[go: up one dir, main page]

RU2815681C1 - Antibodies against tissue factor pathway inhibitor and their use - Google Patents

Antibodies against tissue factor pathway inhibitor and their use Download PDF

Info

Publication number
RU2815681C1
RU2815681C1 RU2019125599A RU2019125599A RU2815681C1 RU 2815681 C1 RU2815681 C1 RU 2815681C1 RU 2019125599 A RU2019125599 A RU 2019125599A RU 2019125599 A RU2019125599 A RU 2019125599A RU 2815681 C1 RU2815681 C1 RU 2815681C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
antibody
antigen
seq
tfpi
binding fragment
Prior art date
Application number
RU2019125599A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Джеймс Р. АПГАР
Сьюзан БЕНАРД
Грегори Дж. КАРВЕН
Санита Р. ХЕТТ
Мэттью ХОЛЬСТИ
Реема ДЖАСУДЖА
Мэйси ДЖИН
Чжон Шон ЦЗЮО
Дебра ПИТТМАН
Марк СТАЛЬ
Original Assignee
Пфайзер Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пфайзер Инк. filed Critical Пфайзер Инк.
Application granted granted Critical
Publication of RU2815681C1 publication Critical patent/RU2815681C1/en

Links

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: disclosed are expression vectors containing a nucleic acid molecule or nucleic acid molecules containing one or more nucleotide sequences, expressing a host cell containing these vectors and a method of producing an antibody or an antigen-binding fragment thereof, involving culturing a host cell.
EFFECT: inventions are used to treat bleeding disorders and to reduce blood coagulation time.
7 cl, 33 tbl, 29 dwg, 18 ex

Description

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯFIELD OF THE INVENTION

Данное изобретение относится к антителам, которые связываются с ингибитором пути тканевого фактора (TFPI).This invention relates to antibodies that bind to tissue factor pathway inhibitor (TFPI).

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND ART

Гемофилии А и В представляют собой связанные с Х хромосомой генетические расстройства, возникающие в результате функционального дефицита белков плазмы - Фактора VIII (FVIII) или Фактора IX (FIX), соответственно. Клиническая тяжесть гемофилии связана с остаточным уровнем активности фактора свертывания крови. Активность фактора меньше 1% ассоциирована с тяжелым фенотипом, умеренная гемофилия ассоциирована с активностью фактора 2%-5%, а легкая - с активностью фактора 5%-40%.Hemophilia A and B are X-linked genetic disorders resulting from a functional deficiency of the plasma proteins Factor VIII (FVIII) or Factor IX (FIX), respectively. The clinical severity of hemophilia is related to the residual level of clotting factor activity. Factor activity of less than 1% is associated with a severe phenotype, moderate hemophilia is associated with factor activity of 2%-5%, and mild hemophilia is associated with factor activity of 5%-40%.

Стандартом лечения для этих расстройств является замена отсутствующего фактора свертывания крови посредством внутривенных инфузий. Заменяющий фактор обычно представляет собой рекомбинантный белок, такой как Xyntha (Фактор VIII) или BeneFIX (FIX), но продукты разной степени чистоты, полученные из плазмы, все еще используются. Лечение заменяющим фактором может быть либо эпизодическим, лечащим кровотечения по необходимости, по мере того, как они появляются, либо профилактическим, предупреждающим кровотечения посредством поддерживания уровней фактора в защитном интервале. Существуют важные доказательства того, что профилактическое лечение предупреждает кровотечения и ассоциированное повреждение суставов, которые являются главными клиническими проявлениями у пациентов с гемофилией. Эффективное профилактическое лечение требует внутривенной инъекции фактора 3-4 раза в неделю, что приводит к затруднениям в соблюдении схемы и режима лечения и пониженному качеству жизни. Стоимость лечения также является высокой
из-за сложности изготовления факторов свертывания крови. Кроме того, у значительного числа пациентов, вплоть до 32% пациентов с тяжелой гемофилией А, развиваются нейтрализующие антитела к введенным факторам, которые рассматриваются пациентами, которые имеют мутации в данных генах, как чужеродные белки. Для этих пациентов требуются альтернативные способы лечения, такие как обходной фактор - Фактор VIIa (NovoSeven).The standard of care for these disorders is to replace the missing clotting factor through intravenous infusions. The replacement factor is usually a recombinant protein such as Xyntha (Factor VIII) or BeneFIX (FIX), but plasma-derived products of varying purity are still used. Factor replacement treatment can be either episodic, treating bleeding as needed as it occurs, or prophylactic, preventing bleeding by maintaining factor levels within the protective interval. There is important evidence that prophylactic treatment prevents bleeding and associated joint damage, which are the main clinical manifestations in patients with hemophilia. Effective preventative treatment requires intravenous injection of factor 3-4 times a week, which leads to difficulties in adherence to treatment regimen and reduced quality of life. The cost of treatment is also high
due to the difficulty of producing blood clotting factors. In addition, a significant number of patients, up to 32% of patients with severe hemophilia A, develop neutralizing antibodies to the injected factors, which are considered foreign proteins by patients who have mutations in these genes. These patients require alternative treatments such as bypass factor Factor VIIa (NovoSeven).

Альтернативным подходом к терапии является обход потребности в заменяющих факторах посредством усиления интактного внешнего пути активации свертывания крови. Пациенты с гемофилией имеют некоторую способность к остановке кровотечений посредством их интактного внешнего пути активации свертывания крови; однако, это недостаточно для прекращения больших кровотечений или для предупреждения спонтанных кровотечений. Внешний путь активации свертываемости крови является недостаточным для обеспечения защиты, так как он быстро блокируется ингибитором пути тканевого фактора (TFPI).An alternative therapeutic approach is to bypass the need for replacement factors by enhancing the intact extrinsic coagulation pathway. Patients with hemophilia have some ability to control bleeding through their intact extrinsic coagulation pathway; however, this is not sufficient to stop major bleeding or prevent spontaneous bleeding. The extrinsic coagulation pathway is insufficient to provide protection as it is rapidly blocked by tissue factor pathway inhibitor (TFPI).

Несмотря на то, что в WO 2010/017196 (Bayer), WO 2011/109452 (Bayer), WO 2014/144577 (Bayer), WO 2010/072687 (Novo Nordisk), WO 2012/001087 (Novo Nordisk), WO 2014/140240 (Novo Nordisk) и WO 2015/007880 (Novo Nordisk) раскрыты антитела, которые связываются с человеческим TFPI, в них не предожены антитела по изобретению, которые имеют характеристики, которые делают их новыми потенциальными терапевтическими средствами против гемофилии.Despite the fact that in WO 2010/017196 (Bayer), WO 2011/109452 (Bayer), WO 2014/144577 (Bayer), WO 2010/072687 (Novo Nordisk), WO 2012/001087 (Novo Nordisk), WO 2014 /140240 (Novo Nordisk) and WO 2015/007880 (Novo Nordisk) disclose antibodies that bind to human TFPI, they do not disclose antibodies of the invention that have characteristics that make them new potential therapeutics against hemophilia.

Продукт, который обеспечивал бы профилактическую защиту при уменьшении частоты дозирования факторов свертывания крови, уменьшая количество используемых факторов, обеспечивая альтернативные пути доставки (например, подкожный) и имея пониженный риск образования нейтрализующих антител, удовлетворял бы значительную нереализованную потребность для пациентов с гемофилией.A product that provided prophylactic protection while reducing the frequency of clotting factor dosing, reducing the amount of factors used, providing alternative routes of delivery (eg, subcutaneous), and having a reduced risk of neutralizing antibody formation would fill a significant unmet need for patients with hemophilia.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

В настоящем описании раскрыты и проиллюстрированы примерами антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты), которые связываются с ингибитором пути тканевого фактора (TFPI).Disclosed and exemplified herein are antibodies (and antigen binding fragments thereof) that bind to tissue factor pathway inhibitor (TFPI).

Специалисты в этой области узнают или смогут установить с использованием не более чем рутинного экспериментирования многие эквиваленты описанных в настоящем описании конкретных воплощений изобретения. Подразумевается то, что такие эквиваленты охватываются следующими воплощениями (В).Those skilled in the art will recognize or be able to determine, using no more than routine experimentation, many equivalents to the specific embodiments of the invention described herein. Such equivalents are intended to be covered by the following embodiments (B).

В1. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с эпитопом в домене Кунитца 2 (K2) ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), где указанный эпитоп содержит остатки Ile105, Arg107 и Leu131 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.IN 1. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to an epitope in the tissue factor pathway inhibitor (TFPI) Kunitz 2 (K2) domain, wherein said epitope comprises residues Ile105, Arg107, and Leu131 as identified by SEQ ID NO: 2.

В2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 1, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент не связывается с доменом Кунитца 1 (K1) TFPI.AT 2. A B. 1 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof does not bind to the Kunitz 1 (K1) domain of TFPI.

В3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 1 или 2, где указанный эпитоп дополнительно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 и Gly132 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 3. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 1 or 2, wherein said epitope further comprises one or more residues selected from the group consisting of Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 and Gly132 as numbered in SEQ ID NO: 2.

В4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-3, где указанный эпитоп дополнительно содержит остатки Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 и Gly132 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 4. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-3, where the specified epitope additionally contains the residues Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 and Gly132 according to SEQ ID NO: 2.

В5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4, где указанный эпитоп дополнительно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 и Glu138 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 5. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4, wherein said epitope further comprises one or more residues selected from the group consisting of Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 and Glu138 as numbered by SEQ ID NO: 2.

В6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-5, где указанный эпитоп дополнительно содержит Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 и Glu138 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 6. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-5, wherein said epitope further comprises Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134 and Glu138 as assigned to SEQ ID NO: 2.

В7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-6, где указанный эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L 140 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 7. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-6, wherein said epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 and L 140 according to SEQ ID NO: 2.

В8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-7, где указанный эпитоп не содержит E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L140 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 8. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-7, where the specified epitope does not contain E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 and L140 according to SEQ ID NO: 2.

В9. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-6, где указанный эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 и G128 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 9. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-6, wherein said epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 and G128 as numbered by SEQ ID NO: 2 .

В10. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-6 и 9, где указанный эпитоп не содержит D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 и G128 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.AT 10 O'CLOCK. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-6 and 9, where the specified epitope does not contain D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 and G128 according to SEQ ID NO: 2.

В11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-10, где указанный эпитоп содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Asn133, Met134 и Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2), где указанный остаток эпитопа имеет ненулевое изменение площади скрытой поверхности (BSA) из-за взаимодействия с указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом.AT 11. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-10, wherein said epitope contains one or more residues selected from the group consisting of Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Asn133, Met134 and Glu138 (as assigned to SEQ ID NO: 2), wherein said epitope residue has a non-zero change in buried surface area (BSA) due to interaction with said antibody or antigen binding fragment thereof.

В12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 11, где указанный эпитоп содержит Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Asn133, Met134 и Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2).AT 12. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 11, where the specified epitope contains Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Asn133, Met134 and Glu138 (according to SEQ ID NO: 2).

В13. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-12, где указанный эпитоп содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Arg107, Arg 112, Tyr127 и Leu131 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2), где указанный остаток эпитопа участвует в водородной связи с остатком из указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.B13. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-12, wherein said epitope contains one or more residues selected from the group consisting of Asp102, Arg107, Arg 112, Tyr127 and Leu131 (as assigned to SEQ ID NO: 2), wherein said epitope residue engages in hydrogen bonding with the remainder of said antibody or antigen-binding fragment thereof.

В14. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 13, где указанный эпитоп содержит Asp102, Arg107, Arg 112, Tyr127 и Leu131 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2).B14. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 13, wherein said epitope contains Asp102, Arg107, Arg 112, Tyr127 and Leu131 (as assigned to SEQ ID NO: 2).

В15. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-14, где указанный эпитоп содержит один или более чем один контактный остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134 и Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2).B15. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-14, wherein said epitope contains one or more contact residues selected from the group consisting of Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134 and Glu138 ( according to SEQ ID NO: 2).

В16. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 15, где указанный эпитоп содержит Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134 и Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2).B16. B. 15 antibody or antigen binding fragment thereof, wherein said epitope contains Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134 and Glu138 (as designated by SEQ ID NO: 2) .

В17. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-16, содержащее следующие остатки паратопа тяжелой (о) цепи и легкой (L) цепи, которые имеют ненулевой изменение в BSA из-за взаимодействия с TFPI (нумерация согласно Kabat): H33 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser и L95B Gly.B17. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-16 containing the following heavy (o) chain and light (L) chain paratope residues that have a non-zero change in BSA due to interaction with TFPI (numbering according to Kabat): H33 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser and L95B Gly.

В18. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-17, содержащее следующие контактные остатки (нумерация согласно Kabat): (a) H47, представляющий собой Trp или Tyr; (б) H58, представляющий собой Tyr; и (в) L91, представляющий собой Tyr или Arg; и возможно содержащее: (г) L96, представляющий собой Gly или Asn.B18. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-17 containing the following contact residues (numbering according to Kabat): (a) H47, representing Trp or Tyr; (b) H58 representing Tyr; and (c) L91, which is Tyr or Arg; and optionally containing: (d) L96 being Gly or Asn.

В19. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-18, содержащее следующие контактные остатки (нумерация согласно Kabat): (a) H33, представляющий собой Ala, Asn, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp или Val; (б) H47, представляющий собой Trp или Tyr; (в) H50, представляющий собой Ala, Arg, Gly, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr или Val; (г) H51, представляющий собой Ile, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (д) H52, представляющий собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr или Val; (е) H56, представляющий собой Ser, Arg, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (ж) H58, представляющий собой Tyr; (з) H95, представляющий собой Leu, Gln, Ile, Phe или Tyr; (и) H96, представляющий собой Gly, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr или Val; (к) H97, представляющий собой Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (л) H98, представляющий собой Thr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (м) H99, представляющий собой Ser, Ala, Gly, Phe или Pro; (н) H100, представляющий собой Leu, Arg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr или Val; (о) H100A, представляющий собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr или Trp; (п) L29, представляющий собой Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr or Trp, Tyr, Val; (р) L31, представляющий собой Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (с) L91, представляющий собой Tyr или Arg; (т) L95A, представляющий собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (у) L95B, представляющий собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; и (ф) L95C, представляющий собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; и возможно содержащее следующие остатки: (х) L93, представляющий собой Tyr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; и (ц) L96, представляющий собой Gly или Asn.B19. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-18, containing the following contact residues (numbering according to Kabat): (a) H33, representing Ala, Asn, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp or Val; (b) H47, representing Trp or Tyr; (c) H50 being Ala, Arg, Gly, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr or Val; (d) H51, representing Ile, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; (e) H52, which is Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr or Val; (f) H56 being Ser, Arg, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; (g) H58, which is Tyr; (h) H95, representing Leu, Gln, Ile, Phe or Tyr; (i) H96 being Gly, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr or Val; (j) H97 being Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; (l) H98 being Thr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; (l) H99, being Ser, Ala, Gly, Phe or Pro; (m) H100, representing Leu, Arg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr or Val; (o) H100A being Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr or Trp; (n) L29, representing Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr or Trp, Tyr, Val; (p) L31 being Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; (c) L91 representing Tyr or Arg; (m) L95A being Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; (y) L95B being Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; and (f) L95C being Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; and possibly containing the following residues: (x) L93, being Tyr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val ; and (c) L96, which is Gly or Asn.

В20. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-18, содержащее следующие контактные остатки (нумерация согласно Kabat): (a) H33, представляющий собой Ala или Val; (б) H47, представляющий собой Trp; (в) H50, представляющий собой Ala; (г) H51, представляющий собой Ile; (д) H52, представляющий собой Ser, Arg, Lys, Phe или Tyr; (е) H56, представляющий собой Ser, Arg или Lys; (ж) H58, представляющий собой Tyr; (з) H95, представляющий собой Leu; (и) H96, представляющий собой Gly, Ala, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser или Val; (к) H97, представляющий собой Ala; (л) H98, представляющий собой Thr, His, Ile, Leu, Met, Phe или Tyr; (м) H99, представляющий собой Ser; (н) H100, представляющий собой Leu, Phe, Trp или Tyr; (о) H100A, представляющий собой Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro или Trp; (п) L29, представляющий собой Ala; (р) L31, представляющий собой Tyr; (с) L91, представляющий собой Tyr; (т) L95A, представляющий собой Ser, Phe, Trp или Tyr; (у) L95B, представляющий собой Gly; и (ф) L95C, представляющий собой Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr или Val; и возможно содержащее следующие остатки: (х) L93, представляющий собой Ser; и (ц) L96, представляющий собой Gly.IN 20. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-18, containing the following contact residues (numbering according to Kabat): (a) H33, representing Ala or Val; (b) H47, representing Trp; (c) H50 representing Ala; (d) H51, which is Ile; (e) H52 being Ser, Arg, Lys, Phe or Tyr; (e) H56 being Ser, Arg or Lys; (g) H58, which is Tyr; (h) H95, representing Leu; (i) H96, which is Gly, Ala, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser or Val; (k) H97 representing Ala; (k) H98, representing Thr, His, Ile, Leu, Met, Phe or Tyr; (l) H99 representing Ser; (m) H100 representing Leu, Phe, Trp or Tyr; (o) H100A being Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro or Trp; (n) L29 representing Ala; (p) L31 representing Tyr; (c) L91 representing Tyr; (t) L95A, representing Ser, Phe, Trp or Tyr; (y) L95B representing Gly; and (f) L95C being Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr or Val; and possibly containing the following residues: (x) L93, representing Ser; and (c) L96, which is Gly.

В21. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-18, содержащее следующие контактные остатки (нумерация согласно Kabat): (a) H33, представляющий собой Ala, Val, His или Phe; (б) H47, представляющий собой Trp или Tyr; (в) H50, представляющий собой Ala, Thr, Ser или Phe; (г) H51, представляющий собой Ile, Arg, Lys или Pro; (д) H52, представляющий собой Ser, Phe, Arg или Tyr; (е) H56, представляющий собой Ser, Lys, Tyr или Phe; (ж) H58, представляющий собой Tyr; (з) H95, представляющий собой Leu, Ile, Gln или Phe; (и) H96, представляющий собой Gly, Arg, Asn или Lys; (к) H97, представляющий собой Ala, Leu, Tyr или Ile; (л) H98, представляющий собой Thr, Tyr, Phe или His; (м) H99, представляющий собой Ser, Pro, Ala или Phe; (н) H100, представляющий собой Leu, Tyr, Trp или Phe; (о) H100A, представляющий собой Ser, Arg, Leu или Trp; (п) L29, представляющий собой Ala, Glu, Asp или Gln; (р) L31, представляющий собой Tyr, Glu, Asp или Trp; (с) L91, представляющий собой Tyr или Arg; (т) L95A, представляющий собой Ser, Phe, Tyr или His; (у) L95B, представляющий собой Gly, Glu, Asp или Pro; и (ф) L95C, представляющий собой Ser, Trp, Tyr или Phe; и возможно содержащее следующие остатки: (х) L93, представляющий собой Ser, Glu, Asp или His; и (ц) L96, представляющий собой Gly или Asn.AT 21. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-18, containing the following contact residues (numbering according to Kabat): (a) H33, representing Ala, Val, His or Phe; (b) H47, representing Trp or Tyr; (c) H50 being Ala, Thr, Ser or Phe; (d) H51, which is Ile, Arg, Lys or Pro; (e) H52 being Ser, Phe, Arg or Tyr; (e) H56 being Ser, Lys, Tyr or Phe; (g) H58, which is Tyr; (h) H95, representing Leu, Ile, Gln or Phe; (i) H96, which is Gly, Arg, Asn or Lys; (j) H97, being Ala, Leu, Tyr or Ile; (k) H98 representing Thr, Tyr, Phe or His; (l) H99, being Ser, Pro, Ala or Phe; (m) H100 representing Leu, Tyr, Trp or Phe; (o) H100A representing Ser, Arg, Leu or Trp; (n) L29, which is Ala, Glu, Asp or Gln; (p) L31 being Tyr, Glu, Asp or Trp; (c) L91 representing Tyr or Arg; (t) L95A, representing Ser, Phe, Tyr or His; (y) L95B, which is Gly, Glu, Asp or Pro; and (f) L95C, representing Ser, Trp, Tyr or Phe; and possibly containing the following residues: (x) L93, which is Ser, Glu, Asp or His; and (c) L96, which is Gly or Asn.

В22. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-18, содержащее следующие контактные остатки (нумерация согласно Kabat): H33 Ala, H47 Trp, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly и L95C Ser; и возможно содержащее следующие остатки: L93 Ser и L96 Gly.B22. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-18, containing the following contact residues (numbering according to Kabat): H33 Ala, H47 Trp, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly and L95C Ser; and possibly containing the following residues: L93 Ser and L96 Gly.

В23. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-22, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH), которая содержит:B23. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-22, containing a heavy chain variable region (VH), which contains:

(а) определяющую комплементарность область один VH (CDR-H1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38.(a) complementarity determining region one VH (CDR-H1) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38.

(б) определяющую комплементарность область два VH (CDR-H2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39; и(b) complementarity determining region two VH (CDR-H2) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39; And

(в) определяющую комплементарность область три VH (CDR-H3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40.(c) complementarity determining region three VH (CDR-H3) containing the amino acid sequence SEQ ID NO: 40.

В24. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-22, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 41.B24. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-22, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 41.

В25. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-24, содержащее последовательность человеческой каркасной области VH3.B25. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-24 containing the sequence of the human VH3 framework region.

В26. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-24, содержащее последовательность человеческой каркасной области VH1.B26. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-24 containing the sequence of the human VH1 framework region.

В27. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-24, содержащее последовательность человеческой каркасной области VH5.B27. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-24 containing the sequence of the human VH5 framework region.

В28. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-24, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23 или IGHV1-69.B28. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-24 containing the human germline VH framework sequence of IGHV3-23 or IGHV1-69.

В29. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-24, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-7.B29. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-24 containing the human germline VH framework sequence of IGHV3-7.

В30. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-24, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B30. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-24 containing the human germline VH framework consensus sequence.

В31. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-30, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41, 63 и 65.B31. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-30, containing a VH that contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 41, 63 and 65.

В32. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-31, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41, 63 и 65.B32. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-31 containing a VH that contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 41, 63 and 65.

В33. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-32, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41.B33. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-32 containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 41.

В34. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-32, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63.B34. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-32 containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63.

В35. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-32, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 65.B35. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-32 containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 65.

В36. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-35, содержащее вариабельную область легкой цепи (VL), которая содержит:B36. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-35, containing a light chain variable region (VL), which contains:

а) определяющую комплементарность область один VL (CDR-L1), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33.a) complementarity determining region one VL (CDR-L1) containing the amino acid sequence SEQ ID NO: 33.

(б) определяющую комплементарность область два VL (CDR-L2), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34; и(b) complementarity determining region two VL (CDR-L2) containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34; And

(в) определяющую комплементарность область три VL (CDR-L3), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35.(c) complementarity determining region three VL (CDR-L3) containing the amino acid sequence SEQ ID NO: 35.

В37. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-35, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 36.B37. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-35, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 36.

В38. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-37, содержащее последовательность человеческой каркасной области Vκ.B38. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-37 containing the sequence of the human Vκ framework region.

В39. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-37, содержащее последовательность человеческой каркасной области Vλ.B39. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-37 containing the sequence of the human Vλ framework region.

В40. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-37, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20.B40. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-37 containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20.

В41. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-37, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV1-39.B41. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-37 containing the VL framework sequence of the human germline IGKV1-39.

В42. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-37, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B42. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-37 containing the human germline VL framework consensus sequence.

В43. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-42, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 36.B43. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-42, containing VL, which contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 36.

В44. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-43, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36.B44. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-43 containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO:36.

В45. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-44, содержащее константную область тяжелой цепи (СН), которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 20.B45. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-44, containing a heavy chain constant region (CH) that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 20.

В46. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-45, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.B46. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-45 containing CH which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.

В47. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-46, содержащее константную область легкой цепи (СL), которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 26.B47. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-46, containing a light chain constant region (CL) that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 26.

В48. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-47, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.B48. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-47 containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26.

В49. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-48, содержащее домен Fc.B49. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-48 containing the Fc domain.

В50. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 49, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA.B50. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 49, wherein said Fc domain is an IgA Fc domain.

B51. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 50, в котором указанный IgA представляет собой IgA1 или IgA2.B51. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 50, wherein said IgA is IgA 1 or IgA 2 .

В52. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 49, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgD.B52. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 49, wherein said Fc domain is an IgD Fc domain.

В53. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 49, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgЕ.B53. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 49, wherein said Fc domain is an IgE Fc domain.

В54. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 49, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgМ.B54. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 49, wherein said Fc domain is an IgM Fc domain.

В55. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 49, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG.B55. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 49, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain.

В56. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 55, где указанный IgG представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.B56. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 55, where the specified IgG is IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 .

В57. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-56, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42.B57. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-56, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 42.

В58. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-56, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64.B58. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-56, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 64.

В59. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-56, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66.B59. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-56, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 66.

В60. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-59, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.B60. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-59, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37.

В61. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-60, содержащее последовательность VH, кодируемую вставкой, присутствующей в плазмиде, депонированной под № АТСС (Американская коллекция типовых культур) РТА-122329.B61. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-60, containing the VH sequence encoded by the insert present in the plasmid deposited under ATCC (American Type Culture Collection) PTA-122329.

В62. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-61, содержащее последовательность VL, кодируемую вставкой, присутствующей в плазмиде, депонированной под № АТСС РТА-122328.B62. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-61, containing the VL sequence encoded by the insert present in the plasmid deposited under ATCC PTA-122328.

В63. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4, где указанный эпитоп дополнительно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 и Tyr109, согласно нумерации SEQ ID NO: 2.B63. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4, wherein said epitope further comprises one or more residues selected from the group consisting of: Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 and Tyr109, as numbered by SEQ ID NO: 2.

В64. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63, где указанный эпитоп дополнительно содержит Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 и Tyr109 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.B64. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63, where the specified epitope further contains Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 and Tyr109 according to SEQ ID NO: 2.

В65. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-64, где указанный эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L140 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B65. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-64, where the specified epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 and L140 (numbered according to SEQ ID NO: 2).

В66. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-65, где указанный эпитоп не содержит: P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L140 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B66. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-65, where the specified epitope does not contain: P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 and L140 (numbering according to SEQ ID NO: 2).

В67. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-64, где указанный эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127, G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B67. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-64, where the specified epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127, G128 (numbering according to SEQ ID NO : 2).

В68. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4, 63-64 и 67, где указанный эпитоп не содержит: D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127, G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B68. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4, 63-64 and 67, where the specified epitope does not contain: D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127, G128 (numbering according to SEQ ID NO: 2).

В69. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из вв. 1-4 и 63-68, содержащее следующие остатки (нумерация согласно Kabat): H33 Ala, H35 Gln, H52 Ser, H53 Asn, H55 Arg, H56 Ser, H95 Phe, H96 Leu, H97 His, H99 Ser, H101 Asp, L31 Met, L32 Tyr, L34 His, L36 Tyr, L50 Arg, L91 Trp и L96 Tyr.B69. Antibody or antigen-binding fragment according to any of the centuries. 1-4 and 63-68, containing the following residues (numbering according to Kabat): H33 Ala, H35 Gln, H52 Ser, H53 Asn, H55 Arg, H56 Ser, H95 Phe, H96 Leu, H97 His, H99 Ser, H101 Asp, L31 Met, L32 Tyr, L34 His, L36 Tyr, L50 Arg, L91 Trp and L96 Tyr.

В70. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-69, содержащее VH, которая содержит:B70. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-69, containing VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48.(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 48.

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 49; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 49; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 50.

В71. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-69, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 51.B71. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-69, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 51.

В72. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-71, содержащее человеческую последовательность каркасной области VH3, VH1 или VH5.B72. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-71 containing the human VH3, VH1 or VH5 framework sequence.

В73. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-72, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23 или IGHV1-69.B73. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-72, containing the human germline VH framework sequence of IGHV3-23 or IGHV1-69.

В74. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-72, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-7.B74. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-72, containing the VH framework sequence of the human germline IGHV3-7.

В75. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-71, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B75. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-71, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В76. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-75, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 67, 69, 51 и 79.B76. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-75, containing a VH that contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 67, 69, 51 and 79.

В77. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-76, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 67, 69, 51 и 79.B77. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-76, containing a VH that contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 67, 69, 51 and 79.

В78. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-77, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67.B78. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-77, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 67.

В79. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-77, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 69.B79. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-77, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 69.

В80. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-77, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51.B80. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-77, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 51.

В81. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-77, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH), которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 79.B81. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-77, containing a heavy chain variable region (VH) that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 79.

В82. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-81, содержащее VL, которая содержит:B82. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-81, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43.(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 43.

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 44; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 45.

В83. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-81, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 46.B83. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-81, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 46.

В84. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-83, содержащее последовательность человеческой каркасной области Vκ или Vλ.B84. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-83, containing the sequence of the human framework region V κ or V λ .

В85. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-84, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B85. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-84 containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В86. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-84, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B86. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-84, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В87. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-86, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, 71, 73, 75 и 77.B87. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-86, containing a VL that contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 46, 71, 73, 75 and 77.

В88. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-87, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, 71, 73, 75 и 77.B88. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-87, containing a VL that contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 46, 71, 73, 75 and 77.

В89. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-88, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46.B89. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-88, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 46.

В90. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-88, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 71.B90. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-88, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 71.

В91. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-88, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 73.B91. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-88, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 73.

В92. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-88, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75.B92. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-88, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 75.

В93. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-88, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77.B93. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-88, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 77.

В94. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-93, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 20.B94. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-93, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 20.

В95. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-94, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.B95. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-94, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.

В96. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-95, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 26.B96. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-95, containing CL, which contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 26.

В97. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-96, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.B97. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-96, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26.

В98. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-97, содержащее домен Fc.B98. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-97, containing the Fc domain.

В99. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 98, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA.B99. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 98, wherein said Fc domain is an IgA Fc domain.

В100. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 99, где указанный IgA представляет собой IgA1 или IgA2.B100. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 99, where said IgA is IgA 1 or IgA 2 .

В101. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 98, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgD, IgE или IgM.B101. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 98, wherein said Fc domain is an IgD, IgE or IgM Fc domain.

В102. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 98, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG.B102. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 98, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain.

В103. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по ВВ. 102, где указанный IgG представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.B103. Antibody or its antigen-binding fragment for EV. 102, wherein said IgG is IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 .

В104. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-103, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52.B104. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-103, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 52.

В105. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-103, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 68.B105. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-103, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 68.

В106. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-103, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 70.B106. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-103, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 70.

В107. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-103, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 80.B107. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-103, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 80.

В108. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-107, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47.B108. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-107, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 47.

В109. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-107, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 72.B109. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-107, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 72.

В110. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-107, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 74.B110. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-107, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 74.

В111. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-107, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76.B111. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-107, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 76.

В112. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-4 и 63-107, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 78.B112. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-4 and 63-107, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 78.

В113. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с эпитопом в домене Кунитца 2 (K2) ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), где указанный эпитоп содержит остатки Glu101, Pro103, Tyr109, Thr111, Ser119, Gln121, Glu123, Arg124, Lys126 и Leu140 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.B113. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to an epitope in the tissue factor pathway inhibitor (TFPI) Kunitz 2 (K2) domain, where said epitope contains residues Glu101, Pro103, Tyr109, Thr111, Ser119, Gln121, Glu123, Arg124, Lys126, and Leu140 according to SEQ ID NO: 2.

В114. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 113, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент не связывается с доменом Кунитца 1 (K1) TFPI.B114. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 113, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof does not bind to the Kunitz 1 (K1) domain of TFPI.

В115. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 113 или 114, где указанный эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118 и C122 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B115. An antibody or antigen binding fragment thereof of B. 113 or 114, wherein said epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118 and C122 (numbered according to SEQ ID NO: 2).

В116. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-115, где указанный эпитоп не содержит: E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118 и C122 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B116. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-115, where the specified epitope does not contain: E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118 and C122 (numbering according to SEQ ID NO: 2).

В117. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 113 или 114, где указанный эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127 и G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B117. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 113 or 114, wherein said epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127 and G128 (numbering according to SEQ ID NO: 2).

В118. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-114 и 117, где указанный эпитоп не содержит: D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127 и G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2).B118. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-114 and 117, where the specified epitope does not contain: D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127 and G128 (numbering according to SEQ ID NO: 2).

В119. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по ВВ. 113-118, содержащее следующие остатки (согласно нумерации Kabat): H50 Asp, H57 Thr, H58 Leu, H59 Tyr, H61 Gln, H98 Asp, H99 Tyr, H100 Asp, L30 His, L50 Trp, L92 Tyr, L93 Thr, L94 Thr и L96 Tyr.B119. Antibody or its antigen-binding fragment for EV. 113-118, containing the following residues (according to Kabat numbering): H50 Asp, H57 Thr, H58 Leu, H59 Tyr, H61 Gln, H98 Asp, H99 Tyr, H100 Asp, L30 His, L50 Trp, L92 Tyr, L93 Thr, L94 Thr and L96 Tyr.

В120. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-119, содержащее VH, которая содержит:B120. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-119 containing VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 88; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 88; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 89.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 89.

В121. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-119, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 90.B121. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-119, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 90.

В122. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-121, содержащее последовательность человеческой каркасной области VH3, VH1 или VH5.B122. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-121 containing the sequence of the human framework region VH3, VH1 or VH5.

В123. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-122, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23, IGHV1-69 или IGHV3-7.B123. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-122 containing the human germline VH framework sequence IGHV3-23, IGHV1-69 or IGHV3-7.

В124. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-121, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B124. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-121, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В125. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-124, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 90, 95, 97, 99, 101, 103, 105 и 107.B125. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-124, containing a VH that contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 90, 95, 97, 99, 101, 103, 105 and 107.

В126. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-125, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 90, 95, 97, 99, 101, 103, 105 и 107.B126. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-125, comprising a VH that contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 90, 95, 97, 99, 101, 103, 105 and 107.

В127. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 90.B127. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 90.

В128. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 95.B128. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 95.

В129. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97.B129. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 97.

В130. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 99.B130. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 99.

В131. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101.B131. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 101.

В132. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103.B132. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 103.

В133. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105.B133. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 105.

В134. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-126, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107.B134. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-126, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 107.

В135. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-134, содержащее VL, которая содержит:B135. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-134, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 81;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 81;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 82; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 82; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 83.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 83.

В136. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-134, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 84.B136. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-134, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 84.

В137. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-136, содержащее последовательность человеческой каркасной области Vκ или Vλ.B137. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-136, containing the sequence of the human Vκ or Vλ framework region.

В138. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-137, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B138. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-137 containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В139. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-136, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B139. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-136, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В140. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-139, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 84, 109 и 111.B140. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-139, comprising a VL that contains an amino acid sequence at least 90% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 84, 109 and 111.

В141. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-140, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 84, 109 и 111.B141. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-140, containing VL, which contains an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 84, 109 and 111.

В142. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-141, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 84.B142. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-141, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 84.

В143. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-141, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109.B143. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-141, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 109.

В144. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-141, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111.B144. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-141, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 111.

В145. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-144, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 20.B145. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-144, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 20.

В146. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-145, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.B146. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-145, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.

В147. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-144, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 91.B147. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-144, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 91.

В148. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-144 и 147, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91.B148. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-144 and 147, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91.

В149. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-148, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 14.B149. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-148, containing CL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 14.

В150. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-149, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.B150. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-149, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.

В151. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-148, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 85.B151. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-148, containing CL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 85.

В152. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-148 и 151, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.B152. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-148 and 151, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.

В153. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-152, содержащее домен Fc.B153. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-152, containing the Fc domain.

В154. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 153, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA (например, IgA1 или IgA2).B154. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 153, wherein said Fc domain is an IgA Fc domain (eg, IgA 1 or IgA 2 ).

В155. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 153, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgD, IgE или IgM.B155. A B. 153 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein said Fc domain is an IgD, IgE, or IgM Fc domain.

В156. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 153, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG.B156. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 153, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain.

В157. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 156, где указанный IgG представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.B157. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 156, where the specified IgG is IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 .

В158. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 92.B158. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 92.

В159. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 94.B159. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 94.

В160. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96.B160. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 96.

В161. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98.B161. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 98.

В162. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100.B162. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 100.

В163. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102.B163. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 102.

В164. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104.B164. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 104.

В165. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106.B165. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 106.

В166. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-157, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108.B166. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-157, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 108.

В167. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-166, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86.B167. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-166, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 86.

В168. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-166, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 93.B168. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-166, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 93.

В169. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-166, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110.B169. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-166, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 110.

В170. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 113-166, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112.B170. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 113-166, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 112.

В171. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом Кунитца 2 (K2) TFPI, содержащее VH, которая содержит:B171. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the Kunitz 2 (K2) domain of TFPI containing VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18.

В172. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 19.B172. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 19.

В173. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VL, которая содержит:B173. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

В174. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 13.B174. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 13.

В175. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее:B175. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing:

(1) VH, которая содержит:(1) VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 17; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18;(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 18;

и (2) VL, которая содержит:and (2) VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.

В176. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 19, и последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 13.B176. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 19, and the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO : 13.

В177. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-176, содержащее человеческие последовательности каркасной области VH3, VH1 или VH5.B177. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-176 containing human VH3, VH1 or VH5 framework sequences.

В178. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-177, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23, IGHV1-69 или IGHV3-7.B178. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-177 containing the human germline VH framework sequence IGHV3-23, IGHV1-69 or IGHV3-7.

В179. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-176, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B179. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-176, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В180. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-179, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 19.B180. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-179, containing a VH that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 19.

В181. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-180, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.B181. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-180, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19.

В182. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-181, содержащее последовательность человеческой каркасной области Vκ или Vλ.B182. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-181, containing the sequence of the human Vκ or Vλ framework region.

В183. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-182, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B183. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-182 containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В184. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-181, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B184. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-181, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В185. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-184, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 13.B185. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-184, containing VL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 13.

В186. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-185, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.B186. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-185, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.

В187. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-186, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 20.B187. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-186, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 20.

В188. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-187, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.B188. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-187, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.

В189. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-188, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 14.B189. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-188, containing CL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 14.

В190. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-189, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14.B190. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-189, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.

В191. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-190, содержащее домен Fc.B191. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-190, containing the Fc domain.

В192. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 191, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA (например, IgA1 или IgA2), IgD, IgE или IgM.B192. A B. 191 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein said Fc domain is an IgA Fc domain (eg, IgA 1 or IgA 2 ), IgD, IgE, or IgM.

В193. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 191, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG.B193. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 191, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain.

В194. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 193, где указанный IgG представляет собой IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.B194. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 193, where the specified IgG is IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 .

В195. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-194, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.B195. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-194, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21.

В196. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 171-195, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15.B196. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 171-195, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.

В197. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VH, которая содержит:B197. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of a TFPI containing a VH that contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30.

В198. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 31.B198. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 31.

В199. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VL, которая содержит:B199. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.

В200. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 25.B200. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 25.

В201. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее:B201. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing:

(1) VH, которая содержит:(1) VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30;(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 30;

и (2) VL, которая содержит:and (2) VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22.(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22.

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 23; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.

В202. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 31, и последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 25.B202. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 31, and the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO : 25.

В203. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-202, содержащее последовательность человеческой каркасной области VH3, VH1 или VH5.B203. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-202, containing the sequence of the human framework region VH3, VH1 or VH5.

В204. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-203, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23, IGHV1-69 или IGHV3-7.B204. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-203 containing the human germline VH framework sequence IGHV3-23, IGHV1-69 or IGHV3-7.

В205. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-202, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B205. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-202, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В206. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-205, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 31.B206. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-205, containing a VH that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 31.

В207. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-206, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31.B207. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-206, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 31.

В208. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-207, содержащее последовательность человеческой каркасной области Vκ или Vλ.B208. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-207, containing the sequence of the human Vκ or Vλ framework region.

В209. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-208, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B209. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-208, containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В210. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-207, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B210. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-207, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В211. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-210, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 25.B211. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-210, containing VL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 25.

В212. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-211, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25.B212. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-211, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25.

В213. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-212, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 20.B213. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-212, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 20.

В214. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-213, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.B214. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-213, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.

В215. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-214, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 26.B215. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-214, containing CL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 26.

В216. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-215, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.B216. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-215, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26.

В217. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-216, содержащее домен Fc.B217. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-216, containing the Fc domain.

В218. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 217, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA (например, IgA1 или IgA2), IgD, IgE или IgM.B218. A B. 217 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein said Fc domain is an IgA Fc domain (eg, IgA 1 or IgA 2 ), IgD, IgE, or IgM.

В219. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 217, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).B219. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 217, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain (eg, IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В220. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-219, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32.B220. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-219, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32.

В221. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 197-220, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27.B221. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 197-220, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 27.

В222. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее вариабельную область тяжелой цепи (VH), которая содержит:B222. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing a heavy chain variable region (VH) that contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60.

В223. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 61.B223. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 61.

В224. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VL, которая содержит:B224. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 54; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 55.

В225. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 56.B225. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 56.

В226. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее:B226. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing:

(1) VH, которая содержит:(1) VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 58;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 59; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60;(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 60;

и (2) VL, которая содержит:and (2) VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 53;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 54; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 55.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 55.

В227. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 61, и последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 56.B227. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, comprising the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 61, and the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO : 56.

В228. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-227, содержащее последовательность каркасной области человеческой VH3, VH1 или VH5.B228. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-227, containing the framework sequence of human VH3, VH1 or VH5.

В229. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-228, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23, IGHV1-69 или IGHV3-7.B229. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-228 containing the human germline VH framework sequence IGHV3-23, IGHV1-69 or IGHV3-7.

В230. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-227, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B230. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-227, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В231. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-230, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 61.B231. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-230, containing a VH that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 61.

В232. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-231, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.B232. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-231, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 61.

В233. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-232, содержащее последовательность каркасной области человеческой Vκ или Vλ.B233. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-232 containing the human Vκ or Vλ framework region sequence.

В234. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-233, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B234. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-233 containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В235. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-232, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B235. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-232, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В236. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-235, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 56.B236. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-235, containing VL, which contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 56.

В237. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-236, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56.B237. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-236, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 56.

В238. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-237, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 20.B238. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-237, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 20.

В239. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-238, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20.B239. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-238, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20.

В240. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-239, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 26.B240. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-239, containing CL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 26.

В241. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-240, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26.B241. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-240, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26.

В242. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-241, содержащее домен Fc.B242. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-241 containing the Fc domain.

В243. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 242, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA (например, IgA1 или IgA2), IgD, IgE или IgM.B243. A B. 242 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein said Fc domain is an IgA (eg, IgA 1 or IgA 2 ), IgD, IgE, or IgM Fc domain.

В244. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 242, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).B244. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 242, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain (eg, IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В245. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-244, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62.B245. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-244, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 62.

В246. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 222-245, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57.B246. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 222-245, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 57.

В247. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VH, которая содержит:B247. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of a TFPI containing a VH that contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120.

В248. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 121.B248. An isolated antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 121.

В249. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VL, которая содержит:B249. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115.

В250. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 116.B250. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 116.

В251. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее:B251. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing:

(1) VH, которая содержит:(1) VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 118;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 119; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120;(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 120;

и (2) VL, которая содержит:and (2) VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 113;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 114; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 115.

В252. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 121, и последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 116.B252. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, comprising the CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 sequences of SEQ ID NO: 121, and the CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 sequences of SEQ ID NO: : 116.

В253. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-252, содержащее последовательность каркасной области человеческой VH3, VH1 или VH5.B253. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-252, containing the framework sequence of human VH3, VH1 or VH5.

В254. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-253, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23, IGHV1-69 или IGHV3-7.B254. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-253 containing the human germline VH framework sequence IGHV3-23, IGHV1-69 or IGHV3-7.

В255. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-252, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B255. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-252, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В256. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-255, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 121.B256. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-255, containing a VH that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 121.

В257. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-256, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121.B257. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-256, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 121.

В258. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-257, содержащее последовательность каркасной области человеческой Vκ или Vλ.B258. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-257 containing the sequence of the human Vκ or Vλ framework region.

В259. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-258, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B259. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-258, containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В260. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-257, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B260. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-257, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В261. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-260, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 116.B261. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-260, containing VL, which contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 116.

В262. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-261, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116.B262. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-261, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 116.

В263. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-262, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 91.B263. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-262, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 91.

В264. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-263, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91.B264. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-263, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91.

В265. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-264, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 85.B265. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-264, containing CL, which contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 85.

В266. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-265, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.B266. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-265, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.

В267. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-266, содержащее домен Fc.B267. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-266, containing the Fc domain.

В268. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 267, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA (например, IgA1 или IgA2), IgD, IgE или IgM.B268. A B. 267 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein said Fc domain is an IgA (eg, IgA 1 or IgA 2 ), IgD, IgE, or IgM Fc domain.

В269. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 267, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).B269. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 267, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain (eg, IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В270. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-269, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122.B270. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-269, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 122.

В271. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 247-270, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117.B271. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 247-270, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 117.

В272. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VH, которая содержит:B272. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of a TFPI containing a VH that contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 129; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 129; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130.(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 130.

В273. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 131.B273. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 SEQ ID NO: 131.

В274. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее VL, которая содержит:B274. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 125.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125.

В275. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 126.B275. An isolated antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing the sequences CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 SEQ ID NO: 126.

В276. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее:B276. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, containing:

(1) VH, которая содержит:(1) VH, which contains:

(а) CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 128;(a) CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 128;

(б) CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 129; и(b) CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 129; And

(в) CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 130;(c) CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 130;

и (2) VL, которая содержит:and (2) VL, which contains:

(а) CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123;(a) CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 123;

(б) CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 124; и(b) CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 124; And

(в) CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 125.(c) CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 125.

В277. Выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, содержащее последовательности CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 SEQ ID NO: 131, и последовательности CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 SEQ ID NO: 126.B277. An isolated antibody or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, comprising the CDR-H1, CDR-H2 and CDR-H3 sequences of SEQ ID NO: 131, and the CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 sequences of SEQ ID NO: : 126.

В278. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-277, содержащее последовательность каркасной области человеческой VH3, VH1 или VH5.B278. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-277, containing the framework sequence of human VH3, VH1 or VH5.

В279. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-278, содержащее последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии IGHV3-23, IGHV1-69 или IGHV3-7.B279. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-278, containing the human germline VH framework sequence IGHV3-23, IGHV1-69 or IGHV3-7.

В280. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-277, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VH человеческой зародышевой линии.B280. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-277, containing the human germline VH framework consensus sequence.

В281. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-280, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 131.B281. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-280, containing a VH that contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 131.

В282. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-281, содержащее VH, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 131.B282. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-281, containing VH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 131.

В283. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-282, содержащее последовательность каркасной области человеческой Vκ или Vλ.B283. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-282 containing the human Vκ or Vλ framework region sequence.

В284. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-283, содержащее последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии IGKV3-20 или IGKV1-39.B284. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-283, containing the human germline VL framework sequence IGKV3-20 or IGKV1-39.

В285. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-282, содержащее консенсусную последовательность каркасной области VL человеческой зародышевой линии.B285. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-282, containing the human germline VL framework consensus sequence.

В286. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-285, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 126.B286. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-285, containing VL, which contains an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 126.

В287. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-286, содержащее VL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126.B287. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-286, containing VL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 126.

В288. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-287, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 91.B288. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-287, containing CH, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 91.

В289. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-288, содержащее СН, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 91.B289. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-288, containing CH, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 91.

В290. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-289, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную SEQ ID NO: 85.B290. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-289, containing CL, which contains an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 85.

В291. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-290, содержащее СL, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 85.B291. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-290, containing CL, which contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85.

В292. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-291, содержащее домен Fc.B292. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-291 containing the Fc domain.

В293. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 292, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgA (например, IgA1 или IgA2), IgD, IgE или IgM.B293. A B. 292 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein said Fc domain is an IgA Fc domain (eg, IgA 1 or IgA 2 ), IgD, IgE, or IgM.

В294. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 292, в котором указанный домен Fc представляет собой домен Fc IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).B294. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 292, wherein said Fc domain is an IgG Fc domain (eg, IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В295. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-294, содержащее тяжелую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 132.B295. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-294, containing a heavy chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 132.

В296. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 272-295, содержащее легкую цепь, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127.B296. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 272-295, containing a light chain that contains the amino acid sequence of SEQ ID NO: 127.

В297. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с TFPI с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом по любому из ВВ. 1-296.B297. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein said antibody or antigen binding fragment thereof competes for binding to TFPI with the antibody or antigen binding fragment thereof at any of the EVs. 1-296.

В298. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с TFPI с антителом, выбранным из группы, состоящей из TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24, TFPI-26, TFPI-106, TFPI-107, TFPI-108, TFPI-109, TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113, TFPI-114, TFPI-115, TFPI-118, TFPI-119, TFPI-122, TFPI-123, TFPI-126, 4D8.b1, химеры mu-hu 4D8, 4D8-Vk1.0 × VH1.0, 4D8-Vk1.0 × VH1.1, 4D8-Vk1.0 × VH1.2, 4D8-Vk1.0 × VH1.3, 4D8-Vk1.0 × VH1.4, 4D8-Vk1.0 × VH1.5, 4D8-Vk1.0 × VH1.6, 4D8-Vk1.1 × VH1.0, 4D8-Vk1.1 × VH1.1, 4D8-Vk1.1 × VH1.2, 4D8-Vk1.1 × VH1.3, 4D8-Vk1.1 × VH1.4, 4D8-Vk1.1 × VH1.5, 4D8-Vk1.1 × VH1.6, hz4D8, 6B7.c5 и 7A4.D9.B298. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein said antibody or antigen binding fragment thereof competes for binding to TFPI with an antibody selected from the group consisting of TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24 , TFPI-26, TFPI-106, TFPI-107, TFPI-108, TFPI-109, TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113, TFPI-114, TFPI-115, TFPI-118, TFPI -119, TFPI-122, TFPI-123, TFPI-126, 4D8.b1, mu-hu chimeras 4D8, 4D8-Vk1.0 × VH1.0, 4D8-Vk1.0 × VH1.1, 4D8-Vk1.0 × VH1.2, 4D8-Vk1.0 × VH1.3, 4D8-Vk1.0 × VH1.4, 4D8-Vk1.0 × VH1.5, 4D8-Vk1.0 × VH1.6, 4D8-Vk1.1 × VH1.0, 4D8-Vk1.1 × VH1.1, 4D8-Vk1.1 × VH1.2, 4D8-Vk1.1 × VH1.3, 4D8-Vk1.1 × VH1.4, 4D8-Vk1.1 × VH1.5, 4D8-Vk1.1 × VH1.6, hz4D8, 6B7.c5 and 7A4.D9.

В299. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с TFPI с антителом, выбранным из группы, состоящей из TFPI-23, TFPI-24, TFPI-106 и TFPI-118.B299. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof competes for binding to TFPI with an antibody selected from the group consisting of TFPI-23, TFPI-24, TFPI-106 and TFPI-118 .

В300. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 299, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с TFPI с TFPI-23 или TFPI-106.B300. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 299, wherein said antibody or antigen binding fragment thereof competes for binding to TFPI with TFPI-23 or TFPI-106.

В301. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 299, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с TFPI с TFPI-24 или TFPI-118.B301. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 299, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof competes for binding to TFPI with TFPI-24 or TFPI-118.

В302. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурирует за связывание с TFPI с антителом 4D8.B302. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof competes for binding to TFPI with antibody 4D8.

В303. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-296.B303. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof binds to the same TFPI epitope as the antibody or antigen binding fragment thereof on any of the EVs. 1-296.

В304. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24, TFPI-26, TFPI-106, TFPI-107, TFPI-108, TFPI-109, TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113, TFPI-114, TFPI-115, TFPI-118, TFPI-119, TFPI-122, TFPI-123, TFPI-126, 4D8.b1, химеры mu-hu 4D8, 4D8-Vk1.0 × VH1.0, 4D8-Vk1.0 × VH1.1, 4D8-Vk1.0 × VH1.2, 4D8-Vk1.0 × VH1.3, 4D8-Vk1.0 × VH1.4, 4D8-Vk1.0 × VH1.5, 4D8-Vk1.0 × VH1.6, 4D8-Vk1.1 × VH1.0, 4D8-Vk1.1 × VH1.1, 4D8-Vk1.1 × VH1.2, 4D8-Vk1.1 × VH1.3, 4D8-Vk1.1 × VH1.4, 4D8-Vk1.1 × VH1.5, 4D8-Vk1.1 × VH1.6, hz4D8, 6B7.c5 и 7A4.D9.B304. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof binds to the same TFPI epitope as the antibody selected from the group consisting of TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23 , TFPI-24, TFPI-26, TFPI-106, TFPI-107, TFPI-108, TFPI-109, TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113, TFPI-114, TFPI-115, TFPI -118, TFPI-119, TFPI-122, TFPI-123, TFPI-126, 4D8.b1, mu-hu chimeras 4D8, 4D8-Vk1.0 × VH1.0, 4D8-Vk1.0 × VH1.1, 4D8 -Vk1.0 × VH1.2, 4D8-Vk1.0 × VH1.3, 4D8-Vk1.0 × VH1.4, 4D8-Vk1.0 × VH1.5, 4D8-Vk1.0 × VH1.6, 4D8 -Vk1.1 × VH1.0, 4D8-Vk1.1 × VH1.1, 4D8-Vk1.1 × VH1.2, 4D8-Vk1.1 × VH1.3, 4D8-Vk1.1 × VH1.4, 4D8 -Vk1.1 × VH1.5, 4D8-Vk1.1 × VH1.6, hz4D8, 6B7.c5 and 7A4.D9.

В305. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из TFPI-23, TFPI-24, TFPI-106 и TFPI-118.B305. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof binds to the same TFPI epitope as the antibody selected from the group consisting of TFPI-23, TFPI-24, TFPI-106 and TFPI-118.

В306. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 305, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и TFPI-23 или TFPI-106.B306. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 305, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof binds to the same TFPI epitope as TFPI-23 or TFPI-106.

В307. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 305, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и TFPI-24 или TFPI-118.B307. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 305, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof binds to the same TFPI epitope as TFPI-24 or TFPI-118.

В308. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и антитело 4D8.B308. An antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI, wherein the antibody or antigen binding fragment thereof binds to the same TFPI epitope as the 4D8 antibody.

В309. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 297-308, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент не связывается с доменом K1 TFPI.B309. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 297-308, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof does not bind to the K1 domain of TFPI.

В310. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-309, где данное антитело или антигенсвязывающий фрагмент представляет собой слитый белок Fc, монотело, макситело, бифункциональное антитело, scFab, scFv, пептитело или антигенсвязывающий фрагмент любого из вышеупомянтых.B310. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-309, wherein the antibody or antigen binding fragment is an Fc fusion protein, monobody, maxibody, bifunctional antibody, scFab, scFv, peptibody or antigen binding fragment of any of the above.

В311. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-310, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывается с TFPI со значением аффинности связывания (Kd) от примерно 1×10-7 М до примерно 1×10-12 М.B311. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-310, wherein said antibody or antigen binding fragment binds to TFPI with a binding affinity (Kd) of about 1 x 10 -7 M to about 1 x 10 -12 M.

В312. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-311, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывается с TFPI со значением аффинности связывания (Kd) от примерно 5×10-7 М до примерно 5×10-11 М.B312. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-311, wherein said antibody or antigen binding fragment binds to TFPI with a binding affinity (Kd) of about 5 x 10 -7 M to about 5 x 10 -11 M.

В313. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-312, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент связывается с TFPI со значением аффинности связывания (Kd) от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-10 М.B313. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-312, wherein said antibody or antigen binding fragment binds to TFPI with a binding affinity (Kd) of about 1x10 -8 M to about 1x10 -10 M.

В314. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-313, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент: (1) уменьшает время свертывания крови при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением (dPT); (2) уменьшает время свертывания в цельной крови при измерении посредством тромбоэластографии или ротационной тромбоэластометрии; (3) увеличивает образование тромбина; (4) увеличивает активность FXa в присутствии TFPI; или (5) приводит к их любой комбинации.B314. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-313, wherein said antibody or antigen binding fragment: (1) reduces blood clotting time as measured in a diluted plasma prothrombin time (dPT) assay; (2) reduces clotting time in whole blood when measured by thromboelastography or rotational thromboelastometry; (3) increases thrombin formation; (4) increases FXa activity in the presence of TFPI; or (5) results in any combination of them.

В315. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент уменьшает время свертывания крови при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением.B315. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein said antibody or antigen-binding fragment reduces blood clotting time as measured in a diluted plasma prothrombin time assay.

В316. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 315, где указанное уменьшение времени свертывания крови при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением является дозозависимым.B316. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 315, wherein said reduction in clotting time as measured in a diluted plasma prothrombin time assay is dose-dependent.

В317. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент уменьшает время свертывания в цельной крови при измерении посредством тромбоэластографии или ротационной тромбоэластометрии.B317. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein said antibody or antigen binding fragment reduces clotting time in whole blood as measured by thromboelastography or rotational thromboelastometry.

В318. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 317, где указанное уменьшение времени свертывания крови при измерении посредством тромбоэластографии или ротационной тромбоэластометрии является дозозависимым.B318. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 317, wherein said reduction in clotting time as measured by thromboelastography or rotational thromboelastometry is dose-dependent.

В319. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент увеличивает образование тромбина.B319. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein said antibody or antigen binding fragment increases thrombin formation.

В320. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 319, где указанное увеличение образования тромбина является дозозависимым.B320. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 319, wherein the said increase in thrombin formation is dose-dependent.

В321. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент увеличивает активность FXa в присутствии TFPI.B321. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein said antibody or antigen binding fragment increases FXa activity in the presence of TFPI.

В322. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 321, где указанное увеличение активности FXa в присутствии TFPI является дозозависимым.B322. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 321, wherein the said increase in FXa activity in the presence of TFPI is dose dependent.

В323. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 322, где указанное антитело усиливает накопление тромбоцитов в присутствии TFPI.B323. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 322, wherein said antibody enhances platelet accumulation in the presence of TFPI.

В324. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 323, где указанное усиление накопления тромбоцитов в присутствии TFPI является дозозависимым.B324. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 323, wherein said enhancement of platelet accumulation in the presence of TFPI is dose-dependent.

В325. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 324, где указанное антитело увеличивает образование фибрина в присутствии TFPI.B325. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 324, wherein said antibody increases fibrin formation in the presence of TFPI.

В326. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 325, где указанное увеличение образования фибрина в присутствии TFPI является дозозависимым.B326. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 325, wherein the said increase in fibrin formation in the presence of TFPI is dose dependent.

В327. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания в цельной крови определяется с использованием цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А.B327. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time in whole blood is determined using whole blood obtained from a human patient having severe hemophilia A.

В328. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания в цельной крови определяется с использованием цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А и ингибирующие антитела против человеческого Фактора VIII. B328. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time in whole blood is determined using whole blood obtained from a human patient having severe hemophilia A and inhibitory antibodies against human Factor VIII.

В329. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания в цельной крови определяется с использованием цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего умеренную гемофилию А.B329. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time in whole blood is determined using whole blood obtained from a human patient having moderate hemophilia A.

В330. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания в цельной крови определяется с использованием цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию В.B330. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time in whole blood is determined using whole blood obtained from a human patient having severe hemophilia B.

В331. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания в цельной крови определяется с использованием цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию В и ингибирующие антитела против человеческого Фактора IX.B331. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time in whole blood is determined using whole blood obtained from a human patient having severe hemophilia B and inhibitory antibodies against human Factor IX.

В332. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания в цельной крови определяется с использованием цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего умеренную гемофилию В.B332. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time in whole blood is determined using whole blood obtained from a human patient having moderate hemophilia B.

В333. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания при измерении в анализе dPT определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А.B333. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time as measured in the dPT assay is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia A.

В334. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания при измерении в анализе dPT определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А и ингибирующие антитела против человеческого Фактора VIII.B334. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time as measured in the dPT assay is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia A and inhibitory antibodies against human Factor VIII.

В335. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания при измерении в анализе dPT определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего умеренную гемофилию А.B335. An antibody or antigen binding fragment thereof according to B. 314, wherein the reduction in clotting time as measured in the dPT assay is determined using plasma obtained from a human patient having moderate hemophilia A.

В336. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания при измерении в анализе dPT определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию В.B336. A B. 314 antibody or antigen binding fragment thereof, wherein the reduction in clotting time as measured in the dPT assay is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia B.

В337. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания крови при измерении в анализе dPT определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию В и ингибирующие антитела против человеческого Фактора IX.B337. An antibody or antigen-binding fragment thereof of B. 314, wherein the reduction in clotting time as measured in a dPT assay is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia B and anti-human Factor IX inhibitory antibodies.

В338. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где уменьшение времени свертывания крови при измерении в анализе dPT определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего умеренную гемофилию В.B338. An antibody or antigen-binding fragment thereof of B. 314, wherein the reduction in clotting time as measured in the dPT assay is determined using plasma obtained from a human patient having moderate hemophilia B.

В339. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где увеличение образования тромбина определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А.B339. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the increase in thrombin generation is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia A.

В340. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где увеличение образования тромбина определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А и ингибирующие антитела против человеческого Фактора VIII.B340. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the increase in thrombin generation is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia A and inhibitory antibodies against human Factor VIII.

В341. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где увеличение образования тромбина определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего умеренную гемофилию А.B341. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the increase in thrombin generation is determined using plasma obtained from a human patient having moderate hemophilia A.

В342. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где увеличение образования тромбина определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию В.B342. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the increase in thrombin generation is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia B.

В343. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где увеличение образования тромбина определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию В и ингибирующие антитела против человеческого Фактора IX.B343. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the increase in thrombin generation is determined using plasma obtained from a human patient having severe hemophilia B and inhibitory antibodies against human Factor IX.

В344. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где увеличение образования тромбина определяется с использованием плазмы, полученной от человеческого пациента, имеющего умеренную гемофилию В.B344. An antibody or antigen-binding fragment thereof according to B. 314, wherein the increase in thrombin generation is determined using plasma obtained from a human patient having moderate hemophilia B.

В345. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где 100 нМ указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является по меньшей мере таким же эффективным в уменьшении времени свертывания цельной крови, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А, что и количество рекомбинантного человеческого Фактора VIII, которое является достаточным для достижения 5% от нормальной свертывающей активности.B345. The antibody or antigen binding fragment thereof of B. 314, wherein 100 nM of said antibody or antigen binding fragment thereof is at least as effective in reducing the clotting time of whole blood obtained from a human patient having severe hemophilia A as the amount of recombinant human Factor VIII , which is sufficient to achieve 5% of normal coagulation activity.

В346. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по В. 314, где 100 нМ указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент является по меньшей мере таким же эффективным в увеличении пикового образования тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами, полученной от человеческого пациента, имеющего тяжелую гемофилию А, что и количество рекомбинантного человеческого Фактора VIII, которое является достаточным для достижения 5% от нормальной свертывающей активности.B346. The antibody or antigen-binding fragment thereof of B. 314, wherein 100 nM said antibody or antigen-binding fragment thereof is at least as effective in increasing peak thrombin generation in platelet-rich plasma obtained from a human patient having severe hemophilia A as the amount recombinant human Factor VIII, which is sufficient to achieve 5% of normal coagulation activity.

В347. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-346, где указанный TFPI представляет собой человеческий TFPI.B347. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-346, wherein said TFPI is a human TFPI.

В348. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-347, где указанный TFPI содержит остатки 91-147 SEQ ID NO: 2.B348. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-347, wherein said TFPI contains residues 91-147 of SEQ ID NO: 2.

В349. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты или молекулы нуклеиновой кислоты, содержащая одну или более чем одну нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из вв. 1-348.B349. An isolated nucleic acid molecule or nucleic acid molecule containing one or more than one nucleotide sequence encoding an antibody or antigen-binding fragment thereof according to any one of the centuries. 1-348.

В350. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с TFPI, где указанная нуклеиновая кислота содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из следующих: последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:175, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:176, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:177, последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:178, последовательность нуклеиновой кислоты вставки вектора, депонированной как mAb-TFPI-106 VL под номером доступа ATCC PTA-122328, и последовательность нуклеиновой кислоты вставки вектора, депонированной как mAb-TFPI-106 VH под номером доступа ATCC PTA-122329.B350. An isolated nucleic acid molecule encoding an antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to TFPI, wherein said nucleic acid comprises a nucleic acid sequence selected from the group consisting of: nucleic acid sequence SEQ ID NO:175, nucleic acid sequence SEQ ID NO: :176, nucleic acid sequence SEQ ID NO:177, nucleic acid sequence SEQ ID NO:178, nucleic acid sequence of the vector insert deposited as mAb-TFPI-106 VL under ATCC accession number PTA-122328, and nucleic acid sequence of the vector insert, deposited as mAb-TFPI-106 VH under ATCC accession number PTA-122329.

В351. Вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по ВВ. 349 и 350.B351. A vector containing a BB nucleic acid molecule. 349 and 350.

В352. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по В. 349 или 350, или вектор по В. 351.B352. A host cell containing a B. 349 or 350 nucleic acid molecule, or a B. 351 vector.

В353. Клетка-хозяин по В. 352, где указанная клетка представляет собой клетку млекопитающего.B353. The host cell of B. 352, wherein said cell is a mammalian cell.

В354. Клетка-хозяин по В. 353, где указанная клетка представляет собой клетку СНО (яичник китайского хомяка), клетку HEK-293 (клетка эмбриональной почки человека) или клетку Sp2.0.B354. The host cell according to B. 353, wherein the cell is a CHO cell (Chinese hamster ovary), a HEK-293 cell (human embryonic kidney cell) or an Sp2.0 cell.

В355. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по любому из ВВ. 352-354 при условиях, когда указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент экспрессируется указанной клеткой-хозяином.B355. A method for producing an antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising culturing a host cell using any of the EVs. 352-354 under conditions wherein said antibody or antigen binding fragment is expressed by said host cell.

В356. Способ по В. 355, дополнительно включающий выделение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.B356. The method according to B. 355, further comprising isolating said antibody or an antigen-binding fragment thereof.

В357. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, полученное способом по В. 355 или 356.B357. An antibody or antigen-binding fragment thereof prepared by the method of B. 355 or 356.

В358. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело или антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-347 и 357, и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент.B358. A pharmaceutical composition containing an antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-347 and 357, and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient.

В359. Способ уменьшения активности ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из ВВ. 1-347 и 357 или фармацевтической композиции по В. 358.B359. A method of reducing the activity of a tissue factor pathway inhibitor (TFPI), comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of an antibody or antigen-binding fragment thereof for any of the EVs. 1-347 and 357 or the pharmaceutical composition according to B. 358.

В360. Способ сокращения времени кровотечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из ВВ. 1-347 и 357 или фармацевтической композиции по В. 358.B360. A method of reducing bleeding time, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of an antibody or antigen-binding fragment thereof for any of the EVs. 1-347 and 357 or the pharmaceutical composition according to B. 358.

В361. Способ по В. 358 или 360, где указанный субъект представляет собой человека.B361. The method according to B. 358 or 360, where the specified subject is a human.

В362. Способ по любому из ВВ. 359-361, где указанный субъект страдает от или подвержен недостаточности свертывания крови.B362. Method according to any of the explosives. 359-361, wherein said subject suffers from or is susceptible to a blood clotting deficiency.

В363. Способ по любому из ВВ. 359-361, где указанный субъект страдает от или подвержен тромбоцитарному расстройству.B363. Method according to any of the explosives. 359-361, wherein said subject suffers from or is susceptible to a platelet disorder.

В364. Способ по любому из ВВ. 359-361, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А, В или С.B364. Method according to any of the explosives. 359-361, wherein said subject suffers from or is susceptible to hemophilia A, B or C.

В365. Способ по любому из ВВ. 359-361, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А или В.B365. Method according to any of the explosives. 359-361, wherein said subject suffers from or is susceptible to hemophilia A or B.

В366. Способ по любому из ВВ. 359-361, где указанный субъект страдает от или подвержен болезни фон Виллебранда (vWD).B366. Method according to any of the explosives. 359-361, wherein said subject suffers from or is susceptible to von Willebrand disease (vWD).

В367. Способ по В. 360, дополнительно включающий введение терапевтически эффективного количества FVII.B367. The method of B. 360, further comprising administering a therapeutically effective amount of FVII.

В368. Способ по В. 367, где указанный способ увеличивает образование тромбина в присутствии TFPI.B368. The method according to B. 367, where the specified method increases the formation of thrombin in the presence of TFPI.

В369. Способ по любому из ВВ. 359-368, включающий внутривенное введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или фармацевтической композиции.B369. Method according to any of the explosives. 359-368, comprising intravenous administration of said antibody or antigen-binding fragment thereof, or pharmaceutical composition.

В370. Способ по любому из ВВ. 359-368, включающий подкожное введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, или фармацевтической композиции.B370. Method according to any of the explosives. 359-368, comprising subcutaneous administration of said antibody or antigen-binding fragment thereof, or pharmaceutical composition.

В371. Способ по любому из ВВ. 359-368, в котором указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция вводится один раз каждые 3 суток, один раз каждые 4 суток, один раз каждые 5 суток, один раз каждые 6 суток, один раз в неделю или дважды в неделю.B371. Method according to any of the explosives. 359-368, in which the specified antibody or antigen binding fragment, or pharmaceutical composition is administered once every 3 days, once every 4 days, once every 5 days, once every 6 days, once a week or twice a week.

В372. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-347 и 357, или фармацевтическая композиция по В. 358 для применения в качестве лекарственного средства.B372. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-347 and 357, or the pharmaceutical composition according to B. 358 for use as a medicine.

В373. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-347 и 357, или фармацевтическая композиция по В. 358 для применения в уменьшении активности TFPI у субъекта.B373. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-347 and 357, or the pharmaceutical composition of B. 358 for use in reducing TFPI activity in a subject.

В374. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из ВВ. 1-347 и 357, или фармацевтическая композиция по В. 357 для применения в сокращении времени кровотечения у субъекта.B374. Antibody or antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-347 and 357, or the pharmaceutical composition of B. 357 for use in reducing bleeding time in a subject.

В375. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция по любому из ВВ. 372-374, где указанный субъект представляет собой человека.B375. An antibody or antigen-binding fragment, or a pharmaceutical composition for any of the IVs. 372-374, where the specified subject is a person.

В376. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция по любому из ВВ. 372-375, где указанный субъект страдает от или подвержен недостаточности свертывания крови.B376. An antibody or antigen-binding fragment, or a pharmaceutical composition for any of the IVs. 372-375, wherein said subject suffers from or is susceptible to a blood clotting deficiency.

В377. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция по любому из ВВ. 372-375, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А, В или С.B377. An antibody or antigen-binding fragment, or a pharmaceutical composition for any of the IVs. 372-375, wherein said subject suffers from or is susceptible to hemophilia A, B or C.

В378. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция по любому из ВВ. 372-375, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А или В.B378. An antibody or antigen-binding fragment, or a pharmaceutical composition for any of the IVs. 372-375, wherein said subject suffers from or is susceptible to hemophilia A or B.

В379. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция по любому из ВВ. 372-375, где указанный субъект страдает от или подвержен болезни фон Виллебранда (vWD).B379. An antibody or antigen-binding fragment, or a pharmaceutical composition for any of the IVs. 372-375, wherein said subject suffers from or is susceptible to von Willebrand disease (vWD).

В380. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент, или фармацевтическая композиция по любому из ВВ. 372-375, где указанный субъект страдает от или подвержен тромбоцитарному расстройству.B380. An antibody or antigen-binding fragment, or a pharmaceutical composition for any of the IVs. 372-375, wherein said subject suffers from or is susceptible to a platelet disorder.

В381. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из ВВ. 1-348 и 357, или фармацевтической композиции по В. 358 для уменьшения активности TFPI у субъекта.B381. The use of an antibody or its antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-348 and 357, or the pharmaceutical composition of B. 358 to reduce TFPI activity in a subject.

В382. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из ВВ. 1-348 и 357, или фармацевтической композиции по В. 358 в изготовлении лекарственного средства для уменьшения активности TFPI у субъекта.B382. The use of an antibody or its antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-348 and 357, or the pharmaceutical composition of B. 358 in the manufacture of a medicament for reducing TFPI activity in a subject.

В383. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из ВВ. 1-348 и 357, или фармацевтической композиции по В. 358 для сокращения времени кровотечения у субъекта.B383. The use of an antibody or its antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-348 and 357, or the pharmaceutical composition of B. 358 to reduce bleeding time in a subject.

В384. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из ВВ. 1-348 и 357, или фармацевтической композиции по В. 358 в изготовлении лекарственного средства для сокращения времени кровотечения у субъекта.B384. The use of an antibody or its antigen-binding fragment for any of the EVs. 1-348 and 357, or the pharmaceutical composition of B. 358 in the manufacture of a medicament for reducing bleeding time in a subject.

В385. Применение по любому из ВВ. 381-384, где указанный субъект представляет собой человека.B385. Application for any of the explosives. 381-384, where the specified subject is a person.

В386. Применение по любому из ВВ. 381-384, где указанный субъект страдает от или подвержен недостаточности свертывания крови.B386. Application for any of the explosives. 381-384, wherein said subject suffers from or is susceptible to a coagulation deficiency.

В387. Применение по любому из ВВ. 381-384, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А, В или С.B387. Application for any of the explosives. 381-384, wherein said subject suffers from or is susceptible to hemophilia A, B or C.

В388. Применение по любому из ВВ. 381-384, где указанный субъект страдает от или подвержен гемофилии А или В.B388. Application for any of the explosives. 381-384, wherein said subject suffers from or is susceptible to hemophilia A or B.

В389. Применение по любому из ВВ. 381-384, где указанный субъект страдает от или подвержен болезни фон Виллебранда (vWD).B389. Application for any of the explosives. 381-384, wherein said subject suffers from or is susceptible to von Willebrand disease (vWD).

В390. Применение по любому из вв. 381-384, где указанный субъект страдает от или подвержен тромбоцитарному расстройству.B390. Application according to any of the centuries. 381-384, wherein said subject suffers from or is susceptible to a platelet disorder.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВBRIEF DESCRIPTION OF GRAPHIC MATERIALS

ФИГ. 1А-1Е представляют собой графические материалы, показывающие структуры сокристаллов разных антител против TFPI и домена K2 TFPI. В частности, как показано на ФИГ. 1Е, все раскрытые в настоящем описании примеры антител - TFPI-23, TFPI-24 и 4D8 - связываются с неперекрывающимися эпитопами домена K2 по сравнению с другими контрольными антителами. TFPI-106 связывается с тем же самым сайтом, что и TFPI-23, а TFPI-118 связывается с тем же самым сайтом, что и TFPI-24. Обозначения «R&D» или «R&D Fab» относятся к антителу Mab 2974 от R&D Systems. Антитело Novo2021 также обозначено «hz4F36». Обозначение «Клон 23» относится к TFPI-23; обозначение «клон 24» относится к TFPI-24.FIG. 1A-1E are graphics showing cocrystal structures of various anti-TFPI antibodies and the TFPI K2 domain. In particular, as shown in FIG. 1E, the example antibodies disclosed herein, TFPI-23, TFPI-24, and 4D8, all bind to non-overlapping K2 domain epitopes compared to other control antibodies. TFPI-106 binds to the same site as TFPI-23, and TFPI-118 binds to the same site as TFPI-24. The designations “R&D” or “R&D Fab” refer to the Mab 2974 antibody from R&D Systems. The Novo2021 antibody is also designated “hz4F36.” The designation "Clone 23" refers to TFPI-23; the designation "clone 24" refers to TFPI-24.

ФИГ. 2А-2Д представляют собой диаграммы, показывающие взаимодействия между остатками эпитопов в пределах домена K2 TFPI и остатками паратопов из разных антител против TFPI. Обозначения «R&D» или «R&D Fab» относятся к антителу Mab 2974 от R&D Systems. Обозначение «Клон 23» относится к TFPI-23; обозначение «клон 24» относится к TFPI-24.FIG. 2A-2E are diagrams showing interactions between epitope residues within the K2 domain of TFPI and paratope residues from different anti-TFPI antibodies. The designations “R&D” or “R&D Fab” refer to the Mab 2974 antibody from R&D Systems. The designation "Clone 23" refers to TFPI-23; the designation "clone 24" refers to TFPI-24.

На ФИГ. 3А-3Д показаны эффективности in vivo разных антител против TFPI в модели мышиной раны. На ФИГ. 3А и 3Б показана продолжительность уменьшающегося кровотечения у мышей с гемофилией А с недостаточностью Фактора VIII (FVIII -/-) при введении антител 2А8-200 и 2А8 (используемых в этом исследовании в качестве контрольных антител). На ФИГ. 3В показана продолжительность эффекта у мышей с гемофилией А при введении антител TFPI 4D8 (контроль), TFPI-21, TFPI-23 и TFPI-24. На ФИГ. 3Г и 3Д показана продолжительность эффекта у мышей с гемофилией А при введении антител TFPI-106 и TFPI-118. Антитела вводили мышам с гемофилией А
(FVIII -/-) посредством внутривенной инъекции в дозе 6 мг/кг в указанные моменты времени (часы (ч)) до ранения. Затем измеряли общий объем кровопотери (мкл) после перерезания хвоста. Мыши с гемофилией А, обработанные носителем (физиологическим раствором), служили в качестве контроля. Все измерения представлены в виде среднего значения плюс/минус SEM (стандартная ошибка среднего). * - Р меньше 0,05. FVIII +/+ мыши (дикий тип) получали физиологический раствор. n равно 5 на группу.In FIG. 3A-3D show the in vivo efficacies of various anti-TFPI antibodies in a murine wound model. In FIG. 3A and 3B show the duration of decreased bleeding in Factor VIII-deficient hemophilia A (FVIII -/-) mice when administered with antibodies 2A8-200 and 2A8 (used as control antibodies in this study). In FIG. 3B shows the duration of effect in mice with hemophilia A when administered antibodies TFPI 4D8 (control), TFPI-21, TFPI-23 and TFPI-24. In FIG. 3D and 3D show the duration of the effect in mice with hemophilia A when administered antibodies TFPI-106 and TFPI-118. Antibodies were administered to mice with hemophilia A
(FVIII -/-) by intravenous injection at a dose of 6 mg/kg at the indicated time points (hours) before injury. The total volume of blood loss (μl) after tail cutting was then measured. Hemophilia A mice treated with vehicle (saline) served as controls. All measurements are presented as mean plus/minus SEM (standard error of the mean). * - P is less than 0.05. FVIII +/+ mice (wild type) received saline. n is 5 per group.

На ФИГ. 4 показана продолжительность кровотечения у мышей с гемофилией В после перерезания хвоста при введении антитела TFPI-106. Антитела вводили мышам с гемофилией В посредством внутривенной инъекции в дозе 6 мг/кг в указанные моменты времени (часы (ч)) до ранения. Затем измеряли общий объем кровопотери (мкл) после перерезания хвоста. Мыши с гемофилией А, обработанные носителем (физиологическим раствором), служили в качестве контроля. Все измерения представлены в виде среднего значения плюс/минус SEM. * - Р меньше 0,05. n равно 4-5 на группу.In FIG. Figure 4 shows the duration of bleeding in mice with hemophilia B after tail cutting when administered with the antibody TFPI-106. Antibodies were administered to hemophilia B mice by intravenous injection at a dose of 6 mg/kg at the indicated time points (hours) before injury. The total volume of blood loss (μl) after tail cutting was then measured. Hemophilia A mice treated with vehicle (saline) served as controls. All measurements are presented as mean plus/minus SEM. * - P is less than 0.05. n is 4-5 per group.

На ФИГ. 5, содержащей панели А и Б, каждая из которых содержит шесть панелей (ФИГ. 5А, 1-6 и ФИГ. 5Б, 1-6), показаны микрофотографии прижизненной микроскопии (IVM), демонстрирующие то, что TFPI выявляется в тромбоцитарном тромбе и вдоль эндотелия in vivo в месте ранениясосуда у мыши дикого типа. На Фиг. 5А показано увеличение тромбоцитарного тромба в месте раненияпри выявлении с использованием CD42c, меченного Dylight 649, который связывается с GP1bβ на тромбоцитах. Присутствие или отсутствие тромбоцитов демонстрируется по флуоресцентному сигналу, выявляемому на панели 1 (0 с); панели 2 (15 с); панели 3 (30 с); панели 4 (60 с); панели 5 (90 с) и панели 6 (120 с). Также вводили IgG негативного контроля, меченный Alexa 488, и не выявляли флуоресценции. На Фиг. 5Б, содержащей панели 1-6, показаны микрофотографии IVM, демонстрирующие то, что TFPI присутствует в тромбоцитарном тромбе и вдоль эндотелия после индуцированного лазером ранения сосуда у мышей дикого типа. Меченный Alexa 488 TFPI (зеленый сигнал, показанный серым) не выявляется в 0 секунд (ФИГ. 5Б, панель 1), и бледный сигнал можно увидеть в 15 секунд (ФИГ. 5Б, панель 2). В 30 секунд (ФИГ. 5Б, панель 3) зеленый флуоресцентный сигнал усиливался, и можно увидеть бледный красный сигнал (CD42c, меченный Dylight 649), указывающий выявление накопления тромбоцитов приблизительно в том же самом месте, где выявляется TFPI. На ФИГ. 5Б, панель 4 (60 секунд) показаны сильный зеленый и красный флуоресцентные сигналы (оба светло-серые, где красную флуоресценцию можно увидеть слева от места ранения сосуда, и зеленый сигнал, главным образом, выявляется в направлении правой стороны места ранения), демонстрируя то, что и накопление тромбоцитов, и TFPI выявляется в месте ранения. На ФИГ. 5Б, панель 5, показаны и красный (тромбоциты), и зеленый (TFPI) флуоресцентный сигналы в месте ранения спустя 60 секунд, когда оба сигнала сильнее, чем спустя 30 секунд. На ФИГ. 5Б, панель 6, показан пониженный красный сигнал (тромбоциты), и пониженный зеленый сигнал (TFPI), оба все еще выявляемые в месте ранения спустя 120 секунд.In FIG. 5, containing panels A and B, each containing six panels (FIGS. 5A, 1-6 and FIGS. 5B, 1-6), shows intravital microscopy (IVM) micrographs demonstrating that TFPI is detected in the platelet thrombus and along the endothelium in vivo at the site of vascular injury in a wild-type mouse. In FIG. 5A shows an increase in platelet thrombus at the site of injury when detected using Dylight 649-labeled CD42c, which binds to GP1bβ on platelets. The presence or absence of platelets is demonstrated by the fluorescent signal detected in panel 1 (0 s); panels 2 (15 s); panels 3 (30 s); panels 4 (60 s); panels 5 (90 s) and panels 6 (120 s). A negative control IgG labeled with Alexa 488 was also injected and no fluorescence was detected. In FIG. 5B, containing panels 1-6, shows IVM micrographs demonstrating that TFPI is present in the platelet thrombus and along the endothelium after laser-induced vascular wounding in wild-type mice. Alexa 488-labeled TFPI (green signal shown in gray) is not detected at 0 seconds (FIG. 5B, panel 1), and a faint signal can be seen at 15 seconds (FIG. 5B, panel 2). At 30 seconds (FIG. 5B, panel 3), the green fluorescent signal increased and a faint red signal (CD42c labeled Dylight 649) could be seen, indicating detection of platelet accumulation at approximately the same location as TFPI. In FIG. 5B, panel 4 (60 seconds) shows strong green and red fluorescent signals (both light gray, where red fluorescence can be seen to the left of the vessel wound site, and green signal is mainly detected towards the right side of the wound site), demonstrating that that both platelet accumulation and TFPI are detected at the wound site. In FIG. 5B, panel 5, shows both red (platelet) and green (TFPI) fluorescent signals at the wound site after 60 seconds, where both signals are stronger than after 30 seconds. In FIG. 5B, panel 6, shows decreased red signal (platelet) and decreased green signal (TFPI), both still detectable at the wound site after 120 seconds.

ФИГ. 6А представляет собой график, показывающий гемостатический эффект TFPI-106 у мышей с гемофилией А после индуцированного лазером ранения сосудов при оценке с использованием IVM, где количество тромбоцитарного тромба выражается как площадь под кривой (AUC) (* показывает Р меньше 0,005). На ФИГ. 6А показано накопление тромбоцитов в месте ранения мышей дикого типа (WT) спустя 0,5 часа после ранения, где мыши получали только контроль в виде физиологического раствора, по сравнению с отсутствием накопления тромбоцитов у мыши с гемофилией А в 0,5 часов, где вводился физиологический раствор. Накопление тромбоцитов выявляли у мышей с гемофилией А в 0,5 часов, где вводился рекомбинантный фактор VIII (rFVIII) или TFPI-106. Эффект накопления тромба все еще выявлялся в 168 часов у мышей с гемофилией А, которым вводился TFPI-106.FIG. 6A is a graph showing the hemostatic effect of TFPI-106 in hemophilia A mice after laser-induced vascular injury when assessed using IVM, where the amount of platelet thrombus is expressed as the area under the curve (AUC) (* indicates P less than 0.005). In FIG. Figure 6A shows platelet accumulation at the wound site of wild-type (WT) mice 0.5 hours post-wounding where mice received only saline control, compared with no platelet accumulation in a hemophilia A mouse at 0.5 hours where saline control was administered. saline. Platelet accumulation was detected in hemophilia A mice at 0.5 hours treated with recombinant factor VIII (rFVIII) or TFPI-106. The clot accumulation effect was still detectable at 168 hours in hemophilia A mice treated with TFPI-106.

ФИГ. 6Б представляет собой график, показывающий гемостатический эффект TFPI-106 у мышей с гемофилией А после индуцированного лазером ранения сосуда при оценке с использованием IVM, где количество образовавшегося фибрина выражается как площадь под кривой (AUC) (* показывает Р меньше 0,005). На ФИГ. 6Б показано образование фибрина в месте ранения у мышей дикого типа (WT) спустя 0,5 часа после ранения, где мыши получали только контроль в виде физиологического раствора, по сравнению с отсутствием выявляемого образования фибрина у мыши с гемофилией А спустя 0,5 часа, где вводился физиологический раствор. Образование фибрина выявляли у мышей с гемофилией А спустя 0,5 часов, где вводился рекомбинантный фактор VIII (rFVIII) или TFPI-106. Эффект образования фибрина все еще выявлялся спустя 168 часов у мышей с гемофилией А, которым вводился TFPI-106.FIG. 6B is a graph showing the hemostatic effect of TFPI-106 in hemophilia A mice after laser-induced vascular injury as assessed using IVM, where the amount of fibrin generated is expressed as the area under the curve (AUC) (* indicates P less than 0.005). In FIG. 6B shows fibrin formation at the wound site in wild-type (WT) mice 0.5 hours after wounding where mice received only saline control, compared with no detectable fibrin formation in a hemophilia A mouse at 0.5 hours. where saline solution was injected. Fibrin formation was detected in hemophilia A mice after 0.5 hours of administration of recombinant factor VIII (rFVIII) or TFPI-106. The effect of fibrin formation was still detectable after 168 hours in hemophilia A mice treated with TFPI-106.

На ФИГ. 7 изображен график, показывающий эффект введения TFPI-106 и рекомбинантного фактора VIIa (rFVIIa) на анализ образования тромбина (TGA) в плазме при тяжелой гемофилии А в присутствии 1 пМ тканевого фактора и 4 мкМ фосфолипидов. На этом графике показаны тромбограммы плазмы при гемофилии А с введением одного TFPI-106 (16 мкг/мл) и в комбинации с rFVIIa (20 мкг/мл; 2 мкг/мл или 0,2 мкг/мл). Также показаны тромбограммы плазмы при гемофилии А и негемофилической плазмы при отсутствии введения и TFPI-106, и rFVIIa.In FIG. 7 is a graph showing the effect of administration of TFPI-106 and recombinant factor VIIa (rFVIIa) on plasma thrombin generation assay (TGA) in severe hemophilia A in the presence of 1 pM tissue factor and 4 μM phospholipids. This graph shows plasma thrombograms in hemophilia A treated with TFPI-106 alone (16 μg/ml) and in combination with rFVIIa (20 μg/ml; 2 μg/ml or 0.2 μg/ml). Thrombograms of plasma from hemophilia A and non-hemophilia plasma in the absence of administration of both TFPI-106 and rFVIIa are also shown.

На ФИГ. 8А изображены тромбограммы, показывающие эффект на образование тромбина в присутствии 1 пМ тканевого фактора и 4 мкМ фосфолипидов в плазме при гемофилии А в присутствии TFPI-106 с или без rFVIIa, или в присутствии только rFVIIa. Негемофилическая плазма включена в качестве контроля.In FIG. 8A depicts thrombograms showing the effect on thrombin generation in the presence of 1 pM tissue factor and 4 μM plasma phospholipids in hemophilia A in the presence of TFPI-106 with or without rFVIIa, or in the presence of rFVIIa alone. Non-hemophilic plasma is included as a control.

На ФИГ. 8Б изображены тромбограммы, показывающие эффект на образование тромбина в присутствии трех единиц Бетезда (3 BU) ингибитора в цитратной обедненной тромбоцитами плазме при гемофилии А в присутствии TFPI-106 с или без rFVIIa, или в присутствии только rFVIIa. Негемофилическая плазма включена в качестве контроля. Также включен контроль негемофилической плазмы, в которую был добавлен TFPI-106 (16 мкг/мл).In FIG. 8B depicts thrombograms showing the effect on thrombin generation in the presence of three Bethesda units (3 BU) inhibitor in citrate platelet-poor plasma in hemophilia A in the presence of TFPI-106 with or without rFVIIa, or in the presence of rFVIIa alone. Non-hemophilic plasma is included as a control. Also included is a control of non-hemophilic plasma supplemented with TFPI-106 (16 μg/ml).

На ФИГ. 8В изображены тромбограммы, показывающие эффект на образование тромбина в присутствии трех единиц Бетезда (3 BU) ингибитора в цитратной обедненной тромбоцитами плазме при гемофилии В в присутствии TFPI-106 с или без rFVIIa, или в присутствии только rFVIIa. Негемофилическая плазма включена в качестве контроля. Также включен контроль негемофилической плазмы, в которую был добавлен TFPI-106 (16 мкг/мл).In FIG. 8B depicts thrombograms showing the effect on thrombin generation in the presence of three Bethesda units (3 BU) inhibitor in citrate platelet-poor plasma in hemophilia B in the presence of TFPI-106 with or without rFVIIa, or in the presence of rFVIIa alone. Non-hemophilic plasma is included as a control. Also included is a control of non-hemophilic plasma supplemented with TFPI-106 (16 μg/ml).

На ФИГ. 9А показан эффект на кровопотерю по сравнению с контролем введения антитела TFPI-106 (6 мг/кг) и отдельно рекомбинантного Фактора VIII (200 единиц/кг) мышам с гемофилией А сразу после перерезания хвоста. На ФИГ. 9Б показан эффект на кровопотерю по сравнению с контролем введения трех разных доз антитела TFPI-106 (6 мг/кг) и отдельно рекомбинантного Фактора VIII (200 единиц/кг) мышам с гемфилией А через 2 минуты после перерезания хвоста.In FIG. 9A shows the effect on blood loss compared to control of administering TFPI-106 antibody (6 mg/kg) and recombinant Factor VIII alone (200 units/kg) to hemophilia A mice immediately after tail cutting. In FIG. Figure 9B shows the effect on blood loss compared to a control of administering three different doses of TFPI-106 antibody (6 mg/kg) and recombinant Factor VIII alone (200 units/kg) to hemphilia A mice 2 minutes after tail cutting.

На ФИГ. 10А показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным Фактором VIII на время свертывания цельной крови от человеческого пациента с тяжелой гемофилией А. На ФИГ. 10Б показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным Фактором VIII на пиковое образование тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами, от человеческого пациента с тяжелой гемофилией А.In FIG. 10A shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant Factor VIII on the clotting time of whole blood from a human patient with severe hemophilia A. FIG. 10B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant Factor VIII on peak thrombin generation in platelet-rich plasma from a human patient with severe hemophilia A.

На ФИГ. 11А показан эффект разных концентраций TFPI 106 и ингибиторов FVIII на время свертывания цельной крови от человеческого пациента с тяжелой гемофилией А. На ФИГ. 11Б показан эффект разных концентраций TFPI 106 и ингибиторов FVIII на пиковое образование тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами, от человеческого пациента с тяжелой гемофилией А. На ФИГ. 11В показан эффект разных концентраций TFPI 106 и ингибиторов FVIII на время свертывания плазмы, обедненной тромбоцитами, от человеческого пациента с тяжелой гемофилией А.In FIG. 11A shows the effect of different concentrations of TFPI 106 and FVIII inhibitors on the clotting time of whole blood from a human patient with severe hemophilia A. FIG. 11B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 and FVIII inhibitors on peak thrombin generation in platelet-rich plasma from a human patient with severe hemophilia A. FIG. 11B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 and FVIII inhibitors on the clotting time of platelet-poor plasma from a human patient with severe hemophilia A.

На ФИГ. 12А показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным фактором VIII на время свертывания цельной крови от человеческого пациента с умеренной гемофилией А. На ФИГ. 12Б показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным фактором VIII на пиковое образование тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами, от человеческого пациента с умеренной гемофилией А. На ФИГ. 12В показан эффект разных концентраций TFPI 106 на время свертывания плазмы, обедненной тромбоцитами, от человеческого пациента с умеренной гемофилией А.In FIG. 12A shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant factor VIII on the clotting time of whole blood from a human patient with moderate hemophilia A. FIG. 12B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant factor VIII on peak thrombin generation in platelet-rich plasma from a human patient with moderate hemophilia A. FIG. 12B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 on the clotting time of platelet-poor plasma from a human patient with moderate hemophilia A.

На ФИГ. 13А показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным фактором IX на время свертывания цельной крови от человеческого пациента с умеренной гемофилией В. На ФИГ. 13Б показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным фактором IX на пиковое образование тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами, от человеческого пациента с умеренной гемофилией В. На ФИГ. 13В показан эффект разных концентраций TFPI 106 на время свертывания плазмы, обедненной тромбоцитами, от человеческого пациента с умеренной гемофилией В.In FIG. 13A shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant factor IX on the clotting time of whole blood from a human patient with moderate hemophilia B. FIG. 13B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant factor IX on peak thrombin generation in platelet-rich plasma from a human patient with moderate hemophilia B. FIG. 13B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 on the clotting time of platelet-poor plasma from a human patient with moderate hemophilia B.

На ФИГ. 14А показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным Фактором VIII на время свертывания цельной крови от многих человеческих пациентов с гемофилией А. На ФИГ. 14Б показан эффект разных концентраций TFPI 106 по сравнению с рекомбинантным Фактором VIII на пиковое образование тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами, от многих человеческих пациентов с гемофилией А. На ФИГ. 14В показан эффект разных концентраций TFPI 106 на время свертывания плазмы, обедненной тромбоцитами, от многих человеческих пациентов с гемофилией В.In FIG. 14A shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant Factor VIII on the clotting time of whole blood from many human patients with hemophilia A. FIG. 14B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 compared to recombinant Factor VIII on peak thrombin generation in platelet-rich plasma from many human patients with hemophilia A. FIG. 14B shows the effect of different concentrations of TFPI 106 on the clotting time of platelet-poor plasma from many human hemophilia B patients.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

1. Обзор1. Review

Как отмечалось выше, пациенты с гемофилией имеют некоторую способность останавливать кровотечения посредством их интактного внешнего пути; однако, внешний путь является недостаточным для обеспечения защиты, так как он быстро останавливается ингибитором пути тканевого фактора (TFPI). Блокирование/нейтрализация ингибирования TFPI у данных пациентов может компенсировать неадекватное образование FXa и нормализовать предрасположенность к кровотечению. Соответственно, в настоящем описании раскрыты и проиллюстрированы примерами антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые специфично связываются с TFPI и ингибируют его активность.As noted above, patients with hemophilia have some ability to control bleeding through the intact extrinsic pathway; however, the extrinsic pathway is insufficient to provide protection as it is quickly stopped by tissue factor pathway inhibitor (TFPI). Blocking/neutralizing TFPI inhibition in these patients may compensate for inadequate FXa production and normalize bleeding susceptibility. Accordingly, antibodies and antigen-binding fragments thereof that specifically bind to and inhibit TFPI activity are disclosed and exemplified herein.

2. Определения2. Definitions

Под «уменьшением активности TFPI» подразумевается то, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может: (1) уменьшать время свертывания по сравнению со временем свертывания в отсутствии антитела при измерении, например, посредством анализа протромбинового времени в плазме с разведением; (2) уменьшать время свертывания в цельной крови по сравнению со временем свертывания в отсутствии антитела при измерении, например, посредством тромбоэластографии или ротационной тромбоэластометрии; (3) увеличивать образование тромбина; (4) увеличивать активность FXa в присутствии TFPI; (5) увеличивать накопление тромбоцитов в присутствии TFPI; (6) увеличивать образование фибрина в присутствии TFPI; или (7) приводить к любой их комбинации. Ингибирующие активности антитела или антигенсвязывающего фрагмента могут быть, но не обязательно являются дозозависимыми (например, вызывая дозозависимое уменьшение времени свертывания при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением).By “reducing TFPI activity” is meant that the antibody or antigen-binding fragment thereof can: (1) reduce the clotting time compared to the clotting time in the absence of the antibody when measured, for example, by dilution plasma prothrombin time assay; (2) reduce clotting time in whole blood compared to clotting time in the absence of antibody when measured, for example, by thromboelastography or rotational thromboelastometry; (3) increase thrombin generation; (4) increase FXa activity in the presence of TFPI; (5) increase platelet accumulation in the presence of TFPI; (6) increase fibrin formation in the presence of TFPI; or (7) result in any combination thereof. The inhibitory activities of an antibody or antigen binding fragment may be, but are not necessarily dose dependent (eg, causing a dose dependent decrease in clotting time as measured in a diluted plasma prothrombin time assay).

Кроме того, как раскрыто и проиллюстрировано в настоящем описании примерами, были получены структуры сокристаллов антител против TFPI и домена Кунитца 2 (домен K2) TFPI. Структурный анализ показывает то, что типичные антитела по изобретению распознают уникальные эпитопы TFPI посравнению с другими публично раскрытыми антителами против TFPI (которые были использованы в качестве контрольных антител в Примерах). Например, как показано на Фиг. 1А-1А-1Е и Фиг. 2А-2Д, по сравнению с несколькими контрольными антителами против TFPI (R&D (Mab2479) Fab, Novo2021 (также именуемое hz4F36) Fab, 2A8 Fab), антитела TFPI-23, TFPI-24 и 4D8 связываются с неперекрывающимися сайтами в домене K2 TFPI.In addition, as disclosed and exemplified herein, cocrystal structures of anti-TFPI antibodies and the Kunitz domain 2 (K2 domain) of TFPI were obtained. Structural analysis shows that exemplary antibodies of the invention recognize unique TFPI epitopes when compared to other publicly disclosed anti-TFPI antibodies (which were used as control antibodies in the Examples). For example, as shown in FIG. 1A-1A-1E and Fig. 2A-2E, compared to several control anti-TFPI antibodies (R&D (Mab2479) Fab, Novo2021 (also called hz4F36) Fab, 2A8 Fab), TFPI-23, TFPI-24 and 4D8 antibodies bind to non-overlapping sites in the K2 domain of TFPI.

Соответственно, в некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела (и антигенсвязывающие фрагменты) распознают уникальный эпитоп TFPI, расположенный в домене K2 TFPI. На основе структуры сокристалла и расчетного аланинового сканирования данный эпитоп содержит три остатка, которые являются важными для взаимодействия антитело-антиген: Ile105, Arg107 и Leu131 (согласно нумерации человеческого TFPI, как показано в SEQ ID NO: 2). Мутирование данных трех остатков на аланин приводит к потере связывания антитела. Например, все антитела TFPI-23 и его варианты (например, TFPI-106 и TFPI-107) распознают данный эпитоп.Accordingly, in some embodiments, the antibodies (and antigen binding fragments) disclosed herein recognize a unique TFPI epitope located in the K2 domain of TFPI. Based on the cocrystal structure and calculated alanine scan, this epitope contains three residues that are important for antibody-antigen interaction: Ile105, Arg107 and Leu131 (as per human TFPI numbering as shown in SEQ ID NO: 2). Mutation of these three residues to alanine results in loss of antibody binding. For example, all TFPI-23 antibodies and its variants (eg, TFPI-106 and TFPI-107) recognize this epitope.

В некоторых воплощениях распознавание ключевых раскрытых в настоящем описании остатков эпитопа позволяет антителам (и их антигенсвязывающим фрагментам) уменьшать активность TFPI. В частности, кристаллическая структура показывает то, что домен K2 TFPI принимает конусообразную структуру с вершиной конуса (особенно Arg107), связывающейся с FXa. И TFPI-23, и TFPI-24 распознают вершину этой конусообразной области и блокируют связывание TFPI с FXa. Антитело 4D8 распознает другой эпитоп в домене K2. 4D8, хотя и не взаимодействует непосредственно с остатками на вершине конуса, тем не менее, блокирует связывание TFPI с FXa. В Таблице 15 обобщены остатки неперекрывающихся эпитопов, распознаваемых типичными раскрытыми в настоящем описании антителами, по сравнению с другими общеизвестными антителами против TFPI.In some embodiments, recognition of key epitope residues disclosed herein allows the antibodies (and antigen binding fragments thereof) to reduce TFPI activity. In particular, the crystal structure shows that the K2 domain of TFPI adopts a cone-shaped structure with the tip of the cone (especially Arg107) binding to FXa. Both TFPI-23 and TFPI-24 recognize the apex of this cone-shaped region and block TFPI binding to FXa. Antibody 4D8 recognizes a different epitope in the K2 domain. 4D8, although not directly interacting with residues at the apex of the cone, nevertheless blocks the binding of TFPI to FXa. Table 15 summarizes the residues of non-overlapping epitopes recognized by typical antibodies disclosed herein, compared to other commonly known anti-TFPI antibodies.

Кроме того, в некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела и их антигенсвязывающие фрагменты продемонстрировали требуемые фармакологические активности и фармакокинетические свойства для лечения дефицитов свертывания крови (таких как гемофилия) и для уменьшения времени кровотечения.Additionally, in some embodiments, the antibodies and antigen-binding fragments thereof disclosed herein have demonstrated desirable pharmacological activities and pharmacokinetic properties for the treatment of coagulation deficiencies (such as hemophilia) and for reducing bleeding time.

Антитело, которое «преимущественно связывается» или «специфично связывается» (используются в настоящем описании взаимозаменяемо) с эпитопом, представляет собой термин, хорошо понятный в этой области, и способы определения такого специфичного или предпочтительного связывания также хорошо известны в этой области. Говорят, что молекула демонстрирует «специфичное связывание» или «преимущественное связывание», если она взаимодействует или ассоциирует чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело «специфично связывается» или «преимущественно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью, чем с другими веществами. Также антитело «специфично связывается» или «предпочтительно связывается» с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью с этой мишенью в образце, чем с другими веществами в этом образце. Например, антитело, которое специфично или предпочтительно связывается с эпитопом TFPI, представляет собой антитело, которое связывается с этим эпитопом с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью, чем с другими эпитопами TFPI или эпитопами, не являющимися эпитопами TFPI. При прочтении данного определения также понятно то, что, например, антитело (или группировка, или эпитоп), которое специфично или преимущественно связывается с первой мишенью, может или не может специфично или преимущественно связываться со второй мишенью. «Специфичное связывание» или «преимущественное связывание», как таковое, не обязательно требует (хотя оно и может включать) исключительного связывания. В общем, но не обязательно, ссылка на связывание означает преимущественное связывание. «Специфичное связывание» или «преимущественное связывание» включает соединение, например, белок, нуклеиновую кислоту, антитело или тому подобное, которое распознает и связывается с конкретной молекулой, но оно по существу не распознает или не связывается с другими молекулами в образце. Например, антитело или рецептор пептида, которое распознает и связывается с когнатным лигандом или партнером связывания (например, антитело против TFPI, которое связывается с TFPI) в образце, но по существу не распознает и не связывается с другими молекулами в образце, специфично связывается с данным когнатным лигандом или партнером связывания. Таким образом, при назначенных условиях анализа специфичная связывающая группировка (например, антитело или его антигенсвязывающая часть, или рецептор, или его лигандсвязывающая часть) предпочтительно связывается с конкретной молекулой-мишенью и не связывается в значительном количестве с другими компонентами, присутствующими в тестируемом образце.An antibody that "preferentially binds" or "specifically binds" (used interchangeably herein) to an epitope is a term well understood in the art, and methods for determining such specific or preferential binding are also well known in the art. A molecule is said to exhibit "specific binding" or "preferential binding" if it interacts or associates more frequently, faster, for longer duration, and/or with greater affinity with a particular cell or substance than with alternative cells or substances. An antibody "specifically binds" or "preferentially binds" to a target if it binds with greater affinity, avidity, ease, and/or duration than other substances. Also, an antibody "specifically binds" or "preferentially binds" to a target if it binds with greater affinity, avidity, ease and/or duration to that target in a sample than to other substances in that sample. For example, an antibody that specifically or preferentially binds to a TFPI epitope is an antibody that binds to that epitope with greater affinity, avidity, ease, and/or duration than other TFPI epitopes or non-TFPI epitopes. It is also clear from reading this definition that, for example, an antibody (or moiety or epitope) that specifically or preferentially binds to a first target may or may not specifically or preferentially bind to a second target. "Specific binding" or "preferential binding", as such, does not necessarily require (although it may include) exclusive binding. In general, but not necessarily, a reference to binding means preferential binding. “Specific binding” or “preferential binding” includes a compound, such as a protein, nucleic acid, antibody, or the like, that recognizes and binds to a particular molecule, but it does not substantially recognize or bind to other molecules in the sample. For example, an antibody or peptide receptor that recognizes and binds to a cognate ligand or binding partner (e.g., an anti-TFPI antibody that binds to TFPI) in a sample, but does not substantially recognize or bind to other molecules in the sample, specifically binds to that cognate ligand or binding partner. Thus, under the intended assay conditions, a specific binding moiety (eg, an antibody or an antigen-binding moiety, or a receptor, or a ligand-binding moiety thereof) preferentially binds to a particular target molecule and does not bind in significant amounts to other components present in the test sample.

Для отбора антитела или пептида, который специфично связывается с интересующей молекулой, можно использовать множество форматов анализа. Например, твердофазный иммуноанализ ELISA, иммунопреципитация, Biacore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ), KinExA, флуоресцентная сортировка клеток (FACS), Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA) и вестерн-блоттинг находятся среди многих анализов, которые можно использовать для идентификации антитела, которое специфично реагирует с антигеном, или рецептора, или его лигандсвязывающей части, который специфично связывается с когнатным лигандом или партнером связывания. Типично специфичная или селективная реакция будет по меньшей мере вдвое превышать фоновый сигнал или шум, более типично - более чем в 10 раз превышать фон, еще более типично - более чем в 50 раз превышать фон, более типично - более чем в 100 раз превышать фон, еще более типично - более чем в 500 раз превышать фон, еще более типично - более чем в 1000 раз превышать фон, и еще более типично - более чем в 10000 раз превышать фон. Также говорят, что антитело «специфично связывается» с антигеном, когда равновесная константа диссоциации (KD) меньше или равна 7 нМ.A variety of assay formats can be used to select an antibody or peptide that specifically binds to a molecule of interest. For example, ELISA, immunoprecipitation, Biacore™ (GE Healthcare, Piscataway, NJ), KinExA, fluorescent cell sorting (FACS), Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA), and Western blotting are among the many assays which can be used to identify an antibody that specifically reacts with an antigen, or a receptor, or a ligand-binding portion thereof, that specifically binds a cognate ligand or binding partner. Typically, a specific or selective response will be at least twice the background signal or noise, more typically more than 10 times background, even more typically more than 50 times background, more typically more than 100 times background, even more typical is more than 500 times background, even more typical is more than 1000 times background, and even more typical is more than 10,000 times background. An antibody is also said to "specifically bind" to an antigen when the equilibrium dissociation constant ( KD ) is less than or equal to 7 nM.

Термин «аффинность связывания» используется в настоящем описании как мера силы нековалентного взаимодействия между двумя молекулами, например, антителом или его фрагментом и антигеном. Термин «аффинность связывания» используется для описания одновалентных взаимодействий (собственная активность).The term "binding affinity" is used herein as a measure of the strength of a non-covalent interaction between two molecules, for example, an antibody or fragment thereof and an antigen. The term binding affinity is used to describe monovalent interactions (intrinsic activity).

Аффинность связывания между двумя молекулами, например, антителом или его фрагментом и антигеном через одновалентное взаимодействие, может количественно определяться посредством определения константы диссоциации (KD). В свою очередь, KD может определяться измерением кинетики образования и диссоциации комплекса с использованием, например, способа поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (Biacore). Константы скорости, соответствующие ассоциации и диссоциации одновалентного комплекса, именуются константой скорости ассоциации k a (или k on ) и константой скорости диссоциации k d (или k o ff ) соответственно. KD соотносится с k a и k d через уравнение KD = k d /k a . Значение константы диссоциации можно определять непосредственно хорошо известными способами и можно рассчитывать даже для сложных смесей способами, такими как, например, способы, изложенные в Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362). Например, KD может быть установлена с использованием анализа связывания на фильтре на основе двойного нитроцеллюлозного фильтра, как, например, раскрыто Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432). В этой области известны другие стандартные анализы для оценки способности к связыванию лигандов, таких как антитела, в отношении антигенов-мишеней, включающие, например, ELISA, вестерн-блоттинг, RIA (радиоиммуноанализ) и анализ проточной цитометрией, и другие анализы, проиллюстрированные в настоящем описании примерами в других местах. Кинетику связывания и аффинность связывания антитела также можно оценивать стандартными анализами, известными в этой области, такими как поверхностный плазмонный резонанс (SPR), например, с использованием системы Biacore™, или KinExA.The binding affinity between two molecules, for example, an antibody or fragment thereof and an antigen through a monovalent interaction, can be quantified by determining the dissociation constant (K D ). In turn, K D can be determined by measuring the kinetics of complex formation and dissociation using, for example, the surface plasmon resonance (SPR) method (Biacore). The rate constants corresponding to the association and dissociation of a monovalent complex are called the association rate constant k a (or k on ) and the dissociation rate constant k d (or k o f ), respectively. K D is related to k a and k d through the equation K D = k d / k a . The value of the dissociation constant can be determined directly by well known methods and can be calculated even for complex mixtures by methods such as, for example, the methods outlined in Caceci et al. (1984, Byte 9: 340-362). For example, K D can be determined using a dual nitrocellulose filter binding assay, such as disclosed by Wong & Lohman (1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5428-5432). Other standard assays known in the art for assessing the binding ability of ligands such as antibodies to target antigens include, for example, ELISA, Western blotting, RIA and flow cytometry assays, and other assays illustrated herein. descriptions with examples elsewhere. Binding kinetics and binding affinity of an antibody can also be assessed by standard assays known in the art, such as surface plasmon resonance (SPR), for example, using the Biacore™ system, or KinExA.

Можно проводить конкурентный анализ связывания, в котором связывание антитела с антигеном сравнивается со связыванием мишени другим лигандом этой мишени, таким как другое антитело или растворимый рецептор, который в иных условиях связывается с мишенью. Концентрация, при которой происходит 50%-ное ингибирование, известна как Ki. При идеальных условиях Ki эквивалентна KD. Значение Ki никогда не будет меньше, чем KD, таким образом, измерение Ki может быть с удобством заменено с получением верхней границы KD.A competitive binding assay can be performed in which the binding of an antibody to an antigen is compared with the binding of a target by another ligand of that target, such as another antibody or a soluble receptor that otherwise binds to the target. The concentration at which 50% inhibition occurs is known as K i . Under ideal conditions, K i is equivalent to K D . The value of K i will never be less than K D , so the measurement of K i can be conveniently substituted to give an upper bound for K D .

Следуя приведенному выше определению, аффинности связывания, ассоциированные с разными молекулярными взаимодействиями, например, сравнение аффинности связывания разных антител в отношении данного антигена, могут сравниваться посредством сравнения значений KD для индивидуальных комплексов антитело/антиген. Значения KD для антител или других партнеров связывания могут быть определены с использованием хорошо установленных в этой области способов. Одним способом определения KD является применение поверхностного плазмонного резонанса, типично с использованием системы биосенсора, такой как система Biacore®.Following the above definition, the binding affinities associated with different molecular interactions, for example, comparing the binding affinities of different antibodies for a given antigen, can be compared by comparing K D values for individual antibody/antigen complexes. K D values for antibodies or other binding partners can be determined using methods well established in the art. One method for determining K D is the use of surface plasmon resonance, typically using a biosensor system such as the Biacore® system.

Аналогичным образом, специфичность взаимодействия может оцениваться определением и сравнением значения KD для интересующего взаимодействия, например, специфичного взаимодействия между антителом и антигеном, со значением KD неинтересующего взаимодействия, например, контрольного антитела, для которого известно, что оно не связывается с TFPI.Likewise, the specificity of an interaction can be assessed by determining and comparing the K D value for an interaction of interest, such as a specific antibody-antigen interaction, with the K D value for an interaction of no interest, such as a control antibody known not to bind TFPI.

Антитело, которое специфично связывается с его мишенью, может связываться с его мишенью с высокой аффинностью, то есть, демонстрируя низкую KD, как обсуждалось выше, и может связываться с другими молекулами, не являющимися мишенями, с меньшей аффинностью. Например, антитело может связываться с молекулами, не являющимися мишенями, с KD 1×10-6 М или более, более предпочтительно - 1×10-5 М или более, более предпочтительно - 1×10-4 М или более, более предпочтительно - 1×10-3 М или более, даже более предпочтительно - 1×10-2 М или более. Антитело по изобретению предпочтительно способно связываться с его мишенью с аффинностью, которая по меньшей мере вдвое, 10-кратно, 50-кратно, 100-кратно, 200-кратно, 500-кратно, 1000-кратно или 10000-кратно или более превышает его аффинность в отношении связывания с другой молекулой, не являющейся TFPI.An antibody that specifically binds to its target may bind to its target with high affinity, that is, exhibiting a low KD as discussed above, and may bind to other non-target molecules with lower affinity. For example, the antibody may bind to non-target molecules with a K D of 1×10 -6 M or more, more preferably 1×10 -5 M or more, more preferably 1×10 -4 M or more, more preferably - 1×10 -3 M or more, even more preferably - 1×10 -2 M or more. The antibody of the invention is preferably capable of binding to its target with an affinity that is at least twice, 10-fold, 50-fold, 100-fold, 200-fold, 500-fold, 1000-fold or 10,000-fold or more its affinity in relation to binding to another molecule that is not TFPI.

В общем, антителу против TFPI необходимо связываться с TFPI с высокой аффинностью для того, чтобы эффективно уменьшать активности TFPI. Однако когда аффинность связывания антитела является слишком высокой, антитело может подвергаться быстрой интернализации и деградации клеткой-хозяином. Это потенциально может приводить к короткому периоду полужизни и повторным инъекциям. Например, антитело TFPI-23 демонстрирует меньшую аффинность связывания (Kd) по сравнению с TFPI-24 и, при определенных обстоятельствах, оказывается более желательным для клинических применений, так как оно имеет меньшую скорость интернализации и более продолжительный период полужизни. Соответственно, обычно желательными являются аффинности связывания (Kd) от 5×10-7 М до примерно 5×10-11 М, в частности, от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-10 М, особенно для лечения хронического состояния (например, гемофилии), для которого требуются повторные инъекции. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией, считается то, что данный интервал аффинности устанавливает равновесие между (1) аффинностями связывания, которые необходимы для эффективного ингибирования активностей TFPI, и (2) более длительным периодом полужизни и пониженной интернализацией антитела.In general, an anti-TFPI antibody needs to bind to TFPI with high affinity in order to effectively reduce TFPI activities. However, when the binding affinity of an antibody is too high, the antibody may undergo rapid internalization and degradation by the host cell. This could potentially lead to a short half-life and repeated injections. For example, the antibody TFPI-23 exhibits lower binding affinity (Kd) compared to TFPI-24 and, under certain circumstances, appears to be more desirable for clinical applications since it has a lower internalization rate and a longer half-life. Accordingly, binding affinities (Kd) of 5×10 -7 M to about 5×10 -11 M, in particular from about 1×10 -8 M to about 1×10 -10 M, are generally desirable, especially for the treatment of chronic conditions (such as hemophilia) that require repeated injections. Without wishing to be bound by any particular theory, it is believed that this affinity range strikes a balance between (1) the binding affinities that are required to effectively inhibit TFPI activities and (2) the longer half-life and reduced internalization of the antibody.

Положения конкретных аминокислотных остатков в TFPI нумеруются согласно SEQ ID NO: 2 (человеческий TFPIα K1K2K3). Однако настоящее изобретение не ограничивается SEQ ID NO: 2. Соответствующие остатки из других гомологов TFPI, изоформ, вариантов или фрагментов могут быть идентифицированы в соответствии с выравниванием последовательностей или выравниванием структур, которое известно в этой области. Например, выравнивания можно делать вручную или с использованием хорошо известных программ выравнивания последовательностей, таких как ClustalW2 или “BLAST 2 Sequences”, с использованием параметров по умолчанию. Например, Arg107 SEQ ID NO: 2 соответствует Arg104 мышиного TFPI K1K2 (SEQ ID NO: 4).The positions of specific amino acid residues in TFPI are numbered according to SEQ ID NO: 2 (human TFPIα K1K2K3). However, the present invention is not limited to SEQ ID NO: 2. Corresponding residues from other TFPI homologs, isoforms, variants or fragments can be identified according to sequence alignments or structural alignments that are known in the art. For example, alignments can be done manually or using well-known sequence alignment programs such as ClustalW2 or “BLAST 2 Sequences” using default parameters . For example, Arg107 SEQ ID NO: 2 corresponds to Arg104 mouse TFPI K1K2 (SEQ ID NO: 4).

«Антигенсвязывающий фрагмент» антитела относится к фрагменту полноразмерного антитела, который сохраняет способность специфично связываться с антигеном (предпочтительно с по существу такой же аффинностью связывания). Примеры антигенсвязывающего фрагмента включают (1) фрагмент Fab - одновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (2) фрагмент F(ab')2 - двухвалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (3) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и СН1; (4) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела; (5) фрагмент dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), который состоит из домена VH; и (6) выделенную определяющую комплементарность область (CDR), Fv, связанные дисульфидной связью фрагменты Fv (dsFv), и антиидиотипические (анти-Id) антитела и интратела. Кроме того, хотя два домена фрагмента Fv, представляющие собой VL и VH, и кодируются отдельными генами, они могут быть соединены с использованием способов генной инженерии посредством синтетического линкера, который позволяет им сделать одну белковую цепь, в которой области VL и VH образуют пару с формированием одновалентных молекул (известных как одноцепоченый Fv (scFv)); см., например, Bird et al. Science 242:423-426 (1988) и Huston et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988)). Также охватываются другие формы одноцепочечных антител, такие как диатела. Диатела представляют собой двухвалентные биспецифичные антитела, в которых домены VH и VL экспрессируются на одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который является слишком коротким для обеспечения образования пары между двумя доменами на той же самой цепи, принуждая данные домены, посредством этого, образовать пару с комплементарными доменами другой цепи и создавая два антигенсвязывающих сайта (см., например, Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993); Poljak et al., 1994, Structure 2:1121-1123).An "antigen-binding fragment" of an antibody refers to a fragment of a full-length antibody that retains the ability to specifically bind an antigen (preferably with substantially the same binding affinity). Examples of the antigen binding fragment include (1) a Fab fragment, a monovalent fragment consisting of VL, VH, CL and CH1 domains; (2) fragment F(ab')2 - a divalent fragment containing two Fab fragments linked by a disulfide bridge in the hinge region; (3) Fd fragment consisting of VH and CH1 domains; (4) an Fv fragment consisting of the VL and VH domains of one arm of the antibody; (5) a dAb fragment (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), which consists of a VH domain; and (6) a dedicated complementarity determining region (CDR), Fv, disulfide-linked Fv fragments (dsFv), and anti-idiotypic (anti-Id) antibodies and intrabodies. In addition, although the two domains of the Fv fragment, VL and VH, are encoded by separate genes, they can be linked using genetic engineering techniques through a synthetic linker that allows them to make a single protein chain in which the VL and VH regions are paired with the formation of monovalent molecules (known as single-chain Fv (scFv)); see, for example, Bird et al. Science 242:423-426 (1988) and Huston et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988)). Other forms of single chain antibodies, such as diabodies, are also covered. Diabodies are bivalent bispecific antibodies in which the VH and VL domains are expressed on the same polypeptide chain, but using a linker that is too short to allow pairing between two domains on the same chain, forcing the domains thereby to pair with complementary domains of the other chain and creating two antigen-binding sites (see, for example, Holliger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993); Poljak et al., 1994, Structure 2:1121- 1123).

Термин «вариабельный домен» антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела (VL) или вариабельной области тяжелой цепи антитела (VН) - либо к одной, либо в комбинации. Как известно в этой области, каждая из вариабельных областей тяжелой и легкой цепи состоит из четырех каркасных областей (FR), соединенных тремя определяющими комплементарность областями (CDR), и способствует образованию антигенсвязывающего сайта антител.The term "variable domain" of an antibody refers to the variable region of an antibody light chain (VL) or the variable region of an antibody heavy chain (VH), either alone or in combination. As is known in the art, the heavy and light chain variable regions each consist of four framework regions (FRs) connected by three complementarity determining regions (CDRs) and contribute to the formation of the antigen binding site of antibodies.

Остатки в вариабельном домене пронумерованы согласно Kabat, что представляет собой систему нумерации, используемую для вариабельных доменов тяжелой цепи или вариабельных доменов легкой цепи компиляции антител. См., Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). С использованием этой системы нумерации реальная линейная аминокислотная последовательность может содержать меньшее число или дополнительные аминокислоты, соответствующие укорачиванию или вставке в FR или CDR вариабельного домена. Например, вариабельный домен тяжелой цепи может включать вставку одной аминокислоты (остаток 52а согласно Kabat) после остатка 52 Н2 и вставленные остатки (например, остатки 82а, 82b и 82с согласно Kabat) после остатка 82 FR тяжелой цепи. Нумерация остатков по Kabat может быть определена для данного антитела посредством выравнивания в областях гомологии последовательности антитела со «стандартной» последовательностью, пронумерованной по Kabat. Доступны разные алгоритмы для присвоения нумерации по Kabat. В настоящей заявке для присвоения нумерации по Kabat вариабельным областям, если не отмечено иное, используется алгоритм, применяемый в Abysis выпуска 2012 года (www.abysis.org).Residues in the variable domain are numbered according to Kabat, which is the numbering system used for heavy chain variable domains or light chain variable domains of antibody compilation. See Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Using this numbering system, the actual linear amino acid sequence may contain fewer or additional amino acids corresponding to the shortening or insertion into the FR or CDR of the variable domain. For example, a heavy chain variable domain may include a single amino acid insertion (Kabat residue 52a) after H2 residue 52 and inserted residues (eg, Kabat residues 82a, 82b and 82c) after heavy chain FR residue 82. Kabat numbering of residues can be determined for a given antibody by alignment in regions of homology of the antibody sequence with a “standard” Kabat numbered sequence. Different algorithms are available for assigning Kabat numbering. This application uses the algorithm used in the 2012 release of Abysis (www.abysis.org) to assign Kabat numbering to variable regions, unless otherwise noted.

Положения конкретных аминокислотных остатков в антителе (такие как раскрытые в настоящем описании остатки паратопа) также пронумерованы согласно Kabat.The positions of specific amino acid residues in the antibody (such as the paratope residues disclosed herein) are also numbered according to Kabat.

«Определяющие комплементарность области» (CDR) могут быть идентифицированы согласно определениям Kabat, Chothia, сочетанию и Kabat, и Chothia, AbM, контактному и/или конформационному определениям или любому способу определения CDR, хорошо известному в этой области. См., например, Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. (определяющие комплементарность области); Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883 (структуры структурных петель). Определение CDR AbM является компромиссом между Kabat и Chothia, и в нем используется программа для моделирования антител AbM от Oxford Molecular (Accelrys®). «Контактное» определение CDR основывается на наблюдаемых контактах с антигенами, изложенных в MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745. «Конформационное» определение CDR основывается на остатках, которые делают энтальпический вклад в связывание антигена (см., например, Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166). Другие определения границ CDR все же могут строго не следовать одному из приведенных выше подходов, но, тем не менее, перекрываются по меньшей мере с частью CDR по Kabat, хотя они могут быть сокращены или удлинены в свете прогнозирования или экспериментальных данных о том, что конкретные остатки или группы остатков или даже целые CDR значимо не влияют на связывание антигена. Термин «CDR» в том виде, в котором он в настоящем описании используется, может относиться к CDR, определенным любым подходом, известным в этой области, включая комбинации подходов.“Complementarity determining regions” (CDRs) can be identified according to Kabat, Chothia, a combination of both Kabat and Chothia, AbM, contact and/or conformational definitions, or any method of defining CDRs well known in the art. See, for example, Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. (determining the complementarity of the region); Chothia et al., 1989, Nature 342:877-883 (structural loop structures). The AbM CDR definition is a compromise between Kabat and Chothia and uses the AbM antibody modeling program from Oxford Molecular (Accelrys®). The “contact” definition of CDR is based on observed contacts with antigens as outlined in MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 262:732-745. The “conformational” definition of a CDR is based on residues that make an enthalpic contribution to antigen binding (see, e.g., Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166). Other definitions of CDR boundaries may still not strictly follow one of the above approaches, but nevertheless overlap with at least part of Kabat's CDR, although they may be shortened or lengthened in light of prediction or experimental evidence that specific residues or groups of residues or even entire CDRs do not significantly affect antigen binding. The term "CDR" as used herein can refer to CDRs determined by any approach known in the art, including combinations of approaches.

В Примерах (см. Таблицы 3 и 4) CDR определяются следующим образом (нумерация согласно Kabat; H: тяжелая цепь; L: легкая цепь):In the Examples (see Tables 3 and 4), CDRs are defined as follows (numbering according to Kabat; H: heavy chain; L: light chain):

CDR-H1: H26-H35B; CDR-H2: H50-H65; CDR-H3: H95-H102CDR-H1: H26-H35B; CDR-H2: H50-H65; CDR-H3: H95-H102

CDR-L1: L24-L34; CDR-L2: L50-L56; CDR-L3: L89-L97CDR-L1: L24-L34; CDR-L2: L50-L56; CDR-L3: L89-L97

Остатки «каркасной области» (FR) представляют собой остатки вариабельного домена антитела, отличные от остатков CDR. Каркасная область домена VH или VL содержит четыре каркасные подобласти: FR1, FR2, FR3 и FR4, перемежающиеся с CDR в следующей структуре: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4. В Примерах (см. Таблицы 3 и 4) остатки FR включают следующие (нумерация согласно Kabat; H: тяжелая цепь; L: легкая цепь):Framework region (FR) residues are residues of the antibody variable domain other than the CDR residues. The framework region of a VH or VL domain contains four framework subregions: FR1, FR2, FR3 and FR4, interspersed with CDRs in the following structure: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4. In the Examples (see Tables 3 and 4), the FR residues include the following (numbering according to Kabat; H: heavy chain; L: light chain):

FR1FR1 FR2FR2 FR3FR3 FR4FR4 Тяжелая цепьHeavy chain H1-H25H1-H25 H36-H49H36-H49 H66-H94H66-H94 H103-H113H103-H113 Легкая цепьLight chain L1-L23L1-L23 L35-L49L35-L49 L57-L88L57-L88 L98-L107L98-L107

Термин «эпитоп» относится к поверхности или области антигена (Ag), с которой специфично связывается антитело, например, к поверхности или области, содержащей остатки, которые взаимодействуют с антителом (Ab). Эпитопы могут быть линейными или конформационными. В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) находятся линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. «Нелинейный эпитоп» или «конформационный эпитоп» содержит несмежные полипептиды (или аминокислоты) в пределах антигенного белка, с которым связывается антитело, специфичное к данному эпитопу. Термин «эпитоп» в том виде, в котором он в настоящем описании используется, определяется как часть антигена, с которой может специфично связываться антитело, при определении любым способом, хорошо известным в этой области, например, традиционными иммуноанализами. В качестве альтернативы, получение и характеристика антител во время процесса открытия могут прояснять информацию о желательных эпитопах. Из этой информации затем можно подвергать антитела конкурентному скринингу на связывание с тем же самым эпитопом. Подходом для достижения этого является проведение конкурентных и перекрестноконкурентных исследований для нахождения антител, которые конкурируют или перекрестно конкурируют друг с другом за связывание с TFPI. То есть, антитела конкурируют за связывание с антигеном таким образом, что данные антитела конкурируют за связывание с антигенсвязывающим сайтом антитела против TFPI по настоящему изобретению.The term "epitope" refers to the surface or region of an antigen (Ag) to which an antibody specifically binds, for example, the surface or region containing residues that interact with the antibody (Ab). Epitopes can be linear or conformational. In a linear epitope, all points of interaction between the protein and the interacting molecule (such as an antibody) are linear along the primary amino acid sequence of the protein. A "non-linear epitope" or "conformational epitope" contains non-contiguous polypeptides (or amino acids) within an antigenic protein to which an antibody specific for that epitope binds. The term "epitope" as used herein is defined as that portion of an antigen to which an antibody can specifically bind, as determined by any method well known in the art, such as conventional immunoassays. Alternatively, production and characterization of antibodies during the discovery process may provide insight into desired epitopes. From this information, antibodies can then be competitively screened for binding to the same epitope. An approach to achieve this is to conduct competition and cross-competition studies to find antibodies that compete or cross-compete with each other for binding to TFPI. That is, the antibodies compete for binding to the antigen such that the antibodies compete for binding to the antigen binding site of the anti-TFPI antibody of the present invention.

Термин «паратоп» происходит из приведенного выше определения «эпитоп» посредством обращения ракурса и относится к поверхности или области молекулы антитела, которая участвует в связывании антигена, например, к площади или области, содержащей остатки, которые взаимодействуют с антигеном. Паратоп может быть линейным или конформационным (таким как прерывающиеся остатки в CDR).The term "paratope" is derived from the above definition of "epitope" by reversal of perspective and refers to the surface or region of an antibody molecule that is involved in binding an antigen, for example, an area or region containing residues that interact with the antigen. The paratope may be linear or conformational (such as discontinuous residues in the CDR).

Эпитоп/паратоп для этой пары связывания антитело/антиген может быть определен и охарактеризован с разными уровнями детализации с использованием целого ряда экспериментальных и расчетных методов картирования эпитопов. Экспериментальные методы включают мутагенез, рентгеноструктурный анализ, спектроскопию ядерного магнитного резонанса (ЯМР), масс-спектрометрию с обменом водорода/дейтерия (ВД-МС) и разные способы кокурентного связывания. Поскольку каждый способ полагается на уникальный принцип, описание эпитопа тесно связано со способом, посредством которого он был определен. Таким образом, эпитоп/паратоп для этой пары антитело/антиген будет определен по-разному, в зависимости от использованного способа картирования.The epitope/paratope for this antibody/antigen binding pair can be identified and characterized to varying levels of detail using a range of experimental and computational epitope mapping techniques. Experimental methods include mutagenesis, X-ray diffraction, nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy, hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry (HD-MS), and various cocompetitive binding techniques. Because each method relies on a unique principle, the description of an epitope is closely related to the method by which it was defined. Thus, the epitope/paratope for this antibody/antigen pair will be determined differently depending on the mapping method used.

На самом детализированном уровне эпитоп/паратоп для взаимодействия между Ag (антиген) и Ab (антитело) может быть определен посредством пространственных координат, определяющих контакты атомов, присутствующие во взаимодействии Ag-Ab, а также информации об их относительных вкладах в термодинамику связывания. На одном уровне остаток эпитопа/паратопа может быть охарактеризован пространственными координатами, определяющими контакты атомов между Ag и Ab. В одном аспекте остаток эпитопа/паратопа может быть определен по конкретному критерию, например, расстоянию между атомами в Ab и Ag (например, расстояние, равное или меньшее, чем 4Å от тяжелого атома когнатного антитела до тяжелого атома антигена («контактные» остатки)). В другом аспекте остаток эпитопа/паратопа может быть охарактеризован как участвующий во взаимодействии на основе водородной связи с когнатным антителом/антигеном или с молекулой воды, которая также связывается водородной связью с когнатным антителом/антигеном (опосредованное водой связывание водородными связями). В другом аспекте остаток эпитопа/паратопа может быть охарактеризован как образующий солевой мостик с остатком когнатного антитела/антигена. В еще одном другом аспекте остаток эпитопа/паратопа может быть охарактеризован как остаток, имеющий ненулевое изменение в скрытой области поверхности (BSA), из-за взаимодействия с когнатным антителом/антигеном. На другом менее подробном уровне эпитоп/паратоп может быть охарактеризован через функцию, например, посредством конкурентного связывания с другими Ab. Эпитоп/паратоп также может быть определен более общим способом, как содержащий аминокислотные остатки, для которых замена другой аминокислотой будет изменять характеристики взаимодействия между Ab и Ag (например, аланиновое сканирование).At the most detailed level, the epitope/paratope for the interaction between Ag (antigen) and Ab (antibody) can be determined by spatial coordinates defining the atomic contacts present in the Ag-Ab interaction, as well as information about their relative contributions to the thermodynamics of binding. At one level, an epitope/paratope residue can be characterized by spatial coordinates defining atomic contacts between Ag and Ab. In one aspect, an epitope/paratope residue may be defined by a particular criterion, e.g., the distance between atoms in Ab and Ag (e.g., a distance equal to or less than 4 Å from the cognate antibody heavy atom to the antigen heavy atom (“contact” residues)) . In another aspect, the epitope/paratope residue may be characterized as engaging in a hydrogen bond interaction with a cognate antibody/antigen or with a water molecule that also hydrogen bonds with the cognate antibody/antigen (water-mediated hydrogen bonding). In another aspect, the epitope/paratope residue may be characterized as forming a salt bridge with the cognate antibody/antigen residue. In yet another aspect, an epitope/paratope residue can be characterized as a residue having a non-zero change in the buried surface region (BSA) due to interaction with a cognate antibody/antigen. At another less detailed level, an epitope/paratope can be characterized by function, for example by competitive binding with other Abs. An epitope/paratope can also be defined more generally as containing amino acid residues for which substitution with another amino acid would alter the interaction characteristics between Ab and Ag (eg, alanine scan).

В контексте полученной рентгеноструктурным анализом кристаллической структуры, определенной пространственными координатами комплекса между антителом, например, фрагментом Fab или двумя фрагментами Fab, и его антигеном, если не определено иначе, остаток эпитопа относится к остатку TFPI, (1) имеющему тяжелый атом (т.е. атом, не являющийся атомом водорода), который находится в пределах расстояния 4 Å от тяжелого атома когнатного антитела (также именуемые «контактные» остатки); (2) участвующему в водородной связи с остатком когнатного антитела или с молекулой воды, которая также связывается водородной связью с когнатным антителом (опосредованное водой связывание водородными связями), (3) участвующему в солевом мостике с остатком когнатного антитела, и/или (4) имеющему ненулевое изменение в скрытой области поверхности (BSA) из-за взаимодействия с когнатным антителом. В общем, для BSA налагается пороговое значение для того, чтобы избегать включения остатков, которые имеют минимальные взаимодействия. Следовательно, если не определено иначе, остатки эпитопа в категории (4) отбираются, если они имеют BSA 20 Å2 или больше, или участвуют в элетростатических взаимодействиях при связывании антитела с TFPI. Аналогичным образом, в контексте кристаллической структуры, полученной рентгеноструктурным анализом, если не определено иначе или не противоречит контексту, остаток паратопа относится к остатку антитела, (1) имеющему тяжелый атом (т.е. атом, не являющийся атомом водорода), который находится в пределах расстояния 4 Å от тяжелого атома TFPI (также именуемые «контактные» остатки); (2) участвующему в водородной связи с остатком TFPI или с молекулой воды, которая также связывается водородной связью с TFPI (опосредованное водой связывание водородными связями), (3) участвующему в солевом мостике с остатком TFPI, и/или (4) имеющему ненулевое изменение в скрытой области поверхности, из-за взаимодействия с TFPI. Опять-таки, если не определено иначе, остатки паратопа в категории (4) отбираются, если они имеют BSA 20 Å2 или больше, или участвуют в электростатических взаимодействиях при связывании антитела с TFPI.In the context of an X-ray crystal structure determined by the spatial coordinates of a complex between an antibody, e.g., a Fab fragment or two Fab fragments, and its antigen, unless otherwise specified, an epitope residue refers to a TFPI residue (1) having a heavy atom (i.e. . a non-hydrogen atom) that is within 4 Å of a cognate antibody heavy atom (also referred to as “contact” residues); (2) participating in a hydrogen bond with a cognate antibody residue or with a water molecule that is also hydrogen bonding with a cognate antibody (water-mediated hydrogen bonding), (3) participating in a salt bridge with a cognate antibody residue, and/or (4) having a non-zero change in the buried surface region (BSA) due to interaction with the cognate antibody. In general, a threshold is imposed on BSA to avoid including residues that have minimal interactions. Therefore, unless otherwise specified, epitope residues in category (4) are selected if they have a BSA of 20 Å 2 or greater, or participate in electrostatic interactions upon antibody binding to TFPI. Likewise, in the context of an X-ray diffraction crystal structure, unless otherwise specified or inconsistent with the context, a paratope residue refers to an antibody residue (1) having a heavy atom (i.e., an atom other than a hydrogen atom) that is in within a distance of 4 Å from the TFPI heavy atom (also called “contact” residues); (2) participating in a hydrogen bond with a TFPI residue or with a water molecule that is also hydrogen bonding with TFPI (water-mediated hydrogen bonding), (3) participating in a salt bridge with a TFPI residue, and/or (4) having a non-zero change in a hidden region of the surface, due to interaction with TFPI. Again, unless otherwise specified, paratope residues in category (4) are selected if they have a BSA of 20 Å 2 or greater, or participate in electrostatic interactions upon antibody binding to TFPI.

Из того факта, что описания и определения эпитопов зависят от использованного способа картирования эпитопов и получаются с разными уровнями детализации следует то, что сравнения эпитопов для разных Ab на одном и том же Ag, аналогичным образом, могут проводиться с разными уровнями детализации. Например, говорят, что эпитопы, описанные на уровне аминокислот, например, определенные из рентгеновской структуры, являются идентичными, если они содержат тот же самый набор аминокислотных остатков. Говорят, что эпитопы являются отдельными (уникальными), если между эпитопами нет общего аминокислотного остатка. Говорят, что эпитопы, характеризуемые конкурентным связыванием, являются перекрывающимися, если связывание соответствующих антител является взаимоисключающим, т.е. связывание одного антитела исключает одновременное или последовательное связывание другого антитела; и говорят, что эпитопы являются отдельными (уникальными), если антиген способен обеспечивать одновременное связывание обоих соответствующих антител.It follows from the fact that epitope descriptions and definitions depend on the epitope mapping method used and are obtained at different levels of detail that comparisons of epitopes for different Abs on the same Ag can similarly be made at different levels of detail. For example, epitopes described at the amino acid level, such as those determined from X-ray structure, are said to be identical if they contain the same set of amino acid residues. Epitopes are said to be distinct (unique) if there is no common amino acid residue between the epitopes. Competitive binding epitopes are said to be overlapping if the binding of the corresponding antibodies is mutually exclusive, i.e. binding of one antibody precludes simultaneous or sequential binding of another antibody; and epitopes are said to be distinct (unique) if the antigen is capable of simultaneous binding of both corresponding antibodies.

Эпитоп и паратоп для этой пары антитело/антиген могут быть идентифицированы традиционными методами. Например, общее расположение эпитопа может быть определено посредством оценки способности антитела к связыванию с разными фрагментами или вариантами полипептидов TFPI, как в настоящем описании было ранее более подробно описано в других местах. Конкретные остатки в пределах TFPI, которые образуют контакт с конкретными остатками в пределах антитела, также могут быть определены с использованием традиционных методов, таких как методы, описанные в примерах. Например, может быть закристаллизован коплекс антитело/антиген. Кристаллическая структура может быть определена и использована для идентификации специфических сайтов взаимодействия между антителом и антигеном.The epitope and paratope for this antibody/antigen pair can be identified by traditional methods. For example, the general location of an epitope can be determined by assessing the ability of an antibody to bind to different fragments or variants of TFPI polypeptides, as herein previously described in more detail elsewhere. Specific residues within TFPI that contact specific residues within an antibody can also be determined using conventional methods, such as those described in the examples. For example, the antibody/antigen complex may be crystallized. The crystal structure can be determined and used to identify specific sites of interaction between antibody and antigen.

Термин «конкурировать» в том виде, в котором он используется в настоящем описании в отношении антитела, означает то, что связывание первого антитела или его антигенсвязывающей части с антигеном уменьшает последующее связывание того же самого антигена вторым антителом или его антигенсвязывающей частью. В общем, связывание первого антитела создает стерическое препятствие, конформационное измерение или связывание с общим эпитопом (или его частью) таким образом, что связывание второго антитела с тем же самым антигеном уменьшаеся. Для определения того, конкурируют ли друг с другом два антитела, можно использовать стандартные конкурентные анализы. Один подходящий анализ для конкуренции антител включает применение технологии Biacore, в которой может измеряться степень взаимодействий с использованием технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR), как правило, с использованием системы биосенсора (такой как система BIACORE®). Например, SPR можно использовать в анализах конкурентного ингибирования связывания in vitro для определения способности одного антитела ингибировать связывание второго антитела. В другом анализе для измерения конкуренции антител используется подход на основе ELISA. Кроме того, высокопроизводительный способ «сортировки» антител на основе их конкуренции описан в международной патентной заявке № WO2003/48731. Конкуренция присутстует, если одно антитело (или фрагмент) уменьшает связывание другого антитела (или фрагмента) с TFRI. Например, можно использовать конкурентный анализ последовательного связывания, с последовательным добавлением разных антител. Первое антитело может добавляться с достижением связывания, которое близко к насыщению. Затем добавлется второе антитело. Если связывание второго антитела с TFPI не выявляется или значительно снижается (например, снижение по меньшей мере примерно на 10%, по меньшей мере примерно на 20%, по меньшей мере примерно на 30%, по меньшей мере примерно на 40%, по меньшей мере примерно на 50%, по меньшей мере примерно на 60%, по меньшей мере примерно на 70%, по меньшей мере примерно на 80% или по меньшей мере примерно на 90%) по сравнению с параллельным анализом в отсутствие первого антитела (значение для которого может быть принято за 100%), два антитела считаются конкурирующими друг с другом. Типичный конкурентный анализ антител (и анализ перекрывающихся эпитопов) посредством SPR приводится в Примере 6.The term “compete” as used herein in relation to an antibody means that binding of a first antibody or antigen-binding portion thereof to an antigen reduces subsequent binding of the same antigen by a second antibody or antigen-binding portion thereof. In general, binding of a first antibody creates a steric hindrance, conformational dimension, or binding to a common epitope (or portion thereof) such that binding of a second antibody to the same antigen is reduced. Standard competition assays can be used to determine whether two antibodies compete with each other. One suitable antibody competition assay involves the use of Biacore technology, in which the extent of interactions can be measured using surface plasmon resonance (SPR) technology, typically using a biosensor system (such as the BIACORE® system). For example, SPR can be used in in vitro competitive inhibition assays to determine the ability of one antibody to inhibit the binding of a second antibody. Another assay uses an ELISA-based approach to measure antibody competition. In addition, a high-throughput method for “sorting” antibodies based on their competition is described in international patent application No. WO2003/48731. Competition is present if one antibody (or fragment) reduces the binding of another antibody (or fragment) to TFRI. For example, a competitive sequential binding assay can be used, with the sequential addition of different antibodies. The first antibody may be added to achieve binding that is close to saturation. The second antibody will then be added. If the binding of the second antibody to TFPI is not detected or is significantly reduced (e.g., a reduction of at least about 10%, at least about 20%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, or at least about 90%) compared to a parallel assay in the absence of the first antibody (the value for which can be taken as 100%), the two antibodies are considered to compete with each other. A typical antibody competition assay (and epitope overlap assay) by SPR is provided in Example 6.

Антитело против TFPI по изобретению может иметь способность конкурировать или перекрестно конкурировать с другим антителом по изобретению за связывание с TFPI, как описано в настоящем описании. Например, антитело по изобретению может конкурировать или перекрестно конкурировать с описанными в настоящем описании антителами за связывание с TFPI или с подходящим фрагментом или вариантом TFPI, который связывается раскрытыми в настоящем описании антителами.An anti-TFPI antibody of the invention may have the ability to compete or cross-compete with another antibody of the invention for binding to TFPI, as described herein. For example, an antibody of the invention may compete or cross-compete with antibodies disclosed herein for binding to TFPI or a suitable fragment or variant of TFPI that is bound by antibodies disclosed herein.

То есть, если первое антитело против TFPI конкурирует со вторым антителом за связывание с TFPI, но оно не конкурирует, когда с TFPI сначала связывается второе антитело, оно считается «конкурирующим» со вторым антителом (что также называется односторонней конкуренцией). Когда антитело конкурирует с другим антителом, независимо от того, какое антитело сначала связывается с TFPI, тогда антитело «перекрестно конкурирует» за связывание с TFPI с другим антителом. Такие конкурирующие или перекрестноконкурирующие антитела могут быть идентифицированы на основе их способности конкурировать/перекрестно конкурировать с известным антителом по изобретению в стандартных анализах связывания. Для демонстрации конкуренции/перекрестной конкуренции можно использовать, например, SPR, например, с использованием системы Biacore™, анализы ELISA или проточную цитометрию. Такая конкуренция/перекрестная конкуренция может свидетельствовать о том, что два антитела связываются с идентичными, перекрывающимися или аналогичными эпитопами.That is, if the first anti-TFPI antibody competes with the second antibody to bind to TFPI, but it does not compete when the TFPI is first bound by the second antibody, it is considered to be “competing” with the second antibody (also called one-way competition). When an antibody competes with another antibody, regardless of which antibody binds TFPI first, then the antibody "cross-competes" for TFPI binding with the other antibody. Such competing or cross-competing antibodies can be identified based on their ability to compete/cross-compete with a known antibody of the invention in standard binding assays. To demonstrate competition/cross-competition, for example, SPR, eg using the Biacore™ system, ELISA assays or flow cytometry can be used. Such competition/cross-competition may indicate that two antibodies bind to identical, overlapping, or similar epitopes.

Антитело против TFPI по настоящему изобретению, следовательно, может быть идентифицировано способом, который включает анализ связывания, в котором оценивается то, способно ли или нет тестируемое антитело конкурировать/перекрестно конкурировать с контрольным антителом, раскрытым в описании (например, TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24, TFPI-26, TFPI-106, TFPI-107, TFPI-108, TFPI-109, TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113, TFPI-114, 4D8, 6B7.c5, 7A4.D9), за сайт связывания на молекуле-мишени.The anti-TFPI antibody of the present invention can therefore be identified by a method that includes a binding assay that evaluates whether or not the test antibody is able to compete/cross-compete with a control antibody disclosed herein (eg, TFPI-3, TFPI- 21, TFPI-23, TFPI-24, TFPI-26, TFPI-106, TFPI-107, TFPI-108, TFPI-109, TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113, TFPI-114, 4D8, 6B7.c5, 7A4.D9), for the binding site on the target molecule.

Белок «слияние с Fc» представляет собой белок, в котором один или более чем один полипептид связан функциональным образом с полипептидом Fc. Слияние с Fc объединяет область Fc иммуноглобулина с партнером слияния.An Fc fusion protein is a protein in which one or more polypeptides are operably linked to an Fc polypeptide. An Fc fusion combines the Fc region of an immunoglobulin with a fusion partner.

Аффинность связывания антитела может быть выражена в виде значения Kd, которое относится к скорости диссоциации конкретного взаимодействия антиген-антитело. Kd представляет собой отношение скорости диссоциации, также именуемой koff, к скорости ассоциации или kon. Таким образом, Kd равна koff / kon и выражается в виде молярной концентрации (н), и чем меньше Kd, тем сильнее аффинность связывания. Значения Kd для антител можно определять с использованием способов, хорошо отработанных в этой области. Одним типичным способом измерения Kd является поверхностный плазмонный резонанс (SPR), типично с использованием системы биосенсора, такой как система BIACORE®. Кинетический анализ BIAcore включает анализирование связывания и диссоциации антигена от чипов с иммобилизованными молекулами (например, молекулами, содержащими эпитопсвязывающие домены) на их поверхности. Другим способом определения Kd антитела является использование интерферометрии Bio-Layer, как правило, с использованием технологии OCTET® (система Octet QKe, ForteBio). Альтернативно или дополнительно, также можно использовать анализ KinExA® (анализ кинетического исключения), доступный от Sapidyne Instruments (Boise, Id.).The binding affinity of an antibody can be expressed as a Kd value, which refers to the rate of dissociation of a particular antigen-antibody interaction. Kd is the ratio of the rate of dissociation, also called koff, to the rate of association or kon. Thus, Kd is equal to koff/kon and is expressed as molar concentration (n), and the smaller the Kd, the stronger the binding affinity. Kd values for antibodies can be determined using methods well established in this field. One typical way to measure Kd is surface plasmon resonance (SPR), typically using a biosensor system such as the BIACORE® system. The BIAcore kinetic assay involves analyzing the binding and dissociation of antigen from chips with immobilized molecules (eg, molecules containing epitope-binding domains) on their surface. Another way to determine the Kd of an antibody is to use Bio-Layer interferometry, typically using OCTET® technology (Octet QKe system, ForteBio). Alternatively or additionally, the KinExA® assay (kinetic exclusion assay), available from Sapidyne Instruments (Boise, Id.), can also be used.

Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество антитела против TFPI или его фрагмента, или комбинации, содержащей такое антитело или его фрагмент, которое является достаточным количеством для достижения намеченной цели, такой как увеличение свертывания, или, в случае гемофилии, уменьшение времени свертывания, или принесение заметной пользы in vivo субъекту, нуждающемуся в этом, иным способом. Точное количество будет зависеть от многочисленных факторов, включающих компоненты и физические характеристики терапевтической композиции, намеченную популяцию пациентов, особенности индивидуального пациента и тому подобное, но не ограничивающихся ими, и может быть определено специалистом в этой области.The term "therapeutically effective amount" means an amount of an anti-TFPI antibody or fragment thereof, or a combination containing such antibody or fragment thereof, that is a sufficient amount to achieve the intended purpose, such as increasing clotting, or, in the case of hemophilia, decreasing clotting time, or bringing a noticeable benefit in vivo to a subject in need in another manner. The exact amount will depend on numerous factors including, but not limited to, the components and physical characteristics of the therapeutic composition, the intended patient population, the characteristics of the individual patient, and the like, and can be determined by one skilled in the art.

Под термином «синергическое терапевтически эффективное количество» подразумевается количество антитела против TFPI или его антигенсвязывающего фрагмента, которое, при предоставлении со вторым терапевтическим агентом, например, фактором VIIa (FVIIa), обеспечивает заметную пользу (например, уменьшенное время свертывания, уменьшенное время кровотечения, усиленное образование фибрина, повышенное накопление тромбоцитов и тому подобное), которая больше, чем аддитивный измеримый эффект каждого терапевтического агента или антитела, вводимых поодиночке.By "synergistic therapeutically effective amount" is meant an amount of an anti-TFPI antibody or antigen-binding fragment thereof that, when provided with a second therapeutic agent, e.g., factor VIIa (FVIIa), provides a noticeable benefit (e.g., decreased clotting time, decreased bleeding time, increased fibrin formation, increased platelet accumulation, etc.), which is greater than the additive measurable effect of each therapeutic agent or antibody administered alone.

Термин «лечение» включает профилактическое и/или терапевтическое лечения. Если введение осуществляетсяч до клинического проявления состояния, то лечение считается профилактическим. Терапевтическое лечение включает, например, уменьшение интенсивности или ослабление тяжести заболевания, или сокращение продолжительности заболевания.The term "treatment" includes prophylactic and/or therapeutic treatments. If administration is carried out before the clinical manifestation of the condition, then the treatment is considered prophylactic. Therapeutic treatment includes, for example, reducing the intensity or severity of the disease, or shortening the duration of the disease.

Термин «примерно» в том виде, в котором он в настоящем описании используется, относится к плюс/минус 10% от значения.The term "about" as used herein refers to plus/minus 10% of the value.

3. Антитела против TFPI3. Antibodies against TFPI

В настоящем описании раскрыты и проиллюстрированы примерами антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты), которые связываются с ингибитором пути тканевого фактора (TFPI). Данные антитела и фрагменты антител связываются с уникальными эпитопами TFPI. В некоторых воплощениях распознавание определенных остатков эпитопов в TFPI позволяет антителам (и их антигенсвязывающим фрагментам) уменьшать активность TFPI. Кроме того, в некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела (и их антигенсвязывающие фрагменты) продемонстрировали желательные фармакологические активности и фармакокинетические свойства для лечения недостаточностей свертывания и уменьшения времени кровотечения.Disclosed and exemplified herein are antibodies (and antigen binding fragments thereof) that bind to tissue factor pathway inhibitor (TFPI). These antibodies and antibody fragments bind to unique TFPI epitopes. In some embodiments, recognition of certain epitope residues in TFPI allows antibodies (and antigen binding fragments thereof) to reduce the activity of TFPI. Additionally, in some embodiments, the antibodies (and antigen binding fragments thereof) disclosed herein have demonstrated desirable pharmacological activities and pharmacokinetic properties for treating coagulation deficiencies and reducing bleeding time.

А. Ингибитор пути тканевого фактора (TFPI)A. Tissue factor pathway inhibitor (TFPI)

TFPI представляет собой ингибитор протеаз, содержащий многовалентный домен Кунитца. Типичные последовательности TFPI человека, мыши, яванского макака, кролика и крысы приведены в Таблице 2.TFPI is a protease inhibitor containing a multivalent Kunitz domain. Representative human, mouse, cynomolgus, rabbit, and rat TFPI sequences are shown in Table 2.

Человеческий TFPI представляет собой внеклеточный гликопротеин с двумя преобладающими формами - TFPI-альфа и TFPI-бета. TFPI-альфа, который представляет собой гликозилированный белок из 276 аминокислот (MW (молекулярная масса) 43 кДа), является наибольшей формой TFPI и состоит из трех доменов, подобных домену Кунитца, и основной карбоксиконцевой области. Альтернативный сплайсинг дает TFPI-бета, который содержит домен Кунитца 1 (K1) и домен Кунитца 2 (K2), но содержит и альтернативную С-концевую часть, не имеющую домена Кунитца 3 (K3) и основной области. TFPI-бета заякоривается в клеточных мембранах посредством посттрансляционной модификации гликозилфосфатидилинозитольным (GPI) якорем.Human TFPI is an extracellular glycoprotein with two predominant forms, TFPI-alpha and TFPI-beta. TFPI-alpha, which is a glycosylated protein of 276 amino acids (MW (molecular weight) 43 kDa), is the largest form of TFPI and consists of three Kunitz-like domains and a basic carboxy-terminal region. Alternative splicing produces TFPI-beta, which contains a Kunitz domain 1 (K1) and a Kunitz domain 2 (K2), but also contains an alternative C-terminal portion lacking the Kunitz domain 3 (K3) and the core region. TFPI-beta is anchored in cell membranes through post-translational modification with a glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchor.

Первичными мишенями TFPI являются протеазы Фактор Xa (FXa) и Фактор VIIa (FVIIa), которые являются ключевыми факторами на стадии инициации каскада свертывания крови. Биохимический анализ выявил то, что K2 является ингибитором FXa, тогда как K1 ингибирует комплекс FVIIa-тканевой фактор. Роль K3 не ясна, так как он, по-видимому, не имеет прямой активности протеазного ингибитора, но может служить в качестве сайта распознавания для кофактора белка S. С-концевой домен, уникальный для TFPI-альфа, может участвовать в распознавании протромбиназы на поверхности тромбоцитов.The primary targets of TFPI are the proteases Factor Xa (FXa) and Factor VIIa (FVIIa), which are key factors in the initiation step of the coagulation cascade. Biochemical analysis revealed that K2 is an inhibitor of FXa, whereas K1 inhibits the FVIIa-tissue factor complex. The role of K3 is unclear, as it does not appear to have direct protease inhibitor activity, but may serve as a recognition site for the S protein cofactor. The C-terminal domain unique to TFPI-alpha may be involved in prothrombinase surface recognition platelets.

Домен Кунитца 1 (K1) соответстует аминокислотным остаткам 26-76 SEQ ID NO: 2, и домен Кунитца 2 (K2) соответстует остаткам 91-147 SEQ ID NO: 2. Домены K1 и K2 из других гомологов, изоформ, вариантов или фрагментов TFPI могут быть идентифицированы посредством выравнивания последовательностей или структурного выравнивания относительно SEQ ID NO: 2.Kunitz domain 1 (K1) corresponds to amino acid residues 26-76 of SEQ ID NO: 2, and Kunitz domain 2 (K2) corresponds to residues 91-147 of SEQ ID NO: 2. K1 and K2 domains from other TFPI homologs, isoforms, variants or fragments may be identified by sequence alignment or structural alignment relative to SEQ ID NO: 2.

TFPI согласно настоящему описанию включает любую встречающуюся в природе форму TFPI, которая может происходить из любого подходящего организма. Например, TFPI может представлять собой TFPI млекопитающего, как, например, TFPI человека, мыши, крысы, примата, не являющегося человеком, коровы, овцы, собаки, кошки или свиньи. В некоторых воплощениях TFPI представляет собой человеческий TFPI. TFPI может представлять собой зрелую форму TFPI (т.е. белок TFPI, который подвергся посттрансляционному процессингу в подходящей клетке). Такой зрелый белок TFPI, например, может быть гликозилирован.TFPI as used herein includes any naturally occurring form of TFPI, which may be derived from any suitable organism. For example, the TFPI may be a mammalian TFPI, such as a human, mouse, rat, non-human primate, cow, sheep, dog, cat, or pig TFPI. In some embodiments, the TFPI is a human TFPI. TFPI may be a mature form of TFPI (ie, a TFPI protein that has undergone post-translational processing in a suitable cell). Such a mature TFPI protein, for example, can be glycosylated.

TFPI согласно настоящему описанию включает любые функциональные фрагменты или варианты, происходящие из TFPI, встречающегося в природе. Функциональный фрагмент TFPI может представлять собой любую часть или фрагмент TFPI, который сохраняет активность TFPI, такую как способность ингибировать Фактор Xa (FXa), ингибировать активность комплекса FVIIa-тканевой фактор и/или функцию, в качестве отрицательного регулятора свертывания или гемостаза. Например, функциональный фрагмент может содержать домен Кунитца, такой как домен K1, домен K2 или оба домена K1 и K2 TFPI.TFPI as used herein includes any functional fragments or variants derived from naturally occurring TFPI. A functional TFPI fragment can be any portion or fragment of TFPI that retains the activity of TFPI, such as the ability to inhibit Factor Xa (FXa), inhibit FVIIa-tissue factor complex activity, and/or function as a negative regulator of coagulation or hemostasis. For example, a functional fragment may comprise a Kunitz domain, such as a K1 domain, a K2 domain, or both the K1 and K2 domains of TFPI.

Функциональный вариант может содержать одну или более чем одну мутацию по сравнению с встречающимся в природе TFPI и все еще сохранять активность встречающегося в природе TFPI, такую как способность ингибировать Фактор Xa (FXa) или способность ингибировать активность комплекса FVIIa-тканевой фактор. Например, вариант может иметь разные степени идентичности последовательности с SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7, например быть по меньшей мере на 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичным последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 7.A functional variant may contain one or more mutations compared to the naturally occurring TFPI and still retain the activity of the naturally occurring TFPI, such as the ability to inhibit Factor Xa (FXa) or the ability to inhibit the activity of the FVIIa-tissue factor complex. For example, a variant may have varying degrees of sequence identity to SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 or 7, such as being at least 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical to the sequence shown in SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6 or SEQ ID NO: 7.

Фрагменты, варианты, изоформы и гомологи TPFI по изобретению должны сохранять важные остатки эпитопа (такие как Ile105, Arg107 и Leu131, если используются антитела TFPI-23 и TFPI-24), как описано в настоящем описании. Кроме того, TFPI может содержать пять или более чем пять, восемь или более чем восемь, десять или более чем десять, двенадцать или более чем двенадцать, или пятнадцать или более чем пятнадцать доступных с поверхности остатков домена K2 TFPI. Доступный с поверхности остаток представляет собой остаток, имеющий больше чем 40%-ную относительную доступность.The TPFI fragments, variants, isoforms and homologues of the invention should retain important epitope residues (such as Ile105, Arg107 and Leu131 if TFPI-23 and TFPI-24 antibodies are used) as described herein. In addition, TFPI may contain five or more than five, eight or more than eight, ten or more than ten, twelve or more than twelve, or fifteen or more than fifteen surface accessible residues of the K2 domain of TFPI. A surface accessible residue is a residue having greater than 40% relative accessibility.

Например, для домена K2 TFPI (см., например, SEQ ID NO: 2) следующие аминокислотные остатки имеют больше чем 40%-ную относительную доступность: 94-95, 98, 100-110, 118-121, 123-124, 131, 134, 138-142 и 144-145. TFPI может содержать пять или более чем пять, восемь или более чем восемь, десять или более чем десять, двенадцать или более чем двенадцать, или пятнадцать или более чем пятнадцать данных остатков, как, например, фрагмент TFPI, который включает пять или более чем пять, восемь или более чем восемь, десять или более чем десять, двенадцать или более чем двенадцать, или пятнадцать или более чем пятнадцать данных остатковFor example, for the K2 domain of TFPI (see, e.g., SEQ ID NO: 2), the following amino acid residues have greater than 40% relative accessibility: 94-95, 98, 100-110, 118-121, 123-124, 131 , 134, 138-142 and 144-145. TFPI may contain five or more than five, eight or more than eight, ten or more than ten, twelve or more than twelve, or fifteen or more than fifteen data residues, such as a TFPI fragment that includes five or more than five , eight or more than eight, ten or more than ten, twelve or more than twelve, or fifteen or more than fifteen given balances

Б. Антитела против TFPIB. Antibodies against TFPI

Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению специфично связывается с доменом K2 TFPI и может ингибировать его взаимодействие с FXa и/или уменьшать активности TFPI.The antibody or antigen binding fragment thereof of the invention specifically binds to the K2 domain of TFPI and can inhibit its interaction with FXa and/or reduce TFPI activities.

TFPI-23 и вариантыTFPI-23 and variants

В одном аспекте данное изобретение включает антитело TFPI-23 и варианты
TFPI-23, которые были созданы для увеличения содержания остатков каркасной области человеческой зародышевой линии («модифицированные на уровне зародышевой линии»). Например, TFPI-106 содержит мутации H1Q на Е и H3V на L (нумерация по Kabat), и TFPI-107 содержит мутации H1Q на Е, H5V на L и H94I на K (нумерация по Kabat). Для целей данного изобретения родительское антитело TFPI-23 и вариант зародышевой линии TFPI-106 являются взаимозаменимыми в взаимодействиях остатка эпитопа и остатка паратопа.In one aspect, the invention includes the TFPI-23 antibody and variants
TFPI-23, which were designed to increase the content of human germline framework region residues (“germline modified”). For example, TFPI-106 contains the mutations H1Q to E and H3V to L (Kabat numbering), and TFPI-107 contains the mutations H1Q to E, H5V to L, and H94I to K (Kabat numbering). For purposes of this invention, the parent antibody TFPI-23 and the germline variant TFPI-106 are interchangeable in epitope residue and paratope residue interactions.

В одном аспекте согласно изобретению предложено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с эпитопом в домене Кунитца 2 (K2) ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), где указанный эпитоп содержит остатки Ile105, Arg107 и Leu131 согласно нумерации SEQ ID NO: 2. В некоторых воплощениях антитело или его антигенсвязывающий фрагмент не связывается с доменом Кунитца 1 (K1) TFPI.In one aspect, the invention provides an isolated antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to an epitope in the tissue factor pathway inhibitor (TFPI) Kunitz 2 (K2) domain, wherein said epitope comprises residues Ile105, Arg107 and Leu131 as identified by SEQ ID NO: 2 In some embodiments, the antibody or antigen binding fragment thereof does not bind to the Kunitz 1 (K1) domain of TFPI.

Как раскрыто и проиллюстрировано примерами в настоящем описании, на основе структуры сокристалла и расчетного аланинового сканирования, были обнаружены уникальные эпитопы в домене K2 TFPI. В частности, кристаллическая структура показывает то, что домен K2 TFPI принимает конусообразную структуру с вершиной конуса (в особенности, Arg107), связывающейся с FXa. Все TFPI-23, TFPI-24 и их варианты распознают остатки около вершины этой конусообразной области и блокируют связывание TFPI с FXa. Следовательно, антитела, распознающие остатки эпитопа, расположенные около вершины конуса, являются особенно полезными для ингибирования активностей TFPI.As disclosed and exemplified herein, based on the cocrystal structure and the calculated alanine scan, unique epitopes were discovered in the K2 domain of TFPI. In particular, the crystal structure shows that the K2 domain of TFPI adopts a cone-shaped structure with the tip of the cone (specifically Arg107) binding to FXa. TFPI-23, TFPI-24, and their variants all recognize residues near the apex of this cone-shaped region and block TFPI binding to FXa. Therefore, antibodies that recognize epitope residues located near the apex of the cone are particularly useful for inhibiting TFPI activities.

В некоторых воплощениях согласно изобретению раскрыты эпитопы TFPI, которые содержат три остатка, которые являются важными для взаимодействия антитело-антиген: Ile105, Arg107 и Leu131 (согласно нумерации человеческого TFPI, как показано в SEQ ID NO: 2). Мутирование данных трех остатков на аланин приводит к потере связывания TFPI-23, TFPI-24 и их вариантов. См. Таблицу 28, в которой обобщены результаты аланинового сканирования.In some embodiments, the invention discloses TFPI epitopes that contain three residues that are important for antibody-antigen interaction: Ile105, Arg107, and Leu131 (as human TFPI numbering as shown in SEQ ID NO: 2). Mutation of these three residues to alanine results in loss of binding of TFPI-23, TFPI-24, and their variants. See Table 28 for a summary of the alanine scan results.

Также были идентифицированы дополнительные остатки TPFI, участвующие в связывании с антителом, но эти остатки могут быть мутированы на аланин без значительного дестабилизирующего эффекта. См. Таблицу 28, в которой обобщены результаты аланинового сканирования.Additional TPFI residues involved in antibody binding have also been identified, but these residues can be mutated to alanine without significant destabilizing effect. See Table 28 for a summary of the alanine scan results.

Соответственно, в некоторых воплощениях эпитопы TFPI дополнительно содержат один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Cys106, Gly108, Cys130, Gly132 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2), и их любой комбинации. Данные остатки эпитопа распознаются TFPI-23, TFPI-24 и их вариантами. См. Таблицу 27, в которой показаны общие остатки эпитопов для TFPI-23 и TFPI-24.Accordingly, in some embodiments, TFPI epitopes further comprise one or more residues selected from the group consisting of Cys106, Gly108, Cys130, Gly132 (as designated by SEQ ID NO: 2), and any combination thereof. These epitope residues are recognized by TFPI-23, TFPI-24, and variants thereof. See Table 27 which shows the common epitope residues for TFPI-23 and TFPI-24.

В некоторых воплощениях эпитоп дополнительно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134, Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. Эти остатки эпитопов распознаются TFPI-23 и его вариантами (например, TFPI-106, TFPI-107), но не TFPI-24 (и его вариантами). См. Таблицу 27.In some embodiments, the epitope further comprises one or more residues selected from the group consisting of: Asp102, Arg112, Tyr127, Gly129, Met134, Glu138 (as numbered in SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. These epitope residues are recognized by TFPI-23 and its variants (eg, TFPI-106, TFPI-107), but not by TFPI-24 (and its variants). See Table 27.

В некоторых воплощениях эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126, L140 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) и их любой комбинации. См. Таблицу 27. Согласно WO201007269 (Novo Nordisk), контрольное антитело 4F36 распознает эпитоп, содержащий E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L140.In some embodiments, the epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126, L140 (numbering according to SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. See Table 27. According to WO201007269 (Novo Nordisk), control antibody 4F36 recognizes epitope containing E100, E101, P103, Y109, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 and L140 .

В некоторых воплощениях эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126, G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) и их любой комбинации. См. Таблицу 27. Согласно Таблице 27 контрольные антитела 2А8 и 2А8-200 распознают эпитоп, содержащий D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 и G128.In some embodiments, the epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126, G128 (numbered as per SEQ ID NO: 2) and any combination of them. See Table 27. According to Table 27, control antibodies 2A8 and 2A8-200 recognize epitope containing D31, D32, P34, C35, K36, E100, E101, P103, Y109, K126 and G128.

В некоторых воплощениях эпитоп может относиться к одному или более чем одному «контактному» остатку TFPI (имеющему тяжелый атом (т.е. атом, не являющийся атомом водорода), который находится в пределах расстояния 4 Å от тяжелого атома когнатного антитела) и содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134, Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. См. Таблицу 29Б.In some embodiments, an epitope may refer to one or more "contact" TFPI residues (having a heavy atom (i.e., a non-hydrogen atom) that is within 4 Å of a heavy atom of the cognate antibody) and contains one or more than one residue selected from the group consisting of Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134, Glu138 (as numbered in SEQ ID NO: 2) and any their combinations. See Table 29B.

В некоторых воплощениях эпитоп может относиться к одному или более чем одному остатку TFPI, участвующему в водородной связи с остатком антитела или с молекулой воды, которая также связана водородной связью с когнатным антителом (опосредованное водой связывание водородными связями), и он содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: Asp102, Arg107, Arg112, Tyr127 и Leu131 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. Данные остатки эпитопа участвуют в водородной связи с когнатным антителом. См., Таблицу 29Б.In some embodiments, an epitope may refer to one or more than one TFPI residue involved in a hydrogen bond with an antibody residue or with a water molecule that is also hydrogen bonded with a cognate antibody (water-mediated hydrogen bonding), and it contains one or more one residue selected from the group consisting of: Asp102, Arg107, Arg112, Tyr127 and Leu131 (as designated by SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. These epitope residues participate in hydrogen bonding with the cognate antibody. See Table 29B.

В некоторых воплощениях эпитоп может относиться к остаткам, имеющим ненулевое изменение в скрытой области поверхности (BSA), из-за взаимодействия с когнатным антителом, и он содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Asn133, Met134, Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. См., Таблицу 29Б.In some embodiments, an epitope may refer to residues having a non-zero change in the buried surface region (BSA) due to interaction with a cognate antibody, and it contains one or more residues selected from the group consisting of: Asp102, Gly104, Ile105 , Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Asn133, Met134, Glu138 (as assigned to SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. See Table 29B.

Данным изобретением также охватывается любая комбинация этих разных категорий остатков эпитопа.Any combination of these different categories of epitope residues is also contemplated by this invention.

В некоторых воплощениях эпитоп содержит по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13 или все описанные выше остатки эпитопа, или любую комбинацию разных категорий описанных выше остатков эпитопа.In some embodiments, the epitope contains at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, or all of the above-described epitope residues, or any combination of different categories of the above-described epitope residues.

Остатки паратопа TFPI-23 (и вариантов) могут относиться к следующим контактным остаткам (в пределах 4 Å от остатка эпитопа TFPI): H33 Ala, H47 Trp, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, и L95C Ser; и возможно L93 Ser и L96 Gly (нумерация согласно Kabat). L93 Ser (4,07 Å) и L96 Gly (4,03 Å) являются опцией из-за того, что расстояния незначительно превышают 4 Å, но являются достаточно близкими для округления до 4 Å.TFPI-23 paratope residues (and variants) may refer to the following contact residues (within 4 Å of the TFPI epitope residue): H33 Ala, H47 Trp, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, and L95C Ser; and possibly L93 Ser and L96 Gly (numbering according to Kabat). L93 Ser (4.07 Å) and L96 Gly (4.03 Å) are an option due to the distances being slightly larger than 4 Å, but are close enough to round to 4 Å.

Заметьте то, что приведенные выше контактные остатки представляют собой исходные остатки из антитела TFPI-23. Однако на основе структурного анализа и аланинового сканирования, считается, что целый ряд контактных остатков в TFPI-23 может быть заменен на другой остаток без значительного влияния на связывание антигена. Например, в Таблице 29А показано то, что целый ряд контактных остатков в TFPI-23 может быть заменен на другие остатки и приводит к эффекту на связывание или стабильность, составляющему лишь меньше, чем 0,02 кДж/моль («меньше, чем 0,02 кДж/моль» означает то, что замена имеет нейтральный эффект на связывание). В частности, как показано в Таблице 29А, столбец 4, три положения CDR и 1 положение каркасной области: H47, H58, L91 и L96 (нумерация согласно Kabat) допускают только один или два остатка: (a) H47 представляет собой Trp или Tyr; (б) H58 представляет собой Tyr; (в) L91 представляет собой Tyr или Arg; и (г) L96 представляет собой Gly или Asn. Другие положения CDR могут допускать больше замен, как обобщено в Таблице 29А, столбец 4.Note that the above contact residues are the original residues from the TFPI-23 antibody. However, based on structural analysis and alanine scanning, it is believed that a number of contact residues in TFPI-23 can be replaced by another residue without significantly affecting antigen binding. For example, Table 29A shows that a number of contact residues in TFPI-23 can be replaced by other residues and result in an effect on binding or stability of only less than 0.02 kJ/mol (“less than 0. 02 kJ/mol" means that the substitution has a neutral effect on binding). Specifically, as shown in Table 29A, column 4, three CDR positions and 1 framework position: H47, H58, L91, and L96 (numbered according to Kabat) allow only one or two residues: (a) H47 is Trp or Tyr; (b) H58 is Tyr; (c) L91 is Tyr or Arg; and (d) L96 is Gly or Asn. Other CDR provisions may allow more substitutions, as summarized in Table 29A, column 4.

Соответственно, в некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие остатки (нумерация согласно Kabat):Accordingly, in some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein contains the following residues (Kabat numbering):

(a) H33 представляет собой Ala, Asn, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp или Val;(a) H33 is Ala, Asn, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp or Val;

(б) H47 представляет собой Trp или Tyr;(b) H47 is Trp or Tyr;

(в) H50 представляет собой Ala, Arg, Gly, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr или Val;(c) H50 is Ala, Arg, Gly, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr or Val;

(г) H51 представляет собой Ile, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(d) H51 is Ile, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(д) H52 представляет собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr или Val;(e) H52 is Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr or Val;

(е) H56 представляет собой Ser, Arg, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(f) H56 is Ser, Arg, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(ж) H58 представляет собой Tyr;(g) H58 is Tyr;

(з) H95 представляет собой Leu, Gln, Ile, Phe или Tyr;(h) H95 is Leu, Gln, Ile, Phe or Tyr;

(и) H96 представляет собой Gly, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr или Val;(i) H96 is Gly, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr or Val;

(к) H97 представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(k) H97 is Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(л) H98 представляет собой Thr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(k) H98 is Thr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(м) H99 представляет собой Ser, Ala, Gly, Phe или Pro;(l) H99 is Ser, Ala, Gly, Phe or Pro;

(н) H100 представляет собой Leu, Arg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr или Val;(m) H100 is Leu, Arg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr or Val;

(о) H100A представляет собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr или Trp;(o) H100A is Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr or Trp;

(п) L29 представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(n) L29 is Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(р) L31 представляет собой Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(p) L31 is Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(с) L91 представляет собой Tyr или Arg;(c) L91 is Tyr or Arg;

(т) L95A представляет собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val;(t) L95A is Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

(у) L95B представляет собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; и(y) L95B is Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; And

(ф) L95C представляет собой Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; (f) L95C is Ser, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val;

и возможно содержит (х) L93, представляющий собой Tyr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr или Val; иand optionally contains (x) L93, which is Tyr, Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr or Val; And

(х) L96, представляющий собой Gly или Asn.(x) L96, representing Gly or Asn.

Среди данных остатков Н47 представляет собой остаток каркасной области; а все другие представляют собой остатки CDR.Among these residues, H47 is a framework region residue; and all others are CDR remnants.

При наложении более строгого критерия замены - замена должна приводить к аффинности меньше -0,02 кДж/моль, означая то, что данная замена должна иметь позитивный (нейтральный/стабилизирущий) эффект - контактные остатки являются следующими (нумерация согласно Kabat) (Таблица 29А, столбец 5):When applying a more stringent substitution criterion - the substitution must result in an affinity of less than -0.02 kJ/mol, meaning that the substitution must have a positive (neutral/stabilizing) effect - the contact residues are as follows (numbered according to Kabat) (Table 29A, column 5):

(a) H33 представляет собой Ala или Val;(a) H33 is Ala or Val;

(б) H47 представляет собой Trp;(b) H47 is Trp;

(в) H50 представляет собой Ala;(c) H50 is Ala;

(г) H51 представляет собой Ile;(d) H51 is Ile;

(д) H52 представляет собой Ser, Arg, Lys, Phe или Tyr;(e) H52 is Ser, Arg, Lys, Phe or Tyr;

(е) H56 представляет собой Ser, Arg или Lys;(f) H56 is Ser, Arg or Lys;

(ж) H58 представляет собой Tyr;(g) H58 is Tyr;

(з) H95 представляет собой Leu;(h) H95 is Leu;

(и) H96 представляет собой Gly, Ala, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser или Val;(i) H96 is Gly, Ala, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser or Val;

(к) H97 представляет собой Ala;(k) H97 is Ala;

(л) H98 представляет собой Thr, His, Ile, Leu, Met, Phe или Tyr;(k) H98 is Thr, His, Ile, Leu, Met, Phe or Tyr;

(м) H99 представляет собой Ser;(l) H99 is Ser;

(н) H100 представляет собой Leu, Phe, Trp или Tyr;(m) H100 is Leu, Phe, Trp or Tyr;

(о) H100A представляет собой Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro или Trp;(o) H100A is Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro or Trp;

(п) L29 представляет собой Ala;(n) L29 is Ala;

(р) L31 представляет собой Tyr;(p) L31 is Tyr;

(с) L91 представляет собой Tyr;(c) L91 is Tyr;

(т) L95A представляет собой Ser, Phe, Trp или Tyr;(t) L95A is Ser, Phe, Trp or Tyr;

(у) L95B представляет собой Gly; и(y) L95B is Gly; And

(ф) L95C представляет собой Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr или Val; (f) L95C is Ser, Arg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr or Val;

и возможно: (х) L93 представляет собой Ser; иand optionally: (x) L93 is Ser; And

(ц) L96 представляет собой Gly.(ts) L96 is Gly.

В качестве альтернативы или дополнительно, выбор подходящих замен может быть основан на столбце 6 Таблицы 29А, где верхние 3 остатка отбираются на основе их влияния на аффинность (т.е. 3 лидирующих прогнозируемых сайта с самым стабилизирующим эффектом на аффинность). При этих критериях контактными остатками являются следующие (нумерация согласно Kabat):Alternatively or additionally, the selection of suitable substitutions can be based on column 6 of Table 29A, where the top 3 residues are selected based on their effect on affinity (ie, the top 3 predicted sites with the most stabilizing effect on affinity). Under these criteria, the contact residues are the following (numbering according to Kabat):

(a) H33 представляет собой Ala, Val, His или Phe;(a) H33 is Ala, Val, His or Phe;

(б) H47 представляет собой Trp или Tyr;(b) H47 is Trp or Tyr;

(в) H50 представляет собой Ala, Thr, Ser или Phe;(c) H50 is Ala, Thr, Ser or Phe;

(г) H51 представляет собой Ile, Arg, Lys или Pro;(d) H51 is Ile, Arg, Lys or Pro;

(д) H52 представляет собой Ser, Phe, Arg или Tyr;(e) H52 is Ser, Phe, Arg or Tyr;

(е) H56 представляет собой Ser, Lys, Tyr или Phe;(e) H56 is Ser, Lys, Tyr or Phe;

(ж) H58 представляет собой Tyr;(g) H58 is Tyr;

(з) H95 представляет собой Leu, Ile, Gln или Phe;(h) H95 is Leu, Ile, Gln or Phe;

(и) H96 представляет собой Gly, Arg, Asn или Lys;(i) H96 is Gly, Arg, Asn or Lys;

(к) H97 представляет собой Ala, Leu, Tyr или Ile;(j) H97 is Ala, Leu, Tyr or Ile;

(л) H98 представляет собой Thr, Tyr, Phe или His;(k) H98 is Thr, Tyr, Phe or His;

(м) H99 представляет собой Ser, Pro, Ala или Phe;(l) H99 is Ser, Pro, Ala or Phe;

(н) H100 представляет собой Leu, Tyr, Trp или Phe;(m) H100 is Leu, Tyr, Trp or Phe;

(о) H100A представляет собой Ser, Arg, Leu или Trp;(o) H100A is Ser, Arg, Leu or Trp;

(п) L29 представляет собой Ala, Glu, Asp или Gln;(n) L29 is Ala, Glu, Asp or Gln;

(р) L31 представляет собой Tyr, Glu, Asp или Trp;(p) L31 is Tyr, Glu, Asp or Trp;

(с) L91 представляет собой Tyr или Arg;(c) L91 is Tyr or Arg;

(т) L95A представляет собой Ser, Phe, Tyr или His;(t) L95A is Ser, Phe, Tyr or His;

(у) L95B представляет собой Gly, Glu, Asp или Pro; и(y) L95B is Gly, Glu, Asp or Pro; And

(ф) L95C представляет собой Ser, Trp, Tyr или Phe; (f) L95C is Ser, Trp, Tyr or Phe;

и, возможно: (х) L93 представляет собой Ser, Glu, Asp или His;and optionally: (x) L93 is Ser, Glu, Asp or His;

(ц) L96 представляет собой Gly или Asn.(ts) L96 is Gly or Asn.

Остатки паратопа TFPI-23 (и вариантов) также могут относиться к остаткам, участвующим в водородной связи с остатком TFPI или с молекулой воды, которая также связана водородной связью с TFPI, и включают следующие: H58 Tyr, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, L29 Ala, L31 Tyr и L95B Gl (нумерация согласно Kabat). См., Таблицу 29Б.TFPI-23 paratope residues (and variants) can also refer to residues that engage in a hydrogen bond with a TFPI residue or with a water molecule that is also hydrogen bonded with TFPI and include the following: H58 Tyr, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr , H99 Ser, H100 Leu, L29 Ala, L31 Tyr and L95B Gl (numbering according to Kabat). See Table 29B.

Остатки паратопа TFPI-23 (и вариантов) также могут относиться к остаткам, имеющим ненулевое изменение в BSA из-за взаимодействия с TFPI, и включают следующие (нумерация согласно Kabat): H33 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L93 Ser, L95A Ser и L95B Gly. Применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии) для того, чтобы избежать включения остатков, которые имеют минимальные взаимодействия. См. Таблицу 29Б.TFPI-23 paratope residues (and variants) can also refer to residues that have a non-zero change in BSA due to interaction with TFPI and include the following (numbering according to Kabat): H33 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala , H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L93 Ser, L95A Ser and L95B Gly. A threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or participation in electrostatic interactions) is applied to avoid inclusion of residues that have minimal interactions. See Table 29B.

Если не применяется пороговое значение BSA, остатки паратопа включают следующие: H33 Ala, H34 Met, H47 Trp, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu, H100A Ser, L28 Gly, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L93 Ser, L94 Ser, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser и L96 Gly. См. Таблицу 29В.If the BSA threshold is not applied, paratope residues include the following: H33 Ala, H34 Met, H47 Trp, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu, H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser , H100 Leu, H100A Ser, L28 Gly, L29 Ala, L31 Tyr, L91 Tyr, L93 Ser, L94 Ser, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser and L96 Gly. See Table 29B.

Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может связываться с тем же самым эпитопом или доменом TFPI, что и антитела, которые конкретно проиллюстрированы в настоящем описании примерами. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может быть идентифицировано сравнением его связывания с TFPI со связыванием TFPI-23 или гуманизированных вариантов (например, TFPI-106 и TFPI-107); или сравнением функции данных антител с TFPI-23 и его вариантами. Анализы и тесты, которые можно использовать с целью такой идентификации, включают анализы, оценивающие конкуренцию за связывание с TFPI, и они иллюстрируются в Примерах.An antibody or antigen binding fragment thereof of the invention may bind to the same TFPI epitope or domain as the antibodies specifically exemplified herein. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof can be identified by comparing its binding to TFPI with that of TFPI-23 or humanized variants (eg, TFPI-106 and TFPI-107); or by comparing the function of these antibodies with TFPI-23 and its variants. Assays and assays that can be used for the purpose of such identification include assays that assess competition for binding to TFPI and are illustrated in the Examples.

В одном воплощении антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может связываться с тем же самым эпитопом или областью, что и описанные в настоящем описании антитела, такие как TFPI-23 и его варианты. Это может включать нахождение в контакте с определенным остатком TFPI, как описано выше. Например, антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может связываться с TFPI таким образом, что оно находится в контакте (в пределах 4 Å) с остатком, выбранным из группы, состоящей из: Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134, Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может быть способно к связыванию с эпитопом, содержащим один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134, Glu138 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации.In one embodiment, an antibody or antigen binding fragment thereof of the invention may bind to the same epitope or region as antibodies described herein, such as TFPI-23 and variants thereof. This may involve being in contact with a specific TFPI residue, as described above. For example, an antibody or antigen binding fragment of the invention may bind to TFPI such that it is in contact (within 4 Å) with a residue selected from the group consisting of: Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134, Glu138 (as designated by SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. An antibody or antigen binding fragment of the invention may be capable of binding to an epitope containing one or more residues selected from the group consisting of Asp102, Gly104, Ile105, Cys106, Arg107, Gly108, Arg112, Tyr127, Gly129, Cys130, Leu131, Gly132, Met134, Glu138 (as designated by SEQ ID NO: 2) and any combination thereof.

Антитело и его антигенсвязывающий фрагмент может содержать по меньшей мере один остаток паратопа (нумерация согласно Kabat), который находится в пределах 4,0 Å от по меньшей мере одного остатка эпитопа TFPI (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) следующим образом: остаток эпитопа 102 Asp находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа H58 Tyr; остаток эпитопа 104 Gly находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа H58 Tyr; остаток эпитопа 105 Ile находится в пределах 4,0 Å от остатков паратопа H33 Ala, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu; остаток эпитопа 106 Cys находится в пределах 4,0 Å от остатков паратопа H100 Leu, H100A Ser; остаток эпитопа 107 Arg находится в пределах 4,0 Å от остатков паратопа H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu; остаток эпитопа 108 Gly находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа H100 Leu; остаток эпитопа 112 Arg находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа L29 Ala, L31 Tyr; остаток эпитопа 127 Tyr находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа L31 Tyr; остаток эпитопа 129 Gly находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа L31 Tyr; остаток эпитопа 130 Cys находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа L91 Tyr, L95B Gly; остаток эпитопа 131 Leu находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа H47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser; остаток эпитопа 132 Gly находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа H58 Tyr, L95A Ser; H58 Tyr, L95A Ser; остаток эпитопа 134 Met находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа L95A Ser; и остаток эпитопа 138 Glu находится в пределах 4,0 Å от остатка паратопа L29 Ala. См. Таблицы 29А и 29Б.The antibody and its antigen binding fragment may contain at least one paratope residue (Kabat numbering) that is within 4.0 Å of at least one TFPI epitope residue (SEQ ID NO: 2) as follows: epitope residue 102 Asp is within 4.0 Å of the paratope residue H58 Tyr; epitope residue 104 Gly is within 4.0 Å of paratope residue H58 Tyr; epitope residue 105 Ile is within 4.0 Å of paratope residues H33 Ala, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu; epitope residue 106 Cys is within 4.0 Å of paratope residues H100 Leu, H100A Ser; epitope residue 107 Arg is within 4.0 Å of paratope residues H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu; epitope residue 108 Gly is within 4.0 Å of paratope residue H100 Leu; epitope residue 112 Arg is within 4.0 Å from paratope residue L29 Ala, L31 Tyr; Tyr epitope residue 127 is within 4.0 Å of Tyr paratope residue L31; epitope residue 129 Gly is within 4.0 Å of paratope residue L31 Tyr; epitope residue 130 Cys is within 4.0 Å of paratope residue L91 Tyr, L95B Gly; epitope residue 131 Leu is within 4.0 Å of paratope residue H47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser; epitope residue 132 Gly is within 4.0 Å of paratope residue H58 Tyr, L95A Ser; H58 Tyr, L95A Ser; epitope residue 134 Met is within 4.0 Å of paratope residue L95A Ser; and epitope residue 138 Glu is within 4.0 Å of paratope residue L29 Ala. See Tables 29A and 29B.

Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также может содержать по меньшей мере один остаток паратопа (нумерация согласно Kabat), который может образовать водородную связь с остатком эпитопа TFPI (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) следующим образом: остаток эпитопа 102 Asp может образовать водородную связь с остатком паратопа H58 Tyr; остаток эпитопа 107 Arg может образовать водородную связь по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser и H100 Leu; остаток эпитопа 112 Arg может образовать водородную связь с остатком паратопа L29 Ala; остаток эпитопа 127 Tyr может образовать водородную связь с остатком паратопа L31 Tyr; и остаток эпитопа 131 Leu может образовать водородную связь с остатком паратопа L95B Gly. См. Таблицу 29Б.The antibody or antigen binding fragment thereof may also contain at least one paratope residue (Kabat numbering) that can form a hydrogen bond with a TFPI epitope residue (SEQ ID NO: 2) as follows: Asp epitope residue 102 can form a hydrogen bond with paratope residue H58 Tyr; the 107 Arg epitope residue may form a hydrogen bond with at least one paratope residue selected from the group consisting of H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser and H100 Leu; epitope residue 112 Arg can form a hydrogen bond with paratope residue L29 Ala; epitope residue 127 Tyr can form a hydrogen bond with paratope residue L31 Tyr; and the epitope residue 131 Leu can form a hydrogen bond with the paratope residue L95B Gly. See Table 29B.

Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент также может содержать по меньшей мере один остаток паратопа (нумерация согласно Kabat), имеющий ненулевое изменение в BSA из-за взаимодействия с остатком эпитопа (нумерация согласно SEQ ID NO: 2), следующим образом: остаток эпитопа 102 Asp взаимодействует с остатком паратопа Н58 Tyr; остаток эпитопа 104 Gly взаимодействует с остатком паратопа H58 Tyr; остаток эпитопа 105 Ile взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H33 Ala, H34 Met, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr и H95 Leu; остаток эпитопа 106 Cys взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H95 Leu, H100 Leu, H100A Ser и L91 Tyr; остаток эпитопа 107 Arg взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser и H100 Leu; остаток эпитопа 108 Gly взаимодействует с остатком паратопа H100 Leu; остаток эпитопа 112 Arg взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L29 Ala, L31 Tyr и L93 Ser; остаток эпитопа 127 Tyr взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L31 Tyr и L95B Gly; остаток эпитопа 129 Gly взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H100A Ser, L31 Tyr и L91 Tyr; остаток эпитопа 130 Cys взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr и L95B Gly; остаток эпитопа 131 Leu взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser и L96 Gly; остаток эпитопа 132 Gly взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из H58 Tyr и L95A Ser; остаток эпитопа 133 Asn взаимодействует с остатком паратопа L95A Ser; остаток эпитопа 134 Met взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L93 Ser, L94 Ser и L95A Ser; и остаток эпитопа 138 Glu взаимодействует по меньшей мере с одним остатком паратопа, выбранным из группы, состоящей из L28 Gly, L29 Ala и L93 Ser.The antibody or antigen binding fragment thereof may also contain at least one paratope residue (Kabat numbering) having a non-zero change in BSA due to interaction with an epitope residue (SEQ ID NO: 2), as follows: epitope residue 102 Asp interacts with paratope residue H58 Tyr; epitope residue 104 Gly interacts with paratope residue H58 Tyr; the 105 Ile epitope residue interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H33 Ala, H34 Met, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr and H95 Leu; the 106 Cys epitope residue interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H95 Leu, H100 Leu, H100A Ser and L91 Tyr; the 107 Arg epitope residue interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser and H100 Leu; epitope residue 108 Gly interacts with paratope residue H100 Leu; the 112 Arg epitope residue interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of L29 Ala, L31 Tyr and L93 Ser; epitope residue 127 Tyr interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of L31 Tyr and L95B Gly; the epitope residue 129 Gly interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H100A Ser, L31 Tyr and L91 Tyr; the 130 Cys epitope residue interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr and L95B Gly; the epitope residue 131 Leu interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser and L96 Gly; the 132 Gly epitope residue interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of H58 Tyr and L95A Ser; epitope residue 133 Asn interacts with paratope residue L95A Ser; epitope residue 134 Met interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of L93 Ser, L94 Ser and L95A Ser; and the epitope residue 138 Glu interacts with at least one paratope residue selected from the group consisting of L28 Gly, L29 Ala and L93 Ser.

Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по изобретению может представлять собой любое антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которое содержит любой из описанных выше остатков паратопа, который взаимодействует по меньшей мере с одним остатком эпитопа, перечисленным выше.An antibody or antigen binding fragment thereof of the invention may be any antibody or antigen binding fragment that contains any of the paratope residues described above that interacts with at least one epitope residue listed above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13 или все описанные выше остатки паратопа, или любую комбинацию разных категорий описанных выше остатков паратопа. Кроме того, в данные остатки паратопа могут быть введены консервативные замены. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 консервативных замен согласно Таблице 34.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises at least 1, at least 2, at least 3, at least 4, at least 5, at least 6, at least 7, at least at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, or all of the paratope remains described above, or any combination of different categories of paratope remains described above. In addition, conservative substitutions can be introduced into these paratope residues. For example, an antibody or antigen binding fragment thereof may contain 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 conservative substitutions according to Table 34.

Таблица 34 Консервативные заменыTable 34 Conservative substitutions Остаток Remainder Консервативная заменаConservative substitution Остаток Remainder Консервативная заменаConservative substitution AlaAla SerSer LeuLeu Ile, ValIle, Val ArgArg LysLys LysLys Arg, GlnArg, Gln AsnAsn Gln; HisGln; His MetMet Leu, IleLeu, Ile AspAsp GluGlu PhePhe Met, Leu, TyrMet, Leu, Tyr CysCys SerSer SerSer Thr; GlyThr; Gly GlnGln AsnAsn ThrThr Ser, ValSer, Val GluGlu AspAsp TrpTrp TyrTyr GlyGly ProPro TyrTyr Trp, PheTrp, Phe HisHis Asn, GlnAsn, Gln ValVal Ile, LeuIle, Leu IleIle Leu, ValLeu, Val ProPro --

Антитело по изобретению может иметь способность конкурировать с другим антителом за связывание с TFPI, как описано в настоящем описании. Например, антитело по изобретению может перекрестно конкурировать с TFPI-23 и его описанными в настоящем описании вариантами за связывание с TFPI или с подходящим фрагментом или вариантом TFPI, который связывается антителами TFPI-23. Такие перекрестно конкурирующие антитела могут быть идентифицированы на основе их способности перекрестно конкурировать с проиллюстрированным примером антителом по изобретению в стандартном анализе связывания. Например, для демонстрации перекрестной конкуренции можно использовать SPR (например, с использованием системы Biacore™), анализы ELISA или проточную цитометрию. Такая перекрестная конкуренция может свидетельствовать о том, что два антитела связываются с идентичными, перекрывающимися или аналогичными эпитопами.An antibody of the invention may have the ability to compete with another antibody for binding to TFPI, as described herein. For example, an antibody of the invention may cross-compete with TFPI-23 and variants thereof described herein for binding to TFPI or to a suitable fragment or variant of TFPI that is bound by TFPI-23 antibodies. Such cross-competing antibodies can be identified based on their ability to cross-compete with the illustrated antibody of the invention in a standard binding assay. For example, SPR (eg, using the Biacore™ system), ELISA assays, or flow cytometry can be used to demonstrate cross-competition. Such cross-competition may indicate that two antibodies bind to identical, overlapping, or similar epitopes.

Антитело по изобретению может, следовательно, быть идентифицировано способом, который включает анализ связывания, в котором оценивается то, способно ли или нет тестируемое антитело конкурировать с проиллюстрированным примером антителом по изобретению (таким как TFPI-23 или любым его вариантом, или фрагментом, как описано в настоящем описании) за сайт связывания на молекуле-мишени.An antibody of the invention may therefore be identified by a method that includes a binding assay that evaluates whether or not the antibody being tested is capable of competing with an exemplified antibody of the invention (such as TFPI-23 or any variant or fragment thereof, as described herein) for the binding site on the target molecule.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 38, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 39 и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 40; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 33, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 34 и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 38, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 39 и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 40; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 33, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 34 и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 35. В некоторых воплощениях в каждом CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 38, 39, 40, 33, 34 и 35 соответственно. В некоторых воплощениях данная замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34. В некоторых воплощениях замена делается согласно Таблице 29А, столбец 4, столбец 5 или столбец 6.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 38, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 39 and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 40; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 33, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 34 and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 35. In some embodiments described in Herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 38, CDR- H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 39 and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 40; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 33, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 34 and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 35. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most 3, no more than 2 or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 38, 39, 40, 33, 34 and 35, respectively. In some embodiments, the substitution is a conservative substitution according to Table 34. In some embodiments, the substitution is made according to Table 29A, column 4, column 5, or column 6.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии. Предпочтительные каркасные области тяжелой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VH1, VH3 или VH5. Например, можно использовать каркасные области VH из следующих зародышевых линий: IGHV3-23, IGHV3-7 или IGHV1-69 (названия зародышевых линий основаны на определении зародышевой линии IMGT). Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ. Например, можно использовать каркасные области VL из следующих зародышевых линий: IGKV1-39 или IGKV3-20 (названия зародышевых линий основаны на определении зародышевой линии IMGT). Альтернативно или дополнительно, последовательность каркасной области может представлять собой консенсусную последовательность каркасной области человеческой зародышевой линии, такую как каркасная область человеческой консенсусной последовательности Vλ1, консенсусной последовательности VΚ1, консенсусной последовательности VΚ2, консенсусной последовательности VΚ3, консенсусная последовательность VH3 зародышевой линии, консенсусная последовательность VH1 зародышевой линии, консенсусная последовательность VH5 зародышевой линии или консенсусная последовательность VH4 зародышевой линии.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4. Preferred human germline heavy chain framework regions are those derived from the VH1, VH3 or VH5 germlines. For example, VH framework regions from the following germlines can be used: IGHV3-23, IGHV3-7, or IGHV1-69 (germline names based on the IMGT germline definition). Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline. For example, VL framework regions from the following germlines can be used: IGKV1-39 or IGKV3-20 (germline names based on the IMGT germline definition). Alternatively or additionally, the framework sequence may be a human germline consensus framework sequence, such as a framework region of the human Vλ1 consensus sequence, VΚ1 consensus sequence, VΚ2 consensus sequence, VΚ3 consensus sequence, VH3 germline consensus sequence, VH1 germline consensus sequence , germline VH5 consensus sequence or germline VH4 consensus sequence.

Последовательности каркасных областей человеческой зародышевой линии доступны из разных общедоступных баз данных, таких как V-base, IMGT, NCBI или Abysis.Human germline framework sequences are available from various public databases such as V-base, IMGT, NCBI or Abysis.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 41, 63 и 65; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 36. Любая комбинация данных последовательностей VL и VH также охватывается данным изобретением.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises: (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% is at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 41, 63 and 65; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 36. Any combination of these VL and VH sequences is also covered by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 20; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 26. Любая комбинация данных последовательностей СH и СL также охватывается данным изобретением.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises: (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 20; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 26. Any combination of these CH and CL sequences is also covered by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 64 или SEQ ID NO: 66; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 37. Любая комбинация данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи также охватывается данным изобретением.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises: (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94 %, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO : 64 or SEQ ID NO: 66; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least is at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 37. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also covered by this invention.

TFPI-24 и вариантыTFPI-24 and variants

Структуры сокристаллов показывают то, что TFPI-24 (и его варианты) имеют целый ряд общих остатков эпитопа с TFPI-23. Среди них Ile105, Arg107 и Leu131 (согласно нумерации человеческого TFPI, как показано SEQ ID NO: 2) считаются важными для взаимодействия антитело-антиген. Другие общие остатки эпитопа включают: Cys106, Gly108, C130, L131 и G132 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2).The cocrystal structures reveal that TFPI-24 (and its variants) share a number of epitope residues with TFPI-23. Among them, Ile105, Arg107 and Leu131 (according to human TFPI numbering as shown by SEQ ID NO: 2) are considered important for antibody-antigen interaction. Other common epitope residues include: Cys106, Gly108, C130, L131 and G132 (as assigned to SEQ ID NO: 2).

Остатки эпитопа, которые являются специфичными в отношении TFPI-24 (и его вариантов) включают: Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 и Tyr109. TFPI-23 и его варианты не связываются с данными остатками. См. Таблицу 27. Соответственно, согласно данному изобретению предложено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с эпитопом в K2 TFPI, где указанный эпитоп (1) содержит остатки Ile105, Arg107 и Leu131; (2) возможно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 и Gly132; и (3) дополнительно возможно содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 и Tyr109 (согласно нумерации SEQ ID NO: 2).Epitope residues that are specific for TFPI-24 (and its variants) include: Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 and Tyr109. TFPI-23 and its variants do not bind to these residues. See Table 27. Accordingly, the present invention provides an isolated antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to an epitope in K2 TFPI, wherein said epitope (1) contains residues Ile105, Arg107 and Leu131; (2) optionally contains one or more residues selected from the group consisting of: Cys106, Gly108, Cys130, Leu131 and Gly132; and (3) further optionally contains one or more residues selected from the group consisting of: Glu100, Glu101, Asp102, Gly104 and Tyr109 (as identified by SEQ ID NO: 2).

В некоторых воплощениях эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126, L140 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. См., Таблицу 27. Согласно WO201007269 (Novo Nordisk), контрольное антитело 4F36 распознает эпитоп, содежащий P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L140.In some embodiments, the epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126, L140 (numbered according to SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. See Table 27. According to WO201007269 (Novo Nordisk), the control antibody 4F36 recognizes the epitope containing P103, T111, Y113, F114, N116, Q118, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 and L140.

В некоторых воплощениях эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127, G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. См., Таблицу 27. Согласно Таблице 27 контрольные антитела 2А8 и 2А8-200 распознают эпитоп, содержащий D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127 и G128.In some embodiments, the epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127, G128 (numbered as per SEQ ID NO: 2) and any combination thereof . See Table 27. According to Table 27, control antibodies 2A8 and 2A8-200 recognize epitope containing D31, D32, P34, C35, K36, P103, K126, Y127 and G128.

Остатки паратопа из TFPI-24 (на основе BSA) также были охарактеризованы (см. Таблицу 24) и включают следующие: H33 Ala, H35 Gln, H52 Ser, H53 Asn, H55 Arg, H56 Ser, H95 Phe, H96 Leu, H97 His, H99 Ser, H101 Asp, L31 Met, L32 Tyr, L34 His, L36 Tyr, L50 Arg, L91 Trp и L96 Tyr. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17 или все из этих остатков паратопа. Кроме того, в данные остатки паратопа могут быть введены консервативные замены. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 консервативных замен согласно Таблице 34.Paratope residues from TFPI-24 (based on BSA) have also been characterized (see Table 24) and include the following: H33 Ala, H35 Gln, H52 Ser, H53 Asn, H55 Arg, H56 Ser, H95 Phe, H96 Leu, H97 His , H99 Ser, H101 Asp, L31 Met, L32 Tyr, L34 His, L36 Tyr, L50 Arg, L91 Trp and L96 Tyr. In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, at least 14, at least at least 15, at least 16, at least 17, or all of these paratope residues. In addition, conservative substitutions can be introduced into these paratope residues. For example, an antibody or antigen binding fragment thereof may contain 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 conservative substitutions according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 48, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 49, и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 50; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 43, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 44, и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 45. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 48, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 49, и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 50; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 43, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 44, и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 45. В некоторых воплощениях в каждой CDR по отношению к SEQ ID NO: 48, 49, 50, 43, 44 и 45 соответственно делается не больше, чем 10, не больше, чем 9, не больше, чем 8, не больше, чем 7, не больше, чем 6, не больше, чем 5, не больше, чем 4, не больше, чем 3, не больше, чем 2 или не больше, чем одна замена. В некоторых воплощениях данная замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 48, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 49, and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 50; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 43, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 44, and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 45. In some embodiments, the described as used herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 48, CDR -H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 49, and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 50; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 43, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 44, and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical SEQ ID NO: 45. In some embodiments, in each CDR, with respect to SEQ ID NOs: 48, 49, 50, 43, 44 and 45, respectively, no more than 10, no more than 9, no more than 8, no more than 7, no more than 6, no more than 5, no more than 4, no more than 3, no more than 2 or no more than one replacement. In some embodiments, the substitution is a conservative substitution according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ и Vλ, как описано выше. Также можно использовать консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK and Vλ germlines as described above. Human germline framework consensus sequences can also be used as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 67, 69, 51 и 79; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, 71, 73, 75 и 77. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 67, 69, 51 and 79; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 46, 71, 73, 75 and 77. Any combination of these VL and VH sequences is also contemplated by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 20; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 26. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises: (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 20; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 26. Any combination of these CH and CL sequences is also encompassed by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Данный домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. A given Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент сдержит: (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70 или SEQ ID NO: 80; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76 или SEQ ID NO: 78. Данным изобретением также охватывается любая комбинация данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein will comprise: (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94 %, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO : 68, SEQ ID NO: 70 or SEQ ID NO: 80; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76 or SEQ ID NO: 78. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention.

4D8 и варианты4D8 and variants

Структуры сокристалла также выявляют информацию об эпитопе и паратопе для антитела 4D8 и вариантов. Остатки эпитопа для 4D8 и его вариантов включают: Glu101, Pro103, Tyr109, Thr111, Ser119, Gln121, Glu123, Arg124, Lys126 и Leu140 согласно нумерации SEQ ID NO: 2.The cocrystal structures also reveal epitope and paratope information for the 4D8 antibody and variants. Epitope residues for 4D8 and its variants include: Glu101, Pro103, Tyr109, Thr111, Ser119, Gln121, Glu123, Arg124, Lys126 and Leu140 as numbered SEQ ID NO: 2.

В некоторых воплощениях эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118, C122 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. См. Таблицу 27. Согласно WO201007269 (Novo Nordisk), контрольное антитело 4F36 распознает эпитоп, содержащий E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118 и C122.In some embodiments, the epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118, C122 (numbered as per SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. See Table 27. According to WO201007269 (Novo Nordisk), the control antibody 4F36 recognizes an epitope containing E100, D102, R107, Y113, F114, N116, Q118 and C122.

В некоторых воплощениях эпитоп не содержит один или более чем один остаток, выбранный из группы, состоящей из: D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127, G128 (нумерация согласно SEQ ID NO: 2) и любой их комбинации. См. Таблицу 27. Согласно Таблице 27, контрольные антитела 2A8 и 2А8-200 распознают эпитоп, содержащий D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127 и G128.In some embodiments, the epitope does not contain one or more residues selected from the group consisting of: D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127, G128 (numbered as per SEQ ID NO: 2) and any combination thereof. See Table 27. According to Table 27, control antibodies 2A8 and 2A8-200 recognize epitope containing D31, D32, P34, C35, K36, E100, I105, R107, G108, Y127 and G128.

Также были охарактеризованы остатки паратопа из 4D8 (на основе BSA) (см. Таблицу 20), и они включают следующие: H50 Asp, H57 Thr, H58 Leu, H59 Tyr, H61 Gln, H98 Asp, H99 Tyr, H100 Asp, L30 His, L50 Trp, L92 Tyr, L93 Thr, L94 Thr и L96 Tyr. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13 или все из этих остатков паратопа. Кроме того, в данные остатки паратопа могут быть введены консервативные замены. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может содержать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 консервативных замен согласно Таблице 34.Paratope residues from 4D8 (based on BSA) have also been characterized (see Table 20) and include the following: H50 Asp, H57 Thr, H58 Leu, H59 Tyr, H61 Gln, H98 Asp, H99 Tyr, H100 Asp, L30 His , L50 Trp, L92 Tyr, L93 Thr, L94 Thr and L96 Tyr. In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein contains at least 8, at least 9, at least 10, at least 11, at least 12, at least 13, or all of these paratope residues. In addition, conservative substitutions can be introduced into these paratope residues. For example, an antibody or antigen binding fragment thereof may contain 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8 conservative substitutions according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 87, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 88 и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 89; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 81, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 82 и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 83. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 87, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 88 и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 89; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 81, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 82 и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 83. В некоторых воплощениях в каждой CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 87, 88, 89, 81, 82 и 83 соответственно. В некоторых воплощениях данная замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 87, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 88 and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 89; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 81, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 82 and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 83. In some embodiments described in Herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 87, CDR- H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 88 and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 89; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 81, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 82 and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 83. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most 3, no more than 2 or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 87, 88, 89, 81, 82 and 83, respectively. In some embodiments, the substitution is a conservative substitution according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ, как описано выше. Также могут быть использованы консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline as described above. Human germline framework consensus sequences may also be used, as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 90, 95, 97, 99, 101, 103, 105 и 107; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 84, 109 и 111. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 90, 95, 97, 99, 101, 103, 105 and 107; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 84, 109 and 111. This invention any combination of these VL and VH sequences is also covered.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 20; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 85. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 20; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 91 or SEQ ID NO: 85. Any combination of these sequences is also covered by this invention CH and CL.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 110 или SEQ ID NO: 112. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 110 or SEQ ID NO: 112. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention.

TFPI-3 и вариантыTFPI-3 and variants

В настоящем описании также предложены TFPI-3 и его варианты. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент на основе TFPI-3 содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 16, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 17 и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 18; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 10, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 11 и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 12. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 16, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 17 и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 18; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 10, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 11 и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 12. В некоторых воплощениях в каждой CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 16, 17, 18, 10, 11 и 12 соответственно. В некоторых воплощениях замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.Also provided herein are TFPI-3 and variants thereof. Accordingly, the antibody or antigen binding fragment thereof based on TFPI-3 contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 16, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 17 and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 18; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 10, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 11 and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 12. In some embodiments described in Herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 16, CDR- H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 17 and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 18; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 10, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 11 and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 12. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most 3, no more than 2 or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 16, 17, 18, 10, 11 and 12, respectively. In some embodiments, the replacement is a conservative replacement according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ, как описано выше. Также могут быть использованы консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline as described above. Human germline framework consensus sequences can also be used, as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 19; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 13. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 19; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 13. Any combination of these VL and VH sequences is also encompassed by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 20; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 14. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 20; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 91 or SEQ ID NO: 14. Any combination of these sequences is also covered by this invention CH and CL.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 21; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 15. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 21; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 15. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention .

TFPI-21 и вариантыTFPI-21 and variants

В настоящем описании также предложены TFPI-21 и его варианты. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент на основе TFPI-21 содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 28, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 29, и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 30; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 22, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 23, и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 24. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 28, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 29, и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 30; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 22, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 23, и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 24. В некоторых воплощениях в каждой CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 28, 29, 30, 22, 23 и 24 соответственно. В некоторых воплощениях данная замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.Also provided herein are TFPI-21 and variants thereof. Accordingly, the TFPI-21-based antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 28, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 29, and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 30; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 22, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 23, and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 24. In some embodiments, the described as used herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 28, CDR -H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 29, and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 30; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 22, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 23, and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical SEQ ID NO: 24. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most more than 3, no more than 2, or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 28, 29, 30, 22, 23 and 24, respectively. In some embodiments, the substitution is a conservative substitution according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ, как описано выше. Также могут быть использованы консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline as described above. Human germline framework consensus sequences may also be used, as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 31; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 25. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 31; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 25. Any combination of these VL and VH sequences is also encompassed by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 20; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 26. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 20; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 91 or SEQ ID NO: 26. Any combination of these sequences is also covered by this invention CH and CL.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 32; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 27. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 32; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 27. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention .

TFPI-26 и вариантыTFPI-26 and variants

В настоящем описании также предложены TFPI-26 и его варианты. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент на основе TFPI-26 содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 58, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 59, и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 60; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 53, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 54, и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 55. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 58, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 59, и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 60; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 53, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 54, и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 55. В некоторых воплощениях в каждой CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 58, 59, 60, 53, 54 и 55 соответственно. В некоторых воплощениях данная замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.Also provided herein are TFPI-26 and variants thereof. Accordingly, the TFPI-26-based antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 58, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 59, and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 60; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 53, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 54, and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 55. In some embodiments, the described as used herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 58, CDR -H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 59, and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 60; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 53, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 54, and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical SEQ ID NO: 55. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most more than 3, no more than 2, or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 58, 59, 60, 53, 54 and 55, respectively. In some embodiments, the substitution is a conservative substitution according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ, как описано выше. Также могут быть использованы консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline as described above. Human germline framework consensus sequences may also be used, as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 61; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 56. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 61; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 56. Any combination of these VL and VH sequences is also encompassed by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 20; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 26. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 20; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 26. Any combination of these CH and CL sequences is also encompassed by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 62; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 57. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 62; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 57. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention .

6В7.с5 и варианты6V7.s5 and variants

В настоящем описании также предложены 6В7.с5 и его варианты. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент на основе 6В7.с5 содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 118, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 119, и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 120; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 113, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 114, и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 115. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 118, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 119, и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 120; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 113, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 114, и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 115. В некоторых воплощениях в каждой CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 118, 119, 120, 113, 114 и 115 соответственно. В некоторых воплощениях замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.The present description also proposes 6B7.s5 and its variants. Accordingly, the antibody or antigen binding fragment thereof based on 6B7.c5 contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 118, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 119, and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 120; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 113, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 114, and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 115. In some embodiments, the described as used herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 118, CDR -H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 119, and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 120; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 113, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 114, and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical SEQ ID NO: 115. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most more than 3, no more than 2, or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 118, 119, 120, 113, 114 and 115, respectively. In some embodiments, the replacement is a conservative replacement according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ, как описано выше. Также могут быть использованы консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline as described above. Human germline framework consensus sequences may also be used, as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 121; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 116. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 121; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 116. Any combination of these VL and VH sequences is also encompassed by this invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 85. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 91; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 91 or SEQ ID NO: 85. Any combination of these sequences is also covered by this invention CH and CL.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 122; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 117. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 122; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 117. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention .

7A4.D9 и варианты7A4.D9 and variants

В настоящем описании также предложены 7А4.D9 и его варианты. Соответственно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент на основе 7А4.D9 содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, содержащую SEQ ID NO: 128, CDR-H2, содержащую SEQ ID NO: 129, и CDR-H3, содержащую SEQ ID NO: 130; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, содержащую SEQ ID NO: 123, CDR-L2, содержащую SEQ ID NO: 124, и CDR-L3, содержащую SEQ ID NO: 125. В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит следующие последовательности CDR тяжелой цепи: (1) CDR-H1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 128, CDR-H2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 129, и CDR-H3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 130; и/или (2) следующие последовательности CDR легкой цепи: CDR-L1, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 123, CDR-L2, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 124, и CDR-L3, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 125. В некоторых воплощениях в каждой CDR делается не более чем 10, не более чем 9, не более чем 8, не более чем 7, не более чем 6, не более чем 5, не более чем 4, не более чем 3, не более чем 2 или не более чем одна замена по отношению к SEQ ID NO: 128, 129, 130, 123, 124 и 125 соответственно. В некоторых воплощениях замена представляет собой консервативную замену согласно Таблице 34.The present description also provides 7A4.D9 and its variants. Accordingly, the antibody or antigen binding fragment thereof based on 7A4.D9 contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1 containing SEQ ID NO: 128, CDR-H2 containing SEQ ID NO: 129, and CDR-H3 containing SEQ ID NO: 130; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1 containing SEQ ID NO: 123, CDR-L2 containing SEQ ID NO: 124, and CDR-L3 containing SEQ ID NO: 125. In some embodiments, the described as used herein, the antibody or antigen binding fragment thereof contains the following heavy chain CDR sequences: (1) CDR-H1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 128, CDR -H2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 129, and CDR-H3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 130; and/or (2) the following light chain CDR sequences: CDR-L1, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 123, CDR-L2, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical to SEQ ID NO: 124, and CDR-L3, at least 85%, at least 90%, or at least 95% identical SEQ ID NO: 125. In some embodiments, each CDR is made at most 10, at most 9, at most 8, at most 7, at most 6, at most 5, at most 4, at most more than 3, no more than 2, or no more than one substitution with respect to SEQ ID NO: 128, 129, 130, 123, 124 and 125, respectively. In some embodiments, the replacement is a conservative replacement according to Table 34.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит последовательность человеческой каркасной области. Например, последовательность каркасной области тяжелой цепи может происходить из человеческой VH3 зародышевой линии, VH1 зародышевой линии, VH5 зародышевой линии или VH4 зародышевой линии, как описано выше. Предпочтительные каркасные области легкой цепи человеческой зародышевой линии представляют собой каркасные области, происходящие из зародышевых линий VΚ или Vλ, как описано выше. Также могут быть использованы консенсусные последовательности каркасной области человеческой зародышевой линии, как описано выше.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises a human framework sequence. For example, the heavy chain framework sequence may be derived from human germline VH3, germline VH1, germline VH5, or germline VH4, as described above. Preferred human germline light chain framework regions are those derived from the VK or Vλ germline as described above. Human germline framework consensus sequences can also be used, as described above.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 131; и/или (2) VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 126. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей VL и VH.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a VH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 131; and/or (2) VL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 126. Any combination of these VL and VH sequences is also encompassed by the invention.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) СH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91; и/или (2) СL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 85. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей СН и CL.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) CH comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75% , at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 91; and/or (2) CL containing an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 91 or SEQ ID NO: 85. Any combination of these sequences is also covered by this invention CH and CL.

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домен Fc. Домен Fc может происходить из IgA (например, IgA1 или IgA2), IgG, IgE или IgG (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4).In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises an Fc domain. The Fc domain may be derived from IgA (eg IgA 1 or IgA 2 ), IgG, IgE or IgG (eg IgG 1 , IgG 2 , IgG 3 or IgG 4 ).

В некоторых воплощениях описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит (1) тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 132; и/или (2) легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 127. Данным изобретением также охватывается любая комбинация из данных последовательностей тяжелой цепи и легкой цепи.In some embodiments, an antibody or antigen binding fragment thereof described herein comprises (1) a heavy chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75 %, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94% , at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99% or 100% identical to SEQ ID NO: 132; and/or (2) a light chain comprising an amino acid sequence that is at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least at least 96%, at least 97%, at least 98%, at least 99%, or 100% identical to SEQ ID NO: 127. Any combination of these heavy chain and light chain sequences is also contemplated by this invention .

Также раскрыто антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI и конкурирует за связывание с TFPI с любым описанным в настоящем описании антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, таким как любое из антител, перечисленных в Таблице 3 (или их антигенсвязывающий фрагмент). Например, если связывание антитела или его антигенсвязывающей части с TFPI мешает последующему связыванию TFPI-23 или TFPI-106 с TFPI, данное антитело или его антигенсвязывающая часть конкурирует с TFPI-23 или TFPI-106 за связывание с TFPI.Also disclosed is an antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI and competes for TFPI binding with any antibody or antigen binding fragment thereof described herein, such as any of the antibodies listed in Table 3 (or an antigen binding fragment thereof). For example, if binding of an antibody or antigen binding portion thereof to TFPI interferes with subsequent binding of TFPI-23 or TFPI-106 to TFPI, the antibody or antigen binding portion thereof competes with TFPI-23 or TFPI-106 for binding to TFPI.

Также раскрыто антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфично связывается с доменом K2 TFPI и связывается с тем же самым эпитопом TFPI, что и любое описанное в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, такое как любое из антител, перечисленных в Таблице 3, или его антигенсвязывающий фрагмент.Also disclosed is an antibody or antigen binding fragment thereof that specifically binds to the K2 domain of TFPI and binds to the same TFPI epitope as any antibody or antigen binding fragment thereof described herein, such as any of the antibodies listed in Table 3 or its antigen binding fragment.

Типичный конкурентный анализ антител (и анализ перекрывающихся эпитопов) посредством SPR приводится в Примере 6.A typical antibody competition assay (and epitope overlap assay) by SPR is provided in Example 6.

Раскрытые в настоящем описании антитела и антигенсвязывающие фрагменты включают моноклональные антитела, поликлональные антитела, фрагменты антител (например, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc и т.д.), химерные антитела, биспецифичные антитела, гетероконъюгатные антитела, одноцепочечные (scFv), их мутанты, слитые белки, содержащие часть антитела, доменные антитела (dAb), гуманизированные антитела и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит сайт распознавания антигена требующейся специфичности, включая гликозилированные варианты антител, варианты антител по аминокислотной последовательности и ковалентно модифицированные антитела. Антитела и антигенсвязывающие фагменты могут быть мышиными, крысиными, человеческими или любого другого происхождения (включая химерные или гуманизированные антитела). В некоторых воплощениях антитело представляет собой моноклональное антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой химерное, гуманизированное или человеческое антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой человеческое антитело. В некоторых воплощениях антитело представляет собой гуманизированное антитело.Antibodies and antigen-binding fragments disclosed herein include monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, antibody fragments (e.g., Fab, Fab', F(ab') 2 , Fv, Fc, etc.), chimeric antibodies, bispecific antibodies, heteroconjugate antibodies , single-chain (scFv), their mutants, fusion proteins containing part of an antibody, domain antibodies (dAbs), humanized antibodies and any other modified configuration of an immunoglobulin molecule that contains an antigen recognition site of the required specificity, including glycosylated antibody variants, amino acid sequence variants of antibodies and covalently modified antibodies. Antibodies and antigen-binding fragments may be murine, rat, human, or any other origin (including chimeric or humanized antibodies). In some embodiments, the antibody is a monoclonal antibody. In some embodiments, the antibody is a chimeric, humanized, or human antibody. In some embodiments, the antibody is a human antibody. In some embodiments, the antibody is a humanized antibody.

В некоторых воплощениях раскрытое в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент имеет значение аффинности (Kd) не больше, чем примерно 1×10-3 М, как, например, не больше, чем примерно 5×10-4 М, не больше, чем примерно 4×10-4 М, не больше, чем примерно 3×10-4 М, не больше, чем примерно 2×10-4 М, не больше, чем примерно 1×10-4 М, не больше, чем примерно 9×10-5 М, не больше, чем примерно 8×10-5 М, не больше, чем примерно 7×10-5 М, не больше, чем примерно 6×10-5 М, не больше, чем примерно 5×10-5 М, не больше, чем примерно 4×10-5 М, не больше, чем примерно 3×10-5 М, не больше, чем примерно 2×10-5 М, не больше, чем примерно 1×10-5 М, не больше, чем примерно 9×10-6 М, не больше, чем примерно 8×10-6 М, не больше, чем примерно 7×10-6 М, не больше, чем примерно 6×10-6 М, не больше, чем примерно 5×10-6 М, не больше, чем примерно 4×10-6 М, не больше, чем примерно 3×10-6 М, не больше, чем примерно 2×10-6 М, не больше, чем примерно 1×10-6 М, не больше, чем примерно 9×10-7 М, не больше, чем примерно 8×10-7 М, не больше, чем примерно 7×10-7 М, не больше, чем примерно 6×10-7 М, не больше, чем примерно 5×10-7 М, не больше, чем примерно 4×10-7 М, не больше, чем примерно 3×10-7 М, не больше, чем примерно 2×10-7 М, не больше, чем примерно 1×10-7 М, не больше, чем примерно 9×10-8 М, не больше, чем примерно 8×10-8 М, не больше, чем примерно 7×10-8 М, не больше, чем примерно 6×10-8 М, не больше, чем примерно 5×10-8 М, не больше, чем примерно 4×10-8 М, не больше, чем примерно 3×10-8 М, не больше, чем примерно 2×10-8 М, не больше, чем примерно 1×10-8 М, не больше, чем примерно 9×10-9 М, не больше, чем примерно 8×10-9 М, не больше, чем примерно 7×10-9 М, не больше, чем примерно 6×10-9 М, не больше, чем примерно 5×10-9 М, не больше, чем примерно 4×10-9 М, не больше, чем примерно 3×10-9 М, не больше, чем примерно 2×10-9 М, не больше, чем примерно 1×10-9 М, от примерно 1×10-3 М до примерно 1×10-13 М, от 1×10-4 М до примерно 1×10-13 М, от 1×10-5 М до примерно 1×10-13 М, от примерно 1×10-6 М до примерно 1×10-13 М, от примерно 1×10-7 М до примерно 1×10-13 М, от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-13 М, от примерно 1×10-9 М до примерно 1×10-13 М, от 1×10-3 М до примерно 1×10-12 М, от 1×10-4 М до примерно 1×10-12 М, от 1×10-5 М до примерно 1×10-12 М, от примерно 1×10-6 М до примерно 1×10-12 М, от примерно 1×10-7 М до примерно 1×10-12 М, от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-12 М, от примерно 1×10-9 М до примерно 1×10-12 М, от 1×10-3 М до примерно 1×10-11 М, от 1×10-4 М до примерно 1×10-11 М, от примерно 1×10-5 М до примерно 1×10-11 М, от примерно 1×10-6 М до примерно 1×10-11 М, от примерно 1×10-7 М до примерно 1×10-11 М, от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-11 М, от примерно 1×10-9 М до примерно 1×10-11 М, от 1×10-3 М до примерно 1×10-10 М, от 1×10-4 М до примерно 1×10-10 М, от примерно 1×10-5 М до примерно 1×10-10 М, от примерно 1×10-6 М до примерно 1×10-10 М, от примерно 1×10-7 М до примерно 1×10-10 М, от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-10 М или от примерно 1×10-9 М до примерно 1×10-10 М.In some embodiments, an antibody or antigen-binding fragment disclosed herein has an affinity (Kd) value of no more than about 1×10 -3 M, such as, for example, no more than about 5×10 -4 M, no more than about 4x10 -4 M, not more than about 3x10 -4 M, not more than about 2x10 -4 M, not more than about 1x10 -4 M, not more than about 9 ×10 -5 M, not more than about 8x10 -5 M, not more than about 7x10 -5 M, not more than about 6x10 -5 M, not more than about 5x10 -5 M, not more than about 4x10 -5 M, not more than about 3x10 -5 M, not more than about 2x10 -5 M, not more than about 1x10 -5 M, not more than about 9x10 -6 M, not more than about 8x10 -6 M, not more than about 7x10 -6 M, not more than about 6x10 -6 M, not more than about 5x10 -6 M, not more than about 4x10 -6 M, not more than about 3x10 -6 M, not more than about 2x10 -6 M, not more , not more than about 1x10 -6 M, not more than about 9x10 -7 M, not more than about 8x10 -7 M, not more than about 7x10 -7 M, not more than about 6x10 -7 M, not more than about 5x10 -7 M, not more than about 4x10 -7 M, not more than about 3x10 -7 M, not more than about 2 ×10 -7 M, not more than about 1x10 -7 M, not more than about 9x10 -8 M, not more than about 8x10 -8 M, not more than about 7x10 -8 M, not more than about 6x10 -8 M, not more than about 5x10 -8 M, not more than about 4x10 -8 M, not more than about 3x10 -8 M, not more than about 2x10 -8 M, not more than about 1x10 -8 M, not more than about 9x10 -9 M, not more than about 8x10 -9 M, not more than about 7x10 -9 M, not more than about 6x10 -9 M, not more than about 5x10 -9 M, not more than about 4x10 -9 M, not more less than about 3x10 -9 M, not more than about 2x10 -9 M, not more than about 1x10 -9 M, from about 1x10 -3 M to about 1x10 -13 M , from 1×10 -4 M to about 1×10 -13 M, from 1×10 -5 M to about 1×10 -13 M, from about 1×10 -6 M to about 1×10 -13 M, from about 1×10 -7 M to about 1×10 -13 M, from about 1×10 -8 M to about 1×10 -13 M, from about 1×10 -9 M to about 1×10 -13 M , from 1×10 -3 M to about 1×10 -12 M, from 1×10 -4 M to about 1×10 -12 M, from 1×10 -5 M to about 1×10 -12 M, from about 1x10 -6 M to about 1x10 -12 M, from about 1x10 -7 M to about 1x10 -12 M, from about 1x10 -8 M to about 1x10 -12 M, from about 1×10 -9 M to about 1×10 -12 M, from 1×10 -3 M to about 1×10 -11 M, from 1×10 -4 M to about 1×10 -11 M, from about 1x10 -5 M to about 1x10 -11 M, from about 1x10 -6 M to about 1x10 -11 M, from about 1x10 -7 M to about 1x10 -11 M, from about 1×10 -8 M to about 1×10 -11 M, from about 1×10 -9 M to about 1×10 -11 M, from 1×10 -3 M to about 1×10 -10 M, from 1x10 -4 M to about 1x10 -10 M, from about 1x10 -5 M to about 1x10 -10 M, from about 1x10 -6 M to about 1x10 -10 M, from about 1×10 -7 M to about 1×10 -10 M, from about 1×10 -8 M to about 1×10 -10 M, or from about 1×10 -9 M to about 1×10 -10 M .

В некоторых воплощениях константа диссоциации измеряется с использованием способа поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (Biacore). Термин «поверхностный плазмонный резонанс» относится к оптическому явлению, которое обеспечивает анализ в реальном времени биоспецифических взаимодейсвий посредством выявления изменений концентрации белка в матрице биосенсора, например, с использованием системы BIACORE™. В некоторых воплощениях измерение SPR проводится с использованием прбора Biacore T100 или Т200.In some embodiments, the dissociation constant is measured using the surface plasmon resonance (SPR) method (Biacore). The term “surface plasmon resonance” refers to an optical phenomenon that provides real-time analysis of biospecific interactions by detecting changes in protein concentration in a biosensor matrix, such as using the BIACORE™ system. In some embodiments, the SPR measurement is performed using a Biacore T100 or T200 instrument.

Например, стандартные условия анализа для поверхностного плазмонного резонанса могут быть основаны на иммобилизации лиганда - приблизительно 100 резонансных единиц (RU) IgG на чипе SPR. Очищенные белки-мишени разводятся в буфере до интервала конечных концентраций и инъецируются с требующейся скоростью тока (например, 10-100 мкл/мин) для обеспечения расчета Ka. Давали идти диссоциации для установления скорости диссоциации (Kd), с последующим 5 с импульсом 3 М MgCl2 (или 20 мМ NaOH) для регенерации поверхности чипа. Сенсограммы затем анализируются с использованием программного пакета для оценки кинетики.For example, standard assay conditions for surface plasmon resonance may be based on ligand immobilization of approximately 100 IgG resonance units (RU) on an SPR chip. Purified target proteins are diluted in buffer to a range of final concentrations and injected at the required flow rate (eg, 10-100 μL/min) to enable Ka calculation. Dissociation was allowed to proceed to establish the dissociation rate (Kd), followed by 5 pulses of 3 M MgCl 2 (or 20 mM NaOH) to regenerate the chip surface. The sensorgrams are then analyzed using a kinetics software package.

В типичном воплощении анализ SPR осуществляется согласно условиям, как изложено в Примере 1 под подзаголовком «Поверхностный плазмонный резонанс (SPR)».In a typical embodiment, the SPR analysis is performed according to the conditions as set forth in Example 1 under the subtitle “Surface Plasmon Resonance (SPR).”

В некоторых воплощениях константа диссоциации измеряется с использованием анализа кинетического исключения на основе раствора (KinExA™). В конкретном воплощении измерение KinExA проводится с использованием прибора KinExA™ 3200 (Sapidyne). Анализ кинетического исключения (KinExA™) представляет собой многоцелевую платформу для иммуноанализа (по существу - проточный спектрофлуориметр), который способен к измерению равновесных констант диссоциации и констант скорости ассоциации и диссоциации для взаимодействий антиген/антитело. Поскольку KinExA™ проводится после получения равновесия, он является преимущественной методикой для применения при измерении Kd высокоаффинных взаимодействий, где скорость диссоциации взаимодействия может быть очень медленной. Методологию KinExA™ обычно можно осуществлять, как описано в Drake et al (2004) Analytical Biochemistry 328, 35-43.In some embodiments, the dissociation constant is measured using a solution-based kinetic exclusion assay (KinExA™). In a specific embodiment, the KinExA measurement is performed using a KinExA™ 3200 instrument (Sapidyne). The Kinetic Exclusion Assay (KinExA™) is a multi-purpose immunoassay platform (essentially a flow spectrofluorimeter) that is capable of measuring equilibrium dissociation constants and association and dissociation rate constants for antigen/antibody interactions. Because KinExA™ is performed after equilibrium has been achieved, it is the preferred technique for use in measuring the Kd of high affinity interactions where the rate of dissociation of the interaction may be very slow. The KinExA™ methodology can generally be carried out as described in Drake et al (2004) Analytical Biochemistry 328, 35-43.

В общем, антителу против TFPI необходимо связываться с TFPI с высокой аффинностью для того, чтобы эффективно блокировать активности TFPI. Однако, поскольку TFPI также экспрессируется на поверхности клетки, при слишком высокой аффинности связывания антитела данное антитело может быстро интернализоваться и деградировать клеткой-хозяином. Это потенциально могло бы приводить к короткому периоду полувыведения и повторным инъекциям. Например, антитело TFPI-23 демонстрирует меньшую аффинность связывания (Kd) по сравнению с TFPI-24 и, при определенных обстоятельствах, является более желательным, так как оно имеет меньшую скорость интернализации и более продолжительный период полувыведения. Соответственно, обычно желательными являются аффинности связывания (Kd) от 5×10-7 М до примерно 5×10-11 М, в частности, от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-10 М (от 0,1 нМ до 10 нМ), если желателен более длительный период полувыведения. Считается, что в этом интервале достигается баланс между (1) аффинностями связывания, которые необходимы для эффективного ингибирования активностей TFPI, и (2) более длительным периодом полувыведения и пониженной интернализацией антитела.In general, an anti-TFPI antibody needs to bind to TFPI with high affinity in order to effectively block TFPI activities. However, since TFPI is also expressed on the cell surface, if the binding affinity of the antibody is too high, the antibody may be quickly internalized and degraded by the host cell. This could potentially lead to a short half-life and repeated injections. For example, the antibody TFPI-23 exhibits lower binding affinity (Kd) compared to TFPI-24 and, under certain circumstances, is more desirable since it has a lower internalization rate and a longer half-life. Accordingly, binding affinities (Kd) of 5×10 -7 M to about 5×10 -11 M, in particular from about 1×10 -8 M to about 1×10 -10 M (0.1 nM to 10 nM) if a longer half-life is desired. This range is believed to achieve a balance between (1) the binding affinities that are required to effectively inhibit TFPI activities and (2) the longer half-life and reduced internalization of the antibody.

В частности, считается, что для поддержания еженедельного подкожного дозирования 3 мг/кг желательным является значение Kd от примерно 1×10-8 М до примерно 1×10-10 М (от 0,1 нМ до 10 нМ).In particular, it is believed that for maintenance of weekly subcutaneous dosing of 3 mg/kg, a Kd value of from about 1×10 -8 M to about 1×10 -10 M (0.1 nM to 10 nM) is desirable.

То, уменьшает ли антитело или его антигенсвязывающий фрагмент активность TFPI, или уменьшает связывание TFPI с физиологическим субстратом (например, FXa), может быть определено посредством измерения уменьшения аффинности связывания TFPI с указанным физиологическим субстратом, например, посредством сравнения (1) аффинности связывания TFPI с его субстратом в присутствии антитела против TFPI (или его антигенсвязывающего фрагмента) с (2) аффинностью связывания TFPI с тем же самым субстратом в отсутствие антитела против TFPI. Уменьшение в связывании TFPI с физиологическим субстратом (например, с FXa) может составлять по меньшей мере примерно 10%, по меньшей мере примерно 20%, по меньшей мере примерно 30%, по меньшей мере примерно 40%, по меньшей мере примерно 50%, по меньшей мере примерно 60%, по меньшей мере примерно 70%, по меньшей мере примерно 80%, по меньшей мере примерно 90%, по меньшей мере примерно 95%, по меньшей мере примерно 96%, по меньшей мере примерно 97%, по меньшей мере примерно 98% или по меньшей мере примерно 99% в присутствии антитела против TFPI (или его антигенсвязывающего фрагмента). Ожидаемое связывание TFPI с его физиологическим субстратом в отсутствие антитела (или фрагмента) может быть принято за 100%.Whether an antibody or antigen binding fragment thereof reduces the activity of TFPI, or reduces the binding of TFPI to a physiological substrate (eg, FXa), can be determined by measuring the decrease in the binding affinity of TFPI to the specified physiological substrate, for example, by comparing (1) the binding affinity of TFPI to its substrate in the presence of an anti-TFPI antibody (or an antigen-binding fragment thereof) with (2) the binding affinity of TFPI to the same substrate in the absence of an anti-TFPI antibody. The reduction in binding of TFPI to a physiological substrate (e.g., FXa) may be at least about 10%, at least about 20%, at least about 30%, at least about 40%, at least about 50%, at least about 60%, at least about 70%, at least about 80%, at least about 90%, at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, according to at least about 98% or at least about 99% in the presence of an anti-TFPI antibody (or an antigen binding fragment thereof). The expected binding of TFPI to its physiological substrate in the absence of antibody (or fragment) can be taken as 100%.

Активности, ингибирующие TFPI, также именуемые в настоящем описании «уменьшение активности TFPI» антитела против TFPI или его антигенсвязывающего фрагмента также можно оценивать в модели in vivo и/или in vitro c использованием, например, плазматических систем. Например, ингибирующие активности (или уровень уменьшения активности TFPI) антитела можно оценивать посредством: (1) уменьшения времени свертывания крови при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением; (2) уменьшения времени свертывания в цельной крови при измерении посредством тромбоэластографии; (3) увеличения образование тромбина; (4) увеличения активности FXa в присутствии TFPI; (5) усиленного накопления тромбоцитов в присутствии TFPI; (6) увеличенного образования фибрина в присутствии TFPI; или (7) их любой комбинации. Ингибирующие активности антитела или антигенсвязывающего фрагмента могут быть дозозависимыми (например, вызывая дозозависимое уменьшение времени свертывания крови при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением).The TFPI-inhibiting activities, also referred to herein as “TFPI-reducing activity,” of an antibody against TFPI or an antigen-binding fragment thereof can also be assessed in an in vivo and/or in vitro model using, for example, plasma systems. For example, the inhibitory activities (or level of reduction in TFPI activity) of an antibody can be assessed by: (1) reducing clotting time as measured in a diluted plasma prothrombin time assay; (2) decreasing clotting time in whole blood as measured by thromboelastography; (3) increasing thrombin formation; (4) increased FXa activity in the presence of TFPI; (5) enhanced platelet accumulation in the presence of TFPI; (6) increased fibrin formation in the presence of TFPI; or (7) any combination thereof. The inhibitory activities of the antibody or antigen-binding fragment may be dose-dependent (eg, causing a dose-dependent decrease in clotting time as measured in a diluted plasma prothrombin time assay).

Несколько типичных анализов для оценки ингибирующей активности антитела в отношении TFPI подробно описаны в Примерах. Например, анализ протромбинового времени (РТ) в плазме с разведением представляет собой модифицированный анализ РТ с использованием разведенного тромбопластина или тканевого фактора для увеличения времени свертывания крови и динамического интервала анализа. Ингибирующее/нейтрализующее антитело против TFPI должно уменьшать протромбиновое время при разведении.Several typical assays for assessing the inhibitory activity of an antibody against TFPI are described in detail in the Examples. For example, a diluted plasma prothrombin time (PT) assay is a modified PT assay using diluted thromboplastin or tissue factor to increase the clotting time and dynamic assay interval. An inhibitory/neutralizing antibody against TFPI should reduce prothrombin time when diluted.

Другой типичной модельной системой для определения активности, ингибирующей TFPI, является внешний теназный анализ, в котором тестируется способность антитела или его антигенсвязывающего фрагмента восстанавливать опосредованную внешним комплексом активацию FX в присутствии TFPI. Другой модельной системой для характеристики активности, ингибирующей TFPI, является анализ ингибирования FXa, в котором активность FXa измеряется в присутствии TFPI (см. Sprecher et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3353-3357 (1994)).Another typical model system for determining TFPI inhibitory activity is the extrinsic tenase assay, which tests the ability of an antibody or antigen binding fragment to restore extrinsic complex-mediated FX activation in the presence of TFPI. Another model system for characterizing TFPI inhibitory activity is the FXa inhibition assay, in which FXa activity is measured in the presence of TFPI (see Sprecher et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3353-3357 (1994)).

Ингибирующие активности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента также можно оценивать в анализе в плазме. Образование тромбина может запускаться в плазме, по существу не имеющей активности FVIII или FIX (например, остаточная активность фактора свертывания крови меньше, чем 1%), в присутствии антитела против TFPI или его антигенсвязывающего фрагмента. Образование тромбина можно выявлять с использованием флуорогенного или хромогенного субстрата. Превращение протромбина можно измерять с использованием, например, Thrombograph™ (Thermo Scientific, Waltham, Mass.), и полученные в результате данные можно объединять в калиброванную автоматическую тромбограмму, генерированную программой Thrombinoscope™, доступной от Thrombinoscope BV.The inhibitory activities of an antibody or antigen-binding fragment thereof can also be assessed in a plasma assay. Thrombin generation can be triggered in plasma substantially free of FVIII or FIX activity (eg, residual clotting factor activity of less than 1%) in the presence of an anti-TFPI antibody or antigen-binding fragment thereof. Thrombin formation can be detected using a fluorogenic or chromogenic substrate. Prothrombin conversion can be measured using, for example, Thrombograph™ (Thermo Scientific, Waltham, Mass.), and the resulting data can be combined into a calibrated automated thrombogram generated by the Thrombinoscope™ program available from Thrombinoscope BV.

Например, антитело или антигенсвязывающий фрагмент может улучшать регулируемое TFPI образование тромбина в отстуствие FVIII (например, в плазме, обедненной FVIII) до по меньшей мере 1% уровня TFPI-зависимого образования тромбина в нормальной плазме. В общем, нормальная (непораженная заболеванием) плазма содержит примерно от 0,5 U/мл до примерно 2 U/мл фактора VIII. Соответственно, в некоторых случаях антитело или антигенсвязывающий фрагмент по изобретению будет усиливать образование тромбина в отсутствие FVIII по меньшей мере до примерно 1% образования тромбина, наблюдающегося в присутствии от 0,5 U/мл до 2 U/мл FVIII. В других воплощениях антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) усиливает образование тромбина в отсутствие FVIII по меньшей мере до примерно 2%, по меньшей мере примерно 3%, по меньшей мере примерно 5%, по меньшей мере примерно 7% или по меньшей мере примерно 10% уровня образования тромбина в нормальной плазме, т.е. в присутствии физиологических уровней Фактора VIII.For example, an antibody or antigen binding fragment may improve TFPI-regulated thrombin generation in the absence of FVIII (eg, in FVIII-depleted plasma) to at least 1% of the level of TFPI-dependent thrombin generation in normal plasma. In general, normal (unaffected by disease) plasma contains from about 0.5 U/ml to about 2 U/ml factor VIII. Accordingly, in some cases, an antibody or antigen binding fragment of the invention will enhance thrombin generation in the absence of FVIII to at least about 1% of the thrombin generation observed in the presence of 0.5 U/ml to 2 U/ml FVIII. In other embodiments, the antibody (or antigen binding fragment thereof) enhances thrombin generation in the absence of FVIII to at least about 2%, at least about 3%, at least about 5%, at least about 7%, or at least about 10 % level of thrombin formation in normal plasma, i.e. in the presence of physiological levels of Factor VIII.

Антитело или антигенсвязывающий фрагмент также можно вводить в животную модель тромбиновой недостаточности или гемофилии для характеристики активностей, ингибирующих TFPI, in vivo. Такие модели in vivo известны в этой области и вкючают, например, мышей, которым вводятся антитела против FVIII для индукции гемофилии А (Tranholm et al., Blood, 102, 3615-3620 (2003)); модели, нокаутированные по фактору свертывания крови, такие как мыши, нокаутированные по FVIII (Bi et al., Nat. Genet., 10(1), 119-121 (1995)), и мыши, нокаутированные по FIX (Wang et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 94(21):11563-11566 (1997)), но не ограничивающиеся ими; индуцированную гемофилию-A у кроликов (Shen et al., Blood, 42(4):509-521 (1973)); и собак Chapel Hill HA (Lozier et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99:12991-12996 (2002)).The antibody or antigen binding fragment can also be introduced into an animal model of thrombin deficiency or hemophilia to characterize TFPI inhibitory activities in vivo . Such in vivo models are known in the art and include, for example, mice treated with anti-FVIII antibodies to induce hemophilia A (Tranholm et al., Blood, 102, 3615-3620 (2003)); coagulation factor knockout models such as FVIII knockout mice (Bi et al., Nat. Genet., 10(1), 119-121 (1995)) and FIX knockout mice (Wang et al. , Proc. Nat. Acad. Sci. USA 94(21):11563-11566 (1997)), but not limited to; induced hemophilia-A in rabbits (Shen et al., Blood, 42(4):509-521 (1973)); and Chapel Hill HA dogs (Lozier et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 99:12991-12996 (2002)).

В некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела (или антигенсвязывающие фрагменты) усиливают активность FXa в присутствии TFPI с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50) не больше чем 1×10-4 М, не больше чем 1×10-5 М, не больше чем 1×10-6 М, не больше чем 1×10-7 М, не больше чем 1×10-8 М, не больше чем 1×10-9 М, не больше чем 1×10-10 М, не больше чем 1×10-11 М или не больше чем 1×10-12 М. Предпочтительно EC50 составляет от примерно 5×10-7 М до 1×10-11 М, как, например, от примерно 1×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 1×10-7 М до 1×10-10 М, от 1×10-7 М до 5×10-9 М, от 5×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 5×10-7 М до 1×10-10 М или от примерно 5×10-7 М до 5×10-9 М.In some embodiments, antibodies (or antigen-binding fragments) disclosed herein enhance FXa activity in the presence of TFPI with a half-maximal effective concentration (EC 50 ) of no more than 1×10 -4 M, no more than 1×10 -5 M, no more than 1×10 -6 M, no more than 1×10 -7 M, no more than 1×10 -8 M, no more than 1×10 -9 M, no more than 1×10 -10 M, no more than 1×10 -11 M or not more than 1×10 -12 M. Preferably the EC 50 is from about 5×10 -7 M to 1×10 -11 M, such as from about 1×10 -7 M to 5x10 -10 M, from about 1x10 -7 M to 1x10 -10 M, from 1x10 -7 M to 5x10 -9 M, from 5x10 -7 M to 5x10 - 10 M, from about 5x10 -7 M to 1x10 -10 M or from about 5x10 -7 M to 5x10 -9 M.

В некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела (или антигенсвязывающие фрагменты) нейтрализуют ингибирование TFPI FVIIa/TF-опосредованной активации FX с полумаксимальной эффективной концентрацией (EC50) не более чем 1×10-4 М, не более чем 1×10-5 М, не более чем 1×10-6 М, не более чем 1×10-7 М, не более чем 1×10-8 М, не более чем 1×10-9 М, не более чем 1×10-10 М, не более чем 1×10-11 М или не более чем 1×10-12 М. Предпочтительно EC50 составляет от примерно 5×10-7 М до 1×10-11 М, как, например, от примерно 1×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 1×10-7 М до 1×10-10 М, от 1×10-7 М до 5×10-9 М, от 5×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 5×10-7 М до 1×10-10 М или от примерно 5×10-7 М до 5×10-9 М.In some embodiments, antibodies (or antigen binding fragments) disclosed herein neutralize TFPI inhibition of FVIIa/TF-mediated FX activation with a half-maximal effective concentration (EC 50 ) of no more than 1×10 -4 M, no more than 1×10 -5 M , no more than 1×10 -6 M, no more than 1×10 -7 M, no more than 1×10 -8 M, no more than 1×10 -9 M, no more than 1×10 -10 M , not more than 1×10 -11 M or not more than 1×10 -12 M. Preferably, the EC 50 is from about 5×10 -7 M to 1×10 -11 M, such as from about 1×10 -7 M to 5×10 -10 M, from about 1×10 -7 M to 1×10 -10 M, from 1×10 -7 M to 5×10 -9 M, from 5×10 -7 M to 5x10 -10 M, from about 5x10 -7 M to 1x10 -10 M, or from about 5x10 -7 M to 5x10 -9 M.

В некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела (или антигенсвязывающие фрагменты) уменьшают время свертывания крови при измерении в анализе протромбинового времени в плазме с разведением с полумаксимальной эффективной концентрацией (ЕС50) не более чем 1×10-4 М, не более чем 1×10-5 М, не более чем 1×10-6 М, не более чем 1×10-7 М, не более чем 1×10-8 М, не более чем 1×10-9 М, не более чем 1×10-10 М, не более чем 1×10-11 М или не более чем 1×10-12 М. Предпочтительно EC50 составляет от примерно 5×10-7 М до 1×10-11 М, как, например, от примерно 1×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 1×10-7 М до 1×10-10 М, от 1×10-7 М до 5×10-9 М, от 5×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 5×10-7 М до 1×10-10 М или от примерно 5×10-7 М до 5×10-9 М.In some embodiments, antibodies (or antigen-binding fragments) disclosed herein reduce clotting time when measured in a plasma prothrombin time assay at a dilution with a half-maximal effective concentration (EC 50 ) of no more than 1×10 -4 M, no more than 1× 10 -5 M, no more than 1×10 -6 M, no more than 1×10 -7 M, no more than 1×10 -8 M, no more than 1×10 -9 M, no more than 1× 10 -10 M, not more than 1×10 -11 M or not more than 1×10 -12 M. Preferably the EC 50 is from about 5×10 -7 M to 1×10 -11 M, such as from approximately 1×10 -7 M to 5×10 -10 M, from approximately 1×10 -7 M to 1×10 -10 M, from 1×10 -7 M to 5×10 -9 M, from 5×10 -7 M to 5×10 -10 M, from about 5×10 -7 M to 1×10 -10 M, or from about 5×10 -7 M to 5×10 -9 M.

В некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитела (или антигенсвязывающие фрагменты) увеличивают индекс скорости образования тромбина с полумаксимальной эффективной концентрацией (ЕС50) не более чем 1×10-4 М, не более чем 1×10-5 М, не более чем 1×10-6 М, не более чем 1×10-7 М, не более чем 1×10-8 М, не более чем 1×10-9 М, не более чем 1×10-10 М, не более чем 1×10-11 М или не более чем 1×10-12 М. Предпочтительно EC50 составляет от примерно 5×10-7 М до 1×10-11 М, как, например, от примерно 1×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 1×10-7 М до 1×10-10 М, от 1×10-7 М до 5×10-9 М, от 5×10-7 М до 5×10-10 М, от примерно 5×10-7 М до 1×10-10 М или от примерно 5×10-7 М до 5×10-9 М.In some embodiments, antibodies (or antigen-binding fragments) disclosed herein increase the thrombin generation rate index with a half-maximal effective concentration (EC 50 ) of no more than 1×10 -4 M, no more than 1×10 -5 M, no more than 1 ×10 -6 M, no more than 1×10 -7 M, no more than 1×10 -8 M, no more than 1×10 -9 M, no more than 1×10 -10 M, no more than 1 ×10 -11 M or not more than 1×10 -12 M. Preferably, the EC 50 is from about 5×10 -7 M to 1×10 -11 M, such as from about 1×10 -7 M to 5 ×10 -10 M, from about 1×10 -7 M to 1×10 -10 M, from 1×10 -7 M to 5×10 -9 M, from 5×10 -7 M to 5×10 -10 M, from about 5x10 -7 M to 1x10 -10 M or from about 5x10 -7 M to 5x10 -9 M.

В некоторых воплощениях раскрытые в настоящем описании антитело и фрагменты антитела также можно дополнительно оценивать другими анализами биологической активности, например, для того, чтобы оценить его эффективность, фармакологическую активность и потенциальную эффективность в качестве терапевтического агента. Такие анализы известны в этой области и зависят от антигена-мишени и намеченного применения антитела. Примеры включают, например, анализы ингибирования роста опухолевых клеток; анализы антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC); анализы агонистической активности или антагонистической активности.In some embodiments, the antibody and antibody fragments disclosed herein may also be further evaluated by other biological activity assays, for example, to evaluate its potency, pharmacological activity, and potential effectiveness as a therapeutic agent. Such assays are known in the art and depend on the target antigen and the intended use of the antibody. Examples include, for example, tumor cell growth inhibition assays; antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) and complement-dependent cytotoxicity (CDC) assays; agonistic activity or antagonistic activity assays.

В. Полинуклеотиды, векторы и клетки-хозяеваB. Polynucleotides, vectors and host cells

Согласно изобретению также предложены полинуклеотиды, кодирующие любое из антител, связывающихся с TFPI по настоящему изобретению включая описанные в настоящем описании фрагменты антител и модифицированные антитела, такие как, например, антитела, имеющие ослабленную эффекторную функцию Fc. В другом аспекте согласно изобретению предложен способ получения любого из описанных в настоящем описании полинуклеотидов. Полинуклеотиды можно получать и экспрессировать методиками, известными в этой области. Соответственно, согласно изобретению предложены полинуклеотиды или композиции, включающие фармацевтические композиции, содержащие полинуклеотиды, кодирующие любое из антител против TFPI и их антигенсвязывающих фрагментов по изобретению.The invention also provides polynucleotides encoding any of the TFPI-binding antibodies of the present invention including antibody fragments and modified antibodies described herein, such as, for example, antibodies having reduced Fc effector function. In another aspect, the invention provides a method for producing any of the polynucleotides described herein. Polynucleotides can be prepared and expressed by techniques known in the art. Accordingly, the invention provides polynucleotides or compositions, including pharmaceutical compositions containing polynucleotides encoding any of the anti-TFPI antibodies and antigen-binding fragments thereof of the invention.

В одном воплощении домены VH и VL или их антигенсвязывающие фрагменты, или полноразмерные НС или LC кодируются отдельными полинуклеотидами. В качестве альтернативы, и VH, и VL или их антигенсвязывающий фрагмент, или НС и LC кодируются одним полинуклеотидом.In one embodiment, the VH and VL domains, or antigen binding fragments thereof, or full-length HC or LC are encoded by separate polynucleotides. Alternatively, both VH and VL or an antigen-binding fragment thereof, or HC and LC, are encoded by a single polynucleotide.

Согласно изобретению предложены полинуклеотиды или композиции, содержащие полинуклеотиды, кодирующие любое из антител против TFPI и их антигенсвязывающих фрагментов по изобретению, включая TFPI-23, TFPI-24, TFPI-106, TFPI-107 и 4D8, но не ограничиваясь ими, где последовательность данного полинуклеотида охватывает последовательность SEQ ID NO:175 (кодирующую область VH TFPI-106), SEQ ID NO:176 (кодирующую область VL TFPI-106), SEQ ID NO:177 (кодирующую тяжелую цепь TFPI-106) и SEQ ID NO:178 (кодирующую легкую цепь TFPI-106).The invention provides polynucleotides or compositions containing polynucleotides encoding any of the anti-TFPI antibodies and antigen-binding fragments thereof of the invention, including, but not limited to, TFPI-23, TFPI-24, TFPI-106, TFPI-107 and 4D8, where the sequence of the given polynucleotide covers the sequence of SEQ ID NO:175 (TFPI-106 VH coding region), SEQ ID NO:176 (TFPI-106 VL coding region), SEQ ID NO:177 (TFPI-106 heavy chain coding region) and SEQ ID NO:178 (encoding light chain TFPI-106).

В другом аспекте согласно изобретению предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая область VH антитела или его антигенсвязывающую часть, которая специфично связывается с TFPI, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты вставки, присутствующей в плазмиде, депонированной под № АТСС (Американская коллекция типовых клеточных культур) РТА-122329.In another aspect, the invention provides an isolated nucleic acid encoding the VH region of an antibody or an antigen-binding portion thereof that specifically binds TFPI, comprising the nucleic acid sequence of the insert present in the plasmid deposited under ATCC (American Type Cell Culture Collection) PTA-122329.

В другом аспекте согласно изобретению предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая область VL антитела или его антигенсвязывающую часть, которая специфично связывается с TFPI, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты вставки, присутствующей в плазмиде, депонированной под № АТСС РТА-122328.In another aspect, the invention provides an isolated nucleic acid encoding the VL region of an antibody or an antigen-binding portion thereof that specifically binds TFPI, comprising the nucleic acid sequence of the insert present in the plasmid deposited under ATCC No. PTA-122328.

В другом аспекте согласно изобретению предложены полинуклеотиды и их варианты, кодирующие антитело против TFPI или его часть, где такие варианты полинуклеотидов содержат последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 87%, по меньшей мере 89%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 91%, по меньшей мере 92%, по меньшей мере 93%, по меньшей мере 94%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности с любой из раскрытых в настоящем описании специфических последовательностей нуклеиновой кислоты. Степень идентичности последовательности по любой длине нуклеотидной последовательности может быть рассчитана с использованием способов, известных обычным специалистам в этой области. В одном неограничивающем воплощении процент идентичности последовательностей между двумя или более чем двумя родственными нуклеотидными пследовательностями может быть определен с использованием нуклеотидного сервера BLAST, доступного от Национальной библиотеки медицины (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/). В этой программе предоставлены разные установки, которые обычный специалист в этой области может использовать для оптимизации сравнений последовательностей в зависимости от таких факторов, как длина, сложность и другие факторы.In another aspect, the invention provides polynucleotides and variants thereof encoding an anti-TFPI antibody or a portion thereof, wherein such polynucleotide variants comprise a nucleic acid sequence having at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 87%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95% , at least 96%, at least 97%, at least 98%, or at least 99% sequence identity with any of the specific nucleic acid sequences disclosed herein. The degree of sequence identity over any length of nucleotide sequence can be calculated using methods known to those of ordinary skill in the art. In one non-limiting embodiment, the percentage of sequence identity between two or more than two related nucleotide sequences can be determined using the nucleotide BLAST server available from the National Library of Medicine (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/). This program provides various settings that one of ordinary skill in the art can use to optimize sequence comparisons depending on factors such as length, complexity, and other factors.

Согласно изобретению предложена молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность любого антитела против TFPI и его антигенсвязывающего фрагмента по изобретению, включая аминокислотную последовательность антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, приведенную в Таблице 33 (например, аминокислотную последовательность SEQ ID NO:21-174), и антитела, которое связывается с тем же самым эпитопом, что и и/или конкурирует за связывание с TFPI с антителом по изобретению, но не ограничиваясь ими.The invention provides a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of any anti-TFPI antibody and antigen-binding fragment thereof of the invention, including the amino acid sequence of the antibody or antigen-binding fragment thereof set forth in Table 33 (e.g., the amino acid sequence of SEQ ID NO:21-174 ), and an antibody that binds to the same epitope as, but is not limited to, and/or competes for binding to TFPI with an antibody of the invention.

В другом аспекте согласно изобретению предложены полинуклеотиды и их варианты, кодирующие антитело против TFPI, где такие варианты полинуклеотидов кодируют аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 70%-ную, по меньшей мере 75%-ную, по меньшей мере 80%-ную, по меньшей мере 85%-ную, по меньшей мере 87%-ную, по меньшей мере 89%-ную, по меньшей мере 90%-ную, по меньшей мере 91%-ную, по меньшей мере 92%-ную, по меньшей мере 93%-ную, по меньшей мере 94%-ную, по меньшей мере 95%-ную, по меньшей мере 96%-ную, по меньшей мере 97%-ную, по меньшей мере 98%-ную или по меньшей мере 99%-ную идентичность последовательности с любой раскрытой в настоящем описании аминокислотной последовательностью антитела против TFPI.In another aspect, the invention provides polynucleotides and variants thereof encoding an anti-TFPI antibody, wherein such polynucleotide variants encode an amino acid sequence having at least 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 87%, at least 89%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97%, at least 98% or at least 99% -sequence identity with any amino acid sequence of an anti-TFPI antibody disclosed herein.

В других воплощениях степень родства между нуклеиновыми кислотами, содержащими вариант полинуклеотидной последовательности, кодирующий антитело против TFPI или его часть, и любой из конкретных раскрытых в настоящем описании полинуклеотидных последовательностей может быть определена посредством тестирования того, гибридизуется ли вариант последовательности (или комплементарная ей последовательность) со специфической нуклеотидной последовательностью (или комплементарной ей последовательностью) при умеренных или сильно жестких условиях в формате анализа норзерн-блоттинг или саузерн-блоттинг. Типичные и неограничивающие «умеренно жесткие условия» включают предварительную промывку в растворе 5 × SSC (хлорид натрия и цитрат натрия), 0,5% SDS (додецилсульфат натрия), 1,0 мM EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота) (pH 8,0); гибридизацию при 50°C-65°C, 5 × SSC, в течение ночи; с последующей двухкратной промывкой при 65°C в течение 20 минут, каждый раз 2×, 0,5× и 0,2× SSC, содержащим 0,1 % SDS.In other embodiments, the degree of relatedness between nucleic acids comprising a polynucleotide sequence variant encoding an anti-TFPI antibody or a portion thereof and any of the specific polynucleotide sequences disclosed herein can be determined by testing whether the sequence variant (or its complementary sequence) hybridizes with a specific nucleotide sequence (or its complementary sequence) under moderate or highly stringent conditions in the Northern blot or Southern blot analysis format. Typical and non-limiting “moderately stringent conditions” include pre-wash in a solution of 5× SSC (sodium chloride and sodium citrate), 0.5% SDS (sodium dodecyl sulfate), 1.0 mM EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) (pH 8.0); hybridization at 50°C-65°C, 5 × SSC, overnight; followed by washing twice at 65°C for 20 minutes, each time with 2×, 0.5× and 0.2× SSC containing 0.1% SDS.

Типичные и неограничивающие «сильно жесткие условия» или «условия сильной жесткости» представляют собой условия, при которых: (1) для промывки используется низкая ионная сила и высокая температура, например, 0,015 М хлорид натрия/0,0015 М цитрат натрия/0,1% додецилсульфат натрия при 50°C; (2) во время гибридизации используется денатурирующий агент, такой как формамид, например 50%-ный (об./об.) формамид с 0,1%-ным бычьим сывороточным альбумином/0,1%-ным фиколлом/0,1%-ным поливинилпиролидоном/50 мМ натрий-фосфатным буфером при рН 6,5 с 750 мМ хлоридом натрия, 75 мМ цитратом натрия при 42°С; или (3) используется 50%-ный формамид, 5 × SSC (0,75 M NaCl, 0,075 M цитрат натрия), 50 мМ фосфат натрия (рН 6,8), 0,1%-ный пирофосфат натрия, 5× раствор Денхардта, обработанная ультразвуком ДНК спермы лосося (50 мкг/мл), 0,1%-ный SDS и 10%-ный декстрана сульфат при 42°С, с промывками при 42°С в 0,2 × SSC (хлорид натрия/цитрат натрия) и 50%-ном формамиде при 55°С, с последующей помывкой в сильно жестких условиях, состоящей из 0,1 × SSC, содержащего EDTA, при 55°С. Специалисту будет понятно как откорректировать температуру, ионную силу и т.д., как необходимо для приспособления к таким факторам, как длина зонда и тому подобное. Обычный специалист в этой области также будет знаком со стандартными методиками для проведения анализа норзерн-блоттинг или саузерн-блоттинг с целью выявления степени родства между вариантом нуклеотидной последовательности и специфической нуклеотидной последовательностью по настоящему изобретению.Typical and non-limiting "high stringency conditions" or "high stringency conditions" are conditions where: (1) low ionic strength and high temperature are used for washing, for example, 0.015 M sodium chloride/0.0015 M sodium citrate/0. 1% sodium dodecyl sulfate at 50°C; (2) a denaturing agent such as formamide is used during hybridization, for example 50% (v/v) formamide with 0.1% bovine serum albumin/0.1% ficoll/0.1% polyvinylpyrrolidone/50 mM sodium phosphate buffer at pH 6.5 with 750 mM sodium chloride, 75 mM sodium citrate at 42°C; or (3) use 50% formamide, 5× SSC (0.75 M NaCl, 0.075 M sodium citrate), 50 mM sodium phosphate (pH 6.8), 0.1% sodium pyrophosphate, 5× solution Denhardt, sonicated salmon sperm DNA (50 µg/ml), 0.1% SDS and 10% dextran sulfate at 42°C, with washes at 42°C in 0.2 x SSC (sodium chloride/citrate sodium) and 50% formamide at 55°C, followed by a high-stringency wash consisting of 0.1 x SSC containing EDTA at 55°C. One skilled in the art will understand how to adjust temperature, ionic strength, etc., as necessary to accommodate factors such as probe length and the like. One of ordinary skill in the art will also be familiar with standard techniques for performing Northern blot or Southern blot analysis to determine the degree of relatedness between a nucleotide sequence variant and a specific nucleotide sequence of the present invention.

Настоящим изобретением также охватываются полинуклеотиды, комплементарные любым таким последовательностям. Полинуклеотиды могут быть одноцепочечными (кодирующими или антисмысловыми) или двухцепочечными и могут представлять собой молекулы ДНК (геномной, кДНК или синтетической) или РНК. Молекулы РНК включают молекулы гяРНК (гетероядерная РНК), которые содержат интроны и соответствуют молекуле ДНК один к одному, и молекулы мРНК, которые не содержат интроны. Дополнительные кодирующие или некодирующие последовательности могут, но не обязательно присутствуют в пределах полинуклеотида по настоящему изобретению.The present invention also covers polynucleotides complementary to any such sequences. Polynucleotides can be single-stranded (coding or antisense) or double-stranded and can be DNA (genomic, cDNA or synthetic) or RNA molecules. RNA molecules include hnRNA (heteronuclear RNA) molecules, which contain introns and correspond one to one to the DNA molecule, and mRNA molecules, which do not contain introns. Additional coding or non-coding sequences may, but are not necessarily present within the polynucleotide of the present invention.

Варианты также или альтернативно могут быть по существу гомологичными природному гену или его части, или комплементарной ему последовательности. Такие варианты полинуклеотида способны гибридизоваться с встречающейся в природе последовательностью ДНК, кодирующей природное антитело, (или с комплементарной ей последовательностью) при умеренно жестких условиях.Variants may also or alternatively be substantially homologous to a naturally occurring gene or a portion thereof, or a sequence complementary thereto. Such polynucleotide variants are capable of hybridizing with a naturally occurring DNA sequence encoding a natural antibody (or its complementary sequence) under moderately stringent conditions.

Обычным специалистам в этой области будет понятно то, что в результате вырожденности генетического кода существует много нуклеотидных последовательностей, способных кодировать любое из раскрытых в настоящем описании антител против TFPI или их частей. Некоторые из этих полинуклеотидов могут иметь относительно низкую степень идентичности последовательности с любой из конкретных приведенных в настоящем описании нуклеотидных последовательностей антител против TFPI при кодировании той же самой аминокислотной последовательности. Тем не менее, в настоящем изобретении конкретно рассматриваются полинуклеотиды, которые отличаются из-за различий в использовании кодонов.Those of ordinary skill in the art will appreciate that, as a result of the degeneracy of the genetic code, there are many nucleotide sequences capable of encoding any of the anti-TFPI antibodies or portions thereof disclosed herein. Some of these polynucleotides may have a relatively low degree of sequence identity with any of the specific anti-TFPI antibody nucleotide sequences disclosed herein while encoding the same amino acid sequence. However, the present invention specifically contemplates polynucleotides that differ due to differences in codon usage.

Полинуклеотиды по настоящему изобретению могут быть получены с использованием химического синтеза, способов генной инженерии или ПЦР (полимеразной цепной реакцией). Способы химического синтеза полинуклеотидов хорошо известны в этой области, и их не нужно в настоящем описании подробно описывать. Специалист в этой области может использовать предложенные в настоящем описании последовательности и имеющийся в продаже синтезатор ДНК для получения требуемой последовательности ДНК.The polynucleotides of the present invention can be obtained using chemical synthesis, genetic engineering methods or PCR (polymerase chain reaction). Methods for chemically synthesizing polynucleotides are well known in the art and need not be described in detail herein. One skilled in the art can use the sequences provided herein and a commercially available DNA synthesizer to obtain the desired DNA sequence.

Для получения полинуклеотидов с использованием способов генной инженерии полинуклеотид, содержащий желательную последовательность, может быть вставлен в подходящий вектор, и данный вектор, в свою очередь, может быть введен в подходящую клетку-хозяина для репликации и амплификации, как обсуждается в настоящем описании далее. Полинуклеотиды могут быть вставлены в клетки-хозяева посредством любых способов, известных в этой области. Клетки могут быть трансформированы введением экзогенного полинуклеотида посредством прямого поглощения, эндоцитоза, трансфекции, F-спаривания или электропорации. Сразу после введения экзогенный полинуклеотид может поддерживаться в клетке в виде неинтегрированного вектора (такого как плазмида) или интегрированного в геном клетки-хозяина. Полинуклеотид, амплифицированный таким образом, может быть выделен из клетки-хозяина способами, хорошо известными в этой области. См., например, Sambrook et al., 1989.To produce polynucleotides using genetic engineering techniques, a polynucleotide containing the desired sequence can be inserted into a suitable vector, and the vector can in turn be introduced into a suitable host cell for replication and amplification, as discussed hereinafter. Polynucleotides can be inserted into host cells by any means known in the art. Cells can be transformed by introducing an exogenous polynucleotide through direct uptake, endocytosis, transfection, F-pairing or electroporation. Immediately after administration, the exogenous polynucleotide may be maintained in the cell as a non-integrated vector (such as a plasmid) or integrated into the genome of the host cell. The polynucleotide thus amplified can be isolated from the host cell by methods well known in the art. See, for example, Sambrook et al., 1989.

В качестве альтернативы, репродукцию последовательностей ДНК обеспечивает ПЦР. Технология ПЦР хорошо известна в этой области и описывается в патентах США № 4683195, 4800159, 4754065 и 4683202, а также в PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al. eds., Birkauswer Press, Boston, 1994.Alternatively, PCR provides replication of DNA sequences. PCR technology is well known in the art and is described in US Patent Nos. 4,683,195, 4,800,159, 4,754,065 and 4,683,202, as well as PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al. eds., Birkauswer Press, Boston, 1994.

РНК может быть получена с использованием выделенной ДНК в подходящем векторе и вставки его в подходящую клетку-хозяина. При репликации клетки и транскрипции ДНК в РНК данная РНК может быть затем выделена с использованием способов, хорошо известных специалистам в этой области, как изложено, например, в Sambrook et al., 1989, выше.The RNA can be produced by using isolated DNA in a suitable vector and inserting it into a suitable host cell. Once the cell has replicated and the DNA has been transcribed into RNA, the RNA can then be isolated using methods well known to those skilled in the art, as set forth, for example, in Sambrook et al., 1989, supra.

Подходящие векторы для клонирования могут быть сконструированы согласно стандартным методикам или могут быть выбраны из большого числа векторов для клонирования, доступных в этой области. В то время как выбранный вектор для клонирования может варьировать согласно клетке-хозяину, намеченной для применения, полезные векторы для клонирования обычно будут иметь способность к саморепликации, могут обладать одной мишенью для конкретной эндонуклеазы рестрикции и/или могут нести гены маркера, который можно использовать при отборе клонов, содержащих вектор. Подходящие примеры включают плазмиды и бактериальные вирусы, например, pUC18, pUC19, Bluescript (например, pBS SK+) и его производные, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, фаговые ДНК и челночные векторы, такие как pSA3 и pAT28. Эти и многие другие векторы для клонирования доступны у коммерческих поставщиков, таких как BioRad, Stratagene и Invitrogen.Suitable cloning vectors can be constructed according to standard techniques or can be selected from the large number of cloning vectors available in the art. While the cloning vector selected may vary according to the host cell intended for use, useful cloning vectors will generally have the ability to self-replicate, may have a single target for a particular restriction endonuclease, and/or may carry marker genes that can be used in selection of clones containing the vector. Suitable examples include plasmids and bacterial viruses, e.g. pUC18, pUC19, Bluescript (e.g. pBS SK+) and its derivatives, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, phage DNA and shuttle vectors such as pSA3 and pAT28 . These and many other cloning vectors are available from commercial suppliers such as BioRad, Stratagene, and Invitrogen.

Кроме того, предложены экспрессионные векторы. Экспрессионные векторы обычно представляют собой реплицируемые полинуклеотидные конструкции, которые содержат полинуклеотид согласно изобретению. Подразумевается то, что экспрессионный вектор должен быть реплицируемым в клетках-хозяевах либо в виде эписом, либо в виде интегральной части хромосомной ДНК. Подходящие экспрессионные векторы включают плазмиды, вирусные векторы, включающие аденовирусы, аденосателлитные вирусы, ретровирусы, космиды и экспрессионный(ные) вектор(ры), раскрытый(тые) в публикации РСТ № WO 87/04462, но не ограничиваются ими. Компоненты вектора обычно могут включать одно или более чем одно из следующего: сигнальную последовательность; репликатор; один или более чем один маркерный ген; подходящие транскрипционные контролирующие элементы (такие как промоторы, энхансеры и терминатор), но не ограничиваются ими. Для экспрессии (т.е. трансляции) обычно также требуется один или более чем один трансляционный контролирующий элемент, такой как сайты связывания рибосомы, сайты инициации трансляции и терминирующие кодоны.In addition, expression vectors have been proposed. Expression vectors are typically replicable polynucleotide constructs that contain a polynucleotide of the invention. It is understood that the expression vector must be replicable in host cells either as episomes or as an integral part of chromosomal DNA. Suitable expression vectors include, but are not limited to, plasmids, viral vectors including adenoviruses, adenosatellite viruses, retroviruses, cosmids and expression vector(s) disclosed in PCT Publication No. WO 87/04462. Vector components typically may include one or more of the following: a signal sequence; replicator; one or more than one marker gene; suitable transcriptional control elements (such as, but not limited to, promoters, enhancers and terminator). Expression (ie, translation) typically also requires one or more translational control elements, such as ribosome binding sites, translation initiation sites, and stop codons.

Векторы, содержащие интересующие полинуклеотиды и/или сами полинуклеотиды могут быть введены в клетку-хозяина любым из целого ряда подходящих способов, включающих электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, DEAE-декстрана или других веществ; бомбардировку микрочастицами; липофекцию и инфекцию (например, когда вектор представляет собой инфекционный агент, такой как вирус осповакцины). Выбор вводимых векторов или полинуклеотидов часто будет зависеть от характеристик клетки-хозяина.Vectors containing the polynucleotides of interest and/or the polynucleotides themselves can be introduced into the host cell by any of a variety of suitable methods, including electroporation, transfection using calcium chloride, rubidium chloride, calcium phosphate, DEAE-dextran or other substances; microparticle bombardment; lipofection and infection (eg when the vector is an infectious agent such as vaccinia virus). The choice of vectors or polynucleotides to be introduced will often depend on the characteristics of the host cell.

Согласно изобретению также предложены клетки-хозяева, содержащие любые из описанных в настоящем описании полинуклеотидов. С целью выделения генов, кодирующих интересующие антитело, полипептид или белок можно использовать любые клетки-хозяева, способные сверхэкспрессировать гетерологичные ДНК. Неограничивающие примеры клеток-хозяев млекопитающих включают клетки обезьяны COS (клетки почки обезьяны), человеческие HeLa, клетки человеческой эмбриональной почки (HEK) 293, Sp2.0 и клетки яичника китайского хомяка (СНО), но не ограничиваются ими. См. также публикацию РСТ № WO 87/04462. Подходящие клетки-хозяева, не являющиеся клетками млекопитающих, включают прокариот (таких как E. coli или B. subtillis) и дрожжей (таких как S. cerevisae, S. pombe или K. lactis). Скрининг клеток-хозяев, экспрессирующих антитело против TFPI или его антигенсвязывающую часть, можно проводить с использованием анализа иммунного связывания, такого как ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ), FACS (флуоресцентная сортировка клеток) или другой анализ, знакомый обычным специалистам в этой области.The invention also provides host cells containing any of the polynucleotides described herein. For the purpose of isolating genes encoding an antibody, polypeptide or protein of interest, any host cell capable of overexpressing heterologous DNA can be used. Non-limiting examples of mammalian host cells include, but are not limited to, monkey COS cells (monkey kidney cells), human HeLa cells, human embryonic kidney (HEK) 293, Sp2.0 cells, and Chinese hamster ovary (CHO) cells. See also PCT Publication No. WO 87/04462. Suitable non-mammalian host cells include prokaryotes (such as E. coli or B. subtillis ) and yeasts (such as S. cerevisae , S. pombe or K. lactis ). Screening for host cells expressing an anti-TFPI antibody or an antigen-binding portion thereof can be performed using an immunobinding assay such as ELISA, FACS, or other assay familiar to those of ordinary skill in the art.

Таким образом, антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент) по изобретению может быть продуцировано рекомбинантно с использованием подходящей клетки-хозяина. Нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, может быть клонирована в экспрессионный вектор, который может быть затем введен в клетку-хозяина, такую как клетка E. coli, дрожжевая клетка, клетка насекомого, клетка COS, клетка СНО или миеломная клетка, которая иным образом не продуцирует иммуноглобулиновый белок, с получением синтеза моноклональных антител в рекомбинантных клетках-хозяевах. Типичные клетки-хозяева включают клетку СНО, клетки HEK 293 и Sp2.0.Thus, an antibody (or antigen binding fragment thereof) of the invention can be produced recombinantly using a suitable host cell. The nucleic acid encoding the antibody or antigen-binding fragment thereof can be cloned into an expression vector, which can then be introduced into a host cell, such as an E. coli cell, yeast cell, insect cell, COS cell, CHO cell, or myeloma cell, which does not otherwise produce immunoglobulin protein, resulting in the synthesis of monoclonal antibodies in recombinant host cells. Typical host cells include CHO cell, HEK 293 and Sp2.0 cells.

Экспрессионный вектор можно использовать для управления экспрессией антитела против TFPI. Специалист в этой области знаком с введением экспрессионных векторов для получения экспрессии экзогенного белка in vivo. См., например, патенты США № 6436908; 6413942 и 6376471. Введение экспрессионных векторов включает местное или системное введение, включающее инъекцию, пероральное введение, генную пушку, введение через катетер и местное введение. Согласно некоторым неограничивающим воплощениям экспрессионный вектор вводится непосредственно в печень, скелетные мышцы, костный мозг или в другие ткани.An expression vector can be used to drive the expression of an anti-TFPI antibody. One skilled in the art is familiar with the administration of expression vectors to obtain exogenous protein expression in vivo . See, for example, US Pat. No. 6,436,908; 6,413,942 and 6,376,471. Administration of expression vectors includes local or systemic administration, including injection, oral administration, gene gun, catheter administration, and topical administration. In some non-limiting embodiments, the expression vector is introduced directly into the liver, skeletal muscle, bone marrow, or other tissues.

Также можно использовать таргетную доставку терапевтических композиций, содержащих экспрессионный вектор или субгеномные полинуклеотиды. Методики опосредованной рецептором доставки ДНК описываются, например, в Findeis et al., Trends Biotechnol., 1993, 11:202; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer, J.A. Wolff, ed., 1994; Wu et al., J. Biol. Chem., 1988, 263:621; Wu et al., J. Biol. Chem., 1994, 269:542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, 87:3655; Wu et al., J. Biol. Chem., 1991, 266:338. Терапевтические композиции, содержащие полинуклеотид, вводятся в интервале от примерно 100 нг до примерно 200 мг ДНК для местного введения в протоколе генотерапии. На протяжении протокола генотерапии также можно использовать интервалы концентрации от примерно 500 нг до примерно 50 мг, от примерно 1 мкг до примерно 2 мг, от примерно 5 мкг до примерно 500 мкг и от примерно 20 мкг до примерно 100 мкг ДНК. Терапевтические полинуклеотиды и полипептиды можно доставлять с использованием носителей для доставки генов. Носитель для доставки гена может иметь вирусное или невирусное происхождение (см., в общем, Jolly, Cancer Gene Therapy, 1994, 1:51; Kimura, Human Gene Therapy, 1994, 5:845; Connelly, Human Gene Therapy, 1995, 1:185 и Kaplitt, Nature Genetics, 1994, 6:148). Экспрессию таких кодирующих последовательностей можно индуцировать с использованием эндогенных промоторов млекопитающих или гетерологичных промоторов. Экспрессия кодирующей последовательности может быть либо конститутивной, либо регулируемой.Targeted delivery of therapeutic compositions containing an expression vector or subgenomic polynucleotides can also be used. Techniques for receptor-mediated DNA delivery are described, for example, in Findeis et al., Trends Biotechnol., 1993, 11:202; Chiou et al., Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer, J.A. Wolff, ed., 1994; Wu et al., J. Biol. Chem., 1988, 263:621; Wu et al., J. Biol. Chem., 1994, 269:542; Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990, 87:3655; Wu et al., J. Biol. Chem., 1991, 266:338. Therapeutic compositions containing polynucleotide are administered in the range of about 100 ng to about 200 mg of DNA for topical administration in a gene therapy protocol. Concentration ranges of about 500 ng to about 50 mg, about 1 μg to about 2 mg, about 5 μg to about 500 μg, and about 20 μg to about 100 μg of DNA may also be used throughout the gene therapy protocol. Therapeutic polynucleotides and polypeptides can be delivered using gene delivery vehicles. The gene delivery vehicle may be of viral or non-viral origin (see generally Jolly, Cancer Gene Therapy, 1994, 1:51; Kimura, Human Gene Therapy, 1994, 5:845; Connelly, Human Gene Therapy, 1995, 1 :185 and Kaplitt, Nature Genetics, 1994, 6:148). Expression of such coding sequences can be induced using endogenous mammalian promoters or heterologous promoters. Expression of a coding sequence can be either constitutive or regulated.

Векторы на основе вирусов для доставки желательного полинуклеотида и экспрессии в желательной клетке хорошо известны в этой области. Типичные носители на основе вируса включают рекомбинантные ретровирусы (см., например, публикации РСТ № WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/02805; патенты США № 5219740 и 4777127; патент Великобритании № 2200651 и европейский патент № 0345242), векторы на основе альфавируса (например, векторы на основе вируса Синдбис, вируса леса Семлики (ATCC VR-67; ATCC VR-1247), вируса реки Росс (ATCC VR-373; ATCC VR-1246) и вируса венесуэльского энцефалита лошадей (ATCC VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR 1249; ATCC VR-532)), и векторы на основе аденосателлитного вируса (AAV) (см., например, публикации PCT № WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 и WO 95/00655), но не ограничиваются ими. Также можно использовать ведение ДНК, связанной с умерщвленным аденовирусом, как описано в Curiel, Hum. Gene Ther., 1992, 3:147.Virus-based vectors for delivery of the desired polynucleotide and expression in the desired cell are well known in the art. Typical virus-based vehicles include recombinant retroviruses (see, for example, PCT Publications No. WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO 93/11230; WO 93/10218; WO 91/ 02805; US Patent Nos. 5,219,740 and 4,777,127; UK Patent No. 2200651 and European Patent No. 0345242), alphavirus vectors (e.g., Sindbis virus, Semliki Forest virus (ATCC VR-67; ATCC VR-1247), River virus vectors Ross (ATCC VR-373; ATCC VR-1246) and Venezuelan equine encephalitis virus (ATCC VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR 1249; ATCC VR-532)), and adenosatellite virus (AAV) vectors (see ., for example, PCT publications No. WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 and WO 95/00655), but are not limited to them. You can also use the management of DNA associated with killed adenovirus, as described in Curiel, Hum. Gene Ther., 1992, 3:147.

Также можно использовать носители и способы для невирусной доставки, включающие поликатионную конденсированную ДНК, связанную или не связанную с одним умерщвленным аденовирусом (см., например, Curiel, Hum. Gene Ther., 1992, 3:147); ДНК, связанную с лигандом (см., например, Wu, J. Biol. Chem., 1989, 264:16985); эукариотические клетки-носители для доставки (см., например, патент США № 5814482; публикации РСТ № WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763 и WO 97/42338) и нейтрализацию заряда нуклеиновых кислот или слияние с клеточными мембранами, но не ограничивающиеся ими. Также можно использовать голую ДНК. Типичные способы введения на основе голой ДНК описываются в публикации РСТ № WO 90/11092 и патенте США № 5580859. Липосомы, которые могут действовать в качестве носителей для доставки генов, описываются в патенте США № 5422120; публикациях PCT № WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445 и EP 0524968. Дополнительные подходы описываются в Philip, Mol. Cell Biol., 1994, 14:2411 и в Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci., 1994, 91:1581.Non-viral delivery vehicles and methods may also be used, including polycationic condensed DNA associated or not associated with a single killed adenovirus (see, for example, Curiel, Hum. Gene Ther., 1992, 3:147); DNA bound to a ligand (see, for example, Wu, J. Biol. Chem., 1989, 264:16985); eukaryotic carrier cells for delivery (see, for example, US Pat. No. 5,814,482; PCT Publications No. WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763 and WO 97/42338) and neutralization of nucleic acid charge or fusion with cell membranes , but not limited to them. Naked DNA can also be used. Exemplary naked DNA administration methods are described in PCT Publication No. WO 90/11092 and US Patent No. 5,580,859. Liposomes that can act as carriers for gene delivery are described in US Pat. No. 5,422,120; PCT publications No. WO 95/13796; WO 94/23697; WO 91/14445 and EP 0524968. Additional approaches are described in Philip, Mol. Cell Biol., 1994, 14:2411 and in Woffendin, Proc. Natl. Acad. Sci., 1994, 91:1581.

Последовательность желательного антитела (или его антигенсвязывающего фрагмента) и нуклеиновой кислоты, кодирующей такое антитело (или его антигенсвязывающий фрагмент), может быть определена с использованием стандартных методик секвенирования. Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей желательное антитело (или фрагменты), может быть вставлена в другие векторы (такие как векторы для клонирования и экспрессионные векторы) для рекомбинантной продукции и характеристики. Тяжелая цепь (или фрагмент тяжелой цепи) и легкая цепь (или фрагмент легкой цепи) могут быть клонированы в тот же самый вектор или в разные векторы.The sequence of a desired antibody (or antigen binding fragment thereof) and the nucleic acid encoding such antibody (or antigen binding fragment thereof) can be determined using standard sequencing techniques. The nucleic acid sequence encoding the desired antibody (or fragments) can be inserted into other vectors (such as cloning vectors and expression vectors) for recombinant production and characterization. The heavy chain (or heavy chain fragment) and the light chain (or light chain fragment) can be cloned into the same vector or into different vectors.

Подходящие векторы для клонирования и экспрессионные векторы могут включать целый ряд компонентов, таких как промотор, энхансер и другие транскрипционные регуляторные последовательности. Также может быть сконструирован вектор для обеспечения перемещения вариабельного домена антитела между разными веторами.Suitable cloning and expression vectors may include a variety of components, such as a promoter, enhancer, and other transcriptional control sequences. A vector can also be constructed to allow movement of the antibody variable domain between different vectors.

Фрагменты антитела могут быть получены протеолитической или другой деградацией антител, рекомбинантными способами или химическим синтезом. Полипептиды антител, особенно более короткие полипептиды из вплоть до примерно 50 аминокислот, с удобством получаются посредством химического синтеза. Способы химического синтеза известны в этой области и коммерчески доступны.Antibody fragments can be produced by proteolytic or other degradation of antibodies, recombinant methods, or chemical synthesis. Antibody polypeptides, especially shorter polypeptides of up to about 50 amino acids, are conveniently prepared by chemical synthesis. Chemical synthesis methods are known in the art and are commercially available.

Раскрытое в настоящем описании антитело или его антигенсвязывающий фрагмент может иметь созревшую аффинность. Например, антитела с созревшей аффинностью могут быть получены методиками, известными в этой области (Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-3319; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896 и WO2004/058184).An antibody or antigen binding fragment thereof disclosed herein may be affinity matured. For example, affinity matured antibodies can be produced by techniques known in the art (Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91 :3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., 1995, J. Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J. Immunol., 154(7):3310-3319; Hawkins et al., 1992, J. Mol. Biol., 226:889-896 and WO2004/058184).

4. Композиции и применения4. Compositions and applications

Описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты могут быть приготовлены в виде фармацевтических композиций. Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы (Remington: The Science and practice of Pharmacy 20th Ed., 2000, Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover) в виде лиофилизированных препаратов или водных растворов. Приемлемые носители, эксципиенты или стабилизаторы являются нетоксичными для реципентов при используемых дозировках и концентрациях и могут содержать такие буферы, как буферы на основе фосфата, цитрата и других органических кислот; антиоксиданты, включающие аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид, бензэтония хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехин; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол); низкомолекулярные (меньше, чем примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включающие глюкозу, маннозу или декстраны; хелатирующие агенты, такие как EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота); сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ). В настоящем описании дополнительно описаны фармацевтически приемлемые эксципиенты.The antibodies or antigen binding fragments described herein can be formulated into pharmaceutical compositions. The pharmaceutical composition may further contain pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers (Remington: The Science and practice of Pharmacy 20th Ed., 2000, Lippincott Williams and Wilkins, Ed. KE Hoover) in the form of lyophilized preparations or aqueous solutions. Suitable carriers, excipients or stabilizers are non-toxic to recipients at the dosages and concentrations used and may contain buffers such as phosphate, citrate and other organic acid buffers; antioxidants including ascorbic acid and methionine; preservatives (such as octadecyldimethylbenzylammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkylparabens such as methyl or propylparaben; catechin; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol and m -cresol); low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates including glucose, mannose or dextrans; chelating agents such as EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid); sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (eg Zn-protein complexes); and/or non-ionic surfactants such as TWEEN™, PLURONICS™ or polyethylene glycol (PEG). Pharmaceutically acceptable excipients are further described herein.

Описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно использовать для разных терапевтических или диагностических целей. Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент можно использовать в качестве агентов для аффинной очистки (например, для очистки TFPI in vitro), в качестве диагностического агента (например, для выявления экспрессии TFPI в конкретных клетках, тканях или сыворотке).The antibodies or antigen binding fragments described herein can be used for a variety of therapeutic or diagnostic purposes. For example, an antibody or antigen-binding fragment thereof can be used as affinity purification agents (eg, to purify TFPI in vitro ), as a diagnostic agent (eg, to detect TFPI expression in specific cells, tissues, or serum).

Типичные терапевтические применения антитела и фрагментов антитела по изобретению включают лечение тромбоцитопении, тромбоцитарных расстройств (нарушений функции или числа тромбоцитов) и расстройств, связанных с кровотечением (например, гемофилии А, гемофилии В и гемофилии С). Данные антитела и фрагменты антител также можно использовать для лечения неконтролируемого кровотечения при таких показаниях, как травма и геморрагический инсульт. Антитела и фрагменты антител также можно использовать в профилактическом лечении (например, перед хирургическими вмешательствами).Typical therapeutic uses of the antibody and antibody fragments of the invention include the treatment of thrombocytopenia, platelet disorders (impairments in platelet function or count), and bleeding disorders (eg, hemophilia A, hemophilia B, and hemophilia C). These antibodies and antibody fragments can also be used to treat uncontrolled bleeding in indications such as trauma and hemorrhagic stroke. Antibodies and antibody fragments can also be used in prophylactic treatment (eg, before surgery).

В частности, описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно использовать для лечения недостаточностей или дефектов свертывания крови. Например, описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно использовать для уменьшения или ингибирования взаимодействия TFPI с FXa, или для уменьшения TFPI-зависимого ингибирования активности TF/FVIIa/FXa.In particular, the antibodies or antigen-binding fragments described herein can be used to treat blood clotting deficiencies or defects. For example, antibodies or antigen binding fragments described herein can be used to reduce or inhibit the interaction of TFPI with FXa, or to reduce TFPI-dependent inhibition of TF/FVIIa/FXa activity.

Для терапевтических применений описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно вводить млекопитающему, особенно человеку, традиционными методиками, как, например, внутривенно (в виде болюса или посредством непрерывной инфузии на протяжении определенного периода времени), внутримышечно, внутрибрюшинно, в спинной мозг, подкожно, внутрь сустава, интрасиновиально, подоболочечно, перорально, местно или посредством ингаляции. Антитела или антигенсвязывающие фрагменты также подходящим образом вводятся внутриопухолевыми, околоопухолевыми, внутриочаговыми или околоочаговыми путями.For therapeutic applications, the antibodies or antigen-binding fragments described herein can be administered to a mammal, especially a human, by conventional techniques, such as intravenously (by bolus or continuous infusion over a period of time), intramuscularly, intraperitoneally, intraperitoneally, subcutaneously , intra-articularly, intrasynovially, intrathecally, orally, topically or by inhalation. Antibodies or antigen-binding fragments are also suitably administered via intratumoral, peritumoral, intralesional or perisolate routes.

Соответственно, в одном аспекте согласно изобретению предложен способ уменьшения активности ингибитора пути тканевого фактора (TFPI), включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества описанных в настоящем описании антител или антигенсвязывающих фрагментов. В другом аспекте согласно изобретению предложен способ сокращения времени кровотечения, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества описанных в настоящем описании антител или антигенсвязывающих фрагментов.Accordingly, in one aspect, the invention provides a method of reducing the activity of a tissue factor pathway inhibitor (TFPI), comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of antibodies or antigen binding fragments described herein. In another aspect, the invention provides a method of reducing bleeding time, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutically effective amount of antibodies or antigen binding fragments described herein.

В некоторых воплощениях субъект представляет собой человека.In some embodiments, the subject is a human.

В некоторых воплощениях данный субъект страдает от или является подверженным недостаточности свертывания крови. Недостаточность в свертывании крови включает, например, болезнь фон Виллебранда (vWD), гемофилии А, В или С и другие тромбоцитарные расстройства (такие как врожденные тромбоцитарные дефекты, врожденная и приобретенная недостаточность пула тромбоцитов, удлиненное время кровотечения).In some embodiments, the subject suffers from or is susceptible to a clotting deficiency. Deficiencies in blood clotting include, for example, von Willebrand disease (vWD), hemophilia A, B or C and other platelet disorders (such as congenital platelet defects, congenital and acquired platelet pool deficiency, prolonged bleeding time).

В некоторых воплощениях описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты вводятся подкожно. В некоторых воплощениях описанные в настоящем описании антитела или антигенсвязывающие фрагменты вводятся внутривенно.In some embodiments, antibodies or antigen binding fragments described herein are administered subcutaneously. In some embodiments, antibodies or antigen binding fragments described herein are administered intravenously.

Фармацевтические композиции могут вводиться субъекту, нуждающемуся в этом, с частотой, которая может варьировать в зависимости от тяжести эпизода кровотечения или, в случае профилактической терапии, может варьировать в зависимости от тяжести недостаточности свертывания крови пациента.The pharmaceutical compositions may be administered to a subject in need thereof at a frequency that may vary depending on the severity of the bleeding episode or, in the case of prophylactic therapy, may vary depending on the severity of the patient's coagulation deficiency.

Композиции могут вводиться нуждающимся пациентам в виде болюса или посредством непрерывной инфузии. Например, болюсное введение антитела, присутствующего в виде фрагмента Fab, может осуществляться в количестве от 0,0025 до 100 мг/кг массы тела, от 0,025 до 0,25 мг/кг, от 0,010 до 0,10 мг/кг или 0,10-0,50 мг/кг. Для непрерывной инфузии антитело, присутствующее в виде фрагмента Fab, может вводиться дозировке от 0,001 до 100 мг/кг массы тела/минуту, от 0,0125 до 1,25 мг/кг/мин, от 0,010 до 0,75 мг/кг/мин, от 0,010 до 1,0 мг/кг/мин или 0,10-0,50 мг/кг/мин в течение периода 1-24 часов, 1-12 часов, 2-12 часов, 6-12 часов, 2-8 часов или 1-2 часов.The compositions may be administered to patients in need as a bolus or by continuous infusion. For example, a bolus of the antibody present as a Fab fragment may be administered in an amount of 0.0025 to 100 mg/kg body weight, 0.025 to 0.25 mg/kg, 0.010 to 0.10 mg/kg, or 0. 10-0.50 mg/kg. For continuous infusion, the antibody present as a Fab fragment can be administered at a dosage of 0.001 to 100 mg/kg body weight/minute, 0.0125 to 1.25 mg/kg/minute, 0.010 to 0.75 mg/kg/minute min, from 0.010 to 1.0 mg/kg/min or 0.10-0.50 mg/kg/min over a period of 1-24 hours, 1-12 hours, 2-12 hours, 6-12 hours, 2 -8 hours or 1-2 hours.

Для введения антитела, присутствующего в виде полноразмерного антитела (с полными константными областями), количества дозировки могут составлять от примерно 1 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 2 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 3 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 4 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 5 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 20 мг/кг, от примерно 2 мг/кг до примерно 20 мг/кг, от примерно 3 мг/кг до примерно 20 мг/кг, от примерно 4 мг/кг до примерно 20 мг/кг, от примерно 5 мг/кг до примерно 20 мг/кг, примерно 1 мг/кг или больше, примерно 2 мг/кг или больше, примерно 3 мг/кг или больше, примерно 4 мг/кг или больше, примерно 5 мг/кг или больше, примерно 6 мг/кг или больше, примерно 7 мг/кг или больше, примерно 8 мг/кг или больше, примерно 9 мг/кг или больше, примерно 10 мг/кг или больше, примерно 11 мг/кг или больше, примерно 12 мг/кг или больше, примерно 13 мг/кг или больше, примерно 14 мг/кг или больше, примерно 15 мг/кг или больше, примерно 16 мг/кг или больше, примерно 17 мг/кг или больше, примерно 19 мг/кг или больше, или примерно 20 мг/кг или больше. Частота введения зависела бы от тяжести состояния. Частота могла бы варьировать от трех раз в неделю до одного раза каждые две или три недели.To administer an antibody present as a full-length antibody (with full constant regions), dosage amounts may range from about 1 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 2 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 3 mg /kg to about 10 mg/kg, from about 4 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 5 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 1 mg/kg to about 20 mg/kg, from about 2 mg/kg to about 20 mg/kg, about 3 mg/kg to about 20 mg/kg, about 4 mg/kg to about 20 mg/kg, about 5 mg/kg to about 20 mg/kg, about 1 mg/kg or more, about 2 mg/kg or more, about 3 mg/kg or more, about 4 mg/kg or more, about 5 mg/kg or more, about 6 mg/kg or more, about 7 mg/kg or more, about 8 mg/kg or more, about 9 mg/kg or more, about 10 mg/kg or more, about 11 mg/kg or more, about 12 mg/kg or more, about 13 mg/kg kg or more, about 14 mg/kg or more, about 15 mg/kg or more, about 16 mg/kg or more, about 17 mg/kg or more, about 19 mg/kg or more, or about 20 mg/kg or more. The frequency of administration would depend on the severity of the condition. The frequency could vary from three times a week to once every two or three weeks.

Дополнительно композиции могут вводиться пациентам посредством подкожной инъекции. Например, доза от 1 до 100 мг антитела против TFPI может вводиться пациентам посредством подкожной инъекции один раз в сутки, один раз в 2 суток, один раз в 3 суток, один раз в 4 суток, один раз в 5 суток, один раз в 6 суток, дважды в неделю, еженедельно, раз в две недели или ежемесячно.Additionally, the compositions can be administered to patients by subcutaneous injection. For example, a dose of 1 to 100 mg of anti-TFPI antibody can be administered to patients by subcutaneous injection once daily, once every 2 days, once every 3 days, once every 4 days, once every 5 days, once every 6 days daily, twice a week, weekly, biweekly or monthly.

В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция вводится подкожно посредством еженедельной схемы с дозой от примерно 0,1 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 0,5 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 1,5 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 2 мг/кг до примерно 10 мг/кг, от примерно 0,1 мг/кг до примерно 8 мг/кг, от примерно 0,5 мг/кг до примерно 8 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 8 мг/кг, от примерно 1,5 мг/кг до примерно 8 мг/кг, от примерно 2 мг/кг до примерно 8 мг/кг, от примерно 0,1 мг/кг до примерно 5 мг/кг, от примерно 0,5 мг/кг до примерно 5 мг/кг, от примерно 1 мг/кг до примерно 5 мг/кг, от примерно 1,5 мг/кг до примерно 5 мг/кг, от примерно 2 мг/кг до примерно 5 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 1,0 мг/кг, примерно 1,5 мг/кг, примерно 2,0 мг/кг, примерно 2,5 мг/кг, примерно 3,0 мг/кг, примерно 3,5 мг/кг, примерно 4,0 мг/кг, примерно 4,5 мг/кг, примерно 5,0 мг/кг, примерно 5,5 мг/кг, примерно 6,0 мг/кг, примерно 6,5 мг/кг, примерно 7,0 мг/кг, примерно 7,5 мг/кг, примерно 8,0 мг/кг, примерно 8,5 мг/кг, примерно 9,0 мг/кг, примерно 9,5 мг/кг или примерно 10,0 мг/кг.In some embodiments, the pharmaceutical composition is administered subcutaneously via a weekly dosage regimen of about 0.1 mg/kg to about 10 mg/kg, about 0.5 mg/kg to about 10 mg/kg, about 1 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 1.5 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 2 mg/kg to about 10 mg/kg, from about 0.1 mg/kg to about 8 mg/kg, from about 0.5 mg/kg to about 8 mg/kg, about 1 mg/kg to about 8 mg/kg, about 1.5 mg/kg to about 8 mg/kg, about 2 mg/kg to about 8 mg/kg, from about 0.1 mg/kg to about 5 mg/kg, from about 0.5 mg/kg to about 5 mg/kg, from about 1 mg/kg to about 5 mg/kg, from about 1 .5 mg/kg to about 5 mg/kg, about 2 mg/kg to about 5 mg/kg, about 0.5 mg/kg, about 1.0 mg/kg, about 1.5 mg/kg, about 2.0 mg/kg, approximately 2.5 mg/kg, approximately 3.0 mg/kg, approximately 3.5 mg/kg, approximately 4.0 mg/kg, approximately 4.5 mg/kg, approximately 5, 0 mg/kg, approximately 5.5 mg/kg, approximately 6.0 mg/kg, approximately 6.5 mg/kg, approximately 7.0 mg/kg, approximately 7.5 mg/kg, approximately 8.0 mg /kg, about 8.5 mg/kg, about 9.0 mg/kg, about 9.5 mg/kg, or about 10.0 mg/kg.

В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция вводится подкожно посредством еженедельной схемы с дозой примерно 2,0 мг/кг. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция вводится подкожно посредством еженедельной схемы с дозой примерно 3,0 мг/кг.In some embodiments, the pharmaceutical composition is administered subcutaneously via a weekly schedule at a dose of approximately 2.0 mg/kg. In some embodiments, the pharmaceutical composition is administered subcutaneously via a weekly schedule at a dose of approximately 3.0 mg/kg.

Описанные в настоящем описании антитела и фрагменты антител можно использовать в качестве монотерапии или в комбинации с другими терапиями для лечения гемостатического расстройства. Например, совместное введение одного или более чем одного антитела (или фрагмента антитела) по изобретению со свертывающим агентом, таким как фактор VIIa, фактор VIII, фактор IX или транексамовая кислота, может быть полезным для лечения гемофилии.The antibodies and antibody fragments described herein can be used as monotherapy or in combination with other therapies to treat a hemostatic disorder. For example, co-administration of one or more antibodies (or antibody fragments) of the invention with a clotting agent such as factor VIIa, factor VIII, factor IX or tranexamic acid may be useful for the treatment of hemophilia.

В одном воплощении предложен способ лечения недостаточности в свертывании или сокращении времени кровотечения, включающий введение (а) первого количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента по изобретению и (б) второго количества фактора VIII или фактора IX. Возможно фактор VII не вводится совместно. В другом воплощении предложен способ лечения недостаточности в свертывании или сокращении времени кровотечения, включающий введение (а) первого количества антитела или антигенсвязывающего фрагмента по изобретению и (б) второго количества фактора VIII или фактора IX. Возможно фактор VII не вводится совместно. Специалист в этой области понял бы, что при лечении недостаточности в свертывании сокращение времени кровотечения также может называться сокращением времени свертывания.In one embodiment, there is provided a method of treating a deficiency in clotting or reducing bleeding time, comprising administering (a) a first amount of an antibody or antigen-binding fragment of the invention and (b) a second amount of factor VIII or factor IX. Factor VII may not be coadministered. In another embodiment, there is provided a method of treating a deficiency in clotting or reducing bleeding time, comprising administering (a) a first amount of an antibody or antigen-binding fragment of the invention and (b) a second amount of factor VIII or factor IX. Factor VII may not be coadministered. One skilled in the art would understand that in the treatment of clotting deficiencies, shortening bleeding time may also be referred to as shortening clotting time.

Данное изобретение также включает фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество комбинации антитела (или фрагмента антитела) по изобретению и фактора VIII или фактора IX, где данная композиция не содержит фактор VII. «Фактор VII» включает фактор VII и фактор VIIa.The present invention also includes a pharmaceutical composition containing a therapeutically effective amount of a combination of an antibody (or antibody fragment) of the invention and factor VIII or factor IX, where the composition does not contain factor VII. "Factor VII" includes factor VII and factor VIIa.

БИОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕПОНИРОВАНИЕBIOLOGICAL DEPOSITION

Репрезентативные материалы по настоящему изобретению были депонированы в Американскую коллекцию типовых культур, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, США, 22 июля 2015 г. Плазмидный вектор mAb-TFPI-106 VH, имеющий № АТСС РТА-122329, содержит вставку ДНК, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи антитела TFPI-106, и плазмидный вектор mAb-TFPI-106 VL, имеющий № АТСС РТА-122328, содержит вставку ДНК, кодирующую вариабельную область легкой цепи антитела TFPI-106. Депонирования осуществляли согласно положениям Будапештского соглашения по международному признанию депонирования микроорганизмов для цели патентной процедуры и инструкции на его основе (Будапештское соглашение). Это обеспечивает поддержание жизнеспособной культуры депонирования в течение 30 лет с даты депонирования. Депонирование будет сделано доступным АТСС согласно условиям Будапештского соглашения и с соблюдением соглашения между Pfizer Inc. и АТСС, что обеспечивает постоянную и неограниченную доступность потомства культуры депонирования для публики при выдаче подходящего патента США или при выкладывании в открытый доступ для публики любой патентной заявки США или иностранной патентной заявки, вне зависимости от того, что происходит сначала, и гарантирует доступность потомства для того, кто определен комиссаром США по патентам и торговым маркам как имеющий право на это согласно разделу 122 капитула 35 U.S.C. (свод законов США) и правам комиссара согласно им (включая раздел 1.14 капитула 37 C.F.R. (свод федеральных правил США) с особой ссылкой на 886 OG 638).Representative materials of the present invention have been deposited in the American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, USA, July 22, 2015. Plasmid vector mAb-TFPI-106 VH, having ATCC No. PTA-122329, contains a DNA insert encoding the variable region of the heavy chain of the antibody TFPI-106, and plasmid vector mAb-TFPI-106 VL , bearing No. ATCC PTA-122328, contains a DNA insert encoding the light chain variable region of the antibody TFPI-106. Deposits were carried out in accordance with the provisions of the Budapest Agreement for the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure and the instructions based on it (Budapest Agreement). This ensures that a viable deposit culture is maintained for 30 years from the date of deposit. The deposit will be made available to ATCC in accordance with the terms of the Budapest Agreement and subject to the agreement between Pfizer Inc. and ATCC, which ensures the continued and unrestricted availability of the progeny of the deposit culture to the public when an eligible U.S. patent is issued or when any U.S. patent application or foreign patent application is made available to the public, regardless of which comes first, and ensures that the progeny are available to the public. one who is determined by the United States Patent and Trademark Commissioner to be entitled thereto under section 122 of 35 U.S.C. (USC) and the Commissioner's rights thereunder (including 37 C.F.R. Section 1.14, with particular reference to 886 OG 638).

Правоприобретатель настоящей заявки согласен с тем, что, если культура депонированных материалов погибнет или будет потеряна, или повреждена при культивировании при подходящих условиях, данные материалы будут быстро заменены по уведомлению другими материалами такого же типа. Доступность депонированного материала не следует истолковывать как лицензию на воплощение данного изобретения на практике в нарушение прав, предоставляемых властью любого правительства согласно его патентному праву.The assignee of this application agrees that if a culture of deposited materials dies or is lost or damaged during cultivation under suitable conditions, such materials will be promptly replaced upon notice by other materials of the same type. The availability of the material deposited should not be construed as a license to practice this invention in violation of the rights granted by the authority of any government under its patent laws.

ПРИМЕРЫEXAMPLES

Данное изобретение далее подробно описано посредством ссылки на следующие экспериментальные примеры. Данные примеры приведены лишь для целей иллюстрации и не предназначены для того, чтобы быть ограничивающими, если не определено иначе. Таким образом, данное изобретение ни в коей мере не следует истолковывать как ограниченное следующими примерами, но скорее следует истолковывать как охватывающее все и любые вариации, которые становятся очевидными как результат предложенных здесь идей.The present invention is further described in detail by reference to the following experimental examples. These examples are provided for illustrative purposes only and are not intended to be limiting unless otherwise specified. Thus, the present invention should in no way be construed as being limited to the following examples, but rather should be construed as covering any and all variations that become apparent as a result of the ideas proposed herein.

Пример 1. Экспериментальные материалы и методыExample 1: Experimental Materials and Methods

1. Белковые реагенты TFPI1. TFPI protein reagents

Белковые реагенты, используемые для иммунизации, селекции на основе фагового дисплея и характеризации антител против TFPI, перечислены в Таблице 1, и ID их последовательностей перечислены в Таблице 2.Protein reagents used for immunization, phage display selection, and anti-TFPI antibody characterization are listed in Table 1, and their sequence IDs are listed in Table 2.

Конструкции TFPI (вектор pSMED2) временно экспрессировались в клетках HEK293F, и кондиционированные среды отбирали через 120 часов после трансфекции. Интересующий белок захватывали из кондиционированных сред с использованием никель сефарозы НР и далее очищали посредством гель-фильтрации. Фактор Xa и фактор Х были приобретены у Haematologic Technologies, Inc. Хромогенный субстрат для амидолитического анализа Фактора Ха, представляющий собой Spectrozyme®ТFXa, был приобретен у Sekisui Diagnostics.TFPI constructs (pSMED2 vector) were transiently expressed in HEK293F cells, and conditioned media were collected 120 h posttransfection. The protein of interest was captured from conditioned media using Ni-Sepharose HP and further purified by gel filtration. Factor Xa and factor X were purchased from Haematologic Technologies, Inc. The chromogenic substrate for the Factor Xa amidolytic assay, Spectrozyme®TFXa, was purchased from Sekisui Diagnostics.

Таблица 1
Белковые реагенты, использованные для иммунизации, селекции на основе фагового дисплея и идентификации антител против TFPI Table 1
Protein reagents used for immunization, phage display selection, and identification of anti-TFPI antibodies ID последовательности (см. Таблицу 2)Sequence ID (see Table 2) Белковый реагентProtein reagent ВидView Секреторная лидерная последова-тельностьSecretory leader sequence TFPITFPI C-концевая меткаC-terminal tag humTFPI K1K2humTFPI K1K2 человекHuman 99 11 88 humTFPI K1K2K3humTFPI K1K2K3 человекHuman 99 22 88 humTFPI2 K1K2K3humTFPI2 K1K2K3 человекHuman 99 33 88 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 мышьmouse 99 44 88 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 яванский макакcynomolgus macaque 99 55 88 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 кроликrabbit 99 66 88 ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 крысаrat 99 77 88

Таблица 2
Идентификационные номера последовательностей реагентов TFPI, описания и последовательности table 2
TFPI reagent sequence identification numbers, descriptions and sequences ID посл.ID last ОписаниеDescription ПоследовательностьSubsequence 11 Человеческий TFPIα K1K2 (№ доступа P10646, остатки 29-177)Human TFPIα K1K2 (accession no. P10646, residues 29-177) DSEEDEEHTI ITDTELPPLK LMHSFCAFKA DDGPCKAIMK RFFFNIFTRQ CEEFIYGGCE GNQNRFESLE ECKKMCTRDN ANRIIKTTLQ QEKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQTK QCERFKYGGC LGNMNNFETL EECKNICEDDSEEDEEHTI ITDTELPPLK LMHSFCAFKA DDGPCKAIMK RFFFNIFTRQ CEEFIYGGCE GNQNRFESLE ECKKMCTRDN ANRIIKTTLQ QEKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQTK QCERFKYGGC LGNMNNFETL EECKNICED 22 Человеческий TFPIα K1K2K3 (№ доступа P10646, остатки 29-282)Human TFPIα K1K2K3 (accession no. P10646, residues 29-282) DSEEDEEHTI ITDTELPPLK LMHSFCAFKA DDGPCKAIMK RFFFNIFTRQ CEEFIYGGCE GNQNRFESLE ECKKMCTRDN ANRIIKTTLQ QEKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQTK QCERFKYGGC LGNMNNFETL EECKNICEDG PNGFQVDNYG TQLNAVNNSL TPQSTKVPSL FEFHGPSWCL TPADRGLCRA NENRFYYNSV IGKCRPFKYS GCGGNENNFT SKQECLRACK KGFIQRISKG GLIKDSEEDEEHTI ITDTELPPLK LMHSFCAFKA DDGPCKAIMK RFFFNIFTRQ CEEFIYGGCE GNQNRFESLE ECKKMCTRDN ANRIIKTTLQ QEKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQTK QCERFKYGGC LGNMNNFETL EECKNICEDG PNGFQVDNYG TQLNAVNNSL TPQSTKVPSL FEFH GPSWCL TPADRGLCRA NENRFYYNSV IGKCRPFKYS GCGGNENNFT SKQECLRACK KGFIQRISKG GLIK 33 Человеческий TFPI2 K1K2K3 (№ доступа P10646, остатки 23-211)Human TFPI2 K1K2K3 (accession no. P10646, residues 23-211) DAAQEPTGNN AEICLLPLDY GPCRALLLRY YYDRYTQSCR QFLYGGCEGN ANNFYTWEAC DDACWRIEKV PKVCRLQVSV DDQCEGSTEK YFFNLSSMTC EKFFSGGCHR NRIENRFPDE ATCMGFCAPK KIPSFCYSPK DEGLCSANVT RYYFNPRYRT CDAFTYTGCG GNDNNFVSRE DCKRACAKADAAQEPTGNN AEICLLPLDY GPCRALLLRY YYDRYTQSCR QFLYGGCEGN ANNFYTWEAC DDACWRIEKV PKVCRLQVSV DDQCEGSTEK YFFNLSSMTC EKFFSGGCHR NRIENRFPDE ATCMGFCAPK KIPSFCYSPK DEGLCSANVT RYYFNPRYRT CDAFTYTGCG GNDNNFVSRE DCKRACAKA 44 Мышиный TFPI K1K2 (№ доступа O54819, остатки 29-174)Mouse TFPI K1K2 (accession no. O54819, residues 29-174) LSEEADDTDS ELGSMKPLHT FCAMKADDGP CKAMIRSYFF NMYTHQCEEF IYGGCEGNEN RFDTLEECKK TCIPGYEKTA VKAASGAERP DFCFLEEDPG LCRGYMKRYL YNNQTKQCER FVYGGCLGNR NNFETLDECK KICENPLSEEADDTDS ELGSMKPLHT FCAMKADDGP CKAMIRSYFF NMYTHQCEEF IYGGCEGNEN RFDTLEECKK TCIPGYEKTA VKAASGAERP DFCFLEEDPG LCRGYMKRYL YNNQTKQCER FVYGGCLGNR NNFETLDECK KICENP 55 TFPI K1K2 яванского макака (№ доступа Q2PFV4,
остатки 29-177)Cynomolgus TFPI K1K2 (Accession No. Q2PFV4,
residues 29-177) DSEEDEEYTI ITDTELPPLK LMHSFCAFKP DDGPCKAIMK RFFFNIFTRQ CEEFIYGGCG GNQNRFESME ECKKVCTRDN VNRIIQTALQ KEKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQSK QCERFKYGGC LGNMNNFETL EECKNTCEDDSEEDEEYTI ITDTELPPLK LMHSFCAFKP DDGPCKAIMK RFFFNIFTRQ CEEFIYGGCG GNQNRFESME ECKKVCTRDN VNRIIQTALQ KEKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQSK QCERFKYGGC LGNMNNFETL EECKNTCED 66 Кроличий TFPI K1K2 (№ доступа P19761, остатки 29-177)Rabbit TFPI K1K2 (accession no. P19761, residues 29-177) AAEEDEEFTN ITDIKPPLQK PTHSFCAMKV DDGPCRAYIK RFFFNILTHQ CEEFIYGGCE GNENRFESLE ECKEKCARDY PKMTTKLTFQ KGKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQSK QCERFKYGGC LGNLNNFESL EECKNTCENAAEEDEEFTN ITDIKPPLQK PTHSFCAMKV DDGPCRAYIK RFFFNILTHQ CEEFIYGGCE GNENRFESLE ECKEKCARDY PKMTTKLTFQ KGKPDFCFLE EDPGICRGYI TRYFYNNQSK QCERFKYGGC LGNLNNFESL EECKNTCEN 77 Крысиный TFPI K1K2 (№ доступа Q02445, остатки 29-176)Rat TFPI K1K2 (accession no. Q02445, residues 29-176) LPEEDDDTIN TDSELRPMKP LHTFCAMKAE DGPCKAMIRS YYFNMNSHQC EEFIYGGCRG NKNRFDTLEE CRKTCIPGYK KTTIKTTSGA EKPDFCFLEE DPGICRGFMT RYFYNNQSKQ CEQFKYGGCL GNSNNFETLE ECRNTCEDLPEEDDDTIN TDSELRPMKP LHTFCAMKAE DGPCKAMIRS YYFNMNSHQC EEFIYGGCRG NKNRFDTLEE CRKTCIPGYK KTTIKTTSGA EKPDFCFLEE DPGICRGFMT RYFYNNQSKQ CEQFKYGGCL GNSNNFETLE ECRNTCED 88 Остатки спейсера выделены курсивом, AviTag™ подчеркнута, метка His-8 выделена жирным шрифтомSpacer residues are in italics, AviTag™ is underlined, His-8 tag is in bold GGGSGGGGGSGG GLND IFEAQKIEWH EGLND IFEAQKIEWH E GGPPGGPP HHHHH HHHHHHHHHH HHHHH 99 Секреторная лидерная последовательность цепи каппа мышиного Ig (№ доступа P01661, остатки 1-20)Mouse Ig kappa chain secretory leader sequence (accession no. P01661, residues 1-20) METDTLLLWV LLLWVPGSTGMETDTLLLWV LLLWVPGSTG

2. Реагенты - антитела2. Reagents - antibodies

Моноклональные антитела, используемые для целей сравнения (эталонные антитела 2A8, 2A8-200, 3F18, hz4F36), перечислены в Таблице 3. Описания, источники и последовательности антител перечислены в Таблице 4 (Фиг. 5). Последовательности легкой цепи и тяжелой цепи клонировали в подходящие векторы, временно экспрессировали в клетках человеческой эмбриональной почки-293 (HEK-293) и очищали посредством белок А-сефарозы и гель-фильтрации. Mab 2974 приобретали у R&D Systems (каталожный № MAB2974).Monoclonal antibodies used for comparison purposes (reference antibodies 2A8, 2A8-200, 3F18, hz4F36) are listed in Table 3. Descriptions, sources and sequences of antibodies are listed in Table 4 (Fig. 5). The light chain and heavy chain sequences were cloned into appropriate vectors, transiently expressed in human embryonic kidney-293 (HEK-293) cells and purified by protein A-Sepharose and gel filtration. Mab 2974 was purchased from R&D Systems (catalog no. MAB2974).

Таблица 3
Идентификационные номера последовательности (SeqID) антител для CDR1,2,3 легкой цепи (LC), вариабельной области легкой цепи (VL), константной области легкой цепи (СL), легкой цепи (LC), CDR1,2,3 тяжелой цепи (НC), вариабельной области тяжелой цепи (VН), константной области тяжелой цепи (СН) и тяжелой цепи (НС). Состав последовательностей для номеров SeqID приводится в Таблице 4. Table 3
Sequence identification numbers (SeqID) of antibodies for CDR1,2,3 light chain (LC), variable region of light chain (VL), constant region of light chain (CL), light chain (LC), CDR1,2,3 heavy chain (HC ), heavy chain variable region (VH), heavy chain constant region (CH) and heavy chain (HC). The sequence composition for SeqID numbers is given in Table 4. SeqID легкой цепи (см. Таблицу 4)Light chain SeqID (see Table 4) SeqID тяжелой цепи (см. Таблицу 4)Heavy chain SeqID (see Table 4) АнтителоAntibody LC
CDR1L.C.
CDR1 LC CDR2LC CDR2 LC
CDR3L.C.
CDR3 VLVL CLC.L. LCL.C. HC
CDR1HC
CDR1 HC
CDR2HC
CDR2 HC
CDR3HC
CDR3 VHVH CHCH HCHC TFPI-3 TFPI-3 1010 11eleven 1212 1313 1414 1515 1616 1717 1818 1919 2020 2121 TFPI-21 TFPI-21 2222 2323 2424 2525 2626 2727 2828 2929 30thirty 3131 2020 3232 TFPI-23 TFPI-23 3333 3434 3535 3636 2626 3737 3838 3939 4040 4141 2020 4242 TFPI-24 TFPI-24 4343 4444 4545 4646 2626 4747 4848 4949 5050 5151 2020 5252 TFPI-26 TFPI-26 5353 5454 5555 5656 2626 5757 5858 5959 6060 6161 2020 6262 TFPI-106 TFPI-106 3333 3434 3535 3636 2626 3737 3838 3939 4040 6363 2020 6464 TFPI-107 TFPI-107 3333 3434 3535 3636 2626 3737 3838 3939 4040 6565 2020 6666 TFPI-108 TFPI-108 4343 4444 4545 4646 2626 4747 4848 4949 5050 6767 2020 6868 TFPI-109 TFPI-109 4343 4444 4545 4646 2626 4747 4848 4949 5050 6969 2020 7070 TFPI-110 TFPI-110 4343 4444 4545 7171 2626 7272 4848 4949 5050 5151 2020 5252 TFPI-111 TFPI-111 4343 4444 4545 7373 2626 7474 4848 4949 5050 5151 2020 5252 TFPI-112 TFPI-112 4343 4444 4545 7575 2626 7676 4848 4949 5050 5151 2020 5252 TFPI-113 TFPI-113 4343 4444 4545 7777 2626 7878 4848 4949 5050 5151 2020 5252 TFPI-114 TFPI-114 4343 4444 4545 4646 2626 4747 4848 4949 5050 7979 2020 8080 TFPI-115 TFPI-115 4343 4444 4545 7171 2626 7272 4848 4949 5050 6767 2020 6868 TFPI-118 TFPI-118 4343 4444 4545 7777 2626 7878 4848 4949 5050 6767 2020 6868 TFPI-119 TFPI-119 4343 4444 4545 7171 2626 7272 4848 4949 5050 6969 2020 7070 TFPI-122 TFPI-122 4343 4444 4545 7777 2626 7878 4848 4949 5050 6969 2020 7070 TFPI-123 TFPI-123 4343 4444 4545 7171 2626 7272 4848 4949 5050 5151 2020 5252 TFPI-126 TFPI-126 4343 4444 4545 7777 2626 7878 4848 4949 5050 5151 2020 5252 4D8.b14D8.b1 8181 8282 8383 8484 8585 8686 8787 8888 8989 9090 9191 9292 Химера mu-hu 4D8 Chimera mu-hu 4D8 8181 8282 8383 8484 1414 9393 8787 8888 8989 9090 2020 9494 4D8-Vk1.0 × VH1.04D8-V k 1.0 × V H 1.0 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 9595 2020 9696 4D8-Vk1.0 × VH1.14D8-V k 1.0 × V H 1.1 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 9797 2020 9898 4D8-Vk1.0 × VH1.24D8-V k 1.0 × V H 1.2 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 9999 2020 100100 4D8-Vk1.0 × VH1.34D8-V k 1.0 × V H 1.3 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 101101 2020 102102 4D8-Vk1.0 × VH1.44D8-V k 1.0 × V H 1.4 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 103103 2020 104104 4D8-Vk1.0 × VH1.54D8-V k 1.0 × V H 1.5 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 105105 2020 106106 4D8-Vk1.0 × VH1.64D8-V k 1.0 × V H 1.6 8181 8282 8383 109109 1414 110110 8787 8888 8989 107107 2020 108108 4D8-Vk1.1 × VH1.04D8-V k 1.1 × V H 1.0 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 9595 2020 9696 4D8-Vk1.1 × VH1.14D8-V k 1.1 × V H 1.1 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 9797 2020 9898 4D8-Vk1.1 × VH1.24D8-V k 1.1 × V H 1.2 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 9999 2020 100100 4D8-Vk1.1 × VH1.34D8-V k 1.1 × V H 1.3 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 101101 2020 102102 4D8-Vk1.1 × VH1.44D8-V k 1.1 × V H 1.4 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 103103 2020 104104 4D8-Vk1.1 × VH1.54D8-V k 1.1 × V H 1.5 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 105105 2020 106106 4D8-Vk1.1 × VH1.64D8-V k 1.1 × V H 1.6 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 107107 2020 108108 hz4D8hz4D8 8181 8282 8383 111111 1414 112112 8787 8888 8989 103103 2020 104104 6B7.c56B7.c5 113113 114114 115115 116116 8585 117117 118118 119119 120120 121121 9191 122122 7A4.D97A4.D9 123123 124124 125125 126126 8585 127127 128128 129129 130130 131131 9191 132132 2A82A8 133133 134134 135135 136136 2626 137137 138138 139139 140140 141141 2020 142142 2A8-2002A8-200 143143 144144 145145 146146 2626 147147 148148 149149 150150 151151 2020 152152 3F183F18 153153 154154 155155 156156 157157 158158 159159 160160 161161 162162 8181 163163 hz4F36hz4F36 164164 165165 166166 167167 1414 168168 169169 170170 171171 172172 173173 174174

3. ELISA связывания TFPI3. TFPI binding ELISA

Рекомбинантные humTFPI K1K2, murTFPI K1K2, cynTFPI K1K2, ratTFPI K1K2, rabTFPI K1K2 или TFPI2 биотинилировали с использованием системы AviTag™ и захватывали на покрытых стрептавидином 96-луночных планшетах Greiner в концентрации 1 × 10-8 М в буфере для анализа ELISA. Очищенные антитела против TFPI разводили до 1 мкг/мл в буфере для анализа ELISA, затем серийно трехкратно разводили с получением восьмиточечных серий разведения. Разведенные антитела добавляли в объеме 100 мкл на лунку. Планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. После промывки планшетов PBS (фосфатно-солевой буферный раствор)/0,05% Tween 20 планшеты инкубировали с поликлональным антителом козы против мышиного IgG-Fc, конъюгированным с пероксидазой хрена (Pierce) в разведении 1:10000. После 1 часа инкубации связавшееся антитело выявляли добавлением раствора суб страта TMB (тетраметилбензидин). Поглощения считывали при 450 нм, и данные анализировали посредством программы GraphPad Prism.Recombinant humTFPI K1K2, murTFPI K1K2, cynTFPI K1K2, ratTFPI K1K2, rabTFPI K1K2 or TFPI2 were biotinylated using the AviTag™ system and captured on streptavidin-coated Greiner 96-well plates at a concentration of 1 × 10 -8 M in ELISA assay buffer. Purified anti-TFPI antibodies were diluted to 1 μg/ml in ELISA assay buffer and then serially diluted threefold to create an eight-point dilution series. Diluted antibodies were added in a volume of 100 μl per well. The plates were incubated at room temperature for 2 hours. After washing the plates with PBS/0.05% Tween 20, the plates were incubated with horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse IgG-Fc polyclonal antibody (Pierce) at a dilution of 1:10,000. After 1 hour of incubation, the bound antibody was detected by adding a solution of TMB (tetramethylbenzidine) substrate. Absorbances were read at 450 nm and data analyzed using GraphPad Prism software.

4. Поверхностный плазмонный резонанс (SPR)4. Surface plasmon resonance (SPR)

Сенсорный чип против человеческого Fc получали посредством аминного связывания антитела против человеческого IgG (каталожный номер BR-1008-39, GE Healthcare) со всеми четырьмя проточными ячейками сенсорного чипа, покрытого карбоксиметилированным декстраном (СМ5) (каталожный номер BR100530, GE Healthcare). Проточные ячейки активировали инъецированием смеси 1:1 400 мМ 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) в течение 7 минут при скорости тока 10 мкл/минуту. Антитело против человеческого IgG разводили до 25 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия, рН 5,0, и инъецировали над всеми проточными ячейками в течение 7 минут со скоростью 10 мкл/минуту. Все проточные ячейки блокировали 1 М этаноламин-HCl (ETH) в течение 7 минут при скорости тока 10 мкл/минуту. Конечный уровень иммобилизации захватывающего антитела составлял приблизительно 10000 резонансных единиц (RU). Проточным буфером для иммобилизации и определения кинетики был 10 мM HEPES, pH 7,4, 150 мM NaCl, 3 мM EDTA, 0,05% (об./об.) Tween-20 (HBS-EP+). Для характеризации связывания антител против TFPI с человеческим TFPI антитела разводили до 0,5 мкг/мл в HBS-EP+ и захватывали посредством антитела против человеческого IgG, иммобилизованного на проточных ячейках 2, 3 и 4 в течение 30 секунд - 1 минуты при скорости тока 5 мкл/минуту с достижением уровня захвата от 70 до 300 RU. Проточную ячейку 1 использовали в качестве контрольной поверхности. После захвата антитела скорость тока увеличивали до 50 мкл/минуту, и инъецировали буфер или человеческий TFPI в концентрации, варьирующей от 0,2 нМ до 200 нМ, в HBS-EP+ через все проточные ячейки на протяжении 1,0 минуты ассоциации, и обеспечивали диссоциацию в течение
10-15 минут. Циклы с буфером для каждого захваченного антитела использовали для двойного контроля (Myszka,D.G. J.Mol.Recognit. 12, 279-284 (1999)). В конце каждого цикла всю поверхность против IgG регенерировали посредством 60-секундного импульса 3 М MgCl2. Кинетические анализы проводили при 25°С при скорости получения сигнала 10 Гц на установке BIAcore T200 (GE Healthcare). Константы скорости и аффинности определяли посредством аппроксимации данных к модели 1:1 в программе BIAcore T200 Evaluation, версия 1.0 (GE).The anti-human Fc sensor chip was prepared by amine coupling of an anti-human IgG antibody (catalog number BR-1008-39, GE Healthcare) to all four flow cells of a carboxymethylated dextran (CM5)-coated sensor chip (catalog number BR100530, GE Healthcare). Flow cells were activated by injecting a 1:1 mixture of 400 mM 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) for 7 minutes at a flow rate of 10 μL/minute. Anti-human IgG antibody was diluted to 25 μg/ml in 10 mM sodium acetate, pH 5.0, and injected over all flow cells for 7 minutes at a rate of 10 μl/minute. All flow cells were blocked with 1 M ethanolamine-HCl (ETH) for 7 min at a flow rate of 10 μL/min. The final immobilization level of the capture antibody was approximately 10,000 resonance units (RU). The running buffer for immobilization and kinetics determination was 10 mM HEPES, pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% (v/v) Tween-20 (HBS-EP+). To characterize the binding of anti-TFPI antibodies to human TFPI, antibodies were diluted to 0.5 μg/ml in HBS-EP+ and captured with anti-human IgG immobilized on flow cells 2, 3 and 4 for 30 seconds to 1 minute at flow rate 5 µl/minute achieving a capture level of 70 to 300 RU. Flow cell 1 was used as a control surface. After antibody capture, the flow rate was increased to 50 μl/minute, and buffer or human TFPI at concentrations ranging from 0.2 nM to 200 nM was injected into HBS-EP+ through all flow cells for 1.0 minute of association, and dissociation was allowed to occur. during
10-15 minutes. Cycles with buffer for each captured antibody were used for double control (Myszka, DG J. Mol. Recognit. 12, 279-284 (1999)). At the end of each cycle, the entire anti-IgG surface was regenerated with a 60 second pulse of 3 M MgCl 2 . Kinetic analyzes were performed at 25°C with a signal acquisition rate of 10 Hz on a BIAcore T200 setup (GE Healthcare). Rate and affinity constants were determined by fitting the data to a 1:1 model in BIAcore T200 Evaluation, version 1.0 (GE).

5. Анализ обращения ингибирования Фактора Ха посредством TFPI5. Analysis of Factor Xa Inhibition Reversal by TFPI

Способность очищенных антител против TFPI восстанавливать активность Фактора Ха в присутствии ингибирующих концентраций TFPI оценивали in vitro. Антитела против TFPI, разведенные в PBS в концентрациях, варьирующих от 1 нМ до 500 нМ, предварительно инкубировали со следующими белками: 10 нМ рекомбинантный человеческий TFPI K1K2 или 10 нМ кроличий TFPI K1K2 в буфере для определения активности (20 мM HEPES, pH 8,0, 150 мM NaCl, 5 мM CaCl2, 0,5 мг/мл BSA) в течение 30 минут при 37°С. Добавляли 2 нМ Фактор Ха, полученный из человеческой плазмы, и реакционные смеси инкубировали при 37°С в течение 30 минут. Добавляли хромогенный субстрат спектрозим Ха до конечной концентрации 500 мкМ для конечного объема реакции 100 мкл. Контрольные реакции включали реакции без Фактора Ха для контроля фона анализа, без TFPI, обеспечивая максимальное образование FXa (100%-ная активность), или без антитела против TFPI (один PBS). Поглощения реакций немедленно считывали на многорежимном планшет-ридере SpectraMax M5e при длине волны 405 нм с 2-минутными интервалами на протяжении периода 60 минут. ЕС50 рассчитывали с использованием программы Prism Graph Pad.The ability of purified anti-TFPI antibodies to restore Factor Xa activity in the presence of inhibitory concentrations of TFPI was assessed in vitro . Anti-TFPI antibodies, diluted in PBS at concentrations ranging from 1 nM to 500 nM, were preincubated with the following proteins: 10 nM recombinant human TFPI K1K2 or 10 nM rabbit TFPI K1K2 in activity assay buffer (20 mM HEPES, pH 8.0 , 150 mM NaCl, 5 mM CaCl 2 , 0.5 mg/ml BSA) for 30 minutes at 37°C. 2 nM Factor Xa derived from human plasma was added and the reaction mixtures were incubated at 37°C for 30 minutes. The chromogenic substrate Spectrozyme Xa was added to a final concentration of 500 μM for a final reaction volume of 100 μL. Control reactions included reactions without Factor Xa to control for assay background, without TFPI to ensure maximum FXa production (100% activity), or without anti-TFPI antibody (PBS alone). Reaction absorbances were immediately read on a SpectraMax M5e multimode plate reader at 405 nm at 2-minute intervals over a 60-minute period. EC 50 was calculated using Prism Graph Pad.

6. Двухэтапный анализ обращения ингибирования TF-FVIIa-FX6. Two-Step TF-FVIIa-FX Inhibition Reversal Assay

Способность очищенных антител против TFPI восстанавливать активность Фактора VIIa-тканевого фактора в присутствии ингибирующих концентраций TFPI оценивали in vitro. Антитела против TFPI в концентрациях, варьирующих от 1 нМ до 500 нМ, предварительно инкубировали с 10 нМ рекомбинантными белками TFPI в буфере для определения активности в течение 30 минут при 37°С. В реакции добавляли приблизительно 1 пМ липидированный тканевой фактор и 1 нМ рекомбинантный Фактор VIIa (NovoSeven) и инкубировали при 37°С в течение 5 минут. В реакции вводили 150 нМ человеческий Фактор Х. Хромогенный субстрат спектрозим Ха добавляли до конечной концентрации 500 мкМ в каждую лунку для конечного объема реакции 100 мкл. Контрольные реакции включали реакции без Фактора VIIa, без тканевого фактора, без Фактора Х, без TFPI или без антитела против TFPI (один PBS). Поглощения реакций немедленно считывали на многорежимном планшет-ридере SpectraMax M5e при длине волны 405 нм с 2-минутными интервалами на протяжении периода 60 минут. ЕС50 рассчитывали с использованием программы Prism Graph Pad.The ability of purified anti-TFPI antibodies to restore Factor VIIa-tissue factor activity in the presence of inhibitory concentrations of TFPI was assessed in vitro . Anti-TFPI antibodies at concentrations ranging from 1 nM to 500 nM were preincubated with 10 nM recombinant TFPI proteins in activity assay buffer for 30 minutes at 37°C. The reaction was added with approximately 1 pM lipidated tissue factor and 1 nM recombinant Factor VIIa (NovoSeven) and incubated at 37°C for 5 minutes. The reaction was spiked with 150 nM human Factor X. The chromogenic substrate Spectrozyme Xa was added to a final concentration of 500 μM in each well for a final reaction volume of 100 μl. Control reactions included reactions without Factor VIIa, without tissue factor, without Factor X, without TFPI, or without anti-TFPI antibody (PBS alone). Reaction absorbances were immediately read on a SpectraMax M5e multimode plate reader at 405 nm at 2-minute intervals over a 60-minute period. EC 50 was calculated using Prism Graph Pad.

7. Анализ образования тромбина (TGA)7. Thrombin Generation Assay (TGA)

Способность очищенных антител против TFPI восстанавливать образование тромбина в плазме с ослабленной активностью Фактора VIII оценивали в анализах образования тромбина с использованием системы калиброванной автоматической тромбограммы (САТ). Антитела против TFPI в концентрациях 1 нМ - 500 нМ, разведенные в PBS, вводили в реакционные смеси, содержащие человеческую плазму, дефицитную по Фактору VIII, и реагент РРР-Low (обедненная тромбоцитами плазма), содержащий 4 мкМ фосфолипид и 1 пМ тканевой фактор. В контрольных реакциях использовался PBS без антитела. Реакции запускали добавлением буфера Fluca, содержащего флуорогенный тромбиновый субстрат и CaCl2. Флуоресценцию каждой реакции немедленно считывали с использованием планшет-ридера Fluoroskan Ascent с использованием программы Thrombinoscope с 20 секундным интервалом в течение 60 минут. Каждую реакцию сравнивали с калибраторной контрольной лункой, содержащей PBS, тромбин - калибровочный стандарт, дефицитную по FVIII плазму и буфер FLUCA. Кривые образования тромбина, полученные с использованием Thrombinoscope (нМ тромбина относительно времени), анализировали для извлечения лаг-перода, высоты пика, времени до пика и площади под кривой или эндогенного тромбинового потенциала (ЕТР) с использованием программы Thrombinoscope (Thrombinoscope, версия BV). Данные использовали для расчета индекса скорости (пиковая концентрация тромбина/ время до пика - лаг-период).The ability of purified anti-TFPI antibodies to restore thrombin generation in Factor VIII-impaired plasma was assessed in thrombin generation assays using a calibrated automated thrombogram (CAT) system. Antibodies against TFPI at concentrations of 1 nM - 500 nM, diluted in PBS, were introduced into reaction mixtures containing human plasma deficient in Factor VIII and PPP-Low reagent (platelet-poor plasma) containing 4 μM phospholipid and 1 pM tissue factor. Control reactions used PBS without antibody. Reactions were started by adding Fluca buffer containing fluorogenic thrombin substrate and CaCl 2 . The fluorescence of each reaction was immediately read using a Fluoroskan Ascent plate reader using Thrombinoscope software at 20 second intervals for 60 minutes. Each reaction was compared to a calibration control well containing PBS, thrombin calibration standard, FVIII-deficient plasma, and FLUCA buffer. Thrombin generation curves obtained using Thrombinoscope (nM thrombin versus time) were analyzed to extract lag time, peak height, time to peak, and area under the curve or endogenous thrombin potential (ETP) using Thrombinoscope software (Thrombinoscope version BV). The data were used to calculate the rate index (peak thrombin concentration/time to peak - lag period).

Также оценивали способность очищенных антител против TFPI восстанавливать образование тромбина в плазме кролика с ослабленной активностью FVIIIa. Нормальную плазму белого новозеландского кролика обрабатывали антителом против FVIII (GM-8015) в конечной концентрации 100 мкг/мл или контрольным мышиным антителом против человеческого IgG2a в концентрации 100 мкг/мл в течение 60 минут при 37°С. Непосредственно перед добавлением в реакционные лунки плазму кролика разводили 1:3 в буфере (20 мМ HEPES, 140 мМ NaCl). Анализы образования тромбина с кроличьей плазмой с нейтрализованным FVIII проводили, как описано выше.The ability of purified anti-TFPI antibodies to restore thrombin formation in rabbit plasma with attenuated FVIIIa activity was also assessed. Normal New Zealand white rabbit plasma was treated with anti-FVIII antibody (GM-8015) at a final concentration of 100 μg/ml or control mouse anti-human IgG2a antibody at a concentration of 100 μg/ml for 60 minutes at 37°C. Immediately before addition to the reaction wells, rabbit plasma was diluted 1:3 in buffer (20 mM HEPES, 140 mM NaCl). Thrombin generation assays with neutralized FVIII rabbit plasma were performed as described above.

8. Получение домена K2 TFPI яванского макака для структурных исследований8. Obtaining the cynomolgus TFPI K2 domain for structural studies

TFPI K1K2 яванского макака (cyno) (Таблица 1) экспрессировали в клетках HEK293, и кондиционированные среды отбирали через 120 часов после трансфекции. Очищенный TFPI K1K2 cyno инкубировали с человеческой эластазой нейтрофилов (HNE) в соотношении 1:70 (мольное отношение HNE:TFPI) в течение 120 мин при RT (комнатная температура) для того, чтобы происходило расщепление. Отделение K1 cyno от K2 cyno проводили с использованием анионообменной хроматографии на HQ50 (Poros). В качестве конечной стадии очистки проводили гель-фильтрацию с использованием Superdex 75. Эндопротеиназу AspN использовали для отрезания остаточной AviTag от С-конца домена K2 cyno.Cynomolgus (cyno) TFPI K1K2 (Table 1) was expressed in HEK293 cells, and conditioned media were collected 120 h posttransfection. Purified TFPI K1K2 cyno was incubated with human neutrophil elastase (HNE) at a ratio of 1:70 (HNE:TFPI molar ratio) for 120 min at RT (room temperature) to allow digestion to occur. Separation of K1 cyno from K2 cyno was performed using anion exchange chromatography on HQ50 (Poros). As a final purification step, gel filtration was performed using Superdex 75. Endoproteinase AspN was used to excise the residual AviTag from the C terminus of the K2 cyno domain.

9. Образование комплексов Fab антитела/K2 TFPI cyno для структурных исследований9. Formation of Fab antibody/K2 TFPI cyno complexes for structural studies

Антитела против TFPI, представляющие собой 4D8.b1, TFPI-23, TFPI-24, 2A8-200 (Таблица 3) и Mab 2974 (R&D systems), расщепляли иммобилизованным папаином согласно протоколу изготовителя (Thermo/Pierce). Использовали MabSelect SuRe для очистки из продуктов расщеления Fab, которые затем использовали для образования комплекса с K2 TFPI cyno. Затем комплексы Fab/K2 TFPI cyno концентрировали приблизительно до 16 мг/мл. Концентрированные комплексы затем использовали для скрининга на условия кристаллизации белка.Anti-TFPI antibodies, 4D8.b1, TFPI-23, TFPI-24, 2A8-200 (Table 3), and Mab 2974 (R&D systems), were digested with immobilized papain according to the manufacturer's protocol (Thermo/Pierce). MabSelect SuRe was used to purify from Fab digestion products, which were then used to complex with K2 TFPI cyno. The Fab/K2 TFPI cyno complexes were then concentrated to approximately 16 mg/ml. The concentrated complexes were then used to screen for protein crystallization conditions.

Пример 2. Образование мышиных антител против TFPIExample 2: Generation of Mouse Anti-TFPI Antibodies

1. Иммунизация мышей и получение гибридомы1. Immunization of mice and production of hybridoma

Каждую из групп из пяти мышей BALB/c подкожно иммунизировали смесью 5 мкг humTFPI K1K2 и 5 мкг murTFPI K1K2, эмульгированный в полном адъюванте Фрейнда. Затем мышей иммунизировали дважды в неделю смесью белка, поочередно эмульгированной в неполном адъюванте Фрейнда или разведенной в PBS. Образцы крови отбирали на сутки 17 и на сутки 27 (после пятых и седьмых иммунизаций соответственно), и сыворотки тестировали на присутствие циркулирующих антител против TFPI посредством ELISA. К суткам 27 каждая мышь получала конечную внутрибрюшинную бустерную иммунизацию смесью белка (10 мкг). Через четверо суток отбирали дренирующие лимфатические узлы (подмышечные, паховые и подколенные), и объединенные клетки лимфатических узлов смешивали в соотношении 1:1 с клетками P3X63.Ag8.653 и подвергали электрическому слиянию клеток. Слитые клетки высаживали на чашки в среды RPMI1640, дополненные FBS (фетальная телячья сыворотка) (25%), NCTC-109 (12,5%), Glutamax (1%), пенициллином-стрептомицином (1%), добавкой для клонирования гибридомы (5%) и HAT (1 × 10-4 М гипоксантина, 4 × 10-7 М аминоптерина и 1,6 × 10-5 М тимидина). Через четырнадцать суток после слияния супернатанты культуры гибридомы тестировали на связывание с humTFPI K1K2 посредством ELISA. На основе их активности связывания и их эффективности в функциональных анализах для дальнейшей характеристики были отобраны антитела из трех гибридом: 4D8, 6B7 и 7А4.Groups of five BALB/c mice were each immunized subcutaneously with a mixture of 5 μg humTFPI K1K2 and 5 μg murTFPI K1K2 emulsified in Freund's complete adjuvant. Mice were then immunized twice weekly with a protein mixture alternately emulsified in Freund's incomplete adjuvant or diluted in PBS. Blood samples were collected on day 17 and day 27 (after the fifth and seventh immunizations, respectively), and the sera were tested for the presence of circulating anti-TFPI antibodies by ELISA. By day 27, each mouse received a final intraperitoneal boost with protein mixture (10 μg). After four days, draining lymph nodes (axillary, inguinal, and popliteal) were collected, and the pooled lymph node cells were mixed in a 1:1 ratio with P3X63.Ag8.653 cells and subjected to electrical cell fusion. Confluent cells were plated in RPMI1640 media supplemented with FBS (fetal bovine serum) (25%), NCTC-109 (12.5%), Glutamax (1%), penicillin-streptomycin (1%), hybridoma cloning supplement ( 5%) and HAT (1 × 10 -4 M hypoxanthine, 4 × 10 -7 M aminopterin and 1.6 × 10 -5 M thymidine). Fourteen days after fusion, hybridoma culture supernatants were tested for binding to humTFPI K1K2 by ELISA. Based on their binding activity and their performance in functional assays, antibodies from three hybridomas, 4D8, 6B7, and 7A4, were selected for further characterization.

2. Клонирование и секвенирование антител против TFPI, полученных из гибридомы2. Cloning and sequencing of anti-TFPI antibodies obtained from hybridoma

Получали РНК из гибридом 4D8, 6B7 и 7А4, и последовательности ДНК вариабельной области из экспрессированных антител получали посредством клонирования ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой).
ПЦР-продукты клонировали в вектор для клонирования ТОРО-ТА, затем секвенировали традиционными способами. Из гибридом 6B7 и 7А4 выявляли одну пару кДНК тяжелой цепи и легкой цепи. Из 4D8 выявляли две кДНК тяжелой цепи и легкой цепи.RNA was prepared from hybridomas 4D8, 6B7 and 7A4, and variable region DNA sequences from the expressed antibodies were obtained by RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction) cloning.
PCR products were cloned into the TOPO-TA cloning vector and then sequenced using traditional methods. From hybridomas 6B7 and 7A4, one pair of heavy chain and light chain cDNAs was identified. From 4D8, two cDNAs were identified, heavy chain and light chain.

Пример 3. Характеристика антител против TFPI мышиной гибридомыExample 3. Characterization of antibodies against TFPI mouse hybridoma

Родительские гибридомы 4D8, 6B7 и 7А4 субклонировали посредством ограниченного разведения с получением моноклональных линий клеток гибридомы. Позитивные субклоны идентифицировали посредством скрининга ELISA на реактивность в отношении humTFPI K1K2 и размножали. Далее характеризовали очищенные антитела из одного субклона каждой гибридомы.The parental hybridomas 4D8, 6B7 and 7A4 were subcloned through limited dilution to generate monoclonal hybridoma cell lines. Positive subclones were identified by ELISA screening for humTFPI K1K2 reactivity and expanded. Purified antibodies from one subclone of each hybridoma were further characterized.

1. Связывание с TFPI1. TFPI binding

Очищенные антитела против TFPI 4D8.B1, 6B7.C5 и 7A4.D9 тестировали на связывание с рекомбинантными человеческим и кроличьим белками TFPI посредством ELISA связывания белка. Значения EC50 каждого антитела в отношении как humTFPI K1K2-aviHis10, так и rabTFPI K1K2 показаны в Таблице 5.Purified anti-TFPI antibodies 4D8.B1, 6B7.C5 and 7A4.D9 were tested for binding to recombinant human and rabbit TFPI proteins by protein binding ELISA. The EC 50 values of each antibody against both humTFPI K1K2-aviHis10 and rabTFPI K1K2 are shown in Table 5.

Таблица 5
Значения ЕС50 (нМ) мышиных MAb против TFPI в отношении человеческого и кроличьего TFPI Table 5
EC50 values (nM) of mouse anti-TFPI MAbs relative to human and rabbit TFPI АнтителоAntibody ECE.C. 5050 (нM) humTFPI K1K2 (nM) humTFPI K1K2 ECE.C. 5050 (нM) K1K2 rabTFPI (nM) K1K2 rabTFPI 4D8.B14D8.B1 0,09590.0959 0,09760.0976 6B7.C56B7.C5 0,12090.1209 0,12890.1289 7A4.D97A4.D9 0,08870.0887 0,08870.0887

Проводили эксперименты поверхностного плазмонного резонанса для оценки аффинности очищенных мышиных антител против TFPI в отношении человеческого и кроличьего белков TFPI K1K2. Значения ka, kd и KD для связывания каждого антитела с человеческим и кроличьим TFPI K1K2 приводятся в Таблице 6.Surface plasmon resonance experiments were performed to evaluate the affinity of purified mouse anti-TFPI antibodies for human and rabbit TFPI K1K2 proteins. The k a , k d and K D values for each antibody binding to human and rabbit TFPI K1K2 are given in Table 6.

Таблица 6
Кинетические измерения в отношении связывания мышиных гибридомных клонов против TFPI с человеческим и кроличьим TFPI Table 6
Kinetic measurements regarding the binding of mouse anti-TFPI hybridoma clones to human and rabbit TFPI АналитAnalyst ЛигандLigand kk aa (1/Mс) (1/Ms) kk dd (1/с)(1/s) KK DD (нM) (nM) humTFPI K1K2humTFPI K1K2 4D8.B14D8.B1 9,58 × 105 9.58 × 10 5 1,14 × 10-3 1.14×10 -3 1,191.19 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 6B7.C56B7.C5 5,52 × 105 5.52 × 10 5 3,63 × 10-3 3.63×10 -3 6,586.58 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 7A4.D97A4.D9 1,48 × 106 1.48 × 10 6 9,21 × 10-3 9.21×10 -3 6,226.22 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 4D8.B14D8.B1 2,01 × 106 2.01 × 10 6 1,26 × 10-3 1.26×10 -3 0,630.63 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 6B7.C56B7.C5 1,14 × 106 1.14 × 10 6 5,64 × 10-3 5.64×10 -3 4,954.95 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 7A4.D97A4.D9 5,30 × 106 5.30 × 10 6 1,88 × 10-2 1.88×10 -2 3,553.55

2. Анализы активности 2. Activity tests in vitroin vitro

Мышиные моноклональные антитела против TFPI тестировали на активность в анализах обращения ингибирования FXa и TF-FXa-FVIIa и в анализе образования тромбина (TGA). Было выбрано самое мощное антитело, представляющее собой 4D8.B1, для продвижения в дальнейшие исследования.Mouse monoclonal antibodies against TFPI were tested for activity in the FXa and TF-FXa-FVIIa inhibition reversal assays and in the thrombin generation assay (TGA). The most potent antibody, 4D8.B1, was selected to advance further research.

Таблица 7
Активность мышиных моноклональных антител против TFPI в анализах обращения ингибирования FXa и TF-FXa-FVIIa и в анализе образования тромбина (TGA) Table 7
Activity of mouse monoclonal antibodies against TFPI in the FXa and TF-FXa-FVIIa inhibition reversal assays and in the thrombin generation assay (TGA) АнтителоAntibody ECE.C. 5050 FXa (нM) FXa (nM) ECE.C. 5050 FXa-FVIIa (нM) FXa-FVIIa (nM) Индекс скорости TGA при 20 нMTGA rate index at 20 nM 4D8.B14D8.B1 5,95.9 6,676.67 26,326.3 6B7.C56B7.C5 13,913.9 12,1312.13 23,523.5 7A4.D97A4.D9 22,322.3 9,359.35 23,323.3

Пример 4. Получение химерных и гуманизированных антител из клона 4D8Example 4: Preparation of Chimeric and Humanized Antibodies from Clone 4D8

1. Получение мышинно-человеческого химерного антитела 4D81. Production of mouse-human chimeric antibody 4D8

кДНК вариабельной области, полученные из гибридомы 4D8, субклонировали в экспрессионные векторы млекопитающего с получением химерных антител, в которых вариабельная область тяжелой цепи мыши была слита в рамке считывания с человеческим IgG1 3M (SEQ 20, Таблица 4), и вариабельная область легкой цепи мыши была слита в рамке считывания с константной областью каппа человеческого Ig (SEQ 62, Таблица 4). Химерные конструкции временно трансфицировали в клетки HEK293. Для идентификации правильной пары тяжелой и легкой цепи из гибридомы 4D8 провели всего четыре временные трансфекции всеми возможными комбинациями тяжелой и легкой цепи. Антитело, полученное из одной из трансфекций, было названо химера hu-mu 4D8 (Таблицы 3 и 4).Variable region cDNAs derived from the 4D8 hybridoma were subcloned into mammalian expression vectors to produce chimeric antibodies in which the mouse heavy chain variable region was fused in frame to human IgG1 3M (SEQ 20, Table 4) and the mouse light chain variable region was fused in frame to human IgG1 3M (SEQ 20, Table 4) and the mouse light chain variable region was fused in frame to the kappa constant region of human Ig (SEQ 62, Table 4). Chimeric constructs were transiently transfected into HEK293 cells. To identify the correct heavy and light chain pair from the 4D8 hybridoma, a total of four transient transfections were performed with all possible combinations of heavy and light chain. The antibody obtained from one of the transfections was named hu-mu 4D8 chimera (Tables 3 and 4).

2. Характеристика мышинно-человеческого химерного антитела 4D8 (mu-hu 4D8)2. Characteristics of mouse-human chimeric antibody 4D8 (mu-hu 4D8)

Химеру mu-hu 4D8 тестировали на ее способность связываться и с человеческим, и с кроличьим белками TFPI K1K2 посредством ELISA связывания белка (Таблица 8) и SPR (Таблица 9). Значения KD и ЕС50 были хорошо сопоставимыми со значениями, измеренными с очищенным мышиным MAb 4D8.B1, демонстрируя то, что пересадка мышиных вариабельных областей, пересаженных на каркасную область человеческого IgG1, сохраняла активность связывания.The mu-hu 4D8 chimera was tested for its ability to bind to both human and rabbit TFPI K1K2 proteins by protein binding ELISA (Table 8) and SPR (Table 9). The KD and EC 50 values were well comparable to those measured with the purified mouse MAb 4D8.B1, demonstrating that grafting of mouse variable regions grafted onto the human IgG1 framework retained binding activity.

Таблица 8
Значения ЕС50 (нМ) химеры mu-hu 4D8 для человеческого и кроличьего TFPI Table 8
EC50 (nM) values of mu-hu 4D8 chimera for human and rabbit TFPI АнтителоAntibody ECE.C. 5050 (нM) humTFPI K1K2 (nM) humTFPI K1K2 ECE.C. 5050 (нM) rabTFPI K1K2 (nM) rabTFPI K1K2 Химера mu-hu 4D8 Chimera mu-hu 4D8 0,05770.0577 0,06800.0680

Таблица 9
Кинетические измерения для связывания химеры mu-hu 4D8 с человеческим и кроличьим TFPI Table 9
Kinetic measurements for binding of mu-hu 4D8 chimera to human and rabbit TFPI АналитAnalyst ЛигандLigand kk aa (1/Mс) (1/Ms) kk dd (1/с)(1/s) KK DD (нM) (nM) humTFPI K1K2humTFPI K1K2 химера
mu-hu 4D8 chimera
mu-hu 4D8 9,58 × 105 9.58 × 10 5 1,14 × 10-3 1.14×10 -3 1,191.19 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 химера
mu-hu 4D8chimera
mu-hu 4D8 2,01 × 106 2.01 × 10 6 1,26 × 10-3 1.26×10 -3 0,630.63

3. Гуманизация химеры hu-mu 4D83. Humanization of the hu-mu 4D8 chimera

Последовательность химеры hu-mu 4D8 гуманизировали посредством пересадки CDR на человеческие акцепторные последовательности каркасной области. Выбрали каркасную область DP54 и каркасную область DPK9. Затем экспрессировали комбинации конструкций тяжелой и легкой цепи (см. Таблицу 3). Антитела тестировали на связывание с человеческим и кроличьим TFPI в анализе связывания посредством ELISA (Таблица 10) и на связывание с человеческим TFPI в анализе связывания SPR (Таблица 11).The hu-mu 4D8 chimera sequence was humanized by grafting the CDR onto human framework acceptor sequences. The DP54 framework region and the DPK9 framework region were selected. Combinations of heavy and light chain constructs were then expressed (see Table 3). Antibodies were tested for binding to human and rabbit TFPI in an ELISA binding assay (Table 10) and for binding to human TFPI in a SPR binding assay (Table 11).

Таблица 10
Значения ЕС50 (нМ) связывания гуманизированных антител 4D8 c человеческим и кроличьим белками TFPI K1K2 Table 10
EC 50 (nM) values for binding of humanized 4D8 antibodies to human and rabbit TFPI K1K2 proteins АнтителоAntibody ECE.C. 5050 (нM) humTFPI K1K2 (nM) humTFPI K1K2 ECE.C. 5050 (нM) rabTFPI K1K2 (nM) rabTFPI K1K2 4D8 Vk 1.0 × VH 1.04D8 V k 1.0 × V H 1.0 0,07720.0772 0,07850.0785 4D8 Vk 1.0 × VH 1.14D8 V k 1.0 × V H 1.1 0,08840.0884 0,07050.0705 4D8 Vk 1.0 × VH 1.24D8 V k 1.0 × V H 1.2 0,07580.0758 0,04220.0422 4D8 Vk 1.0 × VH 1.34D8 V k 1.0 × V H 1.3 0,08220.0822 0,05560.0556 4D8 Vk 1.0 × VH 1.44D8 V k 1.0 × V H 1.4 0,05600.0560 0,04260.0426 4D8 Vk 1.1 × VH 1.04D8 V k 1.1 × V H 1.0 0,04290.0429 0,04510.0451 4D8 Vk 1.1 × VH 1.14D8 V k 1.1 × V H 1.1 0,08180.0818 0,07880.0788 4D8 Vk 1.1 × VH 1.24D8 V k 1.1 × V H 1.2 0,05900.0590 0,07830.0783 4D8 Vk 1.1 × VH 1.34D8 V k 1.1 × V H 1.3 0,06510.0651 0,05110.0511 4D8 Vk 1.1 × VH 1.44D8 V k 1.1 × V H 1.4 0,04930.0493 0,07160.0716

Таблица 11
Анализ SPR связывания гуманизированных антител 4D8 c белком humTFPI K1K2 Table 11
SPR analysis of binding of humanized 4D8 antibodies to humTFPI K1K2 protein АнтителоAntibody ka (1/Mс)k a (1/Ms) Kd (1/с)K d (1/s) KD, нMK D , nM 4D8 Vk 1.0 × VH 1.04D8 V k 1.0 × V H 1.0 6,77 × 104 6.77 × 10 4 4,70 × 10-4 4.70×10 -4 6,94 × 10-9 6.94×10 -9 4D8 Vk 1.0 × VH 1.14D8 V k 1.0 × V H 1.1 6,06 × 104 6.06 × 10 4 1,54 × 10-3 1.54×10 -3 2,54 × 10-8 2.54×10 -8 4D8 Vk 1.0 × VH 1.24D8 V k 1.0 × V H 1.2 2,38 × 105 2.38 × 10 5 1,65 × 10-4 1.65×10 -4 6,95 × 10-10 6.95 × 10 -10 4D8 Vk 1.0 × VH 1.34D8 V k 1.0 × V H 1.3 7,95 × 104 7.95 × 10 4 5,71 × 10-4 5.71×10 -4 7,19 × 10-9 7.19 × 10 -9 4D8 Vk 1.0 × VH 1.44D8 V k 1.0 × V H 1.4 7,55 × 104 7.55 × 10 4 8,35 × 10-4 8.35×10 -4 1,11 × 10-8 1.11×10 -8 4D8 Vk 1.1 × VH 1.04D8 V k 1.1 × V H 1.0 1,25 × 105 1.25 × 10 5 8,35 × 10-4 8.35×10 -4 5,50 × 10-10 5.50 × 10 -10 4D8 Vk 1.1 × VH 1.14D8 V k 1.1 × V H 1.1 1,93 × 105 1.93 × 10 5 1,61 × 10-4 1.61×10 -4 8,32 × 10-10 8.32×10 -10 4D8 Vk 1.1 × VH 1.24D8 V k 1.1 × V H 1.2 1,51 × 105 1.51 × 10 5 9,49 × 10-5 9.49×10 -5 6,27 × 10-10 6.27 × 10 -10 4D8 Vk 1,1 × VH 1,34D8 V k 1.1 × V H 1.3 1,59 × 105 1.59 × 10 5 1,31 × 10-4 1.31×10 -4 8,23 × 10-10 8.23 × 10 -10 4D8 Vk 1,1 × VH 1,44D8 V k 1.1 × V H 1.4 2,21 × 105 2.21 × 10 5 5,28 × 10-5 5.28×10 -5 2,93 × 10-10 2.93 × 10 -10

На основе этих данных 4D8 Vk 1.1 × VH 1.4 отбирали для дальнейшей характеристики и обозначали hz4D8 (Таблица 3). Гуманизированное антитело против TFPI (hz4D8) сравнивали с мышиным 4D8.B1 в отношении активности в анализе обращения ингибирования FXa, двухэтапном анализе ингибирования TF-FVIIa-FX и анализе образования тромбина. Данные в Таблице 12 показывают то, что данное гуманизированное антитело имело улучшенную активность во всех трех анализах по сравнению с мышиным антителом, указывая на то, что у гуманизированного антитела полностью сохранялась активность связывания с TFPI.Based on these data, 4D8 V k 1.1 × V H 1.4 was selected for further characterization and designated hz4D8 (Table 3). A humanized anti-TFPI antibody (hz4D8) was compared with murine 4D8.B1 for activity in the FXa inhibition reversal assay, the TF-FVIIa-FX two-step inhibition assay, and the thrombin generation assay. The data in Table 12 shows that the humanized antibody had improved activity in all three assays compared to the mouse antibody, indicating that the humanized antibody fully retained TFPI binding activity.

Таблица 12
Сравнение антител 4D8.B1 и hz4D8 в анализах обращения ингибирования FXa и Fxa-FVIIa и в анализе образования тромбина (TGA) Table 12
Comparison of 4D8.B1 and hz4D8 antibodies in FXa and Fxa-FVIIa inhibition reversal assays and thrombin generation assay (TGA) АнтителоAntibody ECE.C. 5050 (нM) FXa (nM)FXa ECE.C. 5050 (нM) FXa-FVIIa (nM) FXa-FVIIa Индекс скорости TGA TGA speed index
при 20 нMat 20 nM 4D8.B14D8.B1 4,154.15 3,53.5 13,513.5 Hz4D8Hz4D8 1,871.87 1,571.57 15,715.7

Пример 5. Получение дополнительных антител против TFPI посредством фагового дисплеяExample 5: Production of additional anti-TFPI antibodies via phage display

1. Отбор антител против TFPI посредством фагового дисплея1. Selection of anti-TFPI antibodies via phage display

Идентифицировали антитела на основе одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv), которые связываются с рекомбинантным человеческим и мышиным TFPI K1K2, после четырех циклов селекции с использованием библиотеки фагового дисплея фрагментов антитела scFv, полученных от неиммунизированных человеческих доноров. Отборы фагов поводили в растворе с использованием стрептавидиновых шариков. Связавшийся фаг элюировали посредством инкубации со 140 мМ триэтаноламином (ТЕА), рН 11,5, или 50 мМ MES (морфолино-этансульфоновая кислота), рН 5,5, в течение 10 мин при комнатной температуре на ротационном шейкере и нейтрализовали 1 М Tris-HCl, pH 7,5.Single chain variable fragment (scFv) antibodies that bind to recombinant human and murine TFPI K1K2 were identified after four rounds of selection using a phage display library of scFv antibody fragments obtained from nonimmunized human donors. Phage selections were carried out in solution using streptavidin beads. Bound phage was eluted by incubation with 140 mM triethanolamine (TEA), pH 11.5, or 50 mM MES (morpholino-ethanesulfonic acid), pH 5.5, for 10 min at room temperature on a rotary shaker and neutralized with 1 M Tris- HCl, pH 7.5.

Пул элюированного фага использовали для инфекции 10 мл культуры E. coli ER2738, которая была выращена до средней логарифмической фазы (соответствующей OD600 приблизительно 0,5). Бактерии инфицировали фагом в течение 30 минут при 37°С без встряхивания, концентрировали центрифугированием и высаживали на чашки, с последующим ростом в течение ночи при 30°С. Для следующего цикла отбора фаги спасали посредством инокуляции 25 мл 2× TYAG/тетрациклина до OD600 ~0,1, выращивали при 37°С до OD600 0,3-0,5. Клетки сверхинфицировали хелперным фагом MK13K07 в соотношении клетка/хелперный фаг 1:20 и инкубировали при 37°С без встряхивания в течение 30 минут, затем встряхивая при 150 об./мин в течение 60 минут. Клетки затем центрифугировали, и осадок ресуспендировали в среде, содержащей канамицин и не содержащей глюкозу. Данную культуру выращивали в течение ночи при 25°С. Фаг отбирали в супернатанте после центрифугирования и использовали в следующем цикле селекции.The eluted phage pool was used to infect a 10 ml culture of E. coli ER2738, which was grown to mid-log phase (corresponding to an OD 600 of approximately 0.5). Bacteria were infected with phage for 30 minutes at 37°C without shaking, concentrated by centrifugation and plated, followed by overnight growth at 30°C. For the next round of selection, phages were rescued by inoculation with 25 ml of 2× TYAG/tetracycline to OD 600 ~0.1, grown at 37°C to OD 600 0.3-0.5. Cells were overinfected with helper phage MK13K07 at a cell/helper phage ratio of 1:20 and incubated at 37°C without shaking for 30 minutes, then shaking at 150 rpm for 60 minutes. The cells were then centrifuged and the pellet was resuspended in kanamycin-containing, glucose-free medium. This culture was grown overnight at 25°C. The phage was selected from the supernatant after centrifugation and used in the next selection cycle.

2. Получение неочищенного периплазматического материала для применения в анализе ELISA2. Preparation of crude periplasmic material for use in the ELISA assay

Фрагменты антитела scFv могут экспрессироваться либо на поверхности фаговой частицы, либо в растворе в бактериальном периплазматическом пространстве, в зависимости от используемых условий роста. Для индукции высвобож дения фрагментов антитела scFv в периплазму, 96-глубоколуночные планшеты, содержащие 2× среды TY с 0,1% глюкозы/100 мкг/мл ампициллина, инокулировали из оттаявших глицериновых маточных растворов и выращивали при 37°С в течение приблизительно 4 часов. Содержимое бактериальной периплазмы (перипрепараты) высвобождали осмотическим шоком. Планшеты центрифугировали и отбирали супернатант, содержащий scFv.ScFv antibody fragments can be expressed either on the surface of the phage particle or in solution in the bacterial periplasmic space, depending on the growth conditions used. To induce release of scFv antibody fragments into the periplasm, 96-well plates containing 2× TY media with 0.1% glucose/100 μg/ml ampicillin were inoculated from thawed glycerol stock solutions and grown at 37°C for approximately 4 hours. . The contents of the bacterial periplasm (peripreparations) were released by osmotic shock. The plates were centrifuged and the supernatant containing scFv was collected.

3. ELISA для измерения связывания экспрессированных в периплазме scFv с человеческим и мышиным TFPI K1K2.3. ELISA to measure the binding of periplasmically expressed scFvs to human and murine TFPI K1K2.

Всего из циклов 2, 3 и 4 всех ветвей селекции случайным образом отбирали 1984 клона. Агенты на основе scFv, связывающие TFPI, идентифицировали посредством ELISA связывания периплазматического препарата (перипрепарат). Биотинилированным человеческим и мышиным TFPI K1K2 покрывали 384-луночные стрептавидиновые планшеты Nunc Maxisorp в концентрации 1 мкг/мл в PBS. Растворы TFPI K1K2 удаляли, и планшеты блокировали в течение 1 часа при комнатной температуре в 0,05% Tween 20/1% BSA/PBS. Получали перипрепараты и блокировали в течение 1 часа при комнатной температуре в равном объеме 6% молока/1% BSA. 20 мкл/лунку блокированных периплазматических scFv и контрольных антител переносили в подходящие планшеты и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Добавляли 1:2000 разведение антитела против myc, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) или разведение 1:10000 вторичного антитела козы против человеческого антитела-HRP для выявления связавшихся scFv или контрольных антител против TFPI. Сигнал проявляли с использованием 3,3',5,5'-тетраметилбензидина со считыванием поглощения при 450 нм на планшет-ридере Envision (Perkin Elmer). Всего 883 клона scFv было идентифицировано в качестве агентов, связывающихся с TFPI. Данные 883 scFv, связывающиеся с TFPI, секвенировали для идентификации уникальных клонов. Было выбрано 288 уникальных клонов для тестирования конкурентного связывания TFPI/FXa.A total of 1984 clones were randomly selected from cycles 2, 3 and 4 of all selection branches. scFv-based agents that bind TFPI were identified by periplasmic drug (periprug) binding ELISA. Biotinylated human and mouse TFPI K1K2 was coated on Nunc Maxisorp 384-well streptavidin plates at a concentration of 1 μg/ml in PBS. TFPI K1K2 solutions were removed and plates were blocked for 1 hour at room temperature in 0.05% Tween 20/1% BSA/PBS. Peripreparations were prepared and blocked for 1 hour at room temperature in an equal volume of 6% milk/1% BSA. 20 μl/well of blocked periplasmic scFv and control antibodies were transferred to appropriate plates and incubated for 1 hour at room temperature. A 1:2000 dilution of horseradish peroxidase (HRP)-conjugated anti-myc antibody or a 1:10,000 dilution of goat anti-human-HRP secondary antibody was added to detect bound scFv or control anti-TFPI antibodies. The signal was developed using 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine with absorbance reading at 450 nm on an Envision plate reader (Perkin Elmer). A total of 883 scFv clones were identified as TFPI binding agents. Data from 883 scFvs binding to TFPI were sequenced to identify unique clones. 288 unique clones were selected for competitive TFPI/FXa binding testing.

4. ELISA для идентификации scFv, которые конкурируют с FXa за связывание с человеческим и мышиным TFPI K1K24. ELISA to identify scFvs that compete with FXa for binding to human and murine TFPI K1K2

Всего 288 уникальных клонов тестировали в ELISA конкурентного связывания FXa/TFPI. Человеческим FXa в течение ночи покрывали 384-луночные планшеты Nunc Maxisorp в концентрации 1 мкг/мл в PBS. Раствор FXa удаляли, и поверхность планшета блокировали в течение 1 часа при комнатной температуре в 0,05% Tween 20/1% BSA/PBS. Получали перипрепараты и блокировали в течение 1 часа при комнатной температуре в равном объеме 6% молока/1% BSA. 20 мкл/лунку блокированных периплазматических scFv и контрольных антител смешивали с биотинилированным humTFPI K1K2 и давали инкубироваться в течение 1 часа при комнатной температуре. Данную смесь переносили в планшеты, покрытые FXa, и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Для выявления связавшегося TFPI добавляли разведение 1:2000 стрептавидин-пероксидаза хрена. Сигнал проявляли с использованием 3,3',5,5'-тетраметилбензидина со считыванием поглощения при 450 нм на планшет-ридере Envision. Всего 48 антител scFv было классифицировано в качестве конкурентных ингибиторов связывания TFPI/FXa.A total of 288 unique clones were tested in the FXa/TFPI competitive binding ELISA. Human FXa was coated overnight on Nunc Maxisorp 384-well plates at a concentration of 1 μg/ml in PBS. The FXa solution was removed and the plate surface was blocked for 1 hour at room temperature in 0.05% Tween 20/1% BSA/PBS. Peripreparations were prepared and blocked for 1 hour at room temperature in an equal volume of 6% milk/1% BSA. 20 μl/well of blocked periplasmic scFv and control antibodies were mixed with biotinylated humTFPI K1K2 and allowed to incubate for 1 hour at room temperature. This mixture was transferred to FXa-coated plates and incubated for 1 hour at room temperature. A 1:2000 dilution of streptavidin-horseradish peroxidase was added to detect bound TFPI. The signal was developed using 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine with absorbance reading at 450 nm on an Envision plate reader. A total of 48 scFv antibodies were classified as competitive inhibitors of TFPI/FXa binding.

5. Превращение scFv до человеческого IgG5. Conversion of scFv to human IgG

Для субклонирования в человеческие векторы для клонирования IgG-3M отбирали всего 48 антител scFv с уникальными последовательностями, которые демонстрировали связывание с TFPI и ингибирование в конкурентном ELISA с TFPI/FXa. Вкратце, фрагменты амплифицировали стандартной ПЦР. Фрагменты VH или VL очищали на геле и лигировали в экспрессионный вектор млекопитающих, содержащий либо человеческий IgG1-3M (VH), либо константную область каппа или лямбда (VK/VL). Затем использовали векторы для парной экспрессии VH и VK/VL для кратковременной экспрессии у млекопитающих и очистки в клетках HEK 293.A total of 48 scFv antibodies with unique sequences that demonstrated TFPI binding and inhibition in the TFPI/FXa competitive ELISA were selected for subcloning into human IgG-3M cloning vectors. Briefly, fragments were amplified by standard PCR. VH or VL fragments were gel purified and ligated into a mammalian expression vector containing either human IgG1-3M (VH) or kappa or lambda constant region (VK/VL). VH and VK/VL paired expression vectors were then used for transient mammalian expression and purification in HEK 293 cells.

6. Характеристика человеческих антител на основе IgG-3M против TFPI6. Characterization of human IgG-3M antibodies against TFPI

48 антител против TFPI ранжировали в разлиных анализах, включая анализы обращения ингибирования FXa и TF/FVIIa/FXa. TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24 и TFPI-26 имели желательные свойства, такие как связывание с TFPI из разных видов, слабое или отсутствие связывания с humTFPI2 K1K2K3 (Таблица 13). Данные по анализу обращения ингибирования FXa и TF/FVIIa/FXa для этих тех же самых 5 антител показаны в Таблице 14, а данные по связыванию SPR - в Таблице 15.48 anti-TFPI antibodies were ranked in various assays, including FXa and TF/FVIIa/FXa inhibition reversal assays. TFPI-3, TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24 and TFPI-26 had desirable properties such as binding to TFPI from different species, weak or no binding to humTFPI2 K1K2K3 (Table 13). FXa and TF/FVIIa/FXa inhibition reversal assay data for these same 5 antibodies are shown in Table 14 and SPR binding data in Table 15.

Таблица 13
Антитела против TFPI, которые демонстрировали связывание с TFPI многих видов (человека, обезьяны, мышиным, кроличьим и крысиным) и отсутствие или слабое связывание с человеческим TFPI2 Table 13
Anti-TFPI antibodies that showed binding to multiple species of TFPI (human, monkey, murine, rabbit and rat) and no or weak binding to human TFPI2 Анти-телоAntibody humTFPI K1K2humTFPI K1K2 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 ratTFPI ratTFPI
K1K2K1K2 humTFPI2 K1K2K3humTFPI2 K1K2K3 TFPI-3TFPI-3 ++++ ++++ ++++ ++++ -- -- TFPI-21TFPI-21 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ -- TFPI-23TFPI-23 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ -- TFPI-24TFPI-24 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +/-+/- TFPI-26TFPI-26 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ --

Таблица 14
Активность антитела против TFPI в анализах обращения ингибирования TF/FVIIa/FXa и образования тромбина Table 14
Anti-TFPI Antibody Activity in TF/FVIIa/FXa Inhibition Reversal and Thrombin Generation Assays АнтителоAntibody ECE.C. 5050 FXa (нM) FXa (nM) ECE.C. 5050 FXa-FVIIa (нM) FXa-FVIIa (nM) Индекс скорости TGA при 20 нMTGA rate index at 20 nM TFPI-3TFPI-3 207,9207.9 37,437.4 НТ (не тестировали)NT (not tested) TFPI-21TFPI-21 80,6480.64 54,154.1 24,7124.71 TFPI-23TFPI-23 4646 32,232.2 23,2823.28 TFPI-24TFPI-24 2323 9,39.3 23,2123.21 TFPI-26TFPI-26 12,812.8 9,69.6 18,6518.65

Таблица 15
SPR кинетики связывания антитела против TFPI с человеческим и мышиным TFPI Table 15
SPR kinetics of anti-TFPI antibody binding to human and murine TFPI АналитAnalyst ЛигандLigand kk aa (1/Mс) (1/Ms) kk dd (1/с)(1/s) KK DD (нM) (nM) humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-3TFPI-3 6,25 × 104 6.25 × 10 4 1,7 × 10-3 1.7 × 10 -3 27,0527.05 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-21TFPI-21 7,85 × 105 7.85 × 10 5 3,47 × 10-2 3.47×10 -2 43,9543.95 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-23TFPI-23 9,18 × 105 9.18 × 10 5 9,71 × 10-3 9.71×10 -3 9,899.89 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-24TFPI-24 1,59 × 105 1.59 × 10 5 8,62 × 10-4 8.62×10 -4 5,465.46 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-26TFPI-26 2,05 × 105 2.05 × 10 5 1,18 × 10-3 1.18×10 -3 5,795.79 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-3TFPI-3 2,15 × 105 2.15 × 10 5 8,24 × 10-4 8.24×10 -4 3,813.81 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-21TFPI-21 1,73 × 106 1.73 × 10 6 7,71 × 10-3 7.71×10 -3 4,544.54 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-23TFPI-23 1,69 × 106 1.69 × 10 6 2,48 × 10-3 2.48×10 -3 1,461.46 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-24TFPI-24 2,48 × 105 2.48 × 10 5 5,96 × 10-3 5.96×10 -3 24,124.1 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-26TFPI-26 1,29 × 106 1.29 × 10 6 4,76 × 10-3 4.76×10 -3 3,683.68

Пример 6. Картирование эпитопа антител против TFPI посредством SPRExample 6 Anti-TFPI Antibody Epitope Mapping by SPR

Сэндвич-анализ посредством SPR использовали для картирования эпитопов антител против TFPI, открытых и изложенных в этом документе (TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24, 4D8, 6B7.c5 и 7A4.D9). Другие известные контрольные антитела (hz4F36, 2A8-200 и Mab2974) также были включены в эксперимент по картированию эпитопов. Антитело 1 иммобилизовали на чипе Biacore CM5 с использование химии NHS
(N-гидрокси-сукцинимид). Человеческий TFPI (humTFPI K1K2) исходно инъецировали на чип, пока связывание не было около кажущегося равновесия. Немедленно после остановки инъекции человеческого TFPI над чипом инъецировали антитело 2. Если антитело 2 связывается с комплексом антитела 1 и человеческого TFPI на поверхности чипа СМ5, тогда антитело 2 имеет отличный и неперекрывающийся эпитоп связывания TFPI относительно антитела 1 (оценивается как +). Если антитело 2 не демонстрирует связывания, тогда он оценивается как значимо перекрывающийся эпитоп (негативный (-)) относительно антитела 1. Если антитело 2 демонстрирует слабое связывание, тогда считается, что антитела 1 и 2 имеют некоторое частичное перекрывание в эпитопах TFPI (оценивается как +/-). Как показано в Таблице 16, TFPI-21 и TFPI-23 имеют аналогичные эпитопы, и эти данные также показывают то, что TFPI-21 и TFPI-23 имеют эпитопы, которые полностью отличаются от mab2974 и hz4F36.Sandwich analysis by SPR was used to map the epitopes of the anti-TFPI antibodies discovered and reported herein (TFPI-21, TFPI-23, TFPI-24, 4D8, 6B7.c5 and 7A4.D9). Other known control antibodies (hz4F36, 2A8-200, and Mab2974) were also included in the epitope mapping experiment. Antibody 1 was immobilized on a Biacore CM5 chip using NHS chemistry
(N-hydroxy-succinimide). Human TFPI (humTFPI K1K2) was initially injected onto the chip until binding was near apparent equilibrium. Immediately after stopping the injection of human TFPI, antibody 2 was injected over the chip. If antibody 2 binds to the complex of antibody 1 and human TFPI on the surface of the CM5 chip, then antibody 2 has a distinct and non-overlapping TFPI binding epitope relative to antibody 1 (scored as +). If antibody 2 shows no binding, then it is scored as having a significantly overlapping epitope (negative (-)) relative to antibody 1. If antibody 2 shows weak binding, then antibodies 1 and 2 are scored as having some partial overlap in TFPI epitopes (scored as + /-). As shown in Table 16, TFPI-21 and TFPI-23 have similar epitopes, and these data also show that TFPI-21 and TFPI-23 have epitopes that are completely different from mab2974 and hz4F36.

Таблица 16
Картирование эпитопов антител против TFPI с использование сэндвич-анализа посредством SPR Table 16
Epitope mapping of anti-TFPI antibodies using sandwich analysis by SPR Анти-тело 1Anti-body 1 Антитело 2Antibody 2 TFPI-21TFPI-21 TFPI-23TFPI-23 TFPI-24TFPI-24 hz4F36hz4F36 2A8-2002A8-200 Mab2479Mab2479 4D8.b14D8.b1 6B7.c56B7.c5 7A4.D97A4.D9 TFPI-21 TFPI-21 -- -- -- ++ -- ++ ++ ++ -- TFPI-23 TFPI-23 -- -- -- ++ -- ++ ++ ++ -- TFPI-24 TFPI-24 -- -- -- -- -- -- -- -- -- hz4F36 hz4F36 ++ ++ -- -- -- -- -- -- -- 2A8-200 2A8-200 -- -- -- -- -- -- -- -- -- Mab2479 Mab2479 ++ ++ -- -- -- -- -- -- +/-+/- 4D8.b1 4D8.b1 ++ ++ -- -- -- -- -- -- ++ 6B7.c56B7.c5 ++ ++ -- -- -- -- -- -- ++ 7A4.D97A4.D9 -- -- -- -- -- +/-+/- ++ ++ --

Антитело 1 иммобилизовали на поверхности чипа CM5. Затем инъецировали на поверхность человеческий TFPI (humTFPI K1K2), пока измерение не было близким к кажущемуся равновесию. Немедленно после остановки инъекции TFPI инъецировали антитело 2 для измерения связывания с комплексом антитело 1/TFPI. Оценка «+» дается парам антитела 1 и 2, которые имеют полностью отличные эпитопы. Оценка «-» дается парам антител, которые имеют сильно перекрывающиеся эпитопы. Если антитело 2 демонстрирует слабое связывание, тогда считается, что антитела 1 и 2 имеют некоторое частичное перекрывание в эпитопах TFPI (оценивается как +/-).Antibody 1 was immobilized on the surface of the CM5 chip. Human TFPI (humTFPI K1K2) was then injected onto the surface until the measurement was close to apparent equilibrium. Immediately after stopping the TFPI injection, Antibody 2 was injected to measure binding to the Antibody 1/TFPI complex. A score of "+" is given to antibody pairs 1 and 2, which have completely different epitopes. A score of "-" is given to antibody pairs that have highly overlapping epitopes. If antibody 2 shows weak binding, then antibodies 1 and 2 are considered to have some overlap in TFPI epitopes (scored as +/-).

Пример 7. Модифицирование человеческих каркасных областей антитела TFPI-23 до последовательности зародышевой линииExample 7: Modification of Human TFPI-23 Antibody Framework Regions to Germline Sequence

Получали два варианта TFPI-23 для увеличения содержания остатков каркасной области человеческой зародышевой линии. TFPI-106 содержит мутации от H1Q до E и от H5V до L (нумерация по Kabat), и TFPI-107 (Таблицы 3 и 4) содержало мутации от H1Q до E, от H5V до L и от H94I до K (нумерация по Kabat). TFPI-106, TFPI-107 и TFPI-23 экспрессировали, очищали и тестировали на связывание с humTFPI K1K2 посредством SPR. Данные в Таблице 17 показывают то, что, по сравнению с родительским антителом TFPI-23, вариант зародышевой линии TFPI-106 сохранял полную аффинность связывания.Two variants of TFPI-23 were produced to increase the content of human germline framework remnants. TFPI-106 contained mutations H1Q to E and H5V to L (Kabat numbering), and TFPI-107 (Tables 3 and 4) contained mutations H1Q to E, H5V to L, and H94I to K (Kabat numbering ). TFPI-106, TFPI-107, and TFPI-23 were expressed, purified, and tested for binding to humTFPI K1K2 via SPR. The data in Table 17 shows that, compared with the parent antibody TFPI-23, the germline variant TFPI-106 retained full binding affinity.

Таблица 17
Определенная посредством SPR кинетика связывания с человеческим TFPI вариантов TFPI-23 с каркасными областями человеческими зародышевой линии Table 17
SPR-determined binding kinetics of human TFPI variants of TFPI-23 to human germline framework regions АналитAnalyst ЛигандLigand kk aa (1/Mс) (1/Ms) kk dd (1/с)(1/s) KK DD (нM) (nM) humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-23TFPI-23 9,18 × 105 9.18 × 10 5 9,71 × 10-3 9.71×10 -3 9,899.89 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-106TFPI-106 2,72 × 106 2.72 × 10 6 9,74 × 10-3 9.74×10 -3 3,73.7 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-107TFPI-107 -- -- Нет связыванияNo binding

TFPI-106 продемонстрировало умеренное улучшение в связывании по сравнению с родительским антителом TFPI-23.TFPI-106 showed a modest improvement in binding compared to the parent antibody TFPI-23.

Пример 8. Модифицирование человеческих каркасных областей антитела TFPI-24 до последовательности зародышевой линииExample 8: Modification of Human TFPI-24 Antibody Framework Regions to Germline Sequence

Получали четыре варианта VL TFPI-24 (TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113) и формировали пару с последовательностью VH TFPI-24. Получали три варианта VН
TFPI-24 (TFPI-108, TFPI-109, TFPI-114) и формировали пару с последовательностью VL TFPI-24. На основе этих данных образовали пару наилучшего варианта VL, представляющего собой TFPI-113, и наилучшего варианта VН, представляющего собой TFPI-108, с получением антитела TFPI-118. TFPI-118 и TFPI-24 тестировали на связывание с человеческим TFPI посредством SPR, и результаты в Таблице 18 демонстрируют сопоставимую кинетику связывания.Four VL variants of TFPI-24 (TFPI-110, TFPI-111, TFPI-112, TFPI-113) were obtained and paired with the VH sequence of TFPI-24. We received three variants of VH
TFPI-24 (TFPI-108, TFPI-109, TFPI-114) and formed a pair with the VL sequence of TFPI-24. Based on these data, the best VL variant, which is TFPI-113, and the best VH variant, which is TFPI-108, were paired to produce the antibody TFPI-118. TFPI-118 and TFPI-24 were tested for binding to human TFPI via SPR, and the results in Table 18 demonstrate comparable binding kinetics.

Таблица 18
Кинетику связывания TFPI-24 и варианта с человеческой каркасной областью, представляющего собой FPI-118, с человеческим TFPI сравнивали с использованием SPR Table 18
The binding kinetics of TFPI-24 and the human framework variant FPI-118 to human TFPI were compared using SPR АналитAnalyst ЛигандLigand kk aa (1/Mс) (1/Ms) kk dd (1/с)(1/s) KK DD (нM) (nM) humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-24TFPI-24 9,18 × 105 9.18 × 10 5 9,71 × 10-3 9.71×10 -3 3,683.68 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-118TFPI-118 1,25 × 105 1.25 × 10 5 1,19 × 10-3 1.19×10 -3 9,619.61

TFPI-118 демонстрировало сопоставимую кинетику связывания с родительским антителом TFPI-23.TFPI-118 exhibited comparable binding kinetics to the parent antibody TFPI-23.

Пример 9. Определенная посредством SPR кинетика связывания антител против TFPI с TFPI из разных видовExample 9 Binding kinetics of anti-TFPI antibodies to TFPI from different species determined by SPR

Антитела против TFPI (TFPI-106, TFPI-118 и hz4F36) анализировали посредством SPR для определения кинетики связывания с TFPI из разных видов животных (человека (huTFPI K1K2), яванского макака (cynTFPI K1K2), кролика (rabTFPI K1K2), мыши (murTFPI K1K2) и крысы (ratTFPI K1K2); Таблица 1). В данный эксперимент также включали три антитела для сравнения (hz4F36, 2A8 и 2A8-200).Antibodies against TFPI (TFPI-106, TFPI-118 and hz4F36) were analyzed by SPR to determine the binding kinetics of TFPI from different animal species (human (huTFPI K1K2), cynomolgus monkey (cynTFPI K1K2), rabbit (rabTFPI K1K2), mouse (murTFPI K1K2) and rats (ratTFPI K1K2); Table 1). Three antibodies for comparison (hz4F36, 2A8 and 2A8-200) were also included in this experiment.

Таблица 19
Определенная посредством SPR кинетика связывания антитела против TFPI с TFPI человека, яванского макака, кролика и мыши (значения Kd представляют собой средние из 2 экспериментов) Table 19
SPR-determined binding kinetics of anti-TFPI antibody to human, cynomolgus, rabbit and mouse TFPI (Kd values are the average of 2 experiments) АналитAnalyst ЛигандLigand kk aa (1/Mс) (1/Ms) kk dd (1/с)(1/s) KK DD (нM) (nM) humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-106TFPI-106 2,72 × 106 2.72 × 10 6 9,74 × 10-3 9.74×10 -3 3,73.7 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 TFPI-118TFPI-118 1,25 × 105 1.25 × 10 5 1,19 × 10-3 1.19×10 -3 9,619.61 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 hz4D8hz4D8 3,16 × 106 3.16 × 10 6 1,32 × 10-3 1.32×10 -3 0,420.42 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 hz4F36hz4F36 1,89 × 106 1.89 × 10 6 9,30 × 10-4 9.30×10 -4 0,490.49 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 2A82A8 3,55 × 105 3.55 × 10 5 3,77 × 10-3 3.77×10 -3 10,610.6 humTFPI K1K2humTFPI K1K2 2A8-2002A8-200 1,16 × 106 1.16 × 10 6 3,81 × 10-3 3.81×10 -3 0,3270.327 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 TFPI-106TFPI-106 6,55 × 106 6.55 × 10 6 8,01 × 10-3 8.01×10 -3 1,221.22 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 TFPI-118TFPI-118 7,21 × 105 7.21 × 10 5 1,27 × 10-3 1.27×10 -3 1,81.8 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 hz4D8hz4D8 2,93 × 107 2.93 × 10 7 1,95 × 10-3 1.95×10 -3 0,0670.067 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 hz4F36hz4F36 6,86 × 106 6.86 × 10 6 2,88 × 10-3 2.88×10 -3 0,4250.425 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 2A82A8 2,37 × 105 2.37 × 10 5 3,06 × 10-2 3.06×10 -2 13,2513.25 cynTFPI K1K2cynTFPI K1K2 2A8-2002A8-200 1,25 × 106 1.25 × 10 6 8,09 × 10-4 8.09×10 -4 0,6370.637 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 TFPI-106TFPI-106 3,66 × 106 3.66 × 10 6 1,55 × 10-2 1.55×10 -2 4,254.25 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 TFPI-118TFPI-118 2,01 × 105 2.01 × 10 5 1,55 × 10-2 1.55×10 -2 5,795.79 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 hz4D8hz4D8 3,16 × 106 3.16 × 10 6 2,9 × 10-3 2.9 × 10 -3 0,5020.502 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 hz4F36hz4F36 4,2 × 106 4.2 × 10 6 7,6 × 10-3 7.6×10 -3 1,811.81 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 2A82A8 7,3 × 105 7.3 × 10 5 1,23 × 10-3 1.23×10 -3 1,691.69 rabTFPI K1K2rabTFPI K1K2 2A8-2002A8-200 1,92 × 106 1.92 × 10 6 2,77 × 10-4 2.77×10 -4 0,1450.145 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-106TFPI-106 4,05 × 106 4.05 × 10 6 2,32 × 10-3 2.32×10 -3 0,5750.575 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 TFPI-118TFPI-118 2,19 × 105 2.19 × 10 5 9,82 × 10-3 9.82×10 -3 45,645.6 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 hz4D8hz4D8 -- -- Нет связыванияNo binding murTFPI K1K2murTFPI K1K2 hz4F36hz4F36 -- -- Нет связыванияNo binding murTFPI K1K2murTFPI K1K2 2A82A8 1,91 × 105 1.91 × 10 5 6,32 × 10-3 6.32×10 -3 33,6533.65 murTFPI K1K2murTFPI K1K2 2A8-2002A8-200 2,54 × 106 2.54 × 10 6 1,17 × 10-3 1.17×10 -3 0,4550.455 ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 TFPI-106TFPI-106 3,01 × 106 3.01 × 10 6 4,71 × 10-3 4.71×10 -3 1,571.57 ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 TFPI-118TFPI-118 4,83 × 105 4.83 × 10 5 1,75 × 10-3 1.75×10 -3 3,653.65 ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 hz4D8hz4D8 -- -- Нет связыванияNo binding ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 hz4F36hz4F36 -- -- Нет связыванияNo binding ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 2A82A8 -- -- Не тестировалиNot tested ratTFPI K1K2ratTFPI K1K2 2A8-2002A8-200 -- -- Не тестировалиNot tested

Пример 10. Структуры комплекса антитела против TFPI/TFPIExample 10 Structures of Anti-TFPI/TFPI Antibody Complex

1. Структура комплекса Fab 4D8.b1 / K2 TFPI яванского макака1. Structure of the cynomolgus monkey Fab 4D8.b1/K2 TFPI complex

Fab 4D8.b1 / K2 TFPI яванского макака смешивали в мольном отношении 1:1 с образованием комплекса. Конечную очистку проводили с использованием колонки Superdex 200. Данный комплекс концентрировали до 12,6 мг/мл для структурных исследований. Кристаллы K2 TFPI+Fab 4D8 получали в 100 мМ Tris-HCl, pH 8,5, 20% ПЭГ 10000 (полиэтиленгликоль 10000). Это давало стержневидные кристаллы, которые дифрагировали до 2,9 Å. Кристаллы временно подвергали криозащите, и отбор данных синхротрона осуществляли удаленно в Advanced Photon Source. Кадры изображений обрабатывали с использованием программы AutoPROC (Global Phasing Ltd). Данные принадлежат к пространственной группе P212121 со следующей элементарной ячейкой:
a = 62,102 Å, b = 82,284 Å, c = 103,628 Å, α = β = γ = 90°, с одним комплексом на асимметричную ячейку. Поиски молекулярного замещения с использованием моделей гомологии Fab 4D8, а также общедоступных структур (банк данных белков RSCB; коды PDB 1TFX и 4DTG) доменов K2 TFPI дали убедительные решения для каждого компонента. Уточнение осуществляли с использованием программы autoBUSTER (Global Phasing Ltd), и конечные множители R/Rсвободный при 2,9 Å составляют 0,1707 и 0,2424 соответственно с RMSD (среднеквадратичное отклонение) связи 0,010 Å, RMSD углов 1,26°. На основе скрытой области поверхности (BSA) и процента BSA (% BSA) для остатков на поверхности контакта Fab / K2 TFPI были определены эпитоп и паратоп Fab 4D8. Следующие остатки в домене K2 TFPI участвуют в непосредственном контакте с Fab 4D8 (эпитоп согласно BSA): E101, P103, Y109, I110, T111, Y113, F114, S119, Q121, C122, E123, R124, F125, K126 и L140. Следующие остатки в тяжелой цепи Fab 4D8 составляют паратоп тяжелой цепи: D50, T57, L58, Y59, Q61, K64, D98, Y99 и D100. Следующие остатки в легкой цепи Fab 4D8 составляют паратоп легкой цепи: H30, W50, H91, Y92, T93, T94, P95 и Y96. Значения BSA и % BSA для остатков эпитопа и паратопа показаны в Таблице 20.Cynomolgus Fab 4D8.b1/K2 TFPI was mixed in a 1:1 molar ratio to form a complex. Final purification was performed using a Superdex 200 column. This complex was concentrated to 12.6 mg/ml for structural studies. K2 TFPI+Fab 4D8 crystals were prepared in 100 mM Tris-HCl, pH 8.5, 20% PEG 10000 (polyethylene glycol 10000). This produced rod-shaped crystals that diffracted to 2.9 Å. The crystals were temporarily cryoprotected and synchrotron data collection was performed remotely at the Advanced Photon Source. Image frames were processed using AutoPROC software (Global Phasing Ltd). The data belongs to space group P212121 with the following unit cell:
a = 62.102 Å, b = 82.284 Å, c = 103.628 Å, α = β = γ = 90°, with one complex per asymmetric cell. Molecular replacement searches using Fab 4D8 homology models as well as publicly available structures (RSCB Protein Data Bank; PDB codes 1TFX and 4DTG) of the K2 TFPI domains yielded compelling solutions for each component. Refinement was performed using the autoBUSTER program (Global Phasing Ltd), and the final R/Rfree factors at 2.9 Å are 0.1707 and 0.2424, respectively, with a bond RMSD of 0.010 Å, angle RMSD of 1.26°. Based on the buried surface area (BSA) and percentage of BSA (%BSA) for residues at the Fab/K2 TFPI interface, the Fab 4D8 epitope and paratope were determined. The following residues in the K2 domain of TFPI are involved in direct contact with Fab 4D8 (an epitope according to BSA): E101, P103, Y109, I110, T111, Y113, F114, S119, Q121, C122, E123, R124, F125, K126, and L140. The following residues in the Fab 4D8 heavy chain constitute the heavy chain paratope: D50, T57, L58, Y59, Q61, K64, D98, Y99, and D100. The following residues in the light chain of Fab 4D8 constitute the light chain paratope: H30, W50, H91, Y92, T93, T94, P95, and Y96. The BSA and %BSA values for epitope and paratope residues are shown in Table 20.

Таблица 20
Остатки эпитопа и паратопа антитела 4D8.b1 против TFPI, определенные по скрытой области поверхности (BSA) и проценту BSA (% BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса Fab 4D8.b1 / K2 TFPI яванского макака (остатки легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (НС) антитела пронумерованы с использованием определений Kabat). В анализе BSA применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии). Table 20
Epitope and paratope residues of the anti-TFPI antibody 4D8.b1 determined by the buried surface area (BSA) and percentage BSA (%BSA) of contact surface residues in the structure of the cynomolgus monkey 4D8.b1/K2 TFPI Fab complex (light chain (LC) and heavy chain residues antibody chains (HC) are numbered using Kabat definitions). The BSA assay applies a threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or participation in electrostatic interaction). ОстатокRemainder ЦепьChain № остаткаRemaining number КлассификацияClassification BSAB.S.A. %BSA%BSA GLUG.L.U. TFPIK2TFPIK2 101101 эпитопepitope 33,9333.93 48,7348.73 PROPRO TFPIK2TFPIK2 103103 эпитопepitope 34,9134.91 74,8274.82 TYRTYR TFPIK2TFPIK2 109109 эпитопepitope 71,5471.54 55,1555.15 THRTHR TFPIK2TFPIK2 111111 эпитопepitope 41,7241.72 66,6566.65 SERSER TFPIK2TFPIK2 119119 эпитопepitope 32,8932.89 65,6165.61 GLNGLN TFPIK2TFPIK2 121121 эпитопepitope 67,9967.99 86,5186.51 GLUG.L.U. TFPIK2TFPIK2 123123 эпитопepitope 63,5363.53 99,1599.15 ARGA.R.G. TFPIK2TFPIK2 124124 эпитопepitope 147,09147.09 97,3197.31 LYSLYS TFPIK2TFPIK2 126126 эпитопepitope 114,72114.72 95,8595.85 LEULEU TFPIK2TFPIK2 140140 эпитопepitope 41,6241.62 60,1460.14 ASPA.S.P. 4D8.b1 HC4D8.b1HC 5050 паратопparatope 5,985.98 52,5652.56 THRTHR 4D8.b1 HC4D8.b1HC 5757 паратопparatope 26,4826.48 42,0442.04 LEULEU 4D8.b1 HC4D8.b1HC 5858 паратопparatope 72,9572.95 93,4193.41 TYRTYR 4D8.b1 HC4D8.b1HC 5959 паратопparatope 15,7515.75 33,7533.75 GLNGLN 4D8.b1 HC4D8.b1HC 6161 паратопparatope 59,1459.14 45,4145.41 ASPA.S.P. 4D8.b1 HC4D8.b1HC 9898 паратопparatope 62,8762.87 50,7150.71 TYRTYR 4D8.b1 HC4D8.b1HC 9999 паратопparatope 44,2844.28 59,0659.06 ASPA.S.P. 4D8.b1 HC4D8.b1HC 100100 паратопparatope 5,835.83 27,8427.84 HISHIS 4D8.b1 LC4D8.b1 LC 30thirty паратопparatope 53,1853.18 56,6056.60 TRPTRP 4D8.b1 LC4D8.b1 LC 5050 паратопparatope 53,4153.41 51,5251.52 TYRTYR 4D8.b1 LC4D8.b1 LC 9292 паратопparatope 97,9997.99 96,6196.61 THRTHR 4D8.b1 LC4D8.b1 LC 9393 паратопparatope 39,8939.89 73,4273.42 THRTHR 4D8.b1 LC4D8.b1 LC 9494 паратопparatope 48,0048.00 95,7495.74 TYRTYR 4D8.b1 LC4D8.b1 LC 9696 паратопparatope 15,4915.49 72,2372.23

2. Структуры комплекса Fab 2A8 и 2A8-200 / K1K2 яванского макака2. Structures of the cynomolgus macaque Fab 2A8 and 2A8-200/K1K2 complex

Fab 2A8 и K1K2 TFPI яванского макака смешивали в мольном соотношении 1:1 с образованием комплекса. Конечную очистку проводили с использованием колонки Superdex 200. Для структурных исследований данный комплекс концентрировали до 10,8 мг/мл. Кристаллы комплекса, содержащего Fab 2A8 и K1K2 TFPI, получали при следующих двух условиях: (1) 100 мМ HEPES, pH 7,5, 12,5% ПЭГ 8000, что давало игловидные кристаллы, которые дифрагировали до 3,0 Å; (2) 100 мМ HEPES, pH 7,5, 1600 мМ сульфат аммония, 2% ПЭГ 1000, что давало глыбовидные кристаллы, которые дифрагировали до 3,3 Å. Кристаллы временно подвергали криозащите, и отбор данных синхротрона осуществляли удаленно в Advanced Photon Source. Кадры изображений обрабатывали с использованием программы AutoPROC (Global Phasing Ltd). Данные принадлежат к пространственной группе P3221 со следующими элементарными ячейками: a = b = 196,146 Å, c = 41,262 Å, α = β= 90°, γ = 120°, с одним комплексом на асимметричную ячейку. Поиски молекулярного замещения с использованием моделей гомологии Fab 2А8, а также общедоступных структур (банк данных белков RSCB; коды PDB 1TFX и 4DTG) доменов K2 TFPI дали убедительные решения для каждого компонента. Уточнение осуществляли с использованием программы PHENIX, и конечные множители R/Rсвободный при 3,0 Å составляют 0,1667 и 0,2088, соответственно, с RMSD связи 0,011 Å, RMSD углов 1,474°. На основе скрытой области поверхности (BSA) и процента BSA (% BSA) для остатков на поверхности контакта Fab K1K2 TFPI были определены эпитоп и паратоп данного комплекса. Следующие остатки в доменах K1K2 TFPI участвуют в непосредственном контакте с Fab 2А8 (эпитоп согласно BSA): D31, D32, G33, P34, C35, K36, E100, E101, P103, G104, I105, C106, R107, G108, Y109, E123, K126, Y127 и G128. Следующие остатки в тяжелой цепи Fab 4D8 составляют паратоп тяжелой цепи: G26, T28, S31, Y32, Y96, R97, Y98, W99 и D101 (нумерация по Kabat). Следующие остатки в легкой цепи Fab 2A8 составляют паратоп легкой цепи: L28, R29, N30, Y31, Y32, Y49, Y50, D51 и N66 (нумерация по Kabat). Значения BSA и % BSA для остатков эпитопа и паратопа показаны в Таблице 21. Структура очень близкородственного антитела, представляющего собой 2А8-200, в комплексе с K1K2 TFPI также была определена с использованием по существу идентичных способов. Эпитоп и паратоп данного антитела были идентичными эпитопу и паратопу 2А8.Cynomolgus Fab 2A8 and K1K2 TFPI were mixed in a 1:1 molar ratio to form a complex. Final purification was carried out using a Superdex 200 column. For structural studies, this complex was concentrated to 10.8 mg/ml. Crystals of the complex containing Fab 2A8 and K1K2 TFPI were prepared under the following two conditions: (1) 100 mM HEPES, pH 7.5, 12.5% PEG 8000, which gave needle-shaped crystals that diffracted to 3.0 Å; (2) 100 mM HEPES, pH 7.5, 1600 mM ammonium sulfate, 2% PEG 1000, which gave blocky crystals that diffracted to 3.3 Å. The crystals were temporarily cryoprotected and synchrotron data collection was performed remotely at the Advanced Photon Source. Image frames were processed using AutoPROC software (Global Phasing Ltd). The data belong to space group P3221 with the following unit cells: a = b = 196.146 Å, c = 41.262 Å, α = β= 90°, γ = 120°, with one complex per asymmetric cell. Molecular replacement searches using Fab 2A8 homology models as well as publicly available structures (RSCB Protein Data Bank; PDB codes 1TFX and 4DTG) of the K2 TFPI domains yielded convincing solutions for each component. Refinement was performed using the PHENIX program, and the final R/Rfree factors at 3.0 Å are 0.1667 and 0.2088, respectively, with a bond RMSD of 0.011 Å, angle RMSD of 1.474°. Based on the buried surface area (BSA) and percentage of BSA (%BSA) for residues at the Fab K1K2 TFPI interface, the epitope and paratope of this complex were determined. The following residues in the K1K2 TFPI domains are involved in direct contact with Fab 2A8 (epitope according to BSA): D31, D32, G33, P34, C35, K36, E100, E101, P103, G104, I105, C106, R107, G108, Y109, E123 , K126, Y127 and G128. The following residues in the Fab 4D8 heavy chain constitute the heavy chain paratope: G26, T28, S31, Y32, Y96, R97, Y98, W99, and D101 (Kabat numbering). The following residues in the light chain of Fab 2A8 constitute the light chain paratope: L28, R29, N30, Y31, Y32, Y49, Y50, D51, and N66 (Kabat numbering). The BSA and %BSA values for epitope and paratope residues are shown in Table 21. The structure of a very closely related antibody, 2A8-200, complexed with K1K2 TFPI was also determined using essentially identical methods. The epitope and paratope of this antibody were identical to the epitope and paratope of 2A8.

Таблица 21
Остатки эпитопа и паратопа антитела 2А8 против TFPI, определенные по скрытой области поверхности (BSA) и проценту BSA (% BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса Fab 2А8 / K2 TFPI яванского макака (остатки легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (НС) антитела пронумерованы с использованием определений Kabat). В анализе BSA применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии). Table 21
Epitope and paratope residues of the anti-TFPI antibody 2A8 determined by the buried surface area (BSA) and the percentage of BSA (%BSA) contact surface residues in the structure of the cynomolgus monkey Fab 2A8/K2 TFPI complex (light chain (LC) and heavy chain (HC) residues antibodies are numbered using Kabat definitions). The BSA assay applies a threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or participation in electrostatic interaction). ОстатокRemainder ЦепьChain № остаткаRemaining number КлассификацияClassification BSAB.S.A. %BSA%BSA ASPA.S.P. TFPI K1K2TFPI K1K2 3131 эпитопepitope 41,941.9 59,859.8 ASPA.S.P. TFPI K1K2TFPI K1K2 3232 эпитопepitope 4,94.9 44,044.0 PROPRO TFPI K1K2TFPI K1K2 3434 эпитопepitope 98,898.8 88,788.7 CYSC.Y.S. TFPI K1K2TFPI K1K2 3535 эпитопepitope 40,540.5 91,891.8 LYSLYS TFPI K1K2TFPI K1K2 3636 эпитопepitope 143,6143.6 73,473.4 GLUG.L.U. TFPI K1K2TFPI K1K2 100100 эпитопepitope 47,647.6 35,635.6 GLUG.L.U. TFPI K1K2TFPI K1K2 101101 эпитопepitope 90,290.2 90,790.7 PROPRO TFPI K1K2TFPI K1K2 103103 эпитопepitope 56,856.8 79,279.2 ILEILE TFPI K1K2TFPI K1K2 105105 эпитопepitope 9,39.3 39,139.1 ARGA.R.G. TFPI K1K2TFPI K1K2 107107 эпитопepitope 111,0111.0 71,371.3 GLYGLY TFPI K1K2TFPI K1K2 108108 эпитопepitope 20,520.5 55,855.8 TYRTYR TFPI K1K2TFPI K1K2 109109 эпитопepitope 128,1128.1 79,179.1 GLUG.L.U. TFPI K1K2TFPI K1K2 123123 эпитопepitope 26,526.5 43,043.0 LYSLYS TFPI K1K2TFPI K1K2 126126 эпитопepitope 49,349.3 60,260.2 TYRTYR TFPI K1K2TFPI K1K2 127127 эпитопepitope 1,51.5 9,09.0 GLYGLY TFPI K1K2TFPI K1K2 128128 эпитопepitope 3,23.2 47,747.7 GLYGLY 2A8 HC2A8HC 2626 паратопparatope 29,329.3 46,546.5 THRTHR 2A8 HC2A8HC 2828 паратопparatope 61,661.6 74,174.1 SERSER 2A8 HC2A8HC 3131 паратопparatope 46,546.5 56,756.7 TYRTYR 2A8 HC2A8HC 3232 паратопparatope 54,254.2 85,685.6 TYRTYR 2A8 HC2A8HC 9696 паратопparatope 85,785.7 99,199.1 ARGA.R.G. 2A8 HC2A8HC 9797 паратопparatope 104,4104.4 78,678.6 TYRTYR 2A8 HC2A8HC 9898 паратопparatope 89,389.3 81,381.3 TRPTRP 2A8 HC2A8HC 9999 паратопparatope 20,020.0 96,796.7 ASPA.S.P. 2A8 HC2A8HC 101101 паратопparatope 16,516.5 51,651.6 LEULEU 2A8 LC2A8LC 2828 паратопparatope 7,47.4 67,067.0 ASNASN 2A8 LC2A8LC 30thirty паратопparatope 43,443.4 38,738.7 TYRTYR 2A8 LC2A8LC 3131 паратопparatope 49,649.6 58,258.2 TYRTYR 2A8 LC2A8LC 3232 паратопparatope 94,894.8 72,872.8 TYRTYR 2A8 LC2A8LC 4949 паратопparatope 43,043.0 79,479.4 TYRTYR 2A8 LC2A8LC 5050 паратопparatope 41,241.2 92,992.9 ASPA.S.P. 2A8 LC2A8LC 5151 паратопparatope 15,715.7 64,464.4

3. Структура комплекса Fab Mab 2974 / K2 TFPI3. Structure of Fab Mab 2974/K2 TFPI complex

Fab Mab 2974 (R&D Systems) и K2 TFPI яванского макака смешивали в мольном соотношении 1:1,2 с образованием комплекса. Конечную очистку проводили с использованием колонки Superdex 200. Для структурных исследований данный комплекс концентрировали до 17,5 мг/мл. Кристаллы комплекса, содержащего Fab Mab 2974 и K2 TFPI, получали в 100 мМ цитрате натрия, pH 5,6, 20% изопропанола, 20% ПЭГ 4000, что давало глыбовидные кристаллы, которые дифрагировали до 2,15 Å. Кристаллы временно подвергали криозащите, и отбор данных синхротрона осуществляли удаленно в Advanced Photon Source. Кадры изображений обрабатывали с использованием программы AutoPROC (Global Phasing Ltd). Данные комплекса принадлежат к пространственной группе P212121 со следующими элементарными ячейками: a = 82,075 Å, b = 117,829 Å, c = 170,945 Å, α = β= γ = 90°, с тремя комплексами на асимметричную ячейку. Поскольку последовательность Fab Mab 2947 не была доступна, для расшифровки последовательности белка был отобран набор данных высокого разрешения для одного Fab (1,63 Å), наряду с биоинформационным анализом. Поиски молекулярного замещения с использованием структуры Fab Mab 2947, а также общедоступных структур (банк данных белков RSCB; коды PDB 1TFX и 4DTG) доменов K2 TFPI дали убедительные решения для каждого компонента. Уточнение осуществляли с использованием программы autoBUSTER, и конечные множители R/Rсвободный при 2,15 Å составляют 0,1702 и 0,2161, соответственно, с RMSD связи 0,010 Å, RMSD углов 1,13°. На основе скрытой области поверхности (BSA) и процента BSA (% BSA) для остатков на поверхности контакта Fab K2 TFPI был определен эпитоп данного комплекса. Следующие остатки в домене K2 TFPI участвуют в непосредственном контакте с Fab Mab 2974 (эпитоп согласно BSA): E100, E101, P103, R107, Y109, T111, N116, Q118, S119, Q121, E123, R124, F125 и K126. Значения BSA и % BSA для остатков эпитопа показаны в Таблице 22.Fab Mab 2974 (R&D Systems) and cynomolgus K2 TFPI were mixed in a molar ratio of 1:1.2 to form a complex. Final purification was carried out using a Superdex 200 column. For structural studies, this complex was concentrated to 17.5 mg/ml. Crystals of the complex containing Fab Mab 2974 and K2 TFPI were prepared in 100 mM sodium citrate, pH 5.6, 20% isopropanol, 20% PEG 4000, which gave blocky crystals that diffracted to 2.15 Å. The crystals were temporarily cryoprotected and synchrotron data collection was performed remotely at the Advanced Photon Source. Image frames were processed using AutoPROC software (Global Phasing Ltd). These complexes belong to space group P212121 with the following unit cells: a = 82.075 Å, b = 117.829 Å, c = 170.945 Å, α = β= γ = 90°, with three complexes per asymmetric cell. Since the sequence of Fab Mab 2947 was not available, a high-resolution dataset of a single Fab (1.63 Å) was selected to decipher the protein sequence, along with bioinformatics analysis. Molecular replacement searches using the structure of Fab Mab 2947 as well as publicly available structures (RSCB Protein Data Bank; PDB codes 1TFX and 4DTG) of the K2 TFPI domains yielded compelling solutions for each component. Refinement was performed using the autoBUSTER program, and the final R/Rfree factors at 2.15 Å are 0.1702 and 0.2161, respectively, with a bond RMSD of 0.010 Å and an angle RMSD of 1.13°. Based on the buried surface area (BSA) and percentage of BSA (%BSA) for residues at the Fab K2 TFPI interface, the epitope of this complex was determined. The following residues in the K2 domain of TFPI are involved in direct contact with Fab Mab 2974 (BSA epitope): E100, E101, P103, R107, Y109, T111, N116, Q118, S119, Q121, E123, R124, F125, and K126. BSA and %BSA values for epitope residues are shown in Table 22.

Таблица 22
Остатки эпитопа антитела Mab 2974 против TFPI, определенные по скрытой области поверхности (BSA) и проценту BSA (% BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса Fab Mab 2974 / K2 TFPI яванского макака. В анализе BSA применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии) Table 22
Anti-TFPI antibody Mab 2974 epitope residues determined by the buried surface area (BSA) and percentage BSA (%BSA) of contact surface residues in the structure of the cynomolgus monkey Fab Mab 2974/K2 TFPI complex. The BSA assay applies a threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or involved in electrostatic interaction) ОстатокRemainder ЦепьChain № остаткаRemaining number КлассификацияClassification BSAB.S.A. %BSA%BSA GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 100100 эпитопepitope 25,925.9 16,816.8 GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 101101 эпитопepitope 42,242.2 54,754.7 PROPRO TFPI K2TFPI K2 103103 эпитопepitope 26,826.8 58,558.5 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 107107 эпитопepitope 32,332.3 16,416.4 TYRTYR TFPI K2TFPI K2 109109 эпитопepitope 83,183.1 62,962.9 THRTHR TFPI K2TFPI K2 111111 эпитопepitope 13,813.8 18,918.9 ASNASN TFPI K2TFPI K2 116116 эпитопepitope 23,923.9 71,971.9 GLNGLN TFPI K2TFPI K2 118118 эпитопepitope 107,0107.0 62,762.7 SERSER TFPI K2TFPI K2 119119 эпитопepitope 48,448.4 87,687.6 GLNGLN TFPI K2TFPI K2 121121 эпитопepitope 51,651.6 53,353.3 GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 123123 эпитопepitope 61,661.6 79,879.8 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 124124 эпитопepitope 56,056.0 33,233.2 LYSLYS TFPI K2TFPI K2 126126 эпитопepitope 114,8114.8 91,891.8

4. Структура комплекса Fab TFPI-23 / K2 TFPI яванского макака4. Structure of the cynomolgus monkey Fab TFPI-23/K2 TFPI complex

Fab TFPI-23 и K2 TFPI яванского макака смешивали в мольном соотношении 1:2 с образованием комплекса. Конечную очистку проводили с использованием колонки Superdex 200. Для структурных исследований данный комплекс концентрировали до 12,4 мг/мл. Кристаллы комплекса K2 TFPI+Fab 4D8 получали в 100 мМ Bis-Tris, pH 6,5, 20% PEGMME5000. Это давало волокнообразные кристаллы, которые дифрагировали до 2,9 Å. Кристаллы временно подвергали криозащите, и отбор данных синхротрона осуществляли удаленно в Advanced Photon Source. Кадры изображений обрабатывали с использованием программы AutoPROC (Global Phasing Ltd). Данные принадлежат к пространственной группе P1 со следующими элементарными ячейками: a = 74,669 Å, b = 101,372 Å, c = 119,275 Å, α = 101,83, β = 92,27°, γ = 96,78°, с шестью копиями комплексами на асимметричную ячейку. Поиски молекулярного замещения с использованием моделей гомологии Fab TFPI-23, а также общедоступных структур (банк данных белков RSCB; коды PDB 1TFX и 4DTG) доменов K2 TFPI дали убедительные решения для каждого компонента. Уточнение осуществляли с использованием программы autoBUSTER, и конечные множители R/Rсвободный при 2,9 Å составляют 0,1961 и 0,2344, соответственно, с RMSD связи 0,010 Å, RMSD углов 1,22°. На основе BSA и процента BSA (% BSA) для остатков на поверхности контакта Fab K2 TFPI был определен эпитоп и паратоп данного комплекса. Следующие остатки в домене K2 TFPI участвуют в непосредственном контакте с Fab TFPI-23 (эпитоп согласно BSA): D102, I105, C106, R107, G108, R112, Y127, G129, C130, L131, G132, M134 и E138. Следующие остатки в тяжелой цепи Fab 4D8 составляют паратоп тяжелой цепи: A33, W47, A50, I51, S52, S56, Y58, L95, G96, A97, T98, S99, L100 и S100A. Следующие остатки в легкой цепи Fab 4D8 составляют паратоп легкой цепи: A29, Y31, Y91, S95A, G95B и S95C. Значения BSA и % BSA для остатков эпитопа и паратопа показаны в Таблице 23.Fab TFPI-23 and cynomolgus K2 TFPI were mixed in a molar ratio of 1:2 to form a complex. Final purification was carried out using a Superdex 200 column. For structural studies, this complex was concentrated to 12.4 mg/ml. Crystals of the K2 TFPI+Fab 4D8 complex were prepared in 100 mM Bis-Tris, pH 6.5, 20% PEGMME5000. This produced fiber-like crystals that diffracted to 2.9 Å. The crystals were temporarily cryoprotected and synchrotron data collection was performed remotely at the Advanced Photon Source. Image frames were processed using AutoPROC software (Global Phasing Ltd). The data belongs to space group P1 with the following unit cells: a = 74.669 Å, b = 101.372 Å, c = 119.275 Å, α = 101.83, β = 92.27°, γ = 96.78°, with six copy complexes per asymmetric cell. Molecular replacement searches using TFPI-23 Fab homology models as well as publicly available structures (RSCB Protein Data Bank; PDB codes 1TFX and 4DTG) of the TFPI K2 domains yielded compelling solutions for each component. Refinement was performed using the autoBUSTER program, and the final R/Rfree multipliers at 2.9 Å are 0.1961 and 0.2344, respectively, with a bond RMSD of 0.010 Å, angle RMSD of 1.22°. Based on the BSA and percentage of BSA (%BSA) for the residues at the Fab K2 TFPI interface, the epitope and paratope of this complex were determined. The following residues in the K2 domain of TFPI are involved in direct contact with Fab TFPI-23 (an epitope according to BSA): D102, I105, C106, R107, G108, R112, Y127, G129, C130, L131, G132, M134, and E138. The following residues in the Fab 4D8 heavy chain constitute the heavy chain paratope: A33, W47, A50, I51, S52, S56, Y58, L95, G96, A97, T98, S99, L100, and S100A. The following residues in the light chain of Fab 4D8 constitute the light chain paratope: A29, Y31, Y91, S95A, G95B, and S95C. The BSA and %BSA values for epitope and paratope residues are shown in Table 23.

Таблица 23
Остатки эпитопа и паратопа антитела против TFPI TFPI-23, определенные по скрытой области поверхности (BSA) и проценту BSA (% BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса Fab TFPI-23 / K2 TFPI яванского макака (остатки легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (НС) антитела пронумерованы с использованием определений Kabat). В анализе BSA применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии). Table 23
Epitope and paratope residues of the anti-TFPI antibody TFPI-23 determined by the buried surface area (BSA) and percentage BSA (%BSA) of contact surface residues in the structure of the cynomolgus TFPI Fab TFPI-23/K2 complex (light chain (LC) and heavy chain residues antibody chains (HC) are numbered using Kabat definitions). The BSA assay applies a threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or participation in electrostatic interaction). ОстатокRemainder ЦепьChain № остаткаRemaining number КлассификацияClassification BSAB.S.A. %BSA%BSA ASPA.S.P. TFPI K2TFPI K2 102102 эпитопepitope 27,427.4 49,249.2 ILEILE TFPI K2TFPI K2 105105 эпитопepitope 116,0116.0 81,981.9 CYSC.Y.S. TFPI K2TFPI K2 106106 эпитопepitope 46,846.8 97,097.0 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 107107 эпитопepitope 99,999.9 49,549.5 GLYGLY TFPI K2TFPI K2 108108 эпитопepitope 23,123.1 45,745.7 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 112112 эпитопepitope 42,842.8 70,470.4 TYRTYR TFPI K2TFPI K2 127127 эпитопepitope 18,718.7 92,692.6 GLYGLY TFPI K2TFPI K2 129129 эпитопepitope 36,736.7 69,569.5 CYSC.Y.S. TFPI K2TFPI K2 130130 эпитопepitope 26,726.7 100,0100.0 LEULEU TFPI K2TFPI K2 131131 эпитопepitope 120,8120.8 97,597.5 GLYGLY TFPI K2TFPI K2 132132 эпитопepitope 29,329.3 77,877.8 METMET TFPI K2TFPI K2 134134 эпитопepitope 48,748.7 38,238.2 GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 138138 эпитопepitope 43,843.8 31,731.7 ALAA.L.A. TFPI-23 HCTFPI-23HC 3333 паратопparatope 20,320.3 70,570.5 TYRTYR TFPI-23 HCTFPI-23HC 5858 паратопparatope 107,0107.0 82,782.7 LEULEU TFPI-23 HCTFPI-23HC 9595 паратопparatope 31,631.6 93,493.4 GLYGLY TFPI-23 HCTFPI-23HC 9696 паратопparatope 20,820.8 73,173.1 ALAA.L.A. TFPI-23 HCTFPI-23HC 9797 паратопparatope 12,112.1 34,034.0 THRTHR TFPI-23 HCTFPI-23HC 9898 паратопparatope 5,65.6 4,94.9 SERSER TFPI-23 HCTFPI-23HC 9999 паратопparatope 2,42.4 80,780.7 LEULEU TFPI-23 HCTFPI-23HC 100100 паратопparatope 87,087.0 55,955.9 SERSER TFPI-23 HCTFPI-23HC 100A100A паратопparatope 24,724.7 83,883.8 ALAA.L.A. TFPI-23 LCTFPI-23LC 2929 паратопparatope 38,738.7 86,986.9 TYRTYR TFPI-23 LCTFPI-23LC 3131 паратопparatope 60,860.8 86,086.0 TYRTYR TFPI-23 LCTFPI-23LC 9191 паратопparatope 27,027.0 94,394.3 SERSER TFPI-23 LCTFPI-23LC 95A95A паратопparatope 71,471.4 64,964.9 GLYGLY TFPI-23 LCTFPI-23LC 95B95B паратопparatope 25,325.3 96,596.5

5. Структура комплекса Fab TFPI-24 / K2 TFPI яванского макака5. Structure of the cynomolgus monkey Fab TFPI-24/K2 TFPI complex

Fab TFPI-24 и K2 TFPI яванского макака смешивали в мольном соотношении 1:2 с образованием комплекса. Конечную очистку проводили с использованием колонки Superdex 200. Для структурных исследований данный комплекс концентрировали до 12,2 мг/мл. Кристаллы комплекса K2 TFPI / Fab TFPI-24 получали в 20% PEG3350, 200 мМ нитрате аммония. Это давало кристаллы, которые дифрагировали до 1,75 Å. Кристаллы временно криозащищали, и отбор данных синхротрона осуществляли удаленно в Advanced Photon Source. Кадры изображений обрабатывали с использованием программы AutoPROC. Данные принадлежат к пространственной группе P212121 со следующими элементарными ячейками: a = 42,817 Å, b = 71,362 Å, c = 148,729 Å, α = β = γ = 90°, с одним комплексом на асимметричную ячейку. Поиски молекулярного замещения с использованием моделей гомологии Fab TFPI-24, а также общедоступных структур (банк данных белков RSCB; коды PDB 1TFX и 4DTG) доменов K2 TFPI дали убедительные решения для каждого компонента. Уточнение осуществляли с использованием программы autoBUSTER, и конечные множители R/Rсвободный при 1,75 Å составляют 0,1900 и 0,2269, соответственно, с RMSD связи 0,010 Å, RMSD углов 1,18°. На основе скрытой области поверхности (BSA) и процента BSA (% BSA) для остатков на поверхности контакта Fab / K2 TFPI были определены эпитоп и паратоп данного комплекса. Следующие остатки в домене K2 TFPI участвуют в непосредственном контакте с Fab TFPI-24 (эпитоп согласно BSA): E100, E101, D102, G104, I105, C106, R107, G108, Y109, I110, G129, C130, L131 и G132. Следующие остатки в тяжелой цепи Fab TFPI-24 составляют паратоп тяжелой цепи: A33, Q35, W47, G50, I51, S52, N53, R55, S56, I57, G58, F95, L96, H97, S99 и D101. Следующие остатки в легкой цепи Fab TFPI-24 составляют паратоп легкой цепи: M31, Y32, H34, Y36, L46, R50, W91 и Y96. Значения BSA и % BSA для остатков эпитопа и паратопа показаны в Таблице 24.Fab TFPI-24 and cynomolgus K2 TFPI were mixed in a molar ratio of 1:2 to form a complex. Final purification was carried out using a Superdex 200 column. For structural studies, this complex was concentrated to 12.2 mg/ml. Crystals of the K2 TFPI/Fab TFPI-24 complex were prepared in 20% PEG3350, 200 mM ammonium nitrate. This produced crystals that diffracted to 1.75 Å. The crystals were temporarily cryoprotected and synchrotron data collection was performed remotely at the Advanced Photon Source. Image frames were processed using AutoPROC software. The data belong to space group P212121 with the following unit cells: a = 42.817 Å, b = 71.362 Å, c = 148.729 Å, α = β = γ = 90°, with one complex per asymmetric cell. Molecular replacement searches using TFPI-24 Fab homology models as well as publicly available structures (RSCB Protein Data Bank; PDB codes 1TFX and 4DTG) of the TFPI K2 domains yielded compelling solutions for each component. Refinement was performed using the autoBUSTER program, and the final R/Rfree factors at 1.75 Å are 0.1900 and 0.2269, respectively, with a bond RMSD of 0.010 Å and an angle RMSD of 1.18°. Based on the buried surface area (BSA) and percentage of BSA (%BSA) for residues at the Fab/K2 TFPI interface, the epitope and paratope of this complex were determined. The following residues in the K2 domain of TFPI are involved in direct contact with Fab TFPI-24 (an epitope according to BSA): E100, E101, D102, G104, I105, C106, R107, G108, Y109, I110, G129, C130, L131, and G132. The following residues in the heavy chain of Fab TFPI-24 constitute the heavy chain paratope: A33, Q35, W47, G50, I51, S52, N53, R55, S56, I57, G58, F95, L96, H97, S99, and D101. The following residues in the light chain of Fab TFPI-24 constitute the light chain paratope: M31, Y32, H34, Y36, L46, R50, W91, and Y96. The BSA and %BSA values for epitope and paratope residues are shown in Table 24.

Таблица 24
Остатки эпитопа и паратопа антитела против TFPI TFPI-24, определенные по скрытой области поверхности (BSA) и проценту BSA (% BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса Fab TFPI-24 / K2 TFPI яванского макака (остатки легкой цепи (LC) и тяжелой цепи (НС) антитела пронумерованы с использованием определений Kabat). В анализе BSA применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии). Table 24
Epitope and paratope residues of the anti-TFPI antibody TFPI-24 determined by the buried surface area (BSA) and percentage BSA (%BSA) of contact surface residues in the structure of the cynomolgus TFPI Fab TFPI-24/K2 complex (light chain (LC) and heavy chain residues antibody chains (HC) are numbered using Kabat definitions). The BSA assay applies a threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or participation in electrostatic interaction). ОстатокRemainder ЦепьChain № остаткаRemaining number КлассификацияClassification BSAB.S.A. %BSA%BSA GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 100100 эпитопepitope 44,144.1 30,030.0 GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 101101 эпитопepitope 12,312.3 13,713.7 ASPA.S.P. TFPI K2TFPI K2 102102 эпитопepitope 57,157.1 93,593.5 GLYGLY TFPI K2TFPI K2 104104 эпитопepitope 22,022.0 84,184.1 ILEILE TFPI K2TFPI K2 105105 эпитопepitope 137,7137.7 99,199.1 CYSC.Y.S. TFPI K2TFPI K2 106106 эпитопepitope 45,245.2 91,591.5 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 107107 эпитопepitope 202,7202.7 99,799.7 GLYGLY TFPI K2TFPI K2 108108 эпитопepitope 33,133.1 79,379.3 TYRTYR TFPI K2TFPI K2 109109 эпитопepitope 106,1106.1 76,376.3 CYSC.Y.S. TFPI K2TFPI K2 130130 эпитопepitope 25,125.1 83,983.9 LEULEU TFPI K2TFPI K2 131131 эпитопepitope 66,866.8 54,954.9 GLYGLY TFPI K2TFPI K2 132132 эпитопepitope 4,74.7 14,414.4 ALAA.L.A. TFPI-24 HCTFPI-24HC 3333 паратопparatope 33,133.1 74,074.0 GLNGLN TFPI-24 HCTFPI-24HC 3535 паратопparatope 14,314.3 95,595.5 SERSER TFPI-24 HCTFPI-24HC 5252 паратопparatope 26,326.3 99,399.3 ASNASN TFPI-24 HCTFPI-24HC 5353 паратопparatope 54,654.6 52,652.6 ARGA.R.G. TFPI-24 HCTFPI-24HC 5555 паратопparatope 22,022.0 11,011.0 SERSER TFPI-24 HCTFPI-24HC 5656 паратопparatope 68,768.7 93,593.5 PHEPHE TFPI-24 HCTFPI-24HC 9595 паратопparatope 47,247.2 92,992.9 LEULEU TFPI-24 HCTFPI-24HC 9696 паратопparatope 18,418.4 41,541.5 HISHIS TFPI-24 HCTFPI-24HC 9797 паратопparatope 70,970.9 44,244.2 SERSER TFPI-24 HCTFPI-24HC 9999 паратопparatope 1,01.0 2,12.1 ASPA.S.P. TFPI-24 HCTFPI-24HC 101101 паратопparatope 3,73.7 11,611.6 METMET TFPI-24 LCTFPI-24LC 3131 паратопparatope 30,930.9 46,046.0 TYRTYR TFPI-24 LCTFPI-24LC 3232 паратопparatope 23,323.3 22,522.5 HISHIS TFPI-24 LCTFPI-24LC 3434 паратопparatope 23,723.7 85,285.2 TYRTYR TFPI-24 LCTFPI-24LC 3636 паратопparatope 4,34.3 96,596.5 ARGA.R.G. TFPI-24 LCTFPI-24LC 5050 паратопparatope 62,562.5 60,160.1 TRPTRP TFPI-24 LCTFPI-24LC 9191 паратопparatope 58,358.3 85,685.6 TYRTYR TFPI-24 LCTFPI-24LC 9696 паратопparatope 43,243.2 78,578.5

6. Анализ эпитопа hz4F366. Analysis of the hz4F36 epitope

Структура Fab hz4F36 в комплексе с доменом K2 человеческого TFPI доступна в банке данных белков (код доступа PDB - 4DTG). На основе BSA и процента BSA (%BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса hz4F36 / K2 TFPI были определены остатки эпитопа, как показано в Таблице 25.The structure of Fab hz4F36 in complex with the K2 domain of human TFPI is available in the Protein Data Bank (PDB accession code - 4DTG). Based on the BSA and percentage of BSA (%BSA) interface residues in the hz4F36/K2 TFPI complex structure, the epitope residues were determined as shown in Table 25.

Таблица 25Table 25

Остатки эпитопа антитела против TFPI hz4F36, определенные по скрытой области поверхности (BSA), и проценту BSA (% BSA) остатков поверхности контакта в структуре комплекса Fab hz4F36 / K2 TFPI яванского макака (код доступа PDB - 4DTG). В анализе BSA применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии).Anti-TFPI hz4F36 antibody epitope residues determined by the buried surface region (BSA), and the percentage of BSA (%BSA) contact surface residues in the structure of the cynomolgus monkey hz4F36/K2 TFPI Fab complex (PDB accession code - 4DTG). The BSA assay applies a threshold value (BSA 20 Å 2 or greater, or participation in electrostatic interaction).

ОстатокRemainder ЦепьChain № остаткаRemaining number КлассификацияClassification BSAB.S.A. %BSA%BSA GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 100100 эпитопepitope 103,9103.9 72,972.9 GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 101101 эпитопepitope 44,444.4 68,068.0 ASPA.S.P. TFPI K2TFPI K2 102102 эпитопepitope 31,931.9 55,355.3 PROPRO TFPI K2TFPI K2 103103 эпитопepitope 45,745.7 91,791.7 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 107107 эпитопepitope 105,0105.0 55,855.8 TYRTYR TFPI K2TFPI K2 109109 эпитопepitope 75,975.9 67,467.4 THRTHR TFPI K2TFPI K2 111111 эпитопepitope 24,124.1 51,551.5 TYRTYR TFPI K2TFPI K2 113113 эпитопepitope 51,951.9 100,0100.0 ASNASN TFPI K2TFPI K2 116116 эпитопepitope 17,617.6 63,063.0 GLNGLN TFPI K2TFPI K2 118118 эпитопepitope 76,676.6 34,834.8 GLNGLN TFPI K2TFPI K2 121121 эпитопepitope 43,543.5 50,350.3 GLUG.L.U. TFPI K2TFPI K2 123123 эпитопepitope 27,327.3 63,663.6 ARGA.R.G. TFPI K2TFPI K2 124124 эпитопepitope 129,9129.9 80,980.9 LYSLYS TFPI K2TFPI K2 126126 эпитопepitope 60,860.8 63,663.6 LEULEU TFPI K2TFPI K2 140140 эпитопepitope 33,433.4 61,961.9

7. Сравнение эпитопов антител против TFPI7. Comparison of anti-TFPI antibody epitopes

Эпитопы антител против TFPI, показанные в Таблицах 20-25, сравниваются в Таблицах 26 и 27. В Таблице 26 показаны эпитопы антител, которые являются специфичными в отношении домена K2 TFPI. В Таблицу 27 включены 2 дополнительных антитела (2А8 и 2А8-200), которые связываются и с K1, и с K2 доменами.The anti-TFPI antibody epitopes shown in Tables 20-25 are compared in Tables 26 and 27. Table 26 shows antibody epitopes that are specific for the K2 domain of TFPI. Table 27 includes 2 additional antibodies (2A8 and 2A8-200) that bind to both the K1 and K2 domains.

Таблица 26
Остатки эпитопов антител против TFPI на основе данных в Таблицах 20, 22-25 Table 26
Anti-TFPI antibody epitope residues based on data in Tables 20, 22-25 Остатки челове-
ческого TFPI Remains of human
Czech TFPI Домен TFPI TFPI domain TFPI-24TFPI-24 TFPI-23TFPI-23 4D8.b14D8.b1 hz4F36hz4F36 Mab 2974Mab 2974 E100E100 K2K2 XX XX XX E101E101 K2K2 XX XX XX XX D102D102 K2K2 XX XX XX P103P103 K2K2 XX XX XX G104G104 K2K2 XX I105I105 K2K2 XX XX C106C106 K2K2 XX XX R107R107 K2K2 XX XX XX XX G108G108 K2K2 XX XX Y109Y109 K2K2 XX XX XX XX I110I110 K2K2 T111T111 K2K2 XX XX XX R112R112 K2K2 XX Y113Y113 K2K2 XX F114F114 K2K2 Y115Y115 K2K2 N116N116 K2K2 XX XX N117N117 K2K2 Q118Q118 K2K2 XX XX S119S119 K2K2 XX XX K120K120 K2K2 Q121Q121 K2K2 XX XX XX C122C122 K2K2 E123E123 K2K2 XX XX XX R124R124 K2K2 XX XX XX F125F125 K2K2 K126K126 K2K2 XX XX XX Y127Y127 K2K2 XX G128G128 K2K2 G129G129 K2K2 XX C130C130 K2K2 XX XX L131L131 K2K2 XX XX G132G132 K2K2 XX XX N133N133 K2K2 M134M134 K2K2 XX N135N135 K2K2 N136N136 K2K2 F137F137 K2K2 E138E138 K2K2 XX T139T139 K2K2 L140L140 K2K2 XX XX E141E141 K2K2

Х обозначает аминокислотные остатки TFPI, которые являются частью эпитопа. Х (жирный шрифт) обозначает новые остатки эпитопа для антител, раскрытых в этом изобретении. Следует отметить, что TFPI-23 не конкурирует за связывание с TFPI с hz4F36, 4D8 или mab2974, но действительно конкурирует с TFPI-24 за связывание с TFPI. Антитела 2А8 и 2А8-200 не включены в эту таблицу, так как они требуют для связывания обоих доменов K1 и K2 и не связываются с одним доменом K2.X represents the amino acid residues of TFPI that are part of the epitope. X (bold) indicates new epitope residues for the antibodies disclosed in this invention. It should be noted that TFPI-23 does not compete for TFPI binding with hz4F36, 4D8, or mab2974, but does compete with TFPI-24 for TFPI binding. Antibodies 2A8 and 2A8-200 are not included in this table because they require both K1 and K2 domains for binding and do not bind to the K2 domain alone.

Таблица 27
Сравнение остатков эпитопов антител против TFPI на основе данных, показанных в Таблицах 20-25 Table 27
Comparison of anti-TFPI antibody epitope residues based on data shown in Tables 20-25 Остатки челове-
ческого TFPIRemains of human
Czech TFPI Домен TFPITFPI domain TFPI-24TFPI-24 TFPI-23TFPI-23 4D84D8 hz4F36hz4F36 R&D2974R&D2974 2A82A8 2A8-2002A8-200 D31D31 K1K1 XX XX D32D32 K1K1 XX XX G33G33 K1K1 P34P34 K1K1 XX XX C35C35 K1K1 XX XX K36K36 K1K1 XX XX C59C59 K1K1 E100E100 K2K2 XX XX XX XX XX E101E101 K2K2 XX XX XX XX XX XX D102D102 K2K2 XX XX XX P103P103 K2K2 XX XX XX XX XX G104G104 K2K2 XX I105I105 K2K2 XX XX XX XX C106C106 K2K2 XX XX R107R107 K2K2 XX XX XX XX XX XX G108G108 K2K2 XX XX XX XX Y109Y109 K2K2 XX XX XX XX XX XX I110I110 K2K2 T111T111 K2K2 XX XX XX R112R112 K2K2 XX Y113Y113 K2K2 XX F114F114 K2K2 Y115Y115 K2K2 N116N116 K2K2 XX XX N117N117 K2K2 Q118Q118 K2K2 XX XX S119S119 K2K2 XX XX K120K120 K2K2 Q121Q121 K2K2 XX XX XX C122C122 K2K2 E123E123 K2K2 XX XX XX R124R124 K2K2 XX XX XX F125F125 K2K2 K126K126 K2K2 XX XX XX XX XX Y127Y127 K2K2 XX XX XX G128G128 K2K2 XX XX G129G129 K2K2 XX C130C130 K2K2 XX XX L131L131 K2K2 XX XX G132G132 K2K2 XX XX N133N133 K2K2 M134M134 K2K2 XX N135N135 K2K2 N136N136 K2K2 F137F137 K2K2 E138E138 K2K2 XX T139T139 K2K2 L140L140 K2K2 XX XX E141E141 K2K2

Х обозначает аминокислотные остатки TFPI, которые являются частью эпитопа. Х (жирный шрифт) обозначает новые остатки эпитопа для антител, раскрытых в этом изобретении. Антитела 2А8 и 2А8-200 требуют для связывания обоих доменов K1 и K2 и не связываются с одним доменом K2 или K1.X represents the amino acid residues of TFPI that are part of the epitope. X (bold) indicates new epitope residues for the antibodies disclosed in this invention. Antibodies 2A8 and 2A8-200 require both K1 and K2 domains for binding and do not bind to either the K2 or K1 domain alone.

Таблица 28
Прогнозирование ключевых остатков эпитопа TFPI для TFPI-23 посредством аланинового сканирования с использованием расчетных способов (Accelrys Discovery Studio 4.1) Table 28
Prediction of Key TFPI Epitope Residues for TFPI-23 by Alanine Scan Using Computational Methods (Accelrys Discovery Studio 4.1) Мутация эпитопаEpitope mutation Энергия мутации (ккал/моль)Mutation energy (kcal/mol) Эффект мутацииMutation effect Парамер VDW Parameter VDW Электроста-тический параметрElectrostatic parameter Параметр энтропииEntropy parameter ASP102>ALAASP102>ALA 0,730.73 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 1,561.56 0,370.37 -0,3-0.3 GLY104>ALAGLY104>ALA -0,19-0.19 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL -0,25-0.25 -0,13-0.13 00 ILE105>ALAILE105>ALA 2,192.19 ДЕСТАБИЛИЗИ-РУЮЩАЯDESTABILIZING 5,285.28 -0,05-0.05 -0,53-0.53 CYS106>ALACYS106>ALA 0,430.43 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,960.96 -0,01-0.01 -0,05-0.05 ARG107>ALAARG107>ALA 2,632.63 ДЕСТАБИЛИЗИ-РУЮЩАЯDESTABILIZING 7,357.35 0,350.35 -1,52-1.52 GLY108>ALAGLY108>ALA 0,30.3 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,740.74 -0,02-0.02 -0,08-0.08 ARG112>ALAARG112>ALA -0,07-0.07 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,050.05 -0,18-0.18 00 TYR127>ALATYR127>ALA 0,120.12 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,180.18 0,070.07 00 GLY129>ALAGLY129>ALA -0,33-0.33 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL -0,35-0.35 -0,19-0.19 -0,08-0.08 CYS130>ALACYS130>ALA 0,060.06 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,260.26 -0,08-0.08 -0,04-0.04 LEU131>ALALEU131>ALA 2,122.12 ДЕСТАБИЛИЗИ-РУЮЩАЯDESTABILIZING 4,154.15 0,030.03 0,040.04 GLY132>ALAGLY132>ALA -0,06-0.06 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL -0,08-0.08 -0,04-0.04 00 MET134>ALAMET134>ALA 0,020.02 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,050.05 -0,01-0.01 00 GLU138>ALAGLU138>ALA 0,070.07 НЕЙТРАЛЬНАЯNEUTRAL 0,020.02 0,130.13 00

На основе произвольного порогового значения больше 1 ккал/моль (4,184 кДж/моль) прогнозируется то, что 3 остатка TFPI (Ile105, Arg107 и Leu131), при мутировании до аланина, значимо способствуют связыванию TFPI-23 с TFPI.Based on an arbitrary threshold value greater than 1 kcal/mol (4.184 kJ/mol), 3 TFPI residues (Ile105, Arg107, and Leu131), when mutated to alanine, are predicted to significantly promote the binding of TFPI-23 to TFPI.

Таблица 29А
CDR TFPI-23 и остатки каркасной области в пределах 4 ангстрем от эпитопа K2 TFPI Table 29A
TFPI-23 CDR and framework region residues within 4 Å of the K2 TFPI epitope Столбец 1Column 1 Столбец 2Column 2 Столбец 3Column 3 Столбец 4Column 4 Столбец 5Column 5 Столбец 6Column 6 Соответствующие остаки TFPICorresponding TFPI residues Остатки CDR TFPI-23/паратопа Residues of CDR TFPI-23/paratope CDR/каркасные областиCDR/wireframe areas Потенциальные заменыPotential replacements Аффинность <0,5 ккал/мольAffinity <0.5 kcal/mol Аффинность <-0,5 ккал/мольAffinity <-0.5 kcal/mol Верхние 3 Top 3 105 Ile105 Ile H33 AlaH33 Ala VH1VH1 Asn, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, ValAsn, Gly, His, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Val ValVal Val, His, PheVal, His, Phe 131 Leu131 Leu H47 TrpH47Trp HFR2HFR2 TyrTyr нетNo TyrTyr 105 Ile, 131 Leu105 Ile, 131 Leu H50 AlaH50 Ala VH2VH2 Arg, Gly, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr, ValArg, Gly, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr, Val нетNo Thr, Ser, PheThr, Ser, Phe 105 Ile105 Ile H51 IleH51 Ile VH2VH2 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val нетNo Arg, Lys, ProArg, Lys, Pro 105 Ile105 Ile H52 Ser H52 Ser VH2VH2 Ala, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn, Asp, Gln, Glu, Gly His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Trp, Tyr, Val Arg, Lys, Phe, TyrArg, Lys, Phe, Tyr Phe, Arg, TyrPhe, Arg, Tyr 105 Ile105 Ile H56 SerH56 Ser VH2VH2 Arg, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValArg, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val Arg, LysArg, Lys Lys, Tyr, PheLys, Tyr, Phe 102 Asp, 104 Gly, 105 Ile, 131 Leu, 132 Gly102 Asp, 104 Gly, 105 Ile, 131 Leu, 132 Gly H58 TyrH58 Tyr VH2VH2 нетNo нетNo нетNo 105 Ile105 Ile H95 LeuH95 Leu VH3VH3 Gln, Ile, Phe, TyrGln, Ile, Phe, Tyr нетNo Ile, Gln, PheIle, Gln, Phe 107 Arg107Arg H96 GlyH96 Gly VH3VH3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Ile, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Val Ala, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser, ValAla, Arg, Asn, Lys, Pro, Ser, Val Arg, Asn, LysArg, Asn, Lys 107 Arg107Arg H97 AlaH97 Ala VH3VH3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val нетNo Leu, Tyr, IleLeu, Tyr, Ile 107 Arg107Arg H98 ThrH98 Thr VH3VH3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val His, Ile, Leu, Met, Phe, TyrHis, Ile, Leu, Met, Phe, Tyr Tyr, Phe, HisTyr, Phe, His 107 Arg107Arg H99 SerH99 Ser VH3VH3 Ala, Gly, Phe, ProAla, Gly, Phe, Pro нетNo Pro, Ala, PhePro, Ala, Phe 106 Cys, 107 Arg, 108 Gly106 Cys, 107 Arg, 108 Gly H100 LeuH100 Leu VH3VH3 Arg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr, ValArg, His, Ile, Leu, Lys, Phe, Pro, Trp, Tyr, Val Phe, Trp, TyrPhe, Trp, Tyr Tyr, Trp, PheTyr, Trp, Phe 106 Cys106 Cys H100A SerH100A Ser VH3VH3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, TrpAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp Arg, Asn, Gln, Glu His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, TrpArg, Asn, Gln, Glu His, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Trp Arg, Leu, TrpArg, Leu, Trp 112 Arg, 138 Gly112 Arg, 138 Gly L29 AlaL29 Ala VL1VL1 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val нетNo Glu, Asp, GlnGlu, Asp, Gln 112 Arg, 127 Tyr, 129 Gly112 Arg, 127 Tyr, 129 Gly L31 TyrL31 Tyr VL1VL1 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val нетNo Glu, Asp, TrpGlu, Asp, Trp 130 Cys130 Cys L91 TyrL91 Tyr VL3VL3 ArgArg нетNo ArgArg 131 Leu, 132 Gly, 134 Met131 Leu, 132 Gly, 134 Met L95A SerL95A Ser VL3VL3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val Phe, Trp, TyrPhe, Trp, Tyr Phe, Tyr, HisPhe, Tyr, His 130 Cys, 131 Leu130 Cys, 131 Leu L95B GlyL95B Gly VL3VL3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val нетNo Glu, Asp, ProGlu, Asp, Pro 131 Leu131 Leu L95C SerL95C Ser VL3VL3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val Arg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr, ValArg, Asn, Gln, Glu, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Trp, Tyr, Val Trp, Tyr, PheTrp, Tyr, Phe *138 Glu *138 Glu
(4.07 Å)(4.07 Å) L93 SerL93 Ser VL3VL3 Ala, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, ValAla, Arg, Asn Asp, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Met, Phe Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val нетNo Glu, Asp, HisGlu, Asp, His *131 Leu *131 Leu
(4,03 Å)(4.03 Å) L96 GlyL96 Gly VL3VL3 AsnAsn нетNo AsnAsn

С использованием расчетных способов прогнозирования (Accelrys Discovery Studio 4.1) также демонстрируются возможные аминокислотные замены для каждого остатка CDR/паратопа, которые, как прогнозируется, не оказывают негативного влияния на стабильность TFPI-23 или аффинность в отношении TFPI (меньше 0,5 ккал/моль, столбцы 4-6). Они классифицируются на три группы: (1) замены по меньшей мере с нейтральным эффектом на связывание (аффинность меньше 0,5 ккал/моль, столбец 4), (2) замены, которые имеют нейтральный/стабилизирующий эффект на связывание (аффинность меньше -0,5 ккал/моль, столбец 5), и (3) верхние 3 прогнозируемых сайта с самым стабилизирующим эффектом на аффинность. Для всех остатков используется нумерация по Kabat (столбец 6). 138Glu/L93Ser и 131Leu/L96Gly включаются как возможные контактные остатки, так как расстояние незначительно превышает 4 Å (4,07 Å и 4,03 Å соответственно), но является достаточно близким к округленным 4 Å.Using computational prediction methods (Accelrys Discovery Studio 4.1), possible amino acid substitutions for each CDR/paratope residue are also demonstrated that are not predicted to adversely affect TFPI-23 stability or affinity for TFPI (less than 0.5 kcal/mol , columns 4-6). They are classified into three groups: (1) substitutions with at least a neutral effect on binding (affinity less than 0.5 kcal/mol, column 4), (2) substitutions that have a neutral/stabilizing effect on binding (affinity less than -0 .5 kcal/mol, column 5), and (3) the top 3 predicted sites with the most stabilizing effect on affinity. Kabat numbering is used for all balances (column 6). 138Glu/L93Ser and 131Leu/L96Gly are included as possible contact residues since the distance is slightly larger than 4 Å (4.07 Å and 4.03 Å, respectively) but is fairly close to the rounded 4 Å.

Таблица 29Б
Остатки эпитопа TFPI и соответствующие остатки паратопа TFPI-23 Table 29B
TFPI epitope residues and corresponding TFPI-23 paratope residues Остаток эпитопа TFPI TFPI epitope residue Остаток паратопа TFPI-23Remnant of paratope TFPI-23 Остатки TFPI в пределах 4,0 Å от остатков на антителе TFPI-23TFPI residues within 4.0 Å of residues on the TFPI-23 antibody 102 Asp102 Asp H58 TyrH58 Tyr 104 Gly104 Gly H58 TyrH58 Tyr 105 Ile105 Ile H33 Ala, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 LeuH33 Ala, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu 106 Cys106 Cys H100 Leu, H100A SerH100 Leu, H100A Ser 107 Arg107Arg H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 LeuH96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu 108 Gly108 Gly H100 LeuH100 Leu 112 Arg112 Arg L29 Ala, L31 TyrL29 Ala, L31 Tyr 127 Tyr127 Tyr L31 TyrL31 Tyr 129 Gly129 Gly L31 TyrL31 Tyr 130 Cys130 Cys L91 Tyr, L95B GlyL91 Tyr, L95B Gly 131 Leu131 Leu H47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C SerH47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser 132 Gly132 Gly H58 Tyr, L95A SerH58 Tyr, L95A Ser 134 Met134 Met L95A SerL95A Ser 138 Glu138Glu L29 AlaL29 Ala Пары остатков, связанных водородными связямиPairs of hydrogen bonded residues 102 Asp102 Asp H58 TyrH58 Tyr 107 Arg107Arg H100 LeuH100 Leu 107 Arg 107Arg H96 GlyH96 Gly 107 Arg107Arg H99 SerH99 Ser 107 Arg107Arg H97 AlaH97 Ala 107 Arg107Arg H98 ThrH98 Thr 112 Arg112 Arg L29 AlaL29 Ala 127 Tyr127 Tyr L31 TyrL31 Tyr 131 Leu131 Leu L95B GlyL95B Gly ненулевое изменение в скрытой области поверхности из-за взаимодействия с когнатным антигеном/антителом
Применяется пороговое значение (BSA 20 Å2 или больше, или участие в электростатическом взаимодействии) non-zero change in a hidden surface region due to interaction with a cognate antigen/antibody
Threshold applied (BSA 20 Å 2 or greater, or involved in electrostatic interaction) 102 Asp102 Asp H58 TyrH58 Tyr 105 Ile105 Ile H33 Ala, H58 Tyr, H95 Leu H33 Ala, H58 Tyr, H95 Leu 106 Cys106 Cys H95 Leu, H100 Leu, H100A Ser, L91 TyrH95 Leu, H100 Leu, H100A Ser, L91 Tyr 107 Arg107Arg H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 LeuH96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu 108 Gly108 Gly H100 LeuH100 Leu 112 Arg112 Arg L29 Ala, L31 TyrL29 Ala, L31 Tyr 127 Tyr127 Tyr L31 Tyr, L95B GlyL31 Tyr, L95B Gly 129 Gly129 Gly H100A Ser, L31 Tyr, L91 TyrH100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr 130 Cys130 Cys H95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr, L95B GlyH95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr, L95B Gly 131 Leu131 Leu H58 Tyr, H95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B GlyH58 Tyr, H95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly 132 Gly132 Gly H58 Tyr, L95A Ser H58 Tyr, L95A Ser 134 Met134 Met L95A SerL95A Ser 138 Glu138Glu L29 AlaL29 Ala

Таблица 29В
Остатки эпитопа TFPI и соответствующие остатки паратопа TFPI-23, определенные посредством BSA (не применяется пороговое значение или применяется минимальная BSA) Table 29B
TFPI epitope residues and corresponding TFPI-23 paratope residues determined by BSA (no threshold applied or minimum BSA applied) ненулевое изменение в скрытой области поверхности из-за взаимодействия с когнатным антигеном/антителомnon-zero change in a hidden surface region due to interaction with a cognate antigen/antibody Остаток эпитопа TFPI TFPI epitope residue Остаток паратопа TFPI-23Remnant of paratope TFPI-23 102 Asp102 Asp H56 Ser, H58 TyrH56 Ser, H58 Tyr 104 Gly104 Gly H58 TyrH58 Tyr 105 Ile105 Ile H33 Ala, H34 Met, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu H33 Ala, H34 Met, H50 Ala, H51 Ile, H52 Ser, H56 Ser, H58 Tyr, H95 Leu 106 Cys106 Cys H95 Leu, H100 Leu, H100A Ser, L91 TyrH95 Leu, H100 Leu, H100A Ser, L91 Tyr 107 Arg107Arg H96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 LeuH96 Gly, H97 Ala, H98 Thr, H99 Ser, H100 Leu 108 Gly108 Gly H100 LeuH100 Leu 112 Arg112 Arg L29 Ala, L31 Tyr, L93 SerL29 Ala, L31 Tyr, L93 Ser 127 Tyr127 Tyr L31 Tyr, L95B GlyL31 Tyr, L95B Gly 129 Gly129 Gly H100A Ser, L31 Tyr, L91 TyrH100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr 130 Cys130 Cys H95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr, L95B GlyH95 Leu, H100A Ser, L31 Tyr, L91 Tyr, L95B Gly 131 Leu131 Leu H47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser, L96 GlyH47 Trp, H50 Ala, H58 Tyr, H95 Leu, L31 Tyr, L91 Tyr, L95A Ser, L95B Gly, L95C Ser, L96 Gly 132 Gly132 Gly H58 Tyr, L95A Ser H58 Tyr, L95A Ser 133 Asn133 Asn L95A SerL95A Ser 134 Met134 Met L93 Ser, L94 Ser, L95A SerL93 Ser, L94 Ser, L95A Ser 138 Glu138Glu L28 Gly, L29 Ala, L93 SerL28 Gly, L29 Ala, L93 Ser

Пример 11. Протромбиновое время с разведением (dPT)Example 11: Diluted Prothrombin Time (dPT)

Способность антител против TFPI ингибировать эндогенный TFPI в человеческой плазме, дефицитной по FVIII (гемофилия А), исследовали с использованием анализа протромбинового времени (РТ) с разведением. РТ с разведением представляет собой модифицированный анализ РТ с использованием разведенного тканевого фактора (инновина) для продления времени свертывания крови.The ability of anti-TFPI antibodies to inhibit endogenous TFPI in FVIII-deficient human plasma (hemophilia A) was examined using a dilution prothrombin time (PT) assay. Dilution RT is a modified RT assay using diluted tissue factor (Innovin) to prolong clotting time.

Для анализа dPT в человеческой плазме, дефицитной по FVIII (George King Biomedical), реактив Innovin® разводили 1:3000 в буфере для разведения (50 мМ имидазол, 0,1 М хлорид натрия, 1 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин), 8,34 мМ хлорида кальция, рН 7,4) и предварительно инкубировали при 37°С. Плазму размораживали в водной бане при 37°С в течение 5 минут немедленно перед анализом. Разведения антител против TFPI готовили в PBS, добавляли в плазму, и плазму инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре. После этой инкубации 50 мкл плазмы инкубировали в течение 1 минуты при 37°С, и немедленно инициировали реакцию свертывания посредством добавления 50 мкл разведения 1:3000 реактива Innovin®, нагретого до 37°С. Время до свертывания определяли при 37°С с использованием анализатора свертывания STart® 4. Точки данных получали в двойной повторности, вводили в Microsoft Excel, и 50%-ную эффективную концентрацию (ЕС50) оценивали с использованием GraphPad Prism®. Результаты показаны в Таблице 30.For the dPT assay in FVIII-deficient human plasma (George King Biomedical), Innovin® reagent was diluted 1:3000 in dilution buffer (50 mM imidazole, 0.1 M sodium chloride, 1 mg/ml BSA), 8.34 mM calcium chloride, pH 7.4) and pre-incubated at 37°C. Plasma was thawed in a water bath at 37°C for 5 minutes immediately before analysis. Dilutions of anti-TFPI antibodies were prepared in PBS, added to plasma, and plasma incubated for 20 minutes at room temperature. After this incubation, 50 μl of plasma was incubated for 1 minute at 37°C, and the clotting reaction was immediately initiated by adding 50 μl of a 1:3000 dilution of Innovin® reagent warmed to 37°C. Time to clotting was determined at 37°C using a STart ® 4 clotting analyzer. Data points were obtained in duplicate, entered into Microsoft Excel, and the 50% effective concentration (EC50) was estimated using GraphPad Prism ® . The results are shown in Table 30.

TFPI осуществляет понижающую регуляцию внешнего пути свертывания крови FVIIa/TF/FXa, уменьшая образование FXa и, в конечном итоге, тромбина. dPT измеряет эффекты на внешний путь свертывания крови. Данные показывают то, что добавление антител против TFPI к плазме страдающего от гемофилии А дозозависимо сокращало время свертывания. Контрольный IgG в концентрации 300 нМ не имел влияния на время свертывания.TFPI down-regulates the extrinsic coagulation pathway FVIIa/TF/FXa, reducing the formation of FXa and ultimately thrombin. dPT measures effects on the extrinsic coagulation pathway. The data show that adding anti-TFPI antibodies to the plasma of a hemophilia A patient dose-dependently reduced clotting time. Control IgG at a concentration of 300 nM had no effect on clotting time.

Таблица 30Table 30 Антитело
TFPI-23Antibody
TFPI-23 Антитело
TFPI-106Antibody
TFPI-106 Антитело
TFPI-24Antibody
TFPI-24 Антитело
TFPI-118Antibody
TFPI-118 Антитело
против
TFPI 4F36Antibody
against
TFPI 4F36 Антитело
против
TFPI h4D8Antibody
against
TFPI h4D8 EC50(нM)EC50(nM) 0,980.98 1,241.24 0,570.57 1,161.16 0,440.44 0,470.47

Пример 12. Тромбоэластография (TEG)Example 12 Thromboelastography (TEG)

Тромбоэластография (TEG) представляет собой глобальный гемостатический анализ, в котором измеряется кинетика образования сгустков крови в цельной крови. Цельную кровь выделяли у здоровых человеческих доноров, отбирая в пластмассовые пробирки для сбора крови, содержащие 3,2% цитрата натрия, и первую пробирку для отбора крови отбрасывали для минимизации введения активаторов свертывания, таких как тканевой фактор. Цельную кровь с цитратом обрабатывали в течение одного часа контрольным мышиным антителом против человеческого IgG2 (100 мкг/мл) или ингибирующим антителом против FVIII (GM1805 (Green Mountain), 100 мкг/мл) для ингибирования эндогенного FVIII, индуцируя гемофилия А-подобный фенотип. Цельную кровь (320 мкл) с дозированными антителами против TFPI или контрольным антителом IgG1 добавляли в реакционную чашку TEG®, содержащую 20 мкл 0,2 М хлорида кальция и 20 мкл липидированного тканевого фактора (Innovin®), разведенного в 20 мМ HEPES, 150 мМ хлориде натрия, рН 7,4, что приводило к конечному разведению липидированного тканевого фактора 1:200000 в каждой реакции. Реакции проводили в двойной повторности и немедленно начинали при добавлении цельной крови в чашку TEG. Анализ проводили на анализаторах TEG® 5000 Hemostasis с использованием программы TEG® согласно инструкциям изготовителя после калибровки с использованием контролей Level I и Level II (Haemonetics). Реакции проводили при 37°С в течение 60 минут. См. Таблицу 31.Thromboelastography (TEG) is a global hemostatic assay that measures the kinetics of blood clot formation in whole blood. Whole blood was isolated from healthy human donors into plastic collection tubes containing 3.2% sodium citrate, and the first collection tube was discarded to minimize the introduction of coagulation activators such as tissue factor. Citrated whole blood was treated for one hour with a control mouse anti-human IgG2 antibody (100 μg/ml) or an inhibitory anti-FVIII antibody (GM1805 (Green Mountain), 100 μg/ml) to inhibit endogenous FVIII, inducing a hemophilia A-like phenotype. Whole blood (320 μl) dosed with anti-TFPI antibodies or control IgG1 antibody was added to a TEG ® reaction dish containing 20 μl 0.2 M calcium chloride and 20 μl lipidated tissue factor (Innovin ® ) diluted in 20 mM HEPES, 150 mM sodium chloride, pH 7.4, resulting in a final dilution of lipidated tissue factor of 1:200,000 in each reaction. Reactions were performed in duplicate and started immediately upon addition of whole blood to the TEG plate. Analysis was performed on TEG ® 5000 Hemostasis analyzers using TEG ® software according to the manufacturer's instructions after calibration using Level I and Level II controls (Haemonetics). Reactions were carried out at 37°C for 60 minutes. See Table 31.

Таблица 31
Параметры TEG в крови с гемофилией А (НА), индуцированной антителом, обработанной антителами против TFPI Table 31
TEG parameters in antibody-induced hemophilia A (HA) blood treated with anti-TFPI antibodies Параметры TEG TEG parameters ГруппаGroup Значение RR value
минmin Значение K минK min value Угол альфаAlpha angle
градусыdegrees MAM.A.
ммmm Кровь гемофилии АHemophilia A blood 41,45 ± 2,3341.45 ± 2.33 6 ± 0,76 ± 0.7 33,75 ±1,633.75 ±1.6 59,8 ± 4,6759.8 ± 4.67 Антитело против TFPI 4F36 (100 нM)Anti-TFPI antibody 4F36 (100 nM) 23 ± 0,1423 ± 0.14 4,65 ± 0,214.65 ± 0.21 41,4 ± 1,841.4 ± 1.8 60,4 ± 0,1460.4 ± 0.14 Антитело против TFPI 4F36 (300 нM)Anti-TFPI antibody 4F36 (300 nM) 24,05 ± 0,0724.05 ± 0.07 7,0 ± 0,427.0 ± 0.42 28,35 ± 2,928.35 ± 2.9 56,45 ± 0,4956.45 ± 0.49 Антитело против TFPI 2A8-200 (100нM)Anti-TFPI antibody 2A8-200 (100nM) 26,85 ± 0,9226.85 ± 0.92 8,3 ± 0,148.3 ± 0.14 24,5 ± 0,1424.5 ± 0.14 50,75 ± 0,4950.75 ± 0.49 Антитело против TFPI 2A8-200 (300 нM)Anti-TFPI antibody 2A8-200 (300 nM) 20,4 ± 0,8420.4 ± 0.84 6,25 ± 0,776.25 ± 0.77 31,7 ± 5,0931.7 ± 5.09 54,05 ± 1,954.05 ± 1.9 Антитело TFPI-106 (100 нM)Antibody TFPI-106 (100 nM) 25,25 ± 0,9225.25 ± 0.92 5,35 ± 0,075.35 ± 0.07 38,3 ± 1,238.3 ± 1.2 67,6 ± 0,9867.6 ± 0.98 Антитело TFPI-106 (300 нM)Antibody TFPI-106 (300 nM) 17,85 ± 0,0717.85 ± 0.07 4,65 ± 0,214.65 ± 0.21 40,85 ± 1,240.85 ± 1.2 59,15 ± 1,3459.15 ± 1.34 Нормальная кровьNormal blood 10 ± 0,2810 ± 0.28 2,22.2 60,2 ± 0,5660.2 ± 0.56 62,8 ± 1,9862.8 ± 1.98

В Таблице 31 показано то, что обработка цельной крови антителом против FVIII значительно пролонгировала значение TEG-R до 41,5 минут. В присутствии цельной крови антитело TFPI 106 демонстрировало благоприятный профиль относительно 2А8-200 и 4F36. Добавление TFPI-106, 2А8-200 или 4F36 (300 нМ) приводило к сокращению значения TEG-R до 17,85 минут, 20,4 минут и 24,05 минут соответственно. Антитело TFPI 106 стимулировало свертывание в гемофиличной крови, что демонстрируется уменьшением значения TEG-R и наблюдаемым увеличением угла TEG-альфа.Table 31 shows that treatment of whole blood with anti-FVIII antibody significantly prolonged the TEG-R value to 41.5 minutes. In the presence of whole blood, TFPI 106 showed a favorable profile relative to 2A8-200 and 4F36. Addition of TFPI-106, 2A8-200, or 4F36 (300 nM) reduced the TEG-R value to 17.85 minutes, 20.4 minutes, and 24.05 minutes, respectively. TFPI 106 antibody stimulated coagulation in hemophilic blood, as demonstrated by a decrease in TEG-R value and an observed increase in TEG-alpha angle.

Пример 13. Нейтрализация TFPI и образование тромбинаExample 13 Neutralization of TFPI and Thrombin Generation

Нейтрализацию TFPI антителами против TFPI измеряли с использованием двух хромогенных анализов: прямого анализа активности Фактора Xa и двухэтапного анализа FVIIa/TF/FXa, основанного на ингибировании TFPI образования FXa посредством TF-FVIIa. В первом анализе TFPI-106, TFPI-118, hz4D8 и два контрольных антитела - 4F36 или 2А8-200 - предварительно инкубировали при разных концентрациях (0-500 нМ) с фиксированной концентрацией человеческого рекомбинантного TFPI K1K2 и FXa для обеспечения образования комплекса. Активность FXa оценивали с использованием хромогенного субстрата FXa. Добавление антител против TFPI по изобретению вызывало дозозависимое увеличение активности FXa в этом анализе (см. Таблицу 32, анализ ингибирования Ха, значения ЕС50).Neutralization of TFPI by anti-TFPI antibodies was measured using two chromogenic assays: a direct Factor Xa activity assay and a two-step FVIIa/TF/FXa assay based on TFPI inhibition of FXa formation by TF-FVIIa. In the first assay, TFPI-106, TFPI-118, hz4D8 and two control antibodies - 4F36 or 2A8-200 - were pre-incubated at different concentrations (0-500 nM) with a fixed concentration of human recombinant TFPI K1K2 and FXa to ensure complex formation. FXa activity was assessed using a chromogenic FXa substrate. The addition of anti-TFPI antibodies of the invention caused a dose-dependent increase in FXa activity in this assay (see Table 32, Xa inhibition assay, EC 50 values).

Двумя преобладающими формами TFPI in vivo являются TFPI-альфа (K1K2K3) и TFPI-бета (K1K2). Способность антител против TFPI ингибировать рекомбинантный TFPI K1K2 или TFPI K1K2K3 оценивали в двухэтапном анализе FVIIa/TF/FXa. В этом анализе измеряются объединенные эффекты нейтрализации ингибирования TFPI и на FXa, и на FVIIa/TF/FXa. Антитела в возрастающих концентрациях (0-500 нМ) инкубировали с TFPI, добавляли в среду для анализа с FVIIa/TF/FX, и активность FXa измеряли с использованием хромогенного субстрата FXa. Антитела против TFPI по изобретению нейтрализовали ингибирование TFPI K1K2 опосредованной FVIIa/TF активации FX (см. Таблицу 32, значения ЕС50 FVIIa/TF/FXa). Типичные антитела по изобретению также были эффективными в ингибировании TFPI K1K2K3 (ЕС50 для TFPI-106 составляет 8,47 нМ для нейтрализации ингибирования FVIIa/TF/FXa посредством TFPI K1K2K3). Эти данные демонстрируют ингибирование полноразмерного и усеченного TFPI.The two predominant forms of TFPI in vivo are TFPI alpha (K1K2K3) and TFPI beta (K1K2). The ability of anti-TFPI antibodies to inhibit recombinant TFPI K1K2 or TFPI K1K2K3 was assessed in a two-step FVIIa/TF/FXa assay. This assay measures the combined effects of neutralizing TFPI inhibition on both FXa and FVIIa/TF/FXa. Antibodies at increasing concentrations (0-500 nM) were incubated with TFPI, added to FVIIa/TF/FX assay media, and FXa activity was measured using FXa chromogenic substrate. Anti-TFPI antibodies of the invention neutralized TFPI K1K2 inhibition of FVIIa/TF-mediated FX activation (see Table 32, FVIIa/TF/FXa EC 50 values). Representative antibodies of the invention were also effective in inhibiting TFPI K1K2K3 (EC 50 for TFPI-106 is 8.47 nM to neutralize inhibition of FVIIa/TF/FXa by TFPI K1K2K3). These data demonstrate inhibition of full-length and truncated TFPI.

Клиническая тяжесть гемофилии относится к остаточному уровню активности фактора свертывания. Активность фактора меньше 1% ассоциирована с тяжелым фенотипом, умеренная гемофилия ассоциирована с активностью фактора 2-5%, и легкая - с активностью фактора больше 5% - меньше 40%. Дефекты во внутреннем пути свертывания крови при гемофилии приводят к неадекватному образованию тромбина. Анализ образования тромбина (TGA) использовали для проверки ингибирования эндогенного TFPI в гемофилической плазме, обедненной тромбоцитами. В анализе TGA измеряется исходная фаза, фаза активации и фаза инактивации образования тромбина. Способности антител против TFPI восстанавливать образование тромбина в гемофилической плазме, обедненной тромбоцитами, тестировали с использованием калиброванного автоматического анализа образования тромбина (САТ). TFPI-106,
TFPI-118, hz4D8 и два контрольных антитела, представляющих собой 4F36 или 2A8-200 (0-500 нМ), инкубировали в гемофилической плазме для нейтрализации TFPI до добавления в среду для анализа. По сравнению с нормальной человеческой объединенной плазмой, образование тромбина заметно уменьшается в человеческой гемофилической плазме. При введении в плазму гемофилии А нормального контроля FACT, который представляет собой стандартизированный в концентрации 1U/мл FVIII, наблюдали дозозависимый ответ. Аналогичным образом, добавление FVIII с делецией В-домена в концентрации 200 нг/мл (1U/мл) восстанавливало образование тромбина до 100 нМ. На протяжении 60-минутного хода анализа в гемофилической плазме наблюдали минимальное образование тромбина. Инкубация плазмы с антителами по изобретению приводила к дозозависимому увеличению пика тромбина, эндогенного тромбинового потенциала и индекса скорости. Контрольные антитела, представляющие собой 2А8-200 и 4F36, также анализировали для сравнения (Таблица 32, значения ЕС50 скорости TGA).The clinical severity of hemophilia refers to the residual level of clotting factor activity. Factor activity of less than 1% is associated with a severe phenotype, moderate hemophilia is associated with factor activity of 2-5%, and mild hemophilia with factor activity of more than 5% is less than 40%. Defects in the intrinsic coagulation pathway in hemophilia lead to inadequate thrombin generation. Thrombin generation assay (TGA) was used to test the inhibition of endogenous TFPI in platelet-depleted hemophilic plasma. The TGA assay measures the initial phase, activation phase, and inactivation phase of thrombin generation. The ability of anti-TFPI antibodies to restore thrombin generation in platelet-depleted hemophilic plasma was tested using a calibrated automated thrombin generation assay (ATT). TFPI-106
TFPI-118, hz4D8 and two control antibodies, 4F36 or 2A8-200 (0-500 nM), were incubated in hemophilia plasma to neutralize TFPI before adding to the assay medium. Compared to normal human pooled plasma, thrombin generation is markedly reduced in human hemophilia plasma. When hemophilia A normal control FACT, which is FVIII standardized at a concentration of 1U/ml, was administered into hemophilia A plasma, a dose-dependent response was observed. Similarly, addition of B-domain deleted FVIII at a concentration of 200 ng/ml (1U/ml) restored thrombin generation to 100 nM. During the 60-minute course of the analysis, minimal thrombin formation was observed in hemophilic plasma. Incubation of plasma with antibodies according to the invention resulted in a dose-dependent increase in thrombin peak, endogenous thrombin potential and rate index. Control antibodies, 2A8-200 and 4F36, were also analyzed for comparison (Table 32, TGA rate EC 50 values).

Пример 14. Эффективность Example 14: Efficiency in vivoin vivo в мышиных моделях гемофилии in mouse models of hemophilia

Эффективность некоторых антител против TFPI в качестве прокоагулянтов тестировали с использованием анализа острого перерезания хвоста у гемофилических мышей. В этом анализе ампутировали дистальную часть хвоста, что приводит к существенной потере крови, которая может быть уменьшена при введении гемостатического агента до или вскоре после осуществления перерезания. Гемофилические мыши получали одну внутривенную (в.в.) дозу антител против TFPI (6 мг/кг) через хвостовую вену в объеме 4 мл/кг, неспецифичный контрольный IgG (6 мг/кг) или носитель - физиологический раствор. В разное время после дозирования эффект антител на кровотечение оценивали следующим образом.The effectiveness of several anti-TFPI antibodies as procoagulants was tested using an acute tail-cut assay in hemophilic mice. In this assay, the distal portion of the tail is amputated, resulting in significant blood loss, which can be reduced by administering a hemostatic agent before or shortly after cutting. Hemophilic mice received a single intravenous (i.v.) dose of anti-TFPI antibody (6 mg/kg) via the tail vein in a volume of 4 ml/kg, a nonspecific control IgG (6 mg/kg), or saline vehicle. At various times after dosing, the effect of antibodies on bleeding was assessed as follows.

Мышей внутрибрюшинно анестезировали смесью кетамина/ксилазина. Хвосты погружали в 50 мл предварительно нагретого фосфатно-солевого буферного раствора (PBS) при 37°С на 2 минуты. Осуществляли отрезание 3 мм хвоста, и кровь собирали в PBS в течение 10-минутного периода. Затем количественно определяли объем потери крови посредством измерения содержания гемоглобина в PBS с использованием следующей методики. Пробирки центрифугировали для сбора эритроцитов, ресуспендировали в 5 мл лизирующего буфера (8,3 г/л хлорида аммония, 1,0 г/л бикарбоната калия и 0,037 г/л EDTA), и измеряли поглощение образцов при 575 нМ посредством спектрофотометра. Значения поглощения пересчитывали в общую кровопотерю (мкл) с использованием стандартной кривой. Статистическую значимость различия между средними оценивали посредством дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим критерием множественных сравнений Даннета с использованием программы GraphPad®Prism. Результаты выражены как среднее плюс/минус стандартная ошибка среднего (SEM). В графических материалах, описанных ниже, статистическая значимость определяется как значение Р меньше 0,05 и указывается звездочкой над данными.Mice were anesthetized intraperitoneally with a ketamine/xylazine mixture. The tails were immersed in 50 ml of prewarmed phosphate-buffered saline (PBS) at 37°C for 2 minutes. A 3 mm tail cut was performed and blood was collected in PBS over a 10 minute period. The amount of blood loss was then quantified by measuring the hemoglobin content in PBS using the following procedure. The tubes were centrifuged to collect red blood cells, resuspended in 5 ml of lysis buffer (8.3 g/L ammonium chloride, 1.0 g/L potassium bicarbonate and 0.037 g/L EDTA), and the absorbance of the samples was measured at 575 nM using a spectrophotometer. Absorbance values were converted to total blood loss (μl) using a standard curve. The statistical significance of differences between means was assessed by analysis of variance (ANOVA) followed by Dunnett's multiple comparison test using GraphPad ® Prism. Results are expressed as mean plus/minus standard error of the mean (SEM). In the graphics described below, statistical significance is defined as a P value less than 0.05 and is indicated by an asterisk above the data.

На Фиг. 3А показан эффект на кровопотерю у мышей с гемофилией А (обозначены FVIII -/-) после перерезания хвоста дозирования антитела 2А8-200 в разное время перед перерезанием хвоста по сравнению с контролем в виде носителя (физиологичекий раствор). На Фиг. 3Б показан эффект на кровопотерю у мышей с гемофилией А (обозначены FVIII -/-) после перерезания хвоста дозирования антитела 2А8 в разное время перед перерезанием хвоста по сравнению с контролем в виде носителя (физиологичекий раствор) и неспецифического человеческого IgG1 (обозначен hIgG1). На Фиг. 3Б также показан эффект на кровопотерю у нормальных мышей (обозначены FVIII +/+) после перерезания хвоста дозирования антитела 2А8 в два разных момента времени перед перерезанием хвоста. На Фиг. 3В показан эффект на кровопотерю у мышей с гемофилией А после перерезания хвоста дозирования антител 4D8, 21, 23 и 24 в разное время перед перерезанием хвоста по сравнению с контролем в виде носителя (физиологичекий раствор). На Фиг. 3Г показан эффект на кровопотерю у мышей с гемофилией А после перерезания хвоста дозирования антитела 106 в разное время перед перерезанием хвоста по сравнению с контролем в виде носителя (физиологичекий раствор). На Фиг. 3Д показан эффект на кровопотерю у мышей с гемофилией А после перерезания хвоста дозирования антитела 118 в разное время перед перерезанием хвоста по сравнению с контролем в виде носителя (физиологичекий раствор). На Фиг. 4 показан эффект на кровопотерю у мышей с гемофилией В после перерезания хвоста дозирования антитела 106 в разное время перед перерезанием хвоста по сравнению с контролем в виде носителя (физиологичекий раствор).In FIG. 3A shows the effect on blood loss in hemophilia A mice (designated FVIII -/-) after tail cutting of dosing with antibody 2A8-200 at different times before tail cutting compared to vehicle control (saline). In FIG. Figure 3B shows the effect on blood loss in hemophilia A mice (designated FVIII -/- ) after tail cutting of dosing with antibody 2A8 at different times before tail cutting compared to vehicle (saline) and nonspecific human IgG1 controls (designated hIgG 1 ). In FIG. Figure 3B also shows the effect on blood loss in normal mice (designated FVIII +/+) after tail cutting of dosing with 2A8 antibody at two different time points before tail cutting. In FIG. 3B shows the effect on blood loss in hemophilia A tail-cut mice of dosing with antibodies 4D8, 21, 23 and 24 at different times before tail-cut, compared to vehicle controls (saline). In FIG. Figure 3D shows the effect on blood loss in hemophilia A tail-cut mice of dosing with antibody 106 at different times before tail-cut compared to vehicle controls (saline). In FIG. Figure 3D shows the effect on blood loss in hemophilia A tail-cut mice of dosing with antibody 118 at different times before tail-cut compared to vehicle controls (saline). In FIG. Figure 4 shows the effect on blood loss in hemophilia B mice after tail cutting of dosing with antibody 106 at different times before tail cutting compared to vehicle controls (saline).

Как показано на Фиг. 3Г и Фиг. 4, введение 6 мг/кг антитела 106 против TFPI мышам с гемофилией А или гемофилией В уменьшало кровопотерю в модели острого травматического повреждения при введении антител в разное время до повреждения хвоста в виде перерезания. У мышей с гемофилией А гемостатический эффект сохранялся в течение по меньшей мере 189 часов после введения, хотя к 240 часам после введения данный эффект возвращался к контрольным уровням. У мышей с гемофилией В данный эффект сохранялся в течение по меньшей мере 72 часов после введения и возвращался к исходному уровню к 192 часам после введения.As shown in FIG. 3G and Fig. 4, administration of 6 mg/kg anti-TFPI antibody 106 to mice with hemophilia A or hemophilia B reduced blood loss in a model of acute traumatic injury when the antibodies were administered at different times before tail cutting injury. In mice with hemophilia A, the hemostatic effect persisted for at least 189 hours after administration, although the effect returned to control levels by 240 hours after administration. In hemophilia B mice, this effect persisted for at least 72 hours after administration and returned to baseline by 192 hours after administration.

Описанные выше данные и результаты свидетельствуют о том, что протестированные антитела, включая антитело TFPI 106, могут профилактически вводиться субъектам с гемофилией А или гемофилией В для уменьшения кровотечения перед травматическим повреждением или другим типом эпизода кровотечения.The data and results described above suggest that the antibodies tested, including the TFPI 106 antibody, may be administered prophylactically to subjects with hemophilia A or hemophilia B to reduce bleeding prior to a traumatic injury or other type of bleeding episode.

Эффект антитела TFPI 106 в качестве гемостатического средства у мышей с гемофилией А также был протестирован для определения того, могло ли оно уменьшать кровотечение при введении вскоре после перерезания хвоста. Данные эксперименты проводили с использованием аналогичной методологии, что и эксперименты, тестирующие эффект антител при введении до перерезания хвоста, за исключением того, что немедленно после перерезания хвоста инфундировали в.в. дозу TFPI 106 (6 мг/кг) или рекомбинантного Фактора VIII (200 единиц/кг) через канюлю, вставленную в яремную вену, после чего отбирали кровь в течение 10 минут до количественного измерения кровопотери. Во второй серии экспериментов разные дозы TFPI 106 и Фактора VIII (200 Ед/кг) раздельно вводили мышам с гемофилией А через 2 минуты после обрезания хвоста, и затем отбирали кровь в течение 10 минут до количественного измерения кровопотери.The effect of the TFPI 106 antibody as a hemostatic agent in mice with hemophilia A was also tested to determine whether it could reduce bleeding when administered shortly after tail cutting. These experiments were performed using similar methodology as the experiments testing the effect of antibodies administered before tail cutting, except that immediately after tail cutting the i.v. dose of TFPI 106 (6 mg/kg) or recombinant Factor VIII (200 units/kg) through a cannula inserted into the jugular vein, and blood was collected for 10 minutes before quantifying blood loss. In a second series of experiments, different doses of TFPI 106 and Factor VIII (200 U/kg) were separately administered to hemophilia A mice 2 minutes after tail clipping, and then blood was collected for 10 minutes before blood loss was quantified.

На Фиг. 9А показано то, что 6 мг/мл антитела TFPI 106, введенного немедленно после перерезания хвоста, было эффективным в уменьшении кровопотери у мышей с гемофилией А по сравнению с контролем в виде носителя, хотя и не в такой же степени, что 200 Ед/кг Фактора VIII, введенного таким же способом. На Фиг. 9Б показано то, что антитело TFPI 106 дозозависимо уменьшает кровотечение у мышей с гемофилией А при введении через 2 минуты после повреждения посредством перерезания хвоста, и что наивысшая протестированная доза (6 мг/кг) TFPI 106 была приблизительно такой же эффективной, что и рекомбинантный Фактор VIII в дозе 200 Ед/кг, когда оба были введены через 2 мин после перерезания хвоста. Данные и результаты, описанные на этих Фигурах, свидетельствуют о том, что антитело TFPI 106 может быть эффективным в качестве лечения по требованию против кровотечения, которое уже началось у субъектов из-за травмы или некоторой другой причины.In FIG. Figure 9A shows that 6 mg/ml TFPI 106 antibody administered immediately after tail cutting was effective in reducing blood loss in hemophilia A mice compared to vehicle controls, although not to the same extent as 200 U/kg. Factor VIII, administered in the same way. In FIG. Figure 9B shows that TFPI 106 antibody dose-dependently reduced bleeding in hemophilia A mice when administered 2 minutes after tail-cut injury, and that the highest dose tested (6 mg/kg) of TFPI 106 was approximately as effective as recombinant Factor VIII at a dose of 200 U/kg when both were administered 2 min after tail cutting. The data and results described in these Figures indicate that the TFPI 106 antibody may be effective as an on-demand treatment against bleeding that has already begun in subjects due to injury or some other cause.

Пример 15. Фармакокинетика и метаболизм продуктаExample 15. Pharmacokinetics and metabolism of the product

Фармакокинетику (PK) и/или токсикокинетику (TK) TFPI-106 охарактеризовывали после внутривенного (в.в.) и/или подкожного (п.к.) дозирования у крыс Wistar Han, новозеландских белых кроликов и яванских макаков.The pharmacokinetics (PK) and/or toxicokinetics (TK) of TFPI-106 were characterized following intravenous (IV) and/or subcutaneous (SC) dosing in Wistar Han rats, New Zealand white rabbits and cynomolgus monkeys.

Антитело против TFPI в плазме кролика с цитратом натрия количественно определяли с использованием сэндвич-иммуноанализа на Gyrolab. Единицы ответа считывали посредством прибора Gyrolab при установке фотоумножителя (PMT) на 1%. Концентрации образца определяли посредством интерполяции из стандартной кривой, которая была аппроксимирована с использованием 5-параметрической аппроксимации логистической кривой с весом ответа 1/у2. Стандартные точки в буфере для анализа содержали 5% объединенной кроличьей плазмы с цитратом натрия, с содержанием, варьирующим от 0,78 нг/мл до 891 нг/мл, и интервал количественного измерения в 100% матриксе кроличьей плазмы составлял от 90 нг/мл до 5500 нг/мл. Пять образцов антитела против TFPI в концентрации 0,45; 8,0; 47,15; 153 и 275 нг/мл в буфере для анализа, содержащем 5% объединенной кроличьей плазмы с цитратом натрия, служили в качестве контроля качества.Anti-TFPI antibody in sodium citrate rabbit plasma was quantified using a Gyrolab sandwich immunoassay. Response units were read using the Gyrolab instrument with the photomultiplier tube (PMT) set at 1%. Sample concentrations were determined by interpolation from the standard curve, which was fitted using a 5-parameter logistic curve fit with a response weight of 1/y2. The standard points in the assay buffer contained 5% pooled rabbit plasma with sodium citrate, ranging from 0.78 ng/mL to 891 ng/mL, and the quantitation range in the 100% rabbit plasma matrix ranged from 90 ng/mL to 5500 ng/ml. Five samples of anti-TFPI antibody at a concentration of 0.45; 8.0; 47.15; 153 and 275 ng/ml in assay buffer containing 5% pooled rabbit plasma with sodium citrate served as quality control.

Антитело против TFPI в крысиной плазме с цитратом натрия также количественно определяли с использованием сэндвич-иммуноанализа на Gyrolab, как описано выше. Стандартные точки в буфере для анализа, содержащем 5% объединенной крысиной плазмы с цитратом натрия, имели содержание, варьирующее от 0,78 нг/мл до 891 нг/мл, и интервал количественного измерения в 100%-ном матриксе крысиной плазмы составлял от 90 нг/мл до 5500 нг/мл. Пять образцов антитела против TFPI в концентрации 0,45; 8,1; 47,15; 153 и 275 нг/мл в буфере для анализа, содержащем 5% объединенной крысиной плазмы с цитратом натрия, служили в качестве контроля качества.Anti-TFPI antibody in sodium citrate rat plasma was also quantified using a Gyrolab sandwich immunoassay as described above. Standard points in assay buffer containing 5% pooled rat plasma with sodium citrate had contents ranging from 0.78 ng/ml to 891 ng/ml, and the quantitation interval in 100% rat plasma matrix ranged from 90 ng /ml up to 5500 ng/ml. Five samples of anti-TFPI antibody at a concentration of 0.45; 8.1; 47.15; 153 and 275 ng/ml in assay buffer containing 5% pooled rat plasma with sodium citrate served as quality control.

Для количественного определения антитела против TFPI в плазме яванского макака использовали количественный анализ связывания лиганда общих человеческих Ig с использованием платформы для анализа Meso-Scale Discovery (MSD). Связавшееся антитело против TFPI выявляли с использованием рутениилированного мышиного антитела против Fc человеческого IgG с получением электрохемилюминисцентного сигнала в приборе MSD. Концентрации образца определяли посредством интерполяции из стандартной кривой, которая представляет собой аппроксимацию с использованием
5-параметрического логистического уровнения, формулой взвешивания для стандартной кривой является 1/у^2. Стандартные точки в 5%-ной плазме обезьяны варьировали от 0,999 нг/мл до 1156 нг/мл антитела против TFPI, и интервал количественного измерения в 100%-ной плазме составлял от 64,8 нг/мл до 7136 нг/мл. Пять образцов антитела против TFPI в концентрации 64,8, 117, 680, 3964 и 7136 нг/мл в 100%-ной плазме, разведенной до MRD 1:20 (3,24; 5,83; 34,0; 198 и 357 нг/мл в 5%-ной плазме соответственно), служили в качестве контроля качества.A quantitative total human Ig ligand binding assay using the Meso-Scale Discovery (MSD) assay platform was used to quantify anti-TFPI antibody in cynomolgus monkey plasma. Bound anti-TFPI antibody was detected using ruthenylated mouse anti-human IgG Fc antibody to produce an electrochemiluminescence signal in an MSD instrument. Sample concentrations were determined by interpolation from a standard curve, which is an approximation using
5-parameter logistic leveling, the weighting formula for the standard curve is 1/y^2. The standard points in 5% monkey plasma ranged from 0.999 ng/ml to 1156 ng/ml anti-TFPI antibody, and the quantitation interval in 100% plasma ranged from 64.8 ng/ml to 7136 ng/ml. Five samples of anti-TFPI antibody at concentrations of 64.8, 117, 680, 3964 and 7136 ng/ml in 100% plasma diluted to MRD 1:20 (3.24, 5.83, 34.0, 198 and 357 ng/ml in 5% plasma, respectively) served as quality control.

У новозеландских белых кроликов TFPI-106 демонстрировало более быстрый клиренс (CL) по сравнению с изотипическим контрольным моноклональным антителом (mAb). У яванских макаков TFPI-106 демонстрировало нелинейную кинетику PK при низких дозах, согласующуюся с опосредованным мишенью распределением лекарственного средства (TMDD), наблюдаемым для антител против TFPI. См. Таблицу 32.In New Zealand White rabbits, TFPI-106 exhibited faster clearance (CL) compared to the isotype control monoclonal antibody (mAb). In cynomolgus monkeys, TFPI-106 exhibited nonlinear PK kinetics at low doses, consistent with the target-mediated drug distribution (TMDD) observed for anti-TFPI antibodies. See Table 32.

В Таблице 32 обобщены определенные фармакокинетические свойства и фармакологические активности типичных антител против TFPI по изобретению (hum4D8, TFPI-106 и TFPI-108), а также двух контрольных антител (4F36 и 2A8-200).Table 32 summarizes the specific pharmacokinetic properties and pharmacological activities of representative anti-TFPI antibodies of the invention (hum4D8, TFPI-106 and TFPI-108), as well as two control antibodies (4F36 and 2A8-200).

Таблица 32
Фармакокинетические свойства и фармакологические активности типичных антител против TFPI Table 32
Pharmacokinetic properties and pharmacological activities of typical anti-TFPI antibodies °° hz4D8hz4D8 TFPI-106TFPI-106 TFPI-118TFPI-118 4F364F36 2A8-2002A8-200 ИсточникSource гибридомаhybridoma библиотека лямбдаlambda library библиотека лямбдаlambda library Контрольное AbControl Ab Контрольное AbControl Ab Каркасные области зародышевой линииGermline framework regions DP-54 и DPK9DP-54 and DPK9 DP-47/VH3 и DPL8/VL1 DP-47/VH3 and DPL8/VL1 DP-31/VH3 и DPL3/VL1 DP-31/VH3 and DPL3/VL1 НАON НАON Человеческий подкласс IgGHuman IgG subclass IgG1-3MIgG1-3M IgG4IgG4 Kd (нM) человеческого TFPI K1K2Kd (nM) of human TFPI K1K2 0,420.42 3,73.7 9,619.61 0,4930.493 0,3270.327 Kd (нM) TFPI K1K2 яванского макакаKd (nM) TFPI K1K2 cynomolgus monkey 0,0670.067 1,221.22 1,81.8 0,4250.425 0,6370.637 Kd (нM) кроличьего TFPI K1K2Kd (nM) rabbit TFPI K1K2 0,5020.502 4,254.25 5,795.79 1,811.81 0,1450.145 Kd (нM) мышиного TFPI K1K2Kd (nM) of mouse TFPI K1K2 Нет связыванияNo binding 0,5750.575 45,645.6 Нет связыванияNo binding 0,4550.455 Kd (нM) крысиного TFPI K1K2Kd (nM) of rat TFPI K1K2 Нет связыванияNo binding 1,571.57 3,653.65 Нет связыванияNo binding НАON ЭпитопEpitope K2K2 K2K2 K2K2 K2K2 K1K2K1K2 Определенная Biacore конкуренция с 4F36Certain Biacore competition with 4F36 ДаYes НетNo ДаYes НАON ДаYes Скрининг поли-реактивностиPoly-reactivity screening отрицательнаяnegative отри-цательнаяnegative отри-цательнаяnegative НОBUT ДаYes EC50 (нM) анализа ингибирования Ха EC 50 (nM) Xa inhibition assay 6,926.92 18,0818.08 20,820.8 6,576.57 2,422.42 EC50 (нM) FVIIa/TF/XaEC 50 (nM) FVIIa/TF/Xa 0,40.4 4,34.3 4,034.03 1,851.85 4,844.84 EC50 (нM) скорости TGAEC 50 (nM) TGA speed 3,93.9 3,073.07 7,727.72 1,71.7 °° EC50 (нM) PT с разведениемEC 50 (nM) PT with dilution 0,47 0.47 1,24 1.24 1,16 1.16 0,440.44 11 Мышиная НА при отрезании хвоста, IC50 Mouse ON when cutting off the tail, IC 50 НАON 2,42.4 1,11.1 НАON НТNT Мышиная НА при отрезании хвоста -0,5 ч
96 ч
196 чMouse NA when cutting off the tail -0.5 h
96 h
196 h НАON 55%
39%
~ 6%55%
39%
~6% 55%
39%
19%55%
39%
19% НАON 32%
32%°32%
32%° IHM кролика
Эффективность в 0,5 ч
Продолжитель-ность по aPTT/ PT с разведениемIHM rabbit
Efficiency in 0.5 h
Duration according to aPTT/PT with dilution 60%
>48 часов60%
> 48 hours 60%
>48 часов60%
> 48 hours 60%
> 48 часов60%
> 48 hours 60%
> 48 часов60%
> 48 hours 27%
>48 часов27%
> 48 hours Период полувыведения у кролика - t1/2 при 2 мг/кгHalf-life in rabbit - t1/2 at 2 mg/kg 14 часов14 hours 29 часов29 hours 15 часов15 hours 11 часов11 o'clock 12 часов 12 hours

Пример 16. Гемостатический эффект ингибирования антителом TFPI усиливает накопление тромбоцитов и образование фибрина Example 16 Hemostatic effect of TFPI antibody inhibition enhances platelet accumulation and fibrin formation in vivoin vivo в модели индуцированного лазером повреждения у гемофилических мышей in a laser-induced injury model in hemophilic mice

Как утверждалось в настоящем описании ранее, ингибитор пути тканевого фактора (TFPI) представляет собой ингибитор сериновых протеаз плазмы, который непосредственно связывается с комплексом тканевой фактор (TF)/Фактор VIIa/Фактор Xa и ингибирует его, а также модулирует инициацию свертывания крови, индуцированную TF. Блокирование TFPI может потенциально облегчать гемостаз, инициированный TF/FVIIa, компенсируя потерю фактора VIII (FVIII) или фактора IX при гемофилии А или В. Антитела по изобретению ингибируют TFPI с широкой видовой перекрестной реактивностью. Здесь оценивали гемостатический эффект TFPI-106 на образование тромбоцитарного сгустка и отложение фибрина in vivo с использованием прижизненной микроскопии (IVM) у мышей с гемофилией А и В.As previously stated herein, tissue factor pathway inhibitor (TFPI) is a plasma serine protease inhibitor that directly binds to and inhibits the tissue factor (TF)/Factor VIIa/Factor Xa complex and also modulates TF-induced initiation of coagulation. . Blocking TFPI may potentially alleviate TF/FVIIa-induced hemostasis by compensating for the loss of factor VIII (FVIII) or factor IX in hemophilia A or B. The antibodies of the invention inhibit TFPI with wide species cross-reactivity. Here, the hemostatic effect of TFPI-106 on platelet clot formation and fibrin deposition was assessed in vivo using intravital microscopy (IVM) in hemophilia A and B mice.

Материалы и методы. Антитело TFPI-106, рекомбинантный Фактор VIII и носитель (фосфатно-солевой буферный раствор) получали, как описано в настоящем описании выше. Антитело против CD42c, конъюгированное с Dylight-649 приобретали у Emfret Analytics (Германия). Антитело против фибрина клона 59D8 (Hui KY et al. (1983) Science 222(4628):1129-1132) метили Alexa Fluor 488 с использованием набора для мечения белка согласно инструкциям изготовителя (Life Technologies, Carlsbad, CA). Самцов мышей с гемофилией А (F8 KO), весящих в среднем от 30 до 35 граммов, приобретали из частной линии, поддерживаемой в Charles River laboratories (Wilmington, MA). Мышей акклиматизировали в течение по меньшей мере 3 суток до проведения экспериментальных процедур. Materials and methods. Antibody TFPI-106, recombinant Factor VIII and vehicle (phosphate-buffered saline) were prepared as described herein above. Anti-CD42c antibody conjugated to Dylight-649 was purchased from Emfret Analytics (Germany). Anti-fibrin antibody clone 59D8 (Hui KY et al. (1983) Science 222(4628):1129-1132) was labeled with Alexa Fluor 488 using a protein labeling kit according to the manufacturer's instructions (Life Technologies, Carlsbad, CA). Male hemophilia A (F8 KO) mice, weighing on average 30 to 35 grams, were purchased from a private line maintained at Charles River laboratories (Wilmington, MA). Mice were acclimated for at least 3 days before experimental procedures.

Самцам мышей с гемофилией А, гемофилией В или дикому типу C57BL/6J (WT) дозировали одну внутривенную дозу TFPI-106 (6 мг/кг), носитель, рекомбинантный человеческий FVIII (rFVIII, 200 IU (международная единица)/кг) или TFPI-106, меченное Alexa-488 (0,7 мг/кг). Микроциркуляцию в кремастере у анестезированных мышей наблюдали с использованием IVM. Накопление тромбоцитов и образование фибрина количественно определяли после повреждения стенки сосуда артерии кремастера посредством нагревания лазером. Тромбоциты визуализировали с использованием антитела против CD42c, конъюгированного с Dylight-649 (GP1bβ), и фибрин выявляли посредством антитела против фибрина клона 59D8, конъюгированного с Alexa-488.Male mice with hemophilia A, hemophilia B, or wild type C57BL/6J (WT) were dosed with one intravenous dose of TFPI-106 (6 mg/kg), vehicle, recombinant human FVIII (rFVIII, 200 IU/kg) or TFPI -106, labeled with Alexa-488 (0.7 mg/kg). Microcirculation in the cremaster of anesthetized mice was observed using IVM. Platelet accumulation and fibrin formation were quantified after vessel wall injury of the cremaster artery by laser heating. Platelets were visualized using anti-CD42c antibody conjugated to Dylight-649 (GP1bβ), and fibrin was detected using anti-fibrin clone 59D8 antibody conjugated to Alexa-488.

Более конкретно для подготовки мышей с гемофилией А для визуализации прижизненной микроскопией животных анестезировали смесью кетамина/ксилазина, доставленной внутрибрюшинно. Вводили канюлю в яремную вену, и в качестве поддерживающей анестезии использовали пентобарбитал натрия (5 мг/кг, внутривенно). Вводили канюлю в трахею для поддержания открытых дыхательных путей. Затем для визуализации микрососудов экспонировали мышцу кремастер. Животных поддерживали на теплом согревающем коврике, используя теплый буферизованный раствор, в котором инкубировалась экспонированная ткань кремастера на протяжении всего периода визуализации. Через канюлю, вставленную в яремную вену, осуществляли инфузию меченых антител против CD42c тромбоцитов, конъюгированных с Dylight 649 (GP1bβ), и антитела против фибрина, которое не имеет перекрестной реактивности с фибриногеном (антитело против фибрина клона 59D8, конъюгированное с Alexa Fluor 488). Сфокусированный пучок лазерного излучения (532 нанометра) инициировал повреждение микрососудов кремастера мыши. Каждая мышь получала 2 повреждения, индуцированных лазером. Первое повреждение делали у необработанной мыши для того, чтобы оно служило в качестве контроля. Второе повреждение делали у той же самой мыши, и немедленно вводили TFPI-106 (в дозе 6 мг/кг) внутривенно через канюлю, вставленную в яремную вену. При обоих повреждениях образование сгустка отслеживали из интенсивностей флуоресценции накопления тромбоцитов и отложения фибрина.More specifically, to prepare hemophilia A mice for intravital microscopy imaging, animals were anesthetized with a ketamine/xylazine mixture delivered intraperitoneally. A cannula was inserted into the jugular vein, and sodium pentobarbital (5 mg/kg, intravenous) was used as maintenance anesthesia. A cannula was inserted into the trachea to maintain an open airway. The cremaster muscle was then exposed to visualize the microvessels. Animals were maintained on a warm warming pad using a warm buffered solution in which exposed cremaster tissue was incubated throughout the imaging period. A labeled anti-platelet CD42c antibody conjugated to Dylight 649 (GP1bβ) and an anti-fibrin antibody that does not cross-react with fibrinogen (anti-fibrin antibody clone 59D8 conjugated to Alexa Fluor 488) were infused through a jugular vein cannula. A focused beam of laser radiation (532 nanometers) initiated damage to the microvessels of the mouse cremaster. Each mouse received 2 laser-induced lesions. The first lesion was made in an untreated mouse to serve as a control. A second lesion was made in the same mouse, and TFPI-106 (at a dose of 6 mg/kg) was immediately administered intravenously through a cannula inserted into the jugular vein. In both injuries, clot formation was monitored from the fluorescence intensities of platelet accumulation and fibrin deposition.

Точки данных (интенсивности флуоресценции) отбирали и анализировали с использованием программы SlideBook (версия 6.0). Медианные интенсивности флуоресценции откладывали на графике как функцию времени для каждого индивидуального сгустка, и соответствующую площадь под кривой измеряли с использованием программы GraphPad®Prism (версия номер 6.03). Статистическую значимость определяли с использованием критерия Манна-Уитни с использованием программы GraphPad®Prism (версия номер 6.03).Data points (fluorescence intensities) were selected and analyzed using SlideBook software (version 6.0). Median fluorescence intensities were plotted as a function of time for each individual clot, and the corresponding area under the curve was measured using GraphPad®Prism software (version number 6.03). Statistical significance was determined using the Mann-Whitney test using GraphPad®Prism (version number 6.03).

Результаты: TFPI выявляли у мышей WT в месте накопления тромбоцитов в пределах сгустка тромбоцитов и выстилки эндотелия с использованием TFPI-106, меченного Alexa-488 (Фиг. 5). Фиг. 5А содержит шесть верхних панелей (пронумерованных от 1 до 6), демонстрирующих выявление тромбоцитов с использованием антитела против CD42c, конъюгированного с Dylight 649, у мышей WT, которым был введен контрольный IgG, меченный с использованием Alexa 488, в 0 (панель 5А-1), 15 (Фиг. 5А-2), 30 (Фиг. 5А-3), 60 (Фиг. 5А-4), 90 (Фиг. 5А-5) и 120 (Фиг. 5А-6) секунд после повреждения, индуцированного лазером. Метка Alexa 488 не была выявлена в тромбоцитарном тромбе (выявлен с использованием антитела против CD42c, конъюгированного с Dylight 649) в месте повреждения. На Фиг. 5Б, содержащей шесть панелей (пронумерованных 1-6) вдоль нижней части этой Фиг., показано то, что TFPI-106, меченное Alexa-488, выявлялось, начиная примерно в 15 секунд (Фиг. 5Б-2) и увеличивая интенсивность флуоресценции в примерно 30 (Фиг. 5Б-3), 60 (Фиг. 5Б-4) и 90 (Фиг. 5Б-5) секунд, и затем поддерживая интенсивность примерно в 120 секунд (Фиг. 5Б-6) в тромбоцитарном тромбе вдоль эндотелия после повреждения, индуцированного лазером, у мышей WT, где тромбоциты были выявлены с использованием антитела против CD42c, меченного Dylight 649. Results: TFPI was detected in WT mice at the site of platelet accumulation within the platelet clot and endothelial lining using Alexa-488-labeled TFPI-106 (Figure 5). Fig. 5A contains six top panels (numbered 1 to 6) demonstrating platelet detection using anti-CD42c antibody conjugated to Dylight 649 in WT mice injected with control IgG labeled using Alexa 488 at 0 (panel 5A-1 ), 15 (Fig. 5A-2), 30 (Fig. 5A-3), 60 (Fig. 5A-4), 90 (Fig. 5A-5) and 120 (Fig. 5A-6) seconds after damage, laser induced. Alexa 488 tag was not detected in platelet thrombus (detected using anti-CD42c antibody conjugated to Dylight 649) at the site of injury. In FIG. 5B, containing six panels (numbered 1-6) along the bottom of this Figure, shows that Alexa-488-labeled TFPI-106 was detected starting at approximately 15 seconds (Figure 5B-2) and increasing in fluorescence intensity at approximately 30 (Fig. 5B-3), 60 (Fig. 5B-4) and 90 (Fig. 5B-5) seconds, and then maintaining an intensity of approximately 120 seconds (Fig. 5B-6) in the platelet thrombus along the endothelium after laser-induced injury in WT mice, where platelets were detected using Dylight 649-labeled anti-CD42c antibody.

TFPI-106 усиливало накопление тромбоцитов и образование фибрина у мышей с гемофилией А (F8 KO) по сравнению с мышами с гемофилией А, обработанными носителем, в 0,5 часов, и данный эффект сохранялся примерно в 168 часов. Более конкретно, у мышей F8 KO (с гемофилией А), обработанных TFPI-106, IVM показала повышенную зеленую флуоресценцию (антитело против фибрина клона 59D8, конъюгированное с Alexa 488) и красную флуоресценцию (антитело против CD42c, меченное Dylight 649 - GP1bβ, выявлющее тромбоциты) в месте повреждения примерно в 0,5 часов, которая сохранялась примерно в 168 часов, и картина флуоресценции была аналогичной картине флуоресценции, наблюдаемой у мышей WT, обработанных носителем. Однако такая флуоресценция не была выявлена у мышей с гемофилией А, обработанных носителем, где не наблюдали ни накопления тромбоцитов, ни образования фибрина.TFPI-106 increased platelet accumulation and fibrin formation in hemophilia A (F8 KO) mice compared with vehicle-treated hemophilia A mice at 0.5 hours, and this effect was maintained at approximately 168 hours. More specifically, in F8 KO (hemophilia A) mice treated with TFPI-106, the IVM showed increased green fluorescence (anti-fibrin antibody clone 59D8 conjugated to Alexa 488) and red fluorescence (anti-CD42c antibody labeled Dylight 649 - GP1bβ, detecting platelets) at the site of injury at approximately 0.5 hours, which persisted at approximately 168 hours, and the fluorescence pattern was similar to that observed in vehicle-treated WT mice. However, such fluorescence was not detected in vehicle-treated hemophilia A mice, where neither platelet accumulation nor fibrin formation was observed.

Мыши с гемофилией А демонстрировали увеличение накопления тромбоцитов (Фиг. 6А) и отложения фибрина (Фиг. 6Б) примерно в 0,5 часов после дозирования TFPI-106, аналогичное уровням, достигаемым посредством rFVIII (* - P меньше 0,005 указана на каждом графике). Гемостатический эффект сохранялся с TFPI-106 у мышей с гемофилией А в течение вплоть до 168 часов. Аналогичным образом, мыши с гемофилией В, обработанные TFPI-106, аналогично демонстрировали улучшенный гемостаз примерно в 30 минут после дозирования с увеличением накопления тромбоцитов и образования фибрина по сравнению с контролями, обработанными носителем. Ни TFPI-106, ни rFVIII, которые дозировали гемофилическим мышам, не достигали максимального уровня отложения фибрина, наблюдаемого у негемофилических мышей WT. Таким образом, эти данные показывают то, что после повреждения эндотелия лазером TFPI выявлялся в месте повреждения. Более важно то, что эти данные демонстрируют то, что введение TFPI-106 гемофилическим мышам приводит к значительному и стойкому улучшению гемостаза в модели повреждения лазером.Hemophilia A mice exhibited increases in platelet accumulation (Figure 6A) and fibrin deposition (Figure 6B) at approximately 0.5 hours after TFPI-106 dosing, similar to levels achieved by rFVIII (* - P less than 0.005 is indicated in each graph) . The hemostatic effect was maintained with TFPI-106 in hemophilia A mice for up to 168 hours. Likewise, hemophilia B mice treated with TFPI-106 similarly demonstrated improved hemostasis at approximately 30 minutes post-dosing with increased platelet accumulation and fibrin formation compared to vehicle-treated controls. Neither TFPI-106 nor rFVIII dosed into hemophilic mice achieved the maximum level of fibrin deposition observed in non-hemophilic WT mice. Thus, these data show that after laser damage to the endothelium, TFPI was detected at the site of injury. More importantly, these data demonstrate that administration of TFPI-106 to hemophilic mice results in significant and durable improvements in hemostasis in a laser injury model.

Пример 17. Эффект на образование тромбина ингибирования против TFPI в комбинации с FVIIa при гемофилии А и В в анализе TGAExample 17 Effect on Thrombin Generation of Anti-TFPI Inhibition in Combination with FVIIa in Hemophilia A and B in the TGA Assay

Способы: анализы образования тромбина (TGA)Methods: Thrombin Generation Assays (TGA)

Оценивали влияние антитела против TFPI, представляющего собой TFPI-106, на образование тромбина самого по себе и в комбинации с рекомбинантным FVIIa (rFVIIa) в гемофилических плазмах с помощью анализа образования тромбина (TGA). Цитратная, обедненная тромбоцитами при тяжелой гемофилии А (дефицитная по FVIII) плазма, плазма с ингибитором при тяжелой гемофилии А или при гемофилии В (дефицитная по FIX) от доноров с врожденной недостаточностью были приобретены у George King Biomedical (Overland Park, KS) и HRF (Raleigh, NC). Нормальная объединенная плазма (негемофилическая) была приобретена у George King Biomedical. Реактивы для образования тромбина; PPP-Reagent LOW (4 мкл фосфолипида и 1 пМ тканевой фактор - конечная концентрация в объеме реакционной среды); буфер FluCa (содержащий хлорид кальция и флуорогенный субстрат) и калибратор тромбина были приобретены у Diagnostica Stago (Parsippany, NJ). Анализы образования тромбина осуществляли с использованием калиброванной автоматической тромбограммы (CAT), включающей флуоресцентный планшет-ридер Fluoroskan Ascent (Thrombinoscope BV, Маастрихт, Нидерланды).The effect of the anti-TFPI antibody TFPI-106 on thrombin generation alone and in combination with recombinant FVIIa (rFVIIa) in hemophilic plasmas was assessed using a thrombin generation assay (TGA). Citrate platelet-depleted severe hemophilia A (FVIII-deficient) plasma, severe hemophilia A inhibitor plasma, or hemophilia B (FIX-deficient) plasma from donors with congenital deficiency were purchased from George King Biomedical (Overland Park, KS) and HRF (Raleigh, NC). Normal pooled plasma (nonhemophilic) was purchased from George King Biomedical. Reagents for thrombin formation; PPP-Reagent LOW (4 μl of phospholipid and 1 pM tissue factor - final concentration in the volume of the reaction medium); FluCa buffer (containing calcium chloride and fluorogenic substrate) and thrombin calibrator were purchased from Diagnostica Stago (Parsippany, NJ). Thrombin generation assays were performed using a calibrated automated thrombogram (CAT) incorporating a Fluoroskan Ascent fluorescence plate reader (Thrombinoscope BV, Maastricht, The Netherlands).

Рекомбинантный FVIIa (rFVIIa в 20 мМ HEPES, 150 мМ хлориде натрия, 1% бычьем сывороточном альбумине (BSA), pH 7,4) добавляли в 70 мкл плазмы при гемофилии А в концентрациях вплоть до 20 мкг/мл. Двадцать мкл PPP-Reagent LOW и 10 мкл антитела TFPI-106 добавляли в реакционные лунки в конечной концентрации 16 мкг/мл. Контрольные реакционные смеси, откалиброванные по эталону, включали 20 мкл калибратора, представляющего собой тромбин, и 70 мкл плазмы. Для тестирования концентрации 0 мкг/мл использовали носитель (фосфатно-солевой буферный раствор (PBS)). Десять мкл носителя добавляли в контрольные лунки с калибратором. Во втором наборе реакций rFVIIa (5 мкл) в буфере HEPES или буфер HEPES (5 мкл) добавляли в 70 мкл образцов гемофилической плазмы (гемофилия А, гемофилия А с ингибитором или гемофилия В) для конечной концентрации rFVIIa в плазме 2 мкг/мл. Двадцать мкл PPP-Reagent LOW и 5 мкл антитела TFPI-106 (разведенного в PBS) или PBS (5 мкл) добавляли в образцы гемофилической плазмы с дозированием rFVIIa (75 мкл) и в гемофилическую плазму, обработанную буфером HEPES (75 мкл), до конечных концентраций 16 мкг/мл. Кроме того, антитело TFPI-106 (в концентрации 16 мкг/мл) анализировали в негемофилической плазме, обработанной буфером HEPES (75 мкл). В анализ была включена контрольная необработанная негемофилическая плазма (80 мкл). Параллельно осуществляли реакции, откалиброванные по эталону (20 мкл калибратора, представляющего собой тромбин, с 80 мкл носителя с дозированной гемофилической или негемофилической плазмой или 80 мкл необработанной негемофилической плазмы). Все реакции проводили в двойной повторности. Образцы инкубировали при 37°С в течение 5 минут, и затем инициировали реакции добавлением 20 мкл FluCa в общем объеме реакции 120 мкл. Флуоресценцию реакций в плазме считывали при 37°С с 20-секундными интервалами на флуориметре Fluoroscan Ascent и сравнивали с реакциями эталонного калибратора, представляющего собой тромбина, для определения концентраций тромбина. Интенсивность флуоресцентного сигнала непрерывно отслеживали при 37°С с использованием CAT (компьютерная томография).Recombinant FVIIa (rFVIIa in 20 mM HEPES, 150 mM sodium chloride, 1% bovine serum albumin (BSA), pH 7.4) was added to 70 μl of hemophilia A plasma at concentrations up to 20 μg/ml. Twenty μl of PPP-Reagent LOW and 10 μl of TFPI-106 antibody were added to the reaction wells at a final concentration of 16 μg/ml. Control reaction mixtures, calibrated against a standard, included 20 μl of thrombin calibrator and 70 μl of plasma. Vehicle (phosphate-buffered saline (PBS)) was used to test a concentration of 0 μg/mL. Ten μL of vehicle was added to the control wells containing the calibrator. In the second set of reactions, rFVIIa (5 μl) in HEPES buffer or HEPES buffer (5 μl) was added to 70 μl of hemophilia plasma samples (hemophilia A, hemophilia A with inhibitor, or hemophilia B) for a final plasma rFVIIa concentration of 2 μg/ml. Twenty μL of PPP-Reagent LOW and 5 μL of TFPI-106 antibody (diluted in PBS) or PBS (5 μL) were added to rFVIIa-dosed hemophilus plasma samples (75 μL) and to HEPES buffer-treated hemophilia plasma samples (75 μL) to final concentrations 16 μg/ml. In addition, TFPI-106 antibody (at a concentration of 16 μg/ml) was analyzed in non-hemophilic plasma treated with HEPES buffer (75 μl). Control untreated non-hemophilic plasma (80 μl) was included in the analysis. In parallel, reactions calibrated against a standard (20 μl of thrombin calibrator with 80 μl of vehicle dosed with hemophilic or non-hemophilic plasma or 80 μl of untreated non-hemophilic plasma) were carried out. All reactions were carried out in duplicate. Samples were incubated at 37°C for 5 minutes, and then reactions were initiated by adding 20 μl FluCa for a total reaction volume of 120 μl. The fluorescence of plasma reactions was read at 37°C at 20-second intervals on a Fluoroscan Ascent fluorimeter and compared with the reactions of a thrombin reference calibrator to determine thrombin concentrations. The fluorescent signal intensity was continuously monitored at 37°C using CAT (computed tomography).

Результаты: недостаточности фактороы свертывания крови FVIII (гемофилия А) и FIX (гемофилия В) препятствуют достаточному образованию тромбина для превращения фибриногена в фибрин для развития стабильного сгустка. Антитело TFPI-106, новое моноклональное антитело, которое специфично связывается с и ингибирует и/или нейтрализует ингибирующую активность TFPI, имеет в качестве мишени путь свертывания крови внешнего тканевого фактора/FVIIa. Пациенты с ингибиторами, получающие TFPI-106, также могут получать rFVIIa для лечения кровотечения в период между инфузиями фактора свертывания. Таким образом, эффект TFPI-106 на образование тромбина в присутствии и в отсутствие rFVIIa в гемофилической плазме проверяли in vitro c использованием признанного в этой области анализа TGA (анализ образования тромбина). Results: Coagulation factor deficiencies FVIII (hemophilia A) and FIX (hemophilia B) prevent sufficient thrombin generation to convert fibrinogen to fibrin for stable clot development. Antibody TFPI-106, a novel monoclonal antibody that specifically binds to and inhibits and/or neutralizes the inhibitory activity of TFPI, targets the extrinsic tissue factor/FVIIa coagulation pathway. Inhibitor patients receiving TFPI-106 may also receive rFVIIa to treat bleeding between clotting factor infusions. Therefore, the effect of TFPI-106 on thrombin generation in the presence and absence of rFVIIa in hemophilic plasma was tested in vitro using the industry-recognized TGA (thrombin generation assay) assay.

Исследования in vitro c использованием анализа образования тромбина в человеческой плазме с цитратом, обедненной тромоцитами, дефицитной по фактору VIII проводили для исследования активности TFPI-106 в присутствии rFVIIa. В одном исследовании антитело TFPI-106 добавляли в человеческую плазму, дефицитную по фактору VIII, в фиксированной концентрации (16 мкг/мл), представляющей собой концентрацию rFVIIa, которая, как известно, увеличивает образование тромбина в плазме при гемофилии А. rFVIIa добавляли в среду для анализа в возрастающих концентрациях вплоть до 20 мкг/мл. Неожиданно, комбинация TFPI-106 и rFVIIa восстанавливала образование тромбина до уровней, наблюдаемых в нормальной плазме. Пиковые уровни тромбина, наблюдаемые с комбинацией TFPI-106 и ряда концентраций rFVIIa (эптаког альфа) - 0,2, 2 и 20 мкг/мл - были аналогичными. Данные, как показано на Фиг. 7, демонстрируют то, что TFPI-106 улучшало ответ в виде образования тромбина в плазме при тяжелой гемофилии А, в которую дозировали rFVIIa (Фиг. 7, сплошная черная, темно-серая и светло-серая линии). In vitro studies using thrombin generation assays in citrate platelet-depleted factor VIII-deficient human plasma were performed to examine the activity of TFPI-106 in the presence of rFVIIa. In one study, the antibody TFPI-106 was added to factor VIII-deficient human plasma at a fixed concentration (16 μg/mL), representing the concentration of rFVIIa known to increase plasma thrombin generation in hemophilia A. rFVIIa was added to the medium for analysis in increasing concentrations up to 20 µg/ml. Surprisingly, the combination of TFPI-106 and rFVIIa restored thrombin generation to levels observed in normal plasma. Peak thrombin levels observed with the combination of TFPI-106 and a range of rFVIIa (eptacog alfa) concentrations - 0.2, 2 and 20 μg/ml - were similar. The data as shown in Fig. 7 demonstrate that TFPI-106 improved the plasma thrombin response in severe hemophilia A dosed with rFVIIa (Fig. 7, solid black, dark gray and light gray lines).

Эффект TFPI-106 (16 мкг/мл; Фиг. 7, темно-серая пунктирная линия) на образование тромбина также измеряли в негемофилической плазме, которая имела полный набор факторов свертывания крови. В соответствии с ингибирующей активностью TFPI-106 на внешний путь TFPI, добавление антитела TFPI-106 приводило к увеличению образования тромбина с уменьшением lag-периода и увеличением пикового тромбина. Пиковый тромбин ~200 нМ при добавлении TFPI-106 и rFVIIa находится в пределах интервала, описанного для нормальной негемофилической плазмы.The effect of TFPI-106 (16 μg/ml; Fig. 7, dark gray dotted line) on thrombin generation was also measured in non-hemophilic plasma, which had a complete complement of coagulation factors. Consistent with the inhibitory activity of TFPI-106 on the extrinsic TFPI pathway, addition of TFPI-106 antibody resulted in an increase in thrombin generation with a decrease in lag period and an increase in peak thrombin. Peak thrombin of ~200 nM upon addition of TFPI-106 and rFVIIa is within the range reported for normal non-hemophilic plasma.

TFPI-ингибирующая активность TFPI-106 на образование тромбина в присутствии и в отсутствие rFVIIa была дополнительно исследована в дополнительных образцах плазмы от гемофилии А (Фиг. 8А; 1 пМ тканевой фактор и 4 мкМ фосфолипиды), плазмы от гемофилии В (Фиг. 8В; ингибитор 3 BU) и в плазме от гемофилии А (Фиг. 8Б; ингибитор 3 BU) с ингибитором, и данные результаты графически показаны на Фиг. 8А, 8В и 8Б соответственно. TFPI-106 добавляли в образцы плазмы в конечной концентрации 16 мкг/мл. Конечная концентрация rFVIIa в данных исследованиях составляла 2 мкг/мл. Добавление 2 мкг/мл rFVIIa в гемофилическую плазму приводило к умеренному увеличению образования тромбина по сравнению с контролем в виде носителя. Добавление 16 мкг/мл TFPI-106 одного или в комбинации с rFVIIa приводило к увеличению образования тромбина, включающему более высокую пиковую концентрацию тромбина и сокращение лаг-периода по сравнению с добавлением одного rFVIIa. Минимальный аддитивный эффект в образовании тромбина наблюдали после совместной обработки rFVIIa и TFPI-106. Пиковые уровни тромбина, достигаемые при дозировании 16 мкг/мл TFPI-106 самого по себе или в комбиации с rFVIIa, были сравнимыми с уровнями, наблюдаемыми в негемофилической плазме, и не превышали уровень, наблюдаемый в негемофилической плазме, в которую дозировали TFPI-106. Эти данные демонстрируют то, что TFPI-106 было эффективным в обходе недостаточностей образования тромбина при гемофилии А, гемофилии В и в плазме при гемофилии А с ингибиторами.The TFPI inhibitory activity of TFPI-106 on thrombin generation in the presence and absence of rFVIIa was further examined in additional hemophilia A plasma samples (Fig. 8A; 1 pM tissue factor and 4 μM phospholipids), hemophilia B plasma (Fig. 8B; inhibitor 3 BU) and in hemophilia A plasma (Fig. 8B; inhibitor 3 BU) with inhibitor, and these results are graphically shown in Fig. 8A, 8B and 8B respectively. TFPI-106 was added to plasma samples at a final concentration of 16 μg/mL. The final concentration of rFVIIa in these studies was 2 μg/ml. Addition of 2 μg/ml rFVIIa to hemophilic plasma resulted in a modest increase in thrombin generation compared with vehicle control. The addition of 16 μg/mL TFPI-106 alone or in combination with rFVIIa resulted in increased thrombin generation, including a higher peak thrombin concentration and a shorter lag period compared with the addition of rFVIIa alone. A minimal additive effect in thrombin generation was observed after co-treatment with rFVIIa and TFPI-106. Peak thrombin levels achieved with 16 μg/mL dosing of TFPI-106 alone or in combination with rFVIIa were comparable to those observed in non-hemophilic plasma and were not greater than those observed in non-hemophilic plasma dosed with TFPI-106. These data demonstrate that TFPI-106 was effective in bypassing thrombin generation deficiencies in hemophilia A, hemophilia B, and in plasma hemophilia A with inhibitors.

Пример 18. Прокоагулирующая активность в человеческой гемофилической крови и плазмеExample 18 Procoagulant activity in human hemophilic blood and plasma

В этом примере описана гемостатическая активность антитела TFPI-106 при тестировании с использованием цельной крови и плазмы, полученных от человеческих субъектов, имеющих гемофилию А и В, по сравнению с рекомбинантными факторами свертывания - Фактором VIII и Фактором IX.This example describes the hemostatic activity of the antibody TFPI-106 when tested using whole blood and plasma obtained from human subjects with hemophilia A and B, compared to the recombinant coagulation factors Factor VIII and Factor IX.

Материалы и методы. Цельная кровь и плазма (обогащенная тромбоцитами и обедненная тромбоцитами) были получены от волонтеров - пациентов с гемофилией в возрасте по меньшей мере 18 лет согласно протоколу, одобренному комиссией по биомедицинской этике. Эти субъекты имели умеренную или тяжелую недостаточность Фактора VIII (FVIII) или Фактора IX (FIX), с ингибирующими антителами или без них, но в иных отношениях были здоровыми в состоянии без кровотечения. Волонтеров исключали, если они использовали какую-либо заместительную терапию в отношении факторов в пределах предыдущих 48 часов перед поступлением в исследование, имели активное кровотечение или имели медицинскую или семейную историю тромбоза. Из 11 волонтеров 5 имели тяжелую недостаточность FVIII, 2 имели умеренную недостаточность FVIII, 1 имел умеренную недостаточность FIX, и 3 имели тяжелую недостаточность FVIII с ингибитором FVIII. Для завершения всех целей данного исследования 46 мл крови (10 пробирок для крови) отбирали у каждого волонтера посредством асептической венопункции в опорожняемые пробирки, содержащие 3,2% цитрата натрия.Materials and methods. Whole blood and plasma (platelet-rich and platelet-poor) were obtained from volunteer hemophilia patients at least 18 years of age under a biomedical ethics review board-approved protocol. These subjects had moderate to severe deficiency of Factor VIII (FVIII) or Factor IX (FIX), with or without inhibitory antibodies, but were otherwise healthy in a nonbleeding state. Volunteers were excluded if they had used any factor replacement therapy within the previous 48 hours before study entry, were actively bleeding, or had a medical or family history of thrombosis. Of the 11 volunteers, 5 had severe FVIII deficiency, 2 had moderate FVIII deficiency, 1 had moderate FIX deficiency, and 3 had severe FVIII deficiency with an FVIII inhibitor. To complete all purposes of this study, 46 ml of blood (10 blood tubes) was collected from each volunteer by aseptic venipuncture into empty tubes containing 3.2% sodium citrate.

Исследуемые препараты включали TFPI 106, совпадающее по изотипу антитело против человеческого IgG1 негативного контроля, рекомбинантный человеческий Фактор VIII и рекомбинантный человеческий Фактор IX, которые добавляли в цельную кровь или плазму, в зависимости от эксперимента. В зависимости от анализа, TFPI 106 тестировали в концентрации 1, 5, 20, 50 или 100 нМ, контрольное антитело IgG1 в концентрации 100 нМ, и рекомбинантный FVIII или FIX в концентрациях , при которых достигалось бы 5%, 10% или 40% нормальной активности фактора на основе анализа активированного частичного тромбопластинового времени (aPTT). Для достижения требуемых коцентраций исследуемые препараты разводили буфером для разведения с рН 7,4, содержащим 20 мМ HEPES, 150 мМ NaCl и 0,5% бычьего сывороточного альбумина.Drugs studied included TFPI 106, an isotype-matched negative control anti-human IgG 1 antibody, recombinant human Factor VIII, and recombinant human Factor IX, which were added to whole blood or plasma, depending on the experiment. Depending on the assay, TFPI 106 was tested at 1, 5, 20, 50, or 100 nM, control IgG 1 antibody at 100 nM, and recombinant FVIII or FIX at concentrations that would achieve 5%, 10%, or 40% normal factor activity based on activated partial thromboplastin time (aPTT) analysis. To achieve the required concentrations, the study drugs were diluted with a pH 7.4 dilution buffer containing 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, and 0.5% bovine serum albumin.

Для определения прокоагулирующего эффекта исследуемых препаратов использовали три типа анализов, включая ротационную тромбоэластографию (ROTEM), анализ образования тромбина (TGA) и анализ протромбинового времени с разведением (dPT).Three types of assays were used to determine the procoagulant effect of the study drugs, including rotational thromboelastography (ROTEM), thrombin generation assay (TGA), and dilution prothrombin time (dPT) assay.

ROTEM измеряет вязкоэластические свойства образца цельной крови по мере его свертывания при условиях низкого срезывающего усилия. По ходу свертывания вязкость образца возрастает, что может быть проанализировано графически. ROTEM проводили с использованием анализатора ROTEM (Pentapharm GmbH, Мюнхен, Германия), используя программу Pentapharm 1.0.04 для оценки свертывания в цельной крови. Свертывание инициировали добавлением 0,020 мл разведения 1:2333 липидированного тканевого фактора (Innovin, Siemens Healthcare) для конечного разведения реакционной среды 1:42000 и 0,020 мл CaCl2 до 0,300 мл цельной крови с цитратом. Все реакции проводили в двойной повторности. Отслеживали параметры ROTEM, и анализировали время свертывания (СТ) ROTEM. Данные, отобранные программой устройства, экспортировали в Microsoft Excel 2010 и/или в GraphPad Prism (версия 6) для анализа. Для каждого волонтера рассчитывали процент изменения времени свертывания ROTEM обработанных образцов по отношению к необработанному образцу от того же самого волонтера.ROTEM measures the viscoelastic properties of a whole blood sample as it clots under low shear force conditions. As coagulation progresses, the viscosity of the sample increases, which can be analyzed graphically. ROTEM was performed using a ROTEM analyzer (Pentapharm GmbH, Munich, Germany) using Pentapharm 1.0.04 software to evaluate coagulation in whole blood. Clotting was initiated by adding 0.020 ml of a 1:2333 dilution of lipidated tissue factor (Innovin, Siemens Healthcare) for a final dilution of the reaction medium of 1:42000 and 0.020 ml of CaCl 2 to 0.300 ml of citrated whole blood. All reactions were carried out in duplicate. ROTEM parameters were monitored, and ROTEM clotting time (CT) was analyzed. Data selected by the device software were exported to Microsoft Excel 2010 and/or GraphPad Prism (version 6) for analysis. For each volunteer, the percentage change in ROTEM clotting time of treated samples relative to an untreated sample from the same volunteer was calculated.

С использованием анализа образования тромбина (TGA) оценивали кинетику образования тромбина в плазме, обогащенной тромбоцитами (PRP), и плазме, обедненной тромбоцитами (РРР), полученной из крови волонтера согласно способам Hemker, et al., Calibrated automated thrombin generation measurement in clotting plasma. Pathophysiolol Haemost Thromb, 33:4-15 (2003). Вкратце, образцы цельной крови, в которые были дозированы исследуемые препараты, центрифугировали при 150 g в течение 10 минут при комнатной температуре с получением РRР. Неиспользованную плазму замораживали и хранили при -80°С. В PRP плазме число тромбоцитов доводили до 150000 тромбоцитов на микролитр с использованием аутологичной РРР. Немедленно измеряли образование тромбина в свежей PRP. Для образцов PRP в лунки 96-луночного планшета для микротитрования в тройной повторности добавляли 20 мкл 1 пМ тканевого фактора (реактив PRP, Diagnostica Stago, Inc., Parsippany, NJ) и 80 мкл PRP. Образование тромбина инициировали добавлением 20 мкл буфера FLUCa (конечная концентрация 16,7 ммоль/л CaCl2 и 417 ммоль/л флуорогенного тромбинового субстрата Z-Gly-Gly-Arg-AMC). Интенсивность флуоресценции выявляли с использованием флуориметра Fluoroskan Ascent. Для образцов РРР вместо реактива PRP использовали реактив РРР LOW (конечная концентрация 1 пМ тканевой фактор и 4 микромолярные прокоагулирующие фосфолипиды) и прогоняли, как описано для образцов PRP. Образование тромбина рассчитывали с использованием программы Thrombinoscope в версии 5.0.0.742 (Thrombinoscope BV, Маастрихт, Нидерланды). Данные, полученные в программе Thrombinoscope, экспортировали в Microsoft Excel 2010 и/или GraphPad Prism (версия 6) для анализа. Для каждого волонтера рассчитывали процентное изменение пиковой концентрации тромбина TGA обработанных образцов по отношению к необработанному обрацу от того же самого волонтера.Using a thrombin generation assay (TGA), the kinetics of thrombin generation in platelet-rich plasma (PRP) and platelet-poor plasma (PPP) obtained from volunteer blood were assessed according to the methods of Hemker, et al., Calibrated automated thrombin generation measurement in clotting plasma . Pathophysiolol Haemost Thromb, 33:4-15 (2003). Briefly, whole blood samples dosed with study drugs were centrifuged at 150 g for 10 minutes at room temperature to obtain PRP. Unused plasma was frozen and stored at -80°C. In PRP plasma, the platelet count was adjusted to 150,000 platelets per microliter using autologous PPP. Thrombin generation in fresh PRP was immediately measured. For PRP samples, 20 μl of 1 pM tissue factor (PRP reagent, Diagnostica Stago, Inc., Parsippany, NJ) and 80 μl of PRP were added in triplicate to wells of a 96-well microtiter plate in triplicate. Thrombin formation was initiated by adding 20 μl of FLUCa buffer (final concentration 16.7 mmol/l CaCl 2 and 417 mmol/l fluorogenic thrombin substrate Z-Gly-Gly-Arg-AMC). Fluorescence intensity was detected using a Fluoroskan Ascent fluorimeter. For PPP samples, PPP LOW reagent (final concentration of 1 pM tissue factor and 4 micromolar procoagulant phospholipids) was used instead of PRP reagent and run as described for PRP samples. Thrombin generation was calculated using Thrombinoscope version 5.0.0.742 (Thrombinoscope BV, Maastricht, The Netherlands). Data obtained from Thrombinoscope software were exported to Microsoft Excel 2010 and/or GraphPad Prism (version 6) for analysis. For each volunteer, the percentage change in peak thrombin TGA concentration of treated samples relative to an untreated sample from the same volunteer was calculated.

Анализы протромбинового времени с разведением (dPT) проводили на анализаторе свертывания STart 4 (Diagnostica Stago, Parsipanny, NJ). Замороженную РРР размораживали, и дозировали в нее антитело TFPI 106 в концентрациях 1, 5, 20 и 100 нМ или изотипическое контрольное антитело в концентрации 100 нМ. Дозированные образцы плазмы инкубировали при 37°С в течение 30 минут до проведения анализа dPT. Пятьдесят микролитров плазмы добавляли в кювету STart 4 и инкубировали в течение 60 секунд при 37°С. Реакцию активировали добавлением разведения 1:6000 реактива на основе тканевого фактора (Innovin), приготовленного в буфере для разведения (50 мМ имидазол, 0,1 М хдорид натрия, 1 мг/мл бычий сывороточный альбумин и 8,34 мМ CaCl2, pH 7,4), и предварительно инкубировали при 37°С. Время до свертывания измеряли при 37°С с реакциями, идущими в двойной повторности. Время свертывания экспортировали в Microsoft Excel 2010 или GraphPadPrism (версия 6) для анализа. Процентное изменение в dPT свертывания для образцов, обработанных исследуемым препаратом, рассчитывали относительно времени свертывания dPT необработанного образца для каждого волонтера.Dilution prothrombin time (dPT) assays were performed on a STart 4 coagulation analyzer (Diagnostica Stago, Parsipanny, NJ). Frozen PPP was thawed and dosed with 1, 5, 20, and 100 nM TFPI 106 antibody or 100 nM isotype control antibody. Dosed plasma samples were incubated at 37°C for 30 minutes prior to dPT analysis. Fifty microliters of plasma was added to a STart 4 cuvette and incubated for 60 seconds at 37°C. The reaction was activated by adding a 1:6000 dilution of tissue factor reagent (Innovin) prepared in dilution buffer (50 mM imidazole, 0.1 M sodium chloride, 1 mg/ml bovine serum albumin and 8.34 mM CaCl 2 , pH 7 ,4), and were preincubated at 37°C. Time to clotting was measured at 37°C with reactions occurring in duplicate. Clotting times were exported to Microsoft Excel 2010 or GraphPadPrism (version 6) for analysis. The percentage change in clotting dPT for test drug-treated samples was calculated relative to the dPT clotting time of the untreated sample for each volunteer.

Как описано в графических материалах, антитело TFPI-106 вызывало дозозависимое увеличение свертывания цельной крови, полученной от волонтеров с гемофилией А или В, при измерении с использованием способа ROTEM. В частности, антитело уменьшало время свертывания и увеличивало максимальную твердость сгустка по сравнению с негативными контролями. Кроме того, TFPI-106 приводило к дозозависимым увеличениям образования тромбина при добавлении как к обогащенной тромбоцитами, так и к обедненной тромбоцитами плазме, полученной от гемофилических пациентов, что доказывается уменьшениями лаг-периода и повышенной пиковой концентрацией образованного тромбина по сравнению с негативными контролями.As described in the graphics, the TFPI-106 antibody caused a dose-dependent increase in the coagulation of whole blood obtained from volunteers with hemophilia A or B, when measured using the ROTEM method. Specifically, the antibody decreased clotting time and increased maximum clot hardness compared to negative controls. In addition, TFPI-106 resulted in dose-dependent increases in thrombin generation when added to both platelet-rich and platelet-poor plasma obtained from hemophiliac patients, as evidenced by decreased lag times and increased peak concentrations of thrombin generated compared with negative controls.

На Фиг. 10А и 10Б проиллюстрирован прокоагулирующий эффект TFPI-106 в цельной крови и плазме, полученных от волонтеров с тяжелой гемофилией А. На Фиг. 10А показан эффект на свертывание крови в анализе ROTEM двух концентраций TFPI 106 по сравнению с IgG негативного контроля и концентраций рекомбинантного FVIII, достаточных для достижения 5%, 10% и 40% от нормальной активности. На Фиг. 10Б показано пиковое образование тромбина в обогащенной тромбоцитами плазме при трех концентрациях TFPI-106 по сравнению с негативными контролями и FVIII. Эти анализы демонстрируют дозозависимый эффект пониженного времени свертывания и повышенного пикового образования тромбина из-за TFPI 106.In FIG. 10A and 10B illustrate the procoagulant effect of TFPI-106 in whole blood and plasma obtained from volunteers with severe hemophilia A. FIG. 10A shows the effect on blood coagulation in the ROTEM assay of two concentrations of TFPI 106 compared to negative control IgG and concentrations of recombinant FVIII sufficient to achieve 5%, 10% and 40% of normal activity. In FIG. 10B shows peak thrombin generation in platelet-rich plasma at three concentrations of TFPI-106 compared to negative controls and FVIII. These assays demonstrate a dose-dependent effect of decreased clotting time and increased peak thrombin generation due to TFPI 106.

На Фиг. 11А, 11Б и 11В проиллюстрирован прокоагулирующий эффект TFPI-106 в цельной крови и плазме от волонтера с тяжелой гемофилией А и ингибирующими антителами (ингибиторами) FVIII. На Фиг. 11А показан эффект на свертывание крови в анализе ROTEM двух концентраций TFPI 106 по сравнению с IgG негативного контроля. На Фиг. 11Б показано пиковое образование тромбина в обогащенной тромбоцитами плазме трех концентраций TFPI-106 по сравнению с IgG негативного контроля. На Фиг. 11В показан эффект четырех концентраций TFPI-106 на образование сгустка из обедненной тромбоцитами плазмы в анализе РТ с разведением по сравнению с IgG негативного контроля. Эти анализы показывают дозозависимый эффект пониженного времени свертывания и повышенного пикового образования тромбина из-за TFPI 106.In FIG. 11A, 11B and 11B illustrate the procoagulant effect of TFPI-106 in whole blood and plasma from a volunteer with severe hemophilia A and FVIII inhibitory antibodies. In FIG. 11A shows the effect on blood coagulation in the ROTEM assay of two concentrations of TFPI 106 compared to a negative control IgG. In FIG. 11B shows peak thrombin generation in platelet-rich plasma of three concentrations of TFPI-106 compared to negative control IgG. In FIG. 11B shows the effect of four concentrations of TFPI-106 on clot formation from platelet-poor plasma in the RT dilution assay compared to negative control IgG. These analyzes show a dose-dependent effect of decreased clotting time and increased peak thrombin generation due to TFPI 106.

На Фиг. 12А, 12Б и 12В проиллюстрирован прокоагулирующий эффект TFPI-106 в цельной крови и плазме от волонтера с умеренной гемофилией А. На Фиг. 12А показан эффект на свертывание крови в анализе ROTEM двух концентраций TFPI 106 по сравнению с IgG негативного контроля и концентрациями рекомбинантного FVIII, достаточными для достижения 5%, 10% и 40% нормальной активности. На Фиг. 12Б показано пиковое образование тромбина в обогащенной тромбоцитами плазме трех концентраций TFPI-106 по сравнению с негативными контролями и FVIII. На Фиг. 12В показан эффект четырех концентраций TFPI-106 на образование сгустка из обедненной тромбоцитами плазмы в анализе РТ с разведением по сравнению с IgG негативного контроля. Эти анализы показывают дозозависимый эффект пониженного времени свертывания и повышенного пикового образования тромбина из-за TFPI 106.In FIG. 12A, 12B, and 12B illustrate the procoagulant effect of TFPI-106 in whole blood and plasma from a volunteer with moderate hemophilia A. FIG. 12A shows the effect on blood coagulation in the ROTEM assay of two concentrations of TFPI 106 compared to negative control IgG and concentrations of recombinant FVIII sufficient to achieve 5%, 10% and 40% of normal activity. In FIG. 12B shows peak thrombin generation in platelet-rich plasma of three concentrations of TFPI-106 compared to negative controls and FVIII. In FIG. 12B shows the effect of four concentrations of TFPI-106 on clot formation from platelet-poor plasma in the RT dilution assay compared to negative control IgG. These analyzes show a dose-dependent effect of decreased clotting time and increased peak thrombin generation due to TFPI 106.

На Фиг. 13А, 13Б и 13В проиллюстрирован прокоагулирующий эффект TFPI-106 в цельной крови и плазме от волонтера с умеренной гемофилией В. На Фиг. 13А показан эффект на свертывание крови в анализе ROTEM двух концентраций TFPI-106 по сравнению с IgG негативного контроля и концентрациями рекомбинантного Фактора IX (FIX), достаточными для достижения 5%, 10% и 40% нормальной активности. На Фиг. 13Б показано пиковое образование тромбина в обогащенной тромбоцитами плазме трех концентраций TFPI-106 по сравнению с негативными контролями и FIX. На Фиг. 13В показан эффект четырех концентраций TFPI 106 на образование сгустка из обедненной тромбоцитами плазмы в анализе РТ с разведением по сравнению с IgG негативного контроля. Эти анализы показывают дозозависимый эффект пониженного времени свертывания и повышенного пикового образования тромбина из-за TFPI-106.In FIG. 13A, 13B and 13B illustrate the procoagulant effect of TFPI-106 in whole blood and plasma from a volunteer with moderate hemophilia B. FIG. 13A shows the effect on blood coagulation in the ROTEM assay of two concentrations of TFPI-106 compared to negative control IgG and concentrations of recombinant Factor IX (FIX) sufficient to achieve 5%, 10% and 40% of normal activity. In FIG. 13B shows peak thrombin generation in platelet-rich plasma of three concentrations of TFPI-106 compared to negative controls and FIX. In FIG. 13B shows the effect of four concentrations of TFPI 106 on clot formation from platelet-poor plasma in the RT dilution assay compared to negative control IgG. These analyzes show a dose-dependent effect of decreased clotting time and increased peak thrombin generation due to TFPI-106.

На Фиг. 14А, 14Б и 14В проиллюстрирован прокоагулирующий эффект TFPI-106 в цельной крови и плазме от волонтеров с умеренной гемофилией А. На Фиг. 14А показан эффект на свертывание крови в анализе ROTEM трех концентраций TFPI-106 по сравнению с концентрациями рекомбинантного FVIII, достаточными для достижения 5%, 10% и 40% нормальной активности. Каждая точка данных представляет собой процентное уменьшение времени свертывания образца крови одного волонтера, обработанного TFPI-106 или FVIII, относительно времени свертывания необработанного образца крови от того же самого волонтера. Самая широкая горизонтальная планка среди точек данных для каждой обработки представляет среднее процентное уменьшение времени свертывания всех протестированных образцов волонтеров. На Фиг. 14Б показан эффект на пиковое образование тромбина в обогащенной тромбоцитами плазме трех концентраций TFPI 106 по сравнению с FVIII. Каждая точка данных представляет собой процентное увеличение пикового образования тромбина образца плазмы одного волонтера, обработанного TFPI-106 или FVIII, относительно пикового образования тромбина необработанного образца плазмы от того же самого волонтера. Самая широкая горизонтальная планка среди точек данных для каждой обработки представляет среднее процентное увеличение пикового образования тромбина всех протестированных образцов волонтеров. На Фиг. 14В показан эффект четырех концентраций TFPI 106 на образование сгустка из обедненной тромбоцитами плазмы в анализе РТ с разведением. Каждая точка данных представляет собой процентное уменьшение времени свертывания образца плазмы одного волонтера, обработанного TFPI-106, относительно времени свертывания необработанного образца плазмы от того же самого волонтера. Самая широкая горизонтальная планка среди точек данных для каждой обработки представляет среднее процентное уменьшение времени свертывания всех протестированных образцов волонтеров. Анализ РТ с разведением продемонстрировал дозозависимое уменьшение времени свертывания, вызванное TFPI-106, и анализ образования тромбина продемонстрировал дозозависимое увеличение пикового образования тромбина, вызванное TFPI-106.In FIG. 14A, 14B and 14B illustrate the procoagulant effect of TFPI-106 in whole blood and plasma from volunteers with moderate hemophilia A. FIG. 14A shows the effect on blood coagulation in the ROTEM assay of three concentrations of TFPI-106 compared with concentrations of recombinant FVIII sufficient to achieve 5%, 10% and 40% of normal activity. Each data point represents the percentage reduction in clotting time of a blood sample from one volunteer treated with TFPI-106 or FVIII relative to the clotting time of an untreated blood sample from the same volunteer. The widest horizontal bar among the data points for each treatment represents the average percentage reduction in clotting time across all volunteer samples tested. In FIG. 14B shows the effect on peak thrombin generation in platelet-rich plasma of three concentrations of TFPI 106 compared to FVIII. Each data point represents the percentage increase in peak thrombin generation of a plasma sample from one volunteer treated with TFPI-106 or FVIII relative to the peak thrombin generation of an untreated plasma sample from the same volunteer. The widest horizontal bar among the data points for each treatment represents the average percentage increase in peak thrombin generation of all volunteer samples tested. In FIG. 14B shows the effect of four concentrations of TFPI 106 on clot formation from platelet-poor plasma in a dilution RT assay. Each data point represents the percentage reduction in clotting time of a plasma sample from one volunteer treated with TFPI-106 relative to the clotting time of an untreated plasma sample from the same volunteer. The widest horizontal bar among the data points for each treatment represents the average percentage reduction in clotting time across all volunteer samples tested. The dilution RT assay demonstrated a dose-dependent decrease in clotting time caused by TFPI-106, and the thrombin generation assay demonstrated a dose-dependent increase in peak thrombin generation caused by TFPI-106.

Таблица 33Table 33
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИSEQUENCES SEQ ID NO:SEQ ID NO: ОписаниеDescription ПоследовательностьSubsequence 1010 CDR1 LC mAb-TFPI-3 CDR1 LC mAb-TFPI-3 RASQGISSSL ARASQGISSSL A 11eleven CDR2 LC mAb-TFPI-3 CDR2 LC mAb-TFPI-3 AASTLQSAASTLQS 1212 CDR3 LC mAb-TFPI-3 CDR3 LC mAb-TFPI-3 QQLDSYPLSQQLDSYPLS 1313 VL mAb-TFPI-3
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL mAb-TFPI-3
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined AIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIS SSLAWYQQKP GKAPKLLIYA ASTLQSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ LDSYPLSFGQ GTKLEIKAIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQGIS SSLA WYQQKP GKAPKLLIY A ASTLQS GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ LDSYPLS FGQ GTKLEIK 1414 Константная область каппа человеческого IgKappa constant region of human Ig RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGECRTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC 1515 LC mAb-TFPI-3
CDR1, 2, 3
подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mAb-TFPI-3
CDR1, 2, 3
underlined Variable region sequence in italics AIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQGIS SSLA WYQQKP GKAPKLLIY A ASTLQS GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ LDSYPLS FGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC AIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQGIS SSLA WYQQKP GKAPKLLIY A ASTLQS GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ LDSYPLS FGQ GTKLEIK RTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLS STLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 1616 CDR1 HC mAb-TFPI-3 CDR1 HC mAb-TFPI-3 GYTFTGYYMHGYTFTGYYMH 1717 CDR2 HC mAb-TFPI-3 CDR2 HC mAb-TFPI-3 WINPNSGGTN YAQKFQGWINPNSGGTN YAQKFQG 1818 CDR3 HC mAb-TFPI-3 CDR3 HC mAb-TFPI-3 GIARLQWLPT EADFDYGIARLQWLPT EADFDY 1919 HL mAb-TFPI-3
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркутыHL mAb-TFPI-3
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT GYYMHWVRQA PGQGLEWMGW INPNSGGTNY AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARGI ARLQWLPTEA DFDYWGQGTL VTVSSQVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKAS GYTFT GYYMH WVRQA PGQGLEWMG W INPNSGGTNY AQKFQG RVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAR GI ARLQWLPTEA DFDY WGQGTL VTVSS 2020 Константная область тяжелой цепи человеческого IgG1
Мутации эффекторной функции: L117A, L118A, G120A подчеркнуты C-концевой лизин удаленHuman IgG1 heavy chain constant region
Effector function mutations: L117A, L118A, G120A underlined, C-terminal lysine removed ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPE AA G A PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQY N STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 2121 HC mAb-TFPI-3
CDR1, CDR2 и CDR3
подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации эффекторной функции выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-3
CDR1, CDR2 and CDR3
underlined Variable region sequence in italics Effector function mutations in bold QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT GYYMHWVRQA PGQGLEWMGW INPNSGGTNY AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARGI ARLQWLPTEA DFDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP EAAGAPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGQVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKAS GYTFT GYYMH WVRQA PGQGLEWMG W INPNSGGTNY AQKFQG RVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCAR GI ARLQWLPTEA DFDY WGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTF PA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP E AA G A PSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQ VYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPG 2222 CDR1 LC mAb-TFPI-21 CDR1 LC mAb-TFPI-21 TGSSSNIGAG YDVHTGSSSNIGAG YDVH 2323 CDR2 LC mAb-TFPI-21 CDR2 LC mAb-TFPI-21 GNSNRPSGNSNRPS 2424 CDR3 LC mAb-TFPI-21 CDR3 LC mAb-TFPI-21 QSYDSSLSGS VVQSYDSSLGSGS VV 2525 VL mAb-TFPI-21
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL mAb-TFPI-21
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined QSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SCTGSSSNIG AGYDVHWYQQ LPGTAPKLLI YGNSNRPSGV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADFYC QSYDSSLSGS VVFGGGTKVT VLGQSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SC TGSSSNIG AGYDVH WYQQ LPGTAPKLLI Y GNSNRPS GV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADFYC QSYDSSLSGS VV FGGGTKVT VLG 2626 CL лямбда человеческого Ig CL lambda human Ig QPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTVA WKADSSPVKA GVETTTPSKQ SNNKYAASSY LSLTPEQWKS HRSYSCQVTH EGSTVEKTVA PTECS QPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTVA WKADSSPVKA GVETTTPSKQ SNNKYAASSY LSLTPEQWKS HRSYSCQVTH EGSTVEKTVA PTECS 2727 LC mAb-TFPI-21
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mAb-TFPI-21
CDR1, 2, 3 are underlined. Variable region sequence is in italics. QSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SC TGSSSNIG AGYDVH WYQQ LPGTAPKLLI Y GNSNRPS GV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADFYC QSYDSSLSGS VV FGGGTKVT VLGQPKAAP SVTLFPPSSE ELQANKATLV CLISDFYPGA VTVAWKADSS PVKAGVETTT PSKQSNNKYA ASSYLSLTPE QWKSHRSYSC QVTHEGSTVE KTVAPTECS QSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SC TGSSSNIG AGYDVH WYQQ LPGTAPKLLI Y GNSNRPS GV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADFYC QSYDSSLSGS VV FGGGTKVT VLG QPKAAP SVTLFPPSSE ELQANKATLV CLISDFYPGA VTVAWKADSS PVKAGVETTT PSKQSNNKYA ASSY LSLTPE QWKSHRSYSC QVTHEGSTVE KTVAPTECS 2828 CDR1 HC mAb-TFPI-21 CDR1 HC mAb-TFPI-21 GFTFSSYAMSGFTFSSYAMS 2929 CDR2 HC mAb-TFPI-21 CDR2 HC mAb-TFPI-21 AISGSGGSTY YADSVKGAISGSGGSTY YADSVKG 30thirty CDR3 HC mAb-TFPI-21 CDR3 HC mAb-TFPI-21 LGATSLSAFD ILGATSLSAFD I 3131 VH mAb-TFPI-21 VH mAb-TFPI-21 QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAILG ATSLSAFDIW GQGTMVTVSSQVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS 3232 HC mAb-TFPI-21
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации эффекторной функции выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-21
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Effector function mutations are in bold QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAILG ATSLSAFDIW GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGQVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLS SVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPE AA G A PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLP PSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 3333 CDR1 LC mAb-TFPI-23 CDR1 LC mAb-TFPI-23 TGSSSNIGAG YDVHTGSSSNIGAG YDVH 3434 CDR2 LC mAb-TFPI-23 CDR2 LC mAb-TFPI-23 GNSNRPS GNSNRPS 3535 CDR3 LC mAb-TFPI-23 CDR3 LC mAb-TFPI-23 QSYDSSLSGS GV QSYDSSLGSGS GV 3636 VL mAb-TFPI-23
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL mAb-TFPI-23
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined QSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SCTGSSSNIG AGYDVHWYQQ LPGTAPKLLI YGNSNRPSGV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADYYC QSYDSSLSGS GVFGGGTKLT VLGQSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SC TGSSSNIG AGYDVH WYQQ LPGTAPKLLI Y GNSNRPS GV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADYYC QSYDSSLSGS GV FGGGTKLT VLG 3737 LC mAb-TFPI-23
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mAb-TFPI-23
CDR1, 2, 3 are underlined. Variable region sequence is in italics. QSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SC TGSSSNIG AGYDVH WYQQ LPGTAPKLLI Y GNSNRPS GV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADYYC QSYDSSLSGS GV FGGGTKLT VLGQPKAAPS VTLFPPSSEE LQANKATLVC LISDFYPGAV TVAWKADSSP VKAGVETTTP SKQSNNKYAA SSYLSLTPEQ WKSHRSYSCQ VTHEGSTVEK TVAPTECS QSVLTQPPSV SGAPGQRVTI SC TGSSSNIG AGYDVH WYQQ LPGTAPKLLI Y GNSNRPS GV PDRFSGSKSG TSASLAITGL QAEDEADYYC QSYDSSLSGS GV FGGGTKLT VL GQPKAAPS VTLFPPSSEE LQANKATLVC LISDFYPGAV TVAWKADSSP VKAGVETTTP SKQSNNKYAA SSYLSLT PEQ WKSHRSYSCQ VTHEGSTVEK TVAPTECS 3838 CDR1 HC mAb-TFPI-23 CDR1 HC mAb-TFPI-23 GFTFSSYAMS GFTFSSYAMS 3939 CDR2 HC mAb-TFPI-23 CDR2 HC mAb-TFPI-23 AISGSGGSTY YADSVKG AISGSGGSTY YADSVKG 4040 CDR3 HC mAb-TFPI-23 CDR3 HC mAb-TFPI-23 LGATSLSAFD I LGATSLSAFD I 4141 VH mAb-TFPI-23 VH mAb-TFPI-23 QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAILG ATSLSAFDIW GQGTMVTVSSQVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS 4242 HC mAb-TFPI-23
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации эффекторной области выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-23
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Effector region mutations are in bold QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLS SVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPE AA G A PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLP PSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 4343 CDR1 LC mAb-TFPI-24 CDR1 LC mAb-TFPI-24 SGSTSNIGTM YVHSGSTSNIGTM YVH 4444 CDR2 LC mAb-TFPI-24 CDR2 LC mAb-TFPI-24 RNNHRPSRNNHRPS 4545 CDR3 LC mAb-TFPI-24 CDR3 LC mAb-TFPI-24 LAWDDTLRAY V LAWDDTLRAY V 4646 CDR1, CDR2, CDR3 VL mAb-TFPI-24 подчеркнутыCDR1, CDR2, CDR3 VL mAb-TFPI-24 are underlined QSVLTQPPSV SGTPGQRVTI SCSGSTSNIG TMYVHWYQHV PGTAPKLLIY RNNHRPSGVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYCL AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQSVLTQPPSV SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQHV PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL G 4747 LC mAb-TFPI-24
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mAb-TFPI-24
CDR1, 2, 3 are underlined. Variable region sequence is in italics. QSVLTQPPSV SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQHV PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS QSVLTQPPSV SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQHV PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLT PEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS 4848 CDR1 HC mAb-TFPI-24 CDR1 HC mAb-TFPI-24 GLTIDNYAMQGLTIDNYAMQ 4949 CDR2 HC mAb-TFPI-24 CDR2 HC mAb-TFPI-24 GISGNSRSIG YADSVKGGISGNSRSIG YADSVKG 5050 CDR3 HC mAb-TFPI-24 CDR3 HC mAb-TFPI-24 FLHESDYFLHESDY 5151 VH mAb-TFPI-24
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH mAb-TFPI-24
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVQLVESGGG SVQPGRSLRL SCAVSGLTID NYAMQWVRQR PGKGLEWVSG ISGNSRSIGY ADSVKGRLTI SRDNAKNSLY LQIDSLRADD TALYYCAIFL HESDYWGQGT LVTVSSEVQLVESGGG SVQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQR PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQIDSLRADD TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSS 5252 HC mAb-TFPI-24
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации эффекторной области выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-24
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Effector region mutations are in bold EVQLVESGGG SVQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQR PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQIDSLRADD TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG EVQLVESGGG SVQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQR PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQIDSLRADD TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSS ASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVT VPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PE AA G A PSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMT KN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG 5353 CDR1 LC mAb-TFPI-26 CDR1 LC mAb-TFPI-26 TGSSSNLGAD YDVQTGSSNLGAD YDVQ 5454 CDR2 LC mAb-TFPI-26 CDR2 LC mAb-TFPI-26 GNNNRPSGNNNRPS 5555 CDR3 LC mAb-TFPI-26CDR3 LC mAb-TFPI-26 QSYDRSLSGS MVQSYDRSLGSGS MV 5656 VL mAb-TFPI-26
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL mAb-TFPI-26
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined QSVLTQPPSL SGAPGQRVTI SCTGSSSNLG ADYDVQWYQQ LPGTAPKLLI FGNNNRPSGV PDRFSGSRSG TSASLAITGL QAEDEANYYC QSYDRSLSGS MVFGGGTKLT VLGQSVLTQPPSL SGAPGQRVTI SC TGSSSNLG ADYDVQ WYQQ LPGTAPKLLI F GNNNRPS GV PDRFSGSRSG TSASLAITGL QAEDEANYYC QSYDRSLSGS MV FGGGTKLT VLG 5757 LC mAb-TFPI-26
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mAb-TFPI-26
CDR1, 2, 3 are underlined. Variable region sequence is in italics. QSVLTQPPSL SGAPGQRVTI SC TGSSSNLG ADYDVQ WYQQ LPGTAPKLLI F GNNNRPS GV PDRFSGSRSG TSASLAITGL QAEDEANYYC QSYDRSLSGS MV FGGGTKLT VLGQPKAAP SVTLFPPSSE ELQANKATLV CLISDFYPGA VTVAWKADSS PVKAGVETTT PSKQSNNKYA ASSYLSLTPE QWKSHRSYSC QVTHEGSTVE KTVAPTECS QSVLTQPPSL SGAPGQRVTI SC TGSSSNLG ADYDVQ WYQQ LPGTAPKLLI F GNNNRPS GV PDRFSGSRSG TSASLAITGL QAEDEANYYC QSYDRSLSGS MV FGGGTKLT VLG QPKAAP SVTLFPPSSE ELQANKATLV CLISDFYPGA VTVAWKADSS PVKAGVETTT PSKQSNNKYA ASSYLS LTPE QWKSHRSYSC QVTHEGSTVE KTVAPTECS 5858 CDR1 HC mAb-TFPI-26 CDR1 HC mAb-TFPI-26 GFTFSSYAMSGFTFSSYAMS 5959 CDR2 HC mAb-TFPI-26 CDR2 HC mAb-TFPI-26 AISGSGGSTY YADSVKGAISGSGGSTY YADSVKG 6060 CDR3 HC mAb-TFPI-26 CDR3 HC mAb-TFPI-26 NGAAAAWDYNGAAAAWDY 6161 VH mAb-TFPI-26
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH mAb-TFPI-26
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCANNG AAAAWDYWGQ GTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAN NG AAAAWDY WGQ GTLVTVSS 6262 HC mAb-TFPI-26
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации эффекторной области выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-26
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Effector region mutations are in bold EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAN NG AAAAWDY WGQ GTLVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPEAAGAPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAN NG AAAAWDY WGQ GTLVTVSS AS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPE AA G A PS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQ VSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPG 6363 VH mAb-TFPI-106
SEQ 26 с мутацями Q1E, V5L, выделенными жирным шрифтомVH mAb-TFPI-106
SEQ 26 with Q1E, V5L mutations in bold EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAILG ATSLSAFDIW GQGTMVTVSS E VQL L ESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS 6464 HC mAb-TFPI-106
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации Q1E,V5L выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-106
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Mutations Q1E,V5L are in bold E VQL L ESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG E VQL L ESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAI LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SK LTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 6565 VH mAb-TFPI-107
SEQ 26 с мутациями Q1E, V5L, I94K, выделенными жирным шрифтом VH mAb-TFPI-107
SEQ 26 with Q1E, V5L, I94K mutations in bold EVQLLESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SYAMSWVRQA PGKGLEWVSA ISGSGGSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAK LG ATSLSAFDIW GQGTMVTVSS E VQL L ESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCA K LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS 6666 HC mAb-TFPI-107
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации Q1E, V5L, I94K выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-107
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Mutations Q1E, V5L, I94K are in bold E VQL L ESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISGSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCA K LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG E VQL L ESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFS SYAMS WVRQA PGKGLEWVS A ISSGGSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCA K LG ATSLSAFDI W GQGTMVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SK LTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 6767 VH mAb-TFPI-108
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 38 с мутациями S11L, R40A, L67F, I82M, D82aN, D85E, выделенными жирным шрифтомVH mAb-TFPI-108
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 38 with mutations S11L, R40A, L67F, I82M, D82aN, D85E in bold EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAVSGLTID NYAMQWVRQA PGKGLEWVSG ISGNSRSIGY ADSVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TALYYCAIFL HESDYWGQGT LVTVSSEVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG R F TI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSS 6868 HC mAb-TFPI-108
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации S11L, R40A, L67F, I82M, D82aN, D85E выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-108
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Mutations S11L, R40A, L67F, I82M, D82aN, D85E are in bold. EVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG R F TI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG EVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG R F TI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNS TYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG 6969 VH mAb-TFPI-109
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 38 с мутациями S11L, V24A, R40A, I82M, D82aN, D85E, выделенными жирным шрифтомVH mAb-TFPI-109
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 38 with mutations S11L, V24A, R40A, I82M, D82aN, D85E in bold EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAASGLTID NYAMQWVRQA PGKGLEWVSG ISGNSRSIGY ADSVKGRLTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TALYYCAIFL HESDYWGQGT LVTVSSEVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCA A S GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSS 7070 HC mAb-TFPI-109
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации S11L, V24A, R40A, I82M, D82aN, D85E выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-109
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Mutations S11L, V24A, R40A, I82M, D82aN, D85E are in bold. EVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCA A S GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG EVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCA A S GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNS TYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG 7171 VL mAb-TFPI-110
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 32 с мутациями V10A, V39L, G71A, выделенными жирным шрифтомVL mAb-TFPI-110
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 32 with mutations V10A, V39L, G71A in bold QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSTSNIG TMYVHWYQHL PGTAPKLLIY RNNHRPSGVP DRFSGSKSGT SASLAISGLR SEDEADYYCL AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQH L PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT S A SLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL G 7272 LC mAb-TFPI-110
CDR1, 2, 3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации V10A, V39L, G71A выделены жирным шрифтомLC mAb-TFPI-110
CDR1, 2, 3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Mutations V10A, V39L, G71A are in bold. QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQH L PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT S A SLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQH L PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT S A SLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVLGQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS 7373 VL mAb-TFPI-111
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 32 с мутациями V10A, H38Q, V39L, выделенными жирным шрифтомVL mAb-TFPI-111
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 32 with mutations V10A, H38Q, V39L in bold QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSTSNIG TMYVHWYQQL PGTAPKLLIY RNNHRPSGVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYCL AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQ QL PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL G 7474 LC mAb-TFPI-111
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации V10A, H38Q, V39L выделены жирным шрифтомLC mAb-TFPI-111
CDR1, 2, 3 are underlined Variable region sequence is in italics Mutations V10A, H38Q, V39L are in bold QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQ QL PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH W.Y.Q. QL PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVLGQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS 7575 VL mAb-TFPI-112
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 32 с мутациями V10A, V39L, выделенными жирным шрифтомVL mAb-TFPI-112
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 32 with mutations V10A, V39L in bold QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSTSNIG TMYVHWYQHL PGTAPKLLIY RNNHRPSGVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYCL AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQH L PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL G 7676 LC mAb-TFPI-112
CDR1, 2, 3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации V10A, V39L выделены жирным шрифтомLC mAb-TFPI-112
CDR1, 2, 3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Mutations V10A, V39L are in bold. QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQH L PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQH L PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT SGSLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVLGQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS 7777 VL mAb-TFPI-113
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 32 с мутациями V10A, H38Q, V39L, G71A, выделенными жирным шрифтомVL mAb-TFPI-113
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 32 with mutations V10A, H38Q, V39L, G71A in bold QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCSGSTSNIG TMYVHWYQQL PGTAPKLLIY RNNHRPSGVP DRFSGSKSGT SASLAISGLR SEDEADYYCL AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQ QL PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT S A SLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL G 7878 LC mAb-TFPI-113
CDR1, 2, 3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации V11A, H38Q, V39L, G71A выделены жирным шрифтомLC mAb-TFPI-113
CDR1, 2, 3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Mutations V11A, H38Q, V39L, G71A are in bold. QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH WYQ QL PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT S A SLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVL GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS QSVLTQPPS A SGTPGQRVTI SC SGSTSNIG TMYVH W.Y.Q. QL PGTAPKLLIY RNNHRPS GVP DRFSGSKSGT S A SLAISGLR SEDEADYYC L AWDDTLRAYV FGTGTKVTVLGQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS 7979 VH HC mAb-TFPI-114
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
SEQ 38 с мутациями S11L, R40A, I82M, D82AN, D85E, выделенными жирным шрифтомVH HC mAb-TFPI-114
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
SEQ 38 with mutations S11L, R40A, I82M, D82AN, D85E in bold EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCAVSGLTID NYAMQWVRQA PGKGLEWVSG ISGNSRSIGY ADSVKGRLTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TALYYCAIFL HESDYWGQGT LVTVSSEVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSS 8080 HC mAb-TFPI-114
CDR1, CDR2 и CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Мутации S11L, R40A, I82M, D82AN, D85E выделены жирным шрифтомHC mAb-TFPI-114
CDR1, CDR2 and CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Mutations S11L, R40A, I82M, D82AN, D85E are in bold. EVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG EVQLVESGGG L VQPGRSLRL SCAVS GLTID NYAMQ WVRQ A PGKGLEWVS G ISGNSRSIGY ADSVKG RLTI SRDNAKNSLY LQ MN SLRA E D TALYYCAI FL HESDY WGQGT LVTVSSASTK GPSVFPLAPS SKSTSGGTAA LGCLVKDYFP EPVTVSWNSG ALTSGVHTFP AVLQSSGLYS LSSVVTVPSS SLGTQTYICN VNHKPSNTKV DKKVEPKSCD KTHTCPPCPA PEAAGAPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNS TYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL
SLSPG 8181 CDR1 VL мышиного 4d8b1 CDR1 VL mouse 4d8b1 KASQDVHTAV AKASQDVHTAV A 8282 CDR2 VL мышиного 4d8b1 CDR2 VL mouse 4d8b1 WASTRHTWASTRHT 8383 CDR3 VL мышиного 4d8b1 CDR3 VL mouse 4d8b1 QQHYTTPYTQQHYTTPYT 8484 VL мышиного 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL mouse 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVH TAVAWYQQKP GQSPRLLIYW ASTRHTGVPD RFTGCGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYCQQ HYTTPYTFGG GTKLEMKDIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GQSPRLLIY W ASTRHT GVPD RFTGCGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYC QQ HYTTPYT FGG GTKLEMK 8585 Константная область каппа мышиного IgMouse Ig kappa constant region ADAAPTVSIF PPSSEQLTSG GASVVCFLNN FYPKDINVKW KIDGSERQNG VLNSWTDQDS KDSTYSMSST LTLTKDEYER HNSYTCEATH KTSTSPIVKS FNRNECADAAPTVSIF PPSSEQLTSG GASVVCFLNN FYPKDINVKW KIDGSERQNG VLNSWTDQDS KDSTYSMSST LTLTKDEYER HNSYTCEATH KTSSTSPIVKS FNRNEC 8686 LC мышиного 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mouse 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GQSPRLLIY W ASTRHT GVPD RFTGCGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYC QQ HYTTPYT FGG GTKLEMKADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS VVCFLNNFYP KDINVKWKID GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS TSPIVKSFNR NEC DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GQSPRLLIY W ASTRHT GVPD RFTGCGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYC QQ HYTTPYT FGG GTKLEMK ADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS VVCFLNNFYP KDINVKWKID GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTL TL TKDEYERHNS YTCEATHKTS TSPIVKSFNR NEC 8787 CDR1 VH мышиного 4d8b1 CDR1 VH mouse 4d8b1 GYTFTDYNLDGYTFTDYNLD 8888 CDR2 VH мышиного 4d8b1 CDR2 VH mouse 4d8b1 DINPINGATL YNQKFKGDINPINGATL YNQKFKG 8989 CDR3 VH мышиного 4d8b1 CDR3 VH mouse 4d8b1 YYGDYDAMDYYYGDYDAMDY 9090 VH мышиного 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH mouse 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVLLQQSGPE LVKPGASVKI PCKASGYTFT DYNLDWVKQS HGKSLEWIGD INPINGATLY NQKFKGKATL TVDQSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCSIYY GDYDAMDYWG QGASVTVSSEVLLQQSGPE LVKPGASVKI PCKAS GYTFT DYNLD WVKQS HGKSLEWIG D INPINGATLY NQKFKG KATL TVDQSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCSI YY GDYDAMDY WG QGASVTVSS 9191 Константная область тяжелой цепи мышиного IghMouse Igh heavy chain constant region AKTTPPSVYP LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT VPEVSSVFIF PPKPKDVLTI TLTPKVTCVV VDISKDDPEV QFSWFVDDVE VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFVYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH NHHTEKSLSH SPGKAKTTPPSVYP LAPGSAAQTN SMVTLGCLVK GYFPEPVTVT WNSGSLSSGV HTFPAVLQSD LYTLSSSVTV PSSTWPSETV TCNVAHPASS TKVDKKIVPR DCGCKPCICT VPEVSSVFIF PPKPKDVLTI TLTPKVTCVV VDISKDDPEV QFSWFVDDVE VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQ DW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW NGQPAENYKN TQPIMDTDGS YFVYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH NHHTEKSLSH SPGK 9292 HC мышиного 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC mouse 4d8b1
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics EVLLQQSGPE LVKPGASVKI PCKAS GYTFT DYNLD WVKQS HGKSLEWIG D INPINGATLY NQKFKG KATL TVDQSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCSI YY GDYDAMDY WG QGASVTVSSA KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCVVV DISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY FVYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS
PGK EVLLQQSGPE LVKPGASVKI PCKAS GYTFT DYNLD WVKQS HGKSLEWIG D INPINGATLY NQKFKG KATL TVDQSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCSI YY GDYDAMDY WG QGASVTVSS A KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL Y TLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCVVV DISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS L TCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY FVYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS
PGK 9393 LC химеры Mu-hu 4d8
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC chimeras Mu-hu 4d8
CDR1, 2, 3 are underlined. Variable region sequence is in italics. DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GQSPRLLIY W ASTRHT GVPD RFTGCGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYC QQ HYTTPYT FGG GTKLEMKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GQSPRLLIY W ASTRHT GVPD RFTGCGSGTD YTLTISSVQA EDLALYYC QQ HYTTPYT FGG GTKLEMK RTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLS STLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 9494 НC химеры Mu-hu 4d8
CDR1, 2, 3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомNC chimeras Mu-hu 4d8
CDR1, 2, 3 are underlined. Variable region sequence is in italics. EVLLQQSGPE LVKPGASVKI PCKAS GYTFT DYNLD WVKQS HGKSLEWIG D INPINGATLY NQKFKG KATL TVDQSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCSI YY GDYDAMDY WG QGASVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVLLQQSGPE LVKPGASVKI PCKAS GYTFT DYNLD WVKQS HGKSLEWIG D INPINGATLY NQKFKG KATL TVDQSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCSI YY GDYDAMDY WG QGASVTVSS A STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LY SLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV Y TLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 9595 VH 4d8-VH10
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH 4d8-VH10
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVAD INPINGATLY NQKFKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARYY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 9696 HC 4d8-VH10
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC 4d8-VH10
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined. Variable region sequence is in italics. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS A STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LY SLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV Y TLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 9797 VH 4d8-VH11
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Обратные мутации A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A выделены жирным шрифтомVH 4d8-VH11
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Back mutations A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A are highlighted in bold EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVG D INPINGATLY NQKFKGRATI SVDQAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARYY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG R A TI S V D Q AKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 9898 HC 4d8-VH11
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Обратные мутации A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A выделены жирным шрифтомHC 4d8-VH11
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Reverse mutations A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A are in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG R A TI S V D Q AKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG R A TI S V D Q AKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 9999 VH 4d8-VH12
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Обратная мутация A49G выделена жирным шрифтомVH 4d8-VH12
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The A49G back mutation is shown in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVG D INPINGATLY NQKFKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARYY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 100100 HC 4d8-VH12
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Обратная мутация A49G выделена жирным шрифтомHC 4d8-VH12
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. The A49G reverse mutation is in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 101101 VH 4d8-VH13
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Обратная мутация F67A выделена жирным шрифтомVH 4d8-VH13
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The F67A back mutation is shown in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVAD INPINGATLY NQKFKGRATI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARYY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG R A TI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 102102 HC 4d8-VH13
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Обратная мутация F67A выделена жирным шрифтомHC 4d8-VH13
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. The F67A reverse mutation is in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG R A TI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG R A TI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 103103 VH 4d8-VH14
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты Обратная мутация N73Q выделена жирным шрифтомVH 4d8-VH14
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined. The N73Q reverse mutation is highlighted in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVAD INPINGATLY NQKFKGRFTI SRDQAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARYY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRD Q AKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 104104 HC 4d8-VH14
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты Последовательность вариабельной области выделена курсивом Обратная мутация N73Q выделена жирным шрифтомHC 4d8-VH14
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined Variable region sequence is in italics Back mutation N73Q is in bold EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRD Q AKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRD Q AKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 105105 VH 4d8-VH15
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты Обратная мутация L78A выделена жирным шрифтомVH 4d8-VH15
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined. The L78A back mutation is highlighted in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVAD INPINGATLY NQKFKGRFTI SRDNAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCARYY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 106106 HC 4d8-VH15
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Обратная мутация L78A выделена жирным шрифтомHC 4d8-VH15
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. The L78A reverse mutation is in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWVA D INPINGATLY NQKFKG RFTI SRDNAKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYCAR YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 107107 VH 4d8-VH16
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Обратные мутации A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A, A93S, R94I выделены жирным шрифтомVH 4d8-VH16
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Reverse mutations A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A, A93S, R94I are highlighted in bold EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT DYNLDWVRQA PGKGLEWVG D INPINGATLY NQKFKGRATI SVDQAKNSAY LQMNSLRAED TAVYYCSI YY GDYDAMDYWG QGTLVTVSSEVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG R A TI S V D Q AKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYC SI YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSS 108108 HC 4d8-VH16
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивом Обратные мутации A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A, A93S, R94I выделены жирным шрифтомHC 4d8-VH16
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
The variable region sequence is in italics. Reverse mutations A49G, F67A, R71V, N73Q, L78A, A93S, R94I are in bold. EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG R A TI S V D Q AKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYC SI YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GYTFT DYNLD WVRQA PGKGLEWV G D INPINGATLY NQKFKG R A TI S V D Q AKNS A Y LQMNSLRAED TAVYYC S.I. YY GDYDAMDY WG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQ YNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 109109 VL 4D8-VK10
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL 4D8-VK10
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDVH TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPYTFGQ GTKLEIKDIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GKAPKLLIY W ASTRHT GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ HYTTPYT FGQ GTKLEIK 110110 LC 4D8-VK10
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
VL выделена курсивомLC 4D8-VK10
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
VL is in italics DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GKAPKLLIY W ASTRHT GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ HYTTPYT FGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GKAPKLLIY W ASTRHT GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ HYTTPYT FGQ GTKLEIK RTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS LSSTLT LSKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC 111111 VL 4D8-VK11
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты Обратная мутация F71Y выделена жирным шрифтомVL 4D8-VK11
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined. The F71Y reverse mutation is highlighted in bold. DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKASQDVH TAVAWYQQKP GKAPKLLIYW ASTRHTGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCQQ HYTTPYTFGQ GTKLEIKDIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GKAPKLLIY W ASTRHT GVPS RFSGSGSGTD Y TLTISSLQP EDFATYYC QQ HYTTPY TFGQ GTKLEIK 112112 LC 4D8-VK11
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
VL выделена курсивомLC 4D8-VK11
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
VL is in italics DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GKAPKLLIY W ASTRHT GVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYC QQ HYTTPYT FGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC KASQDVH TAVA WYQQKP GKAPKLLIY W ASTRHT GVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYC QQ HYTTPYT FGQ GTKLEIK RTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS LSSTLT LSKADYEKHKV YACEVTHQGL SSPVTKSFNR GEC 113113 CDR1 VL мышиного 6b7c5 CDR1 VL mouse 6b7c5 KASQDVITAV AKASQDVITAV A 114114 CDR2 VL мышиного 6b7c5CDR2 VL mouse 6b7c5 WASTRHTWASTRHT 115115 CDR3 VL мышиного 6b7c5CDR3 VL mouse 6b7c5 QQHYSTPYTQQHYSTPYT 116116 VL мышиного 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3
подчеркнутыVL mouse 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3
underlined DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITCKASQDVI TAVAWYQQKP GQSPKLLIYW ASTRHTGVPV RFTGSGSGTD YTLTIISVQA EDLALYYCQQ HYSTPYTFGG GTKLEIKDIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVI TAVA WYQQKP GQSPKLLIY W ASTRHT GVPV RFTGSGSGTD YTLTIISVQA EDLALYYC QQ HYSTPYT FGG GTKLEIK 117117 LC мышиного 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mouse 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVI TAVA WYQQKP GQSPKLLIY W ASTRHT GVPV RFTGSGSGTD YTLTIISVQA EDLALYYC QQ HYSTPYT FGG GTKLEIKADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS VVCFLNNFYP KDINVKWKID GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSSTLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS TSPIVKSFNR NEC DIVMTQSHKF MSTSVGDRVS ITC KASQDVI TAVA WYQQKP GQSPKLLIY W ASTRHT GVPV RFTGSGSGTD YTLTIISVQA EDLALYYC QQ HYSTPYT FGG GTKLEIK ADA APTVSIFPPS SEQLTSGGAS VVCFLNNFYP KDINVKWKID GSERQNGVLN SWTDQDSKDS TYSMSS TLTL TKDEYERHNS YTCEATHKTS TSPIVKSFNR NEC 118118 CDR1 VH мышиного 6b7c5 Mouse VH CDR1 6b7c5 GYTFTDYTMDGYTFTDYTMD 119119 CDR2 VH мышиного 6b7c5CDR2 VH mouse 6b7c5 DINPSNGGSI YNRKFKGDINPSNGGSI YNRKFKG 120120 CDR3 VH мышиного 6b7c5CDR3 mouse VH 6b7c5 MHYNYDGFPYMHYNYDGFPY 121121 VH мышиного 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH mouse 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVLLQQSGPE LVKPGSSVKI PCKASGYTFT DYTMDWVKQS HGKSLEWIGD INPSNGGSIY NRKFKGKATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCARMH YNYDGFPYWG QGTLVTVSAEVLLQQSGPE LVKPGSSVKI PCKAS GYTFT DYTMD WVKQS HGKSLEWIG D INPSNGGSIY NRKFKG KATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCAR MH YNYDGFPY WG QGTLVTVSA 122122 НС мышиного 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомMouse NS 6b7c5
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics EVLLQQSGPE LVKPGSSVKI PCKAS GYTFT DYTMD WVKQS HGKSLEWIG D INPSNGGSIY NRKFKG KATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCAR MH YNYDGFPY WG QGTLVTVSAA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG EVLLQQSGPE LVKPGSSVKI PCKAS GYTFT DYTMD WVKQS HGKSLEWIG D INPSNGGSIY NRKFKG KATL TVDKSSSTAY MELRSLTSED TAVYYCAR MH YNYDGFPY WG QGTLVTVSA A STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 123123 CDR1 VL мышиного 7A4D9 CDR1 VL mouse 7A4D9 RASKSVSTSG YTYMHRASKSVSTSG YTYMH 124124 CDR2 VL мышиного 7A4D9CDR2 VL mouse 7A4D9 LASNLESLASNLES 125125 CDR3 VL мышиного 7A4D9CDR3 VL mouse 7A4D9 QHIRELPFTQHIRELPFT 126126 VL мышиного 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL mouse 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCRASKSVS TSGYTYMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLES GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAAAY YCQHIRELPF TFGSGTKLEI KDIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISC RASKSVS TSGYTYMH WY QQKPGQPPKL LIY LASNLES GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAAAY YC QHIRELPF T FGSGTKLEI K 127127 LC мышиного 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mouse 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISC RASKSVS TSGYTYMH WY QQKPGQPPKL LIY LASNLES GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAAAY YC QHIRELPF T FGSGTKLEI KADAAPTVSI FPPSSEQLTS GGASVVCFLN NFYPKDINVK WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS TLTLTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISC RASKSVS TSGYTYMH WY QQKPGQPPKL LIY LASNLES GVPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAAAY YC QHIRELPF T FGSGTKLEI K ADAAPTVSI FPPSSEQLTS GGASVVCFLN NFYPKDINVK WKIDGSERQN GVLNSWTDQD SKDSTYSMSS TLT LTKDEYE RHNSYTCEAT HKTSTSPIVK SFNRNEC 128128 CDR1 VH мышиного 7A4D9CDR1 VH mouse 7A4D9 GYTFTSYVMHGYTFTSYVMH 129129 CDR2 VH мышиного 7A4D9CDR2 VH of mouse 7A4D9 YLNPYNDGTK YNEKFKGYLNPYNDGTK YNEKFKG 130130 CDR3 VH мышиного 7A4D9CDR3 VH mouse 7A4D9 TLLYAMDYTLLYAMDY 131131 VH мышиного 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3
подчеркнутыVH murine 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3
underlined EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFT SYVMHWVKQK PGQGLEWIGY LNPYNDGTKY NEKFKGKASL ISDKSSSTVY MELSSLTSED SAVYYCATTL LYAMDYWGQG SSVTVSSEVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKAS GYTFT SYVMH WVKQK PGQGLEWIG Y LNPYNDGTKY NEKFKG KASL ISDKSSSTVY MELSSLTSED SAVYYCAT TL LYAMDY WGQG SSVTVSS 132132 HC мышиного 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC murine 7A4D9
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKAS GYTFT SYVMH WVKQK PGQGLEWIG Y LNPYNDGTKY NEKFKG KASL ISDKSSSTVY MELSSLTSED SAVYYCAT TL LYAMDY WGQG SSVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEM EVQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKAS GYTFT SYVMH WVKQK PGQGLEWIG Y LNPYNDGTKY NEKFKG KASL ISDKSSSTVY MELSSLTSED SAVYYCAT TL LYAMDY WGQG SSVTVSS AST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSS GLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LP PSREEM 133133 CDR1 VL 2A8 CDR1 VL 2A8 SGDNLRNYYA HSGDNLRNYYA H 134134 CDR2 VL 2A8CDR2 VL 2A8 YDNNRPSYDNNRPS 135135 CDR3 VL 2A8CDR3 VL 2A8 QSWDDGVPVQSWDDGVPV 136136 VL 2A8
CDR1, CDR2, CDR3
подчеркнутыVL 2A8
CDR1, CDR2, CDR3
underlined DIELTQPPSV SVAPGQTARI SCSGDNLRNY YAHWYQQKPG QAPVVVIYYD NNRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYCQSW DDGVPVFGGG TKLTVLGDIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIY YD NNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW DDGVPV FGGG TKLTVLG 137137 LC 2A8
CDR1, CDR2, CDR3
подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC 2A8
CDR1, CDR2, CDR3
underlined
Variable region sequence is in italics DIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIY YD NNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW DDGVPV FGGG TKLTVLGQPK AAPSVTLFPP SSEELQANKA TLVCLISDFY PGAVTVAWKA DSSPVKAGVE TTTPSKQSNN KYAASSYLSL TPEQWKSHRS YSCQVTHEGS TVEKTVAPTE CS DIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIY YD NNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW DDGVPV FGGG TKLTVL GQPK AAPSVTLFPP SSEELQANKA TLVCLISDFY PGAVTVAWKA DSSPVKAGVE TTTPSKQSNN KYAASSYLSL TPE QWKSHRS YSCQVTHEGS TVEKTVAPTE CS 138138 CDR1 VH 2A8 CDR1 VH 2A8 GFTFRSYGMSGFTFRSYGMS 139139 CDR2 VH 2A8CDR2 VH 2A8 SIRGSSSSTY YADSVKGSIRGSSSSTY YADSVKG 140140 CDR3 VH 2A8CDR3 VH 2A8 KYRYWFDYKYRYWFDY 141141 VH 2A8
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH 2A8
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFR SYGMSWVRQA PGKGLEWVSS IRGSSSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARKY RYWFDYWGQG TLVTVSSQVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFR SYGMS WVRQA PGKGLEWVS S IRGSSSSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR KY RYWFDY WGQG TLVTVSS 142142 HC 2A8
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC 2A8
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFR SYGMS WVRQA PGKGLEWVS S IRGSSSSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR KY RYWFDY WGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFR SYGMS WVRQA PGKGLEWVS S IRGSSSSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR KY RYWFDY WGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLS SVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG 143143 CDR1 VL 2A8-200 CDR1 VL 2A8-200 SGDNLRNYYA HSGDNLRNYYA H 144144 CDR2 VL 2A8-200CDR2 VL 2A8-200 YDVNRPSYDVNRPS 145145 CDR3 VL 2A8-200CDR3 VL 2A8-200 QSWWDGVPVQSWWDGVPV 146146 VL 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined DIELTQPPSV SVAPGQTARI SCSGDNLRNY YAHWYQQKPG QAPVVVIFYD VNRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYCQSW WDGVPVFGGG TKLTVLGDIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIF YD VNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW WDGVPV FGGG TKLTVLG 147147 LC 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics DIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIF YD VNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW WDGVPV FGGG TKLTVLGQPK AAPSVTLFPP SSEELQANKA TLVCLISDFY PGAVTVAWKA DSSPVKAGVE TTTPSKQSNN KYAASSYLSL TPEQWKSHRS YSCQVTHEGS TVEKTVAPTE CS DIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIF YD VNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW WDHVPV FGGG TKLTVLGQPK AAPSVTLFPP SSEELQANKA TLVCLISDFY PGAVTVAWKA DSSPVKAGVE TTTPSKQSNN KYAASSYLSL TPE QWKSHRS YSCQVTHEGS TVEKTVAPTE CS 148148 CDR1 VH 2A8-200 CDR1 VH 2A8-200 GFTFRSYGMDGFTFRSYGMD 149149 CDR2 VH 2A8-200CDR2 VH 2A8-200 SIRGSRSSTY YADSVKGSIRGSRSSTY YADSVKG 150150 CDR3 VH 2A8-200CDR3 VH 2A8-200 LYRYWFDYLYRYWFDY 151151 VH 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFR SYGMDWVRQA PGKGLEWVSS IRGSRSSTYY ADSVKGRFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCARLY RYWFDYWGQG TLVTVSSQVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFR SYGMD WVRQA PGKGLEWVS S IRGSRSSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR LY RYWFDY WGQG TLVTVSS 152152 HC 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC 2A8-200
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFR SYGMD WVRQA PGKGLEWVS S IRGSRSSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR LY RYWFDY WGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG QVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAAS GFTFR SYGMD WVRQA PGKGLEWVS S IRGSRSSTYY ADSVKG RFTI SRDNSKNTLY LQMNSLRAED TAVYYCAR LY RYWFDY WGQG TLVTVSS AST KGPSVFPLAP SSKSTSGGTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY S LSSVVTVPS SSLGTQTYIC NVNHKPSNTK VDKKVEPKSC DKTHTCPPCP APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMT K NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG 153153 CDR1 VL 3F18CDR1 VL 3F18 SGDNLRNYYA HSGDNLRNYYA H 154154 CDR2 VL 3F18CDR2 VL 3F18 YDNNRPSYDNNRPS 155155 CDR3 VL 3F18 CDR3 VL 3F18 QSWDDGVPVQSWDDGVPV 156156 VL 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined DIELTQPPSV SVAPGQTARI SCSGDNLRNY YAHWYQQKPG QAPVVVIYYD NNRPSGIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYCQSW DDGVPVFGGG TKLTVLGDIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIY YD NNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW DDGVPV FGGG TKLTVLG 157157 CL лямбда мышиного Ig CL lambda mouse Ig QPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECSQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRSYSCQVT HEGSTVEKTV APTECS 158158 LC 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics DIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIY YD NNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW DDGVPV FGGG TKLTVLGQPK AAPSVTLFPP SSEELQANKA TLVCLISDFY PGAVTVAWKA DSSPVKAGVE TTTPSKQSNN KYAASSYLSL TPEQWKSHRS YSCQVTHEGS TVEKTVAPTE CS DIELTQPPSV SVAPGQTARI SC SGDNLRNY YAH WYQQKPG QAPVVVIY YD NNRPS GIPER FSGSNSGNTA TLTISGTQAE DEADYYC QSW DDGVPV FGGG TKLTVLGQPK AAPSVTLFPP SSEELQANKA TLVCLISDFY PGAVTVAWKA DSSPVKAGVE TTTPSKQSNN KYAASSYLSL TPE QWKSHRS YSCQVTHEGS TVEKTVAPTE CS 159159 CDR1 VH 3F18 CDR1 VH 3F18 GFTFSNYALSGFTFSNYALS 160160 CDR2 VH 3F18 CDR2 VH 3F18 SISSGGATYY PDSVEGSISSGGATYY PDSVEG 161161 CDR3 VH 3F18 CDR3 VH 3F18 GAYGSDYFDYGAYGSDYFDY 162162 VH 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVKLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS NYALSWVRQT PDKRLEWVAS ISSGGATYYP DSVEGRFTIS RDNVRNILYL QMSSLQSEDT AMYYCTRGAY GSDYFDYWGQ GTTLTVSSEVKLVESGGG LVKPGGSLRL SCAAS GFTFS NYALS WVRQT PDKRLEWVA S ISSGGATYYP DSVEG RFTIS RDNVRNILYL QMSSLQSEDT AMYYCTR GAY GSDYFDY WGQ GTTLTVSS 163163 HC 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC 3F18
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics EVKLVESGGG LVKPGGSLRL SCAAS GFTFS NYALS WVRQT PDKRLEWVA S ISSGGATYYP DSVEG RFTIS RDNVRNILYL QMSSLQSEDT AMYYCTR GAY GSDYFDY WGQ GTTLTVSSAK TTPPSVYPLA PGSAAQTNSM VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY TLSSSVTVPS STWPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVVVD ISKDDPEVQF SWFVDDVEVH TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKT ISKTKGRPKA PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP G EVKLVESGGG LVKPGGSLRL SCAAS GFTFS NYALS WVRQT PDKRLEWVA S ISSGGATYYP DSVEG RFTIS RDNVRNILYL QMSSLQSEDT AMYYCTR GAY GSDYFDY WGQ GTTLTVSS AK TTPPSVYPLA PGSAAQTNSM VTLGCLVKGY FPEPVTVTWN SGSLSSGVHT FPAVLQSDLY TLSSSVTVPS ST WPSETVTC NVAHPASSTK VDKKIVPRDC GCKPCICTVP EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVVVD ISKDDPEVQF SWFVDDVEVH TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKT ISKTKGRPKA PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP G 164164 CDR1 VL hz4F36 CDR1 VL hz4F36 KSSQSLLESD GKTYLNKSSQSLLESD GKTYLN 165165 CDR2 VL hz4F36 CDR2 VL hz4F36 LVSILDSLVSILDS 166166 CDR3 VL hz4F36 CDR3 VL hz4F36 LQATHFPQTLQATHFPQT 167167 VL hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVL hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISCKSSQSLL ESDGKTYLNW YLQKPGQSPQ LLIYLVSILD SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCLQATHFP QTFGGGTKVE IKDIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISC KSSQSLL ESDGKTYLN W YLQKPGQSPQ LLIY LVSILD S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYC LQATHFP QT FGGGTKVE IK 168168 LC hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISC KSSQSLL ESDGKTYLN W YLQKPGQSPQ LLIY LVSILD S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYC LQATHFP QT FGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC DIVMTQTPLS LSVTPGQPAS ISC KSSQSLL ESDGKTYLN W YLQKPGQSPQ LLIY LVSILD S GVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYC LQATHFP QT FGGGTKVE IK RTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSK DSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV TKSFNRGEC 169169 CDR1 VH hz4F36 CDR1 VH hz4F36 GFTFSNYAMSGFTFSNYAMS 170170 CDR2 VH hz4F36CDR2 VH hz4F36 TISRSGSYSY FPDSVQGTISRSGSYSY FPDSVQG 171171 CDR3 VH hz4F36CDR3 VH hz4F36 LGGYDEGDAM DSLGGYDEGDAM DS 172172 VH hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнутыVH hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS NYAMSWVRQT PEKRLEWVAT ISRSGSYSYF PDSVQGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARLG GYDEGDAMDS WGQGTTVTVS SEVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAAS GFTFS NYAMS WVRQT PEKRLEWVA T ISRSGSYSYF PDSVQG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR LG GYDEGDAMDS WGQGTTVTVS S 173173 CH hz4F36
Константная область тяжелой цепи человеческого IgG4 CH hz4F36
Human IgG4 heavy chain constant region ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGKASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RV VSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK 174174 HC hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 подчеркнуты
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC hz4F36
CDR1, CDR2, CDR3 are underlined
Variable region sequence is in italics EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAAS GFTFS NYAMS WVRQT PEKRLEWVA T ISRSGSYSYF PDSVQG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR LG GYDEGDAMDS WGQGTTVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAAS GFTFS NYAMS WVRQT PEKRLEWVA T ISRSGSYSYF PDSVQG RFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCAR LG GYDEGDAMDS WGQGTTVTVS S ASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLY SLSSVV TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPS QEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK 175175 VH mAb-TFPI-106
нуклеиновые кислоты, кодирующие CDR1, CDR2, CDR3, подчеркнутыVH mAb-TFPI-106
nucleic acids encoding CDR1, CDR2, CDR3 are underlined GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGCGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGATTCTGGGAGCTACTTCGTTATCGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGCGAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGCGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCT GGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGC TGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCA GCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATAC TACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGC TGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCG ATTCTGGGAGCTACTTCGTTATCGGCTTTTGATATC TGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGC 176176 VL mAb-TFPI-106
нуклеиновые кислоты, кодирующие CDR1, CDR2, CDR3, подчеркнутыVL mAb-TFPI-106
nucleic acids encoding CDR1, CDR2, CDR3 are underlined CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGTTCAGGGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTACAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCCTGC ACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACAC TGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTAT GGTAACAGCAATCGGCCCTCA GGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGC TCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGC CAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGTTCAGGGGTA TTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA 177177 HC mAb-TFPI-106
нуклеиновые кислоты, кодирующие CDR1, CDR2, CDR3, подчеркнуты;
Последовательность вариабельной области выделена курсивомHC mAb-TFPI-106
nucleic acids encoding CDR1, CDR2, CDR3 are underlined;
Variable region sequence is in italics GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGCGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCT GGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGC TGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCA GCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATAC TACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCG ATTCTGGGAGCTACTTCGTTATCGGCTTTTGATATC TGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGCGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGT GAGGTGCAGCTGCTGGAGTCTGGCGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCT GGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGC TGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCA GCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATAC TACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGC TGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCG ATTCTGGGAGCTACTTCGTTATCGGCTTTTGATATC TGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCGAGC 178178 LC mAb-TFPI-106
нуклеиновые кислоты, кодирующие CDR1, CDR2, CDR3, подчеркнуты;
Последовательность вариабельной области выделена курсивомLC mAb-TFPI-106
nucleic acids encoding CDR1, CDR2, CDR3 are underlined;
Variable region sequence is in italics CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGC ACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACAC TGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATCTAT GGTAACAGCAATCGGCCCTCA GGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGC CAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGTTCAGGGGTA TTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGC ACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGCAGGTTATGATGTACAC TGGTACCAGCAGCTTCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCCATCTAT GGTAACAGCAATCGGCCCCTCA GGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGC CAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGTGGTTCAGGGGTA TTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCC CACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA

Описание и состав последовательности для номеров SeqID (идентификационный номер последовательности) антител. (При названии конкретных остатков используется нумерация по Kabat. Точки начала и конца CDR VH и VL определяются с использованием определений Kabat).Description and sequence composition for SeqID (sequence identification number) numbers of antibodies. (Kabat numbering is used when naming specific residues. CDR start and end points VH and VL are defined using Kabat definitions).

Разные характеристики и воплощения настоящего изобретения, относящиеся к приведенным выше индивидуальным разделам, применяются, сообразно обстоятельствам, к другим разделам, с учетом необходимых изменений. Следовательно, характеристики, определенные в одном разделе, могут быть объединены с характеристиками, определенными в других разделах, сообразно обстоятельствам. Все процитированные в настоящем описании ссылки, включая патенты, патентные заявки, статьи, учебники и процитированные номера доступа последовательностей, и ссылки, процитированные в них, являются тем самым включенными посредством ссылки во всей их полноте. В случае, когда одна или более чем одна включенная литературная ссылка и аналогичные материалы отличаются от или противоречат этой заявке, включая определенные термины, применение терминов, описанные методики или тому подобное, но не ограничиваясь ими, данная заявка будет иметь преимущество.Various features and embodiments of the present invention related to the individual sections above apply, as appropriate, to other sections, mutatis mutandis. Therefore, characteristics defined in one section may be combined with characteristics defined in other sections, as appropriate. All references cited herein, including patents, patent applications, articles, textbooks and sequence accession numbers cited, and references cited therein are hereby incorporated by reference in their entirety. To the extent that one or more included references and similar materials differ from or conflict with this application, including, but not limited to, certain terms, application of terms, techniques described, or the like, this application will control.

--->--->

Перечень последовательностей List of sequences

SEQUENCE LISTING SEQUENCE LISTING

<110> Pfizer Inc.<110> Pfizer Inc.

Pittman, Debra Pittman, Debra

Apgar, James R. Apgar, James R.

Juo, Zong Sean Juo, Zong Sean

Jin, Macy Jin, Macy

Stahl, Mark Stahl, Mark

Carven, Gregory J. Carven, Gregory J.

Holsti, Matthew Holsti, Matthew

Benard, Susan Benard, Susan

Hett, Sunita R. Hett, Sunita R.

Jasuja, Reema Jasuja, Reema

<120> TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR ANTIBODIES AND USES THEREOF<120> TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR ANTIBODIES AND USES THEREOF

<130> PC72096A<130>PC72096A

<150> US 62/207,229<150> US 62/207,229

<151> 2015-08-19<151> 2015-08-19

<150> US 62/360,205<150> US 62/360,205

<151> 2016-07-08<151> 2016-07-08

<160> 178 <160> 178

<170> PatentIn version 3.5<170> Patent In version 3.5

<210> 1<210> 1

<211> 149<211> 149

<212> PRT<212>PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 1<400> 1

Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp

20 25 30 20 25 30

Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr

35 40 45 35 40 45

Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp Asn

65 70 75 80 65 70 75 80

Ala Asn Arg Ile Ile Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp Phe Ala Asn Arg Ile Ile Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp Phe

85 90 95 85 90 95

Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg

100 105 110 100 105 110

Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys

130 135 140 130 135 140

Asn Ile Cys Glu Asp Asn Ile Cys Glu Asp

145 145

<210> 2<210> 2

<211> 254<211> 254

<212> PRT<212>PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 2<400> 2

Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu His Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Ala Asp Asp

20 25 30 20 25 30

Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr

35 40 45 35 40 45

Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Gln Asn

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp Asn Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Lys Met Cys Thr Arg Asp Asn

65 70 75 80 65 70 75 80

Ala Asn Arg Ile Ile Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp Phe Ala Asn Arg Ile Ile Lys Thr Thr Leu Gln Gln Glu Lys Pro Asp Phe

85 90 95 85 90 95

Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg

100 105 110 100 105 110

Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys

130 135 140 130 135 140

Asn Ile Cys Glu Asp Gly Pro Asn Gly Phe Gln Val Asp Asn Tyr Gly Asn Ile Cys Glu Asp Gly Pro Asn Gly Phe Gln Val Asp Asn Tyr Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Gln Leu Asn Ala Val Asn Asn Ser Leu Thr Pro Gln Ser Thr Lys Thr Gln Leu Asn Ala Val Asn Asn Ser Leu Thr Pro Gln Ser Thr Lys

165 170 175 165 170 175

Val Pro Ser Leu Phe Glu Phe His Gly Pro Ser Trp Cys Leu Thr Pro Val Pro Ser Leu Phe Glu Phe His Gly Pro Ser Trp Cys Leu Thr Pro

180 185 190 180 185 190

Ala Asp Arg Gly Leu Cys Arg Ala Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Tyr Asn Ala Asp Arg Gly Leu Cys Arg Ala Asn Glu Asn Arg Phe Tyr Tyr Asn

195 200 205 195 200 205

Ser Val Ile Gly Lys Cys Arg Pro Phe Lys Tyr Ser Gly Cys Gly Gly Ser Val Ile Gly Lys Cys Arg Pro Phe Lys Tyr Ser Gly Cys Gly Gly

210 215 220 210 215 220

Asn Glu Asn Asn Phe Thr Ser Lys Gln Glu Cys Leu Arg Ala Cys Lys Asn Glu Asn Asn Phe Thr Ser Lys Gln Glu Cys Leu Arg Ala Cys Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Lys Gly Phe Ile Gln Arg Ile Ser Lys Gly Gly Leu Ile Lys Lys Gly Phe Ile Gln Arg Ile Ser Lys Gly Gly Leu Ile Lys

245 250 245 250

<210> 3<210> 3

<211> 189<211> 189

<212> PRT<212>PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 3<400> 3

Asp Ala Ala Gln Glu Pro Thr Gly Asn Asn Ala Glu Ile Cys Leu Leu Asp Ala Ala Gln Glu Pro Thr Gly Asn Asn Ala Glu Ile Cys Leu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Leu Asp Tyr Gly Pro Cys Arg Ala Leu Leu Leu Arg Tyr Tyr Tyr Pro Leu Asp Tyr Gly Pro Cys Arg Ala Leu Leu Leu Arg Tyr Tyr Tyr

20 25 30 20 25 30

Asp Arg Tyr Thr Gln Ser Cys Arg Gln Phe Leu Tyr Gly Gly Cys Glu Asp Arg Tyr Thr Gln Ser Cys Arg Gln Phe Leu Tyr Gly Gly Cys Glu

35 40 45 35 40 45

Gly Asn Ala Asn Asn Phe Tyr Thr Trp Glu Ala Cys Asp Asp Ala Cys Gly Asn Ala Asn Asn Phe Tyr Thr Trp Glu Ala Cys Asp Asp Ala Cys

50 55 60 50 55 60

Trp Arg Ile Glu Lys Val Pro Lys Val Cys Arg Leu Gln Val Ser Val Trp Arg Ile Glu Lys Val Pro Lys Val Cys Arg Leu Gln Val Ser Val

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Asp Gln Cys Glu Gly Ser Thr Glu Lys Tyr Phe Phe Asn Leu Ser Asp Asp Gln Cys Glu Gly Ser Thr Glu Lys Tyr Phe Phe Asn Leu Ser

85 90 95 85 90 95

Ser Met Thr Cys Glu Lys Phe Phe Ser Gly Gly Cys His Arg Asn Arg Ser Met Thr Cys Glu Lys Phe Phe Ser Gly Gly Cys His Arg Asn Arg

100 105 110 100 105 110

Ile Glu Asn Arg Phe Pro Asp Glu Ala Thr Cys Met Gly Phe Cys Ala Ile Glu Asn Arg Phe Pro Asp Glu Ala Thr Cys Met Gly Phe Cys Ala

115 120 125 115 120 125

Pro Lys Lys Ile Pro Ser Phe Cys Tyr Ser Pro Lys Asp Glu Gly Leu Pro Lys Lys Ile Pro Ser Phe Cys Tyr Ser Pro Lys Asp Glu Gly Leu

130 135 140 130 135 140

Cys Ser Ala Asn Val Thr Arg Tyr Tyr Phe Asn Pro Arg Tyr Arg Thr Cys Ser Ala Asn Val Thr Arg Tyr Tyr Phe Asn Pro Arg Tyr Arg Thr

145 150 155 160 145 150 155 160

Cys Asp Ala Phe Thr Tyr Thr Gly Cys Gly Gly Asn Asp Asn Asn Phe Cys Asp Ala Phe Thr Tyr Thr Gly Cys Gly Gly Asn Asp Asn Asn Phe

165 170 175 165 170 175

Val Ser Arg Glu Asp Cys Lys Arg Ala Cys Ala Lys Ala Val Ser Arg Glu Asp Cys Lys Arg Ala Cys Ala Lys Ala

180 185 180 185

<210> 4<210> 4

<211> 146<211> 146

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 4<400> 4

Leu Ser Glu Glu Ala Asp Asp Thr Asp Ser Glu Leu Gly Ser Met Lys Leu Ser Glu Glu Ala Asp Asp Thr Asp Ser Glu Leu Gly Ser Met Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Leu His Thr Phe Cys Ala Met Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Lys Pro Leu His Thr Phe Cys Ala Met Lys Ala Asp Asp Gly Pro Cys Lys

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ile Arg Ser Tyr Phe Phe Asn Met Tyr Thr His Gln Cys Glu Ala Met Ile Arg Ser Tyr Phe Phe Asn Met Tyr Thr His Gln Cys Glu

35 40 45 35 40 45

Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Glu Asn Arg Phe Asp Thr Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Glu Asn Arg Phe Asp Thr

50 55 60 50 55 60

Leu Glu Glu Cys Lys Lys Thr Cys Ile Pro Gly Tyr Glu Lys Thr Ala Leu Glu Glu Cys Lys Lys Thr Cys Ile Pro Gly Tyr Glu Lys Thr Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Val Lys Ala Ala Ser Gly Ala Glu Arg Pro Asp Phe Cys Phe Leu Glu Val Lys Ala Ala Ser Gly Ala Glu Arg Pro Asp Phe Cys Phe Leu Glu

85 90 95 85 90 95

Glu Asp Pro Gly Leu Cys Arg Gly Tyr Met Lys Arg Tyr Leu Tyr Asn Glu Asp Pro Gly Leu Cys Arg Gly Tyr Met Lys Arg Tyr Leu Tyr Asn

100 105 110 100 105 110

Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Val Tyr Gly Gly Cys Leu Gly Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe Val Tyr Gly Gly Cys Leu Gly

115 120 125 115 120 125

Asn Arg Asn Asn Phe Glu Thr Leu Asp Glu Cys Lys Lys Ile Cys Glu Asn Arg Asn Asn Phe Glu Thr Leu Asp Glu Cys Lys Lys Ile Cys Glu

130 135 140 130 135 140

Asn Pro Asn Pro

145 145

<210> 5<210> 5

<211> 149<211> 149

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 5<400> 5

Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu Tyr Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu Asp Ser Glu Glu Asp Glu Glu Tyr Thr Ile Ile Thr Asp Thr Glu Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Pro Asp Asp Pro Pro Leu Lys Leu Met His Ser Phe Cys Ala Phe Lys Pro Asp Asp

20 25 30 20 25 30

Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr Gly Pro Cys Lys Ala Ile Met Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Phe Thr

35 40 45 35 40 45

Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Gln Asn Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Gly Gly Asn Gln Asn

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Glu Ser Met Glu Glu Cys Lys Lys Val Cys Thr Arg Asp Asn Arg Phe Glu Ser Met Glu Glu Cys Lys Lys Val Cys Thr Arg Asp Asn

65 70 75 80 65 70 75 80

Val Asn Arg Ile Ile Gln Thr Ala Leu Gln Lys Glu Lys Pro Asp Phe Val Asn Arg Ile Ile Gln Thr Ala Leu Gln Lys Glu Lys Pro Asp Phe

85 90 95 85 90 95

Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg

100 105 110 100 105 110

Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Ser Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Ser Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys Gly Cys Leu Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Lys

130 135 140 130 135 140

Asn Thr Cys Glu Asp Asn Thr Cys Glu Asp

145 145

<210> 6<210> 6

<211> 149<211> 149

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 6<400> 6

Ala Ala Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Asn Ile Thr Asp Ile Lys Pro Ala Ala Glu Glu Asp Glu Glu Phe Thr Asn Ile Thr Asp Ile Lys Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Leu Gln Lys Pro Thr His Ser Phe Cys Ala Met Lys Val Asp Asp Pro Leu Gln Lys Pro Thr His Ser Phe Cys Ala Met Lys Val Asp Asp

20 25 30 20 25 30

Gly Pro Cys Arg Ala Tyr Ile Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Leu Thr Gly Pro Cys Arg Ala Tyr Ile Lys Arg Phe Phe Phe Asn Ile Leu Thr

35 40 45 35 40 45

His Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Glu Asn His Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Glu Gly Asn Glu Asn

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Glu Lys Cys Ala Arg Asp Tyr Arg Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Glu Lys Cys Ala Arg Asp Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Lys Met Thr Thr Lys Leu Thr Phe Gln Lys Gly Lys Pro Asp Phe Pro Lys Met Thr Thr Lys Leu Thr Phe Gln Lys Gly Lys Pro Asp Phe

85 90 95 85 90 95

Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Tyr Ile Thr Arg

100 105 110 100 105 110

Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Ser Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Ser Lys Gln Cys Glu Arg Phe Lys Tyr Gly

115 120 125 115 120 125

Gly Cys Leu Gly Asn Leu Asn Asn Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys Gly Cys Leu Gly Asn Leu Asn Asn Phe Glu Ser Leu Glu Glu Cys Lys

130 135 140 130 135 140

Asn Thr Cys Glu Asn Asn Thr Cys Glu Asn

145 145

<210> 7<210> 7

<211> 148<211> 148

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 7<400> 7

Leu Pro Glu Glu Asp Asp Asp Thr Ile Asn Thr Asp Ser Glu Leu Arg Leu Pro Glu Glu Asp Asp Asp Thr Ile Asn Thr Asp Ser Glu Leu Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Met Lys Pro Leu His Thr Phe Cys Ala Met Lys Ala Glu Asp Gly Pro Met Lys Pro Leu His Thr Phe Cys Ala Met Lys Ala Glu Asp Gly

20 25 30 20 25 30

Pro Cys Lys Ala Met Ile Arg Ser Tyr Tyr Phe Asn Met Asn Ser His Pro Cys Lys Ala Met Ile Arg Ser Tyr Tyr Phe Asn Met Asn Ser His

35 40 45 35 40 45

Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Lys Asn Arg Gln Cys Glu Glu Phe Ile Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Lys Asn Arg

50 55 60 50 55 60

Phe Asp Thr Leu Glu Glu Cys Arg Lys Thr Cys Ile Pro Gly Tyr Lys Phe Asp Thr Leu Glu Glu Cys Arg Lys Thr Cys Ile Pro Gly Tyr Lys

65 70 75 80 65 70 75 80

Lys Thr Thr Ile Lys Thr Thr Ser Gly Ala Glu Lys Pro Asp Phe Cys Lys Thr Thr Ile Lys Thr Thr Ser Gly Ala Glu Lys Pro Asp Phe Cys

85 90 95 85 90 95

Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Phe Met Thr Arg Tyr Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Arg Gly Phe Met Thr Arg Tyr

100 105 110 100 105 110

Phe Tyr Asn Asn Gln Ser Lys Gln Cys Glu Gln Phe Lys Tyr Gly Gly Phe Tyr Asn Asn Gln Ser Lys Gln Cys Glu Gln Phe Lys Tyr Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Cys Leu Gly Asn Ser Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Arg Asn Cys Leu Gly Asn Ser Asn Asn Phe Glu Thr Leu Glu Glu Cys Arg Asn

130 135 140 130 135 140

Thr Cys Glu Asp Thr Cys Glu Asp

145 145

<210> 8<210> 8

<211> 35<211> 35

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 8<400> 8

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Pro Pro His His His His His His His Ile Glu Trp His Glu Gly Gly Pro Pro His His His His His His

20 25 30 20 25 30

His His His His His His

35 35

<210> 9<210> 9

<211> 20<211> 20

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 9<400> 9

Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Ser Thr Gly Gly Ser Thr Gly

20 20

<210> 10<210> 10

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 10<400> 10

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Leu Ala Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Leu Ala

1 5 10 1 5 10

<210> 11<210> 11

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 11<400> 11

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5 15

<210> 12<210> 12

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 12<400> 12

Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Leu Ser Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Leu Ser

1 5 15

<210> 13<210> 13

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 13<400> 13

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Leu Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 14<210> 14

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 14<400> 14

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30 20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60 50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105 100 105

<210> 15<210> 15

<211> 214<211> 214

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 15<400> 15

Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ser

20 25 30 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Leu Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asp Ser Tyr Pro Leu

85 90 95 85 90 95

Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140 130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 210

<210> 16<210> 16

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 16<400> 16

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His

1 5 10 1 5 10

<210> 17<210> 17

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 17<400> 17

Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 18<210> 18

<211> 16<211> 16

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 18<400> 18

Gly Ile Ala Arg Leu Gln Trp Leu Pro Thr Glu Ala Asp Phe Asp Tyr Gly Ile Ala Arg Leu Gln Trp Leu Pro Thr Glu Ala Asp Phe Asp Tyr

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 19<210> 19

<211> 125<211> 125

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 19<400> 19

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Ile Ala Arg Leu Gln Trp Leu Pro Thr Glu Ala Asp Phe Ala Arg Gly Ile Ala Arg Leu Gln Trp Leu Pro Thr Glu Ala Asp Phe

100 105 110 100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125 115 120 125

<210> 20<210> 20

<211> 329<211> 329

<212> PRT<212>PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 20<400> 20

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80 65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95 85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110 100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125 115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175 165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190 180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205 195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220 210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240 225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255 245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270 260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285 275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300 290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320 305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

325 325

<210> 21<210> 21

<211> 454<211> 454

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 21<400> 21

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30 20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Gly Ile Ala Arg Leu Gln Trp Leu Pro Thr Glu Ala Asp Phe Ala Arg Gly Ile Ala Arg Leu Gln Trp Leu Pro Thr Glu Ala Asp Phe

100 105 110 100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125 115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser

130 135 140 130 135 140

Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160 145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175 165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190 180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys

195 200 205 195 200 205

Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu

210 215 220 210 215 220

Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

245 250 255 245 250 255

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

260 265 270 260 265 270

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

275 280 285 275 280 285

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

290 295 300 290 295 300

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

305 310 315 320 305 310 315 320

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

325 330 335 325 330 335

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

340 345 350 340 345 350

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

355 360 365 355 360 365

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

370 375 380 370 375 380

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

385 390 395 400 385 390 395 400

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

405 410 415 405 410 415

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

420 425 430 420 425 430

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

435 440 445 435 440 445

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Leu Ser Leu Ser Pro Gly

450 450

<210> 22<210> 22

<211> 14<211> 14

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 22<400> 22

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10 1 5 10

<210> 23<210> 23

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 23<400> 23

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 24<210> 24

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 24<400> 24

Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Val Val Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Val Val

1 5 10 1 5 10

<210> 25<210> 25

<211> 113<211> 113

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 25<400> 25

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Leu Ser Gly Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

Gly Gly

<210> 26<210> 26

<211> 105<211> 105

<212> PRT<212>PRT

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 26<400> 26

Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe

20 25 30 20 25 30

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val

35 40 45 35 40 45

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys

50 55 60 50 55 60

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu

85 90 95 85 90 95

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105 100 105

<210> 27<210> 27

<211> 218<211> 218

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 27<400> 27

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Phe Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Leu Ser Gly Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

115 120 125 115 120 125

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

130 135 140 130 135 140

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

165 170 175 165 170 175

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

180 185 190 180 185 190

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

195 200 205 195 200 205

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 28<210> 28

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 28<400> 28

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 29<210> 29

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 29<400> 29

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 30<210> 30

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 30<400> 30

Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile

1 5 10 1 5 10

<210> 31<210> 31

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 31<400> 31

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 32<210> 32

<211> 449<211> 449

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 32<400> 32

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125 115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140 130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175 165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205 195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220 210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala

225 230 235 240 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270 260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285 275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335 325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445 435 440 445

Gly Gly

<210> 33<210> 33

<211> 14<211> 14

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 33<400> 33

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10 1 5 10

<210> 34<210> 34

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 34<400> 34

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 35<210> 35

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 35<400> 35

Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Gly Val Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Gly Val

1 5 10 1 5 10

<210> 36<210> 36

<211> 113<211> 113

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 36<400> 36

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Leu Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

Gly Gly

<210> 37<210> 37

<211> 218<211> 218

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 37<400> 37

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30 20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Leu Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

115 120 125 115 120 125

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

130 135 140 130 135 140

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

165 170 175 165 170 175

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

180 185 190 180 185 190

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

195 200 205 195 200 205

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 38<210> 38

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 38<400> 38

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 39<210> 39

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 39<400> 39

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 40<210> 40

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 40<400> 40

Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile

1 5 10 1 5 10

<210> 41<210> 41

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 41<400> 41

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 42<210> 42

<211> 449<211> 449

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 42<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125 115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140 130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175 165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205 195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220 210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala

225 230 235 240 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270 260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285 275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335 325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445 435 440 445

Gly Gly

<210> 43<210> 43

<211> 13<211> 13

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 43<400> 43

Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Tyr Val His Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Tyr Val His

1 5 10 1 5 10

<210> 44<210> 44

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 44<400> 44

Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Arg Asn Asn His Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 45<210> 45

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 45<400> 45

Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Arg Ala Tyr Val Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Arg Ala Tyr Val

1 5 10 1 5 10

<210> 46<210> 46

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 46<400> 46

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 47<210> 47

<211> 216<211> 216

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 47<400> 47

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln His Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125 115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175 165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190 180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205 195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 48<210> 48

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 48<400> 48

Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ala Met Gln Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ala Met Gln

1 5 10 1 5 10

<210> 49<210> 49

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 49<400> 49

Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 50<210> 50

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 50<400> 50

Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr

1 5 15

<210> 51<210> 51

<211> 116<211> 116

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 51<400> 51

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asp Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Asp Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 52<210> 52

<211> 445<211> 445

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 52<400> 52

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Ile Asp Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Asp Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125 115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140 130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190 180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205 195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255 245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270 260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285 275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300 290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335 325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350 340 345 350

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365 355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380 370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415 405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430 420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 53<210> 53

<211> 14<211> 14

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 53<400> 53

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ala Asp Tyr Asp Val Gln Thr Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ala Asp Tyr Asp Val Gln

1 5 10 1 5 10

<210> 54<210> 54

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 54<400> 54

Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 55<210> 55

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 55<400> 55

Gln Ser Tyr Asp Arg Ser Leu Ser Gly Ser Met Val Gln Ser Tyr Asp Arg Ser Leu Ser Gly Ser Met Val

1 5 10 1 5 10

<210> 56<210> 56

<211> 113<211> 113

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 56<400> 56

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ala Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ala Asp

20 25 30 20 25 30

Tyr Asp Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Tyr Asp Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Phe Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Leu Ile Phe Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Ser Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Ser Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Leu Ser Gly Ser Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

Gly Gly

<210> 57<210> 57

<211> 218<211> 218

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 57<400> 57

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Gly Ala Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ala Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Leu Gly Ala Asp

20 25 30 20 25 30

Tyr Asp Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Tyr Asp Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45 35 40 45

Leu Ile Phe Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Leu Ile Phe Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Ser Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Ser

85 90 95 85 90 95

Leu Ser Gly Ser Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Leu Ser Gly Ser Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110 100 105 110

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

115 120 125 115 120 125

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

130 135 140 130 135 140

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

145 150 155 160 145 150 155 160

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

165 170 175 165 170 175

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

180 185 190 180 185 190

Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val

195 200 205 195 200 205

Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 58<210> 58

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 58<400> 58

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 59<210> 59

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 59<400> 59

Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 60<210> 60

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 60<400> 60

Asn Gly Ala Ala Ala Ala Trp Asp Tyr Asn Gly Ala Ala Ala Ala Trp Asp Tyr

1 5 15

<210> 61<210> 61

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 61<400> 61

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Asn Asn Gly Ala Ala Ala Ala Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Asn Asn Gly Ala Ala Ala Ala Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 62<210> 62

<211> 447<211> 447

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 62<400> 62

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Asn Asn Gly Ala Ala Ala Ala Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ala Asn Asn Gly Ala Ala Ala Ala Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125 115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140 130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175 165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205 195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220 210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser

225 230 235 240 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270 260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335 325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350 340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380 370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415 405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 63<210> 63

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 63<400> 63

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 64<210> 64

<211> 449<211> 449

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 64<400> 64

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Ile Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125 115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140 130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175 165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205 195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220 210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala

225 230 235 240 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270 260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285 275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335 325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445 435 440 445

Gly Gly

<210> 65<210> 65

<211> 120<211> 120

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 65<400> 65

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Lys Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Lys Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 66<210> 66

<211> 449<211> 449

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 66<400> 66

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Lys Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Ala Lys Leu Gly Ala Thr Ser Leu Ser Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125 115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala

130 135 140 130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175 165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys

195 200 205 195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp

210 215 220 210 215 220

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala

225 230 235 240 225 230 235 240

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

245 250 255 245 250 255

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

260 265 270 260 265 270

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

275 280 285 275 280 285

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

290 295 300 290 295 300

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

325 330 335 325 330 335

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

340 345 350 340 345 350

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

355 360 365 355 360 365

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

370 375 380 370 375 380

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

385 390 395 400 385 390 395 400

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

405 410 415 405 410 415

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

420 425 430 420 425 430

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

435 440 445 435 440 445

Gly Gly

<210> 67<210> 67

<211> 116<211> 116

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 67<400> 67

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 68<210> 68

<211> 445<211> 445

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 68<400> 68

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125 115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140 130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190 180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205 195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255 245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270 260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285 275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300 290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335 325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350 340 345 350

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365 355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380 370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415 405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430 420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 69<210> 69

<211> 116<211> 116

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 69<400> 69

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 70<210> 70

<211> 445<211> 445

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 70<400> 70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125 115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140 130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190 180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205 195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255 245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270 260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285 275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300 290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335 325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350 340 345 350

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365 355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380 370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415 405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430 420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 71<210> 71

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 71<400> 71

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 72<210> 72

<211> 216<211> 216

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 72<400> 72

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125 115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175 165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190 180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205 195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 73<210> 73

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 73<400> 73

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 74<210> 74

<211> 216<211> 216

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 74<400> 74

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125 115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175 165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190 180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205 195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 75<210> 75

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 75<400> 75

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 76<210> 76

<211> 216<211> 216

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 76<400> 76

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Gly Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125 115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175 165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190 180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205 195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 77<210> 77

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 77<400> 77

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly

100 105 110 100 105 110

<210> 78<210> 78

<211> 216<211> 216

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 78<400> 78

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Thr Ser Asn Ile Gly Thr Met

20 25 30 20 25 30

Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45 35 40 45

Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ile Tyr Arg Asn Asn His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60 50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Ala Trp Asp Asp Thr Leu

85 90 95 85 90 95

Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Arg Ala Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110 100 105 110

Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125 115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140 130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175 165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190 180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205 195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215 210 215

<210> 79<210> 79

<211> 116<211> 116

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 79<400> 79

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 80<210> 80

<211> 445<211> 445

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 80<400> 80

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Thr Ile Asp Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Arg Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Ala Ile Phe Leu His Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

115 120 125 115 120 125

Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu

130 135 140 130 135 140

Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly

145 150 155 160 145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu

180 185 190 180 185 190

Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr

195 200 205 195 200 205

Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr

210 215 220 210 215 220

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe

225 230 235 240 225 230 235 240

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

245 250 255 245 250 255

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

260 265 270 260 265 270

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

275 280 285 275 280 285

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

290 295 300 290 295 300

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser

325 330 335 325 330 335

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

340 345 350 340 345 350

Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

355 360 365 355 360 365

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

370 375 380 370 375 380

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

405 410 415 405 410 415

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

420 425 430 420 425 430

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 81<210> 81

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 81<400> 81

Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Val Ala Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Val Ala

1 5 10 1 5 10

<210> 82<210> 82

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 82<400> 82

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5 15

<210> 83<210> 83

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 83<400> 83

Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr

1 5 15

<210> 84<210> 84

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 84<400> 84

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Cys Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Cys Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

100 105 100 105

<210> 85<210> 85

<211> 106<211> 106

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 85<400> 85

Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr

20 25 30 20 25 30

Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln

35 40 45 35 40 45

Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

50 55 60 50 55 60

Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg

65 70 75 80 65 70 75 80

His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro

85 90 95 85 90 95

Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

100 105 100 105

<210> 86<210> 86

<211> 213<211> 213

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 86<400> 86

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Cys Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Cys Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Ala Asp Ala Ala Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Ala Asp Ala Ala Pro

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn

130 135 140 130 135 140

Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr

180 185 190 180 185 190

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe

195 200 205 195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys Asn Arg Asn Glu Cys

210 210

<210> 87<210> 87

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 87<400> 87

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Leu Asp Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Leu Asp

1 5 10 1 5 10

<210> 88<210> 88

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 88<400> 88

Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 89<210> 89

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 89<400> 89

Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr

1 5 10 1 5 10

<210> 90<210> 90

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 90<400> 90

Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 91<210> 91

<211> 324<211> 324

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 91<400> 91

Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr

20 25 30 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser

35 40 45 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu

50 55 60 50 55 60

Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val

65 70 75 80 65 70 75 80

Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys

85 90 95 85 90 95

Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro

100 105 110 100 105 110

Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu

115 120 125 115 120 125

Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser

130 135 140 130 135 140

Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu

145 150 155 160 145 150 155 160

Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

165 170 175 165 170 175

Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn

180 185 190 180 185 190

Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro

195 200 205 195 200 205

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln

210 215 220 210 215 220

Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val

245 250 255 245 250 255

Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln

260 265 270 260 265 270

Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn

275 280 285 275 280 285

Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val

290 295 300 290 295 300

Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His

305 310 315 320 305 310 315 320

Ser Pro Gly Lys Ser Pro Gly Lys

<210> 92<210> 92

<211> 443<211> 443

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 92<400> 92

Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190 180 185 190

Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser

195 200 205 195 200 205

Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys

210 215 220 210 215 220

Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr

245 250 255 245 250 255

Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser

260 265 270 260 265 270

Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg

275 280 285 275 280 285

Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile

290 295 300 290 295 300

Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn

305 310 315 320 305 310 315 320

Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys

325 330 335 325 330 335

Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu

340 345 350 340 345 350

Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe

355 360 365 355 360 365

Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala

370 375 380 370 375 380

Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr

385 390 395 400 385 390 395 400

Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly

405 410 415 405 410 415

Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His

420 425 430 420 425 430

Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys

435 440 435 440

<210> 93<210> 93

<211> 214<211> 214

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 93<400> 93

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Cys Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Cys Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg Thr Val Ala Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140 130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 210

<210> 94<210> 94

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 94<400> 94

Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Asn Leu Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 95<210> 95

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 95<400> 95

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 96<210> 96

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 96<400> 96

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 97<210> 97

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 97<400> 97

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 98<210> 98

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 98<400> 98

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 99<210> 99

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 99<400> 99

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 100<210> 100

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 100<400> 100

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 101<210> 101

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 101<400> 101

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 102<210> 102

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 102<400> 102

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 103<210> 103

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 103<400> 103

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gln Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gln Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 104<210> 104

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 104<400> 104

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gln Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Gln Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 105<210> 105

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 105<400> 105

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 106<210> 106

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 106<400> 106

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Ala Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 107<210> 107

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 107<400> 107

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 108<210> 108

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 108<400> 108

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Asn Leu Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ile Asn Gly Ala Thr Leu Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Val Asp Gln Ala Lys Asn Ser Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ile Tyr Tyr Gly Asp Tyr Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 109<210> 109

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 109<400> 109

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 110<210> 110

<211> 214<211> 214

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 110<400> 110

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140 130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 210

<210> 111<210> 111

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 111<400> 111

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 112<210> 112

<211> 214<211> 214

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 112<400> 112

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125 115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140 130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190 180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205 195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 210

<210> 113<210> 113

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 113<400> 113

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala Val Ala Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala Val Ala

1 5 10 1 5 10

<210> 114<210> 114

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 114<400> 114

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5 15

<210> 115<210> 115

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 115<400> 115

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5 15

<210> 116<210> 116

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 116<400> 116

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Val Arg Phe Thr Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Val Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ile Ser Val Gln Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ile Ser Val Gln Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 100 105

<210> 117<210> 117

<211> 213<211> 213

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 117<400> 117

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ile Thr Ala

20 25 30 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Val Arg Phe Thr Gly Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Val Arg Phe Thr Gly

50 55 60 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ile Ser Val Gln Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ile Ser Val Gln Ala

65 70 75 80 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Asp Ala Ala Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Asp Ala Ala Pro

100 105 110 100 105 110

Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly

115 120 125 115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn

130 135 140 130 135 140

Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr

180 185 190 180 185 190

Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe

195 200 205 195 200 205

Asn Arg Asn Glu Cys Asn Arg Asn Glu Cys

210 210

<210> 118<210> 118

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 118<400> 118

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp

1 5 10 1 5 10

<210> 119<210> 119

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 119<400> 119

Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Arg Lys Phe Lys Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Arg Lys Phe Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 120<210> 120

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 120<400> 120

Met His Tyr Asn Tyr Asp Gly Phe Pro Tyr Met His Tyr Asn Tyr Asp Gly Phe Pro Tyr

1 5 10 1 5 10

<210> 121<210> 121

<211> 119<211> 119

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 121<400> 121

Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Thr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Thr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Arg Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Arg Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Met His Tyr Asn Tyr Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Met His Tyr Asn Tyr Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

115 115

<210> 122<210> 122

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 122<400> 122

Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Thr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Thr Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Arg Lys Phe Gly Asp Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Arg Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Met His Tyr Asn Tyr Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Ala Arg Met His Tyr Asn Tyr Asp Gly Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

115 120 125 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

130 135 140 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

145 150 155 160 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175 165 170 175

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

180 185 190 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

195 200 205 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

210 215 220 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

260 265 270 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

325 330 335 325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380 370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415 405 410 415

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 123<210> 123

<211> 15<211> 15

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 123<400> 123

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Thr Tyr Met His Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Thr Tyr Met His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 124<210> 124

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 124<400> 124

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5 15

<210> 125<210> 125

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 125<400> 125

Gln His Ile Arg Glu Leu Pro Phe Thr Gln His Ile Arg Glu Leu Pro Phe Thr

1 5 15

<210> 126<210> 126

<211> 111<211> 111

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 126<400> 126

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30 20 25 30

Gly Tyr Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gly Tyr Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg

85 90 95 85 90 95

Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 127<210> 127

<211> 217<211> 217

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 127<400> 127

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30 20 25 30

Gly Tyr Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gly Tyr Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45 35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60 50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80 65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg

85 90 95 85 90 95

Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ala

100 105 110 100 105 110

Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu

115 120 125 115 120 125

Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro

130 135 140 130 135 140

Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr

165 170 175 165 170 175

Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His

180 185 190 180 185 190

Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile

195 200 205 195 200 205

Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys

210 215 210 215

<210> 128<210> 128

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 128<400> 128

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Val Met His

1 5 10 1 5 10

<210> 129<210> 129

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 129<400> 129

Tyr Leu Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Tyr Leu Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 130<210> 130

<211> 8<211> 8

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 130<400> 130

Thr Leu Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Thr Leu Leu Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 15

<210> 131<210> 131

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 131<400> 131

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Tyr Leu Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly Tyr Leu Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Ser Leu Ile Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr Lys Gly Lys Ala Ser Leu Ile Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Thr Thr Leu Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ser Ala Thr Thr Leu Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ser

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 132<210> 132

<211> 358<211> 358

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 132<400> 132

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45 35 40 45

Gly Tyr Leu Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Gly Tyr Leu Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Lys Ala Ser Leu Ile Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr Lys Gly Lys Ala Ser Leu Ile Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Thr Thr Leu Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ser Ala Thr Thr Leu Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Ser Ser

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125 115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140 130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190 180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205 195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220 210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270 260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300 290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335 325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Pro Ser Arg Glu Glu Met

355 355

<210> 133<210> 133

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 133<400> 133

Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala His Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala His

1 5 10 1 5 10

<210> 134<210> 134

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 134<400> 134

Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 135<210> 135

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 135<400> 135

Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val

1 5 15

<210> 136<210> 136

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 136<400> 136

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 100 105

<210> 137<210> 137

<211> 212<211> 212

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 137<400> 137

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn

115 120 125 115 120 125

Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val

130 135 140 130 135 140

Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser

180 185 190 180 185 190

Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro

195 200 205 195 200 205

Thr Glu Cys Ser Thr Glu Cys Ser

210 210

<210> 138<210> 138

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 138<400> 138

Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 139<210> 139

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 139<400> 139

Ser Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ser Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 140<210> 140

<211> 8<211> 8

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 140<400> 140

Lys Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Lys Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr

1 5 15

<210> 141<210> 141

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 141<400> 141

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ser Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Lys Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ala Arg Lys Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 142<210> 142

<211> 446<211> 446

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 142<400> 142

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ser Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Lys Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ala Arg Lys Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125 115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140 130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190 180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205 195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220 210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270 260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300 290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335 325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380 370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415 405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 143<210> 143

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 143<400> 143

Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala His Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala His

1 5 10 1 5 10

<210> 144<210> 144

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 144<400> 144

Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 145<210> 145

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 145<400> 145

Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val

1 5 15

<210> 146<210> 146

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 146<400> 146

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Phe

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 100 105

<210> 147<210> 147

<211> 212<211> 212

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 147<400> 147

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Phe His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Phe

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Val Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Trp Asp Gly Val Pro Val

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn

115 120 125 115 120 125

Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val

130 135 140 130 135 140

Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser

180 185 190 180 185 190

Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro

195 200 205 195 200 205

Thr Glu Cys Ser Thr Glu Cys Ser

210 210

<210> 148<210> 148

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 148<400> 148

Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met Asp Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Gly Met Asp

1 5 10 1 5 10

<210> 149<210> 149

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 149<400> 149

Ser Ile Arg Gly Ser Arg Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ser Ile Arg Gly Ser Arg Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 150<210> 150

<211> 8<211> 8

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 150<400> 150

Leu Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Leu Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr

1 5 15

<210> 151<210> 151

<211> 117<211> 117

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 151<400> 151

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ser Ile Arg Gly Ser Arg Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Arg Gly Ser Arg Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Leu Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ala Arg Leu Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Val Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 152<210> 152

<211> 446<211> 446

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 152<400> 152

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr

20 25 30 20 25 30

Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ser Ser Ile Arg Gly Ser Arg Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Arg Gly Ser Arg Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Leu Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Ala Arg Leu Tyr Arg Tyr Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110 100 105 110

Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu

115 120 125 115 120 125

Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys

130 135 140 130 135 140

Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser

165 170 175 165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190 180 185 190

Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn

195 200 205 195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His

210 215 220 210 215 220

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val

225 230 235 240 225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255 245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

260 265 270 260 265 270

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285 275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300 290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320 305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335 325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350 340 345 350

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365 355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380 370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400 385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415 405 410 415

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430 420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445 435 440 445

<210> 153<210> 153

<211> 11<211> 11

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 153<400> 153

Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala His Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala His

1 5 10 1 5 10

<210> 154<210> 154

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 154<400> 154

Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser

1 5 15

<210> 155<210> 155

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 155<400> 155

Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val

1 5 15

<210> 156<210> 156

<211> 107<211> 107

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 156<400> 156

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly

100 105 100 105

<210> 157<210> 157

<211> 105<211> 105

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 157<400> 157

Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe

20 25 30 20 25 30

Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val

35 40 45 35 40 45

Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys

50 55 60 50 55 60

Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser

65 70 75 80 65 70 75 80

His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu

85 90 95 85 90 95

Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

100 105 100 105

<210> 158<210> 158

<211> 212<211> 212

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 158<400> 158

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Asn Tyr Tyr Ala

20 25 30 20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Ile Tyr

35 40 45 35 40 45

Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60 50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu

65 70 75 80 65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Asp Gly Val Pro Val

85 90 95 85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala

100 105 110 100 105 110

Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn

115 120 125 115 120 125

Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val

130 135 140 130 135 140

Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu

145 150 155 160 145 150 155 160

Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser

165 170 175 165 170 175

Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser

180 185 190 180 185 190

Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro

195 200 205 195 200 205

Thr Glu Cys Ser Thr Glu Cys Ser

210 210

<210> 159<210> 159

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 159<400> 159

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Leu Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Leu Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 160<210> 160

<211> 16<211> 16

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 160<400> 160

Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 161<210> 161

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 161<400> 161

Gly Ala Tyr Gly Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Gly Ala Tyr Gly Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10 1 5 10

<210> 162<210> 162

<211> 118<211> 118

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 162<400> 162

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Gln Met Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr

85 90 95 85 90 95

Arg Gly Ala Tyr Gly Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Gly Ala Tyr Gly Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 115

<210> 163<210> 163

<211> 441<211> 441

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 163<400> 163

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ala Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Glu

50 55 60 50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu

65 70 75 80 65 70 75 80

Gln Met Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr Gln Met Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr

85 90 95 85 90 95

Arg Gly Ala Tyr Gly Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Gly Ala Tyr Gly Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110 100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro

115 120 125 115 120 125

Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly

130 135 140 130 135 140

Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175 165 170 175

Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr

180 185 190 180 185 190

Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser

195 200 205 195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro

210 215 220 210 215 220

Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys

245 250 255 245 250 255

Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp

260 265 270 260 265 270

Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu

275 280 285 275 280 285

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met

290 295 300 290 295 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser

305 310 315 320 305 310 315 320

Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly

325 330 335 325 330 335

Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln

340 345 350 340 345 350

Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe

355 360 365 355 360 365

Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu

370 375 380 370 375 380

Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe

385 390 395 400 385 390 395 400

Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn

405 410 415 405 410 415

Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr

420 425 430 420 425 430

Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly

435 440 435 440

<210> 164<210> 164

<211> 16<211> 16

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 164<400> 164

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 165<210> 165

<211> 7<211> 7

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 165<400> 165

Leu Val Ser Ile Leu Asp Ser Leu Val Ser Ile Leu Asp Ser

1 5 15

<210> 166<210> 166

<211> 9<211> 9

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 166<400> 166

Leu Gln Ala Thr His Phe Pro Gln Thr Leu Gln Ala Thr His Phe Pro Gln Thr

1 5 15

<210> 167<210> 167

<211> 112<211> 112

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 167<400> 167

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser

20 25 30 20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Ile Leu Asp Ser Gly Val Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Ile Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala

85 90 95 85 90 95

Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

<210> 168<210> 168

<211> 219<211> 219

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 168<400> 168

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Glu Ser

20 25 30 20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45 35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Ile Leu Asp Ser Gly Val Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Ile Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala

85 90 95 85 90 95

Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125 115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175 165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 210 215

<210> 169<210> 169

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 169<400> 169

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 170<210> 170

<211> 17<211> 17

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 170<400> 170

Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val Gln Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Gly

<210> 171<210> 171

<211> 12<211> 12

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 171<400> 171

Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser

1 5 10 1 5 10

<210> 172<210> 172

<211> 121<211> 121

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 172<400> 172

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser Trp Gly Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser Trp Gly

100 105 110 100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 115 120

<210> 173<210> 173

<211> 327<211> 327

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 173<400> 173

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95 85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110 100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125 115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140 130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175 165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190 180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205 195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220 210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255 245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270 260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325 325

<210> 174<210> 174

<211> 448<211> 448

<212> PRT<212>PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 174<400> 174

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45 35 40 45

Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val Ala Thr Ile Ser Arg Ser Gly Ser Tyr Ser Tyr Phe Pro Asp Ser Val

50 55 60 50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95 85 90 95

Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser Trp Gly Ala Arg Leu Gly Gly Tyr Asp Glu Gly Asp Ala Met Asp Ser Trp Gly

100 105 110 100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

115 120 125 115 120 125

Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala

130 135 140 130 135 140

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

145 150 155 160 145 150 155 160

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

165 170 175 165 170 175

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

180 185 190 180 185 190

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His

195 200 205 195 200 205

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly

210 215 220 210 215 220

Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240 225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255 245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

260 265 270 260 265 270

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285 275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300 290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320 305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

325 330 335 325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350 340 345 350

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365 355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380 370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400 385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415 405 410 415

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430 420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445 435 440 445

<210> 175<210> 175

<211> 360<211> 360

<212> DNA<212> DNA

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 175<400> 175

gaggtgcagc tgctggagtc tggcggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60gaggtgcagc tgctggagtc tggcggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gattctggga 300ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gattctggga 300

gctacttcgt tatcggcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcgagc 360gctacttcgt tatcggcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcgagc 360

<210> 176<210> 176

<211> 336<211> 336

<212> DNA<212> DNA

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 176<400> 176

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120

cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180

cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240

caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttca 300caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttca 300

ggggtattcg gcggagggac caagctgacc gtccta 336ggggtattcg gcggagggac caagctgacc gtccta 336

<210> 177<210> 177

<211> 1347<211> 1347

<212> DNA<212> DNA

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 177<400> 177

gaggtgcagc tgctggagtc tggcggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60gaggtgcagc tgctggagtc tggcggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gattctggga 300ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gattctggga 300

gctacttcgt tatcggcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcgagc 360gctacttcgt tatcggcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcgagc 360

gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420gcgtcgacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 660

aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggca 720aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgctggggca 720

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080

atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200

ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320

cagaagagcc tctccctgtc cccgggt 1347cagaagagcc tctccctgtc cccggggt 1347

<210> 178<210> 178

<211> 654<211> 654

<212> DNA<212> DNA

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Синтетическая конструкция<223> Synthetic construction

<400> 178<400> 178

cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60

tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120

cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180

cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240

caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttca 300caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttca 300

ggggtattcg gcggagggac caagctgacc gtcctaggtc agcccaaggc tgccccctcg 360ggggtattcg gcggagggac caagctgacc gtcctaggtc agcccaaggc tgccccctcg 360

gtcactctgt tcccgccctc ctctgaggag cttcaagcca acaaggccac actggtgtgt 420gtcactctgt tcccgccctc ctctgaggag cttcaagcca acaaggccac actggtgtgt 420

ctcataagtg acttctaccc gggagccgtg acagtggcct ggaaggcaga tagcagcccc 480ctcataagtg acttctaccc gggagccgtg acagtggcct ggaaggcaga tagcagcccc 480

gtcaaggcgg gagtggagac caccacaccc tccaaacaaa gcaacaacaa gtacgcggcc 540gtcaaggcgg gagtggagac caccacaccc tccaaacaaa gcaacaacaa gtacgcggcc 540

agcagctatc tgagcctgac gcctgagcag tggaagtccc acagaagcta cagctgccag 600agcagctatc tgagcctgac gcctgagcag tggaagtccc acagaagcta cagctgccag 600

gtcacgcatg aagggagcac cgtggagaag acagtggccc ctacagaatg ttca 654gtcacgcatg aagggagcac cgtggagaag acagtggccc ctacagaatg ttca 654

<---<---

Claims (11)

1. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты или молекулы нуклеиновых кислот, содержащую(ие) одну или более чем одну нуклеотидную последовательность:1. An expression vector containing a nucleic acid molecule or nucleic acid molecules containing(s) one or more than one nucleotide sequence: (1) кодирующую VH, содержащую CDR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38, CDR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 39, и CDR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40, и VL, содержащую CDR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, CDR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, и CDR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35;(1) encoding VH, containing CDR-H1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 38, CDR-H2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 39, and CDR-H3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 40, and VL, containing CDR-L1 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 33, CDR-L2 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, and CDR-L3 containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 35; (2) кодирующую VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 63, и VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36;(2) encoding VH containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 63, and VL containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 36; (3) кодирующую тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:64, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37; или(3) encoding a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO:64, and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37; or (4) содержащую последовательность SEQ ID NO: 175, последовательность SEQ ID NO: 176, последовательность SEQ ID NO: 177, или последовательность SEQ ID NO: 178.(4) comprising the sequence SEQ ID NO: 175, the sequence SEQ ID NO: 176, the sequence SEQ ID NO: 177, or the sequence SEQ ID NO: 178. 2. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты или молекулы нуклеиновых кислот, содержащую(ие) одну или более чем одну нуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 64, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37.2. An expression vector containing a nucleic acid molecule or nucleic acid molecules containing(s) one or more nucleotide sequences encoding a heavy chain containing the amino acid sequence SEQ ID NO: 64, and a light chain containing the amino acid sequence SEQ ID NO: 37. 3. Экспрессирующая клетка-хозяин, содержащая вектор по любому из пп. 1-2.3. An expression host cell containing the vector according to any one of claims. 1-2. 4. Клетка-хозяин п. 3, где указанная клетка представляет собой клетку млекопитающих.4. The host cell of claim 3, wherein said cell is a mammalian cell. 5. Клетка-хозяин по п. 4, где указанная клетка-хозяин представляет собой клетку СНО, клетку HEK-293 или клетку Sp2.0.5. The host cell of claim 4, wherein said host cell is a CHO cell, a HEK-293 cell, or an Sp2.0 cell. 6. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, включающий культивирование клетки-хозяина по любому из пп. 3-5 при условиях, когда указанное антитело или антигенсвязывающий фрагмент экспрессируется указанной клеткой-хозяином.6. A method for producing an antibody or an antigen-binding fragment thereof, comprising culturing a host cell according to any one of claims. 3-5 under conditions wherein said antibody or antigen binding fragment is expressed by said host cell. 7. Способ по п. 6, дополнительно включающий выделение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.7. The method according to claim 6, further comprising isolating said antibody or an antigen-binding fragment thereof.
RU2019125599A 2015-08-19 2016-08-10 Antibodies against tissue factor pathway inhibitor and their use RU2815681C1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62/207,229 2015-08-19
US62/360,205 2016-07-08

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018104283A Division RU2705540C2 (en) 2015-08-19 2016-08-10 Antibodies against tissue factor pathway inhibitor and use thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2024106219A Division RU2024106219A (en) 2015-08-19 2024-03-11 Antibodies against tissue factor pathway inhibitor and their applications

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2815681C1 true RU2815681C1 (en) 2024-03-20

Family

ID=

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012001087A1 (en) * 2010-06-30 2012-01-05 Novo Nordisk A/S Antibodies that are capable of specifically binding tissue factor pathway inhibitor
WO2012135671A2 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 Bayer Healthcare Llc Monoclonal antibodies against tissue factor pathway inhibitor (tfpi)
RU2011129068A (en) * 2008-12-22 2013-01-27 Ново Нордиск А/С ANTIBODIES AGAINST INHIBITOR OF METABOLIC WAY OF TISSUE FACTOR

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2011129068A (en) * 2008-12-22 2013-01-27 Ново Нордиск А/С ANTIBODIES AGAINST INHIBITOR OF METABOLIC WAY OF TISSUE FACTOR
WO2012001087A1 (en) * 2010-06-30 2012-01-05 Novo Nordisk A/S Antibodies that are capable of specifically binding tissue factor pathway inhibitor
WO2012135671A2 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 Bayer Healthcare Llc Monoclonal antibodies against tissue factor pathway inhibitor (tfpi)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABUMIYA T. et al. "An anti-tissue factor pathway inhibitor (TFPI) monoclonal antibody recognized the third Kunitz domain (K3) of free-form TFPI but not lipoprotein-associated forms in plasma." The Journal of Biochemistry, 1995, 118(1)178-182. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2022201091B2 (en) Tissue factor pathway inhibitor antibodies and uses thereof
US10544212B2 (en) Anti-IL-33 antibodies, compositions, methods and uses thereof
AU2018221557B2 (en) Dosing schedule of a Wnt inhibitor and an anti-PD-1 antibody molecule in combination
AU2017258492A1 (en) Interferon beta antibodies and uses thereof
RU2815681C1 (en) Antibodies against tissue factor pathway inhibitor and their use
JP7745556B2 (en) CD137-binding molecules and uses thereof
US20240083991A1 (en) Anti-bmp9 antibodies and methods of use thereof
HK40065949A (en) Tissue factor pathway inhibitor antibodies and uses thereof
HK1253845B (en) Tissue factor pathway inhibitor antibodies and uses thereof
HK1253845A1 (en) Tissue factor pathway inhibitor antibodies and uses thereof