RU2812786C2

RU2812786C2 - Применение ролуперидона для лечения негативных симптомов и заболеваний, повышения нейропластичности и содействия нейрозащите

Info

Publication number: RU2812786C2
Application number: RU2021107094A
Authority: RU
Inventors: Реми Анри ЛЮТРИНГЕР
Original assignee: Минерва Ньюросайенсиз, Инк.
Priority date: 2018-08-21
Filing date: 2019-08-21
Publication date: 2024-02-02

Abstract

Изобретение относится к области медицины и фармакологии, а именно к применению ролуперидона. Раскрывается способ лечения или уменьшения амблиопии, включающий введение терапевтически эффективного количества ролуперидона, то есть соединения (I), или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата. 18 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 4 пр.

Description

Родственные Заявки

Эта заявка испрашивает приоритет и преимущество предварительной заявки США № 62/720 667, поданной 21 августа 2018 г., и предварительной заявки США № 62/831 535, поданной 9 апреля 2019 г., содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки во всей их полноте.

Область техники

Эта заявка относится к применению ролуперидона, то есть Соединения (I), и его солей, сольватов, фармацевтических композиций и лекарственных форм для использования в способах лечения негативных симптомов и расстройств (например, аутических расстройств, амблиопии, расстройств личности, черепно-мозговой травмы), а также увеличивает нейропластичность и способствует нейропротекции у субъектов, нуждающихся в этом.

Уровень техники

Нейротрофический фактор головного мозга (BDNF) является членом семейства белков, называемых нейротрофинами, которые играют важную роль в формировании и функционировании нервных связей. BDNF является наиболее широко распространенным нейротрофином в головном мозге и связан с нейрогенезом, нейропластичностью, нейропротекцией, регуляцией синапсов, обучением и памятью. (BDNF and schizophrenia: from neurodevelopment to neuronal plasticity, learning and memory, R. Nieto et al, Frontiers in Psychiatry, June 2013, Volume 4 Article 45.) Также описана причастность к шизофрении (Childhood trauma interacted with BDNF Val66Met influence schizophrenic symptoms, Xiao-Jiao Bi et al, Medicine. 97(13):e0160, MAR 2018.) и другим нарушениям мозговой деятельности. (Giacobbo et al. Molecular Neurobiology https://doi.org/10.1007/s12035-018-1283-6, published online 17-August-2018.)

Появляющаяся доказательная база указывает на связь между BDNF и расстройствами центральной нервной системы. Было показано, что эпигенетические изменения в гене BDNF связаны с патофизиологией шизофрении, а снижение экспрессии BDNF было выявлено в лобной коре и гиппокампе мозга у пациентов с шизофренией. (Effects of Antipsychotic Drugs on the Epigenetic Modification of Brain-Derived Neurotrophic Factor Gene Expression in the Hippocampi of Chronic Restraint Stress Rats, M. K. Seo et al., Neural Plasticity, Volume 2018, Article ID 2682037, 10 pages.)

Исследователи полагают, что уровни BDNF ниже нормы могут влиять на патогенез шизофрении, способствуя измененному развитию мозга и нарушениям нейропластичности и синаптической функции. Эти нарушения могут объяснять определенные морфологические и нейрохимические характеристики мозга пациентов с шизофренией. (BDNF and schizophrenia: from neurodevelopment to neuronal plasticity, learning and memory, R. Nieto et al, Frontiers in Psychiatry, June 2013, Volume 4 Article 45.)

Кроме того, было обнаружено, что функциональный полиморфизм гена BDNF взаимодействует с факторами окружающей среды при развитии психозов, включая шизофрению и биполярные расстройства. (Xiao-Jiao Bi et al, Medicine. 97(13):e0160, March, 2018.) Дополнительные исследования обнаружили связь между более высоким уровнем BDNF и улучшенной когнитивной функцией у больных шизофренией и улучшением нейропсихологической функции. Было показано, что BDNF защищает астроциты от гибели клеток посредством передачи сигналов TrkB-T1, оказывает антиоксидантное действие и индуцирует высвобождение нейропротективных факторов из астроцитов. (BDNF (Brain-Derived Neurotrophic Factor) уровни сыворотки у больных шизофренией с когнитивным дефицитом, (N. Utami et al., «BDNF (brain-derived neurotrophic factor) serum levels in schizophrenic patients with cognitive deficits», doi:10.1088/1755-1315/125/1/012181.)

Таким образом, BDNF играет решающую роль в развитии и пластичности мозга и в значительной степени причастен к некоторым психическим расстройствам. Было показано, что эпигенетические изменения в гене BDNF связаны с патофизиологией шизофрении, а снижение экспрессии BDNF было выявлено в лобной коре и гиппокампе мозга у пациентов с шизофренией.

Гидрохлорид ролуперидона, то есть Соединение (I), разрабатывается Minerva Neurosciences, Inc. (Waltham, MA) для лечения негативных симптомов у пациентов с шизофренией. Соединение (I) является потенциальным лекарственным препаратом с равноэффективной афинностью к 5-гидрокситриптамину-2A (5-HT_2A) и сигме 2 и, при более низких уровнях афинности к α1-адренергическим рецепторам. Соединение (I) не проявляет сродства к дофаминергическим, мускариновым, холинергическим и гистаминергическим рецепторам. Соединение (I) не имеет прямых дофаминергических постсинаптических блокирующих эффектов, которые, как известно, участвуют в некоторых побочных эффектах, таких как экстрапирамидные симптомы, седативный эффект, увеличение пролактина и увеличение веса.

Краткое содержание описания

Один аспект этой заявки относится к способу лечения или уменьшения по меньшей мере одного негативного симптома у субъекта, включающему введение терапевтически эффективного количества Соединения (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата субъекту.

В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома у субъекта.

В одном варианте введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома у субъекта.

В одном варианте осуществления позитивный симптом представляет собой галлюцинацию, бред, дезорганизованное мышление, двигательное расстройство или деперсонализацию.

В одном варианте осуществления негативный симптом представляет собой ангедонию, притупленный аффект, эмоциональную отчужденность, трудности в общении, пассивное/апатическое социальное отчуждение, трудности с абстрактным мышлением, отсутствие спонтанности или плавного течения беседы или стереотипное мышление.

В одном варианте осуществления субъект является шизофреником.

В одном варианте осуществления субъект не является шизофреником.

В одном варианте осуществления изобретения субъект страдает расстройством, выбранным из группы, состоящей из амблиопии, аутического расстройства, задержки умственного развития, органического расстройства личности, антисоциального расстройства личности, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства, шизоидного расстройства личности, посттравматического стрессового расстройства, шизотипического расстройства личности, параноидального расстройства личности, истерического расстройства личности, нарциссического расстройства личности, зависимого расстройства личности, тревожного расстройства личности, соматоформного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, генерализованного тревожного расстройства, социального тревожного расстройства, тревожного расстройства, вызванного разлукой, реактивного расстройства привязанностей, панического расстройства, расстройства деперсонализации, дереализационного расстройства, фобии, расстройства адаптации, аффективного расстройства, предменструального дисфорического расстройства, избирательного мутизма, обсессивно-компульсивного расстройства личности, черепно-мозговой травмы, синдрома дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальных кист, биполярного расстройства, каталепсии, энцефалити, болезни Хантингтона, инфекций (например, менингита), синдрома запертого человека, мигрени, рассеянного склероза, миелопатии или синдрома Туретта.

Один аспект этой заявки относится к способу лечения или уменьшения амблиопии у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение терапевтически эффективного количества Соединения (I),

Один аспект этой заявки относится к способу лечения аутического расстройства у субъекта, который в этом нуждается, включающему введение терапевтически эффективного количества Соединения (I),

В одном варианте аутическое расстройство представляет собой классический аутизм, синдром Аспергера, дезинтегративное расстройство детского возраста, синдром Ретта, общее расстройство развития неуточненное, синдром ломкой X-хромосомы или их комбинацию.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из способов, раскрытых в данном документе, где введение Соединения (I) увеличивает нейропластичность у субъекта по сравнению с субъектом, которому не вводили Соединение (I), или его фармацевтически приемлемую соль, или гидрат.

Дальнейший аспект этой заявки, который относится к любому из способов, раскрытых в данном документе, где введение Соединения (I) способствует нейрозащите или нейрональной регенерации у субъекта по сравнению с субъектом, которому не вводили Соединение (I), или фармацевтически приемлемую соль, или гидрат.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из способов, раскрытых в данном документе, где терапевтически эффективное количество Соединения (I) вводят субъекту один или два раза в сутки в течение 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев или дольше.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из раскрытых здесь способов, где субъекту также вводят антипсихотическое средство. В одном варианте осуществления антипсихотическое средство представляет собой типичное антипсихотическое средство, выбранное из группы, состоящей из галоперидола, локсапина, тиоридазина, молиндона, тиотиксена, флуфеназина, мезоридазина, трифлуоперазина, перфеназина и хлорпромазина. В одном варианте осуществления антипсихотическое средство представляет собой атипичное антипсихотическое средство, выбранное из группы, состоящей из рисперидона, оланзапина, клозапина, кветиапина, зипразидона, арипипразола, серитиндола, зотепина и пероспирона.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из способов, раскрытых в данном документе, в котором возраст субъекта составляет менее 50, 40, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12 или 11 лет.

Один из аспектов этой заявки относится к способу увеличения нейропластичности у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение эффективного количества Соединения (I),

В одном варианте реализации субъект не является шизофреником.

Один аспект данной заявки относится к способу усиления нейрозащиты у субъекта, нуждающегося в этом, причем способ включает приведение в контакт нейронной клетки с эффективным количеством Соединения (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата, где указанное приведение в контакт предотвращает или замедляет гибель нейронных клеток по сравнению с гибелью нейронных клеток, происходящей в отсутствие указанного контакта, или где указанное приведение в контакт способствует регенерации нервов путем стимуляции роста нейронов.

Один аспект этой заявки относится к способу увеличения экспрессии нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) в клетке, включающему приведение в контакт клетки с эффективным количеством Соединения (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата.

В одном варианте осуществления приведение в контакт происходит in vitro.

В одном варианте осуществления приведение в контакт происходит in vivo.

Один аспект этой заявки относится к способу увеличения экспрессии нейротрофического фактора линии глиальных клеток (GDNF) в клетке, включающему приведение в контакт клетки с эффективным количеством Соединения (I),

Один аспект этой заявки относится к способу лечения или уменьшения нарушения у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение терапевтически эффективного количества Соединения (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата субъекту, где расстройство выбрано из группы, состоящей из амблиопии, аутического расстройства, задержки умственного развития, органического расстройства личности, антисоциального расстройства личности, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства, шизоидного расстройства личности, посттравматического стрессового расстройства, шизотипического расстройства личности, параноидального расстройства личности, истерического расстройства личности, нарциссического расстройства личности, зависимого расстройства личности, тревожного расстройства личности, соматоформного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, генерализованного тревожного расстройства, социального тревожного расстройства, тревожного расстройства, вызванного разлукой, реактивного расстройства привязанностей, панического расстройства, расстройства деперсонализации, дереализационного расстройства, фобии, расстройства адаптации, аффективного расстройства, предменструального дисфорического расстройства, избирательного мутизма, обсессивно-компульсивного расстройства личности, черепно-мозговой травмы, синдрома дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальных кист, биполярного расстройства, каталепсии, энцефалита, болезни Хантингтона, инфекций (например, менингита), синдрома запертого человека, мигрени, рассеянного склероза, миелопатии и синдрома Туретта.

Один аспект этой заявки относится к терапевтически эффективному количеству Соединения (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в лечении или уменьшении по меньшей мере одного негативного симптома у субъекта.

В одном варианте осуществления использование Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома у субъекта.

В одном варианте применение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома у субъекта.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования при лечении или уменьшении амблиопии у субъекта, страдающего амблиопией.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата для применения при лечении аутического расстройства у субъекта, страдающего аутизмом. В одном варианте аутическое расстройство представляет собой классический аутизм, синдром Аспергера, дезинтегративное расстройство детского возраста, синдром Ретта, общее расстройство развития неуточненное, синдром ломкой X-хромосомы или их комбинацию.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, в котором использование Соединения (I) увеличивает нейропластичность у субъекта по сравнению с субъектом, у которого Соединение (I) не используется.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, в котором использование Соединения (I) способствует нейропротекции или нейрональной регенерации у субъекта по сравнению с субъектом, у которого Соединение (I) не используется.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, где терапевтически эффективное количество Соединения (I) вводят субъекту один или два раза в сутки в течение 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев 6 месяцев или дольше.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, где субъекту также вводят антипсихотическое средство. В одном варианте осуществления антипсихотическое средство представляет собой типичное антипсихотическое средство, выбранное из группы, состоящей из галоперидола, локсапина, тиоридазина, молиндона, тиотиксена, флуфеназина, мезоридазина, трифлуоперазина, перфеназина и хлорпромазина. В одном варианте осуществления антипсихотическое средство представляет собой атипичное антипсихотическое средство, выбранное из группы, состоящей из рисперидона, оланзапина, клозапина, кветиапина, зипразидона, арипипразола, серитиндола, зотепина и пероспирона.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, в котором возраст субъекта составляет менее 50, 40, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12 или 11 лет.

Один аспект этой заявки относится к эффективному количеству Соединения (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования для повышения нейропластичности у субъекта, нуждающегося в этом.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в стимулировании нейрозащиты у субъекта, нуждающегося в этом, включающий приведение в контакт нейронной клетки с эффективным количеством Соединения (I), при этом указанное приведение в контакт предотвращает или задерживает гибель нейронных клеток по сравнению с гибелью нейронных клеток, происходящее в отсутствие указанного контакта или при котором указанное приведение в контакт способствует регенерации нервов путем стимуляции роста нейронов.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата для использования для увеличения экспрессии нейротропного фактора головного мозга (BDNF) в клетке, включающий приведение в контакт клетки с эффективным количеством Соединения (I).

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрата для применения для увеличения экспрессии нейротропного фактора (GDNF) линии глиальных клеток в клетке, включающий приведение в контакт клетки с эффективным количеством Соединения (I).

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования при лечении или уменьшении расстройства у субъекта, нуждающегося в этом, при этом расстройство выбрано из группы, состоящей из амблиопии, аутического расстройства, задержки умственного развития, органического расстройства личности, антисоциального расстройства личности, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства, шизоидного расстройства личности, посттравматического стрессового расстройства, шизотипического расстройства личности, параноидального расстройства личности, истерического расстройства личности, нарциссического расстройства личности, зависимого расстройства личности, тревожного расстройства личности, соматоформного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, генерализованного тревожного расстройства, социального тревожного расстройства, тревожного расстройства, вызванного разлукой, реактивного расстройства привязанностей, панического расстройства, расстройства деперсонализации, дереализационного расстройства, фобии, расстройства адаптации, аффективного расстройства, предменструального дисфорического расстройства, избирательного мутизма, обсессивно-компульсивного расстройства личности, черепно-мозговой травмы, синдрома дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальных кист, биполярного расстройства, каталепсии, энцефалита, болезни Хантингтона, инфекций (например, менингита), синдрома запертого человека, мигрени, рассеянного склероза, миелопатии и синдрома Туретта.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для лечения или уменьшения по меньшей мере одного негативного симптома у субъекта.

В одном варианте осуществления, использование лекарственного препарата начинается до проявления первого позитивного симптома у субъекта.

В одном варианте осуществления использование лекарственного средства начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома у субъекта.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для лечения или уменьшения амблиопии у субъекта, страдающего амблиопией.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для лечения аутического расстройства у субъекта, страдающего аутическим расстройством. В одном варианте аутическое расстройство представляет собой классический аутизм, синдром Аспергера, дезинтегративное расстройство детского возраста, синдром Ретта, общее расстройство развития неуточненное, синдром ломкой X-хромосомы или их комбинацию.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, в котором использование лекарственного средства увеличивает нейропластичность у субъекта по сравнению с субъектом, где лекарство не использовалось.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, в котором использование лекарственного средства способствует нейрозащите или нейрональной регенерации у субъекта по сравнению с субъектом, где лекарство не использовалось.

Дополнительный аспект этой заявки, который относится к любому из описанных здесь применений, где лекарственное средство вводят субъекту один или два раза в сутки в течение 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев или дольше.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для повышения нейропластичности у субъекта, нуждающегося в этом.

или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для усиления нейрозащиты у субъекта, нуждающегося в этом, включающий приведение в контакт нейронной клетки с эффективным количеством лекарственного средства, и при этом указанное приведение в контакт предотвращает или задерживает гибель нейронных клеток относительно гибели нейронных клеток, происходящей в отсутствие указанного контакта, или при котором указанное приведение в контакт способствует регенерации нервов путем стимуляции роста нейронов.

Один аспект этой заявки относится к Соединению (I),

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для увеличения экспрессии нейротропного фактора головного мозга (BDNF) в клетке, включая приведение в контакт клетки с эффективным количеством лекарственного средства.

, или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для увеличения экспрессии нейротропного фактора глиальной клеточной линии (GDNF) в клетке, включая приведение в контакт клетки с эффективным количеством лекарственного средства.

или его фармацевтически приемлемой соли, или гидрату для использования в производстве лекарственного средства для лечения или уменьшения расстройства у субъекта, нуждающегося в этом, при этом расстройство выбрано из группы, состоящей из амблиопии, аутического расстройства, задержки умственного развития, органического расстройства личности, антисоциального расстройства личности, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства, шизоидного расстройства личности, посттравматического стрессового расстройства, шизотипического расстройства личности, параноидального расстройства личности, истерического расстройства личности, нарциссического расстройства личности, зависимого расстройства личности, тревожного расстройства личности, соматоформного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, генерализованного тревожного расстройства, социального тревожного расстройства, тревожного расстройства, вызванного разлукой, реактивного расстройства привязанностей, панического расстройства, расстройства деперсонализации, дереализационного расстройства, фобии, расстройства адаптации, аффективного расстройства, предменструального дисфорического расстройства, избирательного мутизма, обсессивно-компульсивного расстройства личности, черепно-мозговой травмы, синдрома дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальных кист, биполярного расстройства, каталепсии, энцефалита, болезни Хантингтона, инфекций (например, менингита), синдрома запертого человека, мигрени, рассеянного склероза, миелопатии и синдрома Туретта.

Краткое описание Фигур

Фиг.1: Влияние Соединения (I) на высвобождение BDNF первичными астроцитами крысы, измеренное с помощью ELISA in situ. Данные выражены в пг/мл (среднее значение ± стандартная ошибка среднего значения (sem); * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001; однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннета).

Фиг. 2: Влияние Соединения (I) на высвобождение BDNF первичными нейронами гиппокампа, измеренное in situ с помощью ELISA. Данные выражены в пг/мл (среднее ± среднеквадратичное; * p <0,05; ** p <0,01; *** p <0,001; однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннета).

Фиг. 3: Влияние Соединения (I) на высвобождение GDNF первичными астроцитами крысы, измеренное с помощью ELISA in situ. Данные выражены в пг/мл (среднее ± среднеквадратичное; * p <0,05; ** p <0,01; *** p <0,001; однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннета).

Фиг. 4: Влияние Соединения (I) на высвобождение BDNF астроцитами, измеренное qPCR. Данные выражены в кратном изменении (FC) по сравнению с контрольным состоянием (среднее значение ± sem; * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001; однофакторный дисперсионный анализ с последующим тестом Даннета). GA=глатирамера ацетат.

Подробное описание

BDNF, который является наиболее широко распространенным членом нейротрофинов в головном мозге, был связан с нейрогенезом, нейропластичностью, нейропротекцией, синаптической регуляцией, обучением и памятью. Нарушение регуляции BDNF было описано в патофизиологии шизофрении и некоторых других нейропсихиатрических расстройств. Результаты клинического исследования Фазы 2b показали статистически значимое преимущество обеих испытанных доз (32 мг и 64 мг) Соединения (I) по сравнению с плацебо в улучшении негативных симптомов при шизофрении. Наши настоящие результаты показывают, что Соединение (I) увеличивает высвобождение BDNF астроцитами и нейронами гиппокампа и высвобождение GDNF астроцитами. Кроме того, Соединение (I) способно усиливать экспрессию BDNF при концентрациях лекарственного средства, аналогичных тем, которые наблюдаются у человека при испытанных дозах. Следовательно, в дополнение к известным путям нейротрансмиттеров, на которые нацелено Соединение (I), особенно на серотонинергические 5-HT2A и сигма2 пути, воздействие Соединения (I) на BDNF и GDNF предполагает, что это соединение может иметь потенциал для модификации заболевания, нейропротекции, улучшения нейропластичности и лечения негативных симптомов у страдающих и не страдающих шизофренией субъектов, а также при лечении других заболеваний и расстройств.

Понимание механизма действия Соединения (I) потенциально может пролить свет на нейробиологию, лежащую в основе его клинических преимуществ. Его молекулярный профиль связывания показывает сильное сродство к рецепторам 5-HT_2A (K_i 7,5 нмоль/л) и рецепторам сигма₂ (K_i 8,2 нмоль/л) с 30-кратной селективностью по сравнению с рецепторами сигма₁(K_i 254 нмоль/л). Кроме того, имеется значительное сродство к альфа1-адренорецепторам (K_i 14,4 нмоль/л). Основная гипотеза предполагает, что гипофункция в определенных нейросетях может способствовать отсутствию синаптической пластичности, лежащей в основе патогенеза шизофрении и, в частности, негативных симптомов.

Следовательно, в дополнение к известным путям нейротрансмиттеров, на которые нацелено Соединение (I), в частности серотонинергическим 5HT_2A и сигма-2 путям, воздействие Соединения (I) на BDNF и GDNF предполагает, что это соединение может иметь потенциал для модификации заболевания и улучшенной нейропластичности.

Модуляция сигма-рецепторов, два известных подтипа которых это сигма 1 (Sig1R) и сигма 2_.(Sig2R), только недавно была исследована как возможная стратегия лечения расстройств центральной нервной системы (ЦНС). (Sahlholm, K. et al. «The dopamine stabilizers ACR16 and (-)-OSU6162 display nanomolar affinities at the σ-1 receptor.» Mol. Psychiatry. (2013);18(1):12-4.) Оба подтипа сигма-рецепторов экспрессируются в ЦНС и отличаются друг от друга на основании их сродства к разным лигандам и биологическим профилям. Sig2R, который был недавно клонирован (Alon, A. et al, «Identification of the gene that codes for the sigma 2 receptor» Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. Jul 3;114(27):7160-7165, 2017) и идентифицирован как трансмембранный белок 97 (TMEM97), участвует в пролиферации клеток, регуляции цитозольного кальция, переносе холестерина и гомеостазе. Sig2R уже давно ассоциируется с раком, и он все чаще участвует в клеточных процессах, связанных с различными расстройствами ЦНС, включая болезнь Альцгеймера, шизофрению, паническую атаку, боль и болезнь Ниманна-Пика.

Соединение (I), также известное как ролуперидон, гидрохлорид ролуперидона, MIN-101 и ранее известное как CYR-101 и MT-210, разрабатывается Minerva Neurosciences, Inc. (Уолтем, Массачусетс) для лечения негативных симптомов у пациентов, страдающих шизофренией. (см. патент США № 9732059, который полностью включен посредством ссылки). Соединение (I) имеет химическое название 1H-Изоиндол-1-он, 2-[[1-[2-(4-Фторфенил)-2-оксоэтил]-4-пиперидинил]метил]-2,3-дигидро-, гидрохлорид, гидрат (1:1:2). Структура свободного основания представляет собой:

.

Как раскрыто в патентах США №№ 9,458,130, 9,730,920 и 10,258,614, содержание которых полностью включено в настоящий документ, у пациентов, получавших Соединение (I), наблюдалось удлинение интервала QT, что, по-видимому, связано с уровнями Соединения (I) в плазме и, более конкретно, с метаболитом, идентифицированным как BFB-520. Эти патенты показывают, что удлинение интервала QT, вызванное введением Соединения (I), может быть уменьшено путем введения этого агента в составе с модифицированным высвобождением (MR), который обеспечивает максимальную концентрацию в плазме (C_max) Соединения (I) и BFB-520 ниже 80 нг/мл и 12 нг/мл соответственно.

В US 2016/0354357 раскрыты способы лечения нарушений, опосредованных рецептором сигма-2, включающие введение Соединения (I).

Все ссылки на Соединение (I) в данном документе включают все фармацевтически приемлемые соли и/или все сольваты (например, дигидрат гидрохлорида) и их альтернативные физические формы, если не указано иное. Все указанные здесь дозы основаны на молекулярной массе свободного основания Соединения (I), которая составляет 366,43 г/моль, а не на молекулярной массе его фармацевтически приемлемой соли или сольвата (например, дигидрата гидрохлорида) или любых вспомогательных веществ. в составе, если не указано иное.

Все количества компонента пероральной лекарственной формы, описанные в данном документе, которые указаны в процентах по массе, относятся к общей массе пероральной лекарственной формы, если не указано иное.

Термин «примерно» как часть количественного выражения, такого как «примерно X», включает любое значение, которое на 10% выше или ниже, чем X, а также включает любое числовое значение, которое находится между X-10% и X+10%. Так, например, вес около 40 г включает вес от 36 до 44 г.

«Введение» относится к введению агента, такого как Соединение (I), или его лекарственной формы, субъекту. Связанные термины «вводить» и «введение» (и грамматические эквиваленты) относятся как к прямому введению, которое может представлять собой введение субъекту медицинским работником или путем самостоятельного введения субъектом, так и/или к непрямому введению, которое может быть осуществлено в соответствии с назначением лекарственного средства, такого как лекарственная форма, описанная здесь. Например, врач, который инструктирует пациента самостоятельно вводить лекарство и/или дает пациенту рецепт на лекарство, вводит лекарство пациенту.

«BNSS» (англ.: Brief Negative Symptom Scale) - это краткая шкала негативных симптомов.

«Включающий» или «включает» применительно к конкретной лекарственной форме, композиции, применению, способу или процессу, описанным или заявленным в настоящем документе, означает, что лекарственная форма, композиция, применение, способ или процесс включают все перечисленные элементы в конкретном описании или формуле, но не исключает других элементов. «Состоит по существу из» и «состоящий по существу из» означает, что описанная или заявленная композиция, лекарственная форма, метод, применение или процесс не исключают другие материалы или этапы, которые не влияют существенно на указанные физические, фармакологические, фармакокинетические свойства или терапевтические эффекты композиции, лекарственной формы, метода, применения или процесса Термины «состоит из» и «состоящий из» означают исключение более чем следовых элементов других ингредиентов и существенных этапов способа или процесса.

Термины «контролируемое высвобождение» или «CR» ("Controlled release") в контексте настоящего описания в отношении пероральной лекарственной формы означают, что Соединение (I) высвобождается из лекарственной формы в соответствии с заранее определенным профилем, который может включать условия, предусматривающие когда и где происходит высвобождение после перорального приема и/или определенную скорость высвобождения в течение определенного периода времени.

Термин «агент с контролируемым высвобождением», используемый здесь в отношении пероральной лекарственной формы согласно описанию, относится к одному или нескольким веществам или материалам, которые модулируют высвобождение Соединения (I) из лекарственной формы. Агенты с контролируемым высвобождением могут быть материалами, которые являются органическими или неорганическими, встречающимися в природе или синтетическими, такими как полимерные материалы, триглицериды, производные триглицеридов, жирные кислоты и соли жирных кислот, тальк, борная кислота и коллоидный диоксид кремния.

«Аллель CYP2D6» относится к одной из более чем 100 названных версий гена CYP2D6, которые присутствуют в общей популяции и обычно подразделяются на одну из трех категорий: активная (функциональная); с пониженной активностью (частично активная или пониженная функция) и неактивная (нефункциональная).

Активные аллели CYP2D6 включают: *1, *2, *2A, *33, *35, *39, *48 и *53.

Аллели CYP2D6 с пониженной активностью включают: *9, *10, *17, *29, *41, *49, *50, *54, *55, *59, *69 и *72.

Неактивные аллели CYP2D6 включают: *3, *4, *5 (делеция), *6, *7, *8, *11, *12, *13, *14A, *14B, *15, *18, *19, *20, *21, *38, *40, *42, *44, *56, *56A, *56B и *68.

«Генотип CYP2D6 (EM) экстенсивного метаболизатора» применительно к субъекту означает, что субъект имеет CYP2D6, что приводит к нормальной метаболической активности CYP2D6. Генотипы CYP2D6 EM включают комбинации: (a) двух активных аллелей CYP2D6, (b) одного активного и одного с пониженной активностью аллеля CYP2D6 и (c) одного активного и одного неактивного аллеля CYP2D6.

«Генотип промежуточного метаболизатора (IM) CYP2D6» применительно к субъекту означает, что субъект имеет генотип CYP2D6, что приводит к снижению метаболической активности CYP2D6. Генотипы CYP2D6 IM включают комбинации: (а)одного неактивного и одного аллеля CYP2D6 со сниженной активностью; и (c) два аллеля CYP2D6 со сниженной активностью.

«Генотип CYP2D6 PM» применительно к субъекту означает, что субъект имеет положительный результат теста на генотип со слабым метаболизмом CYP2D6 и, таким образом, вероятно, не имеет активности CYP2D6. Генотип CYP2D6 PM - это 2 неактивных аллеля.

«Генотип CYP2D6 UM» применительно к субъекту означает, что субъект имеет положительный результат теста на генотип сверхбыстрого метаболизатора CYP2D6 и, таким образом, вероятно, имеет активность CYP2D6 выше средней. Генотип CYP2D6 UM состоит из 3 или более активных аллелей.

«Энтеросолюбильное покрытие», используемое здесь в отношении лекарственной формы настоящего описания, относится к pH-зависимому материалу, который окружает ядро, содержащее Соединение (I), и который остается практически неизменным в кислой среде желудка, но растворяется в pH среды кишечника.

В одном варианте осуществления в лекарственных формах описания наполнитель выбран из группы, состоящей из микрокристаллической целлюлозы, моногидрата лактозы, сахарозы, глюкозы и сорбита.

Используемый здесь термин «скользящий агент» относится к веществу, используемому для ускорения потока порошка за счет снижения межчастичного сцепления. В одном варианте осуществления в лекарственных формах описания скользящее вещество выбрано из группы, состоящей из безводного коллоидного кремнезема, крахмала и талька.

«Смазывающее вещество» в контексте настоящего описания относится к веществу, которое предотвращает склеивание и/или слипание ингредиентов в машинах, используемых при приготовлении лекарственных форм настоящего изобретения. В одном варианте осуществления в лекарственных формах настоящего изобретения смазывающее вещество выбрано из группы, состоящей из стеарата магния, стериновой кислоты и растительного стеарина.

«Состояние голодания» или «состояние натощак», используемые для описания субъекта, означают, что субъект не ел в течение по меньшей мере 4 часов до интересующей временной точки, такой как время введения Соединения (I) или его лекарственной формы. В одном из вариантов реализации субъект в состоянии натощак не ел по меньшей мере в течение 6, 8, 10 или 12 часов до введения Соединения (I) или его лекарственной формы.

«Состояние накормленности» или «состояние сытости», используемые для описания субъекта в данном документе, означают, что субъект ел менее чем за 4 часа до интересующей точки времени, такой как время введения Соединения (I) или его лекарственной формы. В одном из вариантов реализации субъект в сытом состоянии не ел по меньшей мере в течение 3, 2, 1 или 0,5 часа до введения Соединения (I) или его лекарственной формы.

«Гастроустойчивый» или «GR» применительно к пероральной лекарственной форме CR, описанной здесь, означает, что высвобождение Соединения (I) в желудке субъекта не должно превышать 5%, 2,5%, 1% или 0,5% от общего количества Соединения (I) в лекарственной форме.

«MIN-101» - это кодовое название Соединения (I) или гидрохлорида ролуперидона, то есть 1H-изоиндол-1-он, 2-[[1-[2-(4-фторфенил)-2-оксоэтил]-4-пиперидинил]метил]-2,3-дигидро-, гидрохлорида, гидрата (1:1:2), с альтернативным названием дигидрат гидрохлорида 2-{1-[2-(4-фторфенил)-2-оксоэтил]пиперидин-4-илметил}-2,3-дигидроизоиндол-1-она.

Термин «лекарственная форма для перорального применения» в контексте настоящего описания относится к фармацевтическому лекарственному продукту, который содержит определенное количество (дозу) Соединения (I) в качестве активного ингредиента или его фармацевтически приемлемой соли и/или сольвата, а также неактивных компонентов (наполнителей), составлен в особой конфигурации, подходящей для перорального введения, такой как таблетка или капсула. В одном варианте осуществления композиции имеют форму таблетки, на которой можно делать отметки..

«Фармацевтически приемлемая соль», как здесь используется по отношению к Соединению (I), означает солевую форму Соединения (I), а также гидраты солевой формы с одной или несколькими присутствующими молекулами воды. Такие соли и гидратированные формы сохраняют биологическую активность Соединения (I) и не являются нежелательными с биологической или иной точки зрения, т.е. проявляют минимальные токсикологические эффекты, если таковые имеются. В одном из вариантов реализации фармацевтически приемлемая соль Соединения (I) имеет одну молекулу HCl и две молекулы воды, то есть 1H-изоиндол-1-он, 2-[[1-[2-(4-фторфенил)-2-оксоэтил]-4-пиперидинил]метил]-2,3-дигидро-, гидрохлорид, гидрат (1:1:2).

«PANSS» ("Positive and Negative Syndrome Scale")- это шкала позитивных и негативных синдромов.

«Фармакокинетический параметр» означает измерение или характеристику, которая описывает фармакокинетические свойства интересующего соединения. Параметры PK, используемые здесь, определены ниже.

«AUC» - это общая площадь под кривой зависимости концентрации в плазме от времени, которая является мерой воздействия представляющего интерес соединения, и представляет собой интеграл кривой зависимости концентрации от времени после однократной дозы или в стабильном состоянии. AUC выражается в единицах нг·ч/мл (нг x ч/мл).

«AUC_(0-4H)» означает AUC от 0 до 4 часов после введения разовой дозы.

«AUC_(0-24H)» означает AUC от 0 до 24 часов после введения разовой дозы.

«AUC_last» означает AUC от момента времени 0 до последней поддающейся количественной оценке концентрации (C_last).

«AUC_(0-tau)» означает AUC от 0 часов до конца интервала дозирования.

«C_max» означает наблюдаемую максимальную (пиковую) концентрацию в плазме указанного соединения, такого как Соединение (I), , после введения дозы композиции, содержащей это соединение. В одном из вариантов осуществления C_max измеряют после 2 или более доз композиции. В одном из вариантов осуществления C_max измеряется, когда указанное соединение достигает устойчивого состояния.

«C_min» означает наблюдаемую минимальную концентрацию указанного соединения, такого как Соединение (I), в плазме после введения дозы композиции, содержащей это соединение. В одном из вариантов осуществления C_max измеряют после 2 или более доз композиции. В одном из вариантов осуществления C_max измеряется, когда указанное соединение достигает устойчивого состояния.

«C_ss» означает концентрацию в устойчивом состоянии.

«C_ave» означает среднюю концентрацию, которая представляет собой отношение AUC во времени.

«C_p» означает концентрацию в плазме определенного соединения, такого как Соединение (I), в любое время T после введения дозы композиции, содержащей соединение.

«C_p(last)» означает последний измеренный C_p со ссылкой на время сбора последнего из серии образцов крови для анализа на указанное соединение.

«C_p(T)» означает C_p в указанное время; таким образом, C_p(4H) и C_p(12H) представляют собой C_p через 4 часа и 24 часа соответственно.

«H» означает часы.

«PK» означает фармакокинетику(и).

«Устойчивое состояние» означает, что скорость абсорбции указанного представляющего интерес соединения, такого как Соединение (I), равна скорости выведения соединения.

«Шизофреник» относится к субъекту, у которого была диагностирована шизофрения или который страдает от нее. В одном варианте осуществления изобретения субъект, страдающий шизофренией также страдает расстройством, выбранным из группы, состоящей из амблиопии, аутического расстройства, задержки умственного развития, органического расстройства личности, антисоциального расстройства личности, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства, шизоидного расстройства личности, посттравматического стрессового расстройства, шизотипического расстройства личности, параноидального расстройства личности, истерического расстройства личности, нарциссического расстройства личности, зависимого расстройства личности, тревожного расстройства личности, соматоформного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, генерализованного тревожного расстройства, социального тревожного расстройства, тревожного расстройства, вызванного разлукой, реактивного расстройства привязанностей, панического расстройства, расстройства деперсонализации, дереализационного расстройства, фобии, расстройства адаптации, аффективного расстройства, предменструального дисфорического расстройства, избирательного мутизма, обсессивно-компульсивного расстройства личности, черепно-мозговой травмы, синдрома дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальных кист, биполярного расстройства, каталепсии, энцефалита, болезни Хантингтона, инфекций (например, менингита), синдрома запертого человека, мигрени, рассеянного склероза, миелопатии или синдрома Туретта.

«Субъект, не страдающий шизофренией», относится к субъекту, которому не был поставлен диагноз и/или который не страдает шизофренией. В одном варианте реализации субъект, не страдающий шизофренией, все еще страдает от негативных симптомов. В одном варианте осуществления у субъекта, не страдающего шизофренией, не было диагностировано психическое расстройство. В одном варианте осуществления изобретения субъект, не страдающий шизофренией страдает расстройством, выбранным из группы, состоящей из амблиопии, аутического расстройства, задержки умственного развития, органического расстройства личности, антисоциального расстройства личности, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства, шизоидного расстройства личности, посттравматического стрессового расстройства, шизотипического расстройства личности, параноидального расстройства личности, истерического расстройства личности, нарциссического расстройства личности, зависимого расстройства личности, тревожного расстройства личности, соматоформного расстройства, обсессивно-компульсивного расстройства, генерализованного тревожного расстройства, социального тревожного расстройства, тревожного расстройства, вызванного разлукой, реактивного расстройства привязанностей, панического расстройства, расстройства деперсонализации, дереализационного расстройства, фобии, расстройства адаптации, аффективного расстройства, предменструального дисфорического расстройства, избирательного мутизма, обсессивно-компульсивного расстройства личности, черепно-мозговой травмы, синдрома дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальных кист, биполярного расстройства, каталепсии, энцефалита, болезни Хантингтона, инфекций (например, менингита), синдрома запертого человека, мигрени, рассеянного склероза, миелопатии или синдрома Туретта.

«Тау» означает интервал дозирования (H). Например, для ежедневного приема тау составляет 24 часа,

T_max означает время достижения максимальной (или пиковой) концентрации указанного терапевтического соединения в плазме или сыворотке после введения разовой дозы композиции, содержащей соединение, и до введения второй дозы.

V_max означает максимальную скорость абсорбции (мг/ч).

«Терапевтически эффективное количество», используемое в данном документе в отношении терапевтического применения лекарственной формы, содержащей Соединение (I) или его фармацевтическую соль и/или сольват, означает количество свободного основания (Соединения (I)), которое достаточно для лечения, облегчения или предотвращения конкретного заболевания, симптома заболевания (например, негативный симптом), расстройства или состояния, или проявляет обнаруживаемый терапевтический или ингибирующий эффект. Эффект можно определить любым методом анализа, известным в данной области. Эффективное количество для конкретного субъекта может зависеть от массы тела, размера и состояния здоровья субъекта; характера и степени заболевания; и следует ли вводить субъекту дополнительные терапевтические средства. Терапевтически эффективные количества для данной ситуации могут быть определены с помощью обычных экспериментов, которые находятся в компетенции и оценке клинициста.

«Эффективное количество» при использовании в связи с Соединением (I) или его солью, гидратом или фармацевтической композицией относится к количеству, эффективному для улучшения нейропластичности или нейрозащиты.

«Лечить», «врачевание», «лечение» и аналогичные термины, используемые в данном документе по отношению к одному или нескольким указанным симптомам заболевания, должны включать ведение и уход за пациентом с целью улучшения одного или нескольких указанных симптомов, и включают введение соединения (I), его композиции или его лекарственной формы с такой частотой дозирования и в течение периода лечения, которые достаточны для предотвращения появления одного или нескольких симптомов, снижения частоты, интенсивности или тяжести одного или нескольких симптомов, задерживают или предотвращают развитие дополнительных симптомов, или любое сочетание этих целей лечения. В одном варианте осуществления эффект лечения соединением (I), его композицией или его лекарственной формой оценивается путем сравнения тяжести симптомов у субъекта на исходном уровне (например, до лечения) и после по меньшей мере одного периода лечения. В одном варианте осуществления период лечения составляет по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере две недели, по меньшей мере четыре недели, по меньшей мере шесть недель, по меньшей мере восемь недель, по меньшей мере 10 недель или по меньшей мере двенадцать недель или более. В одном из вариантов реализации симптомы, подлежащие лечению, представляют собой по меньшей мере один негативный симптом у пациента с шизофренией или не-шизофренией, лекарственная форма содержит 32 мг Соединения (I), частота приема составляет один раз в сутки, а период лечения составляет по меньшей мере восемь недель.

Соединение (I) может быть синтезировано с использованием стандартных методов и процедур синтеза для получения органических молекул и преобразований функциональных групп и манипуляций, включая использование защитных групп, как может быть получено из соответствующей научной литературы или из стандартных справочных учебников в данной области. Общепризнанные справочные учебники по органическому синтезу, хотя и не ограничиваются одним или несколькими источниками, включают: Smith, M.B.; March, J. March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure, 5^th ed.; John Wiley & Sons: New York, 2001; и Greene, T.W.; Wuts, P.G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd; John Wiley & Sons: New York, 1999. Способ получения Соединения (I) описан в патенте США № 7166617, содержание которого полностью включено в настоящий документ.

В одном из вариантов осуществления форма лекарственного вещества Соединения (I), используемая в любом из описанных здесь способов, представляет собой дигидрат гидрохлоридной соли Соединения (I), который имеет химическое название 1H-Изоиндол-1-он, 2-[[1-[2-(4-фторфенил)-2-оксоэтил]-4-пиперидинил]метил]-2,3-дигидро-, гидрохлорид, гидрат (1:1:2), который имеет молекулярную формулу C₂₂H₂₃FN₂O₂, HCl, 2H₂O и молекулярный вес 438,92. Количество этого лекарственного вещества, которое эквивалентно указанному количеству свободного основания, можно рассчитать, умножив указанное количество Соединения (I) на 1,2; таким образом, 38,4 мг этого лекарственного вещества эквивалентно 32,0 мг свободного основания Соединения (I).

Артикли «a» ипи «an» используются в этом описании для обозначения одного или более чем одного (то есть, по меньшей мере, одного) грамматического объекта статьи. Например, «элемент» означает один элемент или более чем один элемент.

Термин «и/или» используется в этом описании для обозначения «и» или «или», если не указано иное.

Термин «изомер» относится к солям и/или соединениям, которые имеют одинаковый состав и молекулярную массу, но отличаются по физическим и/или химическим свойствам. Структурное различие может заключаться в строении (геометрические изомеры) или в способности вращать плоскость поляризованного света (стереоизомеры). Что касается стереоизомеров, соли Соединения (I) могут иметь один или несколько асимметричных атомов углерода и могут встречаться в виде рацематов, рацемических смесей и в виде индивидуальных энантиомеров или диастереомеров.

Описание также включает фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество раскрытой соли Соединения (I) и фармацевтически приемлемый носитель. Типичные «фармацевтически приемлемые соли» включают, к примеру, водорастворимые и водонерастворимые соли, такие как ацетат, амсонат (4,4-диаминостильбен-2,2-дисульфонат), бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, бутират, кальций, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, цитрат, клавуляриат, дигидрохлорид, эдетат, эдисилат, эстолат, эзилат, фумерат, фьюнарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликоллиларсанилат, гексафторфосфат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, магний, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, аммониевая соль N-метилглюкамина, 3-гидрокси-2-нафтоат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат (1,1-метен-бис-2-гидрокси-3-нафтоат, эинбонат), пантотенат, фосфат/дифосфат , пикрат, полигалактуронат, пропионат, п-толуолсульфонат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, сульфосалицилат, сурамат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтиодид и валератные соли.

Термины «пациент» и «субъект» используются здесь взаимозаменяемо и относятся к млекопитающему, например, человеку, мыше, крысе, морской свинке, собаке, кошке, лошади, корове, свинье или нечеловеческому примату, например обезьяне, шимпанзе, бабуину или макаке-резусу.

В одном из вариантов субъектом является человек.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 50 лет.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 40 лет.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 30 лет.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 25 лет.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 21 лет.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 18 лет.

В одном из воплощений субъектом является человек моложе 15 лет.

В одном варианте реализации субъект является человеком младше 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 или 10 лет.

Термин «носитель», используемый в этом описании, охватывает носители, эксципиенты и разбавители и означает материал, композицию или носитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулирующий материал, участвующие в переносе или транспортировке фармацевтического агента из одного органа или части тела в другой орган или часть тела субъекта.

Термин «лечение» применительно к субъекту относится к улучшению по меньшей мере одного симптома расстройства у субъекта. Лечение включает выздоровление, улучшение или, по крайней мере, частичное улучшение состояния. Например, лечение включает лечение или улучшение по меньшей мере одного негативного симптома у шизофреника. Например, лечение включает лечение или улучшение по меньшей мере одного негативного симптома у субъекта, не страдающего шизофренией. Например, лечение включает лечение или улучшение по меньшей мере одного негативного симптома у субъекта не-шизофреника, страдающего одним из заболеваний или расстройств, описанных здесь. Например, амблиопию можно лечить, улучшая зрение амблиопичного глаза. При аутизме расстройство можно лечить путем уменьшения одного или нескольких симптомов раздражительности, летаргии и гиперактивности, неадекватного зрительного контакта и несоответствующей речи.

Термин «расстройство» используется в этом описании для обозначения и используется взаимозаменяемо с терминами заболевание, состояние или недуг, если не указано иное.

Термин «вводить», «введение» или «введение», используемые в этом описании, относятся либо к прямому введению Соединения (I), либо его соли, гидрата, композиции или лекарственной формы субъекту, либо к введению производного пролекарства или аналога Соединения (I), или его соли, гидрата, композиции или лекарственной формы субъекту, которые могут образовывать эквивалентное количество активной соли в организме субъекта.

«Атипичное антипсихотическое средство» включает, без ограничения, рисперидон, оланзапин, клозапин, кветиапин, зипразидон, арипипразол, серитиндол, зотепин и пероспирон.

«Типичное антипсихотическое средство» включает, без ограничения, галоперидол, локсапин, тиоридазин, молиндон, тиотиксен, флуфеназин, мезоридазин, трифтороперазин, перфеназин и хлорпромазин.

Другие примеры агентов, применимых в сочетании с Соединением (I) в любом из раскрытых здесь способов, включают, без ограничения, флуоксетин, циталопрам, эсциталопрам, венлафаксин, дулоксетин, бупропион.

Дозировки Соединения (I), композиции, содержащей соединение (I), или лекарственной формы, содержащей Соединение (I), для любого из способов и применений, описанных в данном документе, варьируются в зависимости от агента, возраста, веса и клинического состояния субъекта-реципиента, а также опыта и мнения клинициста или практикующего врача, назначающего терапию, среди других факторов, влияющих на выбранную дозировку.

Терапевтически эффективное количество Соединения (I) можно вводить один или несколько раз в течение дня в течение до 30 или более суток с последующими 1 или более днями неприменения Соединения (I). Схема лечения этого типа, т.е. введение Соединения (I) в последовательные дни с последующим отказом от введения Соединения (I) в последовательные дни, может называться циклом лечения. Цикл лечения можно повторять столько раз, сколько необходимо для достижения желаемого эффекта.

В одном варианте терапевтически эффективное количество Соединения (I) составляет 0,01, 0,05, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, или 500 мг введенных один, два, три, четыре или более раз в сутки в течение одного, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати, пятнадцати, тридцати последовательных дней или один, два, три, четыре или более раз в сутки в течение 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев или дольше.

В одном варианте осуществления терапевтически эффективное количество Соединения (I) вводят один или два раза в сутки хронически (то есть неограниченно).

Дозировки Соединения (I) также могут находиться в диапазоне от примерно 0,01 мг/кг в сутки до примерно 3000 мг/кг в сутки. В одном аспекте дозировки могут находиться в диапазоне от примерно 1 мг/кг в сутки до примерно 1000 мг/кг в сутки. В одном аспекте доза будет в диапазоне от примерно 0,1 мг/сутки до примерно 50 г/сутки; от примерно 0,1 мг/сутки до примерно 25 г/сутки; от примерно 0,1 мг/сутки до примерно 10 г/сутки; от примерно 0,1 мг до примерно 3 г/сутки; или от примерно 0,1 мг до примерно 1 г/сутки в разовой, разделенной или непрерывной дозе (эта доза может быть скорректирована в зависимости от веса пациента в кг, площади поверхности тела в м² и возраста в годах). Эффективное количество фармацевтического агента - это такое количество, которое обеспечивает объективно идентифицируемое улучшение, отмеченное клиницистом или другим квалифицированным наблюдателем.

Используемый здесь термин «эффективный способ дозирования» относится к количеству Соединения (I), обеспечивающему желаемый биологический эффект у субъекта или клетки.

Терапевтически эффективное количество Соединения (I) можно первоначально оценить либо в анализах клеточных культур, либо на животных моделях, обычно на крысах, мышах, кроликах, собаках или свиньях. Модель на животных также можно использовать для определения подходящего диапазона концентраций и пути введения. Такую информацию затем можно использовать для определения полезных доз и способов введения людям. Терапевтическая/профилактическая эффективность и токсичность могут быть определены стандартными фармацевтическими процедурами на культурах клеток или экспериментальных животных, например, ED₅₀ (терапевтически эффективная доза для 50% популяции) и LD₅₀ (летальная доза для 50% популяции). Соотношение доз между токсическим и терапевтическим эффектами представляет собой терапевтический индекс, который может быть выражен как отношение LD₅₀/ED₅₀. Предпочтительны фармацевтические композиции, которые демонстрируют высокие терапевтические индексы. Дозировка может варьироваться в этом диапазоне в зависимости от применяемой лекарственной формы, чувствительности пациента и пути введения.

Дозировку и введение регулируют для обеспечения достаточных уровней Соединения (I) или для поддержания желаемого эффекта. Факторы, которые могут быть приняты во внимание, включают серьезность болезненного состояния, общее состояние здоровья субъекта, возраст, вес и пол субъекта, диету, время и частоту введения, комбинацию(и) лекарств, чувствительность к реакции и переносимость/ответ на терапию. Фармацевтические композиции длительного действия можно вводить каждые 3-4 дня, каждую неделю или один раз каждые две недели в зависимости от периода полувыведения и скорости выведения конкретного состава.

Фармацевтические композиции, содержащие Соединение (I), могут быть изготовлены общеизвестным способом, например, посредством обычных процессов смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, улавливания или лиофилизации. Фармацевтические композиции могут быть составлены обычным способом с использованием одного или нескольких фармацевтически приемлемых носителей, содержащих эксципиенты и/или вспомогательные вещества, которые облегчают переработку Соединения (I) в препараты, которые можно использовать в фармацевтике. Конечно, подходящая композиция зависит от выбранного пути введения.

Фармацевтические композиции, подходящие для инъекций, включают стерильные водные растворы (если они водорастворимы) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Для внутривенного введения подходящие носители включают физиологический раствор, бактериостатическую воду, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) или фосфатно-солевой буфер (PBS). Во всех случаях композиция должна быть стерильной и жидкой до такой степени, чтобы ее можно было легко вводить шприцем. Он должен быть стабильным в условиях производства и хранения и должен быть защищен от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибки. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси. Подходящую текучесть можно поддерживать, например, за счет использования покрытия, такого как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсии и за счет использования поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях будет предпочтительно включать в композицию изотонические агенты, например сахара, многоатомные спирты, такие как маннит, сорбит, хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может быть достигнуто путем включения в композицию агента, замедляющего абсорбцию, например моностеарата алюминия и желатина.

Стерильные растворы для инъекций могут быть приготовлены путем включения Соединения (I) в необходимом количестве в соответствующий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, если требуется, с последующей стерилизацией фильтрованием. Обычно дисперсии готовят путем включения активного агента или соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций, способами приготовления являются вакуумная сушка и сублимационная сушка, которые дают порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из его раствора, предварительно стерилизованного фильтрованием.

Пероральные композиции обычно включают инертный разбавитель или пищевой фармацевтически приемлемый носитель. Их можно заключать в желатиновые капсулы или прессовать в таблетки. Для перорального терапевтического введения Соединение (I) может быть включено с эксципиентами и использоваться в форме таблеток, пастилок или капсул. Пероральные композиции также могут быть приготовлены с использованием жидкого носителя для использования в качестве жидкости для полоскания рта, при этом агент или соединение в жидком носителе применяют перорально с полосканием и отхаркиванием или проглатыванием. Фармацевтически совместимые связывающие агенты и/или адъювантные материалы могут быть включены как часть композиции. Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединений аналогичной природы: связующее, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; эксципиент, такой как крахмал или лактоза, разрыхлитель, такой как альгиновая кислота, примогель или кукурузный крахмал; лубрикант, такой как стеарат магния; скользящее вещество, такое как коллоидный диоксид кремния; подслащивающий агент, такой как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как перечная мята, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор.

Для введения путем ингаляции агенты или соединения доставляются в форме аэрозольного баллончика из находящегося под давлением контейнера или дозатора, который содержит подходящий пропеллент, например газ, такой как диоксид углерода, или распылитель.

Системное введение также может осуществляться через слизистые оболочки или через кожу. Для чреcслизистого или чрескожного введения в композиции используются пенетранты, подходящие для проницаемого барьера. Такие пенетранты обычно известны в данной области и включают, например, средства для трансмукозального введения, детергенты, соли желчных кислот и производные фузидовой кислоты. Чресслизистое введение может осуществляться с помощью назальных спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения активные агенты или соединения включают в состав мазей, мазей, гелей или кремов, как обычно известно в данной области.

В одном аспекте Соединение (I) получают с фармацевтически приемлемыми носителями, которые будут защищать агент или соединение от быстрого выведения из организма, например состав с контролируемым высвобождением, включая имплантаты и микрокапсулированные системы доставки. Могут использоваться биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы приготовления таких составов будут очевидны специалистам в данной области. Материалы также могут быть коммерчески получены от Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомные суспензии (включая липосомы, нацеленные на инфицированные клетки с помощью моноклональных антител к вирусным антигенам) также могут быть использованы в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Их можно приготовить способами, известными специалистам в данной области, например, как описано в патенте США № 4,522,811.

Особенно выгодно составлять композиции для перорального или парентерального введения в виде стандартной лекарственной формы для простоты введения и единообразия дозировки. Используемая здесь форма единичной дозировки относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для субъекта, подлежащего лечению; каждая единица содержит заранее определенное количество активного агента или соединения, рассчитанное на достижение желаемого терапевтического эффекта, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем. Спецификация стандартных лекарственных форм для применения диктуется и напрямую зависит от уникальных характеристик Соединения (I) и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут.

В одном из вариантов осуществления Соединение (I) вводят в любой из гастроустойчивых лекарственных форм с контролируемым высвобождением, описанных в US 2019/0038561, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Фармацевтические композиции могут включать совместные составы Соединения (I) с любым из агентов или соединений, описанных в данном документе, включая, например, типичный или атипичный антипсихотик.

Фармацевтические композиции могут быть включены в контейнер, упаковку или дозатор вместе с инструкциями по применению.

Режим дозирования с использованием описанной соли выбирается в соответствии с множеством факторов, включая тип, вид, возраст, вес, пол и состояние здоровья пациента; тяжесть состояния, подлежащего лечению; способ введения; почечную или печеночную функции пациента; и конкретно используемой описанной соли. Врач или ветеринар с обычной квалификацией в данной области может легко определить и прописать эффективное количество лекарственного средства, необходимое для предотвращения, противодействия или остановки прогрессирования состояния.

Иллюстративные способы введения Соединения (I) включают системное или местное введение, такое как пероральное, назальное, парентеральное, трансдермальное, подкожное, вагинальное, буккальное, ректальное или местное введение. В одном варианте осуществления Соединение (I) или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат вводят перорально.

Иллюстративные фармацевтические композиции представляют собой таблетки и желатиновые капсулы, содержащие соль Соединения (I) и фармацевтически приемлемый носитель, такой как а) разбавитель, к примеру, очищенная вода, триглицеридные масла, такие как гидрогенизированное или частично гидрогенизированное растительное масло, или их смеси, кукурузное масло, оливковое масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло, рыбий жир, такой как EPA или DHA, или их сложные эфиры или триглицериды или их смеси, омега-3 жирные кислоты или их производные, лактоза, декстроза, сахароза, маннитол, сорбит, целлюлоза, натрий, сахарин, глюкоза и/или глицин; b) лубрикант, к примеру, диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота, ее магниевая или кальциевая соль, олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и/или полиэтиленгликоль; также для таблеток; c) связующее, к примеру, алюмосиликат магния, крахмальная паста, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, карбонат магния, натуральные сахары, такие как глюкоза или бета-лактоза, кукурузные подсластители, натуральные и синтетические камеди, такие как акация, трагакант или натрия альгинат, воски и/или поливинилпирролидон, если желательно; d) разрыхлитель, к примеру, углеводы, агар, метилцеллюлоза, бентонит, ксантановая камедь, альгиновая кислота или ее натриевая соль, или шипучие смеси; e) абсорбент, краситель, ароматизатор и подсластитель; f) эмульгатор или диспергирующий агент, такой как Tween 80, Labrasol, HPMC, DOSS, капроил 909, labrafac, labrafil, peceol, транскутол, capmul MCM, capmul PG-12, captex 355, гелуцир, витамин E TGPS или другой приемлемый эмульгатор; и/или g) агент, усиливающий абсорбцию соли, такой как циклодекстрин, гидроксипропилциклодекстрин, PEG400 и/или PEG200.

Для приготовления фармацевтических композиций из Соединения (I) или его соли или гидрата инертные фармацевтически приемлемые носители могут быть твердыми или жидкими. Препараты в твердой форме включают порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, облатки и суппозитории. Порошки и таблетки могут содержать от примерно 5 до примерно 95 процентов активного ингредиента. Подходящие твердые носители известны в данной области, например карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар или лактоза. Таблетки, порошки, облатки и капсулы можно использовать в качестве твердых лекарственных форм, подходящих для перорального введения. Примеры фармацевтически приемлемых носителей и способов производства различных композиций можно найти в A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pa.

Препараты в жидкой форме включают растворы, суспензии и эмульсии. Например, водные или водно-пропиленгликолевые растворы для парентеральной инъекции или добавление подсластителей и веществ, придающих непрозрачность для пероральных растворов, суспензий и эмульсий. Препараты в жидкой форме могут также включать растворы для интраназального введения.

Жидкие, особенно инъекционные, композиции могут быть, например, приготовлены растворением, диспергированием и т.д. Например, описанная соль растворяется или смешивается с фармацевтически приемлемым растворителем, таким как, например, вода, физиологический раствор, водная декстроза, глицерин, этанол и т.п. с образованием изотонического раствора или суспензии для инъекций. Белки, такие как альбумин, хиломикронные частицы или белки сыворотки, могут быть использованы для солюбилизации раскрытых соединений.

Родительское инъекционное введение обычно используется для подкожных, внутримышечных или внутривенных инъекций и инфузий. Инъекционные препараты могут быть приготовлены в обычных формах, либо в виде жидких растворов, либо суспензий, либо твердых форм, подходящих для растворения в жидкости перед инъекцией.

Аэрозольные препараты, подходящие для ингаляции, могут включать растворы и твердые вещества в форме порошка, которые могут быть в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как инертный сжатый газ, например, азот.

Также включены препараты в твердой форме, которые предназначены для превращения незадолго до использования в препараты в жидкой форме для перорального или парентерального введения. Такие жидкие формы включают растворы, суспензии и эмульсии.

В зависимости от предполагаемого способа введения описанные композиции могут быть в твердой, полутвердой или жидкой лекарственной форме, такой как, например, инъекции, таблетки, суппозитории, пилюли, капсулы с замедленным высвобождением, эликсиры, настойки, эмульсии, сиропы, порошки, жидкости, суспензии и т.п., иногда в стандартных дозах и в соответствии с общепринятой фармацевтической практикой. Точно так же их можно также вводить внутривенно (как болюс, так и инфузия), внутрибрюшинно, подкожно или внутримышечно, и все они используют формы, хорошо известные специалистам в области фармацевтики.

Фармацевтические композиции могут быть приготовлены согласно обычным методам смешивания, гранулирования или нанесения покрытия, соответственно, и настоящие фармацевтические композиции могут содержать от примерно 0,1% до примерно 99%, от примерно 5% до примерно 90% или от примерно 1% до примерно 20% описанной соли по весу или объему.

ИЗЛОЖЕНИЕ примеров и результатов

Первичные культуры астроцитов получали из коры головного мозга новорожденных крыс и культивировали, как описано McCarthy et al., 1980.

После слияния астроциты помещали в 96-луночный иммунопланшет с плоским дном из поверхностного полистирола Nunc MaxiSorp, предварительно покрытый поли-D-лизином, в течение 30 мин и моноклональным антителом против BDNF в течение ночи при 4°C при плотности 30 000 клеток/лунка. Процедура была выполнена, как описано (Balkowiec and Katz, 2002) и (Malik et al., 2014; Su et al., 2012). Клетки инкубировали в течение 5 суток с или без тестируемого соединения придопидина в концентрации 1 мкМ в качестве контрольного соединения и Соединения (I) в концентрациях в диапазоне от 3 нМ до 1 мкМ. По окончании лекарственной обработки клетки тщательно промывали TBST (20 мМ Tris-HCl (pH 7,6), 150 мМ NaCl и 0,05% (об./об.) Tween 20). Затем планшет инкубировали с поликлональным антителом против BDNF человека в течение ночи и количественно определяли BDNF.

Первичные культуры нейронов гиппокампа получали от новорожденных крыс (крыс Wistar), как описано Balkowiec и Katz (2002). Нейроны гиппокампа высевали в 96-луночный планшет Nunc MaxiSorp с плоским дном из поверхностного полистирола, предварительно покрытый поли-D-лизином, в течение 30 минут моноклональным антителом против BDNF в течение ночи при 4°C и плотности 70000 клеток/лунку. Процедура была выполнена, как описано (Balkowiec and Katz, 2002) и (Malik et al., 2014; Su et al., 2012). Клетки инкубировали в течение 3 суток с или без тестируемого соединения придопидина в концентрации 1 мкМ в качестве контрольного соединения и Соединения (I) в концентрациях в диапазоне от 3 нМ до 1 мкМ. По окончании лекарственной обработки клетки тщательно промывали TBST (20 мМ Tris-HCl (pH 7,6), 150 мМ NaCl и 0,05% (об./об.) Tween 20). Затем планшет инкубировали с поликлональным антителом против BDNF человека в течение ночи и количественно определяли BDNF. В этом состоянии после 3 суток культивирования культура нейронов гиппокампа содержит менее 5% астроцитов.

Для анализа экспрессии BDNF с помощью количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (кПЦР) астроциты высевали в 24-луночные планшеты, предварительно покрытые поли-D-лизином. После 1 дня культивирования добавляли свежую бессывороточную среду, содержащую соединения, в течение 5 суток при 37 °C. По окончании инкубации было извлечено общее содержание РНК и проведена обратная транскрипция. Уровни экспрессии рассчитывали с использованием метода ΔCt, где уровень экспрессии интересующей мРНК задается с помощью 2-ΔCT с ΔCT=CT мРНК-мишени - эталонной мРНК CT (Gapdh) в том же образце.

Было обнаружено, что Соединение (I) имеет нейротрофические и нейропротекторные эффекты за счет усиления высвобождения и экспрессии BDNF и высвобождения нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF) в астроцитах и нейронах гиппокампа.

Эффекты Соединений (I) на высвобождение BDNF астроцитами были дозозависимыми, и доза 300 нМ вызвала максимальное увеличение высвобождения BDNF на 29,5% по сравнению с контролем. Уровень высвобождения BDNF после введения Соединения (I) в концентрации 300 нМ был выше, чем эффект, продемонстрированный придопидином в концентрации 1 мкм, эталонной молекулой, использованной в исследовании. (См. Пример 1.) Придопидин в настоящее время разрабатывается для лечения болезни Хантингтона (Придопидин активирует нейрозащитные пути, нарушенные при болезни Хантингтона, Disease, M. Geva et al, Human Molecular Genetics, 2016, Volume 25 Number 18, doi:10.1093/hmg/ddw238).

Эффекты Соединений (I) на высвобождение BDNF нейронами гиппокампа были дозозависимыми, и доза 300 нМ вызвала максимальное увеличение высвобождения BDNF на 27,5% по сравнению с контролем. Уровень высвобождения BDNF после введения Соединения (I) в дозе 300 нМ был выше, чем эффект, продемонстрированный придопидином в дозе 1 мкМ. (См. Пример 2.)

Эффекты Соединений (I) на высвобождение GDNF астроцитами были дозозависимыми, и доза 300 нМ вызвала максимальное увеличение высвобождения GDNF на 20,8% по сравнению с контролем. Уровень высвобождения GDNF после введения Соединения (I) в дозе 300 нМ был выше, чем эффект, продемонстрированный дексмедетомидином в дозе 1 мкм, эталонной молекулой, использованной в исследовании. (См. Пример 3.)

Эффекты Соединений (I) на экспрессию BDNF в астроцитах крыс показали картину ответа на U-дозу, и доза 3 нМ вызвала максимальное увеличение экспрессии BDNF на 81% по сравнению с контролем. Глатирамера ацетат привел к увеличению только на 10% при дозе 25 мкг/мл. (См. Пример 4.)

Наши настоящие результаты показывают, что Соединение (I) увеличивает высвобождение BDNF астроцитами и нейронами гиппокампа и высвобождение GDNF астроцитами. Более того, Соединение (I) способно усиливать экспрессию BDNF при концентрациях лекарственного средства, подобных тем, которые наблюдаются у человека при испытанных дозах. Эти данные, наряду с клиническими результатами, полученными в ходе исследования фазы 2b, предполагают способность Соединения (I) изменять общее течение шизофрении и других психических расстройств. Более того, помимо известных путей нейротрансмиттеров, нацеленных на Соединение (I), в частности, на серотонинергические пути 5-HT_2A и сигма2, действие Соединения (I) на BDNF и GDNF предполагает, что Соединение (I) может иметь потенциал для модификация болезни и улучшение нейропластичности.

НЕГАТИВНЫЕ СИМПТОМЫ

Негативные симптомы обычно относятся к снижению нормального функционирования и включают пять основных поддоменов: притупленный аффект (аффективное сглаживание, притупление выражения), алогия (бедность речи), амотивация (потеря воли), ангедония (снижение способности переживать или предвкушать удовольствие) и асоциальность (социальная изоляция). Хотя негативные симптомы являются хорошо задокументированным и интенсивно изученным аспектом шизофрении, этот класс симптомов был идентифицирован у пациентов с другими расстройствами, включая, например, болезнь Альцгеймера и другие виды деменции, особенно лобно-височную деменцию (ЛВД), расстройство аутистического спектра (ASD), биполярное расстройство (BPD), большое депрессивное расстройство (MDD), болезнь Паркинсона, височная эпилепсия, инсульт и черепно-мозговые травмы (TBI) (см., например, Boone et al, J. of Internat. Neuropsycol. Soc., 2003, Vol 9, pages 698-709; Bastiaansen, J. et al., J. Autism Dev. Disord. 2011, Vol 41:1256-1266; Getz, K. et al., Am. J. Psychiatry 2002, Vol 159:644-651; Winograd-Gurvich, C. et al., Brain Res. Bulletin, 2006, Vol. 70:312-321; Galynker et al., Neuropsychiatry Neuropsychol. Behav. Neurol. 2000, Vol 13:171-176; Galynker I, et al., J. Nerv. Ment. Dis 1997, Vol 185:616-621; Chaudhury, S., et al., Indian J. of Neurotrauma 2005, Vol 2:13-21; Ameen, S et al., German J. of Psychiatry 2007).

Действительно, было высказано предположение, что негативные симптомы являются общими для психических заболеваний в целом (Herbener and Harrow, Schizophrenia Bulletin 2001, Vol. 27: 527-537).

Кроме того, в отчетах нескольких популяционных исследований был сделан вывод, что от 20 до 22% населения в целом имеют один или несколько негативных симптомов, и что у большинства субъектов с негативными симптомами нет клинически диагностированного психического расстройства (Werbeloff, N. et al. ., PLoS ONE 2015, том 10: e0119852; Barrantes-Vidal, N., et al., Schizophr. Res. 2010, Vol 122:219-225).

В то время как позитивные симптомы представляют собой присутствие чего-то, чего обычно не происходит, негативные симптомы отражают отсутствие мыслей и поведения, которые в противном случае можно было бы ожидать, и, таким образом, отражают снижение или потерю нормальной функции или потерю или отсутствие нормального поведения.

Одним из аспектов этой заявки является способ лечения или уменьшения по меньшей мере одного негативного симптома у субъекта, включающий введение терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, его композиции или его лекарственной формы субъекту.

В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома.

В одном из вариантов реализации введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении негативного симптома, является шизофреником.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении негативного симптома, не является шизофреником.

В одном варианте осуществления у субъекта, нуждающегося в лечении негативного симптома, не было диагностировано психическое расстройство.

В одном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении негативного симптома, страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Негативный симптом - это один из пяти основных поддоменов негативных симптомов: притупленный аффект, алогия, амотивация, ангедония и асоциальность. Основные характеристики каждой подобласти описаны ниже.

Притупленный аффект (аффективное сглаживание, притупленное выражение) характеризуется пониженной интенсивностью и диапазоном эмоционального выражения, что проявляется в голосовых и невербальных способах общения, включая интонацию (просодию), выражение лица, жесты рук и движения тела.

Алогия (бедность речи) характеризуется уменьшением количества речи, уменьшением спонтанной речи и потерей беглости разговорной речи.

Амотивация (потеря воли) характеризуется недостатками в инициировании и поддержании целенаправленного поведения, такого как работа, учеба, спорт, личная гигиена и повседневные задачи, особенно когда требуются усилия (когнитивные или физические) и значительная организация, а также дефицит желания заниматься такой деятельностью. Этот поддомен связан с апатией и недостатком энергии.

Ангедония (снижение способности испытывать или ожидать удовольствия) характеризуется ожиданием вознаграждения, отдыха или другого приятного опыта («желание»), которое более заметно и постоянно ухудшается (предвосхищающая ангедония), чем оценка («симпатия») к переживанию самого себя (полная ангедония).

Асоциальность (социальная изоляция) характеризуется снижением интереса, мотивации и признательности к социальным взаимодействиям с другими, такими как семья и друзья, потерей интереса к интимным (сексуальным) отношениям независимо от каких-либо соматических проблем, а для ребенка может включать: потерю интереса к игре с другими детьми.

Одним из аспектов этой заявки является способ лечения или уменьшения аффекта уплощенного аффекта, аффективной тупости или притупления экспрессии у субъекта, включающий введение терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, его композиции или его лекарственной формы субъекту. В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома. В одном из вариантов реализации введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении уплощенного аффекта, аффективной тупости или притупления экспрессии, является шизофреником.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении уплощенного аффекта, аффективной тупости или притупления экспрессии, не является шизофреником.

В одном варианте осуществления у субъекта, нуждающегося в лечении уплощенного аффекта, аффективной тупости или притупления экспрессии, не было диагностировано психическое расстройство.

В одном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении уплощенного аффекта, аффективной тупости или притупленной экспрессии, страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Одним из аспектов этой заявки является способ лечения или уменьшения алогии у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, его композиции или его лекарственной формы. В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома. В одном из вариантов реализации введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома.

В одном из вариантов осуществления субъект, нуждающийся в лечении алогии, является шизофреником.

В одном из вариантов осуществления, нуждающийся в лечении алогии, не болеет шизофренией.

В одном варианте осуществления у субъекта, нуждающегося в лечении алогии, не было диагностировано психическое расстройство.

В одном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении алогии страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Одним из аспектов этой заявки является способ лечения или уменьшения амотивации у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, его композиции или его лекарственной формы. В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома. В одном из вариантов реализации введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении амотивации, является шизофреником.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении амотивации, не является шизофреником.

В одном варианте осуществления у субъекта, нуждающегося в лечении амотивации, не было диагностировано психическое расстройство.

В одном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении отсутствия мотивации страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Одним из аспектов этой заявки является способ лечения или уменьшения ангедонии у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, его композиции или его лекарственной формы. В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома. В одном из вариантов реализации введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении ангедонии, является шизофреником.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении ангедонии, не является шизофреником.

В одном варианте осуществления у субъекта, нуждающегося в лечении ангедонии, не было диагностировано психиатрическое расстройство.

В одном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении ангедонии страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Одним из аспектов этой заявки является способ лечения или уменьшения асоциальности у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, его композиции или его лекарственной формы. В одном варианте осуществления введение Соединения (I) начинается до проявления первого позитивного симптома. В одном из вариантов реализации введение Соединения (I) начинается одновременно с проявлением первого позитивного симптома.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении асоциальности, является шизофреником.

В одном варианте осуществления субъект, нуждающийся в лечении асоциальности, не является шизофреником.

В одном варианте осуществления у субъекта, нуждающегося в лечении асоциальности, не было диагностировано психиатрическое расстройство.

В одном варианте осуществления изобретения субъект, нуждающийся в лечении от асоциальности, страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Тяжесть негативных симптомов, а также ухудшение или улучшение этих симптомов можно оценить по любой из различных медицинских шкал, известных в данной области. К примеру, шкала позитивных и негативных синдромов (PANSS) и шкала оценки негативных симптомов (SANS). Подробное описание PANSS включено в US 2019/0216793, который включен сюда посредством ссылки.

ПОЗИТИВНЫЕ СИМПТОМЫ

Позитивные симптомы при шизофрении и других психических и неврологических расстройствах, включая описанные здесь, могут включать переживание чего-то в сознании, чего обычно не должно быть. Например, галлюцинации и иллюзии представляют собой представления или убеждения, которые обычно не следует испытывать. Помимо галлюцинаций и бреда, у больных шизофренией часто наблюдаются заметные нарушения логического процесса мысли. В частности, психотические мыслительные процессы обычно расплывчаты, дезорганизованы, нелогичны или причудливы. Эти нарушения в мыслительном процессе часто вызывают наблюдаемые модели поведения, которые также являются дезорганизованными и причудливыми. Серьезные нарушения содержания мысли и процессов, которые составляют позитивные симптомы, часто являются наиболее узнаваемыми и яркими чертами шизофрении и других психических и неврологических расстройств.

В одном варианте осуществления упомянутый здесь позитивный симптом включает галлюцинацию, бред, дезорганизованное мышление, двигательное расстройство или деперсонализацию. В одном варианте осуществления субъект, страдающий от позитивного симптома, является шизофреником. В одном варианте осуществления субъект, страдающий от позитивного симптома, не является шизофреником. В одном варианте реализации субъекту, страдающему от позитивного симптома, не был поставлен диагноз психического расстройства. В одном варианте осуществления изобретения субъект, страдающий от позитивного симптома, также страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Тяжесть позитивных симптомов, а также ухудшение или улучшение этих симптомов можно оценить по любой из различных медицинских шкал, известных в данной области. К примеру, шкала позитивных и негативных синдромов (PANSS) и шкала оценки позитивных симптомов (SANS). Подробное описание PANSS включено в US 2019/0216793, который включен сюда посредством ссылки.

Нейропластичность

Нейропластичность (также называемая пластичностью мозга или кортикальной пластичностью) - это способность нервной системы изменять или реагировать на внутренние или внешние раздражители путем реорганизации своей структуры, функций и связей. Считается, что нейропластичность - это клеточный механизм, лежащий в основе обучения и памяти (Harnessing neuroplasticity for clinical applications. Cramer, S. C. et al. Brain. 2011; 134 (Pt. 6): 1591-609). Нейропластичность - это процесс, лежащий в основе нейрогенеза и играющий ключевую роль в процессах обучения и памяти. Были проведены исследования молекулярных и клеточных механизмов, лежащих в основе нейропластических реакций в обучении и памяти, а также тревожности, депрессии, аллодинии, невропатической боли и злоупотребления наркотиками, которые являются одними из наиболее интересных областей исследований в области нейробиологии. (Enciu, A. M. et al. BMC Neurology 2011, 11: 75; Caroni, P. et al. Nat Rev Neurosci 2012, 13(7): 478-90; Carlson, P. J. et al. NeuroRx 2006, 3(1): 22-41; Disner, S. G. et al. Nat Rev Neurosci 2011, 12(8): 467-77; Latremoliere, A. and Woolf, C. J. J Pain 2009, 10(9): 895-26; Madsen, H. B. et al. Front. Mol. Neurosci. 2012, 5: 99). Также было продемонстрировано, что BDNF играет роль медиатора нейропластичности при биполярном расстройстве (Grande, I. et al. Psychiatry Investig. 2010; 7(4): 243-250.)

Нейропластические изменения наблюдаются при большом количестве заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера; боковой амиотрофический склероз; синдром Ангельмана; синдром Аспергера; аутичные расстройства; биполярное расстройство; повреждения головного мозга; болезнь Крейтцфельдта-Якоба; депрессия; синдром Дауна; эпилепсия; синдром ломкой X-хромосомы; атаксия Фридриха; лобно-височная деменция; лобно-височная долевая дегенерация; болезнь Хантингтона; болезнь телец Леви; рассеянный склероз; множественная системная атрофия; болезнь Паркинсона; болезнь Пика; посттравматические стрессовые расстройства; прионные расстройства; синдром Ретта; шизофрения; спинальная и бульбарная мышечная атрофия; повреждения спинного мозга; спиноцеребеллярная атаксия; апоплексия головного мозга; надъядерный паралич; прогрессирующий и туберозный склероз.

Необходимы фармакотерапевтические средства для повышения нейропластичности посредством молекулярных манипуляций с различными клеточными и синаптическими путями, поскольку в настоящее время были достигнуты лишь умеренные или небольшие преимущества при лечении заболеваний, описанных здесь.

Здесь показано, что Cоединение (I) значительно увеличивает высвобождение BDNF и GDNF в астроцитах крыс и культивируемых нейронах гиппокампа головного мозга дозозависимым образом. Также показано, что Cоединение (I) усиливает экспрессию BDNF в астроцитах крыс. Эта активность делает Cоединение (I) обнадеживающим кандидатом в качестве промотора нейропластичности, пригодного для улучшения консолидации памяти и обучения, а также при заболеваниях и/или расстройствах, связанных с когнитивным дефицитом, включая, к примеру, любое из заболеваний, описанных в данном документе.

Одним из аспектов этой заявки является использование Соединения (I), его композиции или его дозированной формы в способе стимулирования или повышения нейропластичности у субъекта, нуждающегося в этом. В одном варианте осуществления субъект является шизофреником. В одном варианте осуществления субъект не является шизофреником. В одном варианте осуществления у субъекта не было диагностировано психическое расстройство. В одном варианте осуществления изобретения субъект страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

НЕЙРОЗАЩИТА

Нейрозащита - это относительное сохранение структуры и/или функции нейронов. (Casson et al. Clinical and Experimental Ophthalmology, 2012, 40 (4): 350-57.)

Здесь показано, что Cоединение (I) значительно увеличивает высвобождение BDNF и GDNF в астроцитах крыс и культивируемых нейронах гиппокампа головного мозга дозозависимым образом. Также показано, что Cоединение (I) усиливает экспрессию BDNF в астроцитах крыс. Эта активность делает Соединение (I) обнадеживающим кандидатом в качестве нейропротекторного промотора, применимого для улучшения консолидации памяти и обучения, а также при заболеваниях и/или расстройствах, связанных с когнитивными нарушениями, включая, к примеру, любое из заболеваний, описанных в данном документе.

Одним из аспектов этой заявки является использование Соединения (I), его композиции или его лекарственной формы в способе или способствовании нейрозащиты у субъекта, нуждающегося в этом. В одном варианте осуществления способ включает приведение в контакт Соединения (I) с нейронной клеткой, где указанное приведение в контакт предотвращает или задерживает гибель нейронных клеток по сравнению с гибелью нейронных клеток, происходящей в отсутствие указанного контакта. В одном варианте осуществления приведение в контакт способствует регенерации нервов за счет стимуляции роста нейронов. В одном из вариантов осуществления субъект является шизофреником. В одном варианте осуществления субъект не является шизофреником. В одном варианте осуществления у субъекта не было диагностировано психическое расстройство. В одном варианте осуществления изобретения субъект страдает амблиопией, аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Используемый здесь термин «способствует нейрозащите» относится к условиям, при которых гибель нейронных клеток (некротическая, апоптотическая или иная) предотвращается или уменьшается, к примеру, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или более, вплоть до 100% (полная защита) в присутствии Соединения (I) или его соли, сольвата, или его композиции по сравнению с отсутствием Соединения (I) или его соли, сольвата или композиции. В одном варианте гибель нейронных клеток снижается по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз, по меньшей мере в 20 раз или более в присутствии Соединения (I) или его соли, сольвата, или композиции по сравнению с отсутствием Соединения (I) или его соли, сольвата или композиции.

В одном варианте осуществления термин «способствует нейрозащите» также относится к условиям, при которых рост нейронных клеток, удлинение аксонов, пролиферация нейронов или функциональная организация увеличиваются по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или более, до включительно, к примеру, по меньшей мере 1 раза, по меньшей мере 2 раз, по меньшей мере 3 раз, по меньшей мере 5 раз, по меньшей мере, 10 раз, по меньшей мере 20 раз или более в присутствии Соединения (I) или его соли, сольвата или композиции по сравнению с отсутствием Соединения (I) или его соли, сольвата или композиции.

Воздействия нейрозащиты можно оценить с помощью любого анализа, известного в данной области техники, к примеру, гибели нервных клеток, разрастания нервной ткани или как описано в патенте США № 10 286032, который включен в настоящее описание в качестве ссылки.

Нарушения памяти и способности к обучению

Здесь показано, что Соединение (I) значительно увеличивает высвобождение BDNF и GDNF в астроцитах крыс и культивируемых нейронах гиппокампа головного мозга дозозависимым образом. Также показано, что Соединение (I) усиливает экспрессию BDNF в астроцитах крыс. Эта активность делает Соединение (I) перспективным кандидатом для улучшения консолидации памяти и обучения и для использования при лечении заболеваний и/или расстройств, связанных с когнитивным дефицитом, включая, к примеру, лечение заболеваний нервной системы и/или лечение нарушений развития, поведения и/или психических расстройств, связанных с когнитивными нарушениями, в частности нарушений обучения и памяти. Неограничивающими примерами таких заболеваний и/или расстройств являются синдром Дауна, синдром Ангельмана, синдром Ретта, аутистические расстройства, синдром Аспергера, синдром ломкой X-хромосомы, депрессия, биполярное расстройство, шизофрения, церебральная деменция, посттравматические стрессовые расстройства, болезнь Пика и нарушения сна, боковой амиотрофический склероз, лобно-височная деменция и атаксия Фридриха, невропатия, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона, аутические расстройства, синдром Дауна, синдром ломкой X-хромосомы и синдром Ретта.

АМБЛИОПИЯ

Амблиопия - это состояние зрительной системы, при котором один глаз не может развить нормальный уровень остроты зрения в период развития зрения. Амблиопия может возникать у субъектов, страдающих косоглазием (косоглазие) или анизометропией (когда оба глаза имеют разные рефракционные аномалии, оставляя один глаз расфокусированным), или их комбинацией (смешанная амблиопия). Амблиопия также может возникнуть из-за депривации (к примеру, в результате катаракты). Плохое зрение, вызванное амблиопией, не всегда устраняется даже после лечения основного заболевания.

Амблиопия - распространенное детское заболевание, поражающее, возможно, до 2-3 процентов населения, и может перейти во взрослую жизнь, если ее не лечить. Хотя большинство людей могут справиться с синдромом ленивого глаза, у них вполне может быть ограниченная или нет бинокулярная функция, и это может поставить под угрозу их способность выполнять определенные сложные задачи, такие как управление самолетом или поездом. Кроме того, люди с одним амблиопическим глазом, у которых поврежден «нормальный» глаз, могут быть фактически слепыми.

Поле зрения человека можно разделить на периферическое и центральное зрение. При амблиопии периферическое зрение в норме, но имеется дефект центрального зрения со сниженной чувствительностью к обнаружению стимулов с высокой пространственной частотой, что отражается в снижении остроты зрения и наличии центральной области пониженной зрительной чувствительности (скотома).

Здесь показано, что Cоединение (I) значительно увеличивает высвобождение BDNF и GDNF в астроцитах крыс и культивируемых нейронах гиппокампа головного мозга дозозависимым образом. Также показано, что Cоединение (I) усиливает экспрессию BDNF в астроцитах крыс. Эта активность делает Соединение (I) многообещающим кандидатом для лечения амблиопии.

В одном аспекте эта заявка относится к способу лечения амблиопии у субъекта, который в этом нуждается, включающему введение терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, или его композиции или лекарственной формы. В одном варианте осуществления субъект также является шизофреником. В одном варианте осуществления субъект не является шизофреником. В одном варианте осуществления у субъекта не было диагностировано психическое расстройство. В одном варианте осуществления изобретения субъект также страдает аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальнфым дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

АУТИЧЕСКИЕ РАЙТРОЙСТВА

Аутические расстройства представляют собой тяжелые нейроповеденческие синдромы, которые считаются наследственными, хотя считается, что факторы окружающей среды способствуют возникновению по крайней мере некоторых аутических расстройств. Аутические расстройства обычно вызывают серьезные дефекты восприятия, познания, исполнительных функций и регуляции движения. Хотя эти эффекты различаются между типами аутизма, аномалии языка и социальных навыков широко распространены при всех типах аутических расстройств.

Механизмы, лежащие в основе аутических расстройств, плохо изучены, но пользуется популярностью гипотеза, согласно которой аутизм разрушает нервные системы, вызывая ненормальный баланс отношения возбуждения к торможению, возможно, связанный с хронически повышенной активностью нейронов без гибели клеток. К примеру, синдром ломкой X-хромосомы - это тип аутического расстройства, возникающий в результате мутаций в нетранслируемой области гена FMR1 на Х-хромосоме. Этот ген кодирует белок, необходимый для нормального развития нервной системы, и мутации предотвращают экспрессию этого белка.

Здесь показано, что Соединение (I) значительно увеличивает высвобождение BDNF и GDNF в астроцитах крыс и культивируемых нейронах гиппокампа головного мозга дозозависимым образом. Также показано, что Соединение (I) усиливает экспрессию BDNF в астроцитах крыс. Эта активность делает Соединение (I) многообещающим кандидатом для лечения аутических расстройств.

В одном аспекте эта заявка относится к способу лечения аутического расстройства у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение терапевтически эффективного количества Соединения (I) или его фармацевтически приемлемой соли или гидрата, или его композиции или лекарственной формы.

В одном варианте осуществления аутизмом является классический аутизм, синдром Аспергера, дезинтегративное расстройство детского возраста, синдром Ретта, общее расстройство развития неуточненное, синдром ломкой X-хромосомы и их комбинации. В одном из осуществлений субъект также является шизофреником. В одном варианте осуществления субъект не является шизофреником. В одном варианте осуществления у субъекта не было диагностировано психическое расстройство. В одном варианте осуществления изобретения субъект также страдает задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, инфекцией (например, менингитом), синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

Примеры

Описание дополнительно проиллюстрировано следующими примерами и схемами синтеза, которые не следует истолковывать как ограничение этого описания по объему или смыслу конкретными описанными здесь процедурами. Следует понимать, что примеры представлены для иллюстрации определенных вариантов осуществления и что этим не предполагается ограничение объема описания. Кроме того, следует понимать, что можно прибегнуть к различным другим вариантам осуществления, модификациям и их эквивалентам, которые могут быть предложены квалифицированными специалистами в данной области техники без отклонения от сущности настоящего описания и/или объема прилагаемой формулы изобретения.

Пример 1. Воздействие Соединения (I) на высвобождение BDNF в астроцитах крыс.

Протокол эксперимента - In situ ELISA на первичных астроцитах

Первичная культура астроцитов крыс

Смешанные глиальные клетки крыс культивировали, как описано McCarthy et al. Первичные глиальные клетки крыс получали из кортикального слоя новорожденных крыс Вистара (1 сутки). Вкратце, мозговые оболочки и кровеносные сосуды коры головного мозга мышей удаляли и помещали в ледяную среду Лейбовица (L15; PanBiotech, ссылка P04-27055, серия 4511117), содержащую 2% пенициллин-стрептомицина (PS; PanBiotech, ссылка P06-07100, серия 2110917) и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA; PanBiotech, ссылка P10-023100, серия, 9610717) при 37°C в течение 10 минут). Ткани диссоциировали с 0,25% трипсин-EDTA (PanBiotech, ссылка P10-023100, серия 8970318) при 37°C в течение 10 мин. Затем клетки подвергали дополнительной инкубации в течение 15 минут. при 37°C в присутствии дезоксирибонуклеазы I (0,1 мг/мл Panbiotech, ссылка: P60-37780100, серия: H140508). Затем клетки осаждали центрифугированием (5 мин при 1200 об/мин) и трипсинизацию останавливали добавлением DMEM (PanBiotech, ссылка P04-03600, серия 8420517) с 10% FCS (Fischer, ссылка 10270106, серия 41A0940K), 1 мМ Na/пируват (PanBiotech, ссылка: P04-43100, серия 3470914). Суспензию клеток механически диссоциировали и фильтровали через нейлоновые сетки диаметром 40 мкм (BD Falcon, ссылка: 352340).

Клетки собирали центрифугированием при 1200 об/мин в течение 10 мин, ресуспендировали в культуральной среде и затем помещали в культуральные колбы (Dutscher, ссылка: 690175). Клетки высевали при плотности 1.25×10⁵клеток/см² и культивировали в 5% CO₂ при 37 °C. Среду меняли 3 раза в неделю.

При конфлюэнтности астроциты высевали в 96-луночный поверхностный полистироловый планшет с плоским дном Nunc MaxiSorp, предварительно покрытый поли-D-лизином в течение 30 минут (Sigma, cсылка: P7886, серия: SLBS8705) и моноклональным антителом против BDNF в течение ночи при 4°C при плотности 30 000 клеток/лунку. (Balkowiec and Katz «Cellular Mechanisms Regulating Activity-Dependent Release of Native Brain-Derived Neurotrophic Factor from Hippocampal Neurons» J. Neuroscience (2002) 22(23):10399-10407; Malik M., et al. «The Effects of Sigma-1 Receptor Selective Ligands on Muscarinic Receptor Antagonist Induced Cognitive Deficits in Mice» Br J of Pharmacology, (2015) 172(10):2519-31; Su, C. et al. «Progesterone increases the release of brain-derived neurotrophic factor from glia via progesterone receptor membrane component 1 (Pgrmc1)-dependent ERK5 signaling», Endocrinology (2012) 153(9):4389-4400. После 2 часов инкубации с культуральной средой для удаления любых остатков промывочного раствора ELISA и инкубации для обеспечения прикрепления клеток к планшету, клетки инкубировали в следующих условиях:

Астроциты инкубировали 5 суток с контрольной средой

Астроциты инкубировали 5 суток с Соединением (I) в концентрации 1 мкМ, 300 нМ, 100 нМ, 30 нМ и 10 нМ.

Астроциты инкубировали 5 суток с придопидином в концентрации 1 мкМ.

По окончании лекарственной обработки клетки тщательно промывали TBST (20 мМ Tris-HCl (pH 7,6), 150 мМ NaCl и 0,05% (об./об.) Tween 20). Затем планшет инкубировали с поликлональным антителом античеловеческого BDNF в течение ночи. Количество специфически связанного поликлонального антитела, которое при воздействии хромогенного субстрата (реагент TMB; Promega) меняет цвет пропорционально количеству BDNF, присутствующему в образце. Интенсивность цвета определяли количественно путем измерения оптической плотности при 450 нм. Стандарты BDNF в диапазоне концентраций от 0 до 500 пг/мл добавляли в параллельные лунки в той же среде, что и нейроны гиппокампа.

Результаты

Тест ELISA in situ, основанный на культивированных астроцитах, показал, что придопидин увеличивал высвобождение BDNF на 22% по сравнению с контрольным уровнем BDNF, равным 54 пг/мл (p <0,001).

Воздействия Соединения (I) были дозозависимыми в течение первых 5 доз, и доза 300 нМ вызвала максимальное увеличение высвобождения BDNF на 29,5% по сравнению с контрольным (p <0,001). Результаты для других доз Соединения (I) показали следующие увеличения высвобождения BDNF: 16,9% для 1 мкМ, 18,9% для 100 нМ, 17,1% для 30 нМ, 16,2% для 10 нМ, все при p <0,001. При концентрации Соединения 3 нМ наблюдалось увеличение на 6,8% (р <0,05). См. cводку на Фигуре 1 и Таблице 1.

Таблица 1. Влияние Соединения (I) на высвобождение BDNF астроцитами (выраженное в % увеличения контрольных условий)

Культура	Придопидин	Соединение (I)
Культура	1 мкМ	1 мкМ	300 нМ	100 нМ	30 нМ	10 нМ	3 нМ
BDNF высвобождение астроцитов	22,3%	16,9%	29,5%	18,9%	17,1%	16,2%	6,8%

Пример 2. Воздействие Соединения (I) на высвобождение BDNF в первичных нейронах гиппокампа.

Протокол эксперимента - In situ ELISA на первичных нейронах гиппокампа

Культура нейронов гиппокампа

Нейроны гиппокампа крыс культивировали, как описано Balkowiec and Katz (2002). Новорожденных крыс (крысы Вистара, Janvier) подвергали глубокой анестезии с помощью гипотермии и обезглавливали. Гиппокампы быстро и в асептических условиях извлекали из каждого мозга в ледяной среде Лейбовица (L15, Panbiotech, ссылка P04-27055, серия: 4511117) с последующим удалением мозговых оболочек и измельчением на мелкие кусочки. Затем ткани гиппокампа переваривали трипсинизацией (трипсин EDTA 1X; PanBiotech, ссылка P10-023100, серия 9610717) в течение 20 минут при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением DMEM (Panbiotech, ссылка P04-03600, серия: 8420517), содержащей ДНКазу I степени II (0,1 мг/мл Panbiotech, ссылка: P60-37780100, серия: H140508) и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS, lnvitrogen, ссылка: 10270-098, серия 41A0940K). Клетки механически диссоциировали за 3 прохода через пипетку на 10 мл. Затем клетки центрифугировали при 515 x г в течение 10 минут при 4 °C. Супернатант удаляли, и клетки осадка ресуспендировали в определенной культуральной среде, состоящей из Нейробазала (Nb, lnvitrogen, ссылка 21103049, серия 1921829) с добавлением 2% B27 (Invitrogen, ссылка 17504-044, серия: 11530536), 2 ммоль L-глутамина (PanBiotech, ссылка P04-80100, серия: 8440517), 2% раствора PS и 5 нг/мл человеческого рекомбинантного основного фактора роста фибробластов (bFGF, Peprotech, ссылка: 100-18B, серия: 021608 C2216). Жизнеспособные клетки подсчитывали на цитометре Neubauer с использованием теста вытеснения трипанового синего.

Нейроны гиппокампа помещали в 96-луночный поверхностный полистироловый иммунопланшет Nunc MaxiSorp с плоским дном, предварительно покрытый поли-D-лизином, в течение 30 минут (Sigma, ссылка: P7886, серия: SLBS8705) моноклональным антителом против BDNF в течение ночи при 4°C при плотности 70000 клеток/лунку. Процедура была выполнена, как описано (Balkowiec and Katz, 2002) и (Malik et al., 2014; Su et al., 2012). После 2 часов инкубации с культуральной средой для удаления любых остатков промывочного раствора ELISA и инкубации для обеспечения прикрепления клеток к планшету, клетки инкубировали в следующих условиях:

Нейроны гиппокампа инкубировали 3 дня с контрольной средой.

Нейроны гиппокампа инкубировали 3 дня с Соединением (I) в концентрации 1 мкМ, 300 нМ, 100 нМ, 30 нМ и 10 нМ.

Нейроны гиппокампа инкубировали 3 дня с придопидином в концентрации 1 мкМ.

По окончании лекарственной обработки клетки тщательно промывали TBST (20 мМ Трис-HCl (pH 7,6), 150 мМ NaCl и 0,05% (об./об.) Твин 20). Затем планшет инкубировали с поликлональным антителом античеловеческого BDNF в течение ночи. Затем количество специфически связанного поликлонального антитела определяли с помощью третичного антитела анти-IgY-пероксидазы хрена, которое при воздействии хромогенного субстрата (реагент TMB; Promega) меняет цвет пропорционально количеству BDNF, присутствующего в образце. Интенсивность цвета определяли количественно путем измерения оптической плотности при 450 нм. (В этом состоянии через 3 дня культивирования культура нейронов гиппокампа содержит менее 5% астроцитов.) Стандарты BDNF в диапазоне концентраций от 0 до 500 пг/мл добавляли в параллельные лунки в той же среде, что и нейроны гиппокампа.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Тест in situ ELISA, основанный на культивированных нейронах гиппокампа, показал, что высвобождение BDNF после инкубации с придопидином привело к увеличению высвобождения BDNF на 18,4% по сравнению с контрольным уровнем BDNF, равным 178 пг/мл (p <0,001). В этом анализе воздействия Соединения (I) были дозозависимыми в течение первых 5 доз и достигли плато при 300 нМ с максимальным увеличением высвобождения BDNF на 27,5% по сравнению с контрольным (p <0,001). Результаты для других доз Соединения (I) показали следующее увеличение высвобождения BDNF: 24,3% для 1 мкМ (p <0,001), 14,9% для 100 нМ (p <0,001), 11,0% для 30 нМ (p <0,05). Дозы 10 нМ и 3 нМ Соединения (I) не показали статистически значимого увеличения высвобождения BDNF. См. cводку на Фигуре 2 и Таблице 2.

Таблица 2. Воздействие Соединения (I) на высвобождение BDNF нейронами гиппокампа (выраженное как % увеличения контрольных состояний)

Культура	Придопидин	Соединение (I)
Культура	1 мкМ	1 мкМ	300 нМ	100 нМ	30 нМ	10 нМ	3 нМ
BDNF высвобождает нейроны гиппокампа	18,4%	24,3%	27,5%	14,9%	11,0%	1,8%	0,4%

Пример 3. Воздействие Соединения (I) на высвобождение GDNF в астроцитах.

Первичная культура астроцитов крыс

После слияния астроциты высевали в 96-луночный поверхностный полистирольный плоский иммунопланшет Nunc MaxiSorp, предварительно покрытый поли-D-лизином в течение 30 мин (Sigma, ссылка: P7886, серия: SLBS8705) и моноклональным антителом анти-GDNF в течение ночи при 4°C при плотности 30 000 клеток/лунка. После 2 часов инкубации с культуральной средой для удаления любых остатков промывочного раствора ELISA и инкубации для обеспечения прикрепления клеток к планшету, клетки инкубировали в следующих условиях:

Астроциты инкубировали 5 суток с дексмедетомидином в концентрации 1 мкМ.

По окончании лекарственной обработки клетки тщательно промывали TBST (20 мМ Tris-HCl (pH 7,6), 150 мМ NaCl и 0,05% (об./об.) Tween 20). Затем планшет инкубировали с поликлональным антителом античеловеческого GDNF в течение ночи. Количество специфически связанного поликлонального антитела, которое при воздействии на хромогенный субстрат (реагент TMB; Promega) меняет цвет пропорционально количеству GDNF, присутствующему в образце. Интенсивность цвета определяли количественно путем измерения оптической плотности при 450 нм. Стандарты GDNF в диапазоне концентраций от 0 до 500 пг/мл добавляли в параллельные лунки в той же среде, что и нейроны гиппокампа.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Тест in situ ELISA, основанный на культивированных астроцитах, показал, что дексмедетомидин увеличивает высвобождение GDNF на 15,8% по сравнению с контрольным уровнем GDNF, равным 262,3 пг/мл (p <0,001). В этом анализе воздействия Соединения (I) зависели от дозы в течение первых 5 доз, и доза 300 нМ вызвала максимальное увеличение высвобождения GDNF на 20,8% по сравнению с контрольным (p <0,001). Результаты для других доз Соединения (I) показали следующие увеличения высвобождения GDNF: 17,5% для 1 мкМ, 14,8% для 100 нМ, 14,2% для 30 нМ, 13,8% для 10 нМ (все при p <0,001). При дозе 3 нМ Соединения (I) наблюдалось увеличение высвобождения GDNF на 11,4%. (р <0,001). См. cводку на Фигуре 3 и Таблице 3.

Таблица 3. Воздействие Соединения (I) на высвобождение GDNF астроцитами (выраженное в % увеличения контрольных условий)

Культура	Дексмедетомидин	Соединение (I)
Культура	1 мкМ	1 мкМ	300 нМ	100 нМ	30 нМ	10 нМ	3 нМ
GDNF высвобождает астроциты	15,8%	17,5%	20,8%	14,8%	14,2%	13,8%	11,4%

Пример 4. Воздействие Соединения (I) на экспрессию BDNF в астроцитах крысы.

Экспериментальный протокол

Первичная культура астроцитов крыс - смешанные глиальные клетки крысы культивировали, как описано McCarthy et al., 1980. Первичные глиальные клетки крыс получали из кортикального слоя новорожденных крыс Вистара (1 сутки). Вкратце, мозговые оболочки и кровеносные сосуды коры головного мозга мышей удаляли и помещали в ледяную среду Лейбовица (L15; PanBiotech, ссылка P04-27055, серия 4511117), содержащую 2% пенициллин-стрептомицин (PS; PanBiotech, ссылка P06-07100, серия 2110917) и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA; PanBiotech, ссылка P06-1391100, серия H171006). Ткани диссоциировали 0,25% трипсин-EDTA (PanBiotech, ссылка P10-023100, серия 8970318) при 37°C в течение 10 мин. Затем клетки подвергали дополнительной инкубации в течение 15 минут при 37°C в присутствии дезоксирибонуклеазы I (0,1 мг/мл Panbiotech, ссылка: P60-37780100, серия: H170706). Затем клетки осаждали (5 мин при 1200 об/мин) и трипсинизацию останавливали добавлением DMEM (Panbiotech, ссылка P04-03600, серия 5181217) с добавлением 10% FCS (Fischer, ссылка 10270106, серия 42G2068K), 1 мМ Na/пирувата (PanBiotech, ссылка: P04-43100, серия: 3470914) и 2% PS. Суспензию клеток механически диссоциировали и фильтровали через нейлоновые сетки диаметром 40 мкм (BD Falcon, ссылка: 352340). Клетки собирали центрифугированием при 1200 об/мин в течение 10 минут, повторно суспендировали в культуральной среде и затем помещали в культуральные колбы (Dutscher, ссылка: 690175). Клетки высевали при плотности 1.25×10⁵ клеток/см² и культивировали в 5% CO₂при 37 °C. Среду меняли три раза в неделю.

Анализ экспрессии BDNF с помощью количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени: астроциты высевали в 24-луночные планшеты, предварительно покрытые поли-D-лизином (Sigma, ссылка P7886, серия: SLBQ9797V). После 1 дня культивирования добавляли свежую бессывороточную среду, содержащую соединения, в течение 5 суток при 37 °C. По истечении времени инкубации среду удаляли и общее содержание RNA экстрагировали с использованием набора нуклео-спиновых RNS XS (Macherey Nagel; 20 мкл/лунку). Сделано 6 лунок/состояние. Концентрацию RNA определяли с помощью спектрофотометра Nanodrop 2000 (Life Technologies ThermoFisher Scientific, Villebon sur Yvette, France).

Обратную транскрипцию выполняли на 500 нг RNA с использованием смеси РНК-к-ДНК с высокой емкостью (Applied Biotechnologies). qPCR выполняли на 12,5 нг cDNA с использованием следующих праймеров, приобретенных в Applied Biotechnology.

Для реакций qPCR использовали набор TaqMan ™ Fast Universal PCR Master Mix (2X). Использовали следующие объемы: смесь: 10 мкл, фермент: 4 мкл, олиго: 1 мкл каждого, cDNA: 5 мкл (12,5 нг). Для сравнения между различными соединениями и концентрациями уровни экспрессии были рассчитаны с использованием метода ΔCt, где уровень экспрессии интересующей mRNA представлен как 2-ΔCT с ΔCT=CT мишень mRNA - CT эталонная mRNA (Gapdh) в том же образце. Для культур, обработанных GA или неизвестным соединением, относительные уровни экспрессии определяли в соответствии с методом ΔΔCt, где уровень экспрессии интересующей mRNA выражается как 2-ΔΔCT, где ΔΔCT=ΔCt для обработанных культур - ΔCt для необработанных культур.

Были выполнены следующие условия:

Клетки астроглии инкубировали 5 суток с контрольной средой.

Клетки астроглии инкубировали 5 суток с Соединением (I) в концентрации 0,3 нМ, 1 нМ, 3 нМ, 10 нМ, 30 нМ, 100 нМ.

Клетки астроглии инкубировали 5 суток со стандартным соединением (глатирамера ацетат, 25 мкг/мл (Reick et al., 2016), Avachem, ссылка 3822, серия CS1701).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Соединение (I) при 10 нМ, 3 нМ и 1 нМ увеличивало экспрессию BDNF астроцитами статистически значимо (**, p <0,01, Fc:1,71 при 10 нМ, ***, p <0,001, Fc: 1,81 при 3 нМ и *, p <0,05 Fc: 1,55 при 1 нМ по сравнению с контрольными условиями). Напротив, глатирамера ацетат не оказывает никакого воздействия (нс, p> 0,05). См. cводку на Фигуре 4 и Таблице 4.

Таблица 4. Воздействие Соединения (I) на экспрессию BDNF в астроцитах (выраженное как % увеличения контрольных условий)

Культура	Глатирамер ацетат	Соединение (I)
Культура	25 мкг/мл	100 нМ	30 нМ	10 нМ	3 нМ	1 нМ	0,3 нМ
Астроциты экспрессии BDNF	10%	5%	31%	71%	81%	55%	26%

Тест qPCR, основанный на культивируемых астроцитах, показал, что глатирамера ацетат увеличивает экспрессию BDNF на 10% по сравнению с контрольными условиями. В этом анализе воздействия Соединения (I) показали обратный U-образный доза-ответ, и доза 3 нМ вызвала максимальное увеличение экспрессии BDNF на 81% по сравнению с контрольным (p <0,001). Результаты других доз Соединения (I) показали следующее увеличение экспрессии BDNF: 5% для 100 нМ, 31% для 30 нМ, 71% для 10 нМ (p <0,01), 55% для 1 нМ, (p < 0,05), а 0,3 нМ увеличение на 26%.

Эти результаты демонстрируют, что Соединение (I) способно усиливать экспрессию BDNF астроцитами. Максимальная эффективность наблюдается при 3 нМ.

Соединение (I) усиливает экспрессию BDNF при концентрациях лекарственного средства, аналогичных тем, которые наблюдаются у человека при испытанных дозах. Следовательно, в дополнение к известным путям нейротрансмиттеров, на которые нацелено Соединение (I), особенно на серотонинергические 5-HT_2A и сигма₂ пути, воздействие Соединения (I) на BDNF и GDNF предполагает, что это соединение может иметь потенциал для модификации заболевания и улучшения нейропластичности.

Эквиваленты

Квалифицированные специалисты в данной области техники поймут или смогут установить, используя не более чем стандартное экспериментирование, многочисленные эквиваленты конкретных вариантов осуществления, конкретно описанных здесь. Предполагается, что такие эквиваленты входят в объем следующей формулы изобретения.

Способы описания, описаны здесь со ссылкой на определенные предпочтительные варианты осуществления. Однако, поскольку конкретные варианты этого станут очевидными для квалифицированных специалистов в данной области техники на основе изложенного здесь описания, описание не следует рассматривать как ограниченное ими.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается квалифицированным специалистом в области, к которой относится это описание. В описании и формуле изобретения формы единственного числа также включают множественное число, если контекст явно не диктует иное.

Следует понимать, что, по крайней мере, некоторые описания были упрощены, чтобы сосредоточить внимание на элементах, которые имеют отношение к четкому пониманию описания, исключая, для ясности, другие элементы, которые специалист с обычной квалификацией в данной области техники может также включать в часть описания. Однако, поскольку такие элементы хорошо известны в данной области техники, и поскольку они не обязательно способствуют лучшему пониманию описания, описание таких элементов здесь не приводится.

Кроме того, в той степени, в которой способ не зависит от конкретного порядка этапов, изложенного в данном документе, конкретный порядок этапов, изложенных в формуле изобретения, не следует истолковывать как ограничение этой формулы.

Все патенты, заявки на патенты, ссылки и публикации, процитированные в данном документе, целиком и полностью включены посредством ссылки, как если бы они были полностью изложены. Такие документы не считаются предшествующим уровнем техники для настоящего описания.

Claims

1. Способ лечения или уменьшения амблиопии у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения (I)

2. Способ по п. 1, в котором введение соединения (I) увеличивает нейропластичность у субъекта по сравнению с субъектом, которому не вводили соединение (I), или его фармацевтически приемлемую соль, или гидрат.

3. Способ по п. 1 или 2, в котором введение соединения (I) способствует нейрозащите или нейрональной регенерации у субъекта по сравнению с субъектом, которому не вводили соединение (I), или его фармацевтически приемлемую соль, или гидрат.

4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором терапевтически эффективное количество соединения (I) вводят субъекту один или два раза в сутки в течение 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев или дольше.

5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором субъекту также вводят антипсихотическое средство.

6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором возраст субъекта составляет менее 50, 40, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12 или 11 лет.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где субъект страдает косоглазием.

8. Способ по любому из пп. 1-6, где субъект страдает анизометропией.

9. Способ по любому из пп. 1-6, где субъект является шизофреником.

10. Способ по любому из пп. 1-6, где субъект не является шизофреником.

11. Способ по любому из пп. 1-6, где у субъекта не было диагностировано психическое расстройство.

12. Способ по любому из пп. 1-6, где субъект страдает аутическим расстройством, задержкой умственного развития, органическим расстройством личности, антисоциальным расстройством личности, шизоаффективным расстройством, шизофреноформным расстройством, шизоидным расстройством личности, посттравматическим стрессовым расстройством, шизотипическим расстройством личности, параноидальным расстройством личности, истерическим расстройством личности, нарциссическим расстройством личности, зависимым расстройством личности, тревожным расстройством личности, соматоформным расстройством, обсессивно-компульсивным расстройством, генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством, тревожным расстройством, вызванным разлукой, реактивным расстройством привязанностей, паническим расстройством, расстройством деперсонализации, дереализационным расстройством, фобией, расстройством адаптации, аффективным расстройством, предменструальным дисфорическим расстройством, избирательным мутизмом, обсессивно-компульсивным расстройством личности, черепно-мозговой травмой, синдромом дефицита (вызванного нейролептиками), арахноидальными кистами, биполярным расстройством, каталепсией, энцефалитом, болезнью Хантингтона, менингитом, синдромом запертого человека, мигренью, рассеянным склерозом, миелопатией или синдромом Туретта.

13. Способ по любому из пп. 1-6, где введение соединения (I) субъекту увеличивает экспрессию мозгового нейротропного фактора (BDNF) у субъекта.

14. Способ по любому из пп. 1-6, где введение соединения (I) субъекту увеличивает экспрессию нейротрофического фактора глиальной клеточной линии (GDNF) у субъекта.

15. Способ по любому из пп. 1-6, где соединение (I) или его фармацевтически приемлемая соль изготавливается для перорального введения.

16. Способ по п. 15, где соединение (I) или его фармацевтически приемлемая соль изготавливается в виде таблетки.

17. Способ по любому из пп. 1-6, где соединение (I) представляет собой дигидрат гидрохлоридной соли.

18. Способ по любому из пп. 1-6, где терапевтически эффективное количество соединения (I) составляет от 0,1 мг/день до 1 г/день.

19. Способ по любому из пп. 1-6, где лечение или уменьшение амблиопии у субъекта приводит к улучшению зрения в амблиопическом глазу субъекта.