RU2817257C1 - Sat-2/xiv/2023 strain of foot and mouth disease virus aphtae epizooticae of sat-2/xiv genotype for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease - Google Patents
Sat-2/xiv/2023 strain of foot and mouth disease virus aphtae epizooticae of sat-2/xiv genotype for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease Download PDFInfo
- Publication number
- RU2817257C1 RU2817257C1 RU2023123055A RU2023123055A RU2817257C1 RU 2817257 C1 RU2817257 C1 RU 2817257C1 RU 2023123055 A RU2023123055 A RU 2023123055A RU 2023123055 A RU2023123055 A RU 2023123055A RU 2817257 C1 RU2817257 C1 RU 2817257C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sat
- foot
- mouth disease
- xiv
- strain
- Prior art date
Links
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 139
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 24
- 101100422538 Escherichia coli sat-2 gene Proteins 0.000 title 2
- 101710173681 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 2 Proteins 0.000 claims abstract description 124
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 claims abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 22
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 10
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 abstract description 4
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 abstract description 3
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 abstract description 3
- 241001250094 Capra sibirica Species 0.000 abstract 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 28
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 7
- 244000309730 Foot-and-mouth disease virus serotype SAT2 Species 0.000 description 6
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 3
- 101710140501 Sulfate adenylyltransferase subunit 2 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100030100 Sulfate anion transporter 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710144481 Sulfate anion transporter 1 Proteins 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 3
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241001144416 Picornavirales Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 2-(aziridin-1-yl)ethanamine Chemical compound NCCN1CC1 LSDGFGPIFBOTJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L disodium;2-hydroxy-3-[4-[4-[(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)amino]-3-methylphenyl]-2-methylanilino]propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC=2)=C1 BTWUORFYKAZQHW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- -1 polyhexamethylene guanidine Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000004370 retrospective diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, может быть использовано для разработки и изготовления средств диагностики, специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV и контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology and can be used for the development and manufacture of diagnostic tools, specific prevention of foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV and monitoring the antigenic and immunogenic activity of foot-and-mouth disease vaccines.
Ящур - особо опасное, карантинное, высококонтагиозное заболевание парнокопытных и мозоленогих животных, которое вызывает РНК(+)-содержащий вирус порядка Picornavirales семейства Picornaviridae рода Aphthovirus с длиной нуклеиновой кислоты около 8500 н.о., которая кодирует 4 структурных белка: VP1, VP2, VP3, VP4 и множество неструктурных протеинов [1, 2, 3]. Выделяют 7 различных серотипов вируса ящура: О, А, Азия-1, С и SAT-1, SAT-2, SAT-3, причем в последние годы активно распространяются представители серотипа SAT-2 [1].Foot and mouth disease is a particularly dangerous, quarantine, highly contagious disease of artiodactyls and calloused animals, which is caused by an RNA(+)-containing virus of the order Picornavirales of the Picornaviridae family of the genus Aphthovirus with a nucleic acid length of about 8500 nt, which encodes 4 structural proteins: VP 1 , VP 2 , VP 3 , VP 4 and many non-structural proteins [1, 2, 3]. There are 7 different serotypes of foot-and-mouth disease virus: O, A, Asia-1, C and SAT-1, SAT-2, SAT-3, and in recent years representatives of the SAT-2 serotype have been actively spreading [1].
В пределах одного генотипа вируса ящура имеет место явление мутационной изменчивости генома и, как следствие, строения и функций белковых молекул, что приводит к возникновению новых изолятов, которые отличаются по степени вирулентности и иммуногенности от ранее выделенных штаммов вируса ящура.Within one genotype of foot-and-mouth disease virus, the phenomenon of mutational variability of the genome and, as a consequence, the structure and functions of protein molecules occurs, which leads to the emergence of new isolates that differ in the degree of virulence and immunogenicity from previously isolated strains of foot-and-mouth disease virus.
Каждый из семи серотипов генетически разделен на различные топотипы. Различия между ними определяют при анализе нуклеотидной последовательности ID-гена (белок VP1), который характеризуется высокой геномной и антигенной вариабельностью [1, 2, 3]. Данный белок вируса ящура является наиболее изменчивым по своему аминокислотному составу, поскольку на него приходится не менее 90% мутаций всех структурных генов. Самыми вариабельными областями считаются участки 40-60, 130-160 и 190-213 а.о. [4, 5]. Филогенетический анализ на основе нуклеотидной последовательности ID-гена (белок VP1) широко используется для вывода эволюционной динамики, эпидемиологических отношений между генетическими линиями и для отслеживания происхождения и перемещения возбудителя вируса ящура [6].Each of the seven serotypes is genetically divided into different topotypes. The differences between them are determined by analyzing the nucleotide sequence of the ID gene (VP 1 protein), which is characterized by high genomic and antigenic variability [1, 2, 3]. This protein of the foot-and-mouth disease virus is the most variable in its amino acid composition, since it accounts for at least 90% of the mutations of all structural genes. The most variable regions are considered to be areas 40-60, 130-160 and 190-213 aa. [4, 5]. Phylogenetic analysis based on the nucleotide sequence of the ID gene (VP 1 protein) is widely used to infer evolutionary dynamics, epidemiological relationships between genetic lineages, and to trace the origin and movement of the causative agent of foot-and-mouth disease virus [6].
Антигенные вариации возникают из-за аминокислотных мутаций, которые изменяют распознавание вирусных белков иммунной системой организма. Поверхностно открытые структуры вируса особенно подвержены иммунной атаке. Процесс появления новых антигенных форм определяется сложным взаимодействием поверхностных вирусных белков и факторов клеток-хозяев [5, 6].Antigenic variations arise from amino acid mutations that alter how the body's immune system recognizes viral proteins. Superficially exposed structures of the virus are especially susceptible to immune attack. The process of emergence of new antigenic forms is determined by the complex interaction of surface viral proteins and host cell factors [5, 6].
По оценкам WOAH (Всемирная организация здравоохранения животных, основана как OIE), болезнь циркулирует у 77% мирового поголовья домашнего скота в Африке, на Ближнем Востоке и в Азии, а также на ограниченной территории Южной Америки [1]. В связи с чем существует риск заноса инфекции в страны, свободные от ящура без вакцинации. Борьба с ящуром заключается в проведении своевременных профилактических мероприятий, таких как эффективный эпидемиологический контроль за болезнью; вакцинирование против ящура домашних и сельскохозяйственных животных; надзор за передвижением диких парнокопытных животных в приграничных районах, подверженных риску проникновения возбудителя из стран, неблагополучных по ящуру; мониторинговые исследования по оценке иммунного статуса сельскохозяйственного и домашнего скота, включая ретроспективную диагностику ящура.The WOAH (World Organization for Animal Health, founded as OIE) estimates that the disease circulates in 77% of the world's livestock in Africa, the Middle East and Asia, as well as a limited area of South America [1]. Therefore, there is a risk of introducing the infection into countries free from foot-and-mouth disease without vaccination. The fight against foot-and-mouth disease consists of carrying out timely preventive measures, such as effective epidemiological control of the disease; vaccination against foot and mouth disease of domestic and farm animals; supervision of the movement of wild artiodactyl animals in border areas at risk of pathogen penetration from countries affected by foot-and-mouth disease; monitoring studies to assess the immune status of agricultural and livestock, including retrospective diagnosis of foot and mouth disease.
Для серотипа SAT-2 выделяют 14 топотипов (I - XIV), внутри которых нет разделения на генетические группы [1, 3]. Такое высокое генетическое и антигенное разнообразие приводит к проблемам при специфической профилактике ящура при применении культуральных инактивированных противоящурных вакцин, а также затрудняет штаммоспецифическую диагностику выделенных изолятов вируса ящура. В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики в отношении вируса ящура серотипа SAT-2 и, в частности, генотипа SAT-2/XIV, представители которого активно распространяются на территории Африканского континента и теперь за ее пределами, в том числе в Азиатских странах. В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики в отношении ящура генотипа SAT-2/XIV.For the SAT-2 serotype, 14 topotypes (I - XIV) are distinguished, within which there is no division into genetic groups [1, 3]. Such high genetic and antigenic diversity leads to problems in the specific prevention of foot-and-mouth disease when using culture-inactivated foot-and-mouth disease vaccines, and also complicates the strain-specific diagnosis of isolated foot-and-mouth disease virus isolates. As a result, there is a need to create new diagnostic tools and specific immunoprophylaxis against the foot and mouth disease virus serotype SAT-2 and, in particular, the genotype SAT-2/XIV, representatives of which are actively spreading throughout the African continent and now beyond its borders, including in Asian countries. countries. As a result, there is a need to create new diagnostic tools and specific immunoprophylaxis against foot and mouth disease of the SAT-2/XIV genotype.
На территории Юго-Восточной, Южной, Восточной Азии вспышки ящура генотипа SAT-2/XIV теперь имеют спорадический характер. Следует отметить, что в последние годы усилились торгово-экономические связи России со странами этого региона, в частности, Монголии, Китая, Индии и др., а также Африки. Исходя из этого, крайне высоки риски заноса изолятов данного генотипа на территорию Российской Федерации, что угрожает биологической безопасности нашей страны по ящуру.In Southeast, South, and East Asia, outbreaks of foot and mouth disease of the SAT-2/XIV genotype are now sporadic. It should be noted that in recent years, Russia’s trade and economic ties with the countries of this region, in particular Mongolia, China, India, etc., as well as Africa, have intensified. Based on this, the risks of introducing isolates of this genotype into the territory of the Russian Federation are extremely high, which threatens the biological security of our country regarding foot-and-mouth disease.
На протяжении многих лет периодически фиксировали вспышки ящура генотипа SAT-2/XIV в странах Африки, однако в 2023 г. представители данного варианта вируса были обнаружены на территории Азиатского континента и Ближнего Востока, в частности, изоляты вируса ящура указанного генотипа были выделены в Иордании 02.2023, в Ираке 02.2023, Грузии 03.2023, Турции 03.2023, Омане 04.2023, Бахрейне 05.2023. Наличие торговых отношений Российской Федерации с этими государствами является угрожающим фактором в отношении распространения возбудителя ящура на территории нашей страны и требует исследования штаммов данного генотипа для создания средств диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV.Over the years, outbreaks of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype have been periodically recorded in African countries, but in 2023, representatives of this variant of the virus were discovered on the territory of the Asian continent and the Middle East, in particular, isolates of the foot-and-mouth disease virus of the specified genotype were isolated in Jordan 02.2023 , in Iraq 02.2023, Georgia 03.2023, Turkey 03.2023, Oman 04.2023, Bahrain 05.2023. The presence of trade relations between the Russian Federation and these states is a threatening factor regarding the spread of the foot-and-mouth disease pathogen in our country and requires the study of strains of this genotype to create diagnostic tools and specific prevention of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype.
Известны производственные штаммы вируса ящура серотипа SAT-2, которые применяются или использовались ранее в мире для производства средств специфической профилактики ящура:There are known production strains of foot and mouth disease virus serotype SAT-2, which are used or have been used previously in the world for the production of specific preventative agents for foot and mouth disease:
- штамм («SAT-2/ZIM/14/2002») (генотип SAT-2/I),- strain (“SAT-2/ZIM/14/2002”) (genotype SAT-2/I),
- штамм («SAT-2/ZIM/5/81») (генотип SAT-2/II),- strain (“SAT-2/ZIM/5/81”) (genotype SAT-2/II),
- штамм («SAT-2/ВОТ/Р3/98») (генотип SAT-2/III),- strain (“SAT-2/BOT/P3/98”) (genotype SAT-2/III),
- штамм («SAT-2/ETH/1/90») (генотип SAT-2/IV),- strain (“SAT-2/ETH/1/90”) (genotype SAT-2/IV),
- штамм («SAT-2/GHA/2/90») (генотип SAT-2/V),- strain (“SAT-2/GHA/2/90”) (genotype SAT-2/V),
- штамм («SAT-2/GAM/8/79») (генотип SAT-2/VI),- strain (“SAT-2/GAM/8/79”) (genotype SAT-2/VI),
- штамм («SAT-2/SAU/6/2000») (генотип SAT-2/VII),- strain (“SAT-2/SAU/6/2000”) (genotype SAT-2/VII),
- штамм («SAT-2/RWO/l/00») (генотип SAT-2/VIII),- strain (“SAT-2/RWO/l/00”) (genotype SAT-2/VIII),
- штамм («SAT-2/KEN/2/84») (генотип SAT-2/IX),- strain (“SAT-2/KEN/2/84”) (genotype SAT-2/IX),
- штамм («SAT-2/UGA/19/98») (генотип SAT-2/X),- strain (“SAT-2/UGA/19/98”) (genotype SAT-2/X),
- штамм («SAT-2/ANG/4/74») (генотип SAT-2/XI),- strain (“SAT-2/ANG/4/74”) (genotype SAT-2/XI),
- штамм («SAT-2/UGA/51/75») (генотип SAT-2/XII),- strain (“SAT-2/UGA/51/75”) (genotype SAT-2/XII),
- штамм («SAT-2/ETH/2/2007») (генотип SAT-2/XIII),- strain (“SAT-2/ETH/2/2007”) (genotype SAT-2/XIII),
- штамм («SAT-2/ETH/2/91») (генотип SAT-2/XIV) (прототип).- strain (“SAT-2/ETH/2/91”) (genotype SAT-2/XIV) (prototype).
Изолят вируса ящура был выделен в результате лабораторно-диагностических исследований в ФГБУ «ВНИИЗЖ» из патологического материала, отобранного от крупного рогатого скота на территории Иорданского Хашимитского Королевства в августе 2023 года. При проведении научных исследований в ФГБУ «ВНИИЗЖ» был охарактеризован и получил название - штамм «SAT-2/XIV/2023».The foot-and-mouth disease virus isolate was isolated as a result of laboratory diagnostic tests at the Federal State Budgetary Institution "ARRIAH" from pathological material collected from cattle in the territory of the Hashemite Kingdom of Jordan in August 2023. During scientific research at the Federal State Budgetary Institution "ARRIAH", the strain "SAT-2/XIV/2023" was characterized and given the name.
По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный штамм принадлежит к генотипу SAT-2/XIV вируса ящура, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура серотипа SAT-2, в том числе, от штамма «SAT-2/ETH/2/91».According to the results of a comparative analysis of nucleotide sequences, the isolated strain belongs to the genotype SAT-2/XIV of the foot-and-mouth disease virus, which differs significantly from the production strains of the foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2, including the strain “SAT-2/ETH/2/91”.
Настоящее изобретение позволяет расширить арсенал производственных штаммов вируса ящура серотипа SAT-2, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде, пригодный для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, изготовления чувствительных и высокоспецифичных диагностических тест-систем и высоко иммуногенных вакцинных препаратов путем получения штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV.The present invention allows us to expand the arsenal of production strains of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2, which have high infectious, antigenic and immunogenic activity in their native form, suitable for monitoring the antigenic and immunogenic activity of vaccines, manufacturing sensitive and highly specific diagnostic test systems and highly immunogenic vaccine preparations by obtaining strain "SAT-2/XIV/2023" of the foot-and-mouth disease virus for the production of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV.
Штамм вируса ящура «SAT-2/XIV/2023» депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вирусов ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ», под регистрационным номером: №489 - деп / 23-39 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».The foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” has been deposited in the All-Russian State Collection of Exotic Types of Foot-and-Mouth Disease Viruses and Other Animal Pathogens (FMD) of the FGBU “ARRIAH”, under registration number: No. 489 - dep / 23-39 - GKSHM FGBU “ARRIAH” "
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура для изготовления средств диагностики и профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV.The possibility of using the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus for the production of diagnostic and preventative means for foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype has been experimentally confirmed.
Сущность изобретения отражена на графическом изображении:The essence of the invention is reflected in the graphic image:
Фиг. 1. - Дендрограмма, отражающая филогенетическое взаимоотношение штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура с эпизоотическими штаммами серологического серотипа SAT-2. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.Fig. 1. - Dendrogram reflecting the phylogenetic relationship of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” with epizootic strains of the serological serotype SAT-2. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the VP 1 gene.
Фиг. 2. - Данные гель-электрофореза очищенного препарата антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023». Примечание: 1 - маркер молекулярного веса, 2 - исследуемая проба препарата антигена вируса ящура.Fig. 2. - Gel electrophoresis data of a purified preparation of the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”. Note: 1 - molecular weight marker, 2 - test sample of the foot-and-mouth disease virus antigen preparation.
Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:The essence of the invention is illustrated by the following sequence lists:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов ID-гена белка VP1 штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура генотипа SAT-2/XIV;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the ID gene of the VP 1 protein of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus genotype SAT-2/XIV;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот ID-гена белка VP1 штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура генотипа SAT-2/XIV.SEQ ID NO: 2 represents the amino acid sequence of the ID gene of the VP 1 protein of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot and mouth disease virus genotype SAT-2/XIV.
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.The foot and mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” is characterized by the following characteristics and properties.
Морфологические признакиMorphological characteristics
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура имеет следующую таксономию: сфера Riboviria, царство Orthornavirae, тип Pisuviricota, класс Pisoniviricetes, отряд Picornavirales, семейство Picornaviridae, род Aphthovirus, вид Foot-and-mouth disease virus, серотип SAT-2, генотип SAT-2/XIV. Штамм возбудителя обладает следующими морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона иксаэдрическая, размер 23 нм. Вирион состоит из молекулы одноцепочечной положительно заряженной молекулы РНК и 60 копий полипептида, каждый из которых представлен белками VP4, VP2, VP3, VP1.The foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” has the following taxonomy: sphere Riboviria, kingdom Orthornavirae, phylum Pisuviricota, class Pisoniviricetes, order Picornavirales, family Picornaviridae, genus Aphthovirus, species Foot-and-mouth disease virus, serotype SAT-2 , genotype SAT-2/XIV. The pathogen strain has the following morphological characteristics characteristic of the foot-and-mouth disease pathogen: the shape of the virion is ixahedral, size 23 nm. The virion consists of a single-stranded positively charged RNA molecule and 60 copies of a polypeptide, each of which is represented by the proteins VP 4 , VP 2 , VP 3 , VP 1 .
Антигенные свойстваAntigenic properties
По антигенным свойствам штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура относится к серотипу SAT-2. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).According to antigenic properties, the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus belongs to the SAT-2 serotype. The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus does not exhibit hemagglutinating activity. In recovered animals, type-specific antibodies are formed in the blood serum, which are detected in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and microneutralization reaction (RMN).
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура ID-гена белка VP1 штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура принадлежит к генотипу SAT-2/XIV (Фиг. 1).Using the nucleotide sequencing method, the primary structure of the ID gene of the VP 1 protein of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” was determined. Comparative analysis of nucleotide sequences showed that the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus belongs to the SAT-2/XIV genotype (Fig. 1).
Антигенное родство (r1) штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура изучено в реакции микронейтрализации вируса, в перекрестном исследовании штамма со специфическими сыворотками, полученными на производственные штаммы вируса ящура.The antigenic affinity (r 1 ) of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus was studied in the microneutralization reaction of the virus, in a cross-study of the strain with specific sera obtained for production strains of the foot-and-mouth disease virus.
Титр референтных сывороток крови КРС, полученных путем иммунизации животных моновалентными вакцинами из производственных штаммов вируса ящура серотипа SAT-2, против 102 ТЦД50 гомологичного и гетерологичного вируса определяли в РМН при перекрестном титровании, рассчитывая значения с использованием уравнения линейной регрессии, и выражали в lg. Значение r1 определяли, как антилогарифм разности lg титров сыворотки против гетерологичного и гомологичного вируса [7, 8, 9].The titer of reference cattle blood sera obtained by immunizing animals with monovalent vaccines from industrial strains of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 against 10 2 TCD 50 of homologous and heterologous virus was determined in the RMN with cross-titration, calculating values using a linear regression equation, and expressed in lg . The r 1 value was determined as the antilogarithm of the difference in serum lg titers against heterologous and homologous viruses [7, 8, 9].
Значение r1 в РМН интерпретировали следующим образом:The value of r 1 in the RMN was interpreted as follows:
при ≥0,3 - исследуемый и производственный штаммы вируса ящура являются родственными;at ≥0.3 - the studied and production strains of foot-and-mouth disease virus are related;
при <0,3 - исследуемый образец штамма вируса ящура значительно отличается от производственного штамма.at <0.3 - the studied sample of the foot-and-mouth disease virus strain differs significantly from the production strain.
Максимальное родство отмечается при значении r1 в РМН, стремящимся к 1,0.Maximum relatedness is observed when the value of r 1 in the RMN tends to 1.0.
Показатели антигенного родства при изучении штамма «SAT-2/XIV/2023» составили r1 от 0,01 до 0,27, что свидетельствует об отсутствии явного антигенного родства с производственными штаммами вируса ящура серотипа SAT-2 (табл. 1).Indicators of antigenic relatedness when studying the strain “SAT-2/XIV/2023” amounted to r 1 from 0.01 to 0.27, which indicates the absence of obvious antigenic relatedness with production strains of foot-and-mouth disease virus serotype SAT-2 (Table 1).
Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno- and chemotaxonomic characteristics
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура является РНК(+) - содержащим вирусом с молекулярной массой 8,079×106 Д. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,84×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.The strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus is an RNA(+)-containing virus with a molecular weight of 8.079×10 6 D. Nucleic acid is represented by a single-chain linear molecule with a molecular weight of 2.84×10 6 D. The virion has a protein shell, consisting of four main proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 and VP 4 . The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирусная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса, в том числе такой важный фермент как РНК-зависимую РНК-полимеразу (3D-ген), участвующую в репликации РНК для сборки вирионов.The main antigenic protein is VP 1 . The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Viral RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and non-structural polypeptides of the virus, including such an important enzyme as RNA-dependent RNA polymerase (3D gene), which is involved in RNA replication for the assembly of virions.
Физические свойстваPhysical properties
Масса вириона составляет 8,44×10-18 г. Плавучая плотность 1,47 г/см3.The mass of the virion is 8.44×10 -18 g. The buoyant density is 1.47 g/cm 3 .
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура устойчив к эфиру, хлороформу, и ацетону. Наиболее стабилен при рН 7,44-7,70. Сдвиги рН в кислую и сильно щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам (выше 38,7°С).Strain “SAT-2/XIV/2023” of foot and mouth disease virus is resistant to ether, chloroform, and acetone. Most stable at pH 7.44-7.70. Shifts in pH to the acidic and strongly alkaline side lead to inactivation of the virus. Sensitive to formaldehyde, UV irradiation, γ-irradiation, high temperatures (above 38.7°C).
Дополнительные признаки и свойстваAdditional characteristics and properties
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not have reactogenic properties.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных.Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulent for naturally susceptible animals during contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемых культурах.Stability - retains the original biological properties when passaging in sensitive biological systems for 5 passages (observation period) on continuous crops.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомячка (ВНК-21).The foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” is reproduced in continuous cell cultures: Siberian mountain ibex kidneys (PSGK-30), pig kidneys (IB-RS-2), Syrian hamster kidneys (VNK-21).
При испытании было проведено 5 последовательных пассажей штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура в перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21, IB-RS-2. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой клеточной линии IB-RS-2 и на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте (КРС) и свиньях.During the test, 5 consecutive passages of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” were carried out in continuous cell cultures PSGK-30, BNK-21, IB-RS-2. Biological properties were characterized by determining the infectious activity of the virus of each passage in the continuous cell line IB-RS-2 and in naturally susceptible animals - cattle (cattle) and pigs.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исследования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the proposed invention is illustrated by examples of its research, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Исследование биологических свойств штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура при репродукции в монослойных перевиваемых клеточных линиях.Example 1. Study of the biological properties of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” during reproduction in monolayer continuous cell lines.
При выделении изолята вируса ящура с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [7].When isolating a foot-and-mouth disease virus isolate in order to obtain its homogeneous population with optimal biotechnological properties, a complex of biological, virological and biochemical methods were used, provided for by guidelines for the detection and identification of foot-and-mouth disease virus strains [7].
Биологические и вирусологические методы включали в себя метод выделения в клеточной линии и адаптацию изолята вируса ящура к ним.Biological and virological methods included the cell line isolation method and adaptation of the foot and mouth disease virus isolate to them.
Процесс выделения возбудителя ящура проводили в монослойных перевиваемых клеточных линиях ПСГК-30, IB-RS-2, ВНК-21 с последующей адаптацией в течение 5 последовательных пассажей. Культуры клеток выращивали в соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25,0 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10%-ной суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хэнкса с 0,5% гидролизата лактальбумина по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов вирусную суспензию предварительно обрабатывали 10%-ным раствором хлороформа. После 30-минутного контакта вируса с клеточной культурой при температуре 37,0±0,1°С во флаконы вносили по 5,0 см3 поддерживающей среды и инкубировали при температуре 37,0±0,1°С до появления цитопатического действия (ЦПД) в культуре клеток, которое представлено в виде округления клеток, повышения их оптической плотности, дегенерации и отделении клеток от поверхности субстрата. При ЦПД не менее 95% клеток, флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей. Вирус считался адаптированным к культурам клеток, если в течение не менее 24 часов проявлялось 95-100% ЦПД в монослое клеточных культур. Адаптация эпизоотического изолята к различным клеточным линиям наступала на уровне пятого пассажа. Титр инфекционной активности вируса ящура определяли с помощью разработанной ранее методики [10].The process of isolating the causative agent of foot and mouth disease was carried out in monolayer continuous cell lines PSGK-30, IB-RS-2, VNK-21 with subsequent adaptation for 5 consecutive passages. Cell cultures were grown in appropriate nutrient media under stationary conditions in flasks with a surface area of 25.0 cm2 , washed from the growth medium and infected with a 10% suspension of aphthous material (multiplicity of infection was 1-10 TCD 50 per cell), prepared in Hanks solution with 0.5% lactalbumin hydrolyzate according to the standard recipe. To remove microflora and ballast cellular components, the viral suspension was pre-treated with a 10% chloroform solution. After 30 minutes of contact of the virus with the cell culture at a temperature of 37.0±0.1°C, 5.0 cm 3 of the supporting medium was added to the vials and incubated at a temperature of 37.0±0.1°C until the cytopathic effect (CPE) appeared ) in cell culture, which is presented in the form of rounding of cells, increasing their optical density, degeneration and separation of cells from the surface of the substrate. When the CPD was at least 95% of cells, the flasks were subjected to freezing-thawing, purification of the cell suspension with chloroform and centrifugation at 3000 g for 15 minutes. The resulting virus-containing material was used for subsequent passages. The virus was considered adapted to cell cultures if 95-100% CPE manifested itself in a monolayer of cell cultures for at least 24 hours. Adaptation of the epizootic isolate to various cell lines occurred at the level of the fifth passage. The titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus was determined using a previously developed method [10].
Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 2, данные которой свидетельствуют о высокой адаптационной способности изолята вируса ящура к использованным клеточным линиям. В монослойной культуре клеток ПСГК-30 за 13 ч получали вирусную суспензию с активностью в РСК 1:16 и титром инфекционной активности 7,31±0,10 lg ТЦД50/СМ3. В монослойной культуре клеток IB-RS-2 за 19 ч получали вирусную суспензию с активностью в РСК 1:16 и титром инфекционной активности 7,01±0,10 lg ТЦД50/см3. В монослойной культуре клеток ВНК-21 за 24 ч получали вирусную суспензию с активностью в РСК 1:16 и титром инфекционной активности 7,05±0,10 lg ТЦД50/см3. Каждое исследование и культивирование проводили 8 раз. В итоге получен штамм «SAT-2/XIV/2023» с охарактеризованными биологическими культуральными свойствами, который далее использовали для исследования его свойств.The results of adaptation of the virus to various cell cultures are presented in Table 2, the data of which indicate the high adaptive ability of the foot-and-mouth disease virus isolate to the cell lines used. In a monolayer culture of PSGK-30 cells, a viral suspension was obtained within 13 hours with an activity in RSC of 1:16 and an infectious activity titer of 7.31±0.10 lg TCD 50 /CM 3 . In a monolayer culture of IB-RS-2 cells, a viral suspension with an activity in RSC of 1:16 and an infectious activity titer of 7.01±0.10 lg TCD 50 /cm 3 was obtained in 19 hours. In a monolayer culture of BHK-21 cells, a viral suspension was obtained within 24 hours with an activity in RSC of 1:16 and an infectious activity titer of 7.05±0.10 lg TCD 50 /cm 3 . Each study and cultivation was carried out 8 times. As a result, a strain “SAT-2/XIV/2023” with characterized biological cultural properties was obtained, which was further used to study its properties.
Пример 2. Исследование биологических свойств штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура на крупном рогатом скоте.Example 2. Study of the biological properties of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” in cattle.
Заражение КРС исходным штаммом вируса ящура проводили интрадермолингвально (I пассаж). Адаптацию и наработку штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура на КРС проводили в течение двух последовательных пассажей. С целью определения титра инфекционной активности адаптированного штамма из афт на этапе второго пассажа на КРС получали 10%-ную вирусную суспензию, из которой готовили последовательные 10-кратные разведения в 1/15 М фосфатно-солевом буферном растворе (ФСБР). Подготовленные разведения с 10-2 по 10-6 вводили интрадермолингвально в 4 точки по 0,1 см3 двум головам КРС. Учет результатов титрования на животных проводили спустя 24 ч по наличию афт на месте введения разведений вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023». Титр инфекционной активности на КРС данного штамма вируса ящура на стадии первого пассажа на КРС составил 5,25 lg ИД,50/0,1 см3, второго пассажа - 6,00 lg ИД50/0,1 см3. Таким образом, была получена 10%-ная афтозная суспензия вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» (2 пассаж на КРС) с титром инфекционной активности 6,00 lg ИД50/0,1 см3.Infection of cattle with the original strain of foot-and-mouth disease virus was carried out intradermal-lingually (passage I). Adaptation and development of the “SAT-2/XIV/2023” strain of foot-and-mouth disease virus in cattle was carried out over two consecutive passages. In order to determine the titer of infectious activity of the adapted strain from aphthae, at the stage of the second passage on cattle, a 10% viral suspension was obtained, from which serial 10-fold dilutions were prepared in 1/15 M phosphate-buffered saline solution (PSBS). Prepared dilutions from 10 -2 to 10 -6 were injected intradermolingually into 4 points of 0.1 cm 3 in two heads of cattle. The results of titration in animals were recorded after 24 hours based on the presence of aphthae at the site of injection of dilutions of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”. The titer of infectious activity on cattle of this strain of foot and mouth disease virus at the stage of the first passage on cattle was 5.25 lg ID, 50 /0.1 cm 3 , the second passage - 6.00 lg ID 50 /0.1 cm 3 . Thus, a 10% aphthous suspension of foot and mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” (passage 2 on cattle) was obtained with an infectious activity titer of 6.00 lg ID 50 /0.1 cm 3 .
Пример 3. Исследование биологических свойств штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура на свиньях.Example 3. Study of the biological properties of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” in pigs.
Заражение свиней исходным штаммом «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура проводили внутрикожно на стадии первого пассажа в область венчика передних конечностей. Адаптацию и наработку штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура на свиньях вели в течение двух последовательных пассажей. С целью определения титра инфекционной активности адаптированного штамма из афт второго пассажа на свиньях получали 10%-ную вирусную суспензию, из которой готовили последовательные 10-кратные разведения с использованием в качестве растворителя 1/15 М ФБР. Подготовленные разведения с 10-2 по 10-6 вводили внутрикожно в венчики копытец по 0,1 см3 в 4 точки на каждый палец конечности одного разведения, из расчета 1 разведение на 2 копытца 1 конечности каждому из 2 подопытных подсвинков.Infection of pigs with the original strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus was carried out intradermally at the stage of the first passage in the area of the corolla of the forelimbs. The adaptation and development of the “SAT-2/XIV/2023” strain of foot-and-mouth disease virus in pigs was carried out over two consecutive passages. In order to determine the titer of infectious activity of the adapted strain, a 10% viral suspension was obtained from aphthae of the second passage in pigs, from which serial 10-fold dilutions were prepared using 1/15 M PBS as a solvent. Prepared dilutions from 10 -2 to 10 -6 were injected intradermally into the corollas of the hooves, 0.1 cm 3 at 4 points on each finger of the limb of one dilution, at the rate of 1 dilution for 2 hooves of 1 limb for each of 2 experimental gilts.
Учет результатов титрования проводили через 24 ч по наличию афт на месте введения разведений. Титр инфекционной активности на свиньях для штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура на свиньях на стадии первого пассажа составил 5,75 lg ИД50/0,1 см3, второго - 6,50 lg ИД50/0,1 см3.The titration results were recorded after 24 hours based on the presence of aphthae at the site of dilution administration. The titer of infectious activity in pigs for the strain “SAT-2/XIV/2023” of foot-and-mouth disease virus in pigs at the stage of the first passage was 5.75 lg ID 50 /0.1 cm 3 , the second - 6.50 lg ID 50 /0.1 cm 3 .
Пример 4. Исследование биологических свойств штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура при репродукции в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH.Example 4. Study of the biological properties of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” during reproduction in the continuous suspension cell line BNK-21/SUSP/ARRIAH.
Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура репродуцировали в суспензионной перевиваемой культуре клеток из почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21 /SUSP/ARRIAH. В качестве поддерживающей среды использовали среду Игла, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого, гидролизата белков крови сухого при рН среды 7,44-7,70. Клеточную линию заражали вирусом из расчета 0,005 ТЦД50/клетка.Strain “SAT-2/XIV/2023” of foot-and-mouth disease virus was reproduced in a suspension continuous culture of cells from the kidney of a newborn Syrian hamster BHK-21 /SUSP/ARRIAH. Eagle's medium was used as a supporting medium, with the addition of dry enzymatic muscle hydrolyzate and dried blood protein hydrolyzate at a pH of 7.44-7.70. The cell line was infected with the virus at the rate of 0.005 TCD 50 /cell.
Культивирование штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура осуществляли при температуре 37,0±01°С до достижения ЦПД вируса, соответствующего не менее 95%. Полученную вируссодержащую суспензию контролировали на стерильность и содержание 146S компонента и общего вирусного белка (ОВБ). Полученные суспензии были стерильными. Концентрация ОВБ в суспензии составляла 2,83±0,12 мкг/см3. Значения титра инфекционной активности вируса, а также процентное содержание 146S компонента штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура отражены в таблице 3, из данных которой видно, что при средней концентрации клеток ВНК-21/SUSP/ARRIAH, равной 4,03±0,13 млн клеток/см3, дозе заражения 0,005 ТЦД50/клетку и продолжительности репродукции вируса 11,45±0,37 ч средний титр инфекционной активности возбудителя ящура был равен 9,53±0,16 lg ТЦД50/см3. Концентрацию 146S компонента вируса ящура определяли с помощью ранее разработанной методики [11]. Содержание данного компонента составило 68,66±0,64% (1,94±0,07 мкг/см3).Cultivation of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” was carried out at a temperature of 37.0±01°C until the CPE of the virus was achieved, corresponding to at least 95%. The resulting virus-containing suspension was monitored for sterility and the content of the 146S component and total viral protein (TVP). The resulting suspensions were sterile. The concentration of OM in the suspension was 2.83±0.12 μg/cm 3 . The titer values of the infectious activity of the virus, as well as the percentage of the 146S component of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus are reflected in Table 3, from which it can be seen that with an average concentration of BHK-21/SUSP/ARRIAH cells equal to 4, 03±0.13 million cells/cm 3 , an infection dose of 0.005 lg TCD 50 /cell and a duration of virus reproduction of 11.45±0.37 hours, the average titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease pathogen was equal to 9.53±0.16 lg TCD 50 /cm 3 . The concentration of the 146S component of the foot-and-mouth disease virus was determined using a previously developed method [11]. The content of this component was 68.66±0.64% (1.94±0.07 μg/cm 3 ).
Пример 5. Определение типовой специфичности и активности штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура.Example 5. Determination of the type specificity and activity of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”.
Исследование типовой специфичности и активности штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура проводили в реакции связывания комплемента (РСК). К полученному антигену штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура, взятому в объеме 0,4 см3 в цельном виде и в разведениях 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 добавляли по 0,1 см3 гомологичной и гетерологичных гипериммунных сывороток, полученных на вирус ящура в рабочем (удвоенном) титре и 0,1 см3 комплемента в рабочем разведении. Смесь выдерживали в водяной бане в течение 20 мин при температуре 37,0±0,1°С. Затем вносили по 0,2 см3 гемолитической системы и выдерживали 30 мин при температуре 37,0±0,1°С. Положительный результат реакции соответствовал 100%-ной задержке гемолиза эритроцитов барана («4 креста»). Параллельно проводили контрольные реакции без сыворотки, без комплемента и компонентов реакции.The study of the type specificity and activity of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” was carried out in the complement fixation reaction (CFR). To the resulting antigen of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus, taken in a volume of 0.4 cm 3 in whole form and in dilutions of 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, was added 0.1 cm 3 of homologous and heterologous hyperimmune sera obtained for foot-and-mouth disease virus in a working (double) titer and 0.1 cm 3 of complement in a working dilution. The mixture was kept in a water bath for 20 minutes at a temperature of 37.0±0.1°C. Then 0.2 cm 3 of hemolytic system was added and kept for 30 minutes at a temperature of 37.0±0.1°C. A positive reaction result corresponded to a 100% delay in hemolysis of sheep erythrocytes (“4 crosses”). In parallel, control reactions were carried out without serum, without complement and reaction components.
В качестве реагентов в РСК использовали сыворотки ящурные типоспецифические гипериммунные морских свинок, полученные на производственные штаммы вируса ящура «А №2029/Турция/06», «SAT-2/XIV/2023» (предлагаемое изобретение), «Азия-1/Таджикистан/2011», «SAT-1 №96/62», «SAT-2/ETH/2/91», «О №2311/Забайкальский/2016» комплемент сухой для РСК, гемолизин (сыворотка гемолитическая), эритроциты барана 2% (взвесь на физиологическом растворе, рН=7,05-7,15). В качестве контроля использовали антигены вируса ящура штаммов «А №2029/Турция/06», «SAT-2/XIV/2023» (предлагаемое изобретение), «Азия-1/Таджикистан/2011», «SAT-1 №96/62», «SAT-2/ETH/2/91», «О №2311/Забайкальский/2016».As reagents, the RSC used foot-and-mouth disease type-specific hyperimmune guinea pig sera obtained for production strains of foot-and-mouth disease virus “A No. 2029/Turkey/06”, “SAT-2/XIV/2023” (proposed invention), “Asia-1/Tajikistan/ 2011", "SAT-1 No. 96/62", "SAT-2/ETH/2/91", "O No. 2311/Zabaikalsky/2016" dry complement for RSC, hemolysin (hemolytic serum), sheep red blood cells 2% ( suspension in physiological solution, pH=7.05-7.15). Antigens of the foot and mouth disease virus strains “A No. 2029/Turkey/06”, “SAT-2/XIV/2023” (proposed invention), “Asia-1/Tajikistan/2011”, “SAT-1 No. 96/62” were used as a control ", "SAT-2/ETH/2/91", "O No. 2311/Zabaikalsky/2016".
Результаты исследования отражены в таблице 4, из которой следует, что штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура обладает выраженной типовой специфичностью, относится к вирусу ящура серотипа SAT-2 и активен в РСК в разведении 1:32.The results of the study are reflected in Table 4, from which it follows that the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus has a pronounced type specificity, belongs to the foot-and-mouth disease virus of the SAT-2 serotype and is active in RSC at a dilution of 1:32.
Пример 6. Получение, контроль качества и применение антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура как биопрепарата для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV.Example 6. Preparation, quality control and use of the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” as a biological product for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype.
Для получения антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура как компонента биопрепарата при изготовлении средств диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV проводили суспензионное культивирование вируса в клеточной линии ВНК-21/SUSP/ARRIAH с получением вирусной суспензии с титром инфекционной активности не ниже 7,00 lg ТЦД50/см3. Полученную вирусную суспензию инактивировали с помощью аминоэтилэтиленимина и осветляли за счет полигексаметиленгуанидина.To obtain the antigen of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus as a component of a biological product in the manufacture of diagnostic tools and specific prevention of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype, suspension cultivation of the virus was carried out in the cell line BNK-21/SUSP/ARRIAH to obtain a viral suspension with a titer of infectious activity not lower than 7.00 lg TCD 50 / cm 3 . The resulting viral suspension was inactivated with aminoethylethylenimine and clarified with polyhexamethylene guanidine.
Инактивированную культуральную суспензию, содержащую антиген вирус ящура, осветляли в течение 30 мин. при 6000 об/мин и 4±2°С на центрифуге типа Bekman J2-21 (Beckman Coulter, USA) или аналоге. Надосадочную жидкость отбирали и добавляли в нее полиэтиленгликоль с молекулярным весом 6000 Д (ПЭГ-6000) до конечной концентрации 8% и хлорид натрия (сухой) до конечной концентрации 0,90%, интенсивно перемешивали и выдерживали при температуре 4±2°С в течение 22±1 ч. Вирусную суспензию осаждали при 6000 об/мин в течение 60 мин., осадок растворяли в 1/15 М фосфатно-солевом буферном растворе, концентрируя в 10 раз (1/10 от первоначального объема).The inactivated cultural suspension containing the foot-and-mouth disease virus antigen was clarified for 30 minutes. at 6000 rpm and 4±2°C on a Bekman J2-21 centrifuge (Beckman Coulter, USA) or equivalent. The supernatant liquid was taken and polyethylene glycol with a molecular weight of 6000 D (PEG-6000) was added to it to a final concentration of 8% and sodium chloride (dry) to a final concentration of 0.90%, mixed vigorously and kept at a temperature of 4±2°C for 22±1 hours. The viral suspension was precipitated at 6000 rpm for 60 minutes, the sediment was dissolved in 1/15 M phosphate-buffered saline, concentrating 10 times (1/10 of the original volume).
К полученному преципитату добавляли 50% хлороформа, интенсивно перемешивали и фракционировали с помощью центрифуги в течение 30 мин. при 3000 об/мин. Отбирали верхнюю водную фракцию, содержащую антиген вируса ящура. Отбирали 100 мкл образца для последующего электрофоретического анализа в 12% полиакриламидном геле.50% chloroform was added to the resulting precipitate, mixed vigorously and fractionated using a centrifuge for 30 minutes. at 3000 rpm. The upper aqueous fraction containing the foot-and-mouth disease virus antigen was collected. 100 μl of sample was taken for subsequent electrophoretic analysis in a 12% polyacrylamide gel.
Для получения очищенного антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура готовили линейный градиент сахарозы с концентрациями 10, 20, 30, 40, 50%. Инактивированную суспензию вируса ящура наливали по 10 мл в центрифужные пробирки, затем последовательно подслаивали растворы сахарозы, начиная с 10%-го и заканчивая 50%-м раствором. Пробирки помещали в металлические центрифужные стаканы и после тщательно выполненного уравновешивания центрифугировали при скорости 40 000 об/мин и температуре 4±2°С в течение 4 часов. Фракционирование градиента сахарозы производили с помощью перистальтического насоса, отбирая фракции по 1 мл в отдельные пробирки. Опалесцирующий слой, содержащий очищенный антиген вируса ящура, располагается приблизительно в 30%-м слое сахарозы. Данную фракцию переосаждали с помощью ультрацентрифугирования в течение 4 часов при скорости 40 000 об/мин. и температуре 4±2°С и ресуспендировали осадок в 1/15 М фосфатно-солевом буферном растворе.To obtain the purified antigen of the foot and mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”, a linear gradient of sucrose was prepared with concentrations of 10, 20, 30, 40, 50%. The inactivated suspension of foot and mouth disease virus was poured into 10 ml centrifuge tubes, then sucrose solutions were successively layered, starting with a 10% solution and ending with a 50% solution. The tubes were placed in metal centrifuge beakers and, after careful equilibration, were centrifuged at 40,000 rpm and 4±2°C for 4 hours. Fractionation of the sucrose gradient was carried out using a peristaltic pump, collecting 1 ml fractions into separate tubes. The opalescent layer containing the purified foot-and-mouth disease virus antigen is located in approximately 30% sucrose layer. This fraction was reprecipitated by ultracentrifugation for 4 hours at 40,000 rpm. and a temperature of 4±2°C and resuspended the sediment in 1/15 M phosphate-buffered saline solution.
Результаты спектрометрического исследования полученных фракций штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура как компонента для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV представлены в таблице 5. Анализ проводили для всех фракций, высокие значения оптической плотности наблюдали для 5-12 фракции с максимальными значениями для 8-11 пиков.The results of a spectrometric study of the obtained fractions of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus as a component for the diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease of the SAT-2/XIV genotype are presented in Table 5. The analysis was carried out for all fractions, high optical density values were observed for 5- 12 fractions with maximum values for 8-11 peaks.
Проведен электрофорез полученных фракций в 12% полиакриламидном геле в денатурирующих условиях для отобранной фракции. Полученные результаты отражены на фиг. 2, из которой видно, что полученный очищенный антиген вируса ящура.Electrophoresis of the obtained fractions was carried out in a 12% polyacrylamide gel under denaturing conditions for the selected fraction. The results obtained are shown in Fig. 2, from which it is clear that the resulting purified antigen of the foot-and-mouth disease virus.
С помощью реакции связывания комплемента определили концентрацию 146S компонента в полученном антигене, которая составила 19,42±0,05 мкг/см3 (n=3, р<0,005), что достаточно для использования при изготовлении диагностических наборов для выявления антигена и антител против вируса ящура, а также изготовления специфических препаратов для профилактики данного заболевания.Using the complement fixation reaction, we determined the concentration of the 146S component in the resulting antigen, which was 19.42±0.05 μg/cm 3 (n=3, p<0.005), which is sufficient for use in the manufacture of diagnostic kits for detecting antigen and antibodies against foot and mouth disease virus, as well as the manufacture of specific drugs for the prevention of this disease.
Таким образом, проведены получение и контроль качества антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура как биопрепарата для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV.Thus, the production and quality control of the antigen of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus as a biological product for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype was carried out.
Полученный антиген использовали в качестве биопрепарата для проведения реакции связывания комплемента для детекции антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» в исследуемых пробах при изготовлении вакцинных препаратов. Для определения диагностической чувствительности реакции анализировали 655 проб антигена, которые являлись заведомо положительными. По результатам проведения реакции связывания комплемента (РСК) доказали, что из 655 образцов сывороток крови все определены в качестве положительных. Для исследования специфичности реакции тестировали 159 отрицательных проб. В результате исследования с помощью РСК, что из 159 отрицательных проб все определены в качестве отрицательных. Пользуясь статистическими методами анализа определили, что в 95%-ном доверительном интервале диагностическая чувствительность (DSe) составила 99,44-100,00%, диагностическая специфичность (DSp) - 97,71-100,00%, k-критерий - 1,000; общая точность (DAc) - 99,55-100,00%.The resulting antigen was used as a biological product to carry out a complement fixation reaction to detect the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” in the test samples for the production of vaccine preparations. To determine the diagnostic sensitivity of the reaction, 655 antigen samples that were known to be positive were analyzed. Based on the results of the complement fixation test (FFR), it was proved that out of 655 blood serum samples, all were determined to be positive. To study the specificity of the reaction, 159 negative samples were tested. As a result of the study using RSC, out of 159 negative samples, all were determined to be negative. Using statistical analysis methods, it was determined that in the 95% confidence interval, diagnostic sensitivity (DSe) was 99.44-100.00%, diagnostic specificity (DSp) - 97.71-100.00%, k-criterion - 1.000; overall accuracy (DAc) - 99.55-100.00%.
Таким образом, полученный антиген штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура применим для использования в качестве биопрепарата в диагностических тест-системах.Thus, the obtained antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” is applicable for use as a biological product in diagnostic test systems.
Пример 7. Применение антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023», для получения сывороток крови кролика, как биопрепарата для диагностики ящура генотипа SAT-2/XIV.Example 7. Use of the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” to obtain rabbit blood sera as a biological product for the diagnosis of foot-and-mouth disease genotype SAT-2/XIV.
Для получения сыворотки крови кролика против антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура как биопрепарата для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/XIV применяли 20 клинически здоровых кроликов средней упитанности массой 2,5-3,0 кг.To obtain rabbit blood serum against the antigen of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus as a biological product for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype, 20 clinically healthy rabbits of average fatness weighing 2.5-3.0 kg were used.
Для гипериммунизации животных применяли антиген вируса ящура, полученный как описано в примере 6, из которого готовили эмульсию с использованием масляного адъюванта Montanide ISA-71 R VG («Seppic», Франция) (в соотношении адъювант/антиген=70/30 по массе). Полученную вакцину вводили в мышцу задних конечностей кролика на 0, 21 и 42 дни в объеме 0,5 см3. Через 7 дней после последней иммунизации кроликов тотально обескровливали и получали сыворотку крови, содержащую антитела против антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура, которую лиофильно высушивали и хранили при температуре 4-8°С.For hyperimmunization of animals, the antigen of the foot and mouth disease virus was used, obtained as described in example 6, from which an emulsion was prepared using the oil adjuvant Montanide ISA-71 R VG (Seppic, France) (adjuvant/antigen ratio = 70/30 by weight). The resulting vaccine was injected into the muscle of the hind limbs of a rabbit on days 0, 21 and 42 in a volume of 0.5 cm 3 . 7 days after the last immunization, the rabbits were completely bled and blood serum containing antibodies against the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” was obtained, which was freeze-dried and stored at a temperature of 4-8°C.
Полученные 20 сывороток крови кроликов проверяли в реакции связывания комплемента и определили, что их активность составила 1:9000-1:9500. Данные показатели являются высокими и достаточными для изготовления диагностических наборов по выявлению антигена и антител против вируса ящура.The resulting 20 rabbit blood sera were tested in the complement fixation reaction and it was determined that their activity was 1:9000-1:9500. These indicators are high and sufficient for the production of diagnostic kits for detecting antigen and antibodies against the foot-and-mouth disease virus.
Изготовленные сыворотки объединили в общий пул, провели лиофильную сушку и, таким образом, получили биопрепарат, который использовали для проведения реакции связывания комплемента для детекции антигена вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023». Для определения диагностической чувствительности реакции анализировали 658 проб антигена, которые являлись заведомо положительными. По результатам проведения реакции связывания комплемента (РСК) доказали, что из 658 образцов сывороток крови все определены в качестве положительных. Для исследования специфичности реакции тестировали 200 отрицательных проб. В результате исследования с помощью РСК, что из 200 отрицательных проб все определены в качестве отрицательных. Пользуясь статистическими методами анализа определили, что в 95%-ном доверительном интервале диагностическая чувствительность (DSe) составила 99,44-100,00%, диагностическая специфичность (DSp) - 98,17-100,00%, k-критерий - 1,000; общая точность (DAc) - 99,57-100,00%.The produced sera were combined into a common pool, freeze-dried, and thus a biological product was obtained, which was used to carry out a complement fixation reaction to detect the antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023”. To determine the diagnostic sensitivity of the reaction, 658 antigen samples that were known to be positive were analyzed. Based on the results of the complement fixation test (FFR), it was proved that out of 658 blood serum samples, all were determined to be positive. To study the specificity of the reaction, 200 negative samples were tested. As a result of the study using RSC, out of 200 negative samples, all were determined to be negative. Using statistical methods of analysis, it was determined that in the 95% confidence interval, diagnostic sensitivity (DSe) was 99.44-100.00%, diagnostic specificity (DSp) - 98.17-100.00%, k-criterion - 1.000; overall accuracy (DAc) - 99.57-100.00%.
Таким образом, полученный антиген вируса ящура штамма «SAT-2/XIV/2023» применим для иммунизации животных как биопрепарат. Проведены получение и контроль качества сывороток крови кролика против антигена штамма «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура, а также показано применение полученной сыворотки как биопрепарата для диагностики ящура генотипа SAT-2/XIV.Thus, the obtained antigen of the foot-and-mouth disease virus strain “SAT-2/XIV/2023” is applicable for immunization of animals as a biological product. The production and quality control of rabbit blood sera against the antigen of the strain “SAT-2/XIV/2023” of the foot-and-mouth disease virus were carried out, and the use of the resulting serum as a biological product for the diagnosis of foot-and-mouth disease of the SAT-2/XIV genotype was shown.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента Российской Федерации на изобретение «Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа SAT-2/XIV для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура».Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention for the application for a patent of the Russian Federation for the invention “Strain “SAT-2/XIV/2023” of foot-and-mouth disease virus Aphtae epizooticae genotype SAT-2/XIV for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease” .
1. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 7th ed. Paris, 2022. - Ch. 3.1.8.1. OIE. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. 7th ed. Paris, 2022. - Ch. 3.1.8.
2. Пономарев А.П., Узюмов В.Л. Вирус ящура: структура, биологические и физико-химические свойства. Владимир: Фолиант, 2006. - 250 с.2. Ponomarev A.P., Uzyumov V.L. Foot and mouth disease virus: structure, biological and physicochemical properties. Vladimir: Foliot, 2006. - 250 p.
3. Alexandersen, S. The pathogenesis and diagnosis of foot and mouth disease / S. Alexsandersen, Z. Zhang, A.L. Donaldson // J. Compr. Pathol. - 2003. - V. 129.-P. 268-282.3. Alexandersen, S. The pathogenesis and diagnosis of foot and mouth disease / S. Alexsandersen, Z. Zhang, A.L. Donaldson // J. Compr. Pathol. - 2003. - V. 129.-P. 268-282.
4. Жильцова M.B. Биологические свойства эпизоотических изолятов вируса ящура типов А, О и Азия-1: Автореф… дис. кан. наук. - Владимир: 2008. - 23 с.4. Zhiltsova M.B. Biological properties of epizootic isolates of foot and mouth disease virus types A, O and Asia-1: Abstract of thesis. can. Sci. - Vladimir: 2008. - 23 p.
5. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. / Под ред. А.Н. Бурдова. - М., Агропромиздат, 1990, 320 с.5. Burdov A.N., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and others. Foot and mouth disease. / Ed. A.N. Burdova. - M., Agropromizdat, 1990, 320 p.
6. Анализ эпизоотической ситуации по ящуру в России с 2010 г. по март 2019 г. / В.П. Семакина, Т.П. Акимова, В.А. Мищенко, А.К. Караулов // Ветеринария. - 2019. - №11. - С. 16-20.6. Analysis of the epizootic situation regarding foot and mouth disease in Russia from 2010 to March 2019 / V.P. Semakina, T.P. Akimova, V.A. Mishchenko, A.K. Karaulov // Veterinary medicine. - 2019. - No. 11. - P. 16-20.
7. Методические рекомендации по выделению и идентификации штаммов вируса ящура / А.А. Гусев, В.М. Захаров, Ж.А. Шажко и др.; ФГУ «ВНИИЗЖ». - Владимир. 2002. - 31 с.7. Methodological recommendations for the isolation and identification of foot-and-mouth disease virus strains / A.A. Gusev, V.M. Zakharov, Zh.A. Shazhko et al.; FGU "ARRIAH" - Vladimir. 2002. - 31 p.
8. Методические рекомендации по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации / С.Р. Кременчугская, М.В. Жильцова, Т.К. Майорова; ФГБУ «ВНИИЗЖ». -Владимир, 2012. - 36 с.8. Methodological recommendations for determining antigenic correspondence between epizootic isolates and industrial strains of foot-and-mouth disease virus in a cross-microneutralization reaction / S.R. Kremenchugskaya, M.V. Zhiltsova, T.K. Mayorova; FSBI "ARRIAH". -Vladimir, 2012. - 36 p.
9. Эпизоотологические особенности ящура типа А, вызванного гетерологичными штаммами вируса / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко, В.В. Дрыгин [и др.] // Ветеринария. - 2014. - №11. - С. 20-24.9. Epizootological features of foot and mouth disease type A caused by heterologous strains of the virus / A.V. Mishchenko, V.A. Mishchenko, V.V. Drygin [and others] // Veterinary medicine. - 2014. - No. 11. - pp. 20-24.
10. Патент №2674076 С1 Российская Федерация, МПК А61К 39/135 C12Q 1/68. Способ определения титра инфекционной активности вируса ящура в неинактивированном сырье для вакцины с применением метода обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени: №2017145889: заявл. 25.12.2017: опубл. 04.12.2018 / Д.А. Лозовой [и др.]; заявитель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ").10. Patent No. 2674076 C1 Russian Federation, IPC A61K 39/135 C12Q 1/68. A method for determining the titer of infectious activity of the foot-and-mouth disease virus in non-inactivated raw materials for a vaccine using the method of reverse transcription and polymerase chain reaction in real time: No. 2017145889: application. 12/25/2017: publ. 12/04/2018 / D.A. Lozova [and others]; applicant Federal State Budgetary Institution "Federal Center for Animal Health" (FSBI "ARRIAH").
11. Патент №2712769 С1 Российская Федерация, МПК G01M 33/58, C12Q 1/68. Способ спектрометрического определения концентрации 146S частиц вируса ящура в неинактивированном сырье для вакцины по оценке количества молекул вирусной РНК, выделенной после иммунного захвата вирионов: №2019116272: заявл. 27.05.2019: опубл. 31.01.2020 / Д.А. Лозовой [и др.]; заявитель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ").11. Patent No. 2712769 C1 Russian Federation, IPC G01M 33/58, C12Q 1/68. Method for spectrometric determination of the concentration of 146S particles of foot-and-mouth disease virus in non-inactivated raw materials for a vaccine by assessing the number of viral RNA molecules isolated after immune capture of virions: No. 2019116272: application. 05/27/2019: publ. 01/31/2020 / D.A. Lozova [and others]; applicant Federal State Budgetary Institution "Federal Center for Animal Health" (FSBI "ARRIAH").
--->--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="SAT-2 XIV <ST26SequenceListing dtdVersion="V1_3" fileName="SAT-2 XIV
2023.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2" 2023.xml" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"
productionDate="2023-08-24">productionDate="2023-08-24">
<ApplicationIdentification> <ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-08-16</FilingDate> <FilingDate>2023-08-16</FilingDate>
</ApplicationIdentification> </ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>532</ApplicantFileReference> <ApplicantFileReference>532</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification> <EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2023-08-16</FilingDate> <FilingDate>2023-08-16</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification> </EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">ФГБУ "Федеральный центр охраны <ApplicantName languageCode="ru">FSBI "Federal Security Center"
здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ")</ApplicantName>animal health" (FSBI "ARRIAH")</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin> <ApplicantNameLatin>FGBI "ARRIAH"</ApplicantNameLatin>
<InventorName languageCode="ru">Никифоров Виктор <InventorName languageCode="ru">Nikiforov Viktor
Викторович</InventorName>Viktorovich</InventorName>
<InventorNameLatin>Nikiforov Viktor Viktorivich</InventorNameLatin> <InventorNameLatin>Nikiforov Viktor Viktorivich</InventorNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Штамм «SAT-2/XIV/2023» вируса <InventionTitle languageCode="en">Strain “SAT-2/XIV/2023” virus
ящура Aphtae epizooticae генотипа SAT-2/XIV для изготовления foot and mouth disease Aphtae epizooticae genotype SAT-2/XIV for production
биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики biological products for diagnostics and specific prevention
ящура</InventionTitle>foot and mouth disease</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity> <SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1"> <SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq> <INSDSeq>
<INSDSeq_length>645</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>645</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature> <INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..645</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..645</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>
<INSDQualifier> <INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>genomic DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q1"> <INSDQualifier id="q1">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>
</INSDFeature> </INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>accacttcggccggtgagggcgctgacgtcgtgaccattgaccccacca <INSDSeq_sequence>accacttcggccggtgagggcgctgacgtcgtgaccattgaccccacca
cacaaggcgggtccgtgacaccggccaggcgcatccacaccgatgtggcattccttctggaccgcagcaccacaaggcgggtccgtgacaccggccaggcgcatccacaccgatgtggcattccttctggaccgcagcac
gcacgtccacaccaacaagaccaccttcaacatcgacctcatggacacaaaggagaaggcactggtaggggcacgtccacaccaacaagaccaccttcaacatcgacctcatggacacaaaggagaaggcactggtaggg
gccatactgcgctcagccacgtactacttctgtgacctggagatcgcgtgtgttggtgaacacaagaggggccatactgcgctcagccacgtactacttctgtgacctggagatcgcgtgtgttggtgaacacaagagg
tgttttggcaaccgaatggggcgcccagaacaacaacgctgggtgacaaccccatggtgtactcgcacaatgttttggcaaccgaatggggcgcccagaacaacaacgctgggtgacaaccccatggtgtactcgcacaa
cggagtcactagatttgccattccgtacacggcaccgcaccggttgctttccactgtatacaacggtgagcggagtcactagatttgccattccgtacacggcaccgcaccggttgctttccactgtatacaacggtgag
tgcgactacaagaaagcctctaccgccatccgcggtgacagggccgtccttgcggccaagtacgctaacatgcgactacaagaaagcctctctaccgccatccgcggtgacagggccgtccttgcggccaagtacgctaaca
ccaagcacactctcccaagcactttcaactttggtcatgtgacggctgacgcacccgtcgacgtgtactaccaagcacactctcccaagcactttcaactttggtcatgtgacggctgacgcacccgtcgacgtgtacta
taggatgaaacgtgctgagttgtactgtccacgcgctcttcttcccgcgtacgaccacgtgggacgtgactaggatgaaacgtgctgagttgtactgtccacgcgctcttcttcccgcgtacgaccacgtgggacgtgac
agatttgacgcgccaattggagtggagagacaactc</INSDSeq_sequence>agatttgacgcgccaattggagtggagagacaactc</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq> </INSDSeq>
</SequenceData> </SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2"> <SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq> <INSDSeq>
<INSDSeq_length>215</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>215</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature> <INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..215</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..215</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>
<INSDQualifier> <INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2"> <INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>FMDV</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>
</INSDFeature> </INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>TTSAGEGADVVTIDPTTQGGSVTPARRIHTDVAFLLDRSTHVHTNKTTF <INSDSeq_sequence>TTSAGEGADVVTIDPTTQGGSVTPARRIHTDVAFLLDRSTHVHTNKTTF
NIDLMDTKEKALVGAILRSATYYFCDLEIACVGEHKRVFWQPNGAPRTTTLGDNPMVYSHNGVTRFAIPYNIDLMDTKEKALVGAILRSATYYFCDLEIACVGEHKRVFWQPNGAPRTTTLGDNPMVYSHNGVTRFAIPY
TAPHRLLSTVYNGECDYKKASTAIRGDRAVLAAKYANTKHTLPSTFNFGHVTADAPVDVYYRMKRAELYCTAPHRLLSTVYNGECDYKKASTAIRGDRAVLAAKYANTKHTLPSTFNFGHVTADAPVDVYYRMKRAELYC
PRALLPAYDHVGRDRFDAPIGVERQL</INSDSeq_sequence>PRALLPAYDHVGRDRFDAPIGVERQL</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq> </INSDSeq>
</SequenceData> </SequenceData>
</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>
<---<---
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2817257C1 true RU2817257C1 (en) | 2024-04-12 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2843305C1 (en) * | 2024-10-29 | 2025-07-11 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Enzyme immunoassay system for assessing antigen and immunogenic activity of foot-and-mouth disease vaccine based on foot-and-mouth disease virus strain sat-2/xiv/2023 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2563345C1 (en) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a |
| RU2744791C1 (en) * | 2020-05-26 | 2021-03-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровью животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain asia-1 2356/14/2018 of the fmd virus aphtae epizooticae of asia-1 type for manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of fmd type asia-1 |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2563345C1 (en) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a |
| RU2744791C1 (en) * | 2020-05-26 | 2021-03-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровью животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain asia-1 2356/14/2018 of the fmd virus aphtae epizooticae of asia-1 type for manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of fmd type asia-1 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ALEXANDERSEN, S., et al, The pathogenesis and diagnosis of foot and mouth, J. Compr. Pathol, 2003., v. 129.-p. 268-282. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2843305C1 (en) * | 2024-10-29 | 2025-07-11 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Enzyme immunoassay system for assessing antigen and immunogenic activity of foot-and-mouth disease vaccine based on foot-and-mouth disease virus strain sat-2/xiv/2023 |
| RU2851261C1 (en) * | 2025-03-25 | 2025-11-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Strain "sat-2 / xiii / ethiopia / 2010" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae genotype sat-2 / xiii for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease |
| RU2851262C1 (en) * | 2025-04-01 | 2025-11-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Strain "sat-2 / iii / botswana / 2012" of aphtae epizooticae virus genotype sat-2/iii for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease |
| RU2851515C1 (en) * | 2025-04-02 | 2025-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | Strain "sat-2/iv/ken/2008" of aphtae epizooticae virus of sat-2/iv genotype for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2817257C1 (en) | Sat-2/xiv/2023 strain of foot and mouth disease virus aphtae epizooticae of sat-2/xiv genotype for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2816943C1 (en) | Strain "asia-1/g-v/2006" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae genotype asia-1/g-v for making biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2817256C1 (en) | A/egypt/euro-sa/2022 strain of aphtae epizooticae foot-and-mouth disease virus for manufacture of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease genotype a/euro-sa | |
| RU2811585C1 (en) | Strain “o/arriah/mya-98” of foot and mouth disease virus aphtae epizooticae for manufacturing of biological products for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2826730C1 (en) | Strain "sat-2/north african/2012" of aphtae epizooticae foot-and-mouth disease virus of genotype sat-2/vii/ghb-12 for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2851515C1 (en) | Strain "sat-2/iv/ken/2008" of aphtae epizooticae virus of sat-2/iv genotype for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2851261C1 (en) | Strain "sat-2 / xiii / ethiopia / 2010" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae genotype sat-2 / xiii for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2851262C1 (en) | Strain "sat-2 / iii / botswana / 2012" of aphtae epizooticae virus genotype sat-2/iii for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2831185C1 (en) | A/kiruhara/2023 strain of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2809223C1 (en) | O N 2241/Ethiopia/2011 STRAIN OF FMD VIRUS APHTAE EPIZOOTICAE GENOTYPE O/EA-3 FOR MANUFACTURE OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FMD | |
| RU2850649C1 (en) | Strain "a/uganda/africa/g-i/2023" aphtae epizooticae serotype virus for manufacture of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2848045C1 (en) | Strain "a/armenia/iran-96" of the foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype a for the manufacture of biological preparations for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2852510C1 (en) | Strain "sat-2/egypt/2018" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae of genus aphthovirus of species foot-and-mouth disease virus of genotype sat-2/vii/ghb-12 for production of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2831181C1 (en) | Strain a/egypt/africa g-iv/2022 of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae of a/africa/g-iv genotype for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2848727C1 (en) | Strain "o/ea-4/ethiopia/2013" of the foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype o for the manufacture of biopreparations for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2806606C1 (en) | O n 2620/orenburg/2021 strain of foot and mouth disease virus aphtae epizooticae genotype o/me-sa/ind-2001e for production of biological products for diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease | |
| RU2848728C1 (en) | Sat-1 / ix / ethiopia / 2007" of the foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype sat-1 for the manufacture of biopreparations for the diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2808493C1 (en) | Strain of foot and mouth disease virus aphtae epizooticae for manufacturing of biological products for diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease of sat-2/vii genotype | |
| RU2799601C1 (en) | A/afghanistan/2017 strain of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae of type a for the manufacture of biological products for the diagnostics and specific prevention of foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2817031C1 (en) | Aphtae epizooticae foot-and-mouth disease virus strain "o no 2222/taiwan/1/2012" for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2850651C1 (en) | Strain "o/uganda/ea-2/2023" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype o for manufacture of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2831199C1 (en) | Strain o/kiruhura/ea-2/2023 of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae o serotype for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2851513C1 (en) | Strain "o/ea-3/tunisia/2019" of foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae serotype o for manufacture of biological preparations for diagnosis and specific prevention of foot-and-mouth disease | |
| RU2804634C1 (en) | Sat-1/kenya/2017 strain of aphtae epizooticae foot and mouth disease virus for the manufacture of biological products for the diagnostics and specific prevention of foot and mouth disease virus of sat-1/nwz genotype | |
| RU2806602C1 (en) | Sat-2/kenya/19/2017 strain of aphtae epizooticae foot and mouth disease virus for the manufacture of diagnostic tools and specific prevention of foot and mouth disease virus of sat-2/iv genotype |