RU2846757C1 - Способы и материалы для лечения нейротоксичности - Google Patents
Способы и материалы для лечения нейротоксичностиInfo
- Publication number
- RU2846757C1 RU2846757C1 RU2022111431A RU2022111431A RU2846757C1 RU 2846757 C1 RU2846757 C1 RU 2846757C1 RU 2022111431 A RU2022111431 A RU 2022111431A RU 2022111431 A RU2022111431 A RU 2022111431A RU 2846757 C1 RU2846757 C1 RU 2846757C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- btz
- mammal
- neurotoxicity
- type calcium
- calcium channel
- Prior art date
Links
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к снижению полимеризации β-тубулина, индуцированной бортезомибом. Способ снижения полимеризации β-тубулина, индуцированной бортезомибом, у млекопитающего с нейротоксичностью, индуцированной бортезомибом, включает введение указанному млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей модулятор кальциевых каналов Т-типа или его соль, в количестве 30 мг/кг массы тела указанного млекопитающего для уменьшения симптома указанной нейротоксичности у указанного млекопитающего, где модулятор кальциевых каналов Т-типа представляет собой CX-8998 или его соль. Способ обеспечивает снижение повышенной полимеризации β-тубулина, вызванной введением бортезомиба. 5 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл., 1 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
По настоящей заявке испрашивается приоритет заявки на патент США № 62/909,694, поданной 2 октября 2019 г. Раскрытие предыдущей заявки считается частью (и включено посредством ссылки) раскрытия настоящей заявки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к способам и материалам для лечения млекопитающих с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью). Например, один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, композицию, включающую один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, таких как CX-8998 или его метаболит) можно вводить млекопитающему с нейротоксичностью в количестве, эффективном для лечения млекопитающего.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Ключевые клинические испытания множественной миеломы показали, что бортезомиб (BTZ)], вводимый отдельно или в виде комбинированной терапии, обеспечивает клинически значимые преимущества, включая более высокую общую частоту ответа, более длительное время до прогрессирования заболевания и увеличение общей выживаемости (Chen et al., 2011 Curr Cancer Drug Targets 11(3):239-253; Knopf et al., 2014 Clin Lymphoma Myeloma Leuk 14(5):380-388; Aguiar et al., 2017 Crit Rev Oncol Hematol 113:196-212; и Sun et al., 2017 Biosci Rep 37(4):BSR20170304).
Однако индуцированная химиотерапией периферическая нейротоксичность (CIPN) является серьезным побочным эффектом химиотерапевтических противораковых средств (Argyriou et al., 2012 Crit Rev Oncol Hematol 82:51-77; Cavaletti et al., 2010 Nat Rev Neurol 6:657-666; Grisold et al., 2012 Neurol Oncol 14(Suppl 4):45-54; and Flatters et al., 2017 Br J Anaesth 119:737-749). CIPN оказывает вредное воздействие на моторные и сенсорные нейроны и вызывает дегенерацию нервных волокон (Carozzi et al., 2013 PLoS One 8:e72995; Cavaletti et al., 2007 Exp Neurol 204:317-325; Gilardini et al., 2012 Neurotoxicol 33:1-7; и Quartu et al., 2014 Biomed Res Int 2014:180428). За один месяц химиотерапии CIPN развивается у 68% больных раком (Seretny et al., 2014 Pain 155:2461-2470). Существующие фармакотерапевтические средства не оказывают никакого влияния на патофизиологию CIPN и не способствуют регрессии заболевания (Starobova et al., 2017 Front Mol Neurosci 10:174; and Hershman et al., 2014 J Clin Oncol 32:1941-1967).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Лечение и/или профилактика CIPN во время лечения химиотерапевтическими средствами остается неудовлетворенной медицинской потребностью.
В настоящем описании представлены способы и материалы для лечения млекопитающего с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью) или с риском ее развития (например, млекопитающего, которому запланировано или ожидается введение химиотерапевтического агента, ассоциированного с индуцированной химиотерапией нейротоксичностью). Млекопитающему с нейротоксичностью можно вводить, например, один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) для лечения млекопитающего. В некоторых случаях млекопитающему с нейротоксичностью или риском ее развития можно вводить один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа для лечения млекопитающего.
CX-8998 представляет собой мощный и высокоселективный управляемый напряжением отрицательный аллостерический модулятор кальциевых каналов Т-типа, который может снижать активность кальциевых каналов Т-типа и является безопасным для использования млекопитающими, такими как человек (Egan et al., 2013 Hum Psychopharmacol. 28(2):124-133; и Papapetropoulos et al., 2018 Mov Disord. 33(S2):S14 (аннотация 29)). Как показано в настоящем описании, совместное лечение (например, введение обоих) CX-8998 и BTZ не ухудшает активность BTZ в клеточных линиях множественной миеломы человека in vitro или в клетках клеточной линии множественной миеломы RPMI-8226 in vivo. Как показано в настоящем описании, совместное лечение CX-8998 и BTZ способствовало устранению нейротоксичности, индуцированной BTZ. Например, совместное лечение CX-8998 (10 и 30 мг/кг) и BTZ устранило индуцированное BTZ снижение скорости нервной проводимости (NCV), не влияя на индуцированное BTZ ингибирование протеасом. Например, совместное лечение CX-8998 (30 мг/кг) и BTZ уменьшило индуцированную BTZ полимеризацию β-тубулина и потерю нервных волокон. Способность уменьшать или устранять нейротоксичность (например, индуцированную химиотерапией нейротоксичность) предоставляет уникальную и нереализованную возможность максимально увеличить терапевтическую пользу химиотерапии (например, противораковые эффекты) при одновременном снижении или устранении любых нейротоксических побочных эффектов химиотерапии. Например, способность снижать или устранять нейротоксичность (например, индуцированную химиотерапией нейротоксичность) может позволить пациенту переносить химиотерапию без необходимости снижения любой дозы или прекращения лечения, что могло бы привести к неадекватному лечению рака и/или сокращению выживаемости.
В общем случае, в одном из аспектов настоящего описания раскрыты способы лечения млекопитающего с нейротоксичностью. Способы могут включать или по существу заключаются во введении млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей модулятор кальциевых каналов Т-типа или его соль, для уменьшения симптома нейротоксичности у млекопитающего. Способ также может включать идентификацию млекопитающего как страдающего нейротоксичностью. Млекопитающее может быть человеком. Нейротоксичность может быть индуцированной химиотерапией нейротоксичностью. Указанная индуцированная химиотерапией нейротоксичность может представлять собой индуцированную бортезомибом нейротоксичность. Млекопитающему с нейротоксичностью может быть назначена химиотерапия для лечения рака у млекопитающего. Рак может представлять собой множественную миелому, лимфому клеток мантийной зоны, лейкемию, рак пищеварительного тракта, рак легких, рак яичек, рак яичников, рак головного мозга, рак матки, рак предстательной железы, рак костей, рак молочной железы или рак мочевого пузыря. Симптомом может быть боль, слабость в конечностях, онемение конечностей, зуд, парестезия, паралич, аносмия, птоз, хронический кашель, двигательные нарушения, потеря памяти, потеря зрения, головная боль, когнитивное расстройство, энцефалопатия, слабоумие, расстройство настроения, запор, сексуальная дисфункция, задержка мочеиспускания, кровотечение или любые их комбинации. Модулятор кальциевых каналов Т-типа может быть отрицательным модулятором. Отрицательный модулятор может быть отрицательным аллостерическим модулятором. Модулятор кальциевых каналов Т-типа может снижать активность кальциевых каналов Т-типа. Модулятор кальциевых каналов Т-типа может включать CX-8998. CX-8998 может быть в форме соли. Модулятор кальциевых каналов Т-типа может включать метаболит CX-8998. Метаболит CX-8998 может иметь структуру:
или любые их комбинации. Метаболит CX-8998 может быть в форме соли. Модулятор кальциевых каналов Т-типа может включать СХ-8998 и один или более метаболитов СХ-8998. Композиция может включать от примерно 10 нМ до примерно 1000 нМ модулятора кальциевых каналов Т-типа. Композиция может включать от примерно 3 мг/кг массы тела млекопитающего до примерно 30 мг/кг массы тела млекопитающего модулятора кальциевых каналов Т-типа для млекопитающего. Композицию можно вводить перорально.
Если не указано иное, все используемые в настоящем описании технические и научные термины имеют такое же значение, в котором их обычно понимает специалист в области, к которой относится настоящее изобретение. Хотя для осуществления изобретения могут быть использованы способы и материалы, аналогичные или эквивалентные представленным в настоящем описании, ниже описаны подходящие способы и материалы. Все публикации, заявки на патент, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем описании, полностью включены в него посредством ссылки. В случае конфликта преимущественную силу будет иметь настоящее описание, включая определения. Кроме того, материалы, способы и примеры носят исключительно иллюстративный характер и не предназначены для ограничения.
Подробное описание одного или более вариантов осуществления изобретения показано ниже на прилагаемых чертежах и в описании. Другие признаки, цели и преимущества изобретения будут очевидны из описания и чертежей, а также из формулы изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1А-1D. Влияние CX-8998 на противораковую активность BTZ. (Фиг. 1A) Процент выживаемости клеточных линий множественной миеломы (MCL) MM.1S, RPMI8336 и U266B1, обработанных in vitro BTZ в течение 72 часов при IC50 (6±0,5 нМ, 4±1,7 нМ и 2,5±0,6 нМ, соответственно) в присутствии или в отсутствие различных концентраций CX-8998. (Фиг. 1B) Относительная масса тела голых мышей с ксенотрансплантатами RPMI8226. (Фиг. 1C) Объем опухоли у бестимусных мышей с ксенотрансплантатами RPMI8226. (Фиг. 1D) Процент ингибирования протеасом в РВМС, выделенных из крыс.
Фиг 2. Скорость проводимости каудального нерва. Скорость проводимости, полученная в каудальных нервах с помощью электромиографии во время фазы 1 (исходный уровень и через 4 недели) и фазы 2 (через 5 и 8 недель) в крысиной модели BTZ-индуцированной CIPN.
Фиг 3. Скорость проводимости седалищного нерва. Скорость проводимости, полученная в седалищных нервах с помощью электромиографии во время фазы 1 (исходный уровень и через 4 недели) и фазы 2 (через 5 и 8 недель) в крысиной модели BTZ-индуцированной CIPN.
Фиг. 4. Болевой порог при механической стимуляции (МТ). Оценка механической аллодинии, измеренная в тесте с динамическим эстезиометром во время фазы 1 (исходный уровень и через 4 недели) и фазы 2 (через 5 и 8 недель) на крысиной модели BTZ-индуцированной CIPN.
Фиг. 5А-5С. Полимеризация β-тубулина, плотность волокон седалищного нерва и гистопатология. (Фиг. 5A) Процент полимеризации β-тубулина в белковых экстрактах из ткани седалищного нерва, взятой после 8-недельного лечения BTZ в присутствии или в отсутствие CX-8998. (Фиг. 5B) Количество нервных волокон на 1 мм, определенное в срезах плантарного безволосого участка кожи задних лап, собранных после 8-недельного лечения BTZ в присутствии или в отсутствие CX-8998. (Фиг. 5C) Репрезентативные изображения образцов тканей, количественно оцененные на фиг. 5B.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем описании представлены способы и материалы для лечения млекопитающего с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью) или риском развития нейротоксичности (например, млекопитающего, которому запланировано или ожидается введение химиотерапевтического средства, ассоциированного с индуцированной химиотерапией нейротоксичностью). Например, млекопитающему с нейротоксичностью можно вводить один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) для лечения млекопитающего. В некоторых случаях млекопитающему с нейротоксичностью или риском ее развития можно вводить один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа и/или один или более их метаболитов для лечения млекопитающего.
В некоторых случаях млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичности) или риском ее развития можно вводить один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) для уменьшения или устранения одного или более симптомов нейротоксичности. Например, один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа можно вводить млекопитающему, как раскрыто в настоящем описании, для уменьшения тяжести одного или более симптомов нейротоксичности, например, на 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95 и более процентов. В некоторых случаях симптом нейротоксичности может быть отсроченным симптомом (например, может оставаться незамеченным в течение нескольких часов, дней или недель после развития нейротоксичности). Примеры симптомов нейротоксичности, которые могут быть уменьшены или устранены раскрытыми в описании способами, включают, без ограничения, боль, слабость (например, слабость конечностей), онемение (например, онемение конечностей), зуд, парестезию, паралич, аносмию, птоз, хронический кашель, двигательную дисфункцию, потерю памяти, потерю зрения, головную боль, когнитивное расстройство, энцефалопатию, деменцию, расстройство настроения, запор, сексуальную дисфункцию, задержку мочеиспускания и/или кровотечение.
Любое подходящее млекопитающее (например, человека) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичности) или риском ее развития можно лечить, как раскрыто в настоящем описании, путем введения одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, таких как CX-8998 или его метаболит. В некоторых случаях млекопитающее с нейротоксичностью или риском ее развития может страдать заболеванием или расстройством, которое делает млекопитающее более уязвимым к развитию нейротоксичности. Примеры млекопитающих с нейротоксичностью или риском ее развития, которых можно лечить, как раскрыто в настоящем описании, включают, без ограничения, людей, приматов, отличных от человека, таких как обезьяны, собак, кошек, лошадей, коров, свиней, овец, мышей и крыс. В некоторых случаях человека с нейротоксичностью или риском ее развития можно лечить путем введения человеку одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа.
Любую подходящую нейротоксичность можно лечить, как раскрыто в настоящем описании, путем введения одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, таких как CX-8998 или его метаболит. Нейротоксичность может негативно воздействовать (например, может повредить) на любую соответствующую часть нервной системы. В некоторых случаях нейротоксичность может присутствовать в центральной нервной системе (ЦНС). В некоторых случаях нейротоксичность может присутствовать в периферической нервной системе (ПНС). В некоторых случаях нейротоксичность может присутствовать как в ЦНС, так и в ПНС. Нейротоксичность может вызывать повреждение нервной системы любого типа. В некоторых случаях нейротоксичность может включать обратимое повреждение нервной ткани (например, одного или более нейронов). Например, нейротоксичность может изменить нормальную активность нервной системы (например, может нарушить функцию одного или более нейронов). В некоторых случаях нейротоксичность может включать необратимое повреждение нервной ткани (например, одного или более нейронов). Например, нейротоксичность может привести к гибели или нарушению функции одного или более нейронов. В некоторых случаях нейротоксичность может быть вызвана воздействием определенного вещества. Причины нейротоксичности включают, без ограничения, лекарственную терапию (например, химиотерапию), лучевую терапию, воздействие тяжелых металлов (например, свинца и ртути), диабет, вирусные инфекции, повреждение нервов, наследственные генетические заболевания, воздействие пестицидов, воздействие растворителей (например, промышленных растворителей и чистящих растворителей), воздействие плесени, пищевых продуктов, пищевых добавок и токсинов (например, встречающихся в природе токсинов и искусственных токсинов). В некоторых случаях нейротоксичность может быть вызвана химиотерапией (например, индуцированная химиотерапией нейротоксичность). В случае индуцированной химиотерапией нейротоксичности такая нейротоксичность может быть вызвана любым химиотерапевтическим средством. Примеры химиотерапевтических средств, которые могут вызывать нейротоксичность при введении млекопитающему (например, человеку), включают, без ограничения, ингибиторы протеасом (например, BTZ, такие как VELCADE®, CHEMOBORTТМ и BORTECADТМ), эпотилоны, алкалоиды барвинка, таксаны, иммуномодуляторы, антрациклины, циклофосфамиды и терапевтические препараты на основе платины. При индуцированной химиотерапией нейротоксичности химиотерапию может получать млекопитающее (например, человек) с раком любого типа. В некоторых случаях рак может включать одну или более солидных опухолей. В некоторых случаях рак может быть гематологическим раком. В некоторых случаях рак может быть первичным раком, метастатическим раком или рецидивирующим раком. Примеры раковых заболеваний, которые можно лечить с помощью химиотерапевтических агентов, способных вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность, включают, без ограничения, множественную миелому, лимфому клеток мантийной зоны, лейкемию, рак пищеварительного тракта, рак легких, рак яичек, рак яичников, рак мозга, рак матки, рак предстательной железы, рак костей, рак молочной железы и рак мочевого пузыря. В некоторых случаях млекопитающее (например, человек) с множественной миеломой (например, рецидивирующей множественной миеломой) и с индуцированной химиотерапией нейротоксичностью (например, индуцированной BTZ) или риском ее развития можно лечить путем введения одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа для млекопитающих.
В некоторых случаях способы лечения млекопитающего (например, человека) c нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью) или риском ее развития также могут включать идентификацию млекопитающего как страдающего нейротоксичностью или подверженного риску ее развития. Для идентификации млекопитающего как страдающего нейротоксичностью или подверженного риску ее развития может быть использован любой подходящий способ. Например, для идентификации млекопитающего как страдающего нейротоксичностью можно использовать неврологическое обследование (например, неврологическое обследование на мышечную силу, координацию, чувствительность, когнитивные функции, такие как память и мышление, зрение и речь), неврологическую визуализацию (например, магнитно-резонансную томографию (МРТ)), биопсию нервов или кожи и/или электромиографию (например, скорость нервной проводимости). Например, для идентификации млекопитающего как подверженного риску развития нейротоксичности (например, как предрасположенного к развитию индуцированной химиотерапией нейротоксичности) можно использовать текущее введение химиотерапевтического агента, который может вызвать индуцированную химиотерапией нейротоксичность при введении млекопитающему (например, BTZ), плановое введение химиотерапевтического агента, который при введении млекопитающему может вызвать индуцированную химиотерапией (например, BTZ) нейротоксичность, возраст (например, пожилые пациенты подвержены более высокому риску), вирусные инфекции (например, герпес), курение в анамнезе, наличие паранеопластических антител, нарушение функции почек со сниженным клиренсом креатинина, ранее существовавшие невропатические симптомы (например, из-за сахарного диабета, наследственной невропатии и/или предшествующего воздействия нейротоксинов).
После выявления нейротоксичности (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичности) или риска ее развития млекопитающему (например, человеку) можно вводить один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа или провести инструктаж в случае самостоятельного введения.
Модулятор кальциевого канала Т-типа может представлять собой любую молекулу (например, малую молекулу, нуклеиновую кислоту, полипептид или их комбинацию), которая может ингибировать кальциевый канал Т-типа. Кальциевые каналы Т-типа также могут называться активируемыми напряжением кальциевыми каналами 3 (Cav3). В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа может быть антагонистом кальциевых каналов Т-типа. Например, модулятор кальциевых каналов Т-типа может ингибировать (например, снижать или устранять) экспрессию кальциевого канала Т-типа (например, субъединицы кальциевого канала Т-типа). В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа может ингибировать (например, может снижать или устранять) активность кальциевого канала Т-типа (например, через связывание или иным образом ингибирования или блокирования активности канала). В контексте настоящего описания термин «CX-8998» также может относиться к структурным аналогам CX-8998 при условии сохранения структурным аналогом фармацевтической функции CX-8998, как раскрыто в настоящем описании (например, дозозависимого уменьшения тремора, уменьшения и/или устранения судорог, и/или уменьшения и/или устранения боли). Аналогично, метаболит CX-8998 также может относиться к структурным аналогам метаболита CX-8998 при условии сохранения структурным аналогом фармацевтической функции метаболита CX-8998, как раскрыто в настоящем описании. В некоторых случаях, когда модулятором кальциевых каналов Т-типа является CX-8998, CX-8998 может быть метаболизирован (например, метаболизирован в организме млекопитающего после введения млекопитающему модулятора кальциевых каналов Т-типа) в один или более метаболитов CX-8998. Химические названия CX-8998 включают, без ограничения, (R)-2-(4-изопропилфенил)-N-(1-(5-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)этил)ацетамид и 2-(4-изопропилфенил)-N-{(1R)-1-(5-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)этил}ацетамида гидрохлорид. Примеры модуляторов кальциевых каналов Т-типа по изобретению включают, без ограничения, CX-8998 (также упоминаемый как MK-8998), метаболиты CX-8998, CX-5395 и CX-6526. В некоторых случаях млекопитающее (например, человека) с нейротоксичностью или риском ее развития можно лечить путем введения млекопитающему CX-8998. Химическая структура CX-8998 показана ниже:
Химические структуры типичных метаболитов CX-8998 показаны ниже:
Модулятор кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) может быть в любой подходящей форме. В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа может быть в форме основания (например, в форме свободного основания соединения). В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа может быть в форме соли (например, в форме соли соединения). В случаях, когда модулятор кальциевых каналов Т-типа, такой как CX-8998 или его метаболит, представляет собой соль, солью может быть любая подходящая соль. Например, соль CX-8998 может включать соль, образованную любой подходящей кислотой (например, хлористоводородной кислотой, лимонной кислотой, бромистоводородной кислотой, малеиновой кислотой, фосфорной кислотой, серной кислотой, фумаровой кислотой и винной кислотой). Например, CX-8998 может представлять собой гидрохлоридную соль CX-8998 (например, CX-8998-HCl). В некоторых случаях соль CX-8998 может быть дейтерирована.
В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) может быть таким, как описано в другом документе (см., например, международную заявку на патент, озаглавленную «Лечение эссенциального тремора (R)-2-(4-изопропилфенил)-N-(1-(5-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)этил)ацетамидом», поданную 3 октября 2019 г.).
В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) может проникать через гематоэнцефалический барьер. Например, CX-8998 или его метаболит может проникать через гематоэнцефалический барьер (например, может присутствовать в спинномозговой жидкости (ЦСЖ) и/или ЦНС). В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа не может проникать через гематоэнцефалический барьер.
Модулятор кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) может быть селективным модулятором. «Селективный» в этом контексте означает, что модулятор кальциевых каналов Т-типа является более эффективным при модуляции кальциевых каналов Т-типа по сравнению с модуляцией других активируемых напряжением кальциевых каналов. Например, модулятор кальциевых каналов Т-типа может быть более эффективным при модуляции кальциевых каналов Т-типа по сравнению с модуляцией других типов кальциевых каналов (например, кальциевых каналов L-типа, кальциевых каналов P-типа, кальциевых каналов N-типа и кальциевых каналов R-типа). Например, модулятор кальциевых каналов Т-типа может быть более эффективным при модуляции кальциевых каналов Т-типа по сравнению с модуляцией мишеней ионных каналов другого типа (например, хлоридных, калиевых и натриевых каналов). Селективность можно определить любым подходящим способом. Например, селективность можно определить путем сравнения IC50 модулятора кальциевых каналов Т-типа при ингибировании ионного канала первого типа (например, кальциевого канала Т-типа) с его IC50 при ингибировании ионного канала второго типа (например, натриевого канала). Если IC50 для ингибирования каналов первого типа ниже, чем IC50 для ингибирования каналов второго типа, то модулятор кальциевых каналов Т-типа можно считать селективным. Отношение IC50, равное 0,1 (или ниже), означает 10-кратную (или более высокую) селективность. Отношение IC50, равное 0,01 (или ниже), означает 100-кратную (или более высокую) селективность. Отношение IC50, равное 0,001 (или ниже), означает 1000-кратную (или более высокую) селективность. В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа, такой как CX-8998 или его метаболит, может обладать селективностью в отношении кальциевых каналов Т-типа, которая выше селективности к ионным каналам других типов в 2 раза или более, 10 раз или более, 100 раз или более или 1000 раз или более. Например, модулятор кальциевых каналов Т-типа, такой как CX-8998 или его метаболит, может иметь селективность, которая более чем 100 раз выше селективности к другим ионным каналам. В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа, такой как CX-8998 или его метаболит, может оказывать селективное антагонистическое действие на любую изоформу Cav3 (например, Cav3.1, Cav3.2 и/или Cav3.3). В некоторых случаях модулятор кальциевых каналов Т-типа, такой как CX-8998 или его метаболит, может оказывать селективное антагонистическое действие на все три изоформы Cav3 (например, Cav3.1, Cav3.2 и Cav3.3).
В некоторых случаях один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит) могут быть включены в состав композиции (например, приемлемой композиции), предназначенной для введения млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, вызванной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития. Например, один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа могут быть приготовлены в виде состава вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями (добавками), вспомогательными веществами и/или разбавителями. В некоторых случаях фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество и/или разбавитель может представлять собой не встречающийся в природе фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество и/или разбавитель. В некоторых случаях фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество и/или разбавитель может представлять собой синтетический фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество и/или разбавитель. Примеры фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ и разбавителей, которые можно использовать в композиции, раскрытой в настоящем описании, включают, без ограничения, сахарозу, лактозу, крахмал (например, гликолят крахмала), целлюлозу, производные целлюлозы (например, модифицированные целлюлозы, такие как микрокристаллическая целлюлоза, и простые эфиры целлюлозы, такие как гидроксипропилцеллюлоза (ГПЦ) и простой эфир гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ)), ксилит, сорбит, маннит, желатин, полимеры (например, поливинилпирролидон (ПВП), полиэтиленгликоль (ПЭГ), сшитый поливинилпирролидон (кросповидон), карбоксиметилцеллюлозу, полиэтилен-полиоксипропиленовые блок-полимеры и сшитую карбоксиметилцеллюлозу натрия (кроскармеллозу натрия)), оксид титана, азокрасители, силикагель, пирогенный диоксид кремния, тальк, карбонат магния, растительный стеарин, стеарат магния, стеарат алюминия, стеариновую кислоту, антиоксиданты (например, витамин А, витамин Е, витамин С, ретинилпальмитат и селен), лимонную кислоту, цитрат натрия, парабены (например, метилпарабен и пропилпарабен), вазелин, диметилсульфоксид, минеральное масло, сывороточные белки (например, человеческий сывороточный альбумин), глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, воду, соли или электролиты (например, физиологический раствор, протаминсульфат, динатрия гидрофосфат, гидрофосфат калия, хлорид натрия и соли цинка), коллоидный кремнезем, трисиликат магния, полиакрилаты, воски, шерстяной жир, лецитин и кукурузное масло.
Композиция, включающая один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит), может быть разработана для любого типа введения млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития. Например, композиция, включающая один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, может быть разработана для перорального или парентерального введения (включая, без ограничения, подкожную, внутримышечную, внутривенную, внутрикожную, внутримозговую, подоболочечную или внутрибрюшинную (i.p.) инъекцию) млекопитающему с нейротоксичностью или риском ее развития. Композиции, подходящие для перорального введения, включают, без ограничения, жидкости, таблетки, капсулы, пилюли, порошки, гели и гранулы. В некоторых случаях композиция, включающая CX-8998 или его метаболит, может представлять собой пероральную дозированную форму с немедленным высвобождением. В некоторых случаях композиция, включающая CX-8998 или его метаболит, может представлять собой пероральную дозированную форму с контролируемым (например, отсроченным и/или пролонгированным) высвобождением. В некоторых случаях композиция, включающая CX-8998 или его метаболит, может представлять собой пероральную лекарственную форму, содержащую по меньшей мере первый компонент, выполненный с возможностью немедленного высвобождения, и второй компонент, выполненный с возможностью контролируемого высвобождения. Композиции, подходящие для парентерального введения, включают, без ограничения, водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, обеспечивающие изотоничность состава с кровью предполагаемого реципиента.
Композицию, включающую один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит), можно вводить млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития, в любом подходящем количестве (например, в любой подходящей дозе). Например, композиция, раскрытая в настоящем описании, может быть приготовлена в виде состава, предназначенного для доставки эффективного количества одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа млекопитающему с нейротоксичностью или риском ее развития. Эффективные количества могут меняться в зависимости от пути введения, возраста и общего состояния здоровья субъекта, использования наполнителя, возможности совместного использования с другими терапевтическими средствами лечения, например использования других средств, и решения лечащего врача. Эффективное количество композиции, содержащей один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, может быть любым количеством, которое позволяет лечить млекопитающего с нейротоксичностью или риском ее развития, как раскрыто в настоящем описании, не вызывая значительной токсичности (например, повреждения клеток (цитотоксичности), тканей и/или органов (например, гепатотоксичности), отличных от нервной ткани) у млекопитающего. Например, эффективное количество CX-8998 может составлять от примерно 10 нМ до примерно 1000 нМ (например, от примерно 10 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 700 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 400 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 200 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 100 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 50 нМ, от примерно 50 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 10 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 100 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 400 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 600 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 700 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 800 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 900 нМ до примерно 1000 нМ, от примерно 100 нМ до примерно 900 нМ, от примерно 200 нМ до примерно 800 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 700 нМ, от примерно от 400 нМ до примерно 600 нМ, от примерно 100 нМ до примерно 300 нМ, от примерно 300 нМ до примерно 500 нМ, от примерно 500 нМ до примерно 700 нМ или от примерно 700 нМ до примерно 900 нМ). В некоторых случаях эффективное количество CX-8998 может составлять примерно 10 нМ, примерно 30 нМ, примерно 100 нМ, примерно 300 нМ или примерно 1000 нМ. Например, эффективное количество CX-8998 может составлять от примерно 10 микрограмм на кг массы тела получающего лечение млекопитающего (мкг/кг) до примерно 1000 мкг/кг в сутки (например, от примерно 10 мкг/кг до примерно 900 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 800 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 700 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 600 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 500 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 400 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 300 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 200 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 100 мкг/кг, от примерно 10 мкг/кг до примерно 50 мкг/кг, от примерно 50 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 100 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 200 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 300 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 400 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 500 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 600 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 700 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 800 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 900 мкг/кг до примерно 1000 мкг/кг, от примерно 50 мкг/кг до примерно 900 мкг/кг, от примерно 75 мкг/кг до примерно 800 мкг/кг, от примерно 100 мкг/кг до примерно 600 мкг/кг, от примерно 200 мкг/кг до примерно 700 мкг/кг, от примерно от 300 мкг/кг до примерно 600 мкг/кг, от примерно 400 мкг/кг до примерно 500 мкг/кг, от примерно 100 мкг/кг до примерно 200 мкг/кг, от примерно 200 мкг/кг до примерно 300 мкг/кг, от примерно 300 мкг/кг до примерно 400 мкг/кг, от примерно 400 мкг/кг до примерно 500 мкг/кг, от примерно 500 мкг/кг до примерно 600 мкг/кг, от примерно 600 мкг/кг до примерно 700 мкг/кг, от примерно 700 мкг/кг до примерно 800 мкг/кг или от примерно 800 мкг/кг до примерно 900 мкг/кг массы тела в сутки). В некоторых случаях эффективное количество CX-8998 может составлять примерно 100 мкг/кг, примерно 300 мкг/кг или примерно 600 мкг/кг в сутки. Эффективное количество может быть постоянным или может регулироваться по скользящей шкале или представлять собой дозу, регулируемую в зависимости от реакции млекопитающего на лечение. На фактическое эффективное количество, используемое для конкретного применения, могут влиять различные факторы. Например, в зависимости от частоты введения, продолжительности лечения, использования нескольких лечебных средств, способа введения и/или тяжести нейротоксичности у получающего лечение млекопитающего может возникнуть потребность в увеличении или уменьшении фактически вводимого эффективного количества.
Композицию, содержащую один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит), можно вводить млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития с любой подходящей частотой. Частота введения может быть любой частотой, которая способствует лечению млекопитающего с нейротоксичностью или риском ее развития, не вызывая значительной токсичности (например, повреждения клеток (цитотоксичности), тканей и/или органов (например, гепатотоксичности), отличных от нервной ткани) у млекопитающего. Например, частота введения может составлять от примерно нескольких раз в сутки (например, двух раз в сутки) до примерно одного раза в сутки, от примерно одного раза в сутки до примерно одного раза в неделю, от примерно одного раза в неделю до примерно одного раза в месяц или от примерно от двух раз в месяц до примерно одного раза в месяц. Частота введения может оставаться постоянной или может меняться в ходе лечения. Как и в случае с эффективным количеством, на фактическую частоту введения, используемую для конкретного применения, могут влиять различные факторы. Например, в зависимости от эффективного количества, продолжительности лечения, использования нескольких лечебных средств и/или способа введения может возникнуть потребность в увеличении или уменьшении частоты введения.
Композицию, содержащую один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит), можно вводить млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития в течение любого подходящего периода времени. Эффективная продолжительность введения млекопитающему или применения млекопитающим композиции, содержащей один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, может представлять собой любую продолжительность, которая обеспечивает лечение млекопитающего с нейротоксичностью или риском ее развития, не вызывая значительной токсичности (например, повреждения клеток (цитотоксичности), тканей и/или органов (например, гепатотоксичности), отличных от нервной ткани). Например, эффективная продолжительность может варьировать от нескольких дней до нескольких недель, от нескольких недель до нескольких месяцев, от нескольких месяцев до нескольких лет или от нескольких лет и далее на протяжении всей жизни. В некоторых случаях эффективная продолжительность может варьировать от примерно 10 лет до примерно всей жизни. На фактическую эффективную продолжительность конкретного вида лечения могут влиять несколько факторов. Например, эффективная продолжительность может меняться в зависимости от частоты введения, эффективного количества, использования нескольких лечебных средств и/или пути введения.
В некоторых случаях композиция, содержащая один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, СХ-8998 или его метаболит), может включать один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа в качестве единственного активного ингредиента(ов) в композиции, эффективной для лечения млекопитающего (например, человека) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития.
В некоторых случаях композиция, содержащая один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа (например, CX-8998 или его метаболит), может включать один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) дополнительных активных агентов (например, терапевтических средств), которые эффективны для лечения млекопитающего (например, человека) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития.
В некоторых случаях млекопитающее (например, человек) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития, получающее лечение, как раскрыто в настоящем описании, путем введения одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, таких как CX-8998 или его метаболит, также может получать лечение одним или более (например, одним, двумя, тремя, четырьмя, пятью или более) дополнительными терапевтическими средствами. Терапевтическое средство, используемое в комбинации с одним или более модуляторами кальциевых каналов Т-типа, раскрытыми в настоящем описании, может представлять собой любое подходящее терапевтическое средство. В некоторых случаях терапевтическое средство, используемое для лечения нейротоксичности, может представлять собой средство, которое может ослаблять или устранять один или более симптомов нейротоксичности. Примеры терапевтических средств, которые можно использовать в комбинации с одним или более модуляторами кальциевых каналов Т-типа, раскрытыми в настоящем описании, для лечения млекопитающего с нейротоксичностью или риском ее развития, включают, без ограничения, стероиды (например, кортикостероиды), обезболивающие средства (например, ацетаминофен, нестероидные противовоспалительные средства (NSAID), такие как ибупрофен и напроксен, и опиоиды, такие как гидрокодон, гидроморфон, метадон, морфин и оксикодон), противоэпилептические средства и антидепрессанты (например, ингибиторы обратного захвата серотонина и норадреналина (SNRI), селективные ингибиторы обратного захвата серотонина (SSRI), трициклические препараты и ингибиторы моноаминоксидазы (MAOI)). В некоторых случаях одно или более дополнительных терапевтических средств можно вводить вместе с одним или более модуляторами кальциевых каналов Т-типа (например, в составе композиции, содержащей один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа и содержащей одно или более дополнительных терапевтических средств). В некоторых случаях одно или более дополнительных терапевтических средств можно вводить независимо от одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа. Когда одно или более дополнительных терапевтических средств вводят независимо от одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, первым может быть введен один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, и затем вторым может быть введено одно или более дополнительных терапевтических средств, или наоборот.
В некоторых случаях способы лечения млекопитающего (например, человека) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития, как раскрыто в настоящем описании (например, путем введения одного или более модуляторов кальциевых каналов T-типа, таких как CX-8998 или его метаболит), также могут включать получение млекопитающим одного или более (например, одного, двух, трех, четырех, пяти или более) дополнительных видов лечения (например, терапевтических вмешательств), которые эффективны для лечения нейротоксичности у млекопитающего. Примеры дополнительных способов лечения, которые можно использовать, как раскрыто в настоящем описании, для лечения млекопитающего с нейротоксичностью или риском ее развития, включают, без ограничения, оксигенотерапию (например, гипербарическую оксигенотерапию), трудотерапию, физиотерапию, хирургию и медитацию. В некоторых случаях одно или более дополнительных видов лечения, эффективных для лечения одного или более симптомов нейротоксичности, можно предоставлять одновременно с введением одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа. В некоторых случаях один или более дополнительных видов лечения, которые эффективны для лечения одного или более симптомов нейротоксичности, можно предоставлять до и/или после введения одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа.
В некоторых случаях млекопитающему (например, человеку) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или риском ее развития, получающему лечение, как раскрыто в настоящем описании, путем введения одного или более (например, одного, два, три, четыре, пять или более) модуляторов кальциевых каналов Т-типа, таких как CX-8998 или его метаболит, могут вводиться или могут быть назначены для введения один или более (например, один, два, три, четыре, пять или более) химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность. Химиотерапевтический агент, который при введении млекопитающему может вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность и который можно использовать в комбинации с одним или более модуляторами кальциевых каналов Т-типа, раскрытыми в настоящем описании, может представлять собой любой подходящий химиотерапевтический агент, который при введении млекопитающему может вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность. Примеры химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность, включают, без ограничения, ингибиторы протеасом (например, BTZ, такие как VELCADE®, CHEMOBORTТМ и BORTECADТМ), эпотилоны, алкалоиды барвинка, таксаны, иммуномодуляторы, антрациклины, циклофосфамиды и препараты на основе платины. Например, млекопитающему, больному раком, которому вводят или которому назначено введение одного или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность, также можно вводить (например, предоставлять совместное лечение) один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа. В контексте настоящего описания, совместное лечение или совместное введение может включать во время лечения введение двух или более терапевтических средств (например, одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа и одного или более химиотерапевтических агентов, которые при введении в организм больного могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность). В некоторых случаях совместное введение двух или более терапевтических средств может включать одновременное или по существу одновременное введение двух или более терапевтических средств. Например, один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа могут быть введены с интервалом в несколько секунд или минут (например, с интервалом от примерно 0 до примерно 5 минут) от момента введения одного или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность. В некоторых случаях один или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность, можно вводить вместе с одним или более модуляторами кальциевых каналов Т-типа (например, в композиции, содержащей один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа и содержащие один или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность). В некоторых случаях один или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность, можно вводить независимо от одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа. Например, один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа могут быть введены с интервалом в несколько минут, часов, дней или недель от момента введения одного или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность. Когда один или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность, вводят независимо от одного или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, первым может быть введен один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа, и затем вторым может быть введен один или более химиотерапевтических агентов, которые при введении млекопитающему могут вызывать индуцированную химиотерапией нейротоксичность (например, один или более модуляторов кальциевых каналов Т-типа могут быть введены с целью профилактики) или наоборот.
В некоторых случаях способы лечения млекопитающего (например, человека) с нейротоксичностью (например, индуцированной химиотерапией нейротоксичностью, такой как BTZ-индуцированная нейротоксичность) или с риском ее развития, как раскрыто в настоящем описании (например, путем введения одного или более модуляторов кальциевых каналов T-типа, таких как CX-8998 или его метаболит), также могут включать мониторинг получающего лечение млекопитающего. Для мониторинга тяжести нейротоксичности у млекопитающего можно использовать любой подходящий способ. Например, для мониторинга тяжести нейротоксичности у млекопитающего можно использовать неврологическое обследование (например, неврологическое обследование для оценки мышечной силы, координации, чувствительности, когнитивных функций, таких как память и мышление, зрение и речь), неврологическую визуализацию (например, МРТ), биопсию нервов или кожи и/или электромиографию (например, скорость нервной проводимости). В некоторых случаях способы, раскрытые в настоящем описании, также могут включать мониторинг получающего лечение млекопитающего, как раскрыто в настоящем описании, на наличие токсичности другого типа (например, повреждения клеток (цитотоксичности), тканей и/или органов (например, гепатотоксичности и нефротоксичности), отличных от нервной ткани). Уровень токсичности, если таковая имеется, можно определить путем оценки клинических признаков и симптомов у млекопитающего до и после введения известного количества конкретной композиции. Следует отметить, что эффективное количество конкретной композиции, вводимой млекопитающему, можно регулировать в соответствии с желаемым результатом, а также реакцией млекопитающего и уровнем токсичности.
Изобретение дополнительно описано в приведенных ниже примерах, которые не ограничивают объем изобретения, описанный в формуле изобретения.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: Устранение индуцированной бортезомибом нейротоксичности путем введения CX-8998
В этом примере выполняют оценку CX-8998, селективного модулятора кальциевых каналов Т-типа, в отношении его влияния на цитотоксичность бортезомиба (BTZ) и способность устранять индуцированную химиотерапией периферическую нейротоксичность (CIPN).
Способы
Исследования in vitro
Химические и лекарственные вещества
Среда RPMI (Roswell Park Memorial Institute) 1640, пенициллин (100 ЕД/мл), стрептомицин (100 мкг/мл), HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), бикарбонат натрия и пируват натрия приобретали в EuroClone SpA (Перо, Италия). Фетальную бычью сыворотку (FBS) получали от Hyclone Laboratories, Inc (Логан, Юта, США). Все остальные химикаты приобретали в Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). BTZ приобретали в LC Laboratories (Вобурн, Массачусетс, США), и CX-8998 приобретали в Cavion, Inc. (Шарлоттсвилл, Виргиния, США). BTZ (2,6 мМ) и CX-8998 (10 мМ) растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и разводили в культуральной среде.
Клеточные линии множественной миеломы человека
Клетки MM.1S и U266B1 получали из Американской коллекции типовых культур (Сан-Джованни, Италия). Все клеточные линии поддерживали в плавающей культуре в среде RPMI, содержащей 2 мМ L-глутамина и дополненной 10% FBS, пенициллином и стрептомицином. В клеточную среду для MM.1S добавляли 1,5 г/л бикарбоната натрия, 10 мМ HEPES и 1 мМ пирувата натрия. Клетки выращивали в культуральных флаконах объемом 75 см2 для плавающих клеток (Corning Inc. Корнинг, Нью-Йорк, США) при 37ºC в 5% CO2 и 95% воздуха.
Изучение цитотоксичности BTZ in vitro
Для измерения ингибирующего эффекта BTZ на рост клеток (% выживаемости клеток) использовали анализ сульфродамина B (SRB). Клетки высевали в 96-луночные планшеты (Eppendorf, Милано, Италия) по 10000 клеток/лунку. Через 24 часа клетки подвергали воздействию BTZ (0,05-250 нМ) в течение 72 часов. После инкубации BTZ разводили в культуральной среде в диапазоне доз для тестирования. Клетки фиксировали трихлоруксусной кислотой в течение 1 часа. Клетки окрашивали раствором SRB в 1% уксусной кислоте в течение 15 минут. Несвязавшийся краситель удаляли пятью промывками 1% уксусной кислотой. Связанный краситель растворяли в растворе трис(гидроксиметил)аминометанового основания, и измеряли поглощение содержимого при 540 нМ. Ингибирование роста выражали в процентах от поглощения клеток в контрольном ДМСО и корректировали относительно поглощения до добавления лекарственного средства. Концентрацию (IC50) BTZ, ингибирующую выживаемость клеток на 50% относительно контроля, вычисляли с помощью нелинейного метода наименьших квадратов, используя программное обеспечение GraphPad Prism (версия 4.0, GraphPad Software, Inc., Ла-Хойя, Калифорния, США).
Изучение in vitro влияния комбинации (BTZ и CX-8998)
Три MMC человека (RPMI 8226, MM.1S, U266B1) подвергали воздействию концентрации IC50 BTZ в течение 72 часов отдельно или в комбинации с CX-8998 при 5 концентрациях (10, 30, 100, 300, 1000 нМ). Эти концентрации (более 2 порядков по величине) CX-8998 были основаны на предыдущих экспериментах, проводимых на клеточных культурах. Также выполняли инкубацию с добавлением только CX-8998 в одной из 5 концентраций и только ДМСО (контроль). Ингибирование роста каждой из 3 клеточных линий измеряли с помощью анализа SRB и выражали в виде среднего значения ± SD % выживаемости клеток для каждой концентрации лекарственного средства или комбинации лекарственных средств относительно контроля (контрольное значение=100%). Разницу в процентах выживаемости клеток для каждого лекарственного средства или комбинации лекарственных средств относительно контроля анализировали с помощью нелинейного метода наименьших квадратов со статистической значимостью р <0,05.
Исследования in vivo
Изучение in vivo противоопухолевой активности (влияния) BTZ и комбинации (BTZ и CX-8998)
Уход и содержание мышей соответствовали Закону о защите животных Министерства сельского хозяйства США (USDA) и правилам START IACUC (Институционального комитета по уходу и использованию животных). Протокол был рассмотрен и одобрен START IACUC. Каждую мышь помещали отдельно в вентилируемые клетки Sealsafe® Plus (Techniplast, Уэст-Честер, Пенсильвания, США) и кормили Teklad 2919 (Envigo, Сомерсет, Нью-Джерси, США), представляющим собой облученный корм для мышей, содержащий 19% белка, 9% жира и 4% клетчатки. Мышей содержали в контролируемых условиях окружающей среды (температура 22 +/-2ºC, относительная влажность 55 +/-10% и 12-часовой цикл свет/темнота (7:00-19:00)).
Это исследование было выполнено компанией South Texas Accelerated Research Therapeutics (START) (Сан-Антонио, Техас, США). BTZ и комбинацию BTZ с CX-8998 тестировали на противоопухолевую активность у бестимусных голых мышей с ксенотрансплантатом на основе клеток START (START-CBX) (Crl: модель опухоли миеломы человека NU(NCr)-Foxn1nu). Клетки RPMI-8226 вводили подкожно (105 клеток) 32 самкам бестимусных голых мышей (Charles River Laboratories, Хьюстон, Техас, США) в возрасте 6-12 недель. Исследование начинали, когда объем опухоли (TV) достигал 125-250 мм3. TV оценивали путем измерения пальпируемой массы цифровым штангенциркулем и выражали в мм3 по формуле ширина2 х длина х 0,52. Мышей стратифицировали по среднему TV на 4 группы по 8 животных в каждой: опухолевый контроль с носителем (0,5% метиленхлорид и 1% твин 80 перорально один раз в сутки в течение 18 дней), неопухолевый контроль (без лечения в течение 28 дней), опухолевый BTZ (внутривенная инъекция 1 мг/кг BTZ два раза в неделю в течение 28 дней), опухолевый BTZ и CX-8998 (внутривенная инъекция 1 мг/кг BTZ два раза в неделю в течение 28 дней и пероральное введение 30 мг/кг CX-8998 один раз в сутки в течение 28 дней). По оценке безопасности в доклинических исследованиях доза 30 мг/кг является переносимой, и предполагалось, что за 28 дней эта доза обеспечит превышающее терапевтический диапазон воздействие. Массу тела, TV и результаты осмотра животных собирали два раза в неделю до 18-го дня (завершение) для контрольных мышей с носителем и два раза в неделю до 28-го дня (завершение) для каждой из трех других групп. Среднее значение массы тела ± SD и TV анализировали с помощью критерия множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Даннета на 18-й день и с помощью критерия Манна-Уитни на 28-й день со статистической значимостью р <0,05.
Изучение in vivo активности BTZ и комбинации (BTZ и CX-8998) по устранению CIPN
Уход и содержание крыс Wistar в исследовании соответствовали рекомендациям Университета Милана-Бикокка и национальным (D.L. n. 26/2014) и международным нормам и правилам (Директива 2010/63/ЕС). Крыс содержали по 2-3 в клетке в тех же условиях окружающей среды, что и бестимусных мышей в исследованиях по изучению влияния. Протокол (47123/14) был одобрен Комитетом по этике Университета Милана-Бикокка.
Использовали самок крыс Wistar (n=52) (Envigo, Корреццана, Италия) в возрасте 10-11 недель. Исследование было разделено на 2 этапа по 4 недели каждый. На первом этапе крыс рандомизировали на 2 группы: 1-я группа получала BTZ (n=44) в дозе 0,2 мг/кг через хвостовую вену внутривенно 3 раза в неделю в течение 4 недель, 2-я группа (n=8) не получала лечения (контроль). В фазе 1 периодически измеряли массу тела относительно исходного уровня (день 1) вплоть до дня 28. На исходном уровне и в конце фазы 1 (день 28) измеряли скорость нервной проводимости (NCV) по каудальному и седалищному нервам, и в тесте с динамическим эстезиометром (DAT) измеряли болевой порог при механической стимуляции (МТ) задней лапы. Затем крыс BTZ повторно рандомизировали на 4 группы для следующей фазы. Во 2-й фазе одна группа (n=8) оставалась без лечения (контроль), вторая группа (n=8) получала BTZ по 0,2 мг/кг 3 раза в неделю в течение 4 недель, и оставшиеся 3 группы (n=12 в каждой) получали комбинированное лечение BTZ в дозе 0,2 мг/кг 3 раза в неделю в течение 4 недель и CX-8998 в дозе 3, 10 или 30 мг/кг в сутки через пероральный зонд в течение 4 недель. Вводимые дозы CX-8998 находились в диапазоне хорошо переносимых воздействий в пределах и выше ожидаемого терапевтического диапазона, основанного на предыдущих доклинических исследованиях. Массу тела периодически измеряли относительно исходного уровня (28-й день) до 56-го дня (окончание). NCV и MT измеряли во всех 4 группах на исходном уровне, а также в дни 35 и 56. В дни 1, 28, 35 и 56 через час после введения BTZ брали образцы крови для измерения протеасом. Полимеризацию β-тубулина и образцы кожи получали для определения плотности внутриэпидермальных нервных волокон (IENF) и гистопатологии. Разницу средних значений ± SEM массы тела, средних значений ± SEM NCV, средних значений ± SEM MT, средних значений ± SEM плотности IENF, средних значений ± SEM полимеризации β-тубулина и средних значений ± SEM ингибирования протеасом анализировали с помощью критерия Манна-Уитни путем их сравнения между группами CTRL и BTZ в конце 4-недельного лечения, затем с помощью критерия множественного сравнения Крускала-Уоллиса и Даннета для сравнения всех групп через 5 и 8 недель со статистической значимостью р <0,05.
Методы оценки при изучении устранения CIPN
NCV
NCV (метры в секунду) получали из хвостового и седалищного нервов с помощью электромиографа (Myto 2, ABN Neuro, Флоренция, Италия). Каудальную NCV измеряли путем размещения регистрирующих игольчатых электродов дистально в хвосте со стимулирующими игольчатыми электродами на 5 см и 10 см проксимальнее точки регистрации. Определяли пиковые латентные периоды потенциалов, зарегистрированных в 2 местах после стимуляции нерва, и вычисляли NCV. Седалищную NCV определяли путем размещения игольчатых регистрирующих электродов вблизи лодыжки и стимулирующих электродов - вблизи бедра. Пиковые латентные периоды регистрировали так же, как и для каудального нерва, и вычисляли NCV. NCV вычисляли в стандартных условиях в помещении с регулируемой температурой (22±2°C), и крысы находились под изофлюрановой анестезией с мониторингом показателей жизнедеятельности.
DAT
МТ оценивали с помощью устройства DAT (модель 37450, Ugo Basile Biological Instruments, Комерио, Италия). После акклиматизации сервоуправляемую заостренную металлическую нить (диаметром 0,5 мм) помещали на подошвенной поверхности задней лапы и оказывали прогрессивное точечное давление до 50 граммов в течение 20 секунд. Давление вызывало произвольную реакцию отдергивания задней лапы, которую регистрировали и которая представляла собой индекс МТ. MT регистрировали попеременно с каждой стороны каждые 2 минуты 3 раза для получения среднего значения. Средние значения МТ представляли собой максимальное давление (в граммах), переносимое каждой крысой. Воздействие механических раздражителей на каждое животное ограничивали 30 секундами.
Анализ ингибирования протеасом
Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяли путем разделения по плотности Ficoll-Hypaque. Клетки добавляли к раствору для лизиса (50 мМ Hepes, 5 мМ ЭДТА, 150 мМ NaCl и 1% Тритон-X100 в воде) и экстрагировали. Лизаты центрифугировали при 13500 об/мин в течение 15 минут при 4ºC. Белковые экстракты солюбилизировали в буфере для лизиса (10% глицерин, 25 мМ TRIS-HCl pH 7,5, 1% Тритон X-100, 5 мМ ЭДТА pH 8 и 1 мМ ЭГТА pH 8) без ингибиторов протеаз и фосфатов и центрифугировали при 14000 об/мин в течение 10 минут при 4ºC. Концентрацию белка оценивали методом Бредфорда с использованием набора реагентов для анализа белка Coomassie® (Pierce, Thermo Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США). Для оценки протеасомной активности использовали флуорометрический анализ, и белковый экстракт инкубировали с субстратом N-сукцинил-Leu-Leu-Val-Tyr-7-амидо-4-метилкумарин (Sigma Aldrich, Милан, Италия) в течение 2 часов. Активность протеасом определяли как относительную световую единицу, генерируемую расщепленным субстратом в реагенте. Флуоресценцию (F) каждой реакции оценивали с помощью флуорометра (прибор-счетчик Wallac 1420 Multilabel Counter, Perkin Elmer Italia SPA, Монца, Италия). Активность протеасом (PA) вычисляли как: %PA=(F BTZ - F субстрат)/(F контроль - F субстрат), и ингибирование выражали как 100 x (1-PA).
Сбор образцов тканей
В день 56 животных подвергали эвтаназии путем ингаляции CO2, и образцы тканей брали у 4 крыс на группу. Правый седалищный нерв замораживали в жидком азоте для анализа полимеризации β-тубулина, и образцы подошвенной гладкой (без шерсти) кожи собирали для измерения плотности IENF.
Анализ полимеризации β-тубулина
Экстракты белков из седалищных нервов обрабатывали аналогично анализу протеасом, за исключением буфера для лизиса, который содержал свежедобавленные ингибиторы протеаз и фосфатов (10 мМ ортованадата натрия, 4 мМ фенилметилсульфонилфторида, 1% апротинина и 20 мМ пирофосфата натрия). Белковые экстракты центрифугировали (14000 об/мин в течение 10 минут при 4ºC) для отделения растворимых (S) фракций, не содержащих тубулин, от полимеризованных (P) фракций. Супернатанты собирали, и осадки полимеризованного тубулина ресуспендировали путем обработки ультразвуком в течение 20 секунд в буфере для лизиса с добавлением 0,5% дезоксихолата натрия (эквивалентно для S-фракции). Аликвоты белков (10 мкг) помещали в 13% SDS-PAGE и после электрофореза переносили на нитроцеллюлозные фильтры. Анализ с помощью иммуноблота выполняли с использованием мышиного антитела к β-тубулину. После инкубации с первичными антителами мембрану промывали и инкубировали с пероксидазой хрена, конъюгированной с козьим анти-кроличьим IgG (Perkin Elmer Italia SPA, Монца, Италия). Для обнаружения использовали хемилюминесцентную систему ECL (Amersham GE Healthcare Europe GmbH, Милан, Италия). Интенсивность полос количественно определяли с помощью системы визуализации Gel Logic 100 (Eastman Kodak, Рочестер, штат Нью-Йорк, США). Окончательные средние значения получали из трех повторных экспериментов, и данные выражали в процентах P/P+S у обработанных крыс относительно контрольной группы.
Плотность IENF
Образцы подошвенной гладкой кожи (5 мм) задних лап фиксировали в 2% PLP (параформальдегид-лизин-перйодат натрия) в течение 24 часов при 4°C и криоконсервировали в течение ночи. Образцы серийно разрезали с помощью криостата с получением срезов размером 20 мкм. Три среза каждой подушечки лапы отбирали случайным образом и подвергнуты иммуноокрашиванию кроличьего поликлонального антитела к белковому продукту гена 9.5 (PGP 9.5; GeneTex, Ирвин, Калифорния, США) в комбинации с биотинилированными антикроличьими IgG и набором субстратов Vector SG с пероксидазой (Vector Laboratories, Burlingame, CA) согласно находящемуся в свободном доступе протоколу. Наблюдатель в слепом режиме подсчитывал общее количество иммуноположительных IENF в каждом срезе под световым микроскопом, оснащенным видеокамерой для микроскопа, при большом увеличении. Подсчитывали отдельные волокна, пересекающие кожно-эпидермальный интерфейс. Вторичные ветви в пределах эпидермиса были исключены. Длину эпидермиса измеряли для получения линейной плотности IENF/миллиметр, как описано в другом документе (Canta et al., 2016 Neurobiol Aging 45:136-148).
Результаты
Изучение in vitro цитотоксичности BTZ и изучение in vitro влияния комбинации (BTZ и CX-8998) на цитотоксичность
BTZ вызывал зависимое от концентрации ингибирование роста клеток (цитотоксичность) в 3 MCL. Значения IC50 BTZ для клеточных линий MM.1S, RPMI 8226 и U266B1 составляли 6±0,5 нМ, 4±1,7 нМ и 2,5±0,6 нМ, соответственно.
Введение только BTZ (концентрации IC50 для клеточных линий MM.1S, RPMI 8226 и U266B1 составляли 6, 4 и 2,5 нМ, соответственно) обеспечивало значимое снижение (p<0,001) процента выживаемости клеток в 3 MCL по сравнению с ДМСО контролем (фиг. 1A). Комбинации CX-8998 (10-1000 нМ) и BTZ приводили к значимому снижению (p <0,001) процента выживаемости клеток в 3 MCL по сравнению с ДМСО контролем и продемонстрировали аналогичное снижение по сравнению с одним только BTZ (фиг. 1A). Сам CX-8998 (во всех концентрациях) не снижал процент выживаемости клеток ни в одной из MCL и продемонстрировал аналогичный уровень выживаемости клеток по сравнению с ДМСО контролем (фиг. 1А).
Изучение in vivo влияния комбинации (BTZ и CX-8998) на противоопухолевую активность
Влияние CX-8998 на противоопухолевую активность BTZ in vivo оценивали на голых мышах, несущих ксенотрансплантаты MCL человека RPMI-8229. Процент увеличения массы тела, начиная с исходного уровня (0-й день) до 18-го дня, был очевидным в контрольной группе с носителем (согласуется с ростом ксенотрансплантата опухоли) и в меньшей степени в контрольной группе без опухоли (нормальный рост животных) (фиг. 1B). Обработка 1 мг/кг BTZ, вводимым отдельно или в комбинации с 30 мг/кг CX-8998, приводило к временной потере массы тела в течение первых двух недель обработки и отсутствию увеличения массы тела в дни 18 и 28, что согласуется с известным противоопухолевым эффектом и профилем переносимости BTZ для этой модели (фиг. 1B).
В день 18 BTZ, вводимый только, и комбинация BTZ с CX-8998 привели к значимому снижению TV (p<0,001 и p<0,05, соответственно) по сравнению с контрольными мышами, получавшими носитель (фиг. 1C). У мышей, получавших только BTZ, наблюдали тенденцию TV к увеличению с дня 18 по день 28, тогда как комбинация BTZ с CX-8998 привела к снижению TV, и на момент завершения исследования разница между двумя группами достигла статистической значимости (p <0,01) (фиг. 1C). В целом, данные о выживаемости клеток in vitro и TV in vivo и данные по увеличению массы совпадали и подтверждали отсутствие влияния CX-8998 на противоопухолевую активность и переносимость BTZ.
Изучение in vivo влияния комбинации (BTZ и CX-8998) на устранение CIPN
Влияние CX-8998 на устранение CIPN оценивали на крысиной модели BTZ-индуцированной нейротоксичности с использованием двухфазного дизайна исследования. В конце фазы 1 (неделя 4) не было статистически значимой разницы в средней массе тела ± SEM (граммы) самок крыс Wistar между BTZ и контрольной группами. После повторной рандомизации и дополнительных 1 или 4 недель (недели 5 и 8, соответственно) лечения изменение массы тела не дало значимых различий между группами, получавшими BTZ, BTZ в комбинации с 3, 10 и 30 мг/кг CX-8998, и контрольной группой. Обработка только BTZ и комбинацией BTZ с CX-8998 хорошо переносилось. Смертельных исходов было два, по одному животному в группах комбинации BTZ с 3 мг/кг CX-8998 и 10 мг/кг CX-8998.
Обработка BTZ привела к значимому ингибированию протеасомной активности в циркулирующих PBMC (среднее значение ± SEM %) на 4-й неделе относительно исходного уровня (p <0,05) (фиг. 1D). На 5-й и 8-й неделе наблюдали аналогичное ингибирование активности протеосом, обеспечиваемое обработкой BTZ и всеми комбинациями BTZ с CX-8998 (фиг. 1D). Эти данные, согласующиеся с результатами исследования MCL in vitro и in vivo, свидетельствуют о том, что совместное с CX-8998 введение не влияет на антипротеасомную активность BTZ.
Влияние CX-8998 на физиологические и поведенческие показатели
Снижение NCV и механическая аллодиния характерны для вызванной BTZ нейротоксичности у крыс (Cavaletti et al., 2007 Exp Neurol 204:317-325; и Meregalli et al., 2010 EJP 14:343-350). На исходном уровне (день 1) среднее значение ± SEM NCV (метры в секунду) каудального (фиг. 2) и седалищного (фиг. 3) нервов было сходным между контрольной группой и группой, получавшей только BTZ. После обработки BTZ величины NCV в каудальном и седалищном нервах значимо уменьшились во всех временных точках по сравнению с контролем: через 4, 5 и 8 недель для каудального нерва (p <0,01, p <0,05, p <0,001, соответственно) (фиг. 2) и седалищного нерва (p <0,01, p <0,05, соответственно) (фиг. 3). На 5 неделе величина NCV седалищного нерва была меньше, чем в контроле, но разница не была статистически значимой (таблица 1). Отсутствие статистической значимости, вероятно, обусловлено более высокой общей изменчивостью значений NCV седалищного нерва, меньшим количеством животных в группе на 5-й неделе и/или более низким абсолютным эффектом BTZ на снижение NCV на 5-й неделе по сравнению с 8-й неделей.
На 8 неделе величина NCV каудальных нервов значительно увеличилась (p <0,01, p <0,001, соответственно) при обработке 10 и 30 мг/кг CX-8998 в комбинации с BTZ по сравнению с обработкой одним BTZ (фиг. 2). Величина NCV седалищных нервов значимо увеличилась на 8 неделе (p <0,05) в группах комбинированного лечения с 10 мг/кг и 30 мг/кг CX-8998 по сравнению с группой, получавшей только BTZ (фиг. 3). На 5 неделе NCV каудального или седалищного нервов не показали значимых различий в комбинированных группах по сравнению с введением только BTZ (фиг. 2, 3, таблица 1). На 5-й неделе NCV каудальных нервов имела тенденцию к увеличению во всех комбинациях с BTZ по сравнению с одним только BTZ (таблица 1). Наоборот, на 5 неделе наблюдали тенденцию к снижению NCV седалищных нервов во всех группах комбинированной дозы по сравнению с введением только BTZ (таблица 1). Короткая продолжительность лечения CX-8998, в дополнение к факторам, описанным выше, могла способствовать отсутствию значимых эффектов лечения, наблюдаемому на 5-й неделе.
На исходном уровне (день 1) средние значения ± SEM MT (граммы) задних лап были сопоставимыми между контрольной группой и группой, получавшей только BTZ (фиг. 4). На 4-й неделе уровень МТ значимо снизился (p<0,0001) в группе BTZ по сравнению с контрольными крысами, что указывает на развитие механической аллодинии (фиг. 4). На 5-й и 8-й неделе у крыс, получавших комбинации BTZ и 3 и 30 мг/кг CX-8998, наблюдалась тенденция к увеличению МТ (снижение механической аллодинии) по сравнению с введением только BTZ, но различия не были статистически значимыми (фиг. 4, таблица 1).
Влияние CX-8998 на оценку тканей
Снижение плотности IENF и повышенная полимеризация β-тубулина представляют собой аномалии тканей, ассоциированные с BTZ-индуцированной нейротоксичностью (Cavaletti et al., 2007 Exp Neurol 204:317-325; и Meregalli et al., 2010 EJP 14:343-350).
Среднее значение ± SEM полимеризации β-тубулина (%) значимо увеличилось при использовании только BTZ и BTZ в комбинации с 3 и 10 мг/кг CX-8998 по сравнению с контролем (p <0,05) (фиг. 5A). Это увеличение имело тенденцию к устранению, но при комбинировании BTZ с 30 мг/кг CX-8998 не достигло статистической значимости на 8-й неделе относительно введения только BTZ (фиг. 5А, таблица 1).
Среднее значение ± SEM плотности IENF (количество волокон на миллиметр) в образцах ткани задней лапы крысы значимо снизилось (p <0,001) при использовании только BTZ по сравнению с контролем (фиг. 5B), что согласуется с нарушением NCV. Совместное введение 30 мг/кг CX-8998 привело к значимому устранению BTZ-индуцированного снижения плотности IENF на 8-й неделе (p<0,05) (фиг. 5B). На 8 неделе комбинация BTZ и 3 мг/кг CX-8998 показала тенденцию к улучшению, но не достигла статистической значимости по сравнению с BTZ, и комбинация BTZ с 10 мг/кг CX-8998 не показала никакого значимого улучшения по сравнению с введением только BTZ (фиг. 5В, Таблица 1).
Качественный анализ нервных волокон в подошвенной гладкой коже задней лапы с помощью светового микроскопа показал, что более высокое количество нервных волокон (стрелки) было обнаружено в случае комбинации BTZ и 30 мг/кг CX-8998 по сравнению с одним BTZ и BTZ в комбинации с CX-8998 в дозе 3 мг/кг (фиг. 5C). Эти качественные наблюдения нервных волокон согласуются с данными плотности IENF.
Таблица 1. Сравнение групп лечения и статистический анализ конечных точек исследований in vivo
| IENF плотность (Фиг. 5B) | |||
| Тест Крускала-Уоллиса | |||
| P значение | P <0,0001 | ||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно |
| CTRL vs BTZ | 28,99 | P < 0,001 | *** |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 18,06 | P < 0.05 | * |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 28,94 | P < 0,001 | *** |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 8,444 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -10,93 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -0,04167 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -20,54 | P <0,05 | * |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 10,89 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -9,611 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -20,50 | P <0,01 | ** |
| Полимеризация тубулина (Фиг. 5A) | |||
| Тест Крускала-Уоллиса | |||
| P значение | P<0,0001 | ||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно |
| CTRL vs BTZ | -14,74 | P <0,05 | * |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -15,64 | P <0,05 | * |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -15,46 | P <0,05 | * |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 0,2576 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -4,000 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -4,000 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 15,00 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 0,000 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 19,00 | P <0,05 | * |
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 19,00 | P <0,05 | * |
| Рост опухоли в день 28 (Фиг. 1B справа) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,0070 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | ** |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | да |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 92,50, 43,50 |
| U критерий Манна-Уитни | 7,500 |
| Рост опухоли, день 18 (Фиг. 1B справа) | |||
| Тест Крускала-Уоллиса | |||
| P значение | P<0,0005 | ||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно |
| Контроль с носителем vs BTZ | 13,13 | P <0,001 | *** |
| Контроль с носителем vs BTZ+cx-8998 | 10,13 | P <0,05 | * |
| BTZ vs BTZ+CX-8998 | -3.000 | P >0,05 | ns |
| Ингибирование протеосом: Исходный уровень vs BTZ, 4 недели (Фиг. 1C) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,0286 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Точное |
| Суммарное P значение | * |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Да |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 10, 26 |
| U критерий Манна-Уитни | 0,0000 |
| Динамический тест, исходный уровень (Фиг. 4) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,6572 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | ns |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Нет |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 194, 1184 |
| U критерий Манна-Уитни | 158,0 |
| Динамический тест, 4 недели (Фиг. 4) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,0001 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | *** |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Да |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 322,5, 758,5 |
| U критерий Манна-Уитни | 17,50 |
| Динамический тест, 5 недель (Фиг. 4) | ||||||
| Тест Крускала-Уоллиса | ||||||
| P значение | P<0,0065 | |||||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно | |||
| CTRL vs BTZ | 17,24 | P <0,05 | * | |||
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 3,250 | P >0,05 | ns | |||
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 16,50 | P <0,05 | * | |||
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 10,56 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -13,99 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -0,7411 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -6,679 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 13,25 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 7,313 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -5,938 | P >0,05 | ns | |||
| Динамический тест, 8 недель (Фиг. 4) | ||||||
| Тест Крускала-Уоллиса | ||||||
| P значение | P<0,0011 | |||||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно | |||
| CTRL vs BTZ | 23,19 | P <0,001 | *** | |||
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 7,563 | P >0,05 | ns | |||
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 16,69 | P <0,05 | * | |||
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 13,50 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -15,63 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -6,500 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -9,688 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 9,125 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 5,938 | P >0,05 | ns | |||
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -3,188 | P >0,05 | ns | |||
| NCV каудального нерва (Исходное значение) (Фиг. 2) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,4464 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | Ns |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Нет |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 187, 633 |
| U критерий Манна-Уитни | 105,0 |
| NCV каудального нерва (4 weeks) (Фиг. 2) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,0029 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | ** |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Да |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 74, 136 |
| U критерий Манна-Уитни | 0,0000 |
| NCV каудального нерва (5 недель) (Фиг. 2) | ||||
| Тест Крускала-Уоллиса | ||||
| P значение | P<0,0200 | |||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно | |
| CTRL vs BTZ | 15,75 | P <0,05 | * | |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 4,542 | P >0,05 | ns | |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 11,13 | P >0,05 | ns | |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 4,708 | P >0,05 | ns | |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -11,21 | P >0,05 | ns | |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -4,625 | P >0,05 | ns | |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -11,04 | P >0,05 | ns | |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 6,583 | P >0,05 | ns | |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 0,1667 | P >0,05 | ns | |
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -6,417 | P >0,05 | ns | |
| NCV каудального нерва (8 недель) (Фиг. 2) | ||||
| Тест Крускала-Уоллиса | ||||
| P значение | P<0,0001 | |||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно | |
| CTRL vs BTZ | 37,00 | P <0,001 | *** | |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 25,45 | P <0,01 | ** | |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 14,64 | P >0,05 | ns | |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 6,583 | P >0,05 | ns | |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -11,55 | P >0,05 | ns | |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -22,36 | P <0,01 | ** | |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -30,42 | P <0,001 | *** | |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -10,82 | P >0,05 | ns | |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -18,87 | P <0,05 | * | |
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -8,053 | P >0,05 | ns | |
| NCV седалищного нерва (исходное значение) (Фиг. 3) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,1873 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | Ns |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Нет |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 124,5, 695,5 |
| U критерий Манна-Уитни | 88,50 |
| NCV седалищного нерва (4 недели) (Фиг. 3) | |
| Тест Манна-Уитни | |
| P значение | 0,0029 |
| Точное или приблизительное р-значение? | Гауссово приближение |
| Суммарное P значение | ** |
| Медианы значимо отличаются? (P <0,05) | Да |
| Одно- или двустороннее значение P-значение? | Двустороннее |
| Сумма рангов в колонке A (CTRL), B (BTZ) | 74, 136 |
| U критерий Манна-Уитни | 0,0000 |
| NCV седалищного нерва (5 недель) (Фиг. 3) | |||
| Тест Крускала-Уоллиса | |||
| P значение | P<0,3513 | ||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно |
| CTRL vs BTZ | 2,250 | P >0,05 | ns |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 8,917 | P >0,05 | ns |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 4,833 | P >0,05 | ns |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 7,500 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 6,667 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 2,583 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 5,250 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -4,083 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -1,417 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 2,667 | P >0,05 | ns |
| NCV седалищного нерва (8 недель) (Фиг. 3) | |||
| Тест Крускала-Уоллиса | |||
| P значение | P<0,0059 | ||
| Тест множественного сравнения Даннета | Разница ранговой суммы | P значение | Суммарно |
| CTRL vs BTZ | 22,10 | P <0,05 | * |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | 11,98 | P >0,05 | ns |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | 2,848 | P >0,05 | ns |
| CTRL vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | 2,333 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 3 мг/кг | -10,12 | P >0,05 | ns |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -19,26 | P <0,05 | * |
| BTZ vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -19,77 | P <0,05 | * |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 10 мг/кг | -9,136 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 3 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -9,652 | P >0,05 | ns |
| BTZ+ CX-8998 10 мг/кг vs BTZ+ CX-8998 30 мг/кг | -0,5152 | P >0,05 | ns |
Вместе эти результаты демонстрируют, что CX-8998 можно использовать для устранения нейротоксичности в моделях CIPN, не влияя на цитотоксичность BTZ.
ДРУГИЕ ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Следует понимать, что хотя изобретение раскрыто, в том числе, путем его подробного описания, предшествующее описание предназначено для иллюстрации, а не для ограничения объема изобретения, который определяется объемом прилагаемой формулы изобретения. Другие аспекты, преимущества и модификации входят в объем приведенной ниже формулы изобретения.
Claims (8)
1. Способ снижения полимеризации β-тубулина, индуцированной бортезомибом, у млекопитающего с нейротоксичностью, индуцированной бортезомибом, где указанный способ включает введение указанному млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей модулятор кальциевых каналов Т-типа или его соль, в количестве 30 мг/кг массы тела указанного млекопитающего для уменьшения симптома указанной нейротоксичности у указанного млекопитающего, где модулятор кальциевых каналов Т-типа представляет собой CX-8998
или его соль.
2. Способ по п.1, где указанный способ включает идентификацию указанного млекопитающего как страдающего указанной нейротоксичностью.
3. Способ по любому из пп.1, 2, где указанным млекопитающим является человек.
4. Способ по любому из пп.1-3, где указанному млекопитающему с нейротоксичностью вводят указанную химиотерапию для лечения рака у указанного млекопитающего.
5. Способ по п.4, где указанный рак выбирают из группы, состоящей из множественной миеломы, лимфомы клеток мантийной зоны, лейкемии, рака пищеварительного тракта, рака легких, рака яичек, рака яичников, рака мозга, рака матки, рака предстательной железы, рака костей, рака молочной железы и рака мочевого пузыря.
6. Способ по любому из пп.1-5, где указанную композицию вводят перорально.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/909,694 | 2019-10-02 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2846757C1 true RU2846757C1 (ru) | 2025-09-15 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2017083867A1 (en) * | 2015-11-12 | 2017-05-18 | Afasci, Inc. | Ion channel inhibitory compounds, pharmaceutical formulations and uses |
| RU2645158C2 (ru) * | 2012-03-30 | 2018-02-16 | Ниссан Кемикал Индастриз, Лтд. | Соединение триазинона и ингибитор кальциевых каналов т-типа |
| WO2018217845A1 (en) * | 2017-05-26 | 2018-11-29 | Chase Therapeutics Corporation | Pharmaceutical combinations of zonisamide and praxipexole, and related methods, for treating synucleinopathies |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2645158C2 (ru) * | 2012-03-30 | 2018-02-16 | Ниссан Кемикал Индастриз, Лтд. | Соединение триазинона и ингибитор кальциевых каналов т-типа |
| WO2017083867A1 (en) * | 2015-11-12 | 2017-05-18 | Afasci, Inc. | Ion channel inhibitory compounds, pharmaceutical formulations and uses |
| WO2018217845A1 (en) * | 2017-05-26 | 2018-11-29 | Chase Therapeutics Corporation | Pharmaceutical combinations of zonisamide and praxipexole, and related methods, for treating synucleinopathies |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| M. LEE ET AL. Reversal of allodynia and neurophysiological outcomes by CX-8998, a potent, selective T-type calcium channel modulator, in a model of bortezomib induced peripheral neurotoxicity (S7.004). Neurology, vol.90, N15 Supplement, April 2018. [он-лайн], [найдено 19.02.2024]. Найдено в Интернет: https://www.neurology.org/doi/10.1212/WNL.90.15_supplement.S7.004. SHIORI TOMITA ET AL. Critical role of Cav3.2 T-type calcium channels in the peripheral neuropathy induced by bortezomib, a proteasome-inhibiting chemotherapeutic agent, in mice. Toxicology, vol.413, 1 February 2019, Pages 33-39. * |
| SARAH J.L. FLATTERS ET AL. Ethosuximide reverses paclitaxel- and vincristine-induced painful peripheral neuropathy. Pain, 2004 May; 109(1-2): 150-61. doi: 10.1016/j.pain.2004.01.029. N.A. DUGGETT ET AL. Characterization of a rat model of bortezomib‐induced painful neuropathy. British Journal of Pharmacology. 2017, 174(24): 4812-4825. S. PAPAPETROPOULOS ET AL. A Phase 2, Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Trial of CX-8998, a Selective Modulator of the T-Type Calcium Channel in Inadequately Treated Moderate to Severe Essential Tremor: T-CALM Study Design and Methodology for Efficacy Endpoint and Digital Biomarker Selection. Frontiers in Neurology, 2019; 10: 597. Published online 2019 Jun 11. doi: 10.3389/fneur.2019.00597. A Phase 2a, Safety, Tolerability, Pharmacokinetics, and Quantitative EEG Study of CX-8998 in Adolescents and Adults with Idiopathic Generalized Epilepsy with Absence Seizures. Protocol Number: CX-8998-CLN2-002. Version 6.0. 30 May 2019. [он-лайн], [найдено 19. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TWI870475B (zh) | 用於治療神經毒性之方法及材料 | |
| KR101937782B1 (ko) | 바클로펜 및 아캄프로세이트에 기초한 신경 장애의 치료 | |
| EP3307266A1 (en) | Novel cannabinoid combination therapies for multiple myeloma (mm) | |
| AU2015351937A1 (en) | Synergistic use of cannabis for treating multiple myeloma | |
| EP3110427A1 (en) | Compositions of pentosan polysulfate salts for oral administration and methods of use | |
| CN108349867A (zh) | 用于抑制asc的表达、nlrp3的表达和/或nlrp3炎性复合体的形成的双醋瑞因或其类似物 | |
| AU2006210787B2 (en) | Local treatment of neurofibromas | |
| KR20120050512A (ko) | 탈수초를 갖는 환자에서 ４-아미노피리딘을 사용한 지속적 치료 | |
| AU2019274870B2 (en) | Method of treating pain or interstitial cystitis using indole compound | |
| RU2846757C1 (ru) | Способы и материалы для лечения нейротоксичности | |
| HK40075931A (en) | Methods and materials for treating neurotoxicity | |
| JP2025513474A (ja) | 好中球性皮膚疾患の治療 | |
| US11974992B2 (en) | Use of serotonin 5-HT1A receptor agonists to treat diseases associated with sudden unexpected death in epilepsy | |
| Jackson et al. | A Review of the Safety and Effectiveness of Select Ingredients in Compounded Topical Pain Creams | |
| RU2791025C2 (ru) | Способ лечения боли или интерстициального цистита с использованием индольного соединения | |
| Azarfarin et al. | A Balanced Cannabinoids Mixture Protects Neural Stem/progenitor Cells from CoCl2 Induced Injury by Regulating Autophagy and Inflammation: An in Vitro Study | |
| WO2020101977A1 (en) | Lipid ether amine compounds for topical treatment of cutaneous disease | |
| WO2015028673A1 (en) | Cav3 CHANNEL BLOCKING AGENT FOR PAIN TREATMENT | |
| HK40049577B (en) | Indole compound for treating interstitial cystitis | |
| HK40049577A (en) | Indole compound for treating interstitial cystitis | |
| AU2008200878A1 (en) | Use of a topical medicament comprising riluzole |