RU2821530C2 - Фармацевтическая композиция безоболочечного вируса - Google Patents
Фармацевтическая композиция безоболочечного вируса Download PDFInfo
- Publication number
- RU2821530C2 RU2821530C2 RU2022130458A RU2022130458A RU2821530C2 RU 2821530 C2 RU2821530 C2 RU 2821530C2 RU 2022130458 A RU2022130458 A RU 2022130458A RU 2022130458 A RU2022130458 A RU 2022130458A RU 2821530 C2 RU2821530 C2 RU 2821530C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- composition according
- viral genomes
- concentration
- histidine
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 121
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 title claims abstract description 53
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 85
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 79
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 69
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 59
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 43
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 36
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 35
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims description 34
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 34
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-Histidine Natural products OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 30
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 229960002337 magnesium chloride Drugs 0.000 claims description 29
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 29
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 26
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 25
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims description 16
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical group CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 229940050906 magnesium chloride hexahydrate Drugs 0.000 claims description 16
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical group O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 16
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims description 16
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims description 16
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims description 10
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 5
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 5
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 46
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 17
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 14
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 13
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 12
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 11
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 11
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 10
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 9
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 9
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 9
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 9
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 9
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 5
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- CMXXUDSWGMGYLZ-XRIGFGBMSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CMXXUDSWGMGYLZ-XRIGFGBMSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- -1 His Chemical compound 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N Proflavine Chemical compound C1=CC(N)=CC2=NC3=CC(N)=CC=C3C=C21 WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000002313 adhesive film Substances 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000002357 osmotic agent Substances 0.000 description 3
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 3
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000005100 tissue tropism Effects 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 2
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 2
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 2
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 description 2
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 description 2
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 description 2
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 2
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 description 2
- 241000649046 Adeno-associated virus 11 Species 0.000 description 2
- 241000649047 Adeno-associated virus 12 Species 0.000 description 2
- 241000300529 Adeno-associated virus 13 Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000000671 osmolytic effect Effects 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 2
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxane-3,4,5-triol;dihydrate Chemical compound O.O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N 0.000 description 1
- UAGFTQCWTTYZKO-WCCKRBBISA-N (2s)-pyrrolidine-2-carboxylic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 UAGFTQCWTTYZKO-WCCKRBBISA-N 0.000 description 1
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012371 Aseptic Filling Methods 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 241001263478 Norovirus Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002614 leucines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000011860 particles by size Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000008180 pharmaceutical surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Abstract
Настоящее изобретение относится к области фармацевтики, генной терапии и медицины, а именно к фармацевтическим композициям вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, в частности рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), которые могут быть использованы для лечения и профилактики различных заболеваний. Композиции обладают повышенной стабильностью. 45 з.п. ф-лы, 2 ил., 22 табл., 5 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области фармацевтики, генной терапии и медицины, а именно к фармацевтическим композициям вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, в частности рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), которые могут быть использованы для лечения и профилактики различных заболеваний.
Уровень техники
Типичными представителями безоболочечных вирусов являются парвовирусы, норовирусы, а также рота- и аденовирусы.
Простые или безоболочечные вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц - капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид. В каждом вирусе олигомеризация капсидных белков во время сборки капсида обычно приводит к определенному типу симметричной четвертичной структуры. Большинство вирусов имеют капсиды спиральной или икосаэдрической структуры (Lidmar J, Mirny L, Nelson DR. Virus shapes and buckling transitions in spherical shells. Phys Rev E Stat Nonlin Soft Matter Phys. 2003 Nov; 68(5 Pt 1):051910. doi: 10.1103/PhysRevE.68.051910. Epub 2003 Nov 25. PMID: 14682823).
В отличие от безоболочечных капсид оболочечных вирусов покрыт липидной мембраной, известной как суперкапсид. Оболочка приобретается капсидом из внутриклеточной мембраны хозяина вируса; примеры включают внутреннюю ядерную мембрану, мембрану аппарата Гольджи и внешнюю мембрану клетки. Наличие липидной оболочки делает вирусы менее устойчивыми к физико-химическим воздействиям (Alberts В, Bray D, Lewis J, Raff М, Roberts К, Watson JD (1994). Molecular Biology of the Cell (4th ed.). p. 280).
Капсид безоболочечных вирусов выполняет функцию защиты генома при длительном хранении, а также от химических и физических стресс-воздействий, таких как УФ излучение, экстремальные значения рН или температуры, протеолитические и нуклеолитические агенты. Безоболочечные вирусы могут продолжительное время сохранять свои свойства в высушенном состоянии на различных поверхностях как пористых, так и не пористых (Abad FX, Pinto RM, Bosch A. Survival of enteric viruses on environmental fomites. Appl Environ Microbiol. 1994 Oct;60(10):3704-10. doi: 10.1128/aem.60.10.3704-3710.1994. PMID: 7986043; PMCID: PMC201876).
Вирусы осуществляют внедрение своего генетического материала в геном клетки хозяина, поэтому было предложено использовать их в качестве векторов доставки генетической информации в клетки. В терапевтических целях используют векторы на основе ретровируса, аденовируса, аденоассоциированного вируса (AAV), вируса простого герпеса и др. Среди указанных вирусов аденовирус и AAV относятся к безоболочечным вирусам.
Векторы на основе рекомбинантного AAV и рекомбинантного аденовируса в настоящее время являются наиболее широко используемыми и разрабатываемыми продуктами генной терапии, а также они используются в разработке вакцин.
В настоящее время генная терапия рассматривается как потенциально универсальный подход к лечению широкого спектра заболеваний: инфекционных, генетических, злокачественных новообразований и т.д.
Вирусы или вирусные векторы (вирусные частицы) должны сохранять свою структурную целостность, чтобы проявлять инфекционную и биологическую активность в процессе производства, транспортировки, хранения и применения. Структурная целостность вирусного вектора может быть нарушена в процессе приготовления, транспортировки, хранения или применения вакцин или препаратов, содержащих вирусный вектор, что исключает его использование в качестве вектора доставки.
Из уровня техники известны жидкие фармацевтические композиции AAV (WO 2018/128689, WO 2019/094253, WO 2020/014479, WO 2020/214929), жидкие фармацевтические композиции аденовируса (WO 00/29024, WO 2017/013169).
Несмотря на это, по-прежнему существует потребность в улучшенных высокостабильных фармацевтических композициях, содержащих вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса.
Краткое описание чертежей
Фигура 1 представляет собой график изменения размера частиц вектора на основе аденоассоциированного вируса 9 серотипа в зависимости от времени в исследуемых составах при температурном воздействии 65°С.
HisArg, His, Tris, PBS, PhosCitr фармацевтические композиции HisArg AAV9, His AAV9, Tris AAV9, PBS AAV9, PhosCitr AAV9 соответственно, указанные в таблице 9.
Фигура 2 представляет собой график изменения размера частиц вектора на основе аденоассоциированного вируса 5 серотипа в зависимости от времени в исследуемых составах при температурном воздействии 40°С
HisArg, His, Tris, PBS, PhosCitr фармацевтические композиции HisArg AAV5, His AAV5, Tris AAV5, PBS AAV5, PhosCitr AAV5 соответственно, указанные в таблице 18.
Подробное описание изобретения
Авторами изобретения были неожиданно получены стабильные фармацевтические композиции, содержащие вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, в частности рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), которые обладают повышенной коллоидной стабильностью (более высокая температура агрегации), стабильностью к удержанию ДНК (более высокая температура высвобождения ДНК), обеспечивающие стабильность при хранении как в замороженном, так и в жидком виде (отсутствие падения титра при хранении при (5±3)°С, а также сниженное падение титра при термострессе). Разработанные фармацевтические композиции могут быть использованы для лечения и профилактики различных заболеваний.
Определения
Если иное не определено в настоящем документе, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, будут иметь значения, которые обычно понятны специалистам в данной области.
Кроме того, если по контексту не требуется иное, термины в единственном числе включают в себя термины во множественном числе, и термины во множественном числе включают в себя термины в единственном числе.
В настоящем описании и в последующей формуле изобретения, если контекстом не предусмотрено иное, слова «включать» и «содержать» или их вариации, такие как «включает», «включающий», «содержит» или «содержащий», следует понимать, как включение указанного целого или группы целых, но не исключение любого другого целого или группы целых.
Термин «фармацевтическая композиция» относится к композиции и/или составу, содержащему вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса в терапевтически эффективном количестве и эксципиенты или вспомогательные вещества (носители, разбавители, наполнители, растворители и т.п.), выбор и соотношение которых зависит от их природы, способа назначения и дозировки.
Термин «водная композиция» при использовании в данном документе относится к композиции на основе воды, в качестве воды могут быть использованы: вода, вода для инъекций, физиологический раствор (0,9-1,0%-ный водный раствор хлористого натрия).
Термин «лиофилизированный», используемый в настоящем документе, относится к препарату, который был подвергнут процессу, известному в данной области техники как сушка из замороженного состояния, включающему в себя замораживание препарата и последующее удаление льда из замороженного содержимого.
Фармацевтическая композиция является «стабильной», если активный агент сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность и/или биологическую активность в течение заявленного срока годности при температуре хранения, например, при (5±3)°С. При этом активный агент может сохранять и физическую, и химическую стабильность, и биологическую активность. Период хранения выбирается на основании результатов исследования стабильности при ускоренном и естественном хранении.
Термин «вектор» при использовании в настоящем документе означает молекулу нуклеиновой кислоты, способную транспортировать другую нуклеиновую кислоту, с которой она соединена. Кроме того, термин «вектор» в данном настоящем документе означает рекомбинантную вирусную частицу, способную транспортировать нуклеиновую кислоту.
Термин «длительное хранение» или «долговременная стабильность» следует понимать, как обозначение того, что фармацевтическая композиция может храниться в течение трех месяцев или более, в течение шести месяцев или более, в течение одного года или более, а также композиция может быть с минимальным сроком хранения в стабильном состоянии по меньшей мере два года. В общем, термины «длительное хранение» и «долговременная стабильность» дополнительно включают продолжительности хранения в стабильном состоянии, которые по меньшей мере сравнимы или лучше, чем срок хранения в стабильном состоянии, как правило, необходимый для доступных в настоящее время коммерческих составов без потерь в стабильности, которые могут сделать состав непригодным для определенного для него фармацевтического применения.
Термин «буферный агент» относится к кислотному или щелочному компоненту (обычно слабой кислоте или слабому основанию) буфера или буферного раствора. Буферный агент помогает поддерживать значение рН раствора при или около заранее определенного значения, и буферные агенты обычно выбирают для достижения заранее определенного значения. Буферный агент может представлять собой единственное соединение, которое приводит к желательному буферному эффекту, в особенности, если указанный буферный агент смешан с (и подходяще способен к протонному обмену с) подходящим количеством (в зависимости от заранее определенного желательного значения) его соответствующего «кислотного/щелочного конъюгата».
Термин «буфер» или «буферный раствор» относится к водному раствору, содержащему смесь кислоты (обычно слабой кислоты, такой как, например, уксусная кислота, лимонная кислота) и ее конъюгированного основания (такой как, например, ацетатной или цитратной соли, например, ацетат натрия, цитрат натрия, а также гидраты указанных солей, например, натрия ацетат тригидрат) или альтернативно смесь основания (обычно слабого основания, например, гистидина) и его конъюгированной кислоты (например, гистидина гидрохлорида или гистидина гидрохлорида моногидрата, или L-гистидина гидрохлорида (г/х) моногидрата (м/г), или L-гистидина г/х м/г, или гистидина г/х м/г). Значение рН «буферного раствора» мало изменяется при добавлении к нему небольшого количества сильного основания или сильной кислоты, а также при разбавлении и концентрировании, благодаря «буферному эффекту», обеспечиваемому «буферным агентом».
Как правило, аминокислоты представляют собой L-аминокислоты. Например, если используют гистидин и гистидина гидрохлорид моногидрат, как правило, это L-гистидин и L-гистидина гидрохлорид моногидрат. Например, если используют аргинин, то как правило, это L-аргинин. Можно также использовать эквиваленты аминокислот, например, фармацевтически приемлемые соли пролина (например, пролина гидрохлорид).
Сокращения
AAV - аденоассоциированный вирус
BHQ-1 - гаситель флуоресценции, применяемый при проведении ПЦР
Ct - количество циклов
FAM - краситель карбоксифлуоресцеин
GFP - зеленый флуоресцентный белок
GOI - ген интереса
MOI - множественность инфекции (количество вирусных частиц на одну клетку)
rAAV - рекомбинантный аденоассоциированный вирус
TU - единицы трансдукции
Вг - вирусные геномы
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ИФА - иммуноферментный анализ
ФА - функциональная активность
Э ВЭЖХ - эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография
В настоящем изобретении раскрыты стабильные фармацевтические композиции вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, в частности рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), которые могут быть использованы для лечения и профилактики различных заболеваний.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, содержащей:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин,
(iii) аргинин,
(iv) натрия хлорид,
(v) магния хлорид,
(vi) поверхностно-активное вещество и
(vii) воду для инъекций.
В некоторых вариантах осуществления изобретения гистидин содержится в концентрации 2,0-3,58 мг/мл, или 2,3-3,2 мг/мл, или 2,6-3,0 мг/мл, или 2,7-2,8 мг/мл, или 2,79 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения аргинин содержится в концентрации 0,248-0,448 мг/мл, или 0,28-0,416 мг/мл, или 0,3-0,396 мг/мл, или 0,340-0,350 мг/мл, или 0,348 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения натрия хлорид содержится в концентрации 8,0-15,0 мг/мл, или 9,5-13,5 мг/мл, или 10,5-12,5 мг/мл, или 11,0-12,0 мг/мл, или 11,7 мг/мл.
Магния хлорид может быть использован как в виде магния хлорида безводного, так и в виде его гидратов. В некоторых вариантах осуществления изобретения магния хлорид представляет собой магния хлорида гексагидрат.
В некоторых вариантах осуществления изобретения магния хлорид содержится в концентрации 0,15-0,50 мг/мл, или 0,16-0,35 мг/мл, или 0,18-0,25 мг/мл, 0,200-0,210 мг/мл или 0,203 мг/мл.
В качестве поверхностно-активного вещества может быть использовано любое фармацевтически приемлемое поверхностно-активное вещество. Поверхностно-активные вещества хорошо известны в данной области и включают, без ограничения, полисорбат 20, полисорбат 80, различные полоксамеры и плюроники, а также их смеси.
В некоторых вариантах осуществления изобретения поверхностно-активное вещество содержится в концентрации 0,01-1,0 мг/мл, или 0,01-0,5 мг/мл, или 0,01 0,2 мг/мл, или 0,03-0,15 мг/мл, или 0,05 мг/мл, или 0,1 мг/мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,0-3,58 мг/мл,
(iii) аргинин 0,248-0,448 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 8,0-15,0 мг/мл,
(v) магния хлорид 0,15-0,50 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество 0,01-1,0 мг/мл и
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,3-3,2 мг/мл,
(iii) аргинин 0,28-0,416 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 9,5-13,5 мг/мл,
(v) магния хлорид 0,16-0,35 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество 0,01-0,2 мг/мл и
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,6-3,0 мг/мл,
(iii) аргинин 0,3-0,396 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 10,5-12,5 мг/мл,
(v) магния хлорид 0,18-0,25 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество 0,03 0,15 мг/мл и
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,7-2,8 мг/мл,
(iii) аргинин 0,340-0,350 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 11,0-12,0 мг/мл,
(v) магния хлорид 0,200-0,210 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество 0,03-0,15 мг/мл и
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,79 мг/мл,
(iii) аргинин 0,348 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 11,7 мг/мл,
(v) магния хлорид 0,203 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество 0,05 мг/мл,
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,79 мг/мл,
(iii) аргинин 0,348 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 11,7 мг/мл,
(v) магния хлорид 0,203 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество 0,1 мг/мл,
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения магния хлорид представляет собой магния хлорида гексагидрат.
В некоторых вариантах осуществления изобретения поверхностно-активное вещество представляет собой полоксамер 188.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,0-3,58 мг/мл,
(iii) аргинин 0,248-0,448 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 8,0-15,0 мг/мл,
(v) магния хлорида гексагидрат 0,15 0,50 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество, 0,01 1,0 мг/мл и представляющее собой полоксамер 188
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,3-3,2 мг/мл,
(iii) аргинин 0,28-0,416 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 9,5-13,5 мг/мл,
(v) магния хлорида гексагидрат 0,16 0,35 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество, 0,01-0,2 мг/мл и представляющее собой полоксамер 188
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,6-3,0 мг/мл,
(iii) аргинин 0,3-0,396 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 10,5-12,5 мг/мл,
(v) магния хлорида гексагидрат 0,18 0,25 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество, представляющее 0,03-0,15 мг/мл и собой полоксамер 188
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,7-2,8 мг/мл,
(iii) аргинин 0,340-0,350 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 11,0-12,0 мг/мл,
(v) магния хлорида гексагидрат 0,200-0,210 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество, 0,03-0,15 мг/мл и представляющее собой полоксамер 188
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,79 мг/мл,
(iii) аргинин 0,348 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 11,7 мг/мл,
(v) магния хлорид гексагидрат 0,203 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество, представляющее 0,05 мг/мл, собой полоксамер 188
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит:
(i) вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса,
(ii) гистидин 2,79 мг/мл,
(iii) аргинин 0,348 мг/мл,
(iv) натрия хлорид 11,7 мг/мл,
(v) магния хлорид гексагидрат 0,203 мг/мл,
(vi) поверхностно-активное вещество, представляющее 0,1 мг/мл, собой полоксамер 188
(vii) воду для инъекций до 1,0 мл.
В некоторых вариантах осуществления изобретения гистидин представляет собой L-гистидин.
В некоторых вариантах осуществления изобретения аргинин представляет собой L-аргинин.
В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция имеет рН 7,0-9,0, 7,5-8,5 или 7,7-8,7, или 8,0, или 8,2.
В некоторых вариантах осуществления изобретения описанные выше фармацевтические композиции являются пригодными для лиофилизации, т.е. могут выступать в качестве предлиофилизационного раствора.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, представленной в сухой форме, то есть в форме порошка или гранул для растворения в подходящем растворителе (например, воде) перед введением. Такая фармацевтическая композиция может быть получена, например, с помощью лиофилизации, т.е. процесса, известного в данной области техники как сушка из замороженного состояния, включающая в себя замораживание препарата и последующее удаление растворителя из замороженного содержимого.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к лиофилизированной фармацевтической композиции вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса, полученной лиофилизацией любой фармацевтической композиции, описанной выше. Таким образом фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть как водными, так и лиофилизированными (лиофилизаты).
Описанные фармацевтические композиции подходят для доставки терапевтических агентов субъектам для лечения или профилактики различных заболеваний или расстройств. Они могут использоваться в генной терапии для лечения таких заболеваний как гемофилия А, гемофилия Б, злокачественные новообразования, спинальная мышечная атрофия и т.д., а также в разработке вакцин для профилактики, например, инфекционных заболеваний.
Фармацевтические композиции по изобретению могут содержать вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса в различной концентрации. Концентрация вирусного вектора может зависеть, например, от заболевания, для профилактики или лечения которого будут использоваться описанные выше фармацевтические композиции, а также от возраста, веса и состояния здоровья пациента, и, таким образом, может варьироваться у разных пациентов. Подходящую дозу можно регулировать по решению лечащего врача так, что ее можно вводить пациенту один раз или посредством нескольких введений.
В некоторых вариантах осуществления изобретения вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса содержится в концентрации 1,0*105 - 1,0*1014 вирусных геномов/мл, или 1,0*109 - 1,0*1014 вирусных геномов/мл, или 1,0*109 - 5,0*1013 вирусных геномов/мл, или 1,0*109 - 1,0*1013 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*105 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*105 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*105 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*106 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*106 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*106 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*107 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*107 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*107 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*108 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*108 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*108 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*109 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*109 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*109 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*1010 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*1010 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*1010 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*1011 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*1011 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*1011 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*1012 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*1012 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*1012 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*1013 вирусных геномов/мл, или (2,0±0,6)*1013 вирусных геномов/мл, (5,0±1,5)*1013 вирусных геномов/мл, или (1,0±0,3)*1014 вирусных геномов/мл.
В описанных выше фармацевтических композициях в качестве рекомбинантных безоболочечных вирусов могут быть использованы rAAV, рекомбинантные аденовирусы и другие типы рекомбинантных безоболочечных вирусов.
Вектор на основе рекомбинантного аденовируса может быть получен с использованием любого вида, штамма, серотипа или любой комбинации видов, штаммов или серотипов аденовируса или химерного аденовируса. Серотипы аденовируса человека включают любой из серотипов 2, 4, 5, 7, 11, 26, 34, 35, 36, 48, 49 или 50 или их комбинации, производные, модификации или псевдотипы.
В некоторых вариантах осуществления изобретения вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса представляет собой вектор на основе rAAV. Он может быть получен с использованием любого штамма, серотипа AAV (например, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13, AAV14, AAV15 и AAV16) или любой комбинации штаммов, серотипов (например, вектор на основе rAAV, который включает два или более серотипов); может содержать капсидный белок (капсид) AAV любого серотипа (AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13, AAV14, AAV15 и AAV16) или их комбинации, производные, модификации или псевдотипы.
В некоторых вариантах осуществления изобретения вектор на основе rAAV содержит капсид AAV5, или AAV6, или AAV9.
В некоторых вариантах осуществления изобретения капсид AAV5, или AAV6, или AAV9 может быть модифицированным.
Вектор на основе rAAV может быть модифицирован генетически и/или химически.
Вектор на основе rAAV может быть генетически модифицирован для создания векторов на основе rAAV с измененными использованием рецептора, антигенностью, эффективностью трансдукции и/или тканевым тропизмом, а также для вставки пептидных лигандов, антител, фрагментов антител, МНС (major histocompatibility complex, главный комплекс гистосовместимости) и/или рецепторов в вирусный капсид. Например, вектор на основе rAAV может быть генетически модифицирован путем введения одной или нескольких аминокислотных мутаций, например, точечных мутаций.
Под «несколькими точечными мутациями» подразумеваются две, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять или десять точечных замен.
Особенно предпочтительные варианты включают замены (мутации), которые являются консервативными по природе, т.е. те замены, которые имеют место в семействе аминокислот, которые объединены по их боковым цепям. В частности, аминокислоты обычно делят на четыре семейства: (1) кислые - аспартат и глутамат; (2) основные - лизин, аргинин, гистидин; (3) неполярные - аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, метионин, триптофан; и (4) незаряженные полярные - глицин, аспарагин, глутамин, цистеин, серии треонин, тирозин. Фенилаланин, триптофан и тирозин иногда классифицируют как ароматические аминокислоты. Например, достаточно обосновано предсказание о том, что выделенная замена лейцина на изолейцин или валин, аспартата на глутамат, треонина на серии или схожая консервативная замена аминокислоты на структурно родственную аминокислоту не окажет значимого влияния на биологическую активность. Например, полипептид, представляющий интерес, может включать вплоть до приблизительно 5 10 консервативных или неконсервативных аминокислотных замен, при условии, что желаемая функция молекулы остается незатронутой.
Вариант точечных мутаций в последовательностях белков VP1, VP2 или VP3 AAV с помощью аминокислотных замен представляет собой замену, по меньшей мере, одного аминокислотного остатка в белке VP1, VP2 или VP3 AAV на другой аминокислотный остаток.
Консервативные замены показаны в таблице А под заголовком «предпочтительные замены».
Например, в международной заявке WO 2012/145601 описаны вирионы аденоассоциированного вируса (AAV) с вариантным капсидным белком, где вирионы AAV демонстрируют большую инфекционность ретинальных клеток, когда вводятся интравитреальной инъекцией, по сравнению с AAV дикого типа. В международной заявке WO 2013/158879 описан вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где одна замена лизина представляет K137R, где упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинилирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени.
Вектор на основе rAAV может быть химически модифицирован для изменения тканевого тропизма. Также химически модифицированные векторы на основе rAAV могут проявлять измененное использование рецептора, антигенность, эффективность трансдукции и/или тканевой тропизм. Для создания химически модифицированных векторов на основе rAAV используются, например, хемоселективные реакции, которые могут быть нацелены на конкретные боковые цепи аминокислот, могут быть использованы для изменения заряда, полярности, гидрофобности и потенциала водородных связей внутри рецепторных связывающих доменов на капсидах AAV.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанная фармацевтическая композиция вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса по настоящему изобретению предназначена для парентерального введения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанная фармацевтическая композиция вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса по настоящему изобретению предназначена для внутриглазного введения, в том числе интравитреального, субретинального или супрахориоидального введения, а также для внутримышечного, внутривенного или подкожного введения.
В некоторых вариантах осуществления изобретения указанная фармацевтическая композиция вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса по настоящему изобретению может быть введена внутривенно в виде инфузии.
Фармацевтическая композиция вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса по настоящему изобретению может быть использована после разведения. Для этого необходимое количество композиции из флакона переносят в емкость для инфузий, содержащую стерильный 0,9% раствор натрия хлорида, стерильный 5% раствор декстрозы или другие инфузионные растворы. Приготовленный раствор перемешивают путем осторожного переворачивания емкости для инфузий.
В некоторых вариантах осуществления изобретения субъект лечения или пациент является млекопитающим, предпочтительно человеческим субъектом. Вышеупомянутый субъект может быть мужского или женского пола любого возраста.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно хранить в любом подходящем для этого сосуде. Например, стеклянный или полимерный контейнер, флакон, ампула, шприц, картридж или бутылка необходимого объема. Сосуды могут снабжаться дополнительными средствами для введения, например капельницы, автоинжекторы.
Фармацевтическая композиция по данному изобретению может изготавливаться, упаковываться или продаваться в виде единичной стандартной дозы или множества единичных стандартных доз в виде готовой лекарственной формы. Используемый в данном документе термин «единичная стандартная доза» означает дискретное количество фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента обычно равно дозировке активного ингредиента, который будет вводиться субъекту, или удобной части такой дозировки, например, половине или трети такой дозировки.
Фармацевтические композиции можно вводить в виде одного терапевтического средства или в комбинации с дополнительными терапевтическими средствами по мере необходимости. Таким образом, в одном варианте осуществления предлагаемые способы лечения и/или профилактики используют в комбинации с введением терапевтически эффективного количества другого активного средства. Другое активное средство можно вводить до, в течение или после введения фармацевтических композиций по настоящему изобретению. Другое активное средство можно вводить как часть предлагаемой композиции или, альтернативно, в виде отдельного состава.
Примеры
Для наилучшего понимания изобретения приводятся следующие примеры. Эти примеры приведены только в иллюстративных целях и не должны толковаться как ограничивающие сферу применения изобретения в любой форме.
Хотя вышеупомянутое изобретение было подробно описано путем иллюстрации и примера в целях исключения двусмысленного толкования, специалистам в данной области на основе идей, раскрытых в данном изобретении, будет понятно, что могут быть внесены определенные изменения и модификации без отклонения от сущности и объема прилагаемых вариантов осуществления изобретения.
Методики
1. Определение концентрации гена интереса (GOI) в препарате AAV методом ПЦР. Концентрацию GOI в препарате AAV определяли методом количественной полимеразной цепной реакции, используя прямой, обратный праймер и зонд, коньюгированный с красителем FAM и гасителем BHQ-1. Праймеры подобраны к участку гена, кодирующему белок GOI. В ходе пробоподготовки образец сначала обрабатывали ДНКазой для того, чтобы избавиться от остаточной плазмидной ДНК, затем протеиназой для того, чтобы разрушить капсид. Для построения калибровочной прямой использовали лианер изо ванную плазмиду (соответствующего GOI). Для построения калибровочной прямой зависимости логарифма концентрации от количества циклов (Ct) использовали стандарты с шагом уменьшения концентрации в 10 раз. Концентрацию вирусных геномов/мл (вг/мл) в препарате рассчитывали по калибровочной прямой зависимости логарифма концентрации от Ct.
2. Определение концентрации вирусных частиц методом иммуноферментного анализа.
Определение концентрации частиц вирусных векторов (капсидов аденоассоциированного вируса AAV) осуществляли с помощью иммуноферментного анализа с использованием коммерческих наборов PROGEN AAV5 titration ELIS A, PROGEN AAV6 titration ELISA и PROGEN AAV9 titration ELIS А.
96-луночные планшеты с высоким связыванием покрыты связывающими моноклональными мышиными антителами к капсиду AAV, распознающими конформационный эпитоп конкретного серотипа. Белки капсида AAV связываются с антителами при температурной инкубации, не связавшиеся компоненты образца удаляют с помощью многократной промывки планшета.
В качестве детектирующих антител использовали биотинилированные антитела, которые связываются с белками капсида AAV при температурной инкубации планшета. Не связавшиеся компоненты удаляют с помощью многократной промывки планшета.
Для проявления окраски в лунки планшета вносили стрептавидин, коньюгированный с пероксидазой хрена. Стрептавидин связывается с биотином, не связавшиеся компоненты удаляли с помощью многократной промывки планшета.
В качестве хромогена выступает тетраметилбензидин. При взаимодействии пероксидазы хрена, перекиси водорода и хромогена тетраметилбензидина развивается цветная реакция. Реакцию ИФА останавливали добавлением стоп раствора (1 н H2SO4) и измеряли оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм. Концентрацию частиц вирусных векторов в препарате определяли по калибровочному графику, построенному с использованием данных оптической плотности стандартных растворов с известной концентрацией частиц AAV.
3. Определение функциональной активности препарата на основе рекомбинантного аденоассоциированного вирусного вектора, содержащего ген GFP.
Трансдукционную активность препарата на основе рекомбинантного аденоассоциированного вирусного вектора, содержащего ген GFP, оценивали по экспрессии GFP в трансдуцированных препаратом клетках СНО-К1.
Для трансдукции в день анализа клетки СНО-К1 высевали в 24-луночные планшеты в ростовой среде с антибиотиком (СКО-среда для количественного определения) из расчета 1×104 клеток на см2 (19000 клеток на лунку) и инкубировали при температуре+37°С в атмосфере с 5% С02 в течение 4-8 ч для прикрепления клеток к поверхности пластика. Затем вносили в лунки с клетками испытуемые образцы в трех дозах по три повтора на каждую. Дозировки препарата (MOI) для каждого серотипа AAV предварительно подбирали таким образом, чтобы получить после трансдукции порядка 5, 10 и 20% GFP-позитивных клеток, соответственно. Объем препарата, необходимый для трансдукции одной лунки, рассчитывали по следующей формуле:
У=MOI×S×КС,
где V необходимый объем препарата на одну лунку (мл), S площадь одной лунки (см2), MOI - необходимая доза препарата - множественность инфекции (multiplicity of infection) (вг/кл), К - плотность засева клеток в лунках (кл/см2), С - концентрация геном-содержащих капсидов в препарате (вг/мл).
Инкубировали планшеты с трансдуцированными клетками в CO2 инкубаторе (5% CO2, +37°С) в течение 2-3 дней. По истечении срока инкубации из лунок отбирали культуральную жидкость, промывали клетки раствором Хенкса и снимали клетки с пластика с помощью раствора TrypLE (по 150 мкл/лунку). После открепления клеток от пластика вносили в лунки раствор Хенкса (1:1 с TrypLE), собирали клетки в микропробирки на 1,5 мл и центрифугировали 5 мин при 300g. Осадок клеток ресуспендировали в 150 мкл раствора Хенкса. Вносили к каждому образцу, кроме 1 лунки изотопического контроля, по 50 мкл рабочего раствора красителя для определения жизнеспособных клеток в растворе Хенкса и инкубировали клетки 20 мин в темноте при комнатной температуре. Окрашенные клетки центрифугировали 5 минут при 300 g, аккуратно отбирали надосадочную жидкость и добавляли по 100 мкл фиксирующего буфера BD Cytofix. Клетки ресуспендировали и переносили весь объем получившейся взвеси клеток в 96-луночный планшет с V-образным дном для проточного цитометра, инкубировали планшет с клетками 20 мин в темноте при комнатной температуре. По истечении времени инкубации центрифугировали планшет 5 мин при 1200 об/мин, отбирали фиксирующий буфер и промывали клетки Stain Buffer (PBS с 0,1% Натрия азид и 0,5% БСА) по 100 мкл/лунку. Снова центрифугировали и отбирали буфер, после чего вносили по 150 мкл/лунку Stain Buffer и тщательно ресуспендировали клетки.
Анализировали клетки на проточном цитометре. Оценивали жизнеспособность клеток и экспрессию GFP. Рассчитывали для каждой дозы препарата значение ФА или TU (transduction unit)/мл по следующей формуле:
TU=P×NV×D,
где Р - количество GFP-позитивных жизнеспособных клеток в процентах, N - количество исходно посеянных клеток (N=S×K), V - объем внесенного препарата на лунку (мл), D фактор предразведения препарата.
За конечный результат принимали среднее значение TU, рассчитанное по трем дозам образца.
4. Определение концентрации вирусных частиц методом эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Определение концентрации вирусных частиц проводили путем измерения площади пиков испытуемых и стандартов на высокоэффективном жидкостном хроматографе Agilent с УФ-детектором. Длина волны детектора - 260 и 280 нм.
Колонка: TSK-gel G3000SWXL 7,8×300 мм, 5 мкм, 300 .
Фаза А: 0,1 М Na2SO4 в 0,1 М фосфатном буфере, рН=6,7.
Объем ввода: 30 мкл.
Скорость потока: 1 мл/мин.
Температура колонки: 35°С.
Длина волны детектора: 260 нм (4 нм), референсная длина волны (360 нм, bw 100 нм); 280 нм (4 нм), референсная длина волны (360 нм, bw 100 нм). Режим элюирования: изократический. Время хроматографирования: 15 мин.
На полученных хроматограммах идентифицировали пик при длине волны 280 и 260 нм и определяли его площадь. Исходя из полученных данных пиков на хроматограммах калибровочных растворов строили уравнение линейной регрессии для каждой из длин волн. Используя уравнение линейной регрессии при длине волны 280 нм, вычисляли концентрацию вирусных частиц.
Метод эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии использовали как ортогональный метод для определения концентрации вирусных частиц.
5. Получение фармацевтических композиций.
Получение образцов с целевым содержанием вирусных геномов осуществляли в концентрационных ячейках Stirred Cell (Millipore) под давлением. Для этого раствор, содержащий вирусные частицы, в исходном составе помещали в емкость для диафильтрации, после чего вносили в ячейку не менее чем 10 кратный объем водного раствора с целевым составом, включающим буферные, осмотические агенты и, если необходимо, дополнительные водорастворимые стабилизаторы. По завершении процесса диафильтрации раствор концентрировали до оптической плотности, превышающей целевую, выгружали из установки, определяли концентрацию вирусных геномов методом ПЦР. Затем к образцу вносили соответствующий раствор вспомогательных веществ для получения раствора с целевым содержанием вирусных геномов.
Также получение образцов растворов, содержащих вирусные частицы, проводили в кассетах Pellicon (Millipore) в режиме тангенциального потока. Для этого раствор в исходном составе помещали в емкость для диафильтрации, после чего к системе подключали подачу не менее чем 10 кратного объема раствора с целевым составом, содержащим буферные, осмотические агенты и, если необходимо, дополнительные водорастворимые стабилизаторы. Допускается внесение концентрата осмотических агентов и водорастворимых стабилизаторов после завершения диафильтрации. По завершении процесса диафильтрации раствор концентрировали до оптической плотности, превышающей целевую, выгружали из системы и определяли точные значения оптической плотности и концентрации вирусных геномов. Затем к образцу вносили соответствующий раствор вспомогательных веществ для получения раствора с целевым содержанием вирусных геномов.
Перед асептическим наполнением в конечный контейнер (например, стеклянный или полимерный сосуд, флакон или шприц) раствор фильтровали в асептичных условиях через мембрану с размером пор 0.22 мкм.
6. Исследование стабильности.
Исследуемые образцы разделяли на несколько аликвот и помещали в отдельные стерильные стеклянные флаконы: по 1 флакону на каждую контрольную точку устанавливали в термостат, инкубировали при 25°С в течение 4 недель и (5±3)°С в течение 6 месяцев, периодически отбирая контрольные точки согласно плану. При отборе контрольных точек и после завершения хранения флаконы перемещали из термостата или холодильника и передавали на анализ.
7. Термостресс.
Исследуемые образцы разделяли на три аликвоты и помещали в стеклянные флаконы: по одному флакону на каждый состав откладывали в холодильник на хранение при (5±3)°С, остальные устанавливали в термостат и инкубировали при указанной температуре в течение указанного времени. При отборе контрольных точек или после окончания прогрева флаконы перемещали из термостата, выдерживали при комнатной температуре около 15 мин и передавали на анализ.
8. Шейкирование.
Исследуемые образцы разделяли на две аликвоты и помещали в стеклянные флаконы: по одному флакону на каждый состав откладывали в холодильник на хранение при температуре (5±3)°С, остальные устанавливали в термошейкер и шейкировали со скоростью 800 об/мин при температуре (5±3)°С в течение указанного времени. При отборе контрольных точек или после окончания стресса флаконы перемещали из термошейкера и передавали на анализ.
9. Замораживание и оттаивание.
Исследуемые образцы разделяли на две аликвоты и помещали в стеклянные флаконы: устанавливали в морозильную камеру и хранили при температуре минус 20°С и ниже. Большинство генотерапевтических продуктов хранят при температуре не выше минус 70°С, температура не выше минус 20°С выбрана в качестве «худшего случая», так как при таком способе хранения образец находится при температуре выше температуры стеклования, что дополнительно оказывает на образец стрессовое воздействие, аналогичное стрессовому воздействию, происходящему в процессе заморозки. После полной заморозки образца (через 8 16 часов) флаконы перемещали из морозильной камеры, выдерживали при комнатной температуре до полного оттаивания содержимого и при необходимости повторяли цикл заморозки-разморозки. Передавали на анализ образцы после указанного количества циклов замораживания-оттаивания.
10. Изотермическое исследование методом динамического светорассеяния. Анализ коллоидной стабильности исследуемых образцов осуществляли с использованием прибора DynaPro Plate Reader П. В лунки 384-луночного планшета из черного пластика с прозрачным дном помещали 35 мкл каждого исследуемого образца, после этого планшет заклеивали термоустойчивой самоклеящейся пленкой. Закрытый планшет центрифугировали в течение 3 минут при скорости 3000 об/мин и температуре не менее 20°С. Измерение проводили при указанной температуре в течение указанного времени.
Параметры измерения:
• Интенсивность рассеянного света при 9 (угол измерения рассеянного света) = 158°.
• Число измерений на один повтор - 3.
• Время одного измерения - 5 с.
Временной тренд анализировали с использованием ПО Dynamics (Wyatt, США).
11. Определение температуры агрегации.
Температуру агрегации определяли с использованием оборудования DynaPro Plate Reader П. В лунки 384-луночного планшета из черного пластика с прозрачным дном помещали 35 мкл каждого исследуемого образца, после этого планшет заклеивали термоустойчивой самоклеящейся пленкой. Закрытый планшет центрифугировали в течение 3 минут при скорости 3000 об/мин и температуре не менее 20°С.
Параметры измерения:
• Начальная температура измерения 25°С.
• Интенсивность рассеянного света при θ = 158°.
• Число измерений на один повтор - 3.
• Время одного измерения - 5 с.
• Скорость нагрева - 0,15°С/мин.
• Конечная температура 80°С.
Температурный тренд и точку агрегации определяли с использованием ПО Dynamics (Wyatt, США).
12. Определение температуры плавления белков капсидов.
Температуру плавления белков капсидов рекомбинантных аденоассоциированных вирусов определяли методом дифференциальной сканирующей флуорометрии. К 45 мкл исследуемого образца добавляли 5 мкл разбавленного флуоресцентного красителя SyproOrange (Thermo Fisher Scientific, США), специфически связывающегося с гидрофобными участками белковой молекулы, до конечного разведения красителя в 1000 раз. Полученную смесь переносили в 96-луночный планшет для ПЦР, заклеивали самоклеящейся термоустойчивой пленкой, центрифугировали в течение 3 минут при скорости 3000 об/мин и устанавливали в амплификатор с флуорометрическим детектором. Нагрев проводили от 25 до 85°С, шаг изменения температуры 0,15°С, в процессе нагрева детектировали флуоресценцию в соответствии с инструкцией производителя. Для обработки результатов использовали программное обеспечение CFX Manager (Bio-Rad, США).
13. Определение температуры высвобождения ДНК.
Температуру высвобождения ДНК из капсидов векторов на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусов определяли методом дифференциальной сканирующей флуорометрии. К 45 мкл исследуемого образца добавляли 5 мкл разбавленного флуоресцентного красителя SybrGOLD (Thermo Fisher Scientific, США), специфически связывающегося с нуклеиновыми кислотами, до конечного разведения красителя в 2000 раз. Полученную смесь переносили в 96-луночный планшет для ПЦР, заклеивали самоклеящейся термоустойчивой пленкой, центрифугировали в течение 3 минут при скорости 3000 об/мин и устанавливали в амплификатор с флуорометрическим детектором. Нагрев проводили от 25 до 85°С, шаг изменения температуры 0,15°С, в процессе нагрева детектировали флуоресценцию в соответствии с инструкцией производителя. Для обработки результатов использовали программное обеспечение CFX Manager (Bio-Rad, США).
14. Определение гомогенности образцов методом динамического светорассеяния.
Гомогенность образцов определяли методом динамического светорассеяния с использованием оборудования DynaPro Plate Reader П. В лунки 384-луночного планшета из черного пластика со прозрачным дном помещали 35 мкл каждого исследуемого образца, после этого планшет заклеивали термоустойчивой самоклеящейся пленкой. Закрытый планшет центрифугировали в течение 3 минут при скорости 3000 об/мин и температуре не менее 20°С.
Параметры измерения:
• Температура измерения 25°С.
• Выдерживание при температуре перед началом измерения 1 минута.
• Интенсивность рассеянного света при θ=158°.
• Число измерений на один повтор 10.
• Время одного измерения - 5 с.
Размер и полидисперсность образцов определяли с использованием ПО Dynamics (Wyatt, США).
Пример 1. Выбор состава вспомогательных веществ.
Целью исследования является оценка возможности хранения препаратов векторов на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусов в жидкой форме при температурном режиме (5±3)°С, а также выбор оптимального состава вспомогательных веществ для дальнейшего исследования стабильности препаратов различных серотипов.
Раствор вспомогательных веществ должен обеспечивать стабильность вирусного вектора в предполагаемых условиях хранения.
В скрининг были взяты следующие вспомогательные вещества: трис(гидроксиметил)аминометан (буферный агент, поддержание необходимого уровня рН), хлорид натрия (стабилизатор, осмолитик), хлорид магния гексагидрат (стабилизатор), трегалозы дигидрат (стабилизатор, осмолитик, криопротектор), полоксамер р 188 (солюбилизатор), L-гистидин (буферный агент, поддержание необходимого уровня рН, стабилизатор), L-аргинин (буферный агент, поддержание необходимого уровня рН, стабилизатор), L-пролин (стабилизатор).
Составы вспомогательных веществ исследуемых фармацевтических композиций представлены в таблице 1.
Исследование проводили для образцов, содержащих около 1*1010 вг/мл векторов на основе rAAV 5 серотипа, несущего GOI. Образцы с различным составом вспомогательных веществ получали методом диафильтрации в соответствии с методикой 5. Для выявления влияния различных вспомогательных веществ на стабильность векторов образцы в исследуемых составах подвергали стрессовым воздействиям в соответствии с методиками 7, 8, 9. Образцы до и после стрессирования анализировали в соответствии с методиками 1, 2, 3, 4. Результаты представлены в таблицах 2-5.
По результатам панели стрессовых воздействий неожиданно было выявлено положительное влияние использования гистидин-аргининового буферного раствора на стабильность AAV. Неожиданно было обнаружено, что состав, включающий гистидин-аргининовый буферный раствор показал высокую термическую стабильность. Для фармацевтических композиций на основе данной буферной системы наблюдали наименьшее падение концентрации векторных частиц при анализе методами ИФА и ПЦР после термостресса при 50°С.
Также для состава 2, представленного в таблице 1, были проведены исследования ускоренной стабильности в соответствии с методикой 6. Образцы в контрольных точках анализировали в соответствии с методиками 1, 2, 3. Результаты анализа представлены в таблицах 6-8.
В соответствии с полученными данными стабильности в течение 6 месяцев при температуре (5±3)°С и в течение 1 месяца при температуре (25±2)°С состав 2 показал хорошую стабильность течение всего срока хранения.
Пример 2. Исследование фармацевтических композиций для векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа.
В ходе исследования были использованы 5 фармацевтических композиций, представленных в таблице 9 и содержащих материал вектора на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 9 серотипа, состоящий преимущественно из пустых капсидов, в двух концентрациях: 1*1012 и 1*1013 частиц/мл. Исследуемые образцы были получены методом диафильтрации в соответствии с методикой 5.
Исследование коллоидной стабильности при повышенной температуре.
Для исследования коллоидной стабильности определяли температуру агрегации векторов на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусных частиц в 5 составах в соответствии с методикой 11. Результаты представлены в таблице 10.
Также исследование термической стабильности проводили методом термостресса в соответствии методикой 7. До и после воздействия температуры 65°С в течение 96 часов анализировали гомогенность образцов методом динамического светорассеяния в соответствии с методикой 14. Результаты представлены в таблице 11.
Помимо этого, контролировали образцы в процессе воздействия повышенной температуры 65°С в течение 120 мин методом динамического светорассеяния в соответствии с методикой 10. Данные представлены на Фиг. 1.
Фармацевтическая композиция HisArg AAV9 продемонстрировала наилучшие свойства с точки зрения коллоидной стабильности при повышенной температуре. Данная фармацевтическая композиция продемонстрировала наиболее высокую температуру агрегации 76,0°С, минимальный средний радиус частиц в процессе воздействия повышенной температуры, а также после окончания термического воздействия.
Исследование коллоидной стабильности при многократном замораживании-оттаивании.
Исследование влияния многократного замораживания-оттаивания на коллоидную стабильность векторов на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусных частиц проводили в соответствии с методикой 9 при двух концентрациях исследуемых образцов. До и после стрессового воздействия анализировали гомогенность образцов методом динамического светорассеяния в соответствии с методикой 14. Результаты представлены в таблице 12.
Фармацевтическая композиция HisArg AAV9 обладает минимальным радиусом и уровнем полидисперсности, что свидетельствует о сниженном уровне агрегации при замораживании в сравнении с другими растворами.
Пример 3. Исследование фармацевтических композиций для векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 6 серотипа.
В ходе исследования были использованы 5 фармацевтических композиций, содержащих материал вектора на основе rAAV 6 серотипа, несущего GOI. Перечень исследуемых фармацевтических композиций представлен в таблице 13. Исследуемые образцы получали методом диафильтрации в соответствии с методикой 5.
Исследование коллоидной стабильности при повышенной температуре.
Для исследования коллоидной стабильности определяли температуру агрегации векторов на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусных частиц в 5 составах в соответствии с методикой 11. Использовали фармацевтические композиции с концентрацией вирусных векторов 1 *1012 вг/мл. Результаты представлены в таблице 14. Результаты анализировали с использованием инструмента «heat-mapping» в ПО ((Microsoft Excel».
Фармацевтическая композиция HisArg AAV6 продемонстрировала наилучшие свойства с точки зрения коллоидной стабильности при повышенной температуре. Данная фармацевтическая композиция продемонстрировала наиболее высокую температуру агрегации - 72,9°С.
Исследование конформационной и химической стабильности фармацевтической композиции HisArg AAV6.
Исследование конформационной и химической стабильности проводили с использованием материала векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 6 серотипа с концентрацией 1 *1012 вг/мл путем определения температуры денатурации белков капсидов в соответствий с методикой 12 и температуры высвобождения ДНК из капсидов в соответствии с методикой 13. Результаты представлены в таблице 15.
Фармацевтическая композиция HisArg AAV6 продемонстрировала высокую конформационную и химическую стабильность: высокую температуру высвобождения ДНК и высокую температуру денатурации белков капсидов.
Пример 4. Исследование фармацевтических композиций для векторов на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 5 серотипа.
В ходе исследования были использованы 5 фармацевтических композиций, содержащих материал вектора на основе rAAV 5 серотипа, несущего GOI. Перечень исследуемых фармацевтических композиций представлен в таблице 16. Исследуемые образцы получали методом диафильтрации в соответствии с методикой 5.
Исследование коллоидной стабильности при повышенной температуре.
Для исследования коллоидной стабильности определяли температуру агрегации рекомбинантных аденоассоциированных вирусных частиц в 5 составах в соответствии с методикой 11. Использовали фармацевтические композиции с концентрацией вирусных векторов 1012 вг/мл. Результаты представлены в таблице 17.
Также исследование термической стабильности проводили методом термостресса в соответствии методикой 7. До и после воздействия температуры 40°С в течение 96 часов анализировали гомогенность образцов методом динамического светорассеяния в соответствии с методикой 14. Результаты представлены в таблице 18.
Помимо этого, контролировали образцы в процессе воздействия повышенной температуры 40°С в течение 200 мин методом динамического светорассеяния в соответствии с методикой 10. Данные представлены на Фиг. 2.
Фармацевтическая композиция HisArg AAV5 продемонстрировала наилучшие свойства с точки зрения коллоидной стабильности при повышенной температуре. Данная композиция продемонстрировала наиболее высокую температуру агрегации - 59,3°С, минимальный средний радиус частиц в процессе воздействия повышенной температуры, а также минимальный средний радиус и полидисперсность после термического воздействия.
Исследование коллоидной стабильности при многократном замораживании-оттаивании.
Исследование влияния многократного замораживания-оттаивания на коллоидную стабильность рекомбинантных аденоассоциированных вирусных частиц проводили в соответствии с методикой 9. До и после стрессового воздействия анализировали гомогенность образцов методом динамического светорассеяния в соответствии с методикой 14. Результаты представлены в таблице 19.
Фармацевтическая композиция HisArg AAV5 продемонстрировала минимальный размер и полидисперсность среди исследованных образцов.
Исследование конформационной и химической стабильности.
Исследование конформационной и химической стабильности проводили с использованием материала на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса 5 серотипа с концентрацией 1*1013 вг/мл путем определения температуры денатурации белков капсидов в соответствии с методикой 12 и температуры высвобождения ДНК из капсидов в соответствии с методикой 13. Результаты представлены в таблице 20.
Фармацевтическая композиция HisArg AAV5 продемонстрировала наиболее высокую температуру высвобождения ДНК, что свидетельствует о его высоких стабилизирующих свойствах. Фармацевтическая композиция HisArg AAV5 также продемонстрировала высокую температуру денатурации белков капсидов - 87,0°С.
Пример 5. Исследование влияния состава вспомогательных веществ на склонность векторов на основе рекомбинантных аденоассоциированных вирусов к высвобождению ДНК.
Для исследования влияния фармацевтической композиции на склонность к высвобождению ДНК из капсида были использованы две фармацевтические композиции, представленные в таблице 21. Данные составы продемонстрировали лучшие результаты при исследовании рекомбинантных аденоассоциированных частиц серотипа 5 в концентрации 1*1013 вг/мл.
Исследование проводили с использованием материала векторов на основе rAAV 2, 5, 6, 8, 9 серотипов, несущих GOI, с концентрацией 1*1012 вг/мл. Исследуемые образцы были получены методом диафильтрации в соответствии с методикой 5. Анализ проводили в соответствии с методикой 13.
Для всех исследованных векторов на основании аденоассоциированных вирусных
частиц различных серотипов использование фармацевтической композиции:
| L-гистидин | 2,79 мг/мл |
| L-аргинин | 0,348 мг/мл |
| Натрия хлорид | 11,7 мг/мл |
| Магния хлорид | 0,203 мг/мл |
| Полоксамер 188 | 0,1 мг/мл |
привело к увеличению температуры высвобождения ДНК по сравнению с альтернативной фармацевтической композицией на основе гистидиновой буферной системы, что свидетельствует о лучшей стабильности к сохранению ДНК внутри капсида исследуемых объектов в данном составе.
Разработанные композиции могут быть применимы для аденоассоциированных и других типов безоболочечных вирусов.
Claims (58)
1. Фармацевтическая композиция вектора на основе рекомбинантного безоболочечного вируса на основе rAAV, содержащая:
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где гистидин содержится в концентрации 2,3–3,2 мг/мл.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1, где гистидин содержится в концентрации 2,6–3,0 мг/мл.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, где гистидин содержится в концентрации 2,7–2,8 мг/мл.
5. Фармацевтическая композиция по п. 1, где аргинин содержится в концентрации 0,28–0,416 мг/мл.
6. Фармацевтическая композиция по п. 1, где аргинин содержится в концентрации 0,3–0,396 мг/мл.
7. Фармацевтическая композиция по п. 1, где аргинин содержится в концентрации 0,340–0,350 мг/мл.
8. Фармацевтическая композиция по п. 1, где натрия хлорид содержится в концентрации 9,5–13,5 мг/мл.
9. Фармацевтическая композиция по п. 1, где натрия хлорид содержится в концентрации 10,5–12,5 мг/мл.
10. Фармацевтическая композиция по п. 1, где натрия хлорид содержится в концентрации 11,0–12,0 мг/мл.
11. Фармацевтическая композиция по п. 1, где магния хлорид содержится в концентрации 0,16–0,35 мг/мл.
12. Фармацевтическая композиция по п. 1, где магния хлорид содержится в концентрации 0,18–0,25 мг/мл.
13. Фармацевтическая композиция по п. 1, где магния хлорид содержится в концентрации 0,200–0,210 мг/мл.
14. Фармацевтическая композиция по п. 1, где поверхностно-активное вещество содержится в концентрации 0,01–0,5 мг/мл.
15. Фармацевтическая композиция по п. 1, где поверхностно-активное вещество содержится в концентрации 0,01–0,2 мг/мл.
16. Фармацевтическая композиция по п. 1, где поверхностно-активное вещество содержится в концентрации 0,03–0,15 мг/мл.
17. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
18. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
вирусных геномов/мл
19. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
20. Фармацевтическая композиция по п. 19, где гистидин содержится в концентрации 2,79 мг/мл.
21. Фармацевтическая композиция по п. 1, где аргинин содержится в концентрации 0,348 мг/мл.
22. Фармацевтическая композиция по п. 1, где натрия хлорид содержится в концентрации 11,7 мг/мл.
23. Фармацевтическая композиция по п. 1, где магния хлорид содержится в концентрации 0,203 мг/мл.
24. Фармацевтическая композиция по п. 1, где поверхностно-активное вещество содержится в концентрации 0,05 мг/мл или 0,1 мг/мл.
25. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
26. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
27. Фармацевтическая композиция по п. 1, где магния хлорид представляет собой магния хлорида гексагидрат.
28. Фармацевтическая композиция по п. 1, где поверхностно-активное вещество представляет собой полоксамер 188.
29. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
30. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
31. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
32. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
33. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
34. Фармацевтическая композиция по п. 1, содержащая:
35. Фармацевтическая композиция по п. 1, где гистидин представляет собой L-гистидин.
36. Фармацевтическая композиция по п. 1, где аргинин представляет собой L-аргинин.
37. Фармацевтическая композиция по п. 1, где фармацевтическая композиция имеет pH 7,0–9,0.
38. Фармацевтическая композиция по п. 1, где фармацевтическая композиция имеет pH 7,7–8,7.
39. Фармацевтическая композиция по п. 1, где фармацевтическая композиция имеет pH 7,5–8,5.
40. Фармацевтическая композиция по п. 1, где фармацевтическая композиция имеет pH 8,2.
41. Фармацевтическая композиция по п. 1, где вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса на основе rAAV содержится в концентрации 1,0*109–1,0*1013 вирусных геномов/мл.
42. Фармацевтическая композиция по п. 1, где вектор на основе рекомбинантного безоболочечного вируса содержится в концентрации (1,0 ± 0,3)*109 вирусных геномов/мл, (2,0 ± 0,6)*109 вирусных геномов/мл, (5,0 ± 1,5)*109 вирусных геномов/мл, (1,0 ± 0,3)*1010 вирусных геномов/мл, (2,0 ± 0,6)*1010 вирусных геномов/мл, (5,0 ± 1,5)*1010 вирусных геномов/мл, (1,0 ± 0,3)*1011 вирусных геномов/мл, (2,0 ± 0,6)*1011 вирусных геномов/мл, (5,0 ± 1,5)*1011 вирусных геномов/мл, (1,0 ± 0,3)*1012 вирусных геномов/мл, (2,0 ± 0,6)*1012 вирусных геномов/мл, (5,0 ± 1,5)*1012 вирусных геномов/мл, (1,0 ± 0,3)*1013 вирусных геномов/мл, (2,0 ± 0,6)*1013 вирусных геномов/мл, (5,0 ± 1,5)*1013 вирусных геномов/мл или (1,0 ± 0,3)*1014 вирусных геномов/мл.
43. Фармацевтическая композиция по пп. 1-42, где поверхностно-активное вещество представляет собой полоксамер 188, полисорбат 20, полисорбат 80.
44. Фармацевтическая композиция по пп. 1-42, где вектор на основе rAAV содержит капсид AAV5 серотипа, AAV6 серотипа или AAV9 серотипа.
45. Фармацевтическая композиция по п. 44, где капсид AAV5 серотипа, AAV6 серотипа или AAV9 серотипа может быть модифицированным.
46. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1–45, которая является пригодной для лиофилизации.
Priority Applications (16)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW112142883A TW202426017A (zh) | 2022-11-24 | 2023-11-07 | 非包膜病毒的藥物組合物 |
| UY0001040524A UY40524A (es) | 2022-11-24 | 2023-11-15 | Composición farmacéutica de virus sin envoltura |
| ARP230103092A AR131087A1 (es) | 2022-11-24 | 2023-11-16 | Composición farmacéutica de virus sin envoltura |
| AU2023385019A AU2023385019A1 (en) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | Pharmaceutical composition of non-enveloped virus |
| CN202380012579.0A CN118414175A (zh) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | 非包膜病毒的药物组合物 |
| JP2025530609A JP2025539388A (ja) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | 非エンベロープウイルスの医薬組成物 |
| GEAP202516788A GEAP202516788A (en) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | Pharmaceutical composition of non-enveloped virus |
| EP23895129.7A EP4622627A1 (en) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | Pharmaceutical composition of non-enveloped virus |
| PE2025001105A PE20251889A1 (es) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | Composicion farmaceutica de virus sin envoltura |
| PCT/RU2023/050271 WO2024112230A1 (en) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | Pharmaceutical composition of non-enveloped virus |
| KR1020257019943A KR20250105674A (ko) | 2022-11-24 | 2023-11-23 | 비외피성 바이러스의 약학 조성물 |
| MX2025006088A MX2025006088A (es) | 2022-11-24 | 2025-05-23 | Composicion farmaceutica de virus no encapsulado |
| CL2025001538A CL2025001538A1 (es) | 2022-11-24 | 2025-05-23 | Composición farmacéutica de virus sin envoltura |
| DO2025000121A DOP2025000121A (es) | 2022-11-24 | 2025-05-23 | Composición farmacéutica de virus sin envoltura |
| CONC2025/0006850A CO2025006850A2 (es) | 2022-11-24 | 2025-05-23 | Composición farmacéutica de virus sin envoltura |
| IL321096A IL321096A (en) | 2022-11-24 | 2025-05-25 | Pharmaceutical preparation of a non-enveloped virus |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2022130458A RU2022130458A (ru) | 2024-05-24 |
| RU2821530C2 true RU2821530C2 (ru) | 2024-06-25 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6225289B1 (en) * | 1998-12-10 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Methods and compositions for preserving adenoviral vectors |
| WO2005118792A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Avigen, Inc. | Compositions and methods to prevent aav vector aggregation |
| WO2018128689A1 (en) * | 2016-11-04 | 2018-07-12 | Baxalta Incorporated | Adeno-associated virus formulations |
| US10722470B2 (en) * | 2015-07-23 | 2020-07-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pharmaceutical composition comprising an adenoviral vector |
| RU2751952C2 (ru) * | 2015-05-15 | 2021-07-21 | Реджентс Оф Зэ Юниверсити Оф Миннесота | Вектор на основе аденоассоциированного вируса для терапевтической доставки в центральную нервную систему |
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6225289B1 (en) * | 1998-12-10 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Methods and compositions for preserving adenoviral vectors |
| WO2005118792A1 (en) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Avigen, Inc. | Compositions and methods to prevent aav vector aggregation |
| US9051542B2 (en) * | 2004-06-01 | 2015-06-09 | Genzyme Corporation | Compositions and methods to prevent AAV vector aggregation |
| RU2751952C2 (ru) * | 2015-05-15 | 2021-07-21 | Реджентс Оф Зэ Юниверсити Оф Миннесота | Вектор на основе аденоассоциированного вируса для терапевтической доставки в центральную нервную систему |
| US10722470B2 (en) * | 2015-07-23 | 2020-07-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pharmaceutical composition comprising an adenoviral vector |
| WO2018128689A1 (en) * | 2016-11-04 | 2018-07-12 | Baxalta Incorporated | Adeno-associated virus formulations |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Arvind Srivastava et al., Manufacturing Challenges and Rational Formulation Development for AAV Viral Vectors, Journal of Pharmaceutical Sciences Volume 110, Issue 7, July 2021, Pages 2609-2624, найдено онлайн, найдено в Интернете: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022354921001933#bib0091. * |
| Epifanova E.A. et al., Viral vectors for delivering gene material into cells and their application in neurobiology (review). Sovremennye tehnologii v medicine 2017; 9(1): 162-174, найдено онлайн, найдено в Интернете: http://www.stm-journal.ru/ru/numbers/2017/1/1325/html. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2932278T3 (es) | Composiciones y métodos para prevenir la agregación del vector AAV | |
| ES2627913T3 (es) | Viriones de AAV con inmunorreactividad reducida y usos de los mismos | |
| US11702672B2 (en) | Methods to produce chimeric adeno-associated virus/bocavirus parvovirus | |
| BR112020010674A2 (pt) | capsídeos de variante de vírus adeno-associado e uso para inibir a angiogênese | |
| KR20180019543A (ko) | 캡시드(Capsid) | |
| WO2018075798A1 (en) | Modified aav capsids and uses thereof | |
| JP5663285B2 (ja) | アデノ随伴ウイルスの薬学処方物における使用のための賦形剤、およびそれにより構成される薬学処方物 | |
| CN117999353A (zh) | 无包膜病毒的药物组合物 | |
| Chan et al. | Optimized formulation buffer preserves adeno-associated virus-9 infectivity after 4 C storage and freeze/thawing cycling | |
| Piacentino III et al. | X-linked inhibitor of apoptosis protein-mediated attenuation of apoptosis, using a novel cardiac-enhanced adeno-associated viral vector | |
| JP2023540085A (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するＡＡＶ５に基づくワクチン | |
| RU2821530C2 (ru) | Фармацевтическая композиция безоболочечного вируса | |
| JP2025524367A (ja) | アデノ随伴ウイルス医薬組成物及びその使用 | |
| TW202426017A (zh) | 非包膜病毒的藥物組合物 | |
| EA050414B1 (ru) | Фармацевтическая композиция безоболочечного вируса | |
| US20210017542A1 (en) | Aav6 variants | |
| US20210123028A1 (en) | Formulation optimization for viral particles | |
| OA21733A (en) | Pharmaceutical composition of non-enveloped virus. | |
| CN117298296A (zh) | 一种重组腺相关病毒x载体制剂 | |
| Vargas | Investigation of Formulation and Lyophilization Development for AAV5 Gene Therapy Vectors | |
| US20230374468A1 (en) | Formulations for viral vectors | |
| CN120000811A (zh) | 一种重组腺相关病毒药物组合物及其用途 | |
| WO2025214908A1 (en) | Chimeric bocavirus capsid proteins | |
| WO2025214909A1 (en) | Novel bocavirus capsid peptide insertion sites | |
| Bhrigu | Replication of adeno-associated virus in murine fibroblasts with mouse adenovirus provided helper functions |