RU2848318C2

RU2848318C2 - High purity steviol glycosides

Info

Publication number: RU2848318C2
Application number: RU2020142554A
Authority: RU
Inventors: Аветик МАРКОСЯН; Сараванан А/Л РАМАНДАЧ; Мохамад АФЗААЛЬ БИН ХАСИМ; Кристина ЧКХАН; Кхайрул НИЗАМ БИН НАВИ; Сью Инь ЧОУ
Original assignee: ПЬЮРСЁРКЛ ЮЭсЭй ИНК.
Priority date: 2018-06-08
Filing date: 2019-06-07
Publication date: 2025-10-17

Abstract

FIELD: biotechnology.

SUBSTANCE: methods are proposed for obtaining highly purified steviol glycosides: rebaudioside N2 and rebaudioside O4. The methods involve the use of enzyme preparations containing UGTSl2 with SEQ ID NO: 2, SuSy_At with SEQ ID NO: 1 and UGT76G1 with SEQ ID NO: 3, and recombinant microorganisms to convert rebaudioside C into the target steviol glycosides and their subsequent isolation and purification.

EFFECT: to use as a non-caloric sweetener, flavour enhancer, sweetness enhancer and foam suppressant in a consumer product.

11 cl, 13 dwg, 7 tbl, 8 ex

Description

Область техникиField of technology

Настоящее изобретение относится к способу получения композиций, содержащих стевиолгликозиды, включая композиции высокоочищенного стевиолгликозида.The present invention relates to a method for producing compositions containing steviol glycosides, including highly purified steviol glycoside compositions.

Перечень последовательностейList of sequences

Текстовый файл под названием « PC_78PROV.txt », созданный 8 июня 2018 г., имеющий 19 килобайт данных и поданный одновременно с настоящим документом, в полном объеме включен в настоящую заявку путем ссылки.The text file entitled "PC_78PROV.txt", created on June 8, 2018, containing 19 kilobytes of data and filed concurrently with this document, is incorporated into this application by reference in its entirety.

Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for the creation of the invention

Высокоинтенсивные подсластители обладают уровнем сладости, во много раз превышающим уровень сладости сахарозы. Они, по существу, не являются калорийными и обычно используются в рационе питания и продуктах с пониженной калорийностью, включая продукты питания и напитки. Подсластители высокой интенсивности не вызывают гликемической реакции, что делает их подходящими для применения в продуктах, предназначенных для больных диабетом, и других лиц, заинтересованных в контроле потребления углеводов.High-intensity sweeteners (HIS) have a sweetness level many times greater than that of sucrose. They are essentially calorie-free and are commonly used in diets and reduced-calorie products, including foods and beverages. HISS do not cause a glycemic response, making them suitable for use in products intended for diabetics and others interested in controlling carbohydrate intake.

Стевиолгликозиды представляют собой класс соединений, встречающихся в листьях Stevia rebaudiana Bertoni, многолетнего кустарника семейства Asteraceae (Compositae), родом из определенных областей Южной Америки. Они структурно характеризуются одним основанием, стевиолом, отличаясь наличием углеводных остатков в положениях C13 и C19. Они накапливаются в листьях Stevia, составляя приблизительно от 10% до 20% общей массы сухого вещества. В пересчете на массу сухого вещества четыре основных гликозида, обнаруженных в листьях Stevia, как правило, включают стевиозид (9,1%), ребаудиозид A (3,8%), ребаудиозид C (0,6-1,0%) и дулькозид A (0,3%). Другие известные стевиолгликозиды включают ребаудиозид B, C, D, E, F и M, стевиолбиозид и рубузозид.Steviol glycosides are a class of compounds found in the leaves of Stevia rebaudiana Bertoni, a perennial shrub in the Asteraceae (Compositae) family native to certain areas of South America. They are structurally characterized by a single base, steviol, and differ in the presence of carbohydrate residues at positions C13 and C19. They accumulate in Stevia leaves, accounting for approximately 10% to 20% of the total dry matter weight. On a dry matter weight basis, the four main glycosides found in Stevia leaves typically include stevioside (9.1%), rebaudioside A (3.8%), rebaudioside C (0.6-1.0%), and dulcoside A (0.3%). Other known steviol glycosides include rebaudioside B, C, D, E, F, and M, steviolbioside, and rubusoside.

Хотя способы получения стевиолгликозидов из Stevia rebaudiana известны, многие из этих способов не подходят для коммерческого применения.Although methods for obtaining steviol glycosides from Stevia rebaudiana are known, many of these methods are not suitable for commercial use.

Соответственно, остается потребность в простых, эффективных и экономичных способах получения композиций, содержащих стевиолгликозиды, включая композиции высокоочищенного стевиолгликозида.Accordingly, there remains a need for simple, efficient, and cost-effective methods for producing compositions containing steviol glycosides, including highly purified steviol glycoside compositions.

Сущность изобретенияThe essence of the invention

В настоящем изобретении предложен способ получения композиции, содержащей целевой стевиолгликозид, посредством контакта исходной композиции, содержащей органический субстрат, с микробной клеткой и/или ферментным препаратом, с получением таким образом композиции, содержащей целевой стевиолгликозид.The present invention provides a method for producing a composition containing a target steviol glycoside by contacting a starting composition containing an organic substrate with a microbial cell and/or an enzyme preparation, thereby producing a composition containing the target steviol glycoside.

Исходная композиция может представлять собой любое органическое соединение, содержащее по меньшей мере один атом углерода. В одном варианте осуществления исходную композицию выбирают из группы, состоящей из стевиолгликозидов, полиолов или сахарных спиртов, различных углеводов.The starting composition may be any organic compound containing at least one carbon atom. In one embodiment, the starting composition is selected from the group consisting of steviol glycosides, polyols or sugar alcohols, and various carbohydrates.

Целевой стевиолгликозид может представлять собой любой стевиолгликозид. В одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3, ребаудиозид O4 или синтетический стевиолгликозид.The target steviol glycoside can be any steviol glycoside. In one embodiment, the target steviol glycoside is steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 or synthetic steviol glycoside.

В одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N2.In one embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside N2.

В одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид O4.In one embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside O4.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления используют ферментный препарат, содержащий один или более ферментов, или микробную клетку, содержащую один или более ферментов, способных преобразовывать исходную композицию в целевые стевиолгликозиды. Фермент может быть расположен на поверхности и/или внутри клетки. Ферментный препарат может быть представлен в форме цельноклеточной суспензии, сырого лизата или в виде очищенного(-ых) фермента(-ов). Ферментный препарат может быть представлен в свободной форме или иммобилизован на твердой подложке, изготовленной из неорганических или органических материалов.In some preferred embodiments, an enzyme preparation containing one or more enzymes, or a microbial cell containing one or more enzymes, capable of converting the starting composition into the target steviol glycosides, is used. The enzyme may be located on the surface and/or within the cell. The enzyme preparation may be in the form of a whole-cell suspension, a crude lysate, or purified enzyme(s). The enzyme preparation may be in free form or immobilized on a solid support made of inorganic or organic materials.

В некоторых вариантах осуществления микробная клетка содержит ферменты и кодирующие их гены, необходимые для превращения исходной композиции в целевые стевиолгликозиды. Соответственно, в настоящем изобретении также предложен способ получения композиции, содержащей целевой стевиолгликозид, посредством приведения в контакт исходной композиции, содержащей органический субстрат, с микробной клеткой, содержащей по меньшей мере один фермент, способный превращать исходную композицию в целевые стевиолгликозиды, с получением таким образом среды, содержащей по меньшей мере один целевой стевиолгликозид.In some embodiments, the microbial cell comprises enzymes and the genes encoding them necessary for converting the starting composition into the target steviol glycosides. Accordingly, the present invention also provides a method for producing a composition containing a target steviol glycoside by contacting the starting composition containing an organic substrate with a microbial cell containing at least one enzyme capable of converting the starting composition into the target steviol glycosides, thereby producing a medium containing at least one target steviol glycoside.

Ферменты, необходимые для превращения исходной композиции в целевые стевиолгликозиды, включают ферменты биосинтеза стевиола, UDP-глюкозилтрансферазы (UGT), UDP-гликозилтрансферазы (далее UGlyT) и/или фермент UDP-рециркуляции.Enzymes required for the conversion of the starting composition into the target steviol glycosides include steviol biosynthetic enzymes, UDP-glucosyltransferase (UGT), UDP-glycosyltransferase (hereinafter UGlyT) and/or UDP-recycling enzyme.

В одном варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола включают в себя ферменты мевалонатного пути (MVA).In one embodiment, the steviol biosynthetic enzymes include mevalonate pathway (MVA) enzymes.

В другом варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола включают в себя ферменты немевалонатного пути 2-C-метил-D-эритрит-4-фосфата (MEP/DOXP).In another embodiment, the steviol biosynthetic enzymes comprise enzymes of the non-mevalonate 2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate (MEP/DOXP) pathway.

В одном варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола выбраны из группы, включающей в себя геранилгеранилдифосфатсинтазу, копалилдифосфатсинтазу, кауренсинтазу, кауреноксидазу, 13-гидроксилазу кауреновой кислоты (KAH), стевиолсинтетазу, дезоксиксилулозо-5 -фосфатсинтазу (DXS), D-1-дезоксиксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразу (DXR), 4-дифосфоцитидил-2-C-метил-D-эритритолсинтазу (CMS), 4-дифосфоцитидил-2-C-метил-D-эритритолкиназу (CMK), 4-дифосфоцитидил-2-C-метил-D-эритритол-2,4- циклодифосфатсинтазу (MCS), 1-гидрокси-2-метил-2(E)-бутенил-4-дифосфатсинтазу (HDS), 1-гидрокси-2-метил-2(E)-бутенил-4-дифосфатредуктазу (HDR), ацетоацетил-CoA-тиолазу, усеченную HMG-CoA-редуктазу, мевалонаткиназу, фосфомевалонаткиназу, мевалонатпирофосфатдекарбоксилазу, цитохром Р450-редуктазу и т.п.In one embodiment, the steviol biosynthetic enzymes are selected from the group consisting of geranylgeranyl diphosphate synthase, copalyl diphosphate synthase, kaurene synthase, kaurene oxidase, kaurenic acid 13-hydroxylase (KAH), steviol synthetase, deoxyxylulose-5-phosphate synthase (DXS), D-1-deoxyxylulose-5-phosphate reductoisomerase (DXR), 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol synthase (CMS), 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase (CMK), 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol-2,4-cyclodiphosphate synthase (MCS), 1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl-4-diphosphate synthase (HDS), 1-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl-4-diphosphate reductase (HDR), acetoacetyl-CoA thiolase, truncated HMG-CoA reductase, mevalonate kinase, phosphomevalonate kinase, mevalonate pyrophosphate decarboxylase, cytochrome P450 reductase, etc.

UDP-глюкозилтрансфераза может представлять собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы в стевиол и/или субстрат стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида.The UDP-glucosyltransferase may be any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to a steviol and/or steviol glycoside substrate to produce the target steviol glycoside.

UDP-гликозилтрансфераза может представлять собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы в стевиол и/или субстрат стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида.The UDP-glycosyltransferase may be any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to a steviol and/or steviol glycoside substrate to produce the target steviol glycoside.

Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «SuSy_AT» относится к сахарозосинтазе с аминокислотной последовательностью «SEQ ID 1», как описано в примере 1, или полипетиду, имеющему значительную (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%,>97%, >98%, >99%) идентичность аминокислотной последовательности полипептиду SEQ ID 1, а также выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют эти полипептиды.Unless otherwise stated, the term "SuSy_AT" as used herein refers to sucrose synthase with the amino acid sequence "SEQ ID 1" as described in Example 1, or a polypeptide having significant (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%) amino acid sequence identity to the polypeptide of SEQ ID 1, as well as isolated nucleic acid molecules that encode these polypeptides.

Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «UGTSl2» относится к UDP-глюкозилтрансферазе, имеющей аминокислотную последовательность «SEQ ID 2», как описано в примере 1, или полипептиду, имеющему значительную (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%,>97%, >98%, >99%) идентичность аминокислотной последовательности полипептиду SEQ ID 2, а также выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие эти полипептиды.Unless otherwise indicated, the term "UGTSl2" as used herein refers to a UDP-glucosyltransferase having the amino acid sequence "SEQ ID 2" as described in Example 1, or a polypeptide having significant (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%) amino acid sequence identity to the polypeptide of SEQ ID 2, as well as isolated nucleic acid molecules encoding these polypeptides.

Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «UGT76G1» относится к UDP-глюкозилтрансферазе, имеющей аминокислотную последовательность «SEQ ID 3», как описано в примере 1, или полипептиду, имеющему значительную (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%,>97%, >98%, >99%) идентичность аминокислотной последовательности полипептиду SEQ ID 3, а также выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие эти полипептиды.Unless otherwise indicated, the term "UGT76G1" as used herein refers to a UDP-glucosyltransferase having the amino acid sequence "SEQ ID 3" as described in Example 1, or a polypeptide having significant (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%) amino acid sequence identity to the polypeptide of SEQ ID 3, as well as isolated nucleic acid molecules encoding these polypeptides.

Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «UGlyT91C1» относится к UDP-гликозилтрансферазе, имеющей аминокислотную последовательность «SEQ ID 4», как описано в примере 1, или полипептиду, имеющему значительную (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%,>97%, >98%, >99%) идентичность аминокислотной последовательности полипептиду SEQ ID 4, а также выделенным молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим эти полипептиды.Unless otherwise indicated, the term "UGlyT91C1" as used herein refers to a UDP-glycosyltransferase having the amino acid sequence "SEQ ID 4" as described in Example 1, or a polypeptide having significant (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%) amino acid sequence identity to the polypeptide of SEQ ID 4, as well as isolated nucleic acid molecules encoding these polypeptides.

В одном варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола, UDP-глюкозилтрансферазы и UDP-гликозилтрансферазы образуются в микробной клетке. Микробная клетка может представлять собой, например, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp. и т. п. В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансферазы синтезируются.In one embodiment, the steviol biosynthetic enzymes, UDP-glucosyltransferase, and UDP-glycosyltransferase are produced in a microbial cell. The microbial cell can be, for example, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp., etc. In another embodiment, the UDP-glucosyltransferases are synthesized.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза выбрана из группы, включающей UGT74G1, UGT85C2, UGT76G1, UGT91D2, UGTSl2, EUGT11 и UGT, имеющие значительную (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%,>97%, >98%, >99%) идентичность аминокислотной последовательности этим полипептидам, а также выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют эти UGT.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is selected from the group consisting of UGT74G1, UGT85C2, UGT76G1, UGT91D2, UGTS12, EUGT11, and UGTs having significant (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%) amino acid sequence identity to these polypeptides, as well as isolated nucleic acid molecules that encode these UGTs.

В одном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза выбрана из группы, включающей UGlyT91C1 и UGlyT, имеющие значительную (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%,>97%, >98%, >99%) идентичность аминокислотной последовательности этим полипептидам, а также выделенные молекулы нуклеиновой кислоты, которые кодируют эти UGlyT.In one embodiment, the UDP-glycosyltransferase is selected from the group consisting of UGlyT91C1 and UGlyT having significant (>85%, >86%, >87%, >88%, >89%, >90%, >91%, >92%, >93%, >94%, >95%, >96%, >97%, >98%, >99%) amino acid sequence identity to these polypeptides, as well as isolated nucleic acid molecules that encode these UGlyT.

В одном варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола, UGT, UGlyT, система рециркуляции UDP-глюкозы и система рециркуляции UDP-рамнозы присутствуют в одном микроорганизме (микробной клетке). Микроорганизм может представлять собой, например, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp.In one embodiment, the steviol biosynthetic enzymes, UGT, UGlyT, UDP-glucose recycling system, and UDP-rhamnose recycling system are present in a single microorganism (microbial cell). The microorganism can be, for example, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолу или любой исходный стевиолгликозид, несущий функциональную группу - ОH на С13, с получением целевого стевиолгликозида, имеющего -О-глюкозо бета-глюкопиранозид гликозидную связь в С13. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT85C2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol or any parent steviol glycoside bearing an -OH functional group at C13 to produce a target steviol glycoside having an -O-glucose beta-glucopyranoside glycosidic linkage at C13. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT85C2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолу или любой исходный стевиолгликозид, несущий функциональную группу -COOH на C19, с получением целевого стевиолгликозида, имеющего -COO-глюкозо бета-глюкопиранозид гликозидную связь на C19. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol or any parent steviol glycoside bearing a -COOH functional group at C19 to produce a target steviol glycoside having a -COO-glucose beta-glucopyranoside glycosidic linkage at C19. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к существующей глюкозе на C19 любого исходного стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида с по меньшей мере одной дополнительной глюкозой, несущей по меньшей мере одну бета 1→2-глюкопиранозид гликозидную(-ые) связь(-и) на вновь образованной(-ых) гликозидной(-ых) связи(-ях). В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to an existing glucose at C19 of any starting steviol glycoside to produce a target steviol glycoside with at least one additional glucose bearing at least one beta 1→2-glucopyranoside glycosidic linkage(s) on the newly formed glycosidic linkage(s). In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к существующей глюкозе на C19 любого исходного стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида с по меньшей мере одной дополнительной глюкозой, несущей по меньшей мере одну бета 1→3-глюкопиранозид гликозидную(-ые) связь(-и) на вновь образованной(-ых) гликозидной(-ых) связи(-ях). В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to an existing glucose at C19 of any starting steviol glycoside to produce a target steviol glycoside with at least one additional glucose bearing at least one beta 1→3-glucopyranoside glycosidic linkage(s) on the newly formed glycosidic linkage(s). In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к существующей глюкозе на C13 любого исходного стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида с по меньшей мере одной дополнительной рамнозой, несущей по меньшей мере одну альфа 1→2 рамнопиранозид гликозидную(-ые) связь(-и) на вновь образованной(-ых) гликозидной(-ых) связи(-ях). В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to an existing glucose at C13 of any starting steviol glycoside to produce a target steviol glycoside with at least one additional rhamnose bearing at least one alpha 1→2 rhamnopyranoside glycosidic linkage(s) on the newly formed glycosidic linkage(s). In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity with UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к существующей глюкозе на C13 любого исходного стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида с по меньшей мере одной дополнительной глюкозой, несущей по меньшей мере одну бета 1→3-глюкопиранозид гликозидную(-ые) связь(-и) на вновь образованной(-ых) гликозидной(-ых) связи(-ях). В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to an existing glucose at C13 of any starting steviol glycoside to produce a target steviol glycoside with at least one additional glucose bearing at least one beta 1→3-glucopyranoside glycosidic linkage(s) on the newly formed glycosidic linkage(s). In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к существующей глюкозе на C13 любого исходного стевиолгликозида с получением целевого стевиолгликозида с по меньшей мере одной дополнительной глюкозой, несущей по меньшей мере одну бета 1→6-глюкопиранозид гликозидную(-ые) связь(-и) на вновь образованной(-ых) гликозидной(-ых) связи(-ях). В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to an existing glucose at C13 of any starting steviol glycoside to produce a target steviol glycoside with at least one additional glucose bearing at least one beta 1→6-glucopyranoside glycosidic linkage(s) on the newly formed glycosidic linkage(s). In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT91D2.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолу с образованием стевиолмонозида. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT85C2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2, или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol to form steviol monoside. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT85C2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT85C2, or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT85C2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолу с образованием стевиолмонозида А. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol to form steviol monoside A. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиолмонозиду с образованием стевиолбиозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to steviol monoside to form steviolbioside C. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолмонозиду с образованием стевиолбиозида D. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol monoside to form steviolbioside D. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолмонозиду с образованием стевиолбиозида E. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol monoside to form steviolbioside E. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолмонозиду с образованием рубузозида. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol monoside to form rubusoside. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолмонозиду А с образованием рубузозида. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT85C2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2, или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol monoside A to form rubusoside. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT85C2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT85C2, or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT85C2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолмонозиду А с образованием стевиолбиозида A. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol monoside A to form steviol bioside A. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолмонозиду А с образованием стевиолбиозида B. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviol monoside A to form steviol bioside B. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду С с образованием дулькозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside C to form dulcoside C. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду С с образованием дулькозида D. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside C to form dulcoside D. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду С с образованием дулькозида A. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside C to form dulcoside A. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиолбиозиду D с образованием дулькозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to steviolbioside D to form dulcoside C. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду D с образованием ребаудиозида В2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside D to form rebaudioside B2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду D с образованием стевиозида G. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside D to form stevioside G. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиолбиозиду E с образованием дулькозида D. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to steviolbioside E to form dulcoside D. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду E с образованием ребаудиозида B2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside E to form rebaudioside B2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду E с образованием стевиозида H. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside E to form stevioside H. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к рубузозиду с образованием дулькозида A. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rubusoside to form dulcoside A. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к рубузозиду с образованием стевиозида G. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rubusoside to form stevioside G. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к рубузозиду с образованием стевиозида H. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rubusoside to form stevioside H. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к рубузозиду с образованием стевиозида A. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rubusoside to form stevioside A. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к рубузозиду с образованием стевиозида B. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rubusoside to form stevioside B. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду А с образованием стевиозида A. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT85C2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2, или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside A to form stevioside A. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT85C2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2, or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду А с образованием стевиозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside A to form stevioside C. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду В с образованием стевиозида B. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT85C2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2, или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside B to form stevioside B. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT85C2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2, or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиолбиозиду В с образованием стевиозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to steviolbioside B to form stevioside C. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду С с образованием ребаудиозида C3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside C to form rebaudioside C3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду С с образованием ребаудиозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside C to form rebaudioside C. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду D с образованием ребаудиозида C3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside D to form rebaudioside C3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду D с образованием ребаудиозида С4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside D to form rebaudioside C4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду B2 с образованием ребаудиозида C3. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside B2 to form rebaudioside C3. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду B2 с образованием ребаудиозида А4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside B2 to form rebaudioside A4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду А с образованием ребаудиозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside A to form rebaudioside C. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду А с образованием ребаудиозида С4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside A to form rebaudioside C4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду А с образованием ребаудиозида C5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside A to form rebaudioside C5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к дулькозиду А с образованием ребаудиозида C6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to dulcoside A to form rebaudioside C6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиозиду G с образованием ребаудиозида C. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to stevioside G to form rebaudioside C. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду G с образованием ребаудиозида А4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside G to form rebaudioside A4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду G с образованием ребаудиозида E4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside G to form rebaudioside E4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду G с образованием ребаудиозида E6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside G to form rebaudioside E6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиозиду H с образованием ребаудиозида С4. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to stevioside H to form rebaudioside C4. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду H с образованием ребаудиозида А4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside H to form rebaudioside A4. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду H с образованием ребаудиозида E5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside H to form rebaudioside E5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду H с образованием ребаудиозида E7. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside H to form rebaudioside E7. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиозиду А с образованием ребаудиозида C5. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to stevioside A to form rebaudioside C5. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду А с образованием ребаудиозида E4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside A to form rebaudioside E4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду А с образованием ребаудиозида E5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside A to form rebaudioside E5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду А с образованием ребаудиозида E3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside A to form rebaudioside E3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к стевиозиду B с образованием ребаудиозида C6. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to stevioside B to form rebaudioside C6. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду B с образованием ребаудиозида E6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside B to form rebaudioside E6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду B с образованием ребаудиозида E7. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside B to form rebaudioside E7. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду B с образованием ребаудиозида E3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside B to form rebaudioside E3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В одном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к стевиозиду С с образованием ребаудиозида E3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT85C2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2, или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT85C2.In one embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to stevioside C to form rebaudioside E3. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT85C2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2, or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT85C2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C3 с образованием ребаудиозида H2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT74G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT74G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C3 to form rebaudioside H2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT74G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT74G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C с образованием ребаудиозида H2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C to form rebaudioside H2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C с образованием ребаудиозида K. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C to form rebaudioside K. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C с образованием ребаудиозида H4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C to form rebaudioside H4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C4 с образованием ребаудиозида H2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C4 to form rebaudioside H2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C4 с образованием ребаудиозида H3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C4 to form rebaudioside H3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду С4 с образованием ребаудиозида H5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C4 to form rebaudioside H5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду А4 с образованием ребаудиозида H2. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside A4 to form rebaudioside H2. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду А4 с образованием ребаудиозида D5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside A4 to form rebaudioside D5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду А4 с образованием ребаудиозида D6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside A4 to form rebaudioside D6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C5 с образованием ребаудиозида K. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C5 to form rebaudioside K. In a particular embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C5 с образованием ребаудиозида H3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C5 to form rebaudioside H3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C5 с образованием ребаудиозида H6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C5 to form rebaudioside H6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду E4 с образованием ребаудиозида K. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside E4 to form rebaudioside K. In a particular embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E4 с образованием ребаудиозида D5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E4 to form rebaudioside D5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E4 с образованием ребаудиозида D7. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E4 to form rebaudioside D7. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду E5 с образованием ребаудиозида H3. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside E5 to form rebaudioside H3. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E5 с образованием ребаудиозида D5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E5 to form rebaudioside D5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E5 с образованием ребаудиозида D8. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E5 to form rebaudioside D8. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C6 с образованием ребаудиозида H4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C6 to form rebaudioside H4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C6 с образованием ребаудиозида H5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C6 to form rebaudioside H5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду C6 с образованием ребаудиозида H6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside C6 to form rebaudioside H6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду E6 с образованием ребаудиозида H4. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside E6 to form rebaudioside H4. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E6 с образованием ребаудиозида D6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E6 to form rebaudioside D6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E6 с образованием ребаудиозида D7. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E6 to form rebaudioside D7. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду E7 с образованием ребаудиозида H5. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside E7 to form rebaudioside H5. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E7 с образованием ребаудиозида D6. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E7 to form rebaudioside D6. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E7 с образованием ребаудиозида D8. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E7 to form rebaudioside D8. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду E3 с образованием ребаудиозида H6. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside E3 to form rebaudioside H6. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E3 с образованием ребаудиозида D7. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E3 to form rebaudioside D7. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду E3 с образованием ребаудиозида D8. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside E3 to form rebaudioside D8. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H2 с образованием ребаудиозида N3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H2 to form rebaudioside N3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H2 с образованием ребаудиозида N4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H2 to form rebaudioside N4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду K с образованием ребаудиозида N3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside K to form rebaudioside N3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду K с образованием ребаудиозида N2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside K to form rebaudioside N2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H3 с образованием ребаудиозида N3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H3 to form rebaudioside N3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H3 с образованием ребаудиозида N5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H3 to form rebaudioside N5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду D5 с образованием ребаудиозида N3. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside D5 to form rebaudioside N3. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду D5 с образованием ребаудиозида M3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside D5 to form rebaudioside M3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H4 с образованием ребаудиозида N4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H4 to form rebaudioside N4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H4 с образованием ребаудиозида N2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H4 to form rebaudioside N2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H5 с образованием ребаудиозида N4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H5 to form rebaudioside N4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H5 с образованием ребаудиозида N5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H5 to form rebaudioside N5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду D6 с образованием ребаудиозида N4. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside D6 to form rebaudioside N4. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду D6 с образованием ребаудиозида M3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside D6 to form rebaudioside M3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H6 с образованием ребаудиозида N2. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H6 to form rebaudioside N2. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду H6 с образованием ребаудиозида N5. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside H6 to form rebaudioside N5. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду D7 с образованием ребаудиозида N2. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside D7 to form rebaudioside N2. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду D7 с образованием ребаудиозида M3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside D7 to form rebaudioside M3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду D8 с образованием ребаудиозида N5. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside D8 to form rebaudioside N5. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду D8 с образованием ребаудиозида M3. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside D8 to form rebaudioside M3. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду N3 с образованием ребаудиозида O4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside N3 to form rebaudioside O4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду N4 с образованием ребаудиозида O4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside N4 to form rebaudioside O4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду N2 с образованием ребаудиозида O4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGTSl2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGTSl2. В другом конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой EUGT11 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с EUGT11. В еще одном конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT91D2 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT91D2.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside N2 to form rebaudioside O4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGTS12 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGTS12. In another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is EUGT11 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with EUGT11. In yet another specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT91D2 or a UGT having >85% amino acid sequence identity with UGT91D2.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой любую UDP-глюкозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к ребаудиозиду N5 с образованием ребаудиозида K4. В конкретном варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза представляет собой UGT76G1 или UGT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT76G1.In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase is any UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to rebaudioside N5 to form rebaudioside K4. In a specific embodiment, the UDP-glucosyltransferase is UGT76G1 or a UGT having >85% amino acid sequence identity to UGT76G1.

В другом варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой любую UDP-гликозилтрансферазу, способную добавлять по меньшей мере одно звено рамнозы к ребаудиозиду M3 с образованием ребаудиозида O4. В конкретном варианте осуществления UDP-гликозилтрансфераза представляет собой UGlyT91C1 или UGlyT, имеющую >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGlyT91C1.In another embodiment, the UDP-glycosyltransferase is any UDP-glycosyltransferase capable of adding at least one rhamnose unit to rebaudioside M3 to form rebaudioside O4. In a specific embodiment, the UDP-glycosyltransferase is UGlyT91C1 or UGlyT having >85% amino acid sequence identity to UGlyT91C1.

Способ настоящего изобретения необязательно включает рециркуляцию UDP с получением UDP-глюкозы. В одном варианте осуществления способ включает рециркуляцию UDP путем обеспечения катализатора рециркуляции и субстрата рециркуляции, так что биотрансфомация стевиола и/или субстрата стевиолгликозида в целевой стевиолгликозид осуществляется с использованием каталитических количеств UDP-глюкозилтрансферазы и UDP-глюкозы.The method of the present invention optionally includes recycling UDP to produce UDP-glucose. In one embodiment, the method includes recycling UDP by providing a recycling catalyst and a recycling substrate, such that the biotransformation of steviol and/or the steviol glycoside substrate into the target steviol glycoside is accomplished using catalytic amounts of UDP-glucosyltransferase and UDP-glucose.

Способ настоящего изобретения необязательно включает рециркуляцию UDP с получением UDP-рамнозы. В одном варианте осуществления способ включает в себя рециркуляцию UDP путем обеспечения катализатора рециркуляции и субстрата рециркуляции, так что биотрансформация стевиола и/или субстрата стевиолгликозида в целевой стевиолгликозид осуществляется с использованием каталитических количеств UDP-гликозилтрансферазы и UDP-рамнозы.The method of the present invention optionally includes recycling UDP to produce UDP-rhamnose. In one embodiment, the method includes recycling UDP by providing a recycling catalyst and a recycling substrate, such that the biotransformation of steviol and/or the steviol glycoside substrate into the target steviol glycoside is accomplished using catalytic amounts of UDP-glycosyltransferase and UDP-rhamnose.

В одном варианте осуществления катализатором рециркуляции является сахаросинтаза SuSy_At или сахаросинтаза с >85% идентичности аминокислотной последовательности с SuSy_At.In one embodiment, the recycling catalyst is saccharo synthase SuSy_At or saccharo synthase with >85% amino acid sequence identity to SuSy_At.

В одном варианте осуществления субстратом рециркуляции для катализатора рециркуляции UDP-глюкозы является сахароза.In one embodiment, the recycling substrate for the UDP-glucose recycling catalyst is sucrose.

В одном варианте осуществления субстратом рециркуляции для катализатора рециркуляции UDP-рамнозы является молекула, содержащая остаток рамнозила.In one embodiment, the recycling substrate for the UDP-rhamnose recycling catalyst is a molecule containing a rhamnosyl residue.

Способ настоящего изобретения необязательно включает применение трансгликозидаз, в которых в качестве донора сахара используют олиго-или полисахариды для модификации реципиентных молекул целевого стевиолгликозида. Не имеющие ограничительного характера примеры включают циклодекстрин гликозилтрансферазу (CGTase), фруктофуранозидазу, амилазу, сахаридаза, глюкосахаразу, бета-h-фруктозидазу, бета-фруктозидазу, сахаразу, фруктозилинвертазу, щелочную инвертазу, кислотную инвертазу, фруктофуранозидазу. В некоторых вариантах осуществления глюкоза и сахар(-а), отличный(-ые) от глюкозы, включая, без ограничений, фруктозу, ксилозу, рамнозу, арабинозу, дезоксиглюкозу, галактозу, переносятся в реципиентные целевые стевиолгликозиды. В одном варианте осуществления реципиентный стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N2. В другом варианте осуществления реципиентный стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид O4.The method of the present invention optionally includes the use of transglycosidases that use oligo- or polysaccharides as a sugar donor to modify recipient molecules of the target steviol glycoside. Non-limiting examples include cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase), fructofuranosidase, amylase, saccharidase, glucosucrose, beta-h-fructosidase, beta-fructosidase, sucrase, fructosylinvertase, alkaline invertase, acid invertase, fructofuranosidase. In some embodiments, glucose and sugar(s) other than glucose, including, but not limited to, fructose, xylose, rhamnose, arabinose, deoxyglucose, galactose, are transferred to the recipient target steviol glycosides. In one embodiment, the recipient steviol glycoside is rebaudioside N2. In another embodiment, the recipient steviol glycoside is rebaudioside O4.

Способ настоящего изобретения необязательно включает отделение целевого стевиолгликозида от среды с получением композиции высокоочищенного целевого стевиолгликозида. Целевой стевиолгликозид можно отделить по меньшей мере одним подходящим способом, таким как, например, кристаллизация, мембранное разделение, центрифугирование, экстракция, хроматографическое разделение или комбинация таких способов.The method of the present invention optionally includes separating the target steviol glycoside from the medium to obtain a highly purified target steviol glycoside composition. The target steviol glycoside can be separated by at least one suitable method, such as, for example, crystallization, membrane separation, centrifugation, extraction, chromatographic separation, or a combination of such methods.

В одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид может быть получен внутри микроорганизма. В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид может быть секретирован в среде. В одном другом варианте осуществления высвобожденный стевиолгликозид можно непрерывно удалять из среды. В еще одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид отделяют после завершения реакции конверсии.In one embodiment, the target steviol glycoside can be produced within the microorganism. In another embodiment, the target steviol glycoside can be secreted into the medium. In another embodiment, the released steviol glycoside can be continuously removed from the medium. In yet another embodiment, the target steviol glycoside is isolated after completion of the conversion reaction.

В одном варианте осуществления при разделении получают композицию, содержащую целевой стевиолгликозид в количестве, превышающем приблизительно 80% по массе в пересчете на безводное вещество, т. е. композицию высокоочищенного стевиолгликозида. В другом варианте осуществления при разделении получают композицию, содержащую целевой стевиолгликозид в количестве, превышающем приблизительно 90% по массе. В конкретных вариантах осуществления композиция содержит целевой стевиолгликозид в количестве, превышающем приблизительно 95% по массе. В других вариантах осуществления композиция содержит целевой стевиолгликозид в количестве, превышающем приблизительно 99% по массе.In one embodiment, the separation produces a composition comprising the target steviol glycoside in an amount greater than about 80% by weight on an anhydrous basis, i.e., a highly purified steviol glycoside composition. In another embodiment, the separation produces a composition comprising the target steviol glycoside in an amount greater than about 90% by weight. In particular embodiments, the composition comprises the target steviol glycoside in an amount greater than about 95% by weight. In other embodiments, the composition comprises the target steviol glycoside in an amount greater than about 99% by weight.

Целевой стевиолгликозид может находиться в любой полиморфной или аморфной форме, включая гидраты, сольваты, безводные формы или комбинации вышеуказанного.The target steviol glycoside may be in any polymorphic or amorphous form, including hydrates, solvates, anhydrous forms, or combinations thereof.

Очищенные целевые стевиолгликозиды могут быть использованы в потребительских продуктах в качестве подсластителя, модификатора вкусоароматических свойств, ароматизатора с модифицирующими свойствами и/или подавителя пенообразования. Приемлемые потребительские продукты включают, без ограничений, продукты питания, напитки, фармацевтические композиции, табачные продукты, нутрицевтические композиции, композиции для гигиены полости рта и косметические композиции.Purified target steviol glycosides can be used in consumer products as a sweetener, flavor modifier, flavoring agent with modifying properties, and/or foam suppressant. Suitable consumer products include, but are not limited to, foods, beverages, pharmaceutical compositions, tobacco products, nutraceutical compositions, oral hygiene compositions, and cosmetic compositions.

Вышеизложенное дает довольно общее описание признаков и технических преимуществ настоящего изобретения, чтобы можно было лучше понять приведенное ниже подробное описание изобретения. Далее в настоящем документе будут описаны дополнительные признаки и преимущества изобретения, которые составляют предмет формулы изобретения. Специалисты в данной области должны понимать, что описанные концепция и конкретный вариант осуществления могут быть легко использованы в качестве основы для модификации или разработки других структур для осуществления целей, аналогичных заявленным в настоящем изобретении. Кроме того, специалисты в данной области должны понимать, что такие эквивалентные конструкции не выходят за рамки сущности и объема изобретения, указанные в прилагаемой формуле изобретения. Новые признаки, которые считаются характерными для настоящего изобретения как с точки зрения его организации, так и способа эксплуатации, а также дополнительные цели и преимущества станут более понятными из представленного ниже описания при рассмотрении в связке с прилагаемыми рисунками. Однако следует четко понимать, что каждый рисунок приведен только в целях иллюстрации и описания и не предназначен для определения объема настоящего изобретения.The foregoing provides a rather general description of the features and technical advantages of the present invention, so that the detailed description of the invention provided below can be better understood. Further features and advantages of the invention will be described hereinafter, which form the subject of the claims. Those skilled in the art will understand that the described concept and specific embodiment can easily be used as a basis for modifying or developing other structures to achieve objectives similar to those claimed in the present invention. Furthermore, those skilled in the art will understand that such equivalent structures do not depart from the spirit and scope of the invention, as set forth in the appended claims. Novel features that are considered characteristic of the present invention, both in terms of its organization and method of operation, as well as additional objectives and advantages, will become more apparent from the description presented below when considered in conjunction with the accompanying drawings. However, it should be clearly understood that each drawing is provided for illustrative and descriptive purposes only and is not intended to define the scope of the present invention.

Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials

На фиг. 1a и 1b показана химическая структура ребаудиозида N2. На фиг. 1c и 1d показана химическая структура ребаудиозида O4. На фиг. 1e показана химическая структура стевиолгликозида со структурой агликона.Figures 1a and 1b show the chemical structure of rebaudioside N2. Figures 1c and 1d show the chemical structure of rebaudioside O4. Figure 1e shows the chemical structure of steviol glycoside with the aglycone structure.

На фиг. 2а - 2l показаны пути получения ребаудиозида N2, ребаудиозида O4 и различных стевиолгликозидов из стевиола и различных промежуточных стевиолгликозидов.Figures 2a - 2l show the routes to rebaudioside N2, rebaudioside O4, and various steviol glycosides from steviol and various steviol glycoside intermediates.

На фиг. 3а показано биокаталитическое получение ребаудиозида N2 из ребаудиозида C с использованием ферментов UGTSl2 и UGT76G1 и сопутствующей рециркуляции UDP в UDP-глюкозу посредством сахаросинтазы SuSy_At. На фиг. 3b показано биокаталитическое получение ребаудиозида O4 из ребаудиозида C с использованием ферментов UGTSl2 и UGT76G1 и сопутствующей рециркуляции UDP в UDP-глюкозу посредством сахаросинтазы SuSy_At.Figure 3a shows the biocatalytic production of rebaudioside N2 from rebaudioside C using the enzymes UGTSl2 and UGT76G1 and concomitant recycling of UDP to UDP-glucose via the saccharo synthase SuSy_At. Figure 3b shows the biocatalytic production of rebaudioside O4 from rebaudioside C using the enzymes UGTSl2 and UGT76G1 and concomitant recycling of UDP to UDP-glucose via the saccharo synthase SuSy_At.

На фиг. 4 показана хроматограмма ВЭЖХ ребаудиозида C. Пик со временем удерживания 24,535 минуты соответствует ребаудиозиду C.Figure 4 shows the HPLC chromatogram of rebaudioside C. The peak with a retention time of 24.535 minutes corresponds to rebaudioside C.

На фиг. 5 показана хроматограмма ВЭЖХ продукта биокаталитического получения ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 из ребаудиозида C. Пики со временем удерживания 11,317 минуты и 8,603 минуты соответствуют ребаудиозиду N2 и ребаудиозиду O4 соответственно. Пик на 12,567 минуты соответствует ребаудиозиду K.Figure 5 shows an HPLC chromatogram of the product of the biocatalytic preparation of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 from rebaudioside C. Peaks with retention times of 11.317 minutes and 8.603 minutes correspond to rebaudioside N2 and rebaudioside O4, respectively. The peak at 12.567 minutes corresponds to rebaudioside K.

На фиг. 6а показана хроматограмма ВЭЖХ ребаудиозида N2 после очистки посредством ВЭЖХ. Пик со временем удерживания 10,745 минуты соответствует ребаудиозиду N2. На фиг. 6b показана хроматограмма ВЭЖХ ребаудиозида O4 после очистки посредством ВЭЖХ. Пик со временем удерживания 8,185 минуты соответствует ребаудиозиду O4.Figure 6a shows the HPLC chromatogram of rebaudioside N2 after HPLC purification. The peak with a retention time of 10.745 minutes corresponds to rebaudioside N2. Figure 6b shows the HPLC chromatogram of rebaudioside O4 after HPLC purification. The peak with a retention time of 8.185 minutes corresponds to rebaudioside O4.

На фиг. 7а и 7b показаны спектры 1H ЯМР ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 (500 МГц, пиридин-d5) соответственно.Figures 7a and 7b show the 1H NMR spectra of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 (500 MHz, pyridine-d5), respectively.

На фиг. 8а и 8b показаны спектры HSQC ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 (500 МГц, пиридин-d5) соответственно.Figures 8a and 8b show the HSQC spectra of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 (500 MHz, pyridine-d5), respectively.

На фиг. 9а и 9b показаны спектры H,H COSY ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 (500 МГц, пиридин-d5) соответственно.Figures 9a and 9b show the H,H COSY spectra of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 (500 MHz, pyridine-d5), respectively.

На фиг. 10а и 10b показаны спектры HMBC ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 (500 МГц, пиридин-d5) соответственно.Figures 10a and 10b show the HMBC spectra of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 (500 MHz, pyridine-d5), respectively.

На фиг. 11а и 11b показаны спектры HSQC-TOCSY ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 (500 МГц, пиридин-d5) соответственно.Figures 11a and 11b show the HSQC-TOCSY spectra of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 (500 MHz, pyridine-d5), respectively.

На фиг. 12а и 12b показаны жидкостная хроматография и масс-спектрометрия ребаудиозида N2 соответственно.Fig. 12a and 12b show the liquid chromatography and mass spectrometry of rebaudioside N2, respectively.

На фиг. 13а и 13b показаны жидкостная хроматография и масс-спектрометрия ребаудиозида O4 соответственно.Fig. 13a and 13b show the liquid chromatography and mass spectrometry of rebaudioside O4, respectively.

Подробное описаниеDetailed description

Одна из целей изобретения заключается в обеспечении эффективного биокаталитического способа получения целевых стевиолгликозидов, в частности стевиолмонозида, стевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида M3, ребаудиозида O4 или синтетического стевиолгликозида из различных исходных композиций.One of the aims of the invention is to provide an effective biocatalytic method for producing target steviol glycosides, in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 or synthetic steviol glycoside from different starting compositions.

Используемый в настоящем документе термин «реб.» относится к «ребаудиозиду». Оба термина имеют одинаковое значение и могут использоваться взаимозаменяемо.As used in this document, the term "reb." refers to "rebaudioside." Both terms have the same meaning and may be used interchangeably.

Используемые в настоящем документе термины «биокатализ» или «биокаталитический» относятся к применению природных или генно-инженерных биокатализаторов, таких как ферменты, или клеток, содержащих один или более ферментов, способных к одноэтапной или многоэтапной химической трансформации органических соединений. Способы биокатализа включают в себя процессы ферментации, биосинтеза, биоконверсии и биотрансформации. В данной области известны как метод выделенного фермента, так и метод цельноклеточного биокатализа. Ферментами биокатализаторами могут быть природные или рекомбинантные белки.As used herein, the terms "biocatalysis" or "biocatalytic" refer to the use of natural or genetically engineered biocatalysts, such as enzymes or cells containing one or more enzymes, capable of single- or multi-step chemical transformation of organic compounds. Biocatalytic methods include fermentation, biosynthesis, bioconversion, and biotransformation processes. Both isolated enzyme and whole-cell biocatalysis are known in the art. Enzyme biocatalysts can be natural or recombinant proteins.

Используемый в настоящем документе термин «стевиолгликогликозид(-ы)» относится к гликозиду стевиола, включая, без ограничений, стевиолгликозиды природного происхождения, например стевиолмонозид, стевиолмонозид А, стевиолбиозид А, стевиолбиозид В, стевиолбиозид С, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3, ребаудиозид O4 синтетические стевиолгликозиды, например ферментативно глюкозилированные стевиолгликозиды, и комбинации вышеуказанного.As used herein, the term "steviol glycoglycoside(s)" refers to a steviol glycoside, including, but not limited to, naturally occurring steviol glycosides such as steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 synthetic steviol glycosides, such as enzymatically glucosylated steviol glycosides, and combinations thereof.

Исходная композицияOriginal composition

Используемый в настоящем документе термин «исходная композиция» относится к любой композиции (в основном к водному раствору), включающей одно или более органических соединений, содержащих по меньшей мере один атом углерода.As used herein, the term "parent composition" refers to any composition (generally an aqueous solution) comprising one or more organic compounds containing at least one carbon atom.

В одном варианте осуществления исходную композицию выбирают из группы, состоящей из стевиола, стевиолгликозидов, полиолов и различных углеводов.In one embodiment, the starting composition is selected from the group consisting of steviol, steviol glycosides, polyols and various carbohydrates.

Исходная композиция стевиолгликозида выбрана из группы, состоящей из стевиолмонозида, стевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида M3 или другого гликозида стевиола, встречающегося в растении Stevia rebaudiana, синтетических стевиолгликозидов, например ферментативно глюкозилированных стевиолгликозидов, и комбинаций вышеуказанного.The starting composition of steviol glycoside is selected from the group consisting of steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 or another steviol glycoside occurring in the Stevia rebaudiana plant, synthetic steviol glycosides, such as enzymatically glucosylated steviol glycosides, and combinations thereof.

В одном варианте осуществления исходная композиция представляет собой стевиол.In one embodiment, the starting composition is steviol.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиолмонозид.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is steviol monoside.

В еще одном варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиолмонозид A.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is steviol monoside A.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиолбиозид B.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is steviolbioside B.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиолбиозид C.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is steviolbioside C.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиолбиозид D.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is steviolbioside D.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиолбиозид E.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is steviolbioside E.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой рубузозид.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rubusoside.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой дулькозид A.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is dulcoside A.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой дулькозид C.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is C dulcoside.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой дулькозид D.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is dulcoside D.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиозид A.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is stevioside A.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиозид B.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is stevioside B.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиозид C.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is stevioside C.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиозид G.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is stevioside G.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой стевиозид H.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is stevioside H.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид B2.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside B2.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид А4.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside A4.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид C.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside C.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид C3.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside C3.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид С4.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside C4.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид C5.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside C5.

В другом варианте осуществления начальная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид C6.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is C6 rebaudioside.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид E3.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside E3.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид E4.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside E4.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид E5.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside E5.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид E6.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside E6.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид E7.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside E7.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид D5.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside D5.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид D6.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside D6.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид D7.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside D7.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид D8.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside D8.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид H2.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside H2.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид H3.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside H3.

В другом варианте осуществления начальная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид H4.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside H4.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид H5.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside H5.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид H6.In another embodiment, the steviol glycoside starting composition is rebaudioside H6.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид K.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside K.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид N2.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside N2.

В другом варианте осуществления начальная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид N3.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside N3.

В другом варианте осуществления исходная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид N4.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside N4.

В другом варианте осуществления начальная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид N5.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside N5.

В другом варианте осуществления начальная композиция стевиолгликозида представляет собой ребаудиозид M3.In another embodiment, the starting steviol glycoside composition is rebaudioside M3.

Термин «полиол» относится к молекуле, которая содержит более одной гидроксильной группы. Полиол может представлять собой диол, триол или тетраол, содержащий 2, 3 и 4 гидроксильные группы соответственно. Полиол также может содержать более четырех гидроксильных групп, например, пентаол, гексаол, гептаол и т. п., которые содержат 5, 6 или 7 гидроксильных групп соответственно. Кроме того, полиол также может представлять собой сахарный спирт, многоатомный спирт или полиспирт, который является восстановленной формой углевода, причем карбонильная группа (альдегид или кетон, восстанавливающий сахар) восстановлена до первичной или вторичной гидроксильной группы. Примеры полиолов включают, без ограничений, эритрит, мальтит, маннит, сорбит, лактит, ксилит, инозит, изомальт, пропиленгликоль, глицерин, треит, галактит, гидрогенизированную изомальтулозу, восстановленные изомальтоолигосахариды, восстановленные ксилоолигосахариды, восстановленые гентиоолигосахариды, восстановленный мальтозный сироп, восстановленный глюкозный сироп, гидрогенизированные гидролизаты крахмала, полиглицитолы и сахарные спирты или любые другие углеводы, способные к восстановлению.The term "polyol" refers to a molecule containing more than one hydroxyl group. A polyol can be a diol, triol, or tetraol, containing 2, 3, or 4 hydroxyl groups, respectively. A polyol can also contain more than four hydroxyl groups, such as pentaol, hexaol, heptaol, and the like, which contain 5, 6, or 7 hydroxyl groups, respectively. Additionally, a polyol can also be a sugar alcohol, a polyhydric alcohol, or a polyalcohol, which is a reduced form of a carbohydrate in which the carbonyl group (an aldehyde or ketone, a reducing sugar) is reduced to a primary or secondary hydroxyl group. Examples of polyols include, but are not limited to, erythritol, maltitol, mannitol, sorbitol, lactitol, xylitol, inositol, isomalt, propylene glycol, glycerol, threitol, galactitol, hydrogenated isomaltulose, reduced isomaltooligosaccharides, reduced xylooligosaccharides, reduced gentiooligosaccharides, reduced maltose syrup, reduced glucose syrup, hydrogenated starch hydrolysates, polyglycitols and sugar alcohols or any other carbohydrates capable of being reduced.

Термин «углевод» относится к альдегидным или кетоновым соединениям с замещениями несколькими гидроксильными группами и общей формулой (CH₂O)_n, где n равно 3-30, а также к их олигомерам и полимерам. Углеводы, описанные в настоящем изобретении, дополнительно могут быть замещены или деоксигенизированы в одном или более положениях. Углеводы, упоминаемые в настоящем документе, охватывают немодифицированные углеводы, производные углеводов, замещенные углеводы и модифицированные углеводы. Используемые в настоящем документе фразы «производные углеводов», «замещенные углеводы» и «модифицированные углеводы» являются синонимами. Модифицированный углевод означает любой углевод, в котором, по меньшей мере, один атом был добавлен, удален или замещен, а также комбинации вышеуказанного. Таким образом, производные углеводов или замещенные углеводы включают замещенные и незамещенные моносахариды, дисахариды, олигосахариды и полисахариды. Производные углеводов или замещенные углеводы необязательно могут быть очищены от кислорода в любом соответствующем С-положении и/или замещены одним или более фрагментами, такими как водород, галоген, галогеналкил, карбоксил, ацил, ацилокси, амино, амидо, производные карбоксила, алкиламино, диалкиламино, ариламино, алкокси, арилокси, нитро, циано, сульфо, меркапто, имино, сульфонил, сульфенил, сульфинил, сульфамоил, карбоалкокси, карбоксамидо, фосфонил, фосфинил, фосфорил, фосфино, тиоэфир, оксимино, гидразино, карбамил, фосфо, фосфонато или любой другой жизнеспособной функциональной группой при условии, что производные углеводов или замещенные углеводы служат для улучшения сладкого вкуса композиции подсластителя.The term "carbohydrate" refers to aldehyde or ketone compounds with multiple hydroxyl substitutions and the general formula (CH ₂ O) _n , where n is 3-30, as well as oligomers and polymers thereof. The carbohydrates described in the present invention may further be substituted or deoxygenated at one or more positions. Carbohydrates referred to herein include unmodified carbohydrates, carbohydrate derivatives, substituted carbohydrates, and modified carbohydrates. The phrases "carbohydrate derivatives,""substitutedcarbohydrates," and "modified carbohydrates" as used herein are synonymous. A modified carbohydrate means any carbohydrate in which at least one atom has been added, removed, or substituted, as well as combinations of the foregoing. Thus, carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates include substituted and unsubstituted monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, and polysaccharides. The carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates may optionally be purified from oxygen at any corresponding C-position and/or substituted with one or more moieties such as hydrogen, halogen, haloalkyl, carboxyl, acyl, acyloxy, amino, amido, carboxyl derivatives, alkylamino, dialkylamino, arylamino, alkoxy, aryloxy, nitro, cyano, sulfo, mercapto, imino, sulfonyl, sulfenyl, sulfinyl, sulfamoyl, carboalkoxy, carboxamido, phosphonyl, phosphinyl, phosphoryl, phosphino, thioether, oximino, hydrazino, carbamyl, phospho, phosphonato or any other viable functional group, provided that the carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates serve to improve the sweet taste of the sweetener composition.

Примеры углеводов, которые можно использовать в соответствии с настоящим изобретением, включают, без ограничений, тагатозу, трегалозу, галактозу, рамнозу, различные циклодекстрины, циклические олигосахариды, различные типы мальтодекстринов, декстран, сахарозу, глюкозу, рибулозу, фруктозу, треозу, арабинозу, ксилозу, ликсозу, аллозу, алтрозу, маннозу, идозу, лактозу, мальтозу, инвертный сахар, изотрегалозу, неотрегалозу, изомальтулозу, эритрозу, дезоксирибозу, гулозу, идозу, талозу, эритрулозу, ксилулозу, псикозу, туранозу, целлобиозу, амилопектин, глюкозамин, маннозамин, фукозу, глюкуроновую кислоту, глюконовую кислоту, глюконо-лактон, абеквозу, галактозамин, свекловичные олигосахариды, изомальтоолигосахариды (изомальтозу, изомальтотриозу, панозу и т.п.), ксилоолигосахариды (ксилотриозу, ксилобиозу и т.п.), олигосахариды с концевой ксилозой, гентиоолигосахариды (гентиобиозу, гентитриозу, гентиотетраозу и т.п.), сорбозу, нигероолигосахариды, палатинозные олигосахариды, фруктоолигосахариды (кестозу, нистозу и т.п.); мальтотетраол, мальтотриол, мальтоолигосахариды (мальтотриозу, мальтотетраозу, мальтопентаозу, мальтогексаозу, мальтогептаозу и т.п.), крахмал, инулин, инулоолигосахариды, лактулозу, мелибиозу, рафинозу, рибозу, изомеризованные жидкие сахара, такие как кукурузные сиропы с высоким содержанием фруктозы, связывающие сахара и соевые олигосахариды. Кроме того, углеводы, упоминаемые в настоящем документе, могут находиться в D- или L-конфигурации.Examples of carbohydrates that can be used in accordance with the present invention include, but are not limited to, tagatose, trehalose, galactose, rhamnose, various cyclodextrins, cyclic oligosaccharides, various types of maltodextrins, dextran, sucrose, glucose, ribulose, fructose, threose, arabinose, xylose, lyxose, allose, altrose, mannose, idose, lactose, maltose, invert sugar, isotrehalose, neotrehalose, isomaltulose, erythrose, deoxyribose, gulose, idose, talose, erythrulose, xylulose, psicose, turanose, cellobiose, amylopectin, glucosamine, mannosamine, fucose, glucuronic acid, gluconic acid, gluconolactone, abequose, galactosamine, beet oligosaccharides, isomaltooligosaccharides (isomaltose, isomaltotriose, panose, etc.), xylooligosaccharides (xylotriose, xylobiose, etc.), oligosaccharides with terminal xylose, gentiooligosaccharides (gentiobiose, gentiotriose, gentiotetraose, etc.), sorbose, nigero-oligosaccharides, palatinose oligosaccharides, fructooligosaccharides (kestose, nystose, etc.); maltotetraol, maltotriol, maltooligosaccharides (maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, maltoheptaose, etc.), starch, inulin, inulooligosaccharides, lactulose, melibiose, raffinose, ribose, isomerized liquid sugars such as high fructose corn syrups, sugar linkers, and soy oligosaccharides. In addition, the carbohydrates referred to herein may be in the D- or L-configuration.

Исходная композиция может быть синтетической или очищенной (частично или полностью), коммерчески доступной или подготовленной.The starting composition may be synthetic or purified (partially or completely), commercially available or prepared.

В одном варианте осуществления исходная композиция представляет собой глицерин.In one embodiment, the starting composition is glycerin.

В другом варианте осуществления исходная композиция представляет собой глюкозу.In another embodiment, the starting composition is glucose.

В другом варианте осуществления исходная композиция представляет собой рамнозу.In another embodiment, the starting composition is rhamnose.

В еще одном варианте осуществления исходная композиция представляет собой сахарозу.In another embodiment, the starting composition is sucrose.

В еще одном варианте осуществления исходная композиция представляет собой крахмал.In another embodiment, the starting composition is a starch.

В другом варианте осуществления исходная композиция представляет собой мальтодекстрин.In another embodiment, the starting composition is maltodextrin.

В еще одном варианте осуществления исходная композиция представляет собой целлюлозу.In another embodiment, the starting composition is cellulose.

В еще одном варианте осуществления исходная композиция представляет собой амилозу.In another embodiment, the starting composition is amylose.

Органическое(-ие) соединение(-я) исходной композиции служит(-ат) субстратом(-ами) для получения целевого(-ых) стевиолгликозида(-ов), как описано в настоящем документе.The organic compound(s) of the starting composition serve as substrate(s) for the production of the target steviol glycoside(s), as described herein.

Целевой стевиолгликозидTarget steviol glycoside

Целевой стевиолгликозид, описанные в настоящем способе, может представлять собой любой стевиолгликозид, который может быть получен способом, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид выбран из группы, состоящей из стевиолмонозида, стевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида M3, ребаудиозида O4 или другого гликозида стевиола, встречающегося в растении Stevia rebaudiana, синтетических стевиолгликозидов, например ферментативно глюкозилированных стевиолгликозидов, и комбинаций вышеуказанногоThe target steviol glycoside described in the present method may be any steviol glycoside that can be obtained by the method described herein. In one embodiment, the target steviol glycoside is selected from the group consisting of steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 or another steviol glycoside occurring in the plant Stevia rebaudiana, synthetic steviol glycosides, such as enzymatically glucosylated steviol glycosides, and combinations of the foregoing

В одном варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолмонозид.In one embodiment, the target steviol glycoside is steviol monoside.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолмонозид A.In another embodiment, the target steviol glycoside is steviol monoside A.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолбиозид A.In another embodiment, the target steviol glycoside is steviolbioside A.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолбиозид B.In another embodiment, the target steviol glycoside is steviolbioside B.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолбиозид C,In another embodiment, the target steviol glycoside is steviolbioside C,

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолбиозид D.In another embodiment, the target steviol glycoside is steviolbioside D.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиолбиозид E.In another embodiment, the target steviol glycoside is steviolbioside E.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой рубузозид.In another embodiment, the target steviol glycoside is rubusoside.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой дулькозид A.In another embodiment, the target steviol glycoside is dulcoside A.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой дулькозид C.In another embodiment, the target steviol glycoside is C dulcoside.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой дулькозид D.In another embodiment, the target steviol glycoside is dulcoside D.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиозид A.In another embodiment, the target steviol glycoside is stevioside A.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиозид B.In another embodiment, the target steviol glycoside is stevioside B.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиозид C.In another embodiment, the target steviol glycoside is stevioside C.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиозид G.In another embodiment, the target steviol glycoside is stevioside G.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой стевиозид H.In another embodiment, the target steviol glycoside is stevioside H.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид В2.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside B2.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид А4.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside A4.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид C.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside C.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид C3.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside C3.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид С4.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside C4.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид C5.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside C5.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид C6.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside C6.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид E3.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside E3.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид E4.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside E4.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид E5.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside E5.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид E6.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside E6.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид E7.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside E7.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид D5.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside D5.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид D6.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside D6.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид D7.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside D7.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид D8.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside D8.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид H2.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside H2.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид H3.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside H3.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид H4.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside H4.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид H5.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside H5.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид H6.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside H6.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид K.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside K.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N2.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside N2.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N3In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside N3

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N4.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside N4.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N5.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside N5.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид M3.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside M3.

В другом варианте осуществления целевой стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид O4.In another embodiment, the target steviol glycoside is rebaudioside O4.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолмонозида.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviol monoside.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолмонозида A.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviol monoside A.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолбиозида A.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviolbioside A.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолбиозида B.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviolbioside B.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолбиозида C.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviolbioside C.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолбиозида D.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviolbioside D.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиолбиозида E.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of steviolbioside E.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства рубузозида.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rubusoside.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства дулькозида A.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of dulcoside A.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства C.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic method for producing C.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства дулькозида D.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of dulcoside D.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиозида A.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of stevioside A.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиозида B.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of stevioside B.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический српособ для производства стевиозида C.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of stevioside C.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиозида G.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of stevioside G.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства стевиозида H.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of stevioside H.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида В2.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside B2.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида А4.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside A4.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида C.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside C.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида С3.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside C3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида С4.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside C4.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида C5.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside C5.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида C6.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside C6.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида E3.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside E3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида E4.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside E4.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида E5.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside E5.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида E6.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside E6.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида E7.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside E7.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида D5.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside D5.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида D6.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside D6.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида D7.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside D7.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида D8.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside D8.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида H2.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside H2.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида H3.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside H3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида H4.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside H4.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида H5.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside H5.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида H6.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside H6.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида K.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside K.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида N2.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside N2.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида N3In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside N3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида N4.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside N4.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида N5.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside N5.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида M3.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside M3.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение представляет собой биокаталитический способ для производства ребаудиозида O4.In one embodiment, the present invention is a biocatalytic process for the production of rebaudioside O4.

В конкретном варианте осуществления в настоящем изобретении предложен биокаталитический способ для производства ребаудиозида N2 из исходной композиции, содержащей ребаудиозид C и UDP-глюкозу.In a particular embodiment, the present invention provides a biocatalytic process for the production of rebaudioside N2 from a starting composition comprising rebaudioside C and UDP-glucose.

В другом конкретном варианте осуществления в настоящем изобретении предложен биокаталитический способ для производства ребаудиозида O4 из исходной композиции, содержащей ребаудиозид C и UDP-глюкозу.In another specific embodiment, the present invention provides a biocatalytic process for the production of rebaudioside O4 from a starting composition comprising rebaudioside C and UDP-glucose.

Способ настоящего изобретения необязательно включает отделение целевого стевиолгликозида от среды с получением композиции высокоочищенного целевого стевиолгликозида. Целевой стевиолгликозид можно отделить любым подходящим способом, таким как, например, кристаллизация, мембранное разделение, центрифугирование, экстракция, хроматографическое разделение или комбинация таких способов.The method of the present invention optionally includes separating the target steviol glycoside from the medium to obtain a highly purified target steviol glycoside composition. The target steviol glycoside can be separated by any suitable method, such as, for example, crystallization, membrane separation, centrifugation, extraction, chromatographic separation, or a combination of such methods.

В конкретных вариантах осуществления способ, описанный в настоящем документе, приводит к получению композиции высокоочищенного целевого стевиолгликозида. Используемый в настоящем документе термин «высокоочищенный» относится к композиции, содержащей целевой стевиолгликозид в количестве, превышающем приблизительно 80% по массе в пересчете на безводное (сухое) вещество. В одном варианте осуществления композиция высокоочищенного целевого стевиолгликозида содержит целевого стевиолгликозида в количестве, превышающем приблизительно 90% по массе в пересчете на безводное (сухое) вещество, как например, превышающем приблизительно 91%, превышающем приблизительно 92%, превышающем приблизительно 93%, превышающем приблизительно 94%, превышающем приблизительно 95%, превышающем приблизительно 96%, превышающем приблизительно 97%, превышающем приблизительно 98% или превышающем приблизительно 99% содержания целевого стевиолгликозида в пересчете на сухое вещество.In particular embodiments, the method described herein results in the production of a highly purified target steviol glycoside composition. As used herein, the term "highly purified" refers to a composition comprising the target steviol glycoside in an amount greater than about 80% by weight on an anhydrous (dry) basis. In one embodiment, the highly purified target steviol glycoside composition comprises the target steviol glycoside in an amount greater than about 90% by weight on an anhydrous (dry) basis, such as greater than about 91%, greater than about 92%, greater than about 93%, greater than about 94%, greater than about 95%, greater than about 96%, greater than about 97%, greater than about 98%, or greater than about 99% of the target steviol glycoside content on a dry basis.

В одном варианте осуществления, если целевой стевиолгликозид представляет собой реб. N2, способ, описанный в настоящем документе, обеспечивает композицию, имеющую содержание реб. N2 в количестве, превышающем приблизительно 90% по массе в пересчете на сухое вещество. В другом конкретном варианте осуществления, если целевой стевиолгликозид представляет собой реб. N2, способ, описанный в настоящем документе, обеспечивает композицию, имеющую содержание реб. N2 в количестве, превышающем приблизительно 95% по массе в пересчете на сухое вещество.In one embodiment, if the target steviol glycoside is reb. N2, the method described herein provides a composition having a reb. N2 content in an amount greater than about 90% by weight on a dry basis. In another specific embodiment, if the target steviol glycoside is reb. N2, the method described herein provides a composition having a reb. N2 content in an amount greater than about 95% by weight on a dry basis.

В другом варианте осуществления, если целевой стевиолгликозид представляет собой реб. O4, способ, описанный в настоящем документе, обеспечивает композицию, имеющую содержание реб. O4 в количестве, превышающем приблизительно 90% по массе в пересчете на сухое вещество. В другом конкретном варианте осуществления, если целевой стевиолгликозид представляет собой реб. O4, способ, описанный в настоящем документе, обеспечивает композицию, имеющую содержание реб. O4 в количестве, превышающем приблизительно 95% по массе в пересчете на сухое вещество.In another embodiment, if the target steviol glycoside is reb. O4, the method described herein provides a composition having a reb. O4 content in an amount greater than about 90% by weight on a dry basis. In another specific embodiment, if the target steviol glycoside is reb. O4, the method described herein provides a composition having a reb. O4 content in an amount greater than about 95% by weight on a dry basis.

Микроорганизмы и ферментные препаратыMicroorganisms and enzyme preparations

В одном варианте осуществления настоящего изобретения микроорганизм (микробную клетку) и/или ферментный препарат приводят в контакт со средой, содержащей исходную композицию, с получением целевых стевиолгликозидов.In one embodiment of the present invention, the microorganism (microbial cell) and/or enzyme preparation are brought into contact with a medium containing the starting composition to produce the target steviol glycosides.

Фермент может быть в форме цельноклеточной суспензии, сырого лизата, очищенного фермента или комбинации вышеуказанного. В одном варианте осуществления биокатализатор представляет собой очищенный фермент, способный превращать исходную композицию в целевой стевиолгликозид. В другом варианте осуществления биокатализатор представляет собой неочищенный лизат, содержащий по меньшей мере один фермент, способный превращать исходную композицию в целевой стевиолгликозид. В еще одном варианте осуществления биокатализатор представляет собой цельноклеточную суспензию, содержащую по меньшей мере один фермент, способный превращать исходную композицию в целевой стевиолгликозид.The enzyme may be in the form of a whole-cell suspension, a crude lysate, a purified enzyme, or a combination thereof. In one embodiment, the biocatalyst is a purified enzyme capable of converting a starting composition into a target steviol glycoside. In another embodiment, the biocatalyst is a crude lysate containing at least one enzyme capable of converting a starting composition into a target steviol glycoside. In yet another embodiment, the biocatalyst is a whole-cell suspension containing at least one enzyme capable of converting a starting composition into a target steviol glycoside.

В другом варианте осуществления биокатализатор представляет собой одну или более микробных клеток, содержащих фермент(-ы), способный(-ые) превращать исходную композицию в целевой стевиолгликозид. Фермент может быть расположен на поверхности клетки, внутри клетки или может находиться как на поверхности клетки, так и внутри клетки.In another embodiment, the biocatalyst is one or more microbial cells containing an enzyme(s) capable of converting the starting composition into the target steviol glycoside. The enzyme may be located on the cell surface, inside the cell, or both on the cell surface and inside the cell.

Подходящие ферменты для превращения исходной композиции в целевые стевиолгликозиды включают, без ограничений, ферменты биосинтеза стевиола, UDP-глюкозилтрансферазы (UGT) и UDP-гликозилтрансферазы (UGlyT). Необязательно они могут включать фермент(-ы) рецикуляции UDP.Suitable enzymes for converting the starting composition into the target steviol glycosides include, but are not limited to, steviol biosynthetic enzymes, UDP-glucosyltransferase (UGT), and UDP-glycosyltransferase (UGlyT). They may optionally include UDP recycling enzyme(s).

В одном варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола выбраны из группы, включающей в себя геранилгеранилдифосфатсинтазу, копалилдифосфатсинтазу, кауренсинтазу, кауреноксидазу, 13-гидроксилазу кауреновой кислоты (KAH), стевиолсинтетазу, дезоксиксилулозо-5 -фосфатсинтазу (DXS), D-1-дезоксиксилулозо-5-фосфатредуктоизомеразу (DXR), 4-дифосфоцитидил-2-C-метил-D-эритритолсинтазу (CMS), 4-дифосфоцитидил-2-C-метил-D-эритритолкиназу (CMK), 4-дифосфоцитидил-2-C-метил-D-эритритол-2,4- циклодифосфатсинтазу (MCS), l-гидрокси-2-метил-2(E)-бутенил-4-дифосфатсинтазу (HDS), l-гидрокси-2-метил-2(E)-бутенил-4-дифосфатредуктазу (HDR), ацетоацетил-CoA-тиолазу, усеченную HMG-CoA-редуктазу, мевалонаткиназу, фосфомевалонаткиназу, мевалонатпирофосфатдекарбоксилазу, цитохром Р450-редуктазу и т.п.In one embodiment, the steviol biosynthetic enzymes are selected from the group consisting of geranylgeranyl diphosphate synthase, copalyl diphosphate synthase, kaurene synthase, kaurene oxidase, kaurenic acid 13-hydroxylase (KAH), steviol synthetase, deoxyxylulose-5-phosphate synthase (DXS), D-1-deoxyxylulose-5-phosphate reductoisomerase (DXR), 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol synthase (CMS), 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol kinase (CMK), 4-diphosphocytidyl-2-C-methyl-D-erythritol-2,4-cyclodiphosphate synthase (MCS), l-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl-4-diphosphate synthase (HDS), l-hydroxy-2-methyl-2(E)-butenyl-4-diphosphate reductase (HDR), acetoacetyl-CoA thiolase, truncated HMG-CoA reductase, mevalonate kinase, phosphomevalonate kinase, mevalonate pyrophosphate decarboxylase, cytochrome P450 reductase, etc.

В одном варианте осуществления ферменты биосинтеза стевиола, UDP-глюкозилтрансферазы и UDP-гликозилтрансферазы образуются в микробной клетке. Микробная клетка может представлять собой, например, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp. и т.п. В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансферазы синтезируются.In one embodiment, the steviol biosynthetic enzymes, UDP-glucosyltransferase, and UDP-glycosyltransferase are produced in a microbial cell. The microbial cell can be, for example, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp., etc. In another embodiment, the UDP-glucosyltransferases are synthesized.

Способ настоящего изобретения необязательно включает рециркуляцию UDP с получением UDP-глюкозы. В одном варианте осуществления способ включает рециркуляцию UDP путем обеспечения катализатора рециркуляции и субстрата рециркуляции, так что биотрансфомация стевиола и/или субстрата стевиолгликозида в целевой стевиолгликозид осуществляется с использованием каталитических количеств UDP-глюкозилтрансферазы и UDP-глюкозы. Фермент рециркуляции UDP может представлять собой сахаросинтазу SuSy_At или сахаросинтазу с >85% идентичности аминокислотной последовательности с SuSy_At, а рециркуляционным субстратом может быть сахароза.The method of the present invention optionally includes recycling UDP to produce UDP-glucose. In one embodiment, the method includes recycling UDP by providing a recycling catalyst and a recycling substrate, such that the biotransformation of steviol and/or the steviol glycoside substrate into the target steviol glycoside is accomplished using catalytic amounts of UDP-glucosyltransferase and UDP-glucose. The UDP recycling enzyme can be saccharose synthase SuSy_At or a saccharose synthase with >85% amino acid sequence identity to SuSy_At, and the recycling substrate can be sucrose.

Способ настоящего изобретения необязательно включает применение трансгликозидаз, в которых в качестве донора сахара используют олиго-или полисахариды для модификации реципиентных молекул целевого стевиолгликозида. Не имеющие ограничительного характера примеры включают циклодекстрин гликозилтрансферазу (CGTase), фруктофуранозидазу, амилазу, сахаридазу, глюкосахаразу, бета-h-фруктозидазу, бета-фруктозидазу, сахаразу, фруктозилинвертазу, щелочную инвертазу, кислотную инвертазу, фруктофуранозидазу. В некоторых вариантах осуществления глюкоза и сахар(-а), отличный(-ые) от глюкозы, включая, без ограничений, фруктозу, ксилозу, рамнозу, арабинозу, дезоксиглюкозу, галактозу, переносятся в реципиентные целевые стевиолгликозиды. В одном варианте осуществления реципиентный стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид N2. В другом варианте осуществления реципиентный стевиолгликозид представляет собой ребаудиозид O4.The method of the present invention optionally includes the use of transglycosidases that use oligo- or polysaccharides as a sugar donor to modify recipient target steviol glycoside molecules. Non-limiting examples include cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase), fructofuranosidase, amylase, saccharidase, glucosucrose, beta-h-fructosidase, beta-fructosidase, sucrase, fructosylinvertase, alkaline invertase, acid invertase, fructofuranosidase. In some embodiments, glucose and sugar(s) other than glucose, including, but not limited to, fructose, xylose, rhamnose, arabinose, deoxyglucose, galactose, are transferred to recipient target steviol glycosides. In one embodiment, the recipient steviol glycoside is rebaudioside N2. In another embodiment, the recipient steviol glycoside is rebaudioside O4.

В другом варианте осуществления UDP-глюкозилтрансфераза, способная добавлять по меньшей мере одно звено глюкозы к исходной композиции стевиолгликозида, имеет >85% идентичности аминокислотной последовательности с UGT, выбранными из следующего перечня идентификационных номеров GenInfo, предпочтительно из группы, представленной в таблице 1 и таблице 2. In another embodiment, the UDP-glucosyltransferase capable of adding at least one glucose unit to a starting steviol glycoside composition has >85% amino acid sequence identity with UGTs selected from the following list of GenInfo identification numbers, preferably from the group presented in Table 1 and Table 2.

397567
454245
1359905
1685003
1685005
2191136
2501497
2911049
4218003
4314356
13492674
13492676
15217773
15217796
15223396
15223589
15227766
15230017
15231757
15234056
15234195
15234196
15238503
15239523
15239525
15239543
15239937
15240305
15240534
15982889
18086351
18418378
18418380
18418382
19743740
19911201
20149064
20260654
21435782
21553613
21593514
22759895
23955910
26452040
28393204
30679796
242345161
255536859
255538228
255541676
255547075
255552620
255552622
255555343
255555361
255555363
255555365
255555369
255555373
255555377
255556812
255556818
255563008
255564074
255564531
255572878
255577901
255583249
255583253
255583255
255585664
255585666
255634688
255644801
255645821
255647456
255648275
260279126
260279128
261343326
283132367
283362112
289188052
295841350
296088529
296090415
296090524
296090526
297599503
297601531
297611791
297722841
387135318
387135320
387135322
387135324
387135326
387135328
388493506
388495496
388498446
388499220
388502176
388517521
388519407
388521413
388827901
388827903
388827907
388827909
388827913
393887637
393887646
393887649
393990627
397746860
397789318
413924864
414590349
414590661
414591157
414879558
414879559
414879560
414888074
431812559
449432064
449432066
449433069
449436944
449438665
449438667
449440431397567
454245
1359905
1685003
1685005
2191136
2501497
2911049
4218003
4314356
13492674
13492676
15217773
15217796
15223396
15223589
15227766
15230017
15231757
15234056
15234195
15234196
15238503
15239523
15239525
15239543
15239937
15240305
15240534
15982889
18086351
18418378
18418380
18418382
19743740
19911201
20149064
20260654
21435782
21553613
21593514
22759895
23955910
26452040
28393204
30679796
242345161
255536859
255538228
255541676
255547075
255552620
255552622
255555343
255555361
255555363
255555365
255555369
255555373
255555377
255556812
255556818
255563008
255564074
255564531
255572878
255577901
255583249
255583253
255583255
255585664
255585666
255634688
255644801
255645821
255647456
255648275
260279126
260279128
261343326
283132367
283362112
289188052
295841350
296088529
296090415
296090524
296090526
297599503
297601531
297611791
297722841
387135318
387135320
387135322
387135324
387135326
387135328
388493506
388495496
388498446
388499220
388502176
388517521
388519407
388521413
388827901
388827903
388827907
388827909
388827913
393887637
393887646
393887649
393990627
397746860
397789318
413924864
414590349
414590661
414591157
414879558
414879559
414879560
414888074
431812559
449432064
449432066
449433069
449436944
449438665
449438667
449440431 30680413
32816174
32816178
34393978
37993665
37993671
37993675
39104603
41469414
41469452
42566366
42570280
42572855
44890129
46806235
50284482
51090402
51090594
52839682
56550539
62734263
62857204
62857206
62857210
62857212
75265643
75285934
75288884
77550661
77556148
82791223
83778990
89953335
110741436
110743955
115438196
115438785
115441237
115454819
115456047
115457492
115459312
115464719
115471069
115471071
115474009
297724601
297725463
297728331
297738632
297745347
297745348
297795735
297796253
297796257
297796261
297797587
297798502
297799226
297805988
297807499
297809125
297809127
297811403
297820040
297821483
297825217
297832276
297832280
297832518
297832520
297840825
297840827
297847402
297849372
300078590
300669727
302142947
302142948
302142950
302142951
302765302
302796334
302811470
302821107
302821679
319759260
319759266
320148814
326489963
326490273
326491131
449440433
449445896
449446454
449447657
449449002
449449004
449449006
449451379
449451589
449451591
449451593
449453712
449453714
449453716
449453732
449457075
449467555
449468742
449495638
449495736
449499880
449502786
449503471
449503473
449515857
449518643
449519559
449522783
449524530
449524591
449528823
449528825
449534021
460365546
460366882
460369823
460369829
460369831
460369833
460370755
46037471430680413
32816174
32816178
34393978
37993665
37993671
37993675
39104603
41469414
41469452
42566366
42570280
42572855
44890129
46806235
50284482
51090402
51090594
52839682
56550539
62734263
62857204
62857206
62857210
62857212
75265643
75285934
75288884
77550661
77556148
82791223
83778990
89953335
110741436
110743955
115438196
115438785
115441237
115454819
115456047
115457492
115459312
115464719
115471069
115471071
115474009
297724601
297725463
297728331
297738632
297745347
297745348
297795735
297796253
297796257
297796261
297797587
297798502
297799226
297805988
297807499
297809125
297809127
297811403
297820040
297821483
297825217
297832276
297832280
297832518
297832520
297840825
297840827
297847402
297849372
300078590
300669727
302142947
302142948
302142950
302142951
302765302
302796334
302811470
302821107
302821679
319759260
319759266
320148814
326489963
326490273
326491131
449440433
449445896
449446454
449447657
449449002
449449004
449449006
449451379
449451589
449451591
449451593
449453712
449453714
449453716
449453732
449457075
449467555
449468742
449495638
449495736
449499880
449502786
449503471
449503473
449515857
449518643
449519559
449522783
449524530
449524591
449528823
449528825
449534021
460365546
460366882
460369823
460369829
460369831
460369833
460370755
460374714 115480946
116310259
116310985
116788066
116788606
116789315
119394507
119640480
122209731
125526997
125534279
125534461
125540090
125541516
125545408
125547340
125547520
125554547
125557592
125557593
125557608
125559566
125563266
125571055
125579728
125588307
125589492
125599469
125601477
126635837
126635845
126635847
126635863
126635867
126635883
126635887
133874210
133874212
145358033
147772508
147776893
147776894
147776895
147786916
147798900
147798901
326492035
326493430
326500410
326506816
326507826
326508394
326509445
326511261
326511866
326512412
326517673
326518800
326521124
326525567
326525957
326526607
326527141
326530093
326534036
326534312
332071132
339715876
342306012
342306016
343457675
343457677
350534960
356498085
356499771
356499777
356499779
356501328
356502523
356503180
356503184
356503295
356504436
356504523
356504765
356511113
356515120
356517088
356520732
356522586
356522588
356522590
460376293
460378310
460380744
460381726
460382093
460382095
460382754
460384935
460384937
460385076
460385872
460386018
460389217
460394872
460396139
460397862
460397864
460398541
460403139
460403141
460403143
460403145
460405998
460407578
460407590
460409128
460409134
460409136
460409459
460409461
460409463
460409465
460409467
460410124
460410126
460410128
460410130
460410132
460410134
460410213
460411200115480946
116310259
116310985
116788066
116788606
116789315
119394507
119640480
122209731
125526997
125534279
125534461
125540090
125541516
125545408
125547340
125547520
125554547
125557592
125557593
125557608
125559566
125563266
125571055
125579728
125588307
125589492
125599469
125601477
126635837
126635845
126635847
126635863
126635867
126635883
126635887
133874210
133874212
145358033
147772508
147776893
147776894
147776895
147786916
147798900
147798901
326492035
326493430
326500410
326506816
326507826
326508394
326509445
326511261
326511866
326512412
326517673
326518800
326521124
326525567
326525957
326526607
326527141
326530093
326534036
326534312
332071132
339715876
342306012
342306016
343457675
343457677
350534960
356498085
356499771
356499777
356499779
356501328
356502523
356503180
356503184
356503295
356504436
356504523
356504765
356511113
356515120
356517088
356520732
356522586
356522588
356522590
460376293
460378310
460380744
460381726
460382093
460382095
460382754
460384935
460384937
460385076
460385872
460386018
460389217
460394872
460396139
460397862
460397864
460398541
460403139
460403141
460403143
460403145
460405998
460407578
460407590
460409128
460409134
460409136
460409459
460409461
460409463
460409465
460409467
460410124
460410126
460410128
460410130
460410132
460410134
460410213
460411200 147798902
147811764
147827151
147836230
147839909
147846163
147855977
148905778
148905999
148906835
148907340
148908935
148909182
148909920
148910082
148910154
148910612
148910769
156138791
156138797
156138799
156138803
165972256
168016721
171674071
171906258
183013901
183013903
186478321
187373030
187373042
190692175
194701936
195620060
209954691
209954719
209954725
209954733
210063105
210063107
212275846
216296854
217074506
218185693
218187075
218189427
356523945
356523957
356523959
356523961
356523963
356524387
356524403
356527181
356533209
356533852
356534718
356535480
356542996
356543136
356543932
356549841
356549843
356554358
356554360
356558606
356560333
356560599
356560749
356566018
356566169
356566173
356567761
356574704
356576401
356577660
357114993
357115447
357115451
357115453
357116080
357116928
357117461
357117463
357117829
357117839
357125059
357126015
357134488
357135657
357138503
357139683
460413408
460416351
462394387
462394433
462394557
462395646
462395678
462396388
462396389
462396419
462396542
462397507
462399998
462400798
462401217
462402118
462402237
462402284
462402416
462404228
462406358
462408262
462409325
462409359
462409777
462411467
462414311
462414416
462414476
462415526
462415603
462415731
462416307
462416920
462416922
462416923
462416924
462417401
462419769
462420317
462423366147798902
147811764
147827151
147836230
147839909
147846163
147855977
148905778
148905999
148906835
148907340
148908935
148909182
148909920
148910082
148910154
148910612
148910769
156138791
156138797
156138799
156138803
165972256
168016721
171674071
171906258
183013901
183013903
186478321
187373030
187373042
190692175
194701936
195620060
209954691
209954719
209954725
209954733
210063105
210063107
212275846
216296854
217074506
218185693
218187075
218189427
356523945
356523957
356523959
356523961
356523963
356524387
356524403
356527181
356533209
356533852
356534718
356535480
356542996
356543136
356543932
356549841
356549843
356554358
356554360
356558606
356560333
356560599
356560749
356566018
356566169
356566173
356567761
356574704
356576401
356577660
357114993
357115447
357115451
357115453
357116080
357116928
357117461
357117463
357117829
357117839
357125059
357126015
357134488
357135657
357138503
357139683
460413408
460416351
462394387
462394433
462394557
462395646
462395678
462396388
462396389
462396419
462396542
462397507
462399998
462400798
462401217
462402118
462402237
462402284
462402416
462404228
462406358
462408262
462409325
462409359
462409777
462411467
462414311
462414416
462414476
462415526
462415603
462415731
462416307
462416920
462416922
462416923
462416924
462417401
462419769
462420317
462423366 218193594
218193942
219885307
222615927
222619587
222623142
222625633
222625635
222636620
222636621
222636628
222636629
224053242
224053386
224055535
224056138
224056160
224067918
224072747
224080189
224091845
224094703
224100653
224100657
224101569
224103105
224103633
224103637
224109218
224114583
224116284
224120552
224121288
224121296
224121300
224130358
224140703
224143404
224143406
224144306
224285244
225431707
225435532
225436321
225440041
225441116
357140904
357165849
357165852
357168415
357437837
357442755
357442757
357445729
357445731
357445733
357446799
357446805
357452779
357452781
357452783
357452787
357452789
357452791
357452797
357452799
357470367
357472193
357472195
357474295
357474493
357474497
357474499
357490035
357493567
357497139
357497581
357497671
357500579
357504663
357504691
357504699
357504707
357505859
357510851
357516975
359477003
359477998
359478043
359478286
359484299
359486936
462423864
470101924
470102280
470102858
470104211
470104264
470104266
470106317
470106357
470115448
470130404
470131550
470136482
470136484
470136488
470136492
470137933
470137937
470140422
470140426
470140908
470141232
470142008
470142010
470142012
470143607
470143939
470145404
473923244
474114354
474143634
474202268
474299266
474363119
474366157
474429346
475432777
475473002
475489790
475511330
475516200218193594
218193942
219885307
222615927
222619587
222623142
222625633
222625635
222636620
222636621
222636628
222636629
224053242
224053386
224055535
224056138
224056160
224067918
224072747
224080189
224091845
224094703
224100653
224100657
224101569
224103105
224103633
224103637
224109218
224114583
224116284
224120552
224121288
224121296
224121300
224130358
224140703
224143404
224143406
224144306
224285244
225431707
225435532
225436321
225440041
225441116
357140904
357165849
357165852
357168415
357437837
357442755
357442757
357445729
357445731
357445733
357446799
357446805
357452779
357452781
357452783
357452787
357452789
357452791
357452797
357452799
357470367
357472193
357472195
357474295
357474493
357474497
357474499
357490035
357493567
357497139
357497581
357497671
357500579
357504663
357504691
357504699
357504707
357505859
357510851
357516975
359477003
359477998
359478043
359478286
359484299
359486936
462423864
470101924
470102280
470102858
470104211
470104264
470104266
470106317
470106357
470115448
470130404
470131550
470136482
470136484
470136488
470136492
470137933
470137937
470140422
470140426
470140908
470141232
470142008
470142010
470142012
470143607
470143939
470145404
473923244
474114354
474143634
474202268
474299266
474363119
474366157
474429346
475432777
475473002
475489790
475511330
475516200 225443294
225444853
225449296
225449700
225454338
225454340
225454342
225454473
225454475
225458362
225461551
225461556
225461558
225469538
225469540
226316457
226492603
226494221
226495389
226495945
226502400
226507980
226531147
226532094
238477377
240254512
242032615
242032621
242038423
242043290
242044836
242051252
242056217
242056219
242056663
242059339
242059341
242060922
242067411
242067413
242076258
242076396
242084750
242091005
242095206
242345159
359486938
359487055
359488135
359488708
359493630
359493632
359493634
359493636
359493815
359495856
359495858
359495869
359495871
359497638
359807261
374256637
377655465
378405177
378829085
387135070
387135072
387135078
387135092
387135094
387135098
387135100
387135134
387135136
387135174
387135176
387135184
387135186
387135188
387135190
387135192
387135194
387135282
387135284
387135294
387135298
387135300
387135302
387135304
387135312
387135314
387135316
475546199
475556485
475559699
475578293
475591753
475593742
475612072
475622476
475622507
475623787
482550481
482550499
482550740
482550999
482552352
482554970
482555336
482555478
482556454
482557289
482558462
482558508
482558547
482561055
482561555
482562795
482562850
482565074
482566269
482566296
482566307
482568689
482570049
482570572
482575121225443294
225444853
225449296
225449700
225454338
225454340
225454342
225454473
225454475
225458362
225461551
225461556
225461558
225469538
225469540
226316457
226492603
226494221
226495389
226495945
226502400
226507980
226531147
226532094
238477377
240254512
242032615
242032621
242038423
242043290
242044836
242051252
242056217
242056219
242056663
242059339
242059341
242060922
242067411
242067413
242076258
242076396
242084750
242091005
242095206
242345159
359486938
359487055
359488135
359488708
359493630
359493632
359493634
359493636
359493815
359495856
359495858
359495869
359495871
359497638
359807261
374256637
377655465
378405177
378829085
387135070
387135072
387135078
387135092
387135094
387135098
387135100
387135134
387135136
387135174
387135176
387135184
387135186
387135188
387135190
387135192
387135194
387135282
387135284
387135294
387135298
387135300
387135302
387135304
387135312
387135314
387135316
475546199
475556485
475559699
475578293
475591753
475593742
475612072
475622476
475622507
475623787
482550481
482550499
482550740
482550999
482552352
482554970
482555336
482555478
482556454
482557289
482558462
482558508
482558547
482561055
482561555
482562795
482562850
482565074
482566269
482566296
482566307
482568689
482570049
482570572
482575121

Таблица 1Table 1

Номер GIGI number Номер доступаAccess number ПроисхождениеOrigin 190692175190692175 ACE87855.1ACE87855.1 Stevia rebaudianaStevia rebaudiana 4146945241469452 AAS07253.1AAS07253.1 Oryza sativaOryza sativa 6285720462857204 BAD95881.1BAD95881.1 Ipomoea nilIpomoea nil 6285720662857206 BAD95882.1BAD95882.1 Ipomoea purpereaIpomoea purperea 5655053956550539 BAD77944.1BAD77944.1 Bellis perennisBellis perennis 115454819115454819 NP_001051010.1NP_001051010.1 Группа Oryza sativa Japonica Oryza sativa Japonica group 115459312115459312 NP_001053256.1NP_001053256.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 115471069115471069 NP_001059133.1NP_001059133.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 115471071115471071 NP_001059134.1NP_001059134.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 116310985116310985 CAH67920.1CAH67920.1 Группа Oryza sativa IndicaOryza sativa Indica group 116788066116788066 ABK24743.1ABK24743.1 Picea sitchensisPicea sitchensis 122209731122209731 Q2V6J9.1Q2V6J9.1 Fragaria x ananassaFragaria x ananassa 125534461125534461 EAY81009.1EAY81009.1 Группа Oryza sativa IndicaOryza sativa Indica group 125559566125559566 EAZ05102.1EAZ05102.1 Группа Oryza sativa IndicaOryza sativa Indica group 125588307125588307 EAZ28971.1EAZ28971.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 148907340148907340 ABR16806.1ABR16806.1 Picea sitchensisPicea sitchensis 148910082148910082 ABR18123.1ABR18123.1 Picea sitchensisPicea sitchensis 148910612148910612 ABR18376.1ABR18376.1 Picea sitchensisPicea sitchensis 1523419515234195 NP_194486.1NP_194486.1 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 1523952315239523 NP_200210.1NP_200210.1 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 1523993715239937 NP_196793.1NP_196793.1 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 16850051685005 AАВ36653.1AAB36653.1 Nicotiana tabacumNicotiana tabacum 183013903183013903 ACC38471.1ACC38471.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 186478321186478321 NP_172511.3NP_172511.3 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 187373030187373030 ACD03249.1ACD03249.1 Avena strigosaAvena strigosa 194701936194701936 ACF85052.1ACF85052.1 Zea maysZea mays 1974374019743740 AAL92461.1AAL92461.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum 212275846212275846 NP_001131009.1NP_001131009.1 Zea maysZea mays 222619587222619587 EEE55719.1EEE55719.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 224055535224055535 XP_002298527.1XP_002298527.1 Populus trichocarpaPopulus trichocarpa 224101569224101569 XP_002334266.1XP_002334266.1 Populus trichocarpaPopulus trichocarpa 224120552224120552 XP_002318358.1XP_002318358.1 Populus trichocarpaPopulus trichocarpa 224121288224121288 XP_002330790.1XP_002330790.1 Populus trichocarpaPopulus trichocarpa 225444853225444853 XP_002281094XP_002281094 Vitis viniferaVitis vinifera 225454342225454342 XP_002275850.1XP_002275850.1 Vitis viniferaVitis vinifera 225454475225454475 XP_002280923.1XP_002280923.1 Vitis viniferaVitis vinifera 225461556225461556 XP_002285222XP_002285222 Vitis viniferaVitis vinifera 225469540225469540 XP_002270294.1XP_002270294.1 Vitis viniferaVitis vinifera 226495389226495389 NP_001148083.1NP_001148083.1 Zea maysZea mays 226502400226502400 NP_001147674.1NP_001147674.1 Zea maysZea mays 238477377238477377 ACR43489.1ACR43489.1 Triticum aestivumTriticum aestivum 240254512240254512 NP_565540.4NP_565540.4 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 25014972501497 Q43716.1Q43716.1 Petunia x hybridaPetunia x hybrida 255555369255555369 XP_002518721.1XP_002518721.1 Ricinus communisRicinus communis 2645204026452040 BAC43110.1BAC43110.1 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 296088529296088529 CBI37520.3CBI37520.3 Vitis viniferaVitis vinifera 297611791297611791 NP_001067852.2NP_001067852.2 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 297795735297795735 XP_002865752.1XP_002865752.1 Arabidopsis lyrata subsp. lyrataArabidopsis lyrata subsp. lyrata 297798502297798502 XP_002867135.1XP_002867135.1 Arabidopsis lyrata subsp. lyrataArabidopsis lyrata subsp. lyrata 297820040297820040 XP_002877903.1XP_002877903.1 Arabidopsis lyrata subsp. lyrataArabidopsis lyrata subsp. lyrata 297832276297832276 XP_002884020.1XP_002884020.1 Arabidopsis lyrata subsp. lyrataArabidopsis lyrata subsp. lyrata 302821107302821107 XP_002992218.1XP_002992218.1 Selaginella moellendorffiiSelaginella moellendorffii 3068041330680413 NP_179446.2NP_179446.2 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 319759266319759266 ADV71369.1ADV71369.1 Pueraria montana var. lobataPueraria montana var. lobata 326507826326507826 BAJ86656.1BAJ86656.1 Hordeum vulgare subsp. VulgareHordeum vulgare subsp. Vulgare 343457675343457675 AEM37036.1AEM37036.1 Brassica rapa subsp. oleiferaBrassica rapa subsp. oleifera 350534960350534960 NP_001234680.1NP_001234680.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum 356501328356501328 XP_003519477.1XP_003519477.1 Glycine maxGlycine max 356522586356522586 XP_003529927.1XP_003529927.1 Glycine maxGlycine max 356535480356535480 XP_003536273.1XP_003536273.1 Glycine maxGlycine max 357445733357445733 XP_003593144.1XP_003593144.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 357452783357452783 XP_003596668.1XP_003596668.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 357474493357474493 XP_003607531.1XP_003607531.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 357500579357500579 XP_003620578.1XP_003620578.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 357504691357504691 XP_003622634.1XP_003622634.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 359477998359477998 XP_003632051.1XP_003632051.1 Vitis viniferaVitis vinifera 359487055359487055 XP_002271587XP_002271587 Vitis viniferaVitis vinifera 359495869359495869 XP_003635104.1XP_003635104.1 Vitis viniferaVitis vinifera 387135134387135134 AFJ52948.1AFJ52948.1 Linum usitatissimumLinum usitatissimum 387135176387135176 AFJ52969.1AFJ52969.1 Linum usitatissimumLinum usitatissimum 387135192387135192 AFJ52977.1AFJ52977.1 Linum usitatissimumLinum usitatissimum 387135282387135282 AFJ53022.1AFJ53022.1 Linum usitatissimumLinum usitatissimum 387135302387135302 AFJ53032.1AFJ53032.1 Linum usitatissimumLinum usitatissimum 387135312387135312 AFJ53037.1AFJ53037.1 Linum usitatissimumLinum usitatissimum 388519407388519407 AFK47765.1AFK47765.1 Medicago truncatulaMedicago truncatula 393887646393887646 АFN26668.1AFN26668.1 Barbarea vulgaris subsp. arcuataBarbarea vulgaris subsp. arcuata 414888074414888074 DAA64088.1DAA64088.1 Zea maysZea mays 4257285542572855 NP_974524.1NP_974524.1 Arabidopsis thalianaArabidopsis thaliana 449440433449440433 XP_004137989.1XP_004137989.1 Cucumis sativusCucumis sativus 449446454449446454 XP_004140986.1XP_004140986.1 Cucumis sativusCucumis sativus 449449004449449004 XP_004142255.1XP_004142255.1 Cucumis sativusCucumis sativus 449451593449451593 XP_004143546.1XP_004143546.1 Cucumis sativusCucumis sativus 449515857449515857 XP_004164964.1XP_004164964.1 Cucumis sativusCucumis sativus 460382095460382095 XP_004236775.1XP_004236775.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum 460409128460409128 XP_004249992.1XP_004249992.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum 460409461460409461 XP_004250157.1XP_004250157.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum 460409465460409465 XP_004250159.1XP_004250159.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum 462396388462396388 EMJ02187.1EMJ02187.1 Prunus persicaPrunus persica 462402118462402118 EMJ07675.1EMJ07675.1 Prunus persicaPrunus persica 462409359462409359 EMJ14693.1EMJ14693.1 Prunus persicaPrunus persica 462416923462416923 EMJ21660.1EMJ21660.1 Prunus persicaPrunus persica 4680623546806235 BAD17459.1BAD17459.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group 470104266470104266 XP_004288529.1XP_004288529.1 Fragaria vesca subsp. vescaFragaria vesca subsp. vesca 470142008470142008 XP_004306714.1XP_004306714.1 Fragaria vesca subsp. vescaFragaria vesca subsp. vesca 475432777475432777 EMT01232.1EMT01232.1 Aegilops tauschiiAegilops tauschii 5109040251090402 BAD35324.1BAD35324.1 Группа Oryza sativa JaponicaOryza sativa Japonica group

Таблица 2Table 2

Номер GIGI number Номер доступаAccess number ПроисхождениеOrigin Внутренняя ссылкаInternal link 460409128460409128 XP.004249992.1XP.004249992.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum UGTSlUGTSl 460386018460386018 XP.004238697.1XP.004238697.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum - - 460409134460409134 XP.004249995.1XP.004249995.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum -- 460410132460410132 XP.004250485.1XP.004250485.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum UGTSl2UGTSl2 460410130460410130 XP.004250484.1XP.004250484.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum -- 460410128460410128 XP.004250483.1XP.004250483.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum -- 460378310460378310 XP.004234916.1XP.004234916.1 Solanum lycopersicumSolanum lycopersicum -- 209954733209954733 BAG80557.1BAG80557.1 Lycium barbarumLycium barbarum UGTLBUGTLB 209954725209954725 BAG80553.1BAG80553.1 Lycium barbarumLycium barbarum --

Один вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой микробную клетку, содержащую фермент, т. е. фермент, способный превращать исходную композицию в целевой стевиолгликозид. Соответственно, некоторые варианты осуществления настоящего способа включают приведение микроорганизма в контакт со средой, содержащей исходную композицию, с получением среды, содержащей по меньшей мере один целевой стевиолгликозид.One embodiment of the present invention is a microbial cell comprising an enzyme, i.e., an enzyme capable of converting a starting composition into a target steviol glycoside. Accordingly, some embodiments of the present method comprise contacting the microorganism with a medium containing the starting composition to produce a medium containing at least one target steviol glycoside.

Микроорганизм может представлять собой любой микроорганизм, обладающий ферментом(-ами), необходимым(-и) для превращения исходной композиции в целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы). Эти ферменты кодируются в геноме микроорганизма.The microorganism may be any microorganism possessing the enzyme(s) necessary to convert the starting composition into the target steviol glycoside(s). These enzymes are encoded in the microorganism's genome.

Приемлемые микроорганизмы включают, без ограничений, E.coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp. и т. п.Acceptable microorganisms include, but are not limited to, E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp., Yarrowia sp., etc.

В одном варианте осуществления микроорганизм свободен при контакте с исходной композицией.In one embodiment, the microorganism is free upon contact with the starting composition.

В другом варианте осуществления микроорганизм иммобилизован при контакте с исходной композицией. Например, микроорганизм может быть иммобилизован на твердой подложке, изготовленной из неорганических или органических материалов. Не имеющие ограничительного характера примеры твердых подложек, приемлемых для иммобилизации микроорганизма, включают в себя дериватизированную целлюлозу или стекло, керамику, оксиды металлов или мембраны. Микроорганизм можно иммобилизовать на твердой подложке, например, путем ковалентного присоединения, адсорбции, поперечной сшивки, захвата или инкапсуляции.In another embodiment, the microorganism is immobilized by contact with the starting composition. For example, the microorganism can be immobilized on a solid support made of inorganic or organic materials. Non-limiting examples of solid supports suitable for immobilizing the microorganism include derivatized cellulose or glass, ceramics, metal oxides, or membranes. The microorganism can be immobilized on the solid support, for example, by covalent attachment, adsorption, cross-linking, entrapment, or encapsulation.

В еще одном варианте осуществления фермент, способный превращать исходную композицию в целевой стевиолгликозид, секретируется микроорганизмом в реакционную среду.In another embodiment, an enzyme capable of converting the starting composition into the target steviol glycoside is secreted by the microorganism into the reaction medium.

Целевой стевиолгликозид необязательно очищают. Очистка целевого стевиолгликозида от реакционной среды может быть выполнена с помощью по меньшей мере одного подходящего способа с получением композиции высокоочищенного целевого стевиолгликозида. Подходящие способы включают кристаллизацию, мембранное разделение, центрифугирование, экстракцию (жидкую или твердую фазу), хроматографическое разделение, ВЭЖХ (препаративную или аналитическую) или комбинацию таких способов.The target steviol glycoside is optionally purified. Purification of the target steviol glycoside from the reaction medium can be accomplished using at least one suitable method to obtain a highly purified target steviol glycoside composition. Suitable methods include crystallization, membrane separation, centrifugation, extraction (liquid or solid phase), chromatographic separation, HPLC (preparative or analytical), or a combination of such methods.

ПримененияApplications

Высоко очищенный(-ые) целевой(-ые) гликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид А, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3, ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, можно использовать непосредственно «как есть» или в комбинации с другими подсластителями, ароматизаторами, пищевыми ингредиентами и комбинациями вышеуказанного.Highly purified target glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 obtained in accordance with the present invention can be used directly "as is" or in combination with other sweeteners, flavorings, food ingredients and combinations of the above.

Не имеющие ограничительного характера примеры ароматизаторов включают в себя, без ограничений, лайм, лимон, апельсин, фрукты, банан, виноград, грушу, ананас, манго, ягоду, горький миндаль, колу, корицу, сахар, сладкую вату, ваниль и комбинации вышеуказанного.Non-limiting examples of flavorings include, but are not limited to, lime, lemon, orange, fruit, banana, grape, pear, pineapple, mango, berry, bitter almond, cola, cinnamon, sugar, cotton candy, vanilla, and combinations thereof.

Не имеющие ограничительного характера примеры других пищевых ингредиентов включают в себя, без ограничений, подкислители, органические и аминокислоты, красящие агенты, наполнители, модифицированные крахмалы, камеди, текстуризаторы, консерванты, кофеин, антиоксиданты, эмульгаторы, стабилизаторы, загустители, желирующие агенты и комбинации вышеуказанного.Non-limiting examples of other food ingredients include, without limitation, acidulants, organic and amino acids, coloring agents, fillers, modified starches, gums, texturizers, preservatives, caffeine, antioxidants, emulsifiers, stabilizers, thickeners, gelling agents, and combinations of the foregoing.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) гликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид А, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3, ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, может находиться в различных полиморфных формах, включая, без ограничений, гидраты, сольваты, безводные, аморфные формы и комбинации вышеуказанного.Highly purified target glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 obtained in accordance with the present invention may be in various polymorphic forms, including, but not limited to, hydrates, solvates, anhydrous, amorphous forms and combinations of the above.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) гликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид А, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3, ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, может быть включен в качестве высокоинтенсивного натурального подсластителя в продукты питания, напитки, фармацевтические композиции, косметические средства, жевательные резинки, столовые продукты, зерновые продукты, молочные продукты, зубные пасты и другие композиции для ротовой полости и т. п.Highly purified target glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 obtained in accordance with the present invention can be included as a high-intensity natural sweetener in food products, beverages, pharmaceutical compositions, cosmetics, chewing gums, table products, cereal products, dairy products, toothpastes and other compositions for the oral cavity, etc.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) гликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид А, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3, ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, можно использовать как подслащивающее соединение в качестве единственного подсластителя или его можно использовать вместе с по меньшей мере одним подсластителем высокой интенсивности природного происхождения, таким как ребаудиозид A, ребаудиозид A2, ребаудиозид A3, ребаудиозид AM, ребаудиозид B, ребаудиозид C2, ребаудиозид D, ребаудиозид D2, ребаудиозид D3, ребаудиозид D4, ребаудиозид E, ребаудиозид E2, ребаудиозид F, ребаудиозид F2, ребаудиозид F3, ребаудиозид G, ребаудиозид H, ребаудиозид I, ребаудиозид I2, ребаудиозид I3, ребаудиозид J, ребаудиозид K2, ребаудиозид L, ребаудиозид M, ребаудиозид М2, ребаудиозид N, ребаудиозид O, ребаудиозид O2, ребаудиозид O3, ребаудиозид Q, ребаудиозид Q2, ребаудиозид Q3, ребаудиозид R, ребаудиозид S, ребаудиозид T, ребаудиозид T1, ребаудиозид U, ребаудиозид U2, ребаудиозид V, ребаудиозид V2, ребаудиозид W, ребаудиозид W2, ребаудиозид W3, ребаудиозид Y, ребаудиозид Z1, ребаудиозид Z2, стевиолбиозид, стевиозид, стевиозид D, стевиозид E, стевиозид E2, стевиозид F, могрозиды, браззеин, неогесперидин дигидрохалкон, глицирризиновая кислота и ее соли, тауматин, периллартин, пернандульцин, мукурозиозид, байюнозид, фломизозид I, диметилгексагидрофлуорен дикарбоновая кислота, абрузозиды, периандрин, карнозифлозиды, циклокариозид, птерокариозиды, полиподозид А, бразилин, гернандульцин, филлодульцин, глицифиллин, флоризин, трилобатин, дигидрофлавонол, дигидрокверцетин-3 ацетат, неоастилибин, транс-циннамальдегид, монатин и его соли, селлигуаин A, гематоксилин, монеллин, осладин, птерокариозид A, птерокариозид B, мабинлин, пентадин, миракулин, куркулин, неокулин, хлорогеновая кислота, цинарин, подсластитель Luo Han Guo, могрозид V, сиаменозид и комбинации вышеуказанного.Highly purified target glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside O4 obtained according to the present invention can be used as a sweetening compound as a single sweetener or it can be used together with at least one high-intensity sweetener of natural origin, such as rebaudioside A, rebaudioside A2, rebaudioside A3, rebaudioside AM, rebaudioside B, rebaudioside C2, rebaudioside D, rebaudioside D2, rebaudioside D3, rebaudioside D4, rebaudioside E, rebaudioside E2, rebaudioside F, rebaudioside F2, rebaudioside F3, rebaudioside G, rebaudioside H, rebaudioside I, rebaudioside I2, rebaudioside I3, rebaudioside J, rebaudioside K2, rebaudioside L, rebaudioside M, rebaudioside M2, rebaudioside N, rebaudioside O, rebaudioside O2, rebaudioside O3, rebaudioside Q, rebaudioside Q2, rebaudioside Q3, rebaudioside R, rebaudioside S, rebaudioside T, rebaudioside T1, rebaudioside U, rebaudioside U2, rebaudioside V, rebaudioside V2, rebaudioside W, rebaudioside W2, rebaudioside W3, rebaudioside Y, rebaudioside Z1, rebaudioside Z2, steviolbioside, stevioside, stevioside D, stevioside E, stevioside E2, stevioside F, mogrosides, brazzein, neohesperidin dihydrochalcone, glycyrrhizic acid and its salts, thaumatin, perillartin, pernandulcin, mucurosioside, bayunoside, phlomisoside I, dimethylhexahydrofluorene dicarboxylic acid, abrusosides, periandrin, carnosiflozides, cyclocaryoside, pterocaryosides, polypodoside A, brazilin, hernandulcin, phyllodulcin, glycyphyllin, phlorizin, trilobatin, dihydroflavonol, dihydroquercetin-3 acetate, neoastilibin, trans-cinnamaldehyde, monatin and its salts, selliguain A, hematoxylin, monellin, osladin, pterocaryoside A, pterocaryoside B, mabinlin, pentadin, miraculin, curculin, neoculin, chlorogenic acid, cynarin, Luo Han Guo sweetener, mogroside V, siamenoside, and combinations of the above.

В конкретном варианте осуществления стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид М3 и/или ребаудиозид O4 можно использовать в композиции подсластителя, содержащей соединение, выбранное из группы, состоящей изIn a specific embodiment, steviol monoside, steviol monoside A, steviol bioside A, steviol bioside B, steviol bioside C, steviol bioside D, steviol bioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be used in a sweetener composition containing a compound selected from the group consisting of

ребаудиозида A, ребаудиозида A2, ребаудиозида A3, ребаудиозида AM, ребаудиозида B, ребаудиозида C2, ребаудиозида D, ребаудиозида D2, ребаудиозида D3, ребаудиозида D4, ребаудиозида E, ребаудиозида E2, ребаудиозида F, ребаудиозида F2, ребаудиозида F3, ребаудиозида G, ребаудиозида H, ребаудиозида I, ребаудиозида I2, ребаудиозида I3, ребаудиозида J, ребаудиозида K2, ребаудиозида L, ребаудиозида M, ребаудиозида М2, ребаудиозида N, ребаудиозида O, ребаудиозида O2, ребаудиозида O3, ребаудиозида Q, ребаудиозида Q2, ребаудиозида Q3, ребаудиозида R, ребаудиозида S, ребаудиозида T, ребаудиозида T1, ребаудиозида U, ребаудиозида U2, ребаудиозида V, ребаудиозида V2, ребаудиозидаа W, ребаудиозида W2, ребаудиозида W3, ребаудиозида Y, ребаудиозида Z1, ребаудиозида Z2, стевиолбиозида, стевиозида, стевиозида D, стевиозида E, стевиозида E2, стевиозида F, NSF-02, могрозида V, Luo Han Guo, аллулозы, аллозы, D-тагатозы, эритрити и комбинаций вышеуказанного.rebaudioside A, rebaudioside A2, rebaudioside A3, rebaudioside AM, rebaudioside B, rebaudioside C2, rebaudioside D, rebaudioside D2, rebaudioside D3, rebaudioside D4, rebaudioside E, rebaudioside E2, rebaudioside F, rebaudioside F2, rebaudioside F3, rebaudioside G, rebaudioside H, rebaudioside I, rebaudioside I2, rebaudioside I3, rebaudioside J, rebaudioside K2, rebaudioside L, rebaudioside M, rebaudioside M2, rebaudioside N, rebaudioside O, rebaudioside O2, rebaudioside O3, rebaudioside Q, rebaudioside Q2, rebaudioside Q3, rebaudioside R, rebaudioside S, rebaudioside T, rebaudioside T1, rebaudioside U, rebaudioside U2, rebaudioside V, rebaudioside V2, rebaudioside W, rebaudioside W2, rebaudioside W3, rebaudioside Y, rebaudioside Z1, rebaudioside Z2, steviolbioside, stevioside, stevioside D, stevioside E, stevioside E2, stevioside F, NSF-02, mogroside V, Luo Han Guo, allulose, allose, D-tagatose, erythritol and combinations of the above.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) гликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид А, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно также использовать в комбинации с синтетическими подсластителями высокой интенсивности, такими каксукралоза, ацесульфам калия, аспартам, алитам, сахарин, неогесперидин дигидрохалкон, цикламат, неотам, дульцин, суосан адвантам, соли и комбинации вышеуказанного.Highly purified target glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 may also be used in combination with high intensity synthetic sweeteners such as sucralose, acesulfame potassium, aspartame, alitame, saccharin, neohesperidin dihydrochalcone, cyclamate, neotame, dulcine, suosan advantam, salts and combinations thereof.

Кроме того, высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно использовать в комбинации с природными подавителями подсластителей, такими как джимнемовая кислота, годульцин, зизифин, лактизол и т. п. Стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 также могут комбинироваться с различными усилителями вкуса умами. Стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид М3 и/или ребаудиозид O4 можно смешивать с вкусом умами и сладкими аминокислотами, такими как глутамат, аспарагиновая кислота, глицин, аланин, треонин, пролин, серин, глутамат, лизин, триптофан и комбинациями вышеуказанного.In addition, highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be used in combination with natural sweetener suppressors such as gymnemic acid, godulcin, ziziphin, lactisol, etc. Steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can also be combined with various umami flavor enhancers. Steviol monoside, steviol monoside A, steviol bioside A, steviol bioside B, steviol bioside C, steviol bioside D, steviol bioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be mixed with umami and sweet amino acids such as glutamate, aspartic acid, glycine, alanine, threonine, proline, serine, glutamate, lysine, tryptophan and combinations thereof.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид М3 и/или ребаудиозид O4 можно использовать в комбинации с одной или более добавками, выбранными из группы, состоящей из углеводов, полиолов, аминокислот и их соответствующих солей, полиаминокислот и их соответствующих солей, сахарных кислот и их соответствующих солей, нуклеотидов, органических кислот, неорганических кислот, органических солей, включая соли органических кислот и соли органических оснований, неорганических солей, горьких соединений, ароматизаторов и ароматизирующих ингредиентов, вяжущих соединений, белков или гидролизатов белков, поверхностно-активных веществ, эмульгаторов, флавоноидов, спиртов, полимеров и комбинаций вышеуказанного.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be used in combination with one or more additives selected from the group consisting of carbohydrates, polyols, amino acids and their corresponding salts, polyamino acids and their corresponding salts, sugar acids and their corresponding salts, nucleotides, organic acids, inorganic acids, organic salts, including salts of organic acids and salts of organic bases, inorganic salts, bitter compounds, flavorings and flavoring ingredients, astringent compounds, proteins or protein hydrolysates, surfactants, emulsifiers, flavonoids, alcohols, polymers and combinations of the above.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно комбинировать с полиолами или сахарными спиртами. Термин «полиол» относится к молекуле, которая содержит более одной гидроксильной группы. Полиол может представлять собой диол, триол или тетраол, содержащий 2, 3 и 4 гидроксильные группы соответственно. Полиол также может содержать более четырех гидроксильных групп, например, пентаол, гексаол, гептаол и т. п., которые содержат 5, 6 или 7 гидроксильных групп соответственно. Кроме того, полиол также может представлять собой сахарный спирт, многоатомный спирт или полиспирт, который является восстановленной формой углевода, причем карбонильная группа (альдегид или кетон, восстанавливающий сахар) восстановлена до первичной или вторичной гидроксильной группы. Примеры полиолов включают, без ограничений, эритрит, мальтит, маннит, сорбит, лактит, ксилит, инозит, изомальт, пропиленгликоль, глицерин, треит, галактит, гидрогенизированную изомальтулозу, восстановленные изомальтоолигосахариды, восстановленные ксилоолигосахариды, восстановленные гентиоолигосахариды, восстановленный мальтозный сироп, восстановленный глюкозный сироп, гидрогенизированные гидролизаты крахмала, полиглицитолы и сахарные спирты или любые другие углеводы, способные к восстановлению, которые не оказывает негативного влияния на вкус композиции подсластителя.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, Rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be combined with polyols or sugar alcohols. The term "polyol" refers to a molecule that contains more than one hydroxyl group. A polyol can be a diol, triol or tetraol containing 2, 3 and 4 hydroxyl groups, respectively. A polyol can also contain more than four hydroxyl groups, for example, pentaol, hexaol, heptaol, etc., which contain 5, 6 or 7 hydroxyl groups, respectively. In addition, the polyol may also be a sugar alcohol, a polyhydric alcohol, or a polyalcohol, which is a reduced form of a carbohydrate, wherein the carbonyl group (aldehyde or ketone, reducing sugar) is reduced to a primary or secondary hydroxyl group. Examples of polyols include, but are not limited to, erythritol, maltitol, mannitol, sorbitol, lactitol, xylitol, inositol, isomalt, propylene glycol, glycerol, threitol, galactitol, hydrogenated isomaltulose, reduced isomaltooligosaccharides, reduced xylooligosaccharides, reduced gentiooligosaccharides, reduced maltose syrup, reduced glucose syrup, hydrogenated starch hydrolysates, polyglycitols and sugar alcohols or any other carbohydrates capable of reduction that do not adversely affect the taste of the sweetener composition.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно комбинировать с подсластителями с пониженной калорийностью, такими как, например, D-тагатоза, L-сахара, L-сорбоза, L-арабиноза и комбинации вышеуказанного.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be combined with reduced calorie sweeteners such as, for example, D-tagatose, L-sugar, L-sorbose, L-arabinose and combinations of the above.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 также можно комбинировать с различными углеводами. Термин «углевод» в основном относится к альдегидным или кетоновым соединениям с замещениями несколькими гидроксильными группами и общей формулой (CH₂O)_n, где n равно 3-30, а также к их олигомерам и полимерам. Углеводы, описанные в настоящем изобретении, дополнительно могут быть замещены или деоксигенизированы в одном или более положениях. Углеводы, упоминаемые в настоящем документе, охватывают немодифицированные углеводы, производные углеводов, замещенные углеводы и модифицированные углеводы. Используемые в настоящем документе фразы «производные углеводов», «замещенные углеводы» и «модифицированные углеводы» являются синонимами. Модифицированный углевод означает любой углевод, в котором, по меньшей мере, один атом был добавлен, удален или замещен, а также комбинации вышеуказанного. Таким образом, производные углеводов или замещенные углеводы включают замещенные и незамещенные моносахариды, дисахариды, олигосахариды и полисахариды. Производные углеводов или замещенные углеводы необязательно могут быть очищены от кислорода в любом соответствующем С-положении и/или замещены одним или более фрагментами, такими как водород, галоген, галогеналкил, карбоксил, ацил, ацилокси, амино, амидо, производные карбоксила, алкиламино, диалкиламино, ариламино, алкокси, арилокси, нитро, циано, сульфо, меркапто, имино, сульфонил, сульфенил, сульфинил, сульфамоил, карбоалкокси, карбоксамидо, фосфонил, фосфинил, фосфорил, фосфино, тиоэфир, оксимино, гидразино, карбамил, фосфо, фосфонато или любой другой жизнеспособной функциональной группой при условии, что производные углеводов или замещенные углеводы служат для улучшения сладкого вкуса композиции подсластителя.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, Rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can also be combined with various carbohydrates. The term "carbohydrate" generally refers to aldehyde or ketone compounds with substitutions of several hydroxyl groups and the general formula (CH ₂ O) _n , where n is 3-30, as well as to oligomers and polymers thereof. The carbohydrates described in the present invention can further be substituted or deoxygenated at one or more positions. Carbohydrates referred to herein include unmodified carbohydrates, carbohydrate derivatives, substituted carbohydrates, and modified carbohydrates. The phrases "carbohydrate derivatives,""substitutedcarbohydrates," and "modified carbohydrates" are used synonymously herein. A modified carbohydrate means any carbohydrate in which at least one atom has been added, removed, or substituted, as well as combinations thereof. Thus, carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates include substituted and unsubstituted monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, and polysaccharides. The carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates may optionally be purified from oxygen at any corresponding C-position and/or substituted with one or more moieties such as hydrogen, halogen, haloalkyl, carboxyl, acyl, acyloxy, amino, amido, carboxyl derivatives, alkylamino, dialkylamino, arylamino, alkoxy, aryloxy, nitro, cyano, sulfo, mercapto, imino, sulfonyl, sulfenyl, sulfinyl, sulfamoyl, carboalkoxy, carboxamido, phosphonyl, phosphinyl, phosphoryl, phosphino, thioether, oximino, hydrazino, carbamyl, phospho, phosphonato or any other viable functional group, provided that the carbohydrate derivatives or substituted carbohydrates serve to improve the sweet taste of the sweetener composition.

Примеры углеводов, которые можно использовать в соответствии с настоящим изобретением, включают, без ограничений, пискозу, туранозу, аллозу, тагатозу, трегалозу, галактозу, рамнозу, различные циклодекстрины, циклические олигосахариды, различные типы мальтодекстринов, декстран, сахарозу, глюкозу, рибулозу, фруктозу, треозу, арабинозу, ксилозу, ликсозу, аллозу, алтрозу, маннозу, идозу, лактозу, мальтозу, инвертный сахар, изотрегалозу, неотрегалозу, изомальтулозу, эритрозу, дезоксирибозу, гулозу, идозу, талозу, эритрулозу, ксилулозу, псикозу, туранозу, целлобиозу, амилопектин, глюкозамин, маннозамин, фукозу, глюкуроновую кислоту, глюконовую кислоту, глюконо-лактон, абеквозу, галактозамин, свекловичные олигосахариды, изомальтоолигосахариды (изомальтозу, изомальтотриозу, панозу и т.п.), ксилоолигосахариды (ксилотриозу, ксилобиозу и т.п.), олигосахариды с концевой ксилозой, гентиоолигосахариды (гентиобиозу, гентитриозу, гентиотетраозу и т.п.), сорбозу, нигероолигосахариды, палатинозные олигосахариды, фруктоолигосахариды (кестозу, нистозу и т.п.); мальтотетраол, мальтотриол, мальтоолигосахариды (мальтотриозу, мальтотетраозу, мальтопентаозу, мальтогексаозу, мальтогептаозу и т.п.), крахмал, инулин, инулоолигосахариды, лактулозу, мелибиозу, рафинозу, рибозу, изомеризованные жидкие сахара, такие как кукурузные сиропы с высоким содержанием фруктозы, связывающие сахара и соевые олигосахариды. Кроме того, углеводы, упоминаемые в настоящем документе, могут находиться в D- или L-конфигурации.Examples of carbohydrates that can be used in accordance with the present invention include, but are not limited to, piscose, turanose, allose, tagatose, trehalose, galactose, rhamnose, various cyclodextrins, cyclic oligosaccharides, various types of maltodextrins, dextran, sucrose, glucose, ribulose, fructose, threose, arabinose, xylose, lyxose, allose, altrose, mannose, idose, lactose, maltose, invert sugar, isotrehalose, neotrehalose, isomaltulose, erythrose, deoxyribose, gulose, idose, talose, erythrulose, xylulose, psicose, turanose, cellobiose, amylopectin, glucosamine, mannosamine, fucose, glucuronic acid, gluconic acid, gluconolactone, abequose, galactosamine, beet oligosaccharides, isomaltooligosaccharides (isomaltose, isomaltotriose, panose, etc.), xylooligosaccharides (xylotriose, xylobiose, etc.), oligosaccharides with terminal xylose, gentiooligosaccharides (gentiobiose, gentiotriose, gentiotetraose, etc.), sorbose, nigero-oligosaccharides, palatinose oligosaccharides, fructooligosaccharides (kestose, nystose, etc.); maltotetraol, maltotriol, maltooligosaccharides (maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, maltoheptaose, etc.), starch, inulin, inulooligosaccharides, lactulose, melibiose, raffinose, ribose, isomerized liquid sugars such as high fructose corn syrups, sugar linkers, and soy oligosaccharides. In addition, the carbohydrates referred to herein may be in the D- or L-configuration.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, можно использовать в комбинации с различными физиологически активными веществами или функциональными ингредиентами. Функциональные ингредиенты в основном подразделяются на категории, такие как каротиноиды, пищевая клетчатка, жирные кислоты, сапонины, антиоксиданты, нутрицевтики, флавоноиды, изотиоцианаты, фенолы, растительные стерины и станолы (фитостерины и фитостанолы); полиолы; пребиотики, пробиотики; фитоэстрогены; соевый белок; сульфиды/тиолы; аминокислоты; белки; витамины; и минеральные вещества. Функциональные ингредиенты также могут быть классифицированы на основании их полезных свойств, например, для сердечно-сосудистой системы, для снижения уровня холестерина, а также противовоспалительное. Примеры функциональных ингредиентов представлены в документе WO2013/096420, содержание которого включено в настоящий документ путем ссылки.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 obtained according to the present invention can be used in combination with various physiologically active substances or functional ingredients. The functional ingredients are mainly divided into categories such as carotenoids, dietary fiber, fatty acids, saponins, antioxidants, nutraceuticals, flavonoids, isothiocyanates, phenols, plant sterols and stanols (phytosterols and phytostanols); polyols; prebiotics, probiotics; phytoestrogens; soy protein; sulfides/thiols; amino acids; proteins; vitamins; and minerals. Functional ingredients can also be classified based on their beneficial properties, such as cardiovascular, cholesterol-lowering, and anti-inflammatory. Examples of functional ingredients are provided in WO2013/096420, the contents of which are incorporated herein by reference.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, можно применять в качестве подсластителя высокой интенсивности для производства напитков с нулевой калорийностью, пониженной калорийностью или диабетических напитков и пищевых продуктов с улучшенными вкусовыми характеристиками. Его также можно применять в напитках, продуктах питания, фармацевтических препаратах и другой продукции, в которой не может применяться сахар. Кроме того, высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно использовать в качестве подсластителя не только для напитков, продуктов питания и другой продукции, предназначенной для потребления человеком, но также для кормов для животных и скота с улучшенными характеристиками.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, Rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 obtained in accordance with the present invention can be used as a high-intensity sweetener for the production of zero-calorie, reduced-calorie or diabetic beverages and food products with improved taste characteristics. It can also be used in beverages, foods, pharmaceuticals and other products in which sugar cannot be used. In addition, highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be used as a sweetener not only for beverages, foods and other products intended for human consumption, but also for animal feed and livestock with improved characteristics.

Высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4, полученный в соответствии с настоящим изобретением, можно применять в качестве подавителя пенообразования для призводства напитков с нулевой калорийностью, напитков с пониженной калорийностью или диабетических напитков и пищевых продуктов.Highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 obtained in accordance with the present invention can be used as a foam suppressor for the production of zero-calorie, reduced-calorie or diabetic beverages and food products.

Примеры потребляемых продуктов, в которых высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно использовать в качестве подслащивающего вещества, включают, без ограничений, алкогольные напитки, такие как водка, вино, пиво, ликер, саке и т. п.; натуральные соки; освежающие напитки; газированные безалкогольные напитки; диетические напитки; напитки с нулевой калорийностью; напитки и пищевые продукты с пониженной калорийностью; йогуртовые напитки; соки быстрого приготовления; быстрорастворимый кофе; порошковые напитки быстрого приготовления; консервированные продукты; сиропы; ферментированную соевую пасту; соевый соус; уксус; заправки; майонез; кетчупы; карри; суп; быстрорастворимый бульон; порошкообразный соевый соус; порошковый уксус; виды бисквитов; рисовый бисквит; крекеры; хлеб; шоколадные конфеты; карамель; конфеты; жевательную резинку; желе; пудинг; консервированные фрукты и овощи; свежие сливки; джем; мармелад; цветочную пасту; сухое молоко; мороженое; сорбет; овощи и фрукты в бутылках; консервированные и вареные бобы; мясо и продукты, отваренные в подслащенном соусе; сельскохозяйственные растительные пищевые продукты; морепродукты; ветчину; колбасу; рыбную ветчину; рыбную колбасу; рыбную пасту; рыбные продукты глубокой обжарки; сушеные морепродукты; замороженные пищевые продукты; консервированные морские водоросли; консервированное мясо; табак; лекарственные препараты; и многое другое. В принципе, он может иметь неограниченное применение.Examples of consumable products in which the highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be used as a sweetening agent, include, but are not limited to, alcoholic beverages such as vodka, wine, beer, liqueur, sake, etc.; natural juices; refreshing drinks; carbonated soft drinks; diet drinks; zero-calorie drinks; reduced-calorie drinks and foods; yogurt drinks; instant juices; instant coffee; instant powdered drinks; canned foods; syrups; Fermented soybean paste; Soy sauce; Vinegar; Dressings; Mayonnaise; Ketchups; Curry; Soup; Instant broth; Powdered soy sauce; Powdered vinegar; Types of biscuits; Rice cake; Crackers; Bread; Chocolates; Caramel; Candies; Chewing gum; Jelly; Pudding; Canned fruits and vegetables; Fresh cream; Jam; Marmalade; Flower paste; Powdered milk; Ice cream; Sorbet; Bottled fruits and vegetables; Canned and cooked beans; Meat and products boiled in sweetened sauce; Agricultural plant foods; Seafood; Ham; Sausage; Fish ham; Fish sausage; Fish paste; Deep-fried fish products; Dried seafood; Frozen foods; Canned seaweed; Canned meat; Tobacco; Medicines; And many more. In principle, it can have unlimited applications.

Примеры потребляемых продуктов, в которых высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы), в частности стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4 можно использовать в качестве модификатора запаха или ароматизатора с модифицирующими свойствами, включают, без ограничений, алкогольные напитки, такие как водка, вино, пиво, ликер, саке и т.д.; натуральные соки; освежающие напитки; газированные безалкогольные напитки; диетические напитки; напитки с нулевой калорийностью; Напитки и пищевые продукты с пониженной калорийностью; йогуртовые напитки; соки быстрого приготовления; быстрорастворимый кофе; порошковые напитки быстрого приготовления; консервированные продукты; сиропы; ферментированная соевая паста; соевый соус; уксус; заправка; майонез; кетчупы; карри; суп; быстрорастворимый бульон; порошкообразный соевый соус; порошковый уксус; виды бисквитов; рисовый бисквит; крекеры; хлеб; шоколадные конфеты; карамель; конфеты; жевательная резинка; желе; пудинг; консервированные фрукты и овощи; свежие сливки; джем; мармелад; цветочная паста; сухое молоко; мороженое; сорбет; овощи и фрукты в бутылках; консервированные и вареные бобы; мясо и продукты, отваренные в подслащенном соусе; сельскохозяйственные растительные пищевые продукты; морепродукты; ветчина; колбаса; рыбная ветчина; рыбная колбаса; рыбную пасту; рыбные продукты глубокой обжарки; сушеные морепродукты; замороженные пищевые продукты; консервированные морские водоросли; консервированное мясо; табак; лекарственные препараты; и многое другое. В принципе, он может иметь неограниченное применение.Examples of consumable products in which the highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 can be used as an odor modifier or flavoring agent with modifying properties, include, but are not limited to, alcoholic beverages such as vodka, wine, beer, liqueur, sake, etc.; natural juices; refreshing drinks; carbonated soft drinks; diet drinks; zero-calorie drinks; reduced-calorie beverages and foods; yogurt drinks; instant juices; instant coffee; instant powdered drinks; Canned foods; Syrups; Fermented soybean paste; Soy sauce; Vinegar; Dressing; Mayonnaise; Ketchups; Curry; Soup; Instant broth; Powdered soy sauce; Powdered vinegar; Types of biscuits; Rice cake; Crackers; Bread; Chocolates; Caramel; Candies; Chewing gum; Jelly; Pudding; Canned fruits and vegetables; Fresh cream; Jam; Marmalade; Flower paste; Powdered milk; Ice cream; Sorbet; Bottled fruits and vegetables; Canned and cooked beans; Meat and products boiled in sweetened sauce; Agricultural plant foods; Seafood; Ham; Sausage; Fish ham; Fish sausage; Fish paste; Deep-fried fish products; Dried seafood; Frozen foods; Canned seaweed; Canned meat; Tobacco; Medicines; and much more. In principle, it can have unlimited applications.

При производстве такой продукции, как продукты питания, напитки, фармацевтические препараты, косметические средства, столовые продукты и жевательная резинка, могут применяться традиционные способы, такие как смешивание, замешивание, растворение, маринование, пропитывание, перколяция, опрыскивание, распыление, настаивание и другие способы.In the production of products such as food, beverage, pharmaceutical, cosmetic, tableware and chewing gum, traditional methods such as mixing, kneading, dissolving, marinating, soaking, percolation, spraying, atomizing, infusion and other methods can be used.

Кроме того, высокоочищенный(-ые) целевой(-ые) стевиолгликозид(-ы) стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид M3 и/или ребаудиозид O4, полученный в настоящем изобретении, можно использовать в сухих или жидких формах.In addition, highly purified target steviol glycoside(s) steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 obtained in the present invention can be used in dry or liquid forms.

Высокоочищенный целевой стевиолгликозид можно добавлять до или после термической обработки пищевых продуктов. Количество высокоочищенного(-ых) целевого(-ых) стевиолгликозида(-ов), в частности стевиолмонозида, стевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозиа G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида М3 и/или ребаудиозида O4 зависит от цели использования. Как описано выше, его можно добавлять отдельно или в комбинации с другими соединениями.Highly purified target steviol glycoside can be added before or after thermal processing of food products. The amount of highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviol bioside A, steviol bioside B, steviol bioside C, steviol bioside D, steviol bioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, steviosin G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 depends on the intended use. As described above, it can be added alone or in combination with other compounds.

Настоящее изобретение также относится к усилению сладости в напитках с использованием стевиолмонозида, стевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида М3 и/или ребаудиозида O4 в качестве усилителя сладости, в котором стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид М3 и/или ребаудиозид O4 присутствует в концентрации, которая равна или ниже соответствующих им пороговых значений распознавания сладости.The present invention also relates to enhancing sweetness in beverages using steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 as a sweetness enhancer, in which steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 are present in a concentration that is equal to or below their respective sweetness recognition thresholds.

Используемый в настоящем документе термин «усилитель сладости» относится к соединению, способному усиливать или интенсифицировать восприятие сладкого вкуса в композиции, такой как напиток. Термин «усилитель сладости» синонимичен терминам «усилитель сладкого вкуса»,«интенсификатор сладости», «интенсификатор сладкого вкуса».As used herein, the term "sweetness enhancer" refers to a compound capable of enhancing or intensifying the perception of sweet taste in a composition, such as a beverage. The term "sweetness enhancer" is synonymous with the terms "sweetness enhancer," "sweetness intensifier," and "sweet taste enhancer."

Термин «пороговая концентрация распознавания сладости», в основном используемый в настоящем документе, означает наименьшую известную концентрацию сладкого соединения, воспринимаемую человеческим вкусом и составляющую, как правило, около 1,0% эквивалента сахарозы (1,0% SE). В основном усилители сладости могут усиливать или интенсифицировать сладкий вкус подсластителей, не имея сами по себе какого-либо заметного сладкого вкуса, если они присутствуют в пороговой концентрации распознавания сладости данного усилителя сладости или ниже нее; однако сами по себе усилители сладости могут обеспечивать сладкий вкус в концентрациях, превышающих их пороговую концентрацию распознавания сладости. Пороговая концентрация распознавания сладости специфична для конкретного усилителя и может изменяться в зависимости от матрицы напитка. Пороговую концентрацию распознавания сладости можно легко определить путем тестирования вкуса, повышая концентрации данного усилителя до тех пор, пока не будет обнаружено более 1,0% эквивалента сахарозы в данной матрице напитка. Концентрация, которая обеспечивает эквивалентность около 1,0% сахарозы, считается порогом распознавания сладости.The term "sweetness detection threshold concentration," as generally used herein, refers to the lowest known concentration of a sweet compound perceived by the human palate, typically around 1.0% sucrose equivalent (1.0% SE). In general, sweetness enhancers can enhance or intensify the sweet taste of sweeteners without having any noticeable sweet taste themselves when present at or below the sweetness detection threshold concentration of a given sweetness enhancer; however, sweetness enhancers themselves can provide a sweet taste at concentrations above their sweetness detection threshold concentration. The sweetness detection threshold concentration is specific to a particular enhancer and may vary depending on the beverage matrix. The sweetness detection threshold concentration can be readily determined by taste testing, increasing the concentrations of a given enhancer until more than 1.0% sucrose equivalent is detected in a given beverage matrix. The concentration that provides an equivalence of approximately 1.0% sucrose is considered the sweetness detection threshold.

В некоторых вариантах осуществления подсластитель присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 12% по массе, таком как, например, приблизительно 1,0% по массе, приблизительно 1,5% по массе, приблизительно 2,0% по массе, приблизительно 2,5% по массе, приблизительно 3,0% по массе, приблизительно 3,5% по массе, приблизительно 4,0% по массе, приблизительно 4,5% по массе, приблизительно 5,0% по массе, приблизительно 5,5% по массе, приблизительно 6,0% по массе, приблизительно 6,5% по массе, приблизительно 7,0% по массе, приблизительно 7,5% по массе, приблизительно 8,0% по массе, приблизительно 8,5% по массе, приблизительно 9,0% по массе, приблизительно 9,5% по массе, приблизительно 10,0% по массе, приблизительно 10,5% по массе, приблизительно 11,0% по массе, приблизительно 11,5% по массе или приблизительно 12,0% по массе.In some embodiments, the sweetener is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 12% by weight, such as, for example, about 1.0% by weight, about 1.5% by weight, about 2.0% by weight, about 2.5% by weight, about 3.0% by weight, about 3.5% by weight, about 4.0% by weight, about 4.5% by weight, about 5.0% by weight, about 5.5% by weight, about 6.0% by weight, about 6.5% by weight, about 7.0% by weight, about 7.5% by weight, about 8.0% by weight, about 8.5% by weight, about 9.0% by weight, about 9.5% by weight, about 10.0% by weight, about 10.5% by weight, about 11.0% by weight, approximately 11.5% by weight, or approximately 12.0% by weight.

В конкретном варианте осуществления подсластитель присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% из приблизительно 10%, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%, от приблизительно 3% до приблизительно 7% или от приблизительно 4% до приблизительно 6% по массе. В конкретном варианте осуществления подсластитель присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 8% по массе. В другом конкретном варианте осуществления подсластитель присутствует в напитке в количестве от приблизительно 2% до приблизительно 8% по массе.In a specific embodiment, the sweetener is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10%, such as, for example, from about 2% to about 8%, from about 3% to about 7%, or from about 4% to about 6% by weight. In a specific embodiment, the sweetener is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 8% by weight. In another specific embodiment, the sweetener is present in the beverage in an amount of from about 2% to about 8% by weight.

В одном варианте осуществления подсластитель представляет собой стандартный калорийный подсластитель. Подходящие подсластители включают, без ограничений, сахарозу, фруктозу, глюкозу, высокофруктозный кукурузный сироп и высокофруктозный крахмальный сироп.In one embodiment, the sweetener is a standard caloric sweetener. Suitable sweeteners include, but are not limited to, sucrose, fructose, glucose, high-fructose corn syrup, and high-fructose starch syrup.

В другом варианте осуществления подсластитель представляет собой эритрит.In another embodiment, the sweetener is erythritol.

В еще одном варианте осуществления подсластитель представляет собой редкий сахар. Подходящие редкие сахара включают, без ограничений, D-аллозу, D-псикозу, D-рибозу, D-тагатозу, L-глюкозу, L-фукозу, L-арабинозу, D-туранозу, D-лейкрозу и комбинации вышеуказанного.In another embodiment, the sweetener is a rare sugar. Suitable rare sugars include, but are not limited to, D-allose, D-psicose, D-ribose, D-tagatose, L-glucose, L-fucose, L-arabinose, D-turanose, D-leucrose, and combinations thereof.

Предполагается, что подсластитель может быть использован отдельно или в комбинации с другими подсластителями.It is intended that the sweetener may be used alone or in combination with other sweeteners.

В одном варианте осуществления редкий сахар представляет собой D-аллозу. В более конкретном варианте осуществления D-аллоза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In one embodiment, the rare sugar is D-allose. In a more specific embodiment, D-allose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В другом варианте осуществления редкий сахар представляет собой D-псикозу. В более конкретном варианте осуществления D-псикоза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In another embodiment, the rare sugar is D-psicose. In a more specific embodiment, D-psicose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В еще одном варианте осуществления редкий сахар представляет собой D-рибозу. В более конкретном варианте осуществления D-рибоза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In another embodiment, the rare sugar is D-ribose. In a more specific embodiment, D-ribose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В еще одном варианте осуществления редкий сахар представляет собой D-тагатозу. В более конкретном варианте осуществления D-тагатоза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In another embodiment, the rare sugar is D-tagatose. In a more specific embodiment, D-tagatose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В дополнительном варианте осуществления редкий сахар представляет собой L-глюкозу. В более конкретном варианте осуществления L-глюкоза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In a further embodiment, the rare sugar is L-glucose. In a more specific embodiment, L-glucose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В одном варианте осуществления редкий сахар представляет собой L-фукозу. В более конкретном варианте осуществления L-фукоза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In one embodiment, the rare sugar is L-fucose. In a more specific embodiment, L-fucose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В другом варианте осуществления редкий сахар представляет собой L-арабинозу. В более конкретном варианте осуществления L-арабиноза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In another embodiment, the rare sugar is L-arabinose. In a more specific embodiment, L-arabinose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В еще одном варианте осуществления редкий сахар представляет собой D-туранозу. В более конкретном варианте осуществления D-тураноза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In another embodiment, the rare sugar is D-turanose. In a more specific embodiment, D-turanose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

В еще одном варианте осуществления редким сахаром является D-лейкроза. В более конкретном варианте осуществления D-лейкроза присутствует в напитке в количестве от приблизительно 0,5% до приблизительно 10% по массе, таком как, например, от приблизительно 2% до приблизительно 8%.In another embodiment, the rare sugar is D-leucrose. In a more specific embodiment, D-leucrose is present in the beverage in an amount of from about 0.5% to about 10% by weight, such as, for example, from about 2% to about 8%.

Добавление усилителя сладости в концентрации, равной или ниже его порога распознавания сладости, увеличивает обнаруженную эквивалентность сахарозы в напитке, содержащем подсластитель и усилитель сладости, по сравнению с соответствующим напитком без усилителя сладости. Кроме того, сладость может быть увеличена на количество, превышающее обнаруживаемую сладость раствора, содержащего такую же концентрацию по меньшей мере одного усилителя сладости, без какого-либо подсластителя.Adding a sweetness enhancer at a concentration equal to or below its sweetness detection threshold increases the detectable sucrose equivalence in a beverage containing the sweetener and sweetness enhancer compared to a corresponding beverage without the sweetness enhancer. Furthermore, the sweetness may be increased by an amount greater than the detectable sweetness of a solution containing the same concentration of at least one sweetness enhancer, without any sweetener.

Соответственно, в настоящем изобретении также предложен способ усиления сладости напитка, содержащего подсластитель, и добавление усилителя сладости, выбранного из стевиолмонозида, cтевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида M3 и/или ребаудиозида O4 или комбинаций вышеперечисленного, где стевиолмонозид, стевиолмонозид A, стевиолбиозид A, стевиолбиозид B, стевиолбиозид C, стевиолбиозид D, стевиолбиозид E, рубузозид, дулькозид A, дулькозид C, дулькозид D, стевиозид A, стевиозид B, стевиозид C, стевиозид G, стевиозид H, ребаудиозид B2, ребаудиозид A4, ребаудиозид C, ребаудиозид C3, ребаудиозид C4, ребаудиозид C5, ребаудиозид C6, ребаудиозид E3, ребаудиозид E4, ребаудиозид E5, ребаудиозид E6, ребаудиозид E7, ребаудиозид D5, ребаудиозид D6, ребаудиозид D7, ребаудиозид D8, ребаудиозид H2, ребаудиозид H3, ребаудиозид H4, ребаудиозид H5, ребаудиозид H6, ребаудиозид K, ребаудиозид N2, ребаудиозид N3, ребаудиозид N4, ребаудиозид N5, ребаудиозид М3 и/или ребаудиозид O4 присутствуют в концентрации, которая равна или ниже пороговых значений распознавания сладости.Accordingly, the present invention also provides a method for enhancing the sweetness of a beverage containing a sweetener and adding a sweetness enhancer selected from steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 or combinations of the above, where steviol monoside, steviol monoside A, steviol bioside A, steviol bioside B, steviol bioside C, steviol bioside D, steviol bioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 are present in a concentration that is equal to or below sweetness recognition thresholds.

Добавление стевиолмонозида, стевиолмонозида A, стевиолбиозида A, стевиолбиозида B, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида М3 и/или ребаудиозида O4 в концентрации, равной или ниже порога распознавания сладости, в напиток, содержащим подсластитель, может увеличивать обнаруженную эквивалентность сахарозы от приблизительно 1,0% до приблизительно 5,0%, такую как, например, приблизительно 1,0%, приблизительно 1,5%, приблизительно 2,0%, приблизительно 2,5%, приблизительно 3,0%, приблизительно 3,5%, приблизительно 4,0%, приблизительно 4,5% или приблизительно 5,0%.Addition of steviol monoside, steviol monoside A, steviol bioside A, steviol bioside B, steviol bioside C, steviol bioside D, steviol bioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4 at a concentration equal to or below the sweetness detection threshold in a beverage containing a sweetener can increase the detected sucrose equivalence from about 1.0% to about 5.0%, such as, for example, about 1.0%, about 1.5%, about 2.0%, about 2.5%, about 3.0%, about 3.5%, about 4.0%, about 4.5% or about 5.0%.

Следующие примеры иллюстрируют предпочтительные варианты осуществления изобретения для получения высокоочищенного(-ых) целевого(-ых) стевиолгликозида(-ов), в частности стевиолмонозида, стевиолмонозида А, стевиолбиозида А, стевиолбиозида В, стевиолбиозида C, стевиолбиозида D, стевиолбиозида E, рубузозида, дулькозида A, дулькозида C, дулькозида D, стевиозида A, стевиозида B, стевиозида C, стевиозида G, стевиозида H, ребаудиозида B2, ребаудиозида A4, ребаудиозида C, ребаудиозида C3, ребаудиозида C4, ребаудиозида C5, ребаудиозида C6, ребаудиозида E3, ребаудиозида E4, ребаудиозида E5, ребаудиозида E6, ребаудиозида E7, ребаудиозида D5, ребаудиозида D6, ребаудиозида D7, ребаудиозида D8, ребаудиозида H2, ребаудиозида H3, ребаудиозида H4, ребаудиозида H5, ребаудиозида H6, ребаудиозида K, ребаудиозида N2, ребаудиозида N3, ребаудиозида N4, ребаудиозида N5, ребаудиозида М3 и/или ребаудиозида O4. Следует понимать, что изобретение не ограничивается описанными в примерах материалами, пропорциями, условиями и процедурами, которые являются лишь иллюстративными.The following examples illustrate preferred embodiments of the invention for obtaining highly purified target steviol glycoside(s), in particular steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3 and/or rebaudioside O4. It should be understood that the invention is not limited to the materials, proportions, conditions and procedures described in the examples, which are illustrative only.

ПРИМЕРЫEXAMPLES

ПРИМЕР 1EXAMPLE 1

Белковые последовательности сконструированных ферментов, используемых в биокаталитическом процессеProtein sequences of engineered enzymes used in a biocatalytic process

ПРИМЕР 2EXAMPLE 2

Экспрессия и состав варианта SuSy_At SEQ ID 1Expression and composition of the SuSy_At variant SEQ ID 1

Ген, кодирующий вариант SuSy_At SEQ ID 1 (ПРИМЕР 1), клонировали в экспрессионный вектор pLE1A17 (производное от pRSF-1 b, Novagen). Полученную плазмиду использовали для трансформации клеток E.coli BL21(DE3).The gene encoding the SuSy_At variant SEQ ID 1 (EXAMPLE 1) was cloned into the expression vector pLE1A17 (a derivative of pRSF-1 b, Novagen). The resulting plasmid was used to transform E. coli BL21(DE3) cells.

Клетки культивировали в среде ZYM505 (F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207-234) с добавлением канамицина (50 мг/л) при 37 °C. Экспрессию генов индуцировали в логарифмической фазе с помощью ИПТГ (0,2 мМ) и проводили при 30 °C и 200 об/мин в течение 16-18 часов.Cells were cultured in ZYM505 medium (F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207–234) supplemented with kanamycin (50 mg/L) at 37 °C. Gene expression was induced in log phase using IPTG (0.2 mM) and carried out at 30 °C and 200 rpm for 16–18 h.

Клетки собрали центрифугированием (3220 x g, 20 мин, 4 °C) и повторно суспендировали до оптической плотности 200 (измерено при 600 нм (OD₆₀₀)) с буферным раствором для лизиса клеток (100 мМ трис-HCl, pH 7,0; 2 мМ MgCl₂, ДНК нуклеазы 20 Ед/мл, лизоцима 0,5 мг/мл). Затем клетки разрушили с помощью ультразвука, а неочищенные экстракты отделили от продуктов распада клеток центрифугированием (18000 x g 40 мин, 4 °C). Супернатант стерилизовали фильтрованием через фильтр с размером пор 0,2 мкм и разбавили дистиллированной водой в пропорции 50:50 с получением ферментативно активного препарата.Cells were collected by centrifugation (3220 xg, 20 min, 4 °C) and resuspended to an optical density of 200 (measured at 600 nm (OD ₆₀₀ )) with cell lysis buffer (100 mM Tris-HCl, pH 7.0; 2 mM MgCl ₂ , DNA nuclease 20 U/ml, lysozyme 0.5 mg/ml). Cells were then disrupted by sonication, and the crude extracts were separated from cell debris by centrifugation (18,000 xg, 40 min, 4 °C). The supernatant was sterilized by filtration through a 0.2 μm filter and diluted with distilled water in a ratio of 50:50 to obtain the enzymatically active preparation.

Для ферментативно активных препаратов SuSy_At активность в единицах определяют следующим образом: 1 мЕд SuSy_At превращает более 1 нмоль сахарозы в фруктозу за 1 минуту. Анализ проводился при следующих условиях реакции: 30 °C, 50 мМ буферного раствора фосфата калия pH 7,0, 400 мМ сахарозы при t₀, 3 мМ MgCl₂ и 15 мМ уридиндифосфата (UDP).For enzymatically active preparations SuSy_At, the activity in units is determined as follows: 1 mU SuSy_At converts more than 1 nmol of sucrose to fructose in 1 minute. The assay was carried out under the following reaction conditions: 30 °C, 50 mM potassium phosphate buffer solution pH 7.0, 400 mM sucrose at t ₀ , 3 mM MgCl ₂ and 15 mM uridine diphosphate (UDP).

ПРИМЕР 3EXAMPLE 3

Экспрессия и состав варианта UGTSl2 SEQ ID 2Expression and composition of the UGTSl2 variant SEQ ID 2

Ген, кодирующий вариант UGTSl2 SEQ ID 2 (ПРИМЕР 1), клонировали в экспрессионный вектор pLE1A17 (производное pRSF-1 b, Novagen). Полученную плазмиду использовали для трансформации клеток E.coli BL21(DE3).The gene encoding the UGTSl2 variant SEQ ID 2 (EXAMPLE 1) was cloned into the expression vector pLE1A17 (a derivative of pRSF-1 b, Novagen). The resulting plasmid was used to transform E. coli BL21(DE3) cells.

Клетки культивировали в среде ZYM505 (F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207-234) с добавлением канамицина (50 мг/л) при 37 °C. Экспрессию генов индуцировали в логарифмической фазе с помощью ИПТГ (0,1 мМ) и проводили при 30 °C и 200 об/мин в течение 16-18 часов.Cells were cultured in ZYM505 medium (F. William Studier, Protein Expression and Purification 41 (2005) 207–234) supplemented with kanamycin (50 mg/L) at 37 °C. Gene expression was induced in log phase using IPTG (0.1 mM) and carried out at 30 °C and 200 rpm for 16–18 h.

Клетки собрали центрифугированием (3220 x g, 20 мин, 4 °C) и повторно суспендировали до оптической плотности 200 (измерено при 600 нм (OD₆₀₀)) с буферным раствором для лизиса клеток (100 мМ трис-HCl, pH 7,0; 2 мМ MgCl₂, ДНК нуклеазы 20 Ед/мл, лизоцима 0,5 мг/мл). Затем клетки разрушили с помощью ультразвука, а неочищенные экстракты отделили от продуктов распада клеток центрифугированием (18000 x g 40 мин, 4 °C). Супернатант стерилизовали фильтрованием через фильтр с размером пор 0,2 мкм и разбавили 1 M раствора сахарозы в пропорции 50:50 с получением ферментативно активного препарата.Cells were collected by centrifugation (3220 xg, 20 min, 4 °C) and resuspended to an optical density of 200 (measured at 600 nm (OD ₆₀₀ )) with cell lysis buffer (100 mM Tris-HCl, pH 7.0; 2 mM MgCl ₂ , DNA nuclease 20 U/ml, lysozyme 0.5 mg/ml). Cells were then disrupted by sonication, and the crude extracts were separated from cell debris by centrifugation (18,000 xg, 40 min, 4 °C). The supernatant was sterilized by filtration through a 0.2 μm filter and diluted 50:50 with 1 M sucrose solution to obtain the enzymatically active preparation.

Для ферментативно активных препаратов UGTSl2 активность в единицах определяют следующим образом: 1 мЕд UGTSl2 превращает более чем 1 нмоль ребаудиозида A (Реб. A) в ребаудиозид D (Реб. D) за 1 минуту. Анализ проводился при следующих условиях реакции: 30 °C, 50 мМ буферного раствора фосфата калия pH 7,0, 10 мМ Реб. A при t₀, 500 мМ сахарозы, 3 мМ MgCl₂, 0,25 мМ уридиндифосфата (UDP) и 3 Ед/мл SuSy_At.For enzymatically active UGTSl2 preparations, the activity in units is defined as follows: 1 mU UGTSl2 converts more than 1 nmol rebaudioside A (Reb. A) to rebaudioside D (Reb. D) in 1 minute. The assay was carried out under the following reaction conditions: 30 °C, 50 mM potassium phosphate buffer solution pH 7.0, 10 mM Reb. A at t ₀ , 500 mM sucrose, 3 mM MgCl ₂ , 0.25 mM uridine diphosphate (UDP) and 3 U/ml SuSy_At.

ПРИМЕР 4EXAMPLE 4

Экспрессия и состав варианта UGT76G1 SEQ ID 3Expression and composition of the UGT76G1 variant SEQ ID 3

Ген, кодирующий вариант UGT76G1 SEQ ID 3 (ПРИМЕР 1), клонировали в экспрессионный вектор pLE1A17 (производное pRSF-1 b, Novagen). Полученную плазмиду использовали для трансформации клеток E.coli BL21(DE3).The gene encoding the UGT76G1 variant SEQ ID 3 (EXAMPLE 1) was cloned into the expression vector pLE1A17 (a derivative of pRSF-1 b, Novagen). The resulting plasmid was used to transform E. coli BL21(DE3) cells.

Для ферментативно активных препаратов UGT76G1 активность в единицах определяют следующим образом: 1 мЕд UGT76G1 превращает более чем 1 нмоль ребаудиозида D (Реб. D) в ребаудиозид M (Реб. M) за 1 минуту. Анализ проводился при следующих условиях реакции: 30 °C, 50 мМ буферного раствора фосфата калия pH 7,0, 10 мМ Реб. D при t₀, 500 мМ сахарозы, 3 мМ MgCl₂, 0,25 мМ уридиндифосфата (UDP) и 3 Ед/мл SuSy_At.For enzymatically active UGT76G1 preparations, the activity in units is defined as follows: 1 mU UGT76G1 converts more than 1 nmol rebaudioside D (Reb. D) to rebaudioside M (Reb. M) in 1 minute. The assay was performed under the following reaction conditions: 30 °C, 50 mM potassium phosphate buffer solution pH 7.0, 10 mM Reb. D at t ₀ , 500 mM sucrose, 3 mM MgCl ₂ , 0.25 mM uridine diphosphate (UDP) and 3 U/ml SuSy_At.

ПРИМЕР 5EXAMPLE 5

Синтез ребаудиозида N2 и ребаудиозида O4 из ребаудиозида C в однореакторной реакции с одновременным добавлением UGTSl2, SuSy_At и UGT76G1.Synthesis of rebaudioside N2 and rebaudioside O4 from rebaudioside C in a one-pot reaction with simultaneous addition of UGTSl2, SuSy_At and UGT76G1.

Ребаудиозид N2 (реб. N2) и ребаудиозид O4 (реб. O4) синтезировали непосредственно из ребаудиозида C в однореакторной реакции (см. Фиг. 3а и Фиг. 3b) с использованием трех ферментов (см. ПРИМЕРЫ 1, 2, 3 и 4): UGTSl2 (вариант SEQ ID 2), SuSy_At (вариант SEQ ID 1) и UGT76G1 (вариант SEQ ID 3). Конечный реакционный раствор содержал 105 Ед/л UGTSl2, 405 Ед/л SuSy_At, 3 Ед/л UGT76G1, 5 мМ ребаудиозида C, 0,25 мМ уридиндифосфата (UDP), 1 M сахарозы, 4 мМ MgCl₂ и буферный раствор фосфата калия (pH 6,6). Сначала 207 мл дистиллированной воды смешали с 0,24 г MgCl_2•6H₂O, 103 г сахарозы, 9,9 мл 1,5 M буферного раствора фосфата калия (pH 6,6) и 15 г ребаудиозида C. После растворения компонентов температуру довели до 45 °C и добавили UGTSl2, SuSy_At, UGT76G1 и 39 мг UDP. Реакционную смесь инкубировали при 45 °C в течение 24 ч. Дополнительно добавляли 39 мг UDP через 8 часов и 18 часов. Содержание реб. O4, реб. N2, реб. K и реб. C в нескольких временных точках анализировали методом ВЭЖХ.Rebaudioside N2 (reb. N2) and rebaudioside O4 (reb. O4) were synthesized directly from rebaudioside C in a one-pot reaction (see Fig. 3a and Fig. 3b) using three enzymes (see EXAMPLES 1, 2, 3 and 4): UGTSl2 (variant SEQ ID 2), SuSy_At (variant SEQ ID 1) and UGT76G1 (variant SEQ ID 3). The final reaction solution contained 105 U/L UGTSl2, 405 U/L SuSy_At, 3 U/L UGT76G1, 5 mM rebaudioside C, 0.25 mM uridine diphosphate (UDP), 1 M sucrose, 4 mM _MgCl2 and potassium phosphate buffer solution (pH 6.6). First, 207 mL of distilled water were mixed with 0.24 g MgCl2 _• _6H2O , 103 g sucrose, 9.9 mL of 1.5 M potassium phosphate buffer (pH 6.6), and 15 g rebaudioside C. After dissolving the components, the temperature was raised to 45 °C, and UGTSl2, SuSy_At, UGT76G1, and 39 mg UDP were added. The reaction mixture was incubated at 45 °C for 24 h. An additional 39 mg UDP was added after 8 h and 18 h. The contents of reb. O4, reb. N2, reb. K, and reb. C were analyzed at several time points by HPLC.

Для анализа пробы инактивировали путем доведения реакционной смеси до показателя pH5,5 с помощью 17% H₃PO₄, а затем кипятили в течение 10 минут. Полученные образцы отфильтровали, фильтраты разбавляли 10 раз и использовали в качестве образцов для ВЭЖХ анализа. ВЭЖХ анализ проводили на системе ВЭЖХ Agilent HP 1200, состоящей из насоса, колоночного термостата, автоматического пробоотборника, УФ-детектора с возможностью фоновой коррекции и системы сбора данных. Аналиты разделяли с использованием прибора Agilent Poroshell 120 SB- C18, 4.6 мм x 150 мм, 2,7 мкм при 40 °C. Подвижная фаза состояла из двух предварительно подготовленных смесей:For analysis, samples were inactivated by adjusting the reaction mixture to pH 5.5 with 17% H ₃ PO ₄ and then boiling for 10 min. The resulting samples were filtered, and the filtrates were diluted 10-fold and used as samples for HPLC analysis. HPLC analysis was performed on an Agilent HP 1200 HPLC system consisting of a pump, column thermostat, autosampler, UV detector with background correction capability, and a data acquisition system. Analytes were separated using an Agilent Poroshell 120 SB-C18, 4.6 mm x 150 mm, 2.7 μm instrument at 40 °C. The mobile phase consisted of two pre-prepared mixtures:

- предварительно приготовленная смесь 1, содержащая 75 % 10 мМ фосфатного буферного раствора (pH2,6) и 25 % ацетонитрила, и- pre-prepared mixture 1 containing 75% 10 mM phosphate buffer solution (pH2.6) and 25% acetonitrile, and

- предварительно приготовленная смесь 2, содержащая 68 % 10 мМ фосфатного буферного раствора (pH 2,6) и 32% ацетонитрила.- pre-prepared mixture 2 containing 68% 10 mM phosphate buffer solution (pH 2.6) and 32% acetonitrile.

Градиент элюирования начинали со смеси 1, заменяли на смесь 2 до 50% через 12,5 минут, заменяли на смесь 2 до 100% через 13 минут. Общее время анализа составило 45 минут. Температуру колонки поддерживали на уровне 40 °C. Объем вводимой пробы составлял 5 мкл. Виды ребаудиозида обнаруживали с помощью УФ при 210 нм.The elution gradient began with mixture 1, was replaced with mixture 2 at 50% after 12.5 minutes, and was then replaced with mixture 2 at 100% after 13 minutes. The total analysis time was 45 minutes. The column temperature was maintained at 40°C. The injected sample volume was 5 µL. Rebaudioside species were detected using UV at 210 nm.

В таблице 3 для каждого момента времени показано превращение Реб. C в идентифицированные виды ребаудиозида (процентное содержание по площади). Хроматограммы ребаудиозида C и реакционной смеси через 96 часов показаны на Фиг. 4 и Фиг. 5 соответственно. Специалистам в данной области будет понятно, что время удерживания может иногда изменяться в зависимости от изменений в растворителе и/или оборудовании.Table 3 shows the conversion of Reb. C to the identified rebaudioside species (area percentage) for each time point. Chromatograms of rebaudioside C and the reaction mixture after 96 hours are shown in Fig. 4 and Fig. 5, respectively. Those skilled in the art will appreciate that retention times can sometimes vary depending on changes in the solvent and/or equipment.

Таблица 3Table 3

Биотрансформация реб. C в реб. N2 и реб. O4Biotransformation of reb. C in reb. N2 and reb. O4

Время, чTime, h % превращения из реб. C% conversion from reb. C Реб. O4Child O4 Реб. N2Child No. 2 Реб. KReb. K Реб. CChild C 00 00 00 00 100100 2424 4,44.4 34,234.2 31,731.7 29,629.6 9696 12,512.5 72,472.4 15,115.1 00

ПРИМЕР 6EXAMPLE 6

Очистка ребаудиозида N2 и O4Purification of rebaudioside N2 and O4

40 мл реакционной смеси из ПРИМЕРА 5 (через 96 ч) инактивировали путем доведения pH до 5,5 спомощью H₃PO₄, а затем прокипятили в течение 10 минут и отфильтровали. Фильтрат загрузили в колонку, содержащую 30 мл смолы YWD03 (Cangzhou Yuanwei, Китай), предварительно уравновешенной водой. Смолу промыли в 150 мл теплой воды (35 °C) и водный фильтрат из этой стадии удалили.40 ml of the reaction mixture from EXAMPLE 5 (after 96 h) was inactivated by adjusting the pH to 5.5 withwith the help of H₃PO₄, then boiled for 10 minutes and filtered. The filtrate was loaded onto a column containing 30 ml of YWD03 resin (Cangzhou Yuanwei, China), pre-equilibrated with water. The resin was washed with 150 ml of warm water (35°C), and the aqueous filtrate from this step was discarded.

Стевиолгликозиды элюировали с колонки смолы YWD03 путем элюирования с 200 мл 70% об./об. этанола/воды. Фильтрат из этой стадии собрали и подвергали выпариванию на роторном испарителе до тех пор, пока объем образца не достиг приблизительно 25 мл. Этот концентрированный образец подвергли дополнительной очистке с использованием препаративной ВЭЖХ в условиях, приведенных ниже в таблице 4.Steviol glycosides were eluted from the YWD03 resin column by elution with 200 mL of 70% v/v ethanol/water. The filtrate from this step was collected and rotary evaporated until the sample volume reached approximately 25 mL. This concentrated sample was further purified using preparative HPLC under the conditions listed in Table 4 below.

Фракции препаративной ВЭЖХ, которые соответствовали отдельным соединениям из множества прогонов, объединили в соответствии с временем удерживания. Образцы высушили методом сублимации с получением 60 мг ребаудиозида N2 и 10 мг ребаудиозида O4.Preparative HPLC fractions corresponding to individual compounds from multiple runs were pooled according to retention time. Samples were freeze-dried to yield 60 mg of rebaudioside N2 and 10 mg of rebaudioside O4.

Таблица 4Table 4

Условия проведения препаративной ВЭЖХConditions for performing preparative HPLC

КолонкаColumn Agilent Poroshell 120 SB-C18, 4,6 мм x 150 мм, 2,7μмAgilent Poroshell 120 SB-C18, 4.6 mm x 150 mm, 2.7μm ТемператураTemperature 40 °C40 °C Подвижная фазаMobile phase B - вода
C - ацетонитрилB - water
C - acetonitrile ГрадиентGradient Время (мин)Time (min) СWITH ВIN 00 2525 7575 10,010.0 2525 7575 13,013.0 5050 5050 17,017.0 5050 5050 Скорость потокаFlow rate 1 мл/мин1 ml/min Ввод пробыSample introduction 10 мкл10 µl Время остановкиStop time 22 мин22 min Время после обработкиTime after processing 10 мин10 min Температура автоматического пробоотборникаAutomatic sampler temperature Температура окружающей средыAmbient temperature ОбнаружениеDetection УФ при 210 нмUV at 210 nm

Хроматограммы очищенных реб. N2 и реб. O4 показаны на Фиг. 6а и 6b соответственно. Специалистам в данной области будет понятно, что время удерживания может иногда изменяться в зависимости от изменений в растворителе и/или оборудовании.Chromatograms of purified reb. N2 and reb. O4 are shown in Fig. 6a and 6b, respectively. Those skilled in the art will appreciate that retention times can sometimes vary depending on changes in the solvent and/or equipment.

ПРИМЕР 7EXAMPLE 7

Выявление структуры ребаудиозида N2Elucidation of the structure of rebaudioside N2

Эксперименты ЯМР проводили на спектрометре Bruker 500 МГц с образцом, растворенным в пиридине-d5. Наряду с сигналами от образца наблюдались сигналы от пиридин-d5 при δ_C 123,5, 135,5, 149,9 м.д. и δ_H 7,19, 7,55, 8,71 м.д.NMR experiments were performed on a Bruker 500 MHz spectrometer with a sample dissolved in pyridine-d5. Along with the signals from the sample, signals from pyridine-d5 were observed at δ _C 123.5, 135.5, 149.9 ppm and δ _H 7.19, 7.55, 8.71 ppm.

¹H-ЯМР спектр ребаудиозида N2, зарегистрированный в пиридине-d₅, подтвердил превосходное качество образца (см. Фиг. 7а). HSQC (см. Фиг. 8а) показывает наличие экзометиленовой группы в сахарной области с соединением большого диапазона с C-15, наблюдаемым в H,H-COSY (Фиг. 9а). Другие сигналы четвертичных атомов углерода в глубоком поле (C-13, C-16 и C-19) обнаруживаются при помощи HMBC (Фиг. 10а). Корреляция сигналов в HSQC, HMBC и H,H-COSY показывает наличие стевиолгликозида со следующей структурой агликона (см. Фиг. 1е): ¹ H-NMR spectrum of rebaudioside N2 recorded in pyridine-d ₅ confirmed the excellent quality of the sample (see Fig. 7a). HSQC (see Fig. 8a) shows the presence of an exomethylene group in the sugar region with a long-range connection to C-15 observed in H,H-COSY (Fig. 9a). Other deep-field signals of quaternary carbon atoms (C-13, C-16 and C-19) are detected by HMBC (Fig. 10a). Correlation of signals in HSQC, HMBC and H,H-COSY indicates the presence of a steviol glycoside with the following aglycone structure (see Fig. 1e):

Спектр HSQC ребаудиозида N2 также демонстрирует наличие дублета метила (J=6,3 Гц) с H,H-COSY корреляцией с сигналом в сахарной области. HSQC также показывает присутствие шести аномерных сигналов, пять из этих аномерных сигналов имеют константы связывания около 8 Гц, а широкие сигналы их сахарной связи позволяют идентифицировать эти шесть сахаров как βD-глюкозиды. Шестой аномерный сигнал представляет собой широкий синглет, а H,H-COSY корреляция с дублетом метила позволяет идентифицировать этот сахар как α-L-рамнозу.The HSQC spectrum of rebaudioside N2 also reveals a methyl doublet (J = 6.3 Hz) with an H,H-COSY correlation with the signal in the sugar region. HSQC also reveals the presence of six anomeric signals; five of these anomeric signals have binding constants around 8 Hz, and the broad signals of their sugar bonds allow these six sugars to be identified as βD-glucosides. The sixth anomeric signal is a broad singlet, and the H,H-COSY correlation with the methyl doublet allows this sugar to be identified as α-L-rhamnose.

Наблюдение аномерных протонов в комбинации с HSQC и HMBC показывает сахарную связь и корреляцию с агликоном. Определение сахарной последовательности было подтверждено с использованием комбинации HSQC-TOCSY (Фиг. 11а) и HSQC.Observation of anomeric protons in combination with HSQC and HMBC reveals a sugar linkage and correlation with the aglycone. The sugar sequence was confirmed using a combination of HSQC-TOCSY (Fig. 11a) and HSQC.

В целом результаты описанных выше экспериментов ЯМР использовали для определения химических сдвигов протонов и атомов углерода в структуре ребаудиозида N2 (см. таблицу 5).In general, the results of the NMR experiments described above were used to determine the chemical shifts of protons and carbon atoms in the structure of rebaudioside N2 (see Table 5).

Таблица 5Table 5

Химические сдвиги ребаудиозида N2Chemical shifts of rebaudioside N2

ПоложениеPosition δ_C [м.д.]δ _C [ppm] δ_H [м.д.]δ _H [ppm] J [Гц]/ (INT)J [Hz]/ (INT) HMBC (H -> C)HMBC (H -> C) Фрагмент агликонаAglycone fragment 11 39,939.9 тT 0,67
1,620.67
1.62 m
mm
m 22 19,119.1 tt 1,41
2,061.41
2.06 m
mm
m 33 37,037.0 tt 1,07
2,841.07
2.84 m
mm
m 44 44,144.1 ss -- 55 56,956.9 dd 0,960.96 mm 66 21,421.4 tt 1,92
2,171.92
2.17 m
mm
m 77 41,241.2 tt 1,25
1,441.25
1.44 m
mm
m 88 42,842.8 ss -- 99 53,853.8 dd 0,840.84 mm 1010 39,039.0 ss -- 1111 20,220.2 tt 1,60
1,631.60
1.63 m
mm
m 1212 37,937.9 tt 1,98
2,131.98
2.13 m
mm
m 1313 86,286.2 ss -- 1414 42,842.8 tt 1,95
2,391.95
2.39 d
dd
d 11,0
11,011.0
11.0 1515 47,647.6 tt 1,99
2,101.99
2.10 d
dd
d 15,8
15,815.8
15.8 7, 8, 9, 147, 8, 9, 14 1616 154,0154.0 ss -- 1717 104,4104.4 tt 5,04
5,635.04
5.63 br s
br sbr s
br s 13, 15, 1613, 15, 16 1818 28,728.7 qq 1,411.41 ss (3H)(3H) 3, 4, 5, 193, 4, 5, 19 1919 175,4175.4 ss -- 2020 16,216.2 qq 1,011.01 ss (3H)(3H) 1, 5, 9, 101, 5, 9, 10

Таблица 5 (продолжение)Table 5 (continued)

ПоложениеPosition δ_C [м.д.]δ _C [ppm] δ_H [м.д.]δ _H [ppm] J [Гц]/ (Int)J [Hz]/ (Int) HMBC (H -> C)HMBC (H -> C) Фрагмент сахараA fragment of sugar Сахар I: β- D-ГлюкопиранозидSugar I: β-D-Glucopyranoside 1ⁱ 1 ⁱ 97,797.7 dd 4,994.99 dd 7,77.7 1313 2ⁱ 2 ⁱ 75,375.3 dd 4,274.27 mm 3ⁱ 3 ⁱ 89,189.1 dd 4,234.23 mm 4ⁱ 4 ⁱ 69,169.1 dd 4,034.03 mm 5ⁱ 5 ⁱ 77,077.0 dd 3,633.63 mm 6ⁱ 6 ⁱ 61,661.6 tt 4,10
4,274.10
4.27 m
mm
m Сахар II: α- L-рамнопиранозидSugar II: α-L-rhamnopyranoside 1ⁱⁱ 1 ⁱⁱ 101,1101.1 dd 6,506.50 br sbr s 2ⁱ 2 ⁱ 2ⁱⁱ 2 ⁱⁱ 71,871.8 dd 4,844.84 mm 3ⁱⁱ 3 ⁱⁱ 72,072.0 dd 4,564.56 mm 4ⁱⁱ 4 ⁱⁱ 73,373.3 dd 4,264.26 mm 5ⁱⁱ 5 ⁱⁱ 69,069.0 dd 4,874.87 mm 6ⁱⁱ 6 ⁱⁱ 18,418.4 qq 1,711.71 dd 6,36.3 Сахар III: β- D-ГлюкопиранозидSugar III: β-D-Glucopyranoside 1ⁱⁱⁱ 1 ⁱⁱⁱ 104,0104.0 dd 5,135.13 dd 8,18.1 3ⁱ 3 ⁱ 2ⁱⁱⁱ 2 ⁱⁱⁱ 74,874.8 dd 4,004.00 mm 3ⁱⁱⁱ 3 ⁱⁱⁱ 78,078.0 dd 4,144.14 mm 4ⁱⁱⁱ 4 ⁱⁱⁱ 71,371.3 dd 4,054.05 mm 5ⁱⁱⁱ 5 ⁱⁱⁱ 78,078.0 dd 3,983.98 mm 6ⁱⁱⁱ 6 ⁱⁱⁱ 62,062.0 tt 4,20
4,544.20
4.54 m
mm
m Сахар IV: β- D-ГлюкопиранозидSugar IV: β-D-Glucopyranoside 1^iv 1 ^iv 92,692.6 dd 6,216.21 dd 7,77.7 1919 2^iv 2 ^iv 77,077.0 dd 4,474.47 mm 3^iv 3 ^iv 87,787.7 dd 4,224.22 mm 4^iv 4 ^iv 68,668.6 dd 4,134.13 mm 5^iv 5 ^IV 78,378.3 dd 3,803.80 mm 6^iv 6 ^IV 61,761.7 tt 4,03
4,234.03
4.23 m
mm
m Сахар V: β- D-ГлюкопиранозидSugar V: β-D-Glucopyranoside 1^v 1 ^v 103,4103.4 dd 5,725.72 dd 8,18.1 2^iv 2 ^iv 2^v 2 ^v 75,475.4 dd 3,983.98 mm 3^v 3 ^v 78,078.0 dd 4,074.07 mm 4^v 4 ^v 71,071.0 dd 4,104.10 mm 5^v 5 ^v 78,378.3 dd 4,004.00 mm 6^v 6 ^v 61,561.5 tt 4,19
4,534.19
4.53 m
mm
m

Таблица 5 (продолжение)Table 5 (continued)

ПоложениеPosition δ_C [м.д.]δ _C [ppm] δ_H [м.д.]δ _H [ppm] J [Гц]/ (Int)J [Hz]/ (Int) HMBC (H -> C)HMBC (H -> C) Фрагмент сахараA fragment of sugar Сахар VI: β- D-ГлюкопиранозидSugar VI: β-D-Glucopyranoside 1^vi 1 ^vi 104,3104.3 dd 5,305:30 dd 7,77.7 3^iv 3 ^iv 2^vi 2 ^vi 75,275.2 dd 4,004.00 mm 3^vi 3 ^vi 78,178.1 dd 4,174.17 mm 4^vi 4 ^vi 71,371.3 dd 4,094.09 mm 5^vi 5 ^vi 77,777.7 dd 3,973.97 mm 6^vi 6 ^vi 61,761.7 tt 4,20
4,284.20
4.28 m
mm
m

Корреляция всех результатов ЯМР указывает на ребаудиозид N2 с пятью β-D-глюкозами и одной α-L-рамнозой, присоединенными к агликон стевиолу, как показывает следующая химическая структура (см. Фиг. 1а и 1b):Correlation of all NMR results points to rebaudioside N2 with five β-D-glucoses and one α-L-rhamnose attached to the aglycone steviol, as shown by the following chemical structure (see Fig. 1a and 1b):

Анализ методом ЖХМС (Фиг. 12а и Фиг. 12b) ребаудиозида N2 показал наличие иона [M-H]^- при m/z 1273,0 в хорошем соответствии с ожидаемой молекулярной формулой C₅₆H₉₀O₃₂(рассчитано для иона [C₅₆H₈₉O₃₂]^- _:Ошибка 1273,5 < 0.05%). Данные МС подтверждают, что ребаудиозид N2 имеет молекулярную формулу C₅₆H₉₀O₃₂. Анализ методом ЖХМС выполняли в следующих условиях, перечисленных в таблице 6.LCMS analysis (Fig. 12a and Fig. 12b) of rebaudioside N2 showed the presence of [MH] ^- ion at m/z 1273.0 in good agreement with the expected molecular formula of C ₅₆ H ₉₀ O ₃₂ (calculated for [C ₅₆ H ₈₉ O ₃₂ ] ^- ion _: Error 1273.5 < 0.05%). The MS data confirm that rebaudioside N2 has the molecular formula of C ₅₆ H ₉₀ O ₃₂ . LCMS analysis was performed under the following conditions listed in Table 6.

Таблица 6Table 6

Условия для анализа методом ЖХМСConditions for LCMS analysis

КолонкаColumn Agilent Poroshell 120 SB-C18, 4,6 мм x 150 мм, 2,7 μмAgilent Poroshell 120 SB-C18, 4.6 mm x 150 mm, 2.7 μm ТемператураTemperature 40°C40°C Подвижная фазаMobile phase А: Предварительно подготовленный раствор подвижной фазы
- 25% ацетонитрила: 75% муравьиной кислоты (0,1% в воде)
В: Предварительно подготовленный раствор подвижной фазы
- 32% ацетонитрила: 68% муравьиной кислоты (0,1% в воде) A: Pre-prepared mobile phase solution
- 25% acetonitrile: 75% formic acid (0.1% in water)
B: Pre-prepared mobile phase solution
- 32% acetonitrile: 68% formic acid (0.1% in water) ГрадиентGradient Время (мин)Time (min) A (%)A (%) B (%)B (%) 00 100100 00 12,012.0 100100 00 12,512.5 5050 5050 13,013.0 00 100100 60,060.0 00 100100 Скорость потокаFlow rate 0,5 мл/мин0.5 ml/min Ввод пробыSample introduction 2 μл2 μl Время анализаAnalysis time 45 мин45 min Время после обработкиTime after processing 5 мин5 min Температура автоматического пробоотборникаAutomatic sampler temperature Температура окружающей средыAmbient temperature ОбнаружениеDetection МСД в отрицательном режиме сканированияMSD in negative scan mode Настройка МСДSetting up MSD Режим: ES-API, отрицательная полярность
Поток сушильного газа: 13,0 л/мин
Давление распылителя: 30 фунтов/кв. дюйм изб.
Температура сушильного газа: 270°C
Фрагментор: 50 В
Диапазоны сканирования: От 500 до 1500 массыMode: ES-API, negative polarity
Drying gas flow: 13.0 l/min
Spray Pressure: 30 psig
Drying gas temperature: 270°C
Fragmenter: 50 V
Scanning ranges: From 500 to 1500 mass Подготовка образцовSample preparation 1 мг/мл (30% ACN в воде)1 mg/ml (30% ACN in water)

ПРИМЕР 8EXAMPLE 8

Выявление структуры ребаудиозида O4Elucidation of the structure of rebaudioside O4

¹H-ЯМР спектр ребаудиозида O4, зарегистрированный в пиридине d₅, подтвердил превосходное качество образца (см. Фиг. 7b). HSQC (см. Фиг. 8b) показывает наличие экзометиленовой группы в сахарной области с соединением большого диапазона с C-15, наблюдаемым в H,H-COSY (Фиг. 9b). Другие сигналы четвертичных атомов углерода в глубоком поле (C-13, C-16 и C-19) обнаруживаются при помощи HMBC (Фиг. 10b). Корреляция сигналов в HSQC, HMBC и H,H-COSY показывает наличие стевиолгликозида со следующей структурой агликона (см. Фиг. 1е): ¹ H-NMR spectrum of rebaudioside O4 recorded in pyridine d ₅ confirmed the excellent quality of the sample (see Fig. 7b). HSQC (see Fig. 8b) shows the presence of an exomethylene group in the sugar region with a long-range connection to C-15 observed in H,H-COSY (Fig. 9b). Other deep-field signals of quaternary carbon atoms (C-13, C-16 and C-19) are detected by HMBC (Fig. 10b). Correlation of signals in HSQC, HMBC and H,H-COSY indicates the presence of a steviol glycoside with the following aglycone structure (see Fig. 1e):

Спектр HSQC ребаудиозида O4 также демонстрирует наличие дублета метила (J=6,3 Гц) с H,H-COSY корреляцией с сигналом в сахарной области. В HSQC также показано присутствие семи аномерных сигналов, шесть из этих аномерных сигналов имеют константы связывания около 8 Гц, а широкие сигналы их сахарной связи позволяют идентифицировать эти шесть сахаров как βD-глюкозиды. Седьмой аномерный сигнал представляет собой широкий синглет, а H,H-COSY корреляция с дублетом метила позволяет идентифицировать этот сахар как α-L-рамнозу.The HSQC spectrum of rebaudioside O4 also reveals a methyl doublet (J = 6.3 Hz) with an H,H-COSY correlation with the signal in the sugar region. HSQC also reveals the presence of seven anomeric signals; six of these anomeric signals have binding constants around 8 Hz, and the broad signals of their sugar bonds allow these six sugars to be identified as βD-glucosides. The seventh anomeric signal is a broad singlet, and the H,H-COSY correlation with the methyl doublet allows this sugar to be identified as α-L-rhamnose.

Наблюдение аномерных протонов в комбинации с HSQC и HMBC показывает сахарную связь и корреляцию с агликоном. Определение сахарной последовательности было подтверждено с использованием комбинации HSQC-TOCSY (Фиг. 11b) и HSQC.Observation of anomeric protons in combination with HSQC and HMBC reveals a sugar linkage and correlation with the aglycone. The sugar sequence was confirmed using a combination of HSQC-TOCSY (Fig. 11b) and HSQC.

Результаты вышеописанных экспериментов ЯМР использовали для определения химических сдвигов протонов и атомов углерода структуры ребаудиозида O4 (см. таблицу 7).The results of the above NMR experiments were used to determine the chemical shifts of protons and carbon atoms of the rebaudioside O4 structure (see Table 7).

Таблица 7Table 7

Химические сдвиги ребаудиозида O4Chemical shifts of rebaudioside O4

ПоложениеPosition δ_C [м.д.]δ _C [ppm] δ_H [м.д.]δ _H [ppm] J [Гц]/ (INT)J [Hz]/ (INT) HMBC (H -> C)HMBC (H -> C) Фрагмент агликонаAglycone fragment 11 40,040.0 tt 0,67
1,630.67
1.63 m
mm
m 22 19,019.0 tt 1,40
2,061.40
2.06 m
mm
m 33 37,037.0 tt 1,07
2,871.07
2.87 m
mm
m 44 44,444.4 ss -- 55 56,956.9 dd 0,960.96 mm 66 21,321.3 tt 1,97
2,191.97
2.19 m
mm
m 77 41,341.3 tt 1,28
1,461.28
1.46 m
mm
m 88 42,142.1 ss -- 99 53,553.5 dd 0,840.84 mm 1010 39,039.0 ss -- 1111 20,020.0 tt 1,60
1,621.60
1.62 m
mm
m 1212 38,138.1 tt 2,01
2,132.01
2.13 m
mm
m 1313 86,186.1 ss -- 1414 42,642.6 tt 1,99
2,361.99
2.36 d
dd
d 11,2
11,211.2
11.2 1515 47,647.6 tt 2,01
2,142.01
2.14 d
dd
d 15,8
15,815.8
15.8 7, 8, 9, 147, 8, 9, 14 1616 153,9153.9 ss -- 1717 104,5104.5 tt 5,05
5,625.05
5.62 br s
br sbr s
br s 13, 15, 1613, 15, 16 1818 28,528.5 qq 1,421.42 ss (3H)(3H) 3, 4, 5, 193, 4, 5, 19 1919 175,3175.3 ss -- 2020 16,116.1 qq 1,011.01 ss (3H)(3H) 1, 5, 9, 101, 5, 9, 10

Таблица 7 (продолжение)Table 7 (continued)

ПоложениеPosition δ_C [м.д.]δ _C [ppm] δ_H [м.д.]δ _H [ppm] J [Гц]/ (Int)J [Hz]/ (Int) HMBC (H -> C)HMBC (H -> C) Фрагмент сахараA fragment of sugar Сахар I: β- D-ГлюкопиранозидSugar I: β-D-Glucopyranoside 1ⁱ 1 ⁱ 97,797.7 dd 4,924.92 dd 7,77.7 1313 2ⁱ 2 ⁱ 75,575.5 dd 4,224.22 mm 3ⁱ 3 ⁱ 91,091.0 dd 4,024.02 mm 4ⁱ 4 ⁱ 70,170.1 dd 4,014.01 mm 5ⁱ 5 ⁱ 76,776.7 dd 3,553.55 mm 6ⁱ 6 ⁱ 70,270.2 tt 3,84
4,983.84
4.98 m
mm
m Сахар II: α- L-рамнопиранозидSugar II: α-L-rhamnopyranoside 1ⁱⁱ 1 ⁱⁱ 101,0101.0 dd 6,506.50 br sbr s 2ⁱ 2 ⁱ 2ⁱⁱ 2 ⁱⁱ 72,172.1 dd 4,814.81 mm 3ⁱⁱ 3 ⁱⁱ 72,172.1 dd 4,554.55 mm 4ⁱⁱ 4 ⁱⁱ 73,273.2 dd 4,274.27 mm 5ⁱⁱ 5 ⁱⁱ 69,169.1 dd 4,874.87 mm 6ⁱⁱ 6 ⁱⁱ 18,518.5 qq 1,681.68 dd 6,36.3 Сахар III: β- D-ГлюкопиранозидSugar III: β-D-Glucopyranoside 1ⁱⁱⁱ 1 ⁱⁱⁱ 104,6104.6 dd 5,025.02 dd 8,18.1 3ⁱ 3 ⁱ 2ⁱⁱⁱ 2 ⁱⁱⁱ 74,674.6 dd 3,963.96 mm 3ⁱⁱⁱ 3 ⁱⁱⁱ 77,977.9 dd 4,134.13 mm 4ⁱⁱⁱ 4 ⁱⁱⁱ 71,671.6 dd 3,913.91 mm 5ⁱⁱⁱ 5 ⁱⁱⁱ 78,078.0 dd 3,963.96 mm 6ⁱⁱⁱ 6 ⁱⁱⁱ 61,861.8 tt 4,30
4,504:30
4.50 m
mm
m Сахар IV: β- D-ГлюкопиранозидSugar IV: β-D-Glucopyranoside 1^iv 1 ^iv 104,1104.1 dd 4,764.76 dd 7,77.7 6ⁱ 6 ⁱ 2^iv 2 ^iv 75,375.3 dd 3,963.96 mm 3^iv 3 ^iv 78,178.1 dd 4,214.21 mm 4^iv 4 ^iv 70,970.9 dd 4,274.27 mm 5^iv 5 ^IV 77,877.8 dd 3,883.88 mm 6^iv 6 ^IV 61,861.8 tt 4,28
4,364.28
4.36 m
mm
m Сахар V: β- D-ГлюкопиранозидSugar V: β-D-Glucopyranoside 1^v 1 ^v 92,592.5 dd 6,206.20 dd 8,18.1 1919 2^v 2 ^v 77,177.1 dd 4,474.47 mm 3^v 3 ^v 88,088.0 dd 4,224.22 mm 4^v 4 ^v 68,768.7 dd 4,144.14 mm 5^v 5 ^v 78,278.2 dd 3,793.79 mm 6^v 6 ^v 61,461.4 tt 4,20
4,334.20
4.33 m
mm
m

Таблица 7 (продолжение)Table 7 (continued)

ПоложениеPosition δ_C [м.д.]δ _C [ppm] δ_H [м.д.]δ _H [ppm] J [Гц]/ (Int)J [Hz]/ (Int) HMBC (H -> C)HMBC (H -> C) Фрагмент сахараA fragment of sugar Сахар VI: β- D-ГлюкопиранозидSugar VI: β-D-Glucopyranoside 1^vi 1 ^vi 103,5103.5 dd 5,755.75 dd 7,77.7 2^v 2 ^v 2^vi 2 ^vi 75,575.5 dd 3,963.96 mm 3^vi 3 ^vi 78,178.1 dd 4,284.28 mm 4^vi 4 ^vi 72,372.3 dd 4,084.08 mm 5^vi 5 ^vi 78,178.1 dd 3,953.95 mm 6^vi 6 ^vi 62,862.8 tt 4,35
4,564.35
4.56 m
mm
m Сахар VII: β- D-ГлюкопиранозидSugar VII: β-D-Glucopyranoside 1^vii 1 ^vii 104,2104.2 dd 5,315.31 dd 7,87.8 3^v 3 ^v 2^vii 2 ^vii 75,075.0 dd 4,064.06 mm 3^vii 3 ^vii 77,777.7 dd 4,224.22 mm 4^vii 4 ^vii 71,371.3 dd 4,114.11 mm 5^vii 5 ^vii 78,078.0 dd 4,014.01 mm 6^vii 6 ^vii 62,062.0 tt 4,52
4,564.52
4.56 m
mm
m

Корреляция всех результатов ЯМР указывает на ребаудиозид O4 с шестью β-D-глюкозами и одной α-L-рамнозой, присоединенными к агликон стевиолу, как показывает следующая химическая структура (см. Фиг. 1c и 1d):Correlation of all NMR results points to rebaudioside O4 with six β-D-glucoses and one α-L-rhamnose attached to the aglycone steviol, as shown by the following chemical structure (see Fig. 1c and 1d):

Анализ методом ЖХМС (Фиг. 13а и Фиг. 13b) ребаудиозида O4 показал наличие иона [M-H]^- при m/z 1435,0 в хорошем соответствии с ожидаемой молекулярной формулой C₆₂H₁₀₀O₃₇(рассчитано для иона [C₆₂H₉₉O₃₇]^- _:1435,6, ошибка < 0,05%). Данные МС подтверждают, что ребаудиозид O4 имеет молекулярную формулу C₆₂H₁₀₀O₃₇. Анализ методом ЖХМС выполняли с использованием условий, перечисленных в таблице 6.LCMS analysis (Fig. 13a and Fig. 13b) of rebaudioside O4 showed the presence of a [MH] ^- ion at m/z 1435.0 in good agreement with the expected molecular formula of C ₆₂ H ₁₀₀ O ₃₇ (calculated for [C ₆₂ H ₉₉ O ₃₇ ] ^- ion _: 1435.6, error < 0.05%). The MS data confirm that rebaudioside O4 has the molecular formula of C ₆₂ H ₁₀₀ O ₃₇ . LCMS analysis was performed using the conditions listed in Table 6.

Хотя настоящее изобретение и его преимущества описаны подробно, следует понимать, что в него могут быть внесены различные изменения, замены и поправки без отступления от сущности и объема изобретения, в соответствии с прилагаемой формулой изобретения. Кроме того, объем настоящей заявки не ограничивается конкретными вариантами осуществления способов, оборудования, производства, состава вещества, средств, методов и стадий, описанных в спецификации. Как будет понятно среднему специалисту в данной области из описания настоящего изобретения, способы, оборудование, производство, состав вещества, средства, методы или стадии, существующие или которые будут разработаны позже, которые выполняют по существу ту же функцию или достигают по существу того же результата, что и соответствующие варианты осуществления, описанные в настоящем документе, могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением. Соответственно, предполагается, что прилагаемая формула изобретения включает в себя такие способы, оборудование, производство, состав вещества, средства, методы или стадии.Although the present invention and its advantages have been described in detail, it should be understood that various changes, substitutions and amendments can be made thereto without departing from the spirit and scope of the invention, in accordance with the appended claims. Furthermore, the scope of the present application is not limited to the specific embodiments of the methods, equipment, production, composition of matter, means, methods and steps described in the specification. As will be understood by one of ordinary skill in the art from the description of the present invention, methods, equipment, production, composition of matter, means, methods or steps, existing or later developed, which perform substantially the same function or achieve substantially the same result as the corresponding embodiments described herein, can be used in accordance with the present invention. Accordingly, it is intended that the appended claims include such methods, equipment, production, composition of matter, means, methods or steps.

--->--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSEQUENCE LIST

<110> PureCircle USA Inc.<110> PureCircle USA Inc.

<120> HIGH-PURITY STEVIOL GLYCOSIDES<120>HIGH-PURITY STEVIOL GLYCOSIDES

<130> 39227-78PROV<130> 39227-78PROV

<160> 4 <160> 4

<170> PatentIn version 3.5<170> PatentIn version 3.5

<210> 1<210> 1

<211> 808<211> 808

<212> PRT<212> PRT

<213> Arabidopsis thaliana<213> Arabidopsis thaliana

<400> 1<400> 1

Met Ala Asn Ala Glu Arg Met Ile Thr Arg Val His Ser Gln Arg Glu Met Ala Asn Ala Glu Arg Met Ile Thr Arg Val His Ser Gln Arg Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Leu Asn Glu Thr Leu Val Ser Glu Arg Asn Glu Val Leu Ala Leu Arg Leu Asn Glu Thr Leu Val Ser Glu Arg Asn Glu Val Leu Ala Leu

20 25 30 20 25 30

Leu Ser Arg Val Glu Ala Lys Gly Lys Gly Ile Leu Gln Gln Asn Gln Leu Ser Arg Val Glu Ala Lys Gly Lys Gly Ile Leu Gln Gln Asn Gln

35 40 45 35 40 45

Ile Ile Ala Glu Phe Glu Ala Leu Pro Glu Gln Thr Arg Lys Lys Leu Ile Ile Ala Glu Phe Glu Ala Leu Pro Glu Gln Thr Arg Lys Lys Leu

50 55 60 50 55 60

Glu Gly Gly Pro Phe Phe Asp Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile Glu Gly Gly Pro Phe Phe Asp Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile

65 70 75 80 65 70 75 80

Val Leu Pro Pro Trp Val Ala Leu Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val Val Leu Pro Pro Trp Val Ala Leu Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val

85 90 95 85 90 95

Trp Glu Tyr Leu Arg Val Asn Leu His Ala Leu Val Val Glu Glu Leu Trp Glu Tyr Leu Arg Val Asn Leu His Ala Leu Val Val Glu Glu Leu

100 105 110 100 105 110

Gln Pro Ala Glu Phe Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Val Gln Pro Ala Glu Phe Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Val

115 120 125 115 120 125

Lys Asn Gly Asn Phe Thr Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Asn Ala Lys Asn Gly Asn Phe Thr Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Asn Ala

130 135 140 130 135 140

Ser Ile Pro Arg Pro Thr Leu His Lys Tyr Ile Gly Asn Gly Val Asp Ser Ile Pro Arg Pro Thr Leu His Lys Tyr Ile Gly Asn Gly Val Asp

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe His Asp Lys Glu Ser Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe His Asp Lys Glu Ser

165 170 175 165 170 175

Leu Leu Pro Leu Leu Asp Phe Leu Arg Leu His Ser His Gln Gly Lys Leu Leu Pro Leu Leu Asp Phe Leu Arg Leu His Ser His Gln Gly Lys

180 185 190 180 185 190

Asn Leu Met Leu Ser Glu Lys Ile Gln Asn Leu Asn Thr Leu Gln His Asn Leu Met Leu Ser Glu Lys Ile Gln Asn Leu Asn Thr Leu Gln His

195 200 205 195 200 205

Thr Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Ala Glu Leu Lys Ser Glu Thr Thr Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Ala Glu Leu Lys Ser Glu Thr

210 215 220 210 215 220

Leu Tyr Glu Glu Phe Glu Ala Lys Phe Glu Glu Ile Gly Leu Glu Arg Leu Tyr Glu Glu Phe Glu Ala Lys Phe Glu Glu Ile Gly Leu Glu Arg

225 230 235 240 225 230 235 240

Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu Arg Val Leu Asp Met Ile Arg Leu Leu Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu Arg Val Leu Asp Met Ile Arg Leu Leu

245 250 255 245 250 255

Leu Asp Leu Leu Glu Ala Pro Asp Pro Ser Thr Leu Glu Thr Phe Leu Leu Asp Leu Leu Glu Ala Pro Asp Pro Ser Thr Leu Glu Thr Phe Leu

260 265 270 260 265 270

Gly Arg Val Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly Gly Arg Val Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly

275 280 285 275 280 285

Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln

290 295 300 290 295 300

Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Ile Glu Met Leu Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Ile Glu Met Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Gln Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Ile Lys Pro Arg Ile Leu Ile Gln Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Ile Lys Pro Arg Ile Leu Ile

325 330 335 325 330 335

Leu Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Glu Arg Leu Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Glu Arg

340 345 350 340 345 350

Leu Glu Arg Val Tyr Asp Ser Glu Tyr Cys Asp Ile Leu Arg Val Pro Leu Glu Arg Val Tyr Asp Ser Glu Tyr Cys Asp Ile Leu Arg Val Pro

355 360 365 355 360 365

Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu

370 375 380 370 375 380

Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Glu Asp Ala Ala Val Glu Leu Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Glu Asp Ala Ala Val Glu Leu

385 390 395 400 385 390 395 400

Ser Lys Glu Leu Asn Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser Ser Lys Glu Leu Asn Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser

405 410 415 405 410 415

Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr

420 425 430 420 425 430

Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser

435 440 445 435 440 445

Asp Ile Tyr Trp Lys Lys Leu Asp Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Asp Ile Tyr Trp Lys Lys Leu Asp Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln

450 455 460 450 455 460

Phe Thr Ala Asp Ile Phe Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Phe Thr Ala Asp Ile Phe Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr

465 470 475 480 465 470 475 480

Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Glu Thr Val Gly Gln Tyr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Glu Thr Val Gly Gln Tyr

485 490 495 485 490 495

Glu Ser His Thr Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His Glu Ser His Thr Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His

500 505 510 500 505 510

Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala

515 520 525 515 520 525

Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu Lys Arg Arg Leu Thr Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu Lys Arg Arg Leu Thr

530 535 540 530 535 540

Lys Phe His Ser Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Val Glu Asn Lys Phe His Ser Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Val Glu Asn

545 550 555 560 545 550 555 560

Asp Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Lys Lys Lys Pro Ile Leu Phe Asp Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Lys Lys Lys Pro Ile Leu Phe

565 570 575 565 570 575

Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Ser Gly Leu Val Glu Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Ser Gly Leu Val Glu

580 585 590 580 585 590

Trp Tyr Gly Lys Asn Thr Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Trp Tyr Gly Lys Asn Thr Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val

595 600 605 595 600 605

Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Asn Glu Glu Lys Ala Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Asn Glu Glu Lys Ala

610 615 620 610 615 620

Glu Met Lys Lys Met Tyr Asp Leu Ile Glu Glu Tyr Lys Leu Asn Gly Glu Met Lys Lys Met Tyr Asp Leu Ile Glu Glu Tyr Lys Leu Asn Gly

625 630 635 640 625 630 635 640

Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asp Arg Val Arg Asn Gly Glu Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asp Arg Val Arg Asn Gly Glu

645 650 655 645 650 655

Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala

660 665 670 660 665 670

Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly

675 680 685 675 680 685

Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Lys Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Lys Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val

690 695 700 690 695 700

His Gly Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Asp Gln Ala His Gly Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Asp Gln Ala

705 710 715 720 705 710 715 720

Ala Asp Leu Leu Ala Asp Phe Phe Thr Lys Cys Lys Glu Asp Pro Ser Ala Asp Leu Leu Ala Asp Phe Phe Thr Lys Cys Lys Glu Asp Pro Ser

725 730 735 725 730 735

His Trp Asp Glu Ile Ser Lys Gly Gly Leu Gln Arg Ile Glu Glu Lys His Trp Asp Glu Ile Ser Lys Gly Gly Leu Gln Arg Ile Glu Glu Lys

740 745 750 740 745 750

Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Gln Arg Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Gln Arg Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val

755 760 765 755 760 765

Tyr Gly Phe Trp Lys His Val Ser Asn Leu Asp Arg Leu Glu His Arg Tyr Gly Phe Trp Lys His Val Ser Asn Leu Asp Arg Leu Glu His Arg

770 775 780 770 775 780

Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Tyr Arg Pro Leu Ala Gln Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Tyr Arg Pro Leu Ala Gln

785 790 795 800 785 790 795 800

Ala Val Pro Leu Ala Gln Asp Asp Ala Val Pro Leu Ala Gln Asp Asp

805 805

<210> 2<210> 2

<211> 442<211> 442

<212> PRT<212> PRT

<213> solanum lycopersicum<213> solanum lycopersicum

<400> 2<400> 2

Met Ala Thr Asn Leu Arg Val Leu Met Phe Pro Trp Leu Ala Tyr Gly Met Ala Thr Asn Leu Arg Val Leu Met Phe Pro Trp Leu Ala Tyr Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

His Ile Ser Pro Phe Leu Asn Ile Ala Lys Gln Leu Ala Asp Arg Gly His Ile Ser Pro Phe Leu Asn Ile Ala Lys Gln Leu Ala Asp Arg Gly

20 25 30 20 25 30

Phe Leu Ile Tyr Leu Cys Ser Thr Arg Ile Asn Leu Glu Ser Ile Ile Phe Leu Ile Tyr Leu Cys Ser Thr Arg Ile Asn Leu Glu Ser Ile Ile

35 40 45 35 40 45

Lys Lys Ile Pro Glu Lys Tyr Ala Asp Ser Ile His Leu Ile Glu Leu Lys Lys Ile Pro Glu Lys Tyr Ala Asp Ser Ile His Leu Ile Glu Leu

50 55 60 50 55 60

Gln Leu Pro Glu Leu Pro Glu Leu Pro Pro His Tyr His Thr Thr Asn Gln Leu Pro Glu Leu Pro Glu Leu Pro Pro His Tyr His Thr Thr Asn

65 70 75 80 65 70 75 80

Gly Leu Pro Pro His Leu Asn Pro Thr Leu His Lys Ala Leu Lys Met Gly Leu Pro Pro His Leu Asn Pro Thr Leu His Lys Ala Leu Lys Met

85 90 95 85 90 95

Ser Lys Pro Asn Phe Ser Arg Ile Leu Gln Asn Leu Lys Pro Asp Leu Ser Lys Pro Asn Phe Ser Arg Ile Leu Gln Asn Leu Lys Pro Asp Leu

100 105 110 100 105 110

Leu Ile Tyr Asp Val Leu Gln Pro Trp Ala Glu His Val Ala Asn Glu Leu Ile Tyr Asp Val Leu Gln Pro Trp Ala Glu His Val Ala Asn Glu

115 120 125 115 120 125

Gln Gly Ile Pro Ala Gly Lys Leu Leu Val Ser Cys Ala Ala Val Phe Gln Gly Ile Pro Ala Gly Lys Leu Leu Val Ser Cys Ala Ala Val Phe

130 135 140 130 135 140

Ser Tyr Phe Phe Ser Phe Arg Lys Asn Pro Gly Val Glu Phe Pro Phe Ser Tyr Phe Phe Ser Phe Arg Lys Asn Pro Gly Val Glu Phe Pro Phe

145 150 155 160 145 150 155 160

Pro Ala Ile His Leu Pro Glu Val Glu Lys Val Lys Ile Arg Glu Ile Pro Ala Ile His Leu Pro Glu Val Glu Lys Val Lys Ile Arg Glu Ile

165 170 175 165 170 175

Leu Ala Lys Glu Pro Glu Glu Gly Gly Arg Leu Asp Glu Gly Asn Lys Leu Ala Lys Glu Pro Glu Glu Gly Gly Arg Leu Asp Glu Gly Asn Lys

180 185 190 180 185 190

Gln Met Met Leu Met Cys Thr Ser Arg Thr Ile Glu Ala Lys Tyr Ile Gln Met Met Leu Met Cys Thr Ser Arg Thr Ile Glu Ala Lys Tyr Ile

195 200 205 195 200 205

Asp Tyr Cys Thr Glu Leu Cys Asn Trp Lys Val Val Pro Val Gly Pro Asp Tyr Cys Thr Glu Leu Cys Asn Trp Lys Val Val Pro Val Gly Pro

210 215 220 210 215 220

Pro Phe Gln Asp Leu Ile Thr Asn Asp Ala Asp Asn Lys Glu Leu Ile Pro Phe Gln Asp Leu Ile Thr Asn Asp Ala Asp Asn Lys Glu Leu Ile

225 230 235 240 225 230 235 240

Asp Trp Leu Gly Thr Lys Pro Glu Asn Ser Thr Val Phe Val Ser Phe Asp Trp Leu Gly Thr Lys Pro Glu Asn Ser Thr Val Phe Val Ser Phe

245 250 255 245 250 255

Gly Ser Glu Tyr Phe Leu Ser Lys Glu Asp Met Glu Glu Ile Ala Phe Gly Ser Glu Tyr Phe Leu Ser Lys Glu Asp Met Glu Glu Ile Ala Phe

260 265 270 260 265 270

Ala Leu Glu Ala Ser Asn Val Asn Phe Ile Trp Val Val Arg Phe Pro Ala Leu Glu Ala Ser Asn Val Asn Phe Ile Trp Val Val Arg Phe Pro

275 280 285 275 280 285

Lys Gly Glu Glu Arg Asn Leu Glu Asp Ala Leu Pro Glu Gly Phe Leu Lys Gly Glu Glu Arg Asn Leu Glu Asp Ala Leu Pro Glu Gly Phe Leu

290 295 300 290 295 300

Glu Arg Ile Gly Glu Arg Gly Arg Val Leu Asp Lys Phe Ala Pro Gln Glu Arg Ile Gly Glu Arg Gly Arg Val Leu Asp Lys Phe Ala Pro Gln

305 310 315 320 305 310 315 320

Pro Arg Ile Leu Asn His Pro Ser Thr Gly Gly Phe Ile Ser His Cys Pro Arg Ile Leu Asn His Pro Ser Thr Gly Gly Phe Ile Ser His Cys

325 330 335 325 330 335

Gly Trp Asn Ser Val Met Glu Ser Ile Asp Phe Gly Val Pro Ile Ile Gly Trp Asn Ser Val Met Glu Ser Ile Asp Phe Gly Val Pro Ile Ile

340 345 350 340 345 350

Ala Met Pro Ile His Asn Asp Gln Pro Ile Asn Ala Lys Leu Met Val Ala Met Pro Ile His Asn Asp Gln Pro Ile Asn Ala Lys Leu Met Val

355 360 365 355 360 365

Glu Leu Gly Val Ala Val Glu Ile Val Arg Asp Asp Asp Gly Lys Ile Glu Leu Gly Val Ala Val Glu Ile Val Arg Asp Asp Asp Gly Lys Ile

370 375 380 370 375 380

His Arg Gly Glu Ile Ala Glu Ala Leu Lys Ser Val Val Thr Gly Glu His Arg Gly Glu Ile Ala Glu Ala Leu Lys Ser Val Val Thr Gly Glu

385 390 395 400 385 390 395 400

Thr Gly Glu Ile Leu Arg Ala Lys Val Arg Glu Ile Ser Lys Asn Leu Thr Gly Glu Ile Leu Arg Ala Lys Val Arg Glu Ile Ser Lys Asn Leu

405 410 415 405 410 415

Lys Ser Ile Arg Asp Glu Glu Met Asp Ala Val Ala Glu Glu Leu Ile Lys Ser Ile Arg Asp Glu Glu Met Asp Ala Val Ala Glu Glu Leu Ile

420 425 430 420 425 430

Gln Leu Cys Arg Asn Ser Asn Lys Ser Lys Gln Leu Cys Arg Asn Ser Asn Lys Ser Lys

435 440 435 440

<210> 3<210> 3

<211> 458<211> 458

<212> PRT<212> PRT

<213> Stevia rebaudiana<213> Stevia rebaudiana

<400> 3<400> 3

Met Glu Asn Lys Thr Glu Thr Thr Val Arg Arg Arg Arg Arg Ile Ile Met Glu Asn Lys Thr Glu Thr Thr Val Arg Arg Arg Arg Arg Ile Ile

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Phe Pro Val Pro Phe Gln Gly His Ile Asn Pro Ile Leu Gln Leu Leu Phe Pro Val Pro Phe Gln Gly His Ile Asn Pro Ile Leu Gln Leu

20 25 30 20 25 30

Ala Asn Val Leu Tyr Ser Lys Gly Phe Ala Ile Thr Ile Leu His Thr Ala Asn Val Leu Tyr Ser Lys Gly Phe Ala Ile Thr Ile Leu His Thr

35 40 45 35 40 45

Asn Phe Asn Lys Pro Lys Thr Ser Asn Tyr Pro His Phe Thr Phe Arg Asn Phe Asn Lys Pro Lys Thr Ser Asn Tyr Pro His Phe Thr Phe Arg

50 55 60 50 55 60

Phe Ile Leu Asp Asn Asp Pro Gln Asp Glu Arg Ile Ser Asn Leu Pro Phe Ile Leu Asp Asn Asp Pro Gln Asp Glu Arg Ile Ser Asn Leu Pro

65 70 75 80 65 70 75 80

Thr His Gly Pro Leu Ala Gly Met Arg Ile Pro Ile Ile Asn Glu His Thr His Gly Pro Leu Ala Gly Met Arg Ile Pro Ile Ile Asn Glu His

85 90 95 85 90 95

Gly Ala Asp Glu Leu Arg Arg Glu Leu Glu Leu Leu Met Leu Ala Ser Gly Ala Asp Glu Leu Arg Arg Glu Leu Glu Leu Leu Met Leu Ala Ser

100 105 110 100 105 110

Glu Glu Asp Glu Glu Val Ser Cys Leu Ile Thr Asp Ala Leu Trp Tyr Glu Glu Asp Glu Glu Val Ser Cys Leu Ile Thr Asp Ala Leu Trp Tyr

115 120 125 115 120 125

Phe Ala Gln Asp Val Ala Asp Ser Leu Asn Leu Arg Arg Leu Val Leu Phe Ala Gln Asp Val Ala Asp Ser Leu Asn Leu Arg Arg Leu Val Leu

130 135 140 130 135 140

Met Thr Ser Ser Leu Phe Asn Phe His Ala His Val Ser Leu Pro Gln Met Thr Ser Ser Leu Phe Asn Phe His Ala His Val Ser Leu Pro Gln

145 150 155 160 145 150 155 160

Phe Asp Glu Leu Gly Tyr Leu Asp Pro Asp Asp Lys Thr Arg Leu Glu Phe Asp Glu Leu Gly Tyr Leu Asp Pro Asp Asp Lys Thr Arg Leu Glu

165 170 175 165 170 175

Glu Gln Ala Ser Gly Phe Pro Met Leu Lys Val Lys Asp Ile Lys Ser Glu Gln Ala Ser Gly Phe Pro Met Leu Lys Val Lys Asp Ile Lys Ser

180 185 190 180 185 190

Ala Tyr Ser Asn Trp Gln Ile Gly Lys Glu Ile Leu Gly Lys Met Ile Ala Tyr Ser Asn Trp Gln Ile Gly Lys Glu Ile Leu Gly Lys Met Ile

195 200 205 195 200 205

Lys Gln Thr Lys Ala Ser Ser Gly Val Ile Trp Asn Ser Phe Lys Glu Lys Gln Thr Lys Ala Ser Ser Gly Val Ile Trp Asn Ser Phe Lys Glu

210 215 220 210 215 220

Leu Glu Glu Ser Glu Leu Glu Thr Val Ile Arg Glu Ile Pro Ala Pro Leu Glu Glu Ser Glu Leu Glu Thr Val Ile Arg Glu Ile Pro Ala Pro

225 230 235 240 225 230 235 240

Ser Phe Leu Ile Pro Leu Pro Lys His Leu Thr Ala Ser Ser Ser Ser Ser Phe Leu Ile Pro Leu Pro Lys His Leu Thr Ala Ser Ser Ser Ser

245 250 255 245 250 255

Leu Leu Asp His Asp Arg Thr Val Phe Glu Trp Leu Asp Gln Gln Ala Leu Leu Asp His Asp Arg Thr Val Phe Glu Trp Leu Asp Gln Gln Ala

260 265 270 260 265 270

Pro Ser Ser Val Leu Tyr Val Ser Phe Gly Ser Thr Ser Glu Val Asp Pro Ser Ser Val Leu Tyr Val Ser Phe Gly Ser Thr Ser Glu Val Asp

275 280 285 275 280 285

Glu Lys Asp Phe Leu Glu Ile Ala Arg Gly Leu Val Asp Ser Gly Gln Glu Lys Asp Phe Leu Glu Ile Ala Arg Gly Leu Val Asp Ser Gly Gln

290 295 300 290 295 300

Ser Phe Leu Trp Val Val Arg Pro Gly Phe Val Lys Gly Ser Thr Trp Ser Phe Leu Trp Val Val Arg Pro Gly Phe Val Lys Gly Ser Thr Trp

305 310 315 320 305 310 315 320

Val Glu Pro Leu Pro Asp Gly Phe Leu Gly Glu Arg Gly Lys Ile Val Val Glu Pro Leu Pro Asp Gly Phe Leu Gly Glu Arg Gly Lys Ile Val

325 330 335 325 330 335

Lys Trp Val Pro Gln Gln Glu Val Leu Ala His Pro Ala Ile Gly Ala Lys Trp Val Pro Gln Gln Glu Val Leu Ala His Pro Ala Ile Gly Ala

340 345 350 340 345 350

Phe Trp Thr His Ser Gly Trp Asn Ser Thr Leu Glu Ser Val Cys Glu Phe Trp Thr His Ser Gly Trp Asn Ser Thr Leu Glu Ser Val Cys Glu

355 360 365 355 360 365

Gly Val Pro Met Ile Phe Ser Ser Phe Gly Gly Asp Gln Pro Leu Asn Gly Val Pro Met Ile Phe Ser Ser Phe Gly Gly Asp Gln Pro Leu Asn

370 375 380 370 375 380

Ala Arg Tyr Met Ser Asp Val Leu Arg Val Gly Val Tyr Leu Glu Asn Ala Arg Tyr Met Ser Asp Val Leu Arg Val Gly Val Tyr Leu Glu Asn

385 390 395 400 385 390 395 400

Gly Trp Glu Arg Gly Glu Val Val Asn Ala Ile Arg Arg Val Met Val Gly Trp Glu Arg Gly Glu Val Val Asn Ala Ile Arg Arg Val Met Val

405 410 415 405 410 415

Asp Glu Glu Gly Glu Tyr Ile Arg Gln Asn Ala Arg Val Leu Lys Gln Asp Glu Glu Gly Glu Tyr Ile Arg Gln Asn Ala Arg Val Leu Lys Gln

420 425 430 420 425 430

Lys Ala Asp Val Ser Leu Met Lys Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Ser Leu Lys Ala Asp Val Ser Leu Met Lys Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Ser Leu

435 440 445 435 440 445

Glu Ser Leu Val Ser Tyr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Leu Val Ser Tyr Ile Ser Ser Leu

450 455 450 455

<210> 4<210> 4

<211> 462<211> 462

<212> PRT<212> PRT

<213> Oryza sativa<213> Oryza sativa

<400> 4<400> 4

Met Asp Ser Gly Tyr Ser Ser Ser Tyr Ala Ala Ala Ala Gly Met His Met Asp Ser Gly Tyr Ser Ser Ser Tyr Ala Ala Ala Ala Gly Met His

1 5 10 15 1 5 10 15

Val Val Ile Cys Pro Trp Leu Ala Phe Gly His Leu Leu Pro Cys Leu Val Val Ile Cys Pro Trp Leu Ala Phe Gly His Leu Leu Pro Cys Leu

20 25 30 20 25 30

Asp Leu Ala Gln Arg Leu Ala Ser Arg Gly His Arg Val Ser Phe Val Asp Leu Ala Gln Arg Leu Ala Ser Arg Gly His Arg Val Ser Phe Val

35 40 45 35 40 45

Ser Thr Pro Arg Asn Ile Ser Arg Leu Pro Pro Val Arg Pro Ala Leu Ser Thr Pro Arg Asn Ile Ser Arg Leu Pro Pro Val Arg Pro Ala Leu

50 55 60 50 55 60

Ala Pro Leu Val Ala Phe Val Ala Leu Pro Leu Pro Arg Val Glu Gly Ala Pro Leu Val Ala Phe Val Ala Leu Pro Leu Pro Arg Val Glu Gly

65 70 75 80 65 70 75 80

Leu Pro Asp Gly Ala Glu Ser Thr Asn Asp Val Pro His Asp Arg Pro Leu Pro Asp Gly Ala Glu Ser Thr Asn Asp Val Pro His Asp Arg Pro

85 90 95 85 90 95

Asp Met Val Glu Leu His Arg Arg Ala Phe Asp Gly Leu Ala Ala Pro Asp Met Val Glu Leu His Arg Arg Ala Phe Asp Gly Leu Ala Ala Pro

100 105 110 100 105 110

Phe Ser Glu Phe Leu Gly Thr Ala Cys Ala Asp Trp Val Ile Val Asp Phe Ser Glu Phe Leu Gly Thr Ala Cys Ala Asp Trp Val Ile Val Asp

115 120 125 115 120 125

Val Phe His His Trp Ala Ala Ala Ala Ala Leu Glu His Lys Val Pro Val Phe His His Trp Ala Ala Ala Ala Ala Leu Glu His Lys Val Pro

130 135 140 130 135 140

Cys Ala Met Met Leu Leu Gly Ser Ala His Met Ile Ala Ser Ile Ala Cys Ala Met Met Leu Leu Gly Ser Ala His Met Ile Ala Ser Ile Ala

145 150 155 160 145 150 155 160

Asp Arg Arg Leu Glu Arg Ala Glu Thr Glu Ser Pro Ala Ala Ala Gly Asp Arg Arg Leu Glu Arg Ala Glu Thr Glu Ser Pro Ala Ala Ala Gly

165 170 175 165 170 175

Gln Gly Arg Pro Ala Ala Ala Pro Thr Phe Glu Val Ala Arg Met Lys Gln Gly Arg Pro Ala Ala Ala Pro Thr Phe Glu Val Ala Arg Met Lys

180 185 190 180 185 190

Leu Ile Arg Thr Lys Gly Ser Ser Gly Met Ser Leu Ala Glu Arg Phe Leu Ile Arg Thr Lys Gly Ser Ser Gly Met Ser Leu Ala Glu Arg Phe

195 200 205 195 200 205

Ser Leu Thr Leu Ser Arg Ser Ser Leu Val Val Gly Arg Ser Cys Val Ser Leu Thr Leu Ser Arg Ser Ser Leu Val Val Gly Arg Ser Cys Val

210 215 220 210 215 220

Glu Phe Glu Pro Glu Thr Val Pro Leu Leu Ser Thr Leu Arg Gly Lys Glu Phe Glu Pro Glu Thr Val Pro Leu Leu Ser Thr Leu Arg Gly Lys

225 230 235 240 225 230 235 240

Pro Ile Thr Phe Leu Gly Leu Met Pro Pro Leu His Glu Gly Arg Arg Pro Ile Thr Phe Leu Gly Leu Met Pro Pro Leu His Glu Gly Arg Arg

245 250 255 245 250 255

Glu Asp Gly Glu Asp Ala Thr Val Arg Trp Leu Asp Ala Gln Pro Ala Glu Asp Gly Glu Asp Ala Thr Val Arg Trp Leu Asp Ala Gln Pro Ala

260 265 270 260 265 270

Lys Ser Val Val Tyr Val Ala Leu Gly Ser Glu Val Pro Leu Gly Val Lys Ser Val Val Tyr Val Ala Leu Gly Ser Glu Val Pro Leu Gly Val

275 280 285 275 280 285

Glu Lys Val His Glu Leu Ala Leu Gly Leu Glu Leu Ala Gly Thr Arg Glu Lys Val His Glu Leu Ala Leu Gly Leu Glu Leu Ala Gly Thr Arg

290 295 300 290 295 300

Phe Leu Trp Ala Leu Arg Lys Pro Thr Gly Val Ser Asp Ala Asp Leu Phe Leu Trp Ala Leu Arg Lys Pro Thr Gly Val Ser Asp Ala Asp Leu

305 310 315 320 305 310 315 320

Leu Pro Ala Gly Phe Glu Glu Arg Thr Arg Gly Arg Gly Val Val Ala Leu Pro Ala Gly Phe Glu Glu Arg Thr Arg Gly Arg Gly Val Val Ala

325 330 335 325 330 335

Thr Arg Trp Val Pro Gln Met Ser Ile Leu Ala His Ala Ala Val Gly Thr Arg Trp Val Pro Gln Met Ser Ile Leu Ala His Ala Ala Val Gly

340 345 350 340 345 350

Ala Phe Leu Thr His Cys Gly Trp Asn Ser Thr Ile Glu Gly Leu Met Ala Phe Leu Thr His Cys Gly Trp Asn Ser Thr Ile Glu Gly Leu Met

355 360 365 355 360 365

Phe Gly His Pro Leu Ile Met Leu Pro Ile Phe Gly Asp Gln Gly Pro Phe Gly His Pro Leu Ile Met Leu Pro Ile Phe Gly Asp Gln Gly Pro

370 375 380 370 375 380

Asn Ala Arg Leu Ile Glu Ala Lys Asn Ala Gly Leu Gln Val Ala Arg Asn Ala Arg Leu Ile Glu Ala Lys Asn Ala Gly Leu Gln Val Ala Arg

385 390 395 400 385 390 395 400

Asn Asp Gly Asp Gly Ser Phe Asp Arg Glu Gly Val Ala Ala Ala Ile Asn Asp Gly Asp Gly Ser Phe Asp Arg Glu Gly Val Ala Ala Ala Ile

405 410 415 405 410 415

Arg Ala Val Ala Val Glu Glu Glu Ser Ser Lys Val Phe Gln Ala Lys Arg Ala Val Ala Val Glu Glu Glu Ser Ser Lys Val Phe Gln Ala Lys

420 425 430 420 425 430

Ala Lys Lys Leu Gln Glu Ile Val Ala Asp Met Ala Cys His Glu Arg Ala Lys Lys Leu Gln Glu Ile Val Ala Asp Met Ala Cys His Glu Arg

435 440 445 435 440 445

Tyr Ile Asp Gly Phe Ile Gln Gln Leu Arg Ser Tyr Lys Asp Tyr Ile Asp Gly Phe Ile Gln Gln Leu Arg Ser Tyr Lys Asp

450 455 460 450 455 460

<---<---

Claims

1. Rebaudioside O4 with the formula:

2. A method for obtaining highly purified rebaudioside N2 having the formula

including the stages:

a. providing rebaudioside C;

b. providing an enzyme preparation or microorganism containing UGTSl2 with SEQ ID NO: 2, SuSy_At with SEQ ID NO: 1 and UGT76G1 with SEQ ID NO: 3;

c. contacting the enzyme preparation or microorganism with a medium containing rebaudioside C to obtain a medium containing rebaudioside N2;

d. separation of rebaudioside N2 from the medium;

e. purification of rebaudioside N2 from the medium to obtain highly purified rebaudioside N2.

3. A method for producing highly purified rebaudioside O4 according to claim 1, comprising the steps of:

a. providing rebaudioside C;

c. contacting the enzyme preparation or microorganism with a medium containing rebaudioside C to obtain a medium containing rebaudioside O4;

d. separation of rebaudioside O4 from the medium;

e. purification of rebaudioside O4 from the medium to obtain highly purified rebaudioside O4.

4. A method for obtaining highly purified rebaudioside N2 having the formula

including the stages:

a. providing rebaudioside C;

b. providing a biocatalyst comprising UGTSl2 with SEQ ID NO: 2, SuSy_At with SEQ ID NO: 1 and UGT76G1 with SEQ ID NO: 3;

c. contacting the biocatalyst with a medium containing rebaudioside C to obtain a medium containing rebaudioside N2;

d. separation of rebaudioside N2 from the medium;

5. A method for producing highly purified rebaudioside O4 according to claim 1, comprising the steps of:

a. providing rebaudioside C;

c. contacting the biocatalyst with a medium containing rebaudioside C to obtain a medium containing rebaudioside O4;

d. separation of rebaudioside O4 from the medium;

6. The method according to claim 2 or 3, wherein the microorganism is selected from the group consisting of E. coli, Saccharomyces sp., Aspergillus sp., Pichia sp., Bacillus sp. and Yarrowia sp.

7. The method according to claim 2 or 4, wherein the highly purified rebaudioside N2 has a purity of more than 95% by weight on a dry matter basis.

8. The method according to claim 3 or 5, wherein the highly purified rebaudioside O4 has a purity of more than 95% by weight on a dry matter basis.

9. The use of highly purified rebaudioside O4 according to claim 1 as a sweetener in a consumer product, wherein the consumer product is selected from the group consisting of a food product, a beverage, a pharmaceutical composition, a tobacco product, a nutraceutical composition, an oral hygiene composition and a cosmetic composition; or the product is selected from the group consisting of beverages; natural juices; refreshing beverages; carbonated soft drinks; diet drinks; zero-calorie beverages; reduced-calorie beverages and food products; yogurt drinks; instant juices; instant coffee; instant powdered beverages; canned foods; syrups; fermented soybean paste; soy sauce; vinegar; dressings; mayonnaise; ketchups; curry; soups; instant broth; powdered soy sauce; powdered vinegar; types of biscuits; rice cake; crackers; bread; chocolates; caramel; candies; Chewing gum; Jelly; Pudding; Canned fruit and vegetables; Fresh cream; Jam; Marmalade; Flower paste; Powdered milk; Ice cream; Sorbet; Bottled fruits and vegetables; Canned and cooked beans; Meat and products boiled in sweetened sauce; Agricultural plant foodstuffs; Seafood; Ham; Sausage; Fish ham; Fish sausage; Fish paste; Deep-fried fish products; Dried Seafood; Frozen foods; Canned seaweed; Canned meat; Tobacco products and Pharmaceuticals,

wherein rebaudioside O4 in highly purified rebaudioside O4 has a purity of more than 95% by weight based on dry matter.

10. The use according to claim 9, wherein the consumer product further comprises at least one additive selected from the group consisting of carbohydrates, polyols, amino acids and their corresponding salts, polyamino acids and their corresponding salts, sugar acids and their corresponding salts, nucleotides, organic acids, inorganic acids, organic salts, including salts of organic acids and salts of organic bases, inorganic salts, bitter compounds, caffeine, flavorings and flavoring ingredients, astringents, proteins or protein hydrolysates, surfactants, emulsifiers, flavonoids, alcohols, polymers and combinations of the above; or further containing at least one functional ingredient selected from the group consisting of saponins, antioxidants, dietary fiber sources, fatty acids, vitamins, glucosamine, minerals, preservatives, hydration agents, probiotics, prebiotics, weight management agents, osteoporosis control agents, phytoestrogens, long-chain primary aliphatic saturated alcohols, phytosterols, and combinations of the above; or further comprising a compound selected from the group consisting of steviol monoside, steviol monoside A, steviolbioside A, steviolbioside B, steviolbioside C, steviolbioside D, steviolbioside E, rubusoside, dulcoside A, dulcoside C, dulcoside D, stevioside A, stevioside B, stevioside C, stevioside G, stevioside H, rebaudioside B2, rebaudioside A4, rebaudioside C, rebaudioside C3, rebaudioside C4, rebaudioside C5, rebaudioside C6, rebaudioside E3, rebaudioside E4, rebaudioside E5, rebaudioside E6, rebaudioside E7, rebaudioside D5, rebaudioside D6, rebaudioside D7, rebaudioside D8, rebaudioside H2, rebaudioside H3, rebaudioside H4, rebaudioside H5, rebaudioside H6, rebaudioside K, rebaudioside N2, rebaudioside N3, rebaudioside N4, rebaudioside N5, rebaudioside M3, rebaudioside A, rebaudioside A2, rebaudioside A3, rebaudioside AM, rebaudioside B, rebaudioside C2, rebaudioside D, rebaudioside D2, rebaudioside D3, rebaudioside D4, rebaudioside E, rebaudioside E2, rebaudioside F, rebaudioside F2, rebaudioside F3, rebaudioside G, rebaudioside H, rebaudioside I, rebaudioside I2, rebaudioside I3, rebaudioside J, rebaudioside K2, rebaudioside L, rebaudioside M, rebaudioside M2, rebaudioside N, rebaudioside O, rebaudioside O2, rebaudioside O3, rebaudioside Q, rebaudioside Q2, rebaudioside Q3, rebaudioside R, rebaudioside S, rebaudioside T, rebaudioside T1, rebaudioside U, rebaudioside U2, rebaudioside V, rebaudioside V2, rebaudioside W, rebaudioside W2, rebaudioside W3, rebaudioside Y, rebaudioside Z1, rebaudioside Z2, steviol bioside, stevioside, stevioside D, stevioside E, stevioside E2, Stevioside F, NSF-02, mogroside V, Luo Han Guo, allulose, D-allose, D-tagatose, erythritol, brazzein, neohesperidin dihydrochalcone, glycyrrhizic acid and its salts, thaumatin, perillartin, pernandulcin, mucurosiosides, bayunoside, phlomisoside I, dimethylhexahydrofluorene dicarboxylic acid, abrusosides, periandrin, carnosiflozides, cyclokaryosides, pterocaryosides, polypodoside A, brazilin, hernandulcin, phyllodulcin, glycyphyllin, phlorizin, trilobatin, dihydroflavonol, dihydroquercetin-3 acetate, neoastilibin, trans-cinnamaldehyde, monatin and its salts, selliguaine A, hematoxylin, monellin, osladin, pterocaryoside A, pterocaryoside B, mabinlin, pentadin, miraculin, curculin, neoculin, chlorogenic acid, cynarin, siamenoside, sucralose, acesulfame potassium, aspartame, alitame, saccharin, cyclamate, neotame, dulcin, suosan advantam, gynemic acid, godulcin, ziziphin, lactisol, glutamate, aspartic acid, glycine, alanine, threonine, proline, serine, lysine, tryptophan, maltitol, mannitol, sorbitol, lactitol, xylitol, inositol, isomalt, propylene glycol, glycerin, threitol, galactitol, hydrogenated isomaltulose, reduced isomaltooligosaccharides, reduced xylooligosaccharides, reduced gentiooligosaccharides, reduced maltose syrup, reduced glucose syrup, hydrogenated starch hydrolysates, polyglycitols, sugar alcohols, L-sugars, L-sorbose, L-arabinose, trehalose, galactose, rhamnose, various cyclodextrins, cyclic oligosaccharides, various types of maltodextrins, dextran, sucrose, glucose, ribulose, fructose, threose, xylose, lyxose, altrose, mannose, idose, lactose, maltose, invert sugar, isotrehalose, neotrehalose, isomaltulose, erythrose, deoxyribose, gulose, talose, erythrulose, xylulose, cellobiose, amylopectin, glucosamine, mannosamine, glucuronic acid, gluconic acid, gluconolactone, abexose, galactosamine, beet oligosaccharides, isomaltooligosaccharides such as isomaltoses, isomaltotrioses, panoses, xylooligosaccharides such as xylotrioses, xylobioses, xylo-terminated oligosaccharides, gentiooligosaccharides such as gentiobioses, gentiotrioses, gentiotetraoses, nigero-oligosaccharides, palatinose oligosaccharides, fructooligosaccharides such as kestoses, nystoses, maltotetraol, maltotriol, maltooligosaccharides such as maltotrioses, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, maltoheptanose, starch, inulin, inulooligosaccharides, lactulose, melibiose, raffinose, isomerized liquid sugars such as high fructose corn syrups, linking sugars, soy oligosaccharides, D-psicose, D-ribose, L-glucose, L-fucose, D-turanose, D-leucrose.

11. A method for enhancing the sweetness of a beverage or food product containing a sweetener, comprising:

a. providing a beverage or food product containing a sweetener; and

b. adding a sweetness enhancer containing rebaudioside O4 according to claim 1,

in which rebaudioside O4 is present at a concentration that is equal to or below the sweetness recognition threshold.