RU2810953C2

RU2810953C2 - Подкожное дозирование антител к cd38

Info

Publication number: RU2810953C2
Application number: RU2020135062A
Authority: RU
Inventors: Эрик ФЕДИК; Майкл Ханли; Антонио ПАЛУМБО
Original assignee: Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед
Priority date: 2018-03-28
Filing date: 2019-03-27
Publication date: 2024-01-09

Abstract

Изобретения относятся к иммунотерапии рака, ассоциированного с CD38. Предложены способ и единичная дозированная форма для лечения рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломы (РРММ) у субъекта. Субъекту вводят подкожно выделенное человеческое антитело к CD38 в дозе от 45 до 1800 мг, где доза представляет собой дозу один раз в неделю. Антитело к CD38 содержит CDR1-6, имеющие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 3-8, соответственно. Единичная дозированная форма содержит от 45 до 1800 мг выделенного антитела, имеющего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 10. Выделенное антитело связывается с CD38 и не связывается с эритроцитами человека. Объем единичной дозированной формы составляет 2,5 мл или менее. Изобретение обеспечивает эффективное лечение РРММ, в том числе у пациентов с поздней стадией РРММ, предотвращая побочные эффекты. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 26 ил., 11 табл., 3 пр.

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки

[0001] В данной заявке испрашиваются приоритет предварительной заявки США № 62/649489, поданной 28 марта 2018 г., которая полностью включена в данное описание посредством ссылки.

Область техники

[0002] В данном документе раскрыты способы и композиции для введения изолированных антител к CD38 посредством подкожного (п/к) введения.

Уровень техники

[0003] CD38, также известный как циклическая АДФ-рибозогидролаза, представляет собой трансмембранный гликопротеин типа II с длинным С-концевым внеклеточным доменом и коротким N-концевым цитоплазматическим доменом. CD38 является членом группы родственных мембраносвязанных или растворимых ферментов, которая включает CD157 и ADPR циклазу Aplysia. Это семейство ферментов обладает уникальной способностью превращать НАД в циклическую АДФ-рибозу или никотиновую кислоту-адениндинуклеотидфосфат. CD38 участвует в мобилизации Ca²⁺ и в передаче сигнала посредством фосфорилирования тирозина многочисленных сигнальных молекул, включая фосфолипазу Cγ, ZAP-70, syk и c-cbl. Основываясь на этих наблюдениях, CD38 является важной сигнальной молекулой в созревании и активации лимфоидных клеток во время их нормального развития. Среди гематопоэтических клеток набор функциональных эффектов был приписан CD38-опосредованной передаче сигналов, включая пролиферацию лимфоцитов, высвобождение цитокинов, регуляцию развития и выживания B и миелоидных клеток, а также индукцию созревания дендритных клеток (DC).

[0004] CD38 экспрессируется в незрелых гемопоэтических клетках, снижается в зрелых гемопоэтических клетках и повторно экспрессируется на высоких уровнях в активированных лимфоцитах и плазматических клетках. Например, экспрессия CD38 на высоких уровнях наблюдается в активированных B-клетках, плазматических клетках, активированных CD4+ T-клетках, активированных CD8+ T-клетках, NK-клетках, NKT-клетках, зрелых DC и активированных моноцитах (см., например, патент США № 8362211).

[0005] Присутствие аутоантител к CD38 было связано с рядом заболеваний, включая диабет, хронический аутоиммунный тиреоидит и болезнь Грейвса (см. Antonelli et al. (2001) Clin. Exp. Immunol. 126: 426-431; Mallone et al. (2001) Diabetes 50: 752 и Antonelli et al. (2004) J. Endocrinol. Invest. 27: 695-707).

[0006] Повышенная экспрессия CD38 была документально подтверждена при различных заболеваниях, включая аутоиммунные заболевания и рак. Такие заболевания включают системную красную волчанку (СКВ), ревматоидный артрит (РА), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) и язвенный колит (ЯК). У пациентов с РА плазматические клетки увеличиваются в суставной ткани по сравнению с контролем. У пациентов с СКВ плазмобласты увеличиваются в периферической крови у пациентов с более активным заболеванием. Современные методы лечения В-лимфоцитов на основе CD20, такие как ритуксимаб, эффективно истощают популяцию CD20+ В-клеток, но не могут напрямую и эффективно уничтожить плазматические клетки или плазмобласты, поскольку они не экспрессируют CD20. В соответствии с этой идеей пациенты с РА или СКВ с высоким уровнем плазматических клеток или плазмобластов вряд ли получат существенную клиническую пользу от терапии на основе CD20. Таким образом, терапевтические средства, нацеленные на CD38, который высоко экспрессируется на плазматических клетках и плазмобластах, а также на NK-клетках и активированных Т-клетках, могут обеспечить эффективное лечение РА и СКВ, а также других заболеваний, характеризующихся экспрессией CD-38.

[0007] В частности, повышенная экспрессия CD38 была документально подтверждена при различных заболеваниях гематопоэтического происхождения, а также в клеточных линиях, полученных из них, и была описана как негативный прогностический маркер при гематологических злокачественных опухолях. Такие заболевания включают, без ограничения, множественную миелому (ММ), хронический лимфобластный лейкоз, B-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (B-ХЛЛ), включая B-клеточный острый лимфоцитарный лейкоз, B- и T-острый лимфоцитарный лейкоз (ОЛЛ), острый лимфобластный лейкоз, макроглобулинемию Вальденстрема, лимфому из мантийных клеток, пролимфоцитарный/миелоцитарный лейкоз, острый миелоидный лейкоз (ОМЛ), хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ), фолликулярную лимфому, NK-клеточный лимфолейкоз, плазматический лейкоз, неходжкинскую лимфому, (НХЛ), лимфому Беркитта (ЛБ), Т-клеточную лимфому (ТКЛ), волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ) и лимфому Ходжкина (ЛХ). Кроме того, экспрессия CD38 является прогностическим индикатором для пациентов с такими состояниями, как, например, B-ХЛЛ et al. (2002) Leukemia 16: 30-35 и Morabito et al. (2001) Leukemia Res. 25: 927-932) и острый миелолейкоз (Keyhani et al. (1999) Leukemia Res. 24: 153-159). Таким образом, CD38 представляет собой полезную мишень при лечении заболеваний кроветворной системы.

[0008] Несколько антител к CD38 проходят клинические испытания для лечения рака, ассоциированного с CD38. Однако все терапевтические антитела к CD38 предшествующего уровня техники связываются с эритроцитами (RBC) и тромбоцитами, что приводит к более высокой требуемой дозировке из-за уменьшения непродуктивного связывания с RBC. Хотя CD38 экспрессируется на эритроцитах на уровне, который приблизительно в 1000 раз ниже, чем на миеломных клетках (deWeers et al. (2011) J. Immunol. 186(3):1840-1848), в крови пациентов с ММ (множественной миеломой) с активной формой заболевания на каждую клетку миеломы приходится приблизительно 36000 эритроцитов (Witzig et al. (1993) Cancer 72(1): 108-113). Таким образом, в эритроцитах экспрессируется в 36 раз больше молекул CD38, чем в опухолевых клетках. Таким образом, современные способы лечения с использованием антител к CD38 требуют внутривенного введения из-за высоких доз, необходимых для эффективности, выходящей за рамки связывания с эритроцитами. Например, даратумумаб (mAb к CD38 IgG1; DARZALEX® FDA одобрен и коммерчески доступен от Janssen Oncology) требует очень высокой дозы (≥16 мг/кг) и интенсивного режима (8 раз в неделю, 8 раз в 2 недели, затем раз в месяц) для оптимальной противоопухолевой активности (Xu et al. (2017) Clin. Pharmacol. Ther. 101(6): 721-724).

[0009] Соответственно, лечение с использованием антител к CD38, которые связываются с эритроцитами, в настоящее время сосредоточено на внутривенном введении из-за большого объема антитела, необходимого для достижения терапевтической эффективности, поскольку такие большие объемы не подходят для подкожного введения. Например, даратумумаб нельзя вводить в малых объемах, поскольку для достижения целевого насыщения требуется ≥16 мг/кг (например, приблизительно 1120 мг на пациента массой 70 кг). Наивысшая известная концентрация препарата для подкожного введения составляет 200 мг/мл (Cimzia®, также называемый цертолизумаб пегол). При использовании наивысшей из известных концентраций препарата для подкожного введения, равной 200 мг/мл, даратумумаб имел бы минимальный прогнозируемый объем инъекции 5,6-11,2 мл, что является очень большим объемом для подкожного введения. Учитывая этот большой объем и пределы концентрации, даратумумаб необходимо вводить подкожно в объеме 15 мл вместе с гиалуронидазой, чтобы способствовать диспергированию и абсорбции.

[0010] Другое антитело к CD-38, изатуксимаб (коммерчески доступное от Sanofi Genzyme и в настоящее время проходит клинические испытания фазы 3), вводят в дозе 10 мг/кг и 20 мг/кг в испытаниях фазы 3, что соответствует 700-1400 мг на 70 кг пациента. Опять же, при использовании наивысшей из известных концентраций препарата для подкожного введения 200 мг/мл прогнозируемый объем инъекции изатуксимаба составляет 3,5-14 мл.

[0011] В дополнение к более высоким дозам и объемам, требуемым от известных в настоящее время в клинике антител к CD38, их нацеливание на эритроциты и тромбоциты может вызвать серьезные побочные эффекты, такие как, например, гемолитическая анемия, состояние, при котором эритроциты разрушаются быстрее, чем происходит их замена. В открытом одноранговом исследовании изатуксимаб вводили внутривенно 97 пациентам в дозе 3 мг/кг каждые 2 недели (Q2W; n=23), 10 мг/кг Q2W в течение 2 циклов с последующим Q4W (n=25), 10 мг/кг Q2W (n=24) и 20 мг/кг каждую неделю для 4 доз (1 цикл) с последующим Q2W (n=25). Наиболее частым тяжелым нежелательным явлением (степень 3/4) была анемия, которой страдали 24% пациентов (см. http://www.onclive.com/conference-coverage/asco-2016/isatuximab-monotherapy-effective-for-heavily-pretreated-myeloma, the 2016 ASCO Annual Meeting as well as Richter et al. (2016) J. Clin. Oncol. 34 (suppl): abstr 8005). Помимо тяжелой анемии, тромбоцитопения и нейтропения также являются частыми тяжелыми нежелательными явлениями (22,9%, 18,4% и 18,4% соответственно; Dimopoulos et al. (2018) Blood 132 (suppl. 1): ASH abstract 155/ oral presentation). Аналогичным образом, низкое количество клеток крови (лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов), анемия и тромбоцитопения являются хорошо известными серьезными побочными реакциями на даратумумаб. В одном исследовании даратумумаба 45% всех пациентов страдали анемией (19% из которых были 3-й степени) и 48% пациентов испытывали тромбоцитопению (10% из которых были 3-й степени и 8% из которых 4-й степени) (см., например, дарзалекс (даратумумаб) информация о назначении. Horsham, Pennsylvania: Janssen Biotech, Inc. 2018; а также обзорную статью Costello (2017) Ther. Adv. Hematol. 8(1): 28-37). Кроме того, внутривенное введение терапевтических моноклональных антител может привести к тяжелым реакциям, связанным с инфузией (РСИ). Общие РСИ включают, помимо прочего, заложенность носа, кашель, аллергический ринит, раздражение горла, одышку, озноб, тошноту, гипоксию, гипертензию и т.д. (Usmani et al. (2016) Blood 128(1): 37-44).При применении даратумумаба у 48% пациентов наблюдается РСИ после первой дозы лечения (Usmani et al. (2016) Blood 128(1): 37-44) при 3% тяжелых случаев (дарзалекс (даратумумаб) информация о назначении. Horsham, Pennsylvania: Janssen Biotech, Inc 2018). Аналогичным образом, РСИ были зарегистрированы у 40,4% пациентов, получавших изатуксимаб, при этом у 4,6% пациентов были отмечены тяжелые заболевания (Dimopoulos et al. (2018) Blood 132: (suppl 1) ASH abstract 155/ oral presentation). Таким образом, пациенты, получающие изатуксимаб или даратумумаб, должны находиться под тщательным наблюдением на предмет опасных для жизни и других серьезных побочных эффектов.

[0012] AB79 - это полностью человеческое моноклональное антитело иммуноглобулина IgG1, которое специфически связывается с CD38 с высокой аффинностью (Kd=6,1×10^-10 M). AB79 ингибирует рост опухолевых клеток, экспрессирующих CD38, за счет истощения популяции клеток путем антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) и комплемент-зависимой цитотоксичности (КЗЦ). AB79 также снижает уровень плазматических клеток и плазмобластов в крови, выделенной от здоровых субъектов и пациентов с системной красной волчанкой (СКВ) (№ заявки РСТ PCT/US2017/042128). У здоровых яванских макаков эффективность истощения для каждого типа клеток положительно коррелировала с уровнем экспрессии CD38 и уровнем дозы AB79 (№ заявки РСТ PCT/US2017/042128). Кроме того, AB79 продемонстрировал противовоспалительную и модифицирующую болезнь активность на модели ревматоидного артрита на обезьянах (патент США № US 8362211).

[0013] Учитывая, что многие антитела к CD38 в клинике связывают эритроциты и поэтому не подходят для подкожного введения и обладают опасными нежелательными явлениями, в данной области техники остается потребность в препаратах подкожных антител, которые были бы более безопасными, более удобными и более эффективными для лечения заболеваний в указанное связывание с CD38, например при аутоиммунных заболеваниях и гематологических формах злокачественных опухолей.

Сущность изобретения

[0014] В данном документе предложены способы лечения заболеваний, при которых показано связывание с CD38, таких как, например, аутоиммунные заболевания и гематологические злокачественные опухоли, включающие подкожное введение выделенных антител к CD38.

[0015] В одном аспекте в данном изобретении предложен способ лечения заболевания у субъекта, при котором показано связывание с CD38, причем способ, включает стадию подкожного введения субъекту, страдающему заболеванием, при котором показано связывание с CD38, терапевтически эффективного количества выделенного человеческое антитело к CD38, достаточного для лечения заболевания, при этом антитело к CD38 содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, или варианты этих последовательностей, имеющие до трех аминокислотных замен; и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен, и при этом антитело к CD38 вводят в дозе от 45 до 1800 миллиграммов.

[0016] В другом аспекте в данном изобретении предложен способ лечения заболевания у субъекта, при котором показано связывание с CD38, при этом способ, включает этап подкожного введения субъекту, страдающему заболеванием, при котором показано связывание с CD38, терапевтически эффективного количества выделенного человеческого антитела к CD38, достаточного для лечения заболевания, при этом антитело к CD38 содержит область цепи VH, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4 и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен; и область цепи VL, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или варианты последовательности, содержащие до трех аминокислотных замен, при этом антитело к CD38 вводят в дозе от 45 до 1800 миллиграммов.

[0017] В другом аспекте в данном изобретении предложен к способу лечения заболевания у субъекта, при котором показано связывание с CD38, причем способ, включает стадию подкожного введения субъекту, страдающему заболеванием, при котором показано связывание с CD38, терапевтически эффективного количества выделенного человеческого антитела к CD38, достаточного для лечения заболевания, при этом антитело к CD38 содержит область цепи VH, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и область цепи VL, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, при этом антитело к CD38 вводят в дозировке от 45 до 1800 миллиграммов.

[0018] В одном аспекте описанное в данном документе антитело к CD38 не вызывает гемолитической анемии или тромбоцитопении.

[0019] В одном аспекте введение терапии антителом к CD38 приводит к менее чем 60%, менее чем 50%, менее чем 40%, менее чем 30%, менее чем 25%, менее чем 20%, менее чем 15%, менее чем 10%, менее чем 5%, менее чем 4%, менее чем 3%, менее чем 2% или менее чем 1% случаев 3 или 4 степени одного или более нежелательных явлений, связанных с лечением (НЯСЛ) или нежелательных явлений, возникающих в связи с лечением (НЯВЛ), выбранных из группы, состоящей из анемии, гемолитической анемии, нейтропении, тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении. НЯВЛ - это нежелательное явление, которое наблюдается или диагностируется примерно через 30 суток после приема последней дозы лекарственного средства независимо от причины. НЯВЛ может иметь любую первопричину, связанную с заболеванием или лечением, которая не связана с антителом к CD38 или им, и может быть специфически связана с антителом к CD38. Соответственно, введение антитела к CD38 может приводить к менее чем 30% случаев возникновения одного или более нежелательных явлений, возникающих в результате лечения (НЯВЛ), степени 3 или 4, выбранных из группы, состоящей из анемии, гемолитической анемии, тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении.

[0020] В одном аспекте введение терапии антителом к CD38 приводит к менее чем 60%, менее чем 50%, менее чем 40%, менее чем 30%, менее чем 25%, менее чем 20%, менее чем 15%, менее чем 10%, менее чем 5%, менее чем 4%, менее чем 3%, менее чем 2% или менее чем 1% случаев 3 или 4 степени одного или более нежелательных явлений, связанных с лечением (НЯСЛ), выбранных из группы, состоящей из анемии, гемолитической анемии, нейтропении, тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении. НЯСЛ - это нежелательное явление, при котором лечащий врач полагает, что существует возможная причинно-следственная связь между лекарственным средством, используемым в лечении, и нежелательным явлением. Таким образом, НЯСЛ считается специфически связанным с антителом к CD38. Соответственно, введение антитела к CD38 может приводить к менее чем 30% случаев возникновения одного или более НЯСЛ, степени 3 или 4, выбранных из группы, состоящей из анемии, гемолитической анемии, тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении.

[0021] В одном аспекте введение терапии антителом к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции эритроцитов.

[0022] В одном аспекте введение терапии антителом к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции тромбоцитов.

[0023] В одном аспекте заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание или рак.

[0024] В одном аспекте аутоиммунное заболевание выбирают из группы, состоящей из системной красной волчанки (СКВ), ревматоидного артрита (РА), воспалительного заболевания кишечника (ВЗК), язвенного колита (ЯК), системного амилоидоза легких цепей и реакции трансплантат против хозяин.

[0025] В одном аспекте гематологическую злокачественную опухоль выбирают из группы, состоящей из множественной миеломы, хронического лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лейкоза плазматических клеток, острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, B-клеточной лимфомы и лимфомы Беркитта.

[0026] В одном аспекте гематологическая злокачественная опухоль представляет собой множественную миелому.

[0027] В другом аспекте аутоиммунное заболевание представляет собой системный амилоидоз легких цепей.

[0028] В одном аспекте область цепи VH содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[0029] Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[0030] В одном аспекте область цепи VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или ее вариант до трех аминокислотных замен, а область цепи VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен.

[0031] В одном аспекте область цепи VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, а область цепи VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

[0032] В одном аспекте область цепи VH содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12.Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12.

[0033] Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12.

[0034] В одном аспекте антитело к CD38 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 11 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен.

[0035] В одном аспекте антитело к CD38 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12.

[0036] В одном аспекте терапевтически эффективное количество представляет собой дозу от 45 до 1800 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 45 до 1200 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 45 до 600 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 45 до 135 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 135 до 1800 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 135 до 1200 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 135 до 600 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 600 до 1800 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 600 до 1200 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 1 200 до 1800 миллиграммов.

[0037] В одном аспекте человеческое антитело к CD38 вводится в форме фармацевтически приемлемой композиции.

[0038] В другом аспекте в данном изобретении предложен способ лечения гематологической злокачественной опухоли у субъекта, причем способ, включает стадию подкожного введения субъекту, страдающему гематологической злокачественной опухолью, терапевтически эффективного количества выделенного человеческое антитело к CD38, достаточного для лечения гематологической злокачественной опухоли, при этом антитело к CD38 содержит область цепи VH, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, или варианты этих последовательностей, имеющие до трех аминокислотных замен; и область цепи VL, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен, и при этом антитело вводят в дозе от 45 до 1800 миллиграммов.

[0039] В другом аспекте в данном изобретении предложен способ лечения гематологической злокачественной опухоли у субъекта, при этом способ, включает этап подкожного введения субъекту, страдающему гематологической злокачественной опухолью, терапевтически эффективного количества выделенного человеческого антитела к CD38, достаточного для лечения гематологической злокачественной опухоли, при этом антитело к CD38 содержит область цепи VH, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO : 4 и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен; и область цепи VL, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или варианты последовательности, содержащие до трех аминокислотных замен, при этом антитело к CD38 вводят в дозе от 45 до 1800 миллиграммов.

[0040] В другом аспекте в данном изобретении предложен к способу лечения гематологической злокачественной опухоли у субъекта, причем способ, включает стадию подкожного введения субъекту, страдающему гематологической злокачественной опухолью, терапевтически эффективного количества выделенного человеческого антитела к CD38, достаточного для лечения гематологической злокачественной опухоли, при этом антитело к CD38 содержит область цепи VH, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и CDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и область цепи VL, содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, при этом антитело к CD38 вводят в дозировке от 45 до 1800 миллиграммов.

[0041] В одном аспекте антитело к CD38 не вызывает гемолитической анемии или тромбоцитопении.

[0042] В одном аспекте введение антитела к CD38 приводит к менее чем 60%, менее чем 50%, менее чем 40%, менее чем 30%, менее чем 25%, менее чем 20%, менее чем 15%, менее чем 10%, менее чем 5%, менее чем 4%, менее чем 3%, менее чем 3% или менее чем 1% случаев 3 или 4 степени одного или более нежелательных явлений, связанных с лечением (НЯСЛ) или НЯВЛ, выбранных из группы, состоящей из анемии, включая гемолитическую анемию, нейтропении, тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении. Соответственно, введение антитела к CD38 может приводить к менее чем 30% случаев возникновения одного или более нежелательных явлений, возникающих в результате лечения или НЯВЛ, степени 3 или 4, выбранных из группы, состоящей из анемии, гемолитической анемии, тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении.

[0043] В одном аспекте введение антитела к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции эритроцитов.

[0044] В одном аспекте введение антитела к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции тромбоцитов.

[0045] В одном аспекте гематологическую злокачественную опухоль выбирают из группы, состоящей из множественной миеломы, хронического лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лейкоза плазматических клеток, острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, B-клеточной лимфомы и лимфомы Беркитта.

[0046] В одном аспекте гематологическая злокачественная опухоль представляет собой множественную миелому.

[0047] В одном аспекте область цепи VH содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[0048] Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[0049] В одном аспекте область цепи VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или ее вариант до трех аминокислотных замен, а область цепи VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен.

[0050] В одном аспекте область цепи VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, а область цепи VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

[0051] В одном аспекте область цепи VH содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12.

[0052] Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12.

[0053] В одном аспекте область цепи VH имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 или ее вариант до трех аминокислотных замен, а область цепи VL имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен.

[0054] В одном аспекте антитело к CD38 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12.

[0055] В одном аспекте терапевтически эффективное количество представляет собой дозу от 45 до 1800 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 45 до 1200 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 45 до 600 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 45 до 135 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 135 до 1800 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 135 до 1200 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 135 до 600 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 600 до 1800 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 600 до 1200 миллиграммов. Соответственно, терапевтически эффективное количество может представлять собой дозу от 1 200 до 1800 миллиграммов.

[0056] В одном аспекте человеческое антитело к CD38 вводится в форме фармацевтически приемлемой композиции. Соответственно, фармацевтически приемлемая композиция может подходить для подкожного введения.

[0057] В другом аспекте в данном изобретении предложена единичная дозированная форма, содержащая выделенное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи, имеющую по меньшей мере 80% идентичности с SEQ ID NO: 9, и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10, при этом выделенное антитело связывается с CD38, причем единичная дозированная форма приготовлена для подкожного введения антитела в дозировке от 45 до 1800 миллиграммов. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, область цепи VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[0058] Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[0059] Соответственно, в данном изобретении может быть предложена единичная дозированная форма, содержащая выделенное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 10 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен, причем выделенное антитело связывается с CD38, при этом единичная дозированная форма приготовлена для подкожного введения антитела в дозировке от 45 до 1800 миллиграммов.

[0060] В другом аспекте в данном изобретении предложена единичная дозированная форма, содержащая выделенное антитело, которое содержит аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 9 и аминокислотную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 10, причем выделенное антитело связывается с CD38 и не связывается в значительной степени с эритроцитами человека, при этом единичная дозированная форма приготовлена для подкожного введения антитела в дозировке от 45 до 1800 миллиграммов.

[0061] В одном аспекте тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а область цепи VL содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 11, а цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 12.

[0062] Соответственно, тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11 или ее вариант, имеющий до трех аминокислотных замен, а легкая цепь может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, имеющую до трех аминокислотных замен.

[0063] В одном аспекте тяжелая цепь может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, а легкая цепь может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.

[0064] В одном аспекте единичная дозированная форма приготовлена для подкожного введения антитела при лечении гематологической злокачественной опухоли, выбранной из группы, состоящей из множественной миеломы, хронического лимфобластного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лейкоза плазматических клеток, острого миелоидного лейкоза, хронического миелоидного лейкоза, B-клеточной лимфомы и лимфомы Беркитта.

[0065] В одном аспекте гематологическая злокачественная опухоль представляет собой множественную миелому.

[0066] В одном аспекте антитело к CD38 не вызывает гемолитической анемии или тромбоцитопении.

[0067] В одном аспекте антитело к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции эритроцитов.

[0068] В одном аспекте антитело к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции тромбоцитов.

[0069] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38 для применения в терапии, причем антитело не вызывает значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов после введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить подкожно. Соответственно, антитело можно вводить в дозе от 45 до 1800 миллиграммов.

[0070] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38 для применения в терапии, причем антитело не вызывает значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов после введения, а человеческое антитело к CD38 вводят подкожно в дозе от 45 до 1800 миллиграммов. Соответственно, человеческое антитело к CD38, которое не вызывает значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов после введения, может быть антителом к CD38, как определено в данном документе.

[0071] В одном аспекте предложена единичная дозированная форма, содержащая выделенное антитело, которое не вызывает значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов после введения, причем выделенное антитело связывается с CD38 и не связывается с эритроцитами человека, а единичная дозированная форма приготовленадля подкожного введения антитела в дозе от 45 до 1800 миллиграммов.

[0072] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения в терапии, причем человеческое антитело к CD38 приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 вводят подкожно.

[0073] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения при лечении заболевания, при котором показано связывание с CD38, причем человеческое антитело к CD38 приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 вводят подкожно.

[0074] Во многих аспектах дозировка вводимого антитела к CD38, как описано в данном документе, представляет собой дозировку раз в неделю.

[0075] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения в терапии, причем человеческое антитело к CD38 приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 вводят подкожно.

[0076] Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела. Соответственно, человеческое антитело к CD38 может быть приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 может быть приготовлено для подкожного введения и вводиться в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела.

[0077] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения при лечении рака. Соответственно, рак может представлять собой гематологическую злокачественную опухоль.

[0078] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения при лечении гематологической злокачественной опухоли, причем человеческое антитело к CD38 приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить подкожно.

[0079] Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела. Соответственно, человеческое антитело к CD38 может быть приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 может быть приготовлено для подкожного введения и вводиться в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела.

[0080] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения при лечении гематологической злокачественной опухоли, причем человеческое антитело к CD38 приготовлено для подкожного введения, и человеческое антитело к CD38 вводится в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела. Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить подкожно.

[0081] Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой множественную миелому, хронический лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, лейкоз плазматических клеток, острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, B-клеточную лимфому или лимфому Беркитта. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой множественную миелому.

[0082] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения при лечении аутоиммунного заболевания.

[0083] В одном аспекте предложено человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе, для применения при лечении аутоиммунного заболевания, причем человеческое антитело к CD38 приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить подкожно.

[0084] Соответственно, человеческое антитело к CD38 можно вводить в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела. Соответственно, человеческое антитело к CD38 может быть приготовлено для подкожного введения. Соответственно, человеческое антитело к CD38 может быть приготовлено для подкожного введения и вводиться в дозе в диапазоне от 45 до 1800 миллиграммов антитела.

[0085] Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), язвенный колит, системный амилоидоз легких цепей или реакция трансплантат против хозяина.

[0086] В одном аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая выделенное человеческое антитело к CD38, как определено в данном документе.

[0087] В одном аспекте предложена фармацевтическая композиция, содержащая единичную дозированную форму согласно данному изобретению.

[0088] В одном аспекте предложена фармацевтическая композиция согласно данному изобретению для применения в терапии.

[0089] В одном аспекте предложена фармацевтическая композиция согласно данному изобретению для применения при лечении заболевания, при котором показано связывание с CD38.

[0090] В одном аспекте предложена фармацевтическая композиция согласно данному изобретению для применения при лечении аутоиммунного заболевания. Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), язвенный колит (ЯК), системный амилоидоз легких цепей или реакция трансплантат против хозяина. Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть системная красная волчанка (СКВ). Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть ревматоидный артрит (РА). Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть воспалительное заболевание кишечника (ВЗК). Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть язвенный колит (ЯК). Соответственно, аутоиммунным заболеванием может быть реакция трансплантат против хозяина.

[0091] В другом аспекте предложена фармацевтическая композиция согласно данному изобретению для применения при лечении рака. Соответственно, рак может представлять собой гематологическую злокачественную опухоль. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой множественную миелому, хронический лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, лейкоз плазматических клеток, острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, B-клеточную лимфому или лимфому Беркитта. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой множественную миелому. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой хронический лимфобластный лейкоз. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой хронический лимфолейкоз. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой лейкоз плазматических клеток. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой острый миелоидный лейкоз. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой хронический миелоидный лейкоз. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой В-клеточную лимфому. Соответственно, гематологическая злокачественная опухоль может представлять собой лимфому Беркитта.

[0092] В одном аспекте предложено применение выделенного человеческого антитела к CD38, как определено в данном документе, для производства лекарственного средства для лечения заболевания.

[0093] В другом аспекте предложено применение единичной лекарственной формы согласно данному изобретению для производства лекарственного средства для лечения заболевания.

[0094] Соответственно, заболевание может быть таким, при котором показано связывание с CD38.

[0095] Соответственно, заболеванием может быть аутоиммунным заболеванием, таким как системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), язвенный колит (ЯК), системный амилоидоз легких цепей или реакция трансплантат против хозяина.

[0096] Соответственно, заболевание может быть раком. Соответственно, рак может представлять собой гематологическую злокачественную опухоль, такую как множественная миелома, хронический лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, лейкоз плазматических клеток, острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, B-клеточная лимфома или лимфома Беркитта.

[0097] Соответственно, лекарственное средство можно приготовить для подкожного введения.

[0098] Соответственно, лекарственное средство может быть приготовлено так, чтобы обеспечить дозу от 45 до 1800 миллиграммов антитела.

[0099] Соответственно, лекарственное средство может быть приготовлено для подкожного введения в дозе от 45 до 1800 миллиграммов антитела.

[00100] Эти и другие варианты осуществления, особенности и потенциальные преимущества станут очевидными со ссылкой на следующее описание и графические материалы.

Краткое описание графических материалов

[00101] Объекты и особенности изобретения можно лучше понять, обратившись к графическим материалам, описанным ниже, на которых:

[00102] На Фиг. 1 показана таблица антител, используемых для проточного цитометрического анализа в исследованиях БП.

[00103] На Фиг. 2 показаны данные ФК групп п/к доз. Антитела против лекарственных средств (ADA) были обнаружены с помощью проверенного качественного электрохемилюминесцентного анализа (ECL). Заболеваемость со временем увеличивалась и влияла на ФК, когда она достигала определенного порогового титра около 1000 (~log(7)).

[00104] На Фиг. 3 показаны данные ФК яванского макака (макак) и модели AB79. Панели A и B демонстрируют необработанные данные ФК 8 исследований на обезьянах, панель A, первые 7 суток после первой дозы и панель B весь период наблюдения. Дозы были обозначены цветом, а данные п/к не были указаны (Фиг. 2). Панель C демонстрирует окончательную структуру модели ФК, включая опосредованное мишенью распределение лекарственных средств (TMDD), отмеченное синей рамкой. V_C обозначает объем центрального компартмента, в котором наблюдаются концентрации AB79 (отмечены Conc). V_P обозначает объем периферийного компартмента. R_общее представляет собой компартмент связанного и несвязанного антителом рецептора CD38. K_SYN и K_DEG обозначают константы скорости продуцирования и разложения рецептора, а K_INT константа скорости интернализации (комплексная константа скорости элиминации). K_SS константа установившегося состояния, определяемая как K_SS= (K_OFF+K_INT) / K_ON, где K_OFF - это диссоциация и K_ON константа скорости связывания. Панели D-F показывают наложения предсказаний линейной двухкомпонентной модели (медиана, 95% интервал предсказания) без компонента TMDD и наблюдаемые данные для 3 самых низких доз (исследование 8). Обратите внимание на разные временные рамки между панелями D, E и F.

[00105] На Фиг. 4 показано влияние лечения AB79 на эритроциты через двое суток после введения дозы в исследовании 7 и общее количество лимфоцитов в первые сутки после введения дозы.

[00106] На Фиг. 5 показаны эффекты ADA в 13-недельном токсикологическом исследовании. Оценка относится к окончательной модели ФК популяции (Фиг. 1, таблица 4). Представлены следующие графики согласия (GOF), стратифицированные по дозе и способу введения (Keizer et al. (2013) CPT Pharmacometrics Syst. Pharmacol. 2: e50): (1) условно взвешенные остатки (CWRES) в зависимости от времени; (2) наблюдаемая концентрация в сравнении с прогнозом модели популяции; (3) CWRES в сравнении с предсказанием модели популяции; и (4) наблюдаемая концентрация по сравнению с индивидуальным прогнозом модели.

[00107] На Фиг. 6 показаны графики GOF для окончательной модели ФК популяции, стратифицированной по дозе и способу введения (в/в - красный, п/к - синий).

[00108] На Фиг. 7 показано сравнение экспрессии CD38 на поверхности NK, B и T клеток человека и обезьяны. Измерения проточной цитометрии были стандартизированы, и сигналы представлены в молекулах эквивалентной растворимой флуоресценции (MOEF). Лимфоциты крови человека и обезьяны связывают аналогичные уровни AB79. Прямое сравнение уровней экспрессии CD38 на NK-клетках обезьян (CD3-, CD159a +), B-клетках (CD3-, CD20 +) и T-клетках (CD3 +) и человеческих NK-клетках (CD3-, CD16/CD56 +), B-клетках (CD3-, CD19 +) и Т-клетках (CD3 +) оценивали с помощью проточной цитометрии. Медианную интенсивность флуоресценции (MFI) для окрашивания AB79 для каждой клеточной популяции переводили в единицы MOEF, используя стандартную кривую, построенную с использованием Rainbow Beads (Spherotech; Лейк Форест, Иллинойс). Показанные данные получены от 3 особей каждого вида и показывают MOEF ± SD для каждого типа клеток. Существуют различия в экспрессии CD38 между лимфоцитами крови с более высоким уровнем связывания AB79 (MOEF) на NK-клетках> B-клетках> T-клетках. Характер связывания AB79 аналогичен в клетках крови обезьян, но уровень связывания AB79/экспрессии CD38 ниже.

[00109] На Фиг. 8 показана межиндивидуальная и внутрииндивидуальная изменчивость в данных подсчета Т-клеток, В-клеток и NK-клеток у животных, получавших плацебо.

[00110] На Фиг. 9 показано количество NK, B и Т-клеток перед введением (клеток на мкл), стратифицированное по исследованиям (верхний ряд) или полу (нижний ряд).

[00111] На Фиг. 10 показано AB79-зависимое истощение NK-клеток, B-клеток и T-клеток. Представленные графики сфокусированы на изменениях, произошедших в течение первых 7 суток после лечения первой дозой AB79. Таким образом, можно было объединить данные исследований с однократным и многократным введением доз с еженедельным или раз в две недели графиком дозирования. Графики A-C показывают индивидуальное минимальное количество клеток (т.е. максимальное влияние на ФД), индивидуальное количество клеток через 7 суток после первой дозы, а также средние профили истощения клеток на дозу и структуру модели ФК-ФД NK-клеток, соответственно. На графиках E-F показана одинаковая информацию для B-клеток, а на графиках G-I показана та же информация для T-клеток.

[00112] На Фиг. 11 показаны смоделированные профили ФК человека и профили истощения популяции NK-клеток, B-клеток и T-клеток для AB79. На основе масштабированных моделей ФК и ФК-ФД обезьян были смоделированы 5 профилей ФК и клеточного удаления для однократных внутривенных и подкожных доз (от 0,0003 до 1 мг/кг). На графиках слева показаны данные после внутривенного введения, а на графиках справа - после подкожного введения. Первый ряд графиков отображает профили ФК. Нижний предел количественного определения (LLOQ) 0,05 мкг/мл обозначен горизонтальной пунктирной линией. ФК самой низкой дозы полностью перекрывалась шумом, и только при дозах 0,03 мг/кг ФК достигала уровней выше LLOQ.

[00113] На Фиг. 12 показан план исследования единичной возрастающей дозы AB79 на здоровых добровольцах (исследование токсичности). Всего 6 в/в и 4 п/к когорты из 74 субъектов были рандомизированы и получили единичную дозу AB79. Расширенный слепой анализ данных по безопасности, ФК и ФД проводили для каждой когорты перед увеличением дозы. Критерии остановки включали истощение популяции клеток-мишеней, чтобы избежать потенциальной иммуносупрессии у здоровых добровольцев. За каждым субъектом наблюдали в течение 92 суток после приема лекарственного средства.

[00114] На Фиг. 13 показаны графики GOF для моделей ФК-ФД, стратифицированные по пути введения (в/в - красный; п/к - синий). A) NK-клетки. B) B-клетки. C) Т-клетки.

[00115] На Фиг. 14 показано, что AB79 опосредует истощение популяции клеток за счет антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) и комплемент-зависимой цитотоксичности (КЗЦ). Сравнение количества рецепторов CD38 и восприимчивости к АЗКЦ и КЗЦ в линиях клеток линии B человека. Клеточные линии с повышенной экспрессией CD38 были более восприимчивы к АЗКЦ. Не наблюдалось АЗКЦ в линии клеток лимфобластов человека, которые не экспрессировали CD38 (MV-4-11), или в линии клеток яичников китайского хомячка, трансфицированных CD157, молекулой, близкой к CD38 (данные не показаны). EC₅₀-50% эффективная концентрация; н/в - не выполнялось; SD - стандартное отклонение.

[00116] На Фиг. 15 показано, что AB79 опосредует истощение популяции лимфоцитов обезьян. AB79 дозозависимо истощенные популяции NK-клеток крови> B-клеток> T-клеток у самок яванского макака (n=4/группа дозы) после однократной внутривенной дозы AB79, как количественно определено с помощью флуоросфер Flow-Count^TM (Beckman-Coulter) с помощью проточной цитометрии. Образцы собирали во время предварительного лечения (неделя -1), сутки 1: перед введением дозы, после введения дозы через 15, 30 минут, 1, 4, 8, 24, 48, 96 и 168 часов, на 10, 15, 22, 29, 36, 43, 50 и 57 сутки. Для ясности показаны только данные за 2 недели. Средние значения количества клеток рассчитывались в каждый момент времени и использовались для расчета % от исходного количества.

[00117] На Фиг. 16 показано, что вторичный ответ на столбнячный анатоксин человека (TTd) снижается при лечении AB79. Мышей CB17/SCID лечили антителом к асиалированному GM1 для уничтожения NK-клеток, а затем вводили 25×10⁶ лимфоцитов периферической крови человека. Через 7-10 суток были собраны образцы сыворотки для оценки человеческого Ig, уровень Ig был основой для рандомизации. Мышам давали TTd, чтобы вызвать ответную реакцию, и лечили указанными антителами два раза в неделю в течение 10 суток. Через 3 суток после последней обработки сыворотку собирали и анализировали на антитела к TTd. AB79 дозозависимо подавлял вторичный ответ на TTd. AB79 уменьшал ответную реакцию в той же степени, что и ритуксан (Rtx) (изотип (Iso), Rtx и AB79, все в дозе 10 мг/кг).

[00118] На Фиг. 17 показано, что AB79 не вызывает индукцию цитокинов. AB79 (растворимый) не увеличивал уровни IL-6 в МКПК, собранных у 4 разных субъектов после 24-часовой инкубации, по сравнению с изотипическим контролем IgG1 PHA (положительный контроль) повышал уровни цитокинов у всех субъектов, демонстрируя, что клетки обладают способностью вырабатывать IL- 6. Аналогичные результаты были получены при стимуляции МКПК в течение 48 часов и при тестировании IL-2, IL-4, IL-10, GM-CSF, IFNγ и TNFα (данные не показаны).

[00119] На Фиг. 18A показана схема эксперимента с сухим связыванием, влажным связыванием и растворимым веществом, показанным на Фиг. 18B (модификация Stebbings et al. (2007) J. Immunol. 179: 3325-3331).

[00120] На Фиг. 18B показано, что AB79 не обладает агонистической активностью. AB79 был высококонцентрированным, когда его добавляли в лунки в растворе для испарения жидкости (сухая связь) по сравнению с AB79, который связывался с лунками в растворе (влажная связь) или добавлялся непосредственно к МКПК (растворимый). AB79 не стимулировал IL-6 или IL-2, IL-4, IL-8, IL-10, GM-CSF, IFNγ или TNFα ни в одном из тестируемых условий через 24 часа. IL-8 постоянно продуцировался МКПК и не изменялся никаким лечением (данные не показаны).

[00121] На Фиг.19 показана оценка связывания AB79 с лимфоцитами CD45+ яванского макака. Связывание AB79 с CD45+лимфоцитами в нелизированной цельной крови яванского макака. Регистрируют CD45+ лимфоциты, а затем оценивают связывание AB79 (черная гистограмма) или связывание изотипического контроля (красная гистограмма). Связывание AB79 было обнаружено в подгруппе лимфоцитов, как показано на фракции клеток справа от красной пунктирной линии. Связывание изотипического контроля с лимфоцитами практически не наблюдалось.

[00122] На Фиг. 20 показаны средние наблюдаемые Cmax и минимальные уровни перед дозой (нг/мл) (цикл 1 и цикл 2). На Фиг. 20A показана Cmax (нг/мл) Ab79, а на Фиг. 20B показана концентрация Ab79 (нг/мл).

[00123] На Фиг. 21 показано, что подкожно вводимое Ab79 снижает уровни плазмобластов в крови дозозависимым образом.

[00124] На Фиг. 22 показано, что подкожно вводимое Ab79 снижает уровни плазмобластов в аспиратах костного мозга дозозависимым образом.

[00125] На Фиг. 23показано, что подкожно вводимое Ab79 снижает уровни плазматических клеток в аспиратах костного мозга дозозависимым образом.

[00126] На Фиг. 24 показаны уровни NK-клеток в периферической крови здоровых субъектов после однократного п/к введения AB79. П/к - подкожное.

[00127] На Фиг. 25 показаны уровни плазмобластов, моноцитов, B, T и NK-клеток в периферической крови здоровых субъектов после единичной инъекции плацебо-контроля, 0,1, 0,3 или 0,6 мг/кг-1 п/к AB79. Абсолютное кол-во моноцитов (клетки/мкл), …….. NK-клетки (клетки/мкл), всего Т-лимфоцитов (клетки/мкл), - - - - B-клетки (клетки/мкл), плазмобластные клетки (клетки/мкл). Центрированные кривые представляют собой медианное значение. NK - естественная (клетка) убийца; п/к - подкожно.

[00128] На Фиг. 26 показано связывание AB79 и даратумумаба с эритроцитами человека (медиана флуоресценции индивидуального донора). Периферическую кровь четырех здоровых добровольцев инкубировали с биотин-стрептавидин-BV421 AB79 (0, 0,1, 10, 100 мкг/мл) или биотин-стрептавидин-BV421 даратумумабом (0, 0,1, 1, 10, 100 мкг/мл) в течение 3 часов при комнатной температуре и осторожном встряхивании в присутствии или в отсутствие немеченого AB79 (500 мкг/мл) или немеченого даратумумаба (500 мкг/мл). Расшифровка: AB79-биотин -стреп-BV421; холодный AB79 и AB79-биотин-стреп-BV421; даратумумаб-биотин-стреп-BV421; холодный даратумумаб и даратумумаб-биотин-стреп-BV421.

Подробное описание сущности изобретения

[00129] В данном изобретении предложены способы лечения заболеваний, связанных с CD-38, путем подкожного введения антител к CD38.

[00130] В сосудистой сети пациентов с активным заболеванием экспрессируется приблизительно в 36 раз больше молекул CD38 на эритроцитах, чем на миеломных клетках. Таким образом, например, может потребоваться нецелевая экспрессия CD38 до того, как несвязанное антитело сможет пройти в костный мозг и связать CD38, экспрессируемый на клетках миеломы. Это может объяснить, почему другие антитела к CD38, известные в данной области техники, такие как даратумумаб и изатуксимаб, которые прочно связываются с эритроцитами и тромбоцитами, требуют системного введения высоких доз для достижения эффективности.

[00131] AB79, даратумумаб, изатуксимаб и MOR202 представляют собой IgG1, которые в первую очередь уничтожают опухоли за счет антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ). Этот механизм требует, чтобы эффекторные клетки, такие как NK-клетки, связывали антитела с клетками-мишенями и формировали литический синапс для целенаправленной секреции цитотоксических агентов. Частота этих эффекторных клеток в крови на несколько порядков ниже, чем у эритроцитов и тромбоцитов. Например, соотношение эритроцитов к NK-клеткам в крови составляет 20000:1. Следовательно, эффекторная активность даратумумаба, изатуксимаба и MOR202 отводится от опухолей, потому что эффекторные клетки в первую очередь связываются теми антителами к CD-38, которые связаны с эритроцитами и тромбоцитами, предотвращая образование литического синапса с опухолями, что приводит к низкому эффективность АЗКЦ.

[00132] Лечение пациентов антителами к CD38, которые связываются с эритроцитами и тромбоцитами, может привести к опасным для жизни побочным эффектам. Например, в одном исследовании лечение рецидивирующей или рефрактерной множественной миеломы с помощью MOR202 привело к нескольким серьезным связанным с лечением нежелательным явлениям или НЯВЛ (см., например, Raab et al. (2015) Blood 126: 3035). Наиболее частыми НЯВЛ любой степени были анемия (15 пациентов, 34%), утомляемость (14 пациентов, 32%), инфузионные реакции (РСИ) и лейкопения (13 пациентов, по 30% каждый), лимфопения и тошнота (11 пациентов, по 25% каждый). НЯВЛ степени ≥3 были зарегистрированы у 28 пациентов (64%); наиболее частыми были лимфопения (8 пациентов, 18%), лейкопения (5 пациентов, 11%) и артериальная гипертензия (4 пациента, 9%). РСИ возникали в основном во время первого введения; все были 1-2 степени, за исключением одного пациента (3 степень). Часто сообщалось об инфекциях (26 пациентов, 59%), но в большинстве случаев считалось, что они не связаны с лечением. MOR202 использовался клинически только в виде внутривенной инфузии.

[00133] Известны и другие антитела Morphosys, нацеленные на CD38 (см, e.g., WO 2006/125640, в которой раскрыты четыре человеческих антитела: MOR03077, MOR03079, MOR03080 и MOR03100, и два мышиных антитела: OKT10 и IB4). Эти антитела предшествующего уровня техники уступают антителам для использования согласно данному изобретению (например, AB79) по ряду причин. MOR03080 связывается с CD38 человека и CD38 яванского макака, но с низкой аффинностью к CD38 человека (Biacore K_D=27,5 нм). OKT10 связывается с человеческим CD38 и CD38 яванского макака, но с низкой/умеренной аффинностью к человеческому CD38 (Biacore K_D=8,28 нм). MOR03079 связывается с человеческим CD38 с высокой аффинностью (Biacore K_D=2,4 нм) но не связывается с CD38 яванского макака. MOR03100 и MOR03077 связываются с человеческим CD38 с умеренной или низкой аффинностью (Biacore K_D=10 нм и 56 нм соответственно). Для сравнения, антитела для применения согласно данному изобретению (например, AB79) связываются с человеческим CD38 и яванского макака с высокой аффинностью к CD38 человека. (Biacore K_D=5,4 нм). Более того, антитела предшествующего уровня техники обладают низкой активностью как АЗКЦ, так и КЗЦ.

[00134] Преимущество более эффективной АЗКЦ заключается в возможности доставки терапевтического антитела к CD38 в виде инъекции небольшого объема. Если антитело для применения согласно данному изобретению (например, AB79) приготовлено в концентрации 100 мг/мл, эффективная доза для пациента массой 80 кг с миеломой может быть введена в виде единичной подкожной инъекции <1,0 мл. Напротив, эффективная доза даратумумаба или изатуксимаба, введенная этому пациенту в сопоставимой форме (т.е. 100 мг/мл), потребует введения 12,8 мл или 8-16 мл соответственно.

[00135] Способы и стандартные дозы антител к CD38 обеспечивают в данном документе подкожное введение терапевтически эффективных доз антител к CD38, тем самым обеспечивая неожиданные преимущества и предотвращая побочные эффекты, неудобства и расходы, связанные с введением высоких доз системных терапий антителами к CD38.

[00136] В данном изобретении предложены способы и единичные дозированные формы для подкожного введения терапевтически эффективного количества выделенного антитела к CD38 пациенту, нуждающемуся в этом, для лечения заболеваний, при которых показано связывание с CD38, включая гематологические злокачественные опухоли. В некоторых вариантах осуществления антитело для подкожного введения содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID NO: 9 (или последовательность с идентичностью последовательности по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или 99%) и вариабельную область легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 10 (или последовательность с идентичностью по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или 99%). Предложенное в данном документе антитело к CD38 способно быть терапевтически эффективным при подкожном введении.

[00137] Еще одно преимущество антител к CD38 по данному изобретению состоит в том, что в отличие от некоторых других антител к CD38, используемых в клинике, антитела к CD38 по данному изобретению (например, AB79) способны связываться с CD38 яванского макака (макак), предоставляя полезную модель на животных для доклинической оценки дозировки, токсичности и эффективности, и т.д.

[00138] Другое преимущество антител к CD38 по данному изобретению состоит в том, что их можно использовать для скрининга других антител, которые конкурируют за связывание с CD-38 с тем же эпитопом, и могут быть полезны в способах и единичных дозированных формах по данному изобретению.

[00139] Если в настоящем документе не дано другое определение, то научные и технические термины, используемые в связи с данным изобретением, имеют значения, обычно принятые специалистами в этой области техники. Значение и объем терминов должны быть ясны. Однако, в случае любой скрытой двусмысленности определения, приведенные в данном документе, имеют приоритет над любым словарным или внешним определением. Кроме того, если иное не требуется по контексту, термины в единственном числе включают множественное число, а термины во множественном числе включают единственное число. Термин «или» включает в себя «и/или», если не указано иное. Кроме того, применение термина «включение», «включает», или «включительно», является неограничивающим. Термины, как «элемент» и «компонент» охватывают как элементы, так и компоненты, содержащие одну единицу, и элементы и компоненты, которые содержат более одной субъединицы, если конкретно не указано иное.

[00140] Как правило, номенклатура, используемая в связи с культурами клеток и тканей, молекулярная биология, иммунология, микробиология, генетика, а также химия белков и нуклеиновых кислот и гибридизация, и способы их получения, описанные в данном документе, хорошо известны и широко используются в данной области техники. Способы и технологии по данному изобретению обычно выполняются в соответствии с обычными методами, хорошо известными в данной области техники и описанными в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в данном описании, если не указано иное. Методики ферментативных реакций и очищения осуществляются в соответствии с указаниями производителя, как обычно используется в данной области, как описано в данном документе. Номенклатуры, используемые в связи с лабораторными процедурами и методами аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описанные в данном документе, хорошо известны и широко используются в данной области техники. Стандартные методы используются для химического синтеза, химического анализа, фармацевтического приготовления, приготовления, доставки и лечения пациентов.

[00141] Все заголовки и обозначения разделов используются только для ясности и справочных целей и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие. Например, специалисты в данной области техники оценят полезность объединения различных аспектов по данному описанию из разных заголовков и разделов в соответствии с сущностью и объемом изобретения, описанного в данном документе.

[00142] Некоторые термины определены ниже для более легкого понимания данного изобретения.

[00143] Термины «человеческий CD38» и «человеческий антиген CD38» относятся к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 или ее функциональной фракции, такой как эпитоп, как определено в данном документе (Таблица 1). В общем, CD38 имеет короткий внутрицитоплазматический хвост, трансмембранный домен и внеклеточный домен. Термины «CD38 яванского макака» и «антиген CD38 яванского макака» относятся к аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, которая на 92% идентична аминокислотной последовательности CD38 человека (Таблица 1). Синонимы CD38 включают циклическую АДФ-рибозогидролазу; циклическую АДФ рибозогидролазу 1; АДФ-рибозилциклазу; АДФ-рибозилциклаза 1; цАДФр гидролазу 1; CD38-rs1; I-19; антиген NIM-R5; 2'-фосфо-циклическую-АДФ- рибозтрансферазу; 2'-фосфо-АДФ-рибозилциклазу; 2'-фосфо-циклическую-АДФ- рибозтрансферазу; 2'-фосфо-АДФ-рибозил-циклазу; T10.

Таблица 1. Аминокислотная последовательность CD38 человека и яванского макака

Вид	Аминокислотная последовательность 12345678901234567890123456789012345678901234567890	SEQ ID NO
CD38 человека	MANCEFSPVSGDKPCCRLSRRAQLCLGVSILVLILVVVLAVVVPRWRQQWSGPGTTKRFPETVLARCVKYTEIHPEMRHVDCQSVWDAFKGAFISKHPCNITEEDYQPLMKLGTQTVPCNKILLWSRIKDLAHQFTQVQRDMFTLEDTLLGYLADDLTWCGEFNTSKINYQSCPDWRKDCSNNPVSVFWKTVSRRFAEAACDVVHVMLNGSRSKIFDKNSTFGSVEVHNLQPEKVQTLEAWVIHGGREDSRDLCQDPTIKELESIISKRNIQFSCKNIYRPDKFLQCVKNPEDSSCTSEI	1
CD38 яванского макака	MANCEFSPVSGDKPCCRLSRRAQVCLGVCLLVLLILVVVVAVVLPRWRQQWSGSGTTSRFPETVLARCVKYTEVHPEMRHVDCQSVWDAFKGAFISKYPCNITEEDYQPLVKLGTQTVPCNKTLLWSRIKDLAHQFTQVQRDMFTLEDMLLGYLADDLTWCGEFNTFEINYQSCPDWRKDCSNNPVSVFWKTVSRRFAETACGVVHVMLNGSRSKIFDKNSTFGSVEVHNLQPEKVQALEAWVIHGGREDSRDLCQDPTIKELESIISKRNIRFFCKNIYRPDKFLQCVKNPEDSSCLSGI	2
CD157 человека	maaqgcaasrllqlllqllllllllaaggararwrgegtsahlrdiflgrcaeyrallspeqrnknctaiweafkvaldkdpcsvlpsdydlfinlsrhsiprdkslfwenshllvnsfadntrrfmplsdvlygrvadflswcrqkndsgldyqscptsedcennpvdsfwkrasiqyskdssgvihvmlngseptgaypikgffadyeipnlqkekitrieiwvmheiggpnvescgegsmkvlekrlkdmgfqyscindyrpvkllqcvdhsthpdcalksaaaatqrkapslyteqragliiplflvlasrtql	13

[00144] Термины «терапевтически эффективное количество» и «терапевтически эффективная доза» относятся к количеству терапии, которое достаточно для уменьшения или облегчения тяжести и/или продолжительности расстройства или одного или более его симптомов; предотвращения развития расстройства; вызова регресса расстройства; предотвращения рецидива, развития, возникновения или прогрессирования одного или более симптомов, связанных с расстройством; или усиления или улучшения профилактического или терапевтического эффекта(ов) другой терапии (например, профилактического или терапевтического средства) в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и масса индивидуума, а также способность лекарственных средств вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество антитела представляет собой такое количество, при котором любые токсические или вредные эффекты антитела или части антитела перевешиваются терапевтически полезными эффектами. Терапевтически эффективное количество антитела для терапии опухолей можно измерить по его способности стабилизировать прогрессирование заболевания. Способность соединения ингибировать рак может быть оценена на модельной системе на животных, предсказывающей эффективность в отношении опухолей человека.

[00145] Термины «пациент» и «субъект» включают как людей, так и других животных, в частности млекопитающих. Таким образом, раскрытые в данном документе композиции, дозировки и способы применимы как для лечения людей, так и для ветеринарии. В одном варианте осуществления пациентом является млекопитающее, например человек.

[00146] Термин «заболевание, при котором показано связывание с CD38» означает заболевание, при котором связывание связывающего партнера (например, антитела к CD38 по изобретению) с CD38 обеспечивает профилактический или лечебный эффект, включая улучшение одного или более симптомы заболевания. Такое связывание может привести к блокированию других факторов или партнеров связывания для CD38, нейтрализации CD38, АЗКЦ, КЗЦ, активации комплемента или какому-либо другому механизму, с помощью которого болезнь предотвращается или лечится. Факторы и партнеры связывания для CD38 включают аутоантитела к CD38, которые блокируются антителами к CD38 по изобретению. Такое связывание может указываться как следствие экспрессии CD38 клетками или подмножеством клеток, например, клетками MM, в результате чего предоставление партнера по связыванию CD38 субъекту приводит к удалению, например, лизису этих клеток, например через гемолиз или апоптоз. Такая экспрессия CD38 может быть, например, нормальной, сверхэкспрессированной, несоответствующей экспрессией или следствием активации CD38 относительно нормальных клеток или относительно других типов клеток либо во время состояния, не связанного с заболеванием, либо в состоянии заболевания.

[00147] Термин «гематологическая злокачественная опухоль» относится к злокачественным новообразованиям кроветворных тканей и включает лейкемии, лимфомы и множественные миеломы. Неограничивающие примеры состояний, связанных с аберрантной экспрессией CD38, включают, но не ограничиваются ими, множественную миелому (Jackson et al. (1988) Clin. Exp. Immunol. 72: 351-356); В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (B-ХЛЛ) (Dürig et al. (2002) Leukemia 16: 30-35; Morabito et al. (2001) Leukemia Res. 25: 927-932; Marinov et al. (1993) Neoplasma 40(6): 355-358 и Jelinek et al. (2001) Br. J. Haematol. 115: 854-861); острый лимфобластный лейкоз (Keyhani et al. (1999) Leukemia Res. 24: 153-159 и Marinov et al. (1993) Neoplasma 40(6): 355-358); хронический миелоидный лейкоз (Marinov et al. (1993) Neoplasma 40(6): 355-358); острый миелоидный лейкоз (Keyhani et al. (1999) Leukemia Res. 24: 153-159); хронический лимфолейкоз (ХЛЛ); хронический миелолейкоз или хронический миелоидный лейкоз (ХМЛ); острый миелолейкоз или острый миелоидный лейкоз (ОМЛ); острый лимфолейкоз (ОЛЛ); волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ); миелодиспластические синдромы (МДС); и все подтипы и стадии (например, бластную фазу (БФ) ХМЛ, хроническая фаза (ХФ) или ускоренная фаза (УФ)) этих лейкозов и других гематологических заболеваний, которые определяются морфологическими, гистохимическими и иммунологическими методами, хорошо известными специалистам в данной области техники.

[00148] Термины «новообразование» и «неопластическое состояние» относятся к состоянию, связанному с пролиферацией клеток, характеризующимся потерей нормального контроля, что приводит к одному или более симптомам, включая нерегулируемый рост, отсутствие дифференцировки, дедифференцировку, локальную тканевую инвазию и метастазирование.

[00149] Термин «выделенное антитело» относится к антителу, которое по существу не содержит других антител, имеющих различные антигенные специфичности. Например, выделенное антитело, которое специфически связывается с CD38, по существу не содержит антител, специфически связывающих антигены, отличные от CD38. Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с эпитопом, изоформой или вариантом CD38 человека или CD38 яванского макака, может обладать перекрестной реактивностью с другими родственными антигенами, например, от других видов, таких как гомологи видов CD38. Более того, выделенное антитело может практически не содержать другого клеточного материала и/или химических веществ.

[00150] Термины «красные кровяные тельца», «ККТ» и «эритроциты» относятся к гемоглобин-содержащим клеткам костного мозга, которые переносят кислород к клеткам и тканям, и которые переносят углекислый газ обратно в органы дыхания. Эритроциты также называют красными клетками, красными клетками крови и эритроидными клетками.

[00151] Термины «специфическое связывание», «специфически связывается с» и «специфично для» применительно к взаимодействию конкретного антитела, белка или пептида с антигеном, эпитопом или другими химическими соединениями, означают связывание, которое в значительной степени отличается от неспецифического взаимодействия . Специфическое связывание может быть измерено, например, путем определения связывания молекулы по сравнению со связыванием контрольной молекулы, которая в общем случае представляет собой молекулу сходной структуры, которая не обладает активностью связывания. Например, специфическое связывание может быть определено путем конкуренции с контрольной молекулой, сходной с мишенью. Антитела к CD38 по данному изобретению специфически связывают лиганды CD38. Термины «специфическое связывание», «специфически связывается с» и «специфический для» также означает, что взаимодействие зависит от наличия конкретной структуры (например,, антигенная детерминанта или эпитоп) химического вида; например, антитело распознает и связывается с конкретной структурой белка, а не с белками в целом. Если антитело специфично для эпитопа «А», присутствие молекулы, содержащей эпитоп А (или свободного немеченого А), в реакции, содержащей меченный «А» и антитело, уменьшит количество меченого А, связанного с антителом. Специфическое связывание с конкретным антигеном или эпитопом может проявляться, например, антителом, имеющим KD для антигена или эпитопа на по меньшей мере около 10^-4 M, по меньшей мере около 10^-5 M, по меньшей мере около 10^-6 M, по меньшей мере около 10^-7 M, по меньшей мере около 10^-8 M, по меньшей мере около 10^-9 M, по меньшей мере около 10^-10 M, по меньшей мере около 10^-11 M, по меньшей мере около 10^-12 M или более, где KD обозначает скорость диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Обычно антитело, которое специфически связывает антиген, будет иметь KD, которая в 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5000-, 10000- или более раз больше для контрольной молекулы по сравнению с антигеном или эпитопом. Кроме того, специфическое связывание с конкретным антигеном или эпитопом может проявляться, например, с антителом, имеющим KA или Ka для антигена или эпитопа по меньшей мере 20-, 50-, 100-, 500-, 1000-, 5000-, в 10000 или более раз больше для эпитопа по сравнению с контролем, где KA или Ka относятся к скорости ассоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген.

[00152] Термин «в течение периода времени» относится к любому периоду времени, например минутам, часам, дням, месяцам или годам. Например, за период времени может означать по меньшей мере 10 минут, по меньшей мере 15 минут, по меньшей мере 30 минут, по меньшей мере 60 минут, по меньшей мере 75 минут, по меньшей мере 90 минут, по меньшей мере 105 минут, по меньшей мере 120 минут, по меньшей мере 3 часа, по меньшей мере 4 часа, по меньшей мере 5 часов, по меньшей мере 6 часов, по меньшей мере 7 часов, по меньшей мере 8 часов, по меньшей мере 9 часов, по меньшей мере 10 часов, по меньшей мере 12 часов, по меньшей мере 14 часов, по меньшей мере 16 часов, по меньшей мере 18 часов, по меньшей мере 20 часов, по меньшей мере 22 часа, по меньшей мере одни сутки, по меньшей мере двое суток, по меньшей мере трое суток, по меньшей мере 4 суток, по меньшей мере 5 суток, по меньшей мере 6 суток, по меньшей мере один раз в неделю, по меньшей мере один раз в месяц, по меньшей мере один раз в год или любой промежуток времени между ними. Другими словами, антитело из композиции может абсорбироваться индивидуумом, которому оно вводится, в течение периода по меньшей мере 10 минут, по меньшей мере 15 минут, по меньшей мере 30 минут, по меньшей мере 60 минут, по меньшей мере 75 минут, по меньшей мере 90 минут, по меньшей мере 105 минут, по меньшей мере 120 минут, по меньшей мере 3 часа, по меньшей мере 4 часа, по меньшей мере 5 часов, по меньшей мере 6 часов, по меньшей мере 7 часов, по меньшей мере 8 часов, по меньшей мере 9 часов, по меньшей мере 10 часов, по меньшей мере 12 часов, по меньшей мере 14 часов, по меньшей мере 16 часов, по меньшей мере 18 часов, по меньшей мере 20 часов, по меньшей мере 22 часа, по меньшей мере одни сутки, по меньшей мере двое суток, по меньшей мере трое суток, по меньшей мере 4 суток, по меньшей мере 5 суток, по меньшей мере 6 суток, по меньшей мере один раз в неделю, по меньшей мере один раз в месяц, по меньшей мере один раз в год или любой промежуток времени между ними.

[00153] Композиция, которая «по существу» содержит компонент, означает, что композиция содержит более чем около 80% по массе компонента. Соответственно, композиция может содержать более чем около 90% по массе компонента. Соответственно, композиция может содержать более чем около 95% по массе компонента. Соответственно, композиция может содержать более чем около 97% по массе компонента. Соответственно, композиция может содержать более чем около 98% по массе компонента. Соответственно, композиция может содержать более чем около 99% по массе компонента.

[00154] Термин «около» относится к степени, близкой по количеству, степени, объему, времени и т.д., с незначительными вариациями в размере до 10%.

[00155] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к фармацевтически приемлемому материалу, композиции или носителю, подходящим для введения соединений по данному изобретению млекопитающим. Носители включают жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулирующий материал, участвующие в переносе или транспортировке рассматриваемого соединения от одного органа или части тела в другой орган или часть тела. Каждый носитель должен быть «приемлемым» в смысле совместимости с другими ингредиентами препарата и не причинять вреда пациенту. В одном варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для внутривенного введения. В другом варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для локорегиональной инъекции. В другом варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для подкожного введения. В другом варианте осуществления фармацевтически приемлемый носитель подходит для подкожной инъекции.

[00156] Термин «фармацевтическая композиция» относится к препаратам, подходящим для введения субъекту и лечения заболевания. Когда антитела к CD38 по данному изобретению вводятся в виде фармацевтических препаратов млекопитающим, например, людям, их можно вводить «как есть» или в виде фармацевтической композиции, содержащей антитело к CD38 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем и/или другими вспомогательными веществами. Фармацевтическая композиция может быть в форме стандартной дозированной формы для введения конкретной дозы антитела к CD38 в конкретной концентрации, конкретном количестве или конкретном объеме. Предложены фармацевтические композиции, содержащие антитела к CD38, либо отдельно, либо в комбинации с профилактическими средствами, терапевтическими средствами и/или фармацевтически приемлемыми носителями. Соответственно, фармацевтическая композиция может включать единичную дозированную форму согласно данному изобретению либо отдельно, либо в комбинации с профилактическими средствами, терапевтическими средствами и/или фармацевтически приемлемыми носителями. Соответственно, фармацевтическая композиция может содержать человеческое антитело к CD38, как описано в данном документе, либо отдельно, либо в комбинации с профилактическими средствами, терапевтическими средствами и/или фармацевтически приемлемыми носителями.

[00157] Традиционные структурные единицы антитела обычно содержат тетрамер. Каждый тетрамер обычно состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, каждая пара имеет одну «легкую» цепь (обычно с молекулярной массой около 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (обычно с молекулярной массой около 50-70 кДа). Легкие цепи человека классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда. Тяжелые цепи классифицируются как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. IgG имеет несколько подклассов, включая, помимо прочего, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. IgM имеет подклассы, включая, помимо прочего, IgM1 и IgM2. Таким образом, «изотип» относится к любому из подклассов иммуноглобулинов, определяемых химическими и антигенными характеристиками их константных областей. Известные изотипы иммуноглобулинов человека представляют собой IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgM1, IgM2, IgD и IgE. Терапевтические антитела могут также включать гибриды изотипов и/или подклассов.

[00158] Каждая вариабельная область тяжелой (VH) цепи и вариабельная область легкой (VL) цепи (длиной около 100-110 аминокислот) состоит из трех гипервариабельных областей, называемых «областями, определяющими комплементарность» (CDR), и четырех каркасных областей (FR) (около 15-30 аминокислот в длину), расположенными от аминоконца до карбокси-конца в следующем порядке: FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. «Вариабельность» относится к тому факту, что CDR сильно различаются по последовательности среди антител и, таким образом, определяют уникальный сайт связывания антигена.

[00159] Гипервариабельная область обычно включает аминокислотные остатки из около 24-34 аминокислотных остатков (LCDR1; «L» обозначает легкую цепь), 50-56 (LCDR2) и 89-97 (LCDR3) в вариабельной области легкой цепи и из около 31-35B (HCDR1; «H» обозначает тяжелую цепь), 50-65 (HCDR2) и 95-102 (HCDR3) в вариабельной области тяжелой цепи (Kabat et al. (1991) Sequences Of Proteins Of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD) и/или остатки, образующие гипервариабельную петлю (например, остатки 26-32 (LCDR1), 50-52 (LCDR2) и 91-96 (LCDR3) в вариабельной области легкой цепи и 26-32 (HCDR1), 53-55 (HCDR2) и 96-101 (HCDR3) в вариабельная область тяжелой цепи (Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917.

[00160] Система нумерации Kabat обычно используется для обозначения остатка в вариабельном домене (приблизительно, остатки 1-107 вариабельной области легкой цепи и остатки 1-113 вариабельной области тяжелой цепи) (например,, Kabat et al. (1991) Sequences Of Proteins Of Immunological Interest, 5^th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD), с системой нумерации EU, используемой для области Fc.

[00161] Термин «домен иммуноглобулина (Ig)» относится к области иммуноглобулина, имеющей четкую третичную структуру. В дополнение к вариабельным доменам каждая тяжелая и легкая цепь имеет константные домены: константные домены тяжелой цепи (СН); константные домены легкой цепи (CL) и шарнирные домены. В контексте антител IgG каждый изотип IgG имеет три области CH. Карбокси-концевая часть каждой HC и LC определяет константную область, в первую очередь отвечающую за эффекторную функцию. Соответственно, домены «CH» в контексте IgG следующие: «CH1» относится к положениям 118-220 согласно индексу EU, как у Kabat. «CH2» относится к позициям 237-340 согласно индексу EU, как в Kabat, а «CH3» относится к позициям 341-447 согласно индексу EU, как в Kabat.

[00162] Другим типом домена Ig тяжелой цепи является шарнирная область. Термин «шарнирная область» относится к гибкому полипептиду, содержащему аминокислоты между первым и вторым константными доменами антитела. Структурно домен CH1 IgG заканчивается в положении 220 по EU, а домен CH2 IgG начинается с остатка в положении 237 по EU. Таким образом, для IgG шарнир антитела определяется в данном документе как включающий положения с 221 (D221 в IgG1) до 236 (G236 в IgG1), где нумерация соответствует индексу UE, как у Kabat. В некоторых вариантах осуществления, например в контексте области Fc, включен нижний шарнир, причем «нижний шарнир» обычно относится к положениям 226 или 230.

[00163] Термин «Fc-область» относится к полипептиду, содержащему константную область антитела, за исключением первого константного домена иммуноглобулина и в некоторых случаях части шарнира. Таким образом Fc относится к двум последним константным областям иммуноглобулиновых доменов IgA, IgD и IgG и к последним трем константным областям иммуноглобулиновых доменов IgE и IgM, а также к гибкому шарнирному N-концу этих доменов. Для IgA и IgM Fc может содержать J-цепь. Для IgG домен Fc включает домены иммуноглобулина Cγ2 и Cγ3 (Cγ2 и Cγ3) и нижнюю шарнирную область между Cγ1 (Cγ1) и Cγ2 (Cγ2). Хотя границы Fc-области могут варьировать, Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG обычно определяется как включающая остатки C226 или P230 на ее карбоксильном конце, где нумерация соответствует индексу EU, как в Kabat. В некоторых вариантах осуществления, как более полно описано ниже, в Fc-область вносятся аминокислотные модификации, например, для изменения связывания с одним или более рецепторами FcγR или рецептором FcRn.

Антитела к CD38

[00164] Соответственно, в данном изобретении предложены выделенные антитела к CD38, которые специфически связывают белок CD38 человека и приматов, которые находят применение в способах подкожного введения и единичных дозированных формах. В частности, в данном изобретении используются антитела, которые связываются как с белками CD38 человека, так и с белками приматов, особенно с приматами, используемыми в клинических испытаниях, такими как яванские макаки (Macaca fascicularis, макаки крабоеды, также называемые в данном документе «макаки»).

[00165] В некоторых вариантах осуществления антитела к CD38 по изобретению взаимодействуют с CD38 по ряду аминокислотных остатков, включая K121, F135, Q139, D141, M142, E239, W241, S274, C275, K276, F284, V288, K289, N290, P291, E292, D293 и S294 на основе нумерации последовательностей человека. Соответственно, антитела к CD38 по изобретению могут взаимодействовать с CD38 по ряду аминокислотных остатков, включая K121, F135, Q139, D141, M142, E239, W241, S274, C275, K276, F284, V288, K289, N290, P291, E292, D293 и S294 SEQ ID NO: 1 на основе нумерации последовательностей человека. Соответственно, антитела к CD38 по изобретению взаимодействуют с CD38 по ряду аминокислотных остатков, включая K121, F135, Q139, D141, M142, E239, W241, F274, C275, K276, F284, V288, K289, N290, P291, E292, D293 и S294 SEQ ID NO: 2. Следует отметить, что эти остатки идентичны как у людей, так и у яванских макаков, за исключением того, что S274 на самом деле является F274 у яванских макаков. Эти остатки могут представлять собой иммунодоминантный эпитоп и/или остатки в следе специфического антигенсвязывающего пептида.

[00166] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 для применения согласно изобретению содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79) и ARGSLFHDSSGFYFGH (SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно изобретению содержит легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO:6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO:7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO:8; LCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно изобретению содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79), ARGSLFHDSSGFYFGH ( SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен и легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO: 6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO : 7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO: 8; LCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79) и ARGSLFHDSSGFYFGH (SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO:6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO:7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO:8; LCDR3 AB79). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79), ARGSLFHDSSGFYFGH ( SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79), и легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO: 6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO : 7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO: 8; LCDR3 AB79). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, как определено в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, и остальная часть последовательности может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, как определено в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 и остальная часть последовательности может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, как определено в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 и остальная часть последовательности может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, как определено в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 и остальная часть последовательности может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, как определено в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 и остальная часть последовательности может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9. Соответственно, цепь VH может содержать последовательности CDR, как определено в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5 и остальная часть последовательности может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 9.

[00167] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой (VH) цепи SEQ ID NO: 9.

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSDISWNGGKTHYVDSVKGQFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSLFHDSSGFYFGHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLA (SEQ ID NO:9).

[00168] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:10. Соответственно, цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. Соответственно, цепь VL может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности VL может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10.

[00169] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области легкой (VL) цепи SEQ ID NO: 10.

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGDNYVSWYQQLPGTAPKLLIYRDSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEEL (SEQ ID NO:10).

[00170] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность цепи VHSEQ ID NO: 9 или ее вариант, как описано в данном документе, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность цепи VL SEQ ID NO: 10 или ее вариант, как описано в данном документе.

[00171] Как будет понятно специалистам в данной области техники, вариабельные тяжелые и легкие цепи могут быть присоединены к последовательностям константных доменов человеческого IgG, обычно IgG1, IgG2 или IgG4.

[00172] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую (HC) цепь, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11.

[00173] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи (НС) SEQ ID NO: 11.

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSDISWNGGKTHYVDSVKGQFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSLFHDSSGFYFGHWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:11).

[00174] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12.

[00175] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит аминокислотную последовательность легкой цепи (LС) SEQ ID NO: 12.

QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGDNYVSWYQQLPGTAPKLLIYRDSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO:12).

В некоторых вариантах осуществления антитело содержит аминокислотную последовательность HC SEQ ID NO: 11 или ее вариант, как описано в данном документе, и аминокислотную последовательность LC SEQ ID NO: 12 или ее вариант, как описано в данном документе.

[00176] Данное изобретение включает антитела, которые связываются как с CD38 человека, так и с CD38 макака и взаимодействуют по меньшей мере с 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% следующих аминокислотных остатков: K121, F135, Q139, D141, M142, E239, W241, S274, C275, K276, F284, V288, K289, N290, P291, E292, D293 и S294 из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 на основе нумерации человека. Соответственно, антитело может взаимодействовать по меньшей мере с 90% этих аминокислотных остатков. Соответственно, антитело может взаимодействовать по меньшей мере с 95% этих аминокислотных остатков. Соответственно, антитело может взаимодействовать по меньшей мере с 97% этих аминокислотных остатков. Соответственно, антитело может взаимодействовать по меньшей мере с 98% этих аминокислотных остатков. Соответственно, антитело может взаимодействовать по меньшей мере с 99% этих аминокислотных остатков. Соответственно, антитело может взаимодействовать по меньшей мере с 14 (например, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16) из следующих аминокислот: K121, F135, Q139, D141, M142, E239, W241, S274, C275, K276, F284, V288, K289, N290, P291, E292, D293 и S294 из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2 на основе нумерации человека.

[00177] В некоторых вариантах осуществления антитела являются полноразмерными. Под «полноразмерным антителом» в данном документе подразумевается структура, которая составляет естественную биологическую форму антитела, включая вариабельные и константные области, включая одну или более модификаций, как описано в данном документе.

[00178] Альтернативно, антитела могут иметь множество структур, включая, но не ограничиваясь ими, фрагменты антител, моноклональные антитела, биспецифические антитела, мини-тела, доменные антитела, синтетические антитела (иногда называемые в данном документе «миметики антител»), химерные антитела, гуманизированные. антитела, слитые антитела (иногда называемые «конъюгатами антител») и их фрагменты соответственно. Специфические фрагменты антител включают, но не ограничиваются ими, (i) фрагмент Fab, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1, (ii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и CH1, (iii) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного антитела; (iv) фрагмент dAb (Ward et al. (1989) Nature 341: 544-546) который состоит из одной вариабельной области, (v) выделенные области CDR, (vi) фрагменты F (ab') 2, двухвалентного фрагмента, содержащего два связанных фрагмента Fab; (vii) одноцепочечные молекулы Fv (scFv), где домен VH и домен VL связаны пептидным линкером, который позволяет двум доменам связываться с образованием сайта связывания антигена (Bird et al. (1988) Science 242: 423-426, Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883), (viii) биспецифический одноцепочечный Fv (WO 03/11161) и (ix) «диатела» или «триатела», поливалентные или мультиспецифические фрагменты, сконструированные путем слияния генов (Tomlinson et al. (2000) Methods Enzymol. 326: 461-479; WO94/13804; Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448).

[00179] Соответственно, антитело может быть Fab-фрагментом. Соответственно, антитело может быть Fv-фрагментом. Соответственно, антитело может быть Fd-фрагментом. Соответственно, структура антитела может представлять собой выделенные области CDR. Соответственно, антитело может быть F(ab’)2-фрагментом. Соответственно, антитело может быть scFv-фрагментом.

[00180] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 1 сутки, 2 суток, 4 суток, 8 суток, 10 суток, 15 суток, 20 суток, 25 суток и/или 30 суток после введения.

[00181] Термин «значительный уровень истощения популяции клеток» может относиться к уровню истощения популяции клеток, который имеет неблагоприятные последствия для субъекта.

[00182] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 1 сутки после введения.

[00183] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 2 суток после введения.

[00184] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 4 суток после введения.

[00185] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 8 суток после введения.

[00186] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 10 суток после введения.

[00187] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 15 суток после введения.

[00188] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 20 суток после введения.

[00189] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 25 суток после введения.

[00190] В некоторых вариантах осуществления антитела не вызывают значительного уровня истощения популяции эритроцитов и/или истощения популяции тромбоцитов через 30 суток после введения.

[00191] Соответственно, антитела для применения согласно данному изобретению могут вызывать менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции эритроцитов после лечения. Соответственно, антитела для применения согласно данному изобретению могут вызывать менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции тромбоцитов после лечения.

Модификации антител

[00192] В данном изобретении также предложены варианты антител к CD38. То есть существует ряд модификаций, которые могут быть внесены в антитела по изобретению, включая, помимо прочего, модификации аминокислот в CDR (созревание аффинности), модификации аминокислот в области Fc, варианты гликозилирования, ковалентные модификации других типов, и т.д.

[00193] Термин «вариант» означает полипептид, который отличается от исходного полипептида. Варианты аминокислот могут содержать замены, вставки и делеции аминокислот. В общем, варианты могут включать любое количество модификаций при условии, что функция белка все еще присутствует, как описано в данном документе. То есть, например, в случае вариантов аминокислот, генерируемых с помощью CDR AB79, антитело все еще должно специфически связываться как с CD38 человека, так и с CD38 макака. Термин «вариант области Fc» означает последовательность Fc, которая отличается от последовательности Fc дикого типа или исходной последовательности Fc на основании по меньшей мере одной аминокислотной модификации. Вариант Fc может относиться к самому полипептиду Fc, композициям, содержащим вариант полипептида Fc, или аминокислотной последовательности. Если варианты аминокислот генерируются с Fc-областью, например, вариантные антитела должны поддерживать функции, необходимые для конкретного применения или указания антитела. Например, можно использовать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных замен, например 1-10, 1-5, 1-4, 1-3 и 1-2 замены. Подходящие модификации могут быть выполнены в одном или более положениях, как в общих чертах указано, например, в заявках на патент США с номерами 11/841654; 12/341769; публикации патентов США № 2004013210; 20050054832; 20060024298; 20060121032; 20060235208; 20070148170; и патентах США № 6737056; 7670600; и 6086875, все из которых полностью включены посредством ссылки, в частности, для конкретных аминокислотных замен, которые увеличивают связывание с рецепторами Fc.

[00194] Соответственно, вариант сохраняет функцию родительской последовательности, т.е. вариант является функциональным вариантом. Соответственно, антитело, содержащее вариантную последовательность, поддерживает функцию родительского антитела, т.е. антитело, содержащее вариантную последовательность, способно связывать человеческий CD38. Соответственно, лечение вариантом может вызвать менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции эритроцитов. Соответственно, лечение вариантом может вызвать менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2%, менее 1% истощения популяции тромбоцитов.

[00195] Вариант можно рассматривать с точки зрения сходства (т.е. аминокислотных остатков, имеющих аналогичные химические свойства/функции), предпочтительно вариант экспрессируются с точки зрения идентичности последовательностей.

[00196] Сравнение последовательностей может проводиться на глаз или, чаще, с помощью легко доступных программ сравнения последовательностей. Эти общедоступные и коммерчески доступные компьютерные программы могут вычислять идентичность последовательностей между двумя или более последовательностями.

[00197] Может быть желательно иметь от 1 до 5 модификаций в области Fc белков дикого типа или сконструированных белков, а также, например, от 1 до 5 модификаций в области Fv. Вариант полипептидной последовательности предпочтительно будет обладать, по меньшей мере, около 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью с родительскими последовательностями (например, вариабельные области, константные области и/или последовательности тяжелой и легкой цепей для AB79).Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 85% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 90% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 92% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 95% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 97% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 98% идентичности последовательности с родительской последовательностью. Соответственно, вариант может иметь по меньшей мере 99% идентичности последовательности с родительской последовательностью.

[00198] В одном варианте осуществления идентичность последовательности определяется по всей последовательности. В одном варианте осуществления идентичность последовательности определяется по всей последовательности-кандидату, сравниваемой с последовательностью, изложенной в данном документе.

[00199] Термин «аминокислотная замена» означает замену аминокислоты другой аминокислотой в конкретном положении в последовательности исходного полипептида. Например, замена S100A относится к варианту полипептида, в котором серин в положении 100 заменен на аланин. Соответственно, аминокислотная замена может быть консервативной аминокислотной заменой. Подходящим вариантом может быть одна или более, например, две или три консервативных аминокислотных замены. Аминокислоты со сходными биохимическими свойствами можно определить как аминокислоты, которые могут быть заменены консервативной заменой.

[00200] Если иное явно не указано в данном описании посредством ссылки на конкретную отдельную аминокислоту, аминокислоты могут быть заменены с использованием консервативных замен, как указано ниже. Алифатическая полярная незаряженная аминокислота может быть остатком цистеина, серина, треонина, метионина, аспарагина или глутамина. Алифатическая полярно заряженная аминокислота может представлять собой остаток аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, лизина или аргинина. Ароматическая аминокислота может быть остатком гистидина, фенилаланина, триптофана или тирозина. Консервативные замены могут быть выполнены, например, в соответствии с таблицей 2 ниже. Аминокислоты в одном блоке во втором столбце и предпочтительно в одной строке в третьем столбце могут заменять друг друга:

[00201] Таблица 2. Консервативные замены

АЛИФАТИЧЕСКИЕ	Неполярные	G A P
		I L V
	Полярные - незаряженные	C S T M
		N Q
	Полярные - заряженные	D E
		K R
АРОМАТИЧЕСКИЕ		H F W Y

[00202] Термин «вставка аминокислоты» означает добавление аминокислоты в конкретном положении в последовательности исходного полипептида.

[00203] Термин «делеция аминокислоты» означает удаление аминокислоты в конкретном положении в последовательности исходного полипептида.

[00204] Термины «исходное антитело» и «антитело-предшественник» означают немодифицированное антитело, которое впоследствии модифицируется для создания варианта. В одном варианте осуществления указанное в данном документе исходное антитело представляет собой AB79. В одном варианте осуществления исходное антитело в данном документе содержит цепь VH, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и цепь VL, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В одном варианте осуществления данного изобретения исходное антитело содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12. Родительское антитело может относиться к самому полипептиду, композициям, которые содержат исходное антитело, или аминокислотной последовательности, которая его кодирует. Соответственно, термин «исходный полипептид Fc» означает полипептид Fc, который модифицирован для образования варианта.

[00205] Термины «дикий тип», «ДТ» и «нативный» означают аминокислотную последовательность или нуклеотидную последовательность, которая встречается в природе, включая аллельные варианты. Белок дикого типа, полипептид, антитело, иммуноглобулин, IgG и т.д. имеют аминокислотную последовательность или нуклеотидную последовательность, которая не была намеренно модифицирована.

[00206] В некоторых вариантах осуществления одна или более модификаций аминокислот сделаны в одной или более CDR антитела к CD38. В общем, только 1, 2 или 3 аминокислоты заменяются в любой одиночной CDR, и обычно не более чем из 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 замен делается в наборе CDR. Однако следует понимать, что любая комбинация отсутствия замен, 1, 2 или 3 замен в любой CDR может быть независимо и необязательно объединена с любой другой заменой.

[00207] В некоторых случаях модификации аминокислот в CDR называют «созреванием аффинности». Антитело с «созревшей аффинностью» представляет собой антитело, имеющее одно или более изменений в одной или более CDR, которые приводят к повышению аффинности антитела к антигену по сравнению с родительским антителом, которое не имеет этих изменений. В некоторых случаях может быть желательно уменьшить аффинность антитела к его антигену.

[00208] Созревание аффинности может быть выполнено для увеличения аффинности связывания антитела с антигеном по меньшей мере от около 10% до 50%, 100%, 150% или более или от 1 до 5 раз по сравнению с «исходных» антителом. Иллюстративные антитела с созревшей аффинностью будут иметь наномолярную или даже пикомолярную аффинность к целевому антигену. Антитела с созревшей аффинностью получают известными способами (например, Marks et al. (1992) Biotechnol. 10: 779-783; Barbas et al. (1994) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 91: 3809-3813; Shier et al. (1995) Gene 169: 147-155; Yelton et al. (1995) J. Immunol. 155: 1994-2004; Jackson et al. (1995) J. Immunol. 154(7): 3310-9 и Hawkins et al. (1992) J. Mol. Biol. 226: 889-896).

[00209] Альтернативно, могут быть сделаны модификации аминокислот, например в одной или боле CDR антител по изобретению, которые являются «молчащими», например, которые существенно не изменяют аффинность антитела к антигену. Это может быть сделано по ряду причин, включая оптимизацию экспрессии (как это может быть сделано для нуклеиновых кислот, кодирующих антитела по изобретению).

[00210] Таким образом, в определение CDR и антител по изобретению включены варианты CDR и антитела; то есть антитела по изобретению могут содержать аминокислотные модификации в одной или более CDR, указанных в SEQ ID NO: 3-8. Кроме того, как указано ниже, аминокислотные модификации также могут быть независимо и необязательно выполнены в любых область вне CDR, включая каркасные и константные области.

[00211] В некоторых вариантах осуществления описаны варианты антитела AB79, которые специфичны для CD38 человека (SEQ ID NO: 1) и CD38 яванского макака (SEQ ID NO: 2). Это антитело состоит из шести CDR, где каждая CDR этого антитела может отличаться от SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и/или SEQ ID NO: 8 на 0, 1 или 2 аминокислотные замены.

[00212] В дополнение к модификациям, описанным выше, могут быть сделаны другие модификации. Например, молекулы могут быть стабилизированы за счет включения дисульфидных мостиков, связывающих домены VH и VL (Reiter et al. (1996) Nature Biotech. 14: 1239-1245). Кроме того, существует множество ковалентных модификаций антител, которые могут быть выполнены, как описано ниже.

[00213] Ковалентные модификации антител включены в объем данного изобретения и обычно, но не всегда, выполняются посттрансляционно. Например, несколько типов ковалентных модификаций конструкции на основе антитела вводятся в молекулу путем взаимодействия специфичных аминокислотных остатков конструкции на основе антитела с органическим дериватизирующим агентом, который способен реагировать с выбранными боковыми цепями или концевыми остатками N- или С-.

[00214] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 по данному изобретению специфически связывается с одним или более остатками или участками в CD38, но также не реагирует перекрестно с другими белками, гомологичными CD38, такими как BST-1 (антиген стромальных клеток костного мозга -1) и/или Mo5, также называемый CD157.

[00215] Обычно отсутствие перекрестной реактивности означает менее примерно 5% относительного конкурентного ингибирования между молекулами при оценке с помощью анализа ИФА и/или FACS с использованием достаточных количеств молекул в подходящих условиях анализа.

Ингибирование активности CD38 и уменьшение побочных эффектов

[00216] Раскрытые антитела могут найти применение для блокирования взаимодействия лиганд-рецептор или ингибирования взаимодействия рецепторного компонента. Антитела к CD38 по изобретению могут быть «блокирующими» или «нейтрализующими». Термин «нейтрализующее антитело» относится к антителу, связывание которого с CD38 приводит к ингибированию биологической активности CD38, например его способности взаимодействовать с лигандами, ферментативной активности, сигнальной способности и, в частности, его способности вызывать активацию лимфоцитов. Ингибирование биологической активности CD38 можно оценить с помощью одного или более из нескольких стандартных анализов in vitro или in vivo, известных в данной области техники.

[00217] Термины «ингибирует связывание» и «блокирует связывание» (например, когда относятся к ингибированию/блокированию связывания антитела CD38 с CD38) охватывают как частичное, так и полное ингибирование/блокирование. Ингибирование/блокирование связывания антитела CD38 с CD38 может снижать или изменять нормальный уровень или тип передачи клеточных сигналов, которые возникают, когда антитело к CD38 связывается с CD38 без ингибирования или блокирования. Подразумевается, что ингибирование и блокирование также включают любое измеримое снижение аффинности связывания антитела к CD38 с CD38 при контакте с антителом к CD38, по сравнению с лигандом, не контактирующим с антителом к CD38, например блокирование связывания антитела к CD38 с CD38 на по меньшей мере около 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% или 100%. Соответственно, блокирование связывания антитела к CD38 с CD38 может составлять по меньшей мере около 70%. Соответственно, блокирование связывания антитела к CD38 с CD38 может составлять по меньшей мере около 80%. Соответственно, блокирование связывания антитела к CD38 с CD38 может составлять по меньшей мере около 90%.

[00218] Раскрытые антитела к CD38 могут также ингибировать рост клеток. Термин «ингибирует рост» относится к любому измеряемому снижению роста клеток при контакте с антителом к CD38 по сравнению с ростом тех же клеток, не контактирующих с антителом к CD38, например, ингибирование роста культуры клеток на по меньшей мере около 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% или 100%. Соответственно, ингибирование роста может составлять по меньшей мере около 70%. Соответственно, ингибирование роста может составлять по меньшей мере около 80%. Соответственно, ингибирование роста может составлять по меньшей мере около 90%.

[00219] В некоторых вариантах осуществления раскрытые антитела к CD38 способны истощать популяцию активированных лимфоцитов и плазматических клеток. Термин «истощение популяции» в данному контексте означает измеримое снижение уровней активированных лимфоцитов и/или плазматических клеток в сыворотке у субъекта по сравнению с нелеченными субъектами. Как правило, наблюдается истощение популяции на по меньшей мере около 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% или 100%. Соответственно, истощение популяции может составлять по меньшей мере 50%. Соответственно, истощение популяции может составлять по меньшей мере 60%. Соответственно, истощение популяции может составлять по меньшей мере 70%. Соответственно, истощение популяции может составлять по меньшей мере 80%. Соответственно, истощение популяции может составлять по меньшей мере 90%. Соответственно, истощение популяции может составлять по меньшей мере 100% Как показано ниже в примерах, одно конкретное преимущество, которое проявляют антитела по данному изобретению - это способность этих клеток восстанавливаться после дозирования; то есть, как известно для некоторых видов лечения (например, с помощью антител к CD20), истощение популяции клеток может длиться в течение длительных периодов времени, вызывая побочные нежелательные явления. Как показано в данном документе, воздействие на активированные лимфоциты и/или плазматические клетки можно восстановить.

[00220] Антитела к CD38 по данному изобретению позволяют снизить нежелательные явления по сравнению с антителами к CD38 предшествующего уровня техники. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 не вызывает НЯВЛ. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 позволяет снизить частоту возникновения НЯВЛ в популяции пациентов по сравнению с другими антителами к CD38, такими как MOR202. НЯВЛ обычно относят к степени 1, 2, 3, 4 и 5, причем степень 1 является наименее тяжелой, а степень 5 - наиболее тяжелой. На основе стандартов FDA и других руководящих принципов Общих критериев терминологии для нежелательных явлений (CTCAE) для онкологических препаратов (см., например, https://evs.nci.nih.gov/ftp1/CTCAE/CTCAE_4.03_2010-06-14_QuickReference_5×7.pdf; а также https://ctep.cancer.gov/protocoldevelopment/electronic_applications/ctc.htm и Nilsson and Koke (2001) Drug Inform. J. 35: 1289-1299) описано, как обычно определяются такие степени. 1-я степень - легкая: бессимптомные или легкие симптомы; только клинические или диагностические наблюдения; вмешательство не показано. 2-я степень - умеренная: показано минимальное, местное или неинвазивное вмешательство; ограничение соответствующей возрасту инструментальной активности в повседневной жизни («ADL»). 3-я степень является тяжелой или значимой с медицинской точки зрения, но не представляет непосредственной угрозы для жизни: показана госпитализация или продление госпитализации; отключение; ограничение самообслуживания ADL. 4-я степень - опасное для жизни последствие: показано срочное вмешательство. 5-я степень - смерть, связанная с НЯ.

[00221] В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 позволяет снизить частоту степени НЯВЛ в популяции пациентов по сравнению с другими антителами к CD38, такими как MOR202. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 позволяет снизить степень НЯВЛ по сравнению с другими антителами к CD38 с 5 степени до 4 степени. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 позволяет снизить степень НЯВЛ по сравнению с другими антителами к CD38 с 4 степени до 3 степени. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 позволяет снизить степень НЯВЛ по сравнению с другими антителами к CD38 с 3 степени до 2 степени. В некоторых вариантах осуществления антитело для применения согласно данному изобретению, например, AB79 позволяет снизить степень НЯВЛ по сравнению с другими антителами к CD38 с 2 степени до 1 степени.

[00222] В некоторых вариантах осуществления антитело для использования согласно настоящему изобретению, например, AB79 позволяет снизить степень одного или более НЯВЛ, выбранных из группы, состоящей из анемии (включая гемолитическую анемию), тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении, лимфопении и тошноты. В некоторых вариантах осуществления антитело для использования согласно настоящему изобретению, например, AB79 позволяет снизить возникновение одного или более НЯВЛ, выбранных из группы, состоящей из анемии (включая гемолитическую анемию), тромбоцитопении, утомляемости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении, лимфопении и тошноты.

[00223] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 вызывает менее 50%, менее 40%, менее 30%, менее 20%, менее 10%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1%, истощения популяции эритроцитов. В некоторых вариантах осуществления антитело AB79 вызывает менее 50%, менее 40%, менее 30%, менее 20%, менее 10%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1%, истощения популяции эритроцитов. В некоторых вариантах осуществления антитело AB79 приводит к истощению популяции эритроцитов менее чем 10%.

[00224] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 вызывает менее 50%, менее 40%, менее 30%, менее 20%, менее 10%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1%, истощения популяции тромбоцитов. В некоторых вариантах осуществления антитело AB79 вызывает менее 50%, менее 40%, менее 30%, менее 20%, менее 10%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1%, истощения популяции тромбоцитов. В некоторых вариантах осуществления антитело AB79 приводит к истощению популяции тромбоцитов менее чем 10%.

[00225] В некоторых вариантах осуществления диагностический тест используется для определения наличия и/или степени анемии, включая гемолитическую анемию. Диагностические тесты на анемию, включая гемолитическую анемию, включая определение уровня гемоглобина. Обычно уровни гемоглобина интерпретируются следующим образом: (i) очень легкая/отсутствующая анемия: ≥12,0 г/дл, (ii) легкая: 10-12 г/дл, (iii) умеренная: 8-10 г/дл, (iv) тяжелая: 6-8 г/дл, и (v) очень тяжелые: ≤ 6 г/дл. Другие диагностические тесты на анемию, включая гемолитическую анемию, включают измерение уровня гаптоглобина. Как правило, уровень гаптоглобина ≤ 25 мг/дл указывает на наличие анемии, включая гемолитическую анемию. Другие диагностические тесты включают прямой тест на антиглобулин (DAT) (также называемый прямым тестом Кумбса), который используется для определения того, покрыты ли эритроциты in vivo иммуноглобулином, комплементом или обоими.

[00226] В некоторых вариантах осуществления диагностический тест используется для определения наличия и/или степени тромбоцитопении. Как правило, диагностический тест тромбоцитопении включает измерение количества тромбоцитов на микролитр (мкл) крови. Обычно присутствуют 150 × 10³-450 × 10³тромбоцитов на мкл крови. Как правило, тромбоцитопению диагностируют при наличии < 150 × 10³ тромбоцитов на мкл крови. Легкую тромбоцитопению обычно диагностируют при наличии 70-150 × 10³ тромбоцитов на мкл крови. Умеренную тромбоцитопению обычно диагностируют при наличии 20-70 × 10³ тромбоцитов на мкл. Тяжелую тромбоцитопению обычно диагностируют при наличии <20 × 10³ тромбоцитов на мкл крови.

Показания по заболеванию

[00227] Антитела, способы и единицы дозирования по изобретению находят применение во множестве применений, включая лечение или облегчение заболеваний, связанных с CD38.

[00228] CD38 экспрессируется в незрелых гематопоэтических клетках, снижается в зрелых клетках и повторно экспрессируется на высоких уровнях в активированных лимфоцитах и плазматических клетках. Например, высокая экспрессия CD38 наблюдается в активированных B-клетках, плазматических клетках, активированных CD4+ T-клетках, активированных CD8+ T-клетках, NK-клетках, NKT-клетках, зрелых дендритных клетках (DC) и активированных моноцитах. Определенные состояния связаны с клетками, экспрессирующими CD38, а определенные состояния связаны со сверхэкспрессией, высокой плотностью экспрессии или повышенной экспрессией CD38 на поверхности клеток. Экспрессирует ли популяция клеток CD38 или нет, можно определить методами, известными в данной области техники, например, проточно-цитометрическим определением процента клеток в данной популяции, которые помечены антителом, которое специфически связывает CD38, или иммуногистохимическими анализами, как обычно описано ниже для диагностических приложений. Например, популяция клеток, в которой экспрессия CD38 обнаруживается примерно в 10-30% клеток, может рассматриваться как имеющая слабую положительную реакцию на CD38; и популяция клеток, в которых экспрессия CD38 обнаруживается более чем в 30% клеток, может рассматриваться как определенно положительная для CD38 (как в Jackson et al. (1988) Clin. Exp. Immunol. 72: 351-356), хотя можно использовать другие критерии, чтобы определить, экспрессирует ли популяция клеток CD38. Плотность экспрессии на поверхности клеток может быть определена с использованием методов, известных в данной области техники, таких как, например, проточно-цитометрическое измерение средней интенсивности флуоресценции клеток, которые были флуоресцентно помечены с использованием антител, специфически связывающих CD38.

[00229] Терапевтические антитела к CD38 по данному изобретению связываются с CD38-положительными клетками, что приводит к истощению популяции этих клеток за счет множества механизмов действия, включая пути КЗЦ и АЗКЦ.

[00230] В данной области техники известно, что определенные состояния связаны с клетками, экспрессирующими CD38, а определенные состояния связаны со сверхэкспрессией, высокой плотностью экспрессии или повышенной экспрессией CD38 на поверхности клеток. Экспрессирует ли популяция клеток CD38 или нет, можно определить методами, известными в данной области техники, например, проточно-цитометрическим определением процента клеток в данной популяции, которые помечены антителом, которое специфически связывает CD38, или иммуногистохимическими анализами, как обычно описано ниже для диагностических приложений. Например, популяция клеток, в которой экспрессия CD38 обнаруживается примерно в 10-30% клеток, может рассматриваться как имеющая слабую положительную реакцию на CD38; и популяция клеток, в которых экспрессия CD38 обнаруживается более чем в 30% клеток, может рассматриваться как определенно положительная для CD38 (Jackson et al. (1988) Clin. Exp. Immunol. 72: 351-356), хотя можно использовать другие критерии, чтобы определить, экспрессирует ли популяция клеток CD38. Плотность экспрессии на поверхностях клеток может быть определена с использованием методов, известных в данной области техники, таких как, например, проточно-цитометрическое измерение средней интенсивности флуоресценции клеток, которые были флуоресцентно помечены с использованием антител, специфически связывающих CD38.

[00231] В одном аспекте в данном изобретении предложены способы лечения состояния, связанного с пролиферацией клеток, экспрессирующих CD38, включающие введение пациенту фармацевтически эффективного количества описанного антитела. В некоторых вариантах осуществления состояние представляет собой рак, и в конкретных вариантах осуществления рак представляет собой гематологическую злокачественную опухоль. В некоторых вариантах осуществления состояние представляет собой множественную миелому, хронический лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, лейкоз плазматических клеток, острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, B-клеточную лимфому или лимфому Беркитта. В некоторых вариантах осуществления состояние представляет собой множественную миелому.

[00232] В некоторых вариантах осуществления гематологическая злокачественная опухоль выбрана из группы хронического лимфолейкоза, хронического миелогенного лейкоза, острого миелогенного лейкоза и острого лимфоцитарного лейкоза. В некоторых вариантах осуществления гематологическая злокачественная опухоль представляет собой хронический лимфоцитарный лейкоз. В некоторых вариантах осуществления гематологическая злокачественная опухоль представляет собой хронический миелогенный лейкоз. В некоторых вариантах осуществления гематологическая злокачественная опухоль представляет собой острый миелогенный лейкоз. В некоторых вариантах осуществления гематологическая злокачественная опухоль представляет собой острый лимфоцитарный лейкоз.

[00233] В некоторых вариантах осуществления состояние представляет собой множественную миелому.

[00234] ХЛЛ - самый распространенный лейкоз среди взрослых в западном мире. ХЛЛ включает клональную экспансию созревших лимфоцитов с вовлечением лимфатических узлов и других лимфоидных тканей с прогрессирующей инфильтрацией костного мозга и присутствием в периферической крови. Форма B-клеток (B-ХЛЛ) представляет большинство случаев.

В-клеточная форма хронического лимфоцитарного лейкоза (B-ХЛЛ)

[00235] B-ХЛЛ- неизлечимое заболевание, характеризующееся прогрессирующим увеличением количества анергических моноклональных линии B-клеток, которые накапливаются в костном мозге и периферической крови в течение длительного времени в течение многих лет. Экспрессия CD38 рассматривается как независимый плохой прогностический фактор для B-ХЛЛ (Hamblin et al. (2002) Blood 99: 1023-9).

[00236] B-ХЛЛ характеризуется двумя подтипами: медленным и агрессивным. Эти клинические фенотипы коррелируют с наличием или отсутствием соматических мутаций в гене вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина (IgVH). В данном контексте индолентный B-ХЛЛ относится к расстройству у субъекта, имеющего мутированный ген IgVH и/или имеющего один или более клинических фенотипов, связанных с вялотекущим B-ХЛЛ. В данном контексте фраза агрессивный B-ХЛЛ относится к расстройству у субъекта, имеющего немутантный ген IgVH и/или имеющего один или более клинических фенотипов, связанных с агрессивным B-ХЛЛ.

[00237] Сегодняшняя стандартная терапия B-ХЛЛ является паллиативной и в основном проводится с применением цитостатиков хлорамбуцила или флударабина. При рецидивах часто начинается комбинированная терапия с использованием флударабина, циклофосфамида в сочетании с ритуксимабом (моноклональное антитело к CD20) или алемтузумабом (моноклональное антитело к CD52). В одном исследовании тридцать пять пациентов с рецидивом или рефрактерной агрессивной B-клеточной НХЛ прошли курс химиотерапии высокой дозой (HCT) с последующим введением ритуксимаба 375 мг/м² один раз в неделю 4 дозами, начиная с 40-х суток, и повторенных еще четырех доз, начиная с 180-х суток. Инфузии ритуксимаба хорошо переносились с токсичностью, связанной с инфузией только одной степени 3/4. Неожиданным нежелательным явлением, отмеченным в этом исследовании, была замедленная нейтропения у более чем половины пациентов (19/35 пациентов с 46 эпизодами нейтропении 3 или 4 степени; Kosmas et al. (2002) Leukemia 16: 2004-2015, который доступен онлайн по адресу https://www.nature.com/articles/2402639 ). В другом исследовании, шесть пациентов получали алемтузумаб внутривенно через сутки трижды в неделю в течение 12 недель. Дозу постепенно увеличивали ежесуточно (3, 10, а затем 30 мг) до тех пор, пока пациент был невосприимчив. Основными НЯВЛ были анемия, нейтропения (6/6 пациентов каждая) и тромбоцитопения (5/6 пациентов) (Ishizawa et al. (2017) Jpn. J. Clin. Oncol. 47(1): 54-60). Таким образом, существует острая неудовлетворенная медицинская потребность в лечении B-ХЛЛ уменьшением гематологических побочных эффектов. В некоторых вариантах осуществления предложены способы лечения B-ХЛЛ с использованием описанных антител к CD38, и, как описано ниже, это может быть выполнено с использованием комбинированной терапии, включая необязательно и независимо любые из вышеуказанных лекарственных средств.

Множественная миелома (ММ)

[00238] Множественная миелома (ММ) - это злокачественное заболевание линии B-клеток, характеризующееся неопластической пролиферацией плазматических клеток в костном мозге. Фармакологические находки у здоровых добровольцев подтвердили дальнейшее исследование MM (Fedyk et al. (2018) Blood 132:3249, полностью включено в данный документ посредством ссылки). Пролиферация миеломных клеток вызывает множество эффектов, включая литические поражения (отверстия) в кости, снижение количества эритроцитов, выработку аномальных белков (с сопутствующим повреждением почек, нервов и других органов), снижение функции иммунной системы, и повышенный уровень кальция в крови (гиперкальциемия). В настоящее время варианты лечения включают химиотерапию, предпочтительно связанную, по возможности, с трансплантацией аутологичных стволовых клеток (ASCT). Эти схемы лечения демонстрируют умеренный ответ. Однако наблюдаются лишь незначительные изменения в общей выживаемости, и средняя выживаемость составляет примерно 3 года. Таким образом, существует острая неудовлетворенная потребность в лечении множественной миеломы. В некоторых вариантах осуществления предложены способы лечения множественной миеломы с использованием описанных антител.

Моноклональная гаммопатия неопределенного значения (MGUS) и тлеющая множественная миелома (SMM)

[00239] Моноклональная гаммопатия неопределенного значения (MGUS) и тлеющая множественная миелома (SMM) являются бессимптомными предзлокачественными заболеваниями, характеризующимися пролиферацией моноклональных плазматических клеток в костном мозге и отсутствием повреждения органов-мишеней.

[00240] Тлеющая множественная миелома (SMM) - это бессимптомное пролиферативное заболевание плазматических клеток с высоким риском развития симптоматической или активной множественной миеломы (Kyle et al. (2007) N. Engl. J. Med. 356(25): 2582-2590). Международный консенсусный критерий, определяющий SMM, был принят в 2003 году и требует, чтобы у пациента был уровень М-белка> 30 г/л и/или клональные плазматические клетки костного мозга> 10% (Internat. Myeloma Working Group (2003) Br. J. Haematol. 121: 749-757). У пациентов не должно быть нарушений органов или связанных тканей, таких как поражения костей или симптомы. Недавние исследования выявили две подгруппы SMM: i) пациенты с развивающейся болезнью и ii) пациенты с не развивающейся болезнью (Internat. Myeloma Working Group (2003) Br. J. Haematol. 121: 749-757).

[00241] SMM напоминает моноклональную гаммопатию неопределенного значения (MGUS), поскольку повреждение органа-мишени отсутствует (Kyle et al. (2007) N. Engl. J. Med. 356(25): 2582-2590). Клинически, однако, SMM с гораздо большей вероятностью перерастет в активную множественную миелому или амилоидоз через 20 лет (вероятность 78% для SMM по сравнению с 21% для MGUS) (Kyle et al. (2007) N. Engl. J. Med. 356(25): 2582-2590).

[00242] Критерии международного консенсуса, определяющие MGUS, требуют, чтобы у пациента уровень М-белка <30 г/л, плазматические клетки костного мозга <10% и отсутствие поражения органа или родственных тканей, включая поражения или симптомы костей (Internat. Myeloma Working Group (2003) Br. J. Haematol. 121: 749-757).

Системный амилоидоз легкой цепи

[00243] Амилоидоз относится к семейству заболеваний, связанных с неправильным фолдингом белков, при которых различные типы белков агрегируются в виде внеклеточных нерастворимых фибрилл. Это сложные, мультисистемные заболевания. Распространенным типом системного амилоидоза является системный амилоидоз легких цепей (АЛ). (Gertz et al. (2004) Am. Soc. Hematol. 2004: 257-82). Как и множественная миелома, амилоидоз АЛ представляет собой новообразование плазматических клеток. АЛ-амилоидоз - редкое, прогрессирующее и смертельное заболевание пожилых людей, вызываемое небольшой популяцией клональных плазматических клеток в костном мозге, которые продуцируют избыток свободных легких цепей моноклонального иммуноглобулина. Попадая в кровоток, эти патологические легкие цепи неправильно складываются, агрегируются и откладываются в виде фибриллярного материала во внутренних органах. Отложения амилоидных фибрилл представляют собой тот же белок свободной легкой цепи, который секретируется клональной плазматической клеткой. (Cohen and Comenzo (2010) Am. J. Hematol. 2010: 287-94; Merlini and Bellotti (2003) New England J. Med. 349(6): 583-96; Murray et al. (2010) Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 116 (21): abstr 1909). В результате отложения амилоидных фибрилл происходит повреждение конечного органа и, в конечном итоге, смерть. Терапия, подавляющая клональные плазматические клетки, облегчает заболевание АЛ-амилоидозом за счет удаления фабрики, производящей циркулирующие токсичные легкие цепи, которые затем могут улучшить функцию органов и выживаемость. Ни одно лечение системного амилоидоза АЛ не получило одобрения регулирующих органов. Используемые агенты - те, которые используются для лечения множественной миеломы. Таким образом, существует острая неудовлетворенная медицинская потребность в лечении пациентов с АЛ-амилоидозом, и нацеливание CD38 на плазматические клетки является подходящей терапевтической стратегией.

Другие состояния, связанные с CD38

[00244] Антитела, способы и единицы дозирования по изобретению находят применение во множестве применений, включая лечение или облегчение заболеваний, связанных с CD38, таких как заболевания и состояния, связанные с воспалением и иммунными заболеваниями, особенно заболевания, связанные с активированными лимфоцитами. Антитела к CD38 по данному изобретению связываются с CD38-положительными клетками, что приводит к истощению популяции этих клеток, таких как активированные лимфоциты, за счет множества механизмов действия, включая пути КЗЦ и АЗКЦ.

[00245] Таким образом, любое аутоиммунное заболевание, которое проявляет либо повышенную экспрессию CD38, либо повышенное количество экспрессирующих CD38 клеток в качестве компонента заболевания, можно лечить с использованием антител по изобретению. К ним относятся, без ограничения, отторжение аллогенного островкового трансплантата, очаговая алопеция, анкилозирующий спондилоартрит, антифосфолипидный синдром, аутоиммунная болезнь Аддисона, антинейтрофильные цитоплазматические аутоантитела (ANCA), аутоиммунные заболевания надпочечников, аутоиммунная гемолитическая анемия, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный миокардит, аутоиммунная нейтропения, аутоиммунный оофорит и орхит, аутоиммунная тромбоцитопения, аутоиммунная крапивница, Болезнь Бехчета, буллезный пемфигоид, кардиомиопатия, синдром Кастлмана, брюшной еловый дерматит, синдром хронической утомляемости иммунной дисфункции, хроническая воспалительная демиелинизирующая полинейропатия, Синдром Черга-Стросса, рубцовый пемфигоид, синдром CREST, болезнь холодовых агглютининов, болезнь Крона, дерматомиозит, дискоидная волчанка, эссенциальная смешанная криоглобулинемия, дефицит фактора VIII, фибромиалгия-фибромиозит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, Гийен-Барре, синдром Гудпасчера, реакция трансплантат против хозяина (ТПХ), тиреоидит Хашимото, гемофилия А, идиопатический фиброз легких, идиопатическая тромбоцитопения пурпура (ИТП), невропатия IgA, полинейропатия IgM, иммуноопосредованная тромбоцитопения, ювенильный артрит, болезнь Кавасаки, лишай, красная волчанка, болезнь Меньера, смешанное заболевание соединительной ткани, рассеянный склероз, сахарный диабет 1 типа, миастения, пузырчатка обыкновенная, злокачественная анемия, узелковый полиартериит, полихрондрит, полигландулярные синдромы, ревматическая полимиалгия, полимиозит и дерматомиозит, первичная агаммаглобинулинемия, первичный билиарный цирроз, псориаз, псориатический артрит, феномен Рейнаульда, синдром Рейтера, ревматоидный артрит, саркоидоз, склеродермия, синдром Сьоргена, отторжение трансплантата солидных органов, синдром скованного человека, системная красная волчанка, системный амилоидоз легких цепей, такаясу артериит, височный артериит/гигантоклеточный артериит, тромботическая тромбоцитопения пурпура, язвенный колит, увеит, васкулиты, такие как герпетиформный дерматит, васкулит, витилиго и гранулематоз Вегнера.

[00246] В частности, в некоторых вариантах осуществления данного изобретения используются антитела для диагностики и/или лечения ряда заболеваний, включая, без ограничения, аутоиммунные заболевания, включая, без ограничения, системную красную волчанку (СКВ), ревматоидный артрит (РА), воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), язвенный колит, системный амилоидоз легких цепей и реакцию трансплантат против хозяина. В одном аспекте заболевание представляет собой системную красную волчанку (СКВ). В одном аспекте заболевание представляет собой ревматоидный артрит (РА). В одном аспекте заболевание представляет собой воспалительное заболевание кишечника (ВЗК). В одном аспекте заболевание представляет собой язвенный колит. В одном аспекте заболевание представляет собой реакцию трансплантат против хозяина. В одном аспекте заболевание представляет собой системный амилоидоз легких цепей.

[00247] Таким образом, например, можно лечить пациентов с высоким содержанием плазматических клеток, таких как пациенты с СКВ, у которых наблюдается высокий уровень плазматических клеток, а также пациенты с РА, у которых показано, что они не реагируют на терапию на основе CD20.

Композиции антител для введения in vivo

[00248] Составы антител, используемых в соответствии с данным изобретением, готовят для хранения путем смешивания антитела, имеющего желаемую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, наполнителями или стабилизаторами (Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition (1980) Osol, A. Ed.) в форме лиофилизированных составов или водных растворов.

[00249] Приведенные в данном документе составы могут также содержать более одного активного соединения, если необходимо для конкретного показания, подлежащего лечению, предпочтительно те, которые обладают дополнительными активностями, которые не влияют отрицательно друг на друга. Например, может требоваться предоставление антител с другими видами специфичности. Альтернативно или дополнительно композиция может содержать цитотоксический агент, цитокин, ингибитор роста и/или низкомолекулярный антагонист. Такие молекулы присутствуют в надлежащей комбинации в количествах, которые эффективны для предполагаемого применения.

Подкожное введение

[00250] Описанные в данном документе антитела к CD38, такие как AB79, можно вводить в достаточно терапевтически эффективных дозах, что позволяет вводить их подкожно. Подкожное введение представляет собой минимально инвазивный способ введения и считается наиболее универсальным и, следовательно, желательным способом введения, который можно использовать для краткосрочной и долгосрочной терапии. В некоторых вариантах осуществления подкожное введение можно проводить путем инъекции. В некоторых вариантах осуществления место инъекции или устройство можно изменять, когда требуется несколько инъекций или устройств.

[00251] Соответственно, пациенту гораздо легче вводить подкожные составы самостоятельно, особенно потому, что композицию, возможно, придется принимать регулярно в течение всей жизни пациента (например, начиная с первого года жизни ребенка). Кроме того, простота и скорость подкожного введения позволяет пациенту лучше соблюдать режим лечения и при необходимости быстрее получать лекарственные средства. Таким образом, подкожные композиции антител к CD38, представленные в данном документе, обеспечивают существенное преимущество по сравнению с предшествующим уровнем техники и решают некоторые неудовлетворенные потребности.

[00252] В некоторых вариантах осуществления антитела по данному изобретению вводят субъекту в соответствии с известными методами подкожным путем. В некоторых вариантах осуществления антитела по данному изобретению можно вводить посредством подкожной инъекции. В конкретных вариантах осуществления подкожный состав вводят подкожно в то же место пациента (например, вводят в верхнюю часть руки, переднюю поверхность бедра, нижнюю часть живота или верхнюю часть спины) для повторных или непрерывных инъекций. В других вариантах осуществления подкожный состав вводят подкожно в другое или измененное место пациента. Можно использовать однократное или многократное введение составов.

[00253] В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения, описанные в данном документе, можно использовать для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения, описанные в данном документе, можно использовать для гематологической злокачественной опухоли. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения, описанные в данном документе, можно использовать для множественной миеломы.

[00254] В некоторых вариантах осуществления антитела по изобретению обладают повышенной биодоступностью по сравнению с антителами предшествующего уровня техники. В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител по данному изобретению увеличивается на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% или более по сравнению с антителом предшествующего уровня техники, которое связывается с эритроцитами человека. В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител по данному изобретению составляет 110%, 120%, 130%, 140%, 150%, 160%, 170%, 180%, 190%, 200%, 250% или 300% или более по сравнению с антителом предшествующего уровня техники, которое связывается с эритроцитами человека. Соответственно, биодоступность может быть увеличена на 50%. Соответственно, биодоступность может быть увеличена на 60%. Соответственно, биодоступность может быть увеличена на 70%. Соответственно, биодоступность может быть увеличена на 80%. Соответственно, биодоступность может быть увеличена на 90%.

[00255] В некоторых вариантах осуществления увеличение биодоступности позволяет осуществлять подкожное введение.

[00256] В некоторых вариантах осуществления антитела по изобретению приводят к истощению популяции NK-клеток, B-клеток и/или T-клеток. В некоторых вариантах осуществления антитела по данному изобретению позволяют увеличить истощение популяции NK-клеток по сравнению с истощением популяции B-клеток или T-клеток. В некоторых вариантах осуществления антитела по данному изобретению позволяют увеличить истощение популяции NK-клеток по сравнению с B-клетками, а также повышенное истощение популяции NK-клеток по сравнению с T-клетками. В некоторых вариантах осуществления антитела по данному изобретению позволяют увеличить истощение популяции NK-клеток по сравнению с B-клетками, а также повышенное истощение популяции B-клеток по сравнению с T-клетками. В некоторых вариантах осуществления антитела по данному изобретению позволяют увеличить истощение популяции NK-клеток по сравнению с B-клетками, и повышенное истощение популяции B-клеток по сравнению с T-клетками. Соответственно, антитела по изобретению могут способствовать увеличению истощения популяции CD38⁺ клеток по сравнению с CD38^- клетками.

[00257] В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител к CD38, описанных в данном документе, после подкожного введения составляет от по меньшей мере 50% до по меньшей мере 80% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител к CD38, описанных в данном документе, после подкожного введения составляет от по меньшей мере 60% до по меньшей мере 80% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител к CD38, описанных в данном документе, после подкожного введения составляет от по меньшей мере 50% до 70% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител к CD38, описанных в данном документе, после подкожного введения составляет от по меньшей мере 55% до 65% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. В некоторых вариантах осуществления биодоступность антител к CD38, описанных в данном документе, после подкожного введения составляет от по меньшей мере 55% до 70% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00258] В некоторых вариантах осуществления биодоступность описанных в данном документе антител к CD38 после подкожного введения составляет по меньшей мере 40%, по меньшей мере 45%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 51%, по меньшей мере 52%, по меньшей мере 53%, по меньшей мере 54%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 56%, по меньшей мере 57%, по меньшей мере 58%, по меньшей мере 59%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 61%, по меньшей мере 62%, по меньшей мере 63%, по меньшей мере 64%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 66%, по меньшей мере 67%, по меньшей мере 68%, по меньшей мере 69%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 71%, по меньшей мере 72%, по меньшей мере 73%, по меньшей мере 74%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 76%, по меньшей мере 77%, по меньшей мере 78%, по меньшей мере 79%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 81%, по меньшей мере 82%, по меньшей мере 83%, по меньшей мере 84% или по меньшей мере 85% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. Соответственно, биодоступность может составлять по меньшей мере 50% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. Соответственно, биодоступность может составлять по меньшей мере 60% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. Соответственно, биодоступность может составлять по меньшей мере 70% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. Соответственно, биодоступность может составлять по меньшей мере 80% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы. Соответственно, биодоступность может составлять по меньшей мере 90% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00259] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет 50-80% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00260] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 50% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00261] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 55% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00262] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 60% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00263] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 65% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00264] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 70% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00265] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 75% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00266] В некоторых вариантах осуществления в данном изобретении предложен способ, в котором биодоступность антител по изобретению после подкожного введения составляет по меньшей мере 80% по сравнению с внутривенным введением, нормализованным для той же дозы.

[00267] В некоторых вариантах осуществления данного изобретения предложена единичная дозированная форма, содержащая антитело к CD38, как описано в данном документе, где антитело к CD38 приводит к истощению популяции менее чем 10% эритроцитов.

[00268] В некоторых вариантах осуществления данного изобретения предложена единичная дозированная форма, содержащая антитело к CD38, как описано в данном документе, где антитело к CD38 приводит к истощению популяции менее чем 10% тромбоцитов.

[00269] В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно в виде одной болюсной инъекции. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно ежемесячно. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждые две недели. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно один раз в неделю. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно дважды в неделю. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно ежесуточно. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждые 12 часов. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждые 8 часов. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждые шесть часов. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждые четыре часа. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждые два часа. В некоторых вариантах осуществления описанные в данном документе антитела к CD38 вводятся подкожно каждый час.

[00270] В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения вводятся в дозе от около 45 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 135 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 600 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 1200 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 1200 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 135 мг до около 1200 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 600 мг до около 1200 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 135 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 600 мг. В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы для подкожного введения содержат количество, достаточное для введения дозы от около 135 мг до около 600 мг. В некоторых вариантах осуществления доза выражается в мг на килограмм массы тела. В некоторых вариантах осуществления дозировка представляет собой дозировку один раз в сутки.

Единичные дозированные формы

[00271] В некоторых вариантах осуществления терапевтические антитела к CD38 составляют как часть единичной дозированной формы. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79) и ARGSLFHDSSGFYFGH (SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO: 6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO: 7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO: 8; LCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79), ARGSLFHDSSGFYFGH ( SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен и легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO: 6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO : 7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO: 8; LCDR3 AB79) или варианты этих последовательностей, содержащие до трех аминокислотных замен. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79) и ARGSLFHDSSGFYFGH (SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO:6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO:7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO:8; LCDR3 AB79). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO: 3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO: 4; HCDR2 AB79), ARGSLFHDSSGFYFGH ( SEQ ID NO: 5; HCDR3 AB79), и легкую цепь, содержащую следующие аминокислотные последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO: 6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO : 7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO: 8; LCDR3 AB79). В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:9. Соответственно, тяжелая цепь может содержать следующие аминокислотные последовательности CDR: GFTFDDYG (SEQ ID NO:3; HCDR1 AB79), ISWNGGKT (SEQ ID NO:4; HCDR2 AB79) и ARGSLFHDSSGFYFGH (SEQ ID NO:5; HCDR3 AB79), а остаток тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO 9. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области тяжелой (VH) цепи SEQ ID NO: 9.

[00272] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:10. Соответственно, легкая цепь может содержать следующие последовательности CDR: SSNIGDNY (SEQ ID NO: 6; LCDR1 AB79), RDS (SEQ ID NO: 7; LCDR2 AB79) и QSYDSSLSGS (SEQ ID NO: 8; LCDR3 AB79), а остаток легкой цепи может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность вариабельной области легкой (VL) цепи SEQ ID NO: 10.

[00273] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность цепи VH SEQ ID NO: 9 или ее вариант, как описано в данном документе, и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность цепи VL SEQ ID NO: 10 или ее вариант, как описано в данном документе.

[00274] Как будет понятно специалистам в данной области техники, вариабельные тяжелые и легкие цепи могут быть присоединены к последовательностям константных доменов человеческого IgG, обычно IgG1, IgG2 или IgG4.

В некоторых вариантах осуществления антитело содержит тяжелую (HC) цепь, имеющую аминокислотную последовательность, с по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:11. Соответственно, тяжелая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5, а оставшаяся часть последовательности тяжелой цепи может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO 11. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи (НС) SEQ ID NO: 11.

[00275] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит легкую (LC) цепь, имеющую аминокислотную последовательность, с по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO:12. Соответственно, легкая цепь может содержать последовательности CDR, определенные в SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, а оставшаяся часть последовательности легкой цепи может иметь по меньшей мере 80% идентичности последовательности с SEQ ID NO 12. В некоторых вариантах осуществления антитело содержит аминокислотную последовательность легкой цепи (LС) SEQ ID NO: 12.

[00276] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит аминокислотную последовательность HC SEQ ID NO: 11 или ее вариант, как описано в данном документе, и аминокислотную последовательность LC SEQ ID NO: 12 или ее вариант, как описано в данном документе.

[00277] В некоторых вариантах осуществления состав, содержащий антитело к CD38, представляет собой единичную дозированную форму. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 135 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 600 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 1200 мг до около 1800 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 1200 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 135 мг до около 1 200 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 600 мг до около 1200 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 135 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 45 мг до около 600 мг. В некоторых вариантах осуществления единичная дозированная форма содержит количество, достаточное для введения дозы от около 135 мг до около 600 мг. В некоторых вариантах осуществления доза выражается в мг на килограмм массы тела. В некоторых вариантах осуществления дозировка представляет собой дозировку один раз в сутки.

[00278] В некоторых вариантах осуществления единичные дозированные формы антитела к CD38, представленные в данном документе, могут дополнительно содержать один или более фармацевтически приемлемых наполнителей, носителей и/или разбавителей. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 предложено в виде фармацевтической композиции, которая содержит единичную дозированную форму согласно данному изобретению. Соответственно, фармацевтическая композиция может дополнительно содержать один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей и/или разбавителей.

[00279] Режимы дозирования корректируются для обеспечения оптимального желаемого ответа (например, терапевтического ответа). Например, может быть введена единичная доза, несколько разделенных доз могут вводиться с течением времени, или доза может быть пропорционально уменьшена или увеличена, как указано в зависимости от терапевтической ситуации. Композиции могут быть приготовлены в виде единичной дозированной формы для простоты введения и единообразия дозы. В контексте данного документа единичная дозированная форма относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единичных доз для подлежащего лечению субъекта; каждая единица содержит предопределенное количество активного соединения, рассчитанное так, чтобы оказывать необходимое терапевтическое действие, в сочетании с необходимым фармацевтическим носителем.

[00280] Спецификация единичных дозированных форм по данному изобретению продиктована и напрямую зависит от (a) уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, который должен быть достигнут, и (b) ограничений, присущих области компаундирования, такое как активное соединение для лечения индивидуума.

[00281] Эффективные дозы и режимы дозирования для антител к CD38, используемых в данном изобретении, зависят от типа и тяжести заболевания или состояния, подлежащего лечению, и могут быть определены специалистами в данной области техники.

[00282] В одном варианте осуществления антитело к CD38 вводят подкожно один раз в неделю в дозе от около 45 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 135 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 600 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 1 200 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 45 до около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 135 до около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 600 до около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 45 до около 135 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 45 до около 600 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 135 до около 600 мг.

[00283] Такое введение можно повторять, например, от 1 до 14 раз, например, от 3 до 5 раз. Примерный неограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества антитела к CD38, используемого в данном изобретении, составляет от около 45 до около 1800 мг. Соответственно, доза может составлять от около 135 до около 1800 мг. Соответственно, доза может составлять от около 600 до около 1800 мг. Соответственно, доза может составлять от около 1200 до около 1800 мг. Соответственно, доза может составлять от около 45 до около 1200 мг. Соответственно, доза может составлять от около 135 до около 1200 мг. Соответственно, доза может составлять от около 600 до около 1200 мг. Соответственно, доза может составлять от около 45 до около 135 мг. Соответственно, доза может составлять от около 45 до около 600 мг. Соответственно, доза может составлять от около 135 до около 600 мг.

[00284] В качестве неограничивающих примеров, лечение по данному изобретению может быть предложено как дозировка антитела один раз в стуки в количестве от около 45 до около 1800 мг, например, 45, 60, 80, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 420, 440, 460, 480, 500, 520, 540, 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680, 700, 720, 740, 760, 780, 800, 820, 840, 860, 880, 900, 920, 940, 960, 980, 1000, 1020, 1040, 1060, 1080, 1100, 1120, 1140, 1160, 1180, 1200, 1220, 1240, 1260, 1280, 1300, 1320, 1340, 1360, 1380, 1400, 1420, 1440, 1460, 1480, 1500, 1520, 1540, 1560, 1580, 1600, 1620, 1640, 1660, 1680, 1700, 1720, 1740, 1760, 1780 или 1800 мг в сутки, по меньшей мере, на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 или 40 сутки, или, альтернативно, по меньшей мере, в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 неделю после начала лечения или любой их комбинации, используя единичную или разделенную дозу каждые 24, 18, 12, 8, 6, 4, 2 или 1 час(ов), или любую их комбинацию. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 45 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 100 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 135 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 150 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 300 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 400 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 500 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 600 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 700 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 900 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1000 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1100 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1300 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1400 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1500 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1600 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1700 мг. Соответственно, доза для введения один раз в сутки может составлять около 1800 мг.

[00285] В одном варианте осуществления антитело к CD38 вводят в дозе для введения один раз в неделю, равной от около 45 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 135 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 600 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 1 200 до около 1800 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 45 до около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 135 до около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 600 до около 1200 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 45 до около 135 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 45 до около 600 мг. Соответственно, доза для введения один раз в неделю может составлять от около 135 до около 600 мг. Такое введение можно повторять, например, от 1 до 14 раз, например, от 3 до 5 раз. Введение может осуществляться путем непрерывной инфузии в течение периода от 1 до 24 часов, например от 1 до 12 часов. Такой режим можно повторять один или более раз по мере необходимости, например, через 6 или 12 месяцев. Дозировка может быть определена или скорректирована путем измерения количества соединения по данному изобретению в крови при введении, например, путем взятия биологического образца и использования антиидиотипических антител, которые нацелены на антигенсвязывающую область антитела к CD38.

[00286] В одном варианте осуществления терапевтическое антитело приготовлено с концентрацией 100 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления объем 1,75 мл, 2,0 мл, 2,25 мл или 2,5 мл вводят в бедро, живот или руку. В некоторых вариантах осуществления объем 1,75 мл, 2,0 мл, 2,25 мл или 2,5 мл вводят в бедро или живот. В некоторых вариантах осуществления объем 2,25 мл вводят в бедро или живот. В некоторых вариантах осуществления доза вводится в течение 4-, 6-, 8- или 10-часового периода времени. В некоторых вариантах осуществления доза вводится в течение 8-часового периода времени. В некоторых вариантах осуществления вводят 2, 4, 6 или 8 доз. В некоторых вариантах осуществления дозы вводят каждые 2 часа.

[00287] В дополнительном варианте осуществления антитело к CD38 вводят один раз в неделю в течение 2-12 недель. Соответственно, антитело можно вводить один раз в неделю, например, в течение 3-10 недель. Соответственно, антитело можно вводить один раз в неделю, например, в течение 4-8 недель. Соответственно, антитело можно вводить один раз в неделю, например, в течение 5-7 недель.

[00288] В одном из вариантов осуществления антитело к CD38 вводят подкожно с частотой, которая изменяется со временем. Соответственно, антитело можно вводить один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз в 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в течение 28-суточного цикла лечения до тех пор, пока не будет наблюдаться неприемлемая токсичность или пока субъект не выйдет из лечения из-за других причин.

[00289] В одном варианте осуществления антитело к CD38 вводят с помощью поддерживающей терапии, например, один раз в неделю в течение 6 месяцев или более.

[00290] В одном варианте осуществления антитело к CD38 вводят по схеме, включающей одну инфузию антитела к CD38 с последующей инфузией антитела к CD38, конъюгированного с радиоизотопом. Схема может быть повторена, например, через 7-9 суток.

[00291] В одном варианте осуществления данного изобретения предложена единичная дозированная форма, содержащая антитело к CD38, как описано в данном документе, где антитело к CD38 приводит к истощению популяции эритроцитов менее чем на 10% .

[00292] В одном варианте осуществления данного изобретения предложена единичная дозированная форма, содержащая антитело к CD38, как описано в данном документе, где антитело к CD38 приводит к истощению популяции тромбоцитов менее чем на 10% .

[00293] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD38 для применения согласно изобретению используется в комбинации с одним или более дополнительными терапевтическими средствами, например, химиотерапевтическим агентом. Неограничивающие примеры химиотерапевтических агентов, повреждающих ДНК, включают ингибиторы топоизомеразы I (например, иринотекан, топотекан, камптотецин и их аналоги или метаболиты и доксорубицин); ингибиторы топоизомеразы II (например, этопозид, тенипозид и даунорубицин); алкилирующие агенты (например, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан, тиотепа, ифосфамид, кармустин, ломустин, семустин, стрептозоцин, декарбазин, метотрексат, митомицин C и циклофосфамид); интеркаляторы ДНК (например, цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин); интеркаляторы ДНК и генераторы свободных радикалов, такие как блеомицин; и нуклеозидные миметики (например, 5-фторурацил, капецитибин, гемцитабин, флударабин, цитарабин, меркаптопурин, тиогуанин, пентостатин и гидроксимочевина).

[00294] Химиотерапевтические агенты, которые нарушают репликацию клеток, включают: паклитаксел, доцетаксел и родственные аналоги; винкристин, винбластин и родственные аналоги; талидомид, леналидомид и родственные аналоги (например, CC-5013 и CC-4047); ингибиторы протеинтирозинкиназы (например, иматиниб мезилат и гефитиниб); ингибиторы протеасом (например, бортезомиб); ингибиторы NF-κB, включая ингибиторы киназы IκB; антитела, которые связываются с белками, чрезмерно экспрессируемыми, неправильно экспрессируемыми или активируемыми при раке, и тем самым подавляют репликацию клеток (например, трастузумаб, ритуксимаб, цетуксимаб и бевацизумаб); и другие ингибиторы белков или ферментов, о которых известно, что они активируются, чрезмерно экспрессируются, неправильно экспрессируются или активируются при раке, ингибирование которых подавляет репликацию клеток.

[00295] В некоторых вариантах осуществления антитела по изобретению можно использовать до, одновременно или после лечения Velcade® (бортезомибом).

Способы лечения

[00296] В способах по изобретению терапия используется для обеспечения положительного терапевтического ответа в отношении заболевания или состояния. Термин «положительный терапевтический ответ» относится к улучшению заболевания или состояния и/или улучшению симптомов, связанных с заболеванием или состоянием. Например, положительный терапевтический ответ будет относиться к одному или более из следующих улучшений заболевания: (1) уменьшение количества неопластических клеток; (2) увеличение гибели неопластических клеток; (3) ингибирование выживания опухолевых клеток; (5) ингибирование (т.е. замедление до некоторой степени, предпочтительно остановка) роста опухоли; (6) повышенная выживаемость пациентов; и (7) некоторое облегчение одного или более симптомов, связанных с заболеванием или состоянием.

[00297] Положительные терапевтические ответы при любом данном заболевании или состоянии можно определить с помощью стандартных критериев ответа, специфичных для этого заболевания или состояния. Опухолевый ответ можно оценить на предмет изменений морфологии опухоли (т.е. общей массы опухоли, размера опухоли и т.д.) с использованием таких методов скрининга, как магнитно-резонансная томография (МРТ), рентгенографическая визуализация, компьютерная томография (КТ), сканирование костей скелета, эндоскопия и отбор образцов биопсии опухоли, включая аспирацию костного мозга (BMA) и подсчет опухолевых клеток в кровотоке.

[00298] В дополнение к этим положительным терапевтическим ответам субъект, проходящий терапию, может испытывать положительный эффект в виде улучшения симптомов, связанных с заболеванием. Что касается В-клеточных опухолей, у субъекта может наблюдаться уменьшение так называемых В-симптомов, например, ночного потоотделения, лихорадки, потери массы и/или крапивницы. При предраковых состояниях терапия терапевтическим антителом к CD38 может блокировать и/или продлевать время до развития родственного злокачественного состояния, например, развития множественной миеломы у субъектов, страдающих моноклональной гаммопатией неопределенного значения (MGUS).

[00299] Облегчение заболевания можно охарактеризовать как полный ответ. Термин «полный ответ» относится к отсутствию клинически выявляемого заболевания с нормализацией любых ранее аномальных рентгенографических исследований, костного мозга и спинномозговой жидкости (CSF) или аномального моноклонального белка в случае миеломы.

[00300] Такой ответ может сохраняться от 4 до 8 недель или от 6 до 8 недель после лечения в соответствии со способами по изобретению. В качестве альтернативы облегчение заболевания можно отнести к категории частичного ответа. Термин «частичный ответ» может относиться к по меньшей мере около 50% снижению всей измеряемой опухолевой нагрузки (т.е. количества злокачественных клеток, присутствующих у субъекта, или измеренного объема опухолевых масс, или количества аномального моноклонального белка) в отсутствие новых очагов поражения, которые могут сохраняться от 4 до 8 недель или от 6 до 8 недель.

[00301] Лечение согласно данному изобретению включает «терапевтически эффективное количество» используемых лекарственных средств.

[00302] Термины «терапевтически эффективное количество» и «терапевтически эффективная доза» относятся к количеству терапии, которое достаточно для уменьшения или облегчения тяжести и/или продолжительности расстройства или одного или более его симптомов; предотвращения развития расстройства; вызова регресса расстройства; предотвращения рецидива, развития, возникновения или прогрессирования одного или более симптомов, связанных с расстройством; или усиления или улучшения профилактического или терапевтического эффекта(ов) другой терапии (например, профилактического или терапевтического средства) в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения желаемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и масса индивидуума, а также способность лекарственных средств вызывать желаемый ответ у индивидуума. Терапевтически эффективное количество также представляет собой такое количество, при котором любые токсические или вредные эффекты антитела или части антитела перевешиваются терапевтически полезными эффектами. «Терапевтически эффективное количество» антитела для терапии опухолей можно измерить по его способности стабилизировать прогрессирование заболевания. Способность соединения ингибировать рак может быть оценена на модельной системе на животных, предсказывающей эффективность в отношении опухолей человека.

[00303] Альтернативно, это свойство композиции можно оценить, исследуя способность соединения ингибировать рост клеток или индуцировать апоптоз с помощью анализов in vitro, известных квалифицированному практикующему специалисту. Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может уменьшить размер опухоли или иным образом облегчить симптомы у субъекта. Специалист в данной области техники сможет определить такие количества на основе таких факторов, как размер субъекта, серьезность симптомов субъекта и определенных условий или выбранного способа введения.

Наборы антител к CD38

[00304] В другом аспекте изобретения предложены наборы для лечения заболевания или состояния, связанного с гематологическими злокачественными опухолями. В одном варианте осуществления набор содержит дозу описанного в данном документе антитела к CD38, такого как AB79. В некоторых вариантах осуществления предложенные в данном документе наборы могут содержать одну или более доз жидкого или лиофилизированного состава, как предложено в данном документе. Когда наборы включают лиофилизированный состав описанного в данном документе антитела к CD38, такого как AB79, обычно наборы также будут содержать подходящую жидкость для восстановления жидкого состава, например, стерильную воду или фармацевтически приемлемый буфер. В некоторых вариантах осуществления наборы могут содержать описанный в данном документе состав антитела к CD38, предварительно упакованный в шприц для подкожного введения медицинским работником или для домашнего применения.

[00305] В некоторых вариантах осуществления набор предназначен для однократного введения или дозы описанного в данном документе антитела к CD38, такого как AB79. В других вариантах осуществления набор может содержать несколько доз описанного в данном документе антитела к CD38, такого как AB79, для подкожного введения. В одном варианте осуществления набор может содержать описанный в данном документе состав антитела к CD38, предварительно упакованный в шприц для подкожного введения медицинским работником или для домашнего применения.

Промышленные изделия

[00306] В других вариантах осуществления предложены промышленное изделие, содержащее материалы, полезные для лечения описанных выше расстройств. Изделие состоит из контейнера и этикетки. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы и пробирки. Контейнеры могут быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию, которая эффективна для лечения состояния и может иметь порт для стерильного доступа (например, контейнер может представлять собой пакет с раствором для внутривенного введения или флакон, имеющий пробку, которую можно проткнуть иглой для подкожных инъекций). Активным агентом в композиции является антитело. Этикетка на контейнере или связанная с ним указывает, что композиция используется для лечения выбранного состояния. Изделие может дополнительно содержать второй контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, такой как забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера или раствор декстрозы. Он может дополнительно содержать другие материалы, желательные с коммерческой точки зрения и с точки зрения пользователя, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы и вкладыши в упаковки с инструкциями по применению.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Модельная характеристика антитела к CD38 у яванского макака

[00307] Антитело к CD38 AB79 связывает CD38 яванского макака (макак), что отличает его от даратумумаба (Darzalex^TM), цитолитического моноклонального антитела к CD38, недавно одобренного для лечения множественной миеломы. Эта уникальная функция поддерживала использование макака для доклинических исследований для характеристики фармакокинетики (ФК), фармакодинамики (ФД) и безопасности AB79. С этой целью были разработаны анализы для измерения концентраций лекарственных средств, иммуногенности и количественного определения T-, B- и NK-лимфоцитов в крови яванских макаков. Мы оценили эти параметры в 8 фармакологических и токсикологических доклинических исследованиях. Из протестированных клеточных популяций CD38 наиболее высоко экспрессируется на NK-клетках; поэтому мы предполагаем, что действие препарата на NK-клетки наиболее близко к действию на рассматриваемые клетки-мишени, плазмобласты, плазматические клетки и другие активированные лимфоциты.

[00308] Были объединены данные из 8 исследований на здоровых обезьянах с использованием диапазона доз 0,03-100 мг/кг, и были разработаны математические модели, которые описывают фармакокинетику и взаимосвязь «воздействие-эффект» для каждого из типов клеток. Истощение популяции NK-клеток было идентифицировано как наиболее чувствительный фармакодинамический эффект AB79. Это истощение популяции было описано с помощью модели оборота (ЕС50=34,8 мкг/мл по скорости уничтожения), и полное истощение популяции было достигнуто при внутривенной дозе 0,3 мг/кг. Также наблюдались промежуточные эффекты на количество Т-клеток с использованием модели прямого ответа (ЕС50=9,43 мкг/мл) и на количество В-клеток с использованием модели с 4 транзитными отсеками (ЕС50=19,3 мкг/мл по скорости истощения). Эти анализы подтвердили наблюдение, что каждая из измеренных субпопуляций лимфоцитов очищалась AB79 с разной скоростью и требовала разных периодов времени для истощения популяции компартмента крови.

[00309] Математические модели, которые описывают данные ФК и ФД, являются полезными инструментами для получения механистического и количественного понимания взаимосвязи между воздействием лекарственного средства и эффектом (Friberg et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20: 4713-4721; Mager et al. (2003) Drug Metab. Dispos. 31: 510-518; Han and Zhou (2011) Ther. Deliv. 2: 359-368). Типичные фармакокинетические особенности антител IgG, включая распределение и элиминацию, физиологическое и генетическое сходство между обезьяной и человеком, могут быть использованы для объяснения фармакологии AB79 (Glassman and Balthasar (2014) Cancer Biol. Med. 11: 20-33; Kamath (2016) Drug Discov. Today Technol. 21-22: 75-83). Кроме того, эти модели успешно применялись для прогнозирования концентраций ФК и эффектов ФД у здоровых людей (Han and Zhou (2011) Ther. Deliv. 2:359-368).

Материалы и методы

[00310] Данные исследований на обезьянах представлена в таблице 3 в хронологическом порядке. Исследования единичной дозы 2, 7 и 8 в основном проводились для оценки ФК и ФД внутривенного (в/в) и подкожного (п/к) введенного AB79. Исследования повторных доз проводились для оценки безопасности, ФК и ФД, включая два 4-недельных исследования (исследования 1 и 3) и три 13-недельных исследования в условиях GLP (исследования 4, 5 и 6). В 13-недельном исследовании 5 произошла ошибка дозирования. Животные из группы с самой низкой дозой получали 0,01 мг/кг вместо предполагаемых 0,1 мг/кг за один раз (вторая доза), а затем продолжали прием 0,1 мг/кг. Эти данные были добавлены к набору данных с правильной информацией о фактически введенных дозах. В исследовании 6 повторяли низкую дозу 0,1 мг/кг QW в группе исследования 5. Все исследования на животных проводили в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных, принятым и опубликованным Национальными институтами здравоохранения США.

Таблица 3. Исследования на обезьянах AB79 в хронологическом порядке

№ исследования	Описание исследования	Количество животных (самки, самцы)	Дозы (мг/кг)	Количество образцов на животное (ФК/ФД)
1	Сутки 1 (1 мг/кг) + сутки 28 (2 мг/кг), в/в, ФК, ФД	6 (0, 6)	плц, 1, 2	19/10
2	Единичная доза, в/в, ФК, ФД	9 (0, 9)	плц, 0,3, 3	14/9
3	4 недели токс., один раз в неделю, в/в, ФК, ФД	12 (4, 8)	плц, 1, 30, 100	15/8
4	13 недели токс., один раз в 2 недели, в/в, ФК, ФД	40 (20, 20)	плц, 3, 30, 80	47/29
5	13 недели токс., один раз в неделю, в/в, ФК, ФД	52 (26, 26)	плц, 0,1, 0,3, 1	31/9
6	13 недели токс., один раз в неделю, в/в, ФК, ФД	20 (20, 0)	плц, 0,1	31/10
7	Единичная доза, в/в/п/к, ФК, ФД	12 (12, 0)	0,1, 0,3, 1	16/16
8	Единичная доза, в/в/п/к, ФК, ФД	24 (24, 0)	0,03, 0,1, 0,3	19/19

в/в: внутривенная 30-минутная инфузия (исследования 1-4) или болюс (исследования 5-8), п/к: подкожная инъекция (группа 4 исследования 7 и 3 группы исследования 8), ФК: частая выборка образцов ФК, ФД: частая выборка образцов цельной крови для анализов проточной цитометрии, дающих данные о количестве клеток Т, В и NK. плц - плацебо, «4 недели» или «13 недель» описывают продолжительность периода лечения, токс: токсикологическое исследование, каждые 2 недели: график дозирования каждые две недели.

Биоаналитика

[00311] ФК анализировали с использованием проверенного метода, разработанного и проведенного Charles River Laboratories (Рино, Невада). Вкратце, концентрацию AB79 измеряли в сыворотке обезьян с использованием непрямого иммуноферментного анализа (ИФА). 96-луночный микротитровальный формат был покрыт антиидиотипическим антителом к AB79. Холостые пробы, стандарты и образцы для контроля качества (QC), содержащие AB79 в различных концентрациях, добавляли в планшет и инкубировали в течение 55-65 минут при комнатной температуре (КТ). После промывания микротитрационного планшета добавляли конъюгированный с пероксидазой аффинночистый мышиный античеловеческий IgG (пероксидаза AffiniPure Mouse Anti-Human IgG, Fcγ-фрагмент-специфический; Jackson ImmunoResearch) и инкубировали на планшете в течение дополнительных 55-65 минут. Планшет снова промывали, в лунки добавляли тетраметилбензидин (TMB) для образования хромофора, а развитие окраски останавливали добавлением стоп-раствора (2 Н серной кислотой). Оптическую плотность при 450 нм измеряли с использованием ридера для микропланшетов SPECTRAmax® 190 (Molecular Devices), и концентрации AB79 рассчитывали с использованием 4-параметрической логистической взвешенной (1/y²) стандартной калибровочной кривой. В исследовании 1 (таблица 3) нижний предел количественного определения (LLOQ) AB79 в сыворотке составлял 0,061 мкг/мл, а во всех других исследованиях - 0,05 мкг/мл.

Определение антител к AB79 (иммуногенность)

[00312] Скрининг сыворотки обезьян на антитела к лекарственным средствам (ADA) был проанализирован с использованием качественного электрохемилюминесцентного (ECL) метода, подтвержденного и проведенного Charles River Laboratories (Рино, Невада). Вкратце, неразбавленные образцы сыворотки инкубировали с 300 мМ уксусной кислотой. Кислотно-диссоциированные образцы инкубировали в смеси биотинилированных AB79, AB79, меченных SULFO-TAG (Meso Scale Diagnostics, маркировано в Charles River Laboratories), и 1,5 М основания Trizma для нейтрализации кислоты и образования иммунного комплекса. Затем этот комплекс добавляли в покрытый стрептавидином планшет MSD (Meso Scale Diagnostics) и давали ему возможность связываться. После отмывки комплекс был обнаружен путем добавления буфера Т для считывания MSD (Meso Scale Diagnostics) на планшет и последующего возбуждения SULFO-TAG ™ посредством электрохимической реакции Ru (bpy) 3 для генерации люминесценции (света), которая считывали с помощью MSD Sector 6000 (Meso Scale Diagnostics). Количество люминесценции коррелировало с уровнем обезьяньих антител к AB79, присутствующих в сыворотке отдельных образцов.

Характеристика клеток крови

[00313] Для оценки и сравнения уровня связывания AB79 между людьми и обезьянами образцы крови каждого из них собирали в пробирки с натриевым гепарином. Аликвоту крови (100 мкл) смешивали с соответствующим объемом антитела (Фиг. 1) и инкубировали в течение 15-20 минут при комнатной температуре в темноте. После инкубации для лизирования эритроцитов добавляли 1 мл лизирующего вещества BD FACS (1X; BD Biosciences; Сан-Хосе, Калифорния) и клетки инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре в темноте, затем центрифугировали, декантировали и ресуспендировали в 1 мл раствора. буфер для окрашивания с бычьим сывороточным альбумином (BD Biosciences). Клетки центрифугировали второй раз, декантировали и 250 мкл Flow Fix (1% параформальдегида в PBS Дюльбеко, не содержащем кальция и магния) (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) и измеряли флуоресценцию с помощью проточного цитометрического анализа с использованием проточного цитометра FACSCanto ™ II (BD Biosciences). Измеряли NK-клетки (CD3-, CD159a+), В-клетки (CD3-, CD20+) и Т-клетки (CD3+) обезьян и NK-клетки (CD3-, CD16/CD56+), В-клетки (CD3-, CD19+) и Т-клетки (CD3+ ) человека. Среднюю интенсивность флуоресценции для окрашивания AB79 для каждой клеточной популяции переводили в единицы молекул эквивалентной растворимой флуоресценции (MOEF) с использованием стандартной кривой, построенной с использованием Rainbow Beads (Spherotech; Лейк Форест, Иллинойс).

[00314] В исследованиях, приведенных в Таблице 3, клетки окрашивали и анализировали с использованием утвержденного метода, разработанного и выполненного Charles River Laboratories (Рино, Невада). Образцы крови обезьян собирали в пробирки с натриевым гепарином до и несколько раз после обработки AB79, и конкретные популяции лимфоцитов измеряли с помощью проточного цитометрического анализа с использованием проточного цитометра FACSCanto ™ II (BD Biosciences). Коммерческие антитела и антитело к CD38 (Ab19; патент США № 8362211) титровали до оптимальных концентраций для окрашивания. Были идентифицированы популяции обезьяньих CD38+/-, Т-клеток (CD3+), В-клеток (CD3-/CD20+) и естественных киллеров (NK) клеток (CD3-/CD20-/CD16+) и количественно определены лимфоциты с использованием пробирок CD45TruCount™ (BD Biosciences). Приблизительно 100 мкл аликвот каждого образца крови помещали в соответствующую лунку 96-луночного планшета и добавляли антитела в указанном объеме, смешивали и инкубировали в течение минимум 30 минут при комнатной температуре в темноте. После инкубации эритроциты лизировали, образцы смешивали и инкубировали при комнатной температуре в течение дополнительных 10 минут в темноте. Планшет центрифугировали и супернатант декантировали. Осадок клеток затем ресуспендировали в 1800 мкл буфера для окрашивания, образцы смешивали, центрифугировали и супернатант декантировали. Осадок клеток ресуспендировали в 500 мкл буфера для окрашивания с фетальной бычьей сывороткой и приблизительно 300 мкл клеточной суспензии переносили в 96-луночный планшет с v-образным дном для анализа. Процентное содержание NK-клеток, а также процентное соотношение общего количества Т-клеток и В-клеток применяли к значениям количества клеток, полученным с помощью пробирок TruCount™ (BD Biosciences; Сан-Хосе, Калифорния), и использовали для определения абсолютного количества клеток для каждой популяции клеток. В исследованиях 1-4 субпопуляции CD38+ NK, B и T-клеток оценивались на исходном уровне с помощью меченых антител к CD38 AB79 или Ab19 (Фиг. 1). Хотя TSF-19 связывается с другим эпитопом, результаты были очень похожими и поэтому не представлены отдельно. Обработанные образцы были немедленно проанализированы.

Разработка модели ФК

[00315] При разработке модели ФК были исследованы одно-, двух- и трехкомпонентные модельные структуры. Двухкомпонентная модель явно превосходила однокомпонентную, о чем свидетельствуют графики согласия (GOF) и снижение значения целевой функции (OFV). Основываясь на визуальном осмотре диагностических участков, введение третьего компонента не было необходимым для адекватного описания данных. Биодоступность (F) была смоделирована с использованием преобразования логита F=exp (PAR)/(1+exp (PAR)), где PAR обозначает параметр модели, чтобы гарантировать, что оценки ограничены между 0 и 1. Нелинейная ФК при низких концентрациях моделировали с помощью аппроксимации модели квазистационарного состояния (QSS) целевого процесса распределения лекарственного средства (TMDD) (Gibiansky and Gibiansky (2009) Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 5: 803-812).

[00316] Схематическое изображение модели представлено на Фиг. 3C. Для приближения QSS мы предполагаем, что стационарные концентрации свободного лекарственного средства C, целевого R и комплекса RC лекарственного средства устанавливаются очень быстро по сравнению со всеми другими процессами. Это означает, что процесс связывания уравновешивается процессами диссоциации и интернализации, и что следующее уравнение выполняется в соответствующих единицах: K _ON *C*R = (K _OFF +K _INT ) * RC, где K _ON обозначает константу скорости связывания и K _OFF константу скорости диссоциации, и K _INT константу скорости интернализации.

[00317] Межсубъектная изменчивость (BSV) была исследована для всех параметров и смоделирована с помощью экспоненциальных моделей следующего типа: PAR _i =TVPAR * e ^ETAPAR _i, где PAR _i это человек и TVPAR это типичная оценка параметра, и ETAPAR _i это оценка отклонения отдельных i. Предполагалось, что значения ETAPAR _i подчиняются нормальному распределению со средним нулем. Остатки описывались с помощью комбинированной модели аддитивных и пропорциональных ошибок (Beal and Sheiner (1992) NONMEM User Guides, in University of California CA).

[00318] Следующие параметры были исследованы для выявления потенциальных ковариантных эффектов на ФК AB79: масса тела, пол, доза, способ введения и исследование.

Разработка модели ФК-ФД

[00319] Для каждого из трех типов клеток разработка модели ФК-ФД проводилась отдельно. Обратите внимание, что для разработки модели измерения, близкие к введению лекарственного средства (<8 часов после введения дозы), не использовались, потому что на них повлиял неспецифический лекарственно-независимый эффект, потенциально из-за взятия нескольких проб крови за короткий промежуток времени (Фиг. 4). Модель ФК и оценки параметров были исправлены. Были протестированы модели оборота, транзитного компонента и прямого отклика различных форм (Friberg et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20: 4713-4721; Mager et al. (2003) Drug Metab. Dispos. 31: 510-518). В моделях оборота влияние препарата было введено на скорость выведения клеток в форме модели типа Emax с факторами Хилла или без них. В наших обозначениях модель Emax - это функция f концентрации лекарственного средства c следующего вида: f(c)=EMAX*c ^H /(c ^H +C50 ^H ), EMAX обозначает максимальный эффект, C50 - это концентрация, при которой достигается половина максимального эффекта, и H - фактор Хилла. В модели транзитного компонента (TCM) эффект лекарственного средства был введен и протестирован на различных позициях: на скорости пролиферации, на циркулирующих клетках и на третьем транзитном отсеке. Также были проверены комбинации этих эффектов и подтверждают ли данные наличие механизма обратной связи от циркуляции к скорости распространения. Кроме того, модели прямого ответа типа Emax с факторами Хилла и без них были протестированы для описания кривой «концентрация лекарственного средства-эффект».

[00320] Параметры случайного эффекта были введены для оценки вариабельности между субъектами по базовому количеству клеток, по скорости производства клеток (KIN), по времени прохождения в модели транзитного компонента (MTT), по C50 и EMAX. Индивидуальные средние базовые уровни клеток были представлены в наборе данных (столбец BL). Это было использовано в модели как типичное значение. Был добавлен параметр случайного эффекта, позволяющий регулировать индивидуальную базовую оценку на основе всех измерений индивидуума. Остатки ФД описывались с помощью модели пропорциональных ошибок.

[00321] Для проверки модели в ходе моделирования (ФК и ФК-ФД) OFV, стандартные ошибки, графики GOF и графики зависимости индивидуального прогноза от данных использовались для оценки моделей и сравнения их с альтернативными.

[00322] Были использованы следующие программные пакеты: NONMEM (версия 7.2), KIWI (версия 1.6), Berkeley Madonna (версия 8.3.14), PSN (версия 4) и R (версия 3.3.0).

Подготовка набора данных

[00323] Наборы данных из 8 исследований на обезьянах были собраны, реорганизованы в единый формат и объединены в три отдельных набора данных ФК-ФД, читаемых NONMEM. Каждый из трех наборов данных содержал индивидуальные характеристики обезьян (исследование, ID, группа, масса тела, пол), информацию о дозировке, ФК и данные NK, B или T-клеток. Для животных контрольных групп к наборам данных добавляли только подсчет клеток, но не данные ФК, предполагая, что неявно отсутствуют уровни AB79 в сыворотке. Разрешенная во времени информация о статусе иммуногенности против лекарственных средств (ADA), а именно TITER, содержащий результат количественного измерения и переменную ADAF с флагом 0/1 (ADAF=1, если ADA влияет на концентрацию AB79, ADAF=0, если нет), добавлялся в отдельные столбцы к каждому наблюдению. Титры ADA были измерены с использованием разных спецификаций методов в разных исследованиях, и поэтому между исследованиями значения количественно не сопоставимы напрямую. Чтобы использовать информацию ADA единообразным образом во всех исследованиях, мы применили следующую процедуру для каждого животного отдельно: титры ADA, которые увеличивались в моменты времени позже, чем через 7 суток по сравнению с первоначально измеренными уровнями, считались ADA-положительными и отмечались в наборе данных (ADAF=1). Если образец в какой-то момент времени был отмечен как ADA-положительный, все образцы, взятые после этого момента времени, также были отмечены как ADA-положительные у этого животного независимо от измеренного титра. ADA-положительные наблюдения не использовались для оценки параметров во время разработки модели. Обратите внимание, что также измерения частичного разряда в точках отбора проб концентраций ФК, на которые влияет ADA, были помечены ADAF=1.

[00324] Для данных подсчета клеток индивидуальные базовые значения для каждого типа клеток (NK, B и T-клетки) были рассчитаны как среднее значение всех доступных измерений перед дозой для данного животного. В большинстве исследований это было единичное измерение. Затем базовое значение каждого животного добавляли в качестве наблюдения во время первого события дозирования (TIME=0) и в качестве постоянного значения в столбце BL для каждого наблюдения за соответствующим животным. На основе этого исходного значения был рассчитан процент от исходного уровня для каждого наблюдаемого количества клеток и добавлен к набору данных.

Масштабирование параметров ФК обезьяны

[00325] Окончательные модели ФК и ФК-ФД использовали в качестве отправной точки для моделирования профилей ФК и ФК-ФД для первого клинического испытания на людях. Сравнительный анализ данных терапевтических моноклональных антител показал, что параметры ФК, полученные в результате исследований на обезьянах, можно масштабировать для прогнозирования профилей ФК человека с приемлемой точностью (Han and Zhou (2011) Ther. Deliv. 2: 359-368). В публикации указано, что, используя фиксированный показатель степени 0,85, можно надежно предсказать клиренс моноклональных антител у человека. Следовательно, это соотношение применялось для масштабирования параметров клиренса человека (CL, Q), тогда как параметры объема (VC, VP) масштабировались с использованием прямой зависимости между массами тела (BW):

Результаты

Фармакокинетика AB79

[00326] Набор данных ФК был объединен из всех 8 исследований на здоровых обезьянах, за исключением групп плацебо (таблица 3). Всего набор содержал данные по 140 животным, из которых 58 были самцами и 82 самками. Масса тела исследуемых животных составляла от 2,1 до 4,7 кг, а дозы - от 0,03 до 100 мг на 1 кг массы тела (мг/кг). В одной группе исследования 7 и трех группах исследования 8 доз 0,03, 0,1, 0,3 и 1 мг/кг вводили подкожно (всего 15 животных). Объединенный набор данных содержал 2199 измеряемых значений ФК, превышающих LLOQ (Фиг. 3A, 3B). Параллельно с концентрацией AB79 оценивали ADA. Было обнаружено, что 229 наблюдений ФК подвержены влиянию ADA (Фиг. 5). Образцы ФК были наиболее плотно отобраны после первой дозы, и даже в долгосрочных токсикологических исследованиях большинство животных умерщвляли до 98 суток. Только исследование 4 включало группы выздоровления, и мы смогли собрать данные ФК только от 4 животных, 2 из группы 80 мг/кг и по одному из каждой группы 30 мг/кг и 3 мг/кг (Фиг. 3B).

[00327] Первоначально для каждого исследования на обезьянах проводили ФК-анализы с использованием стандартных некомпонентных методов (NCA). На основании исследований единичной дозы (болюсная внутривенная инъекция или 30-минутная внутривенная инфузия) объем распределения во время терминальной фазы (Vz) был рассчитан в диапазоне от 64 до 116 мл/кг, клиренс от 6,04 до 14,7 мл/кг/сутки, а конечный период полужизни (T1/2) от 4,75 до 11,2 суток. Было обнаружено, что площадь под кривой зависимости концентрации от времени (AUC) и значения максимальной концентрации (Cmax) увеличиваются пропорционально дозе в широком диапазоне. Только фармакокинетические профили групп с наименьшими дозами (<1 мг/кг, Фиг. 3D-3F) свидетельствуют о нелинейном увеличении клиренса при концентрациях ниже 0,5 мкг/мл, вероятно, вызванных целевыми механизмами (TMDD) (Kamath (2016) Drug Discov. Today Technol. 21-22: 75-83). На основе данных всех исследований на обезьянах, за исключением двух групп с наименьшей дозой (доза> 0,3 мг/кг), была построена линейная двухкомпонентная модель. Когда ФК групп с наименьшей дозой был смоделирован и наложен на измеренные концентрации, стало очевидно, что линейная модель лучше предсказывает концентрации (Фиг. 3D-3F).

[00328] Доступные фармакокинетические данные после п/к введения однократной дозы показали, что Cmax была на 70-80% ниже в группах п/к при той же дозе и что AUC были сопоставимы. Никаких различий в параметрах ФК между самцами и самками обезьян не наблюдалось. Результаты этого первоначального анализа были использованы в качестве отправной точки для разработки модели.

Разработка модели ФК

[00329] Разработка модели началась с данных по однократной внутривенной дозе, а затем первоначальная модель была постепенно расширена за счет более сложных данных. Подобно другим терапевтическим антителам, ФК в целом следует линейной двухкомпонентной модели (Kamath (2016) Drug Discov. Today Technol. 21-22: 75-83). Компонент нелинейного удаления (TMDD), описывающий ускоренный клиренс при низких концентрациях, был смоделирован с помощью приближения квазистационарного состояния (QSS) (Gibiansky and Gibiansky (2009) Expert Opin. Drug Metab. Toxicol. 5: 803-812). Предположение, что процесс ассоциации лекарственное средство-мишень происходит намного быстрее, чем процессы диссоциации, распределения и элиминации лекарственного средства, а также устранения мишени и комплекса лекарственное средство-мишень, приводит к упрощенной модели TMDD (Фиг. 3, таблица 4). Количество данных при низких концентрациях было относительно небольшим, так что не все параметры были оценены в одном прогоне оценки программного обеспечения. Поэтому параметры модели TMDD сначала оценивались путем сосредоточения внимания на данных исследований малых однократных доз 7 и 8. Полученные в результате оценки параметров TMDD затем сохранялись фиксированными во время окончательных оценок для всего набора данных (таблица 4).

[00330] Таблица 4. Результаты моделирования ФК популяции, оценки параметров и стандартные ошибки в процентах (% SEM)

	Окончательная оценка параметра		Межиндивидуальная изменчивость/ остаточная изменчивость
Параметр	Типичное значение	% SEM	Величина	% SEM
F	0,227	121	НО	-
K_A (л/сутки)	0,399	20,5	42,1%КВ	53,8
КЛ (л/сутки)	0,0187	5,17	42,9%КВ	20,1
V_C (л)	0,141	3,23	19,8%КВ	22,5
Q (л/сутки)	0,127	14,7	НО	-
V_P (л)	0,127	6,45	39,4%КВ	20,8
K_INT (1/сутки)	0,1	ФИКСИРОВАННЫЙ	49,3%КВ	36,7*
K_SS (1/сутки)	5,68	38,7*	НО	-
K_SYN(ед/л/сутки)^$	0,04	ФИКСИРОВАННЫЙ	НО	-
K_DEG (1/сутки)	0,00452	30,1*	НО	-
ПУТЬ на V_C	-0,697	6,51	НО	-
добавление RV	3,17E -04	21,2	0,0178 СО	-
Свойст. RV	0,0677	1,58	26,0%КВ	-
Минимальное значение целевой функции=5748,412

^$K_SYN скорость синтеза рецептора CD38. Поскольку фактические измерения концентрации или информация о синтезе или скорости разложения CD38 in vivo были недоступны, «u» использовался в качестве единицы для определенного неизвестного количества CD38.

* Оценки и стандартные ошибки для параметров TMDD были получены из отдельного прогона, в котором основное внимание уделялось данным групп с низкой дозой, а затем были зафиксированы для окончательной оценки других параметров ФК. NE: не оценено.

[00331] Оценки параметров поглощения K_A и F были получены при добавлении данных п/к групп. Все данные п/к получены из четырех групп с более низкими однократными дозами из исследований 7 и 8. Эти более низкие дозы (≤1 мг/кг) охватывают клинически значимый диапазон, но могут ограничивать обобщаемость оценок параметров для более высоких доз.

[00332] Межсубъектная изменчивость (BSV) для параметров ФК описывалась экспоненциальными моделями. Скорость абсорбции (K_A), клиренс (КЛ) и периферический объем распределения (V_P) имеют оценочную BSV около 40% и центральный объем распределения (V_C) около 20% (Таблица 4). Ковариативный анализ выявил влияние пути введения на V_C. Типичное значение V_C составляло 0,141 л при внутривенном введении и 0,043 л (примерно на 70% меньше) при подкожном введении. Других значимых ковариатных эффектов выявлено не было. Из-за ограниченного количества данных при низких концентрациях вариабельность между субъектом и индивидуальными прогнозами параметров TMDD оценивалась только для степени интернализации K_INT (BSV: 49%). Оценка модели на основе остаточных ошибок, OFV, стандартных ошибок, графиков GOF и индивидуальных кривых подтвердила, что окончательная модель адекватно описывает ФК AB79 у здоровых обезьян (таблица 4, Фиг. 6).

Фармакодинамика

[00333] Уровень связывания AB79 с NK-клетками, T-клетками и B-клетками крови человека и обезьяны сравнивали с помощью проточного цитометрического анализа. Как показано на Фиг. 7, лимфоциты обезьяны имели уровни экспрессии CD38, основанные на молекулах эквивалентной флуоресценции AB79 (MOEF), которые были немного ниже по сравнению с их аналогами у человека, но с аналогичным соотношением между типами клеток, например, экспрессия CD38 на NK-клетках> В-клетках> Т-клетках. Эти данные подтверждают использование этого вида приматов, кроме человека, в качестве актуальной модели, помогающей предсказать потенциал AB79 для активности ФД у людей.

[00334] Для углубленного количественного анализа взаимосвязи между воздействием лекарственных средств (ФК) и степенью и продолжительностью истощения популяций клеток (ФД) мы собрали наборы данных из концентраций ФК, количества NK-клеток, B-клеток и T-клеток всех 8 исследований на обезьянах, включая животных, получавших плацебо, если возможно (таблица 3). Первоначальная характеристика набора данных показала, что на исходном уровне Т-клетки имели среднее значение 3732 клеток на мкл (межквартильный диапазон (IQR): 2,881-5,176) и были наиболее распространенным подтипом лимфоцитов по сравнению с В-клетками с 1279 клеток на мкл. мкл (IQR: 860,8-1890) и NK-клеток с 685 клетками на мкл (IQR: 482,8-970,1). Исходная экспрессия CD38 в этих популяциях клеток оценивалась в исследованиях 1-4 (таблица 3, n=67). 86,7% (стандартное отклонение 11,3) NK-клеток экспрессировали CD38 с меньшей вариабельностью. Напротив, 58,7% (стандартное отклонение 27,0) В-клеток и 34,5% (стандартное отклонение 24,5) Т-клеток экспрессировали CD38 с большей вариабельностью.

[00335] Данные по животным, получавшим плацебо, показали, что среднее количество каждого из типов клеток варьировалось во времени между отдельными животными больше, чем можно было бы ожидать от изменчивости в пределах одного человека (Фиг. 8). Например, средний коэффициент вариации количества В-клеток индивидуальных кривых плацебо составлял 27%, но индивидуальные средние уровни В-клеток варьировали от 436,6 до 4389. Кроме того, также наблюдались различия между средними исходными числами лимфоцитов у самцов и самок животных, а также у животных из разных исследований, что увеличивало вариабельность (Фиг. 9). Основываясь на этих результатах, количество клеток после обработки было рассчитано относительно его индивидуального исходного значения в процентах, а не абсолютного количества клеток в каждый момент времени. Например, значение 33% означает, что в выборке количество клеток составляло 1/3 от базового количества клеток. Это обеспечило стандартизированные значения, которые можно было сравнивать по всему набору данных.

[00336] Быстрое начало истощения связывающих клеток AB79 предполагает, что исходная концентрация в крови приводит к снижению количества лимфоцитов (Фиг. 10). При внутривенных дозах AB79 0,3 мг/кг средний максимальный эффект на NK-клетки составлял 93,9% (то есть 6,1% от исходного количества клеток). При 0,1 мг/кг максимальное истощение популяции составило 71% (осталось 29% от исходного уровня). При дозах> 0,3 мг/кг популяции NK-клеток были почти полностью истощены в компартменте крови (надир (диапазон): 1,06% от исходного уровня (0,17, 6,23); Фиг. 10А). После единичной дозы 0,3 мг/кг NK-клеткам потребовалось приблизительно 7 суток для восстановления в среднем до 50% от исходного уровня, хотя кинетика восстановления сильно различалась у разных людей (Фиг. 10B, 10C). В соответствии с этими результатами, функция NK также была протестирована на подгруппе животных в исследовании 7 (n=3/группа; Таблица 3). Этот эксперимент показал дозозависимое снижение с минимальными изменениями активности NK в крови через 48 часов после лечения у животных, получавших 0,1 мг/кг AB79 (% лизиса при соотношении эффектор:мишень 100:1 ± стандартное отклонение; 44,5% ± 23,6% против 41,4% ± 25,8%) и почти полную потерю активности NK у животных, получавших 1,0 мг/кг (% лизиса при соотношении эффектор:мишень 100:1 ± стандартное отклонение; 37,4% ± 10,3% против 6,8% ± 12,5%). Функция NK-клеток показала восстановление через 57 суток, в следующий момент времени измеряли (% лизиса при соотношении эффектор:мишень 100:1 ± стандартное отклонение; 16,0% ± 11,9%).

[00337] Популяции B-клеток и T-клеток были истощены в меньшей степени по сравнению с NK-клетками, что согласуется с их более низкими уровнями экспрессии CD38 (Фиг. 7). Например, при внутривенном введении AB79 0,3 мг/кг популяции В-клеток имели средний максимальный уровень истощения до 45% от исходного уровня, а популяции Т-клеток были истощены до 43% от исходного уровня (Фиг. 10D, 10G). При таком уровне дозы снижение количества В-клеток на 50% по сравнению с исходным не было достигнуто у всех животных. Только при самых высоких дозах ≥30 мг/кг популяции В-клеток почти полностью истощались (Фиг. 10D). Популяции Т-клеток истощались до такой же степени, как и популяции В-клеток, но восстановление было быстрее (Фиг. 10G-I).

[00338] В двух исследованиях 7 и 8 сравнивали внутривенное и подкожное дозирование (Фиг. 10C, 10F, 10I). Не было очевидных различий в истощении клеток между путями введения. При более низких дозах (исследование 8) устойчивое (> 24 ч) истощение клеток на 50% ниже исходных значений наблюдалось только в популяции NK-клеток, но не в T- и B-клетках; хотя все клетки показали специфическое истощение популяции клеток в ранние моменты времени. Время начала уничтожения популяции NK-клеток оказалось одинаковым для разных дозированных групп, независимо от пути введения, а продолжительность истощения была дозозависимой. Восстановление клеток во всех тестовых группах наблюдалось к 57 суткам.

модели ФК-ФД

[00339] Отдельные модели ФК-ФД были разработаны для описания эффектов воздействия AB79 на NK, B и T-клетки. Во время моделирования ФК-ФД параметры ФК оставались фиксированными в соответствии с оценками окончательной модели ФК, и были опробованы различные модели частичного разряда (подробности см. в разделе материалы и методы). Популяция NK-клеток в периферической крови была адекватно описана с помощью модели оборота, а эффект уничтожающего лекарственного средства был связан через концентрацию ФК с моделью типа Emax со скоростью истощения. В этой модели EMAX представляет максимальную скорость истощения дополнительных NK-клеток и C50- концентрацию, при которой скорость дополнительного истощения NK-клеток является наполовину максимальной. Структурная модель ФК-ФД для NK-клеток имела следующий вид:

[00340] В формуле NK представляет собой фактическое количество NK-клеток, K _IN скорость производства и K _OUT скорость элиминирования при отсутствии лекарственного средства. Обратите внимание, что при данном базовом измерении BL K _OUT определяется уравнением K _OUT =K _IN /BL. c представляет концентрацию AB79 в центральном отсеке. При одновременной оценке всех параметров программа не дала стабильных результатов. Индивидуальные оценки KIN, EMAX и C50 сильно коррелировали. Более того, из-за ограниченной дифференциации между максимальными эффектами различных доз (см. предыдущий раздел) и большой индивидуальной вариабельности нельзя ожидать точных оценок всех параметров. В серии оценок один или два из трех параметров KIN, EMAX и C50 были зафиксированы на разных значениях, а остальные оценивались. Достигнута стабильная работа и приемлемое качество подгонки с фиксированным KIN, равным 10000, и EMAX, равным 322. Типичная оценка C50 составляла 29,0 мкг/мл (Таблица 5). Кроме того, была протестирована чувствительность выбранных значений KIN и EMAX путем выбора различных комбинаций более высоких и низких значений. Вариабельность между субъектами была большой: 113% для K_IN скорости продукции NK и 149% для C50, что соответствует большим индивидуальным различиям на исходном уровне и между обработанными животными. Модель была оценена на основе остаточных ошибок, OFV, стандартных ошибок, графиков GOF и индивидуальных кривых (таблица 5, Фиг. 4).

[00341] Таблица 5. Результаты моделирования ФД, оценки параметров и стандартные ошибки в процентах (% SEM)

	Окончательная оценка параметра		Межиндивидуальная изменчивость/ остаточная изменчивость
Параметр	Типичное значение	% SEM	Величина	% SEM
Клетки NK
KIN (кол-во/сутки)	10000	ФИКСИРОВАННЫЙ	113%КВ	19,2
C50 (мкг/мл)	29,0	18,8	149%КВ	25,1
EMAX	322	ФИКСИРОВАННЫЙ	НО	-
Исходный уровень (NK-клетки)*	НО	-	28,3%КВ	20,8
Остаточные NK-клетки	0,291	2,42	53,9%КВ	-
В-клетки
MTT (сутки)	8,48	15,4	135%КВ	17,4
C50 (мкг/мл)	19,5	7,58	НО	-
EMAX	2,37	ФИКСИРОВАННЫЙ	НО	-
Исходный уровень (B-клетки)*	НО	-	24,1%КВ	10,7
Остаточные B-клетки	0,136	2,20	36,9%КВ	-
Т-клетки
C50 (мкг/мл)	11,86	7,267	НО	-
EMAX	0,4656	6,578	69,46%КВ	29,50
Исходный уровень (T-клетки)*	НО	-	29,08%КВ	15,50
Остаточные T-клетки	0,1343	2,406	36,65%КВ	-

* Для каждого отдельного животного типичное исходное значение рассчитывали как среднее всех измерений перед введением дозы; НО: не оценено

[00342] Модель транзитного компартмента превосходила модели прямого ответа или оборота для описания вызванного AB79 истощения популяции В-клеток. Четыре транзитных компонента оказались адекватными, и эффект лекарственного средства был описан с помощью модели типа Emax по скорости истощения. Подобно модели уничтожения NK-клеток, EMAX представляет максимальную скорость, а C50 - концентрацию, при которой скорость является половинной от максимальной. Таким образом, структурная модель ФК-ФД для B-клеток определяется следующими пятью уравнениями:

[00343] TR _i (i=1-4) представляют четыре транзитных компонента. K _TR , K _PROL и K _CIRC определяются следующими уравнениями K_TR=K_PROL=K_CIRC=4/MTT, где MTT представляет собой среднее время прохождения (Friberg et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20: 4713-4721). B представляет собой количество В-клеток в крови и c - концентрация AB79 в центральном компоненте.

[00344] При фиксированном EMAX 2,37 типичный C50 составлял 19,5 мкг/мл, а типичное среднее время прохождения (MTT) составляло 8,48 суток (таблица 5). Задержка максимального эффекта относительно максимальной концентрации AB79 была хорошо зафиксирована. Модель показывает, что AB79 в первую очередь влияет на циркулирующие В-клетки. Для описания имеющихся данных о В-клетках обезьян не требовалось никаких дополнительных эффектов и петли обратной связи на клетках-предшественниках. Различия между субъектами по MTT 135% и исходным уровням B-клеток (BASE) 24,1% указывает на большие индивидуальные различия между животными.

[00345] Вызванное лекарственным средством истощение популяции Т-клеток с быстрым восстановлением было адекватно описано с помощью модели прямого ответа: T(c) = BL _T * (1 - EMAX*c/(c+C50)), где T представляет собой фактическое количество Т-клеток, BL _T - количество Т-клеток на исходном уровне и c концентрация AB79 в центральном компартменте. Типичный C50 был оценен как 11,86 мкг/мл, а типичный EMAX был 0,47, что указывает на то, что в этом случае только около половины популяции Т-клеток может быть истощено AB79 (таблица 5). Однако обратите внимание, что вариативность между субъектами на EMAX составляла почти 70%. В этой модели, в отличие от моделей уничтожения NK и B-клеток, C50 представляет концентрацию, при которой истощение популяции T-клеток было полумаксимальным.

[00346] Что касается NK-клеток, модельная оценка окончательных моделей ФК-ФД для B- и T-клеток на основе остаточных ошибок, OFV, стандартных ошибок, графиков GOF и индивидуальных кривых подтвердила, что они адекватно описывают доступные данные по обезьянам (таблица 5, Фиг. 4).

Моделирование ФК и истощение популяции клеток человека

[00347] Модели ФК и ФК-ФД обезьян использовали в качестве отправной точки для моделирования на основе модели данных ФК и подсчета клеток человека, чтобы поддержать дизайн и обосновать выбранные дозы для первого клинического испытания на людях (FIH) на здоровых добровольцах. С этой целью было предположено, что модельные структуры, включая TMDD, полученные из данных по обезьянам, также описывают основные особенности ФК человека и последующее истощение популяции лимфоцитов. Чтобы получить прогнозы для параметров ФК человека, мы масштабировали оценки следующих параметров ФК обезьяны: центральный и периферический объем распределения (V_C, V_P), и клиренс (КЛ) и межкомпартментный клиренс (Q) с прямым подходом для моноклональных антител (Han and Zhou (2011) Ther. Deliv. 2: 359-368). AB79 является полностью человеческим моноклональным антителом, и поэтому мы ожидаем меньшей иммуногенности у людей, чем у обезьян. Следовательно, для моделирования и симулирования мы исключили ADA-положительные образцы из набора данных.

[00348] Используя масштабированную модель, было смоделировано воздействие и профили истощения популяции NK, B и T-клеток для однократных доз посредством 2-часовой инфузии (в/в) или подкожной инъекции (п/к) от 0,0003 до 1,0 мг/кг, как планировалось для исследования FIH (Фиг. 11). Согласно моделированию, после внутривенной дозы 0,0003 мг/кг нельзя ожидать каких-либо наблюдаемых эффектов, вызванных лекарственным средством на количество лимфоцитов, и даже не измеримых концентраций ФК выше LLOQ. Из-за вариабельности и из-за ограниченного размера дозовых групп предполагалось, что минимальное обнаруживаемое влияние лекарственного средства на количество NK-клеток будет уменьшением по меньшей мере на 10%. При дозах 0,01 мг/кг внутривенно и 0,03 мг/кг подкожно было предсказано, что популяции NK-клеток будут истощены до уровня менее 90% от исходного уровня.

[00349] При внутривенной дозе 0,3 мг/кг мы прогнозировали истощение популяции NK-клеток до оставшихся 17% от исходного уровня в течение 3 часов после окончания инфузии и восстановление более чем на 50% через 11 суток (Фиг. 11). При той же дозе модель предсказывает, что популяции В-клеток максимально истощаются до 67% от исходного уровня через 2,5 суток, а популяции Т-клеток немедленно истощаются до 86% от исходного уровня. Для подкожного введения той же дозы 0,3 мг/кг модель предсказывала, что это приводит к меньшему и более позднему максимальному уничтожению (надиры относительно исходного уровня: NK-клетки 37%, B-клетки 74%, T-клетки 94%).

[00350] Эти доклинические исследования in vitro и in vivo демонстрируют, что обезьяна является подходящей животной моделью для изучения фармакологии AB79. Плотно отобранные данные ФК и количества клеток NK, B и T-лимфоцитов из восьми исследований на обезьянах с различными дозами и режимами дозирования обеспечивают богатый источник данных для всестороннего и количественного понимания взаимосвязи между дозой AB79, воздействием и истощением популяции клеток. Созданные популяционные модели ФК и ФК-ФД адекватно описывают наблюдаемые данные и представляют собой мощный инструмент для прогнозирования воздействия и истощения популяции лимфоцитов не только для будущих исследований на обезьянах, но и для клинических испытаний на людях.

[00351] Было проведено первое испытание единичной возрастающей дозы на людях (FIH) на здоровых добровольцах (www.clinicaltrials.gov: NCT02219256) (Фиг. 12). Предполагаемый фармакологический эффект AB79 - истощение популяции активированных лимфоцитов. Однако глубокое и продолжительное истощение популяции лимфоцитов (усиленная фармакология) может привести к нарушениям иммунной системы, что было бы недопустимо для пациентов или здоровых участников исследования. Таким образом, в качестве безопасной начальной в/в дозы для исследования FIH была выбрана 0,0003 мг/кг.

[00352] Данные по обезьянам показали, что истощение популяции NK-клеток было определено как наиболее чувствительный биологический эффект. Результаты моделирования ФК-NK помогли определить минимальный уровень дозы 0,01 мг/кг внутривенно, при котором можно ожидать, что наиболее чувствительный фармакологический эффект (истощение популяции NK-клеток) будет обнаруживаться у людей. Новые данные исследования FIH показали, что общая картина дозозависимых и специфичных для типов клеток разрушающих эффектов AB79 соответствует предсказаниям, основанным на модели (рукопись в стадии подготовки). AB79 оказался даже более эффективным, чем предполагалось. Например, при в/в дозе 0,03 мг/кг популяция NK-клеток у людей истощалась до уровня менее 10% от исходного уровня. Медиана надира (самая низкая точка истощения) у обезьян при этой дозе составила 20,0% (Фиг. 10).

[00353] Три цитолитических моноклональных антитела к CD38 (даратумумаб, изатуксимаб и MOR202) находятся в стадии клинической разработки для лечения множественной миеломы (van de Donk et al. (2016) Immunol. Rev. 270: 95-112). Даратумумаб (Darzalex™, вводимый в виде внутривенной инфузии) недавно был одобрен для лечения множественной миеломы в США и неходжкинской лимфомы в Европе. В отличие от AB79, даратумумаб не реагирует перекрестно с CD38 обезьяны. Таким образом, сравнение наших результатов с AB79 у яванских макаков, получавших даратумумаб, было невозможно. Более того, пациенты с множественной миеломой имеют высокий уровень CD38-положительных злокачественных клеток, что может потребовать более высоких эффективных концентраций антител для этого признака рака (de Weers et al. (2011) J. Immunol. 186:1840-1848).

[00354] Однако примечательно, что даратумумаб одобрен в еженедельной внутривенной дозе 16 мг/кг при множественной миеломе, даже несмотря на то, что AB79 достиг полного истощения популяции периферических NK-клеток примерно при 1 мг/кг и В-клеток при 3 мг/кг (Фиг. 10).

[00355] Несмотря на обширную базу данных из 8 исследований на обезьянах, был признан ряд ограничений. AB79 эффективно истощает популяции NK-клетки даже при самой низкой изученной дозе 0,03 мг/кг. При таких низких дозах ФК быстро падает ниже количественного предела биоаналитического анализа, что не позволяет разрешить взаимосвязь «воздействие-эффект» при более низких дозах. Более того, во время доклинической разработки было признано, что максимальное истощение популяции клеток происходит вскоре после максимальной концентрации лекарственного средства, но разрешение ранней фазы истощение популяции технически ограничено общим количеством образцов и, возможно, неспецифическим истощением популяции клеток из-за повторных сборов крови (эффект забора крови). Эффект забора крови наблюдался как преходящая панцитопения, характеризующаяся истощением типов клеток, которые не связывают AB79 и не зависели от дозы, что позволяет предположить, что это произошло из-за потери объема крови в результате нескольких заборов крови, а не каких-либо специфических эффектов AB79 (Фиг. 13). Следовательно, возможность точной оценки параметров модели, особенно для истощения популяции NK-клеток, была ограничена, а типичные значения KIN и EMAX требовали исправления для достижения стабильных и адекватных результатов оценки.

[00356] Эффект AB79 на плазматические клетки ткани или плазмобласты не может быть измерен. Однако, как и плазматические клетки и плазмобласты, NK-клетки имеют высокие уровни CD38 на своей поверхности, и эффективность истощения популяции клеток конкретной субпопуляции лимфоцитов зависит, по меньшей мере частично, от уровней экспрессии CD38. Следовательно, цитолитический эффект AB79 на плазмобласты и плазматические клетки может быть сопоставим с эффектом на NK-клетки. В настоящее время информация о долгосрочных эффектах лечения AB79 на обезьянах ограничена. Только небольшая подгруппа животных в 13-недельных токсикологических исследованиях была исследована в группе выздоровления в течение более длительного периода времени, и у большинства животных во всех дозированных группах развились ADA. Более того, исходные значения и профили истощения различных субпопуляций лимфоцитов сильно различались у разных людей. Следовательно, долгосрочные эффекты AB79 не могут быть исследованы на обезьянах и должны быть изучены на людях.

[00357] С появлением новых данных о людях будет интересно детально сравнить данные ФК и ФД человека и обезьяны. Построение модели ФК на основе данных человека и сравнение с моделью обезьяны позволит усовершенствовать модель TMDD AB79. Данные, полученные в исследованиях пациентов, дадут представление о том, как опосредованное AB79 истощение популяции клеток линии B сравнивается между пациентами с РА и СКВ и пациентами с множественной миеломой и здоровыми субъектами. Исследование факторов, связанных с субъектом или заболеванием, которые могут влиять на эффективность истощения популяции клеток в дополнение к уровням экспрессии CD38, также важно и может привести к персонализации лечения. Кроме того, тщательное прямое сравнение AB79 с даратумумабом и/или другими антителами к CD38 in vitro и in vivo позволит получить ценную информацию о фармакологии антител к CD38 и их оптимальном применении.

[00358] Обширные фармакологические данные и модели ФК и ФК-ФД позволили охарактеризовать взаимосвязь «воздействие-эффект» у яванских макаков. Основанный на модели анализ NK, B и T-клеток подтвердил и количественно оценил вывод о том, что каждая из субпопуляций лимфоцитов крови истощалась антителами с разной скоростью и требует разных периодов времени для пополнения компонента крови. Эти модели оказались отличным средством моделирования данных ФК и ФД при различных сценариях дозирования при подготовке клинических испытаний.

Пример 2: Истощение популяции CD38+ клеток при помощи AB79

[00359] CD38 представляет собой гидролазу cADPR, экспрессирующуюся на человеческих плазмобластах, плазматических клетках, NK-клетках и активированных Т- и В-клетках, но не на зрелых тромбоцитах или эритроцитах, исходя из связывания AB79. У пациентов с ревматоидным артритом (РА) и системной красной волчанкой (СКВ) плазматические клетки, а также активированные В- и Т-клетки могут играть важную роль в развитии заболевания. В отличие от других методов лечения, селективных к В-клеткам, которые нацелены на CD20 и непосредственно не истощают плазмобласты, которые являются CD20 ^{низкими/отрицательными}, CD38 экспрессируется на высоких уровнях в плазмобластах и плазматических клетках, что делает эти клетки прямой мишенью для AB79. Исследования in vitro с клетками крови и клеточными линиями человека показали, что связывание AB79 с CD38 не приводит к активации цитокинов МКПК, демонстрируя, что AB79 не является агонистом, как обсуждается ниже. Скорее, AB79 опосредовал истощение клеточных линий человеческих линий B посредством АЗКЦ и КЗЦ, и в большинстве случаев клеточные линии с повышенной экспрессией CD38 были более восприимчивы к лизису клеток (Фиг. 14). Это согласуется с данными, полученными на здоровых яванских макаках, где эффективность истощения коррелировала с уровнем экспрессии CD38 и уровнем дозы AB79. Популяции NK-клеток, которые экспрессируют высокие уровни CD38, были истощены в большей степени, чем популяции CD20+ B-клеток и CD3+ T-клеток, которые экспрессируют меньше CD38 (Фиг. 15). In vivo AB79 сильно подавлял ответные реакции человеческих В-клеток на антиген в модели адоптивного переноса мыши (Фиг. 16). Вместе эти данные поддерживают дальнейшее исследование AB79 при аутоиммунных заболеваниях.

[00360] Человеческие МКПК обрабатывали AB79 в нескольких условиях и измеряли высвобождение воспалительных цитокинов. Яванский макак использовался, чтобы показать взаимосвязь между типом клеток и дозой AB79, поскольку AB79 перекрестно реагирует с CD38 обезьяны, который на 91% идентичен белку человека. Вторую модель на животных, адоптивно перенесенные мышиные МКПК человека, использовали для определения того, может ли AB79 нацеливаться на клетки, продуцирующие человеческие антитела.

AB79 связывает CD38 и опосредует АЗКЦ и КЗЦ

[00361] Число рецепторов определяли с помощью FIKIT (DAKO, каталожный номер K0078) с использованием мышиных антител к CD38 человека (клон HIT2) и рассчитывали путем преобразования средней интенсивности флуоресценции (MFI) окрашенных образцов в калибровочную кривую, полученную из MFI 5 популяции шариков, связанные с определенным количеством молекул антител. Абсолютное кол-во рецептора рассчитывали путем вычитания MFI изотипического контроля (мышиный IgG1) из MFI антитела к CD38.

[00362] КЗЦ оценивали путем посева клеточных линий из расчета 10000 клеток/лунку и добавления AB79, контрольного IgG или среды. Обычно строили 5-точечную кривую доза-ответ (0,001-10 мг/мл). Комплемент кролика (2-15 мкл; № CL 3441 CedarLane Laboratories) добавляли в каждую лунку, кроме контрольных. Реагент CytoTox-Glo (Promega, G7571/G7573) использовали для определения цитотоксичности по люминесценции. Тестируемые группы: только клетки; клетки+комплемент; клетки+контроль IgG+комплемент; клетки+AB79+комплемент. Уравнение% КЗЦ:% КЗЦ=100- ((RLU (тест) / RLU (только комплемент)) X 100).

[00363] АЗКЦ тестировали путем посева 5000 клеток-мишеней на лунку (T-клеточные линии) с 50 мл AB79, контрольным IgG, Triton X-100 (1%; Sigma Chemical) или одной средой и 50 мл эффекторных (E) МКПК человека на соотношение Т:Е клеток от 1:25 до 1:50. Обычно строили кривую доза-ответ из 9 точек (0,000001-100 нМ). Экспериментальный лизис=МКПК+линия клеток+антитело. Спонтанный лизис=МКПК+линия клеток без антител. Максимальный лизис=линия клеток+Triton Х-100. Цитотоксичность оценивали с помощью люминесцентного анализа CytoTox-Glo ™ Cytotoxicity Luminescence (Promega).

AB79 не обладает агонистической активностью

[00364] Способность обработки AB79 индуцировать продукцию цитокинов в МКПК человека сравнивали с отрицательным контролем изотипа IgG1 и положительным контролем, PHA, антителами к CD3 (клон OKT3) или антителами к CD52 (Campath).

[00365] Растворимый AB79 не увеличивал уровни IL-6 (среднее ± стандартное отклонение) в МКПК, собранных у 4 различных субъектов после 24-часовой инкубации, по сравнению с изотипическим контролем IgG1. PHA увеличивал уровни цитокинов у всех субъектов, демонстрируя, что клетки обладают способностью вырабатывать IL-6. Аналогичные результаты были получены при стимуляции МКПК в течение 48 часов и при тестировании IL-2, IL-4, IL-10, GM-CSF, IFNγ и TNFα (данные не показаны) (Фиг. 18).

[00366] Способ, которым антитело презентируется клетке, может способствовать результату взаимодействия антитело: лиганд и клеточному ответу (Stebbings et al. (2007) J. Immunol. 179: 3325-3331). Stebbings et al. продемонстрировали, что максимальный клеточный ответ (высвобождение цитокина) на агонистическое антитело происходил, когда антитело было высоко концентрированным и прикреплялось к поверхности лунки, например, когда антитело добавлялось в лунку в растворе и жидкости позволялось испариться (сухая связь) по сравнению с антителами, которым позволено связываться с лунками в растворе (влажная связь) или добавленным непосредственно к МКПК (растворимым) (Фиг. 18A). AB79 не стимулировал выработку цитокинов при использовании любого из этих подходов (Фиг. 18B).

[00367] AB79 (100 мг/мл) не стимулировал IL-2, -4, -6, -8, -10, GM-CSF, IFNγ или TNFα ни в одном из тестируемых условий через 24 часа. AB79 не индуцировал IL-10 или GM-CSF, но оба были индуцированы антителом к CD3 (не показано, все значения, кроме антитела к CD3, были ниже LLOQ). IL-8 постоянно продуцировался МКПК и не изменялся никаким лечением (данные не показаны) (таблица 6).

[00368] Таблица 6. AB79 и стимуляция цитокинов

Презентация антител	Отсутствует	Изотип	AB79	Антитело к CD52	PHA	Антитело к CD3
IL-2
Растворимый:	LLOQ	LLOQ	LLOQ	LLOQ	14953 ± 3117	н/в
Влажное связывание	LLOQ	LLOQ	LLOQ	LLOQ	н/в	395,0 ± 64,8
Сухое связывание	LLOQ	LLOQ	LLOQ	LLOQ	н/в	167,9 ± 90,1
IL-4
Растворимый:	7,3 ± 1,4	4,1 ± 0,8	6,4 ± 3,2	6,9 ± 4,0	50,4 ± 8,9	н/в
Влажное связывание	5,3 ± 08	3,8 ± 1,5	6,4 ± 0,6	8,5 ± 3,7	н/в	17,8 ± 2,4
Сухое связывание	4,4 ± 1,8	7,8 ± 2,7	9,1 ± 2,6	10,5 ± 2,1	н/в	16,2 ± 3,1
IL-6
Растворимый:	325,1 ± 65,3	236,0 ± 98,9	170,5	202,0 ± 48,0	18880 ± 0	н/в
Влажное связывание	216,8 ± 95,1	191,2 ± 47,0	194,6 ± 66,0	207,2 ± 60,2	н/в	902,7 ± 114,1
Сухое связывание	165,0 ± 79,4	369 ± 143	465,8 ± 230	811,1 ± 473,7	н/в	500 ± 17
IFNγ
Растворимый:	1190,2 ± 117,5	857,1 ± 311,7	770,1 ± 203,6	1116,9 ± 330,8	15857 ± 4614,8	н/в
Влажное связывание	1052,8 ± 385,8	657,2 ± 222,6	993,4 ± 198,1	1138,9 ± 339,1	н/в	5674,6 ± 564,7
Сухое связывание	768,1 ± 110,0	1583,1 ± 418,6	1927,6 ± 517,6	1827,0 ± 281,5	н/в	3513,2 ± 708,3
TNFα
Растворимый:	28,71 ± 8,1	11,6 ± 7,1	59,6 ± 90,1	79,9 ± 18,2	9270,0 ± 0	н/в
Влажное связывание	16,5 ± 3,4	16,1 ± 3,9	14,8 ± 8,8	166,1 ± 21,7	н/в	2123,3 ± 239,7
Сухое связывание	16,2 ± 7,4	919,2 ± 77,4	745,1 ± 141	984,4 ± 317,0	н/в	2231,6 ± 687

Мультиплексный анализ цитокинов использовали в соответствии с инструкциями производителя (Bio-Plex Pro^TM Human Cytokine Standard 8-Plex) для измерения концентраций IL-2, -4, -6, -8, -10, GM-CSF, IFNγ и TNFα. Сокращения: нижний предел количественного определения LLOQ; н/в, не выполнялось; ФГА, фитогемагглютинин; МКПК, мононуклеарные клетки периферической крови.

AB79 истощения популяции CD38+ клеток

[00369] AB79 связывает CD38 с высокой аффинностью и опосредует КЗЦ и АЗКЦ. AB79 не является агонистом и не индуцирует высвобождение цитокинов из МКПК человека. AB79 связывал CD38 как человека, так и яванского макака. Лимфоциты обоих видов имели сходные клеточно-специфические паттерны экспрессии CD38 с NK-клетками> B-клетками> T-клетками на основе средней интенсивности флуоресценции при окрашивании AB79. Лечение истощенными AB79 лимфоцитами обезьян обратимым, клеточно-специфическим и дозозависимым образом. AB79 эффективно блокировал ответ отзыва человеческих антител в модели адаптивного переноса мыши.

[00370] В когортах, получавших AB79 путем подкожной инъекции, дозозависимое снижение количества NK-клеток (Фиг. 24) и плазмобластов (Фиг. 25) наблюдалось при дозах ≥ 0,1 мг/кг-1 с ≥ 90% уменьшением плазмобластов у всех субъектов, получавших инъекцию 0,6 мг/кг -1 . Снижение количества NK-клеток на 75% произошло при 0,6 мг кг-1 (данные не показаны) с Cmax 23,0 нг мл -1 (таблица 7). Уровни плазмобластов и NK-клеток были уменьшены по сравнению с исходным уровнем в течение 8 часов после инъекции и демонстрировали tmax, равное 48 часов. Продолжительность восстановления до исходного уровня была переменной; восстановление до исходного уровня (т.е., в пределах -20% от исходного уровня) для доз 0,1, 0,3 и 0,6 мг кг-1 , требовалось в среднем 4, 78 и 50 суток соответственно (данные не представлены). Наблюдалось минимальное снижение общего количества лимфоцитов, В- и Т-клеток, цитотоксических Т-клеток, хелперных Т-клеток, моноцитов (Фиг. 25) и гранулоцитов, красных кровяных телец и тромбоцитов (данные не показаны).

[00371] Таблица 7. Сводные фармакокинетические параметры AB79 после однократной подкожной инъекции AB79 в дозе 0,6 мг/кг-1 здоровым субъектам

Способ введения	Доза	n	t max (h) n= 6	C max (нг мл-1) n= 6	AUC _{последняя} (нг сутки-1 мл-1) n= 6
п/к	0,6 мг кг^-1	6	23,87 (7,98, 96,02)^a	23,0 (67)	90,4 (92)

a n=5. Значения представляют собой среднее (%КВ), кроме t _max, где представлены медианы (мин., макс.). AUC_{последняя} - площадь под кривой зависимости концентрации сыворотки от времени от момента времени 0 до момента последней поддающейся количественной оценке концентрации; Cmax - максимальная наблюдаемая концентрация в сыворотке ; CV - коэффициент вариации; в/в - внутривенно; НО - не определено; ФК - фармакокинетика; п/к - подкожно; tmax - время до максимальной концентрации в сыворотке.

Данные связывания AB79 и даратумумаба с эритроцитами

[00372] Сравнивались профили связывания RBC AB79 и даратумумаба. Как показано на Фиг. 26, оказалось, что существует разница в величине связывания эритроцитов (т.е. MFI) между лекарственными средствами у 3 из 4 протестированных доноров; однако это различие может быть отнесено к разным уровням биотина в каждом из антител, при этом даратумумаб имеет в 1,6-2,0 раза больше биотина, чем AB79. Альтернативный анализ, который контролирует разность потенциалов в флуоресцентной маркировке антител, заключается в сравнении концентрации и профиля связывания каждого антитела, и полезным показателем является концентрация, при которой происходит максимальное связывание (т. е. максимальное специфическое связывание антигена (Bmax)). Bmax идентичен для обоих антител у 3 из 4 доноров (например, 1 мкг/мл для донора 1). В совокупности эти данные указывают на то, что оба антитела связываются с аналогичной аффинностью в пределах текущего предела разрешения анализа, который составляет значение, кратное 10. В заключение, и AB79, и даратумумаб связывались с эритроцитами в этом анализе с аффинностями, которые были в пределах 10 крат друг от друга; 10-кратное или большее различие в аффинности связывания этих антител с эритроцитами не существовало в рамках этой системы анализа.

Пример 3: Исследование фазы 1/2а для изучения безопасности, переносимости, эффективности, фармакокинетики и иммуногенности AB79, вводимого подкожно в качестве единственного агента, у людей с рецидивирующей/рефрактерной (r/r) множественной миеломой (MM)

[00373] Целью этого исследования является оценка безопасности, переносимости, фармакокинетики (ФК), иммуногенности, дозолимитирующей токсичности (ДЛТ) и максимальной переносимой дозы (MTD)/рекомендуемой дозы фазы 2 (RP2D) в фазе 1 исследования и предоставление предварительной оценки клинической активности монотерапии AB79 у участников с рецидивирующей и/или рефрактерной множественной миеломой (РРММ). В исследование включены пациенты с РРММ, которые ранее получали по меньшей мере ингибитор протеасом (PI), иммуномодулирующий препарат (IMid), алкилирующий агент и стероид. Пациенты должны иметь рефрактерное заболевание или иметь непереносимость по меньшей мере 1 PI и по меньшей мере 1 IMiD, и они должны были либо получить 3 или более предшествующих терапии, либо получить по меньшей мере 2 предшествующих терапии, если одна из этих терапий включала комбинацию PI и IMiD. В части увеличения дозы фазы 1b предыдущее воздействие агента к CD38 разрешено, но не требуется. В расширенной части исследования фазы 2а пациенты также должны иметь резистентность к по меньшей мере 1 моноклональной терапии антителом к CD38 в любое время во время лечения. Исследование представляет собой многоцентровое исследование, проведенное в Соединенных Штатах, в котором участвовало около 42 участников.

Фаза 1

[00374] Популяция исследования фазы 1 состоит приблизительно из 24 взрослых участников в возрасте 18 лет и старше. Характеристики пациентов представлены в таблице 8.

Таблица 8. Характеристики пациента

Характеристики уровня дозы	45 мг (n=4)	135 мг (n=3)	300 мг (n=6)	600 мг (n=6)	Всего (n=19)
Медианный возраст, годы (диапазон)	64,5 (53, 75)	69 (64,74)	63,5 (56,69)	62,5 (60,77)	64 (53,77)
Мужчины, %	50	67	67	67	63
ECOG PS 0/1/2, %	85/15/0	25/75/0	33/67/0	0/83/17	26/68/5
ISS I/II/III, потерянный %	50/25/25/0	33/33/0/33	50/33/17/0	17/50/33/0	37/37/21/5
Медианное кол-во до направления терапии (диапазон)	4,5 (2-6)	3 (2-6)	3 (2-8)	5,5 (3-8)	4 (2-8)
Типы терапии:
На основе ингибиторов протеасом, n (%)	4 (100)	3 (100)	4 (100)	6 (100)	19 (100)
На основе IMID, n (%)	4 (100)	3 (100)	4 (100)	6 (100)	19 (100)
На основе моноклональных антител, n (%)	1 (25)	0	3 (50)	3 (50)	7 (37)
На основе даратумумаба, n (%)	1 (25)	0	1 (17)	3 (50)	5 (26)
ASCT, n (%)	4 (100)	3 (100)	6 (100)	5 (83)	18 (95)
Рефрактерность к последней терапии, n (%)	3 (75)	1 (33)	4 (67)	4 (67)	12 (63)

[00375] Участников фазы 1 распределяют в одну из 6 групп лечения AB79 с повышением дозы: когорта 1: 45 мг; когорта 2: 135 мг; когорта 3: 300 мг; когорта 4: 600 мг; когорта 5: 1200 мг; и когорта 6: 1800 мг (таблица 9). AB79 вводится подкожно один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз в 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в течение 28-суточного цикла лечения до прогрессирования заболевания (ПЗ), неприемлемой токсичности или отмены из-за других факторов. Участники могут получать премедикации за 1-3 часа до введения AB79 в каждые сутки приема, а именно: например, дексаметазон (20 мг); ацетаминофен (от 650 до 1000 мг); дифенгидрамин (от 25 до 50 мг) и монтелукаст (10 мг).

[00376] Таблица 9: когорты фазы 1

Когорта	Режим дозирования
Когорта 1: 45 мг AB79	Подкожная инъекция 45 мг AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до появления болезни Паркинсона, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам. Повышение дозы AB79 до 135 мг может быть выполнено с использованием схемы повышения дозы 3+3 для определения MTD и/или RP2D.
Когорта 2: 135 мг AB79	Подкожная инъекция 135 мг AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до появления ПЗ, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам. Повышение дозы AB79 до 300 мг может быть выполнено с использованием схемы повышения дозы 3+3 для определения MTD и/или RP2D.
Когорта 3: 300 мг AB79	Подкожная инъекция 300 мг AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до появления болезни Паркинсона, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам. Повышение дозы AB79 до 600 мг может быть выполнено с использованием схемы повышения дозы 3+3 для определения MTD и/или RP2D.
Когорта 4: 600 мг AB79	Подкожная инъекция 600 мг AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до ПЗ, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам. Повышение дозы AB79 до 1200 мг может быть выполнено с использованием схемы повышения дозы 3+3 для определения MTD и/или RP2D.
Когорта 5: 1200 мг AB79	Подкожная инъекция 1200 мг AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до ПЗ, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам. Повышение дозы AB79 до 1800 мг может быть выполнено с использованием схемы повышения дозы 3+3 для определения MTD и/или RP2D.
Когорта 6: 1800 мг AB79	Подкожная инъекция 1800 мг AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до ПЗ, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам.

[00377] Общее время участия в этом исследовании составляет 36 месяцев (3 года). В фазе 1 участники, прекратившие лечение по любой другой причине, кроме БП, продолжают проходить наблюдение за выживаемостью без прогрессирования (ВБП) на месте каждые 4 недели с момента последней дозы исследуемого препарата в течение 12 месяцев или до ПЗ, смерти, выпадения из последующего наблюдения, отзыва согласия или прекращение исследования. За участниками наблюдают через 30 суток после последней дозы исследуемого препарата или до начала последующей альтернативной противораковой терапии, в зависимости от того, что произойдет раньше, для последующей оценки.

Первичные критерии эффективности для фазы 1

[00378] Первичные критерии эффективности на срок до одного года включают следующие:

Количество участников, сообщивших об одном или более нежелательных явлениях, вызванных лечением (НЯВЛ)

Количество участников с дозолимитирующей токсичностью (ДЛТ): ДЛТ определяется как любое из следующих событий: лабораторные отклонения 4-й степени, за исключением событий, которые явно вызваны внешними причинами; негематологические НЯВЛ степени выше или равной (≥) 3, за исключением тошноты/рвоты 3 степени, утомляемости, продолжающейся менее 72 часов, повышения уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ) или аспартатаминотрансферазы (АСТ), которые разрешаются к степени менее или равной ( ≤) 1 или исходный уровень в течение 7 суток, реакции инъекции (РИ), которая отвечает на симптоматическое лечение; гематологические НЯВЛ, общие терминологические критерии нежелательных явлений Национального института рака (NCI CTCAE): степень ≥ 4, за исключением гемолиза ≥ 3 степени, низкий уровень тромбоцитов 3 степени или выше с клинически значимым кровотечением; и неполное восстановление от связанной с лечением токсичности, вызывающей задержку более (>) 2 недель следующей запланированной инъекции перед началом цикла 2, будет считаться ДЛТ.

Количество участников с НЯВЛ 3 и выше: оценки НЯ оцениваются в соответствии с NCI CTCAE, версия 4.03. 1 степень оценивается как легкая; 2 степень оценивается как средняя; 3 степень оценивается как тяжелая или значимая с медицинской точки зрения, но не угрожающая жизни; 4 степень оценивается как опасные для жизни последствия, а 5 степень оценивается как смерть, связанная с НЯ.

Количество участников с серьезными НЯВЛ

Количество участников с НЯВЛ, приведшими к прекращению лечения

Количество участников с НЯВЛ, приведшими к модификации дозы

Вторичные критерии эффективности

[00379] Вторичные критерии эффективности включают следующее:

Cmax: максимальная наблюдаемая концентрация в сыворотке для AB79 [Временные рамки: цикл 1 и 2: сутки 1 до введения дозы и в несколько временных точек (до 168 часов) после введения дозы.]

Tmax: время достижения максимальной наблюдаемой концентрации в сыворотке (Cmax) для AB79 [Временные рамки: цикл 1 и 2: сутки 1 до введения дозы и в несколько временных точек (до 168 часов) после введения дозы.]

AUC: площадь под кривой зависимости концентрации сыворотки от времени от момента времени 0 до момента последней поддающейся количественной оценке концентрации для AB79 [Временные рамки: цикл 1 и 2: сутки 1 перед введением дозы и в несколько временных точек (до 168 часов) после введения дозы.]

Фаза 1: ОЧО [Временные рамки: до 1 года]: ОЧО определяется как процент участников, достигших ОЧО 50% или выше во время исследования. ЧО определяется как снижение сывороточного М-белка на ≥ 50% и снижение уровня М-белка в суточной моче на ≥ 90% или до <200 мг/24 часа.

Процент участников с минимальным ответом (MR) [Временные рамки: до 1 года]: MR определяется как ≥ 25%, но ≤ 49% снижение сывороточного М-белка и снижение 24-часового М-белка в моче на 50-89%.

Процент участников с положительными антителами к лекарственным средствам (ADA) [Временные рамки: до 1 года].

Результаты.

[00380] По состоянию на 5 марта 2019 года 19 пациентов были включены в 4 группы дозирования (45 мг, 135 мг, 300 мг и 600 мг) и получили по меньшей мере 1 цикл AB79. По состоянию на 5 марта 2019 года 9 пациентов все еще находятся под наблюдением за лечением, 9 пациентов прекратили прием AB79 из-за прогрессирования заболевания и 1 пациент отозвал свое согласие.

[00381] По состоянию на 5 марта 2019 г. у пациентов, подлежащих оценке, во всех 4 когортах (45 мг, 135 мг, 300 мг и 600 мг) не сообщалось о дозолимитирующей токсичности (ДЛТ). Не было никаких реакций в месте инъекции или системных инфузионных реакций. Сообщений о СНЯ, связанных с приемом лекарственных средств, летальных исходах во время исследования или НЯ, которые привели к прекращению исследования, не поступало. (См. Таблицу 10). Кроме того, за исключением 1 временного связанного с лечением события 3 степени снижения количества нейтрофилов и 1 транзиторной анемии, замечательных лабораторных данных не было. Прогрессирование заболевания у одного пациента было связано со снижением уровня тромбоцитов 3 степени, анемией и повышением креатинина. Это исследование продолжается, и пациентов продолжают наблюдать.

[00382] Таблица 10. Данные НЯВЛ

По состоянию на 9 января 2019 г. N (%)	45 мг (n=4)	135 мг (n=3)	300 мг (n=6)	600 мг (n=6)	Всего (n=19)
Любое НЯВЛ	4 (100)	3 (100)	6 (100)	5 (83)	18 (95)
Любое НЯВЛ, связанное с лекарственным средством	3 (75)	2 (67)	3 (50)	3 (50)	11 (58)
НЯВЛ 3 степени и более	2 (50)	1 (33)	1 (17)	2 (33)	6 (32)
НЯВЛ 3 степени и более, связанное с применением лекарственного средства	1 (25)	0	1 (17)	0	2 (11)
СНЯ	1	0	0	0	1(5)
СНЯ, связанное с лекарственным средством	0	0	0	0	0
Прекращение приема из-за НЯВЛ	0	0	0	0	0
Дозолимитирующая токсичность	0	0	0	0	0
Смерть во время исследования	0	0	0	0	0

[00383] По состоянию на 5 марта 2019 г. наиболее распространенными (у> 2 пациентов) НЯВЛ по предпочтительным условиям независимо от причинной связи во всех 4 когортах являются анемия (n=7 пациентов), бессонница (n=5 пациентов в каждой), инфекции верхних дыхательных путей, головокружение, головная боль и гипертония (n=4 пациента каждый), а также диарея, утомляемость, снижение аппетита и мышечные спазмы (n=3 пациента каждый). Все НЯ относились к 1 или 2 степени, за исключением анемии (n=2 пациента), диареи, уменьшения количества тромбоцитов, уменьшения количества нейтрофилов, повышения креатинина, головной боли, гипертонии и мышечно-скелетной боли (n=1 пациент каждый), которые были 3 степенью; только 1 случай низкого числа нейтрофилов и 1 случай анемии были зарегистрированы как связанные с исследуемым лекарственным средством. Случаев РСИ, синдрома высвобождения цитокинов или реакций в месте инъекции не наблюдалось. Таким образом, в данном изобретении предложено безопасное антитело к CD38 для клинического применения по сравнению с предыдущими антителами к CD38, такими как даратумумаб, изатуксимаб или MOR202.

[00384] На Фиг. 20 показано, что воздействие Ab79, вводимого подкожно, увеличивалось с увеличением доз с течением времени, что согласуется с опосредованным мишенью клиренсом лекарственного средства.

[00385] Подкожное введение Ab79 снижало уровни плазмобластов в крови (Фиг. 21), плазмобластов в аспиратах костного мозга (Фиг. 22) и плазматических клеток в аспиратах костного мозга (Фиг. 23) дозозависимым образом. CD38 прикреплялись к клетками-мишенями в периферической крови при дозах ≥ 45 мг в неделю и в костном мозге ≥ 300 мг. Уровни клеток-мишеней в костном мозге и периферической крови снижались дозозависимым образом при дозах ≤ 300 мг.

[00386] У пациентов с поздней стадией РРММ AB79 показал ранние признаки противоопухолевой активности, о чем свидетельствует снижение бремени заболевания на по меньшей мере 50% у некоторых пациентов и длительная стабилизация заболевания у других. Хотя необходимы дополнительные данные, чтобы охарактеризовать клиническую пользу этого препарата, новые данные подтверждают продолжающуюся разработку AB79.

[00387] Два mAb к CD38 в настоящее время находятся в стадии клинической разработки: даратумумаб для внутривенного введения одобрен для пациентов с ММ (рецидивирующий и впервые диагностированный), а внутривенное введение изатуксимаба находится на стадии исследования. Наиболее частыми побочными реакциями (≥ 20%) при монотерапии даратумумабом или в сочетании со стандартными противомиеломными схемами, являются реакции, связанные с инфузией (РСИ), нейтропения, тромбоцитопения, утомляемость, тошнота, диарея, запор, рвота, мышечные спазмы, артралгия, боль в спине, гипертермия, озноб, головокружение, бессонница, кашель, одышка, периферические отеки, периферическая сенсорная нейропатия и инфекции верхних дыхательных путей. (Дарзалекс USPI). Даратумумаб может вызывать тяжелые и/или серьезные инфузионные реакции, включая анафилактические реакции, о чем сообщалось примерно у половины всех пациентов (Дарзалекс USPI). Следует также обратить внимание на то, что даратумумаб мешает определенным лабораторным исследованиям, что важно, и может усложнить анализ крови на совместимость. (Дарзалекс USPI). Исатуксимаб, гуманизированное моноклональное антитело к CD38, также исследуется при множественной миеломе. Зарегистрированные НЯ для изатуксимаба (≥24%) включают инфузионные реакции, тошноту, утомляемость, одышку и кашель, которые обычно имели степень выраженности ≤2 (Richter et al. (2016) JCO 34 (15): 8005; Dimopoulos et al. (2018) Blood 132 (suppl. 1): ASH abstract 155/ oral presentation)). Следовательно, на основании имеющихся данных остается потребность в новых средствах, включая новое поколение таргетной терапии CD-38 с большей селективностью, следовательно, большей эффективностью, что приводит к меньшей токсичности и повышенному удобству для пациентов, чтобы продолжать улучшать клинические результаты.

Фаза 2

[00388] Популяция фазы 2а исследования состоит приблизительно из 18 участников. Дозы и премедикации для фазы 2а основаны на обзоре доступных данных по безопасности, эффективности, ФК и фармакодинамике для предыдущих когорт фазы 1.

[00389] Таблица 11: когорты фазы 2

Когорта

Режим дозирования

Когорта 1: TBD AB79

Подкожная инъекция AB79 один раз в неделю в течение 8 недель, затем один раз каждые 2 недели в течение 16 недель, а затем один раз каждые 4 недели в последующем 28-суточном цикле лечения до ПЗ, неприемлемой токсичности или отмены по другим причинам. Доза AB79 для этой фазы определяется на основании анализа доступных данных по безопасности, эффективности, ФК и фармакодинамики, полученных в ходе фазы 1 исследования.

Первичные критерии эффективности для фазы 2а

[00390] Первичные критерии эффективности на срок до одного года включают следующие:

Общая частота ответа (ОЧО): ОЧО определяется как процент участников, достигших частичного ответа (ЧО) на 50 процентов (%) уменьшения опухоли или лучше во время исследования. ЧО определяется как ≥ 50% уменьшение сывороточного М-белка и уменьшение М-белка в суточной моче на ≥ 90% или менее (<) 200 миллиграмм на (мг/) 24 часа.

Вторичные критерии эффективности для фазы 2а

[00391] Вторичные критерии эффективности на срок до одного года включают следующие:

Фаза 2а: количество участников с ДЛТ

Фаза 2а: количество участников, сообщивших об одном или нескольких НЯВЛ

Фаза 2а: количество участников с НЯВЛ, приведшими к модификации дозы

Фаза 2а: количество участников с НЯВЛ, приведшими к прекращению лечения

Фаза 2а: количество участников с клинически значимыми лабораторными значениями

Фаза 2а: количество участников с клинически значимыми измерениями жизненно важных функций

Фаза 2a: Продолжительность ответа (ПО): ПО - это время от даты первой документации ответа до даты первого задокументированного ПЗ. ПЗ - это увеличение ≥ 25% от самого низкого значения ответа в любом из следующего: сывороточный М-белок (увеличение должно быть ≥ 0,5 г/дл; увеличение компонента М сыворотки ≥ 1 г/дл достаточны для определения рецидива, если начальный M-компонент ≥ 5 г/дл), и/или М-белок мочи (увеличение должно быть ≥ 200 мг/24 часа), и/или только у участников без измеримых уровней М-белка в сыворотке и/или моче, разницы между уровнями вовлеченных/не вовлеченных свободных легких цепей (FLC) (увеличение должно быть> 10 мг/дл), и только у участников без измеримых уровней сыворотки и/или уровни М-белка в моче и без поддающегося измерению заболевания по уровням FLC, проценту плазматических клеток костного мозга (процентное соотношение должно быть ≥ 10%) или определенное развитие новых костных поражений или плазмоцитом мягких тканей, или увеличение размера костных поражений или плазмоцитом мягких тканей, и развитие гиперкальциемии, которая может быть отнесена исключительно на счет пролиферативного нарушения плазматических клеток.

Фаза 2а: Выживание без прогрессирования (ВБП): ВБП - это время от даты первой дозы до самой ранней даты ПЗ. ПЗ- это увеличение ≥ 25% от самого низкого значения ответа в любом из следующего: сывороточный М-белок (увеличение должно быть ≥ 0,5 г/дл; увеличение компонента М сыворотки ≥ 1 г/дл достаточны для определения рецидива, если начальный M-компонент ≥ 5 г/дл), и/или М-белок мочи (увеличение должно быть ≥ 200 мг/24 часа), и/или только у участников без измеримых уровней М-белка в сыворотке и/или моче, разницы между уровнями вовлеченных/не вовлеченных FLC (увеличение должно быть> 10 мг/дл), и только у участников без измеримых уровней сыворотки и/или уровни М-белка в моче и без поддающегося измерению заболевания по уровням FLC, проценту плазматических клеток костного мозга (процентное соотношение должно быть ≥ 10%) или определенное развитие новых костных поражений или плазмоцитом мягких тканей, или увеличение размера костных поражений или плазмоцитом мягких тканей, и развитие гиперкальциемии, которая может быть отнесена исключительно на счет пролиферативного нарушения плазматических клеток.

Фаза 2а: Общая выживаемость (ОВ): ОВ определяется как время от даты первой дозы до даты смерти по любой причине.

Фаза 2a: Время до ответа (ВДО): ВДО определяется как время от даты первой дозы до даты первой документации ответа (частичный ответ (ЧО) или лучше). ЧО определяется как ≥ 50% уменьшение сывороточного М-белка и/или уменьшение М-белка в суточной моче на ≥ 90% или до <200 мг/24 часа.

Критерии включения в исследование фазы 1 и фазы 2а:

[00392] Субъекты получили последнюю дозу любого из следующих видов лечения/процедур в пределах указанных минимальных интервалов до первой дозы AB79: Терапия, специфичная для миеломы (период вымывания 30 суток); терапия антителами (включая антитело к CD38) (период вымывания 120 суток); кортикостероидная терапия (период вымывания 30 суток); аутотрансплантация (период вымывания 90 суток); лучевая терапия (период вымывания 30 суток); серьезная операция (период вымывания 30 суток).

[00393] Для участников с ММ заболевание, поддающееся измерению, определяется как одно из следующего: (а) М-белок сыворотки ≥ 500 мг/дл (≥ 5 г/л); (b) М-белок в моче ≥ 200 мг/24 часа; (c) для участников без измеряемого М-белка при электрофорезе сывороточного белка (SPEP) или электрофорезе белка в моче (UPEP) результат анализа сывороточного FLC с вовлеченным уровнем FLC ≥ 10 мг/дл (≥ 100 мг/л), при условии, что соотношение FLC в сыворотке является ненормальным.

[00394] Предшествующая терапия должна соответствовать всем следующим критериям: (a) участник, ранее получавший по меньшей мере ингибитор протеасом (PI), иммуномодулирующее лекарственное средство (IMid), алкилирующий агент и стероид; (b) участник невосприимчив или не переносит по меньшей мере 1 PI и по меньшей мере 1 IMid; пациент либо получал ≥ 3 предыдущих линий терапии, либо получал по меньшей мере 2 предыдущие линии терапии, если одна из этих линий включала комбинацию PI и IMid; (c) участник мог ранее подвергаться воздействию агента к CD38, как одного агента или в комбинации, но это не требуется.

[00395] В фазе 2а исследования участники с ММ должны также быть невосприимчивыми к по меньшей мере 1 терапии моноклональными антителами к CD38 в любое время во время лечения. «Рефрактерный» определяется как повышение уровня М-белка или ПЗ по меньшей мере на 25% во время лечения или в течение 60 суток после прекращения лечения. «Линия терапии» определяется как 1 или более циклов запланированной программы лечения. Она может состоять из 1 или более запланированных циклов терапии одним агентом или комбинированной терапии, а также последовательности курсов лечения, проводимых запланированным образом. Новая линия терапии начинается, когда планируемый курс терапии изменяется с включением других лечебных агентов (по отдельности или в комбинации) в результате ПЗ, рецидива или токсичности. Новая линия терапии также начинается, когда запланированный период наблюдения за терапией прерывается необходимостью дополнительного лечения заболевания.

Критерии исключения из исследования:

[00396] 1. Сенсорная или моторная нейропатия по критериям общей терминологии для нежелательных явлений Национального института рака (NCI CTCAE), степень ≥3.

2. Получили трансплантацию аллогенных стволовых клеток. 3. Получили терапию антителами к CD38 и не прошли 120-суточный период вымывания до приема AB79. 4. Не излечился от побочных реакций на предшествующее лечение миеломы или процедуры (химиотерапия, иммунотерапия, лучевая терапия) до степени NCI CTCAE ≤ 1 или исходного уровня. 5. Клинические признаки поражения центральной нервной системы (ЦНС) при ММ. 6. Активная инфекция, вызванная вирусом гепатита B (HBV) или вирусом гепатита C (HCV), активная инфекция ВИЧ или цитомегаловирусом (CMV). 7. Синдром POEMS (полинейропатия, органогалия, эндокринопатия, моноклональная гаммопатия и изменения кожи), моноклональная гаммопатия неизвестного значения, тлеющая миелома, солитарная плазмоцитома, амилоидоз, макроглобулинемия Вальденстрема или миелома IgM. 8. Наличие положительного результата теста Кумбса при скрининге.

Включение в описание изобретения сведений путем ссылки

[00397] Содержание всех процитированных ссылок (включая литературные ссылки, патенты, заявки на патенты и веб-сайты), которые могут цитироваться в этой заявке, явным образом включены в данное описание посредством ссылки во всей их полноте для любых целей, как и ссылки, цитируемые в ней, в той же степени, как если бы каждая отдельная ссылка была специально и индивидуально указана для включения посредством ссылки в полном объеме для любых целей.

Эквиваленты

[00398] Описание может быть осуществлено в других конкретных формах без отклонения от сущности или его существенных характеристик. Таким образом, вышеприведенные варианты осуществления следует рассматривать во всех отношениях как иллюстративные, а не как ограничивающие описание. Следовательно, объем описания указан в прилагаемой формуле изобретения, а не в предшествующем описании, и все изменения, которые подпадают под значение и диапазон эквивалентности формулы изобретения, должны быть включены в ее объем. Подразумевается, что модификации для осуществления изобретения, которые очевидны для специалистов в данной области техники, находятся в объеме прилагаемой формулы изобретения.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Takeda Pharmaceutical Company Limited

<120> ПОДКОЖНОЕ ДОЗИРОВАНИЕ АНТИТЕЛ К CD38

<130> 101588-5010-WO

<150> 62/649489

<151> 2018-03-28

<160> 13

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 300

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD38 человека

<400> 1

Met Ala Asn Cys Glu Phe Ser Pro Val Ser Gly Asp Lys Pro Cys Cys

1 5 10 15

Arg Leu Ser Arg Arg Ala Gln Leu Cys Leu Gly Val Ser Ile Leu Val

20 25 30

Leu Ile Leu Val Val Val Leu Ala Val Val Val Pro Arg Trp Arg Gln

35 40 45

Gln Trp Ser Gly Pro Gly Thr Thr Lys Arg Phe Pro Glu Thr Val Leu

50 55 60

Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His Pro Glu Met Arg His Val

65 70 75 80

Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys Gly Ala Phe Ile Ser Lys

85 90 95

His Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gln Pro Leu Met Lys Leu

100 105 110

Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Ile Leu Leu Trp Ser Arg Ile

115 120 125

Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val Gln Arg Asp Met Phe Thr

130 135 140

Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr Leu Ala Asp Asp Leu Thr Trp Cys

145 150 155 160

Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp Trp

165 170 175

Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser Val Phe Trp Lys Thr Val

180 185 190

Ser Arg Arg Phe Ala Glu Ala Ala Cys Asp Val Val His Val Met Leu

195 200 205

Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys Asn Ser Thr Phe Gly Ser

210 215 220

Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys Val Gln Thr Leu Glu Ala

225 230 235 240

Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser Arg Asp Leu Cys Gln Asp

245 250 255

Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile Ser Lys Arg Asn Ile Gln

260 265 270

Phe Ser Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp Lys Phe Leu Gln Cys Val

275 280 285

Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Thr Ser Glu Ile

290 295 300

<210> 2

<211> 301

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD38 яванского макака

<400> 2

Met Ala Asn Cys Glu Phe Ser Pro Val Ser Gly Asp Lys Pro Cys Cys

1 5 10 15

Arg Leu Ser Arg Arg Ala Gln Val Cys Leu Gly Val Cys Leu Leu Val

20 25 30

Leu Leu Ile Leu Val Val Val Val Ala Val Val Leu Pro Arg Trp Arg

35 40 45

Gln Gln Trp Ser Gly Ser Gly Thr Thr Ser Arg Phe Pro Glu Thr Val

50 55 60

Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Val His Pro Glu Met Arg His

65 70 75 80

Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys Gly Ala Phe Ile Ser

85 90 95

Lys Tyr Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gln Pro Leu Val Lys

100 105 110

Leu Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Thr Leu Leu Trp Ser Arg

115 120 125

Ile Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val Gln Arg Asp Met Phe

130 135 140

Thr Leu Glu Asp Met Leu Leu Gly Tyr Leu Ala Asp Asp Leu Thr Trp

145 150 155 160

Cys Gly Glu Phe Asn Thr Phe Glu Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp

165 170 175

Trp Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser Val Phe Trp Lys Thr

180 185 190

Val Ser Arg Arg Phe Ala Glu Thr Ala Cys Gly Val Val His Val Met

195 200 205

Leu Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys Asn Ser Thr Phe Gly

210 215 220

Ser Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys Val Gln Ala Leu Glu

225 230 235 240

Ala Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser Arg Asp Leu Cys Gln

245 250 255

Asp Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile Ser Lys Arg Asn Ile

260 265 270

Arg Phe Phe Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp Lys Phe Leu Gln Cys

275 280 285

Val Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Leu Ser Gly Ile

290 295 300

<210> 3

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 AB79

<400> 3

Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly

1 5

<210> 4

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 AB79

<400> 4

Ile Ser Trp Asn Gly Gly Lys Thr

1 5

<210> 5

<211> 16

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 AB79

<400> 5

Ala Arg Gly Ser Leu Phe His Asp Ser Ser Gly Phe Tyr Phe Gly His

1 5 10 15

<210> 6

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1 AB79

<400> 6

Ser Ser Asn Ile Gly Asp Asn Tyr

1 5

<210> 7

<211> 3

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2 AB79

<400> 7

Arg Asp Ser

1

<210> 8

<211> 10

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 AB79

<400> 8

Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser

1 5 10

<210> 9

<211> 135

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> аминокислотная последовательность цепи (VH)

<400> 9

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asp Ile Ser Trp Asn Gly Gly Lys Thr His Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Gln Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Leu Phe His Asp Ser Ser Gly Phe Tyr Phe Gly His

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala

130 135

<210> 10

<211> 129

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> аминокислотная последовательность цепи (VL)

<400> 10

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu

<210> 11

<211> 453

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> аминокислотная последовательность тяжелой цепи (HC)

<400> 11

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Asp Ile Ser Trp Asn Gly Gly Lys Thr His Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Gln Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Ser Leu Phe His Asp Ser Ser Gly Phe Tyr Phe Gly His

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

<210> 12

<211> 216

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> аминокислотная последовательность легкой цепи (LC)

<400> 12

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asp Asn

20 25 30

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Arg Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg

65 70 75 80

Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu

85 90 95

Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln

100 105 110

Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu

115 120 125

Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr

130 135 140

Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys

145 150 155 160

Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr

165 170 175

Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His

180 185 190

Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys

195 200 205

Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 13

<211> 318

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CD157 человека

<400> 13

Met Ala Ala Gln Gly Cys Ala Ala Ser Arg Leu Leu Gln Leu Leu Leu

1 5 10 15

Gln Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gly Gly Ala Arg Ala

20 25 30

Arg Trp Arg Gly Glu Gly Thr Ser Ala His Leu Arg Asp Ile Phe Leu

35 40 45

Gly Arg Cys Ala Glu Tyr Arg Ala Leu Leu Ser Pro Glu Gln Arg Asn

50 55 60

Lys Asn Cys Thr Ala Ile Trp Glu Ala Phe Lys Val Ala Leu Asp Lys

65 70 75 80

Asp Pro Cys Ser Val Leu Pro Ser Asp Tyr Asp Leu Phe Ile Asn Leu

85 90 95

Ser Arg His Ser Ile Pro Arg Asp Lys Ser Leu Phe Trp Glu Asn Ser

100 105 110

His Leu Leu Val Asn Ser Phe Ala Asp Asn Thr Arg Arg Phe Met Pro

115 120 125

Leu Ser Asp Val Leu Tyr Gly Arg Val Ala Asp Phe Leu Ser Trp Cys

130 135 140

Arg Gln Lys Asn Asp Ser Gly Leu Asp Tyr Gln Ser Cys Pro Thr Ser

145 150 155 160

Glu Asp Cys Glu Asn Asn Pro Val Asp Ser Phe Trp Lys Arg Ala Ser

165 170 175

Ile Gln Tyr Ser Lys Asp Ser Ser Gly Val Ile His Val Met Leu Asn

180 185 190

Gly Ser Glu Pro Thr Gly Ala Tyr Pro Ile Lys Gly Phe Phe Ala Asp

195 200 205

Tyr Glu Ile Pro Asn Leu Gln Lys Glu Lys Ile Thr Arg Ile Glu Ile

210 215 220

Trp Val Met His Glu Ile Gly Gly Pro Asn Val Glu Ser Cys Gly Glu

225 230 235 240

Gly Ser Met Lys Val Leu Glu Lys Arg Leu Lys Asp Met Gly Phe Gln

245 250 255

Tyr Ser Cys Ile Asn Asp Tyr Arg Pro Val Lys Leu Leu Gln Cys Val

260 265 270

Asp His Ser Thr His Pro Asp Cys Ala Leu Lys Ser Ala Ala Ala Ala

275 280 285

Thr Gln Arg Lys Ala Pro Ser Leu Tyr Thr Glu Gln Arg Ala Gly Leu

290 295 300

Ile Ile Pro Leu Phe Leu Val Leu Ala Ser Arg Thr Gln Leu

305 310 315

<---

Claims

1. Способ лечения рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломы у субъекта, включающий подкожное введение субъекту выделенного человеческого антитела к CD38 в достаточном количестве, в котором антитело к CD38 содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и вариабельную область легкой цепи (VL) CDR1, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, CDR2, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и CDR3, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, при этом антитело вводят в дозе от 45 до 1800 мг, где доза представляет собой дозу один раз в неделю.

2. Способ по п. 1, в котором введение антитела к CD38 не вызывает гемолитической анемии или тромбоцитопении.

3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором введение антитела к CD38 приводит к менее чем 30% случаев 3 или 4 степени одного или более нежелательных явлений, связанных с лечением (НЯСЛ), или нежелательных явлений, возникающих в ходе лечения (НЯВЛ), выбранных из группы, состоящей из анемии, гемолитической анемии, тромбоцитопении, усталости, реакций, связанных с инфузией (РСИ), лейкопении и лимфопении.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитело к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1% истощения популяции эритроцитов.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитело к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1% истощения популяции тромбоцитов.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором область VH цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, а область VL цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитело к CD38 содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором антитело вводят в дозе от 135 до 1800 мг, от 600 до 1800 мг, от 1200 до 1800 мг, от 45 до 1200 мг, от 45 до 600 мг, от 45 до 135 мг, от 135 до 1200 мг, от 135 до 600 мг или от 1200 до 1800 мг.

9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором человеческое антитело к CD38 вводят в форме фармацевтически приемлемой композиции.

10. Единичная дозированная форма для лечения рецидивирующей/рефрактерной множественной миеломы, содержащая выделенное антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 10, причем выделенное антитело связывается с CD38 и не связывается с эритроцитами человека и единичная дозированная форма содержит выделенное антитело в количестве от 45 до 1800 мг, при этом единичная дозированная форма содержит один или более фармацевтически приемлемых наполнителей, носителей и/или разбавителей, и при этом объем единичной дозированной формы составляет 2,5 мл или менее.

11. Единичная дозированная форма по п. 10, в которой единичная дозированная форма содержит выделенное антитело в количестве от 135 до 1800 мг, от 600 до 1800 мг, от 1200 до 1800 мг, от 45 до 1200 мг, от 45 до 600 мг, от 45 до 135 мг, от 135 до 1200 мг, от 135 до 600 мг или от 1200 до 1800 мг.

12. Единичная дозированная форма по п. 10 или 11, в которой выделенное антитело содержит тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, содержащую SEQ ID NO: 12.

13. Единичная дозированная форма по любому из пп. 10 или 11, в которой антитело к CD38 не вызывает гемолитической анемии или тромбоцитопении.

14. Единичная дозированная форма по любому из пп. 10-13, в которой антитело к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1% истощения популяции эритроцитов.

15. Единичная дозированная форма по любому из пп. 10-14, в которой антитело к CD38 вызывает менее 10%, менее 9%, менее 8%, менее 7%, менее 6%, менее 5%, менее 4%, менее 3%, менее 2% или менее 1% истощения популяции тромбоцитов.

16. Единичная дозированная форма по любому из пп. 10-15, в которой дозировка представляет собой дозировку один раз в неделю.