RU2808924C1 - Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода - Google Patents
Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода Download PDFInfo
- Publication number
- RU2808924C1 RU2808924C1 RU2023106213A RU2023106213A RU2808924C1 RU 2808924 C1 RU2808924 C1 RU 2808924C1 RU 2023106213 A RU2023106213 A RU 2023106213A RU 2023106213 A RU2023106213 A RU 2023106213A RU 2808924 C1 RU2808924 C1 RU 2808924C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bag6
- hfe
- risk
- fetal growth
- growth restriction
- Prior art date
Links
- 208000001362 Fetal Growth Retardation Diseases 0.000 title claims abstract description 46
- 206010070531 Foetal growth restriction Diseases 0.000 title claims abstract description 46
- 208000030941 fetal growth restriction Diseases 0.000 title claims abstract description 46
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 101150065637 Hfe gene Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 108700022944 Hemochromatosis Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102100031180 Hereditary hemochromatosis protein Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 101000697493 Homo sapiens Large proline-rich protein BAG6 Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 12
- 101150018195 BAG6 gene Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 claims 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 15
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 15
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 12
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 6
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 5
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 5
- 201000005608 severe pre-eclampsia Diseases 0.000 description 5
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 5
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 4
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 3
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 2
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 2
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 2
- 101150044523 ITGB3 gene Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 2
- 238000001558 permutation test Methods 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 210000000685 uterine artery Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 2
- XJOTXKZIRSHZQV-RXHOOSIZSA-N (3S)-3-amino-4-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S,3S)-1-[[(1R,6R,12R,17R,20S,23S,26R,31R,34R,39R,42S,45S,48S,51S,59S)-51-(4-aminobutyl)-31-[[(2S)-6-amino-1-[[(1S,2R)-1-carboxy-2-hydroxypropyl]amino]-1-oxohexan-2-yl]carbamoyl]-20-benzyl-23-[(2S)-butan-2-yl]-45-(3-carbamimidamidopropyl)-48-(hydroxymethyl)-42-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-59-(2-methylsulfanylethyl)-7,10,19,22,25,33,40,43,46,49,52,54,57,60,63,64-hexadecaoxo-3,4,14,15,28,29,36,37-octathia-8,11,18,21,24,32,41,44,47,50,53,55,58,61,62,65-hexadecazatetracyclo[32.19.8.26,17.212,39]pentahexacontan-26-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@H](Cc1cnc[nH]1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@@H]4CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc5ccccc5)NC(=O)[C@@H](NC1=O)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](Cc1cnc[nH]1)NC3=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N2)C(=O)NCC(=O)N4)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XJOTXKZIRSHZQV-RXHOOSIZSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 101000993059 Homo sapiens Hereditary hemochromatosis protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032999 Integrin beta-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010020950 Integrin beta3 Proteins 0.000 description 1
- 102100028047 Large proline-rich protein BAG6 Human genes 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000551546 Minerva Species 0.000 description 1
- 208000034702 Multiple pregnancies Diseases 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006999 cognitive decline Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 102000018511 hepcidin Human genes 0.000 description 1
- 108060003558 hepcidin Proteins 0.000 description 1
- 229940066919 hepcidin Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010438 iron metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 238000011328 necessary treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000001991 pathophysiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 230000028742 placenta development Effects 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 210000003660 reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных женщин русской национальности с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования. Из периферической венозной крови выделяют ДНК. Проводят анализ полиморфных вариантов rs1799945 гена HFE и rs805303 гена BAG6. При выявлении гаплотипа CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии. Способ обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития преэклампсии у беременных женщин русской национальности с задержкой роста плода на основе данных о гаплотипе CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6. 2 ил., 5 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики и может быть использовано для прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования.
В современном акушерстве одной из наиболее актуальных проблем является вопрос сокращения перинатальной смертности. Существенное влияние на данный показатель медико-социального благополучия населения оказывает задержка роста плода (ЗРП). ЗРП осложняет течение гестации в 10-15% всех случаев и является ведущей причиной неблагоприятных перинатальных исходов [Molina L.C.G., Odibo L., Zientara S., et al. Validation of Delphi procedure consensus criteria for defining fetal growth restriction. Ultrasound Obstet Gynecol. 2020; 56(1):61-66]. Кроме того, у плодов с ЗРП отмечается более высокий риск развития сердечно-сосудистых заболеваний, метаболического синдрома, сахарного диабета 2 типа, нервно-психических нарушений и снижения когнитивных функций в отдаленном будущем [Colella М, Frerot A, Novais ARB, Baud О. Neonatal and Long-Term Consequences of Fetal Growth Restriction. Curr Pediatr Rev. 2018; 14(4):212-218].
ЗРП принято подразделять на два клинически значимых фенотипа: ЗРП с ранним началом (регистрируется до 32 недели гестации) и поздним - после 32 недели, молекулярные механизмы патогенеза которых также различны [Fetal Growth Restriction: ACOG Practice Bulletin, Number 227. Obstet Gynecol. 2021; 137(2):е16-е28]. В основе раннего формирования ЗРП лежит нарушение плацентации с аномальной инвазией клеток трофобласта в спиральные маточные артерии и последующими патоморфологическими изменениями в системе «мать - плацента - плод», ведущими к формированию фетоплацентарной недостаточности и ЗРП [Nardozza L.M., Caetano А.С., Zamarian А.С., et al. Fetal growth restriction: current knowledge. Arch Gynecol Obstet. 2017; 295(5):1061-1077]. Следует отметить, что молекулярные основы патогенеза ЗРП и преэклампсии (ПЭ) имеют единые биологические механизмы, что определяет наибольшую эффективность изучения данных заболеваний только при их совместном рассмотрении. Установлено, что ПЭ осложняет течение беременности при раннем развитии ЗРП в 39 - 43%, а при позднем - лишь в 9 - 32% всех случаев [Marasciulo F., Orabona R., Fratelli N. Et al. Preeclampsia and late fetal growth restriction. Minerva Obstet Gynecol. 2021; 73(4):435-441]. Среди триггерных факторов, ведущих к развитию ЗРП, выделяют следующие группы: материнские, плацентарные, плодовые и генетические. В настоящее время различными научными коллективами ведется активное изучение генетических предикторов развития как ЗРП, так и ПЭ [Головченко О. В. Молекулярно-генетические детерминанты преэклампсии. Научные результаты биомедицинских исследований. 2019; 5(4):139-149.]. Выявлены ассоциации различных групп генов-кандидатов (системы гемостаза, факторов роста, цитокинов и др.) с развитием ЗРП и ПЭ. Однако, следует отметить, что в доступной научной литературе имеется малое число работ, посвященных изучению отдельных полиморфных вариантов «материнского» генома, которые одновременно вовлечены как в формирование ПЭ, так и ЗРП. Установление генетических маркеров, единых для этих двух патологий, позволит наиболее эффективно проводить профилактические мероприятия на этапе прегравидарной подготовки и ранних сроках гестации.
Полиморфный вариант rs1799945 гена HFE показал статистически значимые ассоциации (p ≤ 5×10-8) с развитием артериальной гипертензии и различными параметрами АД и АГ по данным восьми GWAS-исследований. Установлено, что аллель G исследуемого полиморфного варианта является «рисковым» и ассоциирован с повышением уровня АД (САД, ДАД, СрАД), в то время как аллель C имеет проективное значение в отношении развития АГ и связан с более низкими цифровыми значениями параметров АД. Ген HFE детерминирует синтез одноименного гликопротеина HFE (homeostatic iron regulator), который сходен по структуре с белками главного комплекса гистосовместимости I класса (MHC-I) [13]. Ген HFE является одним из ключевых регуляторов метаболизма железа - контролирует захват связанного с трансферрином железа из плазмы и экспрессию железорегулирующего гормона гепсидина [15.
Hollerer I, Bachmann A, Muckenthaler MU. Pathophysiological consequences and benefits of HFE mutations: 20 years of research. Haematologica. 2017; 102(5):809-817.].
Согласно материалам GWAS-каталога, полиморфный вариант rs805303 гена BAG6 показал ассоциации с различными параметрами артериального давления (АД), которые достигли полногеномного уровня значимости (p ≤ 5×10-8), по данным двум GWAS-исследований. Установлено, что аллель G полиморфного локуса вариант rs805303 гена BAG6 сопряжен с более высокими показателями уровня САД (p = 1.5×10−11), ДАД (p = 3.0×10−11) и развитием АГ (p = 1.1×10−10) в европейской популяции, а «протективный» аллель A rs805303 гена BAG6 ассоциирован со снижением уровня САД. Ген BAG6 кодирует ремоделирующий ядерный белок, вовлеченный в процессы коррекции нативной структуры полипептидных цепей - молекулярный ко-шаперон семейства BAG 6 и участвует в регуляции процесса аппоптоза во время стресса энлоплазматического ретикулума, аутофагии митохондрий, гибели клеток, вызванной повреждением ДНК, цитотоксичности естественных киллеров (NK-клеток) и секреции провоспалительных цитокинов [Krenciute G., Liu S., Yucer N. et al. Nuclear BAG6-UBL4A-GET4 complex mediates DNA damage signaling and cell death. J Biol Chem. 2013; 288(28):20547-20557].
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода, у женщин русской национальности, на основе данных о гаплотипе CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6.
Из области техники известен патент RU № 2648872 (опубл. 28.03.2018) Способ раннего прогнозирования развития преэклампсии. Данный способ включает сбор анамнестических данных: семейный, социальный, акушерско-гинекологический и соматический анамнез; определение показателей красной крови, тромбоцитов, лейкоформулы; биохимический и иммунологический анализ; оценку периферической гемодинамики методом допплерометрии в маточных артериях, отличающийся тем, что прогнозирование осуществляют на сроке 11-14 недель беременности, дополнительно определяют сывороточный уровень гормона эритропоэтина с расчетом коэффициента адекватности его продукции и оценкой степени адекватности продукции эритропоэтина, оценивают скорость кровотока в правой и левой маточных артериях с определением систоло-диастолического отношения, на основании полученных данных определяют коэффициент прогноза развития преэклампсии G1 и G1, и при определении хотя бы одного значения коэффициента G больше или равно 0 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии. Существенными недостатками данного способа раннего прогнозирования развития преэклампсии являются: 1) Большое число включаемых параметров, что определяет низкую воспроизводимость предложенного способа, а также сложность в проведении большого числа требуемых манипуляций и их дороговизну; 2) Данный способ не предусматривает включение в расчет оценки риска развития преэклампсии генетических маркеров, вклад которых в формирование ПЭ более 50%.
В патенте RU № 2723627 (опубл. 17.06.2020) описан «Способ прогнозирования тяжелой преэклампсии у беременных при носительстве мутации гена протромбина, генотип F2G20210A». Способ включает исследование крови беременных в сроке 7-8 недель, отличающийся тем, что определяют активность протромбина путем использования дефицитной по субстрату плазмы, и при выявлении активности протромбина >180%, при том условии, что 100% соответствует концентрации протромбина в плазме 1 МЕ/мл, делают вывод о риске развития тяжелой преэклампсии. Недостатками метода являются: 1) Возможность прогнозирования только тяжелого течения преэклампсии; 2) Данный способ информативен только в когорте женщин-носительниц мутации гена гена протромбина F2G20210A.
За прототип выбран патент № 2754956 (опубл. 08.09.2021) «Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с синдромом задержки роста плода». Данный способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови и анализ полиморфизма гена тромбоцитарного гликопротеина IIIа ITGB3, высокий риск развития преэклампсии прогнозируют при выявлении аллеля С полиморфного локуса rs5918 гена ITGB3. Недостатком данного способа является то, что при оценке риска развития преэклампсиив расчеты включены данные только об одном полиморфном локусе, тогда как межлокусные взаимодействия оказывают существенное влияние на риск любой патологии.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования, у женщин русской национальности, на основе данных о гаплотипе CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования, у женщин русской национальности, на основе данных о гаплотипе CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6, включающий:
- выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфных локусов rs1799945 гена HFE и rs805303 гена BAG6;
- прогнозирование высокого риска развития преэклампсии у женщин русской национальности при выявлении гаплотипа CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода с учетом молекулярно-генетического тестирования, у женщин русской национальности, на основе данных о гаплотипе CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6.
Способ осуществляют следующим образом:
Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew, 1984) в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови с ЭДТА добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об./мин. в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин. в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. После лиофилизации полученную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при температуре -20°С. Выделенную ДНК используют для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.
Анализ полиморфных локусов rs1799945 гена HFE и rs805303 гена BAG6 осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на термоциклере CFX-96 Real-Time System («Bio-Rad», США) c использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов (синтезированы в ООО «Тест - Ген» (Ульяновск). Амплификация геномной ДНК производилась в реакционной смеси, суммарным объемом 10 мкл, включающей смесь для ПЦР - 4 мкл, Taq-полимеразу - 2 мкл, исследуемый образец (~30 нг ДНК/мкл) - 1 мкл, деионизированная вода - 3мкл. Генотипирование исследуемых образцов осуществлялось с использованием программного обеспечения «CFX-Manager™» методом дискриминации аллелей по величинам относительных единиц флуоресценции (ОЕФ). Для полиморфизма rs1799945 гена HFE зонд с флуоресцентным красителем VIC соответствует аллелю C, зонд с красителем FAM - аллелю G (фиг. 1), для rs805303 гена BAG6 зонд с флуоресцентным красителем VIC соответствует аллелю G, зонд с красителем FAM - аллелю A (фиг. 2).
Изобретение характеризуется фигурами.
Фиг. 1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма HFE (rs1799945): -СС, -GG, -CG, ♦-отрицательный контроль.
Фиг. 2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма BAG6 (rs805303): -GG, -AA, -AG, ♦-отрицательный контроль.
Для анализа ассоциации изучаемых полиморфных локусов с риском развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода, русской национальности, проведен расчет показателей отношения шансов (ОШ) и его 95% доверительного интервала (95% ДИ). Вычисления выполнялись методом логистической регрессии в статистическом пакете программы PLINK (размещен на электронном ресурсе http://zzz.bwh.harvard.edu/plink/) согласно четырех генетических моделей с введением поправок на ковариаты (возраст и индекс массы тела женщины до беременности) и множественные сравнения (применялся адаптивный пермутационный тест). Для оценки ассоциаций гаплотипов с развитием преэклампсии у беременных с задержкой роста плода использовался метод логистической регрессии (программа plink) с включением в анализ необходимых ковариат и коррекцией на множественные сравнения (выполнялся пермутационный тест - выполнено не менее 1000 пермутаций). Статистически значимым считали ррerm<0,05.
Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования, русской национальности, подтверждает анализ результатов наблюдений 190 беременных: 83 женщины с ПЭ в сочетании с ЗРП и 107 пациенток с изолированной формой ЗРП. Верификация диагноза ПЭ осуществлялась при наличии следующих критериев: артериальная гипертензия (ДАД ≥ 90 мм рт. ст. или САД ≥ 140 мм рт. ст.) и протеинурия (≥ 0,3 г/сутки). Диагноз ЗРП устанавливался при замедлении прироста предполагаемой массы плода или окружности живота ниже 10-ого процентиля в сочетании с патологическим кровотоком, зарегистрированным при УЗ-допплерографии, или при значении предполагаемой массы плода или окружности живота менее 3-ого процентиля. Все женщины относились к русскому этносу и не имели родственных связей между собой. В группу наблюдаемых не вошли беременные с многоплодной беременностью, имеющие другую патологию беременности (аномалии прикрепления и расположения плаценты, резус-конфликт, врожденные пороки развития плода плода) и тяжелую экстрагенитальную патологию (АГ, СД и др.), отказавшиеся от участия в исследовании. Клиническое, клинико-анамнестическое и клинико-лабораторное обследование беременных было проведено на сроке родоразрешения, под контролем этического комитета медицинского института НИУ «БелГУ».
Всем женщинам, находящимся под наблюдением, проведено молекулярно-генетическое исследование полиморфных локусов rs1799945 гена HFE и rs805303 гена BAG6. Расчет отношения шансов (ОШ), его 95% доверительного интервала (95% ДИ) и поиск ассоциаций выявленных гаплотипов в рамках гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6 проведен методом логистической регрессии в статистическом пакете программы PLINK согласно аллельной, аддитивной, рецессивной, доминантной генетических моделей с введением поправок на ковариаты и множественные сравнения (выполнено не менее 1000 пермутационных процедур).
В ходе проведенного анализа установлено, что гаплотип CG (частота указанного гаплотипа у беременных с ПЭ в сочетании с ЗРП = 0,551, а у женщин с изолированной ЗРП - 0,413) гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6 (OR=1,91; p=0,007 pperm=0,005), повышает риск развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода.
В качестве примеров конкретного применения разработанного способа приведено обследование беременных с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования, у женщин русской национальности. Выполнено молекулярно-генетическое обследование по полиморфным локусам rs1799945 гена HFE и rs805303 гена BAG6
У беременной женщины С., русской национальности, на сроке 32 недель установлен диагноз: задержка роста плода I степени, после забора венозной крови из локтевой вены и последующего генотипирования выделенной ДНК выявлен гаплотип CC гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6. Согласно результатам молекулярно-генетического тестирования, пациентка С. не включается в группу индивидуумов с высоким риском развития преэклампсии. При дальнейшем наблюдении у данной женщины не было выявлено клинических признаков преэклампсии в течение всего срока гестации. Родоразрешение произведено на сроке 40 недель.
У беременной женщины Т., русской национальности, на сроке 24 недель установлен диагноз: задержка роста плода II степени. Произведен забор венозной крови из локтевой вены с последующим генотипированием выделенной ДНК и выявлен гаплотип CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6. По результатам проведенного молекулярно-генетического тестирования, пациентка С. пациентка Т. включается в группу индивидуумов с высоким риском развития преэклампсии. При дальнейшем наблюдении у данной женщины на сроке 31 недели был верифицирован диагноз: преэклампсия тяжелого течения. Родоразрешение произведено на сроке 35 недель.
У беременной женщины З., русской национальности, на сроке 31 недели установлен диагноз: задержка роста плода I степени. После забора венозной крови из локтевой вены и последующего генотипирования ДНК выявлен гаплотип CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6. Согласно результатам молекулярно-генетического анализа, пациентка З. включается в группу индивидуумов с высоким риском развития преэклампсии. При дальнейшем наблюдении у данной женщины на сроке 34 недель установлен диагноз: преэклампсия умеренного течения. Родоразрешение произведено на сроке 38 недель.
У беременной женщины М., русской национальности, на сроке 31 недели установлен диагноз: задержка роста плода I степени. Произведен забор венозной крови из локтевой вены с последующим генотипированием геномной ДНК и установлен гаплотип GG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6. Согласно результатам молекулярно-генетического тестирования, пациентка М. не включается в группу индивидуумов с высоким риском развития преэклампсии. При дальнейшем ведение беременности у данной женщины не было выявлено клинических признаков преэклампсии в течение всего срока гестации. Родоразрешение произведено на сроке 41 недели.
У беременной женщины Д., русской национальности, на сроке 26 недель установлен диагноз: задержка роста плода II степени. После забора венозной крови из локтевой вены и последующего генотипирования выделенной ДНК установлен гаплотип CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6. По результатам проведенного молекулярно-генетического тестирования, пациентка С. включается в группу индивидуумов с высоким риском развития преэклампсии. При дальнейшем наблюдении у данной женщины при наступлении беременности на сроке 27 недель верифицирован диагноз: тяжелая преэклампсия. Родоразрешение произведено на сроке 36 недель.
Применение данного способа позволит прогнозировать риск развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода, русской национальности, при выявлении гаплотипа CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6, формировать группы риска по развитию преэклампсии у беременных с задержкой роста плода и реализовывать в данных группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода на основе молекулярно-генетического тестирования у женщин русской национальности, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизмов, отличающийся тем, что при исследовании полиморфных вариантов rs1799945 гена HFE и rs805303 гена BAG6 прогнозируют высокий риск развития преэклампсии при выявлении гаплотипа CG гаплоблока rs1799945-rs805303 генов HFE/BAG6.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2808924C1 true RU2808924C1 (ru) | 2023-12-05 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2834808C1 (ru) * | 2024-08-30 | 2025-02-14 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011157445A1 (en) * | 2010-06-18 | 2011-12-22 | Cezanne S.A.S. | Markers for the prognosis and risk assessment of pregnancy-induced hypertension and preeclampsia |
| RU2738675C1 (ru) * | 2020-07-28 | 2020-12-15 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин без отягощенного семейного анамнеза с учетом генетических факторов |
| RU2754956C1 (ru) * | 2021-04-06 | 2021-09-08 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с синдромом задержки роста плода |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011157445A1 (en) * | 2010-06-18 | 2011-12-22 | Cezanne S.A.S. | Markers for the prognosis and risk assessment of pregnancy-induced hypertension and preeclampsia |
| RU2738675C1 (ru) * | 2020-07-28 | 2020-12-15 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин без отягощенного семейного анамнеза с учетом генетических факторов |
| RU2754956C1 (ru) * | 2021-04-06 | 2021-09-08 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с синдромом задержки роста плода |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| REGANIT P.F.M. et al. BAG6 Variant rs805303 is Nominally Associated with ACEi-induced Cough Among Filipinos. Philippine Journal of Science. 2020 Mar; 149(1): 35-41. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2836765C1 (ru) * | 2024-07-22 | 2025-03-21 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования "Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ определения тяжести преэклампсии |
| RU2834808C1 (ru) * | 2024-08-30 | 2025-02-14 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vodolazkaia et al. | Vascular endothelial growth factor pathway in endometriosis: genetic variants and plasma biomarkers | |
| CN102459635B (zh) | 用于选择对于妊娠结果具有高潜能的感受态卵母细胞和感受态胚胎的方法 | |
| Lyubomirskaya et al. | SNPs and transcriptional activity of genes of innate and adaptive immunity at the maternal-fetal interface in woman with preterm labour, associated with preterm premature rupture of membranes | |
| EP2630500B1 (en) | Methods for selecting competent oocytes and competent embryos with high potential for pregnancy outcome | |
| Kang et al. | Genetic variation of the E-cadherin gene is associated with primary infertility in patients with ovarian endometriosis | |
| RU2578425C2 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии | |
| RU2468367C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом | |
| RU2568892C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения | |
| RU2808924C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с задержкой роста плода | |
| RU2558854C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эндометриоза | |
| RU2557952C1 (ru) | Способ прогнозирования веса новорожденного с учетом полиморфных вариантов локуса 10976 g/afvii | |
| RU2741861C1 (ru) | Способ прогнозирования веса новорожденного у беременных с преэклампсией в сочетании с синдромом задержки роста плода | |
| RU2557944C1 (ru) | Способ прогнозирования уровня артериального давления у женщин в конце беременности | |
| RU2433403C2 (ru) | Способ прогнозирования развития артериальной гипертонии у беременных | |
| RU2795660C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин с учетом генетических маркеров | |
| RU2834809C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения | |
| RU2834808C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе генетического тестирования | |
| RU2550933C1 (ru) | Способ прогнозирования риска формирования миомы матки | |
| RU2754956C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии у беременных с синдромом задержки роста плода | |
| RU2473912C1 (ru) | Способ прогнозирования уровня артериального давления у беременных в зависимости от генетического полиморфизма эндотелина 1 | |
| RU2786313C1 (ru) | Способ прогнозирования веса новорожденного с учетом полиморфного локуса гексокиназы 2, дифференциально экспрессирующегося в плаценте | |
| RU2456610C1 (ru) | Способ прогнозирования маточно-плодово-плацентарного кровотока у беременных | |
| RU2770869C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития синдрома задержки роста плода у женщин с отягощенным семейным анамнезом | |
| KR102113061B1 (ko) | miR-605 A＞G, miR-608 G＞C, miR-631 I＞D, miR-938 C＞T 및 miR-1302-3 C＞T 다형성과 한국 여성의 반복착상실패 발병 위험의 연관성 | |
| RU2775433C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии на основе молекулярно-генетического анализа |