/T394F	Y349K/F405A
Набор 5	S364E/T411E	Y349K/D401K
Набор 6	S364D/T394F	Y349K/F405A
Набор 7	S364H/F405A	Y349T/T394F
Набор 8	S364K/E357Q	L368D/K370S
Набор 9	L368D/K370S	S364K
Набор 10	L368E/K370S	S364K
Набор 11	K360E/Q362E	D401K
Набор 12	L368D/K370S	S364K/E357L
Набор 13	K370S	S364K/E357Q
Набор 14	F405L	K409R
Набор 15	K409R	F405L

[0155] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующих наборов замен, показанных в Таблице 10.

Таблица 10
	Первый полипептид	Второй полипептид
Набор 1	K409W	D399V/F405T
Набор 2	Y349S	E357W
Набор 3	K360E	Q347R
Набор 4	K360E/K409W	Q347R/D399V/F405T
Набор 5	Q347E/K360E/K409W	Q347R/D399V/F405T
Набор 6	Y349S/K409W	E357W/D399V/F405T

[0156] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующего набора замен, показанного в Таблице 11.

Таблица 11
	Первый полипептид	Второй полипептид
Набор 1	T366K/L351K	L351D/L368E
Набор 2	T366K/L351K	L351D/Y349E
Набор 3	T366K/L351K	L351D/Y349D
Набор 4	T366K/L351K	L351D/Y349E/L368E
Набор 5	T366K/L351K	L351D/Y349D/L368E
Набор 6	E356K/D399K	K392D/K409D

[0157] Альтернативно, по меньшей мере, одна аминокислотная замена в каждой полипептидной цепи может быть выбрана из Таблицы 12.

Таблица 12
Первый полипептид	Второй полипептид
L351Y, D399R, D399K, S400K, S400R, Y407A, Y407I, Y407V	T366V, T366I, T366L, T366M, N390D, N390E, K392L, K392M, K392V, K392F K392D, K392E, K409F, K409W, T411D и T411E

[0158] Альтернативно, по меньшей мере, одна аминокислотная замена может быть выбрана из следующего набора замен в Таблице 13, где положение(я), указанное в столбце «Первый полипептид», заменено любой известной отрицательно заряженной аминокислотой, и положение(я), указанное в столбце «Второй полипептид», заменено любой известной положительно заряженной аминокислотой.

Таблица 13
Первый полипептид	Второй полипептид
K392, K370, K409, или K439	D399, E356, или E357

[0159] Альтернативно, по меньшей мере, одна аминокислотная замена может быть выбрана из следующего набора в Таблице 14, где положение(я), указанное в столбце «Первый полипептид», заменено любой известной положительно заряженной аминокислотой, и указанное положение(я), указанное в столбце «Второй полипептид», заменено любой известная отрицательно заряженной аминокислотой.

Таблица 14
Первый полипептид	Второй полипептид
D399, E356, или E357	K409, K439, K370, или K392

[0160] Альтернативно, аминокислотные замены могут быть выбраны из следующего набора в Таблице 15.

Таблица 15
Первый полипептид	Второй полипептид
T350V, L351Y, F405A, и Y407V	T350V, T366L, K392L, и T394W

[0161] Альтернативно или дополнительно, структурная стабильность гетеромультимерного белка может быть повышена путем введения S354C либо на первой, либо на второй полипептидной цепи, и Y349C на противоположной полипептидной цепи, которая образует искусственный дисульфидный мостик внутри интерфейса двух полипептидов.

[0162] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в положении T366, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотная последовательность константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, L368 и Y407.

[0163] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, L368 и Y407, и где аминокислота последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в положении T366.

[0164] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411 и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411.

[0165] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, E357, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411 и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из E357, K360, Q362, S364, L368, K370, T394, D401, F405 и T411.

[0166] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, D399, S400 и Y407 и где амино кислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, N390, K392, K409 и T411.

[0167] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из T366, N390, K392, K409 и T411 и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, D399, S400 и Y407.

[0168] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, Y349, K360 и K409, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, E357, D399 и F405.

[0169] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, E357, D399 и F405, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, K360, Q347 и K409.

[0170] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из K370, K392, K409 и K439, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из D356, E357 и D399.

[0171] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из D356, E357 и D399, и где аминокислота последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из K370, K392, K409 и K439.

[0172] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, E356, T366 и D399, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, L351, L368, K392 и K409.

[0173] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Y349, L351, L368, K392 и K409, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из L351, E356, T366 и D399.

[0174] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой S354C, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотная последовательность константной области IgG1 заменой Y349C.

[0175] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой Y349C, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотная последовательность константной области IgG1 заменой S354C.

[0176] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами K360E и K409W, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается из аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами O347R, D399V и F405T.

[0177] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами O347R, D399V и F405T, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами K360E и K409W.

[0178] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T366W, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T366S, T368A и Y407V.

[0179] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T366S, T368A и Y407V, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменой T366W.

[0180] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, L351Y, F405A и Y407V и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, T366L, K392L и T394W.

[0181] В некоторых вариантах осуществления аминокислотная последовательность одной полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, T366L, K392L и T394W, и где аминокислотная последовательность другой полипептидной цепи константной области антитела отличается от аминокислотной последовательности константной области IgG1 заменами T350V, L351Y, F405A и Y407V.

[0182] Полиспецифические белки, описанные выше, могут быть получены с использованием технологии рекомбинантных ДНК, хорошо известных специалисту в данной области. Например, первая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая первую тяжелую цепь иммуноглобулина, может быть клонирована в первый экспрессирующий вектор; вторая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая вторую тяжелую цепь иммуноглобулина, может быть клонирована во второй экспрессирующий вектор; третью последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь иммуноглобулина, можно клонировать в третий экспрессирующий вектор; первый, второй и третий экспрессирующие векторы могут стабильно трансфецироваться вместе в клетки-хозяева для продуцирования мультимерных белков.

[0183] Для достижения наибольшего выхода полиспецифического белка можно изучить различные соотношения первого, второго и третьего экспрессирующего вектора, чтобы определить оптимальное соотношение для трансфекции в клетки-хозяева. После трансфекции отдельные клоны могут быть выделены для генерации банка клеток с использованием методов, известных в данной области, таких как лимитированное разведение, ИФА, FACS, микроскопия или Clonepix.

[0184] Клоны можно культивировать в условиях, подходящих для масштабирования для биореактора и поддержания экспрессии полиспецифического белка. Полиспецифические белки могут быть выделены и очищены с использованием методов, известных в данной области, включая центрифугирование, глубинную фильтрацию, лизис клеток, гомогенизацию, замораживание-оттаивание, аффинную очистку, гель-фильтрацию, ионообменную хроматографию, обменную хроматографию гидрофобного взаимодействия и смешанный режим хроматографии.

II. Характеристика полиспецифических белков

[0185] Описанные в настоящем документе полиспецифические белки включают NKG2D-связывающий сайт, CD16-связывающий сайт и опухолеспецифический антиген, выбранный из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133. В некоторых вариантах осуществления полиспецифичные белки связываются с клетками, экспрессирующими NKG2D и/или CD16, такими как NK-клетки, и опухолевые клетки, экспрессирующие любой из вышеуказанных антигенов одновременно. Связывание полиспецифических белков с NK-клетками повышает активность NK-клеток в отношении разрушения опухолевых клеток.

[0186] В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки связываются с опухолеспецифическим антигеном, выбранным из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133, с аффинностью, подобной аффинности моноклонального антитела, имеющего тот же соответствующий антигенсвязывающий сайт. В некоторых вариантах осуществления полиспецифические белки более эффективны в уничтожении опухолевых клеток, экспрессирующих антиген(ы), чем соответствующие моноклональные антитела.

[0187] В определенных вариантах осуществления описанные в настоящем документе полиспецифические белки, которые включают NKG2D-связывающий сайт и сайт связывания опухолеспецифического антигена, выбранного из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133, активируют первичные человеческие NK-клетки при совместном культивировании с клетками, экспрессирующими CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133, соответственно. Активация NK-клеток отмечена увеличением дегрануляции CD107a и продуцированием цитокинов IFN-γ. Кроме того, по сравнению с соответствующим моноклональным антителом полиспецифические белки могут демонстрировать превосходную активацию человеческих NK-клеток в присутствии клеток, экспрессирующих антиген CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 или CD133.

[0188] В некоторых вариантах осуществления описанные в настоящем документе полиспецифические белки, которые включают NKG2D-связывающий сайт и сайт связывания опухолеспецифического антигена, выбранного из CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133, усиливают активность покоящихся и IL-2-активированных человеческих NK-клеток при их совместном культивировании с клетками, экспрессирующими CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133, соответственно.

[0189] В некоторых вариантах осуществления по сравнению с соответствующим моноклональным антителом, которое связывается с CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 или CD133, полиспецифические белки обладают преимуществом в нацеливании на опухолевые клетки, которые экспрессируют CD37, CD20. CD19, CD22, CD30, CD52 и CD133 на среднем и низком уровне, соответственно.

III. Терапевтические применения

[0190] Изобретение относится к способам лечения злокачественного новообразования с использованием полиспецифического связывающего белка, описанного в настоящем документе, и/или к фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе. Способы могут быть использованы для лечения различных видов злокачественных новообразований, экспрессирующих CD37, CD20, CD19, CD22, CD30, CD52 или CD133. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD37-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), волосато-клеточный лейкоз (HCL), неходжкинская лимфома, или острый миелоидный лейкоз. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD20-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть хронический лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома или И-клеточные злокачественные новообразования. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD19-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть хроническими лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, острый лимфобластный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования, множественная миелома или острый миелоидный лейкоз. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD22-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть хронический лимфоцитарный лейкоз, неходжкинская лимфома, фолликулярная лимфома, острый лимфобластный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования или волосатоклеточный лейкоз. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD30-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть лимфома Ходжкина, анапластическая крупноклеточная лимфома, кожная Т-клеточная лимфома, периферическая Т-клеточная лимфома, Т-клеточный лейкоз-лимфома взрослых, диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, неходжкинская лимфома или эмбрионально-клеточная карцинома. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD52-нацеленных полиспецифических связывающих белков, могут быть хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), кожная Т-клеточная лимфома, периферическая Т-клеточная лимфома и Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, В-клеточные злокачественные новообразования, неходжкинская лимфома, лимфома Ходжкина, анапластическая крупноклеточная лимфома, Т-клеточный лейкоз-лимфома взрослых, новообразования зрелых Т клеток/клеток-натуральных киллеров (NK) или тимома. Примерами злокачественных новообразований, подлежащих лечению с помощью CD133-нацеленных полиспецифических связывающих белков могут быть рак молочной железы, рак толстой кишки, рак предстательной железы, рак печени, рак поджелудочной железы, рак легкого, рак яичников, рак почки, рак матки, рак половых клеток яичка, острый миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, глиома, глиобластома или плоскоклеточный рак головы и шеи.

[0191] В некоторых других вариантах осуществления злокачественное новообразование, подлежащее лечению, включает рак головного мозга, рак прямой кишки и рак матки. Еще в других вариантах осуществления злокачественное новообразование представляет собой плоскоклеточную карциному, аденокарциному, мелкоклеточную карциному, меланому, нейробластому, саркому (например, ангиосаркому или хондросаркому), рак гортани, рак околоушной железы, рак желчных путей, рак щитовидной железы, акрально-лентигинозную меланому, актинический кератоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, аденоидно-кистозную карциному, аденому, аденосаркому, железисто-плоскоклеточную карциному, рак анального канала, анальный рак, ректальный рак, астроцитарную опухоль, карциному бартолиновой железы, базальноклеточную карциному, рак печени, рак костей, рак костного мозга, рак бронхов, карциному бронхиальной железы, карциноид, холангиокарциному, хондосаркому, хориодпапиллому/карциному, хронический лимфолейкоз, хронический миелоидный лейкоз, светлоклеточную карциному, рак соединительной ткани, цистаденому, рак пищеварительной системы, рак двенадцатиперстной кишки, рак эндокринной системы, опухоль эндодермальной пазухи, гиперплазию эндометрия, стромальную саркому эндометрия, эндометриоидную аденокарциному, эндотелиальный рак, эпендимальный рак, эпителиально-клеточный рак, саркому Юинга, рак глаз и глазной орбиты, рак женских половых органов, фокальную нодулярную гиперплазию, рак желчного пузыря, рак полости желудка, рак дна желудка, гастриному, глиобластому, глюкагоному, рак сердца, гемангибластомы, гемангиоэндотелиому, гемангиомы, печеночную аденому, печеночный аденоматоз, гепатобилиарный рак, гепатоцеллюлярную карциному, болезнь Ходжкина, рак подвздошной кишки, инсулиному, интраэпителиальную неоплазию, интраэпителиальную плоскоклеточную неоплазию, рак внутрипеченочных желчных протоков, инвазивную плоскоклеточную карциному, рак тонкой кишки, рак соединительной ткани, саркому Капоши, рак малого таза, крупноклеточный рак, рак толстой кишки, лейомиосаркому, лентиго-меланому, лимфому, рак мужских половых органов, злокачественную меланому, злокачественные мезотелиальные опухоли, медуллобластому, медуллоэпителиому, менингеальный рак, мезотелиальный рак, метастатический рак, рак полости рта, мукоэпидермоидную карциному, множественную миелому, рак мышц, рак носового канала, рак нервной системы, нейроэпителиальную аденокарциному, нодулярную меланому, неэпителиальный рак кожи, неходжкинскую лимфому, овсяно-клеточный рак, олигодендроглиальный рак, рак полости рта, остеосаркому, папиллярную серозную аденокарциному, опухоли гипофиза, плазмоцитому, псевдосаркому, легочную бластому, рак прямой кишки, почечно-клеточный рак, рак дыхательной системы, ретинобластому, рабдомиосаркому, саркому, серозную карциному, рак пазухи, рак кожи, мелкоклеточный рак, рак тонкого кишечника, рак мягких тканей, соматостатин-секретирующую опухоль, рак позвоночника, плоскоклеточную карциному, рак поперечно-полосатых мышц, субмезотелиальный рак, меланому поверхностного распространения, Т-клеточный лейкоз, рак языка, недифференцированный рак, рак мочеточника, рак мочеиспускательного канала, рак мочевого пузыря, рак мочеполовой системы, рак шейки матки, рак тела матки, увеальную меланому, рак влагалища, бородавчатый рак, Випому, рак вульвы, хорошо дифференцированную карциному или опухоль Вильмса.

[0192] В некоторых других вариантах осуществления злокачественное новообразование, подлежащее лечению, представляет собой неходжкинскую лимфому, такую как В-клеточная лимфома или Т-клеточная лимфома. В некоторых вариантах осуществления неходжкинская лимфома представляет собой В-клеточную лимфому, такую как диффузная крупноклеточная В-клеточная лимфома, первичная средостенная В-клеточная лимфома, фолликулярная лимфома, малкоклеточная лимфоцитарная лимфома, лимфома мантийных клеток, В-клеточная лимфома маргинальной зоны, B-клеточная лимфома экстранодальной маргинальной зоны, B-клеточная лимфома узловой маргинальной зоны, B-клеточная лимфома маргинальной зоны селезенки, лимфома Беркитта, лимфоплазмоцитарная лимфома, волосатоклеточный лейкоз или лимфома первичной центральной нервной системы (ЦНС). В некоторых других вариантах осуществления неходжкинская лимфома представляет собой Т-клеточную лимфому, такую как лимфобластная лимфома предшественников Т-клеток, периферическая Т-клеточная лимфома, кожная Т-клеточная лимфома, ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома, экстранодальная лимфома клеток-натуральных киллеров/Т-клеток, узловая Т-клеточная лимфома, кожная Т-клеточная лимфома, Т-клеточная лимфома энтеропатического типа, Т-клеточная лимфома типа подкожного панникулита, анапластическая крупноклеточная лимфома или узловая Т-клеточная лимфома.

IV. Комбинированная терапия

[0193] Еще один аспект изобретения предусматривает комбинированную терапию. Полиспецифические связывающие белки, описанные в настоящем документе, используются в комбинации с дополнительными терапевтическими агентами для лечения злокачественного новообразования.

[0194] Типичные терапевтические агенты, которые могут быть использованы в качестве части комбинированной терапии при лечении злокачественного новообразования, включают, например, облучение, митомицин, третиноин, рибомустин, гемцитабин, винкристин, этопозид, кладрибин, митобронит, метотрексат, доксорубицин, карбоквон, пентостатин, нитракрин, зиностатин, цетрореликс, летрозол, ралтитрексед, даунорубицин, фадрозол, фотемустин, тималфазин, собузоксан, недаплатин, цитарабин, бикалутамид, винорелбина, веснаринон, аминоглютетимид, амсакрин, проглумид, эллиптиния ацетат, кетансерин, доксифлуридин, этретинат, изотретиноин, стрептозоцин, нимустин, виндезины, флутамид, дрогенил, бутоцин, кармофур, разоксан, сизофилан, карбоплатин, митолактол, тегафур, ифосфамид, преднимустин, пицибанил, левамизол, тенипозид, импросульфан, эноцитабин, лизурид, оксимететолон, тамоксифен, прогестерон, мепитиостан, эпитиостанол, форместан, интерферон альфа, интерферон-2 альфа, интерферон-бета, интерферон-гамма, колониестимулирующий фактор-1, колониестимулирующий фактор-2, денилейкин дифитокс, интерлейкин-2, фактор высвобождения лютеинизирующего гормона и вариации вышеупомянутых агентов, которые могут проявлять дифференциальное связывание с их родственным рецептором, а также увеличивать или уменьшать период полужизни в сыворотке.

[0195] Дополнительный класс агентов, которые могут быть использованы в качестве части комбинированной терапии при лечении злокачественного новообразования, относится к ингибиторам иммунной контрольной точки. Типичные ингибиторы иммунной контрольной точки включают агенты, которые ингибируют один или более из (i) антигена 4 (CTLA-4), ассоциированного с цитотоксическими Т-лимфоцитами, (ii) белка 1 программированной клеточной смерти (PD1), (iii) PDL1, (iv) LAG-3, (v) B7-H3, (vi) B7-H4 и (vii) TIM3. Ингибитор CTLA4 ипилимумаб был одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США для лечения меланомы.

[0196] Другие агенты, которые могут быть использованы в качестве части комбинированной терапии при лечении злокачественного новообразования, представляют собой агенты моноклональных антител, которые нацелены на мишени, отличные от контрольных точек (например, герцептин), и нецитотоксические агенты (например, ингибиторы тирозинкиназы).

[0197] Другие категории противоопухолевых агентов включают, например: (i) ингибитор, выбранный из ингибитора ALK, ингибитора ATR, антагониста A2A, ингибитора репарации исключения оснований, ингибитора Bcr-Abl тирозинкиназы, ингибитора тирозинкиназы Брутона, ингибитора CDC7, ингибитора CHK1, ингибитора циклин-зависимой киназы, ингибитора DNA-PK, ингибитора как DNA-PK, так и mTOR, ингибитора DNMT1, ингибитора DNMT1 плюс 2-хлор-дезоксиаденозин, ингибитора HDAC, ингибитора сигнального пути Hedgehog, ингибитора IDO, ингибитора JAK, ингибитора mTOR, ингибитора MEK, ингибитора MELK, ингибитора MTH1, ингибитора PARP, ингибитора фосфоинозитид-3-киназы, ингибитора обоих PARP1 и DHODH, протеосомного ингибитора, ингибитора топоизомеразы-II, ингибитора тирозинкиназы, ингибитора VEGFR и ингибитора WEE1; (ii) агонист OX40, CD137, CD40, GITR, CD27, HVEM, TNFRSF25 или ICOS; и (iii) цитокин, выбранный из IL-12, IL-15, GM-CSF и G-CSF.

[0198] Белки по изобретению также можно использовать в качестве дополнения к хирургическому удалению первичного поражения.

[0199] Количество полиспецифического связывающего белка и дополнительного терапевтического агента и относительные сроки введения могут быть выбраны для достижения желаемого комбинированного терапевтического эффекта. Например, при назначении комбинированной терапии пациенту, нуждающемуся в таком введении, терапевтические агенты в комбинации или фармацевтическую композицию или композиции, содержащие терапевтические агенты, можно вводить в любом порядке, таком как, например, последовательно, одновременно, вместе, одновременно и тому подобное. Кроме того, например, полиспецифический связывающий белок может быть введен в течение времени, когда дополнительный терапевтический агент(ы) оказывает свое профилактическое или терапевтическое действие, или наоборот.

V. Фармацевтические композиции

[0200] Настоящее раскрытие также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат терапевтически эффективное количество белка, описанного в настоящем документе. Композиция может быть приготовлена для использования в различных системах доставки лекарственных средств. Одно или более физиологически приемлемых вспомогательных веществ или носителей также могут быть включены в композицию для подходящего состава. Подходящие составы для использования в настоящем раскрытии есть в Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, PA, 17th ed., 1985. Для краткого обзора способов доставки лекарственных средств см., например, Langer (Science 249: 1527-1533, 1990).

[0201] Композиция для внутривенной доставки лекарственного средства по настоящему изобретению может содержаться в пакете, ручке или шприце. В некоторых вариантах осуществления пакет может быть соединен с каналом, содержащим трубку и/или иглу. В определенных вариантах осуществления состав может представлять собой лиофилизированный состав или жидкий состав. В определенных вариантах осуществления состав может быть заморожен-высушен (лиофилизирован) и может содержаться примерно в 12-60 флаконах. В некоторых вариантах осуществления композиция может быть лиофилизирована, и 45 мг лиофилизированной композиции может содержаться в одном флаконе. В некоторых вариантах осуществления примерно 40-100 мг лиофилизированной композиции может содержаться в одном флаконе. В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный состав из 12, 27 или 45 флаконов объединяют для получения терапевтической дозы белка в составе внутривенного лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления композиция может представлять собой жидкую композицию и храниться в концентрации примерно от 250 мг/флакон примерно до 1000 мг/флакон. В определенных вариантах осуществления композиция может представлять собой жидкую композицию и храниться в концентрации примерно 600 мг/флакон. В некоторых вариантах осуществления композиция может представлять собой жидкую композицию и храниться в концентрации примерно 250 мг/флакон.

[0202] Белок может существовать в жидкой водной фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективное количество белка в буферном растворе с образованием композиции.

[0203] Эти композиции могут быть стерилизованы обычными методами стерилизации или могут быть стерильно отфильтрованы. Полученные водные растворы могут быть упакованы для использования как есть или лиофилизированы, причем лиофилизированный препарат объединяют со стерильным водным носителем перед введением. РН препаратов обычно составляет от 3 до 11, более предпочтительно от 5 до 9 или от 6 до 8, и наиболее предпочтительно от 7 до 8, например от 7 до 7,5. Полученные композиции в твердой форме могут быть упакованы в несколько однодозовых единиц, каждая из которых содержит фиксированное количество вышеупомянутого агента или агентов. Композиция в твердой форме также может быть упакована в контейнер для изменяемого количества.

[0204] В некоторых вариантах осуществления настоящее раскрытие относится к составу с увеличенным сроком хранения, включающему белок по настоящему изобретению, в сочетании с маннитом, моногидратом лимонной кислоты, цитратом натрия, дигидратом динатрийфосфата, дигидратом дигидрофосфата натрия, хлоридом натрия, полисорбатом 80, водой и гидроксидом натрия.

[0205] В некоторых вариантах осуществления готовят водный состав, включающий белок по настоящему изобретению в рН-буферном растворе. Буфер данного изобретения может иметь рН в диапазоне примерно от 4 примерно до 8, например, примерно от 4,5 примерно до 6 или примерно от 4,8 примерно до 5,5, или может иметь рН примерно от 5 примерно до 5,2. Диапазоны, промежуточные по отношению к указанным выше значениям pH, также должны быть частью этого раскрытия. Например, диапазоны значений, использующие комбинацию любого из приведенных выше значений в качестве верхнего и/или нижнего пределов, предназначены для включения. Примеры буферов, которые будут контролировать рН в этом диапазоне, включают ацетатные (например, ацетат натрия), сукцинатные (такие как сукцинат натрия), глюконатные, гистидиновые, цитратные и другие буферы органических кислот.

[0206] В определенных вариантах осуществления композиция включает буферную систему, которая содержит цитрат и фосфат для поддержания рН в диапазоне примерно от 4 примерно до 8. В некоторых вариантах осуществления диапазон рН может составлять примерно от 4,5 примерно до 6, или примерно от рН 4,8 примерно до 5,5, или в диапазоне рН примерно от 5 примерно до 5,2. В некоторых вариантах осуществления буферная система включает моногидрат лимонной кислоты, цитрат натрия, дигидрат динатрийфосфата и/или дигидрат дигидрофосфата натрия. В некоторых вариантах осуществления буферная система включает в себя примерно 1,3 мг/мл лимонной кислоты (например, 1,305 мг/мл), примерно 0,3 мг/мл цитрата натрия (например, 0,305 мг/мл), примерно 1,5 мг/мл динатрийфосфата, дигидрат (например, 1,53 мг/мл), примерно 0,9 мг/мл дигидрата дигидрофосфата натрия (например, 0,86) и примерно 6,2 мг/мл хлорида натрия (например, 6,165 мг/мл). В некоторых вариантах осуществления буферная система включает от 1 до 1,5 мг/мл лимонной кислоты, от 0,25 до 0,5 мг/мл цитрата натрия, от 1,25 до 1,75 мг/мл дигидрата динатрийфосфата, от 0,7 до 1,1 мг/мл дигидрата дигидрофосфата натрия, и от 6 до 6,4 мг/мл хлорида натрия. В некоторых вариантах осуществления pH композиции доводят с помощью гидроксида натрия.

[0207] Полиол, который действует как тонизирующий агент и может стабилизировать антитело, также может быть включен в состав. Полиол добавляют к составу в количестве, которое может варьироваться в зависимости от желаемой изотоничности состава. В некоторых вариантах осуществления водная композиция может быть изотонической. Количество добавляемого полиола также может быть изменено по отношению к молекулярной массе полиола. Например, может быть добавлено меньшее количество моносахарида (например, маннита) по сравнению с дисахаридом (таким как трегалоза). В некоторых вариантах осуществления полиол, который может быть использован в составе в качестве средства для повышения тоничности, представляет собой маннит. В определенных вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно от 5 примерно до 20 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация маннита может составлять примерно 7,5-15 мг/мл. В некоторых вариантах концентрация маннита может составлять примерно 10-14 мг/мл. В определенных вариантах концентрация маннита может составлять примерно 12 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления полиол сорбит может быть включен в состав.

[0208] Детергент или поверхностно-активное вещество также могут быть добавлены в состав. Типичные детергенты включают неионогенные детергенты, такие как полисорбаты (например, полисорбаты 20, 80 и т. д.) или полоксамеры (например, полоксамер 188). Количество добавляемого детергента таково, что оно уменьшает агрегацию антитела в составе и/или сводит к минимуму образование частиц в составе, и/или уменьшает адсорбцию. В определенных вариантах осуществления состав может включать поверхностно-активное вещество, которое представляет собой полисорбат. В некоторых вариантах осуществления композиция может содержать детергент полисорбат 80 или Tween 80. Tween 80 - это термин, используемый для описания полиоксиэтилен (20) сорбитанмоноолеата (см. Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th ed., 1996). В некоторых вариантах осуществления композиция может содержать примерно от 0,1 примерно до 10 мг/мл полисорбата 80 или примерно от 0,5 примерно до 5 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления в композицию можно добавлять примерно 0,1% полисорбата 80.

[0209] В некоторых вариантах осуществления белковый продукт по настоящему изобретению приготовлен в виде жидкой композиции. Жидкий состав может быть представлен в концентрации 10 мг/мл во флаконе любого типа USP/Ph Eur типа I 50R, закрытом резиновой пробкой и запечатанном с использованием алюминиевого обжимного уплотнения. Пробка может быть изготовлена из эластомера, соответствующего USP и Ph Eur. В некоторых вариантах осуществления флаконы могут быть заполнены 61,2 мл раствора белкового продукта, чтобы обеспечить экстрагируемый объем 60 мл. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция может быть разбавлена 0,9% солевым раствором.

[0210] В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция по изобретению может быть приготовлена в виде раствора с концентрацией 10 мг/мл в комбинации с сахаром на стабилизирующем уровне. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция может быть приготовлена в водном носителе. В некоторых вариантах осуществления стабилизатор может быть добавлен в количестве, не превышающем того, которое может привести к вязкости, нежелательной или непригодной для внутривенного введения. В некоторых вариантах осуществления сахар может представлять собой дисахариды, например сахарозу. В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция также может включать один или более из буферного агента, поверхностно-активного вещества и консерванта.

[0211] В некоторых вариантах осуществления pH жидкого состава может быть установлено путем добавления фармацевтически приемлемой кислоты и/или основания. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая кислота может представлять собой соляную кислоту. В некоторых вариантах осуществления основание может представлять собой гидроксид натрия.

[0212] В дополнение к агрегации, дезамидирование является распространенным вариантом продукта пептидов и белков, который может возникать во время ферментации, сбора/осветления клеток, очистки, хранения лекарственного вещества/лекарственного продукта и во время анализа образца. Дезамидирование представляет собой потерю NH₃ из белка с образованием промежуточного сукцинимида, который может подвергаться гидролизу. Промежуточный сукцинимид приводит к снижению массы исходного пептида на 17 дальтон. Последующий гидролиз приводит к увеличению массы на 18 дальтон. Выделение промежуточного сукцинимида затруднено из-за нестабильности в водных условиях. По существу, дезамидирование обычно определяется как увеличение массы на 1 дальтон. Дезамидирование аспарагина приводит к получению аспарагиновой или изоаспарагиновой кислоты. Параметры, влияющие на скорость дезамидирования, включают pH, температуру, диэлектрическую постоянную растворителя, ионную силу, первичную последовательность, локальную конформацию полипептида и третичную структуру. Аминокислотные остатки, соседствующие с Asn в пептидной цепи, влияют на скорости дезамидирования. Gly и Ser, следующие за Asn в белковых последовательностях, приводят к более высокой чувствительности к дезамидированию.

[0213] В некоторых вариантах осуществления жидкая композиция по настоящему изобретению может быть сохранена в условиях pH и влажности для предотвращения дезаминирования белкового продукта.

[0214] Представляющий интерес водный носитель в настоящем описании является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и полезным для приготовления жидкой композиции. Иллюстративные носители включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-буферный солевой раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

[0215] Консервант необязательно может быть добавлен в составы для уменьшения бактериального действия. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоразового (многодозового) состава.

[0216] Внутривенные (IV) составы могут быть предпочтительным путем введения в конкретных случаях, например, когда пациент находится в больнице после трансплантации, получая все лекарственные средства посредством IV пути. В некоторых вариантах осуществления жидкую композицию разбавляют 0,9% раствором хлорида натрия перед введением. В некоторых вариантах осуществления разбавленный лекарственный продукт для инъекций является изотоническим и пригодным для введения путем внутривенной инфузии.

[0217] Соли и/или буферы являются фармацевтически приемлемыми и получены из различных известных кислот (неорганических и органических) с металлами или аминами, образующими основание. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой фосфатный буфер. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой глицинатный, карбонатный, цитратный буферы, и в этом случае ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоиона.

[0218] Консервант необязательно может быть добавлен в составы для уменьшения бактериального действия. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоразового (многодозового) состава.

[0219] Представляющий интерес водный носитель в настоящем описании является фармацевтически приемлемым (безопасным и нетоксичным для введения человеку) и полезным для приготовления жидкой композиции. Иллюстративные носители включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-буферный солевой раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

[0220] Белок по настоящему раскрытию может существовать в лиофилизированной композиции, включающей белки и лиопротектор. Лиопротектором может быть сахар, например дисахариды. В некоторых вариантах осуществления лиопротектор может представлять собой сахарозу или мальтозу. Лиофилизированный состав может также включать один или более из буферного агента, поверхностно-активного вещества, наполнителя и/или консерванта.

[0221] Количество сахарозы или мальтозы, полезное для стабилизации лиофилизированного лекарственного продукта, может быть в массовом соотношении по меньшей мере 1:2 белка к сахарозе или мальтозе. В некоторых вариантах осуществления массовое соотношение белок/сахароза или мальтоза может составлять от 1:2 до 1:5.

[0222] В некоторых вариантах осуществления pH композиции перед лиофилизацией может быть установлено путем добавления фармацевтически приемлемой кислоты и/или основания. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая кислота может представлять собой соляную кислоту. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемым основанием может быть гидроксид натрия.

[0223] Перед лиофилизацией pH раствора, содержащего белок по настоящему изобретению, можно доводить в диапазоне от 6 до 8. В некоторых вариантах осуществления диапазон pH для лиофилизированного лекарственного продукта может составлять от 7 до 8.

[0224] В некоторых вариантах осуществления соль или буферные компоненты могут быть добавлены в количестве 10 мМ - 200 мМ. Соли и/или буферы являются фармацевтически приемлемыми и получены из различных известных кислот (неорганических и органических) с металлами, образующими основание, или аминами. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой фосфатный буфер. В некоторых вариантах осуществления буфер может представлять собой глицинатный, карбонатный, цитратный буферы, и в этом случае ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоиона.

[0225] В некоторых вариантах осуществления может быть добавлен «наполнитель». «Наполнитель» представляет собой соединение, которое добавляет массу к лиофилизированной смеси и способствует физической структуре лиофилизированной таблетки (например, облегчает производство по существу однородной лиофилизированной таблетки, которая поддерживает структуру с открытыми порами). Иллюстративные наполнители включают маннит, глицин, полиэтиленгликоль и сорбит. Лиофилизированные составы по настоящему изобретению могут содержать такие наполнители.

[0226] Консервант необязательно может быть добавлен в составы для уменьшения бактериального действия. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоразового (многодозового) состава.

[0227] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный лекарственный продукт может состоять из водного носителя. Представляющий интерес водный носитель настоящего описания является фармацевтически приемлемым (например, безопасным и нетоксичным для введения человеку) и полезным для приготовления жидкой композиции после лиофилизации. Иллюстративные разбавители включают стерильную воду для инъекций (SWFI), бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), рН-буферный раствор (например, фосфатно-буферный солевой раствор), стерильный физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы.

[0228] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный лекарственный продукт по настоящему изобретению восстанавливается либо стерильной водой для инъекций, USP (SWFI), либо 0,9% инъекцией хлорида натрия, USP. Во время восстановления лиофилизированный порошок растворяется в растворе.

[0229] В некоторых вариантах осуществления лиофилизированный белковый продукт по настоящему изобретению состоит из примерно 4,5 мл воды для инъекций и разбавляется 0,9% солевым раствором (раствор хлорида натрия).

[0230] Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях могут варьироваться так, чтобы получить количество активного ингредиента, которое эффективно для достижения искомого терапевтического ответа для конкретного пациента, композиции и режима введения, без токсичности для пациента.

[0231] Конкретная доза может представлять собой унифицированную дозу для каждого пациента, например, 50-5000 мг белка. Альтернативно, доза для пациента может быть адаптирована к приблизительной массе тела или площади поверхности пациента. Другие факторы в определении подходящей дозировки могут включать заболевание или состояние, которое подлежит лечению или предотвращению, тяжесть заболевания, способ введения, а также возраст, пол и состояние здоровья пациента. Специалисты в данной области обычно проводят дальнейшее уточнение расчетов, необходимых для определения подходящей дозировки для лечения, особенно в свете информации о дозировке и анализах, раскрытых в настоящем документе. Дозировка также может быть определена путем использования известных анализов для определения доз, используемых в сочетании с соответствующими данными доза-ответ. Дозировка индивидуального пациента может быть скорректирована по мере наблюдения за развитием заболевания. Уровни в крови нацеливающей конструкции или комплекса у пациента могут быть измерены, чтобы увидеть, нужно ли корректировать дозировку для достижения или поддержания эффективной концентрации. Фармакогеномика может быть использована для определения того, какие нацеливающие конструкции и/или комплексы и их дозы наиболее вероятно будут эффективны для данного индивидуума (Schmitz et al., Clinica Chimica Acta 308: 43-53, 2001; Steimeret al., Clinica Chimica Acta 308: 33-41, 2001).

[0232] Как правило, дозы на основе массы тела, составляют примерно от 0,01 мкг примерно до 100 мг на кг массы тела, например, примерно от 0,01 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 10 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 1 мкг/кг массы тела, примерно от 0,01 мкг примерно до 0,1 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 10 мкг/кг массы тела, примерно от 0,1 мкг примерно до 1 мкг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 1 мкг примерно до 10 мкг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 10 мкг примерно до 50 мкг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 50 мкг примерно до 100 мкг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 100 мкг примерно до 1 мг/кг массы тела, примерно от 1 мг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 1 мг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 1 мг примерно до 10 мг/кг массы тела, примерно от 10 мг примерно до 100 мг/кг массы тела, примерно от 10 мг примерно до 50 мг/кг массы тела, примерно от 50 мг примерно до 100 мг/кг массы тела.

[0233] Дозы могут вводиться один или более раз в день, еженедельно, ежемесячно или ежегодно, или даже один раз каждые 2-20 лет. Специалисты в данной области техники могут легко оценить частоту повторения для дозирования на основании измеренного времени удерживания и концентраций нацеливающей конструкции или комплекса в жидкостях или тканях организма. Введение по настоящему изобретению может быть внутривенным, внутриартериальным, внутрибрюшинным, внутримышечным, подкожным, внутриплевральным, интратекальным, внутриполостным, путем перфузии через катетер или путем прямой внутриклеточной инъекции. Это может осуществляться один или более раз в день, один или более раз в неделю, один или более раз в месяц и один или более раз в год.

[0234] Вышеприведенное описание описывает множество аспектов и вариантов осуществления изобретения. В заявке на патент конкретно рассматриваются все комбинации и перестановки аспектов и вариантов осуществления.

ПРИМЕРЫ

[0235] Настоящее изобретение теперь в целом описано, оно будет более понятно с помощью ссылок на следующие примеры, которые включены только в целях иллюстрации некоторых аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения и не предназначены для ограничения изобретения каким-либо образом.

Пример 1 - NKG2D-связывающие домены связываются с NKG2D

NKG2D-связывающие домены связываются с очищенным рекомбинантным NKG2D

[0236] Последовательности нуклеиновых кислот эктодоменов NKG2D человека, мыши или яванской макаки были слиты с последовательностями нуклеиновых кислот, кодирующими Fc-домены IgG1 человека, и введены в клетки млекопитающих для экспрессии. После очистки слитые белки NKG2D-Fc были адсорбированы в лунках микропланшетов. После блокирования лунок бычьим сывороточным альбумином для предотвращения неспецифического связывания, NKG2D-связывающие домены титровали и добавляли в лунки, на которые предварительно адсорбировали слитые белки NKG2D-Fc. Связывание первичного антитела определяли с использованием вторичного антитела, которое конъюгировано с пероксидазой хрена и специфически распознает легкую цепь каппа человека, чтобы избежать перекрестной реактивности Fc. 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (TMB), субстрат для пероксидазы хрена, добавляли в лунки для визуализации сигнала связывания, чье поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. Клон NKG2D-связывающего домена, контроль изотипа или положительный контроль (содержащий вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104 или антимышиные клоны NKG2D MI-6 и CX-5, доступные в eBioscience) добавляли в каждую лунку.

[0237] Контроль изотипа показал минимальное связывание с рекомбинантными белками NKG2D-Fc, в то время как положительный контроль наиболее сильно связывался с рекомбинантными антигенами. NKG2D-связывающие домены, продуцируемые всеми клонами, демонстрировали связывание с рекомбинантными белками NKG2D-Fc человека, мыши и яванской макаки, хотя и с разными аффинностями от клона к клону. Как правило, каждый анти-NKG2D клон связывался с рекомбинантным NKG2D-Fc человека (ФИГ. 3) и яванской макаки (ФИГ. 4) со сходной аффинностью, но с более низкой аффинностью с рекомбинантным NKG2D-Fc мыши (ФИГ. 5).

NKG2D-связывающие домены связываются с клетками, экспрессирующими NKG2D

[0238] Клеточные линии мышиной лимфомы EL4 были сконструированы для экспрессии химерного антигенного рецептора NKG2D и сигнального домена CD3-дзета человека или мыши. NKG2D-связывающий клон, изотипический контроль или положительный контроль использовали в концентрации 100 нМ для окрашивания внеклеточного NKG2D, экспрессированного на клетках EL4. Связывание антител определяли с использованием вторичных антител против человеческого IgG, конъюгированных с флуорофором. Клетки анализировали с помощью проточной цитометрии и рассчитывали превышение относительно фона (fold-over-background) (FOB) с использованием средней интенсивности флуоресценции (MFI) NKG2D-экспрессирующих клеток по сравнению с родительскими клетками EL4.

[0239] NKG2D-связывающие домены, продуцируемые всеми клонами, связывались с клетками EL4, экспрессирующими NKG2D человека и мыши. Антитела положительного контроля (содержащие вариабельные домены тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104 или анти-мышиные клоны NKG2D MI-6 и CX-5, доступные на eBioscience) давали лучший сигнал связывания FOB. Аффинность связывания NKG2D для каждого клона была сходной между клетками, экспрессирующими NKG2D человека (ФИГ. 6) и мыши (ФИГ. 7).

Пример 2 - NKG2D-связывающие домены блокируют связывание природного лиганда с NKG2D

Конкуренция с ULBP-6

[0240] Рекомбинантные белки NKG2D-Fc человека адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для снижения неспецифического связывания. Насыщенную концентрацию ULBP-6-His-биотин добавляли в лунки с последующим добавлением клонов NKG2D-связывающего домена. После 2-часовой инкубации лунки промывали и ULBP-6-His-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми NKG2D-Fc, детектировали стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена и субстратом TMB. Поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc рассчитывали по проценту ULBP-6-His-биотина, который блокировался от связывания с белками NKG2D-Fc в лунках. Антитело положительного контроля (содержащее вариабельные доменя тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104) и различные NKG2D-связывающие домены блокировали связывание ULBP-6 с NKG2D, в то время как изотипический контроль показал небольшую конкуренцию с ULBP-6 (ФИГ. 8).

[0241] Последовательность ULBP-6 представлена SEQ ID NO: 108

MAAAAIPALLLCLPLLFLLFGWSRARRDDPHSLCYDITVIPKFRPGPRWCAVQGQVDEKTFLHYDCGNKTVTPVSPLGKKLNVTMAWKAQNPVLREVVDILTEQLLDIQLENYTPKEPLTLQARMSCEQKAEGHSSGSWQFSIDGQTFLLFDSEKRMWTTVHPGARKMKEKWENDKDVAMSFHYISMGDCIGWLEDFLMGMDSTLEPSAGAPLAMSSGTTQLRATATTLILCCLLIILPCFILPGI (SEQ ID NO:108)

Конкуренция с MICA

[0242] Рекомбинантные белки MICA-Fc человека адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для уменьшения неспецифического связывания. NKG2D-Fc-биотин добавляли в лунки, за которыми следовало добавление NKG2D-связывающих доменов. После инкубации и промывания NKG2D-Fc-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми MICA-Fc, детектировали с использованием субстрата стрептавидин-HRP и TMB. Поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc рассчитывали по проценту MICA-Fc-биотина, который блокировался от связывания с белками MICA-Fc в лунках. Антитело положительного контроля (содержащее вариабельные домены тяжелой и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104) и различные NKG2D-связывающие домены блокировали связывание MICA с NKG2D, в то время как изотипический контроль показал небольшую конкуренцию с MICA (ФИГ. 9).

Конкуренция с Rae-1 дельта

[0243] Рекомбинантный мышиный Rae-1дельта-Fc (приобретенный у R & D Systems) адсорбировали в лунках микропланшета, и лунки блокировали бычьим сывороточным альбумином для снижения неспецифического связывания. Мышиный NKG2D-Fc-биотин добавляли в лунки с последующим добавлением NKG2D-связывающих доменов. После инкубации и промывания NKG2D-Fc-биотин, который оставался связанным с лунками, покрытыми Rae-1дельта-Fc, детектировали с использованием субстрата стрептавидин-HRP и TMB. Поглощение измеряли при 450 нМ и корректировали при 540 нМ. После вычитания фона специфическое связывание NKG2D-связывающих доменов с белками NKG2D-Fc рассчитывали по проценту NKG2D-Fc-биотина, который блокировался от связывания с белками Rae-1дельта-Fc в лунках. Положительный контроль (содержащий вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи, выбранные из SEQ ID NO: 101-104, или анти-мышиные клоны NKG2D MI-6 и CX-5, доступные на eBioscience) и различные клоны NKG2D-связывающего домена блокировали связывание Rae-1-дельта с мышиным NKG2D, в то время как антитело изотипического контроля демонстрировало небольшую конкуренцию с Rae-1дельта (ФИГ. 10).

Пример 3 - клоны NKG2D-связывающего домена активируют NKG2D

[0244] Последовательности нуклеиновой кислоты NKG2D человека и мыши были слиты с последовательностями нуклеиновой кислоты, кодирующими сигнальный домен CD3 дзета, с получением конструкций химерного антигенного рецептора (CAR). Конструкции NKG2D-CAR затем клонировали в ретровирусный вектор с использованием сборки Гибсона и трансфицировали в клетки expi293 с получением ретровируса. Клетки EL4 инфицировали вирусами, содержащими NKG2D-CAR вместе с 8 мкг/мл полибрена. Через 24 часа после инфекции уровни экспрессии NKG2D-CAR в клетках EL4 анализировали проточной цитометрией и отбирали клоны, которые экспрессируют на высоком уровне NKG2D-CAR на клеточной поверхности.

[0245] Чтобы определить, активируют ли NKG2D-связывающие домены NKG2D, их адсорбировали в лунки микропланшета, и клетки NKG2D-CAR EL4 культивировали в лунках, покрытых фрагментом антитела, в течение 4 часов в присутствии брефельдина-A и монензина. Внутриклеточное продуцирование TNF-α, индикатора активации NKG2D, анализировали с помощью проточной цитометрии. Процент TNF-α-положительных клеток был нормализован по отношению к клеткам, обработанным положительным контролем. Все NKG2D-связывающие домены активировали как NKG2D человека (ФИГ. 11), так и мыши (ФИГ. 12).

Пример 4 - NKG2D-связывающие домены активируют NK-клетки

Первичные человеческие NK-клетки

[0246] Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкотромбоцитарного слоя периферической крови с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки (CD3^-CD56⁺) выделяли с использованием отрицательного отбора с помощью магнитных гранул из PBMC, и чистота выделенных NK-клеток обычно составляла> 95%. Затем выделенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг/мл IL-2, в течение 24-48 часов, после чего их переносили в лунки микропланшета, на котором были адсорбированы NKG2D-связывающие домены, и культивировали в среде, содержащей конъюгированный с флуорофором антитело против CD107a, брефелдин-А и монензин. После культивирования NK-клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител, конъюгированных с флуорофором, против CD3, CD56 и IFN-γ. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3^-CD56⁺ для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества CD107a/IFN-γ-двойных положительных клеток свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет рекрутирования двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора. NKG2D-связывающие домены и положительный контроль (например, вариабельный домен тяжелой цепи, представленный SEQ ID NO: 101 или SEQ ID NO: 103, и вариабельный домен легкой цепи, представленный SEQ ID NO: 102 или SEQ ID NO: 104) показали более высокий процент NK-клеток, становящихся CD107a⁺ и IFN-γ⁺, чем изотипический контроль (ФИГ. 13 и ФИГ. 14 представляют данные двух независимых экспериментов, в каждом из которых использовали разных доноров PBMC для приготовления NK-клеток).

Первичные мышиные NK-клетки

[0247] Селезенки получали от мышей C57Bl/6 и измельчали через сито для клеток 70 мкм для получения суспензии отдельных клеток. Клетки осаждали и ресуспендировали в лизирующем буфере ACK (приобретенном у Thermo Fisher Scientific # A1049201; 155 мМ хлорида аммония, 10 мМ бикарбоната калия, 0,01 мМ EDTA) для удаления эритроцитов. Оставшиеся клетки культивировали с 100 нг/мл hIL-2 в течение 72 часов, а затем собирали и готовили для выделения NK-клеток. NK-клетки (CD3^-NK1.1⁺) затем выделяли из клеток селезенки с использованием метода отрицательного истощения с использованием магнитных гранул с чистотой> 90%. Очищенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг/мл mIL-15, в течение 48 часов, после чего их переносили в лунки микропланшета, на котором были адсорбированы NKG2D-связывающие домены, и культивировали в среде, содержащей конъюгированный с флуорофором антитело против CD107a, брефелдин-А и монензин. После культивирования в лунках, покрытых NKG2D-связывающим доменом, NK-клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител, конъюгированных с флуорофором, против CD3, NK1.1 и IFN-γ. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3^-NK1.1⁺ для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества CD107a/IFN-γ-двойных положительных клеток свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет рекрутирования двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора. NKG2D-связывающие домены и положительный контроль (выбранный из анти-мышиных NKG2D-клонов MI-6 и CX-5, доступных в eBioscience) показали более высокий процент NK-клеток, становящихся CD107a⁺ и IFN-γ⁺, чем изотипический контроль (ФИГ. 15 и ФИГ. 16 представляют два независимых эксперимента, в каждом из которых использовали разных мышей для приготовления NK-клеток).

Пример 5 - NKG2D-связывающие домены обеспечивают цитотоксичность опухолевых клеток-мишеней

[0248] Анализы активации первичных NK-клеток человека и мыши демонстрируют повышенный уровень маркеров цитотоксичности для NK-клеток после инкубации с NKG2D-связывающими доменами. Чтобы определить, приводит ли это к усилению лизиса опухолевых клеток, был использован клеточный анализ, в котором каждый NKG2D-связывающий домен превращался в моноспецифическое антитело. Fc-область использовали в качестве одного нацеливающего фрагмента, тогда как Fab-область (NKG2D-связывающий домен) действовала как другой нацеливающий фрагмент для активации NK-клеток. Клетки THP-1, которые имеют человеческое происхождение и экспрессируют на высоком уровне Fc-рецепторы, использовали в качестве опухолевой мишени и использовали набор для цитотоксичности Perkin Elmer DELFIA. Клетки THP-1 метили реагентом BATDA и ресуспендировали в количестве 10⁵/мл в культуральной среде. Меченые клетки THP-1 затем объединяли с антителами NKG2D и выделенными мышиными NK-клетками в лунках микропланшета при 37°С в течение 3 часов. После инкубации удаляли 20 мкл культурального супернатанта, смешивали с 200 мкл раствора европия и инкубировали при встряхивании в течение 15 минут в темноте. Флуоресценцию измеряли во времени с помощью планшет-ридера PheraStar, оборудованного модулем флуоресценции с разрешением по времени (возбуждение 337 нм, излучение 620 нм), и специфический лизис рассчитывали в соответствии с инструкциями набора.

[0249] Положительный контроль, ULBP-6 - естественный лиганд для NKG2D, показал повышенный специфический лизис клеток-мишеней THP-1 мышиными NK-клетками. Антитела NKG2D также увеличивали специфический лизис клеток-мишеней THP-1, тогда как антитело изотипического контроля показало снижение специфического лизиса. Пунктирная линия указывает на специфический лизис клеток THP-1 мышиными NK-клетками без добавления антител (ФИГ. 17).

Пример 6 - антитела NKG2D показывают высокую термостабильность

[0250] Температуру плавления NKG2D-связывающих доменов анализировали с использованием дифференциальной сканирующей флуориметрии. Экстраполированные кажущиеся температуры плавления являются высокими по сравнению с типичными антителами IgG1 (ФИГ. 18).

Пример 7. - Синергическая активация человеческих NK-клеток путем перекрестного связывания NKG2D и CD16.

Анализ активации первичных человеческих NK-клеток

[0251] Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкотромбоцитарного слоя периферической крови с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки очищали из РВМС с использованием отрицательных магнитных гранул (StemCell # 17955). NK-клетки были> 90% CD3^-CD56⁺, как определено проточной цитометрией. Затем клетки наращивали 48 часов в среде, содержащей 100 нг/мл hIL-2 (Peprotech # 200-02), перед использованием в анализах активации. Антитела наносили на 96-луночный планшет с плоским дном в концентрации 2 мкг/мл (анти-CD16, Biolegend # 302013) и 5 мкг/мл (анти-NKG2D, R & D # MAB139) в 100 мкл стерильного PBS в течение ночи при 4°С с последующим тщательным промыванием лунок для удаления избытка антител. Для оценки дегрануляции IL-2-активированные NK-клетки ресуспендировали в количестве 5×10⁵ клеток/мл в культуральной среде, дополненной 100 нг/мл hIL2 и 1 мкг/мл APC-конъюгированного анти-CD107a mAb (Biolegend # 328619). Затем на планшеты, покрытые антителами, добавляли 1×10⁵ клеток/лунку. Ингибиторы транспорта белка Брефельдин А (BFA, Biolegend # 420601) и Монензин (Biolegend # 420701) добавляли в конечном разведении 1:1000 и 1:270, соответственно. Посеянные клетки инкубировали в течение 4 часов при 37°С в 5% СО2. Для внутриклеточного окрашивания IFN-γ NK-клетки метили анти-CD3 (Biolegend # 300452) и анти-CD56 mAb (Biolegend # 318328), а затем фиксировали и пермеабилизовали и метили анти-IFN-γ mAb (Biolegend # 506507). NK-клетки анализировали на экспрессию CD107a и IFN-γ методом проточной цитометрии после гейтинга живых CD56⁺CD3^-клеток.

[0252] Чтобы исследовать относительную эффективность комбинации рецепторов, проводили перекрестное связывание NKG2D или CD16 и совместное связывание обоих рецепторов посредством стимулирования в состоянии, связанном с планшетом. Как показано на ФИГ. 19 (ФИГ. 19A-19C), комбинированное стимулирование CD16 и NKG2D приводило к сильно повышенным уровням CD107a (дегрануляция) (ФИГ. 19A) и/или к продуцированию IFN-γ (ФИГ. 19B). Пунктирные линии представляют аддитивный эффект отдельных стимулирований каждого рецептора.

[0253] Уровни CD107a и внутриклеточное продуцирование IFN-γ активированных IL-2 NK-клеток анализировали через 4 часа стимулирования, связанного с планшетом, с помощью анти-CD16, анти-NKG2D или комбинацией обоих моноклональных антител. Графики показывают среднее (n=2) ± SD. ФИГ. 19А демонстрирует уровень CD107a; ФИГ. 19В демонстрирует уровень IFN-γ; ФИГ 19С демонстрирует уровень продуцирования CD107a и IFN-γ. Данные, показанные на ФИГ. 19А-19С, представляют пять независимых экспериментов с использованием пяти разных здоровых доноров.

Пример 8. Оценка связывания TriNKET с экспрессируемым в клетках человеческим NKG2D.

[0254] Клеточные линии мышиной лимфомы EL4 были сконструированы для экспрессии NKG2D человека. Триспецифические связывающие белки (TriNKET), каждый из которых содержит NKG2D-связывающий домен, опухолеспецифический антигенсвязывающий домен (такой как CD20-связывающий домен) и Fc-домен, который связывается с CD16, как показано на ФИГ. 1, тестировали на их аффинность по отношению к NKG2D, экспрессированном на клетках EL4. TriNKET разводили до 20 мкг/мл, а затем разводили последовательно. Связывание TriNKET с NKG2D детектировали с использованием вторичных антител против человеческого IgG, конъюгированных с флуорофором. Затем клетки анализировали проточной цитометрией и строили гистограмму. Протестированные TriNKET включают CD26-TriNKET-CD20 (anNKG2D-связывающий домен из клона ADI-28226 и CD20-связывающий домен, полученный из ритуксимаба), и F04-TriNKET-CD20 (anNKG2D-связывающий домен из клона ADI-29404 и CD20-связывающий домен, полученный из ритуксимаба). Профили связывания CD26-TriNKET-CD20 (пунктирная линия) и F04-TriNKET-CD20 (сплошная линия) показаны на ФИГ. 35 вместе с неокрашенным образцом. Результат демонстрирует разные уровни связывания с NKG2D клонами ADI-28226 и ADI-29404.

Пример 9. Оценка связывания TriNKET с экспрессируемыми в клетках человеческими опухолевыми антигенами.

[0255] Клеточную линию лимфомы человека Raji, экспрессирующую CD20, использовали для анализа связывания TriNKET с опухолеспецифическим антигеном CD20. TriNKET инкубировали с клетками, и связывание детектировали с использованием вторичных антител против человеческого IgG, конъюгированных с флуорофором. Клетки анализировали проточной цитометрией и строили гистограмму. Как показано на ФИГ. 36, F04-TriNKET-CD20 и CD26-TriNKET-CD20 одинаково хорошо связываются с CD20.

Пример 10 - TriNKET активируют NK-клетки

[0256] Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли из лейкотромбоцитарного слоя периферической крови с использованием центрифугирования в градиенте плотности. NK-клетки (CD3^-CD56⁺) выделяли с использованием отрицательного отбора с помощью магнитных гранул из PBMC, и чистота выделенных NK-клеток обычно составляла> 90%. Выделенные NK-клетки культивировали в среде, содержащей 100 нг/мл IL-2 для активации, или оставляли на ночь без цитокина. IL-2-активированные NK-клетки использовали в течение 24-48 часов после активации. Покоящиеся NK-клетки всегда использовали в тот же день после инкубации.

[0257] Опухолевые клетки человека, экспрессирующие опухолевый антиген, собирали и ресуспендировали в культуральной среде в концентрации 2×10⁶/мл. Моноклональные антитела или TriNKET, нацеленные на опухолевый антиген, разводили в культуральной среде. Покоящиеся и/или активированные NK-клетки собирали, промывали и ресуспендировали в количестве 2×10⁶/мл в культуральной среде. Затем опухолевые клетки смешивали с моноклональными антителами/TriNKET и активировали NK-клетки в присутствии IL-2. Брефельдин-А и монензин также добавляли в смешанную культуру для блокирования транспорта белка из клетки для внутриклеточного окрашивания цитокинов. Конъюгированное с флуорофором антитело против CD107a добавляли к смешанной культуре и культуру инкубировали в течение 4 часов, прежде чем образцы были подготовлены для анализа FACS с использованием конъюгированных с флуорофором антител против CD3, CD56 и IFN-γ. Окрашивание CD107a и IFN-γ анализировали в клетках CD3^-CD56⁺ для оценки активации NK-клеток. Увеличение количества CD107a/IFN-γ-двойных положительных клеток свидетельствует о лучшей активации NK-клеток за счет рекрутирования двух активирующих рецепторов, а не одного рецептора.

[0258] Совместное культивирование первичных человеческих NK-клеток с CD20-положительными человеческими опухолевыми клетками приводило к TriNKET-опосредованной активации первичных человеческих NK-клеток (ФИГ. 37). TriNKET, нацеленные на CD20 (например, C26-TriNKET-CD20 и F04-TriNKET-CD20), опосредовали активацию человеческих NK-клеток, совместно культивированных с CD20-положительными клетками Raji, о чем свидетельствует увеличение дегрануляции CD107a и продуцирования цитокинов IFN-γ (ФИГ. 37). По сравнению с моноклональным антителом ритуксимабом оба TriNKET (например, C26-TriNKET-CD20 и F04-TriNKET-CD20) продемонстрировали превосходную активацию человеческих NK-клеток.

Пример 11 - TriNKET усиливают цитотоксичность NK-клеток человека по отношению к опухолевым клеткам

[0259] Чтобы проверить способность NK-клеток человека лизировать опухолевые клетки в присутствии TriNKET, в качестве эффекторных клеток использовали клетки KHYG-1 линии NK-клеток человека, трансдуцированные для экспрессии CD16a-158v человека. Все анализы на цитотоксичность готовили следующим образом: опухолевые клеточные линии человека, экспрессирующие интересующую мишень (например, CD20-положительные клетки Raji), собирали из культуры, клетки промывали PBS и ресуспендировали в ростовой среде при 10⁶/мл для мечения с помощью реагента BATDA (Perkin Elmer AD0116). Следовали инструкциям производителя по мечению клеток-мишеней. После мечения клетки промывали 3 раза PBS и ресуспендировали в количестве 0,5-1,0×10⁵/мл в культуральной среде. Для приготовления фоновых лунок отбирали аликвоту меченых клеток, и клетки извлекали из среды. 100 мкл среды осторожно добавляли в лунки в трех экземплярах, чтобы не повредить осажденные клетки. 100 мкл BATDA-меченных клеток добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета. Лунки предохраняли для спонтанного высвобождения из клеток-мишеней, и лунки были подготовлены для максимального лизиса клеток-мишеней путем добавления 1% Triton-X. Моноклональные антитела или TriNKET против интересующей опухоли-мишени разводили в культуральной среде и добавляли в каждую лунку 50 мкл разведенных моноклональных антител или TriNKET. Клетки KHYG-1-CD16-158V промывали и ресуспендировали в количестве 10⁵-2,0×10⁶/мл в культуральной среде в зависимости от желаемого отношения эффекторных клеток к клеткам-мишеням. 50 мкл NK-клеток добавляли в каждую лунку планшета, чтобы получить в общей сложности 200 мкл культурального объема. Планшет инкубировали при 37°C с 5% CO2 в течение 2-3 часов, прежде чем проводить анализ.

[0260] После культивирования в течение 2-3 часов планшет извлекали из инкубатора, и клетки осаждали центрифугированием при 200g в течение 5 минут. 20 мкл культурального супернатанта переносили в чистый микропланшет, предоставленный производителем, и 200 мкл раствора европия при комнатной температуре добавляли в каждую лунку. Планшет защищали от света и инкубировали на шейкере для планшетов при 250 об/мин в течение 15 минут. Планшет считывался с использованием приборов Victor 3 или SpectraMax i3X. % специфического лизиса рассчитывали следующим образом: %Специфического лизиса = ((Экспериментальное высвобождение - спонтанное высвобождение)/(Максимальное высвобождение - спонтанное высвобождение)) * 100%.

[0261] TriNKET, нацеленные на CD20, опосредуют цитотоксичность NK-клеток человека в отношении CD20-положительных клеток В-клеточной лимфомы Raji. Как показано на ФИГ. 39, оба TriNKET (C26-TriNKET-CD20 и F04-TriNKET-CD20) были способны усиливать цитотоксическую активность покоящихся человеческих эффекторных клеток KHYG-1-CD16a-158V по отношению к опухолевым клеткам дозозависимым образом. Клетки KHYG-1-CD16a-158V были слабо активны в отношении клеток Raji без добавления TriNKET. Пунктирная линия указывает на специфический лизис клеток-мишеней Raji без добавления TriNKET.

[0262] F04-TriNKET-CD20, который опосредует цитотоксичность NK-клеток в отношении CD20-экспрессирующих опухолевых клеток, сравнивали с родительским моноклональным антителом ритуксимабом. F04-TriNKET-CD20 или моноклональное антитело против CD20 ритуксимаб смешивали с клетками KHYG-1-CD16a-158V (клетками KHYG-1, трансдуцированными для экспрессии CD16a-158V человека) и клетками Raji, а цитотоксичность, опосредованную NK-клетками, измеряли, как описано выше. ФИГ. 39 демонстрирует, что F04-TriNKET-CD20 повышает эффективность и способность к максимальному уничтожению цитотоксичности NK-клеток в отношении клеток Raji по сравнению с моноклональным антителом против CD20. Пунктирная линия указывает на специфический лизис клеток-мишеней Raji клетками KHYG-1-CD16a-158V без добавления TriNKET или моноклонального антитела против CD20.

Включение ссылкой

[0263] Полное раскрытие каждого из патентных документов и научных статей, упомянутых в настоящем документе, включено в качестве ссылки для всех целей.

Эквиваленты

[0264] Изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без отклонения от его сущности или существенных характеристик. Таким образом, вышеприведенные варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не ограничивающие изобретение, описанное в настоящем документе. Рамки изобретения, таким образом, указаны с помощью формулы изобретения, а не с помощью вышеуказанного описания, и подразумевается, что все изменения, которые подпадают под значение и интервал эквивалентности пунктов формулы изобретения, охвачены настоящим изобретением.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ADIMAB, LLC.

<120> БЕЛОК, СВЯЗЫВАЮЩИЙСЯ С NKG2D, CD16 И С ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИМ

АНТИГЕНОМ

<130> DFY-022WO

<140>

<141>

<150> 62/552,146

<151> 2017-08-30

<150> 62/546,296

<151> 2017-08-16

<150> 62/546,292

<151> 2017-08-16

<150> 62/539,419

<151> 2017-07-31

<150> 62/539,416

<151> 2017-07-31

<150> 62/539,396

<151> 2017-07-31

<150> 62/510,173

<151> 2017-05-23

<160> 329

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 3

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 3

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 4

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 4

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 5

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 5

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 6

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 6

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 7

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 7

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 8

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Tyr Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 9

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 11

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Gly Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 12

Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ile Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 13

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 13

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 14

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Phe Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 15

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 16

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 17

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 18

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 19

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 19

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 20

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 20

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ile Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 21

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 21

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 22

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 22

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 23

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 23

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 24

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 25

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 25

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 26

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 27

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 27

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 28

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 28

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Phe Ser Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 29

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 29

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 30

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 30

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Tyr Ser Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 31

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 31

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 32

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 32

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Phe Ile Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 33

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 33

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 34

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 34

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gln Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 35

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 35

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 36

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 36

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Phe Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 37

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 37

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 38

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 38

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Leu Tyr Ser Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 39

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 39

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 40

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 40

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Thr Phe Ile Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 41

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 42

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 42

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 43

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 43

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 44

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 44

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 45

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 45

Ala Arg Gly Asp Ser Ser Ile Arg His Ala Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met

1 5 10 15

Asp Val

<210> 46

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 46

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 47

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 47

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 48

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 48

Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr

1 5

<210> 49

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 49

Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 50

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 50

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 51

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 51

Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly

1 5 10

<210> 52

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 52

Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 53

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 53

Ala Arg Gly Ser Asp Arg Phe His Pro Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 54

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 54

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 55

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 55

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 56

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 56

Gln Gln Phe Asp Thr Trp Pro Pro Thr

1 5

<210> 57

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 57

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 58

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 58

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Glu Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 59

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 59

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 60

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 60

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn

85 90 95

Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 61

<211> 126

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 61

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Met Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 62

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 62

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 63

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 63

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 64

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 64

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 65

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 65

Ala Arg Gly Ala Pro Asn Tyr Gly Asp Thr Thr His Asp Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Met Asp Val

<210> 66

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 66

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 67

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 67

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 68

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 68

Gln Gln Tyr Asp Asp Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 69

<211> 124

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 69

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 70

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 70

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 71

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 71

Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 72

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 72

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 73

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 73

Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Tyr Asp Thr Asp Asp His Gly Met Asp

1 5 10 15

Val

<210> 74

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 74

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 75

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 75

Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr

1 5

<210> 76

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 76

Gln Gln Asp Asp Tyr Trp Pro Pro Thr

1 5

<210> 77

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 78

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 78

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 79

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 79

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5

<210> 80

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 80

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 81

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 81

Ala Lys Asp Gly Gly Tyr Tyr Asp Ser Gly Ala Gly Asp Tyr

1 5 10

<210> 82

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 82

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 83

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 83

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 84

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 84

Gln Gln Gly Val Ser Tyr Pro Arg Thr

1 5

<210> 85

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 85

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 86

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 86

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 87

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 87

Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5

<210> 88

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 88

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 89

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 89

Ala Arg Gly Ala Pro Met Gly Ala Ala Ala Gly Trp Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 90

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 90

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 91

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 91

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 92

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 92

Gln Gln Gly Val Ser Phe Pro Arg Thr

1 5

<210> 93

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 93

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met

100 105 110

Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 94

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 94

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 95

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 95

Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5

<210> 96

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 96

Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 97

<211> 18

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 97

Ala Arg Glu Gly Ala Gly Phe Ala Tyr Gly Met Asp Tyr Tyr Tyr Met

1 5 10 15

Asp Val

<210> 98

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 98

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 99

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 99

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 100

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 100

Gln Gln Ser Asp Asn Trp Pro Phe Thr

1 5

<210> 101

<211> 121

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Phe Ile Arg Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Gly Leu Gly Asp Gly Thr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 102

<211> 110

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 102

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn

20 25 30

Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Phe Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu

85 90 95

Asn Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 103

<211> 115

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 103

Gln Val His Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Asp Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly His Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Asn Trp Asp Asp Ala Phe Asn Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 104

<211> 108

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 104

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 105

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 105

Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 106

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 106

Glu Ile Asp His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 107

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 107

Ala Arg Ala Arg Gly Pro Trp Ser Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 108

<211> 246

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 108

Met Ala Ala Ala Ala Ile Pro Ala Leu Leu Leu Cys Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

Phe Leu Leu Phe Gly Trp Ser Arg Ala Arg Arg Asp Asp Pro His Ser

20 25 30

Leu Cys Tyr Asp Ile Thr Val Ile Pro Lys Phe Arg Pro Gly Pro Arg

35 40 45

Trp Cys Ala Val Gln Gly Gln Val Asp Glu Lys Thr Phe Leu His Tyr

50 55 60

Asp Cys Gly Asn Lys Thr Val Thr Pro Val Ser Pro Leu Gly Lys Lys

65 70 75 80

Leu Asn Val Thr Met Ala Trp Lys Ala Gln Asn Pro Val Leu Arg Glu

85 90 95

Val Val Asp Ile Leu Thr Glu Gln Leu Leu Asp Ile Gln Leu Glu Asn

100 105 110

Tyr Thr Pro Lys Glu Pro Leu Thr Leu Gln Ala Arg Met Ser Cys Glu

115 120 125

Gln Lys Ala Glu Gly His Ser Ser Gly Ser Trp Gln Phe Ser Ile Asp

130 135 140

Gly Gln Thr Phe Leu Leu Phe Asp Ser Glu Lys Arg Met Trp Thr Thr

145 150 155 160

Val His Pro Gly Ala Arg Lys Met Lys Glu Lys Trp Glu Asn Asp Lys

165 170 175

Asp Val Ala Met Ser Phe His Tyr Ile Ser Met Gly Asp Cys Ile Gly

180 185 190

Trp Leu Glu Asp Phe Leu Met Gly Met Asp Ser Thr Leu Glu Pro Ser

195 200 205

Ala Gly Ala Pro Leu Ala Met Ser Ser Gly Thr Thr Gln Leu Arg Ala

210 215 220

Thr Ala Thr Thr Leu Ile Leu Cys Cys Leu Leu Ile Ile Leu Pro Cys

225 230 235 240

Phe Ile Leu Pro Gly Ile

245

<210> 109

<211> 117

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 109

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Asn Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Arg Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Gly Pro Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser Gly

115

<210> 110

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 110

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

1 5

<210> 111

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 111

Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly

1 5

<210> 112

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 112

Ser Val Gly Pro Phe Asp Ser

1 5

<210> 113

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 113

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Val Tyr Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Phe Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His His Ser Asp Asn Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 114

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 114

Glu Asn Val Tyr Ser Tyr Leu Ala

1 5

<210> 115

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 115

Phe Ala Lys Thr Leu Ala Glu

1 5

<210> 116

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 116

Gln His His Ser Asp Asn Pro Trp Thr

1 5

<210> 117

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 117

Gln Val Gln Val Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Ser

20 25 30

Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Lys Lys Asp His Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Leu Asn Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Lys Gly Gly Tyr Ser Leu Ala His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala

115

<210> 118

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 118

Phe Ser Leu Thr Thr Ser Gly Val Ser

1 5

<210> 119

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 119

Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 120

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 120

Gly Gly Tyr Ser Leu Ala His

1 5

<210> 121

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 121

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Arg Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Leu Leu Val

35 40 45

Asn Val Ala Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Trp Gly Thr Thr Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 122

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 122

Glu Asn Ile Arg Ser Asn Leu Ala

1 5

<210> 123

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 123

Asn Val Ala Thr Asn Leu Ala

1 5

<210> 124

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 124

Gln His Tyr Trp Gly Thr Thr Trp Thr

1 5

<210> 125

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 125

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Pro Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Arg Ala Gly Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala

115

<210> 126

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 126

Gly Ser Phe Ser Pro Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 127

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 127

Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 128

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 128

Arg Ala Gly Asp Phe Asp Tyr

1 5

<210> 129

<211> 106

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 129

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ile Phe

85 90 95

Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 130

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 130

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 131

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 131

Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser

1 5

<210> 132

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 132

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ile

1 5

<210> 133

<211> 281

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 133

Met Ser Ala Gln Glu Ser Cys Leu Ser Leu Ile Lys Tyr Phe Leu Phe

1 5 10 15

Val Phe Asn Leu Phe Phe Phe Val Leu Gly Ser Leu Ile Phe Cys Phe

20 25 30

Gly Ile Trp Ile Leu Ile Asp Lys Thr Ser Phe Val Ser Phe Val Gly

35 40 45

Leu Ala Phe Val Pro Leu Gln Ile Trp Ser Lys Val Leu Ala Ile Ser

50 55 60

Gly Ile Phe Thr Met Gly Ile Ala Leu Leu Gly Cys Val Gly Ala Leu

65 70 75 80

Lys Glu Leu Arg Cys Leu Leu Gly Leu Tyr Phe Gly Met Leu Leu Leu

85 90 95

Leu Phe Ala Thr Gln Ile Thr Leu Gly Ile Leu Ile Ser Thr Gln Arg

100 105 110

Ala Gln Leu Glu Arg Ser Leu Arg Asp Val Val Glu Lys Thr Ile Gln

115 120 125

Lys Tyr Gly Thr Asn Pro Glu Glu Thr Ala Ala Glu Glu Ser Trp Asp

130 135 140

Tyr Val Gln Phe Gln Leu Arg Cys Cys Gly Trp His Tyr Pro Gln Asp

145 150 155 160

Trp Phe Gln Val Leu Ile Leu Arg Gly Asn Gly Ser Glu Ala His Arg

165 170 175

Val Pro Cys Ser Cys Tyr Asn Leu Ser Ala Thr Asn Asp Ser Thr Ile

180 185 190

Leu Asp Lys Val Ile Leu Pro Gln Leu Ser Arg Leu Gly His Leu Ala

195 200 205

Arg Ser Arg His Ser Ala Asp Ile Cys Ala Val Pro Ala Glu Ser His

210 215 220

Ile Tyr Arg Glu Gly Cys Ala Gln Gly Leu Gln Lys Trp Leu His Asn

225 230 235 240

Asn Leu Ile Ser Ile Val Gly Ile Cys Leu Gly Val Gly Leu Leu Glu

245 250 255

Leu Gly Phe Met Thr Leu Ser Ile Phe Leu Cys Arg Asn Leu Asp His

260 265 270

Val Tyr Asn Arg Leu Ala Arg Tyr Arg

275 280

<210> 134

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 134

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly

100 105 110

Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ala Ala

115 120

<210> 135

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 135

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 136

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 136

Tyr Pro Gly Asn Gly Asp

1 5

<210> 137

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 137

Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val

1 5 10

<210> 138

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 138

Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu

65 70 75 80

Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 139

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 139

Ser Ser Val Ser Tyr Ile His

1 5

<210> 140

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 140

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 141

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 141

Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

1 5

<210> 142

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 142

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser

20 25 30

Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 143

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 143

Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser

1 5

<210> 144

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 144

Phe Pro Gly Asp Gly Asp

1 5

<210> 145

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 145

Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr

1 5 10

<210> 146

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 146

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 147

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 147

Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10

<210> 148

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 148

Gln Met Ser Asn Leu Val Ser

1 5

<210> 149

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 149

Gln Met Ser Asn Leu Val Ser

1 5

<210> 150

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 150

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 151

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 151

Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr

1 5

<210> 152

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 152

Ser Trp Asn Ser Gly Ser

1 5

<210> 153

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 153

Asp Ile Gln Tyr Gly Asn Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210> 154

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 154

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 155

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 155

Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5

<210> 156

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 156

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 157

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 157

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Ile Thr

1 5

<210> 158

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 158

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Met Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 159

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 159

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 160

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 160

Tyr Pro Gly Met Gly Asp

1 5

<210> 161

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 161

Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 162

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 162

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile

20 25 30

His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Trp Ile Tyr

35 40 45

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 163

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 163

Ser Ser Val Ser Tyr Ile His

1 5

<210> 164

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 164

Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 165

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 165

Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

1 5

<210> 166

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 166

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val Val Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 167

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 167

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 168

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 168

Tyr Pro Gly Asn Gly Asp

1 5

<210> 169

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 169

Val Val Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 170

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 170

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Ile Tyr

35 40 45

Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 171

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 171

Ser Ser Val Ser Tyr Met His

1 5

<210> 172

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 172

Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 173

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 173

Gln Gln Trp Ser Phe Asn Pro Pro Thr

1 5

<210> 174

<211> 297

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 174

Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Val Asn Gly Thr Phe Pro Ala Glu Pro

1 5 10 15

Met Lys Gly Pro Ile Ala Met Gln Ser Gly Pro Lys Pro Leu Phe Arg

20 25 30

Arg Met Ser Ser Leu Val Gly Pro Thr Gln Ser Phe Phe Met Arg Glu

35 40 45

Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile

50 55 60

Ala Leu Gly Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Gly Ile Tyr Ala Pro Ile

65 70 75 80

Cys Val Thr Val Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Tyr Ile Ile

85 90 95

Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Thr Glu Lys Asn Ser Arg Lys Cys Leu

100 105 110

Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile

115 120 125

Ser Gly Met Ile Leu Ser Ile Met Asp Ile Leu Asn Ile Lys Ile Ser

130 135 140

His Phe Leu Lys Met Glu Ser Leu Asn Phe Ile Arg Ala His Thr Pro

145 150 155 160

Tyr Ile Asn Ile Tyr Asn Cys Glu Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn

165 170 175

Ser Pro Ser Thr Gln Tyr Cys Tyr Ser Ile Gln Ser Leu Phe Leu Gly

180 185 190

Ile Leu Ser Val Met Leu Ile Phe Ala Phe Phe Gln Glu Leu Val Ile

195 200 205

Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Arg Thr Cys Ser Arg Pro Lys

210 215 220

Ser Asn Ile Val Leu Leu Ser Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Thr Ile

225 230 235 240

Glu Ile Lys Glu Glu Val Val Gly Leu Thr Glu Thr Ser Ser Gln Pro

245 250 255

Lys Asn Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Ile Gln Glu Glu Glu Glu

260 265 270

Glu Glu Thr Glu Thr Asn Phe Pro Glu Pro Pro Gln Asp Gln Glu Ser

275 280 285

Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ser Pro

290 295

<210> 175

<211> 125

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 175

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly

115 120 125

<210> 176

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 176

Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr

1 5

<210> 177

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 177

Trp Pro Gly Asp Gly Asp

1 5

<210> 178

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 178

Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 179

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 179

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp

20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 180

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 180

Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 181

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 181

Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser

1 5

<210> 182

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 182

Gln Gln Ser Thr Glu Asp Pro Trp Thr

1 5

<210> 183

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 183

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Ala Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 184

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 184

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser

1 5

<210> 185

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 185

Tyr Pro Gly Asp Gly Asp

1 5

<210> 186

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 186

Ser Gly Phe Ile Thr Thr Val Arg Asp Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 187

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 187

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Thr Phe

20 25 30

Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile His Glu Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ser

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys

85 90 95

Glu Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 188

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 188

Glu Ser Val Asp Thr Phe Gly Ile Ser Phe Met Asn

1 5 10

<210> 189

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 189

Glu Ala Ser Asn Gln Gly Ser

1 5

<210> 190

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 190

Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Phe Thr

1 5

<210> 191

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 191

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 192

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 192

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 193

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 193

Asn Pro Tyr Asn Asp Gly

1 5

<210> 194

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 194

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 195

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 195

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln His

85 90 95

Leu Glu Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 196

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 196

Lys Ser Leu Gln Asn Val Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10

<210> 197

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 197

Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser

1 5

<210> 198

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 198

Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 199

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 199

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Ile Gly His Ile Trp Trp Asp Asp Asp Lys Arg Tyr Asn Pro Ala

50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Met Glu Leu Trp Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 200

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 200

Gly Gly Ser Ile Ser Thr Ser Gly Met

1 5

<210> 201

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 201

Trp Trp Asp Asp Asp

1 5

<210> 202

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 202

Met Glu Leu Trp Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 203

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 203

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Val Tyr Pro Phe Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 204

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 204

Ser Ser Val Ser Tyr Met His

1 5

<210> 205

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 205

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 206

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 206

Phe Gln Gly Ser Val Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 207

<211> 556

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 207

Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met

1 5 10 15

Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp

20 25 30

Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln

35 40 45

Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu

50 55 60

Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile

65 70 75 80

Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu

85 90 95

Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr

100 105 110

Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp

115 120 125

Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro

130 135 140

Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala

145 150 155 160

Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro

180 185 190

Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser

195 200 205

Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser

210 215 220

Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp

225 230 235 240

Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala

245 250 255

Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu

260 265 270

Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly

275 280 285

Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu

290 295 300

Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg

305 310 315 320

Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val

325 330 335

Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu

340 345 350

Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala

355 360 365

Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp

370 375 380

Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly

385 390 395 400

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu

405 410 415

Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu

420 425 430

Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly

435 440 445

Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu

450 455 460

Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser

465 470 475 480

Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly

485 490 495

Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln

500 505 510

Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala

515 520 525

Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp

530 535 540

Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg

545 550 555

<210> 208

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 208

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Asn Asp Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Asn Phe

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Phe Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Ile Thr Thr Phe Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 209

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 209

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 210

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 210

Asn Pro Arg Asn Asp Tyr

1 5

<210> 211

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 211

Arg Asp Ile Thr Thr Phe Tyr

1 5

<210> 212

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 212

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ala Asn His Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

35 40 45

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln

85 90 95

Tyr Leu Ser Ser Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 213

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 213

Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ala Asn His Lys Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 214

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 214

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 215

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 215

His Gln Tyr Leu Ser Ser Trp Thr

1 5

<210> 216

<211> 120

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 216

Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val

1 5 10 15

Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr Trp Ile

20 25 30

His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gly

35 40 45

Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Lys Phe Gln Gly

50 55 60

Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu

65 70 75 80

Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg

85 90 95

Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 217

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 217

Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr

1 5

<210> 218

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 218

Asn Pro Gly Asn Asn Tyr

1 5

<210> 219

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 219

Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 220

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 220

Asp Val Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser

20 25 30

Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly

85 90 95

Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 221

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 221

Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser

1 5 10

<210> 222

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 222

Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 223

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 223

Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr

1 5

<210> 224

<211> 121

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 224

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ser Arg Ser

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Ser Gly Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Gly Ser Ser Trp Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 225

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 225

Gly Tyr Glu Phe Ser Arg Ser

1 5

<210> 226

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 226

Tyr Pro Gly Asp Gly Asp

1 5

<210> 227

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 227

Asp Gly Ser Ser Trp Asp Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 228

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 228

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Val Gly Asn Thr Phe Leu Glu Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser Gln Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

<210> 229

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 229

Gln Ser Ile Val His Ser Val Gly Asn Thr Phe Leu Glu

1 5 10

<210> 230

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 230

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 231

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 231

Phe Gln Gly Ser Gln Phe Pro Tyr Thr

1 5

<210> 232

<211> 847

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 232

Met His Leu Leu Gly Pro Trp Leu Leu Leu Leu Val Leu Glu Tyr Leu

1 5 10 15

Ala Phe Ser Asp Ser Ser Lys Trp Val Phe Glu His Pro Glu Thr Leu

20 25 30

Tyr Ala Trp Glu Gly Ala Cys Val Trp Ile Pro Cys Thr Tyr Arg Ala

35 40 45

Leu Asp Gly Asp Leu Glu Ser Phe Ile Leu Phe His Asn Pro Glu Tyr

50 55 60

Asn Lys Asn Thr Ser Lys Phe Asp Gly Thr Arg Leu Tyr Glu Ser Thr

65 70 75 80

Lys Asp Gly Lys Val Pro Ser Glu Gln Lys Arg Val Gln Phe Leu Gly

85 90 95

Asp Lys Asn Lys Asn Cys Thr Leu Ser Ile His Pro Val His Leu Asn

100 105 110

Asp Ser Gly Gln Leu Gly Leu Arg Met Glu Ser Lys Thr Glu Lys Trp

115 120 125

Met Glu Arg Ile His Leu Asn Val Ser Glu Arg Pro Phe Pro Pro His

130 135 140

Ile Gln Leu Pro Pro Glu Ile Gln Glu Ser Gln Glu Val Thr Leu Thr

145 150 155 160

Cys Leu Leu Asn Phe Ser Cys Tyr Gly Tyr Pro Ile Gln Leu Gln Trp

165 170 175

Leu Leu Glu Gly Val Pro Met Arg Gln Ala Ala Val Thr Ser Thr Ser

180 185 190

Leu Thr Ile Lys Ser Val Phe Thr Arg Ser Glu Leu Lys Phe Ser Pro

195 200 205

Gln Trp Ser His His Gly Lys Ile Val Thr Cys Gln Leu Gln Asp Ala

210 215 220

Asp Gly Lys Phe Leu Ser Asn Asp Thr Val Gln Leu Asn Val Lys His

225 230 235 240

Thr Pro Lys Leu Glu Ile Lys Val Thr Pro Ser Asp Ala Ile Val Arg

245 250 255

Glu Gly Asp Ser Val Thr Met Thr Cys Glu Val Ser Ser Ser Asn Pro

260 265 270

Glu Tyr Thr Thr Val Ser Trp Leu Lys Asp Gly Thr Ser Leu Lys Lys

275 280 285

Gln Asn Thr Phe Thr Leu Asn Leu Arg Glu Val Thr Lys Asp Gln Ser

290 295 300

Gly Lys Tyr Cys Cys Gln Val Ser Asn Asp Val Gly Pro Gly Arg Ser

305 310 315 320

Glu Glu Val Phe Leu Gln Val Gln Tyr Ala Pro Glu Pro Ser Thr Val

325 330 335

Gln Ile Leu His Ser Pro Ala Val Glu Gly Ser Gln Val Glu Phe Leu

340 345 350

Cys Met Ser Leu Ala Asn Pro Leu Pro Thr Asn Tyr Thr Trp Tyr His

355 360 365

Asn Gly Lys Glu Met Gln Gly Arg Thr Glu Glu Lys Val His Ile Pro

370 375 380

Lys Ile Leu Pro Trp His Ala Gly Thr Tyr Ser Cys Val Ala Glu Asn

385 390 395 400

Ile Leu Gly Thr Gly Gln Arg Gly Pro Gly Ala Glu Leu Asp Val Gln

405 410 415

Tyr Pro Pro Lys Lys Val Thr Thr Val Ile Gln Asn Pro Met Pro Ile

420 425 430

Arg Glu Gly Asp Thr Val Thr Leu Ser Cys Asn Tyr Asn Ser Ser Asn

435 440 445

Pro Ser Val Thr Arg Tyr Glu Trp Lys Pro His Gly Ala Trp Glu Glu

450 455 460

Pro Ser Leu Gly Val Leu Lys Ile Gln Asn Val Gly Trp Asp Asn Thr

465 470 475 480

Thr Ile Ala Cys Ala Ala Cys Asn Ser Trp Cys Ser Trp Ala Ser Pro

485 490 495

Val Ala Leu Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg Asp Val Arg Val Arg Lys

500 505 510

Ile Lys Pro Leu Ser Glu Ile His Ser Gly Asn Ser Val Ser Leu Gln

515 520 525

Cys Asp Phe Ser Ser Ser His Pro Lys Glu Val Gln Phe Phe Trp Glu

530 535 540

Lys Asn Gly Arg Leu Leu Gly Lys Glu Ser Gln Leu Asn Phe Asp Ser

545 550 555 560

Ile Ser Pro Glu Asp Ala Gly Ser Tyr Ser Cys Trp Val Asn Asn Ser

565 570 575

Ile Gly Gln Thr Ala Ser Lys Ala Trp Thr Leu Glu Val Leu Tyr Ala

580 585 590

Pro Arg Arg Leu Arg Val Ser Met Ser Pro Gly Asp Gln Val Met Glu

595 600 605

Gly Lys Ser Ala Thr Leu Thr Cys Glu Ser Asp Ala Asn Pro Pro Val

610 615 620

Ser His Tyr Thr Trp Phe Asp Trp Asn Asn Gln Ser Leu Pro Tyr His

625 630 635 640

Ser Gln Lys Leu Arg Leu Glu Pro Val Lys Val Gln His Ser Gly Ala

645 650 655

Tyr Trp Cys Gln Gly Thr Asn Ser Val Gly Lys Gly Arg Ser Pro Leu

660 665 670

Ser Thr Leu Thr Val Tyr Tyr Ser Pro Glu Thr Ile Gly Arg Arg Val

675 680 685

Ala Val Gly Leu Gly Ser Cys Leu Ala Ile Leu Ile Leu Ala Ile Cys

690 695 700

Gly Leu Lys Leu Gln Arg Arg Trp Lys Arg Thr Gln Ser Gln Gln Gly

705 710 715 720

Leu Gln Glu Asn Ser Ser Gly Gln Ser Phe Phe Val Arg Asn Lys Lys

725 730 735

Val Arg Arg Ala Pro Leu Ser Glu Gly Pro His Ser Leu Gly Cys Tyr

740 745 750

Asn Pro Met Met Glu Asp Gly Ile Ser Tyr Thr Thr Leu Arg Phe Pro

755 760 765

Glu Met Asn Ile Pro Arg Thr Gly Asp Ala Glu Ser Ser Glu Met Gln

770 775 780

Arg Pro Pro Pro Asp Cys Asp Asp Thr Val Thr Tyr Ser Ala Leu His

785 790 795 800

Lys Arg Gln Val Gly Asp Tyr Glu Asn Val Ile Pro Asp Phe Pro Glu

805 810 815

Asp Glu Gly Ile His Tyr Ser Glu Leu Ile Gln Phe Gly Val Gly Glu

820 825 830

Arg Pro Gln Ala Gln Glu Asn Val Asp Tyr Val Ile Leu Lys His

835 840 845

<210> 233

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 233

Gln Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Ile Thr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Asn Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala Ala

115

<210> 234

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 234

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile Thr

1 5 10

<210> 235

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 235

Tyr Pro Gly Ser Gly Asn

1 5

<210> 236

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 236

Tyr Gly Asn Tyr Trp Phe Ala Tyr

1 5

<210> 237

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 237

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Phe Asp

20 25 30

Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Val Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

<210> 238

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 238

Gln Ser Val Asp Phe Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn

1 5 10

<210> 239

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 239

Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 240

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 240

Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Trp Thr

1 5

<210> 241

<211> 123

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 241

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly His Asp Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Asn Gln Asn Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Ala Asp Tyr Gly Asn Tyr Glu Tyr Thr Trp Phe Ala Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 242

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 242

Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Thr Ile His

1 5 10

<210> 243

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 243

Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Gly Tyr Ser Asp Tyr Asn Gln Asn Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 244

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 244

Arg Ala Asp Tyr Gly Asn Tyr Glu Tyr Thr Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 245

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 245

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr His Thr Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn

100 105

<210> 246

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 246

Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

1 5

<210> 247

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 247

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser

1 5

<210> 248

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 248

Gln Gln Tyr His Thr Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 249

<211> 112

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 249

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Ala Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asn His Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ser Leu Thr Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 250

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 250

Ala Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 251

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 251

Asp Ile Asn His Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 252

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 252

Leu Thr Ala Tyr

1

<210> 253

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 253

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Thr Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 254

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 254

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp Leu Thr

1 5 10

<210> 255

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 255

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 256

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 256

Gln Gln Tyr Asp Ser Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 257

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 257

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Asn Glu Asp Gly Ser Glu Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Val His Trp Tyr Phe His Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 258

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 258

Asn Ser Trp Met Ser

1 5

<210> 259

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 259

Asn Ile Asn Glu Asp Gly Ser Glu Lys Phe Tyr Val Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 260

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 260

Val His Trp Tyr Phe His Leu

1 5

<210> 261

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 261

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 262

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 262

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 263

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 263

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 264

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 264

Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr

1 5

<210> 265

<211> 116

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 265

Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Thr Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys His Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Thr Val Tyr Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 266

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 266

Gly Tyr Tyr Trp Ser

1 5

<210> 267

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 267

Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Thr Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 268

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 268

Glu Thr Val Tyr Tyr Phe Asp Leu

1 5

<210> 269

<211> 107

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 269

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Leu Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 270

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 270

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala

1 5 10

<210> 271

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 271

Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr

1 5

<210> 272

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 272

Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Trp Thr

1 5

<210> 273

<211> 595

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 273

Met Arg Val Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu

1 5 10 15

Arg Ala Phe Pro Gln Asp Arg Pro Phe Glu Asp Thr Cys His Gly Asn

20 25 30

Pro Ser His Tyr Tyr Asp Lys Ala Val Arg Arg Cys Cys Tyr Arg Cys

35 40 45

Pro Met Gly Leu Phe Pro Thr Gln Gln Cys Pro Gln Arg Pro Thr Asp

50 55 60

Cys Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Asp Arg

65 70 75 80

Cys Thr Ala Cys Val Thr Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr

85 90 95

Pro Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Val Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met

100 105 110

Phe Cys Ser Thr Ser Ala Val Asn Ser Cys Ala Arg Cys Phe Phe His

115 120 125

Ser Val Cys Pro Ala Gly Met Ile Val Lys Phe Pro Gly Thr Ala Gln

130 135 140

Lys Asn Thr Val Cys Glu Pro Ala Ser Pro Gly Val Ser Pro Ala Cys

145 150 155 160

Ala Ser Pro Glu Asn Cys Lys Glu Pro Ser Ser Gly Thr Ile Pro Gln

165 170 175

Ala Lys Pro Thr Pro Val Ser Pro Ala Thr Ser Ser Ala Ser Thr Met

180 185 190

Pro Val Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Gln Glu Ala Ala Ser Lys Leu

195 200 205

Thr Arg Ala Pro Asp Ser Pro Ser Ser Val Gly Arg Pro Ser Ser Asp

210 215 220

Pro Gly Leu Ser Pro Thr Gln Pro Cys Pro Glu Gly Ser Gly Asp Cys

225 230 235 240

Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Arg Cys

245 250 255

Thr Ala Cys Val Ser Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr Pro

260 265 270

Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Thr Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met Ile

275 280 285

Cys Ala Thr Ser Ala Thr Asn Ser Cys Ala Arg Cys Val Pro Tyr Pro

290 295 300

Ile Cys Ala Ala Glu Thr Val Thr Lys Pro Gln Asp Met Ala Glu Lys

305 310 315 320

Asp Thr Thr Phe Glu Ala Pro Pro Leu Gly Thr Gln Pro Asp Cys Asn

325 330 335

Pro Thr Pro Glu Asn Gly Glu Ala Pro Ala Ser Thr Ser Pro Thr Gln

340 345 350

Ser Leu Leu Val Asp Ser Gln Ala Ser Lys Thr Leu Pro Ile Pro Thr

355 360 365

Ser Ala Pro Val Ala Leu Ser Ser Thr Gly Lys Pro Val Leu Asp Ala

370 375 380

Gly Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly

385 390 395 400

Ser Ser Ala Phe Leu Leu Cys His Arg Arg Ala Cys Arg Lys Arg Ile

405 410 415

Arg Gln Lys Leu His Leu Cys Tyr Pro Val Gln Thr Ser Gln Pro Lys

420 425 430

Leu Glu Leu Val Asp Ser Arg Pro Arg Arg Ser Ser Thr Gln Leu Arg

435 440 445

Ser Gly Ala Ser Val Thr Glu Pro Val Ala Glu Glu Arg Gly Leu Met

450 455 460

Ser Gln Pro Leu Met Glu Thr Cys His Ser Val Gly Ala Ala Tyr Leu

465 470 475 480

Glu Ser Leu Pro Leu Gln Asp Ala Ser Pro Ala Gly Gly Pro Ser Ser

485 490 495

Pro Arg Asp Leu Pro Glu Pro Arg Val Ser Thr Glu His Thr Asn Asn

500 505 510

Lys Ile Glu Lys Ile Tyr Ile Met Lys Ala Asp Thr Val Ile Val Gly

515 520 525

Thr Val Lys Ala Glu Leu Pro Glu Gly Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ala

530 535 540

Glu Pro Glu Leu Glu Glu Glu Leu Glu Ala Asp His Thr Pro His Tyr

545 550 555 560

Pro Glu Gln Glu Thr Glu Pro Pro Leu Gly Ser Cys Ser Asp Val Met

565 570 575

Leu Ser Val Glu Glu Glu Gly Lys Glu Asp Pro Leu Pro Thr Ala Ala

580 585 590

Ser Gly Lys

595

<210> 274

<211> 122

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 274

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Phe Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Asn Pro

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Met Leu Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln

65 70 75 80

Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala

115 120

<210> 275

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 275

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe

1 5

<210> 276

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 276

Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr

1 5

<210> 277

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 277

Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 278

<211> 108

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 278

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asp Lys Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 279

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 279

Gln Asn Ile Asp Lys Tyr Leu Asn

1 5

<210> 280

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 280

Asn Thr Asn Asn Leu Gln Thr

1 5

<210> 281

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 281

Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg Thr

1 5

<210> 282

<211> 113

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 282

Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ala Met Met Lys Thr Lys Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Asp Gly Tyr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser

<210> 283

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 283

Arg Tyr Gly Met Ser

1 5

<210> 284

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 284

Met Met Lys Thr Lys Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 285

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 285

Asp Gly Tyr Tyr

1

<210> 286

<211> 111

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 286

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly

85 90 95

Thr His Leu Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 287

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 287

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 288

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 288

Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser

1 5

<210> 289

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 289

Trp Gln Gly Thr His Leu Trp Thr

1 5

<210> 290

<211> 595

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 290

Met Arg Val Leu Leu Ala Ala Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gly Ala Leu

1 5 10 15

Arg Ala Phe Pro Gln Asp Arg Pro Phe Glu Asp Thr Cys His Gly Asn

20 25 30

Pro Ser His Tyr Tyr Asp Lys Ala Val Arg Arg Cys Cys Tyr Arg Cys

35 40 45

Pro Met Gly Leu Phe Pro Thr Gln Gln Cys Pro Gln Arg Pro Thr Asp

50 55 60

Cys Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Asp Arg

65 70 75 80

Cys Thr Ala Cys Val Thr Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr

85 90 95

Pro Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Val Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met

100 105 110

Phe Cys Ser Thr Ser Ala Val Asn Ser Cys Ala Arg Cys Phe Phe His

115 120 125

Ser Val Cys Pro Ala Gly Met Ile Val Lys Phe Pro Gly Thr Ala Gln

130 135 140

Lys Asn Thr Val Cys Glu Pro Ala Ser Pro Gly Val Ser Pro Ala Cys

145 150 155 160

Ala Ser Pro Glu Asn Cys Lys Glu Pro Ser Ser Gly Thr Ile Pro Gln

165 170 175

Ala Lys Pro Thr Pro Val Ser Pro Ala Thr Ser Ser Ala Ser Thr Met

180 185 190

Pro Val Arg Gly Gly Thr Arg Leu Ala Gln Glu Ala Ala Ser Lys Leu

195 200 205

Thr Arg Ala Pro Asp Ser Pro Ser Ser Val Gly Arg Pro Ser Ser Asp

210 215 220

Pro Gly Leu Ser Pro Thr Gln Pro Cys Pro Glu Gly Ser Gly Asp Cys

225 230 235 240

Arg Lys Gln Cys Glu Pro Asp Tyr Tyr Leu Asp Glu Ala Gly Arg Cys

245 250 255

Thr Ala Cys Val Ser Cys Ser Arg Asp Asp Leu Val Glu Lys Thr Pro

260 265 270

Cys Ala Trp Asn Ser Ser Arg Thr Cys Glu Cys Arg Pro Gly Met Ile

275 280 285

Cys Ala Thr Ser Ala Thr Asn Ser Cys Ala Arg Cys Val Pro Tyr Pro

290 295 300

Ile Cys Ala Ala Glu Thr Val Thr Lys Pro Gln Asp Met Ala Glu Lys

305 310 315 320

Asp Thr Thr Phe Glu Ala Pro Pro Leu Gly Thr Gln Pro Asp Cys Asn

325 330 335

Pro Thr Pro Glu Asn Gly Glu Ala Pro Ala Ser Thr Ser Pro Thr Gln

340 345 350

Ser Leu Leu Val Asp Ser Gln Ala Ser Lys Thr Leu Pro Ile Pro Thr

355 360 365

Ser Ala Pro Val Ala Leu Ser Ser Thr Gly Lys Pro Val Leu Asp Ala

370 375 380

Gly Pro Val Leu Phe Trp Val Ile Leu Val Leu Val Val Val Val Gly

385 390 395 400

Ser Ser Ala Phe Leu Leu Cys His Arg Arg Ala Cys Arg Lys Arg Ile

405 410 415

Arg Gln Lys Leu His Leu Cys Tyr Pro Val Gln Thr Ser Gln Pro Lys

420 425 430

Leu Glu Leu Val Asp Ser Arg Pro Arg Arg Ser Ser Thr Gln Leu Arg

435 440 445

Ser Gly Ala Ser Val Thr Glu Pro Val Ala Glu Glu Arg Gly Leu Met

450 455 460

Ser Gln Pro Leu Met Glu Thr Cys His Ser Val Gly Ala Ala Tyr Leu

465 470 475 480

Glu Ser Leu Pro Leu Gln Asp Ala Ser Pro Ala Gly Gly Pro Ser Ser

485 490 495

Pro Arg Asp Leu Pro Glu Pro Arg Val Ser Thr Glu His Thr Asn Asn

500 505 510

Lys Ile Glu Lys Ile Tyr Ile Met Lys Ala Asp Thr Val Ile Val Gly

515 520 525

Thr Val Lys Ala Glu Leu Pro Glu Gly Arg Gly Leu Ala Gly Pro Ala

530 535 540

Glu Pro Glu Leu Glu Glu Glu Leu Glu Ala Asp His Thr Pro His Tyr

545 550 555 560

Pro Glu Gln Glu Thr Glu Pro Pro Leu Gly Ser Cys Ser Asp Val Met

565 570 575

Leu Ser Val Glu Glu Glu Gly Lys Glu Asp Pro Leu Pro Thr Ala Ala

580 585 590

Ser Gly Lys

595

<210> 291

<211> 133

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 291

Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asp Phe Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Asp Pro Gly Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Asn

65 70 75 80

Leu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Leu Gly Ala Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

115 120 125

Val Thr Val Ser Ser

130

<210> 292

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 292

Asp Phe Glu Met His

1 5

<210> 293

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 293

Asp Ile Asp Pro Gly Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 294

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 294

Gly Ala Phe Val Tyr

1 5

<210> 295

<211> 134

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 295

Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Gln Pro Ala Met Ala Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser

20 25 30

Leu Pro Val Thr Phe Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser

35 40 45

Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu

50 55 60

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

85 90 95

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly

115 120 125

Thr Lys Leu Glu Ile Lys

130

<210> 296

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 296

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser

1 5 10 15

<210> 297

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 297

Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 298

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 298

Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr

1 5

<210> 299

<211> 133

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 299

Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Ala His Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys

20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

35 40 45

Thr Asp Phe Glu Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Met Gly Asp Ile Asp Pro Gly Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Asn

65 70 75 80

Leu Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser

85 90 95

Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Leu Gly Ala Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

115 120 125

Val Thr Val Ser Ser

130

<210> 300

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 300

Asp Phe Glu Met His

1 5

<210> 301

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 301

Asp Ile Asp Pro Gly Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Asn Leu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 302

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 302

Gly Ala Phe Val Tyr

1 5

<210> 303

<211> 134

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 303

Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Gln Pro Ala Met Ala Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser

20 25 30

Leu Pro Val Thr Phe Gly Glu Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser

35 40 45

Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Tyr Leu

50 55 60

Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn

65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

85 90 95

Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly

115 120 125

Thr Lys Leu Glu Ile Lys

130

<210> 304

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 304

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Tyr Leu Ser

1 5 10 15

<210> 305

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 305

Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 306

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 306

Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr

1 5

<210> 307

<211> 127

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 307

Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro

20 25 30

Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Asn

35 40 45

Asn Tyr Asn Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Trp Ile Gly Ala Thr Phe Gly Ser Asp Ser Ile Tyr Tyr Ala Thr Trp

65 70 75 80

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu

85 90 95

Lys Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

100 105 110

Arg Gly Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 308

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 308

Gly Ile Asp Leu Asn Asn Tyr Asn Met Gln

1 5 10

<210> 309

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 309

Ala Thr Phe Gly Ser Asp Ser Ile Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala

1 5 10

<210> 310

<211> 3

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 310

Gly Gly Leu

1

<210> 311

<211> 136

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 311

Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Leu Pro Gly Val Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro

20 25 30

Val Ser Ala Ala Val Gly Ala Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser

35 40 45

Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro

50 55 60

Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

65 70 75 80

Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Ala

85 90 95

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys

100 105 110

Gln Gly Glu Phe Ser Cys Asp Ser Ala Asp Cys Ala Ala Phe Gly Gly

115 120 125

Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly

130 135

<210> 312

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 312

Gln Ser Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu

1 5 10

<210> 313

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 313

Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 314

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 314

Gln Gly Glu Phe Ser Cys Asp Ser Ala Asp Cys Ala Ala

1 5 10

<210> 315

<211> 131

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 315

Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly

1 5 10 15

Val Gln Cys Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro

20 25 30

Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser

35 40 45

Arg Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp

50 55 60

Trp Ile Gly Tyr Ile Asp Ile Gly Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp

65 70 75 80

Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Glu Thr Ser Thr Thr Val Tyr Leu

85 90 95

Lys Val Asn Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala

100 105 110

Arg Gly Val Ala Asn Ser Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr

115 120 125

Val Ser Ser

130

<210> 316

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 316

Gly Phe Ser Leu Ser Arg Tyr Ala Met Ser

1 5 10

<210> 317

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 317

Tyr Ile Asp Ile Gly Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala

1 5 10

<210> 318

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 318

Gly Val Ala Asn Ser Asp Ile

1 5

<210> 319

<211> 135

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

полипептид

<400> 319

Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp

1 5 10 15

Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro

20 25 30

Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ser Ser

35 40 45

Gln Ser Val Phe Asn Asn Lys Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro

50 55 60

Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Phe Val Ser Thr Leu Ala Ser

65 70 75 80

Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr

85 90 95

Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys

100 105 110

Gln Gly Ser Asp Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Ser Pro Phe Gly Gly Gly

115 120 125

Thr Glu Val Val Val Glu Gly

130 135

<210> 320

<211> 13

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 320

Gln Ser Ser Gln Ser Val Phe Asn Asn Lys Trp Leu Ser

1 5 10

<210> 321

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 321

Phe Val Ser Thr Leu Ala Ser

1 5

<210> 322

<211> 12

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 322

Gln Gly Ser Asp Tyr Ser Ser Gly Trp Tyr Ser Pro

1 5 10

<210> 323

<211> 865

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 323

Met Ala Leu Val Leu Gly Ser Leu Leu Leu Leu Gly Leu Cys Gly Asn

1 5 10 15

Ser Phe Ser Gly Gly Gln Pro Ser Ser Thr Asp Ala Pro Lys Ala Trp

20 25 30

Asn Tyr Glu Leu Pro Ala Thr Asn Tyr Glu Thr Gln Asp Ser His Lys

35 40 45

Ala Gly Pro Ile Gly Ile Leu Phe Glu Leu Val His Ile Phe Leu Tyr

50 55 60

Val Val Gln Pro Arg Asp Phe Pro Glu Asp Thr Leu Arg Lys Phe Leu

65 70 75 80

Gln Lys Ala Tyr Glu Ser Lys Ile Asp Tyr Asp Lys Pro Glu Thr Val

85 90 95

Ile Leu Gly Leu Lys Ile Val Tyr Tyr Glu Ala Gly Ile Ile Leu Cys

100 105 110

Cys Val Leu Gly Leu Leu Phe Ile Ile Leu Met Pro Leu Val Gly Tyr

115 120 125

Phe Phe Cys Met Cys Arg Cys Cys Asn Lys Cys Gly Gly Glu Met His

130 135 140

Gln Arg Gln Lys Glu Asn Gly Pro Phe Leu Arg Lys Cys Phe Ala Ile

145 150 155 160

Ser Leu Leu Val Ile Cys Ile Ile Ile Ser Ile Gly Ile Phe Tyr Gly

165 170 175

Phe Val Ala Asn His Gln Val Arg Thr Arg Ile Lys Arg Ser Arg Lys

180 185 190

Leu Ala Asp Ser Asn Phe Lys Asp Leu Arg Thr Leu Leu Asn Glu Thr

195 200 205

Pro Glu Gln Ile Lys Tyr Ile Leu Ala Gln Tyr Asn Thr Thr Lys Asp

210 215 220

Lys Ala Phe Thr Asp Leu Asn Ser Ile Asn Ser Val Leu Gly Gly Gly

225 230 235 240

Ile Leu Asp Arg Leu Arg Pro Asn Ile Ile Pro Val Leu Asp Glu Ile

245 250 255

Lys Ser Met Ala Thr Ala Ile Lys Glu Thr Lys Glu Ala Leu Glu Asn

260 265 270

Met Asn Ser Thr Leu Lys Ser Leu His Gln Gln Ser Thr Gln Leu Ser

275 280 285

Ser Ser Leu Thr Ser Val Lys Thr Ser Leu Arg Ser Ser Leu Asn Asp

290 295 300

Pro Leu Cys Leu Val His Pro Ser Ser Glu Thr Cys Asn Ser Ile Arg

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Gln Leu Asn Ser Asn Pro Glu Leu Arg Gln Leu Pro

325 330 335

Pro Val Asp Ala Glu Leu Asp Asn Val Asn Asn Val Leu Arg Thr Asp

340 345 350

Leu Asp Gly Leu Val Gln Gln Gly Tyr Gln Ser Leu Asn Asp Ile Pro

355 360 365

Asp Arg Val Gln Arg Gln Thr Thr Thr Val Val Ala Gly Ile Lys Arg

370 375 380

Val Leu Asn Ser Ile Gly Ser Asp Ile Asp Asn Val Thr Gln Arg Leu

385 390 395 400

Pro Ile Gln Asp Ile Leu Ser Ala Phe Ser Val Tyr Val Asn Asn Thr

405 410 415

Glu Ser Tyr Ile His Arg Asn Leu Pro Thr Leu Glu Glu Tyr Asp Ser

420 425 430

Tyr Trp Trp Leu Gly Gly Leu Val Ile Cys Ser Leu Leu Thr Leu Ile

435 440 445

Val Ile Phe Tyr Tyr Leu Gly Leu Leu Cys Gly Val Cys Gly Tyr Asp

450 455 460

Arg His Ala Thr Pro Thr Thr Arg Gly Cys Val Ser Asn Thr Gly Gly

465 470 475 480

Val Phe Leu Met Val Gly Val Gly Leu Ser Phe Leu Phe Cys Trp Ile

485 490 495

Leu Met Ile Ile Val Val Leu Thr Phe Val Phe Gly Ala Asn Val Glu

500 505 510

Lys Leu Ile Cys Glu Pro Tyr Thr Ser Lys Glu Leu Phe Arg Val Leu

515 520 525

Asp Thr Pro Tyr Leu Leu Asn Glu Asp Trp Glu Tyr Tyr Leu Ser Gly

530 535 540

Lys Leu Phe Asn Lys Ser Lys Met Lys Leu Thr Phe Glu Gln Val Tyr

545 550 555 560

Ser Asp Cys Lys Lys Asn Arg Gly Thr Tyr Gly Thr Leu His Leu Gln

565 570 575

Asn Ser Phe Asn Ile Ser Glu His Leu Asn Ile Asn Glu His Thr Gly

580 585 590

Ser Ile Ser Ser Glu Leu Glu Ser Leu Lys Val Asn Leu Asn Ile Phe

595 600 605

Leu Leu Gly Ala Ala Gly Arg Lys Asn Leu Gln Asp Phe Ala Ala Cys

610 615 620

Gly Ile Asp Arg Met Asn Tyr Asp Ser Tyr Leu Ala Gln Thr Gly Lys

625 630 635 640

Ser Pro Ala Gly Val Asn Leu Leu Ser Phe Ala Tyr Asp Leu Glu Ala

645 650 655

Lys Ala Asn Ser Leu Pro Pro Gly Asn Leu Arg Asn Ser Leu Lys Arg

660 665 670

Asp Ala Gln Thr Ile Lys Thr Ile His Gln Gln Arg Val Leu Pro Ile

675 680 685

Glu Gln Ser Leu Ser Thr Leu Tyr Gln Ser Val Lys Ile Leu Gln Arg

690 695 700

Thr Gly Asn Gly Leu Leu Glu Arg Val Thr Arg Ile Leu Ala Ser Leu

705 710 715 720

Asp Phe Ala Gln Asn Phe Ile Thr Asn Asn Thr Ser Ser Val Ile Ile

725 730 735

Glu Glu Thr Lys Lys Tyr Gly Arg Thr Ile Ile Gly Tyr Phe Glu His

740 745 750

Tyr Leu Gln Trp Ile Glu Phe Ser Ile Ser Glu Lys Val Ala Ser Cys

755 760 765

Lys Pro Val Ala Thr Ala Leu Asp Thr Ala Val Asp Val Phe Leu Cys

770 775 780

Ser Tyr Ile Ile Asp Pro Leu Asn Leu Phe Trp Phe Gly Ile Gly Lys

785 790 795 800

Ala Thr Val Phe Leu Leu Pro Ala Leu Ile Phe Ala Val Lys Leu Ala

805 810 815

Lys Tyr Tyr Arg Arg Met Asp Ser Glu Asp Val Tyr Asp Asp Val Glu

820 825 830

Thr Ile Pro Met Lys Asn Met Glu Asn Gly Asn Asn Gly Tyr His Lys

835 840 845

Asp His Val Tyr Gly Ile His Asn Pro Val Met Thr Ser Pro Ser Gln

850 855 860

His

865

<210> 324

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 324

Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser

1 5

<210> 325

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 325

Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 326

<211> 19

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 326

Ala Arg Arg Gly Arg Lys Ala Ser Gly Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly

1 5 10 15

Met Asp Val

<210> 327

<211> 17

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 327

Glu Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Thr

<210> 328

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 328

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 329

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<400> 329

Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<---

Claims

1. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, где указанный полиспецифический связывающий белок содержит:

(a) первый антигенсвязывающий сайт, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела против NKG2D;

(b) второй антигенсвязывающий сайт, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи антитела против CD19; и

(c) первый полипептид Fc-домена антитела;

(d) второй полипептид Fc-домена антитела,

где указанный первый полипептид Fc-домена антитела и указанный второй полипептид Fc-домена антитела вместе связывают CD16 и

где указанный вариабельный домен тяжелой цепи или указанный вариабельный домен легкой цепи антитела против NKG2D слит с N-концом указанного первого полипептида Fc-домена антитела и указанный вариабельный домен тяжелой цепи или указанный вариабельный домен легкой цепи антитела против CD19 слит с N-концом указанного второго полипептида Fc-домена антитела.

2. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.1, где первый антигенсвязывающий сайт связывается с NKG2D у человека.

3. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.1 или 2, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи указанного первого антигенсвязывающего сайта присутствуют в одном и том же полипептиде.

4. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-3, где вариабельный домен тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта присутствуют в одном и том же полипептиде.

5. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-4, где первый антигенсвязывающий сайт содержит Fab, который связывается с NKG2D.

6. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-5, где первый антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 105,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 106, и

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 107.

7. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.6, где указанный вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 и указанный вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.

8. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-5, где первый антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 43,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 44,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 45,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 46,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 47, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 48.

9. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.8, где вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 и вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42.

10. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-5, где первый антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 51,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 52,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 53,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 54,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 55, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 56.

11. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.10, где вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49 и вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.

12. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-5, где первый антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 324,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 325,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 326,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 327,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 328, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 329.

13. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.12, где вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59 и вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.

14. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-5, где вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101 и вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102.

15. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-5, где вариабельный домен тяжелой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103 и вариабельный домен легкой цепи первого антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104.

16. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-15, где второй антигенсвязывающий сайт представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).

17. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп. 1-16, где второй антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 176,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 177,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 178,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 180,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 181, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 182.

18. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.17, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 175 и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 179.

19. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп. 1-16, где второй антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 184,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 185,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 186,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 188,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 189, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 190.

20. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.19, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 183 и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187.

21. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп. 1-16, где второй антигенсвязывающий сайт содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 192,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 193,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 194,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 196,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 197, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 198.

22. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.21, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 191 и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 195.

23. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп. 1-16, где второй антигенсвязывающий сайт связывает CD19 и содержит:

последовательность CDR1 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 200,

последовательность CDR2 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 201,

последовательность CDR3 тяжелой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 202,

последовательность CDR1 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 204,

последовательность CDR2 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 205, и

последовательность CDR3 легкой цепи, идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 206.

24. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.23, где вариабельный домен тяжелой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 199 и вариабельный домен легкой цепи второго антигенсвязывающего сайта содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 203.

25. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-24, где Fc-домен антитела содержит шарнирный и CH2-домены.

26. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.25, где шарнирный и СН2-домены принадлежат человеческому антителу IgG1.

27. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.25, где Fc-домен антитела содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотам 234-332 человеческого антитела IgG1.

28. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п.25, где Fc-домен антитела содержит аминокислотную последовательность, которая отличается от Fc-домена человеческого IgG1 в одном или более положениях, выбранных из группы, состоящей из Q347, Y349, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411, K439.

29. Полиспецифический связывающий белок, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по п. 28, где первый полипептид содержит замены K360E и K409W и второй полипептид содержит замены Q347R, D399V и F405T.

30. Фармацевтическая композиция для лечения злокачественного новообразования, экспрессирующего CD19, содержащая эффективное количество полиспецифического связывающего белка, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-29 и фармацевтически приемлемый носитель.

31. Клетка-хозяин для получения полиспецифического связывающего белка, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, содержащая одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих полиспецифический связывающий белок по любому из пп.1-29.

32. Способ усиления гибели опухолевых клеток, экспрессирующих CD19, включающий:

(i) воздействие на указанные опухолевые клетки и на клетки-натуральные киллеры эффективного количества полиспецифического связывающего белка, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-29; и

(ii) обеспечение возможности указанному полиспецифическому связывающему белку, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, одновременно связаться с указанными клетками-натуральными киллерами, экспрессирующими NKG2D и CD16, и указанными опухолевыми клетками, экспрессирующими CD19, где одновременное связывание повышает цитотоксическую активность указанных клеток-натуральных киллеров в отношении указанных опухолевых клеток.

33. Способ лечения злокачественного новообразования, экспрессирующего CD19, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества полиспецифического связывающего белка, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-29 или фармацевтической композиции по п.30.

34. Способ лечения злокачественного новообразования, экспрессирующего CD19, по п.33, где злокачественное новообразование, подлежащее лечению, выбирают из группы, состоящей из хронического лимфоцитарного лейкоза, неходжкинской лимфомы, фолликулярной лимфомы, острого лимфобластного лейкоза, В-клеточных злокачественных новообразований, множественной миеломы и миелолейкоза.

35. Способ усиления гибели клеток-мишеней, экспрессирующих CD19, включающий:

(i) воздействие на клетки-мишени и на клетки-натуральные киллеры эффективного количества полиспецифического связывающего белка, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, по любому из пп.1-29; и

(ii) обеспечение возможности указанному полиспецифическому связывающему белку, который связывает NKG2D, CD19 и CD16, одновременно связаться с указанными клетками-натуральными киллерами, экспрессирующими NKG2D и CD16, и клетками-мишенями, экспрессирующими CD19, где одновременное связывание повышает цитотоксическую активность указанных клеток-натуральных киллеров в отношении указанных клеток-мишеней.