RU2845060C1 - Нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к нацеленным на макрофаги конъюгатам лекарственных средств. Предложены нацеленный на макрофаг конъюгат лекарственного средства, представляющий собой соединение формулы 1D или соединение формулы I, где R₁, R₂, R₃ и R₄ определены в формуле изобретения, и содержащая его фармацевтическая композиция, которая применяется в лечении заболевания, связанного с повышенной активацией макрофагов, например, где заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание или воспалительное заболевание. 2 н. и 27 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл., 6 пр.

Description

ПЕРЕКРЁСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Заявлено преимущество предварительной заявки на патент США 63/063486, поданной 10 августа 2020 г; и предварительной заявки на патент США 63/158892, поданной 10 марта 2021 г; содержание которых полностью включено в настоящую заявку путем ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к новым фармацевтическим агентам, которые могут нацеливаться на активированные макрофаги, и способам лечения, включающим в себя использование указанных фармацевтических агентов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Макрофаги представляют собой лейкоциты, участвующие в функционировании иммунной системы. Макрофаги участвуют в защите организма от патогенов, заживлении ран и иммунной регуляции. Существует два основных фенотипа макрофагов: макрофаги М1, также известные как «классически активированные» макрофаги, и макрофаги М2. Макрофаги M1 обычно являются провоспалительными, тогда как макрофаги M2 обычно являются противовоспалительными. Различные агенты могут вызывать активацию макрофагов, например цитокины, такие как гамма-интерферон, и бактериальные эндотоксины, такие как липополисахарид.

Хотя макрофаги M1 полезны для защиты от патогенов, они также связаны с различными болезненными состояниями, в частности болезненными состояниями, при которых присутствует воспаление.

Таким образом, существует постоянная потребность в лекарственных средствах, которые могут воздействовать на макрофаги M1 и тем самым уменьшать воспаление и связанные с ним заболевания.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении описаны новые нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств. Нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств содержат компонент лекарственного средства, маннозный компонент и линкер, соединяющий лекарственное средство и маннозу. Линкер может содержать гидразоновую группу или оксимную группу.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, предполагается, что маннозный компонент может нацеливаться на макрофаги путем связывания с маннозным рецептором, специфично экспрессируемым на поверхности активированного макрофага, так что компонент лекарственного средства может избирательно воздействовать на активированные макрофаги. Из-за быстрой интернализации маннозного рецептора, нацеленный на макрофаги конъюгат лекарственного средства, который связывается с маннозным рецептором, может интернализоваться в активированный макрофаг. Линкер, который при необходимости является линкером, чувствительным к значению рН, может подвергаться гидролизу после интернализации активированным макрофагом. В случае гидразонового линкера гидролиз гидразоновой группы превращает ее в соответствующую карбонильную группу, позволяя лекарственному средству воздействовать на макрофаг.

Предполагается, что описанные здесь конъюгаты лекарственных средств можно вводить в более низких дозах, чем соответствующие им лекарственные средства, при введении без конъюгации с маннозным компонентом, благодаря их специфичности и их способности связываться с маннозным рецептором и нацеливаться на активированные макрофаги.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 представляет собой столбчатую диаграмму, показывающую результаты анализа уничтожения активированных макрофагов с использованием различных доз, описанных здесь конъюгатов в контакте с активированными макрофагами;

Фиг. 2 представляет собой серию микрофотографий, показывающих уничтожение активированного макрофага при контакте с описанным здесь конъюгатом;

Фиг. 3 представляет собой линейный график, показывающий повышение уровня глюкозы в крови у мышей, которым вводили дексаметазон (сплошная линия), по сравнению с мышами, которым вводили эквивалентные количества (пунктирная линия) или 25-кратное эквивалентное количество (точечная линия) описанного здесь конъюгата;

Фиг. 4 представляет собой линейный график, показывающий концентрацию нацеленного на макрофаги конъюгата лекарственного средства (Соединение I5, треугольники), и соответствующего неконъюгированного лекарственного средства (дексаметазон, кружки) в плазме крови мышей в зависимости от времени после введения; и

Фиг. 5 представляет собой линейный график, показывающий концентрацию нацеленного на макрофаги конъюгата лекарственного средства (Соединение I5, треугольники), и соответствующего неконъюгированного лекарственного средства (дексаметазон, кружки) в моче мышей в зависимости от времени после введения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

I. Терминология

Если не указано иное, то технические термины используются в соответствии с общепринятым употреблением. Определения общих терминов в молекулярной биологии можно найти в изданиях Benjamin Lewin, Genes V, опубликовано Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, опубликовано Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); и Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, опубликовано VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).

Если не пояснено иное, то все используемые здесь технические и научные термины имеют такое же значение, которое обычно понимается средним специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Термины в единственном числе включают в себя ссылки на множественное число, если контекст явно не указывает на иное. Аналогично, союз «или» включает в себя союз «и», если контекст явно не указывает на иное. Кроме того, следует понимать, что все размеры оснований или размеры аминокислот и все значения молекулярного веса или молекулярной массы, указанные для нуклеиновых кислот или полипептидов, являются приблизительными и приведены для описания. Хотя способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, что описаны здесь, могут быть использованы при практическом применении или тестировании настоящего изобретения, подходящие способы и материалы описаны ниже. Термин «содержит» означает «включает в себя». Аббревиатура «e.g.» происходит от латинского термина exempli gratia и используется для обозначения неограничивающего примера. Таким образом, аббревиатура «e.g.» является синонимом термина «например».

В случае конфликта настоящее описание, включая пояснения терминов, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, все материалы, способы и примеры являются иллюстративными и не предназначены для ограничения изобретения.

II. Обзор нескольких вариантов осуществления изобретения

В настоящем изобретении описаны нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственного средства (также называемые в настоящем изобретении «конъюгат» или «конъюгаты»), которые объединяют компонент, представленный лекарственным средством, и направляющий компонент, представленный маннозой, через линкер, где линкер содержит компонент, представленный гидразоном.

Соединение общей формулы [I] представляет собой вариант осуществления такого конъюгата.

[I]:

где R₁ представляет собой прямую связь между маннозным компонентом и карбонильным компонентом; или C1-C12 алкил с прямой или разветвленной цепью; и

R₂ представляет собой компонент лекарственного средства.

Лекарственное средство:

При необходимости компонент лекарственного средства представляет собой стероид. При необходимости лекарственное средство представляет собой глюкокортикоид или минералокортикоид.

Компонент лекарственного средства может содержать активную часть лекарственного средства. При необходимости атом лекарственного средства или часть лекарственного средства могут быть заменены для связывания компонента лекарственного средства с линкером. Например, атом углерода стероида может быть связан с атомом кислорода в случае лекарственного средства. При образовании конъюгата компонент лекарственного средства может содержать атом углерода, связанный с атомом азота, вместо атома кислорода. Атом углерода и атом азота затем образуют гидразоновый линкер. При необходимости компонент лекарственного средства имеет атом азота при атоме углерода в положении 3 или в положении 20 стероида. При необходимости конъюгат действует как пролекарство лекарственного средства, поскольку при введении в организм человека происходит реакция, при которой конъюгат метаболизируется с образованием лекарственного средства или его активного метаболита в организме человека.

При необходимости, стероид представляет собой кортикостероид. Кортикостероид предпочтительно представляет собой преднизолон или дексаметазон. Структуры этих кортикостероидов показаны ниже:

Показан преднизолон.

Показан дексаметазон.

Дополнительные кортикостероиды, которые можно использовать в конъюгатах, выбраны из группы, состоящей из бетаметазона, преднизолона, триамцинолона, гидрокортизона, флудрокортизона и метилпреднизолона.

Линкер:

Линкер может представлять собой ковалентную связь. Линкер может содержать карбонильный компонент. При необходимости, линкер может содержать гидразоновый компонент, оксимный компонент или иминный компонент. При необходимости, линкер может содержать тиоэфирную группу. При необходимости линкер содержит группу, которая подвергается гидролизу в кислых условиях, при необходимости при значении рН 5 или менее. Линкер может также содержать C1-C12 алкильную группу. Алкильная группа может быть прямой или разветвленной. Линкер может также содержать карбонильную группу, смежную с гидразоновым, оксимным или иминным компонентом.

Манноза:

Манноза представляет собой моносахарид, имеющий структуру C₆H₁₂O₆. Манноза подвергается быстрой изомеризации с образованием ряда форм, но в основном присутствует в виде α-D-маннопиранозы. В соответствии с вариантом осуществления изобретения манноза связана с линкером или лекарственным средством при экзоциклическом кислороде в положении C1 маннозного кольца.

Конъюгаты

Описанные здесь конъюгаты как правило имеют структуру: M-L-D, где M представляет собой фрагмент маннозный компонент, L представляет собой линкерный компонент, а D представляет собой компонент лекарственного средства.

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат представляет собой конъюгат дексаметазона, имеющий общую формулу 1D:

где R₁ представляет собой прямую связь между маннозным компонентом и карбонильным компонентом; или C1-C12 алкил с прямой или разветвленной цепью.

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат представляет собой конъюгат преднизона, имеющий общую формулу 1P:

где R₁ представляет собой прямую связь между маннозным компонентом и карбонильным компонентом; или C1-C12 алкил с прямой или разветвленной цепью.

В соответствии с вариантом осуществления изобретения соединение представляет собой конъюгат дексаметазона, обозначенный как MD:

В соответствии с вариантом осуществления изобретения соединение представляет собой конъюгат преднизона, обозначенный как MP:

В соответствии с вариантом осуществления изобретения соединение представляет собой конъюгат дексаметазона, обозначенный как MD4:

В соответствии с вариантом осуществления изобретения соединение представляет собой конъюгат дексаметазона, обозначенный как MD6:

В одном варианте осуществления изобретения конъюгат представляет собой конъюгат преднизона, обозначенный как MP.

Другие варианты осуществления нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств содержат один компонент лекарственного средства на конъюгат и несколько маннозных компонентов, присутствующих в каждом конъюгате. Каждый конъюгат может содержать от 2 до 10 маннозных компонентов на конъюгат. Предпочтительно каждый конъюгат содержит 2, 3 или 4 маннозных компонента на конъюгат.

При необходимости конъюгат представляет собой конъюгат дексаметазонимина, известный как I5 и имеющий структуру, указанную ниже:

Способы лечения:

Далее здесь описаны способы лечения заболеваний, включающие в себя введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества нацеленного на макрофаги конъюгата лекарственного средства. Кроме того, здесь описаны нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств и их фармацевтические композиции для лечения заболеваний.

Заболевания, которые можно лечить с использованием нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, представляют собой заболевания, которые связаны с макрофагами. При необходимости, макрофаг представляет собой макрофаг М1. При необходимости заболевание представляет собой инфекционное заболевание, аутоиммунное заболевание или воспалительное заболевание. Воспалительное заболевание может быть нейровоспалительным заболеванием, поскольку было показано, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств преодолевают гематоэнцефалический барьер.

При необходимости лекарственное средство может оказывать действие, превращающее макрофаги М1 в макрофаги М2. Особенно это касается аутоиммунных заболеваний.

При необходимости, заболевания, которые можно лечить с использованием нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, представляют собой заболевания, связанные с нацеливанием на макрофаг М2. Такое заболевание может представлять собой фиброзное заболевание или заболевание, связанное с опухолью.

При необходимости, подлежащее лечению аутоиммунное заболевание выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, аутоиммунной энтеропатии, псориаза, дерматита, алопеции, иммунодисрегуляции, полиэндокринопатии, энтеропатии, Х-сцепленного синдрома и аутоиммунных эндокринопатий.

При необходимости заболевание представляет собой неалкогольную жировую болезнь печени или неалкогольный стеатогепатит.

При необходимости заболевание представляет собой нейровоспалительное заболевание. При необходимости заболевание выбрано из группы, состоящей из рассеянного склероза, нейромиелита зрительного нерва, неврита зрительного нерва, болезни Альцгеймера и поперечного миелита.

Заболевания, которые можно лечить с помощью нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, могут включать в себя болезнь Паркинсона.

Заболевания, которые можно лечить с помощью конъюгатов нацеленных на макрофаги лекарственных средств, представляют собой нарушения липидного обмена. Нарушение липидного обмена при необходимости выбрано из группы, состоящей из болезни Гоше, болезни Ниманна-Пика, болезни Фабри, болезни Фарбера и болезни Тея-Сакса.

Заболевания, которые можно лечить с помощью нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, могут включать в себя астму.

Заболевания, которые можно лечить с помощью нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственых средств, могут включать в себя депрессию, наркоманию и опиоидную зависимость.

Заболевания, которые можно лечить с помощью нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, могут включать в себя сердечнососудистые заболевания, включая, но без ограничений, атеросклероз.

Дополнительные заболевания, которые можно лечить с помощью нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, могут включать в себя вирусные заболевания или протозойные заболевания. При необходимости, вирусное заболевание является результатом коронавирусной инфекции. При необходимости, заболевание представляет собой COVID-19. При необходимости заболевание представляет собой поствирусные синдромы, включая осложнения, возникающие в результате предшествующей инфекции MERS, SARS, COVID-19 (длительный COVID) и некоронавирусных патогенов, таких как Эбола. При необходимости заболевание представляет собой лейшманиоз. При необходимости заболевание представляет собой устойчивый к антибиотикам штамм стафилококка, стрептококка, E. coli или других инфекционных возбудителей.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, предполагается, что лечение вирусного заболевания, такого как коронавирус, связано с макрофагами, которые служат первой линией защиты в организме, в котором присутствует вирус. Вирус интернализируется макрофагом, и макрофаг начинает уничтожать вирус, координируя врожденный и адаптивный иммунный ответ для уничтожения вируса. Макрофаги высвобождают множество хемокинов и цитокинов наряду с экспрессией определенных рецепторов, включая CD 206. Организм, инфицированный вирусом, может быть относительно бессимптомным на этой ранней стадии вирусной инфекции. Затем вирус может взять под контроль макрофаг и использовать его для репликации вируса. На этой стадии макрофаг может быть атакован нацеленным на макрофаги конъюгатом лекарственного средства, содержащим активный ингредиент, такой как глюкокортикоид, чтобы обеспечить эффективную доставку глюкокортикоида к макрофагу, тем самым инициируя апоптоз в клетке, что приводит к инактивации вируса. При необходимости нацеленный на макрофаги конъюгат лекарственного средства можно вводить на более поздней стадии, как только у пациента проявляются симптомы, например, со стороны дыхательной системы, связанные с избыточной иммунной активностью. Иммунная активность может быть модулирована путем уничтожения макрофагов с помощью нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств.

Коронавирусы (CoV) являются членами отряда Nidovirales, который включает в себя оболочечные вирусы с большими положительными смысловыми (~30 т.п.н.) одноцепочечными РНК-геномами, которые дают характерное вложенное множество субгеномных мРНК во время репликации в цитоплазме инфицированных клеток. Организация генома коронавирусов высококонсервативна: 5'-две трети генома кодируют полипротеин репликазы, за которым следуют последовательности, кодирующие канонические структурные белки: шип, оболочку, мембрану и нуклеокапсид. Многие CoV содержат дополнительные гены, которые расположены среди генов структурных белков. Хотя эти дополнительные гены не обязательно необходимы для репликации вируса и, как правило, не очень консервативны в семействе вирусов, многие из них кодируют белки, которые регулируют реакцию хозяина. Интересно, что белки репликазы коронавируса, которые являются высококонсервативными, также могут действовать как антагонисты, блокируя или замедляя врожденный иммунный ответ хозяина на инфекцию. Тот факт, что множество кодируемых коронавирусом вспомогательных и не вспомогательных белков, как было показано, формирует противовирусный ответ хозяина, предполагает, что опосредованное вирусом нарушение защиты хозяина является важным элементом инфекции.

Имея дело с пандемиями, у тех специалистов, которые занимаются разработкой лекарственных средств, нет ни времени, ни возможности предсказать скорость изменения вируса или частоту появления новых вариантов. В случае с коронавирусом, людей поражают несколько вирусов, включая SARS, MERS и SARS-CoV-2. Вакцины против SARS и MERS, если они доступны, должны быть модифицированы для SARS-CoV-29, и после их разработки они могут принести или не принести пользу при возникновении следующего коронавируса или даже оставаться эффективными для вируса, который распространился так же широко, как SARS-CoV-2 и, таким образом, подвергся стольким мутациям.

Что является полезным в случае SARS-CoV-2 и будущих подобных вирусов, так это терапевтическое средство, которое в идеале можно дозировать до того, как у пациента возникнет необратимое повреждение, то есть до того, как возникнет массивная воспалительная реакция для борьбы с огромным количеством инфицированных вирусом клеток. Это терапевтическое средство должно быть нацелено на вирус вскоре после заражения, но до того, как может произойти значительная репликация. Терапевтическое средство должно контактировать с вирусом и быть эффективным против высококонсервативного защитного механизма вируса, а не механизма, уникального для какого-либо вирусного штамма. Мишень вирусной защиты должна быть высококонсервативной и, следовательно, не подверженной мутациям. Доза терапевтического средства должна быть безопасной и эффективной независимо от стадии инфекции. Другими словами, доза может быть одинаковой как для только что инфицированного пациента, так и для пациента с симптомами, поскольку у вируса была возможность значительно распространиться в течение нескольких дней или недель. При необходимости доза может быть ниже для бессимптомного пациента, чем для пациента с симптомами.

При необходимости описанные здесь нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств можно вводить субъекту на ранней стадии вирусной инфекции или на поздней стадии. На поздней стадии нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств могут ограничивать или предотвращать цитокиновый шторм, связанный с вирусной инфекцией. Цитокиновый шторм представляет собой системный воспалительный синдром, включающий в себя повышенный уровень циркулирующих цитокинов и гиперактивацию иммунных клеток, и может быть опасным для жизни. Преимущество такого противовирусного лечения состоит в том, что пациент приобретает иммунитет к вирусу после контакта с вирусом. При необходимости нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств можно вводить пациентам на ранней стадии выздоровления.

Острая гипергликемия считается фактором риска для пациентов в критическом состоянии и была идентифицирована для таких пациентов как независимый фактор риска таких неблагоприятных исходов, как тяжелые инфекции, полиорганная недостаточность и смерть. Также было обнаружено, что острая гипергликемия вызывает долговременное повреждение островковых клеток, секретирующих инсулин. Пациенты с диабетом II типа или метаболическим синдромом особенно восприимчивы к тяжелой форме COVID-19 после заражения. Острая гипергликемия затрудняет контроль уровня глюкозы у таких пациентов в условиях отделения интенсивной терапии.

Известно, что глюкокортикоиды значительно повышают уровень глюкозы в крови у пациентов. В исследовании RECOVERY, в котором пациентам с COVID вводили дексаметазон, уровень глюкозы в крови у диабетиков был значительно повышен (Rayman G, Lumb AN, Kennon B, Cottrell C, Nagi D, Page E, Voigt D, Courtney HC, Atkins H, Higgins K, Platts J, Dhatariya K, Patel M, Newland-Jones P, Narendran P, Kar P, Burr O, Thomas S, Stewart R. Dexamethasone therapy in COVID-19 patients: implications and guidance for the management of blood glucose in people with and without diabetes. Diabet Med. 2021 Jan;38(1):e14378. doi: 10.1111/dme.14378. Epub 2020 Sep 21). Хотя дексаметазон может оказывать благоприятное действие при COVID-19, необходимо соблюдать крайнюю осторожность при назначении его пациентам, у которых острая гипергликемия особенно проблематична, например, пациентам с диабетом и пациентам с метаболическим синдромом.

Неожиданно было обнаружено, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств, хотя и содержат глюкокортикоиды в качестве активного компонента, не связаны с гипергликемией.

Было высказано предположение, что глюкокортикоиды могут оказывать иммуносупрессивное действие. Это может быть вредным для таких пациентов, как пациенты с COVID-19, поскольку снижение ответа противовирусного интерферона может привести к снижению клиренса вируса. Нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств, по-видимому, не обладают иммуносупрессивной активностью, поскольку они не предотвращают активацию макрофагов и не блокируют активность цитокинов, которые, в дополнение к вирусу и связанным с повреждением молекулярным паттернам, вызывают активацию неинфицированных макрофагов и проявляют только противовоспалительную активность в результате их активации в макрофагах, экспрессирующих CD206.

Кроме того, предполагается, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств будут демонстрировать снижение активности M2, тем самым потенциально уменьшая фиброз легких у пациентов с COVID-19. Также предполагается, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств не снижают количество Т-клеток и В-клеток, хотя было показано, что сами по себе глюкокортикоиды токсичны для Т-клеток и В-клеток. Эти упомянутые выше эффекты нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств подтверждаются тем, что они вызывают разные уровни экспрессии цитокинов в сыворотке, ЖБАЛ и ЦНС по сравнению со свободными кортикостероидами, такими как дексаметазон.

При необходимости, нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств можно вводить отдельно или в комбинации. Примером комбинации для лечения вируса, такого как коронавирус, является противомалярийный препарат, такой как гидроксихлорохин. Другой типичной комбинацией для лечения вируса, такого как коронавирус, является азитромицин.

Нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств можно вводить различными путями. В соответствии с вариантом осуществления изобретения их вводят перорально, назофарингеально, подкожно, внутривенно, интратекально, интраокулярно, интраартикулярно, ингаляционно или местно.

В соответствии с вариантом осуществления изобретения нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств вводят в молярном количестве, которое меньше, чем количество соответствующего лекарственного средства. Например, нацеленный на макрофаги конъюгат лекарственного средства, содержащий дексаметазон в качестве лекарственного компонента, можно вводить в молярном количестве от 0,001% до 50% относительно молярного количества, указанного для применения по данному показанию.

В соответствии с вариантом осуществления изобретения нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств вводят в молярном количестве, превышающем количество соответствующего лекарственного средства. Например, нацеленное на макрофаги лекарственное средство можно вводить в молярном количестве от 150% до 1000% по отношению к молярному количеству, указанному для применения по данным показаниям. Не ограничиваясь какой-либо теорией, этот тип введения возможен из-за более низкой токсичности описанных здесь нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, благодаря селективности конъюгатов и пониманию того, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств активны внутри микрофагов и не активны (или менее активны) при контакте с другими клетками/тканями.

Дополнительные варианты осуществления изобретения относятся к фармацевтическим композициям, содержащим нацеленный на макрофаги конъюгат лекарственного средства. В соответствии с вариантом осуществления изобретения нацеленный на макрофаги конъюгат лекарственного средства объединяют, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом с образованием фармацевтической композиции. В одном варианте осуществления изобретения фармацевтическая композиция адаптирована для применения человеком или животным посредством перорального, назофарингеального, подкожного, внутривенного, интратекального, интраокулярного, интраартикулярного, ингаляционного или местного введения.

Фармацевтические композиции в соответствии с вариантом осуществления изобретения для удобства могут находиться в виде стандартных лекарственных форм, и быть приготовлены любым из способов, хорошо известных в области фармацевтики. В одном варианте осуществления изобретения стандартная лекарственная форма находится в виде таблетки, капсулы, пастилки, облатки, пластыря, ампулы, флакона или предварительно наполненного шприца.

Фармацевтические композиции, как правило, вводят в форме фармацевтической композиции, содержащей, по меньшей мере, один активный компонент вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем.

Для перорального введения фармацевтическая композиция может иметь форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков и тому подобного. Таблетки, содержащие различные вспомогательные вещества, такие как цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция, используются вместе с различными разрыхлителями, такими как крахмал и предпочтительно картофельный или тапиоковый крахмал и некоторые сложные силикаты, вместе со связующими агентами, такими как поливинилпирролидон, сахароза, желатин и аравийская камедь. Кроме того, смазывающие агенты, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк, часто очень полезны для целей таблетирования. Твердые композиции аналогичного типа также используются в качестве наполнителей мягких и твердых желатиновых капсул; предпочтительные материалы в этой связи также включают в себя лактозу или молочный сахар, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Когда для перорального введения желательны водные суспензии и/или настои, активные агенты можно комбинировать с различными подсластителями, ароматизаторами, красителями, эмульгаторами и/или суспендирующими агентами, а также с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и их различные комбинации.

Композиции в соответствии с вариантами осуществления изобретения можно также вводить в составе композиции с контролируемым высвобождением, например, композиции с замедленным высвобождением или композиции с быстрым высвобождением. Такая дозированная композиция с контролируемым высвобождением может быть получена с помощью способов, хорошо известных специалистам в данной области техники.

Для парентерального введения можно использовать растворы в кунжутном или арахисовом масле или в водном растворе пропиленгликоля, а также стерильные водные растворы соответствующих водорастворимых солей. Такие водные растворы могут быть соответствующим образом забуферены, если это необходимо, и жидкий разбавитель сначала должен быть изотонизирован достаточным количеством физиологического раствора или глюкозы. Эти водные растворы особенно подходят для внутривенных, внутримышечных, подкожных и внутрибрюшинных инъекций.

Фармацевтические композиции согласно вариантам осуществления изобретения могут содержать активный агент в количестве от 0,1% до 95%, предпочтительно от 1% до 70%. В варианте осуществления изобретения суточная доза активного агента составляет от 0,001 мг до 3000 мг.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, предполагается, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств имеют преимущества по сравнению с соответствующими лекарственными средствами, благодаря селективности нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств. Хотя их можно вводить системно, предполагается, что нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств в первую очередь будут высвобождать компонент активного лекарственного средства вблизи, предпочтительно, внутри активированного макрофага. Такое направленное введение ограничивает «нецелевую» токсичность, повышает безопасность и позволяет проводить селективное лечение заболеваний, связанных с активированными макрофагами.

В публикации заявки на патент США 2018/0099048 раскрыты конъюгаты лекарственных средств на основе декстрана. Преимуществом описанных здесь нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств по сравнению с конъюгатами на основе декстрана является ряд причин. Ранее описанные соединения на основе декстрана основаны на декстрановой цепи массой 10000 дальтон. Исходный декстран, доступный и продаваемый как декстран Фармакопеи США, никогда не имеет молекулярную массу точно равную 10000 дальтон, и имеет широкий диапазон масс со средней молекулярной массой 10000 дальтон. После конъюгации лекарственного средства конъюгат имеет молекулярную массу около 20000 дальтон и является высоко гетерогенным. Он имеет приблизительное количество компонентов связывания d-маннозы (15-20) и приблизительное количество свободных линкерных сайтов (частично в зависимости от количества уже связанных d-манноз). При разработке терапевтического средства к каждой молекуле остова будет присоединено приблизительное количество терапевтических молекул. Когда такая платформа используется для визуализирующего агента, который обычно вводят однократно и в очень низкой дозе в микрограммах на одно введение, вариабельность приемлема с учетом безопасности. Однако для терапевтических средств, дозируемых на уровне миллиграммов, вариабельность, стабильность и различные метаболиты сделали бы терапевтические средства на основе декстрана практически чрезвычайно трудным для характеристики и воспроизводимого производства в соответствии со стандартами Надлежащей производственной практики.

Продукты на основе декстрана с большой молекулярной массой, вероятно, обладают иммуногенными свойствами из-за их размера, что делает проблематичным повторное введение дозы, а тестирование токсичности на животных в меньшей степени предсказывает токсичность для человека.

Описанные здесь конъюгаты лекарственных средств представляют собой простые органические молекулы со стандартными свойствами фармацевтического производства, имеющие молекулярную массу примерно 600 дальтон. Поскольку нет полимерной основы, эти соединения могут быть получены с высокой степенью чистоты, что упрощает процедуры их утверждения регулирующими органами. Такие чистые соединения намного легче квалифицировать, поэтому их разработка происходит быстрее и дешевле. Описанные здесь конъюгаты лекарственных средств легче приготовить, и они обладают большей системной биодоступностью.

Макромолекулы значительно хуже преодолевают биологические барьеры по сравнению с малыми молекулами. Описанные здесь агенты преодолевают гематоэнцефалический барьер, тогда как полимеры с массой 20 кД, вероятно, преодолевают его с на несколько порядков меньшей эффективностью. Кроме того, макромолекулы имеют более низкое проникновение внутрь опухоли, чем малые молекулы.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединению, имеющему формулу M-L-D, где M представляет собой маннозный компонент, L представляет собой линкерный компонент и D представляет собой компонент лекарственного средства, где компонент лекарственного средства представляет собой кортикостероид. При необходимости, линкер содержит гидразоновый компонент, оксимный компонент, иминный компонент и тиоэфирный компонент. При необходимости L дополнительно содержит карбонильную группу. При необходимости карбонильная группа связана с гидразоновым компонентом. При необходимости L представляет собой линкер, содержащий оксимный компонент. При необходимости L дополнительно содержит C1-C12 алкильную группу. При необходимости C1-C12 алкильная группа связана с карбонильной группой. При необходимости алкильная группа представляет собой C1-C6 алкильную группу. При необходимости стероид выбран из группы, состоящей из преднизона, дексаметазона, бетаметазона, преднизолона, триамцинолона, гидрокортизона, флудрокортизона и метилпреднизолона. При необходимости препарат представляет собой преднизолон или дексаметазон. При необходимости соединение имеет молекулярную массу менее 800 дальтон.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы:

где R₁ представляет собой прямую связь; или C1-C12 алкил с прямой или разветвленной цепью; R₂ представляет собой водород или фтор; R₃ представляет собой водород или метильную группу. R₄ представляет собой гидроксильную группу или кетонную группу. При необходимости R₁ представляет собой прямую связь. При необходимости R₁ представляет собой группу CH₂. При необходимости R₁ представляет собой (метил)этильную группу. При необходимости R₁ представляет собой пентильную группу. При необходимости R₂ и R₃ представляют собой H и R₄ представляет собой кетонную группу. При необходимости R₂ представляет собой фтор, R₃ представляет собой метил и R₄ представляет собой гидроксильную группу.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы:

где R₁ представляет собой прямую связь; или C1-C12 алкил с прямой или разветвленной цепью; R₂ представляет собой водород или фтор; R₃ представляет собой водород или метильную группу и R₄ представляет собой гидроксильную группу или кетонную группу. При необходимости R1 представляет собой группу (CH₂)₃. При необходимости R₂ и R₃ представляют собой H и R₄ представляет собой кетонную группу. При необходимости R₂ представляет собой фтор, R₃ представляет собой метил и R₄ представляет собой гидроксильную группу.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, описанное в одном из вышеупомянутых вариантов осуществления изобретения.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, включающему в себя введение нуждающемуся в этом пациенту соединения, описанного в одном из вышеупомянутых вариантов осуществления. Необязательно заболевание связано с повышенной активацией макрофагов. Необязательно заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание или воспалительное заболевание. Необязательно заболевание выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, аутоиммунной энтеропатии, псориаза, дерматита, алопеции, иммунодисрегуляции, полиэндокринопатии, энтеропатии, Х-сцепленного синдрома и аутоиммунной эндокринопатии. Необязательно заболевание представляет собой неалкогольную жировую болезнь печени или неалкогольный стеатогепатит. Необязательно заболевание представляет собой нейровоспалительное заболевание. Необязательно нейровоспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из рассеянного склероза, нейромиелита зрительного нерва, неврита зрительного нерва, болезни Альцгеймера и поперечного миелита. Необязательно заболевание представляет собой болезнь Паркинсона. Необязательно заболевание представляет собой нарушение липидного обмена. Необязательно заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Гоше, болезни Ниманна-Пика, болезни Фабри, болезни Фарбера и болезни Тея-Сакса. Необязательно заболевание представляет собой астму. Необязательно заболевание выбрано из группы, состоящей из депрессии, наркомании и опиоидной зависимости. Необязательно заболевание выбрано из группы, состоящей из атеросклероза и сердечнососудистых заболеваний. Необязательно заболевание представляет собой патоген, включая вирусное заболевание, бактериальное заболевание или протозойное заболевание. Необязательно заболевание является следствием коронавирусной инфекции. Необязательно заболевание представляет собой COVID-19. Необязательно у пациента отсутствуют симптомы COVID-19. Необязательно заболевание представляет собой лейшманиоз. Необязательно пациент страдает синдромом высвобождения цитокинов. Необязательно пациент также страдает от заболевания, связанного с нарушением обмена веществ, связанным с метаболизмом глюкозы. Необязательно метаболическим нарушением является диабет или метаболический синдром. Необязательно заболевание представляет собой заболевание головного мозга, необязательно неврологическое заболевание. Необязательно заболевание представляет собой рак головного мозга, необязательно глиобластому.

В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания путем селективной доставки кортикостероида в иммунную клетку. Необязательно, иммунная клетка представляет собой макрофаг. Необязательно, способ включает в себя введение описанного выше соединения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1А: Получение соединений согласно формуле (I)

Соединения в соответствии с формулой (I), содержащие маннозный компонент, линкер, содержащий карбонильную группу, и гидразоновый компонент, связанный с компонентом лекарственного средства, которое представляет собой кортикостероид, могут быть получены в соответствии со следующей общей процедурой:

Раствор 1,2,3,4,6-пента-O-ацетил-D-маннопиранозы (6 г, 15,37 ммоль) и 3-гидроксимасляной кислоты (2,24 г, 21,5 ммоль, 1,4 экв.) в ДХМ (120 мл) при температуре 5°C по каплям добавляли к BF₃·Et₂O (диэтилэфират трифторида бора, 9,5 мл, 77 ммоль, 5 экв.). Смесь перемешивали при температуре 5°С в течение 24 часов. Добавляли еще кислоты (0,2 экв.) с последующим добавлением по каплям BF₃.Et₂O (4,75 мл). Смесь перемешивали при температуре 5°С еще 6 часов. Смесь гасили насыщенным NaHCO₃ (100 мл). Разделяли два слоя, и органический слой экстрагировали насыщенным NaHCO3 (3x100 мл). Объединенные водные слои подкисляли 6 н. раствором HCl и экстрагировали ДХМ (3×100 мл). Объединенные экстракты сушили и концентрировали, получая неочищенный продукт.

Раствор исходного кетона (10 г, 25,51 ммоль) в EtOH (600 мл) добавляли к моногидрату гидразина (2,55 г, 2 экв.). Реакционную смесь нагревали при температуре 50°С в течение 2 дней. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали до объёма ~100 мл. Остаток выливали в H₂O (500 мл) и наблюдали осаждение продукта. Смесь фильтровали и твердое вещество промывали H₂O. Собранное твердое вещество сушили в вакууме с получением продукта, который использовали на следующем этапе.

Смесь вышеуказанного неочищенного продукта (2,95 г, 6,79 ммоль) и гидразона (3,17 г, 7,8 ммоль, 1,15 экв.) и HATU (3,37 г, 8,87 ммоль, 1,3 экв.) в ТГФ (40 мл) добавляли к N,N- диизопропилэтиламину (iPr2NEt) (2,47 мл, 14,16 ммоль, 2 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Смесь разбавляли ДХМ (150 мл) и последовательно промывали 1 н. HCl (50 мл), H₂O (50 мл) и насыщенным NaHCO₃ (50 мл). Органический слой сушили (Na₂SO₄) и концентрировали. Остаток очищали при помощи колоночной хроматографии с получением неочищенного продукта.

Неочищенный продукт предыдущего этапа растворяли в 50 мл смеси MeOH/Et3N/H₂O. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. ЖХ-МС. Смесь концентрировали досуха и остаток очищали при помощи колоночной хроматографии с последующей колоночной хроматографией с обращенной фазой с получением продукта.

Предшественник соединений кислоты и гидразона получали из 1,2,3,4,6-пента-O-ацетил-D-маннопиранозы и соответствующей кислоты с гидразином с получением разработанных соединений на основе той же процедуры, что и для соединения, описанного выше.

Пример 1B: Получение соединения I5

Конъюгат, содержащий дексаметазон, линкер и маннозный компонент, получали с использованием следующей процедуры. Другие конъюгаты, содержащие альтернативные линкеры и лекарственные средства, могут быть получены с использованием того же процесса, описанного в этом примере, с соответствующими модификациями для альтернативного лекарственного средства и линкера.

Этап 1: (2R,3R,4S,5S,6S)-2-(ацетоксиметил)-6-(3-бромпропокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетат (соединение R1)

1,2,3,4,6-пента-O-ацетила-D-маннопиранозид (8 г, 20,5 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (80 мл) и добавляли 3-бромпропан-1-ол (3,13 г, 22,5 ммоль) с последующим добавлением эфирата трехфтористого бора (10,1 мл, 82,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в темноте в атмосфере азота в течение 24 часов. Проводили анализ ТСХ (гексан:EtOAc=1:1). В результате было обнаружено новое пятно. Добавляли ДХМ и реакционную смесь нейтрализовали добавлением насыщенного раствора NaHCO₃. Фазы разделяли, водную фазу промывали ДХМ. Объединенную органическую фазу сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией (градиент от 3:1 до 1:1 - гексан:EtOAc), продукт выделяли в виде бесцветного масла с выходом 64%.

Этап 2: (2R,3R,4S,5S,6S)-2-(ацетоксиметил)-6-(3-((1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)окси)пропокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетат (соединение R2)

К раствору соединения R1 (3,5 г, 7,5 ммоль) и N-гидроксилфталимида (1,35 г, 8,25 ммоль) в ДМФА (15 мл), добавляли DBU (1,1 мл, 8,25 ммоль) и красный раствор перемешивали в течение 18 часов при комнатной температуре в атмосфере азота. Реакцию контролировали с помощью ТСХ (гексан/EtOAc=1/1) и ЖХ-МС (SB1090) до полного расхода исходного материала. Желто-оранжевый раствор по каплям добавляли к раствору 1 н. HCl (50 мл). Отделяли белое твердое вещество, которое растворяли в EtOAC. Водную фазу экстрагировали EtOAc, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (градиент 0-50% EtOAc в гексане). Получали 3 г (выход 73%) белого твёрдого вещества.

Этап 3: (2R,3R,4S,5S,6S)-2-(ацетоксиметил)-6-(3-(аминоокси)пропокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетат (соединение R3)

Соединение R2 (3,04 г, 5,51 ммоль) растворяли в метаноле (100 мл) в течение 30 мин из-за трудного растворения и добавляли 1,5 экв. гидразингидрата (0,401 мл, 8,27 ммоль). Перемешивание продолжали в течение 4 часов, ход реакции контролировали при помощи ТСХ (EtOAc) и ЖХ-МС (SB1090). Растворитель удаляли выпариванием, осаждалось белое твердое вещество (побочный продукт). Неочищенный продукт промывали EtOAc, суспензию фильтровали, маточный раствор упаривали. Эту промывку EtOAc повторяли 4 раза с последующей дополнительной промывкой CHCl₃. Маточный раствор упаривали досуха. Получали 1,85 г (выход 80%) бесцветного масла. Структуру полученного вещества подтверждали анализами ЯМР и ЖХ-МС (SB1090).

Этап 4: (2R,3R,4S,5S,6S)-2-(ацетоксиметил)-6-(3-(((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R,E)-9-фтор-11,17-дигидрокси-17-(2-гидроксиацетил)-10,13,16-триметил-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-3H-циклопента[a]фенантрен-3-илиден)амино)пропокси)тетрагидро-2H-пиран-3,4,5-триилтриацетат (соединение R4)

Предварительно полученный оксим R3 (1,8 г, 4,27 ммоль) добавляли в раствор дексаметазона (1,11 г, 2,85 ммоль) в EtOH (25 мл), а затем ПТСК (0,27 г, 1,42 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 часов при контроле реакции с помощью ЖХ-МС (SB1090). Через 1 час была обнаружена конверсия на уровне 95%. Продукты моно/ди-снятия защиты ацетатных групп также наблюдали с помощью ЖХ-МС. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли NaHCO₃ (1 г), суспензию перемешивали в течение 5 минут и фильтровали. EtOH выпаривали досуха. Очистка колоночной хроматографией (градиент от 50% до 100% EtOAc в гексане) давала смесь продукта и побочного продукта с частично снятой защитой. Выход: 1,66 гр. Эту смесь использовали на следующем этапе.

Этап 5: 1-((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R,E)-9-фтор-11,17-дигидрокси-10,13,16-триметил-3-((3-(((2S,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2H-пиран-2-ил)окси)пропокси)имино)-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-3H-циклопента[a]фенантрен-17-ил)-2-гидроксиэтан-1-он (соединение I5)

Соединение R4 (1,66 г) растворяли в 60 мл смеси MeOH/Et₃N/H₂O (8:1:1). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре и контролировали с помощью ЖХ-МС (SB1090). После 4 часов перемешивания наблюдали только желаемый продукт (m/z 628). Растворитель выпаривали и продукт (1,33 г неочищенного продукта) очищали хроматографией на силикагеле, элюировали смесью ДХМ/МеОН=85/15 и контролировали с помощью ТСХ (ДХМ/МеОН=80/20). Было выделено 0,7 г белого твёрдого вещества, которое было охарактеризовано с помощью ЯМР и ЖХ-МС (SB1090), которые подтвердили его структуру.

Пример 2А: Связывание конъюгатов с иммобилизованными CD206-презентирующими клетками

Материалы, используемые в этом примере, являются коммерчески доступными. Если не указано иное, то способы соответствуют стандартным процедурам. Анализ ChIP (иммунопреципитация хроматина) (BiacoreT200) использовали для исследования взаимодействия различных малых молекул с иммобилизованным белком CD206 (CM5 с 5000 резонансных единиц (РЕ) CD206, иммобилизованного на Fc2).

Иммобилизация: Белки CD206 иммобилизовали в виде раствора 50 мкг/мл в 10 мМ ацетате натрия с рН 4,5 с использованием стандартной химии иммобилизации по аминогруппе (активация EDS/NHS). Проанализированные соединения представлены в таблице.

Условия пропускания и буфер для образцов: условия анализа: HBS-P, 0,5 мМ, CaCl₂, с pH 8,0 (10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, pH 7,4 с 0,005% Tween 20) при температуре 25°C.

Буфер для регенерации: 30-секундные введения 0,1% SDS и 10 мМ NaOH.

Схема подачи и введения: 50 мкл/мин, 3-минутное введение, 2-4-минутная диссоциация. Для анализа использовался метод двойного сравнения.

Подготовка образцов: Образцы готовили в виде серии двукратных разведений с начальной концентрацией 700 нМ в рабочем буфере (43,8, 87,5, 175, 350, 700 нМ).

Результаты

Полученные результаты обобщены в приведенной ниже Таблице 1.

Материал	Молярная масса	Чистота %	мг	мл	KD (мМ) Эксп. 1	KD (мМ) Эксп. 2
MP	592,2	95	0,91	0,505107	1,16	0,92
MD4	654,2	90	0,97	0,53841	0,24
MD6	682	98	5,36	2,975133	3,67
MD	626,1	90	0,98	0,543961	1,13
I5	627,3	98	1,59	0,882549		1,09

Заключение

Весь анализ стационарного состояния был выполнен путем проведения измерений на максимуме связывания. Для некоторых соединений наблюдалось снижение сигнала при длительном введении, что, скорее всего, было вызвано влиянием примесей или остаточных растворителей в образцах. Наиболее выраженный эффект был обнаружен для соединения MD. Эти результаты показывают, что описанные здесь соединения могут быть многообещающими новыми терапевтическими средствами для лечения заболеваний, опосредованных активированными макрофагами, экспрессирующими маннозный рецептор (CD206).

Пример 2B: Анализ макрофагов

Анализ уничтожения макрофагов проводили, чтобы определить потенциал описанных здесь конъюгатов, для лечения заболеваний, связанных с макрофагами. Моноциты THP1 трансформировали в макрофаги для использования форболмиристатацетат (ФМА). Макрофаги после активации инфицированием Leishmania инкубировали с описанными здесь конъюгатами при концентрации соединения 10, 1 и 0,1 микрограмм (мкг) на миллилитр (мл). Воздействие тестируемых соединений на уничтожение активированных (инфицированных) макрофагов сравнивали с действием тестируемых соединений на уничтожение неинфицированных и инактивированных макрофагов. Данные, показанные на Фигуре. 1, представляют процент выживаемости макрофагов после 12-14 часов инкубации с конъюгатами. Используемые здесь конъюгаты представляли собой MD6, MD4, MD и I5. Звездочки MD* и I5* обозначают соединения, имеющие различные уровни оптической чистоты по сравнению с их аналогами. На этой фигуре серия 1 представляет собой контрольные макрофаги, которые не были заражены. Серии 2, 3 и 4 представляют собой дозы 0,1, 1 и 10 мкг/мл. Значения, показанные в этих сериях, представляют собой количество клеток, нормализованное по отношению к контрольным неинфицированным макрофагам.

На фиг. 2 показан другой эксперимент, в котором один тестируемый конъюгат, I5, добавляли к активированным (верхний ряд) или неинфицированным (нижний ряд) макрофагам и осуществляли мониторинг путем визуализации живых клеток при инкубации с I5 в концентрации 10 мкг/мл. Визуализация визуализации живых клеток при помощи программы для измерений и морфометрии Olympus cellSens, выполненная с соединением I5 в концентрации 10 мкг/мл, показала уничтожение активированных макрофагов в течение 8 часов.

Среда, используемая для анализа макрофагов: RPMI с 10% FCS, дополненная пенициллином, стрептомицином и глутамином. Соединения готовили в фосфатно-солевом буфере со значением рН, доведенным до 7,6, и использовали сразу после приготовления.

Заражение макрофагов: Макрофаги 5 раз инфицировали Leishmania donovani при плотности 1x10⁵ моноцитов, трансформированных в макрофаги, плотность инфекции составляла 5x10⁵ L. donovani.

Эксперимент проводили по следующему плану:

Трансформация моноцитов в макрофаги: с 0 до 48 часов

Заражение макрофагов Leishmania: с 48 до 84 часов

Обработка соединением: с 84 до 96 часов

Планшет, используемый для анализа, представлял собой подходящий для микроскопии 24-луночный планшет со стеклянным дном.

Живые макрофаги подсчитывали в пяти разных полях лунок для разных концентраций, и для анализа использовали среднее количество. Основываясь на подсчете контрольных макрофагов, корректировали %.

Результаты: На фиг. 1 показано, что тестируемые соединения снижают выживаемость активированных макрофагов дозозависимым образом. По мере увеличения дозы выживаемость макрофагов снижается для всех протестированных соединений. Конъюгаты I5 и MD4 оказались особенно эффективными. На фиг. 2 показано, что активированные макрофаги с дендритами в 0 часов, показанные в верхнем ряду, элиминировались в течение 8 часов после контакта с конъюгатом I5. Напротив, макрофаги, которые не были активированы инфекцией (нижний ряд), оставались неизменными в присутствии той же концентрации I5. Эти результаты указывают на способность описанных здесь конъюгатов лечить заболевания, связанные с активированными макрофагами, такие как воспалительные заболевания.

Пример 3: Исследование на мышах с мутацией Scurfy.

Мышь с мутацией Scurfy представляет собой встречающуюся в природе мышиную модель редкого и смертельного заболевания человека Х-сцепленного синдрома иммунной дисрегуляции, полиэндокринопатии и энтеропатии (IPEX). Это сцепленное с Х-хромосомой заболевание, которое приводит к функциональному дефекту регуляторных Т-клеток (Tregs), что приводит к летальному мультиорганному воспалению. Известного лекарства от этого заболевания не существует, хотя трансплантация гемопоэтических стволовых клеток была умеренно эффективной у людей и у мышиной модели с мутацией Scurfy. Было проведено исследование, чтобы определить, могут ли нацеленные на макрофаги конъюгаты лекарственных средств, содержащие кортикостероид, особенно дексаметазон, модулировать гиперактивный аутоиммунный фенотип и уменьшать воспаление и/или повреждение органов в достаточной степени, чтобы продлить жизнь у мышей. При применении у людей конъюгаты могут уменьшать воспаление, делая трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток менее опасной и более эффективной в долгосрочной перспективе. Кроме того, было проведено исследование, чтобы определить, могут ли нацеленные на макрофаги конъюгаты стероидов демонстрировать терапевтические эффекты, сравнимые с неконъюгированными стероидами, при ограничении побочных эффектов.

Глюкокортикоидная терапия в настоящее время играет ключевую роль при многих воспалительных заболеваниях и по-прежнему представляет собой наиболее часто используемое противовоспалительное средство во всем мире. Применение глюкокортикоидной терапии ограничено из-за связанных с ней значительных побочных эффектов. Эти побочные эффекты связаны с тем, что почти все клетки организма имеют глюкокортикоидные рецепторы. При противовоспалительном применении эффективная доза имеет многочисленные нецелевые эффекты, которые ограничивают дозу и продолжительность использования глюкокортикоидов. Желаемый противовоспалительный эффект требует системного уровня в крови, достаточного для прохождения глюкокортикоидов через клеточную мембрану в воспалительных клетках, чтобы глюкокортикоид мог связываться с глюкокортикоидным рецептором (GR) и создавать комплекс, который вызывает геномный сдвиг в макрофаге, превращая его из провоспалительного фенотипа (М1) в противовоспалительный фенотип (М2). Ненацеленые глюкокортикоиды в тех же концентрациях вызывают многочисленные геномные и негеномные эффекты в большинстве клеток организма, что приводит к неприемлемой токсичности.

Самцов мышей Scurfy распределяли по группам по 11-13 мышей в группе. Мышей изучали с 3-го дня до достижения максимальной выживаемости. Мышей оценивали по времени выживания. Средняя продолжительность жизни не получающих лечения мышей Scurfy составляет 20 ± 2 дня.

По прибытии самок мышей линии B6 помещали в клетку (2 самки на одного самца) с самцами мышей линии DBA1. Пометы генотипировали, чтобы определить самок-носителей, используемых для будущего разведения, и положительных самцов, которых затем изучали, вводя им терапевтический тестируемый агент. Первый помет был генотипирован, но не получал лечения, и за животными наблюдали для установления контрольных значений. Самцам следующих пометов ежедневно, начиная с 3-го дня, подкожно вводили 1 мг тестируемого агента и ежедневно наблюдали, чтобы определить, улучшает ли тестируемый агент качество жизни, фенотип и продолжительность жизни по сравнению с не получавшими лечения контролями.

Результаты показывают, что продолжительность жизни мышей Scurfy можно увеличить с помощью описанных здесь конъюгатов, а также уменьшить симптомы, связанные с IPEX.

Пример 4: Влияние нацеленного на макрофаги конъюгата лекарственного средства на уровень глюкозы в крови.

Мышей линии CC57BL/6 в возрасте приблизительно 9 недель взвешивали и акклиматизировали к условиям помещения. Животных распределяли по 3 группам лечения в зависимости от их массы тела, создавая однородные группы по 5 мышей в каждой группе. После голодания уровни глюкозы в крови мышей измеряли в момент времени 0, когда вводили тестируемое лекарственное средство, а затем последовательно через 30, 60, 90 и 120 минут после введения с использованием тест-полосок для определения уровня глюкозы в крови. Тестируемое лекарственное средство, вводимое животным каждой группы, представляло собой 65 микрограмм (мкг) дексаметазона на мышь в группе 1; соединение I5 в количестве 100 мкг на мышь в группе 2; и соединение I5 в количестве 2500 мкг на мышь в группе 3.

Результаты усредняли, а изменения по сравнению с исходным уровнем представлены в виде графика и показаны на фиг. 3. Как можно видеть, дексаметазон, введенный в дозе 65 мг (сплошная линия), повышает уровень сахара в крови у мышей до уровня примерно 15%, по меньшей мере, в интервале времени от 30 минут до 120 минут после введения.

Когда мышам вводили 100 мкг соединения I5 (пунктирная линия), уровень глюкозы в крови не повышается выше исходного уровня в течение периода времени от 30 минут до 120 минут после введения. Эта доза, которая соответствует молярному эквиваленту 65 мкг неконъюгированного дексаметазона, неожиданно не вызывала повышения уровня глюкозы в крови. Когда мышам вводили по 2500 мкг каждого соединения I5 (точечная линия), что представляет собой 25-кратную дозу молярного эквивалента 65 мкг неконъюгированного дексаметазона, неожиданно не наблюдалось повышения уровня глюкозы в крови по сравнению с исходным уровнем.

Эти данные указывают на потенциал нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств, включая без ограничений I5, при лечении воспаления без повышения уровня глюкозы в крови, как это наблюдается с неконъюгированными глюкокортикоидами, такими как дексаметазон. Существует потенциал для применения таких нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств для лечения воспалительного заболевания у пациентов, особенно чувствительных к повышению уровня глюкозы в крови, таких как пациенты с диабетом или пациенты с метаболическим синдромом.

Пример 5: Липополисахаридная (ЛПС) модель нейровоспаления

ЛПС представляет собой иммуностимулирующий компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий, который был идентифицирован как лиганд Toll-подобного рецептора 4 (TLR-4). TLR-4 экспрессируется на микроглии в центральной нервной системе, которая после активации продуцирует провоспалительные цитокины, ключевые медиаторы нейровоспалительного процесса, включая ФНО-α, IL-1β и простагландин E2. Введение ЛПС животным вызывает у них депрессивноподобные синдромы и может быть связано с нейровоспалительными заболеваниями.

120 мышей (самки линии C57BL/6) в возрасте приблизительно 6 недель распределяли по группам на основе массы тела, создавая однородные группы, и акклиматизировали к условиям помещения в течение 5 дней.

Нейровоспалительную реакцию индуцировали у всех мышей внутрибрюшинным введением 5 мг/кг ЛПС. Тестируемые образцы вводили подкожно трем группам следующим образом: Группа 1: Соединение I5 в количестве 100 мкг на мышь. Группа 2: дексаметазон в дозе 65 мг на мышь. Группа 3: контрольный носитель. Тестовые образцы вводили в следующие моменты времени: за 30 минут до инъекции ЛПС, через 2 часа после инъекции ЛПС и через 10 часов после инъекции ЛПС (где применимо). По 10 животных из каждой группы умерщвляли в следующие моменты времени: 4, 8, 24 и 48 часов после введения ЛПС. Головной мозг забирали и сохраняли в забуференном 4% формальдегиде. Жидкость бронхоальвеолярного лаважа извлекали из легких всех животных.

Образцы анализировали на: ИФН-гамма, IL-1b, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, MIP-1a, VEGF-A, ФНОa, Г-КСФ, эотаксин, ГМ-КСФ, IL-1а, IL-3, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12, IL-13, LIX, IL-15, IL-17, IP-10, КС, МСР-1, М-КСФ , MIP-2, MIG и RANTES.

Результаты были следующими:

Клиническая балльная оценка - Внешний вид - изменения внешнего вида мышей наблюдали через 24 часа после индукции ЛПС - лучшие баллы клинической оценки были в группе 1. Реакция на раздражитель - изменения в реакции мышей наблюдали через 24 часа после индукции ЛПС - лучшие баллы клинической оценки были в группе 1. Состояние глаз - изменения состояния глаз мышей наблюдали через 24 часа после индукции ЛПС - лучшие баллы клинической оценки были в группе 1. Дыхание - изменения дыхания наблюдали через 24 часа после индукции ЛПС - лучшие баллы клинической оценки были группе PIF-GC. Общий клинический балл - группа 1 имела лучший клинический балл по сравнению с группами 2 и 3.

Уровни цитокинов в головном мозге - статистический анализ показал, что лечение в группе 1 имело иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый в отношении IL-2 (через 4 и 8 часов после введения ЛПС), IL-10 (через 8 часов после введения ЛПС), VEGF (через 8 и 24 часа после введения ЛПС) по сравнению с группами 2 и 3.

Уровни цитокинов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа -статистический анализ показал, что лечение в группе 1 имело иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый в отношении IL-1a и MCP1 (через 4 часа после введения ЛПС), MCP1 (через 8 часов после введения ЛПС). Однако, через 24 часа после индукции ЛПС у животных группы 2 наблюдался более выраженный иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый в отношении IL-1а, IL-2 и MIP1а по сравнению с группами 1 и 3.

Уровни цитокинов в сыворотке крови - статистический анализ показал, что лечение в группе 1 имело иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый в отношении IL-17 и RANTES (через 4 часа введения после ЛПС), LIF (через 8 часов после введения ЛПС). Однако, через 4 часа после индукции ЛПС лечение в группы 2 имело более выраженный иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый для LIF, ФНОa, по сравнению с лечением в группе 1 и группе 3. Кроме того, через 8 часов после индукции LPS лечение в группе 2 имело более выраженный иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый для IL-17, по сравнению с группой 1 и группой 3, и через 24 часа после индукции ЛПС лечение в группе 2 имело более выраженный иммуномодулирующий эффект, наблюдаемый для IL-1b и RANTES.

Эти результаты показали, что противовоспалительные эффекты соединения I5 наблюдались в ЦНС, что подтверждается отличием этих результатов, определенным по уровням цитокинов в ЦНС, от результатов для не получавших лечения контролей, а также результатов, полученных при использовании эквимолярного количества свободного дексаметазона. Это подтверждает, что I5 способно проникать через гематоэнцефалический барьер и воздействовать на нейровоспаление в головном мозге. Поскольку I5 нацелено на экспрессирующие CD206 макрофаги в ЦНС, необходимая эффективность доставки I5 через ГЭБ меньше, чем у свободного ненаправленного дексаметазона, для достижения желаемых зависящих от макрофагов противовоспалительных эффектов.

Пример 6: Проникновение через гематоэнцефалический барьер in vivo с использованием нацеленных на макрофаги конъюгатов лекарственных средств.

Фармакокинетическое исследование проводили на мышах для оценки системного воздействия соединения I5 по сравнению с контрольным стероидом, дексаметазоном, после однократной внутривенной (в/в) инъекции самкам мышей линии ICR. Кроме того, для обоих тестируемых соединений оценивали экскрецию соединения I5 с мочой и способность преодолевать гематоэнцефалический барьер путем анализа спинномозговой жидкости (СМЖ) через 1, 4, 8 и 24 часа после введения.

Группа 1 состояла из 6 мышей и была разделена на 2 подгруппы по 3 мыши. Мышам этой группы вводили однократную внутривенную инъекцию фосфатно-солевого буфера в количестве 10 мл/кг.

Группа 2 состояла из 24 мышей и была разделена на 8 подгрупп по 3 мыши. Мышам этой группы вводили однократную внутривенную инъекцию 200 мг/кг соединения I5 в растворе ФСБ в количестве 10 мл/кг.

Группа 3 состояла из 24 мышей и была разделена на 8 подгрупп по 3 мыши. Мышам этой группы вводили однократную внутривенную инъекцию 40 мг/кг дексаметазона фосфата натрия в растворе ФСБ в количестве 10 мл/кг.

Для группы 1 у одной подгруппы кровь собирали через 5 минут после введения, а у другой - через 24 часа после введения. Для групп 2 и 3 в подгруппах собирали кровь через 5, 15, 30 минут, 1, 2, 4, 8 и 24 часа после введения. Результаты фармакокинетики плазмы подробно описаны в таблицах ниже. Аналитом для группы 2 было соединение I5, а для группы 3 - дексаметазон.

Таблица 2: Фармакокинетические параметры в плазме

Группа	C max (нг/мл)	T max (ч)	ППК last (ч*нг/мл)	T last (ч)	ППК ∞ (ч*нг/мл)	T ½ (ч)	Exp rel (%)
2	44300	0,0833	18600	24,0	18700	4,23	4,2
3	27600	0,0833	88000	24,0	88000	1,83	-

a) Относительное системное воздействие, рассчитанное как [ППК∞/доза (соединение I5)/ ППК∞/доза (дексаметазон)] x 100

Таблица 3: Фармакокинетические параметры в плазме, продолжение

Группа	CL (мл/ч/кг)	Vz (мл/кг)	Vss (мл/кг)	C max /Доза (нг/мл/мг/кг)	ППК ∞ /Доза (ч*нг/мл/мг/кг)
2	10700	65300	12100	222	93,4
3	455	1200	1300	689	2200

Таблица 4: Параметры, используемые для оценки t½ в плазме

Группа	R 2	Нет точек лямбда z	Лямбда z (1/ч)	Лямбда z ниже (ч)	Лямбда z выше (ч)	ППК % Экстрап (%)	T ½ (ч)
2	0,904	4	0,164	2	24	0,403	4,23
3	1,00	3	0,378	4	24	0,0134	1,83

Объединенные концентрации в моче в зависимости от времени показаны в Таблице 5:

Группа	Номинальное время (ч)
	0,5	1,0	2,0	8,0	24,0
	Концентрация (нг/мл)
2	119000	51000	23200	11400	7110
3	48900	56100	50500	27200	8370

Объединенные концентрации в зависимости от времени в головном мозге (СМЖ) показаны в Таблице 6:

Группа	Номинальное время (ч)
	1	4	8	24
	Концентрация (нг/мл)
2	29,4	6,86	BLQ	10,5
3	НПКО	НПКО	НПКО	НПКО

НПКО означает «ниже предела количественного определения» и представляет уровни ниже самого низкого уровня количественного определения 5,00 нг/мл.

Средняя концентрация в плазме крови в зависимости от времени для образцов представлена на фиг. 4 (среднее значение и значение СКО, n=3/момент времени) для соединения I5 (треугольники) и дексаметазона (кружки).

В контрольной группе 1 ни одно животное не подвергалось воздействию тестируемого соединения I5, поэтому все образцы были ниже нижнего предела количественного определения (НПКО) (5,00 нг/мл), тогда как уровень дексаметазона у одного животного (из 6 животных) был примерно в 6 раз выше НПКО (32,4 нг/мл).

Все животные, получавшие либо соединение I5, либо дексаметазон, систематически подвергались воздействию тестируемых соединений. Однако у трех животных в последний момент времени, 24 часа, уровни были ниже предела количественного определения (ПКО), у одного животного в группе, получавшей соединение I5, и у двух животных в группе, получавшей дексаметазон.

Для соединения I5 в плазме наблюдали двухфазную кривую элиминации, а конечный период полувыведения составлял примерно 4,2 часа у мышей после внутривенного введения. Для дексаметазона наблюдалась однофазная кривая элиминации из плазмы с более коротким периодом полувыведения, равным 1,8 часа.

Клиренс для соединения I5 был выше, чем для дексаметазона (10,7 против 0,455 л/ч/кг). Кроме того, объём распределения Vss для соединения I5 был больше, чем для дексаметазона (12,1 против 1,3 л/кг). Следовательно, C_max и ППК_∞ с поправкой на дозу были ниже для соединения I5, чем для дексаметазона. Относительное системное воздействие после введения 200 мг соединения I5 было низким, 4,2%, по сравнению с 40 мг дексаметазона.

Профили объединенной концентрации в моче в зависимости от времени показаны для соединения I5 (треугольники) и дексаметазона (кружки) на фиг. 5.

В контрольной группе ни одно животное не подвергалось воздействию тестируемого вещества, дексаметазона, поэтому все образцы были ниже НПКО (5,00 нг/мл), тогда как для соединения I5 в 24-часовой пробе мочи были уровни выше НПКО (4010 нг/мл), приблизительно на 50% ниже, чем в 24-часовой пробе мочи в группе дозирования 1, где вводили 200 мг/кг (НПКО, 5,00 нг/мл).

Объединенные данные о концентрации в спинномозговой жидкости в зависимости от времени, приведенные в Таблице 6, показывают, что соединение I5 может проникать через гематоэнцефалический барьер, поскольку были обнаружены уровни от 6,86 до 29,4 нг/мл (в 1,4-5,9 раза больше НПКО, 5,00 нг/мл). Самый высокий уровень наблюдался в 1-й момент времени, через 1 час после введения дозы. Дексаметазон не проникал через гематоэнцефалический барьер, или, по крайней мере, все собранные образцы были ниже НПКО (5,00 нг/мл).

Ввиду множества возможных вариантов осуществления изобретения, к которым могут быть применены принципы раскрытого изобретения, следует признать, что приведенные иллюстративные варианты осуществления изобретения являются только предпочтительными примерами настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие объём изобретения. Наоборот, объём настоящего изобретения определяется следующей формулой изобретения. Поэтому авторы настоящего изобретения заявляем, что настоящим изобретением является все, что входит в объём и сущность этой формулы изобретения.

Claims (40)

1. Нацеленный на макрофаг конъюгат лекарственного средства, представляющий собой соединение формулы 1D

где R₁ представляет собой прямую связь или C₁-C₁₂ алкил с прямой или разветвленной цепью;

R₂ представляет собой водород или фтор;

R₃ представляет собой водород или метильную группу;

R₄ представляет собой гидроксильную группу или кетонную группу; или

соединение формулы I

где R₁ представляет собой C₁-C₆ алкил с прямой цепью;

R₂ представляет собой фтор;

R₃ представляет собой метильную группу; и

R₄ представляет собой гидроксильную группу.

2. Соединение по п. 1, где в соединении формулы 1D R₁ представляет собой прямую связь.

3. Соединение по п. 1, где в соединении формулы 1D R₁ представляет собой группу СН₂.

4. Соединение по п. 1, где в соединении формулы 1D R₁ представляет собой (метил)этильную группу.

5. Соединение по п. 1, где в соединении формулы 1D R₁ представляет собой пентильную группу.

6. Соединение по любому из пп. 2-5, где в соединении формулы 1D R₂ и R₃ представляют собой H и R₄ представляет собой кетонную группу.

7. Соединение по любому из пп. 2-5, где в соединении формулы 1D R₂ представляет собой фтор, R₃ представляет собой метил и R₄ представляет собой гидроксильную группу.

8. Соединение по п. 1, где в соединении формулы I R₁ представляет собой группу (CH₂)₃.

9. Соединение по п. 1 или 8, где в соединении формулы I R₂ представляет собой фтор, R₃ представляет собой метил и R₄ представляет собой гидроксильную группу.

10. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из предшествующих пунктов для применения в лечении заболевания, связанного с повышенной активацией макрофагов, где указанная композиция содержит терапевтически эффективное количество нацеленного на макрофаг конъюгата лекарственного средства по любому из пп. 1-9.

11. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой аутоиммунное заболевание или воспалительное заболевание.

12. Фармацевтическая композиция по п. 11, отличающаяся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из ревматоидного артрита, аутоиммунной энтеропатии, псориаза, дерматита, алопеции, иммунодисрегуляции, полиэндокринопатии, энтеропатии, Х-сцепленного синдрома и аутоиммунной эндокринопатии.

13. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой неалкогольную жировую болезнь печени или неалкогольный стеатогепатит.

14. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой нейровоспалительное заболевание.

15. Фармацевтическая композиция по п. 14, отличающаяся тем, что нейровоспалительное заболевание выбрано из группы, состоящей из рассеянного склероза, нейромиелита зрительного нерва, неврита зрительного нерва, болезни Альцгеймера и поперечного миелита.

16. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой болезнь Паркинсона.

17. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой нарушение липидного обмена.

18. Фармацевтическая композиция по п. 17, отличающаяся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Гоше, болезни Ниманна-Пика, болезни Фабри, болезни Фарбера и болезни Тея-Сакса.

19. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой астму.

20. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из депрессии, наркомании и опиоидной зависимости.

21. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание выбрано из группы, состоящей из атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний.

22. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой патоген, включающий в себя вирусное заболевание, бактериальное заболевание или протозойное заболевание.

23. Фармацевтическая композиция по п. 22, отличающаяся тем, что заболевание является результатом коронавирусной инфекции.

24. Фармацевтическая композиция по п. 23, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой COVID-19.

25. Фармацевтическая композиция по п. 24, отличающаяся тем, что у пациента отсутствуют симптомы COVID-19.

26. Фармацевтическая композиция по п. 22, отличающаяся тем, что заболевание представляет собой лейшманиоз.

27. Фармацевтическая композиция по п. 10, отличающаяся тем, что пациент страдает синдромом высвобождения цитокинов.

28. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 10-27, отличающаяся тем, что пациент также страдает от заболевания, связанного с нарушением обмена веществ, связанным с метаболизмом глюкозы.

29. Фармацевтическая композиция по п. 28, отличающаяся тем, что нарушение обмена веществ представляет собой диабет или метаболический синдром.