RU2844751C1 - Средство генной терапии на основе csrp3 (богатого цистеином и глицином белка 3) - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. Изобретение раскрывает генетическую конструкцию, способную увеличивать экспрессию мышечного белка LIM (MLP), содержащую кодирующий данный белок полинуклеотид, функционально связанную с промотором, специфичным для клеток миокарда, например MHCK7 или HTNNT2. Изобретение применимо в генной терапии заболеваний, связанных с дефицитом белка CSRP3 вследствие дефектов в кодирующем его гене, например, при сердечной недостаточности, различных видах кардиомиопатии и др. 7 н. и 63 з.п. ф-лы, 5 ил., 6 табл., 5 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании заявки на патент США № 63/061727, поданной 5 августа 2020 года, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

ЗАЯВЛЕНИЕ ОТНОСИТЕЛЬНО ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Перечень последовательностей, связанный с настоящей заявкой, представлен в текстовом формате вместо бумажной копии и включен посредством ссылки в описание в данном документе. Текстовый файл, содержащий перечень последовательностей, имеет следующее название: ROPA_020_01WO_ST25.txt. Текстовый файл имеет размер приблизительно 120 КБ, создан 3 августа 2021 года и подан в электронном виде через EFS-Web.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Ген богатого цистеином и глицином белка 3 (CSRP3) кодирует мышечный белок LIM (MLP). Генетические дефекты в CSRP3 ассоциированы с аутосомно-доминантной кардиомиопатией, как гипертрофической кардиомиопатией (HCM), так и дилатационной кардиомиопатией (DCM), поскольку аутосомно-доминантные мутации в разных доменах белка связаны с разными фенотипами. Мутации с утратой функции, которые снижают уровни MLP, могут вызывать неправильную локализацию белка и опосредованную протеасомами деградацию, что приводит к нарушению нормальных сигнальных путей в сердечной и скелетной мышцах. Изменения уровней или внутриклеточной локализации MLP также связаны со скелетными миопатиями, в том числе плече-лопаточно-лицевой мышечной дистрофией, немалиновой миопатией и поясно-конечностной мышечной дистрофией типа 2В. У больных поясно-конечностной мышечной дистрофией типа 2А, мышечной дистрофией Дюшенна и дерматомиозитом были выявлены изменения уровней изоформы белка MLP-b или нарушение регуляции соотношения MLP:MLP-b.

У пациентов с CSRP3 проявляются различные симптомы в зависимости от конкретной мутации, но общие симптомы включают обструктивную HCM или DCM, гипертрофию желудочков (с межжелудочковой перегородкой в диапазоне 14—32 мм), желудочковую тахикардию, непереносимость физической нагрузки, стенокардию. Обычно имеют место умеренные оценки в баллах I-II по шкале NYHA (Нью-Йоркской кардиологической ассоциации). Внезапная сердечная смерть была отмечена, например, в семье, несущей мутацию C58G. В одном исследовании большинство носителей C58G, которым проводили биопсии мышц, при поступлении жаловались на миалгии и судороги при физической нагрузке.

Существует неудовлетворенная потребность в терапии связанных с CSRP3 заболеваний или нарушений. В данном документе представлено решение данной потребности с помощью средств генной терапии.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение в целом относится к средству генной терапии заболевания или нарушения, например сердечного заболевания или нарушения, с применением вектора, экспрессирующего MLP или его функциональный вариант.

В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрен полинуклеотид, содержащий кассету экспрессии и необязательно фланкирующие инвертированные концевые повторы (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV), где полинуклеотид содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую мышечный белок LIM (MLP) или его функциональный вариант, функционально связанный с промотором.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой специфичный для сердца промотор.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой специфичный для мышц промотор.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой специфичный для кардиомиоцитов промотор.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор MHCK7.

В некоторых вариантах осуществления промотор MHCK7 характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 31.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор сердечного тропонина T (hTNNT2).

В некоторых вариантах осуществления промотор hTNNT2 характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 32.

В некоторых вариантах осуществления кассета экспрессии содержит экзон 1 гена сердечного тропонина Т (hTNNT2), где необязательно промотор hTNNT2 и экзон 1 совместно характеризуются по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 32.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой убиквитарный промотор, необязательно промотор CMV или промотор CAG.

В некоторых вариантах осуществления кассета экспрессии содержит полиА-сигнал.

В некоторых вариантах осуществления полиА-сигнал представляет собой полиА гормона роста человека (hGH).

В некоторых вариантах осуществления кассета экспрессии содержит посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка (WPRE), необязательно WPRE(x).

В некоторых вариантах осуществления мышечный белок LIM (MLP) или его функциональный вариант представляет собой MLP.

В некоторых вариантах осуществления MLP представляет собой MLP человека.

В некоторых вариантах осуществления MLP представляет собой изоформу А MLP.

В некоторых вариантах осуществления MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления MLP представляет собой изоформу B MLP.

В некоторых вариантах осуществления MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 2.

В некоторых вариантах осуществления MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 3.

В некоторых вариантах осуществления MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 4.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидная последовательность, кодирующая MLP, представляет собой полинуклеотид богатого цистеином и глицином белка 3 (CSRP3).

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид CSRP3 представляет собой полинуклеотид CSRP3 человека.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидная последовательность, кодирующая MLP, характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 5.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидная последовательность, кодирующая MLP, характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 7.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 2,4 т. о., не более чем приблизительно 2,6 т. о. или от приблизительно 2,4 т. о. до приблизительно 2,6 т. о.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 3,0 т. о., не более чем приблизительно 3,3 т. о. или от приблизительно 3,0 т. о. до приблизительно 3,3 т. о.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 2,4 т. о., по меньшей мере приблизительно 2,6 т. о., по меньшей мере приблизительно 3,0 т. о., по меньшей мере приблизительно 3,3 т. о., по меньшей мере приблизительно 3,5 т. о., по меньшей мере приблизительно 3,7 т. о., по меньшей мере приблизительно 3,9 т. о., по меньшей мере приблизительно 4,1 т. о. или по меньшей мере приблизительно 4,3 т. о.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 2,6 т. о., по меньшей мере приблизительно 3,0 т. о., не более чем приблизительно 3,3 т. о., не более чем приблизительно 3,5 т. о., не более чем приблизительно 3,7 т. о., не более чем приблизительно 3,9 т. о., не более приблизительно 4,1 т. о., не более чем приблизительно 4,3 т. о. или не более чем приблизительно 4,5 т. о.

В некоторых вариантах осуществления кассета экспрессии характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 8-11.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 12-15.

В некоторых вариантах осуществления кассета экспрессии фланкирована 5′- и 3′-инвертированными концевыми повторами (ITR), необязательно ITR из AAV2, необязательно ITR, которые характеризуются по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 20-26.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид является самокомплементарным.

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид содержит кассету экспрессии и последовательность, обратно комплементарную кассете экспрессии.

В некоторых вариантах осуществления кассета экспрессии и последовательность, обратно комплементарная кассете экспрессии, фланкированы 5′- и 3′-инвертированными концевыми повторами (ITR), необязательно ITR из AAV2, необязательно ITR, которые характеризуются по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 23 или SEQ ID NO: 26.

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрен вектор генной терапии, содержащий полинуклеотид по настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления вектор генной терапии представляет собой рекомбинантный вектор на основе аденоассоциированного вируса (rAAV).

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV представляет собой AAV9 или его функциональный вариант.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 77.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV представляет собой AAVrh10 или его функциональный вариант.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 79.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV представляет собой AAV6 или его функциональный вариант.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 78.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV представляет собой AAVrh74 или его функциональный вариант.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 80.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV представляет собой самокомплементарный вектор на основе AAV.

В другом аспекте в настоящем изобретением предусмотрен способ лечения и/или предупреждения заболевания или нарушения у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий введение субъекту вектора по настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой нарушение сердечной деятельности.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой сердечную недостаточность.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой гипертрофическую кардиомиопатию.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой дилатационную кардиомиопатию.

В некоторых вариантах осуществления субъектом является млекопитающее.

В некоторых вариантах осуществления субъектом является примат.

В некоторых вариантах осуществления субъектом является человек.

В некоторых вариантах осуществления субъект имеет мутацию в гене CSRP3, которая обуславливает аминокислотную замену, выбранную из C58G, L44P, S54R, E55G и/или K69R, относительно CSRP3 человека, кодирующего MLP человека, имеющий последовательность под SEQ ID NO: 1.

В некоторых вариантах осуществления вектор вводят посредством внутривенной инъекции, внутрисердечной инъекции, внутрисердечной инфузии и/или катетеризации сердца.

В некоторых вариантах осуществления введение увеличивает экспрессию MLP на по меньшей мере приблизительно 5%.

В некоторых вариантах осуществления введение увеличивает экспрессию MLP на по меньшей мере приблизительно 30%.

В некоторых вариантах осуществления введение увеличивает экспрессию MLP на по меньшей мере приблизительно 70%.

В некоторых вариантах осуществления введение увеличивает экспрессию MLP на величину от приблизительно 5% до приблизительно 10%.

В некоторых вариантах осуществления введение увеличивает экспрессию MLP на величину от приблизительно 30% до приблизительно 50%.

В некоторых вариантах осуществления введение увеличивает экспрессию MLP на величину от приблизительно 70% до приблизительно 100%.

В некоторых вариантах осуществления способ позволяет лечить и/или предупреждать заболевание или нарушение.

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая вектор по настоящему изобретению.

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрен набор, содержащий вектор или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению и необязательно инструкции по применению.

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрено применение композиции по настоящему изобретению при лечении заболевания или нарушения, необязательно, в соответствии с любым из раскрытых в данном документе способов.

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрена композиция по настоящему изобретению для применения при лечении заболевания или нарушения, необязательно в соответствии с любым из способов, раскрытых в данном документе.

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрен способ экспрессии мышечного белка LIM (MLP) или его функционального варианта, предусматривающий приведение клетки в контакт с вектором по настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления клетка представляет собой кардиомиоцит.

В некоторых вариантах осуществления кардиомиоцит представляет собой кардиомиоцит человека.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор MHCK7, и где уровень экспрессии MLP по меньшей мере в 2 раза превышает уровень экспрессии MLP в клетке, трансдуцированной вектором с промотором hTNNT2.

В некоторых вариантах осуществления промотор представляет собой промотор MHCK7, и где уровень экспрессии MLP в 2-10 раз превышает уровень экспрессии MLP в клетке, трансдуцированной вектором с промотором hTNNT2.

В нижеследующем подробном описании раскрыты различные другие аспекты и варианты осуществления. Настоящее изобретение ограничено исключительно прилагаемой формулой изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фиг. 1 представлена векторная диаграмма неограничивающего примера векторного генома. Полная полинуклеотидная последовательность векторного генома представлена под SEQ ID NO: 12. Заглавная часть представляет собой кассету экспрессии (SEQ ID NO: 8).

На фиг. 2 представлена векторная диаграмма неограничивающего примера векторного генома. Полная полинуклеотидная последовательность векторного генома представлена под SEQ ID NO: 13. Заглавная часть представляет собой кассету экспрессии (SEQ ID NO: 9).

На фиг. 3 представлена векторная диаграмма неограничивающего примера векторного генома. Полная полинуклеотидная последовательность векторного генома представлена под SEQ ID NO: 14. Заглавная часть представляет собой кассету экспрессии (SEQ ID NO: 10).

На фиг. 4 представлена векторная диаграмма неограничивающего примера векторного генома. Полная полинуклеотидная последовательность векторного генома представлена под SEQ ID NO: 15. Заглавная часть представляет собой кассету экспрессии (SEQ ID NO: 11).

На фиг. 5А представлена экспрессия CSRP3 в трансдуцированных CHO-Lec2.

На фиг. 5B представлена экспрессия CSRP3 в трансдуцированных кардиомиоцитах (линия дифференцированных клеток AC16 — Sigma-Aldrich®, № по кат. SCC109). Клетки трансдуцировали посредством MOI 3E5 из каждого вектора; спустя 6 суток собирали клеточные лизаты и проводили вестерн-блоттинг с применением поликлонального антитела к CSRP3 (Thermo-Fisher® PA5-29155 1:1000).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предусмотрены векторы генной терапии для CSPRP3, которые доставляют полинуклеотид, кодирующий MLP, а также способ применения и другие композиции и способы. Лечение связанного с CSPRP3 нарушения осложняется аутосомно-доминантным характером большинства форм связанных с CSPRP3 нарушений и факторами, свидетельствующими о том, что уровень экспрессии белка и баланс между изоформами MLP имеют решающее значение для нормальной функции у здоровых субъектов. Более того, успешность генной терапии сердца нельзя спрогнозировать. Кардиомиоциты являются особенно сложным типом клеток при использовании генной терапии. Раскрытые в данном документе композиции и способы позволяют решить данную проблему.

Определения

Заголовки разделов предназначены только для организационных целей и не должны истолковываться как ограничивающие описываемый предмет изобретения конкретными аспектами или вариантами осуществления.

Если не указано иное, все используемые в данном документе технические и научные термины имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом в области техники, к которой относится настоящее изобретение. Ниже описаны подходящие способы и материалы, хотя при осуществлении настоящего изобретения на практике можно применять способы и материалы, схожие или эквивалентные описанным в данном документе. Все публикации, патентные заявки, патенты и другие источники, упомянутые в данном документе, прямо включены посредством ссылки во всей своей полноте. В случаях спора настоящее описание, в том числе определения, будет иметь преимущественную силу. Кроме того, описанные в данном документе материалы, способы и примеры носят исключительно иллюстративный характер и не предназначены для ограничения.

Все упомянутые в данном документе публикации и патенты во всей своей полноте включены в данный документ посредством ссылки, как если бы каждая отдельная публикация или патент были специально и отдельно указаны как включенные посредством ссылки. В случае спора данная заявка, в том числе любые приведенные в данном документе определения, будет иметь преимущественную силу. Тем не менее, упоминание любого литературного источника, статьи, публикации, патента, патентной публикации и патентной заявки, цитируемых в данном документе, не является и не должно восприниматься как признание или любая форма предположения о том, что они представляют собой действительный предшествующий уровень техники или являются частью общего знания в любой стране мира.

В настоящем описании любой диапазон концентраций, процентный диапазон, диапазон соотношений или диапазон целых чисел следует понимать как включающий значение любого целого числа в указанном диапазоне и, при необходимости, его долей (например, одну десятую и одну сотую доли целого числа), если не указано иное. Термин «приблизительно», когда он непосредственно предшествует числу или цифре, означает, что данное число или данная цифра находится в диапазоне плюс или минус 10%. Следует понимать, что используемые в данном документе термины в форме единственного числа относятся к «одному или нескольким» из перечисленных компонентов, если не указано иное. Использование альтернативы (например, «или») следует понимать как означающее либо одну, либо обе, либо любую комбинацию альтернатив. Термин «и/или» следует понимать как означающий либо одну, либо обе альтернативы. Используемые в данном документе термины «включать» и «содержать» используют как синонимы.

Используемые в данном документе термины «идентичность» и «идентичный» относятся в части полипептидной или полинуклеотидной последовательности к проценту точно совпадающих остатков в результатах выравнивания такой «запрашиваемой» последовательности с «рассматриваемой» последовательностью, таких как результаты выравнивания, полученные с помощью алгоритма BLAST. Идентичность вычисляют, если не указано иное, по всей длине рассматриваемой последовательности. Таким образом, запрашиваемая последовательность «характеризуется по меньшей мере x% идентичностью» с рассматриваемой последовательностью, если при выравнивании запрашиваемой последовательности с рассматриваемой последовательностью по меньшей мере x% (округленных в меньшую сторону) остатков в рассматриваемой последовательности выровнены как точное совпадение с соответствующим остатком в запрашиваемой последовательности. Если рассматриваемая последовательность имеет варьируемые положения (например, остатки, обозначенные X), совпадением считают выравнивание с любым остатком в запрашиваемой последовательности.

Используемый в данном документе термин «вектор на основе AAV» или «вектор на основе rAAV» относится к рекомбинантному вектору, содержащему один или несколько представляющих интерес полинуклеотидов (или трансгенов), которые фланкированы последовательностями концевых повторов AAV (ITR). Такие векторы на основе AAV могут быть реплицированы и упакованы в инфекционные вирусные частицы, если они присутствуют в клетке-хозяине, которая была трансфицирована плазмидой, кодирующей и экспрессирующей продукты генов rep и cap. Альтернативно, векторы на основе AAV могут быть упакованы в инфекционные частицы с помощью клетки-хозяина, которая была стабильно сконструирована для экспрессии генов rep и cap.

Используемый в данном документе термин «вирион AAV», или «вирусная частица AAV», или «векторная частица AAV» относится к вирусной частице, состоящей по меньшей мере из одного капсидного белка AAV и инкапсулированного полинуклеотидного вектора на основе AAV. В контексте данного документа, если частица содержит гетерологичный полинуклеотид (т. е. полинуклеотид, отличный от генома AAV дикого типа, такой как трансген, подлежащий доставке в клетку млекопитающего), ее обычно называют «векторной частицей AAV» или просто «вектором на основе AAV». Таким образом, получение векторной частицы AAV обязательно включает получение вектора на основе AAV, поскольку такой вектор содержится внутри векторной частицы AAV.

Используемый в данном документе термин «промотор» относится к полинуклеотидной последовательности, способной стимулировать инициацию транскрипции РНК с полинуклеотида в эукариотической клетке.

Используемый в данном документе термин «векторный геном» относится к полинуклеотидной последовательности, упакованной вектором (например, вирионом rAAV), включающей фланкирующие последовательности (в AAV — инвертированные концевые повторы). Термины «кассета экспрессии» и «полинуклеотидная кассета» относятся к части векторного генома между фланкирующими последовательностями ITR. «Кассета экспрессии» подразумевает, что векторный геном содержит по меньшей мере один ген, кодирующий генный продукт, функционально связанный с элементом, управляющим экспрессией (например, промотором).

Используемый в данном документе термин «нуждающийся пациент» или «нуждающийся субъект» относится к пациенту или субъекту, подверженному риску развития или страдающему от заболевания, нарушения или патологического состояния, которое поддается лечению или облегчению с помощью рекомбинантного вектора генной терапии или системы редактирования генов, раскрытых в данном документе. Нуждающийся пациент или субъект может, например, быть пациентом или субъектом, у которого диагностировано ассоциированное с сердцем нарушение. У субъекта может быть мутация в гене CSRP3 или делеция всего или части гена CSRP3 или регуляторных последовательностей гена, что вызывает аберрантную экспрессию белка MLP. Термины «субъект» и «пациент» используют в данном документе взаимозаменяемо. Субъект, которого лечат описанными в данном документе способами, может быть взрослым или ребенком. Субъекты могут различаться по возрасту.

Используемый в данном документе термин «вариант» или «функциональный вариант» относится взаимозаменяемо к белку, который имеет одну или несколько аминокислотных замен, вставок или делеций по сравнению с исходным белком, который сохраняет одну или несколько требуемых активностей исходного белка.

Используемый в данном документе термин «генетическое нарушение» относится к частичной или полной утрате функции или аберрантной активности гена. Например, субъект может страдать от генетического нарушения экспрессии или функции гена CSRP3, которое снижает экспрессию или приводит к утрате или аберрантной функции белка MLP по меньшей мере в некоторых клетках (например, клетках сердца) субъекта.

Используемый в данном документе термин «лечение» относится к облегчению одного или нескольких симптомов заболевания или нарушения. Термин «предупреждение» относится к задержке или прерыванию проявления одного или нескольких симптомов заболевания или нарушения или к замедлению прогрессирования связанного с CSRP3 заболевания или нарушения, например, гипертрофической кардиомиопатии (HCM), дилатационной кардиомиопатии (DCM) или скелетной миопатии.

[100]

Белок MLP или полинуклеотид

В настоящем изобретении предусмотрены композиции и способы применения, относящиеся к молекуле мышечного белка LIM (MLP). Известно, что с гипертрофической кардиомиопатией (HCM) или дилатационной кардиомиопатией (DCM) связаны различные мутации в CSRP3. Были обнаружены как наследственные, так и de novo мутации. В некоторых случаях гетерозиготной миссенс-мутации достаточно для того, чтобы вызвать заболевание.

Полипептидная последовательность MLP выглядит следующим образом:

MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCMACRKALDSTTVAAHESEIYCKVCYGRRYGPKGIGYGQGAGCLSTDTGEHLGLQFQQSPKPARSVTTSNPSKFTAKFGESEKCPRCGKSVYAAEKVMGGGKPWHKTCFRCAICGKSLESTNVTDKDGELYCKVCYAKNFGPTGIGFGGLTQQVEKKE

(SEQ ID NO: 1).

Вторая изоформа MLP имеет следующую полипептидную последовательность: MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCSPQSRHAQLPPATLPNSLRSLESPRSALDVASQSMLLRRLWEVASLGTRPVSAVPSVGRVWSPQMSLTKMGNFIAKFAMPKILAPRVLGLEALHNKWKRKNEEVRRFSDFLRA

(SEQ ID NO: 2).

Другая изоформа MLP имеет следующую полипептидную последовательность:

MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCLC

(SEQ ID NO: 3).

Другая изоформа MLP имеет следующую полипептидную последовательность:

MPNWGGGAKCGACEKTVYHAEEIQCNGRSFHKTCFHCTLAQDLFPLCHLWEESGVHKC

(SEQ ID NO: 4).

В некоторых вариантах осуществления белок MLP содержит полипептидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 1-4.

В некоторых вариантах осуществления настоящим изобретением предусмотрен вирион рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащий капсид и векторный геном, где векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую MLP или его функциональный вариант, функционально связанную с промотором. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен вирион рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащий капсид и векторный геном, где векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую MLP, функционально связанную с промотором. Полинуклеотид, кодирующий MLP, может содержать полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

ATGCCAAACTGGGGCGGAGGCGCAAAATGTGGAGCCTGTGAAAAGACCGTCTACCATGCAGAAGAAATCCAGTGCAATGGAAGGAGTTTCCACAAGACGTGTTTCCACTGCATGGCCTGCAGGAAGGCTCTTGACAGCACGACAGTCGCGGCTCATGAGTCGGAGATCTACTGCAAGGTGTGCTATGGGCGCAGATATGGCCCCAAAGGGATCGGGTATGGACAAGGCGCTGGCTGTCTCAGCACAGACACGGGCGAGCATCTCGGCCTGCAGTTCCAACAGTCCCCAAAGCCGGCACGCTCAGTTACCACCAGCAACCCTTCCAAATTCACTGCGAAGTTTGGAGAGTCCGAGAAGTGCCCTCGATGTGGCAAGTCAGTCTATGCTGCTGAGAAGGTTATGGGAGGTGGCAAGCCTTGGCACAAGACCTGTTTCCGCTGTGCCATCTGTGGGAAGAGTCTGGAGTCCACAAATGTCACTGACAAAGATGGGGAACTTTATTGCAAAGTTTGCTATGCCAAAAATTTTGGCCCCACGGGTATTGGGTTTGGAGGCCTTACACAACAAGTGGAAAAGAAAGAA

(SEQ ID NO: 5).

Необязательно полинуклеотидная последовательность, кодирующая векторный геном, может содержать последовательность Козак, в том числе без ограничения GCCACCATGG (SEQ ID NO: 6). Последовательность Козак может перекрываться с полинуклеотидной последовательностью, кодирующей белок MLP или его функциональный вариант. Например, векторный геном может содержать полинуклеотидную последовательность (с подчеркнутой последовательностью Козак), которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

gccaccATGCCAAACTGGGGCGGAGGCGCAAAATGTGGAGCCTGTGAAAAGACCGTCTACCATGCAGAAGAAATCCAGTGCAATGGAAGGAGTTTCCACAAGACGTGTTTCCACTGCATGGCCTGCAGGAAGGCTCTTGACAGCACGACAGTCGCGGCTCATGAGTCGGAGATCTACTGCAAGGTGTGCTATGGGCGCAGATATGGCCCCAAAGGGATCGGGTATGGACAAGGCGCTGGCTGTCTCAGCACAGACACGGGCGAGCATCTCGGCCTGCAGTTCCAACAGTCCCCAAAGCCGGCACGCTCAGTTACCACCAGCAACCCTTCCAAATTCACTGCGAAGTTTGGAGAGTCCGAGAAGTGCCCTCGATGTGGCAAGTCAGTCTATGCTGCTGAGAAGGTTATGGGAGGTGGCAAGCCTTGGCACAAGACCTGTTTCCGCTGTGCCATCTGTGGGAAGAGTCTGGAGTCCACAAATGTCACTGACAAAGATGGGGAACTTTATTGCAAAGTTTGCTATGCCAAAAATTTTGGCCCCACGGGTATTGGGTTTGGAGGCCTTACACAACAAGTGGAAAAGAAAGAA

(SEQ ID NO: 7).

В некоторых вариантах осуществления последовательность Козак представляет собой альтернативную последовательность Козак, содержащую или состоящую из любой из следующих:

(gcc)gccRccAUGG (SEQ ID NO: 16);

(gcc)gccRccAUGC (SEQ ID NO: 17);

AGNNAUGN;

ANNAUGG;

ANNAUGC;

ACCAUGG;

ACCAUGC;

GACACCAUGG (SEQ ID NO: 18) и

GACACCAUGC (SEQ ID NO: 19).

В некоторых вариантах осуществления векторный геном не содержит последовательности Козак.

Векторный геном

Вирионы AAV по настоящему изобретению содержат векторный геном. Векторный геном может содержать кассету экспрессии (или полинуклеотидную кассету для задач по редактированию генов без потребности в экспрессии полинуклеотидной последовательности). Можно применять любые подходящие инвертированные концевые повторы (ITR). ITR могут относиться к тому же серотипу, что и капсид, или к другому серотипу (например, можно применять ITR из AAV2).

В некоторых вариантах осуществления 5' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

CCTGCAGGCAGCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT

(SEQ ID NO: 20).

В некоторых вариантах осуществления 5' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

GCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACGTA

(SEQ ID NO: 21).

В некоторых вариантах осуществления 5' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACGTA

(SEQ ID NO: 22).

В некоторых вариантах осуществления 5' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

Ttggccactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcct

(SEQ ID NO: 23).

В некоторых вариантах осуществления 3' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

AGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGCTGCCTGCAGG

(SEQ ID NO: 24).

В некоторых вариантах осуществления 3' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

TACGTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGC

(SEQ ID NO: 25).

В некоторых вариантах осуществления 3' ITR содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

aggaacccctagtgatggagactccctctctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgggcgaccaaaggtcgcccgacgcccgggctttgcccgggcggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagt

(SEQ ID NO: 26).

В некоторых вариантах осуществления векторный геном содержит одну или несколько последовательностей-наполнителей, которые, например, на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичны

GCGGCAATTCAGTCGATAACTATAACGGTCCTAAGGTAGCGATTTAAATACGCGCTCTCTTAAGGTAGCCCCGGGACGCGTCAATTGACTACAAACCGAGTATCTGCAGAGGGCCCTGCGTATG (SEQ ID NO: 27);

CTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGATCCTCTCTTAAGGTAGCATCGAGATTTAAATTAGGGATAACAGGGTAATGGCGCGGGCCGC (SEQ ID NO: 28) или

GTTACCCAGGCTGGAGTGCAGTGGCACATTTCTGCTCACTGCAACCTCCTCCTCCCTGGGTTC (SEQ ID NO: 29).

Промоторы

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок MLP или его функциональный вариант, функционально связана с промотором.

В настоящем изобретении предусмотрено применение различных промоторов. К промоторам, применимым в вариантах осуществления настоящего изобретения, относятся без ограничения промотор цитомегаловируса (CMV), промотор гена фосфоглицераткиназы (PGK) или промоторная последовательность, состоящая из энхансера CMV и частей промотора гена бета-актина курицы и гена бета-глобина кролика (CAG). В некоторых случаях промотор может представлять собой синтетический промотор. Иллюстративные синтетические промоторы представлены в Schlabach et al. PNAS USA. 107(6):2538–43 (2010). В некоторых вариантах осуществления промотор содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична

ACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGG

(SEQ ID NO: 30).

В некоторых вариантах осуществления полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок MLP или его функциональный вариант, функционально связана с индуцируемым промотором. Индуцируемый промотор может быть сконфигурирован таким образом, чтобы обуславливать транскрипционную экспрессию или не обуславливать транскрипционную экспрессию полинуклеотидной последовательности в ответ на добавление или накопление средства или в ответ на удаление, разложение или разведение средства. Средство может представлять собой лекарственное средство. Средство может представлять собой тетрациклин или одно из его производных, в том числе без ограничения доксициклин. В некоторых случаях индуцируемый промотор представляет собой промотор tet-on, промотор tet-off, химически регулируемый промотор, физически регулируемый промотор (т. е. промотор, который реагирует на присутствие или отсутствие света или на низкую или высокую температуру). К индуцируемым промоторам относятся промоторы, индуцируемые ионами тяжелых металлов (такие как промотор вируса опухоли молочной железы мыши (mMTV) или различные промоторы гена гормона роста), и промоторы из фага Т7, которые активны в присутствии РНК-полимеразы Т7. Данный перечень индуцируемых промоторов не является ограничивающим.

В некоторых случаях промотор представляет собой тканеспецифичный промотор, такой как промотор, способный управлять экспрессией в клетке сердца в большей степени, чем в клетке, отличной от клетки сердца. В некоторых вариантах осуществления тканеспецифичный промотор выбран из любых различных промоторов, специфичных для клеток сердца, в том числе без ограничения десмина (Des), тяжелой цепи альфа-миозина (α-MHC), легкой цепи 2 миозина (MLC-2), сердечного тропонина С (cTnC), сердечного тропонина Т (hTNNT2), мышечной креатинкиназы (СК) и комбинаций данных промоторных/энхансерных областей, таких как MHCK7. В некоторых случаях промотор представляет собой убиквитарный промотор. «Убиквитарный промотор» относится к промотору, который не является тканеспецифичным в экспериментальных или клинических условиях. В некоторых случаях убиквитарный промотор представляет собой любой из промоторов CMV, CAG, UBC, PGK, EF1-альфа, GAPDH, SV40, HBV, бета-актина курицы и бета-актина человека.

В некоторых вариантах осуществления промоторная последовательность выбрана из таблицы 3. В некоторых вариантах осуществления промотор содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 31—51.

Таблица 3

ПРОМОТОР	ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ	SEQ ID NO:
MHCK7	ACCCTTCAGATTAAAAATAACTGAGGTAAGGGCCTGGGTAGGGGAGGTGGTGTGAGACGCTCCTGTCTCTCCTCTATCTGCCCATCGGCCCTTTGGGGAGGAGGAATGTGCCCAAGGACTAAAAAAAGGCCATGGAGCCAGAGGGGCGAGGGCAACAGACCTTTCATGGGCAAACCTTGGGGCCCTGCTGTCTAGCATGCCCCACTACGGGTCTAGGCTGCCCATGTAAGGAGGCAAGGCCTGGGGACACCCGAGATGCCTGGTTATAATTAACCCAGACATGTGGCTGCCCCCCCCCCCCCAACACCTGCTGCCTCTAAAAATAACCCTGTCCCTGGTGGATCCCCTGCATGCGAAGATCTTCGAACAAGGCTGTGGGGGACTGAGGGCAGGCTGTAACAGGCTTGGGGGCCAGGGCTTATACGTGCCTGGGACTCCCAAAGTATTACTGTTCCATGTTCCCGGCGAAGGGCCAGCTGTCCCCCGCCAGCTAGACTCAGCACTTAGTTTAGGAACCAGTGAGCAAGTCAGCCCTTGGGGCAGCCCATACAAGGCCATGGGGCTGGGCAAGCTGCACGCCTGGGTCCGGGGTGGGCACGGTGCCCGGGCAACGAGCTGAAAGCTCATCTGCTCTCAGGGGCCCCTCCCTGGGGACAGCCCCTCCTGGCTAGTCACACCCTGTAGGCTCCTCTATATAACCCAGGGGCACAGGGGCTGCCCTCATTCTACCACCACCTCCACAGCACAGACAGACACTCAGGAGCCAGCCAG	31
Промотор сердечного тропонина Т человека (без экзона 1) hTnnT2 / HTNNT2	CTCAGTCCATTAGGAGCCAGTAGCCTGGAAGATGTCTTTACCCCCAGCATCAGTTCAAGTGGAGCAGCACATAACTCTTGCCCTCTGCCTTCCAAGATTCTGGTGCTGAGACTTATGGAGTGTCTTGGAGGTTGCCTTCTGCCCCCCAACCCTGCTCCCAGCTGGCCCTCCCAGGCCTGGGTTGCTGGCCTCTGCTTTATCAGGATTCTCAAGAGGGACAGCTGGTTTATGTTGCATGACTGTTCCCTGCATATCTGCTCTGGTTTTAAATAGCTTATCTGAGCAGCTGGAGGACCACATGGGCTTATATGGCGTGGGGTACATGTTCCTGTAGCCTTGTCCCTGGCACCTGCCAAAATAGCAGCCAACACCCCCCACCCCCACCGCCATCCCCCTGCCCCACCCGTCCCCTGTCGCACATTCCTCCCTCCGCAGGGCTGGCTCACCAGGCCCCAGCCCACATGCCTGCTTAAAGCCCTCTCCATCCTCTGCCTCACCCAGT	33
Промотор сердечного тропонина Т человека (с экзоном 1, подчеркнут) hTnnT2 / HTNNT2	CTCAGTCCATTAGGAGCCAGTAGCCTGGAAGATGTCTTTACCCCCAGCATCAGTTCAAGTGGAGCAGCACATAACTCTTGCCCTCTGCCTTCCAAGATTCTGGTGCTGAGACTTATGGAGTGTCTTGGAGGTTGCCTTCTGCCCCCCAACCCTGCTCCCAGCTGGCCCTCCCAGGCCTGGGTTGCTGGCCTCTGCTTTATCAGGATTCTCAAGAGGGACAGCTGGTTTATGTTGCATGACTGTTCCCTGCATATCTGCTCTGGTTTTAAATAGCTTATCTGAGCAGCTGGAGGACCACATGGGCTTATATGGCGTGGGGTACATGTTCCTGTAGCCTTGTCCCTGGCACCTGCCAAAATAGCAGCCAACACCCCCCACCCCCACCGCCATCCCCCTGCCCCACCCGTCCCCTGTCGCACATTCCTCCCTCCGCAGGGCTGGCTCACCAGGCCCCAGCCCACATGCCTGCTTAAAGCCCTCTCCATCCTCTGCCTCACCCAGTCCCCGCTGAGACTGAGCAGACGCCTCCAGGATCTGTCGGCAG	32
Промотор тяжелой цепи α-сердечного миозина мыши (αMHC)	GGTACCGGATCCTGCAAGGTCACACAAGGGTCTCCACCCACCAGGTGCCCTAGTCTCAATTTCAGTTTCCATGCCTTGTTCTCACAATGCTGGCCTCCCCAGAGCTAATTTGGACTTTGTTTTTATTTCAAAAGGGCCTGAATGAGGAGTAGATCTTGTGCTACCCAGCTCTAAGGGTGCCCGTGAAGCCCTCAGACCTGGAGCCTTTGCAACAGCCCTTTAGGTGGAAGCAGAATAAAGCAATTTTCCTTAAAGCCAAAATCCTGCCTCTAGACTCTTCTTCTCTGACCTCGGTCCCTGGGCTCTAGGGTGGGGAGGTGGGGCTTGGAAGAAGAAGGTGGGGAAGTGGCAAAAGCCGATCCCTAGGGCCCTGTGAAGTTCGGAGCCTTCCCTGTACAGCACTGGCTCATAGATCCTCCTCCAGCCAAACATAGCAAGAAGTGATACCTCCTTTGTGACTTCCCCAGGCCCAGTACCTGTCAGGTTGAAACAGGATTTAGAGAAGCCTCTGAACTCACCTGAACTCTGAAGCTCATCCACCAAGCAAGCACCTAGGTGCCACTGCTAGTTAGTATCCTACGCTGATAATATGCAGAGCTGGGCCACAGAAGTCCTGGGGTGTAGGAACTGACCAGTGACTTTTCAGTCGGCAAAGGTATGACCCCCTCAGCAGATGTAGTAATGTCCCCTTAGATCCCATCCCAGGCAGGTCTCTAAGAGGACATGGGATGAGAGATGTAGTCATGTGGCATTCCAAACACAGCTATCCACAGTGTCCCTTGCCCCTTCCACTTAGCCAGGAGGACAGTAACCTTAGCCTATCTTTCTTCCTCCCCATCCTCCCAGGACACACCCCCTGGTCTGCAGTATTCATTTCTTCCTTCACGTCCCCTCTGTGACTTCCATTTGCAAGGCTTTTGACCTCTGCAGCTGCTGGAAGATAGAGTTTGGCCCTAGGTGTGGCAAGCCATCTCAAGAGAAAGCAGACAACAGGGGGACCAGATTTTGGAAGGATCAGGAACTAAATCACTGGCGGGCCTGGGGGTAGAAAAAAGAGTGAGTGAGTCCGCTCCAGCTAAGCCAAGCTAGTCCCCGAGATACTCTGCCACAGCTGGGCTGCTCGGGGTAGCTTTAGGAATGTGGGTCTGAAAGACAATGGGATTGGAAGACATCTCTTTGAGTCTCCCCTCAACCCCACCTACAGACACACTCGTGTGTGGCCAGACTCCTGTTCAACAGCCCTCTGTGTTCTGACCACTGAGCTAGGCAACCAGAGCATGGGCCCTGTGCTGAGGATGAAGAGTTGGTTACCAATAGCAAAAACAGCAGGGGAGGGAGAACAGAGAACGAAATAAGGAAGGAAGAAGGAAAGGCCAGTCAATCAGATGCAGTCAGAAGAGATGGGAAGCCAACACACAGCTTGAGCAGAGGAAACAGAAAAGGGAGAGATTCTGGGCATAAGGAGGCCACAGAAAGAAGAGCCCAGGCCCCCCAAGTCTCCTCTTTATACCCTCATCCCGTCTCCCAATTAAGCCCACTCTTCTTCCTAGATCAGACCTGAGCTGCAGCGAAGAGACCCGTAGGGAGGATCACACTGGATGAAGGAGATGTGTGGAGAAGTCCAGGGAACCTAAGAGCCAGAGCCTAAAAGAGCAAGAGATAAAGGTGCTTCAAAGGTGGCCAGGCTGTGCACACAGAGGGTCGAGGACTGGTGGTAGAGCCTCAAGATAAGGATGATGCTCAGAATGGGCGGGGGGGGGGATTCTGGGGGGGGGAGAGAGAAGGTGAGAAGGAGCCTGGAACAGAGAATCTGGAAGCGCTGGAAACGATACCATAAAGGGAAGAACCCAGGCTACCTTTAGATGTAAATCATGAAAGACAGGGAGAAGGGAAGCTGGAGAGAGTAGAAGGACCCCGGGGCAAGACATTGAAGCAAGGACAAGCCAGGTTGAGCGCTCCGTGAAATCAGCCTGCTGAAGGCAGAGCCCTGGTATGAGCACCAGAACAGCAGAGGCTAGGGTTAATGTCGAGACAGGGAACAGAAGGTAGACACAGGAACAGACAGAGACGGGGGAGCCAGGTAACAAAGGAATGGTCCTTCTCACCTGTGGCCAGAGCGTCCATCTGTGTCCACATACTCTAGAATGTTCATCAGACTGCAGGGCTGGCTTGGGAGGCAGCTGGAAAGAGTATGTGAGAGCCAGGGGAGACAAGGGGGCCTAGGAAAGGAAGAAGAGGGCAAACCAGGCCACACAAGAGGGCAGAGCCCAGAACTGAGTTAACTCCTTCCTTGTTGCATCTTCCATAGGAGGCAGTGGGAACTCTGTGACCACCATCCCCCATGAGCCCCCACTACCCATACCAAGTTTGGCCTGAGTGGCATTCTAGGTTCCCTGAGGACAGAGCCTGGCCTTTGTCTCTTGGACCTGACCCAAGCTGACCCAATGTTCTCAGTACCTTATCATGCCCTCAAGAGCTTGAGAACCAGGCAGTGACATATTAGGCCATGGGCTAACCCTGGAGCTTGCACACAGGAGCCTCAAGTGACCTCCAGGGACACAGCTGCAGACAGGTGGCCTTTATCCCCAAAGAGCAACCATTTGGCATAGGTGGCTGCAAATGGGAATGCAAGGTTGAATCAGGTCCCTTCAAGAATACTGCATGCAAGACCTAAGACCCCTGGAGAGAGGGGTATGCTCCTGCCCCCACCCACCATAAGGGGAGTGAACTATCCTAGGGGGCTGGCGACCTTGGGGAGACACCACATTACTGAGAGTGCTGAGCCCAGAAAAACTGACCGCCCTGTGTCCTGCCCACCTCCACACTCTAGAGCTATATTGAGAGGTGACAGTAGATAGGGTGGGAGCTGGTAGCAGGGAGAGTGTTCCTGGGTGTGAGGGTGTAGGGGAAAGCCAGAGCAGGGGAGTCTGGCTTTGTCTCCTGAACACAATGTCTACTTAGTTATAACAGGCATGACCTGCTAAAGACCCAACATCTACGACCTCTGAAAAGACAGCAGCCCTGGAGGACAGGGGTTGTCTCTGAGCCTTGGGTGCTTGATGGTGCCACAAAGGAGGGCATGAGTGTGAGTATAAGGCCCCAGGAGCGTTAGAGAAGGGCACTTGGGAAGGGGTCAGTCTGCAGAGCCCCTATCCATGGAATCTGGAGCCTGGGGCCAACTGGTGTAAATCTCTGGGCCTGCCAGGCATTCAAAGCAGCACCTGCATCCTCTGGCAGCCTGGGGAGGCGGAAGGGAGCAACCCCCCACTTATACCCTTTCTCCCTCAGCCCCAGGATTAACACCTCTGGCCTTCCCCCTTCCCACCTCCCATCAGGAGTGGAGGGTTGCAGAGGGAGGGTAAAAACCTACATGTCCAAACATCATGGTGCACGATATATGGATCAGTATGTGTAGAGGCAAGAAAGGAAATCTGCAGGCTTAACTGGGTTAATGTGTAAAGTCTGTGTGCATGTGTGTGTGTCTGACTGAAAACGGGCATGGCTGTGCAGCTGTTCAGTTCTGTGCGTGAGGTTACCAGACTGCAGGTTTGTGTGTAAATTGCCCAAGGCAAAGTGGGTGAATCCCTTCCATGGTTTAAAGAGATTGGATGATGGCCTGCATCTCAAGGACCATGGAAAATAGAATGGACACTCTATATGTGTCTCTAAGCTAAGGTAGCAAGGTCTTTGGAGGACACCTGTCTAGAGATGTGGGCAACAGAGACTACAGACAGTATCTGTACAGAGTAAGGAGAGAGAGGAGGGGGTGTAGAATTCTCTTACTATCAAAGGGAAACTGAGTCGTGCACCTGCAAAGTGGATGCTCTCCCTAGACATCATGACTTTGTCTCTGGGGAGCCAGCACTGTGGAACTTCAGGTCTGAGAGAGTAGGAGGCTCCCCTCAGCCTGAAGCTATGCAGATAGCCAGGGTTGAAAGGGGGAAGGGAGAGCCTGGGATGGGAGCTTGTGTGTTGGAGGCAGGGGACAGATATTAAGCCTGGAAGAGAAGGTGACCCTTACCCAGTTGTTCAACTCACCCTTCAGATTAAAAATAACTGAGGTAAGGGCCTGGGTAGGGGAGGTGGTGTGAGACGCTCCTGTCTCTCCTCTATCTGCCCATCGGCCCTTTGGGGAGGAGGAATGTGCCCAAGGACTAAAAAAAGGCCATGGAGCCAGAGGGGCGAGGGCAACAGACCTTTCATGGGCAAACCTTGGGGCCCTGCTGTCCTCCTGTCACCTCCAGAGCCAAGGGATCAAAGGAGGAGGAGCCAGGACAGGAGGGAAGTGGGAGGGAGGGTCCCAGCAGAGGACTCCAAATTTAGGCAGCAGGCATATGGGATGGGATATAAAGGGGCTGGAGCACTGAGAGCTGTCAGAGATTTCTCCAACCCAGGTAAGAGGGAGTTTCGGGTGGGGGCTCTTCACCCACACCAGACCTCTCCCCACCTAGAAGGAAACTGCCTTTCCTGGAAGTGGGGTTCAGGCCGGTCAGAGATCTGACAGGGTGGCCTTCCACCAGCCTGGGAAGTTCTCAGTGGCAGGAGGTTTCCACAAGAAACACTGGATGCCCCTTCCCTTACGCTGTCTTCTCCATCTTCCTCCTGGGGATGCTCCTCCCCGTCTTGGTTTATCTTGGCTCTTCGTCTTCAGCAAGATTTGCCCTGTGCTGTCCACTCCATCTTTCTCTACTGTCTCCGTGCCTTGCCTTGCCTTCTTGCGTGTCCTTCCTTTCCACCCATTTCTCACTTCACCTTTTCTCCCCTTCTCATTTGTATTCATCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTTCTCCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTTCCTGTGTCAGAGTGCTGAGAATCACACCTGGGGTTCCCACCCTTATGTAAACAATCTTCCAGTGAGCCACAGCTTCAGTGCTGCTGGGTGCTCTCTTACCTTCCTCACCCCCTGGCTTGTCCTGTTCCATCCTGGTCAGGATCTCTAGATTGGTCTCCCAGCCTCTGCTACTCCTCTTCCTGCCTGTTCCTCTCTCTGTCCAGCTGCGCCACTGTGGTGCCTCGTTCCAGCTGTGGTCCACATTCTTCAGGATTCTCTGAAAAGTTAACCAGGTGAGAATGTTTCCCCTGTAGACAGCAGATCACGATTCTCCCGGAAGTCAGGCTTCCAGCCCTCTCTTTCTCTGCCCAGCTGCCCGGCACTCTTAGCAAACCTCAGGCACCCTTACCCCACATAGACCTCTGACAGAGAAGCAGGCACTTTACATGGAGTCCTGGTGGGAGAGCCATAGGCTACGGTGTAAAAGAGGCAGGGAAGTGGTGGTGTAGGAAAGTCAGGACTTCACATAGAAGCCTAGCCCACACCAGAAATGACAGACAGATCCCTCCTATCTCCCCCATAAGAGTTTGAGTCGACCCGCGGCCCCGAATTG	34
Промотор сердечного тропонина Т курицы (cTnT)	GGGATAAAAGCAGTCTGGGCTTTCACATGACAGCATCTGGGGCTGCGGCAGAGGGTCGGGTCCGAAGCGCTGCCTTATCAGCGTCCCCAGCCCTGGGAGGTGACAGCTGGCTGGCTTGTGTCAGCCCCTCGGGCACTCACGTATCTCCGTCCGACGGGTTTAAAATAGCAAAACTCTGAGGCCACACAATAGCTTGGGCTTATATGGGCTCCTGTGGGGGAAGGGGGAGCACGGAGGGGGCCGGGGCCGCTGCTGCCAAAATAGCAGCTCACAAGTGTTGCATTCCTCTCTGGGCGCCGGGCACATTCCTGCTGGCTCTGCCCGCCCCGGGGTGGGCGCCGGGGGGACCTTAAAGCCTCTGCCCCCCAAGGAGCCCTTCCCAGACAGCCGCCGGCACCCACCGCTCCGTGGGA	35
Креатинкиназа М человека (hCKM)	CTCTCAGCCCTGGAAGTCCTTGCTCACAGCCGAGGCGCCGAGAGCGCTTGCTCTGCCCAGATCTGCGCGAGTCTGGCGCCCGCGCTCTGAACGGCGTCGCTGCCCAGCCCCCTTCCCCGGGAGGTGGGAGCGGCCACCCAGGGCCCCGTGGCTGCCCTTGTAAGGAGGCGAGGCCCGAGGACACCCGAGACGCCCGGTTATAATTAACCAGGACACGTGGCGAACCCCCCTCCAACACCTGCCCCCGAACCCCCCCATACCCAGCGCCTCGGGTCTCGGCCTTTGCGGCAGAGGAGACAGCAAAGCGCCCTCTAAAAATAACTCCTTTCCCGGCGACCGAGACCCTCCCTGTCCCCCGCACAGCGGAAATCTCCCAGTGGCACCGAGGGGGCGAGGGTTAAGTGGGGGGGAGGGTGACCACCGCCTCCCACCCTTGCCCTGAGTTTGAATCTCTCCAACTCAGCCAGCCTCAGTTTCCCCTCCACTCAGTCCCTAGGAGGAAGGGGCGCCCAAGCGCGGGTTTCTGGGGTTAGACTGCCCTCCATTGCAATTGGTCCTTCTCCCGGCCTCTGCTTCCTCCAGCTCACAGGGTATCTGCTCCTCCTGGAGCCACACCTTGGTTCCCCGAGGTGCCGCTGGGACTCGGGTAGGGGTGAGGGCCCAGGGGGCACAGGGGGAGCCGAGGGCCACAGGAAGGGCTGGTGGCTGAAGGAGACTCAGGGGCCAGGGGACGGTGGCTTCTACGTGCTTGGGACGTTCCCAGCCACCGTCCCATGTTCCCGGCGGGGGGCCAGCTGTCCCCACCGCCAGCCCAACTCAGCACTTGGTCAGGGTATCAGCTTGGTGGGGGGGCGTGAGCCCAGCCCCTGGGGCGGCTCAGCCCATACAAGGCCATGGGGCTGGGCGCAAAGCATGCCTGGGTTCAGGGTGGGTATGGTGCGGGAGCAGGGAGGTGAGAGGCTCAGCTGCCCTCCAGAACTCCTCCCTGGGGACAACCCCTCCCAGCCAATAGCACAGCCTAGGTCCCCCTATATAAGGCCACGGCTGCTGGCCCTTCCTTTGGGTCAGTGTCACCTCCAGGATACAGACA	36
Бета-актин человека (HuBa)	GCCCAGCACCCCAAGGCGGCCAACGCCAAAACTCTCCCTCCTCCTCTTCCTCAATCTCGCTCTCGCTCTTTTTTTTTTTCGCAAAAGGAGGGGAGAGGGGGTAAAAAAATGCTGCACTGTGCGGCGAAGCCGGTGAGTGAGCGGCGCGGGGCCAATCAGCGTGCGCCGTTCCGAAAGTTGCCTTTTATGGCTCGAGCGGCCGCGGCGGCGCCCTATAAAACCCAGCGGCGCGACGCGCCACCACCGCCGAGTC	37
Бета-актин курицы (CBA)	GGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGA	38
Цитомегаловирус (CMV)	TGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCG	39
Цитомегаловирус (CMV) (вторая версия)	TAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGT	40
Цитомегаловирус (CMV) (третья версия)	CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCT	41
Промотор CAG (первая версия)	ACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGG	42
Промотор CAG (вторая версия)	CGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG	43
EF1-альфа человека (EF1-α)	CAACCTTTGGAGCTAAGCCAGCAATGGTAGAGGGAAGATTCTGCACGTCCCTTCCAGGCGGCCTCCCCGTCACCACCCCCCCCAACCCGCCCCGACCGGAGCTGAGAGTAATTCATACAAAAGGACTCGCCCCTGCCTTGGGGAATCCCAGGGACCGTCGTTAAACTCCCACTAACGTAGAACCCAGAGATCGCTGCGTTCCCGCCCCCTCACCCGCCCGCTCTCGTCATCACTGAGGTGGAGAATAGCATGCGTGAGGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGAGAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACGGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCGTGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTT	44
Синапсин1 (Syn) человека, короткая версия	AGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTC	45
Синапсин1 (Syn) человека с 3′ удлинением	AGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAG	46
Синапсин1 (Syn) человека с 5′ удлинением	CTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTC	47
CamKIIa человека (CaMKIIa)	ACTTGTGGACAAAGTTTGCTCTATTCCACCTCCTCCAGGCCCTCCTTGGGTCCATCACCCCAGGGGTGCTGGGTCCATCCCACCCCCAGGCCCACACAGGCTTGCAGTATTGTGTGCGGTATGGTCAGGGCGTCCGAGAGCAGGTTTCGCAGTGGAAGGCAGGCAGGTGTTGGGGAGGCAGTTACCGGGGCAACGGGAACAGGGCGTTTTGGAGGTGGTTGCCATGGGGACCTGGATGCTGACGAAGGCTCGCGAGGCTGTGAGCAGCCACAGTGCCCTGC	48
Промотор eSYN	GACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTCGCGACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGG	49

В предпочтительном варианте осуществления векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентична SEQ ID NO: 31. В предпочтительном варианте осуществления векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентична SEQ ID NO: 32. В предпочтительном варианте осуществления векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, или 100% идентична SEQ ID NO: 33.

Дополнительными иллюстративными примерами промоторов являются поздний промотор SV40 из обезьяньего вируса 40, энхансерный/промоторный элемент полиэдра бакуловируса, промотор гена тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSV tk), предранний промотор цитомегаловируса (CMV) и различные ретровирусные промоторы, в том числе LTR-элементы. Известно большое разнообразие других промоторов, и они общедоступны в данной области техники, а последовательности многих таких промоторов доступны в базах данных последовательностей, таких как база данных GenBank.

Другие регуляторные элементы

В некоторых случаях векторы по настоящему изобретению дополнительно содержат один или несколько регуляторных элементов, выбранных из группы, состоящей из энхансера, интрона, поли-А-сигнала, последовательности, кодирующей пептид 2А, WPRE (посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита Вудчака) и HPRE (посттранскрипционный регуляторный элемент гепатита В).

В некоторых вариантах осуществления вектор содержит энхансер CMV.

В определенных вариантах осуществления векторы содержат один или несколько энхансеров. В отдельных вариантах осуществления энхансер представляет собой энхансерную последовательность CMV, энхансерную последовательность GAPDH, энхансерную последовательность гена β-актина или энхансерную последовательность EF1-α. Вышеизложенные последовательности известны в данной области техники. Например, последовательность предраннего (IE) энхансера CMV является следующей:

ACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCA

(SEQ ID NO: 50).

В определенных вариантах осуществления векторы содержат один или несколько интронов. В отдельных вариантах осуществления интрон представляет собой последовательность интрона глобина кролика, последовательность интрона β-актина курицы, последовательность синтетического интрона, последовательность интрона SV40 или последовательность интрона EF1-α.

В определенных вариантах осуществления векторы содержат полиA-последовательность. В отдельных вариантах осуществления полиА-последовательность представляет собой полиА-последовательность глобина кролика, полиА-последовательность гормона роста человека, полиА-последовательность гормона роста крупного рогатого скота, полиА-последовательность PGK, полиА-последовательность SV40 или полиА-последовательность ТК. В некоторых вариантах осуществления поли-А-сигнал может представлять собой сигнал полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bGHpA).

В определенных вариантах осуществления векторы содержат один или несколько элементов, стабилизирующих транскрипт. В отдельных вариантах осуществления элемент, стабилизирующий транскрипт, представляет собой последовательность WPRE, последовательность HPRE, область прикрепления к ядерному скелету, 3'-UTR или 5'-UTR. В отдельных вариантах осуществления векторы содержат как 5'-UTR, так и 3'-UTR.

В некоторых вариантах осуществления вектор содержит 5'-нетранслируемую область (UTR), выбранную из таблицы 4. В некоторых вариантах осуществления векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 51—61.

Таблица 4

5'-НЕТРАНСЛИРУЕМАЯ ОБЛАСТЬ	ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ	SEQ ID NO:
Экзон/интрон бета-актина человека	CGCGTCCGCCCGCGAGCACAGAGCCTCGCCTTTGCCGATCCGCCGCCCGTCCACACCCGCCGCCAGGTAAGCCCGGCCAGCCGACCGGGGCATGCGGCCGCGGCCCTTCGCCCGTGCAGAGCCGCCGTCTGGGCCGCAGCGGGGGGCGCATGGGGCGGAACCGGACCGCCGTGGGGGGCGCGGGAGAAGCCCCTGGGCCTCCGGAGATGGGGGACACCCCACGCCAGTTCGCAGGCGCGAGGCCGCGCTCGGGCGGGCGCGCTCCGGGGGTGCCGCTCTCGGGGCGGGGGCAACCGGCGGGGTCTTTGTCTGAGCCGGGCTCTTGCCAATGGGGATCGCACGGTGGGCGCGGCGTAGCCCCCGTCAGGCCCGGTGGGGGCTGGGGCGCCATGCGCGTGCGCGCTGGTCCTTTGGGCGCTAACTGCGTGCGCGCTGGGAATTGGCGCTAATTGCGCGTGCGCGCTGGGACTCAATGGCGCTAATCGCGCGTGCGTTCTGGGGCCCGGGCGCTTGCGCCACTTCCTGCCCGAGCCGCTGGCGCCCGAGGGTGTGGCCGCTGCGTGCGCGCGCGCGACCCGGTCGCTGTTTGAACCGGGCGGAGGCGGGGCTGGCGCCCGGTTGGGAGGGGGTTGGGGCCTGGCTTCCTGCCGCGCGCCGCGGGGACGCCTCCGACCAGTGTTTGCCTTTTATGGTAATAACGCGGCCGGCCCGGCTTCCTTTGTCCCCAATCTGGGCGCGCGCCGGCGCCCCCTGGCGGCCTAAGGACTCGGCGCGCCGGAAGTGGCCAGGGCGGCAGCGGCTGCTCTTGGCGGCCCCGAGGTGACTATAGCCTTCTTTTGTGTCTTGATAGTTCGCCAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTC	51
Экзон/интрон бета-актина курицы + интрон глобина кролика	GTCGCTGCGCGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTC	52
Последовательность химерного интрона	GGTAAGTTTAGTCTTTTTGTCTTTTATTTCAGGTCCCGGATCCGGTGGTGGTGCAAATCAAAGAACTGCTCCTCAGTGGATGTTGCCTTTACTTCTAGGCCTGTACGGAAGTGTTACTTCTGCTCTAAAAGCTGCGGAATTGTACCCGC	53
5'-UTR-Syn1 Hs	AGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGCTGTGCTCCTGGGCACCGCGCAGTCCGCCCCCGCGGCTCCTGGCCAGACCACCCCTAGGACCCCCTGCCCCAAGTCGCA	54
IE экзон CMV	TCAGATCGCCTGGAGAGGCCATCCACGCTGTTTTGACCTCCATAGTGGACACCGGGACCGATCCAGCCTCCGCGGCCGGGAACGGTGCATTGGAACGCGGATTCCCCGTGCCAAGAGTGAC	55
TPL-eMLP (аденовирусный энхансерный элемент)	CTCACTCTCTTCCGCATCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGCTCGCGGTTGAGGACAAACTCTTCGCGGTCTTTCCAGTACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGCGAGTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAAGGTAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTGCTGCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGTCTTGAGACGGCGGATGGTCGAGGTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATTACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAG	56
Интрон/экзон Ef1-α человека	CTTTTTCGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGGTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTCCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTGGAGCCAGGGGCGGGCCTTGCGCTTTAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACGTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAGGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGCCCGCGGCCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTCCAGGGGGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTGGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGGCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAG	57
Интрон A EF1-α человека	GTAAGTGCCGTGTGTGGTTCCCGCGGGCCTGGCCTCTTTACGGGTTATGGCCCTTGCGTGCCTTGAATTACTTCCACCTGGCTGCAGTACGTGATTCTTGATCCCGAGCTTCGGGTTGGAAGTGGGTGGGAGAGTTCGAGGCCTTGCGCTTAAGGAGCCCCTTCGCCTCGTGCTTGAGTTGAGGCCTGGCCTGGGCGCTGGGGCCGCCGCGTGCGAATCTGGTGGCACCTTCGCGCCTGTCTCGCTGCTTTCGATAAGTCTCTAGCCATTTAAAATTTTTGATGACCTGCTGCGACGCTTTTTTTCTGGCAAGATAGTCTTGTAAATGCGGGCCAAGATCTGCACACTGGTATTTCGGTTTTTGGGGCCGCGGGCGGCGACGGGGCCCGTGCGTCCCAGCGCACATGTTCGGCGAGGCGGGGCCTGCGAGCGCGGCCACCGAGAATCGGACGGGGGTAGTCTCAAGCTGGCCGGCCTGCTCTGGTGCCTGGCCTCGCGCCGCCGTGTATCGCCCCGCCCTGGGCGGCAAGGCTGGCCCGGTCGGCACCAGTTGCGTGAGCGGAAAGATGGCCGCTTCCCGGCCCTGCTGCAGGGAGCTCAAAATGGAGGACGCGGCGCTCGGGAGAGCGGGCGGGTGAGTCACCCACACAAAGGAAAAGGGCCTTTCCGTCCTCAGCCGTCGCTTCATGTGACTCCACGGAGTACCGGGCGCCGTCCAGGCACCTCGATTAGTTCTCGAGCTTTTGGAGTACGTCGTCTTTAGGTTGGGGGGAGGGGTTTTATGCGATGGAGTTTCCCCACACTGAGTGGGTGGAGACTGAAGTTAGGCCAGCTTGGCACTTGATGTAATTCTCCTTGGAATTTGCCCTTTTTGAGTTTGGATCTTGGTTCATTCTCAAGCCTCAGACAGTGGTTCAAAGTTTTTTTCTTCCATTTCAG	58
5’-UTR CamKIIa человека	TCAGAAGCCCCGGGCTCGTCAGTCAAACCGGTTCTCTGTTTGCACTCGGCAGCACGGGCAGGCAAGTGGTCCCTAGGTTCGGG	59
Интрон Β-глобина	GTGAGTCTATGGGACCCTTGATGTTTTCTTTCCCCTTCTTTTCTATGGTTAAGTTCATGTCATAGGAAGGGGAGAAGTAACAGGGTACACATATTGACCAAATCAGGGTAATTTTGCATTTGTAATTTTAAAAAATGCTTTCTTCTTTTAATATACTTTTTTGTTTATCTTATTTCTAATACTTTCCCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAATAATGATACAATGTATCATGCCTCTTTGCACCATTCTAAAGAATAACAGTGATAATTTCTGGGTTAAGGCAATAGCAATATTTCTGCATATAAATATTTCTGCATATAAATTGTAACTGATGTAAGAGGTTTCATATTGCTAATAGCAGCTACAATCCAGCTACCATTCTGCTTTTATTTTATGGTTGGGATAAGGCTGGATTATTCTGAGTCCAAGCTAGGCCCTTTTGCTAATCATGTTCATACCTCTTATCTTCCTCCCACAG	60
Интрон SV40	TCTAGAGGATCCGGTACTCGAGGAACTGAAAAACCAGAAAGTTAACTGGTAAGTTTAGTCTTTTTGTCTTTTATTTCAGGTCCCGGATCCGGTGGTGGTGCAAATCAAAGAACTGCTCCTCAGTGGATGTTGCCTTTACTTCTAGGCCTGTACGGAAGTGTTACTTCTGCTCTAAAAGCTGCGGAATTGTACCCGC	61

В некоторых вариантах осуществления вектор содержит 3'-нетранслируемую область, выбранную из таблицы 5. В некоторых вариантах осуществления векторный геном содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 62—70.

Таблица 5

3'-НЕТРАНСЛИРУЕМАЯ ОБЛАСТЬ	ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ	SEQ ID NO:
WPRE(x) (мутантный регуляторный элемент гепатита сурков — версия 1)	AATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGC	62
WPRE(x) (мутантный регуляторный элемент гепатита сурков — версия 2)	TCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCA	63
WPRE(x) (мутантный регуляторный элемент гепатита сурков — версия 3)	TTCCTGTTAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGGTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTGCTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCATTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCACGGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGCTGACGTCCTTTCCGCGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCCTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCCATGTATCTTTTTCACCTGTGCCTTGTTTTTGCCTGTGTTCCGCGTCCTACTTTTCAAGCCTCCAAGCTGTGCCTTGGGCGGCTTTGGGGCATGGACATAGATCCCTATAAAGAATTTGGTTCATCTTATCAGTTGTTGAATTTTCTTCCTTTGGAC	64
CAAX	TGTGTGATAATG	65
EES	CTGTTCTCATCACATCATATCAAGGTTATATACCATCAATATTGCCACAGATGTTACTTAGCCTTTTAATATTTCTCTAATTTAGTGTATATGCAATGATAGTTCTCTGATTTCTGAGATTGAGTTTCTCATGTGTAATGATTATTTAGAGTTTCTCTTTCATCTGTTCAAATTTTTGTCTAGTTTTATTTTTTACTGATTTGTAAGACTTCTTTTTATAATCTGCATATTACAATTCTCTTTACTGGGGTGTTGCAAATATTTTCTGTCATTCTATGGCCTGACTTTTCTTAATGGTTTTTTAATTTTAAAAATAAGTCTTAATATTCATGCAATCTAATTAACAATCTTTTCTTTGTGGTTAGGACTTTGAGTCATAAGAAATTTTTCTCTACACTGAAGTCATGATGGCATGCTTCTATATTATTTTCTAAAAGATTTAAAGTTTTGCCTTCTCCATTTAGACTTATAATTCACTGGAATTTTTTTGTGTGTATGGTATGACATATGGGTTCCCTTTTATTTTTTACATATAAATATATTTCCCTGTTTTTCTAAAAAAGAAAAAGATCATCATTTTCCCATTGTAAAATGCCATATTTTTTTCATAGGTCACTTACATATATCAATGGGTCTGTTTCTGAGCTCTACTCTATTTTATCAGCCTCACTGTCTATCCCCACACATCTCATGCTTTGCTCTAAATCTTGATATTTAGTGGAACATTCTTTCCCATTTTGTTCTACAAGAATATTTTTGTTATTGTCTTTGGGCTTTCTATATACATTTTGAAATGAGGTTGACAAGTTA	66
HPRE	ATAACAGGCCTATTGATTGGAAAGTTTGTCAACGAATTGTGGGTCTTTTGGGGTTTGCTGCCCCTTTTACGCAATGTGGATATCCTGCTTTAATGCCTTTATATGCATGTATACAAGCAAAACAGGCTTTTACTTTCTCGCCAACTTACAAGGCCTTTCTCAGTAAACAGTATATGACCCTTTACCCCGTTGCTCGGCAACGGCCTGGTCTGTGCCAAGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCTTGGCCATAGGCCATCAGCGCATGCGTGGAACCTTTGTGTCTCCTCTGCCGATCCATACTGCGGAACTCCTAGCCGCTTGTTTTGCTCGCAGCAGGTCTGGAGCAAACCTCATCGGGACCGACAATTCTGTCGTACTCTCCCGCAAGTATACATCGTTTCCATGGCTGCTAGGCTGTGCTGCCAACTGGATCCTGCGCGGGACGTCCTTTGTTTACGTCCCGTCGGCGCTGAATCCCGCGGACGACCCCTCCCGGGGCCGCTTGGGGCTCTACCGCCCGCTTCTCCGTCTGCCGTACCGTCCGACCACGGGGCGCACCTCTCTTTACGCGGACTCCCCGTCTGTGCCTTCTCATCTGCCGGACCGTGTGCACTTCGCTTCACCTCTGCACGTCGCATGGAGGCCACCGTGAACGCCCACCGGAACCTGCCCAAGGTCTTGCATAAGAGGACTCTTGGACTTTCAGCAATGTCATC	67
R2V17 (энхансерный элемент, полученный из HepB)	TTCCTGTAAACAGGCCTATTGATTGGAAAGTTTGTCAACGAATTGTGGGTCTTTTGGGGTTTGCTGCCCCTTTTACGCAATGTGGATATCCTGCTTTAATGCCTTTATATGCATGTATACAAGCAAAACAGGCTTTTACTTTCTCGCCAACTTACAAGGCCTTTCTCAGTAAACAGTATATGACCCTTTACCCCGTTGCTCGGCAACGGCCTGGTCTGTGCCAAGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCTTGGCCATAGGCCATCAGCGCATGCGTGGAACCTTTGTGTCTCCTCTGCCGATCCATACTGCGGAACTCCTAGCCGCTTGTTTTGCTCGCAGCTGGACTGGAGCAAACCTCATCGGGACCGACAATTCTGTCGTACTCTCCCGCAAGCACTCACCGTTTCCGCGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGATTCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATCCAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCTCTTCCGCCTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTTTGGGCCGCCTCCCCGCCCATGTATCTTTTTCACCTGTGCCTTGTTTTTGCCTGTGTTCCGCGTCCTACTTTTCAAGCCTCCAAGCTGTGCCTTGGGCGGCTTTGGGGCATGGACATAGATCCCTATAAAGAATTTGGTTCATCTTATCAGTTGTTGAATTTTCTTCCTTTGGAC	68
3’-UTR (глобина)	GCTGGAGCCTCGGTAGCCGTTCCTCCTGCCCGCTGGGCCTCCCAACGGGCCCTCCTCCCCTCCTTGCACCGGCCCTTCCTGGTCTTTGAATAAA	69
WPRE(r)	ATTCGAGCATCTTACCGCCATTTATTCCCATATTTGTTCTGTTTTTCTTGATTTGGGTATACATTTAAATGTTAATAAAACAAAATGGTGGGGCAATCATTTACATTTTTAGGGATATGTAATTACTAGTTCAGGTGTATTGCCACAAGACAAACATGTTAAGAAACTTTCCCGTTATTTACGCTCTGTTCCTGTTAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTGATATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTGTGTGGATATGCTGCTTTAATGCCTCTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTACGGCTTTCGTTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGGAGTTGTGGCCCGTTGTCCGTCAACGTGGCGTGGTGTGCTCTGTGTTTGCTGACGCAACCCCCACTGGCTGGGGCATTGCCACCACCTGTCAACTCCTTTCTGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCGATCGCCACGGCAGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGGGCTAGGTTGCTGGGCACTGATAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAAGGGCC	70

В некоторых вариантах осуществления вектор содержит сигнал полиаденилирования (полиА), выбранный из таблицы 6. В некоторых вариантах осуществления полиА-сигнал содержит полинуклеотидную последовательность, которая на по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентична любой из SEQ ID NO: 71—75.

Таблица 6

УЧАСТОК ПОЛИ-АДЕНИЛИРОВАНИЯ	ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ	SEQ ID NO:
Глобин кролика (pAGlobin-Oc)	TGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGAACATATGGGAGGGCAAATCATTTAAAACATCAGAATGAGTATTTGGTTTAGAGTTTGGCAACATATGCCCATATGCTGGCTGCCATGAACAAAGGTTGGCTATAAAGAGGTCATCAGTATATGAAACAGCCCCCTGCTGTCCATTCCTTATTCCATAGAAAAGCCTTGACTTGAGGTTAGATTTTTTTTATATTTTGTTTTGTGTTATTTTTTTCTTTAACATCCCTAAAATTTTCCTTACATGTTTTACTAGCCAGATTTTTCCTCCTCTCCTGACTACTCCCAGTCATAGCTGTCCCTCTTCTCTTATGGAGATC	71
Гормон роста крупного рогатого скота (pAGH-Bt — версия 1)	TTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAATACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGGTACCCAGGTGCTGAAGAATTGACCCGGTTCCTCCTGGG	72
Гормон роста крупного рогатого скота (pAGH-Bt — версия 2)	TTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGGTACCCAGGTGCTGAAGAATTGACCCGGTTCCTCCTGGG	73
Гормон роста крупного рогатого скота (pAGH-Bt — версия 3)	CTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGG	74
Гормон роста человека (pAGH-Hs)	CTGCCCGGGTGGCATCCCTGTGACCCCTCCCCAGTGCCTCTCCTGGCCCTGGAAGTTGCCACTCCAGTGCCCACCAGCCTTGTCCTAATAAAATTAAGTTGCATCATTTTGTCTGACTAGGTGTCCTTCTATAATATTATGGGGTGGAGGGGGGTGGTATGGAGCAAGGGGCCCAAGTTGGGAAGAAACCTGTAGGGCCTGC	75

Иллюстративные векторные геномы изображены на фиг. 1—4 и представлены под SEQ ID NO: 12—15. Кассета экспрессии каждой последовательности, выделенная заглавными буквами, представлена под SEQ ID NO: 8—11. В некоторых вариантах осуществления векторный геном содержит, фактически состоит из или состоит из полинуклеотидной последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 8—11, необязательно с последовательностями ITR в нижнем регистре или без них. Кодирующая последовательность выделена заглавными буквами.

Вектор на основе аденоассоциированного вируса

Аденоассоциированный вирус (AAV) представляет собой парвовирус с дефицитом репликации, одноцепочечный ДНК-геном которого имеет длину приблизительно 4,7 т. о., включая два инвертированных концевых повтора (ITR) длиной ~145 нуклеотидов. Существует несколько известных вариантов AAV, которые также иногда называют серотипами при классификации по антигенным эпитопам. Известны нуклеотидные последовательности геномов серотипов AAV. Например, полный геном AAV-1 представлен в GenBank под номером доступа NC_002077; полный геном AAV-2 представлен в GenBank под номером доступа NC_001401 и Srivastava et al., J. Virol., 45: 555-564 (1983); полный геном AAV-3 представлен в GenBank под номером доступа NC_1829; полный геном AAV-4 представлен в GenBank под номером доступа NC_001829; геном AAV-5 предоставлен в GenBank под номером доступа AF085716; полный геном AAV-6 представлен в GenBank под номером доступа NC_00 1862; по меньшей мере, части геномов AAV-7 и AAV-8 представлены в GenBank под номерами доступа AX753246 и AX753249 соответственно; геном AAV-9 представлен в Gao et al., J. Virol., 78: 6381-6388 (2004); геном AAV-10 представлен в Mol. Ther., 13(1): 67-76 (2006); а геном AAV-11 представлен в Virology, 330(2): 375-383 (2004). Последовательность генома AAVrh.74 представлена в патенте США 9434928, включенном в данный документ посредством ссылки. Цис-действующие последовательности, направляющие репликацию вирусной ДНК (rep), инкапсуляцию/упаковку и интеграцию хромосом клетки-хозяина, содержатся в ITR AAV. Три промотора AAV (названные p5, p19 и p40 по причине их относительного местоположения на карте) управляют экспрессией двух внутренних открытых рамок считывания AAV, кодирующих гены rep и cap. Два промотора rep (p5 и p19) в сочетании с дифференциальным сплайсингом одного интрона AAV (в нуклеотидах 2107 и 2227) приводят к продуцированию четырех белков rep (rep78, rep68, rep52 и rep40) из гена rep. Белки rep обладают множеством ферментативных свойств, которые в конечном итоге ответственны за репликацию вирусного генома. Ген cap экспрессируется под контролем промотора р40 и кодирует три капсидных белка: VP1, VP2 и VP3. Альтернативный сплайсинг и неконсенсусные участки начала трансляции ответственны за продукцию трех родственных капсидных белков. Единственный консенсусный участок полиаденилирования расположен в положении 95 карты генома AAV. Жизненный цикл и генетика AAV рассмотрены в Muzyczka, Current Topics in Microbiology and Immunology, 158: 97-129 (1992).

AAV обладает уникальными признаками, которые делают его привлекательным в качестве вектора для доставки чужеродной ДНК в клетки, например, при генной терапии. Инфекция AAV клеток в культуре не является цитопатической, а естественная инфекция людей и других животных протекает без проявлений и симптомов. Более того, AAV инфицирует многие клетки млекопитающих, что делает возможным нацеливание на множество различных тканей в условиях in vivo. Более того, AAV трансдуцирует медленно делящиеся и неделящиеся клетки и может сохраняться фактически в течение всего времени жизни этих клеток в виде транскрипционно-активной ядерной эписомы (внехромосомного элемента). Провирусный геном AAV вставляют в виде клонированной ДНК в плазмиды, что делает возможным построение рекомбинантных геномов. Кроме того, поскольку сигналы, направляющие репликацию AAV и инкапсуляцию генома, содержатся в ITR генома AAV, некоторые или все внутренние примерно 4,3 т. о. генома (кодирующие репликационные и структурные капсидные белки, rep-cap) можно заменить на чужеродную ДНК. Для получения векторов на основе AAV белки rep и cap могут быть представлены в транс-ориентации. Еще одним важным признаком AAV является то, что это чрезвычайно стабильный и активный вирус. Он легко выдерживает условия, используемые для инактивации аденовируса (от 56° до 65°C в течение нескольких часов), что делает менее критичным хранение AAV в холоде. AAV можно даже лиофилизировать. Наконец, инфицированные AAV клетки не устойчивы к суперинфекции.

Вирусные векторы для доставки генов, применимые при реализации на практике настоящего изобретения, можно построить с применением методологий, хорошо известных в области молекулярной биологии. Как правило, вирусные векторы, несущие трансгены, собирают из полинуклеотидов, кодирующих трансген, подходящих регуляторных элементов и элементов, необходимых для продукции вирусных белков, которые опосредуют трансдукцию клеток. Такие рекомбинантные вирусы можно получить с помощью методик, известных в данной области техники, например, путем трансфекции упаковывающих клеток или временной трансфекции хелперными плазмидами или вирусами. Типичные примеры клеток, упаковывающих вирус, включают без ограничения клетки HeLa, клетки SF9 (необязательно с бакуловирусным хелперным вектором), клетки 293 и т. д. Для получения векторов на основе AAV можно применять герпесвирусную систему, как описано в US20170218395A1. Подробные протоколы получения таких дефектных по репликации рекомбинантных вирусов можно найти, например, в WO95/14785, WO96/22378, патенте США № 5882877, патенте США № 6013516, патенте США № 4861719, патенте США № 5278056 и WO94/19478, полное содержание каждого из которых включено в данный документ посредством ссылки.

Векторы AAV, применимые при реализации на практике настоящего изобретения, можно упаковать в вирионы AAV (вирусные частицы) с применением различных систем, в том числе аденовирусных и систем без хелперов. Стандартные способы в биологии AAV включают способы, описанные Kwon и Schaffer. Pharm Res. (2008) 25(3):489-99; Wu et al. Mol. Ther. (2006) 14(3):316-27. Burger et al. Mol. Ther. (2004) 10(2):302-17; Grimm et al. Curr Gene Ther. (2003) 3(4):281-304; Deyle DR, Russell DW. Curr Opin Mol Ther. (2009) 11(4):442-447; McCarty et al. Gene Ther. (2001) 8(16):1248-54; и Duan et al. Mol Ther. (2001) 4(4):383-91. Системы без хелперов включали системы, описанные в US 6004797; US 7588772 и US 7094604;

ДНК AAV в геномах rAAV может происходить из любого варианта или серотипа AAV, для которого может быть получен рекомбинантный вирус, включая без ограничения следующие варианты или серотипы AAV: AAV-1, AAV-2, AAV-3, AAV-4, AAV-5, AAV-6, AAV-7, AAV-8, AAV-9, AAV- 10, AAV-11, AAV- 12, AAV-13 и AAVrh10. Получение псевдотипированного rAAV раскрыто, например, в WO 01/83692. Также предусмотрены другие типы вариантов rAAV, например, rAAV с мутациями в капсиде. См., например, Marsic et al., Molecular Therapy, 22(11): 1900-1909 (2014). Нуклеотидные последовательности геномов различных серотипов AAV известны из уровня техники.

В некоторых случаях rAAV содержит самокомплементарный геном. Как определено в данном документе, rAAV, содержащий «самокомплементарный» или «двухцепочечный» геном, относится к rAAV, который был сконструирован таким образом, что кодирующая область rAAV сконфигурирована для образования внутримолекулярной матрицы двухцепочечной ДНК, как описано в McCarty et al. Self-complementary recombinant adeno-associated virus (scAAV) vectors promote efficient transduction independently of DNA synthesis. Gene Therapy. 8 (16): 1248-54 (2001). В некоторых случаях в настоящем изобретении предусмотрено применение rAAV, содержащего самокомплементарный геном, поскольку при инфицировании (таком как трансдукция), а не при ожидании клеточно-опосредованного синтеза второй цепи генома rAAV, две комплементарные половины scAAV будут связываться с образованием одной единицы двухцепочечной ДНК (dsDNA), готовой к немедленной репликации и транскрипции. Следует понимать, что вместо полной кодирующей емкости, имеющей место у rAAV (4,7—6 т. о.), rAAV, содержащий самокомплементарный геном, может содержать лишь приблизительно половину данного количества (≈2,4 т. о.).

В других случаях вектор на основе rAAV содержит одноцепочечный геном. Как определено в данном документе, «отдельный стандартный» геном относится к геному, который не является самокомплементарным. В большинстве случаев нерекомбинантные AAV имеют одноцепочечные ДНК-геномы. Были некоторые указания на то, что для достижения эффективной трансдукции клеток rAAV должны представлять собой scAAV. Однако в настоящем изобретении предусмотрены векторы на основе rAAV, которые могут иметь одноцепочечные геномы, а не самокомплементарные геномы, при том понимании, что для получения оптимальной транскрипции гена в целевых клетках могут быть полезны и другие генетические модификации вектора на основе rAAV. В некоторых случаях настоящее изобретение относится к одноцепочечным векторам на основе rAAV, способным к эффективному переносу генов в передний сегмент глаза мыши. См. Wang et al. Single stranded adeno-associated virus achieves efficient gene transfer to anterior segment in the mouse eye. PLoS ONE 12(8): e0182473 (2017).

В некоторых случаях вектор на основе rAAV относится к серотипу AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13, AAVrh10 или AAVrh74. Получение псевдотипированного rAAV раскрыто, например, в WO 01/83692. Также предусмотрены другие типы вариантов rAAV, например, rAAV с мутациями в капсиде. См., например, Marsic et al., Molecular Therapy, 22(11): 1900-1909 (2014). В некоторых случаях вектор на основе rAAV относится к серотипу AAV9. В некоторых вариантах осуществления указанный вектор на основе rAAV относится к серотипу AAV9 и содержит одноцепочечный геном. В некоторых вариантах осуществления указанный вектор на основе rAAV относится к серотипу AAV9 и содержит самокомплементарный геном. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит последовательности инвертированных концевых повторов (ITR) из AAV2. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит геном AAV2, так что вектор на основе rAAV представляет собой вектор на основе AAV-2/9, вектор на основе AAV-2/6 или вектор на основе AAV-2/8.

Полноразмерные последовательности и последовательности капсидных генов для большинства известных AAV представлены в патенте США № 8524446, который включен в данный документ во всей своей полноте.

Векторы на основе AAV могут содержать последовательность AAV дикого типа или они могут содержать одну или несколько модификаций в последовательности AAV дикого типа. В определенных вариантах осуществления вектор на основе AAV содержит одну или несколько аминокислотных модификаций, например, замены, делеции или вставки в капсидном белке, например, VP1, VP2 и/или VP3. В отдельных вариантах осуществления модификация обеспечивает снижение иммуногенности при введении вектора на основе AAV субъекту.

Капсидные белки rAAV можно модифицировать таким образом, чтобы rAAV был нацелен на конкретную представляющую интерес целевую ткань, такую как эндотелиальные клетки или, более конкретно, эндотелиальные верхушечные клетки. В некоторых вариантах осуществления rAAV вводят непосредственно во внутрижелудочковое пространство субъекта.

В некоторых вариантах осуществления вирион rAAV представляет собой вирион rAAV AAV2. Капсид может представлять собой капсид AAV2 или его функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления капсид AAV2 характеризуется по меньшей мере 98%, 99% или 100% идентичностью с эталонным капсидом AAV2, например,

MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL

(SEQ ID NO: 76).

В некоторых вариантах осуществления вирион rAAV представляет собой вирион rAAV AAV9. Капсид может представлять собой капсид AAV9 или его функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления капсид AAV9 характеризуется по меньшей мере 98%, 99% или 100% идентичностью с эталонным капсидом AAV9, например,

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL

(SEQ ID NO: 77).

В некоторых вариантах осуществления вирион rAAV представляет собой вирион rAAV AAV6. Капсид может представлять собой капсид AAV9 или его функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления капсид AAV6 характеризуется по меньшей мере 98%, 99% или 100% идентичностью с эталонным капсидом AAV6, например,

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL

(SEQ ID NO: 78).

В некоторых вариантах осуществления вирион rAAV представляет собой вирион rAAV AAVrh.10. Капсид может представлять собой капсид AAV9 или его функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления капсид AAVrh.10 характеризуется по меньшей мере 98%, 99% или 100% идентичностью с эталонным капсидом AAVrh.10, например,

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAGPSGLGSGTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYQFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFSQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTDGTYSEPRPIGTRYLTRNL

(SEQ ID NO: 79).

В некоторых вариантах осуществления капсидный белок кодируется полинуклеотидом, поставляемым на плазмиде в транс-положении к плазмиде-переносчику. Полинуклеотидная последовательность гена cap из AAVrh74 дикого типа выглядит следующим образом:

последовательность, кодирующая капсид AAVrh74 (SEQ ID NO: 80)

ATGGCTGCCGATGGTTATCTTCCAGATTGGCTCGAGGACAACCTCTCTGAGGGCATTCGCGAGTGGTGGGACCTGAAACCTGGAGCCCCGAAACCCAAAGCCAACCAGCAAAAGCAGGACAACGGCCGGGGTCTGGTGCTTCCTGGCTACAAGTACCTCGGACCCTTCAACGGACTCGACAAGGGGGAGCCCGTCAACGCGGCGGACGCAGCGGCCCTCGAGCACGACAAGGCCTACGACCAGCAGCTCCAAGCGGGTGACAATCCGTACCTGCGGTATAATCACGCCGACGCCGAGTTTCAGGAGCGTCTGCAAGAAGATACGTCTTTTGGGGGCAACCTCGGGCGCGCAGTCTTCCAGGCCAAAAAGCGGGTTCTCGAACCTCTGGGCCTGGTTGAATCGCCGGTTAAGACGGCTCCTGGAAAGAAGAGACCGGTAGAGCCATCACCCCAGCGCTCTCCAGACTCCTCTACGGGCATCGGCAAGAAAGGCCAGCAGCCCGCAAAAAAGAGACTCAATTTTGGGCAGACTGGCGACTCAGAGTCAGTCCCCGACCCTCAACCAATCGGAGAACCACCAGCAGGCCCCTCTGGTCTGGGATCTGGTACAATGGCTGCAGGCGGTGGCGCTCCAATGGCAGACAATAACGAAGGCGCCGACGGAGTGGGTAGTTCCTCAGGAAATTGGCATTGCGATTCCACATGGCTGGGCGACAGAGTCATCACCACCAGCACCCGCACCTGGGCCCTGCCCACCTACAACAACCACCTCTACAAGCAAATCTCCAACGGGACCTCGGGAGGAAGCACCAACGACAACACCTACTTCGGCTACAGCACCCCCTGGGGGTATTTTGACTTCAACAGATTCCACTGCCACTTTTCACCACGTGACTGGCAGCGACTCATCAACAACAACTGGGGATTCCGGCCCAAGAGGCTCAACTTCAAGCTCTTCAACATCCAAGTCAAGGAGGTCACGCAGAATGAAGGCACCAAGACCATCGCCAATAACCTTACCAGCACGATTCAGGTCTTTACGGACTCGGAATACCAGCTCCCGTACGTGCTCGGCTCGGCGCACCAGGGCTGCCTGCCTCCGTTCCCGGCGGACGTCTTCATGATTCCTCAGTACGGGTACCTGACTCTGAACAATGGCAGTCAGGCTGTGGGCCGGTCGTCCTTCTACTGCCTGGAGTACTTTCCTTCTCAAATGCTGAGAACGGGCAACAACTTTGAATTCAGCTACAACTTCGAGGACGTGCCCTTCCACAGCAGCTACGCGCACAGCCAGAGCCTGGACCGGCTGATGAACCCTCTCATCGACCAGTACTTGTACTACCTGTCCCGGACTCAAAGCACGGGCGGTACTGCAGGAACTCAGCAGTTGCTATTTTCTCAGGCCGGGCCTAACAACATGTCGGCTCAGGCCAAGAACTGGCTACCCGGTCCCTGCTACCGGCAGCAACGCGTCTCCACGACACTGTCGCAGAACAACAACAGCAACTTTGCCTGGACGGGTGCCACCAAGTATCATCTGAATGGCAGAGACTCTCTGGTGAATCCTGGCGTTGCCATGGCTACCCACAAGGACGACGAAGAGCGATTTTTTCCATCCAGCGGAGTCTTAATGTTTGGGAAACAGGGAGCTGGAAAAGACAACGTGGACTATAGCAGCGTGATGCTAACCAGCGAGGAAGAAATAAAGACCACCAACCCAGTGGCCACAGAACAGTACGGCGTGGTGGCCGATAACCTGCAACAGCAAAACGCCGCTCCTATTGTAGGGGCCGTCAATAGTCAAGGAGCCTTACCTGGCATGGTGTGGCAGAACCGGGACGTGTACCTGCAGGGTCCCATCTGGGCCAAGATTCCTCATACGGACGGCAACTTTCATCCCTCGCCGCTGATGGGAGGCTTTGGACTGAAGCATCCGCCTCCTCAGATCCTGATTAAAAACACACCTGTTCCCGCGGATCCTCCGACCACCTTCAATCAGGCCAAGCTGGCTTCTTTCATCACGCAGTACAGTACCGGCCAGGTCAGCGTGGAGATCGAGTGGGAGCTGCAGAAGGAGAACAGCAAACGCTGGAACCCAGAGATTCAGTACACTTCCAACTACTACAAATCTACAAATGTGGACTTTGCTGTCAATACTGAGGGTACTTATTCCGAGCCTCGCCCCATTGGCACCCGTTACCTCACCCGTAATCTGTAA.

В настоящем изобретении дополнительно предусмотрены белковые последовательности для VP1, VP2 и VP3 AAVrh74, включая SEQ ID NO: 2-4, и их гомологи или функциональные варианты.

VP1 AAVrh74 (SEQ ID NO: 81)

MAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL.

VP2 AAVrh74 (SEQ ID NO: 82)

STIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL.

VP3 AAVrh74 (SEQ ID NO: 83)

RTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL.

В определенных случаях капсид AAVrh74 содержит аминокислотную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит полипептид, который содержит, или по сути состоит, или дополнительно состоит из последовательности, которая, например, на по меньшей мере 65%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 75%, на по меньшей мере 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% или 89%, чаще на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, 99% или более идентична аминокислотной последовательности VP1 AAVrh74, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит полипептид, который содержит, или по сути состоит, или дополнительно состоит из последовательности, которая, например, на по меньшей мере 65%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 75%, на по меньшей мере 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% или 89%, чаще на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, 99% или более идентична аминокислотной последовательности VP2 AAVrh74, представленной под SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе rAAV содержит полипептид, который содержит, или по сути состоит, или дополнительно состоит из последовательности, которая, например, на по меньшей мере 65%, на по меньшей мере 70%, на по меньшей мере 75%, на по меньшей мере 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% или 89%, чаще на 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98%, 99% или более идентична аминокислотной последовательности VP3 AAVrh74, представленной под SEQ ID NO: 4.

В некоторых вариантах осуществления вирион rAAV представляет собой вирион rAAV AAV-PHP.B или его нейтрофический вариант, такой как без ограничения один из вариантов, описанных в международных патентных публикациях №№ WO 2015/038958 A1 и WO 2017/100671 A1. Например, капсид AAV может содержать по меньшей мере 4 смежные аминокислоты из последовательности TLAVPFK (SEQ ID NO: 85) или KFPVALT (SEQ ID NO: 86), например, вставленные между последовательностями, кодирующими аминокислоты 588 и 589 в AAV9.

Капсид может представлять собой капсид AAV-PHP.B или его функциональный вариант. В некоторых вариантах осуществления капсид AAV-PHP.B характеризуется по меньшей мере 98%, 99% или 100% идентичностью с эталонным капсидом AAV-PHP.B, например,

MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQTLAVPFKAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL

(SEQ ID NO: 84).

Дополнительные капсиды AAV, применяемые в вирионах rAAV по настоящему изобретению, включают капсиды, раскрытые в патентных публикациях №№ WO 2009/012176 A2 и WO 2015/168666 A2.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, авторами настоящего изобретения было определено, что вектор на основе AAV9, AAVrh.74 или вектор на основе AAVrh.10 будет придавать вектору требуемый тропизм в отношении сердца. Не ограничиваясь какой-либо теорией, авторами настоящего изобретения дополнительно было определено, что вектор на основе AAV9, AAVrh.74 или вектор на основе AAVrh.10 может обеспечивать требуемую специфичность в отношении клеток сердца.

Фармацевтические композиции и наборы

В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие вирион rAAV по настоящему изобретению и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.

С целью введения, например путем инъекции, можно использовать различные растворы, такие как стерильные водные растворы. Такие водные растворы при необходимости можно забуферить, а жидкий разбавитель сначала сделать изотоническим с помощью солевого раствора или глюкозы. Растворы rAAV в виде свободной кислоты (ДНК содержит кислые фосфатные группы) или фармакологически приемлемой соли можно получить в воде, соответствующим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как полоксамер 188, например, в концентрации 0,001% или 0,01%. Дисперсию rAAV также можно получить в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях, а также в маслах. При обычных условиях хранения и применения данные препараты содержат консервант для предупреждения роста микроорганизмов. В этой связи все используемые стерильные водные среды могут быть легко получены стандартными методиками, хорошо известными специалистам в данной области техники.

Фармацевтические формы, пригодные для инъекционного применения, включают без ограничения стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных инъекционных растворов или дисперсий. Во всех случаях форма является стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы существовала возможность ее легкого введения шприцем. Она должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть защищена от загрязняющего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибки. Носителем может быть растворитель или дисперсионная среда, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и др.), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, за счет применения покрытия, такого как лецитин, за счет поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и за счет применения поверхностно-активных веществ. Предупредить действие микроорганизмов можно с помощью различных противобактериальных и противогрибковых средств, например парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и др. Во многих случаях предпочтительным будет включение придающих изотоничность средств, например, сахаров или хлорида натрия. Пролонгированное всасывание инъекционных композиций может быть достигнуто за счет применения средств, замедляющих всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина.

Стерильные инъекционные растворы можно получить путем включения rAAV в требуемом количестве в соответствующий растворитель с различными другими перечисленными выше ингредиентами, при необходимости, с последующей стерилизацией фильтрацией. Как правило, дисперсии получают путем включения простерилизованного активного ингредиента в стерильную среду-носитель, которая содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и методика лиофилизации, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любой дополнительный необходимый ингредиент из его раствора, предварительно простерилизованного фильтрацией.

В другом аспекте настоящее изобретение предусматривает набор, содержащий вирион rAAV по настоящему изобретению и инструкции по применению.

Способы применения

В одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрен способ повышения активности MLP в клетке, предусматривающий приведение клетки в контакт с rAAV по настоящему изобретению. В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрен способ повышения активности MLP у субъекта, предусматривающий введение rAAV по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления клетка и/или субъект имеют дефицит уровней экспрессии матричной РНК CSRP3 или белка MLP и/или активности и/или имеют мутацию с утратой функции в CSRP3. Клетка может представлять собой клетку сердца, например, кардиомиоцит.

В некоторых вариантах осуществления способ способствует выживанию сердечной клетки, например кардиомиоцита, в культуре клеток и/или в условиях in vivo. В некоторых вариантах осуществления способ стимулирует и/или восстанавливает функцию сердца.

Способы лечения

В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения заболевания или нарушения у нуждающегося в этом субъекта, предусматривающий введение субъекту эффективного количества вириона rAAV по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение сердечной деятельности. К иллюстративным нарушениям сердечной деятельности относятся сердечная недостаточность, гипертрофическая кардиомиопатия и дилатационная кардиомиопатия. В некоторых вариантах осуществления субъект страдает генетическим нарушением экспрессии или функции CSRP3. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой HCM или DCM. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой наследственную гипертрофическую кардиомиопатию-12 (CMH12). В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой дилатационную кардиомиопатию-1М (CMD1M). В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой скелетную миотрофию. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой плече-лопаточно-лицевую мышечную дистрофию, немалиновую миопатию или поясно-конечностную мышечную дистрофию типа 2B. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой поясно-конечностную мышечную дистрофию типа 2А, мышечную дистрофию Дюшенна или дерматомиозит.

AAV-опосредованная доставка белка MLP в сердце может увеличить продолжительность жизни, предупредить или ослабить дегенерацию клеток сердца, сердечную недостаточность, рубцевание, снижение фракции выброса, аритмию, стенокардию, обструктивную HCM или DCM, гипертрофию желудочков (IVS: диапазон 14-32 мм), желудочковую тахикардию, легкие I-II балла по NYHA, непереносимость физической нагрузки, стенокардию (боль в груди), внезапную сердечную смерть, миалгии и судороги при физической нагрузке.

Описанные в данном документе способы могут обеспечивать эффективное биораспределение в сердце. Они могут приводить к устойчивой экспрессии во всех или значительной части клеток сердца, например, кардиомиоцитах. Примечательно, что раскрытые в данном документе способы могут обеспечивать длительную экспрессию белка MLP на протяжении всей жизни субъекта после введения вектора на основе AAV.

В настоящем изобретении также предусмотрены различные виды комбинированной терапии. В частности, предусмотрены комбинации способов по настоящему изобретению со стандартными средствами лечения (например, кортикостероидами или препаратами для местного снижения давления), а также комбинации с новыми средствами терапии. В некоторых случаях субъекта можно лечить стероидом и/или комбинацией иммунодепрессантов для предупреждения или снижения иммунного ответа на введение описанного в данном документе rAAV.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе, составляющей от приблизительно 1×10¹² до 5×10¹⁴ векторных геномов (вг) вектора на основе AAV, на килограмм (кг) общей массы тела субъекта (вг/кг). В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе, составляющей от приблизительно 1×10¹³ до 5×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе, составляющей от приблизительно 5×10¹³ до 3×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе, составляющей от приблизительно 5×10¹³ до 1×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе, составляющей менее чем приблизительно 1×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹⁵ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹⁵ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹⁵ вг/кг или менее чем приблизительно 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе, составляющей приблизительно 1×10¹² вг/кг, приблизительно 3×10¹² вг/кг, приблизительно 5×10¹² вг/кг, приблизительно 7×10¹² вг/кг, приблизительно 1×10¹³ вг/кг, приблизительно 3×10¹³ вг/кг, приблизительно 5×10¹³ вг/кг, приблизительно 7×10¹³ вг/кг, приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 3×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 5×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 7×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 1×10¹⁵ вг/кг, приблизительно 3×10¹⁵ вг/кг, приблизительно 5×10¹⁵ вг/кг или приблизительно 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят в дозе 1×10¹² вг/кг, 3×10¹² вг/кг, 5×10¹² вг/кг, 7×10¹² вг/кг, 1×10¹³ вг/кг, 3×10¹³ вг/кг, 5×10¹³ вг/кг, 7×10¹³ вг/кг, 1×10¹⁴ вг/кг, 3×10¹⁴ вг/кг, 5×10¹⁴ вг/кг, 7×10¹⁴ вг/кг, 1×10¹⁵ вг/кг, 3×10¹⁵ вг/кг, 5×10¹⁵ вг/кг или 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе, составляющей от приблизительно 1×10¹² до 5×10¹⁴ векторных геномов (вг) вектора на основе AAV, на килограмм (кг) общей массы тела субъекта (вг/кг). В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе, составляющей от приблизительно 1×10¹³ до 5×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе, составляющей от приблизительно 5×10¹³ до 3×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе, составляющей от приблизительно 5×10¹³ до 1×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе, составляющей менее чем приблизительно 1×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹⁵ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹⁵ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹⁵ вг/кг или менее чем приблизительно 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе, составляющей приблизительно 1×10¹² вг/кг, приблизительно 3×10¹² вг/кг, приблизительно 5×10¹² вг/кг, приблизительно 7×10¹² вг/кг, приблизительно 1×10¹³ вг/кг, приблизительно 3×10¹³ вг/кг, приблизительно 5×10¹³ вг/кг, приблизительно 7×10¹³ вг/кг, приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 3×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 5×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 7×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 1×10¹⁵ вг/кг, приблизительно 3×10¹⁵ вг/кг, приблизительно 5×10¹⁵ вг/кг или приблизительно 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят системно в дозе 1×10¹² вг/кг, 3×10¹² вг/кг, 5×10¹² вг/кг, 7×10¹² вг/кг, 1×10¹³ вг/кг, 3×10¹³ вг/кг, 5×10¹³ вг/кг, 7×10¹³ вг/кг, 1×10¹⁴ вг/кг, 3×10¹⁴ вг/кг, 5×10¹⁴ вг/кг, 7×10¹⁴ вг/кг, 1×10¹⁵ вг/кг, 3×10¹⁵ вг/кг, 5×10¹⁵ вг/кг или 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей от приблизительно 1×10¹² до 5×10¹⁴ векторных геномов (вг) вектора на основе AAV, на килограмм (кг) общей массы тела субъекта (вг/кг). В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей от приблизительно 1×10¹³ до 5×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей от приблизительно 5×10¹³ до 3×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей от приблизительно 5×10¹³ до 1×10¹⁴ вг/кг. В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей менее чем приблизительно 1×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹² вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹³ вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 7×10¹⁴ вг/кг, менее чем приблизительно 1×10¹⁵ вг/кг, менее чем приблизительно 3×10¹⁵ вг/кг, менее чем приблизительно 5×10¹⁵ вг/кг или менее чем приблизительно 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей приблизительно 1×10¹² вг/кг, приблизительно 3×10¹² вг/кг, приблизительно 5×10¹² вг/кг, приблизительно 7×10¹² вг/кг, приблизительно 1×10¹³ вг/кг, приблизительно 3×10¹³ вг/кг, приблизительно 5×10¹³ вг/кг, приблизительно 7×10¹³ вг/кг, приблизительно 1×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 3×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 5×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 7×10¹⁴ вг/кг, приблизительно 1×10¹⁵ вг/кг, приблизительно 3×10¹⁵ вг/кг, приблизительно 5×10¹⁵ вг/кг или приблизительно 7×10¹⁵ вг/кг.

В некоторых вариантах осуществления вектор на основе AAV вводят внутривенно в дозе, составляющей 1×10¹² вг/кг, 3×10¹² вг/кг, 5×10¹² вг/кг, 7×10¹² вг/кг, 1×10¹³ вг/кг, 3×10¹³ вг/кг, 5×10¹³ вг/кг, 7×10¹³ вг/кг, 1×10¹⁴ вг/кг, 3×10¹⁴ вг/кг, 5×10¹⁴ вг/кг, 7×10¹⁴ вг/кг, 1×10¹⁵ вг/кг, 3×10¹⁵ вг/кг, 5×10¹⁵ вг/кг или 7×10¹⁵ вг/кг.

Доказательства функционального улучшения, клинической пользы или эффективности у пациентов могут быть выявлены по изменению согласно функциональной классификации Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (класс NYHA), в патологической электрокардиограмме, конечно-диастолическом/конечно-систолическом диаметре левого желудочка, максимальной толщине межжелудочковой стенки, максимальной толщине задней стенки, частоте пика Е и пика А, пиковой ранней и пиковой поздней скорости трансмитриального наполнения, ранней диастолической и поздней диастолической доплеровской скорости в тканях, артериальной гипертонии и степени сердечной гипертрофии. Дополнительная гистология миокарда позволит выявить AAV-опосредованный полезный эффект MLP, что будет видно по снижению гипертрофии кардиомиоцитов, уменьшению массива миоцитов и уменьшению интерстициального и периваскулярного фиброза и рубцевания по сравнению с исходным уровнем или контрольными пациентами с соответствующим заболеванием.

Введение композиций

Введение эффективной дозы композиций можно осуществлять стандартными в данной области путями, включая без ограничения системную, местную, прямую инъекцию, внутривенное, внутрисердечное введение. В некоторых случаях введение включает системную, местную, прямую инъекцию, внутривенную, внутрисердечную инъекцию. Введение можно осуществлять путем катетеризации сердца.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрено местное введение и системное введение эффективной дозы rAAV и композиций по настоящему изобретению. Например, системное введение может быть введением в систему кровообращения, так чтобы воздействие происходило на весь организм. Системное введение включает парентеральное введение посредством инъекции, инфузии или имплантации. Пути введения раскрытых в данном документе композиций включают внутривенное («IV») введение, внутрибрюшинное («IP») введение, внутримышечное («IM») введение, введение в очаг поражения или подкожное («SC») введение или имплантацию устройства с медленным высвобождением, например, мини-осмотической помпы, депо-состава и т. д. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению предусматривают введение вектора на основе AAV по настоящему изобретению или содержащей его фармацевтической композиции посредством внутривенного, внутримышечного, внутриартериального, внутрипочечного, внутриуретрального, внутрисердечного, внутрикоронарного, внутримиокардиального, внутрикожного, эпидурального, подкожного, внутрибрюшинного, внутрижелудочкового, ионофоретического или внутричерепного введения.

В частности, введение rAAV по настоящему изобретению можно осуществлять с помощью любого физического способа, который позволит транспортировать рекомбинантный вектор на основе rAAV в целевую ткань животного. Введение включает без ограничения инъекцию в сердце.

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению предусматривает внутрисердечную доставку. Инфузию можно проводить с помощью специальной канюли, катетера, шприца/иглы с применением инфузионной помпы. Введение может предусматривать доставку эффективного количества вириона rAAV или фармацевтической композиции, содержащей вирион rAAV, в сердце. Это можно осуществить, например, посредством внутривенного, внутримышечного, внутриартериального, внутрипочечного, внутриуретрального, внутрисердечного, внутрикоронарного, внутримиокардиального, внутрикожного, эпидурального, подкожного, внутрибрюшинного, внутрижелудочкового, ионофоретического или внутричерепного введения. Композиции по настоящему изобретению дополнительно можно вводить внутривенно.

Раскрытый в данном документе способ лечения позволяет уменьшить и/или предупредить один или несколько симптомов, в том числе без ограничения гипертрофию желудочков, желудочковую тахикардию, умеренные I-II балла по NYHA, непереносимость физической нагрузки и стенокардию.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Доклиническая биоактивность и эффективность

Векторы, проиллюстрированные на фиг. 1-4, тестируют в условиях in vitro с применением культивируемых кардиомиоцитов (например, кардиомиоцитов с индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, iPSC-CM). Экспрессию MLP оценивают с помощью иммунофлуоресценции и вестерн-блоттинга. Анализы фосфорилирования позволяют выявить снижение аутофосфорилирования протеинкиназы C-альфа (PKC-A).

Выбранные векторы тестируют в условиях in vivo с применением дефицитных по MLP или мутантных по MLP мышиных моделей кардиомиопатии (например, модели с включением C58G (KI) или модели с KI W4R). Эффективность определяют путем измерения фракции выброса левого желудочка (LVEF) и/или конечно-диастолического размера левого желудочка (LVED) с помощью эхокардиографии, снижения общей массы сердца (например, нормализованной по длине большеберцовой кости), инвазивных гемодинамических оценок работы левого желудочка на dP/dt_max, dP/dt_min и константы релаксации Tau или уменьшения гипертрофии левого и/или правого желудочка при гистологической оценке. Дополнительно, эффективность в условиях in vivo на мышиной модели оценивают путем измерения биомаркеров, в том числе без ограничения экспрессии гена предсердного натрийуретического фактора (Nppa), экспрессии гена натрийуретического пептида головного мозга (Nppb) и экспрессии белка тяжелой цепи бета-миозина. Физиологическую эффективность определяют путем тестирования активности протеинкиназы С-альфа (PKC-A), фосфорилирования MLP в сердце, убиквитин-зависимой деградации белков протеасомой. В случае векторов на основе AAV наблюдается нормализация или смягчение состояния в ответ на лечение.

Пример 2. Экспрессия белка в кардиомиоцитах человека

Векторы, проиллюстрированные на фиг. 1-4, тестировали в условиях in vitro с применением контрольной линии клеток (CHO-Lec2; фиг. 5A) и культивируемых кардиомиоцитов (линии дифференцированных клеток AC16; фиг. 5B). Экспрессию мышечного белка LIM (MLP; белок, кодируемый CSRP3) оценивали с помощью вестерн-блоттинга.

На фиг. 5А представлена экспрессия CSRP3 в трансдуцированных CHO-Lec2. На фиг. 5B представлена экспрессия CSRP3 в трансдуцированных кардиомиоцитах (линия дифференцированных клеток AC16 - Sigma-Aldrich®, № по кат. SCC109). Клетки трансдуцировали посредством MOI 3E5 из каждого вектора; спустя 6 суток собирали клеточные лизаты и проводили вестерн-блоттинг с применением поликлонального антитела к CSRP3 (Thermo-Fisher® PA5-29155 1:1000).

Экспрессия белка MLP трансгена CSRP3 выше при использовании промотора MHCK7, чем при использовании промотора hTNNT2 («hTnT»). Оба серотипа AAV9 и AAVrh74 вектора на основе AAV способны трансдуцировать клеточную линию кардиомиоцитов. Исходя из данных, приведенных на фиг. 5B, экспрессия белка MLP очевидно выше с вектором на основе AAVrh74, чем с вектором на основе AAV9.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Спейскрафт Севен, ЛЛСИ

<120> СРЕДСТВО ГЕННОЙ ТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ CSRP3 (БОГАТОГО ЦИСТЕИНОМ И ГЛИЦИНОМ

БЕЛКА 3)

<130> ROPA-020/01WO 329592-22266

<150> US 63/061727

<151> 2020-08-05

<160> 86

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 194

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Pro Asn Trp Gly Gly Gly Ala Lys Cys Gly Ala Cys Glu Lys Thr

1 5 10 15

Val Tyr His Ala Glu Glu Ile Gln Cys Asn Gly Arg Ser Phe His Lys

20 25 30

Thr Cys Phe His Cys Met Ala Cys Arg Lys Ala Leu Asp Ser Thr Thr

35 40 45

Val Ala Ala His Glu Ser Glu Ile Tyr Cys Lys Val Cys Tyr Gly Arg

50 55 60

Arg Tyr Gly Pro Lys Gly Ile Gly Tyr Gly Gln Gly Ala Gly Cys Leu

65 70 75 80

Ser Thr Asp Thr Gly Glu His Leu Gly Leu Gln Phe Gln Gln Ser Pro

85 90 95

Lys Pro Ala Arg Ser Val Thr Thr Ser Asn Pro Ser Lys Phe Thr Ala

100 105 110

Lys Phe Gly Glu Ser Glu Lys Cys Pro Arg Cys Gly Lys Ser Val Tyr

115 120 125

Ala Ala Glu Lys Val Met Gly Gly Gly Lys Pro Trp His Lys Thr Cys

130 135 140

Phe Arg Cys Ala Ile Cys Gly Lys Ser Leu Glu Ser Thr Asn Val Thr

145 150 155 160

Asp Lys Asp Gly Glu Leu Tyr Cys Lys Val Cys Tyr Ala Lys Asn Phe

165 170 175

Gly Pro Thr Gly Ile Gly Phe Gly Gly Leu Thr Gln Gln Val Glu Lys

180 185 190

Lys Glu

<210> 2

<211> 150

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 2

Met Pro Asn Trp Gly Gly Gly Ala Lys Cys Gly Ala Cys Glu Lys Thr

1 5 10 15

Val Tyr His Ala Glu Glu Ile Gln Cys Asn Gly Arg Ser Phe His Lys

20 25 30

Thr Cys Phe His Cys Ser Pro Gln Ser Arg His Ala Gln Leu Pro Pro

35 40 45

Ala Thr Leu Pro Asn Ser Leu Arg Ser Leu Glu Ser Pro Arg Ser Ala

50 55 60

Leu Asp Val Ala Ser Gln Ser Met Leu Leu Arg Arg Leu Trp Glu Val

65 70 75 80

Ala Ser Leu Gly Thr Arg Pro Val Ser Ala Val Pro Ser Val Gly Arg

85 90 95

Val Trp Ser Pro Gln Met Ser Leu Thr Lys Met Gly Asn Phe Ile Ala

100 105 110

Lys Phe Ala Met Pro Lys Ile Leu Ala Pro Arg Val Leu Gly Leu Glu

115 120 125

Ala Leu His Asn Lys Trp Lys Arg Lys Asn Glu Glu Val Arg Arg Phe

130 135 140

Ser Asp Phe Leu Arg Ala

145 150

<210> 3

<211> 39

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Pro Asn Trp Gly Gly Gly Ala Lys Cys Gly Ala Cys Glu Lys Thr

1 5 10 15

Val Tyr His Ala Glu Glu Ile Gln Cys Asn Gly Arg Ser Phe His Lys

20 25 30

Thr Cys Phe His Cys Leu Cys

35

<210> 4

<211> 58

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 4

Met Pro Asn Trp Gly Gly Gly Ala Lys Cys Gly Ala Cys Glu Lys Thr

1 5 10 15

Val Tyr His Ala Glu Glu Ile Gln Cys Asn Gly Arg Ser Phe His Lys

20 25 30

Thr Cys Phe His Cys Thr Leu Ala Gln Asp Leu Phe Pro Leu Cys His

35 40 45

Leu Trp Glu Glu Ser Gly Val His Lys Cys

50 55

<210> 5

<211> 582

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 5

atgccaaact ggggcggagg cgcaaaatgt ggagcctgtg aaaagaccgt ctaccatgca 60

gaagaaatcc agtgcaatgg aaggagtttc cacaagacgt gtttccactg catggcctgc 120

aggaaggctc ttgacagcac gacagtcgcg gctcatgagt cggagatcta ctgcaaggtg 180

tgctatgggc gcagatatgg ccccaaaggg atcgggtatg gacaaggcgc tggctgtctc 240

agcacagaca cgggcgagca tctcggcctg cagttccaac agtccccaaa gccggcacgc 300

tcagttacca ccagcaaccc ttccaaattc actgcgaagt ttggagagtc cgagaagtgc 360

cctcgatgtg gcaagtcagt ctatgctgct gagaaggtta tgggaggtgg caagccttgg 420

cacaagacct gtttccgctg tgccatctgt gggaagagtc tggagtccac aaatgtcact 480

gacaaagatg gggaacttta ttgcaaagtt tgctatgcca aaaattttgg ccccacgggt 540

attgggtttg gaggccttac acaacaagtg gaaaagaaag aa 582

<210> 6

<211> 10

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мотив последовательности Козак

<400> 6

gccaccatgg 10

<210> 7

<211> 588

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Полинуклеотид, кодирующий MLP с последовательностью Козак

<400> 7

gccaccatgc caaactgggg cggaggcgca aaatgtggag cctgtgaaaa gaccgtctac 60

catgcagaag aaatccagtg caatggaagg agtttccaca agacgtgttt ccactgcatg 120

gcctgcagga aggctcttga cagcacgaca gtcgcggctc atgagtcgga gatctactgc 180

aaggtgtgct atgggcgcag atatggcccc aaagggatcg ggtatggaca aggcgctggc 240

tgtctcagca cagacacggg cgagcatctc ggcctgcagt tccaacagtc cccaaagccg 300

gcacgctcag ttaccaccag caacccttcc aaattcactg cgaagtttgg agagtccgag 360

aagtgccctc gatgtggcaa gtcagtctat gctgctgaga aggttatggg aggtggcaag 420

ccttggcaca agacctgttt ccgctgtgcc atctgtggga agagtctgga gtccacaaat 480

gtcactgaca aagatgggga actttattgc aaagtttgct atgccaaaaa ttttggcccc 540

acgggtattg ggtttggagg ccttacacaa caagtggaaa agaaagaa 588

<210> 8

<211> 2152

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – кассета экспрессии MHCK7-CSRP3

<400> 8

acccttcaga ttaaaaataa ctgaggtaag ggcctgggta ggggaggtgg tgtgagacgc 60

tcctgtctct cctctatctg cccatcggcc ctttggggag gaggaatgtg cccaaggact 120

aaaaaaaggc catggagcca gaggggcgag ggcaacagac ctttcatggg caaaccttgg 180

ggccctgctg tctagcatgc cccactacgg gtctaggctg cccatgtaag gaggcaaggc 240

ctggggacac ccgagatgcc tggttataat taacccagac atgtggctgc cccccccccc 300

ccaacacctg ctgcctctaa aaataaccct gtccctggtg gatcccctgc atgcgaagat 360

cttcgaacaa ggctgtgggg gactgagggc aggctgtaac aggcttgggg gccagggctt 420

atacgtgcct gggactccca aagtattact gttccatgtt cccggcgaag ggccagctgt 480

cccccgccag ctagactcag cacttagttt aggaaccagt gagcaagtca gcccttgggg 540

cagcccatac aaggccatgg ggctgggcaa gctgcacgcc tgggtccggg gtgggcacgg 600

tgcccgggca acgagctgaa agctcatctg ctctcagggg cccctccctg gggacagccc 660

ctcctggcta gtcacaccct gtaggctcct ctatataacc caggggcaca ggggctgccc 720

tcattctacc accacctcca cagcacagac agacactcag gagccagcca ggccaccatg 780

ccaaactggg gcggaggcgc aaaatgtgga gcctgtgaaa agaccgtcta ccatgcagaa 840

gaaatccagt gcaatggaag gagtttccac aagacgtgtt tccactgcat ggcctgcagg 900

aaggctcttg acagcacgac agtcgcggct catgagtcgg agatctactg caaggtgtgc 960

tatgggcgca gatatggccc caaagggatc gggtatggac aaggcgctgg ctgtctcagc 1020

acagacacgg gcgagcatct cggcctgcag ttccaacagt ccccaaagcc ggcacgctca 1080

gttaccacca gcaacccttc caaattcact gcgaagtttg gagagtccga gaagtgccct 1140

cgatgtggca agtcagtcta tgctgctgag aaggttatgg gaggtggcaa gccttggcac 1200

aagacctgtt tccgctgtgc catctgtggg aagagtctgg agtccacaaa tgtcactgac 1260

aaagatgggg aactttattg caaagtttgc tatgccaaaa attttggccc cacgggtatt 1320

gggtttggag gccttacaca acaagtggaa aagaaagaat gatcaacctc tggattacaa 1380

aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata 1440

cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc 1500

cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg 1560

tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac 1620

ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat 1680

cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt 1740

ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat 1800

tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc 1860

ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag 1920

tcggatctcc ctttgggccg cctccccgca ctgcccgggt ggcatccctg tgacccctcc 1980

ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata 2040

aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat ggggtggagg 2100

ggggtggtat ggagcaaggg gcccaagttg ggaagaaacc tgtagggcct gc 2152

<210> 9

<211> 1925

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – кассета экспрессии hTnT-CSRP3

<400> 9

ctcagtccat taggagccag tagcctggaa gatgtcttta cccccagcat cagttcaagt 60

ggagcagcac ataactcttg ccctctgcct tccaagattc tggtgctgag acttatggag 120

tgtcttggag gttgccttct gccccccaac cctgctccca gctggccctc ccaggcctgg 180

gttgctggcc tctgctttat caggattctc aagagggaca gctggtttat gttgcatgac 240

tgttccctgc atatctgctc tggttttaaa tagcttatct gagcagctgg aggaccacat 300

gggcttatat ggcgtggggt acatgttcct gtagccttgt ccctggcacc tgccaaaata 360

gcagccaaca ccccccaccc ccaccgccat ccccctgccc cacccgtccc ctgtcgcaca 420

ttcctccctc cgcagggctg gctcaccagg ccccagccca catgcctgct taaagccctc 480

tccatcctct gcctcaccca gtccccgctg agactgagca gacgcctcca ggatctgtcg 540

gcaggccacc atgccaaact ggggcggagg cgcaaaatgt ggagcctgtg aaaagaccgt 600

ctaccatgca gaagaaatcc agtgcaatgg aaggagtttc cacaagacgt gtttccactg 660

catggcctgc aggaaggctc ttgacagcac gacagtcgcg gctcatgagt cggagatcta 720

ctgcaaggtg tgctatgggc gcagatatgg ccccaaaggg atcgggtatg gacaaggcgc 780

tggctgtctc agcacagaca cgggcgagca tctcggcctg cagttccaac agtccccaaa 840

gccggcacgc tcagttacca ccagcaaccc ttccaaattc actgcgaagt ttggagagtc 900

cgagaagtgc cctcgatgtg gcaagtcagt ctatgctgct gagaaggtta tgggaggtgg 960

caagccttgg cacaagacct gtttccgctg tgccatctgt gggaagagtc tggagtccac 1020

aaatgtcact gacaaagatg gggaacttta ttgcaaagtt tgctatgcca aaaattttgg 1080

ccccacgggt attgggtttg gaggccttac acaacaagtg gaaaagaaag aatgatcaac 1140

ctctggatta caaaatttgt gaaagattga ctggtattct taactatgtt gctcctttta 1200

cgctatgtgg atacgctgct ttaatgcctt tgtatcatgc tattgcttcc cgtatggctt 1260

tcattttctc ctccttgtat aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg 1320

ttgtcaggca acgtggcgtg gtgtgcactg tgtttgctga cgcaaccccc actggttggg 1380

gcattgccac cacctgtcag ctcctttccg ggactttcgc tttccccctc cctattgcca 1440

cggcggaact catcgccgcc tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca 1500

ctgacaattc cgtggtgttg tcggggaaat catcgtcctt tccttggctg ctcgcctgtg 1560

ttgccacctg gattctgcgc gggacgtcct tctgctacgt cccttcggcc ctcaatccag 1620

cggaccttcc ttcccgcggc ctgctgccgg ctctgcggcc tcttccgcgt cttcgccttc 1680

gccctcagac gagtcggatc tccctttggg ccgcctcccc gcactgcccg ggtggcatcc 1740

ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc cctggaagtt gccactccag tgcccaccag 1800

ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat tttgtctgac taggtgtcct tctataatat 1860

tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa ggggcccaag ttgggaagaa acctgtaggg 1920

cctgc 1925

<210> 10

<211> 2152

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – кассета экспрессии MHCK7-CSRP3

<400> 10

acccttcaga ttaaaaataa ctgaggtaag ggcctgggta ggggaggtgg tgtgagacgc 60

tcctgtctct cctctatctg cccatcggcc ctttggggag gaggaatgtg cccaaggact 120

aaaaaaaggc catggagcca gaggggcgag ggcaacagac ctttcatggg caaaccttgg 180

ggccctgctg tctagcatgc cccactacgg gtctaggctg cccatgtaag gaggcaaggc 240

ctggggacac ccgagatgcc tggttataat taacccagac atgtggctgc cccccccccc 300

ccaacacctg ctgcctctaa aaataaccct gtccctggtg gatcccctgc atgcgaagat 360

cttcgaacaa ggctgtgggg gactgagggc aggctgtaac aggcttgggg gccagggctt 420

atacgtgcct gggactccca aagtattact gttccatgtt cccggcgaag ggccagctgt 480

cccccgccag ctagactcag cacttagttt aggaaccagt gagcaagtca gcccttgggg 540

cagcccatac aaggccatgg ggctgggcaa gctgcacgcc tgggtccggg gtgggcacgg 600

tgcccgggca acgagctgaa agctcatctg ctctcagggg cccctccctg gggacagccc 660

ctcctggcta gtcacaccct gtaggctcct ctatataacc caggggcaca ggggctgccc 720

tcattctacc accacctcca cagcacagac agacactcag gagccagcca ggccaccatg 780

cccaattggg gtggaggagc taaatgtgga gcttgtgaaa aaacagttta tcatgctgaa 840

gaaattcaat gtaatggaag atcttttcat aaaacatgtt ttcattgtat ggcttgtaga 900

aaagcacttg attctacaac tgttgcagca catgaaagtg aaatctattg taaagtatgt 960

tatggaagaa gatatggacc aaaaggaatt ggatatggac aaggagcagg atgtctttct 1020

acagatactg gagaacattt gggattgcaa tttcaacaaa gtcctaaacc agctagatct 1080

gttacaacaa gtaatccatc aaaatttact gctaaatttg gagaatccga aaaatgtcct 1140

agatgtggaa aatcagtata tgctgctgaa aaagttatgg gaggtggaaa accatggcat 1200

aagacatgtt ttagatgtgc aatttgtggt aaatctttgg aatctacaaa tgttacagat 1260

aaagatggag aattgtattg taaagtttgt tatgctaaaa attttggacc tacaggtata 1320

ggatttggag gtttgacaca acaagttgaa aaaaaagaat gatcaacctc tggattacaa 1380

aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata 1440

cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc 1500

cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg 1560

tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac 1620

ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat 1680

cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt 1740

ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat 1800

tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc 1860

ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag 1920

tcggatctcc ctttgggccg cctccccgca ctgcccgggt ggcatccctg tgacccctcc 1980

ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata 2040

aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat ggggtggagg 2100

ggggtggtat ggagcaaggg gcccaagttg ggaagaaacc tgtagggcct gc 2152

<210> 11

<211> 1925

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - hTnT-CSRP3 кодон-оптимизированная кассета

экспрессии

<400> 11

ctcagtccat taggagccag tagcctggaa gatgtcttta cccccagcat cagttcaagt 60

ggagcagcac ataactcttg ccctctgcct tccaagattc tggtgctgag acttatggag 120

tgtcttggag gttgccttct gccccccaac cctgctccca gctggccctc ccaggcctgg 180

gttgctggcc tctgctttat caggattctc aagagggaca gctggtttat gttgcatgac 240

tgttccctgc atatctgctc tggttttaaa tagcttatct gagcagctgg aggaccacat 300

gggcttatat ggcgtggggt acatgttcct gtagccttgt ccctggcacc tgccaaaata 360

gcagccaaca ccccccaccc ccaccgccat ccccctgccc cacccgtccc ctgtcgcaca 420

ttcctccctc cgcagggctg gctcaccagg ccccagccca catgcctgct taaagccctc 480

tccatcctct gcctcaccca gtccccgctg agactgagca gacgcctcca ggatctgtcg 540

gcaggccacc atgcccaatt ggggtggagg agctaaatgt ggagcttgtg aaaaaacagt 600

ttatcatgct gaagaaattc aatgtaatgg aagatctttt cataaaacat gttttcattg 660

tatggcttgt agaaaagcac ttgattctac aactgttgca gcacatgaaa gtgaaatcta 720

ttgtaaagta tgttatggaa gaagatatgg accaaaagga attggatatg gacaaggagc 780

aggatgtctt tctacagata ctggagaaca tttgggattg caatttcaac aaagtcctaa 840

accagctaga tctgttacaa caagtaatcc atcaaaattt actgctaaat ttggagaatc 900

cgaaaaatgt cctagatgtg gaaaatcagt atatgctgct gaaaaagtta tgggaggtgg 960

aaaaccatgg cataagacat gttttagatg tgcaatttgt ggtaaatctt tggaatctac 1020

aaatgttaca gataaagatg gagaattgta ttgtaaagtt tgttatgcta aaaattttgg 1080

acctacaggt ataggatttg gaggtttgac acaacaagtt gaaaaaaaag aatgatcaac 1140

ctctggatta caaaatttgt gaaagattga ctggtattct taactatgtt gctcctttta 1200

cgctatgtgg atacgctgct ttaatgcctt tgtatcatgc tattgcttcc cgtatggctt 1260

tcattttctc ctccttgtat aaatcctggt tgctgtctct ttatgaggag ttgtggcccg 1320

ttgtcaggca acgtggcgtg gtgtgcactg tgtttgctga cgcaaccccc actggttggg 1380

gcattgccac cacctgtcag ctcctttccg ggactttcgc tttccccctc cctattgcca 1440

cggcggaact catcgccgcc tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca 1500

ctgacaattc cgtggtgttg tcggggaaat catcgtcctt tccttggctg ctcgcctgtg 1560

ttgccacctg gattctgcgc gggacgtcct tctgctacgt cccttcggcc ctcaatccag 1620

cggaccttcc ttcccgcggc ctgctgccgg ctctgcggcc tcttccgcgt cttcgccttc 1680

gccctcagac gagtcggatc tccctttggg ccgcctcccc gcactgcccg ggtggcatcc 1740

ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc cctggaagtt gccactccag tgcccaccag 1800

ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat tttgtctgac taggtgtcct tctataatat 1860

tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa ggggcccaag ttgggaagaa acctgtaggg 1920

cctgc 1925

<210> 12

<211> 2430

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – полная полинуклеотидная последовательность

векторного геном

<400> 12

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60

cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcctaccct tcagattaaa aataactgag gtaagggcct 180

gggtagggga ggtggtgtga gacgctcctg tctctcctct atctgcccat cggccctttg 240

gggaggagga atgtgcccaa ggactaaaaa aaggccatgg agccagaggg gcgagggcaa 300

cagacctttc atgggcaaac cttggggccc tgctgtctag catgccccac tacgggtcta 360

ggctgcccat gtaaggaggc aaggcctggg gacacccgag atgcctggtt ataattaacc 420

cagacatgtg gctgcccccc cccccccaac acctgctgcc tctaaaaata accctgtccc 480

tggtggatcc cctgcatgcg aagatcttcg aacaaggctg tgggggactg agggcaggct 540

gtaacaggct tgggggccag ggcttatacg tgcctgggac tcccaaagta ttactgttcc 600

atgttcccgg cgaagggcca gctgtccccc gccagctaga ctcagcactt agtttaggaa 660

ccagtgagca agtcagccct tggggcagcc catacaaggc catggggctg ggcaagctgc 720

acgcctgggt ccggggtggg cacggtgccc gggcaacgag ctgaaagctc atctgctctc 780

aggggcccct ccctggggac agcccctcct ggctagtcac accctgtagg ctcctctata 840

taacccaggg gcacaggggc tgccctcatt ctaccaccac ctccacagca cagacagaca 900

ctcaggagcc agccaggcca ccatgccaaa ctggggcgga ggcgcaaaat gtggagcctg 960

tgaaaagacc gtctaccatg cagaagaaat ccagtgcaat ggaaggagtt tccacaagac 1020

gtgtttccac tgcatggcct gcaggaaggc tcttgacagc acgacagtcg cggctcatga 1080

gtcggagatc tactgcaagg tgtgctatgg gcgcagatat ggccccaaag ggatcgggta 1140

tggacaaggc gctggctgtc tcagcacaga cacgggcgag catctcggcc tgcagttcca 1200

acagtcccca aagccggcac gctcagttac caccagcaac ccttccaaat tcactgcgaa 1260

gtttggagag tccgagaagt gccctcgatg tggcaagtca gtctatgctg ctgagaaggt 1320

tatgggaggt ggcaagcctt ggcacaagac ctgtttccgc tgtgccatct gtgggaagag 1380

tctggagtcc acaaatgtca ctgacaaaga tggggaactt tattgcaaag tttgctatgc 1440

caaaaatttt ggccccacgg gtattgggtt tggaggcctt acacaacaag tggaaaagaa 1500

agaatgatca acctctggat tacaaaattt gtgaaagatt gactggtatt cttaactatg 1560

ttgctccttt tacgctatgt ggatacgctg ctttaatgcc tttgtatcat gctattgctt 1620

cccgtatggc tttcattttc tcctccttgt ataaatcctg gttgctgtct ctttatgagg 1680

agttgtggcc cgttgtcagg caacgtggcg tggtgtgcac tgtgtttgct gacgcaaccc 1740

ccactggttg gggcattgcc accacctgtc agctcctttc cgggactttc gctttccccc 1800

tccctattgc cacggcggaa ctcatcgccg cctgccttgc ccgctgctgg acaggggctc 1860

ggctgttggg cactgacaat tccgtggtgt tgtcggggaa atcatcgtcc tttccttggc 1920

tgctcgcctg tgttgccacc tggattctgc gcgggacgtc cttctgctac gtcccttcgg 1980

ccctcaatcc agcggacctt ccttcccgcg gcctgctgcc ggctctgcgg cctcttccgc 2040

gtcttcgcct tcgccctcag acgagtcgga tctccctttg ggccgcctcc ccgcactgcc 2100

cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc 2160

agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc 2220

cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggccca agttgggaag 2280

aaacctgtag ggcctgcagg aacccctagt gatggagact ccctctctgc gcgctcgctc 2340

gctcactgag gccgggcgac caaaggtcgc ccgacgcccg ggctttgccc gggcggcctc 2400

agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt 2430

<210> 13

<211> 2203

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - полная полинуклеотидная последовательность

векторного генома

<400> 13

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60

cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcctctcag tccattagga gccagtagcc tggaagatgt 180

ctttaccccc agcatcagtt caagtggagc agcacataac tcttgccctc tgccttccaa 240

gattctggtg ctgagactta tggagtgtct tggaggttgc cttctgcccc ccaaccctgc 300

tcccagctgg ccctcccagg cctgggttgc tggcctctgc tttatcagga ttctcaagag 360

ggacagctgg tttatgttgc atgactgttc cctgcatatc tgctctggtt ttaaatagct 420

tatctgagca gctggaggac cacatgggct tatatggcgt ggggtacatg ttcctgtagc 480

cttgtccctg gcacctgcca aaatagcagc caacaccccc cacccccacc gccatccccc 540

tgccccaccc gtcccctgtc gcacattcct ccctccgcag ggctggctca ccaggcccca 600

gcccacatgc ctgcttaaag ccctctccat cctctgcctc acccagtccc cgctgagact 660

gagcagacgc ctccaggatc tgtcggcagg ccaccatgcc aaactggggc ggaggcgcaa 720

aatgtggagc ctgtgaaaag accgtctacc atgcagaaga aatccagtgc aatggaagga 780

gtttccacaa gacgtgtttc cactgcatgg cctgcaggaa ggctcttgac agcacgacag 840

tcgcggctca tgagtcggag atctactgca aggtgtgcta tgggcgcaga tatggcccca 900

aagggatcgg gtatggacaa ggcgctggct gtctcagcac agacacgggc gagcatctcg 960

gcctgcagtt ccaacagtcc ccaaagccgg cacgctcagt taccaccagc aacccttcca 1020

aattcactgc gaagtttgga gagtccgaga agtgccctcg atgtggcaag tcagtctatg 1080

ctgctgagaa ggttatggga ggtggcaagc cttggcacaa gacctgtttc cgctgtgcca 1140

tctgtgggaa gagtctggag tccacaaatg tcactgacaa agatggggaa ctttattgca 1200

aagtttgcta tgccaaaaat tttggcccca cgggtattgg gtttggaggc cttacacaac 1260

aagtggaaaa gaaagaatga tcaacctctg gattacaaaa tttgtgaaag attgactggt 1320

attcttaact atgttgctcc ttttacgcta tgtggatacg ctgctttaat gcctttgtat 1380

catgctattg cttcccgtat ggctttcatt ttctcctcct tgtataaatc ctggttgctg 1440

tctctttatg aggagttgtg gcccgttgtc aggcaacgtg gcgtggtgtg cactgtgttt 1500

gctgacgcaa cccccactgg ttggggcatt gccaccacct gtcagctcct ttccgggact 1560

ttcgctttcc ccctccctat tgccacggcg gaactcatcg ccgcctgcct tgcccgctgc 1620

tggacagggg ctcggctgtt gggcactgac aattccgtgg tgttgtcggg gaaatcatcg 1680

tcctttcctt ggctgctcgc ctgtgttgcc acctggattc tgcgcgggac gtccttctgc 1740

tacgtccctt cggccctcaa tccagcggac cttccttccc gcggcctgct gccggctctg 1800

cggcctcttc cgcgtcttcg ccttcgccct cagacgagtc ggatctccct ttgggccgcc 1860

tccccgcact gcccgggtgg catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg 1920

aagttgccac tccagtgccc accagccttg tcctaataaa attaagttgc atcattttgt 1980

ctgactaggt gtccttctat aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc 2040

ccaagttggg aagaaacctg tagggcctgc aggaacccct agtgatggag actccctctc 2100

tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg 2160

cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agt 2203

<210> 14

<211> 2430

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - полная полинуклеотидная последовательность

векторного генома

<400> 14

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60

cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcctaccct tcagattaaa aataactgag gtaagggcct 180

gggtagggga ggtggtgtga gacgctcctg tctctcctct atctgcccat cggccctttg 240

gggaggagga atgtgcccaa ggactaaaaa aaggccatgg agccagaggg gcgagggcaa 300

cagacctttc atgggcaaac cttggggccc tgctgtctag catgccccac tacgggtcta 360

ggctgcccat gtaaggaggc aaggcctggg gacacccgag atgcctggtt ataattaacc 420

cagacatgtg gctgcccccc cccccccaac acctgctgcc tctaaaaata accctgtccc 480

tggtggatcc cctgcatgcg aagatcttcg aacaaggctg tgggggactg agggcaggct 540

gtaacaggct tgggggccag ggcttatacg tgcctgggac tcccaaagta ttactgttcc 600

atgttcccgg cgaagggcca gctgtccccc gccagctaga ctcagcactt agtttaggaa 660

ccagtgagca agtcagccct tggggcagcc catacaaggc catggggctg ggcaagctgc 720

acgcctgggt ccggggtggg cacggtgccc gggcaacgag ctgaaagctc atctgctctc 780

aggggcccct ccctggggac agcccctcct ggctagtcac accctgtagg ctcctctata 840

taacccaggg gcacaggggc tgccctcatt ctaccaccac ctccacagca cagacagaca 900

ctcaggagcc agccaggcca ccatgcccaa ttggggtgga ggagctaaat gtggagcttg 960

tgaaaaaaca gtttatcatg ctgaagaaat tcaatgtaat ggaagatctt ttcataaaac 1020

atgttttcat tgtatggctt gtagaaaagc acttgattct acaactgttg cagcacatga 1080

aagtgaaatc tattgtaaag tatgttatgg aagaagatat ggaccaaaag gaattggata 1140

tggacaagga gcaggatgtc tttctacaga tactggagaa catttgggat tgcaatttca 1200

acaaagtcct aaaccagcta gatctgttac aacaagtaat ccatcaaaat ttactgctaa 1260

atttggagaa tccgaaaaat gtcctagatg tggaaaatca gtatatgctg ctgaaaaagt 1320

tatgggaggt ggaaaaccat ggcataagac atgttttaga tgtgcaattt gtggtaaatc 1380

tttggaatct acaaatgtta cagataaaga tggagaattg tattgtaaag tttgttatgc 1440

taaaaatttt ggacctacag gtataggatt tggaggtttg acacaacaag ttgaaaaaaa 1500

agaatgatca acctctggat tacaaaattt gtgaaagatt gactggtatt cttaactatg 1560

ttgctccttt tacgctatgt ggatacgctg ctttaatgcc tttgtatcat gctattgctt 1620

cccgtatggc tttcattttc tcctccttgt ataaatcctg gttgctgtct ctttatgagg 1680

agttgtggcc cgttgtcagg caacgtggcg tggtgtgcac tgtgtttgct gacgcaaccc 1740

ccactggttg gggcattgcc accacctgtc agctcctttc cgggactttc gctttccccc 1800

tccctattgc cacggcggaa ctcatcgccg cctgccttgc ccgctgctgg acaggggctc 1860

ggctgttggg cactgacaat tccgtggtgt tgtcggggaa atcatcgtcc tttccttggc 1920

tgctcgcctg tgttgccacc tggattctgc gcgggacgtc cttctgctac gtcccttcgg 1980

ccctcaatcc agcggacctt ccttcccgcg gcctgctgcc ggctctgcgg cctcttccgc 2040

gtcttcgcct tcgccctcag acgagtcgga tctccctttg ggccgcctcc ccgcactgcc 2100

cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc 2160

agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc 2220

cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggccca agttgggaag 2280

aaacctgtag ggcctgcagg aacccctagt gatggagact ccctctctgc gcgctcgctc 2340

gctcactgag gccgggcgac caaaggtcgc ccgacgcccg ggctttgccc gggcggcctc 2400

agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt 2430

<210> 15

<211> 2203

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - полная полинуклеотидная последовательность

векторного генома

<400> 15

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60

cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcctctcag tccattagga gccagtagcc tggaagatgt 180

ctttaccccc agcatcagtt caagtggagc agcacataac tcttgccctc tgccttccaa 240

gattctggtg ctgagactta tggagtgtct tggaggttgc cttctgcccc ccaaccctgc 300

tcccagctgg ccctcccagg cctgggttgc tggcctctgc tttatcagga ttctcaagag 360

ggacagctgg tttatgttgc atgactgttc cctgcatatc tgctctggtt ttaaatagct 420

tatctgagca gctggaggac cacatgggct tatatggcgt ggggtacatg ttcctgtagc 480

cttgtccctg gcacctgcca aaatagcagc caacaccccc cacccccacc gccatccccc 540

tgccccaccc gtcccctgtc gcacattcct ccctccgcag ggctggctca ccaggcccca 600

gcccacatgc ctgcttaaag ccctctccat cctctgcctc acccagtccc cgctgagact 660

gagcagacgc ctccaggatc tgtcggcagg ccaccatgcc caattggggt ggaggagcta 720

aatgtggagc ttgtgaaaaa acagtttatc atgctgaaga aattcaatgt aatggaagat 780

cttttcataa aacatgtttt cattgtatgg cttgtagaaa agcacttgat tctacaactg 840

ttgcagcaca tgaaagtgaa atctattgta aagtatgtta tggaagaaga tatggaccaa 900

aaggaattgg atatggacaa ggagcaggat gtctttctac agatactgga gaacatttgg 960

gattgcaatt tcaacaaagt cctaaaccag ctagatctgt tacaacaagt aatccatcaa 1020

aatttactgc taaatttgga gaatccgaaa aatgtcctag atgtggaaaa tcagtatatg 1080

ctgctgaaaa agttatggga ggtggaaaac catggcataa gacatgtttt agatgtgcaa 1140

tttgtggtaa atctttggaa tctacaaatg ttacagataa agatggagaa ttgtattgta 1200

aagtttgtta tgctaaaaat tttggaccta caggtatagg atttggaggt ttgacacaac 1260

aagttgaaaa aaaagaatga tcaacctctg gattacaaaa tttgtgaaag attgactggt 1320

attcttaact atgttgctcc ttttacgcta tgtggatacg ctgctttaat gcctttgtat 1380

catgctattg cttcccgtat ggctttcatt ttctcctcct tgtataaatc ctggttgctg 1440

tctctttatg aggagttgtg gcccgttgtc aggcaacgtg gcgtggtgtg cactgtgttt 1500

gctgacgcaa cccccactgg ttggggcatt gccaccacct gtcagctcct ttccgggact 1560

ttcgctttcc ccctccctat tgccacggcg gaactcatcg ccgcctgcct tgcccgctgc 1620

tggacagggg ctcggctgtt gggcactgac aattccgtgg tgttgtcggg gaaatcatcg 1680

tcctttcctt ggctgctcgc ctgtgttgcc acctggattc tgcgcgggac gtccttctgc 1740

tacgtccctt cggccctcaa tccagcggac cttccttccc gcggcctgct gccggctctg 1800

cggcctcttc cgcgtcttcg ccttcgccct cagacgagtc ggatctccct ttgggccgcc 1860

tccccgcact gcccgggtgg catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg 1920

aagttgccac tccagtgccc accagccttg tcctaataaa attaagttgc atcattttgt 1980

ctgactaggt gtccttctat aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc 2040

ccaagttggg aagaaacctg tagggcctgc aggaacccct agtgatggag actccctctc 2100

tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg 2160

cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agt 2203

<210> 16

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мотив последовательности Козак

<400> 16

gccgccrcca ugg 13

<210> 17

<211> 13

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мотив последовательности Козак

<400> 17

gccgccrcca ugc 13

<210> 18

<211> 10

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мотив последовательности Козак

<400> 18

gacaccaugg 10

<210> 19

<211> 10

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мотив последовательности Козак

<400> 19

gacaccaugc 10

<210> 20

<211> 141

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус

<400> 20

cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60

gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120

actccatcac taggggttcc t 141

<210> 21

<211> 168

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 21

gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgcccg ggcaaagccc gggcgtcggg cgacctttgg 60

tcgcccggcc tcagtgagcg agcgagcgcg cagagaggga gtggccaact ccatcactag 120

gggttccttg tagttaatga ttaacccgcc atgctactta tctacgta 168

<210> 22

<211> 170

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус

<400> 22

ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60

ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120

aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta 170

<210> 23

<211> 145

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус

<400> 23

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgcccgggc aaagcccggg 60

cgtcgggcga cctttggtcg cccggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120

gccaactcca tcactagggg ttcct 145

<210> 24

<211> 141

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус

<400> 24

aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60

ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120

gagcgcgcag ctgcctgcag g 141

<210> 25

<211> 168

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 25

tacgtagata agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag 60

ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 120

cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgc 168

<210> 26

<211> 133

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 26

aggaacccct agtgatggag actccctctc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc 60

gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc 120

gcagagaggg agt 133

<210> 27

<211> 124

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - последовательность векторного наполнителя <400> 27

gcggcaattc agtcgataac tataacggtc ctaaggtagc gatttaaata cgcgctctct 60

taaggtagcc ccgggacgcg tcaattgact acaaaccgag tatctgcaga gggccctgcg 120

tatg 124

<210> 28

<211> 84

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - последовательность векторного наполнителя

<400> 28

cttctgaggc ggaaagaacc agatcctctc ttaaggtagc atcgagattt aaattaggga 60

taacagggta atggcgcggg ccgc 84

<210> 29

<211> 63

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - последовательность векторного наполнителя

<400> 29

gttacccagg ctggagtgca gtggcacatt tctgctcact gcaacctcct cctccctggg 60

ttc 63

<210> 30

<211> 573

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – промотор CAG в части бетагерпесвируса человека 5

<400> 30

acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 60

aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 120

gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 180

ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 240

atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtcga 300

ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac ccccaatttt 360

gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg ggggggcgcg 420

cgccaggcgg ggcggggcgg ggcgaggggc ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg 480

cagccaatca gagcggcgcg ctccgaaagt ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc 540

ggccctataa aaagcgaagc gcgcggcggg cgg 573

<210> 31

<211> 771

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – промотор MHCK7

<400> 31

acccttcaga ttaaaaataa ctgaggtaag ggcctgggta ggggaggtgg tgtgagacgc 60

tcctgtctct cctctatctg cccatcggcc ctttggggag gaggaatgtg cccaaggact 120

aaaaaaaggc catggagcca gaggggcgag ggcaacagac ctttcatggg caaaccttgg 180

ggccctgctg tctagcatgc cccactacgg gtctaggctg cccatgtaag gaggcaaggc 240

ctggggacac ccgagatgcc tggttataat taacccagac atgtggctgc cccccccccc 300

ccaacacctg ctgcctctaa aaataaccct gtccctggtg gatcccctgc atgcgaagat 360

cttcgaacaa ggctgtgggg gactgagggc aggctgtaac aggcttgggg gccagggctt 420

atacgtgcct gggactccca aagtattact gttccatgtt cccggcgaag ggccagctgt 480

cccccgccag ctagactcag cacttagttt aggaaccagt gagcaagtca gcccttgggg 540

cagcccatac aaggccatgg ggctgggcaa gctgcacgcc tgggtccggg gtgggcacgg 600

tgcccgggca acgagctgaa agctcatctg ctctcagggg cccctccctg gggacagccc 660

ctcctggcta gtcacaccct gtaggctcct ctatataacc caggggcaca ggggctgccc 720

tcattctacc accacctcca cagcacagac agacactcag gagccagcca g 771

<210> 32

<211> 544

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 32

ctcagtccat taggagccag tagcctggaa gatgtcttta cccccagcat cagttcaagt 60

ggagcagcac ataactcttg ccctctgcct tccaagattc tggtgctgag acttatggag 120

tgtcttggag gttgccttct gccccccaac cctgctccca gctggccctc ccaggcctgg 180

gttgctggcc tctgctttat caggattctc aagagggaca gctggtttat gttgcatgac 240

tgttccctgc atatctgctc tggttttaaa tagcttatct gagcagctgg aggaccacat 300

gggcttatat ggcgtggggt acatgttcct gtagccttgt ccctggcacc tgccaaaata 360

gcagccaaca ccccccaccc ccaccgccat ccccctgccc cacccgtccc ctgtcgcaca 420

ttcctccctc cgcagggctg gctcaccagg ccccagccca catgcctgct taaagccctc 480

tccatcctct gcctcaccca gtccccgctg agactgagca gacgcctcca ggatctgtcg 540

gcag 544

<210> 33

<211> 502

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 33

ctcagtccat taggagccag tagcctggaa gatgtcttta cccccagcat cagttcaagt 60

ggagcagcac ataactcttg ccctctgcct tccaagattc tggtgctgag acttatggag 120

tgtcttggag gttgccttct gccccccaac cctgctccca gctggccctc ccaggcctgg 180

gttgctggcc tctgctttat caggattctc aagagggaca gctggtttat gttgcatgac 240

tgttccctgc atatctgctc tggttttaaa tagcttatct gagcagctgg aggaccacat 300

gggcttatat ggcgtggggt acatgttcct gtagccttgt ccctggcacc tgccaaaata 360

gcagccaaca ccccccaccc ccaccgccat ccccctgccc cacccgtccc ctgtcgcaca 420

ttcctccctc cgcagggctg gctcaccagg ccccagccca catgcctgct taaagccctc 480

tccatcctct gcctcaccca gt 502

<210> 34

<211> 5464

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 34

ggtaccggat cctgcaaggt cacacaaggg tctccaccca ccaggtgccc tagtctcaat 60

ttcagtttcc atgccttgtt ctcacaatgc tggcctcccc agagctaatt tggactttgt 120

ttttatttca aaagggcctg aatgaggagt agatcttgtg ctacccagct ctaagggtgc 180

ccgtgaagcc ctcagacctg gagcctttgc aacagccctt taggtggaag cagaataaag 240

caattttcct taaagccaaa atcctgcctc tagactcttc ttctctgacc tcggtccctg 300

ggctctaggg tggggaggtg gggcttggaa gaagaaggtg gggaagtggc aaaagccgat 360

ccctagggcc ctgtgaagtt cggagccttc cctgtacagc actggctcat agatcctcct 420

ccagccaaac atagcaagaa gtgatacctc ctttgtgact tccccaggcc cagtacctgt 480

caggttgaaa caggatttag agaagcctct gaactcacct gaactctgaa gctcatccac 540

caagcaagca cctaggtgcc actgctagtt agtatcctac gctgataata tgcagagctg 600

ggccacagaa gtcctggggt gtaggaactg accagtgact tttcagtcgg caaaggtatg 660

accccctcag cagatgtagt aatgtcccct tagatcccat cccaggcagg tctctaagag 720

gacatgggat gagagatgta gtcatgtggc attccaaaca cagctatcca cagtgtccct 780

tgccccttcc acttagccag gaggacagta accttagcct atctttcttc ctccccatcc 840

tcccaggaca caccccctgg tctgcagtat tcatttcttc cttcacgtcc cctctgtgac 900

ttccatttgc aaggcttttg acctctgcag ctgctggaag atagagtttg gccctaggtg 960

tggcaagcca tctcaagaga aagcagacaa cagggggacc agattttgga aggatcagga 1020

actaaatcac tggcgggcct gggggtagaa aaaagagtga gtgagtccgc tccagctaag 1080

ccaagctagt ccccgagata ctctgccaca gctgggctgc tcggggtagc tttaggaatg 1140

tgggtctgaa agacaatggg attggaagac atctctttga gtctcccctc aaccccacct 1200

acagacacac tcgtgtgtgg ccagactcct gttcaacagc cctctgtgtt ctgaccactg 1260

agctaggcaa ccagagcatg ggccctgtgc tgaggatgaa gagttggtta ccaatagcaa 1320

aaacagcagg ggagggagaa cagagaacga aataaggaag gaagaaggaa aggccagtca 1380

atcagatgca gtcagaagag atgggaagcc aacacacagc ttgagcagag gaaacagaaa 1440

agggagagat tctgggcata aggaggccac agaaagaaga gcccaggccc cccaagtctc 1500

ctctttatac cctcatcccg tctcccaatt aagcccactc ttcttcctag atcagacctg 1560

agctgcagcg aagagacccg tagggaggat cacactggat gaaggagatg tgtggagaag 1620

tccagggaac ctaagagcca gagcctaaaa gagcaagaga taaaggtgct tcaaaggtgg 1680

ccaggctgtg cacacagagg gtcgaggact ggtggtagag cctcaagata aggatgatgc 1740

tcagaatggg cggggggggg gattctgggg gggggagaga gaaggtgaga aggagcctgg 1800

aacagagaat ctggaagcgc tggaaacgat accataaagg gaagaaccca ggctaccttt 1860

agatgtaaat catgaaagac agggagaagg gaagctggag agagtagaag gaccccgggg 1920

caagacattg aagcaaggac aagccaggtt gagcgctccg tgaaatcagc ctgctgaagg 1980

cagagccctg gtatgagcac cagaacagca gaggctaggg ttaatgtcga gacagggaac 2040

agaaggtaga cacaggaaca gacagagacg ggggagccag gtaacaaagg aatggtcctt 2100

ctcacctgtg gccagagcgt ccatctgtgt ccacatactc tagaatgttc atcagactgc 2160

agggctggct tgggaggcag ctggaaagag tatgtgagag ccaggggaga caagggggcc 2220

taggaaagga agaagagggc aaaccaggcc acacaagagg gcagagccca gaactgagtt 2280

aactccttcc ttgttgcatc ttccatagga ggcagtggga actctgtgac caccatcccc 2340

catgagcccc cactacccat accaagtttg gcctgagtgg cattctaggt tccctgagga 2400

cagagcctgg cctttgtctc ttggacctga cccaagctga cccaatgttc tcagtacctt 2460

atcatgccct caagagcttg agaaccaggc agtgacatat taggccatgg gctaaccctg 2520

gagcttgcac acaggagcct caagtgacct ccagggacac agctgcagac aggtggcctt 2580

tatccccaaa gagcaaccat ttggcatagg tggctgcaaa tgggaatgca aggttgaatc 2640

aggtcccttc aagaatactg catgcaagac ctaagacccc tggagagagg ggtatgctcc 2700

tgcccccacc caccataagg ggagtgaact atcctagggg gctggcgacc ttggggagac 2760

accacattac tgagagtgct gagcccagaa aaactgaccg ccctgtgtcc tgcccacctc 2820

cacactctag agctatattg agaggtgaca gtagataggg tgggagctgg tagcagggag 2880

agtgttcctg ggtgtgaggg tgtaggggaa agccagagca ggggagtctg gctttgtctc 2940

ctgaacacaa tgtctactta gttataacag gcatgacctg ctaaagaccc aacatctacg 3000

acctctgaaa agacagcagc cctggaggac aggggttgtc tctgagcctt gggtgcttga 3060

tggtgccaca aaggagggca tgagtgtgag tataaggccc caggagcgtt agagaagggc 3120

acttgggaag gggtcagtct gcagagcccc tatccatgga atctggagcc tggggccaac 3180

tggtgtaaat ctctgggcct gccaggcatt caaagcagca cctgcatcct ctggcagcct 3240

ggggaggcgg aagggagcaa ccccccactt ataccctttc tccctcagcc ccaggattaa 3300

cacctctggc cttccccctt cccacctccc atcaggagtg gagggttgca gagggagggt 3360

aaaaacctac atgtccaaac atcatggtgc acgatatatg gatcagtatg tgtagaggca 3420

agaaaggaaa tctgcaggct taactgggtt aatgtgtaaa gtctgtgtgc atgtgtgtgt 3480

gtctgactga aaacgggcat ggctgtgcag ctgttcagtt ctgtgcgtga ggttaccaga 3540

ctgcaggttt gtgtgtaaat tgcccaaggc aaagtgggtg aatcccttcc atggtttaaa 3600

gagattggat gatggcctgc atctcaagga ccatggaaaa tagaatggac actctatatg 3660

tgtctctaag ctaaggtagc aaggtctttg gaggacacct gtctagagat gtgggcaaca 3720

gagactacag acagtatctg tacagagtaa ggagagagag gagggggtgt agaattctct 3780

tactatcaaa gggaaactga gtcgtgcacc tgcaaagtgg atgctctccc tagacatcat 3840

gactttgtct ctggggagcc agcactgtgg aacttcaggt ctgagagagt aggaggctcc 3900

cctcagcctg aagctatgca gatagccagg gttgaaaggg ggaagggaga gcctgggatg 3960

ggagcttgtg tgttggaggc aggggacaga tattaagcct ggaagagaag gtgaccctta 4020

cccagttgtt caactcaccc ttcagattaa aaataactga ggtaagggcc tgggtagggg 4080

aggtggtgtg agacgctcct gtctctcctc tatctgccca tcggcccttt ggggaggagg 4140

aatgtgccca aggactaaaa aaaggccatg gagccagagg ggcgagggca acagaccttt 4200

catgggcaaa ccttggggcc ctgctgtcct cctgtcacct ccagagccaa gggatcaaag 4260

gaggaggagc caggacagga gggaagtggg agggagggtc ccagcagagg actccaaatt 4320

taggcagcag gcatatggga tgggatataa aggggctgga gcactgagag ctgtcagaga 4380

tttctccaac ccaggtaaga gggagtttcg ggtgggggct cttcacccac accagacctc 4440

tccccaccta gaaggaaact gcctttcctg gaagtggggt tcaggccggt cagagatctg 4500

acagggtggc cttccaccag cctgggaagt tctcagtggc aggaggtttc cacaagaaac 4560

actggatgcc ccttccctta cgctgtcttc tccatcttcc tcctggggat gctcctcccc 4620

gtcttggttt atcttggctc ttcgtcttca gcaagatttg ccctgtgctg tccactccat 4680

ctttctctac tgtctccgtg ccttgccttg ccttcttgcg tgtccttcct ttccacccat 4740

ttctcacttc accttttctc cccttctcat ttgtattcat ccttccttcc ttccttcctt 4800

ccttccttcc ttccttcctt ccttcctttc tcccttcctt ccttccttcc ttccttcctt 4860

ccttccttcc ttcctgtgtc agagtgctga gaatcacacc tggggttccc acccttatgt 4920

aaacaatctt ccagtgagcc acagcttcag tgctgctggg tgctctctta ccttcctcac 4980

cccctggctt gtcctgttcc atcctggtca ggatctctag attggtctcc cagcctctgc 5040

tactcctctt cctgcctgtt cctctctctg tccagctgcg ccactgtggt gcctcgttcc 5100

agctgtggtc cacattcttc aggattctct gaaaagttaa ccaggtgaga atgtttcccc 5160

tgtagacagc agatcacgat tctcccggaa gtcaggcttc cagccctctc tttctctgcc 5220

cagctgcccg gcactcttag caaacctcag gcacccttac cccacataga cctctgacag 5280

agaagcaggc actttacatg gagtcctggt gggagagcca taggctacgg tgtaaaagag 5340

gcagggaagt ggtggtgtag gaaagtcagg acttcacata gaagcctagc ccacaccaga 5400

aatgacagac agatccctcc tatctccccc ataagagttt gagtcgaccc gcggccccga 5460

attg 5464

<210> 35

<211> 413

<212> ДНК

<213> Gallus gallus

<400> 35

gggataaaag cagtctgggc tttcacatga cagcatctgg ggctgcggca gagggtcggg 60

tccgaagcgc tgccttatca gcgtccccag ccctgggagg tgacagctgg ctggcttgtg 120

tcagcccctc gggcactcac gtatctccgt ccgacgggtt taaaatagca aaactctgag 180

gccacacaat agcttgggct tatatgggct cctgtggggg aagggggagc acggaggggg 240

ccggggccgc tgctgccaaa atagcagctc acaagtgttg cattcctctc tgggcgccgg 300

gcacattcct gctggctctg cccgccccgg ggtgggcgcc ggggggacct taaagcctct 360

gccccccaag gagcccttcc cagacagccg ccggcaccca ccgctccgtg gga 413

<210> 36

<211> 1090

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 36

ctctcagccc tggaagtcct tgctcacagc cgaggcgccg agagcgcttg ctctgcccag 60

atctgcgcga gtctggcgcc cgcgctctga acggcgtcgc tgcccagccc ccttccccgg 120

gaggtgggag cggccaccca gggccccgtg gctgcccttg taaggaggcg aggcccgagg 180

acacccgaga cgcccggtta taattaacca ggacacgtgg cgaacccccc tccaacacct 240

gcccccgaac ccccccatac ccagcgcctc gggtctcggc ctttgcggca gaggagacag 300

caaagcgccc tctaaaaata actcctttcc cggcgaccga gaccctccct gtcccccgca 360

cagcggaaat ctcccagtgg caccgagggg gcgagggtta agtggggggg agggtgacca 420

ccgcctccca cccttgccct gagtttgaat ctctccaact cagccagcct cagtttcccc 480

tccactcagt ccctaggagg aaggggcgcc caagcgcggg tttctggggt tagactgccc 540

tccattgcaa ttggtccttc tcccggcctc tgcttcctcc agctcacagg gtatctgctc 600

ctcctggagc cacaccttgg ttccccgagg tgccgctggg actcgggtag gggtgagggc 660

ccagggggca cagggggagc cgagggccac aggaagggct ggtggctgaa ggagactcag 720

gggccagggg acggtggctt ctacgtgctt gggacgttcc cagccaccgt cccatgttcc 780

cggcgggggg ccagctgtcc ccaccgccag cccaactcag cacttggtca gggtatcagc 840

ttggtggggg ggcgtgagcc cagcccctgg ggcggctcag cccatacaag gccatggggc 900

tgggcgcaaa gcatgcctgg gttcagggtg ggtatggtgc gggagcaggg aggtgagagg 960

ctcagctgcc ctccagaact cctccctggg gacaacccct cccagccaat agcacagcct 1020

aggtccccct atataaggcc acggctgctg gcccttcctt tgggtcagtg tcacctccag 1080

gatacagaca 1090

<210> 37

<211> 253

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 37

gcccagcacc ccaaggcggc caacgccaaa actctccctc ctcctcttcc tcaatctcgc 60

tctcgctctt tttttttttc gcaaaaggag gggagagggg gtaaaaaaat gctgcactgt 120

gcggcgaagc cggtgagtga gcggcgcggg gccaatcagc gtgcgccgtt ccgaaagttg 180

ccttttatgg ctcgagcggc cgcggcggcg ccctataaaa cccagcggcg cgacgcgcca 240

ccaccgccga gtc 253

<210> 38

<211> 281

<212> ДНК

<213> Gallus gallus

<400> 38

ggtcgaggtg agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct ccccaccccc 60

aattttgtat ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg gggggggggg 120

ggcgcgcgcc aggcggggcg gggcggggcg aggggcgggg cggggcgagg cggagaggtg 180

cggcggcagc caatcagagc ggcgcgctcc gaaagtttcc ttttatggcg aggcggcggc 240

ggcggcggcc ctataaaaag cgaagcgcgc ggcgggcggg a 281

<210> 39

<211> 220

<212> ДНК

<213> Бетагерпесвирус человека 5

<400> 39

tggtgatgcg gttttggcag tacaccaatg ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat 60

ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa aatcaacggg 120

actttccaaa atgtcgtaat aaccccgccc cgttgacgca aatgggcggt aggcgtgtac 180

ggtgggaggt ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg 220

<210> 40

<211> 583

<212> ДНК

<213> Бетагерпесвирус человека 5

<400> 40

tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg 60

cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 120

gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 180

atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 240

aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 300

catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 360

catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 420

atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 480

ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 540

acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgt 583

<210> 41

<211> 508

<212> ДНК

<213> Бетагерпесвирус человека 5

<400> 41

cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60

gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120

atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180

aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240

catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 300

catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 360

atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 420

ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 480

acggtgggag gtctatataa gcagagct 508

<210> 42

<211> 573

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – промотор CAG в части бетагерпесвируса человека 5

<400> 42

acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 60

aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 120

gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 180

ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 240

atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtcga 300

ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac ccccaatttt 360

gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg ggggggcgcg 420

cgccaggcgg ggcggggcgg ggcgaggggc ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg 480

cagccaatca gagcggcgcg ctccgaaagt ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc 540

ggccctataa aaagcgaagc gcgcggcggg cgg 573

<210> 43

<211> 580

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – промотор CAG в части бетагерпесвируса человека 5

<400> 43

cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60

gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120

atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180

aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240

catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 300

catgtcgagg tgagccccac gttctgcttc actctcccca tctccccccc ctccccaccc 360

ccaattttgt atttatttat tttttaatta ttttgtgcag cgatgggggc gggggggggg 420

ggggcgcgcg ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga ggcggagagg 480

tgcggcggca gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg cgaggcggcg 540

gcggcggcgg ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg 580

<210> 44

<211> 455

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 44

caacctttgg agctaagcca gcaatggtag agggaagatt ctgcacgtcc cttccaggcg 60

gcctccccgt caccaccccc cccaacccgc cccgaccgga gctgagagta attcatacaa 120

aaggactcgc ccctgccttg gggaatccca gggaccgtcg ttaaactccc actaacgtag 180

aacccagaga tcgctgcgtt cccgccccct cacccgcccg ctctcgtcat cactgaggtg 240

gagaatagca tgcgtgaggc tccggtgccc gtcagtgggc agagcgcaca tcgcccacag 300

tccccgagaa gttgggggga ggggtcggca attgaacggg tgcctagaga aggtggcgcg 360

gggtaaactg ggaaagtgat gtcgtgtact ggctccgcct ttttcccgag ggtgggggag 420

aaccgtatat aagtgcagta gtcgccgtga acgtt 455

<210> 45

<211> 401

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 45

agtgcaagtg ggttttagga ccaggatgag gcggggtggg ggtgcctacc tgacgaccga 60

ccccgaccca ctggacaagc acccaacccc cattccccaa attgcgcatc ccctatcaga 120

gagggggagg ggaaacagga tgcggcgagg cgcgtgcgca ctgccagctt cagcaccgcg 180

gacagtgcct tcgcccccgc ctggcggcgc gcgccaccgc cgcctcagca ctgaaggcgc 240

gctgacgtca ctcgccggtc ccccgcaaac tccccttccc ggccaccttg gtcgcgtccg 300

cgccgccgcc ggcccagccg gaccgcacca cgcgaggcgc gagatagggg ggcacgggcg 360

cgaccatctg cgctgcggcg ccggcgactc agcgctgcct c 401

<210> 46

<211> 448

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 46

agtgcaagtg ggttttagga ccaggatgag gcggggtggg ggtgcctacc tgacgaccga 60

ccccgaccca ctggacaagc acccaacccc cattccccaa attgcgcatc ccctatcaga 120

gagggggagg ggaaacagga tgcggcgagg cgcgtgcgca ctgccagctt cagcaccgcg 180

gacagtgcct tcgcccccgc ctggcggcgc gcgccaccgc cgcctcagca ctgaaggcgc 240

gctgacgtca ctcgccggtc ccccgcaaac tccccttccc ggccaccttg gtcgcgtccg 300

cgccgccgcc ggcccagccg gaccgcacca cgcgaggcgc gagatagggg ggcacgggcg 360

cgaccatctg cgctgcggcg ccggcgactc agcgctgcct cagtctgcgg tgggcagcgg 420

aggagtcgtg tcgtgcctga gagcgcag 448

<210> 47

<211> 422

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 47

ctgcagaggg ccctgcgtat gagtgcaagt gggttttagg accaggatga ggcggggtgg 60

gggtgcctac ctgacgaccg accccgaccc actggacaag cacccaaccc ccattcccca 120

aattgcgcat cccctatcag agagggggag gggaaacagg atgcggcgag gcgcgtgcgc 180

actgccagct tcagcaccgc ggacagtgcc ttcgcccccg cctggcggcg cgcgccaccg 240

ccgcctcagc actgaaggcg cgctgacgtc actcgccggt cccccgcaaa ctccccttcc 300

cggccacctt ggtcgcgtcc gcgccgccgc cggcccagcc ggaccgcacc acgcgaggcg 360

cgagataggg gggcacgggc gcgaccatct gcgctgcggc gccggcgact cagcgctgcc 420

tc 422

<210> 48

<211> 281

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 48

acttgtggac aaagtttgct ctattccacc tcctccaggc cctccttggg tccatcaccc 60

caggggtgct gggtccatcc cacccccagg cccacacagg cttgcagtat tgtgtgcggt 120

atggtcaggg cgtccgagag caggtttcgc agtggaaggc aggcaggtgt tggggaggca 180

gttaccgggg caacgggaac agggcgtttt ggaggtggtt gccatgggga cctggatgct 240

gacgaaggct cgcgaggctg tgagcagcca cagtgccctg c 281

<210> 49

<211> 851

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории – полинуклеотид промотора eSYN

<400> 49

gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc 60

catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca 120

acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga 180

ctttccattg acgtcaatgg gtggactatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc 240

aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct 300

ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat 360

tagtcatcgc tattaccatg gctgcagagg gccctgcgta tgagtgcaag tgggttttag 420

gaccaggatg aggcggggtg ggggtgccta cctgacgacc gaccccgacc cactggacaa 480

gcacccaacc cccattcccc aaattgcgca tcccctatca gagaggggga ggggaaacag 540

gatgcggcga ggcgcgtcgc gactgccagc ttcagcaccg cggacagtgc cttcgccccc 600

gcctggcggc gcgcgccacc gccgcctcag cactgaaggc gcgctgacgt cactcgccgg 660

tcccccgcaa actccccttc ccggccacct tggtcgcgtc cgcgccgccg ccggcccagc 720

cggaccgcac cacgcgaggc gcgagatagg ggggcacggg cgcgaccatc tgcgctgcgg 780

cgccggcgac tcagcgctgc ctcagtctgc ggtgggcagc ggaggagtcg tgtcgtgcct 840

gagagcgcag g 851

<210> 50

<211> 304

<212> ДНК

<213> Бетагерпесвирус человека 5

<400> 50

cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60

gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120

atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180

aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240

catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 300

catg 304

<210> 51

<211> 953

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 51

cgcgtccgcc cgcgagcaca gagcctcgcc tttgccgatc cgccgcccgt ccacacccgc 60

cgccaggtaa gcccggccag ccgaccgggg catgcggccg cggcccttcg cccgtgcaga 120

gccgccgtct gggccgcagc ggggggcgca tggggcggaa ccggaccgcc gtggggggcg 180

cgggagaagc ccctgggcct ccggagatgg gggacacccc acgccagttc gcaggcgcga 240

ggccgcgctc gggcgggcgc gctccggggg tgccgctctc ggggcggggg caaccggcgg 300

ggtctttgtc tgagccgggc tcttgccaat ggggatcgca cggtgggcgc ggcgtagccc 360

ccgtcaggcc cggtgggggc tggggcgcca tgcgcgtgcg cgctggtcct ttgggcgcta 420

actgcgtgcg cgctgggaat tggcgctaat tgcgcgtgcg cgctgggact caatggcgct 480

aatcgcgcgt gcgttctggg gcccgggcgc ttgcgccact tcctgcccga gccgctggcg 540

cccgagggtg tggccgctgc gtgcgcgcgc gcgacccggt cgctgtttga accgggcgga 600

ggcggggctg gcgcccggtt gggagggggt tggggcctgg cttcctgccg cgcgccgcgg 660

ggacgcctcc gaccagtgtt tgccttttat ggtaataacg cggccggccc ggcttccttt 720

gtccccaatc tgggcgcgcg ccggcgcccc ctggcggcct aaggactcgg cgcgccggaa 780

gtggccaggg cggcagcggc tgctcttggc ggccccgagg tgactatagc cttcttttgt 840

gtcttgatag ttcgccagcc tctgctaacc atgttcatgc cttcttcttt ttcctacagc 900

tcctgggcaa cgtgctggtt attgtgctgt ctcatcattt tggcaaagaa ttc 953

<210> 52

<211> 1068

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - Экзон/интрон бета-актина курицы плюс интрон

глобина кролика

<400> 52

gtcgctgcgc gctgccttcg ccccgtgccc cgctccgccg ccgcctcgcg ccgcccgccc 60

cggctctgac tgaccgcgtt actcccacag gtgagcgggc gggacggccc ttctcctccg 120

ggctgtaatt agcgcttggt ttaatgacgg cttgtttctt ttctgtggct gcgtgaaagc 180

cttgaggggc tccgggaggg ccctttgtgc ggggggagcg gctcgggggg tgcgtgcgtg 240

tgtgtgtgcg tggggagcgc cgcgtgcggc tccgcgctgc ccggcggctg tgagcgctgc 300

gggcgcggcg cggggctttg tgcgctccgc agtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc 360

ggtgccccgc ggtgcggggg gggctgcgag gggaacaaag gctgcgtgcg gggtgtgtgc 420

gtgggggggt gagcaggggg tgtgggcgcg tcggtcgggc tgcaaccccc cctgcacccc 480

cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtac ggggcgtggc 540

gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg 600

ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gcccccggag cgccggcggc 660

tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag 720

ggacttcctt tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc 780

tctagcgggc gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc 840

cttcgtgcgt cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg 900

ggggacggct gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc 960

ggcggctcta gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg 1020

ggcaacgtgc tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattc 1068

<210> 53

<211> 149

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - последовательность химерного интрона

<400> 53

ggtaagttta gtctttttgt cttttatttc aggtcccgga tccggtggtg gtgcaaatca 60

aagaactgct cctcagtgga tgttgccttt acttctaggc ctgtacggaa gtgttacttc 120

tgctctaaaa gctgcggaat tgtacccgc 149

<210> 54

<211> 126

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 54

agtctgcggt gggcagcgga ggagtcgtgt cgtgcctgag agcgcagctg tgctcctggg 60

caccgcgcag tccgcccccg cggctcctgg ccagaccacc cctaggaccc cctgccccaa 120

gtcgca 126

<210> 55

<211> 121

<212> ДНК

<213> Бетагерпесвирус человека 5

<400> 55

tcagatcgcc tggagaggcc atccacgctg ttttgacctc catagtggac accgggaccg 60

atccagcctc cgcggccggg aacggtgcat tggaacgcgg attccccgtg ccaagagtga 120

c 121

<210> 56

<211> 512

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - энхансерный элемент, полученный из аденовируса

<400> 56

ctcactctct tccgcatcgc tgtctgcgag ggccagctgt tgggctcgcg gttgaggaca 60

aactcttcgc ggtctttcca gtactcttgg atcggaaacc cgtcggcctc cgaacggtac 120

tccgccaccg agggacctga gcgagtccgc atcgaccgga tcggaaaacc tctcgagaaa 180

ggcgtctaac cagtcacagt cgcaaggtag gctgagcacc gtggcgggcg gcagcgggtg 240

gcggtcgggg ttgtttctgg cggaggtgct gctgatgatg taattaaagt aggcggtctt 300

gagacggcgg atggtcgagg tgaggtgtgg caggcttgag atccagctgt tggggtgagt 360

actccctctc aaaagcgggc attacttctg cgctaagatt gtcagtttcc aaaaacgagg 420

aggatttgat attcacctgg cccgatctgg ccatacactt gagtgacaat gacatccact 480

ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc ag 512

<210> 57

<211> 956

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 57

ctttttcgca acgggtttgc cgccagaaca caggtaagtg ccgtgtgtgg ttcccgcggg 60

cctggcctct ttacgggtta tggcccttgc gtgccttgaa ttacttccac ctggctccag 120

tacgtgattc ttgatcccga gctggagcca ggggcgggcc ttgcgcttta ggagcccctt 180

cgcctcgtgc ttgagttgag gcctggcctg ggcgctgggg ccgccgcgtg cgaatctggt 240

ggcaccttcg cgcctgtctc gctgctttcg ataagtctct agccatttaa aatttttgat 300

gacgtgctgc gacgcttttt ttctggcaag atagtcttgt aaatgcgggc caggatctgc 360

acactggtat ttcggttttt gggcccgcgg ccggcgacgg ggcccgtgcg tcccagcgca 420

catgttcggc gaggcggggc ctgcgagcgc ggccaccgag aatcggacgg gggtagtctc 480

aagctggccg gcctgctctg gtgcctggcc tcgcgccgcc gtgtatcgcc ccgccctggg 540

cggcaaggct ggcccggtcg gcaccagttg cgtgagcgga aagatggccg cttcccggcc 600

ctgctccagg gggctcaaaa tggaggacgc ggcgctcggg agagcgggcg ggtgagtcac 660

ccacacaaag gaaaagggcc tttccgtcct cagccgtcgc ttcatgtgac tccacggagt 720

accgggcgcc gtccaggcac ctcgattagt tctggagctt ttggagtacg tcgtctttag 780

gttgggggga ggggttttat gcgatggagt ttccccacac tgagtgggtg gagactgaag 840

ttaggccagc ttggcacttg atgtaattct ccttggaatt tggccttttt gagtttggat 900

cttggttcat tctcaagcct cagacagtgg ttcaaagttt ttttcttcca tttcag 956

<210> 58

<211> 939

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 58

gtaagtgccg tgtgtggttc ccgcgggcct ggcctcttta cgggttatgg cccttgcgtg 60

ccttgaatta cttccacctg gctgcagtac gtgattcttg atcccgagct tcgggttgga 120

agtgggtggg agagttcgag gccttgcgct taaggagccc cttcgcctcg tgcttgagtt 180

gaggcctggc ctgggcgctg gggccgccgc gtgcgaatct ggtggcacct tcgcgcctgt 240

ctcgctgctt tcgataagtc tctagccatt taaaattttt gatgacctgc tgcgacgctt 300

tttttctggc aagatagtct tgtaaatgcg ggccaagatc tgcacactgg tatttcggtt 360

tttggggccg cgggcggcga cggggcccgt gcgtcccagc gcacatgttc ggcgaggcgg 420

ggcctgcgag cgcggccacc gagaatcgga cgggggtagt ctcaagctgg ccggcctgct 480

ctggtgcctg gcctcgcgcc gccgtgtatc gccccgccct gggcggcaag gctggcccgg 540

tcggcaccag ttgcgtgagc ggaaagatgg ccgcttcccg gccctgctgc agggagctca 600

aaatggagga cgcggcgctc gggagagcgg gcgggtgagt cacccacaca aaggaaaagg 660

gcctttccgt cctcagccgt cgcttcatgt gactccacgg agtaccgggc gccgtccagg 720

cacctcgatt agttctcgag cttttggagt acgtcgtctt taggttgggg ggaggggttt 780

tatgcgatgg agtttcccca cactgagtgg gtggagactg aagttaggcc agcttggcac 840

ttgatgtaat tctccttgga atttgccctt tttgagtttg gatcttggtt cattctcaag 900

cctcagacag tggttcaaag tttttttctt ccatttcag 939

<210> 59

<211> 83

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 59

tcagaagccc cgggctcgtc agtcaaaccg gttctctgtt tgcactcggc agcacgggca 60

ggcaagtggt ccctaggttc ggg 83

<210> 60

<211> 476

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 60

gtgagtctat gggacccttg atgttttctt tccccttctt ttctatggtt aagttcatgt 60

cataggaagg ggagaagtaa cagggtacac atattgacca aatcagggta attttgcatt 120

tgtaatttta aaaaatgctt tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat 180

actttcccta atctctttct ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca 240

ccattctaaa gaataacagt gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata 300

taaatatttc tgcatataaa ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc 360

tacaatccag ctaccattct gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga 420

gtccaagcta ggcccttttg ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacag 476

<210> 61

<211> 196

<212> ДНК

<213> вирус обезьян 40

<400> 61

tctagaggat ccggtactcg aggaactgaa aaaccagaaa gttaactggt aagtttagtc 60

tttttgtctt ttatttcagg tcccggatcc ggtggtggtg caaatcaaag aactgctcct 120

cagtggatgt tgcctttact tctaggcctg tacggaagtg ttacttctgc tctaaaagct 180

gcggaattgt acccgc 196

<210> 62

<211> 589

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - мутировавший регуляторный элемент гепатита сурка

<400> 62

aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60

ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120

atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180

tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240

ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300

attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360

ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420

gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480

aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540

cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589

<210> 63

<211> 588

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - мутировавший регуляторный элемент гепатита сурка

<400> 63

tcaacctctg gattacaaaa tttgtgaaag attgactggt attcttaact atgttgctcc 60

ttttacgcta tgtggatacg ctgctttaat gcctttgtat catgctattg cttcccgtat 120

ggctttcatt ttctcctcct tgtataaatc ctggttgctg tctctttatg aggagttgtg 180

gcccgttgtc aggcaacgtg gcgtggtgtg cactgtgttt gctgacgcaa cccccactgg 240

ttggggcatt gccaccacct gtcagctcct ttccgggact ttcgctttcc ccctccctat 300

tgccacggcg gaactcatcg ccgcctgcct tgcccgctgc tggacagggg ctcggctgtt 360

gggcactgac aattccgtgg tgttgtcggg gaaatcatcg tcctttcctt ggctgctcgc 420

ctgtgttgcc acctggattc tgcgcgggac gtccttctgc tacgtccctt cggccctcaa 480

tccagcggac cttccttccc gcggcctgct gccggctctg cggcctcttc cgcgtcttcg 540

ccttcgccct cagacgagtc ggatctccct ttgggccgcc tccccgca 588

<210> 64

<211> 755

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - мутировавший регуляторный элемент гепатита сурка

<400> 64

ttcctgttaa tcaacctctg gattacaaaa tttgtgaaag attgactggt attcttaact 60

atgttgctcc ttttacgcta tgtggatacg ctgctttaat gcctttgtat catgctattg 120

cttcccgtat ggctttcatt ttctcctcct tgtataaatc ctggttgctg tctctttatg 180

aggagttgtg gcccgttgtc aggcaacgtg gcgtggtgtg cactgtgttt gctgacgcaa 240

cccccactgg ttggggcatt gccaccacct gtcagctcct ttccgggact ttcgctttcc 300

ccctccctat tgccacggcg gaactcatcg ccgcctgcct tgcccgctgc tggacagggg 360

ctcggctgtt gggcactgac aattccgtgg tgttgtcggg gaagctgacg tcctttccgc 420

ggctgctcgc ctgtgttgcc acctggattc tgcgcgggac gtccttctgc tacgtccctt 480

cggccctcaa tccagcggac cttccttccc gcggcctgct gccggctctg cggcctcttc 540

cgcctcttcg ccttcgccct cagacgagtc ggatctccct ttgggccgcc tccccgccca 600

tgtatctttt tcacctgtgc cttgtttttg cctgtgttcc gcgtcctact tttcaagcct 660

ccaagctgtg ccttgggcgg ctttggggca tggacataga tccctataaa gaatttggtt 720

catcttatca gttgttgaat tttcttcctt tggac 755

<210> 65

<211> 12

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Мотив CAAX

<400> 65

tgtgtgataa tg 12

<210> 66

<211> 810

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 66

ctgttctcat cacatcatat caaggttata taccatcaat attgccacag atgttactta 60

gccttttaat atttctctaa tttagtgtat atgcaatgat agttctctga tttctgagat 120

tgagtttctc atgtgtaatg attatttaga gtttctcttt catctgttca aatttttgtc 180

tagttttatt ttttactgat ttgtaagact tctttttata atctgcatat tacaattctc 240

tttactgggg tgttgcaaat attttctgtc attctatggc ctgacttttc ttaatggttt 300

tttaatttta aaaataagtc ttaatattca tgcaatctaa ttaacaatct tttctttgtg 360

gttaggactt tgagtcataa gaaatttttc tctacactga agtcatgatg gcatgcttct 420

atattatttt ctaaaagatt taaagttttg ccttctccat ttagacttat aattcactgg 480

aatttttttg tgtgtatggt atgacatatg ggttcccttt tattttttac atataaatat 540

atttccctgt ttttctaaaa aagaaaaaga tcatcatttt cccattgtaa aatgccatat 600

ttttttcata ggtcacttac atatatcaat gggtctgttt ctgagctcta ctctatttta 660

tcagcctcac tgtctatccc cacacatctc atgctttgct ctaaatcttg atatttagtg 720

gaacattctt tcccattttg ttctacaaga atatttttgt tattgtcttt gggctttcta 780

tatacatttt gaaatgaggt tgacaagtta 810

<210> 67

<211> 726

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита B

<400> 67

ataacaggcc tattgattgg aaagtttgtc aacgaattgt gggtcttttg gggtttgctg 60

ccccttttac gcaatgtgga tatcctgctt taatgccttt atatgcatgt atacaagcaa 120

aacaggcttt tactttctcg ccaacttaca aggcctttct cagtaaacag tatatgaccc 180

tttaccccgt tgctcggcaa cggcctggtc tgtgccaagt gtttgctgac gcaaccccca 240

ctggttgggg cttggccata ggccatcagc gcatgcgtgg aacctttgtg tctcctctgc 300

cgatccatac tgcggaactc ctagccgctt gttttgctcg cagcaggtct ggagcaaacc 360

tcatcgggac cgacaattct gtcgtactct cccgcaagta tacatcgttt ccatggctgc 420

taggctgtgc tgccaactgg atcctgcgcg ggacgtcctt tgtttacgtc ccgtcggcgc 480

tgaatcccgc ggacgacccc tcccggggcc gcttggggct ctaccgcccg cttctccgtc 540

tgccgtaccg tccgaccacg gggcgcacct ctctttacgc ggactccccg tctgtgcctt 600

ctcatctgcc ggaccgtgtg cacttcgctt cacctctgca cgtcgcatgg aggccaccgt 660

gaacgcccac cggaacctgc ccaaggtctt gcataagagg actcttggac tttcagcaat 720

gtcatc 726

<210> 68

<211> 755

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Сделано в лаборатории - энхансерный элемент, полученный из HepB

<400> 68

ttcctgtaaa caggcctatt gattggaaag tttgtcaacg aattgtgggt cttttggggt 60

ttgctgcccc ttttacgcaa tgtggatatc ctgctttaat gcctttatat gcatgtatac 120

aagcaaaaca ggcttttact ttctcgccaa cttacaaggc ctttctcagt aaacagtata 180

tgacccttta ccccgttgct cggcaacggc ctggtctgtg ccaagtgttt gctgacgcaa 240

cccccactgg ttggggcttg gccataggcc atcagcgcat gcgtggaacc tttgtgtctc 300

ctctgccgat ccatactgcg gaactcctag ccgcttgttt tgctcgcagc tggactggag 360

caaacctcat cgggaccgac aattctgtcg tactctcccg caagcactca ccgtttccgc 420

ggctgctcgc ctgtgttgcc acctggattc tgcgcgggac gtccttctgc tacgtccctt 480

cggccctcaa tccagcggac cttccttccc gcggcctgct gccggctctg cggcctcttc 540

cgcctcttcg ccttcgccct cagacgagtc ggatctccct ttgggccgcc tccccgccca 600

tgtatctttt tcacctgtgc cttgtttttg cctgtgttcc gcgtcctact tttcaagcct 660

ccaagctgtg ccttgggcgg ctttggggca tggacataga tccctataaa gaatttggtt 720

catcttatca gttgttgaat tttcttcctt tggac 755

<210> 69

<211> 94

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 69

gctggagcct cggtagccgt tcctcctgcc cgctgggcct cccaacgggc cctcctcccc 60

tccttgcacc ggcccttcct ggtctttgaa taaa 94

<210> 70

<211> 596

<212> ДНК

<213> Вирус гепатита сурка

<400> 70

attcgagcat cttaccgcca tttattccca tatttgttct gtttttcttg atttgggtat 60

acatttaaat gttaataaaa caaaatggtg gggcaatcat ttacattttt agggatatgt 120

aattactagt tcaggtgtat tgccacaaga caaacatgtt aagaaacttt cccgttattt 180

acgctctgtt cctgttaatc aacctctgga ttacaaaatt tgtgaaagat tgactgatat 240

tcttaactat gttgctcctt ttacgctgtg tggatatgct gctttaatgc ctctgtatca 300

tgctattgct tcccgtacgg ctttcgtttt ctcctccttg tataaatcct ggttgctgtc 360

tctttatgag gagttgtggc ccgttgtccg tcaacgtggc gtggtgtgct ctgtgtttgc 420

tgacgcaacc cccactggct ggggcattgc caccacctgt caactccttt ctgggacttt 480

cgctttcccc ctcccgatcg ccacggcaga actcatcgcc gcctgccttg cccgctgctg 540

gacaggggct aggttgctgg gcactgataa ttccgtggtg ttgtcgggga agggcc 596

<210> 71

<211> 387

<212> ДНК

<213> Oryctolagus cuniculus

<400> 71

tggctaataa aggaaattta ttttcattgc aatagtgtgt tggaattttt tgtgtctctc 60

actcggaaga acatatggga gggcaaatca tttaaaacat cagaatgagt atttggttta 120

gagtttggca acatatgccc atatgctggc tgccatgaac aaaggttggc tataaagagg 180

tcatcagtat atgaaacagc cccctgctgt ccattcctta ttccatagaa aagccttgac 240

ttgaggttag atttttttta tattttgttt tgtgttattt ttttctttaa catccctaaa 300

attttcctta catgttttac tagccagatt tttcctcctc tcctgactac tcccagtcat 360

agctgtccct cttctcttat ggagatc 387

<210> 72

<211> 251

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 72

ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac 60

tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca 120

ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aatacaatag 180

caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat gggtacccag gtgctgaaga attgacccgg 240

ttcctcctgg g 251

<210> 73

<211> 251

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 73

ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac 60

tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca 120

ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag 180

caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat gggtacccag gtgctgaaga attgacccgg 240

ttcctcctgg g 251

<210> 74

<211> 225

<212> ДНК

<213> Bos taurus

<400> 74

ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 60

tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 120

tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 180

gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatgg 225

<210> 75

<211> 202

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 75

ctgcccgggt ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc 60

actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag 120

gtgtccttct ataatattat ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcccaagttg 180

ggaagaaacc tgtagggcct gc 202

<210> 76

<211> 735

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус 2

<400> 76

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr

435 440 445

Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 77

<211> 736

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус 9

<400> 77

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn

260 265 270

Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg

275 280 285

Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn

290 295 300

Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

305 310 315 320

Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu

340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

385 390 395 400

Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu

405 410 415

Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser

450 455 460

Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro

465 470 475 480

Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln

580 585 590

Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val

705 710 715 720

Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 78

<211> 736

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус 6

<400> 78

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Phe Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His

260 265 270

Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe

275 280 285

His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn

290 295 300

Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln

305 310 315 320

Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn

325 330 335

Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro

340 345 350

Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala

355 360 365

Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly

370 375 380

Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro

385 390 395 400

Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe

405 410 415

Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp

420 425 430

Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg

435 440 445

Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Lys Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg

565 570 575

Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Leu Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala

580 585 590

Thr Gly Asp Val His Val Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 79

<211> 738

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус примата, отличного от человека

<400> 79

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile

145 150 155 160

Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln

165 170 175

Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro

180 185 190

Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly

195 200 205

Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser

210 215 220

Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val

225 230 235 240

Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His

245 250 255

Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp

260 265 270

Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn

275 280 285

Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn

290 295 300

Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn

305 310 315 320

Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala

325 330 335

Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln

340 345 350

Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe

355 360 365

Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn

370 375 380

Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr

385 390 395 400

Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr

405 410 415

Gln Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser

420 425 430

Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu

435 440 445

Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu

450 455 460

Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp

465 470 475 480

Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser

485 490 495

Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His

500 505 510

Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr

515 520 525

His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met

530 535 540

Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val

545 550 555 560

Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr

565 570 575

Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala

580 585 590

Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val

595 600 605

Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile

610 615 620

Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe

625 630 635 640

Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val

645 650 655

Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe

660 665 670

Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu

675 680 685

Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr

690 695 700

Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp

705 710 715 720

Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg

725 730 735

Asn Leu

<210> 80

<211> 2217

<212> ДНК

<213> Аденоассоциированный вирус примата, отличного от человека

<400> 80

atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggcattcgc 60

gagtggtggg acctgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 120

aacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180

aagggggagc ccgtcaacgc ggcggacgca gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 240

cagcagctcc aagcgggtga caatccgtac ctgcggtata atcacgccga cgccgagttt 300

caggagcgtc tgcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgcgc agtcttccag 360

gccaaaaagc gggttctcga acctctgggc ctggttgaat cgccggttaa gacggctcct 420

ggaaagaaga gaccggtaga gccatcaccc cagcgctctc cagactcctc tacgggcatc 480

ggcaagaaag gccagcagcc cgcaaaaaag agactcaatt ttgggcagac tggcgactca 540

gagtcagtcc ccgaccctca accaatcgga gaaccaccag caggcccctc tggtctggga 600

tctggtacaa tggctgcagg cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac 660

ggagtgggta gttcctcagg aaattggcat tgcgattcca catggctggg cgacagagtc 720

atcaccacca gcacccgcac ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaagcaa 780

atctccaacg ggacctcggg aggaagcacc aacgacaaca cctacttcgg ctacagcacc 840

ccctgggggt attttgactt caacagattc cactgccact tttcaccacg tgactggcag 900

cgactcatca acaacaactg gggattccgg cccaagaggc tcaacttcaa gctcttcaac 960

atccaagtca aggaggtcac gcagaatgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taaccttacc 1020

agcacgattc aggtctttac ggactcggaa taccagctcc cgtacgtgct cggctcggcg 1080

caccagggct gcctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca tgattcctca gtacgggtac 1140

ctgactctga acaatggcag tcaggctgtg ggccggtcgt ccttctactg cctggagtac 1200

tttccttctc aaatgctgag aacgggcaac aactttgaat tcagctacaa cttcgaggac 1260

gtgcccttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgg accggctgat gaaccctctc 1320

atcgaccagt acttgtacta cctgtcccgg actcaaagca cgggcggtac tgcaggaact 1380

cagcagttgc tattttctca ggccgggcct aacaacatgt cggctcaggc caagaactgg 1440

ctacccggtc cctgctaccg gcagcaacgc gtctccacga cactgtcgca gaacaacaac 1500

agcaactttg cctggacggg tgccaccaag tatcatctga atggcagaga ctctctggtg 1560

aatcctggcg ttgccatggc tacccacaag gacgacgaag agcgattttt tccatccagc 1620

ggagtcttaa tgtttgggaa acagggagct ggaaaagaca acgtggacta tagcagcgtg 1680

atgctaacca gcgaggaaga aataaagacc accaacccag tggccacaga acagtacggc 1740

gtggtggccg ataacctgca acagcaaaac gccgctccta ttgtaggggc cgtcaatagt 1800

caaggagcct tacctggcat ggtgtggcag aaccgggacg tgtacctgca gggtcccatc 1860

tgggccaaga ttcctcatac ggacggcaac tttcatccct cgccgctgat gggaggcttt 1920

ggactgaagc atccgcctcc tcagatcctg attaaaaaca cacctgttcc cgcggatcct 1980

ccgaccacct tcaatcaggc caagctggct tctttcatca cgcagtacag taccggccag 2040

gtcagcgtgg agatcgagtg ggagctgcag aaggagaaca gcaaacgctg gaacccagag 2100

attcagtaca cttccaacta ctacaaatct acaaatgtgg actttgctgt caatactgag 2160

ggtacttatt ccgagcctcg ccccattggc acccgttacc tcacccgtaa tctgtaa 2217

<210> 81

<211> 535

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус примата, отличного от человека

<400> 81

Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala

1 5 10 15

Asp Gly Val Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp

20 25 30

Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro

35 40 45

Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly

50 55 60

Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly

65 70 75 80

Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp

85 90 95

Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn

100 105 110

Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly

115 120 125

Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr

130 135 140

Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly

145 150 155 160

Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly

165 170 175

Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe

180 185 190

Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn

195 200 205

Phe Glu Phe Ser Tyr Asn Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr

210 215 220

Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln

225 230 235 240

Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gln Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly

245 250 255

Thr Gln Gln Leu Leu Phe Ser Gln Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala

260 265 270

Gln Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val

275 280 285

Ser Thr Thr Leu Ser Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly

290 295 300

Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly

305 310 315 320

Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser

325 330 335

Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gln Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val

340 345 350

Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr

355 360 365

Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gln

370 375 380

Gln Gln Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala

385 390 395 400

Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro

405 410 415

Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro

420 425 430

Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile

435 440 445

Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala

450 455 460

Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val

465 470 475 480

Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro

485 490 495

Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe

500 505 510

Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr

515 520 525

Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

530 535

<210> 82

<211> 398

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус примата, отличного от человека

<400> 82

Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr Val

1 5 10 15

Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val

20 25 30

Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gln

35 40 45

Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln

50 55 60

Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Asn Phe Glu Asp

65 70 75 80

Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu

85 90 95

Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gln

100 105 110

Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu Phe Ser Gln Ala

115 120 125

Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro

130 135 140

Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gln Asn Asn Asn

145 150 155 160

Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg

165 170 175

Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp

180 185 190

Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gln

195 200 205

Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser

210 215 220

Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr Gly

225 230 235 240

Val Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly

245 250 255

Ala Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg

260 265 270

Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp

275 280 285

Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His

290 295 300

Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro

305 310 315 320

Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gln Tyr

325 330 335

Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu

340 345 350

Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr

355 360 365

Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser

370 375 380

Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

385 390 395

<210> 83

<211> 332

<212> БЕЛОК

<213> Аденоассоциированный вирус примата, отличного от человека

<400> 83

Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Asn Phe Glu Asp Val Pro

1 5 10 15

Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn

20 25 30

Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gln Ser Thr

35 40 45

Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gln Gln Leu Leu Phe Ser Gln Ala Gly Pro

50 55 60

Asn Asn Met Ser Ala Gln Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr

65 70 75 80

Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gln Asn Asn Asn Ser Asn

85 90 95

Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser

100 105 110

Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu

115 120 125

Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gln Gly Ala

130 135 140

Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu

145 150 155 160

Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr Gly Val Val

165 170 175

Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val

180 185 190

Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg Asp Val

195 200 205

Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn

210 215 220

Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro

225 230 235 240

Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr

245 250 255

Thr Phe Asn Gln Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr

260 265 270

Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser

275 280 285

Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser

290 295 300

Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro

305 310 315 320

Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

325 330

<210> 84

<211> 743

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая конструкция – вариант AAV9

<400> 84

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn

260 265 270

Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg

275 280 285

Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn

290 295 300

Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile

305 310 315 320

Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn

325 330 335

Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu

340 345 350

Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro

355 360 365

Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp

370 375 380

Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe

385 390 395 400

Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu

405 410 415

Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu

420 425 430

Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser

435 440 445

Arg Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser

450 455 460

Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro

465 470 475 480

Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser

565 570 575

Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Thr Leu Ala Val

580 585 590

Pro Phe Lys Ala Gln Ala Gln Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile

595 600 605

Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro

610 615 620

Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro

625 630 635 640

Leu Met Gly Gly Phe Gly Met Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile

645 650 655

Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp

660 665 670

Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val

675 680 685

Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro

690 695 700

Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe

705 710 715 720

Ala Val Asn Thr Glu Gly Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr

725 730 735

Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

740

<210> 85

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептидная вставка

<400> 85

Thr Leu Ala Val Pro Phe Lys

1 5

<210> 86

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептидная вставка

<400> 86

Lys Phe Pro Val Ala Leu Thr

1 5

<---

Claims (70)

1. Полинуклеотид для увеличения экспрессии мышечного белка LIM (MLP), содержащий кассету экспрессии, где полинуклеотид содержит полинуклеотидную последовательность, кодирующую MLP, функционально связанную с промотором.

2. Полинуклеотид по п. 1, где промотор представляет собой специфичный для сердца промотор.

3. Полинуклеотид по п. 1 или 2, где промотор представляет собой специфичный для мышцы промотор.

4. Полинуклеотид по любому из пп. 1–3, где промотор представляет собой специфичный для кардиомиоцитов промотор.

5. Полинуклеотид по любому из пп. 1–4, где промотор представляет собой промотор MHCK7.

6. Полинуклеотид по п. 5, где промотор MHCK7 характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 31.

7. Полинуклеотид по любому из пп. 1–4, где промотор представляет собой промотор сердечного тропонина Т (hTNNT2).

8. Полинуклеотид по п. 7, где промотор hTNNT2 характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 32.

9. Полинуклеотид по любому из пп. 1–4, 7 или 8, где кассета экспрессии содержит экзон 1 гена сердечного тропонина Т (hTNNT2), где промотор hTNNT2 и экзон 1 совместно характеризуются по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 32.

10. Полинуклеотид по любому из пп. 1–4, где промотор представляет собой промотор CMV или промотор CAG.

11. Полинуклеотид по любому из пп. 1–10, где кассета экспрессии содержит полиА–сигнал.

12. Полинуклеотид по п. 11, где полиА–сигнал представляет собой полиА гормона роста человека (hGH).

13. Полинуклеотид по любому из пп. 1–12, где кассета экспрессии содержит посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка (WPRE).

14. Полинуклеотид по п. 1, где MLP представляет собой MLP человека.

15. Полинуклеотид по п. 14, где MLP представляет собой изоформу А MLP.

16. Полинуклеотид по п. 14 или 15, где MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 1.

17. Полинуклеотид по п. 14 или 16, где MLP представляет собой изоформу B MLP.

18. Полинуклеотид по п. 15 или 17, где MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 2.

19. Полинуклеотид по п. 14, где MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 3.

20. Полинуклеотид по п. 14, где MLP характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 4.

21. Полинуклеотид по любому из пп. 1–20, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая MLP, представляет собой полинуклеотид богатого цистеином и глицином белка 3 (CSRP3).

22. Полинуклеотид по п. 21, где полинуклеотид CSRP3 представляет собой полинуклеотид CSRP3 человека.

23. Полинуклеотид по любому из пп. 1–22, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая MLP, характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 5.

24. Полинуклеотид по любому из пп. 1–23, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая MLP, характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с SEQ ID NO: 7.

25. Полинуклеотид по любому из пп. 1–24, где полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 2,4 т.о., не более чем приблизительно 2,6 т.о. или от приблизительно 2,4 т.о. до приблизительно 2,6 т.о.

26. Полинуклеотид по любому из пп. 1–25, где полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 3,0 т.о., не более чем приблизительно 3,3 т.о. или от приблизительно 3,0 т.о. до приблизительно 3,3 т.о.

27. Полинуклеотид по любому из пп. 1–26, где полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 2,4 т.о., по меньшей мере приблизительно 2,6 т.о., по меньшей мере приблизительно 3,0 т.о., по меньшей мере приблизительно 3,3 т.о., по меньшей мере приблизительно 3,5 т.о., по меньшей мере приблизительно 3,7 т.о., по меньшей мере приблизительно 3,9 т.о., по меньшей мере приблизительно 4,1 т.о. или по меньшей мере приблизительно 4,3 т.о.

28. Полинуклеотид по любому из пп. 1–27, где полинуклеотид содержит по меньшей мере приблизительно 2,6 т.о., по меньшей мере приблизительно 3,0 т.о., не более чем приблизительно 3,3 т.о., не более чем приблизительно 3,5 т.о., не более чем приблизительно 3,7 т.о., не более чем приблизительно 3,9 т.о., не более чем приблизительно 4,1 т.о., не более чем приблизительно 4,3 т.о. или не более чем приблизительно 4,5 т.о.

29. Полинуклеотид по любому из пп. 1–28, где кассета экспрессии характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 8–11.

30. Полинуклеотид по любому из пп. 1–29, где полинуклеотид характеризуется по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 12–15.

31. Полинуклеотид по любому из пп. 1–30, где кассета экспрессии фланкирована 5′– и 3′–AAV2 инвертированными концевыми повторами (ITR), где ITR характеризуются по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 20–26.

32. Полинуклеотид по любому из пп. 1–31, где полинуклеотид является самокомплементарным.

33. Полинуклеотид по любому из пп. 1–32, где полинуклеотид содержит кассету экспрессии и последовательность, обратно комплементарную кассете экспрессии.

34. Полинуклеотид по п. 33, где кассета экспрессии и последовательность, обратно комплементарная кассете экспрессии, фланкированы 5′– и 3′–AAV2 инвертированными концевыми повторами (ITR), где ITR характеризуются по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 23 или SEQ ID NO: 26.

35. Вектор генной терапии для увеличения экспрессии MLP, содержащий полинуклеотид по любому из пп. 1–34.

36. Вектор по п. 35, где вектор генной терапии представляет собой рекомбинантный вектор на основе аденоассоциированного вируса (rAAV).

37. Вектор по п. 36, где вектор на основе rAAV представляет собой AAV9.

38. Вектор по п. 37, где вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 77.

39. Вектор по п. 36, где вектор на основе rAAV представляет собой вектор AAVrh10.

40. Вектор по п. 39, где вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 79.

41. Вектор по п. 36, где вектор на основе rAAV представляет собой вектор AAV6.

42. Вектор по п. 41, где вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 78.

43. Вектор по п. 36, где вектор на основе rAAV представляет собой вектор AAVrh74.

44. Вектор по п. 43, где вектор на основе rAAV содержит капсидный белок, который характеризуется 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью с любой из SEQ ID NO: 80.

45. Вектор по любому из пп. 36–44, где вектор на основе rAAV представляет собой самокомплементарный вектор на основе AAV.

46. Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у субъекта, имеющего или подозреваемого в наличии нарушения, ассоциированного с дефектами в CSRP3, включающий введение субъекту вектора по любому из пп. 35–45.

47. Способ по п. 46, где заболевание или нарушение представляет собой нарушение сердечной деятельности.

48. Способ по п. 46 или 47, где заболевание или нарушение представляет собой сердечную недостаточность.

49. Способ по любому из пп. 46–48, где заболевание или нарушение представляет собой гипертрофическую кардиомиопатию.

50. Способ по любому из пп. 46–48, где заболевание или нарушение представляет собой дилатационную кардиомиопатию.

51. Способ по любому из пп. 46–50, где субъектом является млекопитающее.

52. Способ по п. 51, где субъектом является примат.

53. Способ по п. 52, где субъектом является человек.

54. Способ по любому из пп. 46–53, где субъект имеет мутацию в гене CSRP3, которая обуславливает аминокислотную замену, выбранную из C58G, L44P, S54R, E55G и/или K69R, относительно CSRP3 человека, кодирующего MLP человека, имеющий последовательность под SEQ ID NO: 1.

55. Способ по любому из пп. 46–54, где вектор вводится посредством внутривенной инъекции, внутрисердечной инъекции, внутрисердечной инфузии и/или катетеризации сердца.

56. Способ по любому из пп. 46–55, где введение увеличивает экспрессию MLP на по меньшей мере приблизительно 5%.

57. Способ по любому из пп. 46–56, где введение увеличивает экспрессию MLP на по меньшей мере приблизительно 30%.

58. Способ по любому из пп. 46–57, где введение увеличивает экспрессию MLP на по меньшей мере приблизительно 70%.

59. Способ по любому из пп. 46–58, где введение увеличивает экспрессию MLP на величину от приблизительно 5% до приблизительно 10%.

60. Способ по любому из пп. 46–57, где введение увеличивает экспрессию MLP на величину от приблизительно 30% до приблизительно 50%.

61. Способ по любому из пп. 46–58, где введение увеличивает экспрессию MLP на величину от приблизительно 70% до приблизительно 100%.

62. Способ по любому из пп. 46–61, где способ обеспечивает лечение и/или предупреждение заболевания или нарушения.

63. Фармацевтическая композиция для увеличения экспрессии MLP, содержащая вектор по любому из пп. 35–45.

64. Набор для увеличения экспрессии MLP, содержащий вектор по любому из пп. 35–45 или фармацевтическую композицию по п. 63 и инструкции по применению.

65. Применение композиции по п. 63 в лечении заболевания или нарушения способом по любому из пп. 46–62.

66. Способ экспрессии мышечного белка LIM (MLP), включающий приведение клетки в контакт с вектором по любому из пп. 35–45.

67. Способ по п. 66, где клетка представляет собой кардиомиоцит.

68. Способ по п. 67, где кардиомиоцит представляет собой кардиомиоцит человека.

69. Способ по любому из пп. 66–68, где промотор представляет собой промотор MHCK7 и где уровень экспрессии MLP в по меньшей мере 2 раза превышает уровень экспрессии MLP в клетке, трансдуцированной вектором с промотором hTNNT2.

70. Способ по любому из пп. 66–68, где промотор представляет собой промотор MHCK7 и где уровень экспрессии MLP в 2–10 раз превышает уровень экспрессии MLP в клетке, трансдуцированной вектором с промотором hTNNT2.