RU2845656C2 - Novel schizochytrium species strain with easy extraction of intracellular oil and method for producing oil containing omega-3 using same - Google Patents
Novel schizochytrium species strain with easy extraction of intracellular oil and method for producing oil containing omega-3 using sameInfo
- Publication number
- RU2845656C2 RU2845656C2 RU2024111075A RU2024111075A RU2845656C2 RU 2845656 C2 RU2845656 C2 RU 2845656C2 RU 2024111075 A RU2024111075 A RU 2024111075A RU 2024111075 A RU2024111075 A RU 2024111075A RU 2845656 C2 RU2845656 C2 RU 2845656C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microalgae
- schizochytrium
- biomass
- acid
- strain
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Область изобретенияField of invention
Перекрестная ссылка на родственные заявки на изобретенияCross-reference to related patent applications
В настоящей заявке на изобретение заявлен приоритет, основанный на Заявке на Корейский патент №1020210152561, поданной 8 ноября 2021 года, и полные содержания, раскрытые в документах соответствующей Заявки на Корейский патент, включены в описание настоящей заявки на изобретение путем ссылки.The present invention application claims priority based on Korean Patent Application No. 1020210152561 filed on November 8, 2021, and the entire contents disclosed in the documents of the corresponding Korean Patent Application are incorporated into the description of the present invention application by reference.
Настоящее изобретение относится к новому штамму Schizochytrium sp., обладающему легкой экстракцией внутриклеточного масла, и к способу продуцирования масла, содержащего омега-3, с его использованием.The present invention relates to a new strain of Schizochytrium sp. having easy extraction of intracellular oil, and to a method for producing oil containing omega-3 using it.
Предшествующий уровень техникиPrior art
Траустохитридиевые выживают и распространяются в различных средах в природе. Они живут в симбиозе, прикрепляясь к организмам, плавают в морской среде или пресной воде, или солоноватой среде, и распределяются в различных осадочных слоях, чтобы выжить. Эти траустохитридиевые относятся к самому низкому слою морской экологической пищевой цепи, и также классифицируется как органические гетеротрофные простейшие микроводоросли, как фитопланктон. Траустохитридиевые в природной среде функционально отвечают за циркуляцию и очистку природных циркулирующих элементов, таких как сера, азот, фосфор, калий и т.п. Кроме того, они содержат полиненасыщенную жирную кислоту (PUFA), включающую докозагексаеновую кислоту (DHA) и эйкозапентаеновую кислоту (EPA), классифицированные как омега-3, в высокой концентрации для того, чтобы функционировать как источник к морской экосистеме.Thraustochytridids survive and spread in various environments in nature. They live symbiotically by attaching to organisms, float in the marine environment or fresh water or brackish environment, and distribute in various sediment layers to survive. These thraustochytridids belong to the lowest layer of the marine ecological food chain, and are also classified as organic heterotrophic protozoan microalgae, like phytoplankton. Thraustochytridids in the natural environment are functionally responsible for the circulation and purification of natural circulating elements such as sulfur, nitrogen, phosphorus, potassium, etc. In addition, they contain polyunsaturated fatty acid (PUFA) including docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA), classified as omega-3, in high concentrations to function as a source for the marine ecosystem.
Большинство высших организмов, включающих людей, не могут сами синтезировать полиненасыщенную жирную кислоту, включающую докозагексаеновую кислоту и эйкозапентаеновую кислоту, таким образом, они должны потребляться в качестве незаменимых питательных веществ. Докозагексаеновая кислота и эйкозапентаеновая кислота среди полиненасыщенных жирных кислот представляют собой незаменимые жирные кислоты для головного мозга, глазной ткани и нервной системы, и, в частности, они, как известно, играют важную роль в развитии нервной системы, такой как зрение и возможность двигательных нервов у младенцев, и предупреждение сердечно-сосудистого заболевания, и они являются наиболее распространенными компонентами среди структурных липидов головного мозга.Most higher organisms, including humans, cannot synthesize polyunsaturated fatty acid, including docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid, themselves, so they must be consumed as essential nutrients. Docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid among polyunsaturated fatty acids are essential fatty acids for the brain, eye tissue and nervous system, and in particular, they are known to play an important role in the development of the nervous system, such as vision and motor nerve function in infants, and the prevention of cardiovascular disease, and they are the most abundant components among the structural lipids of the brain.
До настоящего времени основной источник полиненасыщенной жирной кислоты представляет собой масло рыб, экстрагированное из масла луфаря, такого как макрель, сайра, тунец, ставрида, сардина, сельдь и т.п., и оно очень полезно в качестве корма для разведения рыб, такого как исходный корм для морской рыбы. Хотя экстракция и получение полиненасыщенной жирной кислоты из масла рыб промышленно развито, также существуют и недостатки. Качество масла рыб варьирует в зависимости от вида рыбы, сезона и места лова, и оно образуется в результате рыболовства, поэтому его сложно поставлять постоянно. Кроме того, существуют ограничения в процессе производства и в производстве вследствие проблемы загрязнения тяжелыми металлами и органическими химическими веществами, содержащимися в масле рыб, проблемы окисления двойных связей в процессе переработки, а также специфического рыбного запаха масла рыб и т.п.Up to now, the main source of polyunsaturated fatty acid is fish oil extracted from bluefish oil such as mackerel, saury, tuna, horse mackerel, sardine, herring, etc., and it is very useful as fish farming feed such as raw material feed for marine fish. Although the extraction and production of polyunsaturated fatty acid from fish oil has been industrially developed, there are also shortcomings. The quality of fish oil varies depending on the fish species, season and fishing location, and it is produced by fishing, so it is difficult to supply it continuously. In addition, there are limitations in the production process and production due to the problem of pollution by heavy metals and organic chemicals contained in fish oil, the problem of oxidation of double bonds during processing, and the peculiar fishy smell of fish oil, etc.
Для решения этих проблем недавно было проведено исследование способа продуцирования полиненасыщенной жирной кислоты, включая докозагексаеновую кислоту и эйкозапентаеновую кислоту, микробной культурой. В частности, микроводоросли могут обеспечивать несколько преимуществ по сравнению с маслом рыб в дополнение к способности вновь синтезировать жирную кислоту естественным путем. Они могут стабильно поставляться путем культивирования в промышленных масштабах, и это позволяет продуцировать биомассу, имеющую относительно постоянный биохимический состав. В отличие от масла рыб, липиды, продуцируемые микроводорослями, не имеют какого-либо неприятного запаха. Кроме того, они имеют более простой состав жирных кислот по сравнению с маслом рыб, что облегчает стадии выделения основных жирных кислот.To solve these problems, a method for producing polyunsaturated fatty acid including docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid by microbial culture has been recently investigated. In particular, microalgae can provide several advantages over fish oil in addition to the ability to re-synthesize fatty acid naturally. They can be stably supplied by culturing on an industrial scale, and this allows the production of biomass having a relatively constant biochemical composition. Unlike fish oil, the lipids produced by microalgae do not have any unpleasant odor. In addition, they have a simpler fatty acid composition compared with fish oil, which facilitates the steps of isolating essential fatty acids.
На основе этих преимуществ, недавно быстро стало продвигаться исследование и индустриализация при продуцировании полиненасыщенной жирной кислоты, содержащей омега-3 ненасыщенную жирную кислоту (ω-ненасыщенную жирную кислоту), такую как докозагексаеновая кислота (DHA), эйкозапентаеновая кислота (EPA), арахидоновая кислота (ARA), докозапентаеновая кислота (DPA) и α-линоленовая кислота и т.п., и главным образом продуцирование полиненасыщенной жирной кислоты микроорганизмами Thraustochytrium sp. и Schizochytrium sp., которые представляют собой вид морских микроводорослей. Например, раскрыт способ продуцирования омега-3 полиненасыщенной жирной кислоты с использованием Schizochytrium sp. ATCC20888 и Schizochytrium sp. PTA10208, которые представляют собой микроорганизмы Schizochytrium sp. (патент США №5130242), и, дополнительно, способ продуцирования докозагексаеновой кислоты и эйкозапентаеновой кислоты с использованием Thraustochytrium sp. ATCC10212 (Thraustochytrium sp. PTA10212), который представляет собой микроорганизм Thraustochytrium sp. серий траустохитридиевых. Based on these advantages, recently, research and industrialization have been rapidly advancing in producing polyunsaturated fatty acid containing omega-3 unsaturated fatty acid (ω-unsaturated fatty acid) such as docosahexaenoic acid (DHA), eicosapentaenoic acid (EPA), arachidonic acid (ARA), docosapentaenoic acid (DPA) and α-linolenic acid and the like, and especially producing polyunsaturated fatty acid by Thraustochytrium sp. and Schizochytrium sp. microorganisms, which are a kind of marine microalgae. For example, a method for producing omega-3 polyunsaturated fatty acid using Schizochytrium sp. ATCC20888 and Schizochytrium sp. PTA10208, which are Schizochytrium sp. microorganisms, is disclosed. (US Patent No. 5,130,242), and further a method for producing docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid using Thraustochytrium sp. ATCC10212 ( Thraustochytrium sp. PTA10212), which is a Thraustochytrium sp. microorganism of the Thraustochytridium series.
Описание изобретенияDescription of the invention
Техническая задачаTechnical task
В одном из воплощений настоящего изобретения предложены новые микроводоросли Schizochytrium sp. В одном из конкретных воплощений новые микроводоросли Schizochytrium sp. могут представлять собой микроводоросли Schizochytrium sp. CD01-1821 (Идентификационный номер KCTC14660BP).In one embodiment of the present invention, novel microalgae Schizochytrium sp. are provided. In one specific embodiment, the novel microalgae Schizochytrium sp. may be microalgae Schizochytrium sp. CD01-1821 (Identification number KCTC14660BP).
В еще одном воплощении настоящего изобретения предложена биомасса или биомасло, происходящие из микроводорослей Schizochytrium sp.In another embodiment of the present invention, there is provided a biomass or bio-oil derived from the microalgae Schizochytrium sp .
В другом воплощении настоящего изобретения предложена кормовая композиция, содержащая биомассу, биомасло или их комбинацию, происходящие из микроводорослей Schizochytrium sp.In another embodiment of the present invention, a feed composition is provided comprising biomass, bio-oil or a combination thereof, derived from the microalgae Schizochytrium sp .
В другом воплощении настоящего изобретения предложена пищевая композиция, содержащая биомассу, биомасло или их комбинацию, происходящие из микроводорослей Schizochytrium sp.In another embodiment of the present invention, a food composition is provided comprising biomass, bio-oil or a combination thereof, derived from the microalgae Schizochytrium sp .
В другом воплощении настоящего изобретения предложен способ продуцирования биомассы или биомасла, происходящих из микроводорослей Schizochytrium sp.In another embodiment of the present invention, a method is provided for producing biomass or bio-oil derived from the microalgae Schizochytrium sp .
В другом воплощении настоящего изобретения предложено применение для продуцирования биомассы или биомасла из микроводорослей Schizochytrium sp.In another embodiment of the present invention, a use is provided for producing biomass or bio-oil from the microalgae Schizochytrium sp .
В другом воплощении настоящего изобретения предложено применение для продуцирования кормовой композиции или пищевой композиции из микроводорослей Schizochytrium sp.In another embodiment of the present invention, there is provided a use for producing a feed composition or a food composition from the microalgae Schizochytrium sp .
Решение технической задачиSolving a technical problem
Каждое описание и воплощение, раскрытые в настоящей заявке на изобретение, могут быть применены к каждому из других описаний и воплощений. Другими словами, все комбинации различных элементов, раскрытых в настоящей заявке на изобретение, оказываются в объеме настоящего изобретения. Кроме того, не следует считать, что объем настоящего изобретения ограничен подробным описанием, изложенным ниже. Кроме того, специалистам в данной области техники понятно множество эквивалентов конкретных аспектов настоящего изобретения, описанных в настоящей заявке на изобретение, с использованием только общего экспериментирования, или они могут подтвердить их. Кроме того, предполагается, что такие эквиваленты включены в настоящее изобретение.Each description and embodiment disclosed in this patent application may be applied to each of the other descriptions and embodiments. In other words, all combinations of the various elements disclosed in this patent application fall within the scope of the present invention. Furthermore, the scope of the present invention should not be considered to be limited by the detailed description set forth below. Furthermore, those skilled in the art will recognize or be able to ascertain many equivalents to the specific aspects of the present invention described in this patent application using only general experimentation. Moreover, such equivalents are intended to be included in the present invention.
В одном из воплощений настоящего изобретения предложены новые микроводоросли Schizochytrium sp.In one embodiment of the present invention, novel microalgae Schizochytrium sp are provided.
Используемый в настоящем описании изобретения термин “траустохитридиевые” означает микроводоросли порядка Thraustochytriales. Кроме того, используемый в настоящем описании изобретения термин, “Schizochytrium sp.” является одним из названий рода, принадлежащих к семейству Thraustochytriaceae порядка Thraustochytriales, и может использоваться взаимозаменяемо с термином “Schizochytrium sp. (род Schizochytrium)”. Кроме того, термин “микроводоросли” означает организм, который невозможно увидеть невооруженным глазом и который можно увидеть только под микроскопом среди фотосинтезирующих растений с хлорофиллом, и который живет, свободно плавая в воде, и также называется фитопланктоном. Существуют различные типы микроводорослей, и поскольку фотосинтез невозможен, сюда включены даже штаммы, которые растут только как гетеротрофы.As used in the present description of the invention, the term “Thraustochytridiaceae” means microalgae of the order Thraustochytriales . In addition, as used in the present description of the invention, the term “ Schizochytrium sp. ” is one of the names of a genus belonging to the family Thraustochytriaceae of the order Thraustochytriales, and can be used interchangeably with the term “ Schizochytrium sp. (genus Schizochytrium )”. In addition, the term “microalgae” means an organism that cannot be seen with the naked eye and can only be seen under a microscope among photosynthetic plants with chlorophyll, and which lives by floating freely in water, and is also called phytoplankton. There are various types of microalgae, and since photosynthesis is impossible, even strains that grow only as heterotrophs are included.
В качестве одного из воплощений настоящего изобретения после отбора образцов из окружающей среды прибрежных областей для получения чистых выделенных колоний серий траустохитридиевых в результате анализа общего содержания липидов и жирных кислот были получены два вида штаммов CD01-1821 и CD01-1822 с превосходным внутриклеточным содержанием DHA. В результате оценки культур было подтверждено то, что штамм CD01-1821 был более полезен для процесса масштабирования, поскольку обладал более высокой общей продукцией биомассы и общим содержанием масла в одних и тех же условиях ферментации.As one embodiment of the present invention, after collecting samples from the coastal environment to obtain pure isolated colonies of the thraustochytrid series, two kinds of strains CD01-1821 and CD01-1822 with excellent intracellular DHA content were obtained as a result of analyzing the total lipid and fatty acid content. As a result of evaluating the cultures, it was confirmed that the strain CD01-1821 was more useful for the scale-up process because it had higher total biomass production and total oil content under the same fermentation conditions.
Таким образом, в описании настоящего изобретения новые микроводоросли Schizochytrium sp. могут представлять собой микроводоросли Schizochytrium sp. CD01-1821 (Идентификационный номер KCTC14660BP).Thus, in the description of the present invention, the new microalgae Schizochytrium sp. may be the microalgae Schizochytrium sp. CD01-1821 (Identification number KCTC14660BP).
Кроме того, штамм Schizochytrium sp. может иметь нуклеотидную последовательность 18s рРНК в соответствии с SEQ ID NO: 1, но не ограничиваться этим. Например, микроводоросли Schizochytrium sp. могут иметь 18S рРНК, состоящую из нуклеотидной последовательности, демонстрирующей идентичность последовательности 80% или более, 85% или более, 90% или более, 95% или более, 98% или более или 99% или более с нуклеотидной последовательностью в соответствии с SEQ ID NO: 1, но не ограничиваться этим.In addition, the Schizochytrium sp. strain may have a nucleotide sequence of 18s rRNA according to SEQ ID NO: 1, but not limited thereto. For example, the Schizochytrium sp. microalgae may have an 18S rRNA consisting of a nucleotide sequence exhibiting a sequence identity of 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, 98% or more, or 99% or more with the nucleotide sequence according to SEQ ID NO: 1, but not limited thereto.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “докозагексаеновая кислота (DHA)” представляет собой одну из полиненасыщенных жирных кислот, имеющих химическую формулу C22H32O2, и относящихся к омега-3 жирной кислоте вместе с альфа-линоленовой кислотой (α-линоленовая кислота: (ALA) и эйкозапентаеновой кислотой (EPA), и общее наименование представляет собой цервоновую кислоту, и в качестве сокращения она также может обозначаться как 22:6 n-3.The term “docosahexaenoic acid (DHA)” used in the description of the present invention is one of the polyunsaturated fatty acids having the chemical formula C 22 H 32 O 2 , and belonging to the omega-3 fatty acid together with alpha-linolenic acid (α-linolenic acid: (ALA) and eicosapentaenoic acid (EPA), and the common name is cervonic acid, and as an abbreviation, it can also be referred to as 22:6 n-3.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “эйкозапентаеновая кислота (EPA)” представляет собой одну из полиненасыщенных жирных кислот, имеющих химическую формулу C20H30O2, и относящихся к омега-3 жирной кислоте вместе с ALA и докозагексаеновой кислотой (DHA), и в качестве сокращения она также может обозначаться как 20:5 n-3.As used in the description of the present invention, the term “eicosapentaenoic acid (EPA)” is one of the polyunsaturated fatty acids having the chemical formula C 20 H 30 O 2 and belonging to the omega-3 fatty acid together with ALA and docosahexaenoic acid (DHA), and as an abbreviation it can also be referred to as 20:5 n-3.
Микроводоросли Schizochytrium sp. могут продуцировать и/или содержать DHA в количестве от 35 до 60% по массе относительно общей массы жирной кислоты. Например, микроводоросли Schizochytrium sp. могут продуцировать DHA в количестве от 40 до 65% по массе, от 45 до 65% по массе, от 50 до 65% по массе, от 40 до 60% по массе, от 45 до 60% по массе, от 50 до 60% по массе или от 55 до 60% по массе относительно общей массы жирной кислоты.The microalgae Schizochytrium sp. can produce and/or contain DHA in an amount of from 35 to 60% by weight relative to the total weight of the fatty acid. For example, the microalgae Schizochytrium sp. can produce DHA in an amount of from 40 to 65% by weight, from 45 to 65% by weight, from 50 to 65% by weight, from 40 to 60% by weight, from 45 to 60% by weight, from 50 to 60% by weight, or from 55 to 60% by weight relative to the total weight of the fatty acid.
Микроводоросли Schizochytrium sp. могут продуцировать и/или содержать EPA в количестве от 0,1 до 2% по массе относительно общей массы жирной кислоты. Например, микроводоросли Schizochytrium sp. могут продуцировать EPA в количестве от 0,2 до 2% по массе, от 0,2 до 1,5% по массе, от 0,2 до 1% по массе, от 0,3 до 2% по массе, от 0,3 до 1,5% по массе, от 0,3 до 1% по массе, от 0,5 до 2% по массе, от 0,5 до 1,5% по массе, от 0,5 до 1% по массе, от 0,5 до 0,9% по массе или от 0,6 до 0,8% по массе относительно общей массы жирной кислоты.The microalgae Schizochytrium sp. can produce and/or contain EPA in an amount of from 0.1 to 2% by weight relative to the total weight of the fatty acid. For example, the microalgae Schizochytrium sp. can produce EPA in an amount of from 0.2 to 2% by weight, from 0.2 to 1.5% by weight, from 0.2 to 1% by weight, from 0.3 to 2% by weight, from 0.3 to 1.5% by weight, from 0.3 to 1% by weight, from 0.5 to 2% by weight, from 0.5 to 1.5% by weight, from 0.5 to 1% by weight, from 0.5 to 0.9% by weight, or from 0.6 to 0.8% by weight relative to the total weight of the fatty acid.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предложена биомасса или биомасло, происходящие из микроводорослей Schizochytrium sp., содержащие микроводоросли Schizochytrium sp. CD01-1821, культуру микроводорослей, высушенный продукт культуры или лизат высушенного продукта.In another aspect of the present invention, there is provided a biomass or biooil derived from Schizochytrium sp. microalgae, comprising Schizochytrium sp . CD01-1821 microalgae, a microalgae culture, a dried culture product or a lysate of the dried product.
Описание микроводорослей Schizochytrium sp. представлено выше.The description of the microalgae Schizochytrium sp. is presented above.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “биомасса” обозначает энергетический источник биоэнергии, то есть живой организм, такой как растение, животное, микроорганизм и т. п., и также обозначает массу или количество энергии конкретного живого организма, экологически присутствующего в единицу времени и пространства. Кроме того, биомасса включает соединение, секретируемое клеткой, но не ограничивается этим, и может содержать клетку и/или содержимое клетки, а также внеклеточное вещество. В настоящей заявке на изобретение биомасса может представлять собой сами микроводоросли Schizochytrium sp., их культуру, их высушенный продукт, их лизат или продукт, продуцируемый путем культивирования или ферментирования микроводорослей, или может представлять собой концентрат или высушенный продукт биомассы, но не ограничиваться этим.The term "biomass" used in the description of the present invention means an energy source of bioenergy, i.e. a living organism such as a plant, an animal, a microorganism, etc., and also means the mass or amount of energy of a specific living organism ecologically present in a unit of time and space. In addition, biomass includes a compound secreted by a cell, but is not limited to this, and may contain a cell and / or cell contents, as well as an extracellular substance. In the present application for the invention, the biomass may be the microalgae Schizochytrium sp. itself, their culture, their dried product, their lysate or a product produced by culturing or fermenting microalgae, or may be a concentrate or a dried product of biomass, but is not limited to this.
“Культура” микроводорослей Schizochytrium sp. относится к продукту, продуцируемому путем культивирования микроводорослей, и, в частности, она может представлять собой раствор для культивирования, содержащий микроводоросли, или культуральный фильтрат, в котором микроводоросли удалены из раствора для культивирования, но не ограничивается этим. “Высушенный продукт” культуры микроводорослей Schizochytrium sp. представляет собой такой продукт, в котором влага удалена из культуры микроводорослей, и, например, он может представлять собой высушенную микробную клетку микроводорослей, но не ограничивается этим. Кроме того, “лизат” высушенного продукта в совокупности обозначает результат лизиса высушенного продукта, в котором влага удалена из культуры микроводорослей, и например, он может представлять собой высушенный порошок микробных клеток, но не ограничивается этим. Культура микроводорослей Schizochytrium sp. может быть приготовлена в соответствии с способом культивирования, известным в области техники, путем инокулирования микроводорослей в культурную среду для микроводорослей, и высушенный продукт культуры и его лизат также могут быть получены в соответствии со способом обработки или сушки раствора микроводорослей или раствора для культивирования, известных в области техники.“The culture” of Schizochytrium sp. microalgae refers to a product produced by culturing the microalgae, and in particular, it may be a culture solution containing the microalgae or a culture filtrate in which the microalgae are removed from the culture solution, but is not limited thereto. “The dried product” of the Schizochytrium sp. microalgae culture is such a product in which moisture is removed from the microalgae culture, and for example, it may be a dried microbial cell of the microalgae, but is not limited thereto. In addition, “the lysate” of the dried product collectively means the result of lysis of the dried product in which moisture is removed from the microalgae culture, and for example, it may be a dried microbial cell powder, but is not limited thereto. The culture of Schizochytrium sp. microalgae can be prepared according to a culture method known in the art by inoculating microalgae into a culture medium for microalgae, and the dried culture product and its lysate can also be obtained according to a method for processing or drying a microalgae solution or a culture solution known in the art.
Биомасса, происходящая из микроводорослей Schizochytrium sp., может содержать неочищенный жир, составляющий от 40 до 85% по массе, от 45 до 80% по массе, от 50 до 75% по массе, от 50 до 70% по массе, от 54 до 66% по массе относительно общей массы биомассы.Biomass originating from microalgae Schizochytrium sp. may contain unrefined fat constituting from 40 to 85% by weight, from 45 to 80% by weight, from 50 to 75% by weight, from 50 to 70% by weight, from 54 to 66% by weight relative to the total weight of the biomass.
Биомасса, происходящая из микроводорослей Schizochytrium sp., может содержать неочищенный белок, составляющий от 5 до 25% по массе, от 5 до 20% по массе, от 10 до 20% по массе или от 15 до 20% по массе относительно общей массы биомассы.Biomass derived from microalgae Schizochytrium sp. may contain crude protein comprising from 5 to 25% by weight, from 5 to 20% by weight, from 10 to 20% by weight, or from 15 to 20% by weight relative to the total weight of the biomass.
Биомасса, происходящая из микроводорослей Schizochytrium sp., может содержать DHA, составляющую 35% по массе или более, или от 35 до 60% по массе относительно общей массы жирной кислоты, и может содержать EPA, составляющую 0,1% по массе или более, или от 0,1 до 2% по массе относительно общей массы жирной кислоты, и может содержать пальмитиновую кислоту, составляющую от 30 до 40% по массе или более относительно общей массы жирной кислоты.Biomass originating from microalgae Schizochytrium sp. may contain DHA constituting 35% by weight or more, or from 35 to 60% by weight relative to the total weight of fatty acid, and may contain EPA constituting 0.1% by weight or more, or from 0.1 to 2% by weight relative to the total weight of fatty acid, and may contain palmitic acid constituting 30 to 40% by weight or more relative to the total weight of fatty acid.
Микроводоросли Schizochytrium sp. обладают высоким содержанием масла и, в частности, высоким содержанием омега-3, так что время культивирования с сложными сахарами может быть уменьшено. Таким образом, последнее является благоприятным для процесса масштабирования.The microalgae Schizochytrium sp. have a high oil content and in particular a high omega-3 content, so that the cultivation time with complex sugars can be reduced. The latter is therefore favorable for the scaling process.
“Содержание жира” может быть использовано взаимозаменяемо с “содержанием неочищенного жира”."Fat content" may be used interchangeably with "crude fat content".
Биомасса может быть получена при помощи способа получения биомассы, происходящей из микроводорослей Schizochytrium sp. в соответствии с одним из аспектов.The biomass can be obtained using a method for obtaining biomass derived from microalgae Schizochytrium sp. according to one of the aspects.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена композиция, содержащая микроводоросли Schizochytrium sp. CD01-1821, культуру микроводорослей, высушенный продукт культуры или лизат высушенного продукта.In another aspect of the present invention, a composition is provided comprising the microalgae Schizochytrium sp. CD01-1821, a microalgae culture, a dried product of the culture, or a lysate of the dried product.
Композиция может содержать биомассу, биомасло или их комбинацию, происходящие из микроводорослей Schizochytrium sp. The composition may contain biomass, bio-oil or a combination thereof, originating from the microalgae Schizochytrium sp.
В другом аспекте настоящего изобретения предложена кормовая композиция, содержащая биомассу, происходящую из микроводорослей Schizochytrium sp. CD01-1821, или концентрат, или высушенный продукт биомассы.In another aspect of the present invention, there is provided a feed composition comprising biomass derived from the microalgae Schizochytrium sp. CD01-1821, or a concentrate or a dried product of the biomass.
Описание микроводорослей Schizochytrium sp., биомассы, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры и лизата высушенного продукта является таким, как описано выше.The description of the microalgae Schizochytrium sp. , biomass, microalgae culture, dried culture product and lysate of the dried product is as described above.
Концентрат или высушенный продукт биомассы может быть получен в соответствии со способом обработки, концентрирования или сушки микробной биомассы, известного в области техники.The concentrate or dried biomass product can be obtained according to a method for processing, concentrating or drying microbial biomass known in the art.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “биомасло” обозначает масло, полученное из биомассы процессов биологической, термохимической и физико-химической экстракции, и в настоящей заявке на изобретение полученное биомасло может содержать полиненасыщенную жирную кислоту, и, в частности, может содержать DHA и EPA, но не ограничиваться этим.The term “bio-oil” used in the description of the present invention means oil obtained from biomass by biological, thermo-chemical and physico-chemical extraction processes, and in the present invention application the obtained bio-oil may contain polyunsaturated fatty acid, and in particular may contain DHA and EPA, but is not limited to this.
В описании настоящего изобретения биомасло может содержать экстракт биомассы.In the description of the present invention, the bio-oil may comprise a biomass extract.
В качестве способа получения экстракта биомасла может быть использован способ с использованием фермента, такого как протеаза, целлюлаза, пектиназа или хитиназа и т.п., в соответствии со способом лизиса или растворения клеточной мембраны или компонента клеточной стенки, способ физического лизиса клеточной мембраны или компонента клеточной стенки с использованием гомогенизатора, ультразвукового разрушителя, путем разрушения с шариками и т. п, способ экстракции путем внутриклеточного проникновения путем прямого добавления растворителя, способ экстракции без растворителя путем разделения при помощи способа центрифугирования после различных способов лизирования и т.п., но не ограничиваться этим.As a method for obtaining a bio-oil extract, a method using an enzyme such as protease, cellulase, pectinase or chitinase, etc., in accordance with a method of lysing or dissolving a cell membrane or a cell wall component, a method of physically lysing a cell membrane or a cell wall component using a homogenizer, an ultrasonic disruptor, by disruption with beads, etc., an extraction method by intracellular penetration by directly adding a solvent, a solvent-free extraction method by separation using a centrifugation method after various lysis methods, etc., can be used, but are not limited to these.
Композиция может находиться в форме раствора, порошка или суспензии, но не ограничиваться этим. Композиция может представлять собой, например, пищевую композицию, кормовую композицию или композицию кормовой добавки.The composition may be in the form of a solution, powder or suspension, but is not limited to this. The composition may be, for example, a food composition, a feed composition or a feed additive composition.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “кормовая композиция” относится к корму, который дают животным. Кормовая композиция относится к веществу, обеспечивающему органические или неорганические питательные вещества, необходимые для поддержания жизни животного или производства мяса, молока и т.п. Кормовая композиция может дополнительно содержать питательный компонент, необходимый для поддержания жизни животного или продуцирования мяса, молока и т.п. Кормовая композиция может быть получена в виде различных типов корма, известных в области техники, и, в частности, может содержать концентрированный корм, грубую пищу и/или специальный корм.The term "feed composition" as used in the description of the present invention refers to feed that is given to animals. A feed composition refers to a substance that provides organic or inorganic nutrients necessary to maintain the life of an animal or to produce meat, milk, etc. The feed composition may further comprise a nutrient component necessary to maintain the life of an animal or to produce meat, milk, etc. The feed composition may be prepared in the form of various types of feed known in the art and, in particular, may comprise concentrated feed, roughage, and/or special feed.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “кормовая добавка” включает вещества, добавляемые в корм для достижения различных эффектов, таких как дополнение питательного вещества и предупреждение утраты веса, улучшение перевариваемости волокна в корме, улучшение качества масла, предупреждение репродуктивного расстройства и улучшение коэффициента рождаемости, предупреждение высокотемпературного стресса летом и т.п. Кормовая добавка в соответствии с настоящей заявкой на изобретение соответствуют кормовой добавке в соответствии с Действующим руководством по кормлению, и может дополнительно содержать препараты минеральных веществ, таких как углеводородное соединение натрия, бентонит, оксид магния, сложное минеральное вещество и т.п., минеральные препараты, которые представляют собой следовые минеральные вещества, такие как цинк, медь, кобальт, селен и т.п., витаминные препараты, такие как кератин, витамин Е, витамины А, D и Е, никотиновая кислота, комплекс витамина В и т.п., защитные аминокислотные препараты, такие как метионин, лизин и т.п., защитные препараты жирных кислот, такие как кальциевая соль жирных кислот и т. п., живые клетки и дрожжевые агенты, такие как пробиотики (бактериальный препарат), дрожжевая культура, ферментированный продукт плесени и т. п.The term “feed additive” used in the description of the present invention includes substances added to feed to achieve various effects such as supplementing nutrition and preventing weight loss, improving fiber digestibility in feed, improving oil quality, preventing reproductive disorder and improving birth rate, preventing high temperature stress in summer, etc. The feed additive according to the present invention application corresponds to the feed additive according to the Current Feeding Guide, and may further contain mineral preparations such as sodium hydrocarbon compound, bentonite, magnesium oxide, complex mineral substance, etc., mineral preparations that are trace minerals such as zinc, copper, cobalt, selenium, etc., vitamin preparations such as keratin, vitamin E, vitamins A, D and E, nicotinic acid, vitamin B complex, etc., protective amino acid preparations such as methionine, lysine, etc., protective fatty acid preparations such as calcium salt of fatty acids, etc., live cells and yeast agents such as probiotics (bacterial preparation), yeast culture, fermented mold product, etc.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “пищевая композиция” включает все формы функциональной еды, пищевой добавки, здоровой пищи и пищевых добавок и т.п., и вышеупомянутые типы пищевых композиций могут быть приготовлены в различных формах в соответствии с обычным способом, известным в данной области техники.The term “food composition” used in the description of the present invention includes all forms of functional food, food supplement, health food and food additives, etc., and the above-mentioned types of food compositions can be prepared in various forms according to a conventional method known in the art.
Композиция в соответствии с настоящей заявкой на изобретение может дополнительно содержать зерно, такое как измельченная или дробленая пшеница, овес, ячмень, кукуруза и рис; корм на основе растительного белка, например корм, содержащий сою и подсолнечник в качестве основного компонента; корм на основе животного белка, например кровяную муку, мясную муку, костную муку и рыбную муку; сахар и молочные продукты, например высушенные компоненты, состоящие из различных видов сухого молока и сывороточного порошка, и в дополнение к ним может дополнительно содержать пищевую добавку, усилитель пищеварения и поглощения, стимулятор роста и т. п.The composition according to the present invention application may additionally contain grain, such as crushed or ground wheat, oats, barley, corn and rice; feed based on vegetable protein, for example feed containing soy and sunflower as the main component; feed based on animal protein, for example blood meal, meat meal, bone meal and fish meal; sugar and dairy products, for example dried components consisting of various types of dry milk and whey powder, and in addition to them may additionally contain a food additive, a digestion and absorption enhancer, a growth stimulator, etc.
Композиция в соответствии с настоящей заявкой на изобретение может быть введена сама по себе или в комбинации с другими кормовыми добавками среди съедобного носителя. Кроме того, композиция может быть непосредственно смешана в виде верхней заправки или для кормления или легкого введения в виде композиции для отдельного перорального введения для кормления животного. Когда композицию в корм вводят отдельно, тогда она может быть приготовлена в виде композиции с опосредованным высвобождением или композиции с длительным высвобождением в комбинации с фармацевтически приемлемым съедобным носителем, также известным в области техники. Этот съедобный носитель может представлять собой твердое вещество или жидкость, например кукурузный крахмал, лактозу, сахарозу, соевые хлопья, арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло и пропиленгликоль. При использовании твердого носителя композиция может представлять собой верхний слой таблетки, капсулы, порошок, пастилку или лепешку или в виде недиспергируемой формы. Когда используется жидкий носитель, тогда композиция может представлять собой композицию мягкой желатиновой капсулы, или сироп или суспензию, эмульсию или раствор.The composition according to the present invention application can be administered alone or in combination with other feed additives among the edible carrier. In addition, the composition can be directly mixed as a top dressing or for feeding or easy administration as a composition for separate oral administration for feeding an animal. When the composition is administered in the feed alone, then it can be prepared as a composition with mediated release or a composition with prolonged release in combination with a pharmaceutically acceptable edible carrier, also known in the art. This edible carrier can be a solid or a liquid, for example, corn starch, lactose, sucrose, soybean flakes, peanut oil, olive oil, sesame oil and propylene glycol. When using a solid carrier, the composition can be the top layer of a tablet, capsule, powder, lozenge or troche or in the form of a non-dispersible form. When a liquid carrier is used, the composition may be a soft gelatin capsule composition, or a syrup or suspension, emulsion or solution.
Композиция в соответствии с настоящей заявкой может содержать, например, консервант, стабилизатор, увлажнитель или эмульгатор, криопротектор или эксципиент и т.п. Криопротектор может представлять собой одним или более чем один, выбранный из группы, состоящей из глицерина, трегалозы, мальтодекстрина, обезжиренного сухого молока и крахмала.The composition according to the present application may contain, for example, a preservative, a stabilizer, a humectant or an emulsifier, a cryoprotectant or an excipient, etc. The cryoprotectant may be one or more selected from the group consisting of glycerol, trehalose, maltodextrin, nonfat dry milk and starch.
Консервант, стабилизатор или эксципиент может содержаться в композиции в эффективной дозе, достаточной для уменьшения повреждения микроводорослей Schizochytrium sp., содержащихся в композиции. Кроме того, криопротектор может содержаться в композиции в эффективной дозе, достаточной для уменьшения повреждения микроводорослей Schizochytrium sp., содержащихся в композиции, когда композиция находится в сухом состоянии.The preservative, stabilizer or excipient may be contained in the composition in an effective dose sufficient to reduce damage to the Schizochytrium sp. microalgae contained in the composition. In addition, the cryoprotectant may be contained in the composition in an effective dose sufficient to reduce damage to the Schizochytrium sp. microalgae contained in the composition when the composition is in a dry state.
Композиция может использоваться путем добавления к корму животного путем осаждения, распыления или смешивания.The composition can be used by adding to animal feed by precipitation, spraying or mixing.
Композиция в соответствии с настоящим изобретением может применяться в отношении кормов для различных животных, включая млекопитающих, птиц, рыб, ракообразных, головоногих, рептилий и амфибий, но не ограничиваться этим. Например, млекопитающее может включает свинью, корову, овцу, козу, экспериментального грызуна или домашнее животное, и птица может включает домашнюю птицу, и домашняя птица может включают цыпленка, индейку, утку, гуся, фазана или перепела, и т.п., но не ограничиваться этим. Кроме того, рыба может включают коммерческую сельскохозяйственную рыбу и ее мальки, декоративную рыбу и т.п., и ракообразное может включают креветки, моллюски и т.п., но не ограничиваться этим. Кроме того, композиция может применяться к рациону зоопланктона, коловраток.The composition according to the present invention can be applied to feeds for various animals, including, but not limited to, mammals, birds, fish, crustaceans, cephalopods, reptiles and amphibians. For example, a mammal can include a pig, a cow, a sheep, a goat, an experimental rodent or a pet, and a bird can include poultry, and poultry can include chicken, turkey, duck, goose, pheasant or quail, etc., but not limited to. In addition, fish can include commercial farmed fish and their fry, ornamental fish and the like, and crustaceans can include shrimp, mollusks and the like, but not limited to. In addition, the composition can be applied to the diet of zooplankton, rotifers.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ продуцирования биомассы, происходящей из микроводорослей Schizochytrium sp., включающий культивирование микроводорослей Schizochytrium sp. CD01-1821; и выделение из микроводорослей, их высушенного продукта или их лизата биомассы, содержащей докозагексаеновую кислоту.In another aspect of the present invention, a method is provided for producing biomass derived from Schizochytrium sp. microalgae, comprising culturing Schizochytrium sp. CD01-1821 microalgae; and isolating from the microalgae, their dried product or their lysate, a biomass containing docosahexaenoic acid.
Описание микроводорослей Schizochytrium sp., биомассы, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры и лизата высушенного продукта являются такими, как описано выше.The description of the microalgae Schizochytrium sp. , biomass, microalgae culture, dried culture product and dried product lysate are as described above.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “культивирование” обозначает выращивание микроводорослей в надлежащим образом контролируемых условиях окружающей среды. Способ культивирования в соответствии с настоящей заявкой на изобретение может быть проведен в соответствии с подходящей средой и условиями культивирования, известными в данной области техники. Этот способ культивирования может быть легко скорректирован и использован специалистами в данной области техники в зависимости от выбранных микроводорослей.The term "cultivation" as used in the description of the present invention means growing microalgae under suitably controlled environmental conditions. The culturing method according to the present invention application can be carried out in accordance with a suitable medium and culturing conditions known in the art. This culturing method can be easily adjusted and used by those skilled in the art depending on the selected microalgae.
В частности, культивирование микроводорослей Schizochytrium sp. в соответствии с настоящей заявкой на изобретение может быть осуществлено в гетеротрофных условиях, но не ограничиваться этим.In particular, the cultivation of Schizochytrium sp. microalgae in accordance with the present invention application may be carried out under heterotrophic conditions, but is not limited to this.
Используемый в описании настоящего изобретения термин “гетеротрофный” представляет собой пищевой способ, зависимый от органического вещества, полученного из источника энергии или источника питательных веществ вне организма, и представляет собой термин, соответствующий автотрофности, и он может быть использован взаимозаменяемо с термином “темновая культура”.As used in the description of the present invention, the term “heterotrophic” is a nutritional method dependent on organic matter obtained from an energy source or nutrient source outside the organism, and is a term corresponding to autotrophy, and it can be used interchangeably with the term “dark culture”.
Культивирование микроводорослей Schizochytrium sp. не ограничивается конкретно этим, но может быть осуществлено при помощи известного способа периодического культивирования, способа непрерывного культивирования, способа культивирования с подпиткой и т.п. Любая среда и другие условия культивирования, используемые при культивировании микроводорослей в соответствии с настоящей заявкой на изобретение, могут быть использованы без особых ограничений до тех пор, пока она представляет собой среду, используемую для культивирования обычных микроводорослей. В частности, микроводоросли в соответствии с настоящей заявкой на изобретение могут быть культивированы путем корректирования температуры, рН и т.п. в аэробных условиях в обычной среде, содержащей подходящий источник углерода, источник азота, источник фосфора, неорганическое соединение, аминокислоту и/или витамин и т.п.The cultivation of the microalgae Schizochytrium sp. is not particularly limited thereto, but can be carried out by a known batch culture method, a continuous culture method, a fed-batch culture method, etc. Any medium and other culture conditions used in culturing the microalgae according to the present invention application can be used without particular limitations as long as it is a medium used for culturing conventional microalgae. In particular, the microalgae according to the present invention application can be cultured by adjusting the temperature, pH, etc. under aerobic conditions in a conventional medium containing a suitable carbon source, a nitrogen source, a phosphorus source, an inorganic compound, an amino acid and/or a vitamin, etc.
В частности, подходящий pH (например pH от 5 до 9, в частности, pH от 6 до 8, в частности, pH 6,8) может быть скорректирован с использованием основного соединения (например, гидроксида натрия, гидроксида калия или аммиака) или кислотного соединения (например, фосфата или сульфата), но не ограничиваться этим.In particular, a suitable pH (e.g. pH 5 to 9, in particular pH 6 to 8, in particular pH 6.8) can be adjusted using a basic compound (e.g. sodium hydroxide, potassium hydroxide or ammonia) or an acidic compound (e.g. phosphate or sulfate), but is not limited thereto.
Кроме того, для поддержания аэробного условия в культуре в нее может быть инжектирован кислород или содержащий кислород газ, или для поддержания анаэробных и микроаэробных условий азот, водород или углекислый газ может быть инжектирован без инжекции газа, но не ограничиваться этим.In addition, to maintain an aerobic condition in the culture, oxygen or an oxygen-containing gas may be injected into the culture, or to maintain anaerobic and microaerobic conditions, nitrogen, hydrogen or carbon dioxide may be injected without gas injection, but not limited to this.
Кроме того, температура культивирования может поддерживаться при от 20 до 45°С или от 25 до 40°С, и культивирование может продолжаться в течение приблизительно от 10 до 160 часов, но не ограничиваться этим. Кроме того, во время культивирования может быть использован пеногаситель, такой как полигликолевый эфир жирной кислоты, для подавления образования пузырьков, но не ограничиваться этим.In addition, the culturing temperature may be maintained at 20 to 45°C or 25 to 40°C, and the culturing may be continued for about 10 to 160 hours, but not limited thereto. In addition, during the culturing, an antifoaming agent such as a fatty acid polyglycol ester may be used to suppress the formation of bubbles, but not limited thereto.
Источник углерода, содержащийся в среде, используемой при культивировании микроводорослей Schizochytrium sp., может представлять собой любой один или более чем один, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, мальтозы, галактозы, маннозы, сахарозы, арабинозы, ксилозы и глицерина, но любой источник углерода, используемый для культивирования микроводорослей, не ограничивается этим.The carbon source contained in the medium used in culturing the Schizochytrium sp. microalgae may be any one or more selected from the group consisting of glucose, fructose, maltose, galactose, mannose, sucrose, arabinose, xylose and glycerol, but any carbon source used for culturing the microalgae is not limited to this.
Источник азота, содержащийся в среде, используемой при культивировании микроводорослей Schizochytrium sp., может представлять собой (1) любой один или более чем один из источников органического азота, выбранных из группы, состоящей из дрожжевого экстракта, мясного экстракта, пептона и триптона, или 2) любой один или более чем один из неорганических источников азота, выбранных из группы, состоящей из ацетата аммония, нитрата аммония, хлорида аммония, сульфата аммония, нитрата натрия, мочевины и MSG (однозамещенного глутамата натрия), но любой источник азота, используемый для культивирования микроводорослей не ограничивается этим.The nitrogen source contained in the medium used in the cultivation of the Schizochytrium sp. microalgae may be (1) any one or more organic nitrogen sources selected from the group consisting of yeast extract, meat extract, peptone and tryptone, or 2) any one or more inorganic nitrogen sources selected from the group consisting of ammonium acetate, ammonium nitrate, ammonium chloride, ammonium sulfate, sodium nitrate, urea and MSG (monosodium glutamate), but any nitrogen source used for the cultivation of the microalgae is not limited thereto.
Среда, используемая при культивировании микроводорослей Schizochytrium sp., может содержать по отдельности или содержать в смеси первичный кислый фосфат калия, вторичный кислый фосфат калия в качестве источника фосфора, и соответствующую им содержащую натрий соль и т.п., но не ограничиваться этим.The medium used in culturing the microalgae Schizochytrium sp. may contain, individually or in mixture, monopotassium phosphate, dipotassium phosphate as a phosphorus source, and a sodium salt corresponding to them, etc., but is not limited thereto.
Путем выделения биомассы из микроводорослей, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры или лизата высушенного продукта можно собирать желаемую биомассу с использованием соответствующего способа, известного в области техники. Например, может быть использовано центрифугирование, фильтрация, анионообменная хроматография, кристаллизация и высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC) и т.п., и дополнительно может быть включен способ очистки.By isolating the biomass from the microalgae, the microalgae culture, the dried product of the culture or the lysate of the dried product, the desired biomass can be collected using an appropriate method known in the art. For example, centrifugation, filtration, anion exchange chromatography, crystallization and high performance liquid chromatography (HPLC) and the like can be used, and a purification method can be further included.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ продуцирования биомасла, происходящего из микроводорослей Schizochytrium sp., включающий культивирование микроводоросли Schizochytrium sp. CD01-1821; и выделение из микроводорослей, их высушенного продукта или их лизата биомассы, содержащей докозагексаеновую кислоту.In another aspect of the present invention, a method is provided for producing bio-oil derived from Schizochytrium sp. microalgae, comprising culturing Schizochytrium sp. CD01-1821 microalgae; and isolating from the microalgae, their dried product or their lysate a biomass containing docosahexaenoic acid.
Описание микроводорослей Schizochytrium sp., биомасла, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры или высушенного продукта лизата и культивирование микроводорослей являются такими, как описано выше.The description of the microalgae Schizochytrium sp. , bio-oil, microalgae culture, dried culture product or dried lysate product and microalgae cultivation are as described above.
Путем выделения липида из микроводорослей, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры или лизата высушенного продукта можно собирать желаемый липид с использованием соответствующего способа, известного в области техники. Например, может быть использовано центрифугирование, фильтрация, анионообменная хроматография, кристаллизация и HPLC и т.п., и дополнительно может быть включен способ очистки.By isolating the lipid from the microalgae, the microalgae culture, the dried product of the culture or the lysate of the dried product, the desired lipid can be collected using an appropriate method known in the art. For example, centrifugation, filtration, anion exchange chromatography, crystallization and HPLC and the like can be used, and a purification method can be further included.
Например, липид и производные липидов, такие как жирный альдегид, жирный спирт и углеводород (например, алкан), могут быть экстрагированы при помощи гидрофобного растворителя, такого как гексан. Липид и производные липидов также могут быть экстрагированы с использованием способа разжижения, разжижения масла и сверхкритической CO2-экстракции и т.п. Кроме того, известный способ извлечения липидов из микроводорослей включает, например, способ 1) сбора клеток путем центрифугирования и промывания дистиллированной водой, и затем сушки при помощи сублимационной сушки, и 2) измельчения полученного клеточного порошка и последующее экстрагирование липидов н-гексаном (Miao, X. and Wu, Q., Biosource Technology (2006) 97: 841-846).For example, lipid and lipid derivatives such as fatty aldehyde, fatty alcohol and hydrocarbon (e.g., alkane) can be extracted using a hydrophobic solvent such as hexane. The lipid and lipid derivatives can also be extracted using a liquefaction method, oil liquefaction and supercritical CO2 extraction and the like. In addition, a known method for extracting lipids from microalgae includes, for example, a method of 1) collecting cells by centrifugation and washing with distilled water and then drying by freeze-drying, and 2) grinding the obtained cell powder and then extracting lipids with n-hexane (Miao, X. and Wu, Q., Biosource Technology (2006) 97: 841-846).
В другом воплощении настоящего изобретения предложено применение микроводорослей Schizochytrium sp. CD01-1821, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры или лизата высушенного продукта для продуцирования биомассы или биомасла.In another embodiment of the present invention, there is provided the use of microalgae Schizochytrium sp. CD01-1821, a microalgae culture, a dried product of the culture or a lysate of the dried product for the production of biomass or bio-oil.
Микроводоросли Schizochytrium sp., биомасса, культура микроводорослей, высушенный продукт культуры и лизат высушенного продукта являются такими, как описано выше.The microalgae Schizochytrium sp. , biomass, microalgae culture, dried culture product and lysate of the dried product are as described above.
В другом воплощении настоящего изобретения предложено применение микроводорослей Schizochytrium sp. CD01-1821, культуры микроводорослей, высушенного продукта культуры или лизата высушенного продукта для получения кормовой композиции или пищевой композиции.In another embodiment of the present invention, there is provided the use of microalgae Schizochytrium sp. CD01-1821, a microalgae culture, a dried product of the culture or a lysate of the dried product for the production of a feed composition or a food composition.
Микроводоросли Schizochytrium sp., биомасса, культура микроводорослей, высушенный продукт культуры и лизат высушенного продукта являются такими, как описано выше.The microalgae Schizochytrium sp. , biomass, microalgae culture, dried culture product and lysate of the dried product are as described above.
Благоприятные эффектыBeneficial effects
Новые серии траустохитридиевых микроводорослей в соответствии с настоящим изобретением имеют высокое содержание жира в биомассе и имеют высокое содержание ненасыщенных жирных кислот, таких как докозагексаеновая кислота и эйкозапентаеновая кислота среди них, и очень легко эстрагировать биомассу, продуцируемую ими или путем культивирования и ферментации, и из биомассы экстрагировать жирные компоненты, включая ненасыщенные жирные кислоты. Соответственно, микроводоросли, высушенный продукт биомассы и получаемое из него биомасло, могут быть полезно использованы в качестве композиции для корма или композиции для питания и т.п.The new series of thraustochytrid microalgae according to the present invention have a high fat content in the biomass and have a high content of unsaturated fatty acids such as docosahexaenoic acid and eicosapentaenoic acid among them, and it is very easy to extract the biomass produced by them or by culturing and fermentation, and to extract fatty components including unsaturated fatty acids from the biomass. Accordingly, the microalgae, the dried biomass product and the bio-oil obtained therefrom can be advantageously used as a feed composition or a nutritional composition and the like.
Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials
Фиг. 1 представляет собой схематическую диаграмму, демонстрирующую способ выделения штамма микроводорослей серии Thraustochytrid.Fig. 1 is a schematic diagram showing a method for isolating a strain of a microalgae of the Thraustochytrid series.
Фиг. 2 представляет собой изображение, которое демонстрирует результат анализа общего содержания липидов и содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (EPA) среди омега-3 29 видов выделенных микроводорослей серий Thraustochytrid.Fig. 2 is an image showing the result of the analysis of total lipid content and the content of docosahexaenoic acid (DHA) and eicosapentaenoic acid (EPA) among omega-3 of 29 species of isolated microalgae of the Thraustochytrid series.
Фиг. 3 представляет собой фотографию, обнаруживающую при помощи оптического микроскопа штамм Schizochytrium sp. CD01-1821 дикого типа.Fig. 3 is a photograph showing the wild-type strain Schizochytrium sp. CD01-1821 using an optical microscope.
Вариант реализации изобретенияVariant of implementation of the invention
Далее настоящее изобретение будет описано более подробно с помощью примеров. Однако эти примеры предназначены для иллюстративного описания одного или более чем одного конкретного воплощения, и объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами.The present invention will now be described in more detail with the aid of examples. However, these examples are intended to illustratively describe one or more specific embodiments, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
Пример 1. Выделение микроводорослей серий траустохитридиевых Example 1. Isolation of microalgae of the thraustochytrid series
Чтобы выделить микроводоросли серий траустохитридиевых, были собраны образцы окружающей среды в виде морской воды, листьев и отложений в общей сложности из 40 областей вдоль районов западного побережья Кореи, областей Seocheon, Gunsan, Buan и Yeonggwang-gun. Отбор образцов осуществляли в центре конкретной области, где органические отложения развивались и были обнаружены, и собранные образцы окружающей среды транспортировали в лабораторную среду в течение 7 суток, и производили операцию по удалению других источников загрязнения, таких как бактериальные микроорганизмы и грибы, и простейшие за исключением микроводорослей серий траустохитридиевых. Путем непрерывного микроскопического исследования клетки микроводорослей серий траустохитридиевых были выделены с фокусом на образцы, которые демонстрировали характерную морфологию и образовывали обнаруживаемые зооспоры в течение жизненного цикла или составляли эктоплазматическую сеть, генерируемую на стадии развития (Фиг. 1). В качестве разделительной среды и среды для культивирования, используемой в процессе выделения, использовали модифицированную среду YEP (0,1 г/л дрожжевой экстракт, 0,5 г/л пептон, 2 г/л MgSO4·7H2O, 50 г/л морская соль, 5,0 мг/л H3BO3, 3,0 мг/л MnCl2, 0,2 мг/л CuSO4, 0,05 мг/л NaMo4·2H2O, 0,05 мг/л CoSO4, 0,7 мг/л ZnSO4·7H2O, 15 г/л агар). Могут быть получены чистые выделенные колонии, из которых источники загрязнения удаляли несколько раз путем процессов выделения и субкультивирования, и выделенные колонии вновь были под контролем источника загрязнения и подвергались процессу удаления и источника загрязнения в твердой среде, включая раствор из коктейля антибиотиков (0-50 мг/л стрептомицина сульфат, 0-30 мг/л ампициллин, 0-30 мг/л пенициллин G, 0-30 мг/л канамицина сульфат), и, таким образом, получали чистые разделяемые колонии.To isolate the Thraustochytrid series microalgae, environmental samples such as seawater, leaves, and sediments were collected from a total of 40 areas along the west coast of Korea, Seocheon, Gunsan, Buan, and Yeonggwang-gun areas. Sampling was performed at the center of a specific area where organic sediments developed and were detected, and the collected environmental samples were transported to a laboratory environment within 7 days, and an operation was performed to remove other pollution sources such as bacterial microorganisms and fungi, and protozoa except for the Thraustochytrid series microalgae. Through continuous microscopic examination, the cells of the Thraustochytrid series microalgae were isolated focusing on the samples that showed characteristic morphology and formed detectable zoospores during the life cycle or constituted the ectoplasmic reticulum generated during the developmental stage (Fig. 1). Modified YEP medium (0.1 g/L yeast extract, 0.5 g/L peptone, 2 g/L MgSO 4 7H 2 O, 50 g/L sea salt, 5.0 mg/L H 3 BO 3 , 3.0 mg/L MnCl 2 , 0.2 mg/L CuSO 4 , 0.05 mg/L NaMo 4 2H 2 O, 0.05 mg/L CoSO 4 , 0.7 mg/L ZnSO 4 7H 2 O , 15 g/L agar) was used as the separation medium and the culture medium used in the isolation process. Pure isolated colonies can be obtained from which the contamination sources have been removed several times by the isolation and subculture processes, and the isolated colonies were again under contamination source control and subjected to the contamination source removal process in a solid medium including a solution of an antibiotic cocktail (0-50 mg/L streptomycin sulfate, 0-30 mg/L ampicillin, 0-30 mg/L penicillin G, 0-30 mg/L kanamycin sulfate), and thus pure separable colonies were obtained.
Пример 2. Оценка культивирования выделенных микроводорослей и отбор наилучшего штаммаExample 2. Evaluation of the cultivation of isolated microalgae and selection of the best strain
Была проведена оценка культивирования чистых выделенных колоний в примере 1, и посредством этого был отобран самый лучший штамм.The cultivation of pure isolated colonies in Example 1 was evaluated and the best strain was selected through this.
В частности, чистые выделенные колонии в примере 1 культивировали с использованием модифицированной среды GGYEP (5 г/л глюкоза, 5 г/л глицерин, 0,1 г/л дрожжевой экстракт, 0,5 г/л пептон, 2 г/л MgSO4·7H2O, 50 г/л морская соль, 5,0 мг/л H3BO3, 3,0 мг/л MnCl2, 0,2 мг/л CuSO4, 0,05 мг/л NaMo4·2H2O, 0,05 мг/л CoSO4, 0,7 мг/л ZnSO4 7H2O) в колбе объемом 250 мл в условиях 10-35°С, 100-200 об/мин в течение приблизительно 2 суток. На основе достигнутого результата культивирования было отобрано 29 видов микроводорослей, которые могли расти при температуре 30°С или выше и имели превосходную скорость роста и могли обеспечить количество микробных клеток. Для отобранных штаммов микроводорослей культивирование в колбе объемом 500 мл с модифицированной средой GYEP, включающей 30 г/л глюкозу в качестве источника углерода и условиях культивирования 30°С 150 об/мин, проводили в течение 2 суток. После подтверждения того, что все входящие источники углерода были израсходованы в среде культивирования в течение 2 суток, весь культивирующий раствор отбирали и сушили в течение ночи в сушильном шкафу при 60°С для получения биомассы.In particular, the pure isolated colonies in Example 1 were cultured using a modified GGYEP medium (5 g/L glucose, 5 g/L glycerol, 0.1 g/L yeast extract, 0.5 g/L peptone, 2 g/L MgSO 4 7H 2 O, 50 g/L sea salt, 5.0 mg/L H 3 BO 3 , 3.0 mg/L MnCl 2 , 0.2 mg/L CuSO 4 , 0.05 mg/L NaMo 4 2H 2 O, 0.05 mg/L CoSO 4 , 0.7 mg/L ZnSO 4 7H 2 O) in a 250 ml flask under conditions of 10-35°C, 100-200 rpm for approximately 2 days. Based on the achieved culturing result, 29 kinds of microalgae that could grow at 30°C or higher and had excellent growth rate and could provide the microbial cell number were selected. For the selected microalgae strains, culturing was carried out in a 500-mL flask with a modified GYEP medium containing 30 g/L glucose as a carbon source and under culturing conditions of 30°C 150 rpm for 2 days. After confirming that all the input carbon sources were consumed in the culturing medium within 2 days, the whole culturing solution was collected and dried overnight in a drying oven at 60°C to obtain biomass.
Чтобы проанализировать содержание липида и полиненасыщенной жирной кислоты в культивированных микробных клетках микроводорослей, использовали способ, изложенный ниже, и полученное из микроводорослей масло, содержащее жирную кислоту, с использованием высушенных микробных клеток измеряли при помощи следующего способа. Процесс добавления 8,3 М раствора соляной кислоты (HCl) к 5 г высушенных микробных клеток, и затем гидролиза клеточных стенок микробных клеток микроводорослей при 80°С, и затем добавление 30 мл этилового эфира и 20 мл петролейного эфира и смешивание в течение 30 секунд, и затем центрифугирование повторяли 3 раза или более. Отделенный слой растворителя отбирали и переносили в предварительно взвешенную круглую колбу, и затем растворитель удаляли путем продувания азотом, и постоянную массу охлаждали в эксикаторе. При помощи измерения массы высушенного масла путем вычитания массы пустой колбы из массы колбы после сушки рассчитывали общее содержание масла. Содержание докозагексаеновой кислоты (DHA) в масле было представлено путем предварительной обработки метанольным 0,5 н. NaOH и 14% трифторборан-метанолом (BF3) и измерения путем газовой хроматографии.In order to analyze the content of lipid and polyunsaturated fatty acid in the cultured microbial cells of microalgae, the method described below was used, and the fatty acid-containing oil obtained from microalgae using the dried microbial cells was measured by the following method. The process of adding 8.3 M hydrochloric acid (HCl) solution to 5 g of the dried microbial cells, and then hydrolyzing the cell walls of the microalgae microbial cells at 80°C, and then adding 30 ml of ethyl ether and 20 ml of petroleum ether and mixing for 30 seconds, and then centrifuging were repeated 3 times or more. The separated solvent layer was collected and transferred to a pre-weighed round flask, and then the solvent was removed by blowing with nitrogen, and the constant weight was cooled in a desiccator. By measuring the weight of the dried oil by subtracting the weight of the empty flask from the weight of the flask after drying, the total oil content was calculated. The docosahexaenoic acid (DHA) content of the oil was represented by pre-treatment with methanolic 0.5 N NaOH and 14% trifluoroborane-methanol (BF3) and measured by gas chromatography.
[Расчётная формула 1][Calculation formula 1]
Общее содержание масла (%) = (*масло г/количество высушенных микробных клеток г) × 100Total oil content (%) = (*oil g/number of dried microbial cells g) × 100
*масло г: масса колбы после кислотного гидролиза и удаления растворителя – масса круглой колбы*oil g: weight of flask after acid hydrolysis and removal of solvent – weight of round flask
“Биомасса” в соответствии с таблицей 1 ниже обозначает концентрацию микробной клетки в растворе для культивирования, и она может быть использована взаимозаменяемо с DCW (сухая масса клеток) в соответствии с таблицей 2 ниже.“Biomass” according to Table 1 below refers to the concentration of microbial cell in the culture solution, and it can be used interchangeably with DCW (dry cell weight) according to Table 2 below.
Таблица 1Table 1
(В таблице (TFA) обозначает общее содержание жирной кислоты и может быть использовано взаимозаменяемо с “содержанием неочищенного жира”, или “количеством неочищенного жира”, или “общим содержанием липидов”).(In the table, (TFA) refers to total fatty acid content and can be used interchangeably with “crude fat content” or “crude fat amount” or “total lipid content”).
В качестве результата, как продемонстрировано в таблице 1 и на Фиг. 2, было продемонстрировано, что внутриклеточное содержание ДНК является очень высоким для 2 видов штаммов CD01-1821 и CD01-1822.As a result, as shown in Table 1 and Fig. 2, it was demonstrated that the intracellular DNA content was very high for the 2 kinds of strains CD01-1821 and CD01-1822.
В качестве результата анализа жирных кислот оценку культивирования осуществляли в 5 л среды для культивирования для 2 видов штаммов CD01-1821, CD01-1822 с превосходным внутриклеточным содержанием ДНК. Для посевной культуры их культивировали с использованием стерилизованной среды MJW02 (30 г/л глюкоза, 3,0 г/л MgSO4·7H2O, 15 г/л Na2SO4, 0,8 г/л NaCl, 1,0 г/л дрожжевой экстракт, 1,0 г/л ОГН (MSG)·1H2O, 1,0 г/л NaNO3, 0,8 г/л KH2PO4, 1,5 г/л K2HPO4, 0,5 г/л CaCl2, 10 мл/л смешанный раствор витаминов) в колбе объемом 500 мл в условиях 30°С, 150 об/мин в течение приблизительно 24 часов. Отбирали аликвоту содержимого колбы с посевной культурой и инокулировали в 5 л среды для культивирования. Вводили 28% глюкозный источник углерода относительно общего раствора для культивирования и культивирование продолжали в течение приблизительно 72 часов, и культивирование осуществляли в стерилизованной среде MJW02 в условиях среды для культивирования 30°С, 500 об/мин, 1,5 об/об/мин, pH 5-8.As a result of fatty acid analysis, the cultivation evaluation was carried out in 5 L of the cultivation medium for 2 kinds of strains CD01-1821, CD01-1822 with excellent intracellular DNA content. For seed culture, they were cultured using sterilized MJW02 medium (30 g/L glucose, 3.0 g/L MgSO4 7H2O , 15 g/L Na2SO4 , 0.8 g/L NaCl, 1.0 g/L yeast extract, 1.0 g/L MSG 1H2O , 1.0 g/L NaNO3, 0.8 g/ L KH2PO4 , 1.5 g/L K2HPO4 , 0.5 g/L CaCl2, 10 ml/L mixed vitamin solution ) in a 500 ml flask under the condition of 30°C, 150 rpm for about 24 hours. An aliquot of the seed culture flask contents was taken and inoculated into 5 L of culture medium. A 28% glucose carbon source relative to the total culture solution was added, and the culture was continued for approximately 72 hours, and the culture was carried out in sterilized MJW02 medium under culture medium conditions of 30°C, 500 rpm, 1.5 rpm, pH 5-8.
Таблица 2Table 2
В качестве результата, как было продемонстрировано в таблице 2, подтвердили то, что штамм CD01-1821 был более полезным для процесса масштабирования, поскольку он обладал более высоким общим продуцированием биомассы и количества неочищенного жира в тех же самых условиях ферментации, чем штамм CD01-1822. Соответственно, штамм CD01-1821 отбирали и использовали для идентификации последовательности штамма и дополнительной разработки штамма. Тип выбранного штамма CD01-1821 обнаруживали с использованием оптического микроскопа, и он представлен на Фиг. 3.As a result, as shown in Table 2, it was confirmed that the strain CD01-1821 was more useful for the scale-up process because it had higher total biomass production and crude fat amount under the same fermentation conditions than the strain CD01-1822. Accordingly, the strain CD01-1821 was selected and used for strain sequence identification and further strain development. The type of the selected strain CD01-1821 was detected using an optical microscope, and it is shown in Fig. 3.
Пример 3. Подтверждение характеристик культивирования штамма CD01-1821 в условиях сложного источника углеродаExample 3. Confirmation of the cultivation characteristics of strain CD01-1821 under complex carbon source conditions
При ферментации на основе гетеротрофных микроорганизмов глюкозный компонент в основном используется в качестве сырья для источника углерода. В этом случае глюкоза представляет собой моносахарид в рафинированной форме на 90% или более, и стоимость получается выше во время ферментации в промышленных масштабах по сравнению с другими компонентами исходного сырья-источника углерода. Для того, чтобы использовать недорогое сырье-источник углерода и путем этого получить ценовую конкурентоспособность, важно обнаружить штамм, который может быть использован для ферментации микроорганизмом, и может быть культивирован обычно из недорогого компонента-источника углерода, отличного от очищенной глюкозы.In the fermentation based on heterotrophic microorganisms, the glucose component is mainly used as a raw material for the carbon source. In this case, glucose is a monosaccharide in a refined form of 90% or more, and the cost is higher during fermentation on an industrial scale compared with other components of the raw material carbon source. In order to use inexpensive raw material carbon source and thereby obtain price competitiveness, it is important to find a strain that can be used for fermentation by the microorganism and can be cultured usually from an inexpensive carbon source component other than purified glucose.
Таким образом, оценку ферментационного культивирования осуществляли для сахара-сырца, содержащего глюкозу, фруктозу или сахарозу в качестве основного компонента, для штамма CD01-1821, выбранного в примере 2, и штамма CJM01 (KR 10-2100650 B1) для подтверждения характеристик культивирования. Культивирование осуществляли в 30 л среды для культивирования, и на основе модифицированной среды MJW02 осуществляли эксперименты с лизатами сахара-сырца, содержащими, соответственно, 450 г/л глюкозу, смесь 225 г/л глюкозы и 225 г/л фруктозы, 225 г/л глюкозу, 220 г/л фруктозу и 1,51 г/л сульфат. Условия культивирования устанавливали такими же, как условия 30°С, 500 об/мин, 1,5 об/об/мин, рН 5-8, и, соответственно, вводили 35% источник углерода от общего раствора для культивирования.Thus, fermentation culture evaluation was performed for raw sugar containing glucose, fructose or sucrose as the main component, for the CD01-1821 strain selected in Example 2 and the CJM01 strain (KR 10-2100650 B1) to confirm the culture characteristics. The culture was performed in 30 L of the culture medium, and experiments were performed on the modified MJW02 medium with raw sugar lysates containing 450 g/L glucose, a mixture of 225 g/L glucose and 225 g/L fructose, 225 g/L glucose, 220 g/L fructose and 1.51 g/L sulfate, respectively. The cultivation conditions were set to the same conditions as 30°C, 500 rpm, 1.5 rpm, pH 5-8, and, accordingly, 35% of the carbon source from the total cultivation solution was introduced.
Таблица 3Table 3
В результате, как продемонстрировано в Таблице 3, штамм CD01-1821 продемонстрировал общее продуцирование биомассы и количество неочищенного жира на эквивалентном или более высоком уровне в ферментации в условиях среды смеси с фруктозой или лизата сахара-сырца, но не с глюкозой в качестве единственного компонента. С другой стороны, штамм CJM01 продемонстрировал диауксическую форму роста с потреблением двойного источника углерода и картиной роста клеток, поскольку в среду добавляют сахарный компонент, отличающийся от глюкозного компонента, и продемонстрировано явление, заключающееся в том, что общее время культивирования было увеличено. Путем соответствующего результата эксперимента можно подтвердить, что штамм CD01-1821 имел возможность масштабируемой ферментации в условиях сложного источника углерода.As a result, as shown in Table 3, the CD01-1821 strain showed the total biomass production and crude fat amount at an equivalent or higher level in the fermentation under the medium condition of the mixture with fructose or raw sugar lysate, but not with glucose as the only component. On the other hand, the CJM01 strain showed a diauxic growth form with dual carbon source consumption and cell growth pattern since a sugar component different from the glucose component was added to the medium, and demonstrated the phenomenon that the total culturing time was increased. Through the corresponding experimental result, it can be confirmed that the CD01-1821 strain had the ability of scalable fermentation under the complex carbon source condition.
Пример 4. Идентификация нового штамма Example 4. Identification of a new strain Schizochytrium sp. Schizochytrium sp. CD01-1821CD01-1821
Для биомолекулярной идентификации отдельного и выбранного штамма микроводорослей CD01-1821 в примере 1 и примере 2 анализировали последовательность гена 18S рРНК.For biomolecular identification of the individual and selected microalgae strain CD01-1821 in Example 1 and Example 2, the 18S rRNA gene sequence was analyzed.
В частности, после экстракции и выделения гДНК из колонии чистых отделенных микроводорослей CD01-1821 осуществляли реакцию амплификации путем полимеразной цепной реакции (PCR) с использованием праймеров 18s-Fwd, LABY-ARev для амплификации гена области 18s рРНК, описанного в таблице 4.In particular, after extraction and isolation of gDNA from the colony of pure isolated microalgae CD01-1821, the amplification reaction was carried out by polymerase chain reaction (PCR) using primers 18s-Fwd, LABY-ARev to amplify the gene of the 18s rRNA region described in Table 4.
Таблица 4Table 4
Для реакции ПЦР (PCR) с использованием реакционного раствора, содержащего полимеразу taq осуществляли денатурацию при 95°С в течение 5 минут, и затем денатурацию при 95°С в течение 30 секунд, отжиг при 50°С в течение 30 секунд и полимеризацию при 72°С в течение 2 минут повторяли 35 раз, и затем реакцию полимеризации осуществляли при 72°С в течение 5 минут. Реакционный раствор амплифицировали при помощи процесса PCR в условиях электрофореза в 1% агарозном геле, и, таким образом, подтвердили, что амплифицировали фрагменты ДНК размером приблизительно 1000 п.о., и осуществляли анализ путем секвенирования нуклеотидной последовательности. В качестве результата анализа было подтверждено то, что полученная соответствующая последовательность демонстрировала гомологию 95,11% с последовательностью гена 18S рРНК штамма Schizochytrium limacinum OUC109, относящегося к сериям микроводорослей семейства траустохитридиевых, и продемонстрировала гомологию 95,0% с последовательностью гена 18S рРНК штамма LY-2012 Schizochytrium sp. в соответствии с поиском NCBI BLAST (средства поиска основного локального выравнивания Национального центра биотехнологической информации). Таким образом, было подтверждено то, что выделенные микроводоросли CD01-1821 представляли собой новый штамм Schizochytrium sp., и были названы штаммом CD01-1821 Schizochytrium sp., и депонированы в Корейской коллекции типовых культур (KCTC) Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии 23 августа 2021 года, и ему был присвоен идентификационный номер KCTC14660BP.For the PCR reaction using the reaction solution containing taq polymerase, denaturation was performed at 95°C for 5 minutes, and then denaturation was performed at 95°C for 30 seconds, annealing at 50°C for 30 seconds and polymerization at 72°C for 2 minutes were repeated 35 times, and then the polymerization reaction was performed at 72°C for 5 minutes. The reaction solution was amplified by the PCR process under 1% agarose gel electrophoresis, and thus it was confirmed that DNA fragments of approximately 1000 bp were amplified, and analysis was performed by nucleotide sequence sequencing. As a result of the analysis, it was confirmed that the obtained corresponding sequence showed 95.11% homology with the 18S rRNA gene sequence of Schizochytrium limacinum strain OUC109 belonging to the Thraustochytridaceae family of microalgae, and showed 95.0% homology with the 18S rRNA gene sequence of Schizochytrium sp. strain LY-2012 according to the NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) search. Thus, it was confirmed that the isolated microalgae CD01-1821 was a new strain of Schizochytrium sp. , and was named as Schizochytrium sp. strain CD01-1821. , and deposited in the Korea Type Culture Collection (KCTC), Korea Research Institute of Life Sciences and Biotechnology on August 23, 2021, and was assigned the accession number KCTC14660BP.
Пример 5. Анализ содержания неочищенного белка в образцах растворов для культивирования штамма CD01-1821Example 5. Analysis of the content of crude protein in samples of solutions for culturing strain CD01-1821
Для анализа содержания неочищенного белка в образцах растворов для культивирования штамма Schizochytrium sp. CD01-1821 использовали способ, такой как приведенный ниже.The following method was used to analyze the crude protein content of the Schizochytrium sp. CD01-1821 strain culture solutions.
В частности, высушенные микробные клетки, каждые из которых представляют собой высушенный продукт (образец) ферментированного раствора, соответствующие приблизительно 20~30 мг, точно отмеряли и помещали в пробирку для разложения, и добавляли два ускорителя разложения. Ускоритель разложения эффективно разлагается, когда соотношение серной кислоты (H2SO4) и сульфата калия (K2SO4) составляет 1,4~2,0:1,0. Затем в пробирку для разложения добавляли концентрированную серную кислоту (H2SO4) 12~15 мл, и ее охлаждали до комнатной температуры, когда цвет разлагаемого раствора был прозрачно светло-зеленым (с использованием медного ускорителя) или прозрачным желтым (с использованием селенового катализатора) путем разложения в устройстве для разложения при 420°С в течение от 45 до 60 минут. После охлаждения к разложенному испытуемому раствору добавляли 80 мл дистиллированной воды. После добавления 25 мл раствора для сбора, смешанного с индикатором смешивания, в колбу Эрленмейера, ее помещали в дистилляционный аппарат, и стойку колбы Эрленмейера поднимали так, чтобы дистиллированный раствор поступал в раствор для сбора во время дистилляции. 50 мл раствора гидроксида натрия (NaOH) (количество, соответствующее 4-кратной серной кислоте, используемой во время разложения) добавляли в пробирку для разложения и перегоняли в дистилляционном аппарате в течение 3-4 минут. Было подтверждено, что раствор для сбора в колбе Эрленмейера дистилляционного аппарата становился зеленым при сборе аммиака (NH3), содержащегося в дистиллированном растворе. Дистиллированный раствор титровали с использованием раствора соляной кислоты (обычно 0,1 н. или 0,2 н.) до тех пор, пока конечная точка не достигла бледно-розового цвета, и регистрировали количество кислоты, используемой для титрования. В случае автоматического устройства, дистилляция, титрование и расчет выполняются автоматически. Путем использования результата эксперимента, по приведенной ниже формуле расчета 2 получали % азота. Количественное определение белка выражали путем умножением полученного ранее % азота на средний коэффициент азота 6,25.Specifically, the dried microbial cells, each of which is a dried product (sample) of the fermented solution, corresponding to about 20~30 mg, were accurately measured and placed in a decomposition tube, and two decomposition accelerators were added. The decomposition accelerator is effectively decomposed when the ratio of sulfuric acid (H2SO4) to potassium sulfate (K 2 SO 4 ) is 1.4~2.0:1.0. Then, 12~15 ml of concentrated sulfuric acid (H2SO4) was added to the decomposition tube, and it was cooled to room temperature when the color of the decomposed solution was transparent light green (using a copper accelerator) or transparent yellow (using a selenium catalyst) by decomposition in a decomposition device at 420°C for 45 to 60 minutes. After cooling, 80 ml of distilled water was added to the decomposed test solution. After adding 25 ml of the collection solution mixed with the mixing indicator into the Erlenmeyer flask, it was placed in the distillation apparatus, and the stand of the Erlenmeyer flask was raised so that the distilled solution entered the collection solution during distillation. 50 ml of sodium hydroxide (NaOH) solution (the amount corresponding to 4 times the sulfuric acid used during the digestion) was added to the digestion tube and distilled in the distillation apparatus for 3-4 minutes. It was confirmed that the collection solution in the Erlenmeyer flask of the distillation apparatus turned green when collecting ammonia (NH3) contained in the distilled solution. The distilled solution was titrated using hydrochloric acid solution (usually 0.1 N or 0.2 N) until the end point reached a pale pink color, and the amount of acid used for titration was recorded. In case of automatic device, distillation, titration and calculation are performed automatically. By using the result of the experiment, the % nitrogen was obtained by the calculation formula below 2. The protein quantification was expressed by multiplying the previously obtained % nitrogen by the average nitrogen factor 6.25.
[Формула для расчета 2][Formula for calculation 2]
Азот (%) = {(количество HCl в мл – контрольный образец в мл) x M x 14,01/количество образца в мг} × 100 Nitrogen (%) = {(amount of HCl in ml – control sample in ml) x M x 14.01/amount of sample in mg} x 100
* 14,01: Атомная масса азота * 14.01: Atomic mass of nitrogen
* M: Молярность HCl *M: Molarity of HCl
* Ускоритель разложения: Kjeltabs или его эквивалент * Decomposition accelerator: Kjeltabs or equivalent
* Раствор борной кислоты: 1% (или 4%) раствор борной кислоты, приготовленный до постоянного объема 10 л путем добавления 100 г H3BO3 (или 400 г), 100 мл 0,1% раствора бромкрезолового зеленого и 100 мл 0,1% раствора метилового красного.* Boric acid solution: 1% (or 4%) boric acid solution prepared to a constant volume of 10 L by adding 100 g H3BO3 (or 400 g), 100 ml 0.1% bromocresol green solution and 100 ml 0.1% methyl red solution.
Для анализа содержания аминокислот образец высушенного продукта ферментированного раствора (проба) массой приблизительно 1 г отбирали из растворов для культивирования штамма CD01-1821. После проведения кислотного гидролиза внутриклеточного белка с использованием раствора HCl в концентрации 6 н, его разбавляли и фильтровали дистиллированной водой, и осуществляли жидкостную хроматографию.For amino acid content analysis, a dried fermentation solution sample (sample) weighing approximately 1 g was collected from the CD01-1821 strain culture solutions. After acid hydrolysis of the intracellular protein was performed using 6 N HCl solution, it was diluted and filtered with distilled water, and liquid chromatography was performed.
Таблица 5Table 5
В результате, как продемонстрировано в таблице 5, было подтверждено то, что содержание неочищенного белка в высушенных микробных клетках CD01-1821 составляло 17%. Кроме того, в содержании аминокислот в высушенных микробных клетках содержание глутаминовой кислоты было самым высоким, и оно было высоким в последовательности тирозина, аланина, фенилаланина, глицина, аргинина, серина, валина, лизина, аспарагиновой кислоты, метионина, изолейцина и лейцина. Таким образом, было подтверждено то, что аминокислота в высушенной микробной клетке CD01-1821 состояла из глутаминовой кислоты, тирозина, аланина, фенилаланина, глицина, аргинина, серина, валина, лизина, аспарагиновой кислоты, метионина, изолейцина и лейцина.As a result, as shown in Table 5, it was confirmed that the crude protein content of the dried microbial cells CD01-1821 was 17%. In addition, among the amino acid content of the dried microbial cells, the content of glutamic acid was the highest, and it was high in the sequence of tyrosine, alanine, phenylalanine, glycine, arginine, serine, valine, lysine, aspartic acid, methionine, isoleucine and leucine. Therefore, it was confirmed that the amino acid in the dried microbial cell CD01-1821 was composed of glutamic acid, tyrosine, alanine, phenylalanine, glycine, arginine, serine, valine, lysine, aspartic acid, methionine, isoleucine and leucine.
Из приведенного выше описания специалистам в данной области техники, к которой относится настоящая заявка на изобретение, будет понятно то, что настоящая заявка на изобретение может быть реализована в других конкретных формах без изменения ее технической сущности или существенных характеристик. В этом отношении следует понимать, что примеры, описанные выше, являются иллюстративными, а не ограничивающими во всех отношениях. Объем настоящего изобретения следует рассматривать как включающий в себя все изменения или модифицированные формы, полученные из значения и объема формулы изобретения, описанной далее, и их эквивалентных концепций, а не из подробного описания изобретения.From the above description, it will be clear to those skilled in the art to which this invention application pertains that the present invention application may be embodied in other specific forms without changing its technical essence or essential characteristics. In this regard, it should be understood that the examples described above are illustrative and not limiting in all respects. The scope of the present invention should be considered as including all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims described below and their equivalent concepts, and not from the detailed description of the invention.
Идентификационный номерIdentification number
Наименование депонирующего органа: Корейская коллекция типовых культур (KCTC) Корейского научно-исследовательского института биологических наук и биотехнологии.Name of depository authority: Korea Type Culture Collection (KCTC), Korea Research Institute of Life Sciences and Biotechnology.
Идентификационный номер: KCTC14660BP.Identification number: KCTC14660BP.
Дата депонирования: 20210823.Deposit date: 20210823.
--->--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="en" <ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="en"
nonEnglishFreeTextLanguageCode="ru" dtdVersion="V1_3" nonEnglishFreeTextLanguageCode="ru" dtdVersion="V1_3"
fileName="P24294RU-st26-RU.xml" softwareName="WIPO Sequence" fileName="P24294RU-st26-RU.xml" softwareName="WIPO Sequence"
softwareVersion="2.2.0" productionDate="2024-06-11">softwareVersion="2.2.0" productionDate="2024-06-11">
<ApplicationIdentification><ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>KR</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>KR</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>PCT/KR2022/011959</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>PCT/KR2022/011959</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2022-08-10</FilingDate> <FilingDate>2022-08-10</FilingDate>
</ApplicationIdentification></ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>P24294RU</ApplicantFileReference> <ApplicantFileReference>P24294RU</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification> <EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>KR</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>KR</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>10-2021-0152561</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>10-2021-0152561</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2021-11-08</FilingDate> <FilingDate>2021-11-08</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification> </EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">СИДЖЕЙ ЧЕИЛДЖЕДАНГ КОРПОРЕЙШН <ApplicantName languageCode="en">CJ CHEILDJEDANG CORPORATION
</ApplicantName></ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>CJ CHEILJEDANG CORPORATION</ApplicantNameLatin> <ApplicantNameLatin>CJ CHEILJEDANG CORPORATION</ApplicantNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Новый штамм Schizochytrium sp. с <InventionTitle languageCode="en">A new strain of Schizochytrium sp.
легкой экстракцией внутриклеточного масла и способ продуцирования easy extraction of intracellular oil and production method
масла, содержащего омега-3, с его использованием </InventionTitle>oils containing omega-3, using it </InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>3</SequenceTotalQuantity> <SequenceTotalQuantity>3</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1"> <SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq><INSDSeq>
<INSDSeq_length>850</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>850</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table><INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..850</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..850</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q1"><INSDQualifier id="q1">
<INSDQualifier_name>note</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>note</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>18s rRNA sequence of <INSDQualifier_value>18s rRNA sequence of
CD01-1821</INSDQualifier_value> CD01-1821</INSDQualifier_value>
<NonEnglishQualifier_value>Последовательность 18s рРНК <NonEnglishQualifier_value>18s rRNA sequence
CD01-1821</NonEnglishQualifier_value>CD01-1821</NonEnglishQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..850</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..850</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier><INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q2"><INSDQualifier id="q2">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
<NonEnglishQualifier_value>Синтетическая <NonEnglishQualifier_value>Synthetic
конструкция</NonEnglishQualifier_value>construction</NonEnglishQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table></INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>aagcttgtttcaaagattaccatgcatgtgtaagtataagcgattgtac <INSDSeq_sequence>aagcttgtttcaaagattaccatgcatgtgtaagtataagcgattgtac
tgtgagactgcgaacggctcattatatcagtaataatttcttcggtagtttcttttataggatacctgcatgtgagactgcgaacggctcattatatcagtaataatttcttcggtagtttctttttataggatacctgca
gtaattctggaaataatacatgctgtaagagccctgtatggggctgcacttattagattgaagccgatttgtaattctggaaataatacatgctgtaagagccctgtatggggctgcacttattagattgaagccgattt
tattggtgaatcatgataattgagcagattgacttttttgtcatgaatcgtttgagtttctgccccatcatattggtgaatcatgataattgagcagattgacttttttgtcatgaatcgtttgagtttctgccccatca
gttgtcacggtagtgtattggactacggtgactataacgggtgacggaagttagggctgactccggaagggttgtcacggtagtgtattggactacggtgactataacgggtgacggaagttagggctgactccggaagg
gagcctgaaacggctaccatatccaaggatagcacaggccgtaaattacccactgtggactccacaggtagagcctgaaacggctaccatatccaaggatagcacaggccgtaaattacccactgtggactccacaggta
gtgacagaaatatcgatgcaagcgtgtatgcgttttgctatcggaatgaagcaatgtaaaaccctcatcggtgacagaaatatcgatgcaagcgtgtatgcgttttgctatcggaatgaagcaatgtaaaaccctcatcg
aggatcaactggagggcaagtctggtgccagcagccgcggtaattccagctccagaagcatatgctaaagaggatcaactggagggcaagtctggtgccagcagccgcggtaattccagctccagaagcatatgctaaag
ttgttgcagttaaaaagctgtagttgaattttggcatgggcaccggtgctttccctgaatggggattgatttgttgcagttaaaaagctgtagttgaattttggcatgggcaccggtgctttccctgaatggggattgat
tgttgtgttgccttggccatctttttcttcttttttggaatctttcactgtaatcaaagcaagtgttccatgttgtgttgccttggccatctttttcttcttttttggaatctttcactgtaatcaaagcaagtgttcca
agcaggcgatgaccggtatgtttattatgggatgataaataggacttgggtgctattttgttggtttgcaagcaggcgatgaccggtatgtttattatgggatgataaataggacttgggtgctattttgttggtttgca
cgcctgagtaaggttaataggaacagttgggggtattcgtatttaggagctagaggtgaaattcttgattcgcctgagtaaggttaataggaacagttgggggtattcgtatttaggagctagaggtgaaattcttgatt
ccaaaagacaaacagaggaaaggcattccca</INSDSeq_sequence>ccaaaagacaaacagaggaaaggcattccca</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq></INSDSeq>
</SequenceData></SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2"> <SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq><INSDSeq>
<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table><INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q3"><INSDQualifier id="q3">
<INSDQualifier_name>note</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>note</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>Synthetic_18S Fwd <INSDQualifier_value>Synthetic_18S Fwd
primer</INSDQualifier_value> primer</INSDQualifier_value>
<NonEnglishQualifier_value>Синтетический праймер 18S <NonEnglishQualifier_value>Synthetic primer 18S
Fwd</NonEnglishQualifier_value>Fwd</NonEnglishQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier><INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q4"><INSDQualifier id="q4">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
<NonEnglishQualifier_value>Синтетическая <NonEnglishQualifier_value>Synthetic
конструкция</NonEnglishQualifier_value>construction</NonEnglishQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table></INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>aacctggttgatcctgccagt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>aacctggttgatcctgccagt</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq></INSDSeq>
</SequenceData></SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="3"> <SequenceData sequenceIDNumber="3">
<INSDSeq><INSDSeq>
<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table><INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..18</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..18</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier id="q5"><INSDQualifier id="q5">
<INSDQualifier_name>note</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>note</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>Synthetic_LABY-ARev <INSDQualifier_value>Synthetic_LABY-ARev
primer</INSDQualifier_value> primer</INSDQualifier_value>
<NonEnglishQualifier_value>Синтетический праймер <NonEnglishQualifier_value>Synthetic primer
LABY-ARev</NonEnglishQualifier_value>LABY-ARev</NonEnglishQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
<INSDFeature><INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..18</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..18</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals><INSDFeature_quals>
<INSDQualifier><INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q6"><INSDQualifier id="q6">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>
<NonEnglishQualifier_value>Синтетическая <NonEnglishQualifier_value>Synthetic
конструкция</NonEnglishQualifier_value>construction</NonEnglishQualifier_value>
</INSDQualifier></INSDQualifier>
</INSDFeature_quals></INSDFeature_quals>
</INSDFeature></INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table></INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>gggatcgaagatgattag</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gggatcgaagatgattag</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq></INSDSeq>
</SequenceData></SequenceData>
</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>
<---<---
Claims (17)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2021-0152561 | 2021-11-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2024111075A RU2024111075A (en) | 2024-08-14 |
| RU2845656C2 true RU2845656C2 (en) | 2025-08-25 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101847551B1 (en) * | 2016-11-04 | 2018-04-10 | 전북대학교산학협력단 | Mutant microalgae Schizochytrium sp. SHG104 strain having high productivity of carotenoid-type antioxidant pigment and bio-oil containing DHA and uses thereof |
| RU2754686C1 (en) * | 2018-06-29 | 2021-09-06 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | New strains of microalgae of thraustochytrium genus and method for producing polyunsaturated fatty acids using these strains |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101847551B1 (en) * | 2016-11-04 | 2018-04-10 | 전북대학교산학협력단 | Mutant microalgae Schizochytrium sp. SHG104 strain having high productivity of carotenoid-type antioxidant pigment and bio-oil containing DHA and uses thereof |
| RU2754686C1 (en) * | 2018-06-29 | 2021-09-06 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | New strains of microalgae of thraustochytrium genus and method for producing polyunsaturated fatty acids using these strains |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PARK H. et al. Enhanced production of carotenoids using a Thraustochytrid microalgal strain containing high levels of docosahexaenoic acid-rich oil. Bioprocess Biosyst Eng 41, 1355-1370 (2018). Найдено по адресу: https://doi.org/10.1007/s00449-018-1963-7. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2021398406B2 (en) | Novel schizochytrium sp. strain and polyunsaturated fatty acid production method using same | |
| RU2754686C1 (en) | New strains of microalgae of thraustochytrium genus and method for producing polyunsaturated fatty acids using these strains | |
| RU2845656C2 (en) | Novel schizochytrium species strain with easy extraction of intracellular oil and method for producing oil containing omega-3 using same | |
| RU2845666C2 (en) | Novel schizochytrium species strain with easy extraction of intracellular oil and method for producing oil containing omega-3 using same | |
| AU2022382354B2 (en) | Novel strain of schizochytrium sp. with easy intracellular oil extraction and method for producing oil containing omega3 using same | |
| AU2022382507B2 (en) | Novel strain of schizochytrium sp. with easy intracellular oil extraction and a method for producing oil containing omega-3 using same | |
| RU2827970C1 (en) | New strain of schizochytrium species and method of producing polyunsaturated fatty acids using thereof | |
| TWI865080B (en) | Novel strain of schizochytrium sp. strain and a method for producing oil containing omega-3 using the same |