RU2825570C1 - USE OF COMPOSITION CONTAINING ERRγ INHIBITOR AS ACTIVE INGREDIENT FOR ENHANCING ANTI-TUMOUR EFFECT - Google Patents
USE OF COMPOSITION CONTAINING ERRγ INHIBITOR AS ACTIVE INGREDIENT FOR ENHANCING ANTI-TUMOUR EFFECT Download PDFInfo
- Publication number
- RU2825570C1 RU2825570C1 RU2022115954A RU2022115954A RU2825570C1 RU 2825570 C1 RU2825570 C1 RU 2825570C1 RU 2022115954 A RU2022115954 A RU 2022115954A RU 2022115954 A RU2022115954 A RU 2022115954A RU 2825570 C1 RU2825570 C1 RU 2825570C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liver cancer
- sorafenib
- errγ
- protein
- patient
- Prior art date
Links
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИAREA OF TECHNOLOGY
Настоящее изобретение относится к применению композиции для усиления противоопухолевого эффекта, включающей в качестве активного ингредиента ингибитор эстроген-связанного рецептора гамма (ERRγ), и, более конкретно, к фармацевтической композиции для ингибирования устойчивости рака печени к сорафенибу и усиления противоопухолевого эффекта, включающей ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента, способу лечения устойчивого к сорафенибу рака печени с его использованием. Кроме того, оно относится к набору для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, в котором ERRγ используется в качестве биомаркера для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, и к способу предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени с его использованием.The present invention relates to the use of a composition for enhancing an antitumor effect, comprising an estrogen-related receptor gamma (ERRγ) inhibitor as an active ingredient, and more particularly to a pharmaceutical composition for inhibiting liver cancer resistance to sorafenib and enhancing an antitumor effect, comprising an ERRγ inhibitor as an active ingredient, a method for treating sorafenib-resistant liver cancer using it. In addition, it relates to a kit for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer, in which ERRγ is used as a biomarker for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer, and a method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer using it.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИPRIOR ART
Одной из основных причин смерти в Корее являются злокачественные новообразования (рак). Согласно статистике причин смерти, опубликованной Национальным статистическим управлением, уровень смертности от рака печени в 2016 году составил 21,5 на 100000 человек, что уступает только смертности от рака легких (Hepatocellular Carcinoma Treatment Guidelines, Korean Liver Cancer Society, 2018).One of the leading causes of death in Korea is malignant neoplasms (cancer). According to the cause of death statistics released by the National Statistics Office, the death rate from liver cancer in 2016 was 21.5 per 100,000 people, second only to that from lung cancer (Hepatocellular Carcinoma Treatment Guidelines, Korean Liver Cancer Society, 2018).
Основным способом лечения рака печени является резекция печени, которая представляет собой основной терапевтический метод лечения пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой, ограниченной печенью без цирроза (Lang Н., Liver resection for hepatocellular carcinoma in non-cirrhotic liver without underlying viral hepatitis. Br J Surg. 2005 Feb. 92(2): 198-202), но его можно рассматривать в первую очередь, когда ожидается, что остаточная функция печени будет достаточной даже при наличии цирроза (Capussotti L, Muratore A, Massucco Р, Ferrero A, Polastri R, Bouzari H Major liver resections for hepatocellular carcinoma on cirrhosis: early and long-term outcomes. Liver Transpl., 2004 Feb, 10 (2 Suppl 1): S64-8), и только 30-40% пациентов с диагнозом на ранней стадии можно лечить хирургическим путем.The mainstay of liver cancer treatment is liver resection, which is the mainstay of treatment for patients with hepatocellular carcinoma limited to the liver without cirrhosis (Lang H., Liver resection for hepatocellular carcinoma in non-cirrhotic liver without underlying viral hepatitis. Br J Surg. 2005 Feb. 92(2): 198-202), but it may be considered first when residual liver function is expected to be sufficient even in the presence of cirrhosis (Capussotti L, Muratore A, Massucco P, Ferrero A, Polastri R, Bouzari H Major liver resections for hepatocellular carcinoma on cirrhosis: early and long-term outcomes. Liver Transpl., 2004 Feb, 10 (2 Suppl 1): S64-8), and only 30-40% of patients diagnosed at an early stage can be treated surgically.
При наличии внепеченочных метастазов в местные лимфатические узлы, легкие и т.п. или при инвазии сосудов печени пациентов лечат с использованием мультикиназного ингибитора сорафениба (Nexavar®). В этом случае степень повышения выживаемости в клинической практике не соответствует ожидаемому уровню, и рак рецидивирует в течение 6 мес.Таким образом, продолжаются попытки по преодолению этого заболевания (Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, et al., Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma. N Engl J Med 2008; 359: 378-390).In the presence of extrahepatic metastases to local lymph nodes, lungs, etc., or in the presence of hepatic vascular invasion, patients are treated with the multikinase inhibitor sorafenib (Nexavar®). In this case, the degree of survival improvement in clinical practice does not meet the expected level, and the cancer relapses within 6 months. Thus, attempts to overcome this disease continue (Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC, et al., Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma. N Engl J Med 2008; 359: 378-390).
Тем временем проводятся исследования метаболизма рака и разработка новых лекарственных средств, чтобы преодолеть ограничения существующих противоопухолевых препаратов или направленных терапевтических агентов, а также изучить метаболические характеристики рака путем исследования специфического метаболического контроля раковых клеток, отличных от нормальных клеток (Vander Heiden MG. Targeting cancer metabolism: a therapeutic window opens. Nat Rev Drug Discov 2011; 10: 671-684).Meanwhile, cancer metabolism research and drug development are being conducted to overcome the limitations of existing anticancer drugs or targeted therapeutic agents, and to study the metabolic characteristics of cancer by investigating the specific metabolic control of cancer cells that differs from normal cells (Vander Heiden MG. Targeting cancer metabolism: a therapeutic window opens. Nat Rev Drug Discov 2011; 10: 671-684).
ДОКУМЕНТ УРОВНЯ ТЕХНИКИPRIOR ART DOCUMENT
Патентный документPatent document
Патентный документ 1: публикация патента Кореи No. 10-1704533Patent Document 1: Korea Patent Publication No. 10-1704533
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDISCLOSURE OF INVENTION
Техническая задачаTechnical task
Соответственно, авторы настоящего изобретения обнаружили, что ингибитор ERRγ ингибирует устойчивость рака печени к сорафенибу и эффективно ингибирует пролиферацию рака печени. Таким образом, настоящее изобретение было создано на основе этого обнаружения.Accordingly, the present inventors have found that an ERRγ inhibitor inhibits the resistance of liver cancer to sorafenib and effectively inhibits the proliferation of liver cancer. Thus, the present invention has been completed based on this finding.
Соответственно, одна из задач настоящего изобретения заключается в предложении фармацевтической композиции для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающей ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.Accordingly, one of the objects of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising an ERRγ inhibitor as an active ingredient.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении фармацевтической композиции для ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающей ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for inhibiting sorafenib resistance in liver cancer, comprising an ERRγ inhibitor as an active ingredient.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении фармацевтической композиции для предупреждения или лечения рака печени, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating liver cancer, comprising an ERRγ inhibitor and sorafenib as active ingredients.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа скрининга вещества, которое усиливает лечение устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего обработку клеток рака печени, устойчивых к сорафенибу, веществом-кандидатом и оценку активности или экспрессии ERRγ в клетках.Another object of the present invention is to provide a method for screening for a substance that enhances the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising treating sorafenib-resistant liver cancer cells with a candidate substance and assessing the activity or expression of ERRγ in the cells.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении набора для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего агент для измерения уровня мРНК гена эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или белка, экспрессируемого из него.Another object of the present invention is to provide a diagnostic kit for sorafenib-resistant liver cancer comprising an agent for measuring the level of mRNA of the estrogen-related receptor γ (ERRγ) gene or the protein expressed from it.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего следующие стадии:Another object of the present invention is to provide a method for providing information for the diagnosis of sorafenib-resistant liver cancer, comprising the following steps:
(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, для определения того проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу;(a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer to determine whether the liver cancer exhibits resistance to sorafenib;
(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и(b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and
(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).(c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer when the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (a) is higher than the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (b).
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предоставления информации, необходимой для определения терапевтического способа для пациента с раком печени, включающего следующие стадии:Another object of the present invention is to provide a method for providing information necessary for determining a therapeutic method for a patient with liver cancer, comprising the following steps:
(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;(a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer;
(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и(b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and
(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).(c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer when the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (a) is higher than the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (b).
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа диагностики или лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего следующие стадии:Another object of the present invention is to provide a method for diagnosing or treating sorafenib-resistant liver cancer, comprising the following steps:
(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;(a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer;
(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и(b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and
(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение другого терапевтического агента против рака печени, отличного от сорафениба, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).(c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer and administering another therapeutic agent against liver cancer other than sorafenib when the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in step (a) is higher than the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in step (b).
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающего введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.Another object of the present invention is to provide a method for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising administering an ERRγ inhibitor to a patient with sorafenib-resistant liver cancer.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающего введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.Another object of the present invention is to provide a method for inhibiting sorafenib resistance in liver cancer, comprising administering an ERRγ inhibitor to a patient with sorafenib-resistant liver cancer.
Еще одна задача настоящего изобретения заключается в предложении способа предупреждения или лечения рака печени, включающего введение ингибитора ERRγ и сорафениба пациенту с раком печени.Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating liver cancer comprising administering an ERRγ inhibitor and sorafenib to a patient with liver cancer.
Однако технические задачи, которые должны быть решены в настоящем изобретении, не ограничиваются вышеописанными техническими задачами, и поэтому следует понимать, что технические задачи, которые не описаны в данном описании, станут очевидными для специалистов в данной области техники из подробного описания изобретения.However, the technical problems to be solved in the present invention are not limited to the above-described technical problems, and therefore it should be understood that technical problems that are not described in this description will become obvious to those skilled in the art from the detailed description of the invention.
Техническое решениеTechnical solution
Для решения вышеуказанных задач в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения предложен агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или усилении лечения устойчивого к сорфенибу рака печени.To solve the above problems, according to one aspect of the present invention, there is provided an agent capable of inhibiting the activity of the estrogen-related receptor γ (ERRγ) protein or the expression of the ERRγ gene, for use in the prevention or enhancement of the treatment of sorfenib-resistant liver cancer.
В данном отношении, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающая ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.In this regard, according to another aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising an ERRγ inhibitor as an active ingredient.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.According to another aspect of the present invention, there is provided a method for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising administering to a subject an ERRγ inhibitor.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение ингибитора ERRγ для предупреждения, облегчения состояния или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.According to another aspect of the present invention, there is provided the use of an ERRγ inhibitor for the prevention, amelioration or enhancement of treatment of sorafenib-resistant liver cancer.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения агент для ингибирования активности белка ERRγ может представлять собой обратный агонист или антагонист против ERRγ, или антитело или аптамер, способные специфически связываться с ERRγ, но настоящее изобретение не ограничивается этим.According to one embodiment of the present invention, the agent for inhibiting the activity of ERRγ protein may be an inverse agonist or antagonist against ERRγ, or an antibody or aptamer capable of specifically binding to ERRγ, but the present invention is not limited thereto.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения обратный агонист против ERRγ может представлять собой соединение следующей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, но не ограничивается соединением, при условии что оно является обратным агонистом против ERRγ, который проявляет действие, эквивалентное данному соединению:According to one embodiment of the present invention, the inverse agonist against ERRγ may be a compound of the following formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, but is not limited to the compound as long as it is an inverse agonist against ERRγ that exhibits an action equivalent to this compound:
[Формула 1][Formula 1]
В соответствии с другим воплощением настоящего изобретения агент для ингибирования экспрессии гена ERRγ может быть выбран из группы, состоящей из микроРНК, миРНК (малая интерферирующая РНК), кшРНК (короткая шпилечная РНК) и антисмыслового олигонуклеотида, все из которых специфически связываются с мРНК данного гена, но настоящее изобретение не ограничивается этим.According to another embodiment of the present invention, the agent for inhibiting the expression of the ERRγ gene may be selected from the group consisting of microRNA, siRNA (small interfering RNA), shRNA (short hairpin RNA) and antisense oligonucleotide, all of which specifically bind to the mRNA of the gene, but the present invention is not limited thereto.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в ингибировании устойчивости к сорафенибу при предупреждении или лечении рака печени.According to another aspect of the present invention, there is provided an agent capable of inhibiting ERRγ protein activity or ERRγ gene expression for use in inhibiting sorafenib resistance in the prevention or treatment of liver cancer.
В данном отношении, согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающая ингибитор ERRγ в качестве активного ингредиента.In this regard, according to another aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for inhibiting sorafenib resistance in liver cancer, comprising an ERRγ inhibitor as an active ingredient.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.According to another aspect of the present invention, there is provided a method of inhibiting sorafenib resistance in liver cancer, comprising administering to a subject an ERRγ inhibitor.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение ингибитора ERRγ для ингибирования устойчивости рака печени к сорафенибу.According to another aspect of the present invention, there is provided the use of an ERRγ inhibitor for inhibiting liver cancer resistance to sorafenib.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена композиция, включающая агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или лечении рака печени.According to another aspect of the present invention, there is provided a composition comprising an agent capable of inhibiting ERRγ protein activity or ERRγ gene expression for use in the prevention or treatment of liver cancer.
В данном отношении, согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения рака печени, включающая ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.In this regard, according to another aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for preventing or treating liver cancer, comprising an ERRγ inhibitor and sorafenib as active ingredients.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предупреждения или лечения рака печени, включающий введение субъекту композиции, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.According to another aspect of the present invention, there is provided a method for preventing or treating liver cancer, comprising administering to a subject a composition comprising an ERRγ inhibitor and sorafenib as active ingredients.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено применение композиции, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов, для предупреждения, улучшения состояния или усиления лечения рака печени.According to another aspect of the present invention, there is provided the use of a composition comprising an ERRγ inhibitor and sorafenib as active ingredients for preventing, improving or enhancing the treatment of liver cancer.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения композиция может повышать лекарственную чувствительность рака печени к сорафенибу или может усиливать противоопухолевый эффект сорафениба в отношении рака печени, но настоящее изобретение этим не ограничивается.According to one embodiment of the present invention, the composition may increase the drug sensitivity of liver cancer to sorafenib or may enhance the antitumor effect of sorafenib against liver cancer, but the present invention is not limited thereto.
Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения композицию можно вводить одновременно с сорафенибом, отдельно или последовательно, но настоящее изобретение этим не ограничивается.According to another embodiment of the present invention, the composition can be administered simultaneously with sorafenib, separately or sequentially, but the present invention is not limited thereto.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ скрининга вещества, усиливающего лечение устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий обработку клеток рака печени, устойчивого к сорафенибу, веществом-кандидатом и оценку активности или экспрессии ERRγ в этих клетках.According to another aspect of the present invention, there is provided a method of screening for a substance that enhances the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising treating sorafenib-resistant liver cancer cells with a candidate substance and assessing the activity or expression of ERRγ in these cells.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен набор для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий агент для измерения уровня мРНК гена эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или белка, экспрессируемого из него.According to another aspect of the present invention, there is provided a kit for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer, comprising an agent for measuring the level of mRNA of the estrogen-related receptor γ (ERRγ) gene or a protein expressed from it.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения агент для измерения уровня мРНК гена может включать пару праймеров, зонд или антисмысловой нуклеотид, который специфически связывается с данным геном, но настоящее изобретение этим не ограничивается.According to one embodiment of the present invention, an agent for measuring the mRNA level of a gene may include a pair of primers, a probe, or an antisense nucleotide that specifically binds to the gene, but the present invention is not limited thereto.
Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения агент для измерения уровня белка может включать антитело или аптамер, специфичные для данного белка, но настоящее изобретение не ограничивается этим.According to another embodiment of the present invention, the agent for measuring the protein level may include an antibody or aptamer specific for the protein, but the present invention is not limited thereto.
Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения набор может включать набор для ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией), набор для конкурентной ОТ-ПЦР, набор для ОТ-ПЦР в реальном времени, набор ДНК-чипов или набор белковых чипов, но настоящее изобретение не ограничивается этим.According to another embodiment of the present invention, the kit may include an RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction) kit, a competitive RT-PCR kit, a real-time RT-PCR kit, a DNA chip kit or a protein chip kit, but the present invention is not limited thereto.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий следующие стадии:According to another aspect of the present invention, there is provided a method for providing information for the diagnosis of sorafenib-resistant liver cancer, comprising the following steps:
(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, для определения того проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу;(a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer to determine whether the liver cancer exhibits resistance to sorafenib;
(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и(b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and
(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).(c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer when the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (a) is higher than the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (b).
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ предоставления информации, необходимой для определения терапевтического способа для пациента с раком печени, включающий следующие стадии:According to another aspect of the present invention, there is provided a method for providing information necessary for determining a therapeutic method for a patient with liver cancer, comprising the following steps:
(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;(a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer;
(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и(b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and
(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).(c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer when the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (a) is higher than the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in stage (b).
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен способ диагностики или лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий следующие стадии:According to another aspect of the present invention, there is provided a method for diagnosing or treating sorafenib-resistant liver cancer, comprising the following steps:
(а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени;(a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer;
(б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и(b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and
(в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение другого терапевтического агента против рака печени, отличного от сорафениба, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).(c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer and administering another therapeutic agent against liver cancer other than sorafenib when the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in step (a) is higher than the level of expression of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed from it measured in step (b).
Согласно одному воплощению настоящего изобретения биологический образец может включать ткань печени, клетки печени, цельную кровь, плазму, сыворотку или кровь, но настоящее изобретение ими не ограничивается.According to one embodiment of the present invention, the biological sample may include liver tissue, liver cells, whole blood, plasma, serum or blood, but the present invention is not limited thereto.
Благоприятные эффектыBeneficial effects
Согласно настоящему изобретению ингибитор эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) обладает эффектом повышения чувствительности к противоопухолевому препарату сорафенибу, ингибирования пролиферации устойчивых к сорафенибу клеток рака печени и значительного уменьшения размера рака печени. Таким образом, ожидается, что настоящее изобретение будет эффективно использовано в качестве фармацевтической композиции для лечения распространенного рака печени, устойчивого к сорафенибу. Кроме того, с помощью способа предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению можно прогнозировать терапевтическую реакцию пациентов с раком печени на сорафениб и тем самым определять терапевтическую стратегию для каждого пациента на основе результатов прогнозирования, таким образом обеспечивая эффективное лечение рака печени.According to the present invention, the estrogen-related receptor γ (ERRγ) inhibitor has the effect of increasing sensitivity to the antitumor drug sorafenib, inhibiting the proliferation of sorafenib-resistant liver cancer cells, and significantly reducing the size of liver cancer. Therefore, the present invention is expected to be effectively used as a pharmaceutical composition for the treatment of advanced liver cancer resistant to sorafenib. In addition, by using the method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention, it is possible to predict the therapeutic response of liver cancer patients to sorafenib, and thereby determine a therapeutic strategy for each patient based on the prediction results, thereby providing effective treatment for liver cancer.
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
Фиг. 1А-1В представляют собой диаграммы, показывающие результаты конструирования клеточной линии рака печени, проявляющей устойчивость к сорафенибу (Huh7: клеточная линия рака печени; Huh7-R: устойчивая к сорафенибу клеточная линия рака печени; SK-Hep: клеточная линия рака печени; SK-Hep-R: устойчивая к сорафенибу клеточная линия рака печени).Fig. 1A-1B are diagrams showing the results of constructing a liver cancer cell line exhibiting sorafenib resistance (Huh7: liver cancer cell line; Huh7-R: sorafenib-resistant liver cancer cell line; SK-Hep: liver cancer cell line; SK-Hep-R: sorafenib-resistant liver cancer cell line).
Фиг. 2А и 2Б представляют собой диаграммы, показывающие, что орфанный ядерный рецептор ERRγ увеличивается в клеточных линиях рака печени, устойчивых к сорафенибу Huh7-R (Фиг. 2А) и SK-Hep-R (Фиг. 2Б).Fig. 2A and 2B are graphs showing that the orphan nuclear receptor ERRγ is increased in sorafenib-resistant liver cancer cell lines Huh7-R (Fig. 2A) and SK-Hep-R (Fig. 2B).
Фиг. 3А и 3Б представляют собой диаграммы, показывающие результаты лечения устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени Huh7-R (Фиг. 3А) и SK-Hep-R (Фиг. 3Б) соединением (DN200434) формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, что указывает на увеличение количества реакционноспособных форм кислорода (ROS) в каждой из устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени.Fig. 3A and 3B are graphs showing the results of treatment of sorafenib-resistant liver cancer cell lines Huh7-R (Fig. 3A) and SK-Hep-R (Fig. 3B) with the compound (DN200434) of formula 1, which is an inverse agonist against ERRγ, indicating an increase in the amount of reactive oxygen species (ROS) in each of the sorafenib-resistant liver cancer cell lines.
Фиг. 4А и 4Б представляют собой диаграммы, показывающие, что устойчивые к сорафенибу клеточные линии рака печени Huh7-R (Фиг. 4А) и SK-Hep-R (Фиг. 4Б), которые не оказывали противоопухолевого эффекта при обработке клеточных линий только сорафенибом, снижали пролиферацию клеток при одновременной обработке клеточных линий соединением формулы 1 (DN200434) и сорафенибом.Fig. 4A and 4B are graphs showing that sorafenib-resistant liver cancer cell lines Huh7-R (Fig. 4A) and SK-Hep-R (Fig. 4B), which had no antitumor effect when the cell lines were treated with sorafenib alone, had reduced cell proliferation when the cell lines were co-treated with compound of formula 1 (DN200434) and sorafenib.
Фиг. 5А представляет собой изображение, показывающее, что размер опухоли заметно уменьшается в животной модели (ксенотрансплантат), полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контрольной группой (группа, получавшая только сорафениб).Fig. 5A is an image showing that the tumor size is markedly reduced in an animal model (xenograft) derived from sorafenib-resistant liver cancer cell line Huh7-R when the compound of formula 1 (DN200434) is administered in combination with sorafenib, compared with the control group (sorafenib-only group).
Фиг. 5Б представляет собой график, показывающий, что масса опухоли заметно снижается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб).Fig. 5B is a graph showing that tumor weight was significantly reduced in an animal model derived from sorafenib-resistant liver cancer cell line Huh7-R when the compound of formula 1 (DN200434) was administered in combination with sorafenib, compared with the control (sorafenib-only group).
Фиг. 5В представляет собой диаграмму, показывающую, что объем опухоли значительно уменьшается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (Huh7-R-Con; группа, получавшая только сорафениб).Fig. 5B is a graph showing that tumor volume is significantly reduced in an animal model derived from the sorafenib-resistant liver cancer cell line Huh7-R when the compound of formula 1 (DN200434) is administered in combination with sorafenib, compared with the control (Huh7-R-Con; sorafenib-only group).
Фиг. 5Г представляет собой диаграмму, показывающую отсутствие изменений массы тела между группами в результате эксперимента с использованием животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R.Fig. 5G is a graph showing the absence of changes in body weight between groups as a result of the experiment using an animal model derived from the sorafenib-resistant liver cancer cell line Huh7-R.
Фиг. 6А представляет собой изображение, показывающее, что размер опухоли значительно уменьшается в животной модели (ксенотрансплантат), полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб).Fig. 6A is an image showing that the tumor size was significantly reduced in an animal model (xenograft) derived from sorafenib-resistant liver cancer cell line SK-Hep-R when the compound of formula 1 (DN200434) was administered in combination with sorafenib, compared with the control (sorafenib-only group).
Фиг. 6Б представляет собой график, показывающий, что масса опухоли значительно уменьшается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб).Fig. 6B is a graph showing that tumor weight was significantly reduced in an animal model derived from sorafenib-resistant liver cancer cell line SK-Hep-R when the compound of formula 1 (DN200434) was administered in combination with sorafenib, compared to the control (sorafenib-only group).
Фиг. 6В представляет собой диаграмму, показывающую, что объем опухоли заметно уменьшается в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, когда соединение формулы 1 (DN200434) вводят в комбинации с сорафенибом, по сравнению с контролем (Huh7-R-Con; группа, получавшая только сорафениб).Fig. 6B is a graph showing that tumor volume was significantly reduced in an animal model derived from sorafenib-resistant liver cancer cell line SK-Hep-R when the compound of formula 1 (DN200434) was administered in combination with sorafenib, compared with the control (Huh7-R-Con; sorafenib-only group).
Фиг. 6Г представляет собой диаграмму, показывающую отсутствие изменений массы тела между группами в результате эксперимента с использованием животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R.Fig. 6G is a graph showing the absence of changes in body weight between groups as a result of the experiment using an animal model derived from the sorafenib-resistant liver cancer cell line SK-Hep-R.
Наилучший способ осуществления изобретенияThe best mode of carrying out the invention
В настоящем изобретении предложен агент, способный ингибировать активность белка эстроген-связанного рецептора γ (ERRγ) или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или усилении лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.The present invention provides an agent capable of inhibiting estrogen-related receptor γ (ERRγ) protein activity or ERRγ gene expression for use in preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer.
В данном отношении, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающая в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ.In this regard, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising as an active ingredient an agent capable of inhibiting the activity of the ERRγ protein or the expression of the ERRγ gene.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в ингибировании устойчивости к сорафенибу при предупреждении или лечении рака печени.According to another aspect of the present invention, the present invention provides an agent capable of inhibiting ERRγ protein activity or ERRγ gene expression for use in inhibiting sorafenib resistance in the prevention or treatment of liver cancer.
В данном отношении, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающая в качестве активного ингредиента агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ.In this regard, the present invention provides a pharmaceutical composition for inhibiting sorafenib resistance in liver cancer, comprising as an active ingredient an agent capable of inhibiting ERRγ protein activity or ERRγ gene expression.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложена композиция, включающая агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, для использования в предупреждении или лечении рака печени.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a composition comprising an agent capable of inhibiting ERRγ protein activity or ERRγ gene expression for use in the prevention or treatment of liver cancer.
В данном отношении, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения рака печени, включающая в качестве активных ингредиентов агент, способный ингибировать активность белка ERRγ или экспрессию гена ERRγ, и сорафениб.In this regard, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating liver cancer, comprising as active ingredients an agent capable of inhibiting the activity of the ERRγ protein or the expression of the ERRγ gene, and sorafenib.
Как используют в данном описании, термин «рак печени» относится к первичной злокачественной опухоли, возникающей преимущественно в печени. В патологическом (анамнестическом) аспекте первичная злокачественная опухоль включает различные типы первичного рака печени, такие как гепатоцеллюлярная карцинома, холангиокарцинома, гепатобластома и гемангиосаркома. Среди них гепатоцеллюлярная карцинома и холангиокарцинома составляют большинство случаев первичного рака печени.As used herein, the term "liver cancer" refers to a primary malignant tumor that occurs primarily in the liver. In the pathological (anamnestic) aspect, the primary malignant tumor includes various types of primary liver cancer, such as hepatocellular carcinoma, cholangiocarcinoma, hepatoblastoma, and hemangiosarcoma. Among them, hepatocellular carcinoma and cholangiocarcinoma account for the majority of primary liver cancers.
В настоящем изобретении рак печени может представлять собой гепатоцеллюлярную карциному (НСС), но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the present invention, liver cancer may be hepatocellular carcinoma (HCC), but the present invention is not limited thereto.
Как используют в данном описании, термин «усиление лечения» относится ко всем типам действий для улучшения или благоприятного изменения симптомов устойчивого к сорафенибу рака печени путем введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению после того, как рак печени приобрел устойчивость к сорафенибу.As used herein, the term "enhancement of treatment" refers to all types of actions to improve or favorably change the symptoms of sorafenib-resistant liver cancer by administering the pharmaceutical composition of the present invention after the liver cancer has become resistant to sorafenib.
Как используют в данном описании, термин «лечение» относится ко всем типам действий по улучшению или благоприятному изменению симптомов рака печени путем введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению до или после того, как рак печени приобрел устойчивость к сорафенибу.As used herein, the term "treatment" refers to all types of actions to improve or favorably change the symptoms of liver cancer by administering the pharmaceutical composition of the present invention before or after the liver cancer has become resistant to sorafenib.
В настоящем изобретении фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может повышать чувствительность лекарственного средства к сорафенибу или может усиливать противоопухолевый эффект сорафениба в отношении рака печени, но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the present invention, the pharmaceutical composition of the present invention can increase the sensitivity of a drug to sorafenib or can enhance the antitumor effect of sorafenib against liver cancer, but the present invention is not limited thereto.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения клеточная линия Huh7-SR или SK-Hep-R была сконструирована в качестве устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени, и было подтверждено, что эстроген-связанный рецептор γ (ERRγ) в качестве орфанного ядерного рецептора значительно увеличивается в клеточной линии рака печени, приобретающей устойчивость к сорафенибу (см. Пример 1).According to one embodiment of the present invention, the Huh7-SR or SK-Hep-R cell line was engineered as a sorafenib-resistant liver cancer cell line, and it was confirmed that estrogen-related receptor γ (ERRγ) as an orphan nuclear receptor was significantly increased in the liver cancer cell line acquiring sorafenib resistance (see Example 1).
Также согласно одному воплощению настоящего изобретения было подтверждено, что при обработке устойчивых к сорафенибу клеток рака печени соединением (DN200434) формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, ROS увеличивается. Кроме того, было подтверждено, что устойчивые к сорафенибу клетки рака печени, которые не оказывали противоопухолевого эффекта при обработке клеточных линий только сорафенибом, снижали пролиферацию клеток при одновременной обработке клеточных линий соединением (DN200434) формулы 1 и сорафенибом. В результате было подтверждено, что соединение формулы 1 повышает чувствительность к сорафенибу посредством ингибирования активности ERRγ, тем самым проявляя эффект преодоления лекарственной устойчивости (см. Пример 2).Also, according to one embodiment of the present invention, it was confirmed that when sorafenib-resistant liver cancer cells were treated with the compound (DN200434) of formula 1, which is an inverse agonist against ERRγ, ROS was increased. In addition, it was confirmed that sorafenib-resistant liver cancer cells, which did not have an antitumor effect when the cell lines were treated with sorafenib alone, reduced cell proliferation when the cell lines were simultaneously treated with the compound (DN200434) of formula 1 and sorafenib. As a result, it was confirmed that the compound of formula 1 increased sensitivity to sorafenib by inhibiting ERRγ activity, thereby exhibiting an effect of overcoming drug resistance (see Example 2).
Кроме того, согласно одному воплощению настоящего изобретения было подтверждено, что при измерении изменения размера массы, образованной после введения соединения формулы 1 в комбинации с сорафенибом, на животной модели, полученной из устойчивого к сорафенибу рака печени, размер рака печени заметно снижается по сравнению с контролем (группа, получавшая только сорафениб) (см. Пример 3).In addition, according to one embodiment of the present invention, it was confirmed that when measuring the change in the size of the mass formed after administration of the compound of formula 1 in combination with sorafenib in an animal model derived from sorafenib-resistant liver cancer, the size of the liver cancer was markedly reduced compared with the control (the sorafenib-only group) (see Example 3).
В настоящем изобретении агент для ингибирования активности белка ERRγ может представлять собой обратный агонист или антагонист против ERRγ, или антитело или аптамер, способные специфически связываться с ERRγ, но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the present invention, the agent for inhibiting the activity of ERRγ protein may be an inverse agonist or antagonist against ERRγ, or an antibody or aptamer capable of specifically binding to ERRγ, but the present invention is not limited thereto.
Как используют в данном описании, термин «обратный агонист» или «антагонист» относится к молекуле, способной прямо или опосредованно снижать биологическую активность рецептора, и включает молекулы, способные снижать действие лиганда при использовании в сочетании с лигандом рецептора, но настоящее изобретение не ограничивается этим.As used herein, the term "inverse agonist" or "antagonist" refers to a molecule capable of directly or indirectly reducing the biological activity of a receptor, and includes molecules capable of reducing the effect of a ligand when used in combination with a receptor ligand, but the present invention is not limited thereto.
Как используют в данном описании, термин «антитело» относится к белковой молекуле, способной специфически связываться с антигенным участком белковой или пептидной молекулы. В этом случае белок, кодируемый маркерным геном, может быть получен путем клонирования каждого гена в вектор экспрессии в соответствии с общепринятым способом, и такое антитело может быть получено из полученного белка с использованием общепринятого способа.As used herein, the term "antibody" refers to a protein molecule capable of specifically binding to an antigen site of a protein or peptide molecule. In this case, the protein encoded by the marker gene can be obtained by cloning each gene into an expression vector according to a conventional method, and such an antibody can be obtained from the obtained protein using a conventional method.
Как используют в данном описании, термин «аптамер» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, которая обладает связывающей активностью в отношении заранее определенной молекулы-мишени. Аптамер может представлять собой РНК, ДНК, модифицированную нуклеиновую кислоту или их смесь и может быть в линейной или циклической форме. В общем, химический синтез и массовое производство могут быть проще, поскольку нуклеотидная последовательность, составляющая аптамер, становится короче, и известно, что аптамер имеет большое преимущество с точки зрения затрат, легко химически модифицируется и демонстрирует превосходную стабильность in vivo и низкую токсичность.As used herein, the term "aptamer" refers to a nucleic acid molecule that has binding activity for a predetermined target molecule. The aptamer may be RNA, DNA, modified nucleic acid, or a mixture thereof, and may be in a linear or cyclic form. In general, chemical synthesis and mass production may be simpler because the nucleotide sequence constituting the aptamer becomes shorter, and it is known that the aptamer has a great advantage in terms of cost, is easily chemically modified, and exhibits excellent in vivo stability and low toxicity.
Обратный агонист и антагонист могут представлять собой соединение.The inverse agonist and antagonist may be a compound.
В настоящем изобретении обратный агонистом против ERRγ может представлять собой соединение формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, но настоящее изобретение не ограничивается этим:In the present invention, the inverse agonist against ERRγ may be a compound of formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, but the present invention is not limited to this:
[Формула 1][Formula 1]
Как используют в данном описании, термин «фармацевтически приемлемый» подходит для использования при контакте с тканями субъекта (например человека), поскольку соотношение польза/риск является разумным без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергических реакций или других проблем или осложнений. В этом случае данный термин относится к соединению или композиции, которые находятся в компетенции здравого медицинского суждения.As used herein, the term "pharmaceutically acceptable" is appropriate for use in contact with the tissues of a subject (e.g., a human) because the benefit/risk ratio is reasonable without undue toxicity, irritation, allergic reactions, or other problems or complications. In this case, the term refers to a compound or composition that is within the scope of sound medical judgment.
Соединение по настоящему изобретению можно использовать в форме фармацевтически приемлемой соли. В этом случае в качестве соли можно использовать соль присоединения кислоты, образованную фармацевтически приемлемой свободной кислотой.The compound of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt. In this case, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid can be used as the salt.
Соль присоединения кислоты может быть получена из неорганических кислот, таких как соляная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, серная кислота, бромистоводородная кислота, йодистоводородная кислота, азотная кислота или фосфорная кислота, и алифатических моно- и дикарбоксилатов, фенилзамещенных алканоатов, гидроксиалканоатов и алкандиоатов, и нетоксичных органических кислот, таких как ароматические кислоты, алифатические и ароматические сульфокислоты и т.п.The acid addition salt can be obtained from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitric acid or phosphoric acid, and aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxyalkanoates and alkanedioates, and non-toxic organic acids such as aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, etc.
Такая фармацевтически нетоксичная соль включает сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, нитрат, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, фторид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капрат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себацинат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексан-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитро бензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, терефталат, бензолсульфонат, толуолсульфонат, хлорбензолсульфонат, ксилолсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, β-гидроксибутират, гликолят, малат, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат или манделат.Such pharmaceutically non-toxic salt includes sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate, chloride, bromide, iodide, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suberate, sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methyl benzoate, dinitro benzoate, hydroxybenzoate, methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, chlorobenzenesulfonate, xylenesulfonate, phenylacetate, phenylpropionate, phenylbutyrate, citrate, lactate, β-hydroxybutyrate, glycolate, malate, tartrate, methanesulfonate, propanesulfonate, naphthalene-1-sulfonate, naphthalene-2-sulfonate, or mandelate.
Соль присоединения кислоты по настоящему изобретению может быть получена обычным способом, например, путем растворения соединения формулы 1 в водном растворе кислоты и осаждения соли в смешивающемся с водой органическом растворителе, таком как метанол, этанол, ацетон или ацетонитрил. Кроме того, соль присоединения кислоты может быть получена путем выпаривания растворителя или избытка кислоты из смеси и сушки смеси или путем отфильтровывания осажденной соли отсасыванием.The acid addition salt of the present invention can be obtained in a conventional manner, for example, by dissolving the compound of formula 1 in an aqueous solution of an acid and precipitating the salt in a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. In addition, the acid addition salt can be obtained by evaporating the solvent or excess acid from the mixture and drying the mixture or by filtering off the precipitated salt with suction.
Кроме того, фармацевтически приемлемая соль металла может быть получена с использованием основания. Соль щелочного или щелочноземельного металла получают, например, растворением соединения формулы 1 в избытке раствора гидроксида щелочного металла или гидроксида щелочноземельного металла, фильтрованием нерастворившейся соли соединения и упариванием и сушкой фильтрата. В этом случае может быть фармацевтически подходящим получение соли натрия, калия или кальция в качестве соли металла. Соль серебра, соответствующую соли металла, получают реакцией соли щелочного металла или щелочноземельного металла с подходящей солью серебра (например, нитратом серебра).In addition, a pharmaceutically acceptable metal salt can be prepared using a base. An alkali metal or alkaline earth metal salt is prepared, for example, by dissolving a compound of formula 1 in an excess of an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the undissolved salt of the compound, and evaporating and drying the filtrate. In this case, it may be pharmaceutically suitable to obtain a sodium, potassium or calcium salt as a metal salt. A silver salt corresponding to a metal salt is prepared by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable silver salt (e.g., silver nitrate).
Все изомеры, гидраты и сольваты, которые можно получить обычными способами, а также их фармацевтически приемлемые соли, могут быть включены в объем соединения по настоящему изобретению.All isomers, hydrates and solvates which can be obtained by conventional methods, as well as pharmaceutically acceptable salts thereof, may be included within the scope of the compound of the present invention.
В настоящем изобретении агент для ингибирования экспрессии гена ERRγ может быть выбран из группы, состоящей из микроРНК, миРНК, кшРНК и антисмыслового олигонуклеотида, все из которых специфически связываются с мРНК гена, но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the present invention, the agent for inhibiting the expression of the ERRγ gene may be selected from the group consisting of microRNA, siRNA, shRNA and antisense oligonucleotide, all of which specifically bind to the mRNA of the gene, but the present invention is not limited thereto.
Как используют в данном описании, термины «микроРНК», «миРНК» и «кшРНК» относятся к молекулам нуклеиновых кислот, которые в основном связываются с мРНК, транскрибируемой с гена-мишени, чтобы опосредовать РНК-интерференцию или молчание генов, тем самым ингибируя трансляцию мРНК. Поскольку микроРНК, миРНК и кшРНК могут ингибировать экспрессию гена-мишени на уровне трансляции, их можно использовать в эффективном методе нокдауна гена или методе генной терапии.As used herein, the terms "microRNA", "miRNA" and "shRNA" refer to nucleic acid molecules that primarily bind to mRNA transcribed from a target gene to mediate RNA interference or gene silencing, thereby inhibiting the translation of the mRNA. Since microRNA, siRNA and shRNA can inhibit the expression of a target gene at the translational level, they can be used in an effective gene knockdown method or gene therapy method.
Как используют в данном описании, термин «антисмысловой олигонуклеотид» относится к ДНК или РНК или их производным, содержащим последовательность нуклеиновой кислоты, комплементарную конкретной последовательности мРНК. В этом случае антисмысловой олигонуклеотид может связываться с комплементарной последовательностью мРНК, тем самым ингибируя трансляцию мРНК в белок.As used herein, the term "antisense oligonucleotide" refers to DNA or RNA or derivatives thereof that contain a nucleic acid sequence that is complementary to a specific mRNA sequence. In this case, the antisense oligonucleotide can bind to the complementary mRNA sequence, thereby inhibiting the translation of the mRNA into protein.
Между тем, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать соответствующий носитель, эксципиент и/или разбавитель, обычно используемые для приготовления фармацевтической композиции в дополнение к активному ингредиенту. Кроме того, фармацевтическая композиция может быть приготовлена в форме пероральных составов, таких как порошки, гранулы, таблетки, капсулы, суспензии, эмульсии, сиропы, аэрозоли и т.п., препаратов для наружного применения, суппозиториев и стерильных растворов для инъекций, и могут быть использованы в соответствии с обычными методами.Meanwhile, the pharmaceutical composition of the present invention may further comprise an appropriate carrier, excipient and/or diluent commonly used for preparing a pharmaceutical composition in addition to the active ingredient. In addition, the pharmaceutical composition can be prepared in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols and the like, preparations for external use, suppositories and sterile injection solutions, and can be used in accordance with conventional methods.
Носитель, эксципиент и разбавитель, которые могут быть включены в композицию, включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральные масла и т.п. При приготовлении композиции, композицию можно изготовить с использованием разбавителя или эксципиента, такого как наполнитель, разбавитель, связующее вещество, смачивающее вещество, разрыхлитель, поверхностно-активное вещество и т.п., обычно используемые в данной области техники.The carrier, excipient and diluent that can be included in the composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum arabic, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methyl hydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oils and the like. When preparing the composition, the composition can be prepared using a diluent or excipient such as a filler, a diluent, a binder, a wetting agent, a disintegrant, a surfactant and the like commonly used in the art.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят в фармацевтически эффективном количестве. В настоящем изобретении термин «фармацевтически эффективное количество» относится к количеству, достаточному для лечения заболевания при разумном соотношении польза/риск, применимом к медикаментозному лечению, и эффективный уровень дозы может быть определен в зависимости от типа и тяжести заболевания пациента, активности лекарственного средства, чувствительности к лекарственному средству, времени введения, пути введения и скорости выведения, периода лечения, факторов, включающих одновременно используемые лекарственные средства, и других факторов, хорошо известных в области медицины.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, the term "pharmaceutically effective amount" refers to an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to drug treatment, and an effective dose level can be determined depending on the type and severity of the patient's disease, drug activity, drug sensitivity, administration time, route of administration and excretion rate, treatment period, factors including concomitantly used drugs, and other factors well known in the medical field.
В настоящем изобретении фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена одновременно с сорафенибом, отдельно или последовательно, а также может быть введена в виде одной или нескольких доз.In the present invention, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered simultaneously with sorafenib, separately or sequentially, and can also be administered in single or multiple doses.
Принимая во внимание все вышеперечисленные факторы, важно вводить количество, которое может обеспечить максимальный эффект при минимальном количестве без каких-либо побочных эффектов, что может определить специалист в данной области техники. В частности, эффективное количество фармацевтической композиции по настоящему изобретению может варьировать в зависимости от возраста, пола, состояния и массы тела пациента, абсорбции активного ингредиента в организме, скорости инактивации и скорости выведения, типа заболевания и одновременно применяемых препаратов.Taking into account all the above factors, it is important to administer an amount that can provide the maximum effect with a minimum amount without any side effects, which can be determined by a person skilled in the art. In particular, the effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention can vary depending on the age, sex, condition and body weight of the patient, the absorption of the active ingredient in the body, the inactivation rate and the excretion rate, the type of disease and the drugs used simultaneously.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена субъекту различными путями введения. Например, фармацевтическую композицию можно вводить путем перорального введения, интраназального введения, трансбронхиального введения, артериальной инъекции, внутривенной инъекции, подкожной инъекции, внутримышечной инъекции или внутрибрюшинной инъекции. Суточная доза может быть введена один или несколько раз в сутки.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject by various routes of administration. For example, the pharmaceutical composition can be administered by oral administration, intranasal administration, transbronchial administration, arterial injection, intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection or intraperitoneal injection. The daily dose can be administered once or several times a day.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен способ предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising administering to a subject an ERRγ inhibitor.
В частности, предложен способ предупреждения или усиления лечения устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.In particular, a method for preventing or enhancing the treatment of sorafenib-resistant liver cancer is proposed, comprising administering an ERRγ inhibitor to a patient with sorafenib-resistant liver cancer.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении также предложен способ ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающий введение субъекту ингибитора ERRγ.According to another aspect of the present invention, the present invention also provides a method of inhibiting sorafenib resistance in liver cancer, comprising administering to a subject an ERRγ inhibitor.
В частности, предложен способ ингибирования устойчивости к сорафенибу при раке печени, включающий введение ингибитора ERRγ пациенту с устойчивым к сорафенибу раком печени.In particular, a method for inhibiting sorafenib resistance in liver cancer is proposed, comprising administering an ERRγ inhibitor to a patient with sorafenib-resistant liver cancer.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен способ предупреждения или лечения рака печени, включающий введение субъекту композиции, включающей ингибитор ERRγ и сорафениб в качестве активных ингредиентов.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method for preventing or treating liver cancer, comprising administering to a subject a composition comprising an ERRγ inhibitor and sorafenib as active ingredients.
В частности, предложен способ предупреждения или лечения рака печени, включающий введение ингибитора ERRγ и сорафениба пациенту с раком печени.In particular, a method for preventing or treating liver cancer is proposed, comprising administering an ERRγ inhibitor and sorafenib to a patient with liver cancer.
В способе по настоящему изобретению рак печени может представлять собой устойчивый к сорафенибу рак печени, но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the method of the present invention, the liver cancer may be sorafenib-resistant liver cancer, but the present invention is not limited thereto.
Как используют в данном описании, термин «субъект» относится к субъекту, нуждающемуся в предупреждении, лечении, усилении лечения заболевания или подавлении устойчивости при заболевании. Например, субъект может включать людей или млекопитающих, включая приматов, отличных от человека, мышей, собак, кошек, лошадей, овец и крупного рогатого скота.As used herein, the term "subject" refers to a subject in need of prevention, treatment, enhancement of treatment of a disease, or suppression of resistance to a disease. For example, a subject may include humans or mammals, including non-human primates, mice, dogs, cats, horses, sheep, and cattle.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении также предложен способ скрининга вещества, усиливающего лечение устойчивого к сорафенибу рака печени, включающий (а) обработку клеток с устойчивым к сорафенибу раком печени веществом-кандидатом; и (б) оценку активности или экспрессии ERRγ в клетках. Вещество, способное ингибировать активность или экспрессию ERRγ в клетках устойчивого к сорафенибу рака печени, может быть отобрано таким способом и может быть использовано в качестве усилителя или адъюванта для лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.According to another aspect of the present invention, the present invention also provides a method for screening a substance that enhances the treatment of sorafenib-resistant liver cancer, comprising (a) treating cells with sorafenib-resistant liver cancer with a candidate substance; and (b) assessing the activity or expression of ERRγ in the cells. A substance capable of inhibiting the activity or expression of ERRγ in sorafenib-resistant liver cancer cells can be selected by this method and can be used as an enhancer or adjuvant for the treatment of sorafenib-resistant liver cancer.
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен набор для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a kit for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer.
В частности, набор для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени включает агент для измерения уровня мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него.In particular, the diagnostic kit for sorafenib-resistant liver cancer includes an agent for measuring the level of mRNA of the ERRγ gene or the protein expressed from it.
В настоящем изобретении термин «диагностика» означает подтверждение наличия или характеристик патологического состояния. В настоящем изобретении диагностика заключается в определении наличия или возникновения устойчивого к сорафенибу рака печени путем измерения уровня мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него.In the present invention, the term "diagnosis" means confirmation of the presence or characteristics of a pathological condition. In the present invention, diagnosis consists of determining the presence or occurrence of sorafenib-resistant liver cancer by measuring the level of mRNA of the ERRγ gene or the protein expressed from it.
Используемый в настоящем изобретении термин «агент для измерения уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или его белка» относится к молекуле, которую можно использовать для проверки уровня экспрессии гена ERRγ или белка, кодируемого таким геном. В этом случае агент предпочтительно может представлять собой пару праймеров, зонд или антисмысловой нуклеотид, все из которых специфически связываются с геном ERRγ, или может представлять собой антитело или аптамер, специфичные для белка, кодируемого геном ERRγ.The term "an agent for measuring the expression level of the mRNA of the ERRγ gene or its protein" as used in the present invention refers to a molecule that can be used to test the expression level of the ERRγ gene or the protein encoded by such a gene. In this case, the agent may preferably be a pair of primers, a probe or an antisense nucleotide, all of which specifically bind to the ERRγ gene, or may be an antibody or aptamer specific for the protein encoded by the ERRγ gene.
В настоящем изобретении термин «праймер» относится к короткой последовательности нуклеиновой кислоты, имеющей свободную 3'-гидроксильную группу, то есть к короткой последовательности нуклеиновой кислоты, которая может образовывать пару оснований с комплементарной матрицей и служит исходной точкой для копирования матрицы. В настоящем изобретении ПЦР-амплификацию можно проводить с использованием смысловых и антисмысловых праймеров маркерного полинуклеотида по настоящему изобретению для скрининга пациентов с устойчивым к сорафенибу раком печени на уровень продукции желаемого продукта. Условия ПЦР, длина смыслового и антисмыслового праймеров могут быть модифицированы на основе того, что известно в данной области техники.In the present invention, the term "primer" refers to a short nucleic acid sequence having a free 3'-hydroxyl group, i.e., a short nucleic acid sequence that can form a base pair with a complementary template and serves as a starting point for copying the template. In the present invention, PCR amplification can be carried out using the sense and antisense primers of the marker polynucleotide of the present invention to screen patients with sorafenib-resistant liver cancer for the level of production of the desired product. PCR conditions, the length of the sense and antisense primers can be modified based on what is known in the art.
Используемый в настоящем изобретении термин «зонд» относится к фрагменту нуклеиновой кислоты, такому как РНК или ДНК, соответствующему от нескольких оснований до нескольких сотен оснований, которые могут специфически связываться с мРНК и могут быть помечены для определения наличия/отсутствия специфической мРНК. Зонд может быть изготовлен в виде олигонуклеотидного зонда, одноцепочечного ДНК-зонда, двухцепочечного ДНК-зонда, РНК-зонда и т.п. В настоящем изобретении гибридизацию можно проводить с использованием зонда, комплементарного полинуклеотиду ERRγ по настоящему изобретению, для скрининга пациентов с устойчивым к сорафенибу раком печени на основе степени гибридизации. Выбор подходящих зондов и условий гибридизации можно модифицировать на основе того, что известно в данной области техники.The term "probe" as used in the present invention refers to a nucleic acid fragment such as RNA or DNA corresponding to several bases to several hundred bases, which can specifically bind to mRNA and can be labeled to determine the presence/absence of a specific mRNA. The probe can be prepared as an oligonucleotide probe, a single-stranded DNA probe, a double-stranded DNA probe, an RNA probe, etc. In the present invention, hybridization can be carried out using a probe complementary to the ERRγ polynucleotide of the present invention to screen patients with sorafenib-resistant liver cancer based on the degree of hybridization. The selection of suitable probes and hybridization conditions can be modified based on what is known in the art.
Праймеры или зонды по настоящему изобретению могут быть химически синтезированы с использованием метода с твердой подложкой на основе фосфорамидита или других хорошо известных методов. Такие последовательности нуклеиновых кислот также могут быть модифицированы с использованием ряда способов, известных в данной области техники. Неограничивающие примеры таких модификаций включают метилирование, инкапсуляцию, замену одного или более гомологов природного нуклеотида и межнуклеотидные модификации, такие как модификации незаряженных связей (например, метилфосфонат, фосфотриэфир, фосфорамидат, карбамат и т.д.) или заряженных связей (например, фосфоротиоат, фосфородитиоат и т.д.).The primers or probes of the present invention can be chemically synthesized using a solid support method based on phosphoramidite or other well-known methods. Such nucleic acid sequences can also be modified using a number of methods known in the art. Non-limiting examples of such modifications include methylation, encapsulation, substitution of one or more homologues of a natural nucleotide, and internucleotide modifications such as modifications of uncharged bonds (e.g., methylphosphonate, phosphotriester, phosphoramidate, carbamate, etc.) or charged bonds (e.g., phosphorothioate, phosphorodithioate, etc.).
Нуклеотидную последовательность агента для измерения уровня экспрессии гена ERRγ, используемого в настоящем изобретении, интерпретируют как включающую последовательность, которая проявляет существенную идентичность с последовательностью, специфически связывающейся с геном ERRγ, с учетом мутаций, обладающих биологически эквивалентной активностью. Термин «существенная идентичность» относится к последовательности, которая демонстрирует идентичность по меньшей мере на 60%, более конкретно идентичность на 70%, еще более конкретно идентичность на 80% и наиболее конкретно идентичность на 90%, при выравнивании конкретной последовательности и любых других последовательностей до максимально возможного соответствия и анализе выровненной последовательности с использованием алгоритма, обычно используемого в данной области техники.The nucleotide sequence of the agent for measuring the expression level of the ERRγ gene used in the present invention is interpreted as including a sequence that exhibits substantial identity with a sequence that specifically binds to the ERRγ gene, taking into account mutations that have biologically equivalent activity. The term "substantial identity" refers to a sequence that exhibits at least 60% identity, more particularly 70% identity, even more particularly 80% identity, and most particularly 90% identity, when aligning the specific sequence and any other sequences to the maximum possible match and analyzing the aligned sequence using an algorithm commonly used in the art.
В наборе по настоящему изобретению термины «антитело» и «аптамер» являются такими же, как описано для фармацевтической композиции, и поэтому их описание будет опущено.In the kit of the present invention, the terms “antibody” and “aptamer” are the same as those described for the pharmaceutical composition, and therefore their description will be omitted.
Набор по настоящему изобретению можно использовать для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени путем проверки уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или уровня экспрессии белка, кодируемого этим геном, или использовать для прогнозирования терапевтического ответа на сорафениб.The kit of the present invention can be used to diagnose sorafenib-resistant liver cancer by checking the mRNA expression level of the ERRγ gene or the expression level of the protein encoded by this gene, or used to predict the therapeutic response to sorafenib.
Поскольку набор по настоящему изобретению можно использовать для прогнозирования терапевтического ответа на сорафениб, этот набор также можно использовать для предсказания прогноза у пациентов с раком печени.Since the kit of the present invention can be used to predict the therapeutic response to sorafenib, this kit can also be used to predict the prognosis of patients with liver cancer.
В настоящем изобретении термин «прогнозирование» относится к процессу предсказания медицинских последствий заранее, а для целей настоящего изобретения означает предположение об устойчивости пациентов с раком печени к сорафенибу.In the present invention, the term "prediction" refers to the process of predicting medical outcomes in advance, and for the purposes of the present invention means predicting the resistance of liver cancer patients to sorafenib.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения набор может представлять собой набор для ОТ-ПЦР, набор для конкурентного ОТ-ПЦР, набор для ОТ-ПЦР в реальном времени, набор ДНК-чипов или набор белковых чипов, но настоящее изобретение не ограничивается этим.According to one embodiment of the present invention, the kit may be an RT-PCR kit, a competitive RT-PCR kit, a real-time RT-PCR kit, a DNA chip kit or a protein chip kit, but the present invention is not limited thereto.
Согласно одному воплощению настоящего изобретения набор для измерения уровня экспрессии мРНК гена ERRγ может представлять собой набор, включающий основные элементы, необходимые для проведения ОТ-ПЦР. В дополнение к каждой паре праймеров, специфичных для маркерного гена, набор для ОТ-ПЦР содержит пробирки или другие подходящие контейнеры, реакционный буфер, дезоксинуклеотиды (дНТФ), Taq-полимеразу и обратную транскриптазу, ДНКазу, ингибитор РНКазы, DEPC-воду, стерильную воду и т.п.According to one embodiment of the present invention, a kit for measuring the mRNA expression level of the ERRγ gene may be a kit comprising the basic elements required for performing RT-PCR. In addition to each pair of primers specific for the marker gene, the RT-PCR kit comprises tubes or other suitable containers, a reaction buffer, deoxynucleotides (dNTPs), Taq polymerase and reverse transcriptase, DNase, RNase inhibitor, DEPC water, sterile water, etc.
Набор по настоящему изобретению может включать набор для выделения нуклеиновой кислоты (например, тотальной РНК) из жидкости, клеток или ткани организма, флуоресцентное вещество для мечения, фермент и среду для амплификации нуклеиновых кислот, инструкции по применению, и тому подобное.The kit of the present invention may include a kit for isolating nucleic acid (e.g., total RNA) from a fluid, cells or tissue of an organism, a fluorescent labeling agent, an enzyme and a medium for amplifying nucleic acids, instructions for use, and the like.
В соответствии с другим воплощением настоящего изобретения набор по настоящему изобретению может представлять собой набор для обнаружения ERRγ, включающий основные элементы, необходимые для использования ДНК-чипа. Набор ДНК-чипов может включать субстрат, к которому в качестве зонда присоединена кДНК, соответствующая гену или его фрагменту, и субстрат может включать кДНК, соответствующую гену количественного контроля или его фрагменту.According to another embodiment of the present invention, the kit of the present invention may be a kit for detecting ERRγ, comprising the basic elements necessary for using a DNA chip. The DNA chip kit may comprise a substrate to which a cDNA corresponding to a gene or a fragment thereof is attached as a probe, and the substrate may comprise a cDNA corresponding to a quantitative control gene or a fragment thereof.
Согласно еще одному воплощению настоящего изобретения набор для измерения уровня экспрессии белка, кодируемого ERRγ, по настоящему изобретению может включать субстрат для иммунологического обнаружения антитела, подходящий буферный раствор, вторичное антитело, меченное хромогенным ферментом или флуоресцентным веществом, хромогенный субстрат и т.п. В этом случае в качестве подложки могут быть использованы нитроцеллюлозная мембрана, 96-луночный планшет, синтезированный из поливиниловой смолы, 96-луночный планшет, синтезированный из полистирольной смолы, и предметное стекло. В качестве хромогенного фермента можно использовать пероксидазу и щелочную фосфатазу. FITC (флуоресцеин-изотиоцианат), RITC (родамин-изотиоцианат) и т.п. могут быть использованы в качестве флуоресцентного материала, a ABTS (2,2'-азино-бис-(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)), OPD (орто-фенилендиамин), ТМВ (тетраметилбензидин) и тому подобное можно использовать в качестве хромогенного субстрата.According to another embodiment of the present invention, the kit for measuring the expression level of a protein encoded by ERRγ according to the present invention may comprise a substrate for immunological detection of an antibody, a suitable buffer solution, a secondary antibody labeled with a chromogenic enzyme or a fluorescent substance, a chromogenic substrate, and the like. In this case, a nitrocellulose membrane, a 96-well plate synthesized from a polyvinyl resin, a 96-well plate synthesized from a polystyrene resin, and a glass slide can be used as a support. Peroxidase and alkaline phosphatase can be used as a chromogenic enzyme. FITC (fluorescein isothiocyanate), RITC (rhodamine isothiocyanate), and the like. can be used as a fluorescent material, and ABTS (2,2'-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)), OPD (ortho-phenylenediamine), TMB (tetramethylbenzidine) and the like can be used as a chromogenic substrate.
Набор по настоящему изобретению может быть составлен таким образом, чтобы дополнительно включать композицию, раствор или устройство, содержащее один или более других компонентов, подходящих для метода анализа.The kit of the present invention may be formulated to further include a composition, solution or device containing one or more other components suitable for the assay method.
В соответствии с еще одним аспектом, в настоящем изобретении предложен способ предоставления информации для диагностики устойчивого к сорфенибу рака печени.According to another aspect, the present invention provides a method for providing information for diagnosing sorfenib-resistant liver cancer.
Более конкретно, способ предоставления информации для диагностики устойчивого к сорфенибу рака печени включает: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени, для определения того проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).More specifically, a method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer comprises: (a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer to determine whether the liver cancer exhibits resistance to sorafenib; (b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with a common liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and (c) determining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer when the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed from it measured in step (a) is higher than the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed from it measured in step (b).
В настоящем изобретении термин «биологический образец» относится к ткани (ткани печени), клеткам (клетки печени), цельной крови, плазме, сыворотке, крови, слюне, синовиальной жидкости, моче, мокроте, лимфатической жидкости, спинномозговой жидкости, образцам аутопсии тканей (головной мозг, кожа, лимфатические узлы, спинной мозг и т.п.), супернатанте клеточной культуры или разорванных эукариотических клетках, которые имеют различные уровни экспрессии и/или активности ERRγ в качестве маркера устойчивого к сорафенибу рака печени. Кроме того, биологический образец включает образцы, полученные из метастатических поражений, а также из первичных раковых поражений. В этом случае активность или уровень экспрессии ERRγ можно определить в состоянии, в котором эти биологические образцы подвергались манипуляциям или не подвергались манипуляциям.In the present invention, the term "biological sample" refers to tissue (liver tissue), cells (liver cells), whole blood, plasma, serum, blood, saliva, synovial fluid, urine, sputum, lymph fluid, cerebrospinal fluid, tissue autopsy samples (brain, skin, lymph nodes, spinal cord, etc.), cell culture supernatant, or disrupted eukaryotic cells that have various levels of expression and/or activity of ERRγ as a marker of sorafenib-resistant liver cancer. In addition, the biological sample includes samples obtained from metastatic lesions as well as from primary cancer lesions. In this case, the activity or expression level of ERRγ can be determined in a state in which these biological samples have been manipulated or not manipulated.
В способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению биологический образец на стадии (а) может быть получен с использованием конкретного метода, известного специалистам в данной области техники. Например, биологический образец может быть получен от позвоночного, в частности от млекопитающего, и предпочтительно может быть получен от пациента с раком печени, для проверки того, проявляет ли рак печени устойчивость к сорафенибу. В данном случае пациент с раком печени представляет собой человека. Биопсия ткани часто используется для получения репрезентативного фрагмента опухолевой ткани. Альтернативно, опухолевые клетки могут быть получены непрямым путем в виде ткани или жидкости, о которых известно или предполагается, что они содержат представляющие интерес опухолевые клетки.In the method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention, the biological sample in step (a) can be obtained using a specific method known to those skilled in the art. For example, the biological sample can be obtained from a vertebrate, in particular from a mammal, and can preferably be obtained from a patient with liver cancer, to check whether the liver cancer exhibits resistance to sorafenib. In this case, the patient with liver cancer is a human. Tissue biopsy is often used to obtain a representative fragment of tumor tissue. Alternatively, tumor cells can be obtained indirectly in the form of tissue or fluid that is known or suspected to contain tumor cells of interest.
В настоящем изобретении термин «измерение уровня экспрессии мРНК» относится к процессу подтверждения наличия и уровня экспрессии мРНК гена ERRγ в биологическом образце и может быть определен путем измерения количества мРНК. Методы анализа для этого включают ОТ-ПЦР, конкурентную ОТ-ПЦР, ОТ-ПЦР в реальном времени, метод защиты от РНКаз, нозерн-блоттинг или технологию ДНК-чипов, но настоящее изобретение ими не ограничивается.In the present invention, the term "measuring the expression level of mRNA" refers to a process of confirming the presence and expression level of mRNA of the ERRγ gene in a biological sample, and can be determined by measuring the amount of mRNA. Analysis methods for this include RT-PCR, competitive RT-PCR, real-time RT-PCR, RNase protection method, Northern blotting or DNA chip technology, but the present invention is not limited thereto.
В настоящем изобретении термин «измерение уровня экспрессии белка» относится к процессу подтверждения наличия и уровня экспрессии белка, экспрессируемого из гена ERRγ, в биологическом образце. В этом случае количество белка можно определить с помощью антитела, специфически связывающегося с белком, экспрессируемым из данного гена. Методы анализа для этого включают Вестерн-блоттинг, твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммуноанализ (РИА), радиальную иммунодиффузию, иммунодиффузию Оухтерлони, реактивный иммуноэлектрофорез, иммуногистохимическое окрашивание, анализ иммунопреципитации, анализ связывания комплемента, иммунофлюоресценцию, иммунохроматографию, анализ сортировки активируемых флуоресценцией клеток (анализ FACS), технологию белковых чипов и т.п., но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the present invention, the term "measuring the expression level of a protein" refers to a process of confirming the presence and expression level of a protein expressed from the ERRγ gene in a biological sample. In this case, the amount of the protein can be determined using an antibody that specifically binds to the protein expressed from this gene. Assay methods for this include Western blotting, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radial immunodiffusion, Ouchterlony immunodiffusion, reactive immunoelectrophoresis, immunohistochemical staining, immunoprecipitation assay, complement fixation assay, immunofluorescence, immunochromatography, fluorescence-activated cell sorting assay (FACS assay), protein chip technology, etc., but the present invention is not limited thereto.
В способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению пациент с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени, может быть пациентом с гепатоцеллюлярной карциномой (НСС) или аденокарциномой печени, не проявляющим устойчивый к сорафенибу рак печени, но настоящее изобретение не ограничивается этим.In the method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention, a patient with a general liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer may be a patient with hepatocellular carcinoma (HCC) or liver adenocarcinoma that does not exhibit sorafenib-resistant liver cancer, but the present invention is not limited to this.
В способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению уровень экспрессии гена ERRγ может быть измерен на уровне мРНК или на уровне белка, и выделение мРНК или белка из биологического образца может быть осуществлено с использованием процесса, известного в данной области техники. Способ анализа для измерения уровня мРНК и способ анализа для измерения уровня белка являются такими, как описано выше.In the method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention, the expression level of the ERRγ gene can be measured at the mRNA level or at the protein level, and the extraction of mRNA or protein from the biological sample can be performed using a process known in the art. The analysis method for measuring the mRNA level and the analysis method for measuring the protein level are as described above.
С помощью способа предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению можно прогнозировать терапевтический ответ пациентов с раком печени на сорафениб и определять стратегию лечения для каждого пациента на основе результатов прогнозирования, тем самым делая возможным эффективное лечение рака печени.By using the method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention, it is possible to predict the therapeutic response of liver cancer patients to sorafenib and determine a treatment strategy for each patient based on the prediction results, thereby making it possible to effectively treat liver cancer.
Таким образом, согласно еще одному аспекту, в настоящем изобретении предложен способ предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, включающий измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени.Thus, according to another aspect, the present invention provides a method for providing information necessary for determining a therapeutic method for a patient with liver cancer, comprising measuring the level of expression of the mRNA of the ERRγ gene or a protein expressed from it in a biological sample isolated from a patient with liver cancer.
Более конкретно, способ предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, может включать: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).More specifically, a method for providing information necessary for determining a therapeutic method for a patient with liver cancer may comprise: (a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed therefrom in a biological sample isolated from a patient with liver cancer; (b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed therefrom in a biological sample isolated from a patient with a general liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and (c) defining a patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer when the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed therefrom measured in step (a) is higher than the expression level of the ERRγ gene mRNA or a protein expressed therefrom measured in step (b).
В соответствии со способом предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, при подтверждении устойчивости к сорафенибу у пациента с раком печени, эффект лечения рака печени может быть индуцирован применением других известных терапевтических агентов для лечения рака печени, отличных от сорафениба.According to the method of providing information necessary for determining the therapeutic method for a patient with liver cancer, when resistance to sorafenib is confirmed in a patient with liver cancer, the effect of treating liver cancer may be induced by using other known therapeutic agents for treating liver cancer other than sorafenib.
Следовательно, в соответствии с еще одним аспектом, в настоящем изобретении предложен способ диагностики и лечения устойчивого к сорафенибу рака печени.Therefore, according to another aspect, the present invention provides a method for diagnosing and treating sorafenib-resistant liver cancer.
Более конкретно, способ диагностики и лечения устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению включает: (а) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с раком печени; (б) измерение уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или белка, экспрессируемого из него, в биологическом образце, выделенном от пациента с общим раком печени, отличным от устойчивого к сорафенибу рака печени; и (в) определение пациента с раком печени на стадии (а) как пациента с устойчивым к сорафенибу раком печени и введение другого терапевтического агента против рака печени, отличного от сорафениба, когда уровень экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренный на стадии (а), выше уровня экспрессии мРНК гена ERRγ или экспрессируемого из него белка, измеренного на стадии (б).More specifically, the method for diagnosing and treating sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention comprises: (a) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed therefrom in a biological sample isolated from a patient with liver cancer; (b) measuring the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed therefrom in a biological sample isolated from a patient with a general liver cancer other than sorafenib-resistant liver cancer; and (c) determining the patient with liver cancer at stage (a) as a patient with sorafenib-resistant liver cancer and administering another therapeutic agent for liver cancer other than sorafenib when the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed therefrom measured in step (a) is higher than the expression level of the ERRγ gene mRNA or the protein expressed therefrom measured in step (b).
Конкретные детали способа предоставления информации, необходимой для определения терапевтического метода для пациента с раком печени, и/или способа диагностики и лечения устойчивого к сорафенибу рака печени согласно настоящему изобретению являются такими, как описано выше в способе предоставления информации для диагностики устойчивого к сорафенибу рака печени, и его описание будет опущено.Specific details of the method for providing information necessary for determining a therapeutic method for a patient with liver cancer and/or the method for diagnosing and treating sorafenib-resistant liver cancer according to the present invention are as described above in the method for providing information for diagnosing sorafenib-resistant liver cancer, and the description thereof will be omitted.
Следует понимать, что термины и слова, использованные в описании и прилагаемой формуле изобретения, не следует толковать как ограничивающиеся общими и словарными значениями, а интерпретировать на основе значений и понятий, соответствующих техническим аспектам настоящего изобретения, на основе принципа, согласно которому авторы настоящего изобретения могут надлежащим образом определить концепции терминов для наилучшего описания настоящего изобретения.It should be understood that the terms and words used in the description and the appended claims should not be construed as limited to general and dictionary meanings, but interpreted based on the meanings and concepts corresponding to the technical aspects of the present invention, based on the principle that the authors of the present invention can properly define the concepts of the terms to best describe the present invention.
Далее представлены предпочтительные варианты осуществления для понимания настоящего изобретения. Однако следует понимать, что следующие примеры предназначены только для лучшего понимания настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.The following are preferred embodiments for understanding the present invention. However, it should be understood that the following examples are intended only for a better understanding of the present invention and are not intended to limit the scope of the present invention.
Осуществление изобретенияImplementation of the invention
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ПРИМЕРЫEXPERIMENTAL EXAMPLES
Общие экспериментальные методыGeneral experimental methods
Авторы настоящего изобретения провели эксперименты с использованием устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени (клеточные линии Huh7-SR и SK-Hep-R) и животной модели, полученной из клеточной линии рака печени (ксенотрансплантат). Чтобы определить влияние синтетического соединения DN200434, которое является обратным агонистом против ERRγ, на пролиферацию клеток рака печени и образование ROS, ROS измеряли с использованием подсчета клеток и диацетата 2',7-дихлорфлуоресцина (DCF-DA). Наконец, после того, как клеточная линия рака печени, устойчивая к сорафенибу, была введена крысам, чтобы вызвать образование устойчивого к сорафенибу рака печени, изменения в размере рака печени были подтверждены в группе, которой вводили обратный агонист против ERRγ (DN200434) и сорафениб, и группе, которой вводили контрольный препарат.The present inventors conducted experiments using sorafenib-resistant liver cancer cell lines (Huh7-SR and SK-Hep-R cell lines) and an animal model derived from the liver cancer cell line (xenograft). In order to determine the effect of the synthetic compound DN200434, which is an inverse agonist against ERRγ, on the proliferation of liver cancer cells and the formation of ROS, ROS was measured using cell counting and 2',7-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA). Finally, after the sorafenib-resistant liver cancer cell line was administered to rats to induce the formation of sorafenib-resistant liver cancer, the changes in the size of the liver cancer were confirmed in the group administered with the inverse agonist against ERRγ (DN200434) and sorafenib and the group administered with the control drug.
Пример 1Example 1
Конструирование клеточной линии рака печени, устойчивой к сорафенибу, и подтверждение повышенной экспрессии ERRγConstruction of a sorafenib-resistant liver cancer cell line and confirmation of increased ERRγ expression
Клеточные линии гепатокарциномы [клетки Huh7 (Korea Cell Line Bank (KCLB) №60104), клетки SK-Hep (АТСС® HTB-52TM)] подвергали непрерывному воздействию сорафениба (постепенно увеличивая до 10 мкМ) для конструирования устойчивых к сорафенибу клеточных линий рака печени (клеточные линии Huh7-SR и SK-Hep-R). Чтобы оценить гибель раковых клеток с помощью FACS, сначала клеточную линию рака инкубировали в аннексине, связанном с FITC, и йодиде пропидия (PI) в течение 15 минут, а затем измеряли связывание аннексина и PI с помощью проточной цитометрии для получения данных с использованием проточного цитометра BD Accuri С6 (BD Biosciences) и анализировали с помощью программы анализа Accuri С6 (BD Biosciences)/программного обеспечения FlowJo (FlowJo, LLC). Гибель клеточной линии рака оценивали с использованием антитела к расщепленной каспазе-3 (Cell Signaling Technology). Как показано на Фиг. 1А-1В, было подтверждено, что гибель клеток под действием сорафениба не увеличивалась в обеих устойчивых к сорафенибу клеточных линиях рака печени (например, клеточных линиях Huh7-SR и SK-Hep-R).Hepatocarcinoma cell lines [Huh7 cells (Korea Cell Line Bank (KCLB) #60104), SK-Hep cells (ATCC® HTB-52TM)] were continuously exposed to sorafenib (gradually increasing to 10 μM) to construct sorafenib-resistant liver cancer cell lines (Huh7-SR and SK-Hep-R cell lines). To evaluate cancer cell death by FACS, the cancer cell line was first incubated in FITC-coupled annexin and propidium iodide (PI) for 15 min, and then the binding of annexin and PI was measured by flow cytometry to obtain data using a BD Accuri C6 flow cytometer (BD Biosciences) and analyzed by Accuri C6 analysis program (BD Biosciences)/FlowJo software (FlowJo, LLC). The cancer cell line death was assessed using cleaved caspase-3 antibody (Cell Signaling Technology). As shown in Fig. 1A-1B, it was confirmed that cell death by sorafenib was not increased in both sorafenib-resistant liver cancer cell lines (i.e., Huh7-SR and SK-Hep-R cell lines).
Кроме того, был проведен Вестерн-блоттинг для подтверждения профиля экспрессии орфанного ядерного рецептора ERRγ в клеточных линиях Huh7-SR и SK-Hep-R. В результате было подтверждено, что экспрессия ERRγ значительно увеличилась в обеих из двух клеточных линий рака печени, устойчивых к сорафенибу, как показано на Фиг. 2А и 2Б.In addition, Western blot analysis was performed to confirm the expression profile of the orphan nuclear receptor ERRγ in Huh7-SR and SK-Hep-R cell lines. As a result, it was confirmed that the expression of ERRγ was significantly increased in both of the two sorafenib-resistant liver cancer cell lines, as shown in Fig. 2A and 2B.
Пример 2Example 2
Исследование влияния орфанного ядерного рецептора ERRγ на устойчивый к сорафенибу рак печениInvestigation of the effect of the orphan nuclear receptor ERRγ on sorafenib-resistant liver cancer
Чтобы исследовать влияние соединения (DN200434) формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, на образование ROS в клетках рака печени, устойчивых сорафенибу, эффект измеряли с помощью FACS с использованием 2',7'-дихлоргидрофлуоресцеина диацетата (H2-DCF-DA, Lrvitrogen, США) в качестве зонда ROS. Лекарственно-устойчивые клетки обрабатывали сорафенибом (10 мкМ) и соединением DN200434 (12 мкМ) в течение 24 часов и к клеткам добавляли 10 мкМ Н2-DCF-DA. Затем клетки инкубировали в течение 30 минут, промывали PBS и собирали данные с помощью проточного питометра BD AccuriTM С6 (BD Bioscience, США) и анализировали с помощью программы анализа AccuriTM С6 (BD Bioscience, США). Для определения количества клеток клеточную линию рака печени, устойчивую к сорафенибу, обрабатывали соединением DN200434 (12 мкМ) в комбинации с сорафенибом (10 мкМ) и окрашивали трипановым синим, после чего количество клеток измеряли с помощью гемоцитометра.To investigate the effect of the compound (DN200434) of formula 1, which is an inverse agonist against ERRγ, on ROS generation in sorafenib-resistant liver cancer cells, the effect was measured by FACS using 2',7'-dichlorohydrofluorescein diacetate (H2-DCF-DA, Lrvitrogen, USA) as a ROS probe. The drug-resistant cells were treated with sorafenib (10 μM) and compound DN200434 (12 μM) for 24 hours, and 10 μM H2-DCF-DA was added to the cells. Then, the cells were incubated for 30 minutes, washed with PBS, and the data were collected using a BD AccuriTM C6 Flow Pitometer (BD Bioscience, USA) and analyzed using the AccuriTM C6 Analysis Software (BD Bioscience, USA). To determine the cell number, sorafenib-resistant liver cancer cell line was treated with DN200434 (12 μM) in combination with sorafenib (10 μM) and stained with trypan blue, after which the cell number was measured using a hemocytometer.
В результате, как показано на Фиг. 3А и 3Б, было подтверждено, что увеличение ROS под действием соединения DN200434 наблюдалось как в клеточных линиях Huh7-SR, так и в SK-Hep-R, которые представляют собой устойчивые к сорафинибу клеточные линии рака печени. Как показано на Фиг. 4А и 4Б, было подтверждено, что пролиферация устойчивых к сорафенибу клеток рака печени, которая не подвергалась воздействию при лечении только сорафенибом, значительно снижалась при одновременном введении DN200434 формулы 1. На основании результатов, описанных выше, было подтверждено, что DN200434 может преодолевать лекарственную устойчивость путем ингибирования активности ERRγ и повышения чувствительности к сорафенибу.As a result, as shown in Fig. 3A and 3B, it was confirmed that the increase in ROS by DN200434 was observed in both Huh7-SR and SK-Hep-R cell lines, which are sorafenib-resistant liver cancer cell lines. As shown in Fig. 4A and 4B, it was confirmed that the proliferation of sorafenib-resistant liver cancer cells, which was not affected by sorafenib alone, was significantly reduced by the simultaneous administration of DN200434 of formula 1. Based on the results described above, it was confirmed that DN200434 can overcome drug resistance by inhibiting ERRγ activity and enhancing sensitivity to sorafenib.
Пример 3Example 3
Подтверждение противоопухолевого эффекта в животной модели с устойчивым к сорфенибу раком печениConfirmation of antitumor effect in an animal model of sorfenib-resistant liver cancer
Устойчивую к сорафенибу клеточную линию рака печени Huh7-R вводили мышам для конструирования животной модели рака печени, устойчивого к сорафенибу (ксенотрансплантат). После этого вводили обратный агонист ERRγ (например, DN200434 (формула 1)) в комбинации с сорафенибом и измеряли изменение размера образовавшейся массы. В этом случае в качестве сравнительного контроля использовали группу, в которой животную модель с устойчивым к сорафенибу раком печени лечили только сорафенибом.Sorafenib-resistant Huh7-R liver cancer cell line was injected into mice to construct a sorafenib-resistant liver cancer animal model (xenograft). Subsequently, an ERRγ inverse agonist (e.g., DN200434 (formula 1)) was administered in combination with sorafenib, and the change in the size of the resulting mass was measured. In this case, a group in which the sorafenib-resistant liver cancer animal model was treated with sorafenib alone was used as a comparative control.
В результате, как показано на Фиг. 5А-5В, было подтверждено, что размер, масса и объем опухоли значительно уменьшились в группе, в которой соединение DN200434 формулы 1, являющееся обратным агонистом против ERRγ, вводили в комбинации с сорафенибом в животной модели, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени Huh7-R, по сравнению с контролем. В этом случае, как видно из Фиг. 5Г, было подтверждено отсутствие различий в изменении массы тела между экспериментальной и контрольной группами.As a result, as shown in Fig. 5A-5B, it was confirmed that the tumor size, weight, and volume were significantly reduced in the group in which the compound DN200434 of formula 1, which is an inverse agonist against ERRγ, was administered in combination with sorafenib in the animal model derived from the sorafenib-resistant liver cancer cell line Huh7-R, compared with the control. In this case, as shown in Fig. 5D, it was confirmed that there was no difference in the change in body weight between the experimental and control groups.
Животную модель, полученную из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, конструировали таким же образом, как описано выше, и эффект совместного введения соединения DN200434 формулы 1, которое является обратным агонистом против ERRγ, и сорафениба был подтвержден.An animal model derived from sorafenib-resistant liver cancer cell line SK-Hep-R was constructed in the same manner as described above, and the effect of co-administration of the compound DN200434 of formula 1, which is an inverse agonist against ERRγ, and sorafenib was confirmed.
Аналогично, как показано на Фиг. 6А-6В, было подтверждено, что размер опухоли, масса и объем рака печени заметно уменьшились в группе, в которой соединение DN200434 вводили в комбинации с сорафенибом, даже в модели животных, полученной из устойчивой к сорафенибу клеточной линии рака печени SK-Hep-R, по сравнению с контролем. Как видно из Фиг. 6Г, было подтверждено отсутствие различий в изменении массы тела между экспериментальной и контрольной группами.Similarly, as shown in Fig. 6A-6B, it was confirmed that the tumor size, weight, and volume of liver cancer were markedly reduced in the group in which the compound DN200434 was administered in combination with sorafenib, even in the animal model derived from the sorafenib-resistant liver cancer cell line SK-Hep-R, compared with the control. As shown in Fig. 6D, it was confirmed that there was no difference in the change in body weight between the experimental and control groups.
Суммируя результаты Примеров 1-3, было подтверждено, что экспрессия ERRγ значительно увеличивалась при раке печени, устойчивом к сорафенибу. Кроме того, в ходе экспериментов было подтверждено, что DN200434, являющийся обратным агонистом против ERRγ формулы 1, увеличивает внутриклеточные ROS, ингибирует пролиферацию устойчивых к сорафенибу клеток рака печени и повышает чувствительность к сорафенибу. Кроме того, также было подтверждено, что пролиферация рака значительно снижалась по сравнению с контролем в эксперименте на животных с использованием клеточной линии рака печени, устойчивой к сорафенибу. Приведенные выше результаты доказывают, что ERRγ играет важную роль в лекарственной устойчивости рака печени и эффективен при лечении распространенного лекарственно-устойчивого рака печени, когда активность ERRγ ингибируется с помощью DN200434, который является обратным агонистом ERRγ.To summarize the results of Examples 1 to 3, it was confirmed that the expression of ERRγ was significantly increased in sorafenib-resistant liver cancer. In addition, it was confirmed through the experiments that DN200434, which is an inverse agonist against ERRγ of formula 1, increased intracellular ROS, inhibited the proliferation of sorafenib-resistant liver cancer cells, and increased the sensitivity to sorafenib. In addition, it was also confirmed that the proliferation of cancer was significantly reduced compared with the control in the animal experiment using the sorafenib-resistant liver cancer cell line. The above results prove that ERRγ plays an important role in the drug resistance of liver cancer and is effective in the treatment of advanced drug-resistant liver cancer when the ERRγ activity is inhibited by DN200434, which is an inverse agonist of ERRγ.
Вышеприведенное описание настоящего изобретения дано только в качестве иллюстрации, и специалистам в области техники, к которой относится настоящее изобретение, должно быть понятно, что могут быть сделаны различные изменения и модификации, не отступая от технической сущности и объема настоящего изобретения. Следовательно, следует понимать, что вышеупомянутые воплощения даны только в качестве иллюстрации и не предназначены для ограничения во всех аспектах.The above description of the present invention is given only by way of illustration, and it should be understood by those skilled in the art to which the present invention pertains that various changes and modifications can be made without departing from the technical spirit and scope of the present invention. Therefore, it should be understood that the above embodiments are given only by way of illustration and are not intended to be limiting in all respects.
Claims (19)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2019-0152827 | 2019-11-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2825570C1 true RU2825570C1 (en) | 2024-08-27 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2012148710A (en) * | 2010-04-16 | 2014-05-27 | Новартис Аг | ORGANIC COMPOUND FOR USE IN TREATMENT OF LIVER CANCER |
| WO2018174506A1 (en) * | 2017-03-20 | 2018-09-27 | 아주대학교산학협력단 | Method for prediction of susceptibility to sorafenib treatment by using sulf2 gene, and composition for treatment of cancer comprising sulf2 inhibitor |
| US20190161490A1 (en) * | 2016-06-27 | 2019-05-30 | Sung Yeoun HWANG | Novel aryl ethene derivative and pharmaceutical composition containing same as active ingredient |
| US20190167820A1 (en) * | 2016-06-27 | 2019-06-06 | Sung Yeoun HWANG | Novel aryl ethene derivative and pharmaceutical composition containing same as active ingredient |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2012148710A (en) * | 2010-04-16 | 2014-05-27 | Новартис Аг | ORGANIC COMPOUND FOR USE IN TREATMENT OF LIVER CANCER |
| US20190161490A1 (en) * | 2016-06-27 | 2019-05-30 | Sung Yeoun HWANG | Novel aryl ethene derivative and pharmaceutical composition containing same as active ingredient |
| US20190167820A1 (en) * | 2016-06-27 | 2019-06-06 | Sung Yeoun HWANG | Novel aryl ethene derivative and pharmaceutical composition containing same as active ingredient |
| WO2018174506A1 (en) * | 2017-03-20 | 2018-09-27 | 아주대학교산학협력단 | Method for prediction of susceptibility to sorafenib treatment by using sulf2 gene, and composition for treatment of cancer comprising sulf2 inhibitor |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| БЕЛИКОВ. В.Г. Фармацевтическая химия: учебн.пособ., М: МЕДпресс-информ, 2007, стр.27-29. ХАРКЕВИЧ Д.А. Фармакология: учебник, 10-е изд. испр., перераб. и доп. М: ГЭОТАР-Медиа, 2010, стр. 82. ЖУЛЕНКО В.Н., и др. Фармакология: учебник для студентов высших учебных заведений, М: КолосС, 2008, с.34-35.. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2020392157B2 (en) | Use of composition for enhancing anticancer effect, comprising ERRγ inhibitor as active ingredient | |
| US20200216906A1 (en) | Methods and compositions relating to the diagnosis and treatment of cancer | |
| US20150368646A1 (en) | Compositions and methods for treating pancreatic cancer | |
| EP3045917A2 (en) | Marker for predicting metastasis of breast cancer | |
| US9404927B2 (en) | Systems and methods for diagnosing and treating cancer | |
| JP7167263B2 (en) | Biomarker composition for diagnosing radiation-resistant cancer or predicting radiotherapy prognosis containing PMVK as an active ingredient | |
| RU2825570C1 (en) | USE OF COMPOSITION CONTAINING ERRγ INHIBITOR AS ACTIVE INGREDIENT FOR ENHANCING ANTI-TUMOUR EFFECT | |
| KR102840605B1 (en) | Biomarkers for diagnosing or predicting prognosis of SARS-CoV-2-induced sepsis | |
| WO2011129427A1 (en) | Diagnostic agent and therapeutic agent for cancer | |
| TW200831898A (en) | Treatment of insulin resistance | |
| US20200149049A1 (en) | Methods and compositions relating to anti-calcification | |
| JP6341859B2 (en) | Cancer markers and their uses | |
| HK40072176A (en) | USE OF COMPOSITION FOR ENHANCING ANTICANCER EFFECT, COMPRISING ERRγ INHIBITOR AS ACTIVE INGREDIENT | |
| WO2013183964A1 (en) | Target protein for diagnosing and treating lung cancer | |
| JP2007518398A (en) | Genetic screen | |
| US10316319B2 (en) | Composition for diagnosis of liver metastasis of colorectal cancer and the use thereof | |
| JP7742129B2 (en) | New technologies for the diagnosis, treatment, and screening of therapeutic agents for aortic aneurysms | |
| JP7774310B2 (en) | Method for predicting anticancer drug resistance and prognosis in renal cancer patients, method for screening anti-renal cancer substances, and pharmaceutical composition for treating renal cancer | |
| EP4295844A2 (en) | Pharmaceutical composition for inhibiting cancer metastasis | |
| JPWO2009113495A1 (en) | Method for testing liver cancer using liver cancer-specific expression gene and therapeutic and preventive agent for liver cancer | |
| WO2019103456A2 (en) | Biomarker composition for diagnosing radiation-resistant cancer or for predicting prognosis of radiation therapy containing pmvk as active ingredient | |
| EP4184166A1 (en) | Method for screening colorectal cancer metastasis inhibitor | |
| US20230288399A1 (en) | Method for screening colorectal cancer metastasis inhibitor | |
| WO2017054759A1 (en) | Prevention, diagnosis and treatment of cancer overexpressing gpr160 | |
| CN117018199A (en) | Use of inhibitors of the CCDC154 gene for the preparation of a medicament for the treatment of colorectal cancer or for improving prognosis |