RU2842948C1 - Модулирование содержания редуцирующих сахаров в растении (inv) - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии. В данном изобретении описана клетка растения, содержащая (i) полинуклеотид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 81% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5 (NtINV4-S) или по меньшей мере 62% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7 (NtINV4-T); (ii) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, указанным в (i); (iii) полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6 (NtINV4-S) или по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8 (NtINV4-T); или (iv) конструкцию, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид, указанный в (i), при этом указанная клетка растения предусматривает по меньшей мере одну модификацию, которая обеспечивает модуляцию (a) экспрессии или активности полинуклеотида или (b) экспрессии или активности полипептида, по сравнению с таковыми в клетке контрольного растения, в которой экспрессия или активность полинуклеотида или полипептида не были модифицированы. Изобретение позволяет получить растение табака с новыми вкусоароматическими и органолептическими свойствами, сохраняя при этом коммерчески приемлемые выходы и характеристики. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 5 ил., 5 табл., 9 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к клеткам растений и т. п. с модулированной экспрессией или активностью инвертазы (INV).

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для производства табачных продуктов различные типы табака смешивают в различных соотношениях для создания смесей с определенными вкусоароматическими свойствами. Табак трубоогневой сушки (например, Вирджиния) является наиболее широко выращиваемым табаком и характеризуется высоким соотношением сахара и азота, но имеет ограниченный вкусоароматический профиль. Другие типы табака, такие как табак воздушной сушки (например, Берли, Мэриленд и Галпао) или табак огневой сушки (например, Дарк), предлагают альтернативные вкусоароматические профили. Такие различные вкусоароматические профили важны при получении смешанных табачных продуктов.

Вкусоароматические свойства являются результатом наличия конкретных вкусоароматических соединений или предшественников таких соединений, которые присутствуют в определенных количествах в растениях табака. Например, измененное содержание сахаров в табаке, подвергнутом сушке, может привести к получению другого восприятия вкуса и аромата табака. В аэрозоле и дыме глюкоза и, в меньшей степени, фруктоза могут образовывать соединения Амадори в результате реакции Майяра. Это может привести к получению хлебного, орехового или похожего на попкорн вкусоароматических свойств.

Однако, поскольку количество сортов табака для коммерческого получения ограничено, это означает, что возможности разработки табачных продуктов с различными вкусовыми и ароматическими профилями также ограничены. Это в равной степени относится к производству восстановленного табачного материала, который используется в нагреваемых табачных палочках в продуктах со сниженным риском.

В данной области техники сохраняется потребность в улучшении возможностей создания табака, который предлагает потребителям новые вкусоароматические и органолептические ощущения, сохраняя при этом коммерчески приемлемые выходы и характеристики. Настоящее изобретение направлено на удовлетворение данных и других потребностей.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном документе раскрыты полинуклеотидные и полипептидные последовательности INV из Nicotiana tabacum. Несмотря на то, что на основании структурной идентичности считается, что множество различных генов кодируют вероятные INV в растениях, точка, в которой эти гены становятся активными в отношении их функции как INV в растениях, обычно неизвестна. В частности, очень мало известно об экспрессии гена INV в табаке, особенно в ходе сушки.Авторы настоящего изобретения идентифицировали определенные полинуклеотиды NtINV в растениях, которые функционально экспрессируются во время сушки. Неожиданно было обнаружено, что модулирование экспрессии таких определенных генов NtINV или активности кодируемого ими белка может изменить пул редуцирующих сахаров и сахарозы, образующихся во время сушки листьев. Неожиданно оказалось, что изменения в некоторых генах INV могут привести к изменениям уровней редуцирующих сахаров и сахарозы, образующихся во время сушки листьев. Преимущественно, теперь это обеспечивает возможность создавать табачные смеси с новыми вкусовыми и ароматическими свойствами. Это также может привести к получению другого вкусоароматического или сенсорного восприятия аэрозоля или дыма, образующихся при нагревании табачной смеси. Точно так же, жидкие экстракты, полученные из табака, могут характеризоваться другим вкусоароматическим или сенсорным восприятием. Изменение баланса редуцирующих сахаров и сахарозы также может повлиять на высвобождение акриламида в аэрозоль и дым.

В данном документе описано несколько геномных полинуклеотидных последовательностей INV из Nicotiana tabacum, а именно NtINV3-S (SEQ ID NO: 1), NtINV3-T (SEQ ID NO: 3), NtINV4-S (SEQ ID NO: 5) и NtINV4-T (SEQ ID NO: 7). Также в данном документе описано несколько полипептидных последовательностей INV из Nicotiana tabacum, а именно NtINV3-S (SEQ ID NO: 2), NtINV3-T (SEQ ID NO: 4), NtINV4-S (SEQ ID NO: 6) и NtINV4-T (SEQ ID NO: 8). В частности показано, что NtINV4-S и NtINV4-T играют роль в метаболизме сахаров во время сушки. Во время сушки табак трубоогневой сушки (например, Вирджиния) обычно содержит в по меньшей мере восемь раз больше редуцирующих сахаров, чем табак воздушной сушки (например, Берли), что, главным образом, связано с его генетической предрасположенностью к накоплению высоких уровней крахмала. После сбора растений и во время процесса старения (фаза пожелтения) большая часть крахмала сначала превращается в сахарозу, а затем в редуцирующие сахара, по-видимому, с участием INV.

Полипептидные последовательности NtINV4-S и NtINV4-T являются очень схожими, характеризуясь 96% идентичностью. Ситуация аналогична для полипептидных последовательностей NtINV3-S и NtINV3-T, которые также являются очень схожими и характеризуются 96% идентичностью. Примечательно, что пара NtINV4-S и NtINV4-T и пара NtINV3-S и NtINV3-T характеризуются низкой идентичностью, составляющей только приблизительно 60%, что предполагает различающиеся функцию или регуляцию. Неожиданным стало то, что только NtINV4-S и NtINV4-T подвергаются сверхэкспрессии во время сушки, тогда как NtINV3-S и NtINV3-T во время сушки сверхэкспрессии не подвергаются. В определенных вариантах осуществления экспрессия или активность NtINV3-S и NtINV3-T не подвергаются модуляции. NtINV3-S и NtINV3-T, вероятно, вовлечены в другие метаболические пути, и изменения их экспрессии могут в результате привести к формированию фенотипа, который может быть неблагоприятным с агрономической точки зрения (например, медленный рост). Знание того, какие гены INV сверхэкспрессируются во время сушки, преимущественно позволяет отобрать растения с изменениями только в соответствующих генах и уменьшает потенциальные негативные эффекты в отношении других метаболических процессов.

Модификации экспрессии или активности одной или более INV можно комбинировать с модификациями экспрессии или активности одной или более сахарозосинтаз (SUS) для обеспечения дополнительной модуляции уровней сахаров в подвергнутых сушке листьях. Соответственно, раскрыта комбинация модификаций INV и SUS. Например, снижение экспрессии или активности одной или более INV, как описано в настоящем документе, может обеспечить повышение или понижение уровней глюкозы или фруктозы или их комбинации и повышение уровней сахарозы в подвергнутом сушке листе. В качестве дополнительного примера, повышение экспрессии или активности одной или более INV, как описано в настоящем документе, может обеспечить повышение уровней глюкозы или фруктозы или их комбинации и понижение уровней сахарозы в подвергнутом сушке листе. В качестве дополнительного примера, снижение экспрессии или активности одной или более INV и одной или более SUS, как описано в настоящем документе, может обеспечить дополнительное понижение уровней глюкозы или фруктозы или их комбинации в подвергнутом сушке листе по сравнению со снижением экспрессии или активности одной или более INV отдельно. В качестве дополнительного примера, повышение экспрессии или активности одной или более INV и одной или более SUS, как описано в настоящем документе, может обеспечить дополнительное повышение уровней глюкозы или фруктозы или их комбинации в подвергнутом сушке листе по сравнению с повышением экспрессии или активности одной или более INV отдельно.

В данном документе раскрыты NtSUS1-S (SEQ ID NO: 10), NtSUS1-T (SEQ ID NO: 12), NtSUS2-S (SEQ ID NO: 14), NtSUS2-T (SEQ ID NO: 16), NtSUS3-S (SEQ ID NO: 18), NtSUS3-T (SEQ ID NO: 20), NtSUS4-S (SEQ ID NO: 22), NtSUS4-T (SEQ ID NO: 24), NtSUS5-S (SEQ ID NO: 26), NtSUS5-T (SEQ ID NO: 28), NtSUS6-S (SEQ ID NO: 30) и NtSUS6-T (SEQ ID NO: 32). Также раскрыты соответствующие предсказанные полипептидные последовательности для NtSUS1-S (SEQ ID NO: 11), NtSUS1-T (SEQ ID NO: 13), NtSUS2-S (SEQ ID NO: 15), NtSUS2-T (SEQ ID NO: 17), NtSUS3-S (SEQ ID NO: 19), NtSUS3-T (SEQ ID NO: 21), NtSUS4-S (SEQ ID NO: 23), NtSUS4-T (SEQ ID NO: 25), NtSUS5-S (SEQ ID NO: 27), NtSUS5-T (SEQ ID NO: 29), NtSUS6-S (SEQ ID NO: 31) и NtSUS6-T (SEQ ID NO: 33). NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T могут играть роль в метаболизме сахаров во время сушки. В частности, NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S могут играть роль в метаболизме сахаров во время сушки.

В одном аспекте предусмотрена клетка растения, содержащая (i) полинуклеотид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 81% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5 (NtINV4-S) или по меньшей мере 62% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7 (NtINV4-T); (ii) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, указанным в (i); (iii) полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 84% или по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6 (NtINV4-S) или по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8 (NtINV4-T); или (iv) конструкцию, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид, указанный в (i), при этом указанная клетка растения предусматривает по меньшей мере одну модификацию, которая обеспечивает модуляцию (a) экспрессии или активности полинуклеотида или (b) экспрессии или активности полипептида, полученного исходя из этого полинуклеотида, по сравнению с таковыми в клетке контрольного растения, в которой экспрессия или активность полинуклеотида или полипептида не были модифицированы.

Предпочтительно модулированная экспрессия или модулированная активность обеспечивают модуляцию уровня одного или более редуцирующих сахаров в подвергнутом сушке листе растения, содержащего клетку растения, по сравнению с уровнем одного или более редуцирующих сахаров в подвергнутом сушке листе контрольного растения, содержащего клетку контрольного растения, при этом предпочтительно редуцирующий сахар представляет собой глюкозу или фруктозу или их комбинацию.

Предпочтительно модулированная экспрессия или модулированная активность также обеспечивают модуляцию уровня сахарозы в подвергнутом сушке листе растения, содержащего клетку растения.

Предпочтительно подвергнутый сушке лист характеризуется сниженными уровнями глюкозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 63%, по сравнению с контрольным подвергнутым сушке листом.

Предпочтительно подвергнутый сушке лист характеризуется сниженными уровнями фруктозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 43%, по сравнению с контрольным подвергнутым сушке листом. Предпочтительно подвергнутый сушке лист характеризуется сниженными уровнями глюкозы и фруктозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 63% и по меньшей мере приблизительно 43% соответственно, по сравнению с контрольным подвергнутым сушке листом.

Предпочтительно, подвергнутый сушке лист относится к листу, полученному из средней части на растении.

Предпочтительно, влияние на фенотип растения, содержащего клетку растения, является пренебрежимо малым. Например, фенотип растения может быть неизмененным.

Предпочтительно варьирование в отношении общего содержания свободных аминокислот по сравнению с контрольным растением, содержащим контрольную клетку растения, отсутствует.

Предпочтительно по меньшей мере одна модификация представляет собой по меньшей мере одну модификацию в геноме клетки растения, или по меньшей мере одну модификацию в конструкции, векторе или векторе экспрессии, или по меньшей мере одну трансгенную модификацию.

Предпочтительно по меньшей мере одна модификация представляет собой генетическую мутацию в полинуклеотиде.

Предпочтительно растение представляет собой Nicotiana tabacum.

Предпочтительно клетка растения дополнительно предусматривает по меньшей мере одну модификацию в полинуклеотиде NtSUS или полипептиде, кодируемом им, более предпочтительно, где полинуклеотид NtSUS или полипептид, кодируемый им, выбраны из группы, состоящей из NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S, NtSUS4-T или комбинации двух или более из них, более предпочтительно, где полинуклеотид NtSUS или полипептид, кодируемый им, выбраны из группы, состоящей из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S или комбинации двух или более из них.

Предпочтительно клетка растения содержит по меньшей мере одну мутацию в полинуклеотиде(-ах) NtINV4 или полипептиде(-ах) NtINV4 и по меньшей мере одну мутацию в полинуклеотиде(-ах) NtSUS или полипептиде(-ах), кодируемом(-ых) им(-и).

В дополнительном аспекте предусмотрены растение или его часть, содержащие клетку растения, описанную в данном документе.

Растительный материал, подвергнутый сушке растительный материал или гомогенизированный растительный материал, происходящие или полученные из растения или его части, раскрыты в дополнительном аспекте, где предпочтительно растительный материал выбран из группы, состоящей из биомассы, семени, стебля, цветков или листьев или комбинации двух или более из них. Подвергнутый сушке растительный материал может быть выбран из группы, состоящей из растительного материала трубоогневой сушки, растительного материала солнечной сушки или растительного материала воздушной сушки или комбинации двух или более из них.

В дополнительном аспекте предусмотрен табачный продукт, содержащий клетку растения, часть растения или растительный материал.

В дополнительном аспекте предусмотрен способ получения растения, описанного в данном документе, включающий стадии (a) получения клетки растения, предусматривающей по меньшей мере одну модификацию, описанную в данном документе; и (b) размножения клетки растения с получением растения.

Предпочтительно, на стадии (а) по меньшей мере одну модификацию вводят путем редактирования генома; предпочтительно, при этом методы редактирования генома выбраны из CRISPR-опосредованного редактирования генома, мутагенеза, опосредованного нуклеазой с «цинковыми пальцами», химического или радиационного мутагенеза, гомологичной рекомбинации, олигонуклеотид-направленного мутагенеза и мутагенеза, опосредованного мегануклеазой.

Предпочтительно на стадии (а) по меньшей мере одну модификацию вводят с применением полинуклеотида для обеспечения интерференции или путем введения по меньшей мере одной мутации или их комбинации.

В дополнительном аспекте раскрыт способ получения подвергнутого сушке растительного материала с измененным количеством редуцирующих сахаров по сравнению с контрольным растительным материалом, включающий следующие стадии (a) получения растения или его части или растительного материала, описанных в данном документе; (b) сбора из них растительного материала и (c) сушки растительного материала.

В дополнительном аспекте предусмотрен способ получения жидкого табачного экстракта, при этом способ

включает стадии (а) получения исходного табачного материала из растения или его части, содержащих клетку растения, предусматривающую по меньшей мере одну модификацию, которая обеспечивает модуляцию экспрессии или активности NtINV, как описано в данном документе; (b) нагревания исходного табачного материала при подходящей температуре экстракции; (c) сбора летучих соединений, высвободившихся из исходного табачного материала в ходе нагревания; и (d) объединения собранных летучих соединений, высвободившихся из исходного табачного материала, и образования жидкого табачного экстракта.

В дополнительном аспекте раскрыт способ получения жидкого табачного экстракта, при этом способ включает стадии (а) получения первого исходного табачного материала из растения или его части, содержащих клетку растения, в которой экспрессия или активность NtINV модифицированы, как описано в данном документе; (b) получения второго исходного табачного материала из растения или его части, содержащих клетку растения, в которой экспрессия или активность NtSUS модифицированы, как описано в данном документе; (c) нагревания первого исходного табачного материала при первой температуре экстракции; (d) нагревания второго исходного табачного материала при второй температуре экстракции; (e) сбора летучих соединений, высвободившихся из первых исходных табачных материалов и вторых исходных табачных материалов в ходе нагревания; и (f) объединения собранных летучих соединений, высвободившихся из первого и второго исходных табачных материалов, и образования жидкого табачного экстракта из объединенных летучих соединений.

В дополнительном аспекте раскрыт жидкий табачный экстракт, образованный, полученный или получаемый посредством способа получения жидкого табачного экстракта, как описано в настоящем документе.

В дополнительном аспекте раскрыта клетка растения, содержащая (i) полинуклеотид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 60% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 7; полинуклеотид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 50% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8; (ii) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, указанным в (i); (iii) полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 4, 80% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8; (iv) конструкцию, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид, указанный в (i), где указанная клетка растения предусматривает по меньшей мере одну модификацию, которая обеспечивает модулирование экспрессии или активности полинуклеотида или полипептида по сравнению с таковыми в клетке контрольного растения, в которой экспрессия или активность полинуклеотида или полипептида не были модифицированы.

НЕКОТОРЫЕ ПРЕИМУЩЕСТВА

Преимущественно, изменение баланса сахара-аминокислоты в табаке может повлиять на высвобождение вкусоароматических соединений и акриламида (канцерогенного соединения, образующегося в результате взаимодействия глюкозы (фруктозы) с аспарагином) при нагревании в аэрозоле и дыме.

Преимущественно, для надлежащего изготовления формованного листа из восстановленного табачного материала для нагреваемых табачных палочек требуются редуцирующие сахара. Настоящее изобретение может предусматривать влияние на содержание и баланс сахаров, тем самым воздействуя на изготовление формованного листа.

Преимущественно могут быть созданы генетически не модифицированные растения, которые могут быть более приемлемыми для потребителей.

Преимущественно настоящее изобретение не ограничено применением растений, полученных с помощью EMS-мутагенеза.

Настоящее изобретение можно применять к различным сортам растений или сельскохозяйственных культур. Обычно стареющие листья (листья-источники) продуцируют сахарозу в качестве источника углерода и аспарагин в качестве ресурсов ассимилированного азота для поглощающих листьев и семян. Следовательно, сахароза и аспарагин должны транспортироваться сначала из паренхиматозных (фотосинтезирующих) стареющих клеток листа во флоэму, а затем в верхние поглощающие ткани. Манипуляции в отношении NtINV или кодируемого им полипептида, таким образом, могут влиять на уровень редуцирующих сахаров, таких как глюкоза и фруктоза, с незначительным влиянием на свободные аминокислоты. Такой подход может обеспечить возможность разработки новых сортов табака с меньшим содержанием глюкозы и фруктозы и большим содержанием сахарозы.

Преимущественно, настоящее изобретение можно комбинировать с модулированием экспрессии других генов, таких как NtSUS или кодируемого им полипептида, как описано в данном документе.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фигуре 1 представлена серия графиков, отображающих (A) динамику редуцирующих сахаров (глюкозы и фруктозы) во время трубоогневой сушки табака Вирджиния; (B) экспрессию (Tobarray-Affymetrix) NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T во время трубоогневой сушки табака Вирджиния и (C) экспрессию гена SAG12 , ассоциированного со старением, во время трубоогневой сушки табака Вирджиния.

На фигуре 2 представлена серия графиков, отображающих (A) динамику уровней глюкозы; (B) динамику уровней фруктозы; и (C) динамику уровней сахарозы во время воздушной сушки темного табака. Данные были получены из метаболомных анализов Metabolon (доступные единицы отсутствуют).

На фигуре 3 представлен график, отображающий результаты относительно сайленсинга NtINV4-S и NtINV4-T с применением вектора GATEWAY и измерения экспрессии NtINV4-S и NtINV4-T в листе табака Вирджиния после 48 ч сушки (qPCR). T0-INV4 представляет собой созданную трансгенную линию, а CT0-INV4 представляет собой соответствующие контрольные линии.

На фигуре 4 представлена серия графиков, отображающих содержание (A) глюкозы; (B) фруктозы и (C) сахарозы в подвергнутых сушке листьях, подвергнутых сайленсингу с помощью 35S:INV4-RNAi (INV4-T0), и контрольных подвергнутых сушке листьях (CT0) (CT0, n=4 и T0, n=4). Представлены диаграммы размаха, а также статистический анализ посредством Т-критерия.

На фигуре 5 представлена столбчатая диаграмма, на которой для каждого сорта показано содержание редуцирующих сахаров после сбора (зрелые листья), после двух дней сушки (48 часов сушки) и в конце сушки в табаке Берлей, Вирджиния и восточного типа.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Заголовки разделов, используемые в настоящем раскрытии, служат для организационных целей и не предусматриваются как ограничивающие.

1. Определения

Если не определено иное, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, какое обычно понимает специалист средней квалификации в данной области техники. В случае противоречий данный документ, включая определения, будет иметь преимущественную силу. Предпочтительные способы и материалы описаны ниже, хотя способы и материалы, сходные или эквивалентные описанным в данном документе, могут быть применены при осуществлении настоящего изобретения на практике или его тестировании. Материалы, способы и примеры, раскрытые в данном документе, являются лишь иллюстративными и не предусматриваются как ограничивающие.

Подразумевается, что термины «предусматривают(предусматривает)», «включают(включает)», «имеющий», «имеет», «может», «содержат(содержит)» и их варианты, являются открытыми переходными фразами, терминами или словами, которые не исключают возможности наличия дополнительных действий или структур.

Формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если из контекста явно не следует иное.

Настоящим изобретением предусмотрены другие варианты осуществления, «содержащие», «состоящие из» и «по сути состоящие из» вариантов осуществления или элементов, представленных в данном документе, независимо от того, указано это явно или нет.

В случае изложения в данном документе числовых диапазонов каждое промежуточное число в них предусматривается в явной форме с той же степенью точности. Например, в случае диапазона 6-9 в дополнение к 6 и 9 предусматриваются числа 7 и 8, а в случае диапазона 6,0-7,0 в явной форме предусматриваются числа 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 и 7,0.

Следующие термины, используемые во всем данном описании и формуле изобретения, имеют следующие значения.

Термины «кодирующая последовательность» или «полинуклеотид, кодирующий» означают нуклеотиды (молекулы РНК или ДНК), которые составляют полинуклеотид, который кодирует полипептид. Кодирующая последовательность может дополнительно содержать сигналы инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, в том числе c промотором и сигналом полиаденилирования, способными управлять экспрессией в клетках индивидуума или млекопитающего, которому вводят полинуклеотид. Кодирующая последовательность может быть кодон-оптимизированной.

Термины «комплементарная последовательность» или «комплементарный» могут означать образование уотсон-криковского (например, A-T/U и C-G) или хугстиновского спаривания между нуклеотидами или аналогами нуклеотидов. «Комплементарность» относится к свойству, присущему совместно двум полинуклеотидам, заключающемуся в том, что при их антипараллельном выравнивании друг относительно друга нуклеотидные основания в каждом положении комплементарны друг другу.

Термин «конструкция» относится к двунитевому фрагменту рекомбинантного полинуклеотида, предусматривающему один или более полинуклеотидов. Конструкция содержит «матричную нить», основания которой спарены с комплементарной «смысловой или кодирующей нитью». Указанная конструкция может быть вставлена в вектор в двух возможных ориентациях: либо в той же (или смысловой) ориентации, либо в противоположной (или антисмысловой) ориентации по отношению к ориентации промотора, расположенного в векторе, таком как вектор экспрессии.

Термин «контроль» в контексте контрольного растения или контрольных клеток растения означает растение или клетки растения, в которых экспрессия, функция или активность одного или более генов или полипептидов не была модифицирована (например, повышена или понижена), и поэтому они могут обеспечивать возможность сравнения с растением, в котором экспрессия, функция или активность одного или более таких же генов или полипептидов была модифицирована. «Контрольное растение» означает растение, которое является по существу эквивалентным тестируемому растению или модифицированному растению по всем параметрам, за исключением тестируемых параметров. Например, если речь идет о растении, в которое был введен полинуклеотид, контрольным растением является эквивалентное растение, в которое такой полинуклеотид не был введен. Контрольным растением может являться эквивалентное растение, в которое был введен контрольный полинуклеотид. В таких случаях контрольный полинуклеотид представляет собой полинуклеотид, для которого обуславливаемый им фенотипический эффект в отношении растения, как предполагается, является незначительным или отсутствует. Контрольное растение может содержать пустой вектор. Контрольное растение может соответствовать растению дикого типа. Контрольное растение может быть ноль-сегрегантом, при этом сегрегант T1 больше не содержит трансгена.

Термин «понижение» или «пониженный» относится к снижению, составляющему от приблизительно 10% до приблизительно 99%, или снижению, составляющему по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, или по меньшей мере 100%, или по меньшей мере 150%, или по меньшей мере 200%, или больше, количества или функции, такой как функция полипептида, транскрипционная функция или экспрессия полипептида. Термин «пониженный» или выражение «пониженное количество» может относиться к количеству или функции, которые являются меньшими, чем можно обнаружить в растении или продукте из того же сорта растения, обработанных таким же образом, которые не были модифицированы. Таким образом, в некоторых случаях растение дикого типа того же сорта, которое было переработано таким же образом, используется в качестве контроля, с помощью которого измеряют, достигнуто ли снижение количества.

Термины «донорная ДНК» или «донорная матрица» относятся к фрагменту или молекуле двунитевой ДНК, которые содержат по меньшей мере часть гена, представляющего интерес. Донорная ДНК может кодировать функциональный полипептид.

Термин «эндогенный ген или полипептид» относится к гену или полипептиду, которые происходят из генома организма и не претерпели изменения, такого как потеря, приобретение или замена генетического материала. Эндогенный ген подвергается нормальному переносу гена и экспрессии гена. Эндогенный полипептид подвергается нормальной экспрессии.

Термин «энхансерные последовательности» относится к последовательностям, которые могут обеспечивать повышение экспрессии гена. Эти последовательности могут быть расположены выше, в пределах интронов или ниже транскрибируемого участка. Транскрибируемый участок состоит из экзонов и расположенных между ними интронов, от промотора до участка терминации транскрипции. Усиление экспрессии гена может происходить посредством различных механизмов, включая повышение эффективности транскрипции, стабилизацию зрелой мРНК и усиление трансляции.

Термин «экспрессия» относится к выработке функционального продукта. Например, экспрессия полинуклеотидного фрагмента может относиться к транскрипции полинуклеотидного фрагмента (например, транскрипции, приводящей к получению мРНК или функциональной РНК) или трансляции мРНК с получением полипептида-предшественника или зрелого полипептида или их комбинации.

«Сверхэкспрессия» относится к выработке продукта гена в трансгенных организмах на уровнях, которые превышают уровни выработки в ноль-сегрегантном (или нетрансгенном) организме из того же эксперимента.

Термин «функциональный» описывает полипептид, который обладает биологической функцией или активностью. Термин «функциональный ген» относится к гену, транскрибируемому с образованием мРНК, которая транслируется с образованием функционального или активного полипептида.

Термин «генетическая конструкция» относится к молекулам ДНК или РНК, которые содержат полинуклеотид, который кодирует полипептид. Кодирующая последовательность может содержать сигналы инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, в том числе c промотором и сигналом полиаденилирования, способными управлять экспрессией.

«Редактирование генома», как правило, относится к способу, посредством которого осуществляют изменение геномной нуклеиновой кислоты в клетке. Это может происходить, например, путем удаления, вставки или замены одного или более нуклеотидов в геномной нуклеиновой кислоте. Для создания специфических разрывов или одноцепочечных разрывов в определенных местах генома можно использовать эндонуклеазы, и они дополнительно описаны в данном документе.

Термины «гомология» или «сходство» относятся к степени сходства последовательностей двух полипептидов или двух молекул полинуклеотида, сравниваемых путем выравнивания последовательностей. Степень гомологии между двумя отдельными сравниваемым полинуклеотидами является функцией числа идентичных или совпадающих нуклеотидов в сопоставляемых положениях. Гомологию или сходство можно определять по всей длине рассматриваемой последовательности.

Термины «идентичный» или «идентичность» в контексте двух или более полинуклеотидов или полипептидов означают, что последовательности характеризуются наличием определенной процентной доли остатков, которые являются одинаковыми в пределах определенного участка. Процентную долю можно рассчитать путем оптимального выравнивания двух последовательностей, сравнения двух последовательностей в пределах определенного участка, определения числа положений, в которых в обеих последовательностях находятся идентичные остатки, с получением числа совпадающих положений, деления числа совпадающих положений на общее число положений в определенном участке и умножения результата на 100 с получением процентной доли идентичности последовательностей. В тех случаях, когда эти две последовательности имеют разную длину или при выравнивании создается один или более несимметрично расположенных концов, и определенный участок сравнения включает только одну последовательность, то при расчете остатки одиночной последовательности включаются в знаменатель, а не в числитель. При сравнении ДНК и РНК тимин (Т) и урацил (U) можно считать эквивалентными. Идентичность можно определять самостоятельно или с помощью компьютерного алгоритма для работы с последовательностями, такого как ClustalW, ClustalX, BLAST, FASTA или алгоритм Смита-Уотермана. Подходящие параметры для ClustalW могут являться следующими. Для выравниваний полинуклеотидов: штраф за открытие гэпа=15,0, штраф за продолжение гэпа=6,66 и матрица=идентичность. Для выравниваний полипептидов: штраф за открытие гэпа=10,0, штраф за продолжение гэпа=0,2 и матрица=Gonnet. Для выравниваний ДНК и белка: ENDGAP=-1 и GAPDIST=4.

Термины «повышение» или «повышенный» относятся к повышению, составляющему от приблизительно 10% до приблизительно 99%, или повышению, составляющему по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 100%, по меньшей мере 150% или по меньшей мере 200% или больше, количества, или функции, или активности, как например без ограничения одного или более из функции или активности полипептида, транскрипционной функции или активности и экспрессии полипептида. Термин «повышенный» или выражение «повышенное количество» может относиться к количеству, или функции, или активности в растении или продукте, полученном из растения, которые являются большими, чем можно обнаружить в растении или продукте из того же сорта растения, обработанных таким же образом, которые не были модифицированы. Таким образом, в некоторых случаях растение дикого типа того же сорта, что и растение, которое было обработано таким же образом, используется в качестве контроля, с помощью которого измеряют, достигнуто ли повышение количества.

Термин «ингибировать» или «ингибированный» относится к снижению, составляющему от приблизительно 98% до приблизительно 100%, или снижению, составляющему по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% и, в частности, 100%, количества, или функции, или активности, как, например, без ограничения, одного или более из функции или активности полипептида, транскрипционной функции или активности и экспрессии полипептида.

Термин «введенный» означает доставку полинуклеотида (например, конструкции) или полипептида в клетку. Выражение «введенный» включает ссылку на встраивание полинуклеотида в эукариотическую клетку, где полинуклеотид может быть встроен в геном клетки, а также включает ссылку на транзиентное внедрение полинуклеотида или полипептида в клетку. Выражение «введенный» включает ссылки на способы стабильной или транзиентной трансформации, а также на скрещивание половым путем. Таким образом, выражение «введенный» применительно к вставке полинуклеотида (например, рекомбинантной конструкции/экспрессионной конструкции) в клетку означает «трансфекцию», или «трансформацию», или «трансдукцию» и включает ссылку на встраивание полинуклеотида в эукариотическую клетку, где полинуклеотид может быть встроен в геном клетки (например, хромосомную, плазмидную, пластидную или митохондриальную ДНК), преобразован в автономный репликон или экспрессироваться транзиентно (например, трансфицированная мРНК).

Термины «выделенный» или «очищенный» относятся к материалу, который практически или по сути не содержит компоненты, которые обычно сопутствуют ему, как встречается в его нативном состоянии. Как правило, чистоту и однородность определяют с помощью методик аналитической химии, таких как электрофорез в полиакриламидном геле или высокоэффективная жидкостная хроматография. Полипептид, который является преобладающей молекулой, присутствующей в препарате, является практически очищенным. В частности, выделенный полинуклеотид отделяют от открытых рамок считывания, которые фланкируют требуемый ген и кодируют полипептиды, отличные от необходимого полипептида. Термин «очищенный» обозначает, что полинуклеотид или полипептид дает по сути одну полосу в электрофоретическом геле. В частности, это означает, что полинуклеотид или полипептид являются на по меньшей мере 85% чистыми, более предпочтительно на по меньшей мере 95% чистыми и наиболее предпочтительно на по меньшей мере 99% чистыми. Выделенные полинуклеотиды могут быть очищены из клетки-хозяина, в которой они встречаются в природе. Для получения выделенных полинуклеотидов можно применять общепринятые способы очистки нуклеиновых кислот, известные специалистам в данной области техники. Данный термин также охватывает рекомбинантные полинуклеотиды и химически синтезируемые полинуклеотиды.

«Жидкий табачный экстракт» описывает непосредственный продукт процесса экстракции, осуществленного в отношении исходного табачного материала. Способ экстракции для получения жидкого табачного экстракта может включать нагревание исходного табачного материала в конкретных условиях нагревания и сбор образующихся летучих соединений. Жидкий экстракт табака может содержать смесь соединений, происходящих из исходного табачного материала и удаленных в ходе процедуры экстракции, обычно в комбинации с жидким носителем или растворителем.

Термины «модулировать» или «модулирование» относятся к обеспечению или облегчению качественного или количественного изменения, корректировки или модификации способа, пути, функции или активности, представляющих интерес. Без ограничения такое изменение, корректировка или модификация может представлять собой повышение или понижение уровня соответствующего процесса, пути, функции или активности, представляющих интерес. Например, можно модулировать экспрессию гена или экспрессию полипептида или функцию или активность полипептида. Как правило, относительное изменение, корректировку или модификацию определяют посредством сравнения с контролем.

Термин «не встречающийся в природе» описывает объект, такой как полинуклеотид, генетическую мутацию, полипептид, растение, клетку растения и растительный материал, который не образован естественным путем или не существует в природе. Такие не встречающиеся в природе объекты или искусственные объекты можно создать, синтезировать, осуществить их инициацию, модифицировать, подвергнуть вмешательству или манипуляции способами, описанными в данном документе, или которые известны в данной области техники. Такие не встречающиеся в природе объекты или искусственные объекты могут быть созданы, синтезированы, инициированы, модифицированы, подвергнуты вмешательству или манипуляции человеком. Таким образом, в качестве примера, не встречающееся в природе растение, не встречающуюся в природе клетку растения или не встречающийся в природе растительный материал можно создать с применением традиционных методик селекции растений, таких как обратное скрещивание, или с помощью технологий манипуляции с генами, например, с применением антисмысловой РНК, интерферирующей РНК, мегануклеазы и т. п. В качестве дополнительного примера, не встречающееся в природе растение, не встречающуюся в природе клетку растения или не встречающийся в природе растительный материал можно создать посредством интрогрессии или путем переноса одной или более генетических мутаций (например, одного или более полиморфизмов) от первого растения или клетки растения ко второму растению или клетке растения (которые сами по себе могут быть встречающимися в природе), таким образом, что полученное растение, клетка растения или растительный материал или их потомство содержит генетическую структуру (например, геном, хромосому или ее сегмент), которая не образуется естественным путем, или которая не существует в природе. Полученное растение, клетка растения или растительный материал, таким образом, являются искусственными или не встречающимися в природе. Соответственно, искусственные или не встречающиеся в природе растение или клетку растения можно создать путем модификации генетической последовательности в первом встречающемся в природе растении или клетке растения, даже если полученная генетическая последовательность встречается в природе во втором растении или клетке растения, которые содержат генетический фон, отличный от такового у первого растения или клетки растения. В определенных вариантах осуществления мутация не является встречающейся в природе мутацией, которая существует в природе в полинуклеотиде или полипептиде, таких как ген или полипептид. Различия в генетическом фоне можно выявить по фенотипическим различиям или с помощью методик молекулярной биологии, известных из уровня техники, таких как секвенирование полинуклеотида, определение наличия или отсутствия генетических маркеров (например, маркеров, представляющих собой микросателлитные РНК).

Термины «олигонуклеотид» или «полинуклеотид» означают по меньшей мере два нуклеотида, ковалентно связанных вместе. Описание отдельной нити также определяет последовательность комплементарной нити. Таким образом, полинуклеотид также охватывает нить, комплементарную описанной отдельной нити. Многие варианты полинуклеотида могут использоваться для той же цели, что и указанный полинуклеотид. Таким образом, полинуклеотид также охватывает практически идентичные полинуклеотиды и комплементарные им последовательности. Отдельная нить представляет собой зонд, который может гибридизироваться с данной последовательностью в жестких условиях гибридизации. Таким образом, полинуклеотид также охватывает зонд, который гибридизируется в жестких условиях гибридизации. Полинуклеотиды могут быть однонитевыми или двунитевыми или могут содержать части как двунитевой, так и однонитевой последовательности. Полинуклеотид может представлять собой ДНК, как геномную, так и кДНК, РНК или гибридную молекулу, где полинуклеотид может содержать комбинации дезоксирибо- и рибонуклеотидов, а также комбинации оснований, в том числе урацила, аденина, тимина, цитозина, гуанина, инозина, ксантина, гипоксантина, изоцитозина и изогуанина. Полинуклеотиды можно получать с помощью способов химического синтеза или с помощью рекомбинантных способов.

Специфичность однонитевой ДНК в отношении гибридизации с комплементарными фрагментами определяется «жесткостью» условий реакции (Sambrook et al., Molecular Cloning and Laboratory Manual, Second Ed., Cold Spring Harbor (1989)). Для гибридизации в «жестких условиях» описаны протоколы гибридизации, в которых полинуклеотиды, на по меньшей мере 60% гомологичные друг другу, остаются гибридизированными. Обычно жесткие условия выбирают таким образом, чтобы температура была приблизительно на 5ºC ниже, чем температура точки плавления (Tm) для конкретной последовательности при определенных значениях ионной силы и рН. Tm представляет собой температуру (при определенных значениях ионной силы, рН и концентрации полинуклеотида), при которой 50% зондов комплементарно данной последовательности, гибридизируются с данной последовательностью в равновесном состоянии. Поскольку данные последовательности обычно присутствуют в избытке, то при Tm 50% зондов заняты в равновесном состоянии.

Жесткие условия как правило включают: (1) низкую ионную силу и промывки при высокой температуре, например 15 мМ хлорида натрия, 1,5 мМ цитрата натрия, 0,1% додецилсульфата натрия при 50ºC; (2) присутствие денатурирующего средства во время гибридизации, например 50% (об./об.) формамида, 0,1% бычьего сывороточного альбумина, 0,1% фиколла, 0,1% поливинилпирролидона, 50 мМ натрий-фосфатного буфера (750 мМ хлорида натрия, 75 мМ цитрата натрия; pH 6,5) при 42ºC или (3) присутствие 50% формамида. Как правило, промывки также предусматривают 5 x SSC (0,75 M NaCl, 75 мМ цитрата натрия), 50 мМ фосфат натрия (pH 6,8), 0,1% пирофосфат натрия, 5 x раствор Денхардта, ДНК из молок лососевых рыб, подвергнутую ультразвуковой обработке (50 мкг/мл), 0,1% SDS и 10% сульфат декстрана при 42ºC с промывкой при 42ºC в 0,2 x SSC (хлорид натрия/цитрат натрия) и 50% формамиде при 55ºC и последующей промывкой в условиях высокой жесткости, предусматривающей 0,1 x SSC, содержащий EDTA, при 55ºC. Предпочтительно, условия являются такими, что последовательности, гомологичные друг другу на по меньшей мере приблизительно 65%, 70%, 75%, 85%, 90%, 95%, 98% или 99%, обычно остаются гибридизированными друг с другом.

При «условиях умеренной жесткости» используют растворы для промывки и условия гибридизации, которые являются менее жесткими, такими, что полинуклеотид гибридизируется со всем рассматриваемым полинуклеотидом, его фрагментами, производными или аналогами. Один пример предусматривает гибридизацию в 6 x SSC, 5 x растворе Денхардта, 0,5% SDS и 100 мкг/мл денатурированной ДНК из молок лососевых рыб при 55ºC с последующими одной или более промывками в 1 × SSC, 0,1% SDS при 37ºC. Температуру, ионную силу и т. д. можно регулировать для обеспечения соответствия экспериментальным факторам, таким как длина зонда. Были описаны другие условия умеренной жесткости (см. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Volumes 1-3, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, N.J. (1993); Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual, Stockton Press, New York, N.Y. (1990); Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, 2nd edition, John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1988)).

При «условиях низкой жесткости» используют растворы для промывки и условия гибридизации, которые являются менее жесткими, чем таковые в случае умеренной жесткости, такие, что полинуклеотид гибридизируется со всем рассматриваемым полинуклеотидом, его фрагментами, производными или аналогами. Неограничивающий пример условий гибридизации низкой жесткости предусматривает гибридизацию в 35% формамиде, 5 x SSC, 50 мМ Tris-HCl (pH 7,5), 5 мМ EDTA, 0,02% PVP, 0,02% фиколле, 0,2% BSA, 100 мкг/мл денатурированной ДНК из молок лососевых рыб, 10% (вес/об.) сульфате декстрана при 40ºC с последующими одной или более промывками в 2 x SSC, 25 мМ Tris-HCl (pH 7,4), 5 мМ EDTA и 0,1% SDS при 50ºC. Хорошо описаны другие условия низкой жесткости, такие как условия для вариантов межвидовой гибридизации (см. Ausubel et al., 1993; Kriegler, 1990).

Термин «функционально связанный» означает, что экспрессия гена находится под контролем промотора, с которым он пространственно соединен. Промотор может быть расположен в 5'-направлении (выше) или 3'-направлении (ниже) от гена, который находится под его контролем. Расстояние между промотором и геном может быть примерно таким же, как расстояние между этим промотором и геном, который он контролирует, в гене, из которого получен промотор. Как известно из уровня техники, изменение этого расстояния можно согласованно осуществлять без потери функции промотора. Термин «функционально связанный» относится к ассоциации фрагментов полинуклеотида в одном фрагменте таким образом, что функция одного регулируется другим. Например, промотор функционально связан с фрагментом полинуклеотида, если он способен регулировать транскрипцию данного фрагмента полинуклеотида.

Термин «растение» относится к любому растению на любой стадии его жизненного цикла или развития и его потомкам. В одном варианте осуществления растение представляет собой растение табака, которое относится к растению, принадлежащему к роду Nicotiana. Термин включает ссылку на целые растения, органы растения, ткани растения, ростки растения, семена растения и клетки растения и их потомство. Клетки растения включают без ограничения клетки из семян, суспензионных культур, зародышей, меристематических участков, каллюсной ткани, листьев, корней, побегов, гаметофитов, спорофитов, пыльцы и микроспор. Подходящие виды, культивары, гибриды и сорта растений табака описаны в данном документе.

«Растительный материал» включает лист, корень, чашелистик, кончик корня, лепесток, цветок, побег, стебель, семя и черешок. Растительный материал может представлять собой жизнеспособный или нежизнеспособный растительный материал.

Термины «полинуклеотид», «полинуклеотидная последовательность» или «полинуклеотидный фрагмент» используются в данном документе взаимозаменяемо и относятся к полимеру из РНК или ДНК, который является одно- или двунитевым и необязательно содержит синтетические, неприродные или скорректированные нуклеотидные основания. Полинуклеотиды по настоящему изобретению представлены в прилагаемом перечне последовательностей.

Термины «полипептид» или «полипептидная последовательность» относятся к полимеру из аминокислот, в котором один или более аминокислотных остатков представляют собой искусственный химический аналог соответствующей встречающейся в природе аминокислоты, а также к встречающимся в природе полимерам из аминокислот. Термины также подразумевают модификации, в том числе без ограничения гликозилирование, присоединение липидов, сульфатирование, гамма-карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты, гидроксилирование и ADP-рибозилирование. Полипептиды по настоящему изобретению представлены в прилагаемом перечне последовательностей.

Термин «промотор» означает синтетическую или полученную природным способом молекулу, которая способна обеспечивать, активировать или усиливать экспрессию полинуклеотида в клетке. Термин относится к элементу/последовательности полинуклеотида, расположенным, как правило, выше по последовательности и функционально связанным с фрагментом двунитевого полинуклеотида. Промоторы могут быть получены целиком из участков вблизи нативного гена, представляющего интерес, или могут состоять из разных элементов, полученных из разных нативных промоторов или сегментов синтетического полинуклеотида. Промотор может содержать одну или более специфических регуляторных последовательностей транскрипции для дополнительного усиления экспрессии, или для изменения пространственной экспрессии, или для изменения временной экспрессии. Промотор может также содержать дистальные энхансерные или репрессорные элементы, которые могут быть расположены на расстоянии до несколько тысяч пар оснований от сайта начала транскрипции. Промотор может быть получен из источников, включающих вирусы, бактерии, грибы, растения, насекомых и животных. Промотор может регулировать экспрессию компонента гена конститутивно или дифференциально по отношению к клетке, ткани или органу, в которых происходит экспрессия, или по отношению к стадии развития, на которой происходит экспрессия, или в ответ на внешние стимулы, такие как физиологические нагрузки, патогены, ионы металлов или индуцирующие средства.

Выражения «тканеспецифичный промотор» и «промотор, предпочтительный для определенной ткани», используемые в данном документе взаимозаменяемо, относятся к промотору, который экспрессируется преимущественно, но не обязательно исключительно, в одном органе или ткани, но может экспрессироваться также в одной конкретной клетке. Выражение «промотор, регулируемый в процессе развития» относится к промотору, функция которого определяется событиями, связанными с развитием. Выражение «конститутивный промотор» относится к промотору, который вызывает экспрессию гена в большинстве типов клеток в большинстве случаев. «Индуцируемый промотор» обеспечивает избирательную экспрессию функционально связанной ДНК-последовательности в ответ на присутствие эндогенных или экзогенных стимулов, например химических соединений (химических индукторов), или в ответ на сигналы окружающей среды, гормональные, химические сигналы или сигналы, связанные с развитием, или комбинацию двух или более из них. Примеры индуцируемых или регулируемых промоторов включают промоторы, регулируемые светом, теплом, стрессом, наводнением или засухой, патогенами, фитогормонами, ранениями или химическими веществами, такими как этанол, жасмонат, салициловая кислота или антидоты.

Термин «рекомбинантный» относится к искусственной комбинации двух в иных случаях разделенных сегментов последовательности, полученной, например, посредством химического синтеза или посредством манипуляции с выделенными сегментами полинуклеотидов с помощью методик генной инженерии. Термин также включает ссылку на клетку или вектор, которые были модифицированы путем введения гетерологичного полинуклеотида, или клетку, полученную из модифицированной таким образом клетки, но не охватывает корректировку клетки или вектора в результате встречающихся в природе событий (например, в результате спонтанной мутации, естественной трансформации, или трансдукции, или транспозиции), таких как те, которые происходят без преднамеренного вмешательства человека.

Выражение «рекомбинантная конструкция» относится к комбинации полинуклеотидов, которые обычно не встречаются в природе вместе. Соответственно, рекомбинантная конструкция может содержать регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, полученные из разных источников, или регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, полученные из одного и того же источника, но расположенные иначе, чем это обычно встречается в природе. Рекомбинантная конструкция может представлять собой рекомбинантную ДНК-конструкцию.

Выражения «регуляторные последовательности» и «регуляторные элементы», используемые в данном документе взаимозаменяемо, относятся к полинуклеотидным последовательностям, расположенным выше (5'-некодирующие последовательности), в пределах или ниже (3'-некодирующие последовательности) кодирующей последовательности, которые влияют на транскрипцию, процессинг или стабильность РНК или на трансляцию связанной кодирующей последовательности. Регуляторные последовательности включают промоторы, лидерные последовательности, регулирующие трансляцию, интроны и распознаваемые последовательности полиаденилирования. Термины «регуляторная последовательность» и «регуляторный элемент» используются в данном документе взаимозаменяемо.

Термин «табак» используется в собирательном смысле для обозначения сельскохозяйственных культур табака (например, множества растений табака, выращиваемых в поле, и табака, выращиваемого отличным от гидропоники способом), растений табака и их частей, в том числе без ограничения корней, стеблей, листьев, цветков и семян, подготовленных или полученных так, как описано в данном документе. Понятно, что «табак» включает растения Nicotiana tabacum и продукты из них.

Термин «табачные продукты» относится к потребительским табачным продуктам, в том числе, без ограничения, к курительным материалам (например, сигаретам, сигарам и трубочному табаку), нюхательному табаку, жевательному табаку, жевательной резинке и леденцам, а также компонентам, материалам и ингредиентам для изготовления потребительских табачных продуктов. Данные табачные продукты предпочтительно производят из листьев и стеблей табака, собранных с табака и нарезанных, завяленных, подвергнутых сушке или ферментированных в соответствии с общепринятыми методиками получения табака.

Выражения «терминатор транскрипции», «последовательности терминации» или «терминатор» относятся к ДНК-последовательностям, расположенным ниже кодирующей последовательности, включающим распознаваемые последовательности полиаденилирования и другие последовательности, кодирующие регуляторные сигналы, способные воздействовать на процессинг мРНК или экспрессию гена. Сигнал полиаденилирования обычно характеризуется осуществлением добавления трактов полиадениловой кислоты на 3'-конец предшественника мРНК.

Термин «трансгенный» относится к любой клетке, линии клеток, каллюсу, ткани, части растения или растению, геном которых был скорректирован в результате присутствия гетерологичного полинуклеотида, такого как рекомбинантная конструкция, в том числе к исходным трансгенным объектам, а также полученным с помощью процедур полового скрещивания или бесполого размножения из исходного трансгенного объекта. Термин не охватывает корректировку генома (хромосомную или внехромосомную) с помощью общепринятых способов селекции растений или в результате встречающихся в природе событий, таких как случайное перекрестное опыление, инфекция, вызванная нерекомбинантным вирусом, трансформация нерекомбинантными бактериями, нерекомбинантная транспозиция или спонтанная мутация.

Выражение «трансгенное растение» относится к растению, которое содержит в своем геноме один или более гетерологичных полинуклеотидов, т. е. растение, которое содержит рекомбинантный генетический материал, обычно не обнаруживаемый в нем, и который был введен в рассматриваемое растение (или в предков растения) посредством манипуляции, осуществляемой человеком. Например, гетерологичный полинуклеотид может быть стабильно интегрирован в геном таким образом, что полинуклеотид передается последующим поколениям. Гетерологичный полинуклеотид может быть интегрирован в геном отдельно или в виде части рекомбинантной конструкции. Коммерческая разработка генетически улучшенной идиоплазмы также продвинулась к стадии введения в культурные растения нескольких признаков, что часто называют подходом на основе пирамидирования генов. В этом подходе в растение можно ввести несколько генов, придающих разные характеристики, представляющие интерес. Пирамидирование генов можно осуществлять многими способами, в том числе без ограничения путем котрансформации, повторной трансформации и скрещивания линий с разными трансгенами. Таким образом, растение, выращиваемое из клетки растения, в которую рекомбинантную ДНК вводят с помощью трансформации, является трансгенным растением, равно как и все потомство данного растения, которое содержит введенный трансген (полученное как половым, так и бесполым путем). Понятно, что термин «трансгенное растение» охватывает все растение или дерево и части растения или дерева, например зерна, семена, цветки, листья, корни, плоды, пыльцу, стебли и т. п. Каждый гетерологичный полинуклеотид может придавать трансгенному растению отдельный признак.

Термин «трансген» относится к гену или генетическому материалу, содержащему последовательность гена, которые были выделены из одного организма и введены в другой организм. Этот ненативный сегмент ДНК может сохранять способность к обеспечению выработки РНК или полипептида в трансгенном организме или он может обеспечивать корректировку нормальной функции генетического кода трансгенного организма.

Термин «вариант» по отношению к полинуклеотиду означает: (i) часть или фрагмент полинуклеотида; (ii) последовательность, комплементарную полинуклеотиду или его части; (iii) полинуклеотид, практически идентичный упоминаемому полинуклеотиду или комплементарной ему последовательности; или (iv) полинуклеотид, который гибридизируется в жестких условиях с упоминаемым полинуклеотидом, комплементарной ему последовательностью или практически идентичным ей полинуклеотидом.

Термин «вариант» по отношению к пептиду или полипептиду означает пептид или полипептид, которые отличаются по последовательности за счет вставки, делеции или консервативной замены аминокислот, но сохраняют по меньшей мере одну биологическую функцию или активность. Вариант также может означать полипептид, который сохраняет по меньшей мере одну биологическую функцию или активность. Консервативную замену аминокислоты, т. е. замещение аминокислоты другой аминокислотой со сходными свойствами (например, степенью гидрофильности и распределением заряженных участков), понимают в данной области техники как обычно включающую незначительное изменение.

Термин «сорт» относится к популяции растений, которые обладают постоянными характеристиками, отделяющими их от других растений того же вида. Хотя сорт обладает одним или более отличительными признаками, он дополнительно характеризуется очень небольшим общим варьированием между особями в пределах этого сорта. Сорт часто продается на коммерческой основе.

Термин «вектор» относится к полинуклеотидному средству доставки, которое содержит комбинацию компонентов полинуклеотида для обеспечения транспорта полинуклеотидов, полинуклеотидных конструкций и полинуклеотидных конъюгатов и т. п. Вектор может представлять собой вирусный вектор, бактериофаг, искусственную хромосому бактерий или искусственную хромосому дрожжей. Вектор может представлять собой ДНК- или РНК-вектор. Подходящие векторы включают эписомы, способные к внехромосомной репликации, такие как кольцевые плазмиды из двунитевой нуклеотидной последовательности; линеаризованные плазмиды из двунитевой нуклеотидной последовательности и другие векторы любого происхождения. «Вектор экспрессии» представляет собой полинуклеотидное средство доставки, которое содержит комбинацию компонентов полинуклеотида для обеспечения экспрессии полинуклеотида(-ов), полинуклеотидных конструкций и конъюгатов полинуклеотидов и т. п. Подходящие векторы экспрессии включают эписомы, способные к внехромосомной репликации, такие как кольцевые плазмиды из двунитевой нуклеотидной последовательности; линеаризованные плазмиды из двунитевой нуклеотидной последовательности и другие функционально эквивалентные векторы экспрессии любого происхождения. Вектор экспрессии содержит по меньшей мере промотор, расположенный выше по последовательности и функционально связанный с полинуклеотидом, полинуклеотидными конструкциями или полинуклеотидным конъюгатом, как определено ниже.

Если в данном документе не определено иное, то научные и технические термины, используемые в связи с настоящим раскрытием, будут иметь значения, которые обычно понятны специалистам средней квалификации в данной области техники. Например, любые системы номенклатуры и методики, используемые в связи с культурами клеток или тканей, молекулярной биологией, иммунологией, микробиологией, генетикой и химией полипептида и полинуклеотида, а также гибридизацией, которые описаны в данном документе, хорошо известны и широко применяются в данной области техники. Значение и объем терминов должны быть ясны, однако в случае какой-либо скрытой двусмысленности определения, приведенные в данном документе, имеют преимущественную силу по сравнению с любым словарным или не относящимся к данному документу определением. Кроме того, если иное не требуется по контексту, термины в единственном числе будут включать множественное число, и термины во множественном числе будут включать единственное число.

2. Полинуклеотиды

Раскрыт выделенный полинуклеотид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 60% идентичностью последовательности с любой из последовательностей, описанных в данном документе, включая любой из полинуклеотидов, показанных в перечне последовательностей. Предпочтительно, выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с ними.

Предпочтительно полинуклеотид(-ы), описанный(-е) в данном документе, кодирует(-ют) активный полипептид, который характеризуется по меньшей мере приблизительно 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% или большей функцией или активностью полипептида(-ов), показанного(-ых) в перечне последовательностей.

В другом варианте осуществления предусмотрен выделенный полинуклеотид NtINV, содержащий, состоящий или по сути состоящий из полинуклеотида, характеризующегося по меньшей мере 60% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

В другом варианте осуществления предусмотрен выделенный полинуклеотид NtSUS, содержащий, состоящий или по сути состоящий из полинуклеотида, характеризующегося по меньшей мере 60% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

Предпочтительно выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере приблизительно 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

Предпочтительно выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере приблизительно 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

Предпочтительно выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

Предпочтительно выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере приблизительно 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

Предпочтительно выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере приблизительно 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

Предпочтительно выделенный полинуклеотид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере приблизительно 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

В другом варианте осуществления предусмотрены полинуклеотиды, содержащие, состоящие или по сути состоящие из полинуклеотидов с существенной степенью гомологии (т. е. сходством последовательности) или существенной степенью идентичности с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

В другом варианте осуществления предусмотрены полинуклеотиды, содержащие, состоящие или по сути состоящие из полинуклеотидов с существенной степенью гомологии (т. е. сходством последовательности) или существенной степенью идентичности с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

В другом варианте осуществления предусмотрены фрагменты из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9 с существенной степенью гомологии (то есть сходством последовательности) или с существенной степенью идентичности с ними, которые характеризуются по меньшей мере приблизительно 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с соответствующими фрагментами из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

В другом варианте осуществления предусмотрены фрагменты из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32 с существенной степенью гомологии (то есть сходством последовательности) или с существенной степенью идентичности с ними, которые характеризуются по меньшей мере приблизительно 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с соответствующими фрагментами из SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

В другом варианте осуществления предусмотрены полинуклеотиды, предусматривающие достаточную или существенную степень идентичности или сходства с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9, которые кодируют полипептид, который функционирует в качестве INV.

В другом варианте осуществления предусмотрены полинуклеотиды, предусматривающие достаточную или существенную степень идентичности или сходства с SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32, которые кодируют полипептид, который функционирует в качестве SUS.

В другом варианте осуществления предусмотрен полимер, представляющий собой полинуклеотид, который содержит, состоит или по сути состоит из полинуклеотида, обозначенного в данном документе как SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7 или SEQ ID NO: 9.

В другом варианте осуществления предусмотрен полимер, представляющий собой полинуклеотид, который содержит, состоит или по сути состоит из полинуклеотида, обозначенного в данном документе как SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22 или SEQ ID NO: 24; SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30 или SEQ ID NO: 32.

Полинуклеотиды, описанные в данном документе, предпочтительно кодируют представителей семейства INV или семейства SUS, которые характеризуются активностью INV или активностью SUS соответственно.

Полинуклеотид может включать полимер из нуклеотидов, который может представлять собой немодифицированную или модифицированную дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) или рибонуклеиновую кислоту (РНК). Соответственно, полинуклеотид может представлять собой без ограничения геномную ДНК, комплементарную ДНК (кДНК), мРНК, или антисмысловую РНК, или их фрагмент(-ы). Кроме того, полинуклеотид может представлять собой однонитевую или двунитевую ДНК, ДНК, которая является смесью однонитевых и двунитевых участков, гибридную молекулу, содержащую ДНК и РНК, или гибридную молекулу со смесью однонитевых и двунитевых участков или их фрагмента(-ов). Дополнительно полинуклеотид может быть составлен из трехнитевых участков, содержащих ДНК, РНК или обе, или их фрагмент(-ы). Полинуклеотид может содержать одно или более модифицированных оснований, таких как фосфоротиоаты, и может представлять собой пептидную нуклеиновую кислоту. Как правило, полинуклеотиды могут быть собраны из выделенных или клонированных фрагментов кДНК, геномной ДНК, олигонуклеотидов или отдельных нуклеотидов или комбинации вышеперечисленного. Хотя полинуклеотиды, описанные в данном документе, представлены в виде ДНК-последовательностей, они включают их соответствующие РНК-последовательности и их комплементарные (например, полностью комплементарные) ДНК- или РНК-последовательности, в том числе обратно комплементарные им последовательности.

Фрагменты полинуклеотида могут находиться в диапазоне от по меньшей мере приблизительно 25 нуклеотидов, приблизительно 50 нуклеотидов, приблизительно 75 нуклеотидов, приблизительно 100 нуклеотидов, приблизительно 150 нуклеотидов, приблизительно 200 нуклеотидов, приблизительно 250 нуклеотидов, приблизительно 300 нуклеотидов, приблизительно 400 нуклеотидов, приблизительно 500 нуклеотидов, приблизительно 600 нуклеотидов, приблизительно 700 нуклеотидов, приблизительно 800 нуклеотидов, приблизительно 900 нуклеотидов, приблизительно 1000 нуклеотидов, приблизительно 1100 нуклеотидов, приблизительно 1200 нуклеотидов, приблизительно 1300 нуклеотидов или приблизительно 1400 нуклеотидов и до полноразмерного полинуклеотида, кодирующего полипептиды, описанные в данном документе.

Полинуклеотид обычно содержит фосфодиэфирные связи, хотя в некоторых случаях включены полинуклеотидные аналоги, которые могут иметь альтернативные остовы, содержащие, например, фосфороамидатные, фосфоротиоатные, фосфородитиоатные или О-метилфосфороамидитные связи; и пептидные остовы полинуклеотидов и связи. Другие аналоги полинуклеотидов включают полинуклеотиды с положительно заряженными остовами, неионогенными остовами и безрибозными остовами. Модификации рибозофосфатного остова можно осуществлять по целому ряду причин, например, для повышения стабильности и периода полужизни таких молекул в физиологических средах или в качестве зондов на биочипе. Можно получать смеси встречающихся в природе полинуклеотидов и аналогов; в качестве альтернативы, можно получать смеси разных аналогов полинуклеотидов и смеси природных полинуклеотидов и аналогов.

Известно множество аналогов полинуклеотидов, в том числе, например, таковые с фосфороамидатными, фосфоротиоатными, фосфородитиоатными или О-метилфосфороамидитными связями и пептидными остовами полинуклеотидов и связями. Другие аналоги полинуклеотидов включают таковые с положительно заряженными остовами, неионогенными остовами и безрибозными остовами. Полинуклеотиды, содержащие один или более карбоциклических сахаров, также включены.

Другие аналоги включают пептидные полинуклеотиды, которые представляют собой таковые на основе пептидных аналогов полинуклеотидов.

В числе применений раскрытых полинуклеотидов и их фрагментов находится применение фрагментов в качестве зондов в анализах на основе гибридизации или в качестве праймеров для применения в анализах на основе амплификации. Такие фрагменты обычно содержат по меньшей мере приблизительно 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 или больше смежных нуклеотидов из ДНК-последовательности. В других вариантах осуществления фрагмент ДНК содержит по меньшей мере приблизительно 10, 15, 20, 30, 40, 50 или 60 или больше смежных нуклеотидов из ДНК-последовательности. Таким образом, согласно одному аспекту также предусмотрен способ выявления полинуклеотида, включающий применение зондов или праймеров, или того и другого.

Основные параметры, влияющие на выбор условий гибридизации, и руководство для разработки подходящих условий описаны в Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.). Используя данные о генетическом коде в комбинации с полипептидными последовательностями, описанными в данном документе, можно получить наборы вырожденных олигонуклеотидов. Такие олигонуклеотиды применимы в качестве праймеров, например, в полимеразных цепных реакциях (ПЦР), с помощью которых выделяют и амплифицируют фрагменты ДНК.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV4-S и NtINV4-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T. Необязательно по меньшей мере одна или более дополнительных модификаций (например, мутаций) могут быть включены в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S, NtSUS4-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T, предпочтительно в один или более из NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS2-T, NtSUS4-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS2-T, NtSUS4-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

3. Полипептид

Также предусмотрен выделенный полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из полипептида, характеризующегося по меньшей мере 60% идентичностью последовательности с любым из полипептидов, описанных в данном документе, включая любой из полипептидов, приведенных в перечне последовательностей. Предпочтительно выделенный полипептид содержит, состоит или по сути состоит из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 80%, 85%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95% 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с ними.

Также предусмотрен полипептид NtINV, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8.

Также предусмотрен полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 80%, 81%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8.

Также предусмотрен полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8.

Также предусмотрен полипептид, кодируемый SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8.

Полипептид может предусматривать последовательности, характеризующиеся достаточной или значительной степенью идентичности или сходства с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 8 для выполнения функции INV.

Также предусмотрен полипептид NtSUS, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 или SEQ ID NO: 31; или SEQ ID NO: 33.

Также предусмотрен полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 80%, 81%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 или SEQ ID NO: 31; или SEQ ID NO: 33.

Также предусмотрен полипептид, содержащий, состоящий или по сути состоящий из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,1%, 99,2%, 99,3%, 99,4%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8%, 99,9% или 100% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 или SEQ ID NO: 31; или SEQ ID NO: 33.

Также предусмотрен полипептид, кодируемый SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 или SEQ ID NO: 31; или SEQ ID NO: 33.

Полипептид может предусматривать последовательности, характеризующиеся достаточной или значительной степенью идентичности или сходства с SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 или SEQ ID NO: 31, или SEQ ID NO: 33 для выполнения функции SUS.

Как правило, фрагменты полипептида(-ов) в некоторой степени или полностью сохраняют функцию или активность полноразмерной последовательности, как например активность INV или SUS. Фрагменты полипептида могут находиться в диапазоне от по меньшей мере приблизительно 25 аминокислот, приблизительно 50 аминокислот, приблизительно 75 аминокислот, приблизительно 100 аминокислот, приблизительно 150 аминокислот, приблизительно 200 аминокислот, приблизительно 250 аминокислот, приблизительно 300 аминокислот, приблизительно 400 аминокислот, приблизительно 500 аминокислот и до полноразмерного полипептида, описанного в данном документе.

Полипептиды также включают мутантные варианты, полученных путем введения любого типа корректировок (например, вставки, делеции или замены аминокислот; изменения состояния гликозилирования; изменения, которые влияют на рефолдинг или изомеризацию, трехмерные структуры или состояния самоассоциации), которые могут быть намеренно сконструированы или выделены естественным образом при условии, что они по прежнему сохраняют некоторую или всю свою функциональность или активность. Предпочтительно, данную функцию или активность модулируют.

Делеция относится к удалению одной или более аминокислот из полипептида. Вставка относится к одному или более аминокислотным остаткам, вводимым в заранее определенное место в полипептиде. Вставки могут предусматривать вставки внутрь последовательности одной или более аминокислот. Замена относится к замещению аминокислот полипептида другими аминокислотами, имеющими сходные свойства (такие как сходная гидрофобность, гидрофильность, антигенность, склонность к образованию или разрыву α-спиральных структур или β-складчатых структур). Аминокислотные замены, как правило, предусматривают один остаток, но могут быть сгруппированы в зависимости от функциональных ограничений, накладываемых на полипептид, и могут предусматривать диапазон от приблизительно 1 до приблизительно 10 аминокислот. Аминокислотные замены являются предпочтительно консервативными аминокислотными заменами, как описано ниже. Аминокислотные замены, делеции или вставки можно выполнять с применением методик пептидного синтеза, таких как твердофазный пептидный синтез, или с помощью манипулирования с рекомбинантной ДНК. Способы манипулирования ДНК-последовательностями с получением вариантов полипептида с заменой, вставкой или делецией хорошо известны в данной области техники. Вариант может характеризоваться наличием корректировок, которые вызывают возникновение «молчащего» изменения и в результате приводят к образованию функционально эквивалентного полипептида. Преднамеренные аминокислотные замены можно осуществлять исходя из сходства остатков в отношении полярности, заряда, растворимости, гидрофобности, гидрофильности и амфипатической природы, при условии, что сохраняется связывание, обуславливающее вторичную структуру вещества. Например, отрицательно заряженные аминокислоты включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту, положительно заряженные аминокислоты включают лизин и аргинин, и аминокислоты с незаряженными полярными концевыми группами, характеризующиеся сходными значениями гидрофильности, включают лейцин, изолейцин, валин, глицин, аланин, аспарагин, глутамин, серин, треонин, фенилаланин и тирозин. Консервативные замены можно осуществлять, например, в соответствии с приведенной ниже таблицей. Аминокислоты в одном и том же блоке во втором столбце и предпочтительно в одной и той же строке в третьем столбце можно заменять одна на другую:

АЛИФАТИЧЕСКИЕ	Неполярные	Gly Ala Pro
		Ile Leu Val
	Полярные - незаряженные	Cys Ser Thr Met
		Asn Gly
	Полярные - заряженные	Asp Glu
		Lys Arg
АРОМАТИЧЕСКИЕ		His Phe Trp Tyr

Полипептид может представлять собой зрелый полипептид, или незрелый полипептид, или полипептид, полученный из незрелого полипептида. Полипептиды могут находиться в линейной форме или являться циклизированными с применением известных способов. Полипептиды, как правило, содержат по меньшей мере 10, по меньшей мере 20, по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40 смежных аминокислот.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV4-S и NtINV4-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T. Необязательно по меньшей мере одна или более дополнительных модификаций (например, мутаций) могут быть включены в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S, NtSUS4-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T, предпочтительно в один или более из NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS2-T, NtSUS4-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S и NtSUS4-T, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

По меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtINV4-S и NtINV4-T, и по меньшей мере одна модификация (например, мутация) может быть включена в один или более из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S, тогда как модификация(-и) (например, мутация(-и)) не включена(-ы) в один или более из NtSUS1-S, NtSUS1-T, NtSUS2-T, NtSUS4-T, NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T.

4. Модификация растений

Трансформация

Рекомбинантные конструкции можно применять для трансформации растений или клеток растения для того, чтобы модулировать экспрессию, функцию или активность полипептида. Рекомбинантная полинуклеотидная конструкция может содержать полинуклеотид, кодирующий один или более полинуклеотидов, описанных в данном документе, функционально связанных с регуляторным участком, подходящим для экспрессии полипептида. Таким образом, полинуклеотид может содержать кодирующую последовательность, которая кодирует полипептид, описанный в данном документе. Растения или клетки растений, в которых модулируют экспрессию, функцию или активность полипептида, могут включать мутантные, не встречающиеся в природе, трансгенные, созданные человеком или полученные с помощью методик генной инженерии растения или клетки растения. Предпочтительно, трансгенное растение или клетка растения содержит геном, который был скорректирован путем стабильной интеграции рекомбинантной ДНК. Рекомбинантная ДНК содержит ДНК, полученную с помощью методик генной инженерии и сконструированную вне клетки, и содержит ДНК, содержащую встречающуюся в природе ДНК, или кДНК, или синтетическую ДНК. Трансгенное растение может включать растение, регенерированное из первоначально трансформированной клетки растения, и трансгенные растения, являющиеся потомством более поздних поколений или гибридов трансформированного растения. Предпочтительно, трансгенная модификация обеспечивает корректировку экспрессии, или функции, или активности полинуклеотида или полипептида, описанных в данном документе, по сравнению с таковыми в контрольном растении.

Полипептид, кодируемый рекомбинантным полинуклеотидом, может являться нативным полипептидом или может являться гетерологичным по отношению к клетке. В некоторых случаях рекомбинантная конструкция содержит полинуклеотид, который обеспечивает модулирование экспрессии, функционально связанный с регуляторным участком. Примеры подходящих регуляторных участков описаны в данном документе.

Также представлены векторы, содержащие рекомбинантные полинуклеотидные конструкции, такие как описанные в данном документе. Подходящие основы для векторов включают, например, те, которые обычно используют в данной области техники, такие как плазмиды, вирусы, искусственные хромосомы, искусственные хромосомы бактерий, искусственные хромосомы дрожжей или искусственные хромосомы бактериофагов. Подходящие векторы экспрессии включают без ограничения плазмиды и вирусные векторы, полученные из, например, бактериофага, бакуловирусов и ретровирусов. Многочисленные векторы и системы экспрессии являются коммерчески доступными.

Векторы могут содержать, например, точки начала репликации, участки связывания с ядерным матриксом или маркеры. Маркерный ген может придавать клетке растения селектируемый фенотип. Например, маркер может придавать устойчивость к биоцидным средствам, такую как устойчивость к антибиотику (например, к канамицину, G418, блеомицину или гигромицину) или к гербициду (например, к глифосату, хлорсульфурону или фосфинотрицину). Дополнительно вектор экспрессии может содержать последовательность метки, предназначенной для облегчения манипуляций или выявления (например, очистки или локализации) экспрессируемого полипептида. Последовательности меток, такие как последовательности люциферазы, бета-глюкуронидазы, зеленого флуоресцентного полипептида, глутатион-S-трансферазы, полигистидина, c-myc или гемагглютинина, как правило, экспрессируются в виде фрагмента, слитого с кодируемым полипептидом. Такие метки могут быть вставлены в любом месте в пределах полипептида, в том числе на карбоксильном или амино-конце.

Растение или клетку растения можно трансформировать путем интегрирования рекомбинантного полинуклеотида в их геном с обеспечением их стабильной трансформации. Растение или клетка растения, описанные в данном документе, могут являться стабильно трансформированными. Стабильно трансформированные клетки, как правило, сохраняют введенный полинуклеотид с каждым клеточным делением. Растение или клетка растения также могут являться транзиентно трансформированными, так что рекомбинантный полинуклеотид не интегрируется в их геном. Транзиентно трансформированные клетки, как правило, теряют весь введенный рекомбинантный полинуклеотид или некоторую его часть с каждым клеточным делением, так что введенный рекомбинантный полинуклеотид нельзя выявить в дочерних клетках после достаточного числа клеточных делений.

Из уровня техники доступен ряд способов для трансформации клетки растения, включающий биолистику; методики с применением генной пушки; трансформацию, опосредованную Agrobacterium; трансформацию, опосредованную вирусным вектором; способ на основе замораживания-оттаивания; бомбардировку микрочастицами; прямое поглощение ДНК; ультразвуковую обработку; микроинъекцию; перенос, опосредованный вирусом растения; и электропорацию.

Если клетку или культивируемую ткань применяют в качестве реципиентной ткани для трансформации, при необходимости растения можно регенерировать из трансформированных культур с помощью методов, известных специалистам в данной области техники.

Выбор регуляторных участков, подлежащих включению в рекомбинантную конструкцию, зависит от нескольких факторов, в том числе без ограничения от эффективности, селектируемости, индуцируемости, необходимого уровня экспрессии и предпочтительной экспрессии в определенных клетках или тканях. Обычной задачей для специалиста в данной области техники является модулирование экспрессии кодирующей последовательности посредством правильного выбора регуляторных участков и их размещения по отношению к кодирующей последовательности. Транскрипцию полинуклеотида можно модулировать сходным образом. Некоторые подходящие регуляторные участки инициируют транскрипцию исключительно или преимущественно в определенных типах клеток. Способы идентификации и установления характеристик регуляторных участков в геномной ДНК растений хорошо известны в данной области техники.

Иллюстративные промоторы включают тканеспецифичные промоторы, распознаваемые тканеспецифичными факторами, присутствующими в разных тканях или типах клеток (например, специфичные для корня промоторы, специфичные для побега промоторы, специфичные для ксилемы промоторы), или присутствующими на различных стадиях развития, или присутствующими в ответ на разные условия окружающей среды. Подходящие промоторы включают конститутивные промоторы, которые могут быть активированы в большинстве типов клеток, не требуя специфических индукторов. Примеры промоторов, которые можно применять для контроля экспрессии полипептида, включают промотор 35S вируса мозаики цветной капусты (CaMV/35S), SSU, OCS, lib4, usp, STLS1, B33, nos или промоторы гена убиквитина или фазеолина. Специалисты в данной области техники могут создавать множество вариантов рекомбинантных промоторов.

Тканеспецифичные промоторы представляют собой элементы управления транскрипцией, которые активны только в определенных клетках или тканях в определенные моменты времени в ходе развития растений, например в вегетативных тканях или репродуктивных тканях. Примеры тканеспецифичных промоторов, находящихся под контролем в ходе развития, включают промоторы, которые могут инициировать транскрипцию только (или в основном только) в определенных тканях, таких как вегетативные ткани, например корни или листья, или репродуктивные ткани, такие как плоды, семяпочки, семена, пыльца, тычинки, цветки или любая эмбриональная ткань. Промоторы, специфичные для репродуктивных тканей, могут являться, например, специфичными для пыльника, специфичными для семяпочки, специфичными для зародыша, специфичными для эндосперма, специфичными для интегумента, специфичными для семени и кожуры семени, специфичными для пыльцы, специфичными для лепестка, специфичными для чашелистика или для комбинаций таковых.

Иллюстративные специфичные для листа промоторы включают промотор гена пируватортофосфатдикиназы (PPDK) из C4-растения (кукурузы), промотор cab-m1Ca+2 из кукурузы, промотор родственных myb генов из Arabidopsis thaliana (Atmyb5), промоторы рибулозобисфосфаткарбоксилазы (RBCS) (например, генов томата RBCS 1, RBCS2 и RBCS3A, экспрессируемых в листьях и выращенных на свету саженцах, RBCS1 и RBCS2, экспрессируемых в развивающихся плодах томата, или промотор гена рибулозобисфосфаткарбоксилазы, экспрессируемый на высоких уровнях почти исключительно в мезофильных клетках листовых пластинок и листовых пазух).

Иллюстративные специфичные для стареющих тканей промоторы включают промотор из томата, активный во время созревания плодов, старения и опадения листьев, промотор гена, кодирующего цистеиновую протеазу маиса, промотор 82E4 и промотор генов SAG. Можно применять иллюстративные специфичные для пыльника промоторы. Можно выбрать иллюстративные промоторы для экспрессии предпочтительно в корне, известные специалистам в данной области техники. Иллюстративные промоторы для экспрессии предпочтительно в семенах включают как специфичные для семян промоторы (промоторы, активные в процессе развития семян, такие как промоторы запасных полипептидов семян), так и промоторы прорастающих семян (промоторы, активные во время прорастания семян).

Примеры индуцируемых промоторов включают промоторы, реагирующие на воздействие патогенов, анаэробные условия, повышенную температуру, свет, засуху, низкую температуру или высокую концентрацию солей. Патоген-индуцируемые промоторы включают промоторы связанных с патогенезом полипептидов (PR-полипептидов), индуцирование которых происходит после инфицирования патогеном (например, PR-полипептиды, SAR-полипептиды, бета-1,3-глюканаза, хитиназа).

Дополнительно к промоторам растений другие подходящие промоторы могут иметь бактериальное происхождение, например промотор гена октопинсинтазы, промотор гена нопалинсинтазы и другие промоторы, полученные из Ti-плазмид, или они могут быть получены из вирусных промоторов (например, промоторов 35S и 19S РНК вируса мозаики цветной капусты (CaMV), конститутивных промоторов вируса табачной мозаики, промоторов 19S и 35S вируса мозаики цветной капусты (CaMV) или промотора 35S вируса мозаики норичника).

Мутация

Раскрыты растение или клетка растения, содержащие по меньшей мере одну мутацию в одном или более полинуклеотидах или полипептидах, описанных в данном документе, где указанная мутация приводит к модуляции функции или активности NtINV или полипептида(-ов), кодируемого(-ых) им, или модуляции функции или активности NtINV и NtSUS или полипептидов, кодируемых ими. Комбинации таких мутаций обсуждаются в данном документе.

Предусмотрен способ модулирования уровня полипептида NtINV или полипептида NtINV и полипептида NtSUS в (подвергнутом сушке) растении или в (подвергнутом сушке) растительном материале, при этом указанный способ включает введение в геном указанного растения одной или более мутаций, которые обеспечивают модуляцию экспрессии по меньшей мере одного гена NtINV или по меньшей мере одного гена NtINV и по меньшей мере одного гена NtSUS, где указанный по меньшей мере один ген выбран из любой последовательности в соответствии с настоящим изобретением.

Также предусмотрен способ идентификации растения с модулированными уровнями редуцирующих сахаров, при этом указанный способ включает скрининг образца полинуклеотида из представляющего интерес растения в отношении наличия одной или более мутаций в последовательностях в соответствии с настоящим раскрытием, как например NtINV или NtINV и NtSUS или их комбинации, и необязательно сопоставление идентифицированной мутации(-ий) с мутацией(-ями), которая(-ые), как известно, обеспечивает(-ют) модуляцию уровней редуцирующих сахаров.

Также раскрыты растение или клетка растения, которые являются гетерозиготными или гомозиготными по одной или более мутациям в гене NtINV или гене NtINV и гене NtSUS в соответствии с настоящим изобретением, при этом указанная мутация приводит к модулированной экспрессии гена, или функции, или активности полипептида NtINV или полипептидов NtINV и NtSUS, кодируемых ими.

Для комбинирования мутаций в одном растении можно применять целый ряд подходов, в том числе половое скрещивание. Растение, характеризующееся наличием одной или более благоприятных мутаций в гетерозиготном или гомозиготном состоянии в гене в соответствии с настоящим изобретением, которые модулируют экспрессию гена или функцию или активность полипептида, кодируемого таковым, можно скрещивать с растением, характеризующимся наличием одной или более благоприятных мутаций в гетерозиготном или гомозиготном состоянии в одном или более генах, которые модулируют их экспрессию или функцию или активность полипептида, кодируемого таковыми. В одном варианте осуществления скрещивания проводят для введения одной или более благоприятных мутаций в гетерозиготном или гомозиготном состоянии в ген в соответствии с настоящим изобретением в одном и том же растении.

Функция или активность одного или более полипептидов по настоящему изобретению в растении являются повышенными или пониженными, если функция или активность являются более низкими или более высокими, чем функция или активность того же полипептида(-ов) в растении, которое не было модифицировано для подавления функции или активности этого полипептида, и которое культивировали, собирали и подвергали сушке с применением тех же протоколов.

В некоторых вариантах осуществления мутацию(-и) вводят в растение или клетку растения с применением подхода с обеспечением мутагенеза, и введенную мутацию идентифицируют или подвергают отбору с применением способов, известных специалистам в данной области техники, таких как анализ методом Саузерн-блоттинга, секвенирование ДНК, ПЦР-анализ или фенотипический анализ. Мутации, которые влияют на экспрессию гена или которые нарушают функцию кодируемого полипептида, можно определять с применением способов, хорошо известных из уровня техники. Инсерционные мутации в экзонах гена, как правило, в результате приводят к образованию нефункциональных мутантных вариантов. Мутации по консервативным остаткам могут быть особенно эффективными для подавления метаболической функции кодируемого полипептида. Например, понятно, что мутация в одном или более высококонсервативных участках будет, очевидно, обеспечивать корректировку функции полипептида, в то время как мутация вне этих высококонсервативных участков будет, очевидно, оказывать незначительное влияния на функцию полипептида или не будет влиять на него. Дополнительно мутация в одном нуклеотиде может приводить к возникновению стоп-кодона, наличие которого в результате приведет к получению усеченного полипептида и, в зависимости от степени усечения, потере функции.

Также раскрыты способы получения мутантных полинуклеотидов и полипептидов. Любое представляющее интерес растение, в том числе клетку растения или растительный материал, можно генетически модифицировать различными способами, с помощью которых, как известно, индуцируют мутагенез, в том числе сайт-направленный мутагенез, олигонуклеотид-направленный мутагенез, индуцируемый химическими соединениями мутагенез, индуцируемый ионизирующим излучением мутагенез, мутагенез с применением модифицированных оснований, мутагенез с применением ДНК-дуплекса с гэпом, мутагенез с двунитевыми разрывами, мутагенез с применением линий-хозяев с нарушенной репарацией, мутагенез посредством синтеза полного гена, перетасовка ДНК и другие эквивалентные способы.

Мутации в полинуклеотидах и полипептидах, описанных в данном документе, могут включать внесенные человеком мутации, или искусственные мутации, или мутации, созданные с помощью генной инженерии. Мутации в полинуклеотидах и полипептидах, описанных в данном документе, могут представлять собой мутации, которые получены или которые можно получить посредством способа, который включает стадию манипуляции in vitro или in vivo. Мутации в полинуклеотидах и полипептидах, описанных в данном документе, могут представлять собой мутации, которые получены или которые можно получить посредством способа, который предусматривает вмешательство человека. Функция или активность мутантного варианта полипептида может быть выше, ниже или приблизительно такой же, как у полипептида, не подвергнутого мутированию.

Способы, с помощью которых вводят мутацию случайным образом в полинуклеотид, могут включать химический мутагенез и радиационный мутагенез. Химический мутагенез предусматривает применение экзогенно добавляемых химических веществ, таких как мутагенные, тератогенные или канцерогенные органические соединения, для индуцирования мутаций. Для создания мутаций можно применять мутагены, которые создают главным образом точечные мутации и короткие делеции, вставки, миссенс-мутации, простые повторяющиеся последовательности, трансверсии или транзиции, в том числе химические мутагены или излучение. Мутагены включают этилметансульфонат, метилметансульфонат, N-этил-N-нитрозомочевину, триэтилмеламин, N-метил-N-нитрозомочевину, прокарбазин, хлорамбуцил, циклофосфамид, диэтилсульфат, акриламидный мономер, мельфалан, азотистый иприт, винкристин, диметилнитрозамин, N-метил-N'-нитро-нитрозогуанидин, нитрозогуанидин, 2-аминопурин, 7,12-диметил-бенз(a)антрацен, этиленоксид, гексаметилфосфорамид, бисульфан, диэпоксиалканы (диэпоксиоктан, диэпоксибутан и т. п.), 2-метокси-6-хлор-9[3-(этил-2-хлорэтил)аминопропиламино]акридина дигидрохлорид и формальдегид.

Также предусмотрены спонтанные мутации в локусе, которые могут не быть непосредственно вызванными мутагеном, при условии, что они приводят к возникновению необходимого фенотипа. Подходящие мутагенные средства могут также включать, например, ионизирующее излучение, такое как рентгеновское излучение, гамма-излучение, излучение быстрых нейтронов и ультрафиолетовое излучение. Дозу мутагенного химического вещества или излучения определяют экспериментально для каждого типа ткани растения таким образом, чтобы получить частоту мутаций, которая ниже порогового уровня, характеризующегося летальностью или репродуктивной стерильностью. Любой способ получения полинуклеотида растения, известный специалистам в данной области техники, можно применять для получения полинуклеотида растения для скрининга в отношении мутаций.

Способ мутации может включать одну или более стадий скрещивания растений.

После внесения мутации можно провести скрининг для идентификации мутаций, которые обеспечивают возникновение генов с преждевременными стоп-кодонами или иным образом нефункциональных генов. После внесения мутации можно провести скрининг для идентификации мутаций, которые обеспечивают возникновение функциональных генов, которые способны экспрессироваться на повышенных или пониженных уровнях. Скрининг в отношении мутантных вариантов можно выполнять с помощью секвенирования, или путем применения одного или более зондов или праймеров, специфичных для данного гена или полипептида. В полинуклеотидах можно также обеспечивать возникновение конкретных мутаций, которые могут в результате приводить к модулированию экспрессии гена, модулированию стабильности мРНК или модулированию стабильности полипептида. В данном документе такие растения называются «не встречающимися в природе» или «мутантными» растениями. Как правило, мутантные или не встречающиеся в природе растения содержат по меньшей мере часть чужеродного, или синтетического, или созданного человеком нуклеотида (например, ДНК или РНК), которая не присутствовала в растении до проведения с ним манипуляций. Чужеродный нуклеотид может представлять собой один нуклеотид, два или более нуклеотидов, два или более смежных нуклеотидов или два или более несмежных нуклеотидов, как, например, по меньшей мере 10, 20, 30, 40, 50,100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400 или 1500 или больше смежных или несмежных нуклеотидов.

Трансгеника и редактирование генома

С целью модулировать экспрессию, или функцию, или активность одного или более полинуклеотидов или полипептидов, описанных в данном документе, можно применять специфичные в отношении последовательности полинуклеотиды, которые могут нарушать транскрипцию одного или более эндогенных генов; специфичные в отношении последовательности полинуклеотиды, которые могут нарушать трансляцию РНК-транскриптов (например, двунитевые РНК, siRNA, рибозимы); специфичные в отношении последовательности полинуклеотиды, которые могут нарушать стабильность одного или более полипептидов; специфичные в отношении последовательности полинуклеотиды, которые могут нарушать ферментативную функцию одного или более полипептидов или функцию связывания одного или более полипептидов в отношении субстратов или регуляторных полипептидов; антитела, которые проявляют специфичность в отношении одного или более полипептидов; низкомолекулярные соединения, которые могут нарушать стабильность одного или более полипептидов, или ферментативную функцию одного или более полипептидов, или функцию связывания одного или более полипептидов; полипептиды с «цинковыми пальцами», которые связывают один или более полинуклеотидов; и мегануклеазы, которые обладают функцией в отношении одного или более полинуклеотидов. Технологии редактирования генома хорошо известны в данной области техники и дополнительно обсуждаются ниже.

Нуклеазы с «цинковыми пальцами»

Полипептиды с «цинковыми пальцами» можно применять для модулирования экспрессии, или функции, или активности одного или более полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе. Применение нуклеаз с «цинковыми пальцами» описано в Nature Rev. Genet. (2010) 11 (9): 636-646).

e. Мегануклеазы

Мегануклеазы, например I-CreI, можно применять для модулирования экспрессии, или функции, или активности одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе. Применение мегануклеаз описано в Curr Gene Ther. (2011) Feb;11(1):11-27 и Int J Mol Sci. (2019) 20(16), 4045.

f. TALEN

Эффекторные нуклеазы, подобные активаторам транскрипции (TALEN), можно применять для модулирования экспрессии, или функции, или активности одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе. Применение TALEN описано в Nature Rev. Mol. Cell Biol. (2013) 14: 49-55 и Int J Mol Sci. (2019) 20(16), 4045.

g. CRISPR

Систему CRISPR можно применять для модулирования экспрессии, или функции, или активности одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, и это является предпочтительным способом. Эта технология описана, например, в Plant Methods (2016) 12:8; Front Plant Sci. (2016) 7: 506; Biotechnology Advances (2015) 33, 1, p41-52; Acta Pharmaceutica Sinica B (2017) 7, 3, p292-302; Curr. Op. in Plant Biol. (2017) 36, 1-8 и Int J Mol Sci (2019) 20(16), 4045. Как хорошо известно в данной области техники, система редактирования CRISPR как правило включает два компонента: CRISPR-ассоциированную эндонуклеазу (Cas) (например, Cas9) и направляющую РНК (gRNA). Cas образует двухнитевой разрыв ДНК в сайте генома, который определяется последовательностью молекулы gRNA, связанной с Cas. Место разрыва ДНК посредством Cas определяется уникальной последовательностью, связанной с ним gRNA. gRNA представляет собой специально разработанную последовательность РНК, которая распознает представляющий интерес участок целевой ДНК и направляет туда нуклеазу Cas для редактирования. Она состоит из двух частей: (i) tracrRNA, которая служит каркасом для связывания нуклеазы Cas; и (ii) crisprRNA (crRNA) - последовательность из 17-20 нуклеотидов, комплементарная целевой ДНК.Точный участок ДНК, подлежащий нацеливанию, будет зависеть от конкретного пути применения. Например, для обеспечения активации или подавления целевого полинуклеотида gRNA может быть нацелена на промотор, управляющий экспрессией целевого полинуклеотида. Способы конструирования gRNA хорошо известны в данной области техники, в том числе способы с использованием Chop Chop от Harvard.

Применение редактирования генома на основе Cas9 в арабидопсисе и табаке описано, например, в Methods Enzymol. (2014) 546:459-72 и Plant Physiol Biochem. (2018) 131:37-46. Технология CRISPR широко применяется в растениях (см., например, WO 2015/189693).

В дополнение к Cas9 были описаны другие РНК-направляемые нуклеазы для применения в системе CRISPR, в том числе: Casl, CaslB, Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas7, Cas8, CaslO, Cpfl, Csyl, Csy2, Csy3, Csel, Cse2, Cscl, Csc2, Csa5, Csn2, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Csm6, Cmrl, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, Csbl, Csb2, Csb3, Csxl7, Csxl4, CsxlO, Csxl6, CsaX, Csx3, Csxl, Csxl5, Csfl, Csf2, Csf3 и Csf4. В определенных вариантах осуществления применение Cas9 является предпочтительным.

В настоящем раскрытии дополнительно представлена система редактирования генома на основе CRISPR, содержащая РНК-направляемую нуклеазу и gRNA, где система редактирования генома на основе CRISPR модулирует активность одного или более полинуклеотидов, описанных в настоящем документе. В настоящем изобретении также предусмотрен способ расщепления одного или более полинуклеотидов в клетке растения, включающий введение gRNA и РНК-направляемой нуклеазы в клетку растения, где gRNA действует в сочетании с РНК-направляемой нуклеазой для создания разрыва нити в одном или более полинуклеотидах, описанных в данном документе. Также раскрыта конструкция CRISPR, содержащая: (i) полинуклеотид, кодирующий CRISPR-ассоциированную эндонуклеазу; и (ii) gRNA, содержащую полинуклеотидную последовательность (как правило из приблизительно 17-20 нуклеотидов), комплементарную ДНК полинуклеотида, описанного в данном документе, который подлежит нацеливанию.

h. Антисмысловая модификация

Технология применения антисмысловых олигонуклеотидов представляет собой еще один хорошо известный способ, который можно использовать для модулирования экспрессии или активности одного или более полипептидов NtINV или одного или более полипептидов NtINV и NtSUS. См., например, Gene (1988) 10;72(1-2):45-50.

i. Мобильные генетические элементы

В качестве альтернативы, нацеливание для инактивации в отношении генов можно осуществлять путем введения транспозонов (например, IS-элементов) в геномы представляющих интерес растений. См., например, Cytology and Genetics (2006) 40(4):68-81.

j. Рибозимы

В качестве альтернативы на полинуклеотиды NtINV или NtINV и NtSUS можно осуществлять нацеливание для обеспечения их инактивации путем введения рибозимов, полученных из ряда малых кольцевых РНК, которые способны к саморасщеплению и репликации в растениях. См., например, FEMS Microbiology Reviews (1999) 23, 3, 257-275.

5. Растения

Мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения могут содержать любую комбинацию одной или более модификаций (например, мутаций) в одном или более из NtINV или NtINV и NtSUS, одном или более из NtINV или NtINV и NtSUS, которые приводят к модулированию экспрессии, или функции, или активности этих полинуклеотидов или продуктов таких полинуклеотидов. Например, мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения могут иметь одну модификацию в одном NtINV или в одном NtINV и в одном полинуклеотиде или полипептиде NtSUS; несколько модификаций в одном NtINV или одном NtINV и одном полинуклеотиде или полипептиде NtSUS; одну модификацию в двух или более, или трех или более, или четырех или более полинуклеотидах или полипептидах NtINV или NtINV и NtSUS; или несколько модификаций в двух или более или трех или более или четырех или более полинуклеотидах или полипептидах NtINV или NtINV и NtSUS. В качестве дополнительного примера мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения могут содержать одну или более модификаций в конкретной части полинуклеотида(-ов) или полипептида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, например в участке NtINV или NtINV и NtSUS, который кодирует активный сайт полипептида NtINV или NtSUS или его часть. В качестве дополнительного примера мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения могут содержать одну или более модификаций в участке за пределами одного или более полинуклеотида(-ов) или полипептида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, например в участке, расположенном выше или ниже полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, который он регулирует, при условии, что они модулируют функцию или экспрессию полипептида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS. Элементы, расположенные выше по последовательности, могут включать промоторы, энхансеры или факторы транскрипции. Некоторые элементы, такие как энхансеры, могут располагаться выше по последовательности или ниже по последовательности от гена, который они регулируют. Элемент(-ы) не обязательно расположен рядом с геном, который он регулирует, так как было обнаружено, что некоторые элементы расположены на расстоянии в несколько тысяч пар оснований выше по последовательности или ниже по последовательности от гена, который они регулируют. Мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения могут иметь одну или более модификаций, расположенных в первых 100 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 200 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 300 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 400 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 500 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 600 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 700 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 800 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 900 нуклеотидах от гена(-oв), в первой 1000 нуклеотидов от гена(-oв), в первых 1100 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 1200 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 1300 нуклеотидах от гена(-oв), в первых 1400 нуклеотидах от гена(-oв) или в первых 1500 нуклеотидах от гена(-oв). Мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения могут иметь одну или более модификаций, расположенных в первом, втором, третьем, четвертом, пятом, шестом, седьмом, восьмом, девятом, десятом, одиннадцатом, двенадцатом, тринадцатом, четырнадцатом или пятнадцатом наборе из 100 нуклеотидов гена(-oв) или их комбинации. Раскрыты мутантные или не встречающиеся в природе растения или клетки растения (например, мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения или клетки растения и т. п., как описано в данном документе), содержащие варианты мутантного полипептида.

В одном варианте осуществления семена растений подвергают мутагенезу и затем выращивают из них мутантные растения первого поколения. Затем растениям первого поколения дают самоопылиться и из семян от растений первого поколения выращивают растения второго поколения, которые затем проверяют на наличие мутаций в их локусах. Не смотря на то, что подвергнутый мутации растительный материал можно подвергнуть скринингу на наличие мутаций, преимуществом скрининга растений второго поколения является то, что все соматические мутации соответствуют мутациям в зародышевых линиях. Специалисту в данной области техники будет понятно, что различный растительный материал, в том числе без ограничения семена, пыльцу, ткань растения или клетки растения, можно подвергнуть мутагенезу для создания мутантных растений. Однако тип растительного материала, подвергнутого мутагенезу, может иметь значение, когда полинуклеотид растения подвергают скринингу на наличие мутаций. Например, если пыльцу подвергают мутагенезу до опыления не подвергнутого мутагенезу растения, из семян, полученных при этом опылении, выращивают растения первого поколения. Каждая клетка растений первого поколения будет содержать мутации, возникшие в пыльце; таким образом, эти растения первого поколения можно затем подвергнуть скринингу на наличие мутаций вместо того, чтобы ждать появления второго поколения.

6. Получение модифицированных растений, скрининг и скрещивание

Полинуклеотиды NtINV или NtINV и NtSUS, полученные из отдельных растений, клеток растения или растительного материала, можно необязательно объединить, чтобы ускорить скрининг в отношении мутаций в популяции растений, происходящих из подвергнутых мутагенезу ткани, клеток растения или растительного материала. Можно проверить одно или более следующих поколений растений, клеток растения или растительного материала. Размер необязательно объединенной группы зависит от чувствительности применяемого способа скрининга.

После необязательного объединения образцов, их можно подвергнуть анализу с помощью методик полинуклеотид-специфичной амплификации, таких как ПЦР. Любой один или более праймеров или зондов, специфичных в отношении гена или последовательностей, непосредственно примыкающих к гену, можно применять для амплификации последовательностей в пределах необязательно объединенного образца. Предпочтительно для амплификации участков локуса, в которых с наибольшей вероятностью возникают полезные мутации, разрабатывают один или более праймеров или зондов. Наиболее предпочтительно праймер разрабатывают для выявления мутаций в участках полинуклеотида. Дополнительно, предпочтительным для праймера(-ов) и зонда(-ов) было бы обеспечить избегание известных полиморфных сайтов для облегчения скрининга точечных мутаций. Для облегчения выявления продуктов амплификации один или более праймеров или зондов можно метить с применением любого общепринятого способа введения метки. Праймер(-ы) или зонд(-ы) можно разрабатывать на основе последовательностей, описанных в данном документе, с помощью способов, которые хорошо известны в данной области техники.

Для облегчения выявления продуктов амплификации праймер(-ы) или зонд(-ы) можно метить с применением любого общепринятого способа внесения метки. Их можно разрабатывать на основе последовательностей, описанных в данном документе, с помощью способов, которые хорошо известны в данной области техники.

Полиморфизмы можно идентифицировать с помощью средств, известных в данной области техники, и некоторых из описанных в литературе.

В некоторых вариантах осуществления растение можно регенерировать или вырастить из растения, ткани растения или клетки растения. Можно применять любые подходящие способы регенерации или выращивания растения из клетки растения или ткани растения, такие как без ограничения культивирование тканей или регенерация из протопластов. Предпочтительно растения можно регенерировать путем выращивания трансформированных клеток растения на среде для индукции образования каллюса, среде для индукции образования побегов или среде для индукции образования корней. См., например, McCormick et al., Plant Cell Reports 5:81-84 (1986). Затем данные растения можно выращивать и либо опылять их с помощью той же трансформированной линии, либо других линий и идентифицировать получаемый в результате гибрид, характеризующийся экспрессией требуемой фенотипической характеристики. Можно выращивать два или более поколений, чтобы убедиться, что экспрессия требуемой фенотипической характеристики стабильно поддерживается и наследуется, и затем собирать семена, чтобы убедиться, что экспрессия требуемой фенотипической характеристики была достигнута. Таким образом, выражение «трансформированные семена» относится к семенам, которые содержат нуклеотидную конструкцию, стабильно интегрированную в геном растения.

Соответственно, в дополнительном аспекте предусмотрен способ получения мутантного растения. Способ включает получение по меньшей мере одной клетки растения, содержащей ген NtINV или NtINV и NtSUS, кодирующий функциональный полинуклеотид, описанный в данном документе (или любую их комбинацию, описанную в данном документе). Далее эту по меньшей мере одну клетку растения обрабатывают в условиях, эффективных для модулирования функции полинуклеотида(-ов). По меньшей мере одну мутантную клетку растения затем размножают с получением мутантного растения, где мутантное растение характеризуется модулированными уровнями полипептида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе (или любой их комбинации, описанной в данном документе) по сравнению с таковыми в контрольных растениях. В одном варианте осуществления данного способа получения мутантного растения стадия обработки включает воздействие на по меньшей мере одну клетку химическим мутагенным средством, описанным выше, и в условиях, эффективных для получения по меньшей мере одной мутантной клетки растения. В другом варианте осуществления данного способа стадия обработки включает подвергание по меньшей мере одной клетки воздействию источника ионизирующего излучения в условиях, эффективных для получения по меньшей мере одной мутантной клетки растения. Термин «мутантное растение» включает мутантные растения, у которых генотип является модифицированным по сравнению с генотипом у контрольного растения, предпочтительно с помощью способов, отличных от способов генной инженерии и генетической модификации.

В определенных вариантах осуществления мутантное растение, клетка мутантного растения или мутантный растительный материал может содержать одну или более мутаций, которые встречаются в природе в другом растении, клетке растения или растительном материале и обеспечивают требуемый признак. Эту мутацию можно встроить (например, путем интрогрессии) в другое растение, клетку растения или растительный материал (например, растение, клетку растения или растительный материал с генетическим фоном, отличающимся от такового у растения, из которого происходит мутация) для обеспечения у них данного признака. Таким образом, в качестве примера, мутацию, которая встречается в природе в первом растении, можно ввести во второе растение, такое как второе растение с генетическим фоном, отличающимся от такового у первого растения. Таким образом, специалист в данной области техники может осуществлять поиск и идентифицировать растение, несущее в естественных условиях в своем геноме один или более мутантных аллелей генов, описанных в данном документе, которые обеспечивают желаемый признак. Мутантный аллель(-и), который встречается в природе, можно перенести во второе растение различными способами, включая селекцию, обратное скрещивание и интрогрессию с получением линий, сортов или гибридов, которые имеют одну или более мутаций в генах, описанных в данном документе. Та же методика также может быть применена для интрогрессии одной или более не встречающихся в природе мутации(-й) из первого растения во второе растение. Растения, демонстрирующие желаемый признак, можно отобрать из пула мутантных растений. Предпочтительно, отбор осуществляют с применением данных о полинуклеотиде, описанном в данном документе. Следовательно, можно осуществлять отбор по генетическому признаку по сравнению с контролем. Такой скрининговый подход может предусматривать применение общепринятых методик амплификации или гибридизации, обсуждаемых в данном документе. Таким образом, дополнительный аспект настоящего изобретения относится к способу идентификации мутантного растения, включающему стадии (a) получения образца, содержащего один или более полинуклеотидов из NtINV или NtINV и NtSUS из растения; и (b) определения последовательности полинуклеотида(-ов), где отличие в последовательности полинуклеотида(-ов) по сравнению с полинуклеотидом(-ами) контрольного растения указывает на то, что указанное растение представляет собой мутантное растение. В другом аспекте предусмотрен способ идентификации мутантного растения, которое накапливает повышенные или пониженные уровни редуцирующего(-их) сахара(-ов) по сравнению с контрольным растением, включающий стадии (a) получения образца из растения, подлежащего скринингу; (b) определения того, содержит ли указанный образец одну или более мутаций в одном или более полинуклеотидах NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе; и (c) определения уровня по меньшей мере одного редуцирующего сахара в указанном растении, предпочтительно глюкозы или фруктозы или их комбинации. Предпочтительно уровень по меньшей мере одного редуцирующего сахара определяют в подвергнутых сушке листьях. В другом аспекте предусмотрен способ получения мутантного растения, которое характеризуется повышенными или пониженными уровнями по меньшей мере одного редуцирующего сахара, предпочтительно глюкозы или фруктозы или их комбинации, по сравнению с контрольным растением, включающий стадии (a) получения образца из первого растения; (b) определения того, содержит ли указанный образец одну или более мутаций в одном или более полинуклеотидах NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, которые приводят к модулированным уровням по меньшей мере одного редуцирующего сахара; и (c) переноса одной или более мутаций во второе растение. Предпочтительно уровень по меньшей мере одного редуцирующего сахара определяют в подвергнутых сушке листьях. Мутацию(-и) можно перенести во второе растение с помощью различных способов, которые известны в данной области техники, например с помощью генной инженерии, манипуляции с генами, интрогрессии, селекции растений, обратного скрещивания и т. п. В одном варианте осуществления первое растение является встречающимся в природе растением. В одном варианте осуществления второе растение характеризуется генетическим фоном, отличающимся от такового у первого растения. В другом аспекте предусмотрен способ получения мутантного растения, которое характеризуется повышенными или пониженными уровнями по меньшей мере одного редуцирующего сахара, предпочтительно глюкозы или фруктозы или их комбинации, по сравнению с контрольным растением, включающий стадии (a) получения образца из первого растения; (b) определения того, содержит ли указанный образец одну или более мутаций в одном или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, которые приводят к модулированным уровням по меньшей мере одного редуцирующего сахара; и (c) интрогрессии одной или более мутаций во второе растение. Предпочтительно уровень по меньшей мере одного редуцирующего сахара определяют в подвергнутых сушке листьях. В одном варианте осуществления стадия интрогрессии включает селекцию растений, необязательно включая обратное скрещивание и т. п. В одном варианте осуществления первое растение является встречающимся в природе растением. В одном варианте осуществления второе растение характеризуется генетическим фоном, отличающимся от такового у первого растения. В одном варианте осуществления первое растение не является сортом или элитным сортом. В одном варианте осуществления второе растение представляет собой сорт или элитный сорт. Дополнительный аспект относится к мутантному растению (включая мутантное растение, являющееся сортом или элитным сортом), полученному или получаемому с помощью способов, описанных в данном документе. В определенных вариантах осуществления мутантное растение может содержать одну или более мутаций, локализованных только в конкретном участке растения, как например в пределах последовательности одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе. Согласно данному варианту осуществления остальная геномная последовательность мутантного растения будет такой же или практически такой же, как у растения до мутагенеза.

В определенных вариантах осуществления мутантные растения могут содержать одну или более мутаций, локализованных в более чем одном участке генома растения, как например в пределах последовательности одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, и в одном или более дополнительных участках генома. Согласно данному варианту осуществления остальная геномная последовательность мутантного растения не будет такой же или не будет практически такой же, как у растения до мутагенеза. В определенных вариантах осуществления мутантные растения могут не иметь одну или более мутаций в одном или более, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более экзонах полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или могут не иметь одну или более мутаций в одном или более, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более интронах полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или могут не иметь одну или более мутаций в промоторе полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или могут не иметь одну или более мутаций в 3’-нетранслируемом участке полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или могут не иметь одну или более мутаций в 5'-нетранслируемом участке полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или могут не иметь одну или более мутаций в кодирующем участке полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или могут не иметь одну или более мутаций в некодирующем участке полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе; или любую комбинацию двух или более, трех или более, четырех или более, пяти или более, или шести или более их частей.

В дополнительном аспекте предусмотрен способ идентификации растения, клетки растения или растительного материала, содержащих мутацию в гене, кодирующем полинуклеотид NtINV или NtINV и NtSUS, описанный в данном документе, включающий (a) осуществление мутагенеза в отношении растения, клетки растения или растительного материала; (b) получение образца из указанного растения, клетки растения или растительного материала или их потомков; и (c) определение полинуклеотидной последовательности гена(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, или его(их) варианта, или фрагмента, где отличие в указанной последовательности свидетельствует о наличии одной или более мутаций в ней. Этот способ также обеспечивает отбор растений, имеющих мутацию(-и), которая(-ые) встречается(-ются) в участках генома, которые влияют на экспрессию гена NtINV или NtINV и NtSUS в клетке растения, таких как сайт инициации транскрипции, стартовый кодон, участок интрона, граница экзон-интрон, терминатор или стоп-кодон.

7. Семейства растений, виды, сорта, семена и культура тканей

Растения, подходящие для применения в настоящем изобретении, включают однодольные и двудольные растения и системы клеток растений и могут включать представителей родов Camellia, Cannabis или Nicotiana. Подходящие виды Camellia и Cannabis включают Camellia sinensis (чай), Cannabis sativa, Cannabis indica и Cannabis ruderalis.

Различные варианты осуществления относятся к мутантному табаку, не встречающемуся в природе табаку или трансгенным растениям табака или клеткам растения табака и могут применяться в отношении любых видов из рода Nicotiana, в том числе N. rustica и N. tabacum (например, LA B21, LN KY171, TI 1406, Basma, Galpao, Perique, Beinhart 1000-1 и Petico). Другие виды включают N. acaulis, N. acuminata, N. africana, N. alata, N. ameghinoi, N. amplexicaulis, N. arentsii, N. attenuata, N. azambujae, N. benavidesii, N. benthamiana, N. bigelovii, N. bonariensis, N. cavicola, N. clevelandii, N. cordifolia, N. corymbosa, N. debneyi, N. excelsior, N. forgetiana, N. fragrans, N. glauca, N. glutinosa, N. goodspeedii, N. gossei, N. hybrida, N. ingulba, N. kawakamii, N. knightiana, N. langsdorffii, N. linearis, N. longiflora, N. maritima, N. megalosiphon, N. miersii, N. noctiflora, N. nudicaulis, N. obtusifolia, N. occidentalis, N. occidentalis subsp. hesperis, N. otophora, N. paniculata, N. pauciflora, N. petunioides, N. plumbaginifolia, N. quadrivalvis, N. raimondii, N. repanda, N. rosulata, N. rosulata subsp. ingulba, N. rotundifolia, N. setchellii, N. simulans, N. solanifolia, N. spegazzinii, N. stocktonii, N. suaveolens, N. sylvestris, N. thyrsiflora, N. tomentosa, N. tomentosiformis, N. trigonophylla, N. umbratica, N. undulata, N. velutina, N. wigandioides и N. × sanderae. В одном варианте осуществления растение представляет собой N. tabacum.

Применение сортов табака и элитных сортов табака также предусмотрено в данном документе. Трансгенное, не встречающееся в природе или мутантное растение, следовательно, может представлять собой сорт табака или элитный культивар табака, которые содержат один или более трансгенов или одну или более генетических мутаций или их комбинацию. Генетическая мутация(-и) (например, один или более полиморфизмов) могут представлять собой мутации, которые не существуют в природе в отдельном сорте табака или культиваре табака (например, элитном культиваре табака), или может представлять собой генетическую мутацию(-и), которая(-ые) существует(-ют) в природе при условии, что мутация не существует в природе в отдельном сорте табака или культиваре табака (например, в элитном культиваре табака).

В частности, применимые сорта Nicotiana tabacum включают табак типа Берлей, табак темного типа, табак трубоогневой сушки и табак восточного типа. Неограничивающими примерами сортов или культиваров являются: BD 64, CC 101, CC 200, CC 27, CC 301, CC 400, CC 500, CC 600, CC 700, CC 800, CC 900, Coker 176, Coker 319, Coker 371 Gold, Coker 48, CD 263, DF911, DT 538 LC табак Galpao, GL 26H, GL 350, GL 600, GL 737, GL 939, GL 973, HB 04P, HB 04P LC, HB3307PLC, гибрид 403LC, гибрид 404LC, гибрид 501 LC, K 149, K 326, K 346, K 358, K394, K 399, K 730, KDH 959, KT 200, KT204LC, KY10, KY14, KY 160, KY 17, KY 171, KY 907, KY907LC, KY14xL8 LC, Little Crittenden, McNair 373, McNair 944, msKY 14xL8, Narrow Leaf Madole, Narrow Leaf Madole LC, NBH 98, N-126, N-777LC, N-7371LC, NC 100, NC 102, NC 2000, NC 291, NC 297, NC 299, NC 3, NC 4, NC 5, NC 6, NC7, NC 606, NC 71, NC 72, NC 810, NC BH 129, NC 2002, Neal Smith Madole, OXFORD 207, PD 7302 LC, PD 7309 LC, PD 7312 LC, табак «Перик», PVH03, PVH09, PVH19, PVH50, PVH51, R 610, R 630, R 7-11, R 7-12, RG 17, RG 81, RG H51, RGH 4, RGH 51, RS 1410, Speight 168, Speight 172, Speight 179, Speight 210, Speight 220, Speight 225, Speight 227, Speight 234, Speight G-28, Speight G-70, Speight H-6, Speight H20, Speight NF3, TI 1406, TI 1269, TN 86, TN86LC, TN 90, TN 97, TN97LC, TN D94, TN D950, TR (Tom Rosson) Madole, VA 309, VA359, AA 37-1, B13P, Xanthi (Mitchell-Mor), Bel-W3, 79-615, Samsun Holmes NN, KTRDC номер 2 гибрид 49, Burley 21, KY8959, KY9, MD 609, PG01, PG04, PO1, PO2, PO3, RG11, RG 8, VA509, AS44, Banket A1, Basma Drama B84/31, Basma I Zichna ZP4/B, Basma Xanthi BX 2A, Batek, Besuki Jember, C104, Coker 347, Criollo Misionero, Delcrest, Djebel 81, DVH 405, Galpão Comum, HB04P, Hicks Broadleaf, Kabakulak Elassona, Kutsage E1, LA BU 21, NC 2326, NC 297, PVH 2110, Red Russian, Samsun, Saplak, Simmaba, Talgar 28, Wislica, Yayaldag, Prilep HC-72, Prilep P23, Prilep PB 156/1, Prilep P12-2/1, Yaka JK-48, Yaka JB 125/3, TI-1068, KDH-960, TI-1070, TW136, Basma, TKF 4028, L8, TKF 2002, GR141, Basma xanthi, GR149, GR153, Petit Havana. Также предусмотрены подсорта вышеуказанного с низким уровнем превращения никотина в норникотин, даже если они специально не указаны в данном документе.

Варианты осуществления также относятся к композициям и способам получения мутантных растений, не встречающихся в природе растений, гибридных растений или трансгенных растений, которые были модифицированы для модулирования экспрессии или функции одного или более из полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе (или любой их комбинации, описанной в данном документе). Преимущественно, полученные мутантные растения, не встречающиеся в природе растения, гибридные растения или трансгенные растения могут быть сходными по общему внешнему виду с контрольными растениями или практически такими же. Различные фенотипические характеристики, такие как степень зрелости, количество листьев на растении, высоту стебля, угол врастания листьев, размер листа (ширина и длина), расстояние междоузлия и соотношение листовая пластина-главная жилка можно оценить путем полевых наблюдений.

Один аспект относится к семени мутантного растения, не встречающегося в природе растения, гибридного растения или трансгенного растения, описанного в данном документе. Предпочтительно, семя представляют собой семя табака. Дополнительный аспект относится к пыльце или семяпочке мутантного растения, не встречающегося в природе растения, гибридного растения или трансгенного растения, описанного в данном документе. Кроме того, предусмотрено мутантное растение, не встречающееся в природе растение, гибридное растение или трансгенное растение, описанное в данном документе, которое дополнительно содержит полинуклеотид, обеспечивающий развитие мужской стерильности.

Также представлена культура тканей из регенерируемых клеток мутантного растения, не встречающегося в природе растения, гибридного растения или трансгенного растения или его части, как описано в данном документе, при этом из культуры регенерируют растения, способные экспрессировать все морфологические и физиологические характеристики родителя. Регенерируемые клетки включают клетки из листьев, пыльцы, зародышей, семядолей, гипокотилей, корней, кончиков корней, пыльников, цветков и их части, семяпочек, побегов, стеблей, черешков, сердцевины и семенных коробочек, или каллюса, или протопластов, полученных из них.

Растительный материал, описанный в данном документе, может представлять собой подвергнутый сушке табачный материал, как например подвергнутый сушке табачный материал сорта Вирджиния или восточного типа. Подвергнутый сушке табачный материал может представлять собой табачный материал трубоогневой сушки, солнечной сушки или воздушной сушки.

Рекомендация CORESTA в отношении сушки табака описана в справочнике CORESTA №°17, апрель 2016 г., Sustainability in Leaf Tobacco Production (Принципы устойчивого развития в производстве листового табака).

8. Модулирование содержания сахаров

Мутантные, трансгенные или не встречающиеся в природе растения или их части по настоящему изобретению демонстрируют модулированные уровни по меньшей мере одного редуцирующего сахара, как например глюкоза или фруктоза или их комбинация, в растительном материале, например, в подвергнутых сушке листьях. В определенных вариантах осуществления при понижении уровней глюкозы или фруктозы или их комбинации уровни сахарозы могут повышаться.

Предпочтительно модулированные уровни по меньшей мере одного редуцирующего сахара наблюдаются в по меньшей мере подвергнутых сушке листьях, предпочтительно в полностью высушенных листьях. Предпочтительно подвергнутые сушке листья получают из листьев, полученных из средней части на растении. Предпочтительно, влияние на фенотип отсутствует или незначительно, как например визуальная пригодность растения по сравнению с контрольным растением. Предпочтительно варьирование в отношении общего содержания свободных аминокислот по сравнению с контрольным растением отсутствует или является незначительным. В определенных вариантах осуществления можно модулировать уровни акриламида в дыме, полученном при нагреве подвергнутых сушке листьев или продукта, полученного из них.

Дополнительный аспект относится к мутантным, не встречающимся в природе или трансгенным растению или клетке, как описано в настоящем документе, которые характеризуются пониженными на по меньшей мере 5% уровнями по меньшей мере одного редуцирующего сахара по сравнению с контрольным растением, в котором экспрессия или функция указанного(-ых) полипептида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS не была модулирована.

В определенных вариантах осуществления уровни глюкозы или фруктозы или их комбинации снижаются на приблизительно 30% или больше, как например приблизительно 40%, или приблизительно 50%, или приблизительно 60%, или приблизительно 70%, или приблизительно 80%, или приблизительно 90% или больше, по сравнению с контрольным растением.

В определенных вариантах осуществления уровни глюкозы или фруктозы или их комбинации снижаются на приблизительно 40% или больше, как например приблизительно 50%, или приблизительно 60%, или приблизительно 70%, или приблизительно 80%, или приблизительно 90% или больше, по сравнению с контрольным растением.

В определенных вариантах осуществления уровень глюкозы снижается на по меньшей мере 60% или больше или на по меньшей мере 63% или больше, а уровень фруктозы снижается на по меньшей мере приблизительно 40% или больше или на по меньшей мере 63% или больше по сравнению с контрольным растением.

В определенных вариантах осуществления уровень глюкозы снижается на по меньшей мере 60% или больше или на по меньшей мере 63% или больше, и уровень фруктозы снижается на по меньшей мере приблизительно 40% или больше или на по меньшей мере 63% или больше, и уровень сахарозы повышается в по меньшей мере 2 раза, в по меньшей мере 3 раза или в по меньшей мере 4 раза по сравнению с контрольным растением.

В определенных вариантах осуществления уровни глюкозы и фруктозы повышаются по сравнению с контрольным растением.

В определенных вариантах осуществления уровень глюкозы повышается, уровень фруктозы повышается, а уровень сахарозы понижается по сравнению с контрольным растением.

Повышение может составлять приблизительно 25%, 50%, 100%, 250% или 500% или больше по сравнению с контрольным растением. Понижение может составлять приблизительно 25%, 50% или 75% или больше по сравнению с контрольным растением.

Еще один дополнительный аспект относится к подвергнутому сушке растительному материалу, такому как подвергнутый сушке лист или подвергнутый сушке табак, полученному или получаемому из мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растения или клетки, где экспрессия одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, или функция полипептида NtINV или NtINV и NtSUS, кодируемого ими, являются модулированными, и где уровень глюкозы, фруктозы и необязательно сахарозы модулирован, как обсуждалось выше, по сравнению с контрольным растением.

Варианты осуществления также направлены на композиции и способы для получения мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений или клеток растения, которые были модифицированы для модулирования экспрессии или функции одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS или полипептидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, что может в результате приводить к получению растений, или компонентов растения (например, листьев, таких как подвергнутые сушке листья), или клеток растения с модулированным содержанием глюкозы, фруктозы и необязательно сахарозы.

В одном варианте осуществления фенотип мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения является практически таким же, как у контрольного растения. В одном варианте осуществления вес листьев у мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения является практически таким же, как у контрольного растения. В одном варианте осуществления количество листьев у мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения является практически таким же, как у контрольного растения. В одном варианте осуществления вес листьев и количество листьев у мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения является практически таким же, как у контрольного растения. В одном варианте осуществления высота стебля у мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений является практически такой же, как у контрольных растений, через, например, один, два или три или более месяцев после пересадки в поле или через 10, 20, 30 или 36 или более дней после обрезания верхушек. Например, высота стебля у мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений не меньше, чем высота стебля у контрольных растений. В другом варианте осуществления содержание хлорофилла у мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений является практически таким же, как у контрольных растений. В другом варианте осуществления высота стебля у мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений является практически такой же, как у контрольных растений, и содержание хлорофилла у мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений является практически таким же, как у контрольных растений. В других вариантах осуществления размер или форма или количество или окраска листьев у мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений являются практически такими же, как у контрольных растений.

В другом аспекте предусмотрен способ модулирования количества по меньшей мере одного редуцирующего сахара в по меньшей мере части растения (например, листьях, таких как подвергнутые сушке листья, или в табаке), включающий стадии (i) модулирования экспрессии или функции одного или более из полипептидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе (или любой их комбинаций, описанной в данном документе), при этом предпочтительно полипептид(-ы) NtINV или NtINV и NtSUS кодируется(-ются) соответствующим(-и) полинуклеотидом(-ами) NtINV или NtINV и NtSUS, описанными в данном документе; (ii) измерения уровня по меньшей мере одного редуцирующего сахара (например, глюкозы и фруктозы) и необязательно по меньшей мере одного нередуцирующего сахара, такого как сахароза, в по меньшей мере части (например, листьях, таких как подвергнутые сушке листья, или в табаке, или в дыме) мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения, полученного на стадии (i); и (iii) идентификации мутантного, не встречающегося в природе или трансгенного растения, в котором уровень по меньшей мере одного редуцирующего сахара и необязательно по меньшей мере одного нередуцирующего сахара был модулирован по сравнению с контрольным растением.

В другом аспекте предусмотрен способ модулирования количества по меньшей мере одного редуцирующего сахара в по меньшей мере части подвергнутого сушке растительного материала, такого как подвергнутый сушке лист, включающий стадии (i) модулирования экспрессии или функции одного или более из полипептидов NtINV или NtINV и NtSUS (или любой их комбинации, описанной в данном документе), при этом предпочтительно полипептид(-ы) NtINV или NtINV и NtSUS кодируется(-ются) соответствующим(-и) полинуклеотидом(-ами) NtINV или NtINV и NtSUS, описанными в данном документе; (ii) сбора растительного материала, такого как один или более листьев, и сушки в течение некоторого периода времени; (iii) измерения уровня по меньшей мере одного редуцирующего сахара (например, глюкозы или фруктозы) и необязательно по меньшей мере одного нередуцирующего сахара, такого как сахароза, в по меньшей мере части подвергнутого сушке растительного материала, полученного на стадии (ii) или во время стадии (ii); и (iv) идентификации подвергнутого сушке растительного материала, в котором уровень по меньшей мере одного редуцирующего сахара и необязательно по меньшей мере одного нередуцирующего сахара был модулирован по сравнению с контрольным растением.

Повышение экспрессии по сравнению с контролем может составлять от приблизительно 5% до приблизительно 100%, или повышение составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или 100% или больше, как например 200%, 300%, 500%, 1000% или больше, что включает повышение транскрипционной функции, или уровня экспрессии полинуклеотида NtINV или NtINV и NtSUS, или уровня экспрессии полипептида NtINV или NtINV и NtSUS, или их комбинацию.

Повышение функции или активности по сравнению с контролем может составлять от приблизительно 5% до приблизительно 100%, или повышение составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или 100% или больше, как например 200%, 300%, 500%, 1000% или больше, что включает повышение транскрипционной функции, или уровня экспрессии полинуклеотида NtINV или NtINV и NtSUS, или уровня экспрессии полипептида NtINV или NtINV и NtSUS, или их комбинации.

Снижение уровня экспрессии по сравнению с контролем может составлять от приблизительно 5% до приблизительно 100%, или снижение составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или 100%, что включает снижение транскрипционной функции, или уровня экспрессии полинуклеотида NtINV или NtINV и NtSUS, или уровня экспрессии полипептида NtINV или NtINV и NtSUS, или их комбинацию.

Снижение функции или активности по сравнению с контролем может составлять от приблизительно 5% до приблизительно 100%, или снижение составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 75%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или 100%, что включает снижение транскрипционной функции или уровня экспрессии полинуклеотида NtINV или NtINV и NtSUS, или уровня экспрессии полипептида NtINV или NtINV и NtSUS, или их комбинацию.

Полинуклеотиды и рекомбинантные конструкции, описанные в данном документе, можно применять для модулирования экспрессии, или функции, или активности полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS или полипептидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе, в представляющем интерес виде растений, предпочтительно в табаке.

Целый ряд способов на основе полинуклеотидов можно применять для повышения уровня экспрессии генов в растениях и клетках растений. В качестве примера, можно получать конструкцию, вектор или вектор экспрессии, совместимые с подлежащим трансформации растением, которые содержат представляющий интерес ген вместе с расположенным выше по последовательности промотором, способным к обеспечению сверхэкспрессии гена в растении или клетке растения. Иллюстративные промоторы описаны в данном документе. После трансформации и при выращивании в подходящих условиях промотор может управлять экспрессией для модулирования уровней NtINV или NtINV и NtSUS в растении или в его конкретной ткани. В одном иллюстративном варианте осуществления создают вектор, несущий один или более полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе (или любую их комбинацию, как описано в данном документе), для обеспечения сверхэкспрессии гена в растении или клетке растения. Вектор несет подходящий промотор, такой как промотор 35S вируса мозаики цветной капусты CaMV, расположенный выше по последовательности от трансгена, который запускает его конститутивную экспрессию во всех тканях растения. Вектор также несет ген устойчивости к антибиотику с целью обеспечения возможности отбора трансформированных каллюсов и линий клеток.

Экспрессию последовательностей с промоторов можно усилить посредством включения последовательностей, обеспечивающих контроль экспрессии, которые хорошо известны в данной области техники. Отдельно следует указать сигналы, связанные со старением, и сигналы, которые активны во время процедуры сушки.

Различные варианты осуществления, таким образом, направлены на способы модулирования уровня экспрессии одного или более полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе (или любой их комбинации, как описано в данном документе), путем интеграции нескольких копий полинуклеотида NtINV или NtINV и NtSUS в геном растения, при этом данные способы включают трансформацию клетки растения-хозяина вектором экспрессии, который содержит промотор, функционально связанный с одним или более полинуклеотидами NtINV или NtINV и NtSUS, описанными в данном документе. Полипептид, кодируемый рекомбинантным полинуклеотидом, может являться нативным полипептидом или может являться гетерологичным по отношению к клетке.

В одном варианте осуществления растение для применения по настоящему изобретению представляет собой растение, которое подвергнуто трубоогневой сушке, поскольку такие растения характеризуются высоким содержанием редуцирующих сахаров (при выращивании в поле, более чем приблизительно 14% от сухого веса в конце сушки). Мутантные, трансгенные или не встречающиеся в природе растения или их части, которые подвергнуты трубоогневой сушке, могут характеризоваться содержанием редуцирующих сахаров, которое составляет менее приблизительно 14% сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, например, менее приблизительно 10% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, или менее приблизительно 5% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, или менее приблизительно 1% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки.

В одном варианте осуществления растение для применения по настоящему изобретению представляет собой растение, которое подвергнуто солнечной сушке (поскольку такие растения характеризуются содержанием редуцирующих сахаров, превышающим, при выращивании в поле, приблизительно 6,8% от сухого веса в конце сушки). Мутантные, трансгенные или не встречающиеся в природе растения или их части, которые подвергнуты солнечной сушке, могут характеризоваться содержанием редуцирующих сахаров, составляющим менее приблизительно 5% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, например, менее приблизительно 2,5% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, или менее приблизительно 1% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки.

В одном варианте осуществления растение для применения по настоящему изобретению представляет собой растение, подвергнутое воздушной сушке. Такие растения характеризуются содержанием редуцирующих сахаров, составляющим более приблизительно 1,7% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки. Мутантные, трансгенные или не встречающиеся в природе растения или их части, которые подвергнуты солнечной сушки, могут характеризоваться содержанием редуцирующих сахаров, составляющим менее приблизительно 1,5% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, например, менее приблизительно 1% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки, или менее приблизительно 0,5% от сухого веса при выращивании в поле в конце сушки.

В определенных вариантах осуществления предпочтительно применение растений, подвергнутых трубоогневой сушке или солнечной сушке.

9. Селекция

Растение, несущее мутантный аллель одного или более полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, описанных в данном документе (или любой их комбинации, описанной в данном документе), можно применять в программе селекции растений для создания применимых линий, сортов и гибридов. В частности, мутантный аллель может быть интрогрессирован в коммерчески значимые сорта, описанные выше. Таким образом, предложены способы селекции растений, которые предусматривают скрещивание мутантного растения, не встречающегося в природе растения или трансгенного растения, как описано в данном документе, с растением, характеризующимся иными генетическими особенностями. Способ может дополнительно включать скрещивание растения-потомка с другим растением и необязательно повторение скрещивания до тех пор, пока не будет получено потомка с необходимыми генетическими признаками или генетическим фоном. Одной целью, для которой служат такие способы селекции, является введение необходимого генетического признака в другие сорта, селекционные линии, гибриды или культивары, особенно те, которые представляют коммерческий интерес. Другой целью является облегчение накопления генетических модификаций различных генов в отдельных сортах, линиях, гибридах или культиварах растений. Предусмотрены внутривидовые, а также межвидовые скрещивания. Растения-потомки, которые возникают в результате таких скрещиваний, также называемые селекционными линиями, являются примерами не встречающихся в природе растений по настоящему изобретению.

В одном варианте осуществления предусмотрен способ получения не встречающегося в природе растения, включающий: (a) скрещивание мутантного или трансгенного растения со вторым растением с получением семени растения табака-потомка; (b) выращивание семени растения табака-потомка в пригодных для роста растений условиях с получением не встречающегося в природе растения. Способ может дополнительно включать: (c) скрещивание предыдущего поколения не встречающегося в природе растения с самим собою или с другим растением с получением семени растения табака-потомка; (d) выращивание семени растения табака-потомка из стадии (c) в пригодных для роста растений условиях с получением дополнительных не встречающихся в природе растений; и (e) повторение стадий скрещивания и выращивания (c) и (d) несколько раз с получением следующих поколений не встречающихся в природе растений. Способ может необязательно предусматривать перед стадией (a) стадию получения родительского растения, которое содержит охарактеризованные генетические особенности и которое не идентично мутантному или трансгенному растению. В некоторых вариантах осуществления в зависимости от программы селекции стадии скрещивания и выращивания повторяют от 0 до 2 раз, от 0 до 3 раз, от 0 до 4 раз, от 0 до 5 раз, от 0 до 6 раз, от 0 до 7 раз, от 0 до 8 раз, от 0 до 9 раз или от 0 до 10 раз для получения поколений не встречающихся в природе растений. Обратное скрещивание является примером такого способа, в котором потомка скрещивают с одним из его родителей или с другим растением, генетически сходным с его родителем, для получения растения-потомка в следующем поколении, которое имеет генетические особенности, более близкие к одному из родителей. Методики селекции растений, в частности селекции растений, хорошо известны и могут применяться в способах по настоящему изобретению. В настоящем изобретении дополнительно предложены не встречающиеся в природе растения, полученные с помощью данных способов. Определенные варианты осуществления исключают стадию отбора растения.

В некоторых вариантах осуществления способов, описанных в данном документе, линии, полученные в результате селекции и скрининга на наличие вариантных генов, оценивают в поле с применением стандартных полевых процедур. Предусмотрены контрольные генотипы, в том числе генотип исходного не подвергнутого мутагенезу родителя, и места посадки растений расположены в поле согласно рандомизированному полноблочному плану или согласно другому соответствующему планированию поля. Для табака используют стандартные агрономические методики, например, табак собирают, взвешивают и отбирают образцы для химического и другого общепринятого тестирования до и во время сушки. Статистический анализ данных выполняют для подтверждения сходства отобранных линий с родительской линией. Цитогенетические анализы отобранных растений необязательно выполняют для подтверждения взаимосвязей набора хромосом и конъюгации хромосом.

ДНК-фингерпринтинг, однонуклеотидный полиморфизм, микросателлитные маркеры или подобные технологии можно применять в программе селекции с отбором с помощью маркера (MAS) для переноса или разведения мутантных аллелей гена в других растениях табака, как описано в данном документе. Например, селекционер может создать расщепляющиеся популяции при гибридизации генотипа, содержащего мутантный аллель, с необходимым с агрономической точки зрения генотипом. Растения из F2 или поколений, полученных в результате обратного скрещивания, можно подвергнуть скринингу с применением маркера, полученного из геномной последовательности или ее фрагмента, с применением одной из методик, перечисленных в данном документе. Растения, идентифицированные как обладающие мутантным аллелем, можно подвергнуть обратному скрещиванию или самоопылению для создания второй популяции, подлежащей скринингу. В зависимости от предполагаемого способа наследования или применяемой технологии MAS для отобранных растений может быть необходимым самоопыление перед каждым циклом обратного скрещивания для облегчения обнаружения необходимых отдельных растений. Обратное скрещивание или другую процедуру селекции можно повторять до тех пор, пока необходимый фенотип рекуррентного родителя не восстановится.

Согласно настоящему изобретению в программе селекции успешные скрещивания дают растения F1, которые являются фертильными. Отобранные растения F1 можно скрещивать с одним из родителей, и для растений первого поколения, полученного в результате обратного скрещивания, можно обеспечивать самоопыление с получением популяции, которую снова подвергают скринингу в отношении экспрессии вариантного гена (например, нулевой версии гена). Процесс обратного скрещивания, самоопыления и скрининга повторяют, например, по меньшей мере 4 раза до тех пор, пока при окончательном скрининге не получат растение, которое является фертильным и в достаточной степени подобным рекуррентному родителю. Это растение, при необходимости, самоопыляют и затем потомство снова подвергают скринингу, чтобы подтвердить, что растение демонстрирует экспрессию вариантного гена. В некоторых вариантах осуществления популяцию растений в поколении F2 подвергают скринингу на наличие экспрессии вариантного гена, например растение, которое не экспрессирует полипептид из-за отсутствия гена, идентифицируют согласно стандартным способам, например с помощью методики ПЦР с применением праймеров, созданных на основе информации о последовательности полинуклеотидов для полинуклеотида(-ов), описанного в данном документе (или любой их комбинации, описанной в данном документе).

Гибридные сорта табака можно получить путем предотвращения самоопыления женских родительских растений (то есть родительских форм) первого сорта, позволяя пыльце с мужских родительских растений второго сорта оплодотворить женские родительские растения и обеспечивая образование гибридных семян F1 на женских растениях. Самоопыление женских растений можно предотвратить путем кастрации цветков на ранней стадии развития цветка. В качестве альтернативы, образование пыльцы на женских родительских растениях можно предотвратить, используя какую-либо форму мужской стерильности. Например, мужскую стерильность можно обеспечить посредством цитоплазматической мужской стерильности (CMS) или трансгенной мужской стерильности, где трансген подавляет микроспорогенез или образование пыльцы или вызывает самонесовместимость. Женские родительские растения, содержащие CMS, являются особенно применимы. В вариантах осуществления, в которых женские родительские растения характеризуются CMS, пыльцу собирают с мужских фертильных растений и наносят вручную на рыльца женских родительских растений с CMS и собирают полученные семена F1.

Сорта и линии, описанные в данном документе, можно применять для образования простых гибридов F1 табака. В таких вариантах осуществления растения родительских сортов можно выращивать в виде практически однородных смежных популяций для облегчения естественного перекрестного опыления женских родительских растений мужскими родительскими растениями. Семена F1, образовавшиеся на женских родительских растениях, выборочно собирают с помощью обычных средств. Можно также вырастить два сорта родительского растения совместно и собрать смесь гибридных F1 семян, образовавшихся на женской особи, и семян, образовавшихся без мужской особи в результате самоопыления. В качестве альтернативы, можно осуществить трехлинейное скрещивание, где простой гибрид F1 используют в качестве женской особи и скрещивают с другой мужской особью. В качестве другой альтернативы, можно создать гибриды двойного скрещивания, где потомство F1 двух разных простых гибридов скрещивают само с собой.

Популяцию мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений можно подвергнуть скринингу или отбору в отношении тех представителей популяции, которые имеют необходимый признак или фенотип. Например, популяцию из потомства линии с одной трансформацией можно подвергнуть скринингу в отношении тех растений, которые имеют необходимый уровень экспрессии или функции полипептида(-ов), кодируемого(-ых) с ее помощью. Физические и биохимические способы можно применять для выявления уровней экспрессии или активности. Они включают анализ по Саузерну или ПЦР-амплификацию для выявления полинуклеотида; нозерн-блоттинг, анализ с защитой от РНКазы S1, анализ методом удлинения праймера или RT-PCR-амплификацию для выявления РНК-транскриптов; ферментные анализы для выявления ферментативной или рибозимной функции полипептидов и полинуклеотидов; и гель-электрофорез полипептида, вестерн-блоттинг, иммунопреципитацию и иммуноферментные анализы для выявления полипептидов. Другие методики, такие как гибридизация in situ, ферментативное окрашивание и иммуноокрашивание, и ферментативный анализ также можно применять для выявления присутствия, или экспрессии, или функции, или активности полипептидов или полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS.

В данном документе описаны мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные клетки растения и растения, содержащие один или более рекомбинантных полинуклеотидов, одну или более полинуклеотидных конструкций, одну или более двунитевых РНК, один или более конъюгатов или один или более векторов/векторов экспрессии.

10. Модификация других генов

Без ограничения растения и их части, описанные в данном документе, можно модифицировать до либо после модулирования экспрессии, функции или активности одного или более полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS или полипептидов NtINV или NtINV и NtSUS согласно настоящему изобретению.

Одна или более следующих дополнительных генетических модификаций могут присутствовать в мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растениях или их частях.

Один или более генов, которые вовлечены в превращение промежуточных продуктов азотного обмена могут быть модифицированы, что в результате приводит к более низким уровням по меньшей мере одного специфичного для табака нитрозамина (TSNA). Неограничивающие примеры таких генов включают гены, кодирующие никотин-деметилазу, такие как CYP82E4, CYP82E5 и CYP82E10, описанные в WO2006/091194, WO2008/070274, WO2009/064771 и WO2011/088180, а также нитратредуктазу, описанные в WO2016/046288.

Один или более генов, которые принимают участие в поглощении тяжелых металлов или транспорте тяжелых металлов, могут быть модифицированы, что в результате приводит к более низкому содержанию тяжелых металлов. Неограничивающие примеры включают семейства полипептидов, ассоциированных с множественной лекарственной устойчивостью, семейства посредников диффузии катионов (CDF), семейство Zrt-, Irt-подобных полипептидов (ZIP), семейство катионообменников (CAX), семейство транспортеров меди (COPT), семейство АТФаз тяжелых металлов (например, HMA, как описано в WO2009/074325 и WO2017/129739), семейство гомологов полипептидов макрофагов, ассоциированных с естественной устойчивостью (NRAMP), и другие члены семейства транспортеров с АТФ-связывающей кассетой (ABC) (например, MRP), как описано в WO2012/028309, которые участвуют в транспорте тяжелых металлов, таких как кадмий.

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированной экспрессией или функцией изопропилмалатсинтазы, что в результате приводит к изменению композиции сложного эфира сахарозы, которая может использоваться для изменения ароматического профиля (см. WO2013/029799).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированной экспрессией или функцией треонинсинтазы, при этом можно модулировать уровни метионала (см. WO2013/029800).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированной экспрессией или функцией одного или более из неоксантинсинтазы, ликопен-бета-циклазы и 9-цис-эпоксикаротиноиддиоксигеназы для модуляции содержания бета-дамасценона, чтобы изменить вкусоароматический профиль (см. WO2013/064499).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированными экспрессией или функцией членов семейства CLC хлоридных каналов для модулирования в них уровней нитратов (см. WO2014/096283 и WO2015/197727).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированной экспрессией или функцией одной или более аспарагинсинтетаз для модулирования уровней аспарагина в листе и обеспечения модулированных уровней акриламида в аэрозоле, полученном при нагревании или сжигании листа (см. WO2017/ 129739).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированной протеазной активностью в ходе сушки (см. WO2016/009006).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений со сниженными уровнями нитратов путем изменения экспрессии гена нитратредуктазы (например, Nia2) или активности белка, кодируемого им (см. WO2016/046288).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модифицированными уровнями алкалоидов путем изменения уровня экспрессии генов предполагаемых переносчиков ABC-2 NtABCGl-T и NtABCGl-S или активности белков, кодируемых ими (см. WO2019/086609).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированным периодом времени до наступления цветения путем изменения генной экспрессии генов, кодирующих Terminal Flower 1 (TFL1) или активности белка, кодируемого им (см. WO2018/114641). Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с модулированной экспрессией или функцией одной или более аспарагинсинтетаз для модулирования уровней аспарагина в листе и обеспечения модулированных уровней акриламида в аэрозоле, получаемом при нагревании или сжигании листа (см. WO2017/042162).

Примеры других модификаций включают модуляцию переносимости гербицида, например, глифосат является активным ингредиентом множества гербицидов широкого спектра действия. Устойчивые к глифосату трансгенные растения были разработаны путем переноса гена aroA (глифосат-EPSP-синтетаза из Salmonella typhimurium и E.coli). Устойчивые к сульфонилмочевине растения были получены путем трансформации мутантного гена ALS (ацетолактатсинтетаза) из Arabidopsis. Полипептид OB фотосистемы II из мутантного Amaranthus hybridus был перенесен в растения с получением атразин-устойчивых трансгенных растений; и бромоксинил-устойчивые трансгенные растения были получены путем встраивания гена bxn из бактерии Klebsiella pneumoniae.

Другие примеры модификаций приводят в результате к получению растений, которые устойчивы к насекомым. Токсины Bacillus thuringiensis(Bt) могут обеспечить эффективный путь отсрочки появления Bt-устойчивых вредителей, как недавно показано на брокколи, где гены Bt cry1Ac и cry1C в составе «пирамиды» обеспечивали контроль капустной моли, устойчивой к любому отдельному полипептиду, и существенно задерживали эволюционное развитие устойчивых насекомых.

Другая иллюстративная модификация в результате приводит к получению растений, которые устойчивы к заболеваниям, вызванным патогенами (например, вирусами, бактериями, грибами). Были разработаны растения, экспрессирующие ген Xa21 (устойчивость к бактериальному некрозу), с растениями, экспрессирующими как ген слияния Bt, так и ген хитиназы (устойчивость к желтой огневке-травянке и выносливость в отношении ризоктониоза).

Другая иллюстративная модификация в результате приводит к корректированию репродуктивной способности, например к мужской стерильности.

Другая иллюстративная модификация приводит в результате к получению растений, которые выносливы в отношении абиотического стресса (например, засухе, изменению температуры, засоленности), и выносливые трансгенные растения были получены путем переноса фермента ацилглицерол-фосфат-ацилтрансферазы из Arabidopsis; гены, кодирующие маннитол-дегидрогеназу и сорбитолдегидрогеназу, которые принимают участие в синтезе маннита и сорбита, улучшают устойчивость к засухе.

Другая иллюстративная модификация в результате приводит к получению растений, в которых активность одной или более никотин-N-деметилаз модулируют таким образом, что могут модулироваться уровни норникотина и метаболитов норникотина, которые образуются во время сушки (см. WO2015169927).

Другие иллюстративные модификации могут приводить к получению растений с улучшенными характеристиками запасных полипептидов и масел, растений с повышенной эффективностью фотосинтеза, растений с длительным сроком хранения, растений с повышенным содержанием углеводов и растений, устойчивых к грибам. Также предусмотрены трансгенные растения, в которых модулированы уровни экспрессии S-аденозил-L-метионина (SAM) и/или цистатионин-гамма-синтазы (CGS) или их комбинации.

Один или более генов, которые вовлечены в путь синтеза никотина, можно модифицировать с получением растений или частей растений, которые при сушке вырабатывают модулированные уровни никотина. Гены синтеза никотина могут быть выбраны из группы, состоящей из: A622, BBLa, BBLb, JRE5L1, JRE5L2, MATE1, MATE 2, MPO1, MPO2, MYC2a, MYC2b, NBB1, nic1, nic2, NUP1, NUP2, PMT1, PMT2, PMT3, PMT4 и QPT или комбинации одного или более из них.

Один или более генов, которые вовлечены в регулирование количества одного или более алкалоидов, можно модифицировать с получением растений или частей растений, которые при сушке вырабатывают модулированные уровни алкалоида. Гены, обеспечивающие контроль уровня алкалоидов, могут быть выбраны из группы, состоящей из BBLa, BBLb, JRE5L1, JRE5L2, MATE1, MATE 2, MYC2a, MYC2b, nic1, nic2, NUP1 и NUP2 или комбинации двух или более из них.

Один или более таких признаков можно интрогрессировать в мутантные, не встречающиеся в природе или трансгенные растения другого сорта или можно непосредственно трансформировать в них.

В различных вариантах осуществления предусмотрены мутантные растения, не встречающиеся в природе растения или трансгенные растения, а также биомасса, в которых уровень экспрессии одного или более полинуклеотидов в соответствии с настоящим изобретением являются модулированными для модулирования таким образом уровня полипептида(-ов), кодируемого(-ых) ими.

11. Продукты потребления

Части растений, описанных в данном документе, в частности листовую пластинку и среднюю жилку данных растений, можно включить в изготовление или применять в изготовлении различных продуктов потребления, включая без ограничения материалы, образующие аэрозоль, устройства, образующие аэрозоль, курительные изделия, изделия для курения, бездымные продукты, медицинские или косметические продукты, препараты для внутривенного введения, таблетки, порошки и табачные продукты. Примеры материалов, образующих аэрозоль, включают табачные композиции, виды табака, табачный экстракт, резаный табак, резаный наполнитель, сушеный табак, взорванный табак, гомогенизированный табак, восстановленный табак и виды трубочного табака. Курительные изделия и изделия для курения являются, как правило, устройствами, образующими аэрозоль. Примеры курительных изделий или изделий для курения включают сигареты, сигариллы и сигары. Примеры бездымных продуктов включают жевательный табак и нюхательный табак. В определенных устройствах, образующих аэрозоль, вместо сгорания, табачная композиция или другой материал, образующий аэрозоль, нагревают с помощью одного или более электрических нагревательных элементов с получением аэрозоля. В другом типе нагреваемого устройства, образующего аэрозоль, аэрозоль получают путем перемещения тепла от горючего топливного элемента или источника тепла к физически отделенному материалу, образующему аэрозоль, который может быть расположен внутри, вокруг или ниже по потоку относительно источника тепла. Бездымные табачные продукты и различные табак-содержащие материалы, образующие аэрозоль, могут содержать табак в любом виде, в том числе в виде высушенных частиц, кусков, гранул, порошков или суспензии, нанесенной на, смешанной с, окруженной или иным образом комбинированной с другими ингредиентами в любом формате, таком как хлопья, пленки, таблетки, пены или шарики. Термин «дым» используют для описания типа аэрозоля, который образуется курительными изделиями, такими как сигареты, или при сжигании материала, образующего аэрозоль.

В одном варианте осуществления также предусмотрен растительный материал, подвергнутый сушке, из мутантных, трансгенных и не встречающихся в природе растений, описанных в данном документе. Способы сушки зеленых табачных листьев известны специалистам в данной области и включают без ограничения воздушную сушку, огневую сушку, трубоогневую сушку и солнечную сушку, как описано в данном документе.

В другом варианте осуществления описаны табачные продукты, в том числе табаксодержащие материалы, образующие аэрозоль, содержащие растительный материал, такой как листья, предпочтительно листья, подвергнутые сушке, из мутантных растений табака, трансгенных растений табака или не встречающихся в природе растений табака, описанных в данном документе. Табачные продукты, описанные в данном документе, могут быть смешанными табачными изделиями, которые могут дополнительно содержать немодифицированный табак.

12. Продукты и способы для управления сельскохозяйственными культурами и сельского хозяйства

Для мутантных, не встречающихся в природе или трансгенных растений могут существовать другие варианты применения в, например, сельском хозяйстве.

В настоящем изобретении также предусмотрены способы получения семян, включающие культивирование мутантного растения, не встречающегося в природе растения или трансгенного растения, описанных в данном документе, и сбор семян культивируемых растений. Семена растений, описанных в данном документе, можно кондиционировать и упаковать в упаковочный материал с помощью средств, известных в данной области техники, с получением промышленного изделия. Упаковочный материал, такой как бумага или ткань, хорошо известен в данной области техники. Упаковка семян может иметь этикетку, например маркировку или этикетку, прикрепленную к упаковочному материалу, этикетку, напечатанную на упаковке, которая описывает происхождение содержащихся в ней семян.

Композиции, способы и наборы для генотипирования растений для идентификации, отбора или селекции могут включать средства для выявления присутствия полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS в образце полинуклеотида. Соответственно, описана композиция, содержащая один или более праймеров для специфичной амплификации по меньшей мере части одного или более из полинуклеотидов NtINV или NtINV и NtSUS, и необязательно один или более зондов, и необязательно один или более реагентов для проведения амплификации или выявления.

Соответственно, раскрыты геноспецифические олигонуклеотидные праймеры или зонды, содержащие приблизительно 10 или больше смежных полинуклеотидов, соответствующих полинуклеотиду(-ам) NtINV или NtINV и NtSUS, описанному(-ым) в данном документе. Указанные праймеры или зонды могут содержать приблизительно 15, 20, 25, 30, 40, 45 или 50 или больше смежных полинуклеотидов, которые гибридизируются (например, специфически гибридизируются) с полинуклеотидом(-ами) NtINV или NtINV и NtSUS, описанным(-ыми) в данном документе, или состоять из них. В некоторых вариантах осуществления праймеры или зонды могут содержать приблизительно 10-50 смежных нуклеотидов, приблизительно 10-40 смежных нуклеотидов, приблизительно 10-30 смежных нуклеотидов или приблизительно 15-30 смежных нуклеотидов, которые можно применять в зависимых от последовательности способах идентификации (например, Саузерн-блот-гибридизации) или выделения гена (например, гибридизации in situ бактериальных колоний или бляшек бактериофагов) или выявления гена (например, в качестве одного или более праймеров для амплификации при амплификации или выявлении), или состоять из них. Один или более специфических праймеров или зондов можно разработать и применять для амплификации и обнаружения части или всего полинуклеотида(-ов). В качестве конкретного примера, два праймера можно применять в протоколе ПЦР для амплификации полинуклеотидного фрагмента. ПЦР можно также проводить с применением одного праймера, который получен из последовательности полинуклеотида, и второго праймера, который гибридизируется с последовательностью выше или ниже последовательности полинуклеотида, такой как последовательность промотора, 3'-конец мРНК-предшественника или последовательность, полученная из вектора. Примеры термических и изотермических методик, применимых для амплификации полинуклеотидов in vitro, хорошо известны из уровня техники. Образец может происходить или его можно получить из растения, клетки растения, или растительного материала, или табачного продукта, изготовленных из растения, клетки растения или растительного материала, как описано в данном документе.

В дополнительном аспекте также предусмотрен способ выявления полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, описанного(-ых) в данном документе (или любой их комбинации, описанной в данном документе), в образце, включающий стадии (a) получения образца, содержащего или предположительно содержащего полинуклеотид; (b) приведения указанного образца в контакт с одним или более праймерами или одним или более зондами для специфичного выявления по меньшей мере части полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS и (c) выявления присутствия продукта амплификации, где присутствие продукта амплификации свидетельствует о присутствии полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS в образце. В дополнительном аспекте также предусмотрено применение одного или более праймеров или зондов для специфичного выявления по меньшей мере части полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS. Также предусмотрены наборы для выявления по меньшей мере части полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS, которые содержат один или более праймеров или зондов для специфического выявления по меньшей мере части полинуклеотида(-ов) NtINV или NtINV и NtSUS. Набор может содержать реагенты для амплификации полинуклеотида, например реагенты для ПЦР, или реагенты для технологии обнаружения с применением гибридизационного зонда, такой как Саузерн-блоттинг, нозерн-блоттинг, гибридизация in situ или микрочип. Набор может содержать реагенты для технологии обнаружения связывания антител, такой как вестерн-блоттинг, ELISA, SELDI-масс-спектрометрия или тест-полоски. Набор может содержать реагенты для секвенирования ДНК. Набор может содержать реагенты и инструкции по применению набора.

В некоторых вариантах осуществления набор может содержать инструкции для одного или более описанных способов. Описанные наборы могут быть применимы для определения генетической идентичности, филогенетических исследований, генотипирования, гаплотипирования, анализа родословной или селекции растений, в частности, с количественной оценкой кодоминантных признаков.

В настоящем изобретении также предусмотрен способ генотипирования растения, клетки растения или растительного материала, содержащих полинуклеотид NtINV или NtINV и NtSUS, описанный в данном документе. Генотипирование обеспечивает средства различения гомологов пары хромосом и может быть использовано для различения сегрегантов в популяции растений. Способы на основе применения молекулярных маркеров можно применять для филогенетических исследований, характеризующих генетические связи между сортами сельскохозяйственных культур, выявления гибридов или соматических гибридов, локализации хромосомных сегментов, влияющих на моногенные признаки, клонирования на основе генетических карт и изучения количественного наследования. В определенном способе генотипирования может использоваться любое количество аналитических методик с молекулярным маркером, включая такие на основе полиморфизма длин амплифицированных фрагментов (AFLP). AFLP является результатом аллельных различий между амплифицированными фрагментами, вызванных изменчивостью полинуклеотида. Таким образом, в настоящем изобретении дополнительно предложены способы отслеживания сегрегации одного или более генов или полинуклеотидов, а также хромосомных последовательностей, генетически связанных с этими генами или полинуклеотидами, с применением таких методик, как анализ AFLP.

13. Табачные экстракты

В данном документе также раскрыты способы получения жидкого табачного экстракта и жидкий табачный экстракт, полученный посредством такого(-их) способа(-ов).

Конкретную температуру экстракции выбирают для исходного табачного материала, предпочтительно исходя по меньшей мере из содержания редуцирующих сахаров и, необязательно, содержания никотина в исходном(-ых) табачном(-ых) материале(-ах). Температуру(-ы) экстракции, как правило, выбирают в пределах диапазона от приблизительно 100 градусов Цельсия до приблизительно 160 градусов Цельсия. Продолжительность стадии нагревания можно необязательно регулировать для обеспечения степени контроля над составом экстракта, полученного из исходного(-ых) табачного(-ых) материала(-ов). Предпочтительно исходный(-ые) табачный(-ые) материал(-ы) нагревают при температуре экстракции в течение по меньшей мере приблизительно 90 минут, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 120 минут. Стадию нагревания как правило проводят в инертной атмосфере. Предпочтительно поток инертного газа, такого как азот, пропускают через исходный табачный материал во время стадии нагревания. Летучие табачные соединения высвобождаются в поток инертного газа во время стадии нагревания, так что инертный газ действует как носитель для летучих компонентов. Поток инертного газа может иметь скорость потока по меньшей мере приблизительно 25 литров в минуту, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 30 литров в минуту. Относительно высокая скорость потока инертного газа может преимущественно повышать эффективность экстракции из исходного табачного материала. Необязательно этап нагревания можно осуществлять в вакууме. Подходящие способы нагревания для осуществления нагревания исходного табачного материала известны специалистам и включают: сухую дистилляцию, гидродистилляцию, вакуумную дистилляцию, равновесную дистилляцию и тонкопленочную гидродистилляцию.

Если летучие соединения собирают путем абсорбции жидким растворителем, стадия образования смешанного жидкого табачного экстракта может включать высушивание раствора летучих соединений в жидком растворителе с целью концентрирования этого раствора. Высушивание может быть осуществлено с использованием любого подходящего средства, включая без ограничения обезвоживание, молекулярные сита, сублимационную сушку, разделение фаз, дистилляцию, проникновение сквозь мембрану, контролируемую кристаллизацию воды и фильтрацию, обратную гигроскопичность, ультрацентрифугирование, жидкостную хроматографию, обратный осмос или химическое высушивание.

Жидкий табачный экстракт является особенно подходящим для получения композиции, или состава, или гелеобразной композиции для применения в системе, генерирующей аэрозоль. Раскрыта система, генерирующая аэрозоль, содержащая композицию, или состав, или гелеобразную композицию. В такой системе, генерирующей аэрозоль, композицию, или состав, или гель обычно нагревают в устройстве, генерирующем аэрозоль, таком как устройство, содержащее нагревательный элемент, который взаимодействует с композицией, или составом, или гелем, содержащим жидкий табачный экстракт, с образованием аэрозоля. В ходе применения летучие соединения высвобождаются из композиции путем передачи тепла и захватываются воздухом, втягиваемым через устройство, генерирующее аэрозоль. По мере охлаждения высвобождающихся соединений, они конденсируются с образованием аэрозоля, который вдыхается потребителем.

Настоящее изобретение дополнительно описано в примерах ниже, которые представлены для более подробного описания настоящего изобретения. Эти примеры, в которых изложен предпочтительный режим, предусмотренный в настоящее время для осуществления настоящего изобретения, предназначены для иллюстрации, а не для ограничения настоящего изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Материалы и способы

Выделение ДНК и генотипирование растений

Образцы листа экстрагируют с применением BioSprint 96 (Qiagen, Хильден, Германия) совместно с набором для выделения ДНК из растений BioSprint 96 DNA plant kit (Qiagen, Хильден, Германия). Образцы ДНК используют в реакции TaqMan для того, чтобы определить генотип растения. Реакцию Taqman осуществляют с применением секвенатора ABI PRISM 7900HT (Applied Biosystems, Life Technologies, Фостер-сити, штат Калифорния, США) и мастер-микса TaqMan Fast Advanced (Applied Biosystems, Фостер-сити, штат Калифорния, США).

Измерение содержания свободных аминокислот

Содержание аминокислот можно измерять с помощью различных способов, известных из уровня техники. Одним из таких способов является способ MP 1471 rev 5 2011, Resana, Italy: Chelab Silliker S.r.l, Mérieux NutriSciences Company. Для выявления аминокислот в листьях растения, подвергнутых сушке, после удаления средней жилки пластинки, подвергнутые сушке, при необходимости сушат при 40°C в течение 2-3 дней. Затем табачный материал измельчают в тонкодисперсный порошок (~100 мкM) перед анализом на содержание аминокислот. Другой способ измерения содержания аминокислот в растительном материале описан в UNI EN ISO 13903:2005. Измерение содержания свободных аминокислот можно проводить в соответствии с UNI EN ISO 13903:2005.

Измерение содержания редуцирующих сахаров

Содержание редуцирующих сахаров можно измерять с применением колориметрического способа с сегментированным потоком, разработанного для анализа образцов табака, адаптированного в Skalar Instrument Co (Западный Честер, Пенсильвания) и описанного в Tobacco Science 20: 139-144 (1976). Измерение содержания редуцирующих сахаров также описано в Coresta Recommended Method 38, CRM38, CRM и ISO 15154: 2003. Для определения редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях подвергнутые сушке пластинки после удаления средней жилки сушат при 40°C в течение 2-3 дней, если необходимо. Затем табачный материал измельчают в тонкодисперсный порошок (~100 мкм) перед проведением анализов на редуцирующие сахара. Измерение содержания редуцирующих сахаров проводят в соответствии с ISO 15154: 2003.

Пример 2. Анализ экспрессии NtINV4-S и NtINV4-T в тканях растения

В таблице 1 показано, что NtINV4-S и NtINV4-T экспрессируются в тканях целого растения, в частности в лепестке, а также в незрелом цветке, чашелистике, нижнем листе, среднем листе и верхнем листе в меньшей степени у растений табака Вирджиния, выращенных в полевых условиях. Напротив, NtINV3-S и NtINV3-T характеризуются очень низким уровнем экспрессии в исследованных тканях, при этом поддающийся оценке уровень экспрессии, хотя и очень низкий, присутствует только в незрелом цветке растений табака Вирджиния, выращенных в полевых условиях.

Пример 3. Динамика редуцирующих сахаров (глюкозы и фруктозы) во время трубоогневой сушки табака Вирджиния

Во время сушки (трубоогневой сушки) табака Вирджиния содержание редуцирующих сахаров, главным образом глюкозы и фруктозы, сильно увеличивается в пожелтевших листьях, достигая максимального уровня через один или два дня (см. фигуру 1A). Интересно отметить, что уровень экспрессии NtINV4-S и NtINV4-T увеличивается приблизительно в 2 раза (в log2), достигая плато через 1 или 2 дня (см. фигуру 1A). NtINV4-T экспрессируется в большей степени во время сушки, чем NtINV4-S (см. фигуру 1B и таблицу 2). Обе копии NtINV3 не характеризуются значительным уровнем экспрессии в подвергнутом сушке листе (см. фигуру 2B) или зеленом листе (см. таблицу 1). В качестве контроля SAG12, общий маркер старения растений, в полной мере экспрессируется через один день сушки (см. фигуру 1C).

Пример 4. Динамика редуцирующих сахаров (глюкозы и фруктозы) в темном табаке во время воздушной сушки

Чтобы определить, является ли индукция NtINV4-S и NtINV4-T неспецифичной для табака Вирджиния, изучают данные относительно экспрессии в темном табаке. В этом случае листья подвергают воздушной сушке. В течение первых 120 часов образцы собирают через 24, 48, 96 и 120 часов, замораживают, лиофилизируют и подвергают метаболомным анализам. По наблюдениям в отношении листа табака Вирджиния содержание глюкозы и фруктозы (редуцирующих сахаров) повышается в 4-6 раз в период от 0 часов до 120 часов сушки (завершение фазы пожелтения) (см. фигуру 2). В полностью высушенных листьях (приблизительно через 10 дней после начала сушки) уровни глюкозы и фруктозы понижаются в матриксе листа, как и в табаке трубоогневой сушки (если сравнить фигуры 1 и 2), но в большей степени. Уровни сахарозы оставались почти стабильными в течение первых 120 часов сушки, что позволяет предположить, что в темном табаке запас молекул сахарозы во время пожелтения листьев сохраняется. В конце сушки сахароза полностью гидролизуется и, таким образом, вероятно, полностью метаболизируется (см. фигуру 2C).

В случае тех же образцов замороженный листовой материал используется для выделения РНК для анализа экспрессии NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T. По наблюдениям в отношении табака трубоогневой сушки гены NtINV3 не экспрессируются в собранном листе и не активируются во время воздушной сушки темного табака. С другой стороны, уровень активации NtINV4-S и NtINV4-T повышается в более чем 10 и достигает максимума через 5 дней сушки (120 часов, см. таблицу 2). По наблюдениям в отношении табака трубоогневой сушки активация SAG12 происходит быстрее, а затем понижается через 5 дней сушки (120 часов).

Пример 5. Сайленсинг NtINV4 в табаке трубоогневой сушки

Сайленсинг NtINV4 исследовали в табаке трубоогневой сушки для определения того, вносят ли эти гены вклад в понижение содержания редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях табака. Специфический фрагмент ДНК (SEQ ID NO: 9) в пределах кодирующей последовательности как NtINV4-S, так и NtINV4-T клонировали с помощью сильного промотора вируса мозаики мирабилис (MMV) в векторе GATEWAY. Фрагмент гена NtINV4 фланкирован между MMV и 3’-терминаторной последовательностью nos гена нопалинсинтазы Agrobacterium tumefaciens. Линию табака K326 трансформировали с применением стандартных протоколов трансформации, опосредованной Agrobacterium. Результаты показаны на фигуре 3 в отношении уровней экспрессии INV4 для четырех контролей и четырех трансгенных линий 35S:INV4-RNAi. Для обеспечения отбора растений с низким содержанием редуцирующих сахаров листья отдельных растений T0 и соответствующих контрольных линий анализировали после 48 ч сушки для определения влияния на уменьшение содержания редуцирующих сахаров. Наилучшие линии T0, демонстрирующие самый низкий уровень экспрессии NtINV4 по сравнению с контрольными линиями, отбирали с помощью qPCR. Семена собирали с этих наилучших линий T0. Манипулирование с генами NtINV4 (например, либо с применением конститутивного промотора, либо со специфического индуцируемого старением промотора, такого как SAG12 или E4) может изменять химию подвергнутых сушке листьев табака. Аналогичным образом осуществление нокаута генов NtINV4 с применением стратегии редактирования генома, такой как CRISPR или отбор мутантов, может изменять химический состав аминокислот в листьях основных сортов коммерческого табака.

Пример 6. Анализ уровней глюкозы, фруктозы и сахарозы в полностью высушенных листьях четырех контролей и четырех трансгенных линий 35S:INV4-RNAi

Пять листьев, полученных из средней части растения, от четырех контролей и четырех трансгенных линий 35S:INV4-RNAi, описанных на фигуре 3, собирают после созревания и подвергают трубоогневой сушке. Сахара (глюкоза, фруктоза и сахароза) подвергают анализу в полностью высушенных листьях. Данные, представленные на фигуре 4, показывают сильное и значительное снижение содержания глюкозы и фруктозы в растениях с подвергнутым сайленсингу INV4. Уровень глюкозы и фруктозы снижен на приблизительно 63% и на приблизительно 43% соответственно. Интересно отметить, что в линиях 35S:INV4-RNAi уровень сахарозы характеризуется значительным повышением в 4,1 раза, что, таким образом, позволяет предположить, что часть пула сахарозы, накапливающейся во время сушки листьев, не гидролизуется при участии генов INV4 в линиях с сайленсингом. Какого-либо влияния на визуальную пригодность растений и различия в отношении общего содержания свободных аминокислот между контролем и линиями 35S:INV4-RNAi не наблюдалось.

Нокаут или подавление экспрессии NtINV4-S и NtINV4-T может способствовать снижению содержания редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях. Для еще более сильного понижения количества редуцирующих сахаров можно рассмотреть комбинацию нокаута или подавления NtSUS и NtINV . Для увеличения пула редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях можно рассмотреть сверхэкспрессию NtINV4-S или NtINV4-T или их комбинации с применением индуцируемого старением промотора, такого как SAG12 или E4 (применение конститутивного промотора может изменить метаболизм растения в ходе вегетативной стадии).

Пример 7. Идентификация генов SUS после сушки в табачном листе Берлей, Вирджиния и восточного типа

Для идентификации ключевых функций, вносящих вклад в метаболизм сахарозы во время ранних стадий сушки листа табака Берлей, Вирджиния и восточного типа, проводили анализ преобладания в отношении функции генов, экспрессия которых повышена в подвергнутых сушке листьях после 48 часов сушки в сравнении со спелыми листьями в момент сбора урожая (log2-кратное изменение >2, скорректированное p-значение <0,05) табака Берлей, Вирджиния и восточного типа. Идентифицировали гены, задействованные в выработке редуцирующих сахаров и являющиеся активными после 48 часов сушки независимо от типов сушки и сортов табака. Идентифицировали гены табака, задействованные в выработке редуцирующих сахаров.

Ключевые гены, непосредственно задействованные в выработке редуцирующих сахаров во время ранних стадий сушки в листьях, относятся к семейству генов SUS. SUS, вероятно, представляет собой ключевой фермент для запуска накопления редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке отделенных листьях.

Обнаружено, что геном табака имеет 12 продуктов гена NtSUS, распределенных по 6 семействам, с одной копией S и одной копией T от каждого предка: NtSUS1-S (SEQ ID NO: 10), NtSUS1-T (SEQ ID NO: 12), NtSUS2-S (SEQ ID NO: 14), NtSUS2-T (SEQ ID NO: 16), NtSUS3-S (SEQ ID NO: 18), NtSUS3-T (SEQ ID NO: 20), NtSUS4-S (SEQ ID NO: 22), NtSUS4-T (SEQ ID NO: 24), NtSUS5-S (SEQ ID NO: 26), NtSUS5-T (SEQ ID NO: 28), NtSUS6-S (SEQ ID NO: 30) и NtSUS6-T (SEQ ID NO: 32).

Транскрипты SUS происходили из геномных последовательностей NtSUS2-S (SEQ ID NO: 14), NtSUS3-S (SEQ ID NO: 18), NtSUS3-T (SEQ ID NO: 20) и NtSUS4-S (SEQ ID NO: 22). Экспрессия данных генов повышалась во время сушки листа (старения), как показано в таблице 3. Это подтверждает, что копии S, в частности, задействованы в химической модификации листьев, подвергаемых ранним стадиям сушки, и в данном конкретном случае, в повышении уровня глюкозы и фруктозы.

Хотя в подвергнутых сушке листьях табака Берлей обнаружили низкие значения уровней редуцирующих сахаров по сравнению с табаком Вирджиния и восточного типа, тем не менее гены NtSUS являются активированными в табаке Берлей (см. таблицу 3), вероятно, как конститутивный ответ для обеспечения, в свою очередь, доступного источника углерода для синтеза аминокислот во время ранней фазы сушки.

Как в табаке Берлей (BU), так и в табаке Вирджиния (FC) NtSUS1-S и NtSUS1-T, которые не экспрессируются во время ранних стадий сушки (см. таблицу 3), в частности, экспрессируются в корне и стебле, что свидетельствует о возможной специфической функции в этих тканях, заключающейся в доставки углеводов для синтеза клеточных стенок или снабжения ресурсами углерода в условиях аноксии (см. таблицу 4). С другой стороны, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S, которые индуцируются во время ранних стадий сушки листа, также экспрессируются во всех органах, тогда как NtSUS2-S и NtSUS2-T экспрессируются преимущественно в незрелых цветках и лепестках. NtSUS5-S, NtSUS5-T, NtSUS6-S и NtSUS6-T экспрессируются на низких уровнях во всех проанализированных тканях растений (см. таблицу 4).

Для увеличения пула редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях могла бы рассматриваться сверхэкспрессия NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T или NtSUS4-S или их комбинации с применением индуцируемого старением промотора, такого как SAG12 или E4 (применение конститутивного промотора может существенно изменить метаболизм растения). С другой стороны, осуществление нокаута NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и/или NtSUS4-S может внести вклад в снижение содержания редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях.

Пример 8. Сайленсинг экспрессии NtSUS в листе табака Вирджиния

Сайленсинг NtSUS исследовали для определения того, вносят ли эти гены вклад в снижение содержания редуцирующих сахаров в подвергнутых сушке листьях табака Вирджиния. Специфический фрагмент ДНК в пределах кодирующей последовательности обоих NtSUS клонировали с сильным промотором вируса мозаики ночной красавицы (MMV) в вектор GATEWAY. Фрагмент гена NtSUS фланкирован между MMV и 3’-терминаторной последовательностью nos гена нопалинсинтазы Agrobacterium tumefaciens.

Для обеспечения отбора растений с низким содержанием редуцирующих сахаров листья отдельных растений T0 и соответствующих контрольных линий анализировали после 60 ч сушки для определения влияния на уменьшение содержания редуцирующих сахаров. Отбирали наилучшие линии T0, демонстрирующие наиболее низкий уровень редуцирующих сахаров. Семена собирали с этих наилучших линий T0. Потомство T1 анализировали с помощью qPCR для определения эффективности событий сайленсинга NtSUS в аспекте понижения содержания редуцирующих сахаров.

Манипулирование с генами NtSUS (например, либо с применением конститутивного промотора, либо со специфического индуцируемого старением промотора, такого как SAG12 или E4) может изменять химию подвергнутых сушке листьев табака. Аналогичным образом осуществление нокаута генов NtSUS с применением стратегии редактирования генома, такой как CRISPR или отбор мутантов, может изменять химический состав аминокислот в листьях основных сортов коммерческого табака.

Пример 9. Получение жидкого табачного экстракта из растения табака, модифицированного NtINV4 , и растения табака, модифицированного NtSUS , каждое из которых характеризуется модулированным содержанием редуцирующих сахаров.

Исходный табачный материал получают из подвергнутых сушке листьев растения табака, модифицированного NtINV4, или растения табака, модифицированного NtSUS, в соответствии с настоящим изобретением. Табачный материал нарезают с образованием кусочков табака размером приблизительно 2,5 миллиметра на приблизительно 2,5 миллиметра и кусочки табака загружают в экстракционную камеру, без сжатия. Исходный табачный материал нагревают в экстракционной камере. В ходе нагревания через экстракционную камеру пропускают поток азота со скоростью потока приблизительно 40 литров в минуту. Для каждого исходного табачного материала летучие соединения, высвобождающиеся в ходе этапа нагревания, собирают посредством абсорбции в жидкий растворитель, образованный из пропиленгликоля, при температуре минус 10 градусов Цельсия и при перемешивании со скоростью 750 об/мин. Раствор пропиленгликоля с собранными летучими соединениями высушивают в процессе обезвоживания с целью снижения уровня содержания влаги в растворе до приблизительно 15 процентов. Собирают концентрированные растворы собранных летучих веществ из исходных табачных материалов.

Можно получить комбинированный жидкий табачный экстракт. Для каждого из исходных табачных материалов, обработанных, как описано выше, первый исходный табачный материал нагревают при температуре и в течение периода времени, которые отличаются от таковых для второго исходного табачного материала. Для каждого исходного табачного материала летучие соединения, высвобождающиеся на стадии нагрева, собирают и высушивают. Полученные концентрированные растворы собранных летучих веществ из первого и второго исходных табачных материалов могут быть объединены в определенном соотношении с получением жидкого табачного экстракта.

Любая публикация, цитируемая или описанная в данном документе, предоставляет соответствующую информацию, раскрытую до даты подачи настоящей заявки. Заявления, сделанные в данном документе, не должны истолковываться как признание того, что авторы настоящего изобретения не имеют оснований для его противопоставления как более ранним таким раскрытиям. Все публикации, упомянутые в вышеприведенном описании, включены в данный документ с помощью ссылки. Различные модификации и варианты настоящего изобретения будут очевидны специалистам в данной области без отступления от объема и сути настоящего изобретения. Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано в связи с конкретными предпочтительными вариантами осуществления, следует понимать, что настоящее изобретение, как заявлено, не должно быть неправомерно ограничено такими конкретными вариантами осуществления. В действительности различные модификации описанных способов осуществления изобретения, которые очевидны специалистам в клеточной, молекулярной биологии и биологии растений или в смежных областях, предназначены находиться в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.

ТАБЛИЦА 1

Экспрессия генов NtINV3 и NtINV4 в корне, стебле, листе, расположенном в средней части стебля, незрелом цветке, чашелистике и лепестке растений табака Вирджиния, выращенных в полевых условиях (RNAseq, FPKM)

ТАБЛИЦА 2

Экспрессия NtINV3-S, NtINV3-T, NtINV4-S и NtINV4-T во время воздушной сушки темного табака, представленная на фигуре 2

ТАБЛИЦА 3

Экспрессия генов NtSUS во время ранних стадий сушки для табака Берлей (BU), Вирджиния (FC) и восточного типа (OR)

	BU			FC			OR
	Зеленые	Зрелые	48 ч сушки	Зеленые	Зрелые	48 ч сушки	Зеленые	Зрелые	48 ч сушки
NtSUS1-S	3,4	0,2	0,0	10,4	0,0	0,4	3,4	0,1	0,5
NtSUS1-T	4,1	0,2	0,0	11,4	0,1	0,2	3,4	0,2	0,6
NtSUS2-S	0,2	0,3	28,5	0,3	0,1	1,7	0,6	2,3	17,8
NtSUS2-T	4,0	1,7	5,0	2,6	0,3	0,5	2,7	2,8	3,7
NtSUS3-S	23,4	65,6	130,4	14,2	57,8	82,3	18,7	42,0	163,9
NtSUS3-T	8,5	12,2	76,5	2,4	3,2	41,2	6,1	10,7	126,7
NtSUS4-S	11,6	4,9	22,8	15,5	3,6	22,9	19,0	18,5	105,4
NtSUS4-T	3,2	2,7	8,1	2,7	3,1	1,9	38,0	56,2	37,9
NtSUS5-S	0,6	0,2	0,1	5,1	0,1	0,5	1,4	0,3	0,8
NtSU55-T	0,5	0,5	0,3	3,6	0,4	0,6	1,1	0,8	1,6
NtSUS6-S	7,8	9,5	8,2	7,6	7,7	5,4	7,8	8,2	8,3
NtSUS6-T	3,1	4,2	4,7	1,6	4,3	3,2	3,7	4,9	5,0

ТАБЛИЦА 4

Экспрессия генов NtSUS в корне, стебле, листе, расположенном в средней части стебля, незрелом цветке (незр. цветок), чашелистике и лепестке растений табака Берлей (BU) и Вирджиния (FC), выращенных в поле

	BU						FC
	Корень	Стебель	Лист из средней части стебля	Незр. цветок	Чашелистик	Лепесток	Корень	Стебель	Лист из средней части стебля	Незр. цветок	Чашелистик	Лепесток
NtSUSl-S	206,4	294,0	0,9	8,2	1,6	6,4	95,7	129,1	0,7	31,7	1,1	0,7
NtSUSl-T	170,0	348,6	1,0	14,4	2,5	9,0	70,9	137,6	1,1	36,9	1,7	1,7
N15US2-S	26,4	17,0	0,4	86,1	12,9	97,9	27,3	13,5	0,4	197,3	7,7	150,3
NISUS2-T	61,5	55,1	2,2	96,9	37,3	172,7	4,2	12,7	0,4	122,6	12,4	111,4
NtSUS3-S	7,7	23,0	31,8	10,3	22,5	32,4	81,0	98,7	40,4	14,6	67,5	34,6
NISUS3-T	6,7	6,4	5,0	8,8	7,9	13,7	13,9	20,2	2,8	4,7	6,8	17,7
NISUS4-S	26,5	40,0	8,5	19,4	14,7	23,4	30,6	43,4	6,6	31,4	10,3	34,1
NtSUS4-T	40,7	29,3	6,4	3,2	6,0	4,1	52,6	47,7	4,8	5,4	12,6	20,4
NtSUS5-S	2,6	6,5	0,5	5,6	1,4	1,1	2,2	2,2	0,3	4,4	0,5	0,4
NtSUS5-T	2,6	5,9	0,6	5,3	1,0	1,9	2,6	2,3	1,2	3,4	0,8	1,8
NtSUS6-S	8,3	7,8	7,8	8,9	6,8	7,1	9,4	8,5	6,6	9,5	7,3	8,6
NtSUS6-T	2,7	2,4	4,1	3,0	3,1	4,9	4,0	3,4	3,6	4,2	3,2	5,2

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO 1: полинуклеотидная последовательность NtINV3-S

atggcggaaacaaacaatagcgttccttacacccaattaccggcggaggacaataacacctccgttaattctccggccggatgccggctacgacccaaaagagtgtcgtttatagtattaacagggctggtggcagctttgttactttttgtggcagtgaaatatgggaaaaacgaggcggaggatgtgaatccagggccagtaccaccacaagaaaccgtgtgcaatatgcttggttctaatctaatgccgctgaccagcatgaagacggtggcgcgtggggtggcagaaggtgtctccgccaagtcacgcggtcgtttcttgggattacggccgtttccatggaccaaacaaatgttggcttggcaaagaacatccttccactttcaacctaagaagaattggatgaatggttagtaattctttttctcttatgttattaattttcataaatcaactttattattattattatacaataaatcaacattgcttattgatgaattttaacataaacccgccttatgcttgacgagattaactagaactatatatacaatgaatgattatctccattccattacataaccatgaattatgtttcttaattaattaaagatttgacatgacattatatttcgtttatagtttaagaaaagctttgtattgatgtaaaagaaaccattacagcttcgaatatgggataccttgtctttttcttttcctaagatggatctttgattgcaagaacagagtttgaattactcaggaaacttatttgcttatttattattttttgaggtgaacattaatgatttattcttatttggcatgtgttggattatttggcttggattgcgctgatcacggaaattgcctgattcttttcgtcagatcctaatggtaaagtccatatatttctacttgttattgttgttgttcttcttattattatattattattgaaaattatcgacataatcgggacctcaaaacatactagtcgtagcagtttttaagtagacagattgtcaatatgatgaagacagttgttttcagacaattgcatgtgaattttctaggagcaaacacaaattcctagaatggtaagcaacttccaccctgtctgttccaattataacctcgctacttttgatccacttaatcttattcaaccaacagtggatcacttatttaattatatgtgacctagtttattgagacatttttacattaagccctttcgtatttacacttcaatatgcatcatacaaaaaaaaatgtacttcaaagttatacgttatattaatttctaactccaatttttaaaaaaaaatatattttaggtcccttattctacaaaggatggtaccatttgttctatcaatacaatccagaggctgcagtatggggaaatattgtatggggacatgcagtttcaagagacttaattcactggcaacaccttccagttgctatggttgcggatcaatggtacgacattaatggtgtatggaccggatccgcaaccattttacccgatggtaaactcgtcatgttgtatactgggtcaaccaacgagtcagtacaggttcaaaatttagcgtacccggctgacccatcggatcctctcctaataaaatgggtcaagtatgagggcaacccggttcttgtaccaccacccggaattgctgctaaggatttccgtgaccccaccactgcatggaccacaccacaaggcaaatggcggattactattggttcaaaagttaataaaactggaatttcattggtctatgacactattgattttaagaattttgagttgctggatggggtgctccatggtgtatcgggtacgggtatgtgggaatgtgtggatttttacccggtttcgaaagttgttgaaaatgggcttgacacttcagataatgggcctgcagtaaaacatgtgttaaagtccagtcttgatgatgatagaaatgattattatgcacttggaacttatgatgctgtggctggaaaatgggttcctgataatcccactattgatgttggtattggattaagatatgattatggaaatttttatgcatcaaaaacattttatgaccaagagaaaaagagaagagtcctttgggcttggattactgaaagtgatagtgaagctgctgatatttgcaaaggttgggcatcacttcaggtacaattcaattgtgtcaagctagcgcttgcacatagatttagttgaaacctaaaaaatgagtatttgaaattccgtagaaaaataatttttgaaagttgaagttgtgtttgaatatgcattttatttgaaaaaaaaaacagttctaattttatgagaaagaaaaattcacctaaaaactgccctaaaccagattttaggaacttgaaaaaaaaataaactttttcaaaaactgattatattctatgaacaaacaatattatcaaaaatctattttttttttgccaaaatctatggccaaacaggagctaatttcctttattttttttttcaaacttcatgtcatatttgaattttggtctcatttaacactttggtaacgtgtgatgtaacacagcccattccaaggactataaaatatgacaagaagacaggaagcaatataattacttggccagtggcagaggttgagaatttgagatttaacagcaaggaattcgacaaggtggaggtcaagccaggaaatgttgttccactagaagttggcactgccactcaggtttgttcattaaatttagcttatatacactgactgcctaaaagaatttttttgacattattagtgtattttaagctattatagcacgtaacatgctaatgctcgaataagtttaacttactataacttgaattgttgatgattacagttggacataatggctgagtttgaagtagaccctaaggtcttggagaaattagaaggaagtaatgctacatatgagtgcagaagcagcggtggatctgctgaacgtggtgccttaggaccatttggtttattggttttaacagataagggattgtccgagcaaactccaatttacttctacattgctaaagacgctgctggaaatttcaccacattcttctgcaatgatcttaccaggttctaatttctcctctcttgcattttcatctcatcaatgaagttttagcccttcaccccctcccccaaaaccaaactaataaattggagaaaaccctttattggttcagtgcttaatagcagtacggaattcaggattttaagtcagtgggttctgcgatctatatatatataataatatttttctgcacatacatatagtccgagctagacatagtgagttccgttgaacctgttgcatttagtctgagtccgccactgcttaagcacatccttctcataacaaccgagctttccaaaaacttaagtatttctcatgtccatacttttattcatgtttgaaaatgaagtcacattttgttttataaccgaaaaatcccgagggcaagtggccagtacatggttcgaagctcaatggacactggcaccgcccctttatcgtgctccacttaaatactaagattttgtccgtggcagggtttcaaccaatcacgtacgtttaactcatatattaggaatagcttttaccactagaccaaaactcggggacaatgtatgaagccggatatttgttgcaattctttttaaattaaaatggggacaagatccgagacaaatcttgaaaatgcattacgaagtattgttaagtaagtatgaaaatggtgattctcatctttttacttccttttttaggtcatctgaagcaacagatgttcgcaaactaatctacggaagcacagttccagtcctccaaggagagaagctttctctaagaacactggtaatatcccctttttctttcttaatttcttaatccaaattcttaattagtgcttgttttcctttgtgcgtataattaagtttactaagtatcaattaatggggtatttttgtcaatgtaataggtggatcattcaatagtagaaagttttgcacaaaatggaaggacagcaataacatcaaggttatatccaacaaaggcaatatatgaagatgctaagctctacttgtttaacaatgctacagatgttaccattactgcctcggtcaagatttggcaaatacattctgcaaatatacaatctagttaa

SEQ ID NO 2: полипептидная последовательность NtINV3-S

MAETNNSVPYTQLPAEDNNTSVNSPAGCRLRPKRVSFIVLTGLVAALLLFVAVKYGKNEAEDVNPGPVPPQETVCNMLGSNLMPLTSMKTVARGVAEGVSAKSRGRFLGLRPFPWTKQMLAWQRTSFHFQPKKNWMNDPNGPLFYKGWYHLFYQYNPEAAVWGNIVWGHAVSRDLIHWQHLPVAMVADQWYDINGVWTGSATILPDGKLVMLYTGSTNESVQVQNLAYPADPSDPLLIKWVKYEGNPVLVPPPGIAAKDFRDPTTAWTTPQGKWRITIGSKVNKTGISLVYDTIDFKNFELLDGVLHGVSGTGMWECVDFYPVSKVVENGLDTSDNGPAVKHVLKSSLDDDRNDYYALGTYDAVAGKWVPDNPTIDVGIGLRYDYGNFYASKTFYDQEKKRRVLWAWITESDSEAADICKGWASLQPIPRTIKYDKKTGSNIITWPVAEVENLRFNSKEFDKVEVKPGNVVPLEVGTATQLDIMAEFEVDPKVLEKLEGSNATYECRSSGGSAERGALGPFGLLVLTDKGLSEQTPIYFYIAKDAAGNFTTFFCNDLTRSSEATDVRKLIYGSTVPVLQGEKLSLRTLVDHSIVESFAQNGRTAITSRLYPTKAIYEDAKLYLFNNATDVTITASVKIWQIHSANIQSS

SEQ ID NO 3: полинуклеотидная последовательность NtINV3-T atggcggaaacaaacaatagcgttccttacacccaattaccggcggaggacaataacacctccagtaattctccggccaaatgccggcgacgacccaaaagagtgtcgttcatagtattaacagggctggtggcagctttgttactttttgtggcagtgaaatatgggaataacgaggcggaggatgtaaatccagggccagtaccaccacaagaaaccgtgtgtaacatgcttggttctaatctaatgccgctgaccaccatgaggacggtggcgcgtggggtggcagaaggtgtctccgccaagtcacgcggtcgtttcttgggattacggccgtttccatggaccaaacaaatgttggcttggcaaagaacatccttccactttcaacctaagaagaattggatgaatggttagtaattctttttctcttatgttattttcataaatcagctttgtttttattaaacaataaatcaacagcttattgataattttaaacataaaaccgccttatgcttgacgagattaactagaactttatgtacaatgaatggttatctccattccattacatgcccatgaattttatgtgtcttaatttaaagatttgacaggacattacattacgtttatagtttaagaaaagcttggtattgatataaaaaaaaccattacagcttcgaatatgggataccttgtctttttctttgcctaagatggatctttgattgcaagaacagagtttgaattactcaggaaaaatatgaaatcgttttggaacttatttgcttgtttattattttttgaggtgaacattaatgatttattcttatttggcatgtgttggattctttggctttggactgcgttgctcacggaaattacctgattctgttcgtcagatcctaatggtaagtccatattttctgccggtattattattattattattgttattgttattattattattattattattaatttattttgatatattggaaaccatcgacaaaacggggacctcaaaacatactagtcggggtagtttgtaagtagacagattgacaatatgatgaagacagttgtctttagacaattgcatgtgaattttgtaggagcaaacacaaattcctagaatggtatacaacttcaatcctgtctgtccaattataacctcgctacttttgatccactacacctttttcgatcaacaggggatcacttatttaattatacggaaccctttatataacaatcatatttgttcccgtattttttaggttttatattgagtggttgttatgcaaatattacaggatttgacgtttaaatatttttttggttgttatagataaaaattatctataaataaataatcattccttttttcatgttacatataaaaaataaggaaattatttaaatttaaaatctcacaagctatgcatatttcactaattaaatattaaagaaagttaatacattattaataaattcataactaaaaatataaagatttaaactctaaggcagacattttaaggctaccaaaaaaataatttttttcaagattgatggaagtggaacaactttgtaattgtagcttgtttcgtagatttcattctcttactagcgatataacacttgaattggcaaagatccgtgtctaaattttcagcaaaaaggtatccaatagtttttccttgaatacaatctaagagtttaaccgttaaattttctatccaagtattttttaaatttatccaataaaaaagatatcatgtgcaaatctataaatcttatattttatgcaagatagaaactttatttatttttagaattattattagcaatcttaaagattttatatggctgttatagaggggtaattttacaaaaagcgttctgctataaatatggttgttgctgttataggtaaaaagttgttataaaattgtttatgaaagtcactttactttattttttaactgaaaagtcactatactttgcacattgtaactcaaaagtcaatcaacacttttagggcgttattaaacattatttttcatatttcttttcagcccaaccatttaaaaaataaaaaaaaatatttaaatcatgactcgacggttccatgacctgacccattttctcttatttatgttataaaaaacataaatattactttgttgtagtgtattatattggttctcaatatagttatactaaatgtatacattggtttaagcaaagtattaaatagagaataaggaattaatcttaacaaactagaggagttagatttgaaactgaaacaagaaaattagtagcgttgaagtgaaaaaaaataaaaaggaggaagaaaaaataaaaaaagtatttatgcttgaaattttgactgagaaatattaatataagagtaaattaaaagacaatatccttgatgttttagaacaagaacgcgcattttagtaaagataatgttactagacgaccatttttagtcgaactaatttaatactttgcttaaatcaatatgttgaaaatcaagacaattaacagtaaagtaatatttacgtttttttgtaacaaaaataagagagtgggtcgagttaaagagcgggttgagtcacggtttaaatgggtatttttttattgtttaaatgattgagttaaaaaaaatatgaaaaaaaaaatttaatatggcctaaatgtattgagtgacttttgagttacaatgtgtaaagtatgatgactttccttttacaaaacaaagtaaagtgactttcataaacaattttcattagttcaatgacttctgagaaatggactccttaaaaaattgattctgaagaaaacttggtttttacggtgaatgactgttatatatgaatgttgttatcgaaaggtctgactgtatgtgacctagtttattgagacgtttttacattaaagccctttcgtatttacacttcaatatgcatcatacaaaaaatatgtgcttcataattatacattacattcatttctaactccacttttacaaaaaatattttaggtccattattctacaaaggatggtaccatttgttctatcaatacaatccagaggctgcagtatggggaaatattgtatggggccatgcagtttcaagagacttaattcactggcaacaccttccagttgctatggttgcggatcaatggtacgacattaacggtgtatggaccggatccgcaaccattttacccgatggtaaactcgtcatgttatataccgggtcaaccaacgagtcagtacaggttcaaaatctagcgtacccggctgacccatcggatcctctcctaagaaaatgggtcaaatatgagggcaacccggtacttgtaccaccacccggaattgctactaaagattttcgtgaccccaccactgcatggaccacaccacaaggcaaatggaggattactattggttcaaaggttaataaaactggaatttcattggtctatgacactattgattttaagaaatttgagttgttggatggggtgctccatggtgtaccgggtacgggtatgtgggaatgtgtggacttttacccggtttcgaaagttgttgaaaatgggcttgacacatcagataatgggcctgcagtaaaacatgtgttaaagtccagtctagatgatgatagaaatgattattatgcacttggaacttatgatgcagtggctggtaaatggattcctgataatcccacaattgatgttggtattggattaagatatgattatggaaatttttacgcatcaaaaacattttatgaccaagaaaaaaagagaagagtcctttgggcttggattactgaaggtgatagtgaagctgctgatatttgcaaaggttgggcatcacttcaggtacaattcaattgtgtcgaagacaatttagctagtgttgggatatagatttggttgaaacttaaaaaaaaaaatatttaaaattatggacatgtattttatttgaaaaaaattaaaattctgtgagtggaagaaaaccttttacccaaaaactaccctaaaccagattttgggaatgtaaaaaaaagaatcagatcatattctatgaacaaacaatattatcaaaagttttttaaaaacaattttcaaaatctatggtcaatttcctcttttattttacttcattttgtcatatttgaattttggtctcatttaacacttggtaacgtgtgatgtaaaacagcctattccaaggactataaaatatgacaagaagacaggaagcaacataattacttggccagtggcggaggttgagaatttgagattaaacagtaaggaattcgacaaggtggaggtaaaaccagggtcagtttttccactagaagttggcactgccactcaggtttgttgattgaatttaactatacacgtgtaaaagaatttctttacgttatcggtctattttaaactattatagcacgtaacatgctaatattcgataagtttaacttactataatttgaattgttgatgattatagttggacataatggctgagtttgaaatagaccctaaggtcttggagagattagaaggaaataatgctacatatgagtgcagaagcagtgggggatctgctgaacgtggtgccttaggaccatttggtttattggttttaacagataagggcttgtccgagcaaactccaatttacttctacattgcaaaagacgctgctggaaatttcaccacattcttctgcaatgatcttaccaggttctaatttctcctctcttgcattttcatctcatcaatgaagttttagcccctcccccccaccaaaaccaaactaagaaattggagaaaaacctttattggttcactgcttaatagcagtacggaattcaggattttgagtcattaggttctgctctatatatatatatataataatatttttctacacatatatatagttcgagctaaacataatgagttccgtcgaacctgttgcatctagtctgaatccgccactgctttaacacatctttctcataataaccactatttccaagagcttaagtatttctcatgtccatacttctatccacgtttaaaaatgaagtcagattttgttttatatccgagaaatcccgagggcaagtggccagtacatggttcgaagctcaatggacactggcaccgccctttatcgtgctctacttaaatattaagattttgtctgttgcagggttttaaccaaggacgtacgtttaacccatatataacgagtagcttttaccactagaccaaaactcggggcaatatatgaagccagatatttgttgcaattctctttaattaaattaaaatggtgacaagatccgagacaaatcttggaagtgcattacgtagtatttttaagtaagtatgataatggtgattctcatctttttacttccttttttttaggtcatctgaagcaacagatgttcgcaaactaatctacggaagcacagttccagtcctccaaggagagaagctttctctaagaacactggtaattttcatttttcttctttttttaattgcttattcaaaattcttgattatattgcgtacacttaagtttaccaaatataaattaatggggtatttttgtgaatgtaataggtggatcattcaatagtagaaagttttgcacaaagtggaaggacagcaataacgtcaagggtatatccaacaaaggcaatatatgaagatgctaagctctacttatttaacaatgctacagatgttagcattactgcctcactcaagatttggcaaatgaattctgcaaatatacaatctagttaa

SEQ ID NO 4: полипептидная последовательность NtINV3-T

MAETNNSVPYTQLPAEDNNTSSNSPAKCRRRPKRVSFIVLTGLVAALLLFVAVKYGNNEAEDVNPGPVPPQETVCNMLGSNLMPLTTMRTVARGVAEGVSAKSRGRFLGLRPFPWTKQMLAWQRTSFHFQPKKNWMNGPLFYKGWYHLFYQYNPEAAVWGNIVWGHAVSRDLIHWQHLPVAMVADQWYDINGVWTGSATILPDGKLVMLYTGSTNESVQVQNLAYPADPSDPLLRKWVKYEGNPVLVPPPGIATKDFRDPTTAWTTPQGKWRITIGSKVNKTGISLVYDTIDFKKFELLDGVLHGVPGTGMWECVDFYPVSKVVENGLDTSDNGPAVKHVLKSSLDDDRNDYYALGTYDAVAGKWIPDNPTIDVGIGLRYDYGNFYASKTFYDQEKKRRVLWAWITEGDSEAADICKGWASLQPIPRTIKYDKKTGSNIITWPVAEVENLRLNSKEFDKVEVKPGSVFPLEVGTATQLDIMAEFEIDPKVLERLEGNNATYECRSSGGSAERGALGPFGLLVLTDKGLSEQTPIYFYIAKDAAGNFTTFFCNDLTRSSEATDVRKLIYGSTVPVLQGEKLSLRTLVDHSIVESFAQSGRTAITSRVYPTKAIYEDAKLYLFNNATDVSTASLKIWQMNSANIQSS

SEQ ID NO 5: полинуклеотидная последовательность NtINV4-S

atggccacccaccattcccattatgacccggaaaactccacgacccattacactgtcctaccggatcaacccgaatccgccggcgccgggcgccggaagtctcttaaagttgtctccggcattttgctctcctctttctttttgctttctttagtctttgtgatcctcaaccagtcttcagatttatcacaagaaaactcccgctcgtcggagactttgacgccggcgttgtcacgaggtgtatctcagggagtttccgagaagactttcaaggatgtttccggtagaagcctttcgtactacccgtggactaatgctatgcttacttggcaaaggactgcttaccattttcaacctcaaaagaattggatgaacggtaaattttttggcttatctttctcttattaattcttttaataaaacatgaattttaagatacttatactggctttttcttattgattcttatggctattttgttggggtatcctatggattctgattggatgatatgctgcagatcctaatggtgagtttacttattaccataattactttttattatttattattcccaaaccatgattagtgcatccggctattggttaaagattcacaaaaccaataaaatagtaatcttgtcatagtttccataataatctacacgtacgctattgtttaatgacaagaaatttgacgctcagcatagttaattctctcatatttgtattgtttactttatagcctttgagctaattaattctgggtttctttgaactaaacctttataagttacaatcacacatagatgagttggcacattattcaggctaataatgaaagaaattggattacttgactaatatggcaaatgcggccaatttaatttggattaacacgatatatgtgtggtaataatgcttttgtgcaacatctctcatacaaggacacatgattaggtgattttgtaccaagtctcgggaccaatcacaatatatgggtcacaccttatatattattgtaagagttgggacccaccaaggatttgtctgtctttccaactagccacttgtctttttctcttttttatatttttaaatgaaatggtgtgggttttttatttttgggtcgatctaaccgcttctgcctattatcaatttagccttgtgattgtgagaatagaagagagaaatagaggataataataataaggataagaattaagaacgtaccttcttattgtcgaaattatttgagaagactattcattgttctgattagtgtccatcgatgtccctttcctcctttttctatcttggagaggtttcctcttctttgttttacttttcctttttctaaatatgcattccaaaatcttaacactactcgaacgtccattcttggaaagtctctttgaaagtttagggcaacatcattcggacaacttaattagcattcactattaaaaattaatagaacagaaaagttcatgtatttttttagggagagtaagaggcggattcagaatttaaatcttatgtgtttagtttttaaaatttttaggattgataactgaacatggcgagaaacatgaacatgtgacataaattccgtgtttcaacactaaacaggtccattataccacaaaggatggtaccatcttttttatcaatacaatcctgattcagctgtttggggaaatatcacatggggccatgcaatatccacggacttgatccactggctttacttgcctttcgccatggttccgatcaatggtacgatatcaacggtgtctggaccgggtccgcgaccatcttgcccgacggtcagatcatgatgctatacaccggtgataccaatgattacgtgcaggtgcaaaatcttgcataccctgctaacttatcggatcctctcctcatcgactgggtcaagtaccaggacaatccggtcatggttcccccacccggcattggtgtcaaggacttcagagacccgacaactgcttggaccggaccccaaaacgggcagtggctgctaaccatcgggtccaagattggtaaaacgggtattgcacttgtttatgatacgtccaacttcacaaactttaagctattggatggagttttgcatgcggttccgggtacgggtatgtgggagtgtgtggacttttacccggtatcaaccgttgaggcaaacgggttggacacatcatataacgggccaggtataagcatgtgttaaaagcaagtttagatgacgataagcatgattactatgctattgggacatatgacccggtaaagaacaaatggactcctgataacccggaattggatgtgggtatcgggttgagactggactacgggaaatactatgcgtcaaagacattttatgacccgaaagaacaaagaagaatattgtggggatggattggagaaactgacagtgaagctgctgatctgctgaagggatgggcatctgtacaggtatggactcttttaagtacactacctcagcatccgaagagcattacacttttatttttgttttacattagaccacatgaatgggtgttttggcataactggtaaagttgttgccatgtgaccctgaggtcacgggttcgagccgtagaaatagcctcttgcagtaatgtaataaactcttagtgcatagggttgccttttttattagaccacacacatgttcaagttatgtcatgttagtcgtgtcaattttttgtggaaatcaatttactgcacctcaatcttgaattagttgagactagctataggaacctttgtattgagaggacttatcataatttgatcatttttgcactaactgtcacactatgatattcactttctttatccagtttagtagtgtgccaatacaccttaagcacgtgacaagaatttattagcagggtcatctcgattttatgtaggagtacagaattgaattgaatcttttcttctagtaaattctcaattgcaacttgacaatgaagtttttcagatgcaaaaaagatgaaatatctctaataatttccttttccaataacagagtattccaaggactctgctttatgacaaggagacaaggacacatgtacttcagtggccagttaaagaaattgagagcttaagaattggtgatcctctagtgaaacaggtcaatcttcaaccaggctcaattgagcttgtccatgttgactcagccgcacaggtttgctttctcatccttcgaaattgaaaacgtttcacttatatgtgcttgatgtacagtcctaaaacttgtatgcgcaatggtgcagttggatgtagaagcctcatttgaagtggacaaagcagcactcgcgggaacaattgaagcagatgtggtttcaactgcagtactagtggaggtgctgctaaaagaggcattttgggaccatttggtgtcgttgtaattgctgatcaaacgctttctgagctaaccccagtttacttctacattgccaaaggaactggtggccgagctgaaacctacttctgcgctgatgaaactaggtttgcttctactatgtttatcttgtatactctatcttaatagtccttgtcaaagtatagaggaataacatagcggcgtgatctgatgcagatcctcagaggctcctggagttgctaaacaagtgtatggtagttcagtaccagtgttagatggtgaacaacactcaatgagattattggtaagtgataatccctttattctgactttcttcaaatcaagaataatatcaagcttattagttcttccagtcatcttacttaatttgtggaaatgctccaaagtagtcaatttggtaactattcaagataatgtggttcagaataatttgtgttatgaatgtatttgacagttgggatgatctgttttttagtaaaatttcttaaaaacttaattcaggtggaccactcaattgtggaaagctttgctcaaggaggaagaacagtcataacatcgcgaatttacccaacaaaagcaatcaatggagcagcacgactgttcgttttcaacaatgccaccggggctagtgtgactgcctccctcaagatttggtcactcaaatcagctgatattcgatccttccccttggaccagttgtaa

SEQ ID NO 6: полипептидная последовательность NtINV4-S

MATHHSHYDPENSTTHYTVLPDQPESAGAGRRKSLKVVSGILLSSFFLLSLVFVILNQSSDLSQENSRSSETLTPALSRGVSQGVSEKTFKDVSGRSLSYYPWTNAMLTWQRTAYHFQPQKNWMNDPNGPLYHKGWYHLFYQYNPDSAVWGNITWGHAISTDLIHWLYLPFAMVPDQWYDINGVWTGSATILPDGQIMMLYTGDTNDYVQVQNLAYPANLSDPLLIDWVKYQDNPVMVPPPGIGVKDFRDPTTAWTGPQNGQWLLTIGSKIGKTGIALVYDTSNFTNFKLLDGVLHAVPGTGMWECVDFYPVSTVEANGLDTSYNGPGIKHVLKASLDDDKHDYYAIGTYDPVKNKWTPDNPELDVGIGLRLDYGKYYASKTFYDPKEQRRILWGWIGETDSEAADLLKGWASVQSIPRTLLYDKETRTHVLQWPVKEIESLRIGDPLVKQVNLQPGSIELVHVDSAAQLDVEASFEVDKAALAGTIEADVGFNCSTSGGAAKRGILGPFGVVVIADQTLSELTPVYFYIAKGTGGRAETYFCADETRSSEAPGVAKQVYGSSVPVLDGEQHSMRLLVDHSIVESFAQGGRTVITSRIYPTKAINGAARFVFNNATGASVTASLKIWSLKSADIRSFPLDQL

SEQ ID NO 7: полинуклеотидная последовательность NtINV4-T

atgatgttatacaccggtgataccaatgattacgtgcaggtgcaaaatcttgcgtaccccgccaacttatcggatcccctcctcatcgactgggtcaagtaccggggcaacccggtcatggttccaccacccggcattggtgtcaaggactttagagacccaacgactgcttggaccggaccacaaaacgggcagtggctgcttaccatcgggtccaagattggtaaaacgggtattgcaattgtttatggtacttccaacttcacaaactttaagctattggatggagttttgcatgcggttccgggtacgggtatgtgggagtgtgtggacttttacccggtatcaaccgatgaggcaaacgggttggacacatcatataacgggccaggtataaagcatgtgttaaaagcaagtttagatgacgataagcatgattactatgctattgggacatatgaccggtaaagaacaaatggactcctgataacccgcaattggatgtgggtatcgggttgagactggactacgggaaatactatgcgtcaaagacattttatgacccgaaggaacaaagaagaatattgtggggatggattggggaaactgacagtgaagctgctgatctgctgaagggatgggcatctgtacaggtatggacacttttcaagtacactacctcagcttccgaagagcattacacatttatttttgtattacattagggtgccttggcgtaactctggtaaagtaagttctgaattgcaacgtgaaaatggaggtttttagatgcaaagagatgatatatccctaatagttttcctgttttaataacagagtattccaaggactgtgctttatgataaggagactaggacacatgttcttcagtggccagttaaagaaattgagagcttaagaattggtgatcctctagtgaaacgggtcaatcttcaaccaggctcaattgagctagtccatgttgactcagccgcacaggttgctttctcatccttggaaattgaaaacgtttcacttatatgtgcttaatgtgcagtcctaaaacttgtatgtgcaatggtgcagttggatgtagaagcctcatttgaagtggacaaagcagcactcgagggaacaattgaagcagatgttggtttcaactgcagtactagtggaggtgctgctaaaagaggcattttgggaccatttggtgtcgttgtaattgctgatcaaacgctttctgagctaactccagtttacttctacattgccaaaggacctgatggccgagctgaaacctacttctgtgctgatgaaactaggtttgcttctactatgtttatcttgtatactctatcttaatagtccttgtcaaagtatagatgaataacatagcggcgtgatctgatgcagatcctcagaggctcctggagttgctaaacaagtgtatggtagttcagtaccagtgttagatgatgaacaacactcaatgagattattggtaagtgataatcccgttattctgaccttcgtcaaatcagaataatatcaagcttattagttcttccagtcatcttattaaatttatggaaatgctccaaagtagtcaatttggtaactattcaagataatgtggttcagaataatttgtgttatgaatgtatttgacagttgggatgatctgtgtttttgagtaaaatttcttaaaactgaactcaggtggaccactcaattgtggagagctttgctcaaggaggaagaacagtcataacatcgcgaatttacccaacaaaggcaatcaatggagcagcacgactgttcgttttcaacaatgccacgagggcaaggtgactgcctccctgaagatttggtcactcgaatcagctgatattcgatccttccccttggaccagttgtaa

SEQ ID NO 8: полипептидная последовательность NtINV4-T

MATHHSHYDPENSTTHYTVLPDQPESAGSGHRKSLKVVSGILLSSFFLLSLVFVIVNQSSDLSQKNSHSSETLTPALSRGVSQGVSEKTFRDVSGGSLSYYPWTNAMLTWQRTAYHFQPQKNWMNGPLYHKGWYHLFYQYNPDSAIWGNITWGHAISTDLIHWLYLPFALVPDQWYDINGVWTGSATFLPDGQIMMLYTGDTNDYVQVQNLAYPANLSDPLLIDWVKYRGNPVMVPPPGIGVKDFRDPTTAWTGPQNGQWLLTIGSKIGKTGIAIVYGTSNFTNFKLLDGVLHAVPGTGMWECVDFYPVSTDEANGLDTSYNGPGIKHVLKASLDDDKHDYYAIGTYDPVKNKWTPDNPQLDVGIGLRLDYGKYYASKTFYDPKEQRRILWGWIGETDSEAADLLKGWASVQSIPRTVLYDKETRTHVLQWPVKEIESLRIGDPLVKRVNLQPGSIELVHVDSAAQLDVEASFEVDKAALEGTIEADVGFNCSTSGGAAKRGILGPFGVVVIADQTLSELTPVYFYIAKGPDGRAETYFCADETRSSEAPGVAKQVYGSSVPVLDDEQHSMRLLVDHSIVESFAQGGRTVITSRIYPTKAINGAARLFVFNNATRSVTASLKIWSLESADIRSFPLDQ

SEQ ID NO 9: нуклеотидная последовательность, используемая для сайленсинга NtINV4-T и NtINV4-S

ggtttcaactgcagtactagtggaggtgctgctaaaagaggcattttgggaccatttggtgtcgttgtaattgctgatcaaacgctttctgagctaac

SEQ ID NO: 10: полинуклеотидная последовательность NtSUS1-S

atggcagctagtggtcttagcattaagaaaagtttggaggaatccattttggctcatccagatgaaattttggctctcaagtcaaggtacattactacatataatgatattaagaactagaggcttatccaaggttttgttacatttttgaaattataagtttagaacctaatagtacttggtagcacttgtttccttattatctagctgttgttactgcttgttgctactgctttctgttcatctttccttgagcccggtctatcggaaacaacctctctattctcaaagtataaggtttgcgtacatactacctccccagactctacttgtggaatttactgtttttgttgtgttgttgtaatctaatatttattagaattttactgatttttcacatatatatatctatgtcccctgtcgaaaattctatagctcatgttagctaaatacattagtaccattgtttttaattgttttggttttggcacaggattgaaactgaagggaaaggggtaatgaaaccacttgatctcttgaaccatttggtttctgttactagtaagacaaatggagtaaatattgtacctagtgcacttgtggaagttctcagttgcagccaagaagctgtgattgtaccaccaaaactagcactagctgtacgtccgaggcccggtgtatgggagtacttgtcactgaatcttaagacaaagaaagtggctgaattaagcattcctgaataccttcaattgaaagagaacactgttgatgaaaggtaaagtattagtctgcgatttcgctttgtgaaattgaagtttttgttttgattcataatgttttgtgtatcaattatgttaccagtggaaacatattggagttggattttgagccatttacaacagttacaccaccaaaaacactttctgactctattggcaatggtttggagtttcttaatcgccacattgcttcgaaaatgtttcatgataaggagatttccagatgcctccttgacttcctcagaaaccataactacaaaggaaaggtaataaaaaaaagtgtttctttaaacaagttgtatgattatgtgtatatttctaagtatgttaacttgaaaacagtcattgatggtgaaagaaagcattcaaagcctagagagtttccaacttgttctgaaaaaagcagaggaacatttgtgcacattgaatccagaaactccatactccaattttgaatcaaagtttgaagagattggcttggaaagagggtggggaaacaccgctgaacgcgtgcaagacactatcagtcatcttttgcatctccttgaggctcctaacgcgtcttctttggaaaatttccttggtagaatcccattggttttcaatgttgtgattctaactccacatggttattttgctcaagataatgtcttgggctatcctgacactggtggccaggtttgtgtccaatattttgcattcttgatcaagttctttataccatttgaaccaacaatcttnaacattctttttttggttgtgaaatgttgaataggttgtttacattcttgatcaagttccagctatggagcgtgagatgcttcatcgtatgaagcttcaaggactcgatgatatcatccctcgcatccttgttgtaagtggccttaattttcctagtttcatttacacctctaaatgaaattgatcttttttgttgttttatatcaggtaacaaggctgctgcctgatgcagtaggaaccacctgtggcgagcggatggagaaagtatatggggcagaacattctcatataattcgtgttccatttagaactgagaagggaatgttgcgcaaatggatctcacgattcgaagtctggccatacatggaaactttcactgaggttggaacataaaaacaaataaaatccattggaatgttccttctgcaattgaaaatgtcttgctaactgaagacccatttttaaattgatcatcaggatgttgcagaagaacttgtcaaagaattgcaagctaaaccagacttgatcattggaaactacagtgagggaaatcttgctgcctctttgcttgcgaagaaatttggggctactcagtgtactattgctcatgccttggaaaaaactaagtatccaaactctgaccttaattggaagaagtttgatgacaagtatcatttctcaagtcagttcactgctgatctctttgccatgaatcacactgatttcatcatcaccagcactttccaagaaattgctggaaggtaaaagcaaatgcacaccatcatagtatttcatatttttacccttgtttatactatttccattcaccgaccccgacttgtttaggattgagccatagttgttgttgttgtttgtttatactatttccatttgccgaccacaacttgtttaggactgaggtatagttgttgttgttggtttgttcatattattttcattcgctaaccctaacttgtttgggactgaggcatagtagtagtagtagttgttgctattagtttatactatttccatttgccaaccccaacttgtttggtactgagacatagttgttgttgttgttgtttgtttatactatttccatttgccgaccccaacttgtttaggactgaggtatagttgttgttgttggtttgttcatattattttcattcgctaaccccaacttgtttgggactgaggcatagtagtagtagtagtagttgttgctattagtttatactatttccatttgccaaccccaacttgtttggtactgagacatagttgttgttgttgtttgtttatactatttcaatttgtcgaccccaatttgtttgggaccaaggcatggttgttgttgttgtttgtttgtttttactgtttccattgatattggaacatttgttatttgcagcaaaaacactgtaggacagtatgagagtcatactgcttttaccatgcctggattgtaccgagtagtccatggaatcgattcgtttgatccaaagttcaacattgtctcccctggggctgatatgtcaatctacttcccttacactgagaaggagaaaaggctaaccaacttccacccggaaattgaagaactcctctacagtcctgttgagaataaggaccacttgttagtctccttaatttgcttttatttcatcccatttatgatcgcttttatcccaacagatcgattaatcatttgttatcaacataaacagatgtgtgttgaaggaccggaacaagccaattctctttaccatggcaaggctagatcgcgtgaagaatctaacagggctcgtggaatggtatgctaagaatgcaaggctgagggagcttgttaaccttgtggttgtaggcggagacagaaggaaagaatccaaagatttagaagagcaagcagagatgaagaagatgtatgatcttatcgaaacctataacctgaacggccaattcaggtggatttcttcccaaatgaatcgtgtgaggaacggagaactctatcgttacattgcagacacgaggggtgctttcgttcaaccagcattctacgaggcttttggtttgacagttgtagagtctatgacttgtggtttgccaacttttgctacttgtaatggtggaccatttgagattatagtgaatggaaaatctggtttccatattgatcctaatcaaggtgacaaggctgctgatatgttggtaaatttctttgaaaaatctaaagaagatccaagttattgggatgctatttccaagggaggtctgcaacgtattcttgaaaagtaagcttttgcatttgattagcacaagtgcacaaccaagatttaacttttgaacaaactaaaactaacccttttttgtattttcttttgctaggtatacatggcaaatttattcacagaaagtgatcacactatctgggatttatggattctggaagtatgcaaccaagaatgataaagttgctagtgcaaagaagcgctatcttgagatgttttatgaacttggatttaagaaatcagtaagtgtcaattttaaaggggaaccttggatcaacggttaagttgtctttgtgcaacctataggtcaggggtttgagccgtagaagtagccactaatatttacattagggtagactgtgtacatatcacaccccttggggtacggccctttcctggatcctgtatgaacgcgggatgccttgtgcaccgggctgtatttttttttttagtgtcacttctgtattttgtttgagcttgtttataaagtttggaaatctgctgctaatttgtatatttgttggttgtgtatttcaggctgagaaagttccattggctattgatgaatag

SEQ ID NO: 11: полипептидная последовательность NtSUS1-S

MAASGLSIKKSLEESILAHPDEILALKSRIETEGKGVMKPLDLLNHLVSVTSKTNGVNIVPSALVEVLSCSQEAVIVPPKLALAVRPRPGVWEYLSLNLKTKKVAELSIPEYLQLKENTVDESGNILELDFEPFTTVTPPKTLSDSIGNGLEFLNRHIASKMFHDKEISRCLLDFLRNHNYKGKSLMVKESIQSLESFQLVLKKAEEHLCTLNPETPYSNFESKFEEIGLERGWGNTAERVQDTISHLLHLLEAPNASSLENFLGRIPLVFNVVILTPHGYFAQDNVLGYPDTGGQVVYILDQVPAMEREMLHRMKLQGLDDIIPRILVVTRLLPDAVGTTCGERMEKVYGAEHSHIIRVPFRTEKGMLRKWISRFEVWPYMETFTEDVAEELVKELQAKPDLIIGNYSEGNLAASLLAKKFGATQCTIAHALEKTKYPNSDLNWKKFDDKYHFSSQFTADLFAMNHTDFIITSTFQEIAGSKNTVGQYESHTAFTMPGLYRVVHGIDSFDPKFNIVSPGADMSIYFPYTEKEKRLTNFHPEIEELLYSPVENKDHLCVLKDRNKPILFTMARLDRVKNLTGLVEWYAKNARLRELVNLVVVGGDRRKESKDLEEQAEMKKMYDLIETYNLNGQFRWISSQMNRVRNGELYRYIADTRGAFVQPAFYEAFGLTVVESMTCGLPTFATCNGGPFEIIVNGKSGFHIDPNQGDKAADMLVNFFEKSKEDPSYWDAISKGGLQRILEKYTWQIYSQKVITLSGIYGFWKYATKNDKVASAKKRYLEMFYELGFKKSAEKVPLAIDE

SEQ ID NO: 12: полинуклеотидная последовательность NtSUS1-T

atggcaggcagtggtcttagcattaaggaaagtttggaggaatccattttggctcatccagatgaaattttggctctcaagtcaaggtacattactgcataatgatattaagacctagaagcggatccaagattttgttacatttttgaaattataagtttagaatctaatatttgttatcgcttgtttccttattatcttgctgttgttactgcctgttgctactagtttctgttcatccttccttgagctgagtttctatcggaaacaacctctctactctcaaagtaggaataagttatgcgtacacactaccctccccagactccacttgtgtaatttactgagtttgttgttgttgttgttgtaatctaatacttgttagaattttactgatttttcacatatatatctatgacccatgtcgaaaatactatagctcatgtgctaaatacattagtaccattgttttgtaattgttttggttttggaacaggattgaaactgaagggaaaggggtaatgaaaccagttgatctcttgaaccatttggtttctgttactagtaaaacaaatggagtaaatgttgtacctagtgcacttgtggaagttctcagttgcagccaagaagctgtgattgtaccaccaaaactagcactagctgtacgtccgaggcccggtgtatgggagtacttgtcactgaatcttaagacaaagaaagtggctgaattgagcattcctgagtaccttcaattgaaagagaatactgttgatgaaaggtaaagtaatagtctgcgatttcgctttgtgaaattgaagttttttgtttgattcttaatgttttgtgtatcaattatgttaccagtggaaacatcttggagttggattttgagccatttacaactgttacaacaccaaaaacactttctgactctattggcaatggtttggagtttcttaatcgccacattgcttcgaaaatgtttcttgataaggagattgccaagtgcctccttgactttctcagaaaccataactacaaaggaaaggtagtaaaaaaagtgtttctttaaacaagttgtatgattatgtgtgtatttctaaatatgtcaatttgaaaacagtcattgatggtgaaagaaagcattcaaagcctggagagtttccaacttgttctgaaaaaagcagaggaatatttgcacacactgaatccagaaactccatactccaaatttgaatccaagtttgaagagattggcttggaaagagggtggggaaacaccgctgaacgcgtgcaagacaccattagtcatcttttgcatctccttgaggctcctaacgcgtcttccttggaaaatttccttggtagaatcccattggttttcaatgttgtgattctcaccccacatggttattttgctcaagataatgtcttgggctatcctgacactggtggccaggtttgtgtccgatataacatatcaagaaattttgcattcttgatcatgttctttataccatttgaaccaacattctttttttggttgtgaaatgttgaataggttgtttacattcttgatcaagttccagctatggagcgtgagatgcttcatcgtatgaagcttcaaggactcgacgatatcatccctcgcatccttgttgtaagtgcccttaattttcctggtttggtttacctctaaatgaaattgattttctggctttctaacttttttggattgatctttttgttgttttatatcaggtaactaggctgctgcctgatgctgtaggaaccacttgtggcgagtggatggagaaagtatatggggcagaacattctcatataattcgtgttccatttagaactgagaaaggaatgttgcgcaaatggatctcacgattcgaagtctggccatacatggaaactttcactgaggttggaacataaaaacaaataaaaatcattggaatgttcttctgcatttgaaaatgtcttgctaactaaagactcatttttaaattaatcatcaggatgttgcagaagaacttgtcaaagaattgcaagctaaaccagacttgataattggaaactacagtgagggaaatcttgctgcctcattgcttgctaagaaatttggggctactcagtgtactattgctcatgccttggaaaaaactaagtatccaaactctgaccttaattggaagaagtttgatgacaagtatcatttctcaagtcagttcactgctgatctttttgccatgaatcacactgatttcattatcaccagcactttccaagaaattgctggaaggtaaaagcaaatgcacaccatcatagtatttcatatttttaccctagtttatactatttccatttgtcaactccaacttgtttgggattgaaccatagttgttgtttgtttatactatttccattcgccgaccccaacttatttgggactgagacataattgttgttattattgtttgtttgtttatactatttccattctcagaccccaacttctttgggactgagccgtagattgttgttgttgttgttgttgttgtttgtttatgctatttccgttcaccgaccccaacttatttgggactgaggtgtagaagtagtcgttgttgtttgtttatacgacttccaattgatattcgaatgtttttatttttgcagcaagaacactgtaggacagtatgagagtcatactgcttttaccatgcctggattgtatcgagtagtccatggaatcaattcgtttgatccaaagttcaacattgtctcccctggggctgatatgtcaatctacttcccttacactgagaaggagaaaagactaaccaacttccacccggaaattgaagaactcctctacagtcctgttgagaataaggaccacttgttagtcttctttatttcattcatttttctacaccttttttttcaacagattgattgattggttcttatcaacgtaaacagatgtgtgttgaaggaccagaacaagccaattctctttaccatggcaaggctagatcgcgtgaagaatctaacagggctcgtggaatggtatgcaaagaatgcaaggctaagggagctcgttaaccttgtggttgtaggcggagacagaaggaaagaatccaaagatttagaagagcaagcagagatgaagaagatgtatgatcttatcgaaacatacaacctgaatggccaattcaggtggatttcttcccaaatgaatcgtgtgaggaacggagaactttatcgatacattgcagacacgaggggtgctttcgttcaaccagcattttatgaggcatttggtttgacagttgttgagtctatgacttgtggtttgccaacttttgctacttgtaatggtggaccatttgagattatagtgaatggaaaatctggtttccatattgatcctaatcaaggtgacaaggctgctgatatgttggttaatttcttcgaaaaatctaaagaagatccaagttattgggatactatttccaagggtggtctgcagcgtattcttgaaaagtaagcttttgcatttgattagcacaagtgtacaaccaagatttaacttatgaacaaactaaaactaaccctttttttattttcttttgctaggtatacatggcaaatttattcacagaaagtgatcacattatctgggatttatggattctggaaatatgcaaccaagaatgacaaagttgctagtgcgaagaagcgctatcttgaaatgttttatgaatttgggtttaagaaatcagtaagtgtcacttctgtattttgtttgagcttgtttgtaaagtttggcaatcttctgctaatttgtactatatttgttgacttgtgcatttcaggctgagaaagttccattggctattgatgaatag

SEQ ID NO: 13: полипептидная последовательность NtSUS1-T

MAGSGLSIKESLEESILAHPDEILALKSRIETEGKGVMKPVDLLNHLVSVTSKTNGVNVVPSALVEVLSCSQEAVIVPPKLALAVRPRPGVWEYLSLNLKTKKVAELSIPEYLQLKENTVDESGNILELDFEPFTTVTTPKTLSDSIGNGLEFLNRHIASKMFLDKEIAKCLLDFLRNHNYKGKSLMVKESIQSLESFQLVLKKAEEYLHTLNPETPYSKFESKFEEIGLERGWGNTAERVQDTISHLLHLLEAPNASSLENFLGRIPLVFNVVILTPHGYFAQDNVLGYPDTGGQVVYILDQVPAMEREMLHRMKLQGLDDIIPRILVVTRLLPDAVGTTCGEWMEKVYGAEHSHIIRVPFRTEKGMLRKWISRFEVWPYMETFTEDVAEELVKELQAKPDLIIGNYSEGNLAASLLAKKFGATQCTIAHALEKTKYPNSDLNWKKFDDKYHFSSQFTADLFAMNHTDFIITSTFQEIAGSKNTVGQYESHTAFTMPGLYRVVHGINSFDPKFNIVSPGADMSIYFPYTEKEKRLTNFHPEIEELLYSPVENKDHLCVLKDQNKPILFTMARLDRVKNLTGLVEWYAKNARLRELVNLVVVGGDRRKESKDLEEQAEMKKMYDLIETYNLNGQFRWISSQMNRVRNGELYRYIADTRGAFVQPAFYEAFGLTVVESMTCGLPTFATCNGGPFEIIVNGKSGFHIDPNQGDKAADMLVNFFEKSKEDPSYWDTISKGGLQRILEKYTWQIYSQKVITLSGIYGFWKYATKNDKVASAKKRYLEMFYEFGFKKSAEKVPLAIDE

SEQ ID NO: 14: полинуклеотидная последовательность NtSUS2-S

atggctgaacgtgctctgactcgtgttcacagccttcgtgaacgtcttgatgccactttggctgcacatcgcaatgagatattgctgtttctttcaaggtattgcctaagtagtgttcttgtttcctacaaaagattcagttggtgttcaaaaaacgatatgtgatttgatttatctgcctaagtcttggtagtcataattatccggtacctgtgctggtgcgagttagctggttcggaaactactcttatgaaaacgagagatttagttggtgttgtctgcaattctgtagtatggactattaagcagatagatcatgtttgatatcgaaaaggaatgtatatgtgatgttacttgaactggttttggttattacaggattgaaagccatggaaaagggatcttgaaacctcaccagctattggctgagttcgatgcaattcgccaagatgacaaaaagaagctgaatgatcatgcatttgaagaactcctgaaatctactcaggtaattttgattttggctaaatgtgttaccaagctgaatgatcatgcatttgagtttgtgtccgactactacaatgatatgttataccaggaagcgattgttctgccaccttgggttgcacttgccattcgtttgaggcctggtgtgtgggaatatgtccgtgtgaatgttaatgctctagtcgttgaggagctgaccgtccctgagtatttgcattttaaggaagaacttgttgatggaacgtaagttttagtctcttatttgatactatgttagagaataggcagtggattcaatttatcagtgttgttttttacctaatgcagctccaatggaaatttcgttctcgagttggattttgagcccttcactgcatcctttcctaaaccgaccctcaccaaatctattgggaatggagttgaattcctcaataggcacctttctgcgaaaatgttccatgacaaggaaagcatgaccccgcttcttgaatttcttcgggttcacaattataagggcaaggtaactttgttattcccattcatatatatgttcagtttgtgcttatcatgcgcccaatgatgtatgaatatgtactaaaggatagatgtacgatttcgtttgcagacaatgatgctgaatgacagaatacagaatttaaccactctgcaaaatgtcctaaggaaggcagaggaataccttattatgcttccccctgaaactccattttccgaattcgaacacaagttccaagaaattggattggagaagggatggggcgacactgcggagcgcgtgctagagatgatatgcatgcttcttgatctacttgaggctcccgactcctgtactcttgagaagttcctagggagaattcctatggtgttcaacgtggttatcctttccccccatggatatttcgcccaggaaaatgtcttgggttatcccgacactggtggccaggtgcattactttagtctttgtccgtgagtctatgttgctcagatcctctacaatgccactgtacccgtgtaggatactccaaatataatgcatttttggaggatctgtcaccggtgcaatggcattttggaggtcggagcaacaaacaactgctagtatgcttctaaagcttgcttccataaatgctaaggtccttcacccgtaatgtgcaggttgtctacatattagatcaagttccagccttggagcgtgaaatgcttaaacgcctaaaggagcaaggacttgatataacaccgcgtattcttattgttagtatttcttgtacttgtaattgctgcggattacacaaaattttctctttattggcaacttatcttgatattattcccaggttactcgtctgctgcctgatgcagttggaacaacttgtggtcagcggcttgagaaggtgtatggagccgagcactcacatattcttagggtcccctttaggaccgagaagggcattgttcgcaaatggatatctcgctttgaagtgtggccatacatggagactttcactgaggtgacactaagcttccttgtatttgtctatcttctaattggtattaggaacaatttgctaattattaacgctttggcttttcgtacatcaggatgttgcaaaagaacttgctgcagaactgcaggccaagccagatttgataattggcaactatagcgagggaaatcttgtggcttcattgctggctcacaagttaggcgtaacgcaggtctgtgttatttttcacctcttataaatctgattgtatttccattagtctggaactaaaagtactaaaattttcttttcttcgctgtgttatttgccttctgcagtgcaccattgcccatgcattggagaaaacaaagtatcctgattctgacatctactggaaaaaatttgacgaaaaataccatttctcgtcccagtttaccgctgatcttattgcaatgaatcacaccgattttatcatcaccagcactttccaggagatagcaggaaggtataacatcaattgctaattcggttgcagtaacattttgttcgatttcttccccttatgcttaacctaataccctaatgaattttccagcaaggacactgtcggacagtacgagagtcaccaggcattcacaatgcctggattgtacagagtcgttcacggcattgatgtgttcgatcccaaattcaacattgtctcacctggagctgatataaacctgtatttcccatattccgagaaggaaaagagattgacagcacttcacccagaaattgaggagcttctgtacagtgatgttgagaacgaggaacatctgtaagtttctaacttactcgtaccgtcagtggcagagccagaattttcattaaaatggggtcaaaatataaagacataaattcacaaagaagccaaggggtgtcaatatgtagtataaatatattaaaaaaattacctagctacacaatgtaattttccgacaaaggggtatcggttgcacttcttgaatacatgtggctctgccactgggtacagttacaaagtcctgttacctatgtagatgagcttgtgctgaacatgttgtgattttggtaggtgtgtgctaaaggacaggaataagccaatcttattcacaatggcgagattggatcgtgtgaagaacttaaccggacttgttgagtggtacgccaagaacgcacggctaagggagttggttaaccttgttgtcgttggtggagaccgaaggaaggaatccaaagatttggaagagcaagcagagatgaagaagatgtatgagctaataaagactcacaacttaaatggccaattcagatggatttcttcacagatgaaccgagtaaggaacggcgaactctaccgatacattgccgacactaggggagctttcgtgcagcctgcattctatgaggctttcggtttgactgttgttgaggccatgacctgtggtttgcctacatttgcaactaatcatggcggtccagctgagatcatcgttaacggaaaatccggcttccatatcgatccatatcacggtgagcaagctgctgatctgctagctgatttctttgagaaatgtaagacggaaccttctcattgggaaactatttcaaccggtggcctgaagcgcatccaagagaagtaagcaactctttcttgactctagtcattcaaattaacttgggatttgaggcatagttgattgataatttatcgcgtctctactactatatacaggtacacgtggcaaatctactcggagagattattgacgttggctgctgtttacggtttctggaaacatgtttctaagcttgatcgtctagaaatccgtcgatatctagaaatgttttatgctctcaaataccggaagatggtgagttcttctgcttcctgctcttctcatagtgtttaatatacacttgattgattgcattcacttagactaagttgctcggacacgggtgtggatgtccgacacgagtgcggatctagagttcagatccttcaagatgtaaattataagattcggggatatggatcctagtacggatacgggtgcgagaatccggctaaaaataattttaaaaaaaattatctctaaattatgagatattatgtggaatacttacgtataacttgtaaagtgtagattttttttaattctcaagttgtagattagtaaatgattgatttcctagataagtatgctattttcttcaaatttactcttctgatttcgaaaatcaaattgtatctcgtctcgaatttttccgtccgttatggtcaaagtacccaaaatcgtttgaccaaatcggtacggatcccatacccacacccacactagtgtcgtattgacacgggtgccgcacctaaactgctatgtcggagcaacttagcacttagagaatcattgatgttaaattttcttaattcttgaatctgctaatgaagattttatcttggtttttgtttaggctgaagctgttccattggctgctgaatga

SEQ ID NO: 15: полипептидная последовательность NtSUS2-S

MAERALTRVHSLRERLDATLAAHRNEILLFLSRIESHGKGILKPHQLLAEFDAIRQDDKKKLNDHAFEELLKSTQEAIVLPPWVALAIRLRPGVWEYVRVNVNALVVEELTVPEYLHFKEELVDGTSNGNFVLELDFEPFTASFPKPTLTKSIGNGVEFLNRHLSAKMFHDKESMTPLLEFLRVHNYKGKTMMLNDRIQNLTTLQNVLRKAEEYLIMLPPETPFSEFEHKFQEIGLEKGWGDTAERVLEMICMLLDLLEAPDSCTLEKFLGRIPMVFNVVILSPHGYFAQENVLGYPDTGGQVVYILDQVPALEREMLKRLKEQGLDITPRILIVTRLLPDAVGTTCGQRLEKVYGAEHSHILRVPFRTEKGIVRKWISRFEVWPYMETFTEDVAKELAAELQAKPDLIIGNYSEGNLVASLLAHKLGVTQCTIAHALEKTKYPDSDIYWKKFDEKYHFSSQFTADLIAMNHTDFIITSTFQEIAGSKDTVGQYESHQAFTMPGLYRVVHGIDVFDPKFNIVSPGADINLYFPYSEKEKRLTALHPEIEELLYSDVENEEHLCVLKDRNKPILFTMARLDRVKNLTGLVEWYAKNARLRELVNLVVVGGDRRKESKDLEEQAEMKKMYELIKTHNLNGQFRWISSQMNRVRNGELYRYIADTRGAFVQPAFYEAFGLTVVEAMTCGLPTFATNHGGPAEIIVNGKSGFHIDPYHGEQAADLLADFFEKCKTEPSHWETISTGGLKRIQEKYTWQIYSERLLTLAAVYGFWKHVSKLDRLEIRRYLEMFYALKYRKMAEAVPLAAE

SEQ ID NO: 16: полинуклеотидная последовательность NtSUS2-T

atgctttttatgggagtaaattttatggccggtcattcaactttgtgttcattacgcaaaagtcatttttcttggtgtttattacgcaagtcatttttcttttttttttgttacgtaaaaatcattcaactatgtgtttattatctaaaattcaattttttttttccttttgttacacaaaaatcattttactttactctatttatcacaaaagtcaccttggccagattttataataggcttttatcttttgttacacaaaaattattttactttactctatttatcacaaaagtcaccttggccagattttataataggcttttatcttttgttacacaaaaattattttactttactctatttatcacaaaagtcaccttggccagattttacaatacttttaccttaaaagactattatgcccttgacattataaatcctctcatttatataataccttctatatgatacactatataatatatttttacctaggtattttacttataattaaaataatattaaattattttatttatctattttataatatattcatacatttaattttttcatggcaaatcactttgtttaatcatatttaaacatgaacaaattttaaatatcaaaaaaataaaaaaataaaaaaaatatttatttgaaataataacaaacagatttgtttaacaaatgatagtttttttttatagtcaataaaatttttaaaaaaattcaaagatatttgtttttaatattaatatttttaaagctttatctgttaatattatttatttgaaagtattaatctgatgtgtcattgtgttaaatgtgagtattttatttattggattaatgagtatggcttggctgataaaaagctttgattttataattttcattaaaaatattttattaagctagtacctgacaaatttaatatcttgaaaattaacgttaagaaaaaattaaatataaaaatatattataaaaataataaataaataatatcaagttattttaattataaataaaatacatggttaaaaatatattatatagcatataatatagaaggtattacataaatgagatgatttaaagggcataatagacttttcaggtgaatgatttgtaaaatatggttaaagtgattattgtgataattagagcatagtaaaataatttttatgtaacaaaagaaaaaaaaaatgacttttgggtaatgaacataaatttgaataacttttacgtaacaaaagaataaaataaattttggataataaacataaaattgaatgaccacctataaaatttattatttttttgggctcttcttgatttgattttttagtttagcctttgcagtaatcttggttgtcacgcgtagcgttgtgctttcgccacataagtatttagtagacttaattaatgtcattatatcggttggtgtggttttaattacttaactgtactattatattaggtggaaggtttgaaaatttatagtagtaacattctagatcattgaaaatattggtgtttcagtgactttttagtatgtcattttcattttctaagtggttgtactaatatagtatattaaaattttgattggttgagaaacaatctctctcacctacacggtacgggtaaggtatgcgtatacgcttatcctccctacactccatttgtgggactattgttgttattttggataagctgaggtatccatcttctactaactgcactagtttattttttttgctgtttacagttgaaacaattgtctgaggatttctcacctgctgaatcaactgcaatggctgaacgtgtgctgactcgtgttcacagccttcgtgaacgtcttgatgctactttggctgctcatcgcaatgagatattactgtttctttcaaggtatagccaaagatagtattcttgttaactaaaaaagattcagttggtgttcaaaaaacgatacgtttatctgcctaagtcttggtagtcagaattatccggtacctatgctggtgtgagttagctggctaggaaaccactcttatgaaaacaagagatttagttagagttgtctgtaattctgtagtatggactatgtatgtgatgctatttgaactggttttggttattataggattgaaagccatggaaaagggatcttgaaaccgcatcagctattggctgagtttgatgcaattcgccaagatgacaaaaagaaactgaatgatcatgcatttgaagaactcctgaagtccactcaggtaatatggttttggctatatttgtcgccaacgccaagctcatatttttatattattttgagcttgtgtctgaatacgacgatgatatgttatactaggaagcaattgttctgccaccttgggttgcacttgcgattcgtttgaggcctggtgtgtgggaatatgtccgtgtgaatgtcaatgcgctagtcgttgaggagctgactgtccctgagtatttgcatttcaaggaagaacttgtcgatggaacgtaagtgttagtcttcaatttgatgctatgttagagaataggctgtggaatttattgatcaatgctgtgctttgtcctgatacagctccaatggaaatttcgttctcgagttggattttgagcccttcaccgcatcctttcctaaaccaaccctcaccaaatctatcggaaatggagttgaattcctcaataggcacctctctgcgaaaatgttccatgacaaggaaagcatgaccccgcttcttgaatttcttcgggttcacaattataagggcaaggtgacttgctatttccatttatctataggttcggtttgtgcttatcatgcgcccaatgacatatgaatatgcgctaaaggatagatatatgatttcctttgcagacaatgatgctgaacgacagaatacagaatttaaccacactgcaaaatgtcctaaggaaggcagaggaatacctcattatgcttccccctgaaactccattttccgaattcgaacacaagttccaagaaattggattggagaagggatggggcgacactgcagagcgcgtgctggagatgatatgcatgcttcttgatctcctcgaggctcccgattcctgtactcttgagaagttcttggggagaattcctatggtgttcaatgtggttatcctttccccccacggatatttcgcccaggaaaatgtcttgggttatcccgacactggtggccaggtgcattactttaatctttatccgtgagtctatgtttgttcgaatcctctagaaatgtcactgtacctatgtaggatactccaaatataatgcattttggggggatctgttatgggtgcgatggcatttttggaggtcggagcaacaaacaattgctatgtattcttctaaagcttgctttcataaatgctaaggtccttcacccttaatgtgcaggttgtctatatattagatcaagttccagccttggagcgtgaaatgcttaagcgcctaaaggagcaaggacttgatatcacaccgcgtattcttattgttagtatttcctgtacttgtaattactgcggattacacaaaatttcctttttatcttcttaacaacttatcttgatggtattcccaggttactcgtctgctacctgatgcagttggaacgacttgtggtcagcggcttgagaaggtgtatggagccgagcactcacatattctgagggtcccctttaggactgagaagggcattgttcgtaaatggatctctcgctttgaagtgtggccatatatggagactttcactgaggtgacactaaaacttccttatatttgtctatcttctaattggtattaggaataatttgttaattgttaactctttgtcttttcgtacatcaggatgtcgcaaaagaacttgctgcagaattgcaggccaagccagatttgataataggcaactatagcgagggaaatcttgtggcttcattgctcgctcataagttaggcgtaacacaggtctgtgttgtttttcactctcttaaagatctgattgcatttccattagtctggaactagaagtactaaaaagttcttttcttcactgtgttatttgccgtcggcagtgcaccatagctcatgcattggagaaaacaaagtatcctgattctgacatctactggaaaaaattcgatgaaaaataccatttctcgtcccagtttaccgctgatcttattgcaatgaatcacaccgattttatcatcaccagcactttccaggagatagcaggaaggtataacatcaatttgctacttcgactgcaacagcattgtgttcccatttctttcccttatgcttaacctaataccgtcatgaattttccagcaaggacactgtcggacagtacgagagtcatcaggcattcacaatgcccggattgtacagagttgttcacggcattgatgtgttcgaccccaaattcaacattgtctcacctggagctgacataaacctctatttcccatattccgagaaggaaaagagactgacagcacttcaccctgaaatcgaggagctgctgtacagtgacattgagaacgaggaacatctgtaagtttctaccttactcgtacagtcagtggcggagccagaattttcactaaaataaggtcaaaatataaagacataaatccacaaagaagccaagggtgtcaatatatagtataaatacattaaaaaaattacctatctacacagtgtaattttccgacaaaggggtgtcggttgacactccttgaatacatgtggctctgccactgggtacagttacaaagttctgttacctatgtagatgagcttgtgctgaacatgttgtgattttggcaggtgtgtgctaaaggacaggaataagccaatcttattcacaatggcgagattggatcgtgtgaagaatttaaccggacttgttgagtggtatgccaagaacgcacggctaagggagttggttaaccttgttgtggttggtggagatcgaaggaaagaatccaaagatttggaagagcaaacagaaatgaaaaagatgtatgagctaataaagactcacaatttaaatggccaattcagatggatttcttcacagatgaaccgagtgaggaacggtgaactctaccgatacattgctgacactagaggagctttcgtgcagcctgcattctacgaggctttcggtttgactgttgttgaggccatgacctgtggtttgcctacatttgcaactaatcatggcggtccagctgagatcatcgttaacggaaaatctggcttccacatcgatccatatcacggtgagcaagctgctgatctgctagctgatttctttgagaaatgtaagacagaaccttctcattgggaaaccatttcaacgggtggcctgaagcgcatccaagagaagtaagcaactctttcttgactctagtcattgaaattaactttcttgactctagtcattgaaattaactcgggatttgaggcgtagttgattgatattttatcgcgtctctactactgatatatacaggtacacgtggcaaatctactcggagaggctattgacattggctgctgtttacgggttctggaaacatgtttctaagcttgatcgtctagaaatccgtcgatatcttgaaatgttttatgctctcaaataccgcaagatggtgagttcctcttcttccttgcccttctcctagtgtttaagatacaatataattgattgcattatcttagagaatcattaatgttaaattttcttaattcttgaatctgttaatgaagtttttctcttggtttttgtttaggctgaagctgttccattggctgctgagtga

SEQ ID NO: 17: полипептидная последовательность NtSUS2-T

MLFMGLKQLSEDFSPAESTAMAERVLTRVHSLRERLDATLAAHRNEILLFLSRIESHGKGILKPHQLLAEFDAIRQDDKKKLNDHAFEELLKSTQEAIVLPPWVALAIRLRPGVWEYVRVNVNALVVEELTVPEYLHFKEELVDGTSNGNFVLELDFEPFTASFPKPTLTKSIGNGVEFLNRHLSAKMFHDKESMTPLLEFLRVHNYKGKTMMLNDRIQNLTTLQNVLRKAEEYLIMLPPETPFSEFEHKFQEIGLEKGWGDTAERVLEMICMLLDLLEAPDSCTLEKFLGRIPMVFNVVILSPHGYFAQENVLGYPDTGGQVVYILDQVPALEREMLKRLKEQGLDITPRILIVTRLLPDAVGTTCGQRLEKVYGAEHSHILRVPFRTEKGIVRKWISRFEVWPYMETFTEDVAKELAAELQAKPDLIIGNYSEGNLVASLLAHKLGVTQCTIAHALEKTKYPDSDIYWKKFDEKYHFSSQFTADLIAMNHTDFIITSTFQEIAGSKDTVGQYESHQAFTMPGLYRVVHGIDVFDPKFNIVSPGADINLYFPYSEKEKRLTALHPEIEELLYSDIENEEHLCVLKDRNKPILFTMARLDRVKNLTGLVEWYAKNARLRELVNLVVVGGDRRKESKDLEEQTEMKKMYELIKTHNLNGQFRWISSQMNRVRNGELYRYIADTRGAFVQPAFYEAFGLTVVEAMTCGLPTFATNHGGPAEIIVNGKSGFHIDPYHGEQAADLLADFFEKCKTEPSHWETISTGGLKRIQEKYTWQIYSERLLTLAAVYGFWKHVSKLDRLEIRRYLEMFYALKYRKMAEAVPLAAE

SEQ ID NO: 18: полинуклеотидная последовательность NtSUS3-S

atggcgaatccaaagttcacaagagtacctagcatgagggagagagttgaggatactctctctgctcaccgtaaccagcttgttgctctcctctccaggtatattaataaactctatatacttgttattttctttatttttttgtctttactgataaatttaactgttttcttctttaaatcttgctttcgatgcatgatttctgttgtgttaaattgcgtaaccattttatctaaaagtttatgctgataaacacttttaaattttaatatgtaaattatattatgtctcaacatcaacatgtggatggccaaaaatataaagcttaattttcgttattttgaatgatttttctctgcgagtgttacggtttgcgtacacattacctaaacctcctccctagtccccacttgtgggaatttaattttttttttctttgtttttttttgttgttgttgttgtctgagttcaattcctaccatgttagcttggcaaaaataagttggtaaagcttgaccccaactagttttagttgatcgatttatttggtgatttatagttcaataataataattactattagagaaagttccagcagcttttctgtttgtttttccagttttagtgattgatatatgtgtatatatattctttgtttcttttaagatacgtggcgcaggggaaggggatattgcaacctcaccacttgatcgatgagttcaacaacgctgtatgtgatgacactgcttgtgagaagctcaaagatggtccctttagtgaagtcttgaaagctactcaggtatattcactaatccatgggaatcaagatgatactgtatatctttattatggtgtctttcagaaatttgacgatgatgaaatgcaacttttctctgtttgtcaccttatccagactgtttttttattttttatttttcattttttaacttgaaatgctcttaatttcctttgtttatcgataagaccggatttacaatgtatgaacggagcatcttaagaaccttctggaatgaagatataagatataaaacatggtgtccgttttctcctttgtggaatcagtgtacatatagactgttattttggtcccactttctggatcttctgatcacaccttctcatgcagaggcgagcttgatggtttcaacctttaaattcttactattgaatccatttcactttcgaaattatgagttcgaaatctaatatttgttgaaatttttgcaaatgttcacatataagtttaagctttgtgtcaagaatactgggctcaatggattccaatagaccaggctgtatccgcctctgtctccactctccctgcatccacttctttcgtgtgactaataatgcttaatgagctagaactcgttttaatgtttgaataagttgcttatatcagagcagcttttgatgtttcaatctttaacgggttatgcagtaccagcattctgcggctgaaaaacaggaatctgagatttacttgtctctggctgaatttcttgttcattttgctaacaagtactttggagttaatgcttgctctctgttgtcaaaataggaagccattgtgctgccaccatttgttgccatagcagttcgtccaaggccaggtgtttgggagtatgttcgtgttaatgtatatgatttgagcgttgaacaattgactgttcctgaatatcttcatttcaaggaagaacttgtggatggagagtaagctctttcttatttcaatacgaaacataaaaatttacagaagttgaataattaacaaatttgttgatttttaatgtatgccaggggtaataatcactttgtgcttgagctggattttgagccatttaatgcatcagttcctcgtccatctcgatcgtcatccattggcaatggagtccaattcctcaatcgtcatctttcctcaattatgtttcgcagcaaagactctctggaccccttacttgatttccttagaggacactgtcataaagggaatgtaagtaccaaaagcagttttccctttgtaaatgtctgcttgtccctgattatctactaaatctttcaacacgcgcaaccattataagaaatgtacaatacttctagttagaatttcatcatcgacaaactatctgctttactttttatttttcccatttgatggatgatagtttagtttatataacagatgatattttggttgaagggtaccatgaactttttcacaaccacttaatggatacatagttgtaatagttgacattttggaataatattgtctcacttggaaatgtttaagaagtattactacttctatttgtaagatggattgtttatctatgcaggtcttgatgttgaatgatcgtatacagcgaatctccaggctggagtctgctctttctaaagcagaggattatctctccaagctatcaccagatacatcctataatgagttcgaatacgcgtgagcttgtacacatttgttttgttttctttcaagcatatgtaatttctcaagaaaagggaaatctataggagttgaaacattctttatggaaccatgtgcatgcagattgcaagaaatgggctttgagagaggttggggtgatactgccagacgtgttttggagacgatgcatcttctttctgacattcttcaggctccggatccatcaaccttggagacatttcttggtagactacctatggtgttcaatgtcgtcatattatcccctcatggatattttggccaagcaaatgtcttgggtttgcccgacactggtggccaggtaataacaaggagaatgaggtcttgtattatgtactccctccgttccaatctatatgaacctatttgactgggtatggaaagaaatgaagacttgtaaaacttgtggttctttagaaattccaaacattacatttggttttttccctcttcctggaaattatactactgaatcatctctagatgttccagtttaacttgagacgtaagggtaaataacggaccattactctgtcctttcttgcagtaggcttggtacaatgaatatagttcgcatagttgccggaagctagagctgtgttagaaaactcaggaacattaatttggcgatgctaatcactgctaatgttactgaagcatccatggttttccttgatgttattctccttttggttgcttcacaggttgtctatatactggatcaagtgcgtgccttggaggccgaaatgcttcttagaataaagcaacaaggacttaacttcaagcctagaatccttgtcgtgagtacatatatattatgcaagctcttatttggtttgtgggattgcagttgacatcaatttgcttactctgattactaaaggtcacacggctgatacctgatgctaaaggaaccatgtgcaaccagaggttggagaggattagtggaactgaatactcgcatattttacgtgtcccttttaggacagagaagggaatccttcataaatggatatctaggtttgatgtatggccttacctggagaagttcactgaggtaacctctttgtcccttggaaattgccttttgttgctgatgtttctgctagtgtgcttaaatgacggatgttaactagtcacttgctagcgtttgcaatagcaacgggaaaagaaaggatttttgctagtttgaagtctgcctccaagaaaaattatattaaaagtttatggctagtggaaacatcagtcattcatgtaccttatttctatgcccaagttgtttaagttgaaagtaatttggccaactatgcaaattgggagaacgtgtagccaactattgtgtttgccgacatgttgatatactttttggtcctgatttatatttgttggtttgtcatactggatgaagcaattctcatgtttttctgcttatatatattggaagaagagatacttgtcgtttcatcatttttctcgacctctctattaccaacactttgccaatttaatgtttggaaatgtcttcttgaccaggatgtggcaagtgaaatgaccgctgagctccagggaaagccagatctgattattggcaactacagtgatggaaatttagttgcctcccttttggcatataaaatgggtgtcacacaggtaggaaatacatgattctttatcttgctagcactaagtcttgaggttatgtatctgcaatagaaattttacgctttgccttcatttctttttaattatttttccagtgtaccattgctcatgccttggaaaaaacaaagtatcctgattctgacatctactggaaaaagtttgaggagaaatatcatttttcatgtcagtttactgctgatctactggcaatgaataattcagatttcattatcaccagtacttatcaagagattgcaggaacgtaagtcattttaatctggtcgtttaaatctgatatttcttccctagtagtctattcaatccgaatttcagttcagtatatgatgtcatcggttgaggaactgtgattggtaaccttatcaaatccgtagctgctctataattttatttcgtaattggagaaacaattttttattattgagcttgtagtctgagctagaatttggttctttatctatcaagtagcataatactacaactattttttatgtgtggcaatttgcaatttcaattttctatttctataagttgcagcttttcttcctgttctgatcatatttacatggctgaaactcaatagaaaactaggctagttgatcaaaagtagttggatgctttaaaattagtagacgttttgctaaatgagtgaccaatgttattaaaaaaacgttcatgttttcaacccttttggcatacatttgaccactgcccaagattttggataagtacatgcagtgcttataattataaagcattttatcccaccttgtttttcattatgaaaattaagtaatttacgagtatttgtataagttacttcataaattagaagtaaatctggattgtgtaaagttattcgccccgtatatactgaaagctacttgaacaagcaaaaaaacagacaaacgtaacattctccatggattaatgagacttgtatatatatatatatatatatgtaaagagagagagagagagatttggcttgtaaccacatgtatattatgccatatggatgtgacattgatgtgactagacctaaatgttttgtttcaatgtccacgggagttttacgtagagttaagaggagaagagagtgaggaatactaatgtttgatggtaccccttggcttcttgacctggatactcagtgttcttattcatgcctatactttggtccttgatttcattctcccttttctagcttgagctgcatcaaagaaattccactgtaaaaaaaataatgctcaccatattggtgcaacatggcaaacatgtatcctatttgatgatcaatcaactttatttttctcctgttaattgacctcagtgtgtaactctctatgtatgatagcattgtaacttgtgtcatgattcataaatagggtactagaattggatggttgacatagtaaatggtcaattgatgatccacaaaatatgcacctactgattaaaatgtgatagggcaggtttatttttgtttgtggttaacacagtacttaaccctatatttaatacaatttggcttatctacaatcttttcttcagtgtttatgcgaattccttattgcacaacaatattgtctttctgagttctattctgttgttgcttacacttttattattccagtaacatagatgtgaagacattagattggttgcttgcaaattgatagccacttgtttcaggaagaatactgttggtcagtacgagagccatactgcattcaccctcccgggactatatcgcgtcgttcatggcattgatgttttcgatcccaaattcaatatagtgtctcctggagctgacatgacaatttatttcccatattctgacaaggaaaaaagactaacgtctttgcatggctcgattgaaaagttgttatttgatcctgcgcagaatgaagagcatatgtaagtggcatccgtttgtacttaatttttttggaatagatgacatattatttgcatgaatatgaaaaggagggtctgatatgattttctatagataaactaccaatgatattatttaaaaactcctggatactgtattaggagaagaagagaaccaggggtagatggcattagaatcccttaaatcttgaagagtcgtcactaacgctcccaacacttctgcctcagaccctcaactaaatactattattgttgatttctttggagaagctataagaatctctctctccttatggtgaaaattttacttggctttatacttaacttccaaggctccctcttataaaatgcaaaaactgtctgtattcactctcttggttaacaattgatccaatcaaatgcatatggaacatctttctttacgtttcttctaaagttcgtttgaggataaggagtagaatctgagaagatagactagtaggtaaccttagggacggatgtggaaattaacatatgggctcagcttttctgccgagtgcagaccatgtatatgcgttaaaaaattcactaaacaagtaaatgtttgattttgaacccagtaaatcaaatgagttgtggtagaatctcgaactcgaaccgataaagttcaaatccaggatccgcttttaggtaaactctaccttgggaagtgttatatatatgtccctgattatttctttttccgtttcctttctattttaatttttaaagttatttttagatggttttattttttgataagtggtaagttgttaatattccaaattaaatgccattgtcataactatatacatttataaagaatgattgatcctagtttctcattcctaagatccaaataaggcaataaacaatgtcttagtaattggacctgcttctggtgatcaacgcttgatcgcgtagttagttatagatgactgtaaaaactttaaccattttaatggttttgtcaaagaacaaatatcggacatattatagagaatggactattgtactttgcttctgattggtcattttattgtgatccgtaaattggctgtgactgatgtcatatctttgcttacagaggtaatctgaatgataaatcaaaacccataattttttcaatggcaaggctagaccatgttaagaacattacgggactagttgagtgctatgctaaaaatgccacattgagggaattggcgaaccttgttgtagtagctggatacaacgatgtaaagaaatccagtgatagagaagaaataacagaaattgagaagatgcatgctcttattaaggagcataaattggatgggcaattcagatgggtatcagcccaaacaaaccgggcacgtaatggtgagctctatcgctatatagctgaccagagaggtatatttgttcaggtatgctatttgtattgtattagtccaatttcattttttgcaccaaaagaaaggttgttattgtgacgtatatgtttgttttagcctgcattttatgaagcatttggactaacggtggttgaagctatgacttgtggtcttccaacatttgcaacttgccatggtggtcctaatgagatcattgaacccggtgtatctgggttccatattgatccttatcatcccgataaagctgctgaactcatgtcagaattctttcaacgctgcaaacaagatcctactcactgggaaaaaatatctgcatctggtctccgaaggattcttgagaggtctgtagttgtgtacatgtatagaagattaaagaatgctaccttgatatttatttgaatcaaaaataacaggaacatctcttttttgaacatcactcaagttcttatattaaataatttttaggtatacgtggaagatttactccgagaggctgatgactttatctggcgtatatggtttctggaagcttgtttcaaaacttgagaggcgtgaaactagacgataccttgagatgttctacattctcaaattccgcgagttggtgagtgccttttagctccttttcagttccaataaactatatatgtggtttaagtaagtattaagcataaacatgtccgtgcttggggctgtcgaaaatgctatggacatatcctgagctaaggatttttcaagaaaattgatgttagctttactctatttacaggcaaaatctgtacctctagcaattgatgacaagtga

SEQ ID NO: 19: полипептидная последовательность NtSUS3-S

MANPKFTRVPSMRERVEDTLSAHRNQLVALLSRYVAQGKGILQPHHLIDEFNNAVCDDTACEKLKDGPFSEVLKATQEAIVLPPFVAIAVRPRPGVWEYVRVNVYDLSVEQLTVPEYLHFKEELVDGEGNNHFVLELDFEPFNASVPRPSRSSSIGNGVQFLNRHLSSIMFRSKDSLDPLLDFLRGHCHKGNVLMLNDRIQRISRLESALSKAEDYLSKLSPDTSYNEFEYALQEMGFERGWGDTARRVLETMHLLSDILQAPDPSTLETFLGRLPMVFNVVILSPHGYFGQANVLGLPDTGGQVVYILDQVRALEAEMLLRIKQQGLNFKPRILVVTRLIPDAKGTMCNQRLERISGTEYSHILRVPFRTEKGILHKWISRFDVWPYLEKFTEDVASEMTAELQGKPDLIIGNYSDGNLVASLLAYKMGVTQCTIAHALEKTKYPDSDIYWKKFEEKYHFSCQFTADLLAMNNSDFIITSTYQEIAGTKNTVGQYESHTAFTLPGLYRVVHGIDVFDPKFNIVSPGADMTIYFPYSDKEKRLTSLHGSIEKLLFDPAQNEEHIGNLNDKSKPIIFSMARLDHVKNITGLVECYAKNATLRELANLVVVAGYNDVKKSSDREEITEIEKMHALIKEHKLDGQFRWVSAQTNRARNGELYRYIADQRGIFVQPAFYEAFGLTVVEAMTCGLPTFATCHGGPNEIIEPGVSGFHIDPYHPDKAAELMSEFFQRCKQDPTHWEKISASGLRRILERYTWKIYSERLMTLSGVYGFWKLVSKLERRETRRYLEMFYILKFRELAKSVPLAIDDK

SEQ ID NO: 20: полинуклеотидная последовательность NtSUS3-T

atgtttacatggctgaaactcaatataaaaaacaagggtaggtgatcaaaaatcgttggatgcttaaaatcagtagacgttttgctaaatgagcgaccaatgttattgaaaacgttcatgttttcaacccttttggcatacatttgagcattgcccaagattttggataagtagatgcagtgcttataattttaaagcattgtatcctgccttgtttttcattgtcaaaattaattaacttacaagtatttctataagttgcttcataaattagaagtaaatctggattgtgtaatgttattcgcctcgtaaatactgaaagctgcttgaacaagtgaaaaaacacagacaaacgtaacattctccatggattgatgagacttgtaaaatacatatatagaaatttggcttgtaaccacatgtatattatgccatatggatgtgacattgatgtgactagacctaaatgttttgtttccatgtccactggagttttacgtatagttaagaggagaaaagactgaggaatactaatgtatgatggtacccctttgcttcttgacctggatacccagtgttcctattcatgcctatactttggtccttgatttcactctcccttttctaacttgagctgcatcaaagaaatttccactgtaaaaaaataaataatgctcaccatatctctgcaacattgcaaacatgtatcccatatgattgatattggtgcgacatggcaaacatgtatcctatttgatgatcaatcaaatttatttttcccctgtcaaaatgacctcagtgtgtaattccctatgtatttgatagcattgtaactcgtgtcatgattcatgaatagggtactagaattgcatggttgacaaatattaactggtcgattgatgatccacaaaacatgcacttactgactaaaatgtgatgggacagatttatttttgtttgtgattaacacagtacttaaccctatacttaatacaatttggcctagctacaatcttttcttcagtgcaaattccttgttacacgaccaatattgtctttctgagttctattctgttgttacttacacttttattattcgaataagacattagattgcttgcatgcaaattgatagccacttgtttcaggaagaatactgttggtcagtacgagagccatactgcattcaccctcccaggactatatcgcgtcgttcatggcattgatgttttcgatcccaaattcaatatagtgtctcctggagctgacatgacaatttacttcccatattctgacaaggaaaaaagactaacgtctttgcatggctcgattgagaagttgttatttgatcctgcgcagaatgaagagcatatgtaagtgacatccatttgtacttattttaatttggaatagatgacatacttatttgcatgaatataaactgacaacccagagatttcctacattagaaaaggagggtctgatatgattttctacaaataaattcccagtgatattgttcaaaaagtcctggatactttattatgagagaaccagggatagatggcactagaatcccttaatcttgagaagtcgccacttatcgctcccaacactttctgagaccctcaagtaactactattattgtttgatatcttggagaagctataagaatctttttctccttattgtaattttttttacgtgactttaaacttaacttccaagctccttctgataaaatgcaaaaactgtctgtattcactgtcttggtttattaacaattgatccaatcaaatgcatatggaacatctttctttttgtttcttcaaaagttcgtttgaggataaggagtagaatctgagaagatagactagtaggtaaccttaggggcggatgtagaaatcaacgtatgggttcagctttgttgcagaccctgtatatgcattaaaaaaatcactaaataagtaaataattgattttgaacccagtaaatcaaaatgagttgtagtagaatcctgaactcgaaccgataaagttggatccactaccgggtaaactctaccttgagaagtgtttatatatgtccctaattatttcttttctgtttcctttctattttaattttttaagttcctttttagatggttttattttttgacaagtggtaagttgttagtattccaaattaaatgccattgccataactatatacatttataaagattgattgaccctagtttctcattcctaagatccaaataaggcaataaacaatatgtcttagtacttgaacctgcttctggtggtcaacacttgatcgcgtagttagttatagatgactgtaaaaaccttaatcattttaatggttttgtcaaagaacaaatatcggacatattatagcgaatggactattgtacttttcttctgattggtcattttattgtgatccgtaagttggctgagactgatgtcatatctttgcttacagaggtaatctgaatgataaatcaaaacccataattttttcaatggcaaggctagaccatgttaagaacattacgggactagttgagtgctatgctaaaaatgccacattgagggaattggctaaccttgttgttgtagctggatacaacgatgtaaagaaatccagtgatagagaagaaatagcagaaattgagaagatgcatgctcttattaaggagcataaattggatgggcaattcagatggatagcagcccaaacaaaccgggcacgtaatggtgagctctatcgctatatagctgacaagagaggtatatttgttcaggtacgctgtttgtattgtatttgtccacattcctttttttgcaccgaaagaaaggttgttattgtgacaaatatgtttgttttagcctgcattttatgaagcatttggactcacggtggttgaagctatgacttgtggtcttccaacatttgcaacttgccatggtggtccgaacgagatcattgaacacggtgtatctgggttccatattgatccttatcatcccgataaagctgctgaactcatggcagaattctttcaacgctgcaaacaagatcctactcactgggaaaaaatatctgcatctggtctccgaaggattcttgagaggtttgtagttgtgtacatatatagaagattaaagattgttcccttgatattatttgaatgaaaaataacagtaacatctctttttgaacatcgctcaagttcttgtgttaaataattgttaggtatacgtggaaaatttactccgagaggctgatgactttgtctggtgtatatggtttctggaagcttgtttcaaaacttgagaggcgcgaaactagacgataccttgagatgttctacattctcaaattccgcgagttggtgagtgcctttttgctcattttcagttacaatcaactatatatgtggtttaaatacgtattaagcataaacatgtccgtgattgcggctgtcgaaaatgctatggacatatcctgagctaaggagttttcaagagaattgatttggcttactctgtttacaggcaaaatctgttcctctggcaattgatgacaagtga

SEQ ID NO: 21: полипептидная последовательность NtSUS3-T

MFTWLKLNIKNKGRKNTVGQYESHTAFTLPGLYRVVHGIDVFDPKFNIVSPGADMTIYFPYSDKEKRLTSLHGSIEKLLFDPAQNEEHIGNLNDKSKPIIFSMARLDHVKNITGLVECYAKNATLRELANLVVVAGYNDVKKSSDREEIAEIEKMHALIKEHKLDGQFRWIAAQTNRARNGELYRYIADKRGIFVQPAFYEAFGLTVVEAMTCGLPTFATCHGGPNEIIEHGVSGFHIDPYHPDKAAELMAEFFQRCKQDPTHWEKISASGLRRILERYTWKIYSERLMTLSGVYGFWKLVSKLERRETRRYLEMFYILKFRELAKSVPLAIDDK

SEQ ID NO: 22: полинуклеотидная последовательность NtSUS4-S

atggcggaacgtgtgctgactcgtgttcatagccttcgtgaacgtcttgatgctactttggctgctcatcgcaatgagattttgctgtttctttcaaggtatagtcttagcagattgttctttgatttagttgttattgccagttctaatgtatgggcttatatataaacaaagtgttgaagtatgcaaccatataaactgacagcttaaaatgcttgagagaacacacttttatttatttaattatgccttcagcacaagaagtggaacttgacgcaatggaaccataggtcacgggttcaagtcttggaacagcctgcaatctaaggctgcgtgtagtagaccctagtggtccggcccttccacatatctcgcttagtgtaccgggcccattgagtacgggttcggccgaacccagtcgctttggtccaatccatatatttgtcttaaaaatatattgaatatatacaaattgttaatttagtttaaatatgtgtatcatgggttattcatgctggttttggctgttgcaggattgaaagccatggaaaagggatactgaaacctcaccagttgctggctgaatttgattcaattcacaaagaagacaaaaacaaactgaatgatcatgcttttgaagaagtcctgaaatccactcaggtatttgtggttttagtgttaggtgatggatagcatttattgttttactaagatcacatatgtgtcagtttgtggctagtatttaaaatctggtgtattttgtcatactaggaagcaattgttttgtccccttgggttgcgcttgccattcgtctgaggcctggtgtgtgggaatacgttcgtgtgaatgtcaacgctcttgttgttgaggagcttaccgtgcctgagtatttgcaattcaaggaagaacttgttaatggaacgtaagttttaggttcgaatttgttgatttgttagataacatgttctgaactttttgattaaagttgtgtttttgactgatgcagctcgcacgataactttgttcttgagttggattttgagcccttcactgcatcatttccaaaaccaaccctcaccaaatcaattggaaatggagttgaattccttaaccgacacctctctgccaaaatgttccatgacaaggaaagcatgacccctcttctcgagtttcttcgagttcaccactacaagggcaaggtaaacttgtttttcctgtttgtctatgaatttagtttagttgttttgctccgcgaaaatttcagtggaaactgatttatgcaaccactgagtgattaatatgttcaaacttaccgacttctggttttctgtgtagacaatgatgctgaatgacagaattcaggacttaaatactctccaaaatgtcctaaggaaagctgaggaatacctcactaccctttcccctgaaacttcatactcggcatttgagcacaagttccaagaaattggcttggagaggggttggggtgacactgcggagcgtgttctagagatgatctgcatgctcctggatctcctcgaggctcctgactcgtgcacgcttgagaagttccttggtagaattccaatggtttttaatgtggtcatactttcaccccatggttatttcgcccaggaaaatgtcttgggttaccccgacactggtggccaggtgcactgcttatctgtgttcggtcttattatctctttaaaccctactgccacaagtgctgagatgaacctcctttaatttgcaggttgtctatattttggatcaagttcctgctttggagcgtgagatgctcaagcgcataaaggagcaaggacttgacatcaaaccgcgtattcttattgttcgtattcccagtaattgtgtttaaacttatgattatgcaggattttatctgttctaatacagcactcttgcttaaattctcaggttactcggctgctgcctgatgcggttggtaccacttgtggtcagaggcttgagaaagtgtttggaacagagcactcacacattcttagggtcccctttaggaccgagaagggcattgttcgcaaatggatctctcgctttgaagtctggccatacatggagacattcactgaggtgaagcaagctttctctattcatttttcaatcttccaattggttttggcagcaattttctgcttgctttgacttccgctaaaacttcggattttattgcattaggatgtggcgaaagaaattgctgcagaattgcaggctaagccagatcttatcattggcaattatagtgagggcaaccttgctgcctccttgttggctcacaaattaggtgtaacacaggtcggcaatgtttgtgacatgtaatttcatctttgcatttcctttcgtttgcaactaaaagatttaagagttctctctctcttttttttttccgtctactttgccttatgcagtgcacgatagctcatgctttggagaaaacaaaatatcctgattctgatatctacttgaagaaatttgatgaaaaataccatttctcagcccagtttactgccgatcttattgcaatgaatcacaccgatttcatcatcaccagcactttccaggagatagcgggaaggtatttttacatcagtttcccactctgattaaattacaatgtatttccctatatgattaaatactgtgtttgatcctaaatcatttctaaattttccagcaaggacactgttggacagtacgagagccacatggcgttcacaatgcctggactgtatagagttgttcacggcattgatgtgtttgaccccaaatttaacattgtgtcaccaggagctgatatgaatctctatttcccatactacgagaaggaaaagagattgacagcatatcaccctgaaattgaggagctgctgtttagtgatgttgagaatgacgaacacatgtatgttactaaactagcaatcctgctgcaaaattatggctaattatgtaaacaagtttgtactgaatagatttgttattcgatcaggtgtgtgctgaagaacaggaataagcctatcatattcactatggctagattggatcgagtgaagaacttaactggacttgtcgagctgtacgccaagaacccacggctaagggagttggttaaccttgtcgtggttggaggagaccgaaggaaagaatccaaagacttggaagaacaggcagagatgaagaagatgtacgaacttataaagactcacaatttgaacggccaattccgatggatttcttcccagatgaaccgcgtgaggaatggcgaactctacaggtacattgccgatactaggggagctttcgtgcagcctgcattttacgaggcttttggtttgactgttgttgaggccatgacctgtggtttgcctacatttgcaactaatcacggtggtccagctgagatcatcgttcacgggaaatctggtttccacattgatccataccacggggatcaggcagctgaacttctcgctgatttctttgagaaatgtaagaaagaaccttcgcactgggaagccatttccgagggcggccttaagcgtatacaggagaagtaagcaaactgctactcttttcatttttgcaaaacctactatgatcattattaagctcatttttgcaaaacctacttgctgttgttattgtttgttgcttccttttcactgttctttgagctgaaggtctatcagaaacagtctctctaccttcacaaggtaggggtaagatctgcgtgcacgttaccctcctcaaactctacttaattgtgagattacactaggtttgttgttgttgattctttgctaattaattaaaaggtacacatggcaaatatactcggatcggttgttgacactggctgctgtatatggattctggaagcatgtttccaagcttgatcgtcttgaaattcgccgttatcttgaaatgttctatgctctcaaattccgcaagctggtgagtttcattgctttctgcactcctgcaattgtatag

SEQ ID NO: 23: полипептидная последовательность NtSUS4-S

MAERVLTRVHSLRERLDATLAAHRNEILLFLSRIESHGKGILKPHQLLAEFDSIHKEDKNKLNDHAFEEVLKSTQEAIVLSPWVALAIRLRPGVWEYVRVNVNALVVEELTVPEYLQFKEELVNGTSHDNFVLELDFEPFTASFPKPTLTKSIGNGVEFLNRHLSAKMFHDKESMTPLLEFLRVHHYKGKTMMLNDRIQDLNTLQNVLRKAEEYLTTLSPETSYSAFEHKFQEIGLERGWGDTAERVLEMICMLLDLLEAPDSCTLEKFLGRIPMVFNVVILSPHGYFAQENVLGYPDTGGQVVYILDQVPALEREMLKRIKEQGLDIKPRILIVTRLLPDAVGTTCGQRLEKVFGTEHSHILRVPFRTEKGIVRKWISRFEVWPYMETFTEDVAKEIAAELQAKPDLIIGNYSEGNLAASLLAHKLGVTQCTIAHALEKTKYPDSDIYLKKFDEKYHFSAQFTADLIAMNHTDFIITSTFQEIAGSKDTVGQYESHMAFTMPGLYRVVHGIDVFDPKFNIVSPGADMNLYFPYYEKEKRLTAYHPEIEELLFSDVENDEHMCVLKNRNKPIIFTMARLDRVKNLTGLVELYAKNPRLRELVNLVVVGGDRRKESKDLEEQAEMKKMYELIKTHNLNGQFRWISSQMNRVRNGELYRYIADTRGAFVQPAFYEAFGLTVVEAMTCGLPTFATNHGGPAEIIVHGKSGFHIDPYHGDQAAELLADFFEKCKKEPSHWEAISEGGLKRIQEKYTWQIYSDRLLTLAAVYGFWKHVSKLDRLEIRRYLEMFYALKFRKLVSFIAFCTPAIV

SEQ ID NO: 24: полинуклеотидная последовательность NtSUS4-T

atggccgaacgtgtgctaactcgtgttcacagccttcgcgaacgtcttgatgctactttggctgctcatcgcaatgagattttgctgtttctttcaaggtatagtcttagcagattgttctttgatttagttggtgttatttgccagttctaatgtatggactaatatatgaacaaagtgcgaccatttcaactgacaacttaaaatgtttgagagaatacacgtttatttacttaattatggcttgagcataggaagtgtatcttggcgtaactcgtaaagttgacctcatgtgacaaggaggtcacggtttcgagccgtggaaacagcctcttgcagaaatgcaggtaaggctgcgtgcaatagatcgcccttccacggacccgcgcatagcgggaacttagtgcaccggttgggctgtccttttttatgtcttcagcacaaaaatttagtttaaacatgtgtatcatggattattcatgctggttttgccggttgcaggattgaaagccacggaaaagggatattgaaacctcaccagttgctggctgagtttgaatcaattcacaaagaagacaaaaacaaactgaatgatcatgcttttgaagaagtcctgaaatctactcaggtaatttgtggttttagtgttaggtgatggatagcatttattgtcttactaagatcatatatgtgtcagtttgtggctagtatttgaaaagtctggtgtggtttgtcatactaggaagcaattgtcttgtccccttgggttgcgcttgccattcgtctgcggcctggtgtgtgggaatatgttcgtgtgaatgtcaatgcacttattgtcgaggagctgactgtgcctgaatatttgcaattcaaggaagaacttgttaatggaacgtaagttttaggttcgaaatgatgatttgttaaataatatgttctgaactttttgattaatgttgtgttttcccctgatgcagctcgaacgataactttgttcttgagctggattttgagcccttcactgcatcatttcccaaaccaaccctcaccaaatcaattggaaatggagttgaattcctcaaccgacacctctctgccaaaatgttccatgacaaggaaagcatgacccctcttctcgagtttcttcgagttcatcactacaagggcaaggtaaacttgtttttcctgtttgtctatgaatttagtttctgaaagttgctttgcttcgtgaattttttagtggcaactgatttatgattttctgtgcagacaatgatgctgaatgacagagttcaggacttaaacactctccaaaatgtcctaaggaaggctgaggaatatctcactaccctttcccctgaaacttcatactcggtatttgagcacaagttccaagaaattggcctagagaggggctggggtgacaatgctgagcgtgttctagagatgatctgcatgctcctggatctcctcgaggctccagactcatgcactcttgagaagttccttggtagaattcctatggtttttaatgtggtcattctttcacctcacggatatttcgcccaggaaaatgtcttgggttaccccgatactggtggccaggtgcactgcttatttgtaacaccttacgcttttccctctgaaacttatttgcggcaagttctaaggtcctccttccttaatttgcaggttgtctatattttggatcaagttccggccttggagcgtgagatgctcaagcgcataaaggagcaaggacttgatatcaaaccgcgtattcttattgttcgtatctccaataattgcgtttaaacttatgattgtgcaggatttgatctgttcaaatctaatgactgattttcttttttttttttttttccctcaggttactcggctgctgcctgatgcggttggtaccacttgtggtcagcggcttgagaaagtgtttggaacagagcattcacatattcttagggtcccctttaggaccgagaagggcatcgttcgcaaatggatctctcgctttgaagtctggccttacatggagacattcactgaggtgaagcaagctttctctattcatttttcaatcttccaatctgttttggcagcaatttttcacttactaacactttggctttcgctaaaacttcggattttattacattaggatgtggcaaaagaaattgctgcagaactgcaggcaaagccagatcttataatcggcaactacagcgagggcaaccttgctgcctccttgttggctcacaagttaggtgtaactcaggtctgtaatgtttgtcacctgttatttcaactttgcatttcctttcatttgcaactagaagttaagagttctctctcttttatcttttccgtctattttgccttctgcagtgcaccatagctcatgcgttggagaaaacaaaatatcctgattctgatatctacttgaagaaatttgatgaaaaataccatttctcagcccagtttactgccgatcttattgcaatgaatcacaccgatttcataatcaccagcactttccaggagatagcgggaaggtattacatcacaatggatttccgatatgattaaattagttaatttaatcctacttcattgtgtttgatcctaaaacttttctaaatttcccagcaaggacactgttggacagtacgagagccacatggctttcacgatgcctggattgtatagagttgttcacggcattgatgtgttcgatcccaaattcaacattgtgtcaccaggagctgatatgaatctctatttcccctacttcgagaaggaaaagcgattgacagcatatcaccctgaaattgaggagctgctgtttagcgatgttgagaatgacgaacacatgtatgttactaaactagcaatcctgctgcaaaattgtggctaattatgtaaaaaagtttttactgaatagatttgtgcttctatcaggtgtgtgctgaaggacaggaataagccaattatattcaccatggctagattggatcgagtgaagaacttaactggacttgtggagttgtacgccaagaacccacggctaagggagttggttaaccttgtcgtggttggtggagaccgaaggaaggaatccaaagatttggaagaacaggcagagatgaagaagatgtatgaacttataaagacgcacaatttaaacggccaattccgatggatttcttcccagatgaaccgcgtgaggaatggcgaactctacaggtacattgccgatactaggggagcttttgtgcagcctgcattttacgaggcttttggtttgactgttgttgaggccatgacctgtggtttgcctacgtttgcaactaatcacggtggtccagctgagatcatcgttcacgggaagtctggttttcacattgatccataccacggcgagcaggcagctgaacttctagctgatttctttgagagatgtaagaaagaaccttcacactgggaagccatttccgagggcggccttaagcgtatacaggagaagtaagcaagctgctactcttttcatttttgcaaaacctaccatgatcattattaagctcatttttgcaaaacctacttgttattctttgttgcttccttttccctgttttttgagccgaggttttatcgaaaacatgctttctaccttcacaaggtaggggtaaggtctgcgtttgttattattgttgttgttgattctctgcgaattaattaaaaggtacacatggcaaatctactcggatcggttgttgacactggctgctgtttatggattctggaagcatgtttccaaacttgatcgtcttgaaattcgtcgttatcttgaaatgttctatgctctaaaattccgcaaactggtgagtttcactgctttctgcactcttccaattgttagttgagtgcactcatttaaactgtagctaaagctgttgtaaatcttcagttaagcagctgctaatgaagtttttatcttttgtttttggttcaggctgaagctgtcccgttggctgttgagtaa

SEQ ID NO: 25: полипептидная последовательность NtSUS4-T

MAERVLTRVHSLRERLDATLAAHRNEILLFLSRIESHGKGILKPHQLLAEFESIHKEDKNKLNDHAFEEVLKSTQEAIVLSPWVALAIRLRPGVWEYVRVNVNALIVEELTVPEYLQFKEELVNGTSNDNFVLELDFEPFTASFPKPTLTKSIGNGVEFLNRHLSAKMFHDKESMTPLLEFLRVHHYKGKTMMLNDRVQDLNTLQNVLRKAEEYLTTLSPETSYSVFEHKFQEIGLERGWGDNAERVLEMICMLLDLLEAPDSCTLEKFLGRIPMVFNVVILSPHGYFAQENVLGYPDTGGQVVYILDQVPALEREMLKRIKEQGLDIKPRILIVTRLLPDAVGTTCGQRLEKVFGTEHSHILRVPFRTEKGIVRKWISRFEVWPYMETFTEDVAKEIAAELQAKPDLIIGNYSEGNLAASLLAHKLGVTQCTIAHALEKTKYPDSDIYLKKFDEKYHFSAQFTADLIAMNHTDFIITSTFQEIAGSKDTVGQYESHMAFTMPGLYRVVHGIDVFDPKFNIVSPGADMNLYFPYFEKEKRLTAYHPEIEELLFSDVENDEHMCVLKDRNKPIIFTMARLDRVKNLTGLVELYAKNPRLRELVNLVVVGGDRRKESKDLEEQAEMKKMYELIKTHNLNGQFRWISSQMNRVRNGELYRYIADTRGAFVQPAFYEAFGLTVVEAMTCGLPTFATNHGGPAEIIVHGKSGFHIDPYHGEQAAELLADFFERCKKEPSHWEAISEGGLKRIQEKYTWQIYSDRLLTLAAVYGFWKHVSKLDRLEIRRYLEMFYALKFRKLAEAVPLAVE

SEQ ID NO: 26: полинуклеотидная последовательность NtSUS5-S

atggcctcaacagttgctgatagcatgcctgatgctttgaaacaaagccggtatcatatgaagagatgcttcgctaggtgaacacccttcttttatgttttttcccctctacgtgtttatgtcaaatttccatgcataatgctaactacttttcttctttttgacttcaaaattggatgtgaaaggttcattgcaatgggaaggaggctaatgaagttgaaacatttaacagaagaaatagaagaaactattgaagacaaggcagaaagaaccaggattttggagggttcacttggaaaaattatgagttccacacaggtcagcaccatttaaccaacttagttgaacaggaaaaaaagaaaaagcaaaagagttattgcaaggcgtaacgattttctttgaaattttcaggaggcagctgttgttccaccttatgttgcttttgcagtaaggcacaatcctggcttctgggattatgtcaaagttaacgctgaaactctctctgtggaagctatttcagccagggaatatctcaaattcaaagagatgatctttgacgaagactggtaagtggaaaattgtatcattttaaagagaaacaattttgtaacatacaagaatagttttgatggttgaatgtgcaagcagggcaaaggatgataatgcactggaagtagattttggtgcttttgactactctaatcctcggttagccctttcctcttctgtcggaaatgggctcaactttatctcaaaagttctgtcttcaaagtttggtggaaagccagaggacgcccagcctttgcttgattacttactagctcttaatcatcaaggagaggtatgaaaatggactacctttgtttcttaaaggtattatataatgatgcgcgttataaagttcctttttaaattgaaactttgcagaatctaatgatcaatgagaatctgaatggtgttgctaagcttcaagcagcattgatagtagctgaagtttttgtatcttcctttcccaaagacacaccttataaagactttgagcataagtaagcttctcatatgcttccattgtcatatgcagtataccaatgacatgctaccgaaaagttgtttatgtttgtgacttgattatgaaaactctaggctcaaagaatggggctttgataaagggtggggtcacaatgcaggaagagtaagagagacaatgagactgctttccgagataatccaagcaccagatcccataaatatggagtcctttttcagcaagcttcctactacattcaacattgttatcttctccattcatggttactttggccaagcagatgtccttggtctgcccgatactggaggccaggtctacatatacagcaatttatctccttttgcctcatattgcttattagcgacacttgcatcattgaaatcagacttttacttcacaggttgtttatattctggatcaagtaagggctttagaggaggaaatgttacaaagaatcaagcagcaagggctaaacgtgaagcccaagattcttgtggtgagttttgcaaaaatatgcttagacaggttttgagattgatcggagaagggattaagatgatcaagatctttgtttcctgctttcatgatgtaaacaggtatctcgtctcataccagatgctcgagggacaacatgcaatcaggagatggaacctattcttaactcatcccattctcacatcctgagaattccattcaggactgagaaaggagttcttcgccaatgggtttctcggtttgatatctatccttacttggagaactatgccaaggcaagtcttctaacaaaattaccacctattcatacactttatttactttcttgaactaatcgtttggtttgtgacgtatatcattaggatgcttctgctaagatacttgagctcatggaaggtaaaccagacctcataattgggaactacactgatggaaatttagtggcatctctattggccaacaaacttggagttactcaggttccgtagctgatcatatgatcatattttctacattgtttcttgataattaaatggaaatcttattggatgataacattttagggaaccattgctcatgcattagagaaaactaagtatgaagattctgatgtgaagtggaagcagtttgatcccaagtaccacttttcttgccaatttactgccgatttattggcaatgaatgctgctgattttatcattaccagcacatatcaagaaatcgctggaaggttagcactgactctctcagtatatttggcaacttaatgaatttactgcagtggccaacactaaaagctatcattcgtccttcagcgaaactaggcctggacaatatgaaagtcacacagcatttaccatgccggggctttatagagctgtttcaggcatcaatgtatttgatccaaagttcaacattgctgctcctggggctgaacagtctacctatttccctttcactgagaaacagaaacgattcagcacatttcgtcctgctattaacgaattactttacagtaatgaggaaaacaatgagcacatgtaagtctaattgcccattttcctaatctaaccattgcttaaatcgttctgtttttaccggatgtgtggtacttatcagtaacatttttttttggatcagtggatttcttgcagaccggaaaaaaccaattatattttcaatggcgagatttgatacagtgaagaacctgtcaggcttgactgagtggtatgggaagaataagaagttgcggaacttggtaaaccttgttattgttgggggattcttcgatccatcaaaatcaaaagaccgggaggaagcagctgaaatcaagaagatgcatgaattgattgagaaataccagctcaagggacaaatgagatggatagcagctcaaactgataaatatcgaaatagtgagctataccgaactattgctgacactaagggagcttttgtccaaccggctttatatgaagcttttggactaaccgttattgaagcaatggattgtggattgcctacgtttgcaactaatcaaggtggacctgcagaaatcattgttgatggggtttcaggtttccatattgatccttacaatggggacgaatcaagcaagaaaatagctgatttctttgagaagtgtaaggttgattctaaatattggaacaggatatctgagggaggtctcaagcgcattgaagaatggtaacaaactagttccaagtttaaaaaatggaaaaaatgcttatcatgttatattttcgtggttttaagttctgcttcgatgcagttatacgtggaagatttatgcaaacaaagtgttgaatatgggatcaatctatggattttggagacaattcaatgtggggcaaaagcaggctaagcaaagatactttgagatgttttacaatcctctcttcaggaaattggtaggttgtatatgttgaatacaatttactaagatcctcaaaatgaccaagaaatatacattgactatgctacttttgtaatttcacaggccaaaagcgtgccgatcccacatgaagagccattgccacttgcaacatcagactctactcaatcccaagaattaaaactaccactaccagttccagcagcagtagctaaagttctgccattaacaaggcatgcttttaacttaattacttctctacctagagtaactggtaaagtggatgtcaagtga

SEQ ID NO: 27: полипептидная последовательность NtSUS5-S

MASTVADSMPDALKQSRYHMKRCFARFIAMGRRLMKLKHLTEEIEETIEDKAERTRILEGSLGKIMSSTQEAAVVPPYVAFAVRHNPGFWDYVKVNAETLSVEAISAREYLKFKEMIFDEDWAKDDNALEVDFGAFDYSNPRLALSSSVGNGLNFISKVLSSKFGGKPEDAQPLLDYLLALNHQGENLMINENLNGVAKLQAALIVAEVFVSSFPKDTPYKDFEHKLKEWGFDKGWGHNAGRVRETMRLLSEIIQAPDPINMESFFSKLPTTFNIVIFSIHGYFGQADVLGLPDTGGQVVYILDQVRALEEEMLQRIKQQGLNVKPKILVVSRLIPDARGTTCNQEMEPILNSSHSHILRIPFRTEKGVLRQWDASAKILELMEGKPDLIIGNYTDGNLVASLLANKLGVTQGTIAHALEKTKYEDSDVKWKQFDPKYHFSCQFTADLLAMNAADFIITSTYQEIAGSETRPGQYESHTAFTMPGLYRAVSGINVFDPKFNIAAPGAEQSTYFPFTEKQKRFSTFRPAINELLYSNEENNEHIGFLADRKKPIIFSMARFDTVKNLSGLTEWYGKNKKLRNLVNLVIVGGFFDPSKSKDREEAAEIKKMHELIEKYQLKGQMRWIAAQTDKYRNSELYRTIADTKGAFVQPALYEAFGLTVIEAMDCGLPTFATNQGGPAEIIVDGVSGFHIDPYNGDESSKKIADFFEKCKVDSKYWNRISEGGLKRIEECYTWKIYANKVLNMGSIYGFWRQFNVGQKQAKQRYFEMFYNPLFRKLAKSVPIPHEEPLPLATSDSTQSQELKLPLPVPAAVAKVLPLTRHAFNLITSLPRVTGKVDVK

SEQ ID NO: 28: полинуклеотидная последовательность NtSUS5-T

atggcctcaactgttgctggtagcatgcctgatgctttgaaacaaagccgatatcatatgaagagatgcttcgctaggtgaacacccttcttgttctttttgttttttccctctaccatttatgtcaaatttcaatgcataatgctaactactttttttctttttgacttcaaaattggacgtgaaaggttcattgcaatgggaaggaggttgatgaagctgaaacatttaacagaagaaatagaaaaaactattgaagacaaggcagaaagaaccaagattttggagggttcacttggaaaaattatgagttccacacaggtcagcaccatttaaccaacttaattgaataggaagaaaaaaaaaagcaaaagagttattgcaaggcgtaacgatttcctttgaaattttcaggaggcagctgttgtcccaccttatgttgcttttgcagtaaggcacaatcctggcttctgggattatgtcaaagttgacgctgaaactctctctgtggaagctatttcagccagggactatctcaaattcaaagagatgatctttgatgaagattggtaactggaagattgtatcattttaaagaaacaattttttaatattcaagattagttttgatggttgaatgtgcaagcagggcaaaggatgaaaatgcactcgaagtagattttggtgcttttgactactctaatcatcggttagccctttcctcttctgtcggaaatgggctaaacttcatctcgaaagttttgtcttcaaagtttggtggaaaggcagaagatgcccagcctttgcttgattacttactagctcttaatcatcaaggagaggtatggaaatggactaccttcctttcttaaggaattatataatgatgtatgttataaagatcctttttaaacattgacactttgcagaatctaatgatcaatgagaatctgaatggcgtctctaagcttcaagcagcattgatagtagctgaagtttttgtatcttcctttcccaaagacacaccttataaagactttgagcataagtaagcttttcaaacgcttctgttatcatatgcaatataccaagaatatgttgccttttgaaaagttgtttatgtttatgacttgataatgaaaatactaggctcaaagaatggggctttgagaaagggtggggtcacaatgcaggaagagtaagagagacaatgagactgctttccgagataatccaagcgccagatcccataaatatggagtcctttttcagcaggcttcctactacattcaacattgttatcttctccattcatggttactttggccaagcagatgtccttggtttgcccgatactggaggccaggtttacatacacagcaatttatctccttttgcctcatatttacttattagcgacacttgcattattgaaatcacatttgtatttaacaggttgtttatattctggatcaagtaagagccttagaggaggaaatgttacaaagaatcaagcagcaagggttaaatgtgaagcccaagattcttgtggtgagttatgcaaaaatatgcgtagccaaggttttgaaattgttcagaggggattaagatgatcgagatatttgtttccttcttccattgatgtgtacaggtcactcgtctcattccagatgctcgagggactacatgcaatcaggagatggaacctatacttaactcgtcccattctcacatcctgagaattccattcaggacagagaaaggagttcttcgccaatgggtttctcggtttgatatctatccttacttggagaactatgccaaggcaagtctcctaccaaaattaccacctattcatacactttattcagttttttgagctaatcattctcatttgtcacgtatgtgattaggatgcttctgctaagatacttgagctcatggaaggtaaaccagacctcattattgggaactacactgatggaaatttagtggcatctctattggccaacaaacttggagttactcaggttctacagctgatcatttatctgatcagattttctacattgttttcttgataattaaacggaaatcttatgagattgtaacattttagggaaccattgctcatgcattagagaaaaccaagtatgaagattctgatgtcaagtggaagcagtttgattccaagtaccacttttcttgccaattcactgccgatttattggcaatgaatgctgctgattttatcattaccagcacatatcaagaaatcgcaggaaggttagcactgactctctcagtatatttggcaacttaatgaatgtactgcttgtggccaacactaaaagctattactcgtccttcagcgaaactaggcctggacaatatgaaagtcacacagcatttaccatgccggggctttatagagctgtttcaggcatcaatgtatttgatccaaagttcaacattgctgctcctggggctgaacagtctgcctatttccccttcactgagaaacagaaacgattcagcgcgtttcgtcctgctattgaggaactactttacagtaatgagcaaaacaacgagcacatgtaagtctaattgccccattttcctaatctaaccattgcttaaatgttctgtttttacttgatatgtggtacttatcagtgatattttttattggaacagtggatttcttgcagaccgtaaaaaaccaattatattttcaatggcaagatttgatacggtgaagaacttgtcaggcttgactgagtggtatgggaagaataagaagttgcggaacttggttaacctcgttatcgttgggggattcttcgatccatcaaaatcaaaagaccgggaggaagcagctgaaatcaagaagatgcatgaattgattgagaaatacaagctcaagggacaaatgagatggatagcagctcaaactgataaatatcaaaacagtgagctatatcgaactattgctgacactaaaggagctttcgtccaaccggctttatatgaagcttttggactaactgttattgaagcaatgaattgtggactgcctacatttgctactaatcaaggcggacctgcagaaatcattgttgatggggtttcaggcttccatattgatccttacaatggggatgaatcgagcaagaaaatagctgatttctttgagaagtgtaaggttgattctaaatattggaacaagatatgtggaggaggtctcaagcgcattgaagaatggtaa

SEQ ID NO: 29: полипептидная последовательность NtSUS5-T

MASTVAGSMPDALKQSRYHMKRCFARFIAMGRRLMKLKHLTEEIEKTIEDKAERTKILEGSLGKIMSSTQEAAVVPPYVAFAVRHNPGFWDYVKVDAETLSVEAISARDYLKFKEMIFDEDWAKDENALEVDFGAFDYSNHRLALSSSVGNGLNFISKVLSSKFGGKAEDAQPLLDYLLALNHQGENLMINENLNGVSKLQAALIVAEVFVSSFPKDTPYKDFEHKLKEWGFEKGWGHNAGRVRETMRLLSEIIQAPDPINMESFFSRLPTTFNIVIFSIHGYFGQADVLGLPDTGGQVVYILDQVRALEEEMLQRIKQQGLNVKPKILVVTRLIPDARGTTCNQEMEPILNSSHSHILRIPFRTEKGVLRQWDASAKILELMEGKPDLIIGNYTDGNLVASLLANKLGVTQGTIAHALEKTKYEDSDVKWKQFDSKYHFSCQFTADLLAMNAADFIITSTYQEIAGSETRPGQYESHTAFTMPGLYRAVSGINVFDPKFNIAAPGAEQSAYFPFTEKQKRFSAFRPAIEELLYSNEQNNEHIGFLADRKKPIIFSMARFDTVKNLSGLTEWYGKNKKLRNLVNLVIVGGFFDPSKSKDREEAAEIKKMHELIEKYKLKGQMRWIAAQTDKYQNSELYRTIADTKGAFVQPALYEAFGLTVIEAMNCGLPTFATNQGGPAEIIVDGVSGFHIDPYNGDESSKKIADFFEKCKVDSKYWNKICGGGLKRIEEW

SEQ ID NO: 30: полинуклеотидная последовательность NtSUS6-S

atggctactgcaccagccctaaatagatcagagtccatagctgatagcatgccagaggccttaaggcaaagccggtaccacatgaagaaatgttttgccaagtacatagagcaaggaaagaggatgatgaaacttcataacttgatggatgagttggagaaagtaattgatgatcctgctgaaaggaaccatgttttggaaggcttacttggctacatattatgcactacaatggtatagctagattcatatgtacttatgatgcccttatattgtttcctgatgtattactcttaaaaccttctttgatcaaatttacaggaggctgcagttgttcctccctacattgcctttgccacgagacagaatcctggattctgggaatatgtgaaagtgaatgctaatgatctttctgttgagggtattacagctacagaatacttgaaattcaaggaaatgatagttgatgaatgctggtatagtatacgttgcagcttatcataccttttgtggttttataacttcaatcagaaaactcatcagagttacctttgtgtgaacatgaaatgcagggcaaaagatgaatatgcactggaaattgattttggagcagtagacttctcaacgcctcgactgaccctatcctcttcaattggcaatggtctcagttatgtttccaagtttctaacttcaaagctaaatgctacctccgcgagtgcacagtgtctggttgactacttgctcactttgaatcatcaaggagatgtacgtcaacaaaaatcaaactccataagtaaacttgtcaactctaagaagaaaaaataggaaaagaagattcacgtaacaaattttctttatgttcaactgcagaaactgatgatcaatgagacactcagcactgtctcaaagcttcaggctgcactggttgtagcagaagcatctatttcctctttaccaacagatacaccatatgagagctttgagctaaggtgatttgttttttcctctacttccctccacttgtgccatgctacgtagtactaagtaacttcaattcttgtaaagattcaaacagtggggttttgagaaaggatggggtgatacagctgaaagggtcagcgacaccatgagaacactgtctgaggtgcttcaggcaccagatccattgaacattcagaagttctttggaagggttccaactgttttcaatattgtattgttctctgtccatggatactttggccaagcagatgttcttggcttgccagacactggtggtcaggtaagcatttaatagcttttacatttaacttctatgcattgacaataaaataatttttaacagtttgaccacttctgctcttgttcaacaggtagtttatgttttggatcaagttgtagcttttgaagaagaaatgctacaaagaattaaacagcaggggctcaatattaagcctcaaattcttgtggtgagttcctagacaatcgacgtgactatgcaattatgtagaggctgtttagaaaagttaatatcatatgttgattgcacagttaacccgactgattccggatgcaaaaggaacaaagtgcaaccaggaactagaaccaatcaagaatacaaaacattcacacatcctcagagttccatttaggacagaaaaaggagtgcttaatcaatgggtttcacgatttgatatctatccatatctggagagatatactcaggtatgtatttttatatcaaccttgctcatcaaagatgtgttgtttcctcaattccatttttccccttggcaaaaggatgctgctgacaaaatcgtcgagctaatggaaggcaaacctgatctaatcattggtaactacactgatgggaatctagtggcttcactaatggctagaaaacttgggataactctggtaacttttcttaatcatatttgatgttgcttcttctccaagttagttcttaatctccactgacctagaccatctttgcaacagggaactattgctcatgctttggagaagacaaaatatgaagactctgacataaaattgaaggaactcgatccgaagtaccacttctcttgccaattcacagctgatttgattgcaatgaattcagcagatttcattatcactagcacataccaagaaatagctggaaggtaagaattagagctaataagtaatgcattcatatgtatttcagcatcgctctttcaccatcatcgaatacacaccactactcagtaaatgtatttgctcaaaagtttgcaacttaatggatctcattcttgaatgcttcaacatatgcagcaaagataaaccaggacagtatgagagccatagtgcatttacccttccagggctttacagagttgcttcaggtatcaatgtctttgatccaaaatttaatattgctgcacctggggcagaccagtcggtgtatttcccttacacagaaaagcagaagcgtttgactgctttccgccctgccattgaggaactgctttttagtaaagtggacaatgacgagcacgtgtaagtctaagtgttaaacttcagcttagtgcctagaacatcccactgctctatgtattgatgtttcacttgtttcaaacagtggatatttagaagacagaaagaaacctatcctgtttaccatggcaaggctggacacagtgaagaacacatctggactaacagaatggtatggcaagaacaagaggctcagaagcttagttaaccttgttgtggttggtggttcctttgatcctacaaaatccaaggatagggaagaagcagctgaaataaaaaagatgcacatgctgatagagaaataccagcttaagggtcagattagatggatagcagctcagactgacagatacagaaatagtgaactctaccgcacaatagcagattccaaaggagcttttgtgcagcctgcattgtatgaagcatttggtctaacagtcattgaggcaatgaactgtggattaccaacctttgctaccaaccaaggtggccctgctgagattattgttgatggggtctcaggctttcatattgatccaaataatggggatgaatcaagcaacaaaattgccaactttttccaaaaatgcagggaggatcctgagtattggaacaggatttcagtccagggtctaaaccgtatatatgaatggtaactcacagataagccattcaaattgcaaagaggcacatatcttgcagaaaatttcttaatccttaaatcctaattttttgcagttacacatggaagatctatgcaaacaaggtattgaatatggggtccatctatactttttggaggacattgtacagagatcagaaacaagcaaagcaaagatacatcgagactttctacaatcttgagtttaggaacttggtatagtgctgcatgacattgacagtataccacaaacatctttatgagatgaattacttttaataaaattgtttttaacctttgcttccttaatggcacttattgcaggtaaaaaatgtgcctatcagaaaggacgaaacaccacaaggaccaaaggagagggagaaagttaagccacagatatcacaaaggcatgctctaaagcttttgcctacagtttttcaagagaccctagtatattctagtactaaattagaattatacagcatgcagcttttgctgttcacctttctaaatcaccagttgtgtcaatcaagttgacaaaatcaataaattgggattttccctttcctatgcttgattgttattactcctactttgtttatggtagtcttccttcattgttttctcctgtacttcttttactacaactgtactgacatactaattatttctgtgtaccaggcgctcacaatcaaggttgcagaagtaagattagataaaattgctactgcatga

SEQ ID NO: 31: полипептидная последовательность NtSUS6-S

MATAPALNRSESIADSMPEALRQSRYHMKKCFAKYIEQGKRMMKLHNLMDELEKVIDDPAERNHVLEGLLGYILCTTMEAAVVPPYIAFATRQNPGFWEYVKVNANDLSVEGITATEYLKFKEMIVDECWAKDEYALEIDFGAVDFSTPRLTLSSSIGNGLSYVSKFLTSKLNATSASAQCLVDYLLTLNHQGDKLMINETLSTVSKLQAALVVAEASISSLPTDTPYESFELRFKQWGFEKGWGDTAERVSDTMRTLSEVLQAPDPLNIQKFFGRVPTVFNIVLFSVHGYFGQADVLGLPDTGGQVVYVLDQVVAFEEEMLQRIKQQGLNIKPQILVLTRLIPDAKGTKCNQELEPIKNTKHSHILRVPFRTEKGVLNQWVSRFDIYPYLERYTQDAADKIVELMEGKPDLIIGNYTDGNLVASLMARKLGITLGTIAHALEKTKYEDSDIKLKELDPKYHFSCQFTADLIAMNSADFIITSTYQEIAGSKDKPGQYESHSAFTLPGLYRVASGINVFDPKFNIAAPGADQSVYFPYTEKQKRLTAFRPAIEELLFSKVDNDEHVGYLEDRKKPILFTMARLDTVKNTSGLTEWYGKNKRLRSLVNLVVVGGSFDPTKSKDREEAAEIKKMHMLIEKYQLKGQIRWIAAQTDRYRNSELYRTIADSKGAFVQPALYEAFGLTVIEAMNCGLPTFATNQGGPAEIIVDGVSGFHIDPNNGDESSNKIANFFQKCREDPEYWNRISVQGLNRIYECYTWKIYANKVLNMGSIYTFWRTLYRDQKQAKQRYIETFYNLEFRNLVKNVPIRKDETPQGPKEREKVKPQISQRHALKLLPTVFQETLALTIKVAEVRLDKIATA

SEQ ID NO: 32: полинуклеотидная последовательность NtSUS6-T

atggctactgcaccagccctgaaaagatcagagtccatagctgatagcatgccagaggccttaaggcaaagccggtaccacatgaagaaatgttttgccaagtacatagagcaaggcaagaggatgatgaaacttcataacttgatggatgaattggagaaagtaattgatgatcctgctgaaaggaaccatgttttggaaggcttacttggctacatattatgtactacaatggtatagctagattcatatgtacttatgatgtccttatattgtttccggaggcattattcttaaatccttctttgatcaaatttgtaggaggctgcagttgttcctccctatattgccttcgccacgagacagaatcctggattctgggaatatgtgaaagtcaatgctaatgatctttctgttgagggtattacagctacagattacttgaaattcaaggaaatgatagttgatgaaagctggtatagaatactttgcagcttatcataccttttgtggttttataatttcaatcagaaaactcatcagagttacctttgtgtgaacatgacatgcagggcaaaagatgaatatgcactggaaattgattttggagcagtagacttctcaacgcctcgactgaccctatcctcttcaattggaaatggtctcagttatgtttccaagtttctaacttcaaagctaaatgctacctcagcgagtgcacagtgtctggttgactacttgctcactttgaatcaccaaggagatgtacgtcaacaaaaatcaaactccataagtaaacttgtcaactctaagaagtaaaaataggaaaagaagattcatgtaacaaattttctttatgttcaactgtagaaactgatgatcaatgagacactcggcactgtctcaaagcttcaggctgcactggttgtagcagaagcatctatttcctccttaccaacagatacaccataccagagctttgagctaaggtgatttgttttttcctctacttccttccacttttggtgtgctacatagtactaagtaacttcaattcttgtaaagattcaaacagtggggttttgagaaaggatggggtgatacagctgaaagggtccgcgacaccatgagaacactttctgaggtacttcaggcgccagatccattgaacattgagaagttctttgggagggttccaactgttttcaatattgtattgttctctgttcatggatactttggccaagcaaatgttcttggcttgccagacacaggtggtcaggtaagcatctaatagcttttacatttaacttctatgcattgacaataaaataacttctacactaccaaataatttttgaaagtttgaccacttcggctcttgttcaacaggtggtttatgttttggatcaagttgtagcttttgaagaagaaatgctccaaagaattaaacagcaggggctcaatattaagcctcaaattcttgtggtgagctcctagacaatgacgtgactatgcaattaagtagaggctgtttagaaaagttaatatcatatgttgattgcacagttaacccgactgattccggacgccaaaggaacaaagtgcaaccaggaactagaaccaatcaagaatacaaaacattcacacatcctcagagttccatttaggacagaaaaaggagtgcttaatcaatgggtttcacgatttgatatctatccatatctggagagatatactcaggtgtgtatttttatatcaaccctgctcatcaaagatgtgttgtttcctcaattccatttttcgccttgacaaaaggacgctgctgacaaaatcatcgagctaatggaaggcaaacctgatctaatcattggtaactacactgatgggaatctagtggcttctctaatggctagaaagcttgggataactctggtaacttttcttatcatatttgatgttgtttcttctccaagttggttcttaatgtcaactaacccagaccatctttgtaacagggaactattgctcatgctctggagaagacaaaatatgaagactctgacatcaaattgaaggaactcgatccgaagtaccacttttcttgccaattcacagctgatttgattgcaatgaattcagcagatttcattatcacaagcacatatcaagaaatagccggaaggtaagaattggaactacggaagcagagagctaataagtagtgcactcatatatttcagcatcgctctttcgcataatcgaatacacaccactactcagtaaatgtacttgctcaaaagtttacaagtttatggatcttattcttgaatgcttcaacatatgcagcaaagataggccaggacagtatgagagccatagtgcatttacccttccagggctttacagagttgcttcaggcatcaatgtctttgatcctaaatttaatattgctgcacctggggcagaccaatcggtgtatttcccttacacagaaaagcagacgcgtttgactgctttccgccctgccattgaggaactgctttttagtaaagtggacaatgacgagcacatgtaagtcttagtgttaaacttcagctttcagcttagtgcctagaacattccactggctctatgtattaatgtttcacttgtttcaaacacagtggatatttagaagacagaaagaaacctatcctgtttaccatggcaaggctggacacagtgaagaacacatctggactaacagaatggtatggcaagaacaagaggctcagaagcttagttaaccttgttgtggttggtggttcctttgatcctacaaaatccaaggatagagaagaagcagctgaaataaaaaagatgcacatgctgatagagaaataccagcttaagggtcagatcagatggatagcagctcagactgacagatatagaaacagtgaactctaccgcacaatagcagattccaaaggagcttttgtgcagcctgcattatatgaagcatttggtctaacagtcattgaggcaatgaactgtggattaccaacctttgctaccaaccaaggtggccctgctgagattattgttgatggggtctcaggctttcatattgatccaaataatggggatgaatcaagcaacaaagttgccaactttttccaaaaatgcagggaggatcctgagtattggaacaggatttcagtccagggtctaaaccgtatatatgaatggtaactcacagataagccattcaaattgcaaagaggcacatatcttgctgaaaatttcttaatcctttaatcctaaaattttgcagttacacatggaagatctatgcaaacaaggtattgaatatggggtccatctatactttttggaggacattgtacagagatcagaaacaagcaaagcaaagatacatcgagactttctacaatcttgagtttaggaacttggtatagtgctgcatgacattgacagtataccacaaacatctttatgagatgaattacttttaataaaattgtttttaacctttgcctccttaatgacacttattgcaggtaaaaaatgtgcctatcagacaggacgaaacaccacaaggaccaaaggagaggagggagaaagttaagccacagatatcacaaaggcatgctctaaagcttttgcctatagtttttcaggagaccctagtatattctagtactaaattagaattatacagcatgcagcttgcttctgctgttcacctttctaaatcaccagttatgtcaatcaagttgacaaaatcaataaattcggcttttccctttcctatgcttgattgttattactcctacttcgtttatggtagtcttccttcattgttttctcctgtacttcttttactacaactgtactga

SEQ ID NO: 33: полипептидная последовательность NtSUS6-T

MATAPALKRSESIADSMPEALRQSRYHMKKCFAKYIEQGKRMMKLHNLMDELEKVIDDPAERNHVLEGLLGYILCTTMEAAVVPPYIAFATRQNPGFWEYVKVNANDLSVEGITATDYLKFKEMIVDESWAKDEYALEIDFGAVDFSTPRLTLSSSIGNGLSYVSKFLTSKLNATSASAQCLVDYLLTLNHQGDKLMINETLGTVSKLQAALVVAEASISSLPTDTPYQSFELRFKQWGFEKGWGDTAERVRDTMRTLSEVLQAPDPLNIEKFFGRVPTVFNIVLFSVHGYFGQANVLGLPDTGGQVVYVLDQVVAFEEEMLQRIKQQGLNIKPQILVLTRLIPDAKGTKCNQELEPIKNTKHSHILRVPFRTEKGVLNQWVSRFDIYPYLERYTQDAADKIIELMEGKPDLIIGNYTDGNLVASLMARKLGITLGTIAHALEKTKYEDSDIKLKELDPKYHFSCQFTADLIAMNSADFIITSTYQEIAGSKDRPGQYESHSAFTLPGLYRVASGINVFDPKFNIAAPGADQSVYFPYTEKQTRLTAFRPAIEELLFSKVDNDEHIGYLEDRKKPILFTMARLDTVKNTSGLTEWYGKNKRLRSLVNLVVVGGSFDPTKSKDREEAAEIKKMHMLIEKYQLKGQIRWIAAQTDRYRNSELYRTIADSKGAFVQPALYEAFGLTVIEAMNCGLPTFATNQGGPAEIIVDGVSGFHIDPNNGDESSNKVANFFQKCREDPEYWNRISVQGLNRIYECYTWKIYANKVLNMGSIYTFWRTLYRDQKQAKQRYIETFYNLEFRNLVKNVPIRQDETPQGPKERREKVKPQISQRHALKLLPIVFQETLVYSSTKLELYSMQLASAVHLSKSPVMSIKLTKSINSAFPFPMLDCYYSYFVYGSLPSLFSPVLLLLQLY

--->

Перечень последовательностей

<110> Филип Моррис Продуктс С. А.

<120> МОДУЛИРОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ РЕДУЦИРУЮЩИХ САХАРОВ В РАСТЕНИИ (INV)

<130> P10682EP

<160> 33

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 4237

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 1

atggcggaaa caaacaatag cgttccttac acccaattac cggcggagga caataacacc 60

tccgttaatt ctccggccgg atgccggcta cgacccaaaa gagtgtcgtt tatagtatta 120

acagggctgg tggcagcttt gttacttttt gtggcagtga aatatgggaa aaacgaggcg 180

gaggatgtga atccagggcc agtaccacca caagaaaccg tgtgcaatat gcttggttct 240

aatctaatgc cgctgaccag catgaagacg gtggcgcgtg gggtggcaga aggtgtctcc 300

gccaagtcac gcggtcgttt cttgggatta cggccgtttc catggaccaa acaaatgttg 360

gcttggcaaa gaacatcctt ccactttcaa cctaagaaga attggatgaa tggttagtaa 420

ttctttttct cttatgttat taattttcat aaatcaactt tattattatt attatacaat 480

aaatcaacat tgcttattga tgaattttaa cataaacccg ccttatgctt gacgagatta 540

actagaacta tatatacaat gaatgattat ctccattcca ttacataacc atgaattatg 600

tttcttaatt aattaaagat ttgacatgac attatatttc gtttatagtt taagaaaagc 660

tttgtattga tgtaaaagaa accattacag cttcgaatat gggatacctt gtctttttct 720

tttcctaaga tggatctttg attgcaagaa cagagtttga attactcagg aaacttattt 780

gcttatttat tattttttga ggtgaacatt aatgatttat tcttatttgg catgtgttgg 840

attatttggc ttggattgcg ctgatcacgg aaattgcctg attcttttcg tcagatccta 900

atggtaaagt ccatatattt ctacttgtta ttgttgttgt tcttcttatt attatattat 960

tattgaaaat tatcgacata atcgggacct caaaacatac tagtcgtagc agtttttaag 1020

tagacagatt gtcaatatga tgaagacagt tgttttcaga caattgcatg tgaattttct 1080

aggagcaaac acaaattcct agaatggtaa gcaacttcca ccctgtctgt tccaattata 1140

acctcgctac ttttgatcca cttaatctta ttcaaccaac agtggatcac ttatttaatt 1200

atatgtgacc tagtttattg agacattttt acattaagcc ctttcgtatt tacacttcaa 1260

tatgcatcat acaaaaaaaa atgtacttca aagttatacg ttatattaat ttctaactcc 1320

aatttttaaa aaaaaatata ttttaggtcc cttattctac aaaggatggt accatttgtt 1380

ctatcaatac aatccagagg ctgcagtatg gggaaatatt gtatggggac atgcagtttc 1440

aagagactta attcactggc aacaccttcc agttgctatg gttgcggatc aatggtacga 1500

cattaatggt gtatggaccg gatccgcaac cattttaccc gatggtaaac tcgtcatgtt 1560

gtatactggg tcaaccaacg agtcagtaca ggttcaaaat ttagcgtacc cggctgaccc 1620

atcggatcct ctcctaataa aatgggtcaa gtatgagggc aacccggttc ttgtaccacc 1680

acccggaatt gctgctaagg atttccgtga ccccaccact gcatggacca caccacaagg 1740

caaatggcgg attactattg gttcaaaagt taataaaact ggaatttcat tggtctatga 1800

cactattgat tttaagaatt ttgagttgct ggatggggtg ctccatggtg tatcgggtac 1860

gggtatgtgg gaatgtgtgg atttttaccc ggtttcgaaa gttgttgaaa atgggcttga 1920

cacttcagat aatgggcctg cagtaaaaca tgtgttaaag tccagtcttg atgatgatag 1980

aaatgattat tatgcacttg gaacttatga tgctgtggct ggaaaatggg ttcctgataa 2040

tcccactatt gatgttggta ttggattaag atatgattat ggaaattttt atgcatcaaa 2100

aacattttat gaccaagaga aaaagagaag agtcctttgg gcttggatta ctgaaagtga 2160

tagtgaagct gctgatattt gcaaaggttg ggcatcactt caggtacaat tcaattgtgt 2220

caagctagcg cttgcacata gatttagttg aaacctaaaa aatgagtatt tgaaattccg 2280

tagaaaaata atttttgaaa gttgaagttg tgtttgaata tgcattttat ttgaaaaaaa 2340

aaacagttct aattttatga gaaagaaaaa ttcacctaaa aactgcccta aaccagattt 2400

taggaacttg aaaaaaaaat aaactttttc aaaaactgat tatattctat gaacaaacaa 2460

tattatcaaa aatctatttt ttttttgcca aaatctatgg ccaaacagga gctaatttcc 2520

tttatttttt ttttcaaact tcatgtcata tttgaatttt ggtctcattt aacactttgg 2580

taacgtgtga tgtaacacag cccattccaa ggactataaa atatgacaag aagacaggaa 2640

gcaatataat tacttggcca gtggcagagg ttgagaattt gagatttaac agcaaggaat 2700

tcgacaaggt ggaggtcaag ccaggaaatg ttgttccact agaagttggc actgccactc 2760

aggtttgttc attaaattta gcttatatac actgactgcc taaaagaatt tttttgacat 2820

tattagtgta ttttaagcta ttatagcacg taacatgcta atgctcgaat aagtttaact 2880

tactataact tgaattgttg atgattacag ttggacataa tggctgagtt tgaagtagac 2940

cctaaggtct tggagaaatt agaaggaagt aatgctacat atgagtgcag aagcagcggt 3000

ggatctgctg aacgtggtgc cttaggacca tttggtttat tggttttaac agataaggga 3060

ttgtccgagc aaactccaat ttacttctac attgctaaag acgctgctgg aaatttcacc 3120

acattcttct gcaatgatct taccaggttc taatttctcc tctcttgcat tttcatctca 3180

tcaatgaagt tttagccctt caccccctcc cccaaaacca aactaataaa ttggagaaaa 3240

ccctttattg gttcagtgct taatagcagt acggaattca ggattttaag tcagtgggtt 3300

ctgcgatcta tatatatata ataatatttt tctgcacata catatagtcc gagctagaca 3360

tagtgagttc cgttgaacct gttgcattta gtctgagtcc gccactgctt aagcacatcc 3420

ttctcataac aaccgagctt tccaaaaact taagtatttc tcatgtccat acttttattc 3480

atgtttgaaa atgaagtcac attttgtttt ataaccgaaa aatcccgagg gcaagtggcc 3540

agtacatggt tcgaagctca atggacactg gcaccgcccc tttatcgtgc tccacttaaa 3600

tactaagatt ttgtccgtgg cagggtttca accaatcacg tacgtttaac tcatatatta 3660

ggaatagctt ttaccactag accaaaactc ggggacaatg tatgaagccg gatatttgtt 3720

gcaattcttt ttaaattaaa atggggacaa gatccgagac aaatcttgaa aatgcattac 3780

gaagtattgt taagtaagta tgaaaatggt gattctcatc tttttacttc cttttttagg 3840

tcatctgaag caacagatgt tcgcaaacta atctacggaa gcacagttcc agtcctccaa 3900

ggagagaagc tttctctaag aacactggta atatcccctt tttctttctt aatttcttaa 3960

tccaaattct taattagtgc ttgttttcct ttgtgcgtat aattaagttt actaagtatc 4020

aattaatggg gtatttttgt caatgtaata ggtggatcat tcaatagtag aaagttttgc 4080

acaaaatgga aggacagcaa taacatcaag gttatatcca acaaaggcaa tatatgaaga 4140

tgctaagctc tacttgttta acaatgctac agatgttacc attactgcct cggtcaagat 4200

ttggcaaata cattctgcaa atatacaatc tagttaa 4237

<210> 2

<211> 649

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 2

Met Ala Glu Thr Asn Asn Ser Val Pro Tyr Thr Gln Leu Pro Ala Glu

1 5 10 15

Asp Asn Asn Thr Ser Val Asn Ser Pro Ala Gly Cys Arg Leu Arg Pro

20 25 30

Lys Arg Val Ser Phe Ile Val Leu Thr Gly Leu Val Ala Ala Leu Leu

35 40 45

Leu Phe Val Ala Val Lys Tyr Gly Lys Asn Glu Ala Glu Asp Val Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Val Pro Pro Gln Glu Thr Val Cys Asn Met Leu Gly Ser

65 70 75 80

Asn Leu Met Pro Leu Thr Ser Met Lys Thr Val Ala Arg Gly Val Ala

85 90 95

Glu Gly Val Ser Ala Lys Ser Arg Gly Arg Phe Leu Gly Leu Arg Pro

100 105 110

Phe Pro Trp Thr Lys Gln Met Leu Ala Trp Gln Arg Thr Ser Phe His

115 120 125

Phe Gln Pro Lys Lys Asn Trp Met Asn Asp Pro Asn Gly Pro Leu Phe

130 135 140

Tyr Lys Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gln Tyr Asn Pro Glu Ala Ala

145 150 155 160

Val Trp Gly Asn Ile Val Trp Gly His Ala Val Ser Arg Asp Leu Ile

165 170 175

His Trp Gln His Leu Pro Val Ala Met Val Ala Asp Gln Trp Tyr Asp

180 185 190

Ile Asn Gly Val Trp Thr Gly Ser Ala Thr Ile Leu Pro Asp Gly Lys

195 200 205

Leu Val Met Leu Tyr Thr Gly Ser Thr Asn Glu Ser Val Gln Val Gln

210 215 220

Asn Leu Ala Tyr Pro Ala Asp Pro Ser Asp Pro Leu Leu Ile Lys Trp

225 230 235 240

Val Lys Tyr Glu Gly Asn Pro Val Leu Val Pro Pro Pro Gly Ile Ala

245 250 255

Ala Lys Asp Phe Arg Asp Pro Thr Thr Ala Trp Thr Thr Pro Gln Gly

260 265 270

Lys Trp Arg Ile Thr Ile Gly Ser Lys Val Asn Lys Thr Gly Ile Ser

275 280 285

Leu Val Tyr Asp Thr Ile Asp Phe Lys Asn Phe Glu Leu Leu Asp Gly

290 295 300

Val Leu His Gly Val Ser Gly Thr Gly Met Trp Glu Cys Val Asp Phe

305 310 315 320

Tyr Pro Val Ser Lys Val Val Glu Asn Gly Leu Asp Thr Ser Asp Asn

325 330 335

Gly Pro Ala Val Lys His Val Leu Lys Ser Ser Leu Asp Asp Asp Arg

340 345 350

Asn Asp Tyr Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Asp Ala Val Ala Gly Lys Trp

355 360 365

Val Pro Asp Asn Pro Thr Ile Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg Tyr Asp

370 375 380

Tyr Gly Asn Phe Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Gln Glu Lys Lys

385 390 395 400

Arg Arg Val Leu Trp Ala Trp Ile Thr Glu Ser Asp Ser Glu Ala Ala

405 410 415

Asp Ile Cys Lys Gly Trp Ala Ser Leu Gln Pro Ile Pro Arg Thr Ile

420 425 430

Lys Tyr Asp Lys Lys Thr Gly Ser Asn Ile Ile Thr Trp Pro Val Ala

435 440 445

Glu Val Glu Asn Leu Arg Phe Asn Ser Lys Glu Phe Asp Lys Val Glu

450 455 460

Val Lys Pro Gly Asn Val Val Pro Leu Glu Val Gly Thr Ala Thr Gln

465 470 475 480

Leu Asp Ile Met Ala Glu Phe Glu Val Asp Pro Lys Val Leu Glu Lys

485 490 495

Leu Glu Gly Ser Asn Ala Thr Tyr Glu Cys Arg Ser Ser Gly Gly Ser

500 505 510

Ala Glu Arg Gly Ala Leu Gly Pro Phe Gly Leu Leu Val Leu Thr Asp

515 520 525

Lys Gly Leu Ser Glu Gln Thr Pro Ile Tyr Phe Tyr Ile Ala Lys Asp

530 535 540

Ala Ala Gly Asn Phe Thr Thr Phe Phe Cys Asn Asp Leu Thr Arg Ser

545 550 555 560

Ser Glu Ala Thr Asp Val Arg Lys Leu Ile Tyr Gly Ser Thr Val Pro

565 570 575

Val Leu Gln Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Thr Leu Val Asp His Ser

580 585 590

Ile Val Glu Ser Phe Ala Gln Asn Gly Arg Thr Ala Ile Thr Ser Arg

595 600 605

Leu Tyr Pro Thr Lys Ala Ile Tyr Glu Asp Ala Lys Leu Tyr Leu Phe

610 615 620

Asn Asn Ala Thr Asp Val Thr Ile Thr Ala Ser Val Lys Ile Trp Gln

625 630 635 640

Ile His Ser Ala Asn Ile Gln Ser Ser

645

<210> 3

<211> 5883

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 3

atggcggaaa caaacaatag cgttccttac acccaattac cggcggagga caataacacc 60

tccagtaatt ctccggccaa atgccggcga cgacccaaaa gagtgtcgtt catagtatta 120

acagggctgg tggcagcttt gttacttttt gtggcagtga aatatgggaa taacgaggcg 180

gaggatgtaa atccagggcc agtaccacca caagaaaccg tgtgtaacat gcttggttct 240

aatctaatgc cgctgaccac catgaggacg gtggcgcgtg gggtggcaga aggtgtctcc 300

gccaagtcac gcggtcgttt cttgggatta cggccgtttc catggaccaa acaaatgttg 360

gcttggcaaa gaacatcctt ccactttcaa cctaagaaga attggatgaa tggttagtaa 420

ttctttttct cttatgttat tttcataaat cagctttgtt tttattaaac aataaatcaa 480

cagcttattg ataattttaa acataaaacc gccttatgct tgacgagatt aactagaact 540

ttatgtacaa tgaatggtta tctccattcc attacatgcc catgaatttt atgtgtctta 600

atttaaagat ttgacaggac attacattac gtttatagtt taagaaaagc ttggtattga 660

tataaaaaaa accattacag cttcgaatat gggatacctt gtctttttct ttgcctaaga 720

tggatctttg attgcaagaa cagagtttga attactcagg aaaaatatga aatcgttttg 780

gaacttattt gcttgtttat tattttttga ggtgaacatt aatgatttat tcttatttgg 840

catgtgttgg attctttggc tttggactgc gttgctcacg gaaattacct gattctgttc 900

gtcagatcct aatggtaagt ccatattttc tgccggtatt attattatta ttattgttat 960

tgttattatt attattatta ttattaattt attttgatat attggaaacc atcgacaaaa 1020

cggggacctc aaaacatact agtcggggta gtttgtaagt agacagattg acaatatgat 1080

gaagacagtt gtctttagac aattgcatgt gaattttgta ggagcaaaca caaattccta 1140

gaatggtata caacttcaat cctgtctgtc caattataac ctcgctactt ttgatccact 1200

acaccttttt cgatcaacag gggatcactt atttaattat acggaaccct ttatataaca 1260

atcatatttg ttcccgtatt ttttaggttt tatattgagt ggttgttatg caaatattac 1320

aggatttgac gtttaaatat ttttttggtt gttatagata aaaattatct ataaataaat 1380

aatcattcct tttttcatgt tacatataaa aaataaggaa attatttaaa tttaaaatct 1440

cacaagctat gcatatttca ctaattaaat attaaagaaa gttaatacat tattaataaa 1500

ttcataacta aaaatataaa gatttaaact ctaaggcaga cattttaagg ctaccaaaaa 1560

aataattttt ttcaagattg atggaagtgg aacaactttg taattgtagc ttgtttcgta 1620

gatttcattc tcttactagc gatataacac ttgaattggc aaagatccgt gtctaaattt 1680

tcagcaaaaa ggtatccaat agtttttcct tgaatacaat ctaagagttt aaccgttaaa 1740

ttttctatcc aagtattttt taaatttatc caataaaaaa gatatcatgt gcaaatctat 1800

aaatcttata ttttatgcaa gatagaaact ttatttattt ttagaattat tattagcaat 1860

cttaaagatt ttatatggct gttatagagg ggtaatttta caaaaagcgt tctgctataa 1920

atatggttgt tgctgttata ggtaaaaagt tgttataaaa ttgtttatga aagtcacttt 1980

actttatttt ttaactgaaa agtcactata ctttgcacat tgtaactcaa aagtcaatca 2040

acacttttag ggcgttatta aacattattt ttcatatttc ttttcagccc aaccatttaa 2100

aaaataaaaa aaaatattta aatcatgact cgacggttcc atgacctgac ccattttctc 2160

ttatttatgt tataaaaaac ataaatatta ctttgttgta gtgtattata ttggttctca 2220

atatagttat actaaatgta tacattggtt taagcaaagt attaaataga gaataaggaa 2280

ttaatcttaa caaactagag gagttagatt tgaaactgaa acaagaaaat tagtagcgtt 2340

gaagtgaaaa aaaataaaaa ggaggaagaa aaaataaaaa aagtatttat gcttgaaatt 2400

ttgactgaga aatattaata taagagtaaa ttaaaagaca atatccttga tgttttagaa 2460

caagaacgcg cattttagta aagataatgt tactagacga ccatttttag tcgaactaat 2520

ttaatacttt gcttaaatca atatgttgaa aatcaagaca attaacagta aagtaatatt 2580

tacgtttttt tgtaacaaaa ataagagagt gggtcgagtt aaagagcggg ttgagtcacg 2640

gtttaaatgg gtattttttt attgtttaaa tgattgagtt aaaaaaaata tgaaaaaaaa 2700

aatttaatat ggcctaaatg tattgagtga cttttgagtt acaatgtgta aagtatgatg 2760

actttccttt tacaaaacaa agtaaagtga ctttcataaa caattttcat tagttcaatg 2820

acttctgaga aatggactcc ttaaaaaatt gattctgaag aaaacttggt ttttacggtg 2880

aatgactgtt atatatgaat gttgttatcg aaaggtctga ctgtatgtga cctagtttat 2940

tgagacgttt ttacattaaa gccctttcgt atttacactt caatatgcat catacaaaaa 3000

atatgtgctt cataattata cattacattc atttctaact ccacttttac aaaaaatatt 3060

ttaggtccat tattctacaa aggatggtac catttgttct atcaatacaa tccagaggct 3120

gcagtatggg gaaatattgt atggggccat gcagtttcaa gagacttaat tcactggcaa 3180

caccttccag ttgctatggt tgcggatcaa tggtacgaca ttaacggtgt atggaccgga 3240

tccgcaacca ttttacccga tggtaaactc gtcatgttat ataccgggtc aaccaacgag 3300

tcagtacagg ttcaaaatct agcgtacccg gctgacccat cggatcctct cctaagaaaa 3360

tgggtcaaat atgagggcaa cccggtactt gtaccaccac ccggaattgc tactaaagat 3420

tttcgtgacc ccaccactgc atggaccaca ccacaaggca aatggaggat tactattggt 3480

tcaaaggtta ataaaactgg aatttcattg gtctatgaca ctattgattt taagaaattt 3540

gagttgttgg atggggtgct ccatggtgta ccgggtacgg gtatgtggga atgtgtggac 3600

ttttacccgg tttcgaaagt tgttgaaaat gggcttgaca catcagataa tgggcctgca 3660

gtaaaacatg tgttaaagtc cagtctagat gatgatagaa atgattatta tgcacttgga 3720

acttatgatg cagtggctgg taaatggatt cctgataatc ccacaattga tgttggtatt 3780

ggattaagat atgattatgg aaatttttac gcatcaaaaa cattttatga ccaagaaaaa 3840

aagagaagag tcctttgggc ttggattact gaaggtgata gtgaagctgc tgatatttgc 3900

aaaggttggg catcacttca ggtacaattc aattgtgtcg aagacaattt agctagtgtt 3960

gggatataga tttggttgaa acttaaaaaa aaaaatattt aaaattatgg acatgtattt 4020

tatttgaaaa aaattaaaat tctgtgagtg gaagaaaacc ttttacccaa aaactaccct 4080

aaaccagatt ttgggaatgt aaaaaaaaga atcagatcat attctatgaa caaacaatat 4140

tatcaaaagt tttttaaaaa caattttcaa aatctatggt caatttcctc ttttatttta 4200

cttcattttg tcatatttga attttggtct catttaacac ttggtaacgt gtgatgtaaa 4260

acagcctatt ccaaggacta taaaatatga caagaagaca ggaagcaaca taattacttg 4320

gccagtggcg gaggttgaga atttgagatt aaacagtaag gaattcgaca aggtggaggt 4380

aaaaccaggg tcagtttttc cactagaagt tggcactgcc actcaggttt gttgattgaa 4440

tttaactata cacgtgtaaa agaatttctt tacgttatcg gtctatttta aactattata 4500

gcacgtaaca tgctaatatt cgataagttt aacttactat aatttgaatt gttgatgatt 4560

atagttggac ataatggctg agtttgaaat agaccctaag gtcttggaga gattagaagg 4620

aaataatgct acatatgagt gcagaagcag tgggggatct gctgaacgtg gtgccttagg 4680

accatttggt ttattggttt taacagataa gggcttgtcc gagcaaactc caatttactt 4740

ctacattgca aaagacgctg ctggaaattt caccacattc ttctgcaatg atcttaccag 4800

gttctaattt ctcctctctt gcattttcat ctcatcaatg aagttttagc ccctcccccc 4860

caccaaaacc aaactaagaa attggagaaa aacctttatt ggttcactgc ttaatagcag 4920

tacggaattc aggattttga gtcattaggt tctgctctat atatatatat ataataatat 4980

ttttctacac atatatatag ttcgagctaa acataatgag ttccgtcgaa cctgttgcat 5040

ctagtctgaa tccgccactg ctttaacaca tctttctcat aataaccact atttccaaga 5100

gcttaagtat ttctcatgtc catacttcta tccacgttta aaaatgaagt cagattttgt 5160

tttatatccg agaaatcccg agggcaagtg gccagtacat ggttcgaagc tcaatggaca 5220

ctggcaccgc cctttatcgt gctctactta aatattaaga ttttgtctgt tgcagggttt 5280

taaccaagga cgtacgttta acccatatat aacgagtagc ttttaccact agaccaaaac 5340

tcggggcaat atatgaagcc agatatttgt tgcaattctc tttaattaaa ttaaaatggt 5400

gacaagatcc gagacaaatc ttggaagtgc attacgtagt atttttaagt aagtatgata 5460

atggtgattc tcatcttttt acttcctttt ttttaggtca tctgaagcaa cagatgttcg 5520

caaactaatc tacggaagca cagttccagt cctccaagga gagaagcttt ctctaagaac 5580

actggtaatt ttcatttttc ttcttttttt aattgcttat tcaaaattct tgattatatt 5640

gcgtacactt aagtttacca aatataaatt aatggggtat ttttgtgaat gtaataggtg 5700

gatcattcaa tagtagaaag ttttgcacaa agtggaagga cagcaataac gtcaagggta 5760

tatccaacaa aggcaatata tgaagatgct aagctctact tatttaacaa tgctacagat 5820

gttagcatta ctgcctcact caagatttgg caaatgaatt ctgcaaatat acaatctagt 5880

taa 5883

<210> 4

<211> 645

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 4

Met Ala Glu Thr Asn Asn Ser Val Pro Tyr Thr Gln Leu Pro Ala Glu

1 5 10 15

Asp Asn Asn Thr Ser Ser Asn Ser Pro Ala Lys Cys Arg Arg Arg Pro

20 25 30

Lys Arg Val Ser Phe Ile Val Leu Thr Gly Leu Val Ala Ala Leu Leu

35 40 45

Leu Phe Val Ala Val Lys Tyr Gly Asn Asn Glu Ala Glu Asp Val Asn

50 55 60

Pro Gly Pro Val Pro Pro Gln Glu Thr Val Cys Asn Met Leu Gly Ser

65 70 75 80

Asn Leu Met Pro Leu Thr Thr Met Arg Thr Val Ala Arg Gly Val Ala

85 90 95

Glu Gly Val Ser Ala Lys Ser Arg Gly Arg Phe Leu Gly Leu Arg Pro

100 105 110

Phe Pro Trp Thr Lys Gln Met Leu Ala Trp Gln Arg Thr Ser Phe His

115 120 125

Phe Gln Pro Lys Lys Asn Trp Met Asn Gly Pro Leu Phe Tyr Lys Gly

130 135 140

Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gln Tyr Asn Pro Glu Ala Ala Val Trp Gly

145 150 155 160

Asn Ile Val Trp Gly His Ala Val Ser Arg Asp Leu Ile His Trp Gln

165 170 175

His Leu Pro Val Ala Met Val Ala Asp Gln Trp Tyr Asp Ile Asn Gly

180 185 190

Val Trp Thr Gly Ser Ala Thr Ile Leu Pro Asp Gly Lys Leu Val Met

195 200 205

Leu Tyr Thr Gly Ser Thr Asn Glu Ser Val Gln Val Gln Asn Leu Ala

210 215 220

Tyr Pro Ala Asp Pro Ser Asp Pro Leu Leu Arg Lys Trp Val Lys Tyr

225 230 235 240

Glu Gly Asn Pro Val Leu Val Pro Pro Pro Gly Ile Ala Thr Lys Asp

245 250 255

Phe Arg Asp Pro Thr Thr Ala Trp Thr Thr Pro Gln Gly Lys Trp Arg

260 265 270

Ile Thr Ile Gly Ser Lys Val Asn Lys Thr Gly Ile Ser Leu Val Tyr

275 280 285

Asp Thr Ile Asp Phe Lys Lys Phe Glu Leu Leu Asp Gly Val Leu His

290 295 300

Gly Val Pro Gly Thr Gly Met Trp Glu Cys Val Asp Phe Tyr Pro Val

305 310 315 320

Ser Lys Val Val Glu Asn Gly Leu Asp Thr Ser Asp Asn Gly Pro Ala

325 330 335

Val Lys His Val Leu Lys Ser Ser Leu Asp Asp Asp Arg Asn Asp Tyr

340 345 350

Tyr Ala Leu Gly Thr Tyr Asp Ala Val Ala Gly Lys Trp Ile Pro Asp

355 360 365

Asn Pro Thr Ile Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg Tyr Asp Tyr Gly Asn

370 375 380

Phe Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Gln Glu Lys Lys Arg Arg Val

385 390 395 400

Leu Trp Ala Trp Ile Thr Glu Gly Asp Ser Glu Ala Ala Asp Ile Cys

405 410 415

Lys Gly Trp Ala Ser Leu Gln Pro Ile Pro Arg Thr Ile Lys Tyr Asp

420 425 430

Lys Lys Thr Gly Ser Asn Ile Ile Thr Trp Pro Val Ala Glu Val Glu

435 440 445

Asn Leu Arg Leu Asn Ser Lys Glu Phe Asp Lys Val Glu Val Lys Pro

450 455 460

Gly Ser Val Phe Pro Leu Glu Val Gly Thr Ala Thr Gln Leu Asp Ile

465 470 475 480

Met Ala Glu Phe Glu Ile Asp Pro Lys Val Leu Glu Arg Leu Glu Gly

485 490 495

Asn Asn Ala Thr Tyr Glu Cys Arg Ser Ser Gly Gly Ser Ala Glu Arg

500 505 510

Gly Ala Leu Gly Pro Phe Gly Leu Leu Val Leu Thr Asp Lys Gly Leu

515 520 525

Ser Glu Gln Thr Pro Ile Tyr Phe Tyr Ile Ala Lys Asp Ala Ala Gly

530 535 540

Asn Phe Thr Thr Phe Phe Cys Asn Asp Leu Thr Arg Ser Ser Glu Ala

545 550 555 560

Thr Asp Val Arg Lys Leu Ile Tyr Gly Ser Thr Val Pro Val Leu Gln

565 570 575

Gly Glu Lys Leu Ser Leu Arg Thr Leu Val Asp His Ser Ile Val Glu

580 585 590

Ser Phe Ala Gln Ser Gly Arg Thr Ala Ile Thr Ser Arg Val Tyr Pro

595 600 605

Thr Lys Ala Ile Tyr Glu Asp Ala Lys Leu Tyr Leu Phe Asn Asn Ala

610 615 620

Thr Asp Val Ser Thr Ala Ser Leu Lys Ile Trp Gln Met Asn Ser Ala

625 630 635 640

Asn Ile Gln Ser Ser

645

<210> 5

<211> 4155

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 5

atggccaccc accattccca ttatgacccg gaaaactcca cgacccatta cactgtccta 60

ccggatcaac ccgaatccgc cggcgccggg cgccggaagt ctcttaaagt tgtctccggc 120

attttgctct cctctttctt tttgctttct ttagtctttg tgatcctcaa ccagtcttca 180

gatttatcac aagaaaactc ccgctcgtcg gagactttga cgccggcgtt gtcacgaggt 240

gtatctcagg gagtttccga gaagactttc aaggatgttt ccggtagaag cctttcgtac 300

tacccgtgga ctaatgctat gcttacttgg caaaggactg cttaccattt tcaacctcaa 360

aagaattgga tgaacggtaa attttttggc ttatctttct cttattaatt cttttaataa 420

aacatgaatt ttaagatact tatactggct ttttcttatt gattcttatg gctattttgt 480

tggggtatcc tatggattct gattggatga tatgctgcag atcctaatgg tgagtttact 540

tattaccata attacttttt attatttatt attcccaaac catgattagt gcatccggct 600

attggttaaa gattcacaaa accaataaaa tagtaatctt gtcatagttt ccataataat 660

ctacacgtac gctattgttt aatgacaaga aatttgacgc tcagcatagt taattctctc 720

atatttgtat tgtttacttt atagcctttg agctaattaa ttctgggttt ctttgaacta 780

aacctttata agttacaatc acacatagat gagttggcac attattcagg ctaataatga 840

aagaaattgg attacttgac taatatggca aatgcggcca atttaatttg gattaacacg 900

atatatgtgt ggtaataatg cttttgtgca acatctctca tacaaggaca catgattagg 960

tgattttgta ccaagtctcg ggaccaatca caatatatgg gtcacacctt atatattatt 1020

gtaagagttg ggacccacca aggatttgtc tgtctttcca actagccact tgtctttttc 1080

tcttttttat atttttaaat gaaatggtgt gggtttttta tttttgggtc gatctaaccg 1140

cttctgccta ttatcaattt agccttgtga ttgtgagaat agaagagaga aatagaggat 1200

aataataata aggataagaa ttaagaacgt accttcttat tgtcgaaatt atttgagaag 1260

actattcatt gttctgatta gtgtccatcg atgtcccttt cctccttttt ctatcttgga 1320

gaggtttcct cttctttgtt ttacttttcc tttttctaaa tatgcattcc aaaatcttaa 1380

cactactcga acgtccattc ttggaaagtc tctttgaaag tttagggcaa catcattcgg 1440

acaacttaat tagcattcac tattaaaaat taatagaaca gaaaagttca tgtatttttt 1500

tagggagagt aagaggcgga ttcagaattt aaatcttatg tgtttagttt ttaaaatttt 1560

taggattgat aactgaacat ggcgagaaac atgaacatgt gacataaatt ccgtgtttca 1620

acactaaaca ggtccattat accacaaagg atggtaccat cttttttatc aatacaatcc 1680

tgattcagct gtttggggaa atatcacatg gggccatgca atatccacgg acttgatcca 1740

ctggctttac ttgcctttcg ccatggttcc gatcaatggt acgatatcaa cggtgtctgg 1800

accgggtccg cgaccatctt gcccgacggt cagatcatga tgctatacac cggtgatacc 1860

aatgattacg tgcaggtgca aaatcttgca taccctgcta acttatcgga tcctctcctc 1920

atcgactggg tcaagtacca ggacaatccg gtcatggttc ccccacccgg cattggtgtc 1980

aaggacttca gagacccgac aactgcttgg accggacccc aaaacgggca gtggctgcta 2040

accatcgggt ccaagattgg taaaacgggt attgcacttg tttatgatac gtccaacttc 2100

acaaacttta agctattgga tggagttttg catgcggttc cgggtacggg tatgtgggag 2160

tgtgtggact tttacccggt atcaaccgtt gaggcaaacg ggttggacac atcatataac 2220

gggccaggta taagcatgtg ttaaaagcaa gtttagatga cgataagcat gattactatg 2280

ctattgggac atatgacccg gtaaagaaca aatggactcc tgataacccg gaattggatg 2340

tgggtatcgg gttgagactg gactacggga aatactatgc gtcaaagaca ttttatgacc 2400

cgaaagaaca aagaagaata ttgtggggat ggattggaga aactgacagt gaagctgctg 2460

atctgctgaa gggatgggca tctgtacagg tatggactct tttaagtaca ctacctcagc 2520

atccgaagag cattacactt ttatttttgt tttacattag accacatgaa tgggtgtttt 2580

ggcataactg gtaaagttgt tgccatgtga ccctgaggtc acgggttcga gccgtagaaa 2640

tagcctcttg cagtaatgta ataaactctt agtgcatagg gttgcctttt ttattagacc 2700

acacacatgt tcaagttatg tcatgttagt cgtgtcaatt ttttgtggaa atcaatttac 2760

tgcacctcaa tcttgaatta gttgagacta gctataggaa cctttgtatt gagaggactt 2820

atcataattt gatcattttt gcactaactg tcacactatg atattcactt tctttatcca 2880

gtttagtagt gtgccaatac accttaagca cgtgacaaga atttattagc agggtcatct 2940

cgattttatg taggagtaca gaattgaatt gaatcttttc ttctagtaaa ttctcaattg 3000

caacttgaca atgaagtttt tcagatgcaa aaaagatgaa atatctctaa taatttcctt 3060

ttccaataac agagtattcc aaggactctg ctttatgaca aggagacaag gacacatgta 3120

cttcagtggc cagttaaaga aattgagagc ttaagaattg gtgatcctct agtgaaacag 3180

gtcaatcttc aaccaggctc aattgagctt gtccatgttg actcagccgc acaggtttgc 3240

tttctcatcc ttcgaaattg aaaacgtttc acttatatgt gcttgatgta cagtcctaaa 3300

acttgtatgc gcaatggtgc agttggatgt agaagcctca tttgaagtgg acaaagcagc 3360

actcgcggga acaattgaag cagatgtggt ttcaactgca gtactagtgg aggtgctgct 3420

aaaagaggca ttttgggacc atttggtgtc gttgtaattg ctgatcaaac gctttctgag 3480

ctaaccccag tttacttcta cattgccaaa ggaactggtg gccgagctga aacctacttc 3540

tgcgctgatg aaactaggtt tgcttctact atgtttatct tgtatactct atcttaatag 3600

tccttgtcaa agtatagagg aataacatag cggcgtgatc tgatgcagat cctcagaggc 3660

tcctggagtt gctaaacaag tgtatggtag ttcagtacca gtgttagatg gtgaacaaca 3720

ctcaatgaga ttattggtaa gtgataatcc ctttattctg actttcttca aatcaagaat 3780

aatatcaagc ttattagttc ttccagtcat cttacttaat ttgtggaaat gctccaaagt 3840

agtcaatttg gtaactattc aagataatgt ggttcagaat aatttgtgtt atgaatgtat 3900

ttgacagttg ggatgatctg ttttttagta aaatttctta aaaacttaat tcaggtggac 3960

cactcaattg tggaaagctt tgctcaagga ggaagaacag tcataacatc gcgaatttac 4020

ccaacaaaag caatcaatgg agcagcacga ctgttcgttt tcaacaatgc caccggggct 4080

agtgtgactg cctccctcaa gatttggtca ctcaaatcag ctgatattcg atccttcccc 4140

ttggaccagt tgtaa 4155

<210> 6

<211> 642

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 6

Met Ala Thr His His Ser His Tyr Asp Pro Glu Asn Ser Thr Thr His

1 5 10 15

Tyr Thr Val Leu Pro Asp Gln Pro Glu Ser Ala Gly Ala Gly Arg Arg

20 25 30

Lys Ser Leu Lys Val Val Ser Gly Ile Leu Leu Ser Ser Phe Phe Leu

35 40 45

Leu Ser Leu Val Phe Val Ile Leu Asn Gln Ser Ser Asp Leu Ser Gln

50 55 60

Glu Asn Ser Arg Ser Ser Glu Thr Leu Thr Pro Ala Leu Ser Arg Gly

65 70 75 80

Val Ser Gln Gly Val Ser Glu Lys Thr Phe Lys Asp Val Ser Gly Arg

85 90 95

Ser Leu Ser Tyr Tyr Pro Trp Thr Asn Ala Met Leu Thr Trp Gln Arg

100 105 110

Thr Ala Tyr His Phe Gln Pro Gln Lys Asn Trp Met Asn Asp Pro Asn

115 120 125

Gly Pro Leu Tyr His Lys Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gln Tyr Asn

130 135 140

Pro Asp Ser Ala Val Trp Gly Asn Ile Thr Trp Gly His Ala Ile Ser

145 150 155 160

Thr Asp Leu Ile His Trp Leu Tyr Leu Pro Phe Ala Met Val Pro Asp

165 170 175

Gln Trp Tyr Asp Ile Asn Gly Val Trp Thr Gly Ser Ala Thr Ile Leu

180 185 190

Pro Asp Gly Gln Ile Met Met Leu Tyr Thr Gly Asp Thr Asn Asp Tyr

195 200 205

Val Gln Val Gln Asn Leu Ala Tyr Pro Ala Asn Leu Ser Asp Pro Leu

210 215 220

Leu Ile Asp Trp Val Lys Tyr Gln Asp Asn Pro Val Met Val Pro Pro

225 230 235 240

Pro Gly Ile Gly Val Lys Asp Phe Arg Asp Pro Thr Thr Ala Trp Thr

245 250 255

Gly Pro Gln Asn Gly Gln Trp Leu Leu Thr Ile Gly Ser Lys Ile Gly

260 265 270

Lys Thr Gly Ile Ala Leu Val Tyr Asp Thr Ser Asn Phe Thr Asn Phe

275 280 285

Lys Leu Leu Asp Gly Val Leu His Ala Val Pro Gly Thr Gly Met Trp

290 295 300

Glu Cys Val Asp Phe Tyr Pro Val Ser Thr Val Glu Ala Asn Gly Leu

305 310 315 320

Asp Thr Ser Tyr Asn Gly Pro Gly Ile Lys His Val Leu Lys Ala Ser

325 330 335

Leu Asp Asp Asp Lys His Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Thr Tyr Asp Pro

340 345 350

Val Lys Asn Lys Trp Thr Pro Asp Asn Pro Glu Leu Asp Val Gly Ile

355 360 365

Gly Leu Arg Leu Asp Tyr Gly Lys Tyr Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr

370 375 380

Asp Pro Lys Glu Gln Arg Arg Ile Leu Trp Gly Trp Ile Gly Glu Thr

385 390 395 400

Asp Ser Glu Ala Ala Asp Leu Leu Lys Gly Trp Ala Ser Val Gln Ser

405 410 415

Ile Pro Arg Thr Leu Leu Tyr Asp Lys Glu Thr Arg Thr His Val Leu

420 425 430

Gln Trp Pro Val Lys Glu Ile Glu Ser Leu Arg Ile Gly Asp Pro Leu

435 440 445

Val Lys Gln Val Asn Leu Gln Pro Gly Ser Ile Glu Leu Val His Val

450 455 460

Asp Ser Ala Ala Gln Leu Asp Val Glu Ala Ser Phe Glu Val Asp Lys

465 470 475 480

Ala Ala Leu Ala Gly Thr Ile Glu Ala Asp Val Gly Phe Asn Cys Ser

485 490 495

Thr Ser Gly Gly Ala Ala Lys Arg Gly Ile Leu Gly Pro Phe Gly Val

500 505 510

Val Val Ile Ala Asp Gln Thr Leu Ser Glu Leu Thr Pro Val Tyr Phe

515 520 525

Tyr Ile Ala Lys Gly Thr Gly Gly Arg Ala Glu Thr Tyr Phe Cys Ala

530 535 540

Asp Glu Thr Arg Ser Ser Glu Ala Pro Gly Val Ala Lys Gln Val Tyr

545 550 555 560

Gly Ser Ser Val Pro Val Leu Asp Gly Glu Gln His Ser Met Arg Leu

565 570 575

Leu Val Asp His Ser Ile Val Glu Ser Phe Ala Gln Gly Gly Arg Thr

580 585 590

Val Ile Thr Ser Arg Ile Tyr Pro Thr Lys Ala Ile Asn Gly Ala Ala

595 600 605

Arg Phe Val Phe Asn Asn Ala Thr Gly Ala Ser Val Thr Ala Ser Leu

610 615 620

Lys Ile Trp Ser Leu Lys Ser Ala Asp Ile Arg Ser Phe Pro Leu Asp

625 630 635 640

Gln Leu

<210> 7

<211> 1919

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 7

atgatgttat acaccggtga taccaatgat tacgtgcagg tgcaaaatct tgcgtacccc 60

gccaacttat cggatcccct cctcatcgac tgggtcaagt accggggcaa cccggtcatg 120

gttccaccac ccggcattgg tgtcaaggac tttagagacc caacgactgc ttggaccgga 180

ccacaaaacg ggcagtggct gcttaccatc gggtccaaga ttggtaaaac gggtattgca 240

attgtttatg gtacttccaa cttcacaaac tttaagctat tggatggagt tttgcatgcg 300

gttccgggta cgggtatgtg ggagtgtgtg gacttttacc cggtatcaac cgatgaggca 360

aacgggttgg acacatcata taacgggcca ggtataaagc atgtgttaaa agcaagttta 420

gatgacgata agcatgatta ctatgctatt gggacatatg accggtaaag aacaaatgga 480

ctcctgataa cccgcaattg gatgtgggta tcgggttgag actggactac gggaaatact 540

atgcgtcaaa gacattttat gacccgaagg aacaaagaag aatattgtgg ggatggattg 600

gggaaactga cagtgaagct gctgatctgc tgaagggatg ggcatctgta caggtatgga 660

cacttttcaa gtacactacc tcagcttccg aagagcatta cacatttatt tttgtattac 720

attagggtgc cttggcgtaa ctctggtaaa gtaagttctg aattgcaacg tgaaaatgga 780

ggtttttaga tgcaaagaga tgatatatcc ctaatagttt tcctgtttta ataacagagt 840

attccaagga ctgtgcttta tgataaggag actaggacac atgttcttca gtggccagtt 900

aaagaaattg agagcttaag aattggtgat cctctagtga aacgggtcaa tcttcaacca 960

ggctcaattg agctagtcca tgttgactca gccgcacagg ttgctttctc atccttggaa 1020

attgaaaacg tttcacttat atgtgcttaa tgtgcagtcc taaaacttgt atgtgcaatg 1080

gtgcagttgg atgtagaagc ctcatttgaa gtggacaaag cagcactcga gggaacaatt 1140

gaagcagatg ttggtttcaa ctgcagtact agtggaggtg ctgctaaaag aggcattttg 1200

ggaccatttg gtgtcgttgt aattgctgat caaacgcttt ctgagctaac tccagtttac 1260

ttctacattg ccaaaggacc tgatggccga gctgaaacct acttctgtgc tgatgaaact 1320

aggtttgctt ctactatgtt tatcttgtat actctatctt aatagtcctt gtcaaagtat 1380

agatgaataa catagcggcg tgatctgatg cagatcctca gaggctcctg gagttgctaa 1440

acaagtgtat ggtagttcag taccagtgtt agatgatgaa caacactcaa tgagattatt 1500

ggtaagtgat aatcccgtta ttctgacctt cgtcaaatca gaataatatc aagcttatta 1560

gttcttccag tcatcttatt aaatttatgg aaatgctcca aagtagtcaa tttggtaact 1620

attcaagata atgtggttca gaataatttg tgttatgaat gtatttgaca gttgggatga 1680

tctgtgtttt tgagtaaaat ttcttaaaac tgaactcagg tggaccactc aattgtggag 1740

agctttgctc aaggaggaag aacagtcata acatcgcgaa tttacccaac aaaggcaatc 1800

aatggagcag cacgactgtt cgttttcaac aatgccacga gggcaaggtg actgcctccc 1860

tgaagatttg gtcactcgaa tcagctgata ttcgatcctt ccccttggac cagttgtaa 1919

<210> 8

<211> 638

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 8

Met Ala Thr His His Ser His Tyr Asp Pro Glu Asn Ser Thr Thr His

1 5 10 15

Tyr Thr Val Leu Pro Asp Gln Pro Glu Ser Ala Gly Ser Gly His Arg

20 25 30

Lys Ser Leu Lys Val Val Ser Gly Ile Leu Leu Ser Ser Phe Phe Leu

35 40 45

Leu Ser Leu Val Phe Val Ile Val Asn Gln Ser Ser Asp Leu Ser Gln

50 55 60

Lys Asn Ser His Ser Ser Glu Thr Leu Thr Pro Ala Leu Ser Arg Gly

65 70 75 80

Val Ser Gln Gly Val Ser Glu Lys Thr Phe Arg Asp Val Ser Gly Gly

85 90 95

Ser Leu Ser Tyr Tyr Pro Trp Thr Asn Ala Met Leu Thr Trp Gln Arg

100 105 110

Thr Ala Tyr His Phe Gln Pro Gln Lys Asn Trp Met Asn Gly Pro Leu

115 120 125

Tyr His Lys Gly Trp Tyr His Leu Phe Tyr Gln Tyr Asn Pro Asp Ser

130 135 140

Ala Ile Trp Gly Asn Ile Thr Trp Gly His Ala Ile Ser Thr Asp Leu

145 150 155 160

Ile His Trp Leu Tyr Leu Pro Phe Ala Leu Val Pro Asp Gln Trp Tyr

165 170 175

Asp Ile Asn Gly Val Trp Thr Gly Ser Ala Thr Phe Leu Pro Asp Gly

180 185 190

Gln Ile Met Met Leu Tyr Thr Gly Asp Thr Asn Asp Tyr Val Gln Val

195 200 205

Gln Asn Leu Ala Tyr Pro Ala Asn Leu Ser Asp Pro Leu Leu Ile Asp

210 215 220

Trp Val Lys Tyr Arg Gly Asn Pro Val Met Val Pro Pro Pro Gly Ile

225 230 235 240

Gly Val Lys Asp Phe Arg Asp Pro Thr Thr Ala Trp Thr Gly Pro Gln

245 250 255

Asn Gly Gln Trp Leu Leu Thr Ile Gly Ser Lys Ile Gly Lys Thr Gly

260 265 270

Ile Ala Ile Val Tyr Gly Thr Ser Asn Phe Thr Asn Phe Lys Leu Leu

275 280 285

Asp Gly Val Leu His Ala Val Pro Gly Thr Gly Met Trp Glu Cys Val

290 295 300

Asp Phe Tyr Pro Val Ser Thr Asp Glu Ala Asn Gly Leu Asp Thr Ser

305 310 315 320

Tyr Asn Gly Pro Gly Ile Lys His Val Leu Lys Ala Ser Leu Asp Asp

325 330 335

Asp Lys His Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Thr Tyr Asp Pro Val Lys Asn

340 345 350

Lys Trp Thr Pro Asp Asn Pro Gln Leu Asp Val Gly Ile Gly Leu Arg

355 360 365

Leu Asp Tyr Gly Lys Tyr Tyr Ala Ser Lys Thr Phe Tyr Asp Pro Lys

370 375 380

Glu Gln Arg Arg Ile Leu Trp Gly Trp Ile Gly Glu Thr Asp Ser Glu

385 390 395 400

Ala Ala Asp Leu Leu Lys Gly Trp Ala Ser Val Gln Ser Ile Pro Arg

405 410 415

Thr Val Leu Tyr Asp Lys Glu Thr Arg Thr His Val Leu Gln Trp Pro

420 425 430

Val Lys Glu Ile Glu Ser Leu Arg Ile Gly Asp Pro Leu Val Lys Arg

435 440 445

Val Asn Leu Gln Pro Gly Ser Ile Glu Leu Val His Val Asp Ser Ala

450 455 460

Ala Gln Leu Asp Val Glu Ala Ser Phe Glu Val Asp Lys Ala Ala Leu

465 470 475 480

Glu Gly Thr Ile Glu Ala Asp Val Gly Phe Asn Cys Ser Thr Ser Gly

485 490 495

Gly Ala Ala Lys Arg Gly Ile Leu Gly Pro Phe Gly Val Val Val Ile

500 505 510

Ala Asp Gln Thr Leu Ser Glu Leu Thr Pro Val Tyr Phe Tyr Ile Ala

515 520 525

Lys Gly Pro Asp Gly Arg Ala Glu Thr Tyr Phe Cys Ala Asp Glu Thr

530 535 540

Arg Ser Ser Glu Ala Pro Gly Val Ala Lys Gln Val Tyr Gly Ser Ser

545 550 555 560

Val Pro Val Leu Asp Asp Glu Gln His Ser Met Arg Leu Leu Val Asp

565 570 575

His Ser Ile Val Glu Ser Phe Ala Gln Gly Gly Arg Thr Val Ile Thr

580 585 590

Ser Arg Ile Tyr Pro Thr Lys Ala Ile Asn Gly Ala Ala Arg Leu Phe

595 600 605

Val Phe Asn Asn Ala Thr Arg Ser Val Thr Ala Ser Leu Lys Ile Trp

610 615 620

Ser Leu Glu Ser Ala Asp Ile Arg Ser Phe Pro Leu Asp Gln

625 630 635

<210> 9

<211> 98

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность для сайленсинга NtINV4-T и NtINV4-S

<400> 9

ggtttcaact gcagtactag tggaggtgct gctaaaagag gcattttggg accatttggt 60

gtcgttgtaa ttgctgatca aacgctttct gagctaac 98

<210> 10

<211> 4384

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<220>

<221> общая категория

<222> (1520)..(1520)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 10

atggcagcta gtggtcttag cattaagaaa agtttggagg aatccatttt ggctcatcca 60

gatgaaattt tggctctcaa gtcaaggtac attactacat ataatgatat taagaactag 120

aggcttatcc aaggttttgt tacatttttg aaattataag tttagaacct aatagtactt 180

ggtagcactt gtttccttat tatctagctg ttgttactgc ttgttgctac tgctttctgt 240

tcatctttcc ttgagcccgg tctatcggaa acaacctctc tattctcaaa gtataaggtt 300

tgcgtacata ctacctcccc agactctact tgtggaattt actgtttttg ttgtgttgtt 360

gtaatctaat atttattaga attttactga tttttcacat atatatatct atgtcccctg 420

tcgaaaattc tatagctcat gttagctaaa tacattagta ccattgtttt taattgtttt 480

ggttttggca caggattgaa actgaaggga aaggggtaat gaaaccactt gatctcttga 540

accatttggt ttctgttact agtaagacaa atggagtaaa tattgtacct agtgcacttg 600

tggaagttct cagttgcagc caagaagctg tgattgtacc accaaaacta gcactagctg 660

tacgtccgag gcccggtgta tgggagtact tgtcactgaa tcttaagaca aagaaagtgg 720

ctgaattaag cattcctgaa taccttcaat tgaaagagaa cactgttgat gaaaggtaaa 780

gtattagtct gcgatttcgc tttgtgaaat tgaagttttt gttttgattc ataatgtttt 840

gtgtatcaat tatgttacca gtggaaacat attggagttg gattttgagc catttacaac 900

agttacacca ccaaaaacac tttctgactc tattggcaat ggtttggagt ttcttaatcg 960

ccacattgct tcgaaaatgt ttcatgataa ggagatttcc agatgcctcc ttgacttcct 1020

cagaaaccat aactacaaag gaaaggtaat aaaaaaaagt gtttctttaa acaagttgta 1080

tgattatgtg tatatttcta agtatgttaa cttgaaaaca gtcattgatg gtgaaagaaa 1140

gcattcaaag cctagagagt ttccaacttg ttctgaaaaa agcagaggaa catttgtgca 1200

cattgaatcc agaaactcca tactccaatt ttgaatcaaa gtttgaagag attggcttgg 1260

aaagagggtg gggaaacacc gctgaacgcg tgcaagacac tatcagtcat cttttgcatc 1320

tccttgaggc tcctaacgcg tcttctttgg aaaatttcct tggtagaatc ccattggttt 1380

tcaatgttgt gattctaact ccacatggtt attttgctca agataatgtc ttgggctatc 1440

ctgacactgg tggccaggtt tgtgtccaat attttgcatt cttgatcaag ttctttatac 1500

catttgaacc aacaatcttn aacattcttt ttttggttgt gaaatgttga ataggttgtt 1560

tacattcttg atcaagttcc agctatggag cgtgagatgc ttcatcgtat gaagcttcaa 1620

ggactcgatg atatcatccc tcgcatcctt gttgtaagtg gccttaattt tcctagtttc 1680

atttacacct ctaaatgaaa ttgatctttt ttgttgtttt atatcaggta acaaggctgc 1740

tgcctgatgc agtaggaacc acctgtggcg agcggatgga gaaagtatat ggggcagaac 1800

attctcatat aattcgtgtt ccatttagaa ctgagaaggg aatgttgcgc aaatggatct 1860

cacgattcga agtctggcca tacatggaaa ctttcactga ggttggaaca taaaaacaaa 1920

taaaatccat tggaatgttc cttctgcaat tgaaaatgtc ttgctaactg aagacccatt 1980

tttaaattga tcatcaggat gttgcagaag aacttgtcaa agaattgcaa gctaaaccag 2040

acttgatcat tggaaactac agtgagggaa atcttgctgc ctctttgctt gcgaagaaat 2100

ttggggctac tcagtgtact attgctcatg ccttggaaaa aactaagtat ccaaactctg 2160

accttaattg gaagaagttt gatgacaagt atcatttctc aagtcagttc actgctgatc 2220

tctttgccat gaatcacact gatttcatca tcaccagcac tttccaagaa attgctggaa 2280

ggtaaaagca aatgcacacc atcatagtat ttcatatttt tacccttgtt tatactattt 2340

ccattcaccg accccgactt gtttaggatt gagccatagt tgttgttgtt gtttgtttat 2400

actatttcca tttgccgacc acaacttgtt taggactgag gtatagttgt tgttgttggt 2460

ttgttcatat tattttcatt cgctaaccct aacttgtttg ggactgaggc atagtagtag 2520

tagtagttgt tgctattagt ttatactatt tccatttgcc aaccccaact tgtttggtac 2580

tgagacatag ttgttgttgt tgttgtttgt ttatactatt tccatttgcc gaccccaact 2640

tgtttaggac tgaggtatag ttgttgttgt tggtttgttc atattatttt cattcgctaa 2700

ccccaacttg tttgggactg aggcatagta gtagtagtag tagttgttgc tattagttta 2760

tactatttcc atttgccaac cccaacttgt ttggtactga gacatagttg ttgttgttgt 2820

ttgtttatac tatttcaatt tgtcgacccc aatttgtttg ggaccaaggc atggttgttg 2880

ttgttgtttg tttgttttta ctgtttccat tgatattgga acatttgtta tttgcagcaa 2940

aaacactgta ggacagtatg agagtcatac tgcttttacc atgcctggat tgtaccgagt 3000

agtccatgga atcgattcgt ttgatccaaa gttcaacatt gtctcccctg gggctgatat 3060

gtcaatctac ttcccttaca ctgagaagga gaaaaggcta accaacttcc acccggaaat 3120

tgaagaactc ctctacagtc ctgttgagaa taaggaccac ttgttagtct ccttaatttg 3180

cttttatttc atcccattta tgatcgcttt tatcccaaca gatcgattaa tcatttgtta 3240

tcaacataaa cagatgtgtg ttgaaggacc ggaacaagcc aattctcttt accatggcaa 3300

ggctagatcg cgtgaagaat ctaacagggc tcgtggaatg gtatgctaag aatgcaaggc 3360

tgagggagct tgttaacctt gtggttgtag gcggagacag aaggaaagaa tccaaagatt 3420

tagaagagca agcagagatg aagaagatgt atgatcttat cgaaacctat aacctgaacg 3480

gccaattcag gtggatttct tcccaaatga atcgtgtgag gaacggagaa ctctatcgtt 3540

acattgcaga cacgaggggt gctttcgttc aaccagcatt ctacgaggct tttggtttga 3600

cagttgtaga gtctatgact tgtggtttgc caacttttgc tacttgtaat ggtggaccat 3660

ttgagattat agtgaatgga aaatctggtt tccatattga tcctaatcaa ggtgacaagg 3720

ctgctgatat gttggtaaat ttctttgaaa aatctaaaga agatccaagt tattgggatg 3780

ctatttccaa gggaggtctg caacgtattc ttgaaaagta agcttttgca tttgattagc 3840

acaagtgcac aaccaagatt taacttttga acaaactaaa actaaccctt ttttgtattt 3900

tcttttgcta ggtatacatg gcaaatttat tcacagaaag tgatcacact atctgggatt 3960

tatggattct ggaagtatgc aaccaagaat gataaagttg ctagtgcaaa gaagcgctat 4020

cttgagatgt tttatgaact tggatttaag aaatcagtaa gtgtcaattt taaaggggaa 4080

ccttggatca acggttaagt tgtctttgtg caacctatag gtcaggggtt tgagccgtag 4140

aagtagccac taatatttac attagggtag actgtgtaca tatcacaccc cttggggtac 4200

ggccctttcc tggatcctgt atgaacgcgg gatgccttgt gcaccgggct gtattttttt 4260

ttttagtgtc acttctgtat tttgtttgag cttgtttata aagtttggaa atctgctgct 4320

aatttgtata tttgttggtt gtgtatttca ggctgagaaa gttccattgg ctattgatga 4380

atag 4384

<210> 11

<211> 803

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 11

Met Ala Ala Ser Gly Leu Ser Ile Lys Lys Ser Leu Glu Glu Ser Ile

1 5 10 15

Leu Ala His Pro Asp Glu Ile Leu Ala Leu Lys Ser Arg Ile Glu Thr

20 25 30

Glu Gly Lys Gly Val Met Lys Pro Leu Asp Leu Leu Asn His Leu Val

35 40 45

Ser Val Thr Ser Lys Thr Asn Gly Val Asn Ile Val Pro Ser Ala Leu

50 55 60

Val Glu Val Leu Ser Cys Ser Gln Glu Ala Val Ile Val Pro Pro Lys

65 70 75 80

Leu Ala Leu Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val Trp Glu Tyr Leu Ser

85 90 95

Leu Asn Leu Lys Thr Lys Lys Val Ala Glu Leu Ser Ile Pro Glu Tyr

100 105 110

Leu Gln Leu Lys Glu Asn Thr Val Asp Glu Ser Gly Asn Ile Leu Glu

115 120 125

Leu Asp Phe Glu Pro Phe Thr Thr Val Thr Pro Pro Lys Thr Leu Ser

130 135 140

Asp Ser Ile Gly Asn Gly Leu Glu Phe Leu Asn Arg His Ile Ala Ser

145 150 155 160

Lys Met Phe His Asp Lys Glu Ile Ser Arg Cys Leu Leu Asp Phe Leu

165 170 175

Arg Asn His Asn Tyr Lys Gly Lys Ser Leu Met Val Lys Glu Ser Ile

180 185 190

Gln Ser Leu Glu Ser Phe Gln Leu Val Leu Lys Lys Ala Glu Glu His

195 200 205

Leu Cys Thr Leu Asn Pro Glu Thr Pro Tyr Ser Asn Phe Glu Ser Lys

210 215 220

Phe Glu Glu Ile Gly Leu Glu Arg Gly Trp Gly Asn Thr Ala Glu Arg

225 230 235 240

Val Gln Asp Thr Ile Ser His Leu Leu His Leu Leu Glu Ala Pro Asn

245 250 255

Ala Ser Ser Leu Glu Asn Phe Leu Gly Arg Ile Pro Leu Val Phe Asn

260 265 270

Val Val Ile Leu Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu

275 280 285

Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val

290 295 300

Pro Ala Met Glu Arg Glu Met Leu His Arg Met Lys Leu Gln Gly Leu

305 310 315 320

Asp Asp Ile Ile Pro Arg Ile Leu Val Val Thr Arg Leu Leu Pro Asp

325 330 335

Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Glu Arg Met Glu Lys Val Tyr Gly Ala

340 345 350

Glu His Ser His Ile Ile Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Met

355 360 365

Leu Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu Val Trp Pro Tyr Met Glu Thr

370 375 380

Phe Thr Glu Asp Val Ala Glu Glu Leu Val Lys Glu Leu Gln Ala Lys

385 390 395 400

Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser Glu Gly Asn Leu Ala Ala Ser

405 410 415

Leu Leu Ala Lys Lys Phe Gly Ala Thr Gln Cys Thr Ile Ala His Ala

420 425 430

Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asn Ser Asp Leu Asn Trp Lys Lys Phe

435 440 445

Asp Asp Lys Tyr His Phe Ser Ser Gln Phe Thr Ala Asp Leu Phe Ala

450 455 460

Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala

465 470 475 480

Gly Ser Lys Asn Thr Val Gly Gln Tyr Glu Ser His Thr Ala Phe Thr

485 490 495

Met Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His Gly Ile Asp Ser Phe Asp Pro

500 505 510

Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro

515 520 525

Tyr Thr Glu Lys Glu Lys Arg Leu Thr Asn Phe His Pro Glu Ile Glu

530 535 540

Glu Leu Leu Tyr Ser Pro Val Glu Asn Lys Asp His Leu Cys Val Leu

545 550 555 560

Lys Asp Arg Asn Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg

565 570 575

Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Trp Tyr Ala Lys Asn Ala Arg

580 585 590

Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys

595 600 605

Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Asp

610 615 620

Leu Ile Glu Thr Tyr Asn Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser

625 630 635 640

Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Ala Asp

645 650 655

Thr Arg Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Phe Tyr Glu Ala Phe Gly Leu

660 665 670

Thr Val Val Glu Ser Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys

675 680 685

Asn Gly Gly Pro Phe Glu Ile Ile Val Asn Gly Lys Ser Gly Phe His

690 695 700

Ile Asp Pro Asn Gln Gly Asp Lys Ala Ala Asp Met Leu Val Asn Phe

705 710 715 720

Phe Glu Lys Ser Lys Glu Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Ala Ile Ser Lys

725 730 735

Gly Gly Leu Gln Arg Ile Leu Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser

740 745 750

Gln Lys Val Ile Thr Leu Ser Gly Ile Tyr Gly Phe Trp Lys Tyr Ala

755 760 765

Thr Lys Asn Asp Lys Val Ala Ser Ala Lys Lys Arg Tyr Leu Glu Met

770 775 780

Phe Tyr Glu Leu Gly Phe Lys Lys Ser Ala Glu Lys Val Pro Leu Ala

785 790 795 800

Ile Asp Glu

<210> 12

<211> 3926

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 12

atggcaggca gtggtcttag cattaaggaa agtttggagg aatccatttt ggctcatcca 60

gatgaaattt tggctctcaa gtcaaggtac attactgcat aatgatatta agacctagaa 120

gcggatccaa gattttgtta catttttgaa attataagtt tagaatctaa tatttgttat 180

cgcttgtttc cttattatct tgctgttgtt actgcctgtt gctactagtt tctgttcatc 240

cttccttgag ctgagtttct atcggaaaca acctctctac tctcaaagta ggaataagtt 300

atgcgtacac actaccctcc ccagactcca cttgtgtaat ttactgagtt tgttgttgtt 360

gttgttgtaa tctaatactt gttagaattt tactgatttt tcacatatat atctatgacc 420

catgtcgaaa atactatagc tcatgtgcta aatacattag taccattgtt ttgtaattgt 480

tttggttttg gaacaggatt gaaactgaag ggaaaggggt aatgaaacca gttgatctct 540

tgaaccattt ggtttctgtt actagtaaaa caaatggagt aaatgttgta cctagtgcac 600

ttgtggaagt tctcagttgc agccaagaag ctgtgattgt accaccaaaa ctagcactag 660

ctgtacgtcc gaggcccggt gtatgggagt acttgtcact gaatcttaag acaaagaaag 720

tggctgaatt gagcattcct gagtaccttc aattgaaaga gaatactgtt gatgaaaggt 780

aaagtaatag tctgcgattt cgctttgtga aattgaagtt ttttgtttga ttcttaatgt 840

tttgtgtatc aattatgtta ccagtggaaa catcttggag ttggattttg agccatttac 900

aactgttaca acaccaaaaa cactttctga ctctattggc aatggtttgg agtttcttaa 960

tcgccacatt gcttcgaaaa tgtttcttga taaggagatt gccaagtgcc tccttgactt 1020

tctcagaaac cataactaca aaggaaaggt agtaaaaaaa gtgtttcttt aaacaagttg 1080

tatgattatg tgtgtatttc taaatatgtc aatttgaaaa cagtcattga tggtgaaaga 1140

aagcattcaa agcctggaga gtttccaact tgttctgaaa aaagcagagg aatatttgca 1200

cacactgaat ccagaaactc catactccaa atttgaatcc aagtttgaag agattggctt 1260

ggaaagaggg tggggaaaca ccgctgaacg cgtgcaagac accattagtc atcttttgca 1320

tctccttgag gctcctaacg cgtcttcctt ggaaaatttc cttggtagaa tcccattggt 1380

tttcaatgtt gtgattctca ccccacatgg ttattttgct caagataatg tcttgggcta 1440

tcctgacact ggtggccagg tttgtgtccg atataacata tcaagaaatt ttgcattctt 1500

gatcatgttc tttataccat ttgaaccaac attctttttt tggttgtgaa atgttgaata 1560

ggttgtttac attcttgatc aagttccagc tatggagcgt gagatgcttc atcgtatgaa 1620

gcttcaagga ctcgacgata tcatccctcg catccttgtt gtaagtgccc ttaattttcc 1680

tggtttggtt tacctctaaa tgaaattgat tttctggctt tctaactttt ttggattgat 1740

ctttttgttg ttttatatca ggtaactagg ctgctgcctg atgctgtagg aaccacttgt 1800

ggcgagtgga tggagaaagt atatggggca gaacattctc atataattcg tgttccattt 1860

agaactgaga aaggaatgtt gcgcaaatgg atctcacgat tcgaagtctg gccatacatg 1920

gaaactttca ctgaggttgg aacataaaaa caaataaaaa tcattggaat gttcttctgc 1980

atttgaaaat gtcttgctaa ctaaagactc atttttaaat taatcatcag gatgttgcag 2040

aagaacttgt caaagaattg caagctaaac cagacttgat aattggaaac tacagtgagg 2100

gaaatcttgc tgcctcattg cttgctaaga aatttggggc tactcagtgt actattgctc 2160

atgccttgga aaaaactaag tatccaaact ctgaccttaa ttggaagaag tttgatgaca 2220

agtatcattt ctcaagtcag ttcactgctg atctttttgc catgaatcac actgatttca 2280

ttatcaccag cactttccaa gaaattgctg gaaggtaaaa gcaaatgcac accatcatag 2340

tatttcatat ttttacccta gtttatacta tttccatttg tcaactccaa cttgtttggg 2400

attgaaccat agttgttgtt tgtttatact atttccattc gccgacccca acttatttgg 2460

gactgagaca taattgttgt tattattgtt tgtttgttta tactatttcc attctcagac 2520

cccaacttct ttgggactga gccgtagatt gttgttgttg ttgttgttgt tgtttgttta 2580

tgctatttcc gttcaccgac cccaacttat ttgggactga ggtgtagaag tagtcgttgt 2640

tgtttgttta tacgacttcc aattgatatt cgaatgtttt tatttttgca gcaagaacac 2700

tgtaggacag tatgagagtc atactgcttt taccatgcct ggattgtatc gagtagtcca 2760

tggaatcaat tcgtttgatc caaagttcaa cattgtctcc cctggggctg atatgtcaat 2820

ctacttccct tacactgaga aggagaaaag actaaccaac ttccacccgg aaattgaaga 2880

actcctctac agtcctgttg agaataagga ccacttgtta gtcttcttta tttcattcat 2940

ttttctacac cttttttttc aacagattga ttgattggtt cttatcaacg taaacagatg 3000

tgtgttgaag gaccagaaca agccaattct ctttaccatg gcaaggctag atcgcgtgaa 3060

gaatctaaca gggctcgtgg aatggtatgc aaagaatgca aggctaaggg agctcgttaa 3120

ccttgtggtt gtaggcggag acagaaggaa agaatccaaa gatttagaag agcaagcaga 3180

gatgaagaag atgtatgatc ttatcgaaac atacaacctg aatggccaat tcaggtggat 3240

ttcttcccaa atgaatcgtg tgaggaacgg agaactttat cgatacattg cagacacgag 3300

gggtgctttc gttcaaccag cattttatga ggcatttggt ttgacagttg ttgagtctat 3360

gacttgtggt ttgccaactt ttgctacttg taatggtgga ccatttgaga ttatagtgaa 3420

tggaaaatct ggtttccata ttgatcctaa tcaaggtgac aaggctgctg atatgttggt 3480

taatttcttc gaaaaatcta aagaagatcc aagttattgg gatactattt ccaagggtgg 3540

tctgcagcgt attcttgaaa agtaagcttt tgcatttgat tagcacaagt gtacaaccaa 3600

gatttaactt atgaacaaac taaaactaac ccttttttta ttttcttttg ctaggtatac 3660

atggcaaatt tattcacaga aagtgatcac attatctggg atttatggat tctggaaata 3720

tgcaaccaag aatgacaaag ttgctagtgc gaagaagcgc tatcttgaaa tgttttatga 3780

atttgggttt aagaaatcag taagtgtcac ttctgtattt tgtttgagct tgtttgtaaa 3840

gtttggcaat cttctgctaa tttgtactat atttgttgac ttgtgcattt caggctgaga 3900

aagttccatt ggctattgat gaatag 3926

<210> 13

<211> 803

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 13

Met Ala Gly Ser Gly Leu Ser Ile Lys Glu Ser Leu Glu Glu Ser Ile

1 5 10 15

Leu Ala His Pro Asp Glu Ile Leu Ala Leu Lys Ser Arg Ile Glu Thr

20 25 30

Glu Gly Lys Gly Val Met Lys Pro Val Asp Leu Leu Asn His Leu Val

35 40 45

Ser Val Thr Ser Lys Thr Asn Gly Val Asn Val Val Pro Ser Ala Leu

50 55 60

Val Glu Val Leu Ser Cys Ser Gln Glu Ala Val Ile Val Pro Pro Lys

65 70 75 80

Leu Ala Leu Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val Trp Glu Tyr Leu Ser

85 90 95

Leu Asn Leu Lys Thr Lys Lys Val Ala Glu Leu Ser Ile Pro Glu Tyr

100 105 110

Leu Gln Leu Lys Glu Asn Thr Val Asp Glu Ser Gly Asn Ile Leu Glu

115 120 125

Leu Asp Phe Glu Pro Phe Thr Thr Val Thr Thr Pro Lys Thr Leu Ser

130 135 140

Asp Ser Ile Gly Asn Gly Leu Glu Phe Leu Asn Arg His Ile Ala Ser

145 150 155 160

Lys Met Phe Leu Asp Lys Glu Ile Ala Lys Cys Leu Leu Asp Phe Leu

165 170 175

Arg Asn His Asn Tyr Lys Gly Lys Ser Leu Met Val Lys Glu Ser Ile

180 185 190

Gln Ser Leu Glu Ser Phe Gln Leu Val Leu Lys Lys Ala Glu Glu Tyr

195 200 205

Leu His Thr Leu Asn Pro Glu Thr Pro Tyr Ser Lys Phe Glu Ser Lys

210 215 220

Phe Glu Glu Ile Gly Leu Glu Arg Gly Trp Gly Asn Thr Ala Glu Arg

225 230 235 240

Val Gln Asp Thr Ile Ser His Leu Leu His Leu Leu Glu Ala Pro Asn

245 250 255

Ala Ser Ser Leu Glu Asn Phe Leu Gly Arg Ile Pro Leu Val Phe Asn

260 265 270

Val Val Ile Leu Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu

275 280 285

Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val

290 295 300

Pro Ala Met Glu Arg Glu Met Leu His Arg Met Lys Leu Gln Gly Leu

305 310 315 320

Asp Asp Ile Ile Pro Arg Ile Leu Val Val Thr Arg Leu Leu Pro Asp

325 330 335

Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Glu Trp Met Glu Lys Val Tyr Gly Ala

340 345 350

Glu His Ser His Ile Ile Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Met

355 360 365

Leu Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu Val Trp Pro Tyr Met Glu Thr

370 375 380

Phe Thr Glu Asp Val Ala Glu Glu Leu Val Lys Glu Leu Gln Ala Lys

385 390 395 400

Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser Glu Gly Asn Leu Ala Ala Ser

405 410 415

Leu Leu Ala Lys Lys Phe Gly Ala Thr Gln Cys Thr Ile Ala His Ala

420 425 430

Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asn Ser Asp Leu Asn Trp Lys Lys Phe

435 440 445

Asp Asp Lys Tyr His Phe Ser Ser Gln Phe Thr Ala Asp Leu Phe Ala

450 455 460

Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala

465 470 475 480

Gly Ser Lys Asn Thr Val Gly Gln Tyr Glu Ser His Thr Ala Phe Thr

485 490 495

Met Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His Gly Ile Asn Ser Phe Asp Pro

500 505 510

Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro

515 520 525

Tyr Thr Glu Lys Glu Lys Arg Leu Thr Asn Phe His Pro Glu Ile Glu

530 535 540

Glu Leu Leu Tyr Ser Pro Val Glu Asn Lys Asp His Leu Cys Val Leu

545 550 555 560

Lys Asp Gln Asn Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg

565 570 575

Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Trp Tyr Ala Lys Asn Ala Arg

580 585 590

Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys

595 600 605

Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Asp

610 615 620

Leu Ile Glu Thr Tyr Asn Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser

625 630 635 640

Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Ala Asp

645 650 655

Thr Arg Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Phe Tyr Glu Ala Phe Gly Leu

660 665 670

Thr Val Val Glu Ser Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys

675 680 685

Asn Gly Gly Pro Phe Glu Ile Ile Val Asn Gly Lys Ser Gly Phe His

690 695 700

Ile Asp Pro Asn Gln Gly Asp Lys Ala Ala Asp Met Leu Val Asn Phe

705 710 715 720

Phe Glu Lys Ser Lys Glu Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Thr Ile Ser Lys

725 730 735

Gly Gly Leu Gln Arg Ile Leu Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser

740 745 750

Gln Lys Val Ile Thr Leu Ser Gly Ile Tyr Gly Phe Trp Lys Tyr Ala

755 760 765

Thr Lys Asn Asp Lys Val Ala Ser Ala Lys Lys Arg Tyr Leu Glu Met

770 775 780

Phe Tyr Glu Phe Gly Phe Lys Lys Ser Ala Glu Lys Val Pro Leu Ala

785 790 795 800

Ile Asp Glu

<210> 14

<211> 4532

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 14

atggctgaac gtgctctgac tcgtgttcac agccttcgtg aacgtcttga tgccactttg 60

gctgcacatc gcaatgagat attgctgttt ctttcaaggt attgcctaag tagtgttctt 120

gtttcctaca aaagattcag ttggtgttca aaaaacgata tgtgatttga tttatctgcc 180

taagtcttgg tagtcataat tatccggtac ctgtgctggt gcgagttagc tggttcggaa 240

actactctta tgaaaacgag agatttagtt ggtgttgtct gcaattctgt agtatggact 300

attaagcaga tagatcatgt ttgatatcga aaaggaatgt atatgtgatg ttacttgaac 360

tggttttggt tattacagga ttgaaagcca tggaaaaggg atcttgaaac ctcaccagct 420

attggctgag ttcgatgcaa ttcgccaaga tgacaaaaag aagctgaatg atcatgcatt 480

tgaagaactc ctgaaatcta ctcaggtaat tttgattttg gctaaatgtg ttaccaagct 540

gaatgatcat gcatttgagt ttgtgtccga ctactacaat gatatgttat accaggaagc 600

gattgttctg ccaccttggg ttgcacttgc cattcgtttg aggcctggtg tgtgggaata 660

tgtccgtgtg aatgttaatg ctctagtcgt tgaggagctg accgtccctg agtatttgca 720

ttttaaggaa gaacttgttg atggaacgta agttttagtc tcttatttga tactatgtta 780

gagaataggc agtggattca atttatcagt gttgtttttt acctaatgca gctccaatgg 840

aaatttcgtt ctcgagttgg attttgagcc cttcactgca tcctttccta aaccgaccct 900

caccaaatct attgggaatg gagttgaatt cctcaatagg cacctttctg cgaaaatgtt 960

ccatgacaag gaaagcatga ccccgcttct tgaatttctt cgggttcaca attataaggg 1020

caaggtaact ttgttattcc cattcatata tatgttcagt ttgtgcttat catgcgccca 1080

atgatgtatg aatatgtact aaaggataga tgtacgattt cgtttgcaga caatgatgct 1140

gaatgacaga atacagaatt taaccactct gcaaaatgtc ctaaggaagg cagaggaata 1200

ccttattatg cttccccctg aaactccatt ttccgaattc gaacacaagt tccaagaaat 1260

tggattggag aagggatggg gcgacactgc ggagcgcgtg ctagagatga tatgcatgct 1320

tcttgatcta cttgaggctc ccgactcctg tactcttgag aagttcctag ggagaattcc 1380

tatggtgttc aacgtggtta tcctttcccc ccatggatat ttcgcccagg aaaatgtctt 1440

gggttatccc gacactggtg gccaggtgca ttactttagt ctttgtccgt gagtctatgt 1500

tgctcagatc ctctacaatg ccactgtacc cgtgtaggat actccaaata taatgcattt 1560

ttggaggatc tgtcaccggt gcaatggcat tttggaggtc ggagcaacaa acaactgcta 1620

gtatgcttct aaagcttgct tccataaatg ctaaggtcct tcacccgtaa tgtgcaggtt 1680

gtctacatat tagatcaagt tccagccttg gagcgtgaaa tgcttaaacg cctaaaggag 1740

caaggacttg atataacacc gcgtattctt attgttagta tttcttgtac ttgtaattgc 1800

tgcggattac acaaaatttt ctctttattg gcaacttatc ttgatattat tcccaggtta 1860

ctcgtctgct gcctgatgca gttggaacaa cttgtggtca gcggcttgag aaggtgtatg 1920

gagccgagca ctcacatatt cttagggtcc cctttaggac cgagaagggc attgttcgca 1980

aatggatatc tcgctttgaa gtgtggccat acatggagac tttcactgag gtgacactaa 2040

gcttccttgt atttgtctat cttctaattg gtattaggaa caatttgcta attattaacg 2100

ctttggcttt tcgtacatca ggatgttgca aaagaacttg ctgcagaact gcaggccaag 2160

ccagatttga taattggcaa ctatagcgag ggaaatcttg tggcttcatt gctggctcac 2220

aagttaggcg taacgcaggt ctgtgttatt tttcacctct tataaatctg attgtatttc 2280

cattagtctg gaactaaaag tactaaaatt ttcttttctt cgctgtgtta tttgccttct 2340

gcagtgcacc attgcccatg cattggagaa aacaaagtat cctgattctg acatctactg 2400

gaaaaaattt gacgaaaaat accatttctc gtcccagttt accgctgatc ttattgcaat 2460

gaatcacacc gattttatca tcaccagcac tttccaggag atagcaggaa ggtataacat 2520

caattgctaa ttcggttgca gtaacatttt gttcgatttc ttccccttat gcttaaccta 2580

ataccctaat gaattttcca gcaaggacac tgtcggacag tacgagagtc accaggcatt 2640

cacaatgcct ggattgtaca gagtcgttca cggcattgat gtgttcgatc ccaaattcaa 2700

cattgtctca cctggagctg atataaacct gtatttccca tattccgaga aggaaaagag 2760

attgacagca cttcacccag aaattgagga gcttctgtac agtgatgttg agaacgagga 2820

acatctgtaa gtttctaact tactcgtacc gtcagtggca gagccagaat tttcattaaa 2880

atggggtcaa aatataaaga cataaattca caaagaagcc aaggggtgtc aatatgtagt 2940

ataaatatat taaaaaaatt acctagctac acaatgtaat tttccgacaa aggggtatcg 3000

gttgcacttc ttgaatacat gtggctctgc cactgggtac agttacaaag tcctgttacc 3060

tatgtagatg agcttgtgct gaacatgttg tgattttggt aggtgtgtgc taaaggacag 3120

gaataagcca atcttattca caatggcgag attggatcgt gtgaagaact taaccggact 3180

tgttgagtgg tacgccaaga acgcacggct aagggagttg gttaaccttg ttgtcgttgg 3240

tggagaccga aggaaggaat ccaaagattt ggaagagcaa gcagagatga agaagatgta 3300

tgagctaata aagactcaca acttaaatgg ccaattcaga tggatttctt cacagatgaa 3360

ccgagtaagg aacggcgaac tctaccgata cattgccgac actaggggag ctttcgtgca 3420

gcctgcattc tatgaggctt tcggtttgac tgttgttgag gccatgacct gtggtttgcc 3480

tacatttgca actaatcatg gcggtccagc tgagatcatc gttaacggaa aatccggctt 3540

ccatatcgat ccatatcacg gtgagcaagc tgctgatctg ctagctgatt tctttgagaa 3600

atgtaagacg gaaccttctc attgggaaac tatttcaacc ggtggcctga agcgcatcca 3660

agagaagtaa gcaactcttt cttgactcta gtcattcaaa ttaacttggg atttgaggca 3720

tagttgattg ataatttatc gcgtctctac tactatatac aggtacacgt ggcaaatcta 3780

ctcggagaga ttattgacgt tggctgctgt ttacggtttc tggaaacatg tttctaagct 3840

tgatcgtcta gaaatccgtc gatatctaga aatgttttat gctctcaaat accggaagat 3900

ggtgagttct tctgcttcct gctcttctca tagtgtttaa tatacacttg attgattgca 3960

ttcacttaga ctaagttgct cggacacggg tgtggatgtc cgacacgagt gcggatctag 4020

agttcagatc cttcaagatg taaattataa gattcgggga tatggatcct agtacggata 4080

cgggtgcgag aatccggcta aaaataattt taaaaaaaat tatctctaaa ttatgagata 4140

ttatgtggaa tacttacgta taacttgtaa agtgtagatt ttttttaatt ctcaagttgt 4200

agattagtaa atgattgatt tcctagataa gtatgctatt ttcttcaaat ttactcttct 4260

gatttcgaaa atcaaattgt atctcgtctc gaatttttcc gtccgttatg gtcaaagtac 4320

ccaaaatcgt ttgaccaaat cggtacggat cccataccca cacccacact agtgtcgtat 4380

tgacacgggt gccgcaccta aactgctatg tcggagcaac ttagcactta gagaatcatt 4440

gatgttaaat tttcttaatt cttgaatctg ctaatgaaga ttttatcttg gtttttgttt 4500

aggctgaagc tgttccattg gctgctgaat ga 4532

<210> 15

<211> 805

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 15

Met Ala Glu Arg Ala Leu Thr Arg Val His Ser Leu Arg Glu Arg Leu

1 5 10 15

Asp Ala Thr Leu Ala Ala His Arg Asn Glu Ile Leu Leu Phe Leu Ser

20 25 30

Arg Ile Glu Ser His Gly Lys Gly Ile Leu Lys Pro His Gln Leu Leu

35 40 45

Ala Glu Phe Asp Ala Ile Arg Gln Asp Asp Lys Lys Lys Leu Asn Asp

50 55 60

His Ala Phe Glu Glu Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile Val Leu

65 70 75 80

Pro Pro Trp Val Ala Leu Ala Ile Arg Leu Arg Pro Gly Val Trp Glu

85 90 95

Tyr Val Arg Val Asn Val Asn Ala Leu Val Val Glu Glu Leu Thr Val

100 105 110

Pro Glu Tyr Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Thr Ser Asn

115 120 125

Gly Asn Phe Val Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Thr Ala Ser Phe

130 135 140

Pro Lys Pro Thr Leu Thr Lys Ser Ile Gly Asn Gly Val Glu Phe Leu

145 150 155 160

Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Met Phe His Asp Lys Glu Ser Met Thr

165 170 175

Pro Leu Leu Glu Phe Leu Arg Val His Asn Tyr Lys Gly Lys Thr Met

180 185 190

Met Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asn Leu Thr Thr Leu Gln Asn Val Leu

195 200 205

Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Ile Met Leu Pro Pro Glu Thr Pro Phe

210 215 220

Ser Glu Phe Glu His Lys Phe Gln Glu Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp

225 230 235 240

Gly Asp Thr Ala Glu Arg Val Leu Glu Met Ile Cys Met Leu Leu Asp

245 250 255

Leu Leu Glu Ala Pro Asp Ser Cys Thr Leu Glu Lys Phe Leu Gly Arg

260 265 270

Ile Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly Tyr Phe

275 280 285

Ala Gln Glu Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val

290 295 300

Tyr Ile Leu Asp Gln Val Pro Ala Leu Glu Arg Glu Met Leu Lys Arg

305 310 315 320

Leu Lys Glu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile Leu Ile Val Thr

325 330 335

Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu

340 345 350

Lys Val Tyr Gly Ala Glu His Ser His Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg

355 360 365

Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu Val Trp

370 375 380

Pro Tyr Met Glu Thr Phe Thr Glu Asp Val Ala Lys Glu Leu Ala Ala

385 390 395 400

Glu Leu Gln Ala Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser Glu Gly

405 410 415

Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr Gln Cys

420 425 430

Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile

435 440 445

Tyr Trp Lys Lys Phe Asp Glu Lys Tyr His Phe Ser Ser Gln Phe Thr

450 455 460

Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr

465 470 475 480

Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp Thr Val Gly Gln Tyr Glu Ser

485 490 495

His Gln Ala Phe Thr Met Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His Gly Ile

500 505 510

Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Ile

515 520 525

Asn Leu Tyr Phe Pro Tyr Ser Glu Lys Glu Lys Arg Leu Thr Ala Leu

530 535 540

His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Val Glu Asn Glu Glu

545 550 555 560

His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met

565 570 575

Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Trp Tyr

580 585 590

Ala Lys Asn Ala Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly

595 600 605

Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Ala Glu Met

610 615 620

Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Lys Thr His Asn Leu Asn Gly Gln Phe

625 630 635 640

Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr

645 650 655

Arg Tyr Ile Ala Asp Thr Arg Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Phe Tyr

660 665 670

Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro

675 680 685

Thr Phe Ala Thr Asn His Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val Asn Gly

690 695 700

Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Glu Gln Ala Ala Asp

705 710 715 720

Leu Leu Ala Asp Phe Phe Glu Lys Cys Lys Thr Glu Pro Ser His Trp

725 730 735

Glu Thr Ile Ser Thr Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr

740 745 750

Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Arg Leu Leu Thr Leu Ala Ala Val Tyr Gly

755 760 765

Phe Trp Lys His Val Ser Lys Leu Asp Arg Leu Glu Ile Arg Arg Tyr

770 775 780

Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Tyr Arg Lys Met Ala Glu Ala Val

785 790 795 800

Pro Leu Ala Ala Glu

805

<210> 16

<211> 5901

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 16

atgcttttta tgggagtaaa ttttatggcc ggtcattcaa ctttgtgttc attacgcaaa 60

agtcattttt cttggtgttt attacgcaag tcatttttct tttttttttg ttacgtaaaa 120

atcattcaac tatgtgttta ttatctaaaa ttcaattttt tttttccttt tgttacacaa 180

aaatcatttt actttactct atttatcaca aaagtcacct tggccagatt ttataatagg 240

cttttatctt ttgttacaca aaaattattt tactttactc tatttatcac aaaagtcacc 300

ttggccagat tttataatag gcttttatct tttgttacac aaaaattatt ttactttact 360

ctatttatca caaaagtcac cttggccaga ttttacaata cttttacctt aaaagactat 420

tatgcccttg acattataaa tcctctcatt tatataatac cttctatatg atacactata 480

taatatattt ttacctaggt attttactta taattaaaat aatattaaat tattttattt 540

atctatttta taatatattc atacatttaa ttttttcatg gcaaatcact ttgtttaatc 600

atatttaaac atgaacaaat tttaaatatc aaaaaaataa aaaaataaaa aaaatattta 660

tttgaaataa taacaaacag atttgtttaa caaatgatag ttttttttta tagtcaataa 720

aatttttaaa aaaattcaaa gatatttgtt tttaatatta atatttttaa agctttatct 780

gttaatatta tttatttgaa agtattaatc tgatgtgtca ttgtgttaaa tgtgagtatt 840

ttatttattg gattaatgag tatggcttgg ctgataaaaa gctttgattt tataattttc 900

attaaaaata ttttattaag ctagtacctg acaaatttaa tatcttgaaa attaacgtta 960

agaaaaaatt aaatataaaa atatattata aaaataataa ataaataata tcaagttatt 1020

ttaattataa ataaaataca tggttaaaaa tatattatat agcatataat atagaaggta 1080

ttacataaat gagatgattt aaagggcata atagactttt caggtgaatg atttgtaaaa 1140

tatggttaaa gtgattattg tgataattag agcatagtaa aataattttt atgtaacaaa 1200

agaaaaaaaa aatgactttt gggtaatgaa cataaatttg aataactttt acgtaacaaa 1260

agaataaaat aaattttgga taataaacat aaaattgaat gaccacctat aaaatttatt 1320

atttttttgg gctcttcttg atttgatttt ttagtttagc ctttgcagta atcttggttg 1380

tcacgcgtag cgttgtgctt tcgccacata agtatttagt agacttaatt aatgtcatta 1440

tatcggttgg tgtggtttta attacttaac tgtactatta tattaggtgg aaggtttgaa 1500

aatttatagt agtaacattc tagatcattg aaaatattgg tgtttcagtg actttttagt 1560

atgtcatttt cattttctaa gtggttgtac taatatagta tattaaaatt ttgattggtt 1620

gagaaacaat ctctctcacc tacacggtac gggtaaggta tgcgtatacg cttatcctcc 1680

ctacactcca tttgtgggac tattgttgtt attttggata agctgaggta tccatcttct 1740

actaactgca ctagtttatt ttttttgctg tttacagttg aaacaattgt ctgaggattt 1800

ctcacctgct gaatcaactg caatggctga acgtgtgctg actcgtgttc acagccttcg 1860

tgaacgtctt gatgctactt tggctgctca tcgcaatgag atattactgt ttctttcaag 1920

gtatagccaa agatagtatt cttgttaact aaaaaagatt cagttggtgt tcaaaaaacg 1980

atacgtttat ctgcctaagt cttggtagtc agaattatcc ggtacctatg ctggtgtgag 2040

ttagctggct aggaaaccac tcttatgaaa acaagagatt tagttagagt tgtctgtaat 2100

tctgtagtat ggactatgta tgtgatgcta tttgaactgg ttttggttat tataggattg 2160

aaagccatgg aaaagggatc ttgaaaccgc atcagctatt ggctgagttt gatgcaattc 2220

gccaagatga caaaaagaaa ctgaatgatc atgcatttga agaactcctg aagtccactc 2280

aggtaatatg gttttggcta tatttgtcgc caacgccaag ctcatatttt tatattattt 2340

tgagcttgtg tctgaatacg acgatgatat gttatactag gaagcaattg ttctgccacc 2400

ttgggttgca cttgcgattc gtttgaggcc tggtgtgtgg gaatatgtcc gtgtgaatgt 2460

caatgcgcta gtcgttgagg agctgactgt ccctgagtat ttgcatttca aggaagaact 2520

tgtcgatgga acgtaagtgt tagtcttcaa tttgatgcta tgttagagaa taggctgtgg 2580

aatttattga tcaatgctgt gctttgtcct gatacagctc caatggaaat ttcgttctcg 2640

agttggattt tgagcccttc accgcatcct ttcctaaacc aaccctcacc aaatctatcg 2700

gaaatggagt tgaattcctc aataggcacc tctctgcgaa aatgttccat gacaaggaaa 2760

gcatgacccc gcttcttgaa tttcttcggg ttcacaatta taagggcaag gtgacttgct 2820

atttccattt atctataggt tcggtttgtg cttatcatgc gcccaatgac atatgaatat 2880

gcgctaaagg atagatatat gatttccttt gcagacaatg atgctgaacg acagaataca 2940

gaatttaacc acactgcaaa atgtcctaag gaaggcagag gaatacctca ttatgcttcc 3000

ccctgaaact ccattttccg aattcgaaca caagttccaa gaaattggat tggagaaggg 3060

atggggcgac actgcagagc gcgtgctgga gatgatatgc atgcttcttg atctcctcga 3120

ggctcccgat tcctgtactc ttgagaagtt cttggggaga attcctatgg tgttcaatgt 3180

ggttatcctt tccccccacg gatatttcgc ccaggaaaat gtcttgggtt atcccgacac 3240

tggtggccag gtgcattact ttaatcttta tccgtgagtc tatgtttgtt cgaatcctct 3300

agaaatgtca ctgtacctat gtaggatact ccaaatataa tgcattttgg ggggatctgt 3360

tatgggtgcg atggcatttt tggaggtcgg agcaacaaac aattgctatg tattcttcta 3420

aagcttgctt tcataaatgc taaggtcctt cacccttaat gtgcaggttg tctatatatt 3480

agatcaagtt ccagccttgg agcgtgaaat gcttaagcgc ctaaaggagc aaggacttga 3540

tatcacaccg cgtattctta ttgttagtat ttcctgtact tgtaattact gcggattaca 3600

caaaatttcc tttttatctt cttaacaact tatcttgatg gtattcccag gttactcgtc 3660

tgctacctga tgcagttgga acgacttgtg gtcagcggct tgagaaggtg tatggagccg 3720

agcactcaca tattctgagg gtccccttta ggactgagaa gggcattgtt cgtaaatgga 3780

tctctcgctt tgaagtgtgg ccatatatgg agactttcac tgaggtgaca ctaaaacttc 3840

cttatatttg tctatcttct aattggtatt aggaataatt tgttaattgt taactctttg 3900

tcttttcgta catcaggatg tcgcaaaaga acttgctgca gaattgcagg ccaagccaga 3960

tttgataata ggcaactata gcgagggaaa tcttgtggct tcattgctcg ctcataagtt 4020

aggcgtaaca caggtctgtg ttgtttttca ctctcttaaa gatctgattg catttccatt 4080

agtctggaac tagaagtact aaaaagttct tttcttcact gtgttatttg ccgtcggcag 4140

tgcaccatag ctcatgcatt ggagaaaaca aagtatcctg attctgacat ctactggaaa 4200

aaattcgatg aaaaatacca tttctcgtcc cagtttaccg ctgatcttat tgcaatgaat 4260

cacaccgatt ttatcatcac cagcactttc caggagatag caggaaggta taacatcaat 4320

ttgctacttc gactgcaaca gcattgtgtt cccatttctt tcccttatgc ttaacctaat 4380

accgtcatga attttccagc aaggacactg tcggacagta cgagagtcat caggcattca 4440

caatgcccgg attgtacaga gttgttcacg gcattgatgt gttcgacccc aaattcaaca 4500

ttgtctcacc tggagctgac ataaacctct atttcccata ttccgagaag gaaaagagac 4560

tgacagcact tcaccctgaa atcgaggagc tgctgtacag tgacattgag aacgaggaac 4620

atctgtaagt ttctacctta ctcgtacagt cagtggcgga gccagaattt tcactaaaat 4680

aaggtcaaaa tataaagaca taaatccaca aagaagccaa gggtgtcaat atatagtata 4740

aatacattaa aaaaattacc tatctacaca gtgtaatttt ccgacaaagg ggtgtcggtt 4800

gacactcctt gaatacatgt ggctctgcca ctgggtacag ttacaaagtt ctgttaccta 4860

tgtagatgag cttgtgctga acatgttgtg attttggcag gtgtgtgcta aaggacagga 4920

ataagccaat cttattcaca atggcgagat tggatcgtgt gaagaattta accggacttg 4980

ttgagtggta tgccaagaac gcacggctaa gggagttggt taaccttgtt gtggttggtg 5040

gagatcgaag gaaagaatcc aaagatttgg aagagcaaac agaaatgaaa aagatgtatg 5100

agctaataaa gactcacaat ttaaatggcc aattcagatg gatttcttca cagatgaacc 5160

gagtgaggaa cggtgaactc taccgataca ttgctgacac tagaggagct ttcgtgcagc 5220

ctgcattcta cgaggctttc ggtttgactg ttgttgaggc catgacctgt ggtttgccta 5280

catttgcaac taatcatggc ggtccagctg agatcatcgt taacggaaaa tctggcttcc 5340

acatcgatcc atatcacggt gagcaagctg ctgatctgct agctgatttc tttgagaaat 5400

gtaagacaga accttctcat tgggaaacca tttcaacggg tggcctgaag cgcatccaag 5460

agaagtaagc aactctttct tgactctagt cattgaaatt aactttcttg actctagtca 5520

ttgaaattaa ctcgggattt gaggcgtagt tgattgatat tttatcgcgt ctctactact 5580

gatatataca ggtacacgtg gcaaatctac tcggagaggc tattgacatt ggctgctgtt 5640

tacgggttct ggaaacatgt ttctaagctt gatcgtctag aaatccgtcg atatcttgaa 5700

atgttttatg ctctcaaata ccgcaagatg gtgagttcct cttcttcctt gcccttctcc 5760

tagtgtttaa gatacaatat aattgattgc attatcttag agaatcatta atgttaaatt 5820

ttcttaattc ttgaatctgt taatgaagtt tttctcttgg tttttgttta ggctgaagct 5880

gttccattgg ctgctgagtg a 5901

<210> 17

<211> 825

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 17

Met Leu Phe Met Gly Leu Lys Gln Leu Ser Glu Asp Phe Ser Pro Ala

1 5 10 15

Glu Ser Thr Ala Met Ala Glu Arg Val Leu Thr Arg Val His Ser Leu

20 25 30

Arg Glu Arg Leu Asp Ala Thr Leu Ala Ala His Arg Asn Glu Ile Leu

35 40 45

Leu Phe Leu Ser Arg Ile Glu Ser His Gly Lys Gly Ile Leu Lys Pro

50 55 60

His Gln Leu Leu Ala Glu Phe Asp Ala Ile Arg Gln Asp Asp Lys Lys

65 70 75 80

Lys Leu Asn Asp His Ala Phe Glu Glu Leu Leu Lys Ser Thr Gln Glu

85 90 95

Ala Ile Val Leu Pro Pro Trp Val Ala Leu Ala Ile Arg Leu Arg Pro

100 105 110

Gly Val Trp Glu Tyr Val Arg Val Asn Val Asn Ala Leu Val Val Glu

115 120 125

Glu Leu Thr Val Pro Glu Tyr Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp

130 135 140

Gly Thr Ser Asn Gly Asn Phe Val Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe

145 150 155 160

Thr Ala Ser Phe Pro Lys Pro Thr Leu Thr Lys Ser Ile Gly Asn Gly

165 170 175

Val Glu Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Met Phe His Asp Lys

180 185 190

Glu Ser Met Thr Pro Leu Leu Glu Phe Leu Arg Val His Asn Tyr Lys

195 200 205

Gly Lys Thr Met Met Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asn Leu Thr Thr Leu

210 215 220

Gln Asn Val Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Ile Met Leu Pro Pro

225 230 235 240

Glu Thr Pro Phe Ser Glu Phe Glu His Lys Phe Gln Glu Ile Gly Leu

245 250 255

Glu Lys Gly Trp Gly Asp Thr Ala Glu Arg Val Leu Glu Met Ile Cys

260 265 270

Met Leu Leu Asp Leu Leu Glu Ala Pro Asp Ser Cys Thr Leu Glu Lys

275 280 285

Phe Leu Gly Arg Ile Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro

290 295 300

His Gly Tyr Phe Ala Gln Glu Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly

305 310 315 320

Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Pro Ala Leu Glu Arg Glu

325 330 335

Met Leu Lys Arg Leu Lys Glu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile

340 345 350

Leu Ile Val Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly

355 360 365

Gln Arg Leu Glu Lys Val Tyr Gly Ala Glu His Ser His Ile Leu Arg

370 375 380

Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg

385 390 395 400

Phe Glu Val Trp Pro Tyr Met Glu Thr Phe Thr Glu Asp Val Ala Lys

405 410 415

Glu Leu Ala Ala Glu Leu Gln Ala Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn

420 425 430

Tyr Ser Glu Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly

435 440 445

Val Thr Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro

450 455 460

Asp Ser Asp Ile Tyr Trp Lys Lys Phe Asp Glu Lys Tyr His Phe Ser

465 470 475 480

Ser Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile

485 490 495

Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp Thr Val Gly

500 505 510

Gln Tyr Glu Ser His Gln Ala Phe Thr Met Pro Gly Leu Tyr Arg Val

515 520 525

Val His Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro

530 535 540

Gly Ala Asp Ile Asn Leu Tyr Phe Pro Tyr Ser Glu Lys Glu Lys Arg

545 550 555 560

Leu Thr Ala Leu His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asp Ile

565 570 575

Glu Asn Glu Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn Lys Pro Ile

580 585 590

Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu

595 600 605

Val Glu Trp Tyr Ala Lys Asn Ala Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu

610 615 620

Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu

625 630 635 640

Gln Thr Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Lys Thr His Asn Leu

645 650 655

Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn

660 665 670

Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Ala Asp Thr Arg Gly Ala Phe Val Gln

675 680 685

Pro Ala Phe Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr

690 695 700

Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Asn His Gly Gly Pro Ala Glu Ile

705 710 715 720

Ile Val Asn Gly Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Glu

725 730 735

Gln Ala Ala Asp Leu Leu Ala Asp Phe Phe Glu Lys Cys Lys Thr Glu

740 745 750

Pro Ser His Trp Glu Thr Ile Ser Thr Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln

755 760 765

Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Arg Leu Leu Thr Leu Ala

770 775 780

Ala Val Tyr Gly Phe Trp Lys His Val Ser Lys Leu Asp Arg Leu Glu

785 790 795 800

Ile Arg Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Tyr Arg Lys Met

805 810 815

Ala Glu Ala Val Pro Leu Ala Ala Glu

820 825

<210> 18

<211> 8323

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 18

atggcgaatc caaagttcac aagagtacct agcatgaggg agagagttga ggatactctc 60

tctgctcacc gtaaccagct tgttgctctc ctctccaggt atattaataa actctatata 120

cttgttattt tctttatttt tttgtcttta ctgataaatt taactgtttt cttctttaaa 180

tcttgctttc gatgcatgat ttctgttgtg ttaaattgcg taaccatttt atctaaaagt 240

ttatgctgat aaacactttt aaattttaat atgtaaatta tattatgtct caacatcaac 300

atgtggatgg ccaaaaatat aaagcttaat tttcgttatt ttgaatgatt tttctctgcg 360

agtgttacgg tttgcgtaca cattacctaa acctcctccc tagtccccac ttgtgggaat 420

ttaatttttt ttttctttgt ttttttttgt tgttgttgtt gtctgagttc aattcctacc 480

atgttagctt ggcaaaaata agttggtaaa gcttgacccc aactagtttt agttgatcga 540

tttatttggt gatttatagt tcaataataa taattactat tagagaaagt tccagcagct 600

tttctgtttg tttttccagt tttagtgatt gatatatgtg tatatatatt ctttgtttct 660

tttaagatac gtggcgcagg ggaaggggat attgcaacct caccacttga tcgatgagtt 720

caacaacgct gtatgtgatg acactgcttg tgagaagctc aaagatggtc cctttagtga 780

agtcttgaaa gctactcagg tatattcact aatccatggg aatcaagatg atactgtata 840

tctttattat ggtgtctttc agaaatttga cgatgatgaa atgcaacttt tctctgtttg 900

tcaccttatc cagactgttt ttttattttt tatttttcat tttttaactt gaaatgctct 960

taatttcctt tgtttatcga taagaccgga tttacaatgt atgaacggag catcttaaga 1020

accttctgga atgaagatat aagatataaa acatggtgtc cgttttctcc tttgtggaat 1080

cagtgtacat atagactgtt attttggtcc cactttctgg atcttctgat cacaccttct 1140

catgcagagg cgagcttgat ggtttcaacc tttaaattct tactattgaa tccatttcac 1200

tttcgaaatt atgagttcga aatctaatat ttgttgaaat ttttgcaaat gttcacatat 1260

aagtttaagc tttgtgtcaa gaatactggg ctcaatggat tccaatagac caggctgtat 1320

ccgcctctgt ctccactctc cctgcatcca cttctttcgt gtgactaata atgcttaatg 1380

agctagaact cgttttaatg tttgaataag ttgcttatat cagagcagct tttgatgttt 1440

caatctttaa cgggttatgc agtaccagca ttctgcggct gaaaaacagg aatctgagat 1500

ttacttgtct ctggctgaat ttcttgttca ttttgctaac aagtactttg gagttaatgc 1560

ttgctctctg ttgtcaaaat aggaagccat tgtgctgcca ccatttgttg ccatagcagt 1620

tcgtccaagg ccaggtgttt gggagtatgt tcgtgttaat gtatatgatt tgagcgttga 1680

acaattgact gttcctgaat atcttcattt caaggaagaa cttgtggatg gagagtaagc 1740

tctttcttat ttcaatacga aacataaaaa tttacagaag ttgaataatt aacaaatttg 1800

ttgattttta atgtatgcca ggggtaataa tcactttgtg cttgagctgg attttgagcc 1860

atttaatgca tcagttcctc gtccatctcg atcgtcatcc attggcaatg gagtccaatt 1920

cctcaatcgt catctttcct caattatgtt tcgcagcaaa gactctctgg accccttact 1980

tgatttcctt agaggacact gtcataaagg gaatgtaagt accaaaagca gttttccctt 2040

tgtaaatgtc tgcttgtccc tgattatcta ctaaatcttt caacacgcgc aaccattata 2100

agaaatgtac aatacttcta gttagaattt catcatcgac aaactatctg ctttactttt 2160

tatttttccc atttgatgga tgatagttta gtttatataa cagatgatat tttggttgaa 2220

gggtaccatg aactttttca caaccactta atggatacat agttgtaata gttgacattt 2280

tggaataata ttgtctcact tggaaatgtt taagaagtat tactacttct atttgtaaga 2340

tggattgttt atctatgcag gtcttgatgt tgaatgatcg tatacagcga atctccaggc 2400

tggagtctgc tctttctaaa gcagaggatt atctctccaa gctatcacca gatacatcct 2460

ataatgagtt cgaatacgcg tgagcttgta cacatttgtt ttgttttctt tcaagcatat 2520

gtaatttctc aagaaaaggg aaatctatag gagttgaaac attctttatg gaaccatgtg 2580

catgcagatt gcaagaaatg ggctttgaga gaggttgggg tgatactgcc agacgtgttt 2640

tggagacgat gcatcttctt tctgacattc ttcaggctcc ggatccatca accttggaga 2700

catttcttgg tagactacct atggtgttca atgtcgtcat attatcccct catggatatt 2760

ttggccaagc aaatgtcttg ggtttgcccg acactggtgg ccaggtaata acaaggagaa 2820

tgaggtcttg tattatgtac tccctccgtt ccaatctata tgaacctatt tgactgggta 2880

tggaaagaaa tgaagacttg taaaacttgt ggttctttag aaattccaaa cattacattt 2940

ggttttttcc ctcttcctgg aaattatact actgaatcat ctctagatgt tccagtttaa 3000

cttgagacgt aagggtaaat aacggaccat tactctgtcc tttcttgcag taggcttggt 3060

acaatgaata tagttcgcat agttgccgga agctagagct gtgttagaaa actcaggaac 3120

attaatttgg cgatgctaat cactgctaat gttactgaag catccatggt tttccttgat 3180

gttattctcc ttttggttgc ttcacaggtt gtctatatac tggatcaagt gcgtgccttg 3240

gaggccgaaa tgcttcttag aataaagcaa caaggactta acttcaagcc tagaatcctt 3300

gtcgtgagta catatatatt atgcaagctc ttatttggtt tgtgggattg cagttgacat 3360

caatttgctt actctgatta ctaaaggtca cacggctgat acctgatgct aaaggaacca 3420

tgtgcaacca gaggttggag aggattagtg gaactgaata ctcgcatatt ttacgtgtcc 3480

cttttaggac agagaaggga atccttcata aatggatatc taggtttgat gtatggcctt 3540

acctggagaa gttcactgag gtaacctctt tgtcccttgg aaattgcctt ttgttgctga 3600

tgtttctgct agtgtgctta aatgacggat gttaactagt cacttgctag cgtttgcaat 3660

agcaacggga aaagaaagga tttttgctag tttgaagtct gcctccaaga aaaattatat 3720

taaaagttta tggctagtgg aaacatcagt cattcatgta ccttatttct atgcccaagt 3780

tgtttaagtt gaaagtaatt tggccaacta tgcaaattgg gagaacgtgt agccaactat 3840

tgtgtttgcc gacatgttga tatacttttt ggtcctgatt tatatttgtt ggtttgtcat 3900

actggatgaa gcaattctca tgtttttctg cttatatata ttggaagaag agatacttgt 3960

cgtttcatca tttttctcga cctctctatt accaacactt tgccaattta atgtttggaa 4020

atgtcttctt gaccaggatg tggcaagtga aatgaccgct gagctccagg gaaagccaga 4080

tctgattatt ggcaactaca gtgatggaaa tttagttgcc tcccttttgg catataaaat 4140

gggtgtcaca caggtaggaa atacatgatt ctttatcttg ctagcactaa gtcttgaggt 4200

tatgtatctg caatagaaat tttacgcttt gccttcattt ctttttaatt atttttccag 4260

tgtaccattg ctcatgcctt ggaaaaaaca aagtatcctg attctgacat ctactggaaa 4320

aagtttgagg agaaatatca tttttcatgt cagtttactg ctgatctact ggcaatgaat 4380

aattcagatt tcattatcac cagtacttat caagagattg caggaacgta agtcatttta 4440

atctggtcgt ttaaatctga tatttcttcc ctagtagtct attcaatccg aatttcagtt 4500

cagtatatga tgtcatcggt tgaggaactg tgattggtaa ccttatcaaa tccgtagctg 4560

ctctataatt ttatttcgta attggagaaa caatttttta ttattgagct tgtagtctga 4620

gctagaattt ggttctttat ctatcaagta gcataatact acaactattt tttatgtgtg 4680

gcaatttgca atttcaattt tctatttcta taagttgcag cttttcttcc tgttctgatc 4740

atatttacat ggctgaaact caatagaaaa ctaggctagt tgatcaaaag tagttggatg 4800

ctttaaaatt agtagacgtt ttgctaaatg agtgaccaat gttattaaaa aaacgttcat 4860

gttttcaacc cttttggcat acatttgacc actgcccaag attttggata agtacatgca 4920

gtgcttataa ttataaagca ttttatccca ccttgttttt cattatgaaa attaagtaat 4980

ttacgagtat ttgtataagt tacttcataa attagaagta aatctggatt gtgtaaagtt 5040

attcgccccg tatatactga aagctacttg aacaagcaaa aaaacagaca aacgtaacat 5100

tctccatgga ttaatgagac ttgtatatat atatatatat atatgtaaag agagagagag 5160

agagatttgg cttgtaacca catgtatatt atgccatatg gatgtgacat tgatgtgact 5220

agacctaaat gttttgtttc aatgtccacg ggagttttac gtagagttaa gaggagaaga 5280

gagtgaggaa tactaatgtt tgatggtacc ccttggcttc ttgacctgga tactcagtgt 5340

tcttattcat gcctatactt tggtccttga tttcattctc ccttttctag cttgagctgc 5400

atcaaagaaa ttccactgta aaaaaaataa tgctcaccat attggtgcaa catggcaaac 5460

atgtatccta tttgatgatc aatcaacttt atttttctcc tgttaattga cctcagtgtg 5520

taactctcta tgtatgatag cattgtaact tgtgtcatga ttcataaata gggtactaga 5580

attggatggt tgacatagta aatggtcaat tgatgatcca caaaatatgc acctactgat 5640

taaaatgtga tagggcaggt ttatttttgt ttgtggttaa cacagtactt aaccctatat 5700

ttaatacaat ttggcttatc tacaatcttt tcttcagtgt ttatgcgaat tccttattgc 5760

acaacaatat tgtctttctg agttctattc tgttgttgct tacactttta ttattccagt 5820

aacatagatg tgaagacatt agattggttg cttgcaaatt gatagccact tgtttcagga 5880

agaatactgt tggtcagtac gagagccata ctgcattcac cctcccggga ctatatcgcg 5940

tcgttcatgg cattgatgtt ttcgatccca aattcaatat agtgtctcct ggagctgaca 6000

tgacaattta tttcccatat tctgacaagg aaaaaagact aacgtctttg catggctcga 6060

ttgaaaagtt gttatttgat cctgcgcaga atgaagagca tatgtaagtg gcatccgttt 6120

gtacttaatt tttttggaat agatgacata ttatttgcat gaatatgaaa aggagggtct 6180

gatatgattt tctatagata aactaccaat gatattattt aaaaactcct ggatactgta 6240

ttaggagaag aagagaacca ggggtagatg gcattagaat cccttaaatc ttgaagagtc 6300

gtcactaacg ctcccaacac ttctgcctca gaccctcaac taaatactat tattgttgat 6360

ttctttggag aagctataag aatctctctc tccttatggt gaaaatttta cttggcttta 6420

tacttaactt ccaaggctcc ctcttataaa atgcaaaaac tgtctgtatt cactctcttg 6480

gttaacaatt gatccaatca aatgcatatg gaacatcttt ctttacgttt cttctaaagt 6540

tcgtttgagg ataaggagta gaatctgaga agatagacta gtaggtaacc ttagggacgg 6600

atgtggaaat taacatatgg gctcagcttt tctgccgagt gcagaccatg tatatgcgtt 6660

aaaaaattca ctaaacaagt aaatgtttga ttttgaaccc agtaaatcaa atgagttgtg 6720

gtagaatctc gaactcgaac cgataaagtt caaatccagg atccgctttt aggtaaactc 6780

taccttggga agtgttatat atatgtccct gattatttct ttttccgttt cctttctatt 6840

ttaattttta aagttatttt tagatggttt tattttttga taagtggtaa gttgttaata 6900

ttccaaatta aatgccattg tcataactat atacatttat aaagaatgat tgatcctagt 6960

ttctcattcc taagatccaa ataaggcaat aaacaatgtc ttagtaattg gacctgcttc 7020

tggtgatcaa cgcttgatcg cgtagttagt tatagatgac tgtaaaaact ttaaccattt 7080

taatggtttt gtcaaagaac aaatatcgga catattatag agaatggact attgtacttt 7140

gcttctgatt ggtcatttta ttgtgatccg taaattggct gtgactgatg tcatatcttt 7200

gcttacagag gtaatctgaa tgataaatca aaacccataa ttttttcaat ggcaaggcta 7260

gaccatgtta agaacattac gggactagtt gagtgctatg ctaaaaatgc cacattgagg 7320

gaattggcga accttgttgt agtagctgga tacaacgatg taaagaaatc cagtgataga 7380

gaagaaataa cagaaattga gaagatgcat gctcttatta aggagcataa attggatggg 7440

caattcagat gggtatcagc ccaaacaaac cgggcacgta atggtgagct ctatcgctat 7500

atagctgacc agagaggtat atttgttcag gtatgctatt tgtattgtat tagtccaatt 7560

tcattttttg caccaaaaga aaggttgtta ttgtgacgta tatgtttgtt ttagcctgca 7620

ttttatgaag catttggact aacggtggtt gaagctatga cttgtggtct tccaacattt 7680

gcaacttgcc atggtggtcc taatgagatc attgaacccg gtgtatctgg gttccatatt 7740

gatccttatc atcccgataa agctgctgaa ctcatgtcag aattctttca acgctgcaaa 7800

caagatccta ctcactggga aaaaatatct gcatctggtc tccgaaggat tcttgagagg 7860

tctgtagttg tgtacatgta tagaagatta aagaatgcta ccttgatatt tatttgaatc 7920

aaaaataaca ggaacatctc ttttttgaac atcactcaag ttcttatatt aaataatttt 7980

taggtatacg tggaagattt actccgagag gctgatgact ttatctggcg tatatggttt 8040

ctggaagctt gtttcaaaac ttgagaggcg tgaaactaga cgataccttg agatgttcta 8100

cattctcaaa ttccgcgagt tggtgagtgc cttttagctc cttttcagtt ccaataaact 8160

atatatgtgg tttaagtaag tattaagcat aaacatgtcc gtgcttgggg ctgtcgaaaa 8220

tgctatggac atatcctgag ctaaggattt ttcaagaaaa ttgatgttag ctttactcta 8280

tttacaggca aaatctgtac ctctagcaat tgatgacaag tga 8323

<210> 19

<211> 810

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 19

Met Ala Asn Pro Lys Phe Thr Arg Val Pro Ser Met Arg Glu Arg Val

1 5 10 15

Glu Asp Thr Leu Ser Ala His Arg Asn Gln Leu Val Ala Leu Leu Ser

20 25 30

Arg Tyr Val Ala Gln Gly Lys Gly Ile Leu Gln Pro His His Leu Ile

35 40 45

Asp Glu Phe Asn Asn Ala Val Cys Asp Asp Thr Ala Cys Glu Lys Leu

50 55 60

Lys Asp Gly Pro Phe Ser Glu Val Leu Lys Ala Thr Gln Glu Ala Ile

65 70 75 80

Val Leu Pro Pro Phe Val Ala Ile Ala Val Arg Pro Arg Pro Gly Val

85 90 95

Trp Glu Tyr Val Arg Val Asn Val Tyr Asp Leu Ser Val Glu Gln Leu

100 105 110

Thr Val Pro Glu Tyr Leu His Phe Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Glu

115 120 125

Gly Asn Asn His Phe Val Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Asn Ala

130 135 140

Ser Val Pro Arg Pro Ser Arg Ser Ser Ser Ile Gly Asn Gly Val Gln

145 150 155 160

Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ser Ile Met Phe Arg Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Leu Asp Pro Leu Leu Asp Phe Leu Arg Gly His Cys His Lys Gly Asn

180 185 190

Val Leu Met Leu Asn Asp Arg Ile Gln Arg Ile Ser Arg Leu Glu Ser

195 200 205

Ala Leu Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Lys Leu Ser Pro Asp Thr

210 215 220

Ser Tyr Asn Glu Phe Glu Tyr Ala Leu Gln Glu Met Gly Phe Glu Arg

225 230 235 240

Gly Trp Gly Asp Thr Ala Arg Arg Val Leu Glu Thr Met His Leu Leu

245 250 255

Ser Asp Ile Leu Gln Ala Pro Asp Pro Ser Thr Leu Glu Thr Phe Leu

260 265 270

Gly Arg Leu Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly

275 280 285

Tyr Phe Gly Gln Ala Asn Val Leu Gly Leu Pro Asp Thr Gly Gly Gln

290 295 300

Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Ala Glu Met Leu

305 310 315 320

Leu Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Phe Lys Pro Arg Ile Leu Val

325 330 335

Val Thr Arg Leu Ile Pro Asp Ala Lys Gly Thr Met Cys Asn Gln Arg

340 345 350

Leu Glu Arg Ile Ser Gly Thr Glu Tyr Ser His Ile Leu Arg Val Pro

355 360 365

Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Leu His Lys Trp Ile Ser Arg Phe Asp

370 375 380

Val Trp Pro Tyr Leu Glu Lys Phe Thr Glu Asp Val Ala Ser Glu Met

385 390 395 400

Thr Ala Glu Leu Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser

405 410 415

Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Leu Ala Tyr Lys Met Gly Val Thr

420 425 430

Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser

435 440 445

Asp Ile Tyr Trp Lys Lys Phe Glu Glu Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln

450 455 460

Phe Thr Ala Asp Leu Leu Ala Met Asn Asn Ser Asp Phe Ile Ile Thr

465 470 475 480

Ser Thr Tyr Gln Glu Ile Ala Gly Thr Lys Asn Thr Val Gly Gln Tyr

485 490 495

Glu Ser His Thr Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His

500 505 510

Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala

515 520 525

Asp Met Thr Ile Tyr Phe Pro Tyr Ser Asp Lys Glu Lys Arg Leu Thr

530 535 540

Ser Leu His Gly Ser Ile Glu Lys Leu Leu Phe Asp Pro Ala Gln Asn

545 550 555 560

Glu Glu His Ile Gly Asn Leu Asn Asp Lys Ser Lys Pro Ile Ile Phe

565 570 575

Ser Met Ala Arg Leu Asp His Val Lys Asn Ile Thr Gly Leu Val Glu

580 585 590

Cys Tyr Ala Lys Asn Ala Thr Leu Arg Glu Leu Ala Asn Leu Val Val

595 600 605

Val Ala Gly Tyr Asn Asp Val Lys Lys Ser Ser Asp Arg Glu Glu Ile

610 615 620

Thr Glu Ile Glu Lys Met His Ala Leu Ile Lys Glu His Lys Leu Asp

625 630 635 640

Gly Gln Phe Arg Trp Val Ser Ala Gln Thr Asn Arg Ala Arg Asn Gly

645 650 655

Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Ala Asp Gln Arg Gly Ile Phe Val Gln Pro

660 665 670

Ala Phe Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys

675 680 685

Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys His Gly Gly Pro Asn Glu Ile Ile

690 695 700

Glu Pro Gly Val Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Pro Asp Lys

705 710 715 720

Ala Ala Glu Leu Met Ser Glu Phe Phe Gln Arg Cys Lys Gln Asp Pro

725 730 735

Thr His Trp Glu Lys Ile Ser Ala Ser Gly Leu Arg Arg Ile Leu Glu

740 745 750

Arg Tyr Thr Trp Lys Ile Tyr Ser Glu Arg Leu Met Thr Leu Ser Gly

755 760 765

Val Tyr Gly Phe Trp Lys Leu Val Ser Lys Leu Glu Arg Arg Glu Thr

770 775 780

Arg Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ile Leu Lys Phe Arg Glu Leu Ala

785 790 795 800

Lys Ser Val Pro Leu Ala Ile Asp Asp Lys

805 810

<210> 20

<211> 3604

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 20

atgtttacat ggctgaaact caatataaaa aacaagggta ggtgatcaaa aatcgttgga 60

tgcttaaaat cagtagacgt tttgctaaat gagcgaccaa tgttattgaa aacgttcatg 120

ttttcaaccc ttttggcata catttgagca ttgcccaaga ttttggataa gtagatgcag 180

tgcttataat tttaaagcat tgtatcctgc cttgtttttc attgtcaaaa ttaattaact 240

tacaagtatt tctataagtt gcttcataaa ttagaagtaa atctggattg tgtaatgtta 300

ttcgcctcgt aaatactgaa agctgcttga acaagtgaaa aaacacagac aaacgtaaca 360

ttctccatgg attgatgaga cttgtaaaat acatatatag aaatttggct tgtaaccaca 420

tgtatattat gccatatgga tgtgacattg atgtgactag acctaaatgt tttgtttcca 480

tgtccactgg agttttacgt atagttaaga ggagaaaaga ctgaggaata ctaatgtatg 540

atggtacccc tttgcttctt gacctggata cccagtgttc ctattcatgc ctatactttg 600

gtccttgatt tcactctccc ttttctaact tgagctgcat caaagaaatt tccactgtaa 660

aaaaataaat aatgctcacc atatctctgc aacattgcaa acatgtatcc catatgattg 720

atattggtgc gacatggcaa acatgtatcc tatttgatga tcaatcaaat ttatttttcc 780

cctgtcaaaa tgacctcagt gtgtaattcc ctatgtattt gatagcattg taactcgtgt 840

catgattcat gaatagggta ctagaattgc atggttgaca aatattaact ggtcgattga 900

tgatccacaa aacatgcact tactgactaa aatgtgatgg gacagattta tttttgtttg 960

tgattaacac agtacttaac cctatactta atacaatttg gcctagctac aatcttttct 1020

tcagtgcaaa ttccttgtta cacgaccaat attgtctttc tgagttctat tctgttgtta 1080

cttacacttt tattattcga ataagacatt agattgcttg catgcaaatt gatagccact 1140

tgtttcagga agaatactgt tggtcagtac gagagccata ctgcattcac cctcccagga 1200

ctatatcgcg tcgttcatgg cattgatgtt ttcgatccca aattcaatat agtgtctcct 1260

ggagctgaca tgacaattta cttcccatat tctgacaagg aaaaaagact aacgtctttg 1320

catggctcga ttgagaagtt gttatttgat cctgcgcaga atgaagagca tatgtaagtg 1380

acatccattt gtacttattt taatttggaa tagatgacat acttatttgc atgaatataa 1440

actgacaacc cagagatttc ctacattaga aaaggagggt ctgatatgat tttctacaaa 1500

taaattccca gtgatattgt tcaaaaagtc ctggatactt tattatgaga gaaccaggga 1560

tagatggcac tagaatccct taatcttgag aagtcgccac ttatcgctcc caacactttc 1620

tgagaccctc aagtaactac tattattgtt tgatatcttg gagaagctat aagaatcttt 1680

ttctccttat tgtaattttt tttacgtgac tttaaactta acttccaagc tccttctgat 1740

aaaatgcaaa aactgtctgt attcactgtc ttggtttatt aacaattgat ccaatcaaat 1800

gcatatggaa catctttctt tttgtttctt caaaagttcg tttgaggata aggagtagaa 1860

tctgagaaga tagactagta ggtaacctta ggggcggatg tagaaatcaa cgtatgggtt 1920

cagctttgtt gcagaccctg tatatgcatt aaaaaaatca ctaaataagt aaataattga 1980

ttttgaaccc agtaaatcaa aatgagttgt agtagaatcc tgaactcgaa ccgataaagt 2040

tggatccact accgggtaaa ctctaccttg agaagtgttt atatatgtcc ctaattattt 2100

cttttctgtt tcctttctat tttaattttt taagttcctt tttagatggt tttatttttt 2160

gacaagtggt aagttgttag tattccaaat taaatgccat tgccataact atatacattt 2220

ataaagattg attgacccta gtttctcatt cctaagatcc aaataaggca ataaacaata 2280

tgtcttagta cttgaacctg cttctggtgg tcaacacttg atcgcgtagt tagttataga 2340

tgactgtaaa aaccttaatc attttaatgg ttttgtcaaa gaacaaatat cggacatatt 2400

atagcgaatg gactattgta cttttcttct gattggtcat tttattgtga tccgtaagtt 2460

ggctgagact gatgtcatat ctttgcttac agaggtaatc tgaatgataa atcaaaaccc 2520

ataatttttt caatggcaag gctagaccat gttaagaaca ttacgggact agttgagtgc 2580

tatgctaaaa atgccacatt gagggaattg gctaaccttg ttgttgtagc tggatacaac 2640

gatgtaaaga aatccagtga tagagaagaa atagcagaaa ttgagaagat gcatgctctt 2700

attaaggagc ataaattgga tgggcaattc agatggatag cagcccaaac aaaccgggca 2760

cgtaatggtg agctctatcg ctatatagct gacaagagag gtatatttgt tcaggtacgc 2820

tgtttgtatt gtatttgtcc acattccttt ttttgcaccg aaagaaaggt tgttattgtg 2880

acaaatatgt ttgttttagc ctgcatttta tgaagcattt ggactcacgg tggttgaagc 2940

tatgacttgt ggtcttccaa catttgcaac ttgccatggt ggtccgaacg agatcattga 3000

acacggtgta tctgggttcc atattgatcc ttatcatccc gataaagctg ctgaactcat 3060

ggcagaattc tttcaacgct gcaaacaaga tcctactcac tgggaaaaaa tatctgcatc 3120

tggtctccga aggattcttg agaggtttgt agttgtgtac atatatagaa gattaaagat 3180

tgttcccttg atattatttg aatgaaaaat aacagtaaca tctctttttg aacatcgctc 3240

aagttcttgt gttaaataat tgttaggtat acgtggaaaa tttactccga gaggctgatg 3300

actttgtctg gtgtatatgg tttctggaag cttgtttcaa aacttgagag gcgcgaaact 3360

agacgatacc ttgagatgtt ctacattctc aaattccgcg agttggtgag tgcctttttg 3420

ctcattttca gttacaatca actatatatg tggtttaaat acgtattaag cataaacatg 3480

tccgtgattg cggctgtcga aaatgctatg gacatatcct gagctaagga gttttcaaga 3540

gaattgattt ggcttactct gtttacaggc aaaatctgtt cctctggcaa ttgatgacaa 3600

gtga 3604

<210> 21

<211> 335

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 21

Met Phe Thr Trp Leu Lys Leu Asn Ile Lys Asn Lys Gly Arg Lys Asn

1 5 10 15

Thr Val Gly Gln Tyr Glu Ser His Thr Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

20 25 30

Tyr Arg Val Val His Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

35 40 45

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Thr Ile Tyr Phe Pro Tyr Ser Asp Lys

50 55 60

Glu Lys Arg Leu Thr Ser Leu His Gly Ser Ile Glu Lys Leu Leu Phe

65 70 75 80

Asp Pro Ala Gln Asn Glu Glu His Ile Gly Asn Leu Asn Asp Lys Ser

85 90 95

Lys Pro Ile Ile Phe Ser Met Ala Arg Leu Asp His Val Lys Asn Ile

100 105 110

Thr Gly Leu Val Glu Cys Tyr Ala Lys Asn Ala Thr Leu Arg Glu Leu

115 120 125

Ala Asn Leu Val Val Val Ala Gly Tyr Asn Asp Val Lys Lys Ser Ser

130 135 140

Asp Arg Glu Glu Ile Ala Glu Ile Glu Lys Met His Ala Leu Ile Lys

145 150 155 160

Glu His Lys Leu Asp Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ala Ala Gln Thr Asn

165 170 175

Arg Ala Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Ala Asp Lys Arg Gly

180 185 190

Ile Phe Val Gln Pro Ala Phe Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val

195 200 205

Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys His Gly Gly

210 215 220

Pro Asn Glu Ile Ile Glu His Gly Val Ser Gly Phe His Ile Asp Pro

225 230 235 240

Tyr His Pro Asp Lys Ala Ala Glu Leu Met Ala Glu Phe Phe Gln Arg

245 250 255

Cys Lys Gln Asp Pro Thr His Trp Glu Lys Ile Ser Ala Ser Gly Leu

260 265 270

Arg Arg Ile Leu Glu Arg Tyr Thr Trp Lys Ile Tyr Ser Glu Arg Leu

275 280 285

Met Thr Leu Ser Gly Val Tyr Gly Phe Trp Lys Leu Val Ser Lys Leu

290 295 300

Glu Arg Arg Glu Thr Arg Arg Tyr Leu Glu Met Phe Tyr Ile Leu Lys

305 310 315 320

Phe Arg Glu Leu Ala Lys Ser Val Pro Leu Ala Ile Asp Asp Lys

325 330 335

<210> 22

<211> 4030

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 22

atggcggaac gtgtgctgac tcgtgttcat agccttcgtg aacgtcttga tgctactttg 60

gctgctcatc gcaatgagat tttgctgttt ctttcaaggt atagtcttag cagattgttc 120

tttgatttag ttgttattgc cagttctaat gtatgggctt atatataaac aaagtgttga 180

agtatgcaac catataaact gacagcttaa aatgcttgag agaacacact tttatttatt 240

taattatgcc ttcagcacaa gaagtggaac ttgacgcaat ggaaccatag gtcacgggtt 300

caagtcttgg aacagcctgc aatctaaggc tgcgtgtagt agaccctagt ggtccggccc 360

ttccacatat ctcgcttagt gtaccgggcc cattgagtac gggttcggcc gaacccagtc 420

gctttggtcc aatccatata tttgtcttaa aaatatattg aatatataca aattgttaat 480

ttagtttaaa tatgtgtatc atgggttatt catgctggtt ttggctgttg caggattgaa 540

agccatggaa aagggatact gaaacctcac cagttgctgg ctgaatttga ttcaattcac 600

aaagaagaca aaaacaaact gaatgatcat gcttttgaag aagtcctgaa atccactcag 660

gtatttgtgg ttttagtgtt aggtgatgga tagcatttat tgttttacta agatcacata 720

tgtgtcagtt tgtggctagt atttaaaatc tggtgtattt tgtcatacta ggaagcaatt 780

gttttgtccc cttgggttgc gcttgccatt cgtctgaggc ctggtgtgtg ggaatacgtt 840

cgtgtgaatg tcaacgctct tgttgttgag gagcttaccg tgcctgagta tttgcaattc 900

aaggaagaac ttgttaatgg aacgtaagtt ttaggttcga atttgttgat ttgttagata 960

acatgttctg aactttttga ttaaagttgt gtttttgact gatgcagctc gcacgataac 1020

tttgttcttg agttggattt tgagcccttc actgcatcat ttccaaaacc aaccctcacc 1080

aaatcaattg gaaatggagt tgaattcctt aaccgacacc tctctgccaa aatgttccat 1140

gacaaggaaa gcatgacccc tcttctcgag tttcttcgag ttcaccacta caagggcaag 1200

gtaaacttgt ttttcctgtt tgtctatgaa tttagtttag ttgttttgct ccgcgaaaat 1260

ttcagtggaa actgatttat gcaaccactg agtgattaat atgttcaaac ttaccgactt 1320

ctggttttct gtgtagacaa tgatgctgaa tgacagaatt caggacttaa atactctcca 1380

aaatgtccta aggaaagctg aggaatacct cactaccctt tcccctgaaa cttcatactc 1440

ggcatttgag cacaagttcc aagaaattgg cttggagagg ggttggggtg acactgcgga 1500

gcgtgttcta gagatgatct gcatgctcct ggatctcctc gaggctcctg actcgtgcac 1560

gcttgagaag ttccttggta gaattccaat ggtttttaat gtggtcatac tttcacccca 1620

tggttatttc gcccaggaaa atgtcttggg ttaccccgac actggtggcc aggtgcactg 1680

cttatctgtg ttcggtctta ttatctcttt aaaccctact gccacaagtg ctgagatgaa 1740

cctcctttaa tttgcaggtt gtctatattt tggatcaagt tcctgctttg gagcgtgaga 1800

tgctcaagcg cataaaggag caaggacttg acatcaaacc gcgtattctt attgttcgta 1860

ttcccagtaa ttgtgtttaa acttatgatt atgcaggatt ttatctgttc taatacagca 1920

ctcttgctta aattctcagg ttactcggct gctgcctgat gcggttggta ccacttgtgg 1980

tcagaggctt gagaaagtgt ttggaacaga gcactcacac attcttaggg tcccctttag 2040

gaccgagaag ggcattgttc gcaaatggat ctctcgcttt gaagtctggc catacatgga 2100

gacattcact gaggtgaagc aagctttctc tattcatttt tcaatcttcc aattggtttt 2160

ggcagcaatt ttctgcttgc tttgacttcc gctaaaactt cggattttat tgcattagga 2220

tgtggcgaaa gaaattgctg cagaattgca ggctaagcca gatcttatca ttggcaatta 2280

tagtgagggc aaccttgctg cctccttgtt ggctcacaaa ttaggtgtaa cacaggtcgg 2340

caatgtttgt gacatgtaat ttcatctttg catttccttt cgtttgcaac taaaagattt 2400

aagagttctc tctctctttt ttttttccgt ctactttgcc ttatgcagtg cacgatagct 2460

catgctttgg agaaaacaaa atatcctgat tctgatatct acttgaagaa atttgatgaa 2520

aaataccatt tctcagccca gtttactgcc gatcttattg caatgaatca caccgatttc 2580

atcatcacca gcactttcca ggagatagcg ggaaggtatt tttacatcag tttcccactc 2640

tgattaaatt acaatgtatt tccctatatg attaaatact gtgtttgatc ctaaatcatt 2700

tctaaatttt ccagcaagga cactgttgga cagtacgaga gccacatggc gttcacaatg 2760

cctggactgt atagagttgt tcacggcatt gatgtgtttg accccaaatt taacattgtg 2820

tcaccaggag ctgatatgaa tctctatttc ccatactacg agaaggaaaa gagattgaca 2880

gcatatcacc ctgaaattga ggagctgctg tttagtgatg ttgagaatga cgaacacatg 2940

tatgttacta aactagcaat cctgctgcaa aattatggct aattatgtaa acaagtttgt 3000

actgaataga tttgttattc gatcaggtgt gtgctgaaga acaggaataa gcctatcata 3060

ttcactatgg ctagattgga tcgagtgaag aacttaactg gacttgtcga gctgtacgcc 3120

aagaacccac ggctaaggga gttggttaac cttgtcgtgg ttggaggaga ccgaaggaaa 3180

gaatccaaag acttggaaga acaggcagag atgaagaaga tgtacgaact tataaagact 3240

cacaatttga acggccaatt ccgatggatt tcttcccaga tgaaccgcgt gaggaatggc 3300

gaactctaca ggtacattgc cgatactagg ggagctttcg tgcagcctgc attttacgag 3360

gcttttggtt tgactgttgt tgaggccatg acctgtggtt tgcctacatt tgcaactaat 3420

cacggtggtc cagctgagat catcgttcac gggaaatctg gtttccacat tgatccatac 3480

cacggggatc aggcagctga acttctcgct gatttctttg agaaatgtaa gaaagaacct 3540

tcgcactggg aagccatttc cgagggcggc cttaagcgta tacaggagaa gtaagcaaac 3600

tgctactctt ttcatttttg caaaacctac tatgatcatt attaagctca tttttgcaaa 3660

acctacttgc tgttgttatt gtttgttgct tccttttcac tgttctttga gctgaaggtc 3720

tatcagaaac agtctctcta ccttcacaag gtaggggtaa gatctgcgtg cacgttaccc 3780

tcctcaaact ctacttaatt gtgagattac actaggtttg ttgttgttga ttctttgcta 3840

attaattaaa aggtacacat ggcaaatata ctcggatcgg ttgttgacac tggctgctgt 3900

atatggattc tggaagcatg tttccaagct tgatcgtctt gaaattcgcc gttatcttga 3960

aatgttctat gctctcaaat tccgcaagct ggtgagtttc attgctttct gcactcctgc 4020

aattgtatag 4030

<210> 23

<211> 808

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 23

Met Ala Glu Arg Val Leu Thr Arg Val His Ser Leu Arg Glu Arg Leu

1 5 10 15

Asp Ala Thr Leu Ala Ala His Arg Asn Glu Ile Leu Leu Phe Leu Ser

20 25 30

Arg Ile Glu Ser His Gly Lys Gly Ile Leu Lys Pro His Gln Leu Leu

35 40 45

Ala Glu Phe Asp Ser Ile His Lys Glu Asp Lys Asn Lys Leu Asn Asp

50 55 60

His Ala Phe Glu Glu Val Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile Val Leu

65 70 75 80

Ser Pro Trp Val Ala Leu Ala Ile Arg Leu Arg Pro Gly Val Trp Glu

85 90 95

Tyr Val Arg Val Asn Val Asn Ala Leu Val Val Glu Glu Leu Thr Val

100 105 110

Pro Glu Tyr Leu Gln Phe Lys Glu Glu Leu Val Asn Gly Thr Ser His

115 120 125

Asp Asn Phe Val Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Thr Ala Ser Phe

130 135 140

Pro Lys Pro Thr Leu Thr Lys Ser Ile Gly Asn Gly Val Glu Phe Leu

145 150 155 160

Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Met Phe His Asp Lys Glu Ser Met Thr

165 170 175

Pro Leu Leu Glu Phe Leu Arg Val His His Tyr Lys Gly Lys Thr Met

180 185 190

Met Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Leu Asn Thr Leu Gln Asn Val Leu

195 200 205

Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Thr Leu Ser Pro Glu Thr Ser Tyr

210 215 220

Ser Ala Phe Glu His Lys Phe Gln Glu Ile Gly Leu Glu Arg Gly Trp

225 230 235 240

Gly Asp Thr Ala Glu Arg Val Leu Glu Met Ile Cys Met Leu Leu Asp

245 250 255

Leu Leu Glu Ala Pro Asp Ser Cys Thr Leu Glu Lys Phe Leu Gly Arg

260 265 270

Ile Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly Tyr Phe

275 280 285

Ala Gln Glu Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val

290 295 300

Tyr Ile Leu Asp Gln Val Pro Ala Leu Glu Arg Glu Met Leu Lys Arg

305 310 315 320

Ile Lys Glu Gln Gly Leu Asp Ile Lys Pro Arg Ile Leu Ile Val Thr

325 330 335

Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu

340 345 350

Lys Val Phe Gly Thr Glu His Ser His Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg

355 360 365

Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu Val Trp

370 375 380

Pro Tyr Met Glu Thr Phe Thr Glu Asp Val Ala Lys Glu Ile Ala Ala

385 390 395 400

Glu Leu Gln Ala Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser Glu Gly

405 410 415

Asn Leu Ala Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr Gln Cys

420 425 430

Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile

435 440 445

Tyr Leu Lys Lys Phe Asp Glu Lys Tyr His Phe Ser Ala Gln Phe Thr

450 455 460

Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr

465 470 475 480

Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp Thr Val Gly Gln Tyr Glu Ser

485 490 495

His Met Ala Phe Thr Met Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His Gly Ile

500 505 510

Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met

515 520 525

Asn Leu Tyr Phe Pro Tyr Tyr Glu Lys Glu Lys Arg Leu Thr Ala Tyr

530 535 540

His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Phe Ser Asp Val Glu Asn Asp Glu

545 550 555 560

His Met Cys Val Leu Lys Asn Arg Asn Lys Pro Ile Ile Phe Thr Met

565 570 575

Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Leu Tyr

580 585 590

Ala Lys Asn Pro Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly

595 600 605

Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Ala Glu Met

610 615 620

Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Lys Thr His Asn Leu Asn Gly Gln Phe

625 630 635 640

Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr

645 650 655

Arg Tyr Ile Ala Asp Thr Arg Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Phe Tyr

660 665 670

Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro

675 680 685

Thr Phe Ala Thr Asn His Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly

690 695 700

Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Asp Gln Ala Ala Glu

705 710 715 720

Leu Leu Ala Asp Phe Phe Glu Lys Cys Lys Lys Glu Pro Ser His Trp

725 730 735

Glu Ala Ile Ser Glu Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr

740 745 750

Trp Gln Ile Tyr Ser Asp Arg Leu Leu Thr Leu Ala Ala Val Tyr Gly

755 760 765

Phe Trp Lys His Val Ser Lys Leu Asp Arg Leu Glu Ile Arg Arg Tyr

770 775 780

Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Phe Arg Lys Leu Val Ser Phe Ile

785 790 795 800

Ala Phe Cys Thr Pro Ala Ile Val

805

<210> 24

<211> 4054

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 24

atggccgaac gtgtgctaac tcgtgttcac agccttcgcg aacgtcttga tgctactttg 60

gctgctcatc gcaatgagat tttgctgttt ctttcaaggt atagtcttag cagattgttc 120

tttgatttag ttggtgttat ttgccagttc taatgtatgg actaatatat gaacaaagtg 180

cgaccatttc aactgacaac ttaaaatgtt tgagagaata cacgtttatt tacttaatta 240

tggcttgagc ataggaagtg tatcttggcg taactcgtaa agttgacctc atgtgacaag 300

gaggtcacgg tttcgagccg tggaaacagc ctcttgcaga aatgcaggta aggctgcgtg 360

caatagatcg cccttccacg gacccgcgca tagcgggaac ttagtgcacc ggttgggctg 420

tcctttttta tgtcttcagc acaaaaattt agtttaaaca tgtgtatcat ggattattca 480

tgctggtttt gccggttgca ggattgaaag ccacggaaaa gggatattga aacctcacca 540

gttgctggct gagtttgaat caattcacaa agaagacaaa aacaaactga atgatcatgc 600

ttttgaagaa gtcctgaaat ctactcaggt aatttgtggt tttagtgtta ggtgatggat 660

agcatttatt gtcttactaa gatcatatat gtgtcagttt gtggctagta tttgaaaagt 720

ctggtgtggt ttgtcatact aggaagcaat tgtcttgtcc ccttgggttg cgcttgccat 780

tcgtctgcgg cctggtgtgt gggaatatgt tcgtgtgaat gtcaatgcac ttattgtcga 840

ggagctgact gtgcctgaat atttgcaatt caaggaagaa cttgttaatg gaacgtaagt 900

tttaggttcg aaatgatgat ttgttaaata atatgttctg aactttttga ttaatgttgt 960

gttttcccct gatgcagctc gaacgataac tttgttcttg agctggattt tgagcccttc 1020

actgcatcat ttcccaaacc aaccctcacc aaatcaattg gaaatggagt tgaattcctc 1080

aaccgacacc tctctgccaa aatgttccat gacaaggaaa gcatgacccc tcttctcgag 1140

tttcttcgag ttcatcacta caagggcaag gtaaacttgt ttttcctgtt tgtctatgaa 1200

tttagtttct gaaagttgct ttgcttcgtg aattttttag tggcaactga tttatgattt 1260

tctgtgcaga caatgatgct gaatgacaga gttcaggact taaacactct ccaaaatgtc 1320

ctaaggaagg ctgaggaata tctcactacc ctttcccctg aaacttcata ctcggtattt 1380

gagcacaagt tccaagaaat tggcctagag aggggctggg gtgacaatgc tgagcgtgtt 1440

ctagagatga tctgcatgct cctggatctc ctcgaggctc cagactcatg cactcttgag 1500

aagttccttg gtagaattcc tatggttttt aatgtggtca ttctttcacc tcacggatat 1560

ttcgcccagg aaaatgtctt gggttacccc gatactggtg gccaggtgca ctgcttattt 1620

gtaacacctt acgcttttcc ctctgaaact tatttgcggc aagttctaag gtcctccttc 1680

cttaatttgc aggttgtcta tattttggat caagttccgg ccttggagcg tgagatgctc 1740

aagcgcataa aggagcaagg acttgatatc aaaccgcgta ttcttattgt tcgtatctcc 1800

aataattgcg tttaaactta tgattgtgca ggatttgatc tgttcaaatc taatgactga 1860

ttttcttttt tttttttttt tccctcaggt tactcggctg ctgcctgatg cggttggtac 1920

cacttgtggt cagcggcttg agaaagtgtt tggaacagag cattcacata ttcttagggt 1980

cccctttagg accgagaagg gcatcgttcg caaatggatc tctcgctttg aagtctggcc 2040

ttacatggag acattcactg aggtgaagca agctttctct attcattttt caatcttcca 2100

atctgttttg gcagcaattt ttcacttact aacactttgg ctttcgctaa aacttcggat 2160

tttattacat taggatgtgg caaaagaaat tgctgcagaa ctgcaggcaa agccagatct 2220

tataatcggc aactacagcg agggcaacct tgctgcctcc ttgttggctc acaagttagg 2280

tgtaactcag gtctgtaatg tttgtcacct gttatttcaa ctttgcattt cctttcattt 2340

gcaactagaa gttaagagtt ctctctcttt tatcttttcc gtctattttg ccttctgcag 2400

tgcaccatag ctcatgcgtt ggagaaaaca aaatatcctg attctgatat ctacttgaag 2460

aaatttgatg aaaaatacca tttctcagcc cagtttactg ccgatcttat tgcaatgaat 2520

cacaccgatt tcataatcac cagcactttc caggagatag cgggaaggta ttacatcaca 2580

atggatttcc gatatgatta aattagttaa tttaatccta cttcattgtg tttgatccta 2640

aaacttttct aaatttccca gcaaggacac tgttggacag tacgagagcc acatggcttt 2700

cacgatgcct ggattgtata gagttgttca cggcattgat gtgttcgatc ccaaattcaa 2760

cattgtgtca ccaggagctg atatgaatct ctatttcccc tacttcgaga aggaaaagcg 2820

attgacagca tatcaccctg aaattgagga gctgctgttt agcgatgttg agaatgacga 2880

acacatgtat gttactaaac tagcaatcct gctgcaaaat tgtggctaat tatgtaaaaa 2940

agtttttact gaatagattt gtgcttctat caggtgtgtg ctgaaggaca ggaataagcc 3000

aattatattc accatggcta gattggatcg agtgaagaac ttaactggac ttgtggagtt 3060

gtacgccaag aacccacggc taagggagtt ggttaacctt gtcgtggttg gtggagaccg 3120

aaggaaggaa tccaaagatt tggaagaaca ggcagagatg aagaagatgt atgaacttat 3180

aaagacgcac aatttaaacg gccaattccg atggatttct tcccagatga accgcgtgag 3240

gaatggcgaa ctctacaggt acattgccga tactagggga gcttttgtgc agcctgcatt 3300

ttacgaggct tttggtttga ctgttgttga ggccatgacc tgtggtttgc ctacgtttgc 3360

aactaatcac ggtggtccag ctgagatcat cgttcacggg aagtctggtt ttcacattga 3420

tccataccac ggcgagcagg cagctgaact tctagctgat ttctttgaga gatgtaagaa 3480

agaaccttca cactgggaag ccatttccga gggcggcctt aagcgtatac aggagaagta 3540

agcaagctgc tactcttttc atttttgcaa aacctaccat gatcattatt aagctcattt 3600

ttgcaaaacc tacttgttat tctttgttgc ttccttttcc ctgttttttg agccgaggtt 3660

ttatcgaaaa catgctttct accttcacaa ggtaggggta aggtctgcgt ttgttattat 3720

tgttgttgtt gattctctgc gaattaatta aaaggtacac atggcaaatc tactcggatc 3780

ggttgttgac actggctgct gtttatggat tctggaagca tgtttccaaa cttgatcgtc 3840

ttgaaattcg tcgttatctt gaaatgttct atgctctaaa attccgcaaa ctggtgagtt 3900

tcactgcttt ctgcactctt ccaattgtta gttgagtgca ctcatttaaa ctgtagctaa 3960

agctgttgta aatcttcagt taagcagctg ctaatgaagt ttttatcttt tgtttttggt 4020

tcaggctgaa gctgtcccgt tggctgttga gtaa 4054

<210> 25

<211> 805

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 25

Met Ala Glu Arg Val Leu Thr Arg Val His Ser Leu Arg Glu Arg Leu

1 5 10 15

Asp Ala Thr Leu Ala Ala His Arg Asn Glu Ile Leu Leu Phe Leu Ser

20 25 30

Arg Ile Glu Ser His Gly Lys Gly Ile Leu Lys Pro His Gln Leu Leu

35 40 45

Ala Glu Phe Glu Ser Ile His Lys Glu Asp Lys Asn Lys Leu Asn Asp

50 55 60

His Ala Phe Glu Glu Val Leu Lys Ser Thr Gln Glu Ala Ile Val Leu

65 70 75 80

Ser Pro Trp Val Ala Leu Ala Ile Arg Leu Arg Pro Gly Val Trp Glu

85 90 95

Tyr Val Arg Val Asn Val Asn Ala Leu Ile Val Glu Glu Leu Thr Val

100 105 110

Pro Glu Tyr Leu Gln Phe Lys Glu Glu Leu Val Asn Gly Thr Ser Asn

115 120 125

Asp Asn Phe Val Leu Glu Leu Asp Phe Glu Pro Phe Thr Ala Ser Phe

130 135 140

Pro Lys Pro Thr Leu Thr Lys Ser Ile Gly Asn Gly Val Glu Phe Leu

145 150 155 160

Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Met Phe His Asp Lys Glu Ser Met Thr

165 170 175

Pro Leu Leu Glu Phe Leu Arg Val His His Tyr Lys Gly Lys Thr Met

180 185 190

Met Leu Asn Asp Arg Val Gln Asp Leu Asn Thr Leu Gln Asn Val Leu

195 200 205

Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Thr Leu Ser Pro Glu Thr Ser Tyr

210 215 220

Ser Val Phe Glu His Lys Phe Gln Glu Ile Gly Leu Glu Arg Gly Trp

225 230 235 240

Gly Asp Asn Ala Glu Arg Val Leu Glu Met Ile Cys Met Leu Leu Asp

245 250 255

Leu Leu Glu Ala Pro Asp Ser Cys Thr Leu Glu Lys Phe Leu Gly Arg

260 265 270

Ile Pro Met Val Phe Asn Val Val Ile Leu Ser Pro His Gly Tyr Phe

275 280 285

Ala Gln Glu Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val

290 295 300

Tyr Ile Leu Asp Gln Val Pro Ala Leu Glu Arg Glu Met Leu Lys Arg

305 310 315 320

Ile Lys Glu Gln Gly Leu Asp Ile Lys Pro Arg Ile Leu Ile Val Thr

325 330 335

Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu

340 345 350

Lys Val Phe Gly Thr Glu His Ser His Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg

355 360 365

Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Lys Trp Ile Ser Arg Phe Glu Val Trp

370 375 380

Pro Tyr Met Glu Thr Phe Thr Glu Asp Val Ala Lys Glu Ile Ala Ala

385 390 395 400

Glu Leu Gln Ala Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Ser Glu Gly

405 410 415

Asn Leu Ala Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Leu Gly Val Thr Gln Cys

420 425 430

Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile

435 440 445

Tyr Leu Lys Lys Phe Asp Glu Lys Tyr His Phe Ser Ala Gln Phe Thr

450 455 460

Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr

465 470 475 480

Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp Thr Val Gly Gln Tyr Glu Ser

485 490 495

His Met Ala Phe Thr Met Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val His Gly Ile

500 505 510

Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met

515 520 525

Asn Leu Tyr Phe Pro Tyr Phe Glu Lys Glu Lys Arg Leu Thr Ala Tyr

530 535 540

His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Phe Ser Asp Val Glu Asn Asp Glu

545 550 555 560

His Met Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn Lys Pro Ile Ile Phe Thr Met

565 570 575

Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Leu Tyr

580 585 590

Ala Lys Asn Pro Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly

595 600 605

Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Gln Ala Glu Met

610 615 620

Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Lys Thr His Asn Leu Asn Gly Gln Phe

625 630 635 640

Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr

645 650 655

Arg Tyr Ile Ala Asp Thr Arg Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Phe Tyr

660 665 670

Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro

675 680 685

Thr Phe Ala Thr Asn His Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly

690 695 700

Lys Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr His Gly Glu Gln Ala Ala Glu

705 710 715 720

Leu Leu Ala Asp Phe Phe Glu Arg Cys Lys Lys Glu Pro Ser His Trp

725 730 735

Glu Ala Ile Ser Glu Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr

740 745 750

Trp Gln Ile Tyr Ser Asp Arg Leu Leu Thr Leu Ala Ala Val Tyr Gly

755 760 765

Phe Trp Lys His Val Ser Lys Leu Asp Arg Leu Glu Ile Arg Arg Tyr

770 775 780

Leu Glu Met Phe Tyr Ala Leu Lys Phe Arg Lys Leu Ala Glu Ala Val

785 790 795 800

Pro Leu Ala Val Glu

805

<210> 26

<211> 3752

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 26

atggcctcaa cagttgctga tagcatgcct gatgctttga aacaaagccg gtatcatatg 60

aagagatgct tcgctaggtg aacacccttc ttttatgttt tttcccctct acgtgtttat 120

gtcaaatttc catgcataat gctaactact tttcttcttt ttgacttcaa aattggatgt 180

gaaaggttca ttgcaatggg aaggaggcta atgaagttga aacatttaac agaagaaata 240

gaagaaacta ttgaagacaa ggcagaaaga accaggattt tggagggttc acttggaaaa 300

attatgagtt ccacacaggt cagcaccatt taaccaactt agttgaacag gaaaaaaaga 360

aaaagcaaaa gagttattgc aaggcgtaac gattttcttt gaaattttca ggaggcagct 420

gttgttccac cttatgttgc ttttgcagta aggcacaatc ctggcttctg ggattatgtc 480

aaagttaacg ctgaaactct ctctgtggaa gctatttcag ccagggaata tctcaaattc 540

aaagagatga tctttgacga agactggtaa gtggaaaatt gtatcatttt aaagagaaac 600

aattttgtaa catacaagaa tagttttgat ggttgaatgt gcaagcaggg caaaggatga 660

taatgcactg gaagtagatt ttggtgcttt tgactactct aatcctcggt tagccctttc 720

ctcttctgtc ggaaatgggc tcaactttat ctcaaaagtt ctgtcttcaa agtttggtgg 780

aaagccagag gacgcccagc ctttgcttga ttacttacta gctcttaatc atcaaggaga 840

ggtatgaaaa tggactacct ttgtttctta aaggtattat ataatgatgc gcgttataaa 900

gttccttttt aaattgaaac tttgcagaat ctaatgatca atgagaatct gaatggtgtt 960

gctaagcttc aagcagcatt gatagtagct gaagtttttg tatcttcctt tcccaaagac 1020

acaccttata aagactttga gcataagtaa gcttctcata tgcttccatt gtcatatgca 1080

gtataccaat gacatgctac cgaaaagttg tttatgtttg tgacttgatt atgaaaactc 1140

taggctcaaa gaatggggct ttgataaagg gtggggtcac aatgcaggaa gagtaagaga 1200

gacaatgaga ctgctttccg agataatcca agcaccagat cccataaata tggagtcctt 1260

tttcagcaag cttcctacta cattcaacat tgttatcttc tccattcatg gttactttgg 1320

ccaagcagat gtccttggtc tgcccgatac tggaggccag gtctacatat acagcaattt 1380

atctcctttt gcctcatatt gcttattagc gacacttgca tcattgaaat cagactttta 1440

cttcacaggt tgtttatatt ctggatcaag taagggcttt agaggaggaa atgttacaaa 1500

gaatcaagca gcaagggcta aacgtgaagc ccaagattct tgtggtgagt tttgcaaaaa 1560

tatgcttaga caggttttga gattgatcgg agaagggatt aagatgatca agatctttgt 1620

ttcctgcttt catgatgtaa acaggtatct cgtctcatac cagatgctcg agggacaaca 1680

tgcaatcagg agatggaacc tattcttaac tcatcccatt ctcacatcct gagaattcca 1740

ttcaggactg agaaaggagt tcttcgccaa tgggtttctc ggtttgatat ctatccttac 1800

ttggagaact atgccaaggc aagtcttcta acaaaattac cacctattca tacactttat 1860

ttactttctt gaactaatcg tttggtttgt gacgtatatc attaggatgc ttctgctaag 1920

atacttgagc tcatggaagg taaaccagac ctcataattg ggaactacac tgatggaaat 1980

ttagtggcat ctctattggc caacaaactt ggagttactc aggttccgta gctgatcata 2040

tgatcatatt ttctacattg tttcttgata attaaatgga aatcttattg gatgataaca 2100

ttttagggaa ccattgctca tgcattagag aaaactaagt atgaagattc tgatgtgaag 2160

tggaagcagt ttgatcccaa gtaccacttt tcttgccaat ttactgccga tttattggca 2220

atgaatgctg ctgattttat cattaccagc acatatcaag aaatcgctgg aaggttagca 2280

ctgactctct cagtatattt ggcaacttaa tgaatttact gcagtggcca acactaaaag 2340

ctatcattcg tccttcagcg aaactaggcc tggacaatat gaaagtcaca cagcatttac 2400

catgccgggg ctttatagag ctgtttcagg catcaatgta tttgatccaa agttcaacat 2460

tgctgctcct ggggctgaac agtctaccta tttccctttc actgagaaac agaaacgatt 2520

cagcacattt cgtcctgcta ttaacgaatt actttacagt aatgaggaaa acaatgagca 2580

catgtaagtc taattgccca ttttcctaat ctaaccattg cttaaatcgt tctgttttta 2640

ccggatgtgt ggtacttatc agtaacattt ttttttggat cagtggattt cttgcagacc 2700

ggaaaaaacc aattatattt tcaatggcga gatttgatac agtgaagaac ctgtcaggct 2760

tgactgagtg gtatgggaag aataagaagt tgcggaactt ggtaaacctt gttattgttg 2820

ggggattctt cgatccatca aaatcaaaag accgggagga agcagctgaa atcaagaaga 2880

tgcatgaatt gattgagaaa taccagctca agggacaaat gagatggata gcagctcaaa 2940

ctgataaata tcgaaatagt gagctatacc gaactattgc tgacactaag ggagcttttg 3000

tccaaccggc tttatatgaa gcttttggac taaccgttat tgaagcaatg gattgtggat 3060

tgcctacgtt tgcaactaat caaggtggac ctgcagaaat cattgttgat ggggtttcag 3120

gtttccatat tgatccttac aatggggacg aatcaagcaa gaaaatagct gatttctttg 3180

agaagtgtaa ggttgattct aaatattgga acaggatatc tgagggaggt ctcaagcgca 3240

ttgaagaatg gtaacaaact agttccaagt ttaaaaaatg gaaaaaatgc ttatcatgtt 3300

atattttcgt ggttttaagt tctgcttcga tgcagttata cgtggaagat ttatgcaaac 3360

aaagtgttga atatgggatc aatctatgga ttttggagac aattcaatgt ggggcaaaag 3420

caggctaagc aaagatactt tgagatgttt tacaatcctc tcttcaggaa attggtaggt 3480

tgtatatgtt gaatacaatt tactaagatc ctcaaaatga ccaagaaata tacattgact 3540

atgctacttt tgtaatttca caggccaaaa gcgtgccgat cccacatgaa gagccattgc 3600

cacttgcaac atcagactct actcaatccc aagaattaaa actaccacta ccagttccag 3660

cagcagtagc taaagttctg ccattaacaa ggcatgcttt taacttaatt acttctctac 3720

ctagagtaac tggtaaagtg gatgtcaagt ga 3752

<210> 27

<211> 840

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 27

Met Ala Ser Thr Val Ala Asp Ser Met Pro Asp Ala Leu Lys Gln Ser

1 5 10 15

Arg Tyr His Met Lys Arg Cys Phe Ala Arg Phe Ile Ala Met Gly Arg

20 25 30

Arg Leu Met Lys Leu Lys His Leu Thr Glu Glu Ile Glu Glu Thr Ile

35 40 45

Glu Asp Lys Ala Glu Arg Thr Arg Ile Leu Glu Gly Ser Leu Gly Lys

50 55 60

Ile Met Ser Ser Thr Gln Glu Ala Ala Val Val Pro Pro Tyr Val Ala

65 70 75 80

Phe Ala Val Arg His Asn Pro Gly Phe Trp Asp Tyr Val Lys Val Asn

85 90 95

Ala Glu Thr Leu Ser Val Glu Ala Ile Ser Ala Arg Glu Tyr Leu Lys

100 105 110

Phe Lys Glu Met Ile Phe Asp Glu Asp Trp Ala Lys Asp Asp Asn Ala

115 120 125

Leu Glu Val Asp Phe Gly Ala Phe Asp Tyr Ser Asn Pro Arg Leu Ala

130 135 140

Leu Ser Ser Ser Val Gly Asn Gly Leu Asn Phe Ile Ser Lys Val Leu

145 150 155 160

Ser Ser Lys Phe Gly Gly Lys Pro Glu Asp Ala Gln Pro Leu Leu Asp

165 170 175

Tyr Leu Leu Ala Leu Asn His Gln Gly Glu Asn Leu Met Ile Asn Glu

180 185 190

Asn Leu Asn Gly Val Ala Lys Leu Gln Ala Ala Leu Ile Val Ala Glu

195 200 205

Val Phe Val Ser Ser Phe Pro Lys Asp Thr Pro Tyr Lys Asp Phe Glu

210 215 220

His Lys Leu Lys Glu Trp Gly Phe Asp Lys Gly Trp Gly His Asn Ala

225 230 235 240

Gly Arg Val Arg Glu Thr Met Arg Leu Leu Ser Glu Ile Ile Gln Ala

245 250 255

Pro Asp Pro Ile Asn Met Glu Ser Phe Phe Ser Lys Leu Pro Thr Thr

260 265 270

Phe Asn Ile Val Ile Phe Ser Ile His Gly Tyr Phe Gly Gln Ala Asp

275 280 285

Val Leu Gly Leu Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp

290 295 300

Gln Val Arg Ala Leu Glu Glu Glu Met Leu Gln Arg Ile Lys Gln Gln

305 310 315 320

Gly Leu Asn Val Lys Pro Lys Ile Leu Val Val Ser Arg Leu Ile Pro

325 330 335

Asp Ala Arg Gly Thr Thr Cys Asn Gln Glu Met Glu Pro Ile Leu Asn

340 345 350

Ser Ser His Ser His Ile Leu Arg Ile Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly

355 360 365

Val Leu Arg Gln Trp Asp Ala Ser Ala Lys Ile Leu Glu Leu Met Glu

370 375 380

Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Thr Asp Gly Asn Leu Val

385 390 395 400

Ala Ser Leu Leu Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Gln Gly Thr Ile Ala

405 410 415

His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Glu Asp Ser Asp Val Lys Trp Lys

420 425 430

Gln Phe Asp Pro Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu

435 440 445

Leu Ala Met Asn Ala Ala Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Tyr Gln Glu

450 455 460

Ile Ala Gly Ser Glu Thr Arg Pro Gly Gln Tyr Glu Ser His Thr Ala

465 470 475 480

Phe Thr Met Pro Gly Leu Tyr Arg Ala Val Ser Gly Ile Asn Val Phe

485 490 495

Asp Pro Lys Phe Asn Ile Ala Ala Pro Gly Ala Glu Gln Ser Thr Tyr

500 505 510

Phe Pro Phe Thr Glu Lys Gln Lys Arg Phe Ser Thr Phe Arg Pro Ala

515 520 525

Ile Asn Glu Leu Leu Tyr Ser Asn Glu Glu Asn Asn Glu His Ile Gly

530 535 540

Phe Leu Ala Asp Arg Lys Lys Pro Ile Ile Phe Ser Met Ala Arg Phe

545 550 555 560

Asp Thr Val Lys Asn Leu Ser Gly Leu Thr Glu Trp Tyr Gly Lys Asn

565 570 575

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Val Asn Leu Val Ile Val Gly Gly Phe Phe

580 585 590

Asp Pro Ser Lys Ser Lys Asp Arg Glu Glu Ala Ala Glu Ile Lys Lys

595 600 605

Met His Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Gln Leu Lys Gly Gln Met Arg Trp

610 615 620

Ile Ala Ala Gln Thr Asp Lys Tyr Arg Asn Ser Glu Leu Tyr Arg Thr

625 630 635 640

Ile Ala Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Leu Tyr Glu Ala

645 650 655

Phe Gly Leu Thr Val Ile Glu Ala Met Asp Cys Gly Leu Pro Thr Phe

660 665 670

Ala Thr Asn Gln Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val Asp Gly Val Ser

675 680 685

Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Glu Ser Ser Lys Lys Ile

690 695 700

Ala Asp Phe Phe Glu Lys Cys Lys Val Asp Ser Lys Tyr Trp Asn Arg

705 710 715 720

Ile Ser Glu Gly Gly Leu Lys Arg Ile Glu Glu Cys Tyr Thr Trp Lys

725 730 735

Ile Tyr Ala Asn Lys Val Leu Asn Met Gly Ser Ile Tyr Gly Phe Trp

740 745 750

Arg Gln Phe Asn Val Gly Gln Lys Gln Ala Lys Gln Arg Tyr Phe Glu

755 760 765

Met Phe Tyr Asn Pro Leu Phe Arg Lys Leu Ala Lys Ser Val Pro Ile

770 775 780

Pro His Glu Glu Pro Leu Pro Leu Ala Thr Ser Asp Ser Thr Gln Ser

785 790 795 800

Gln Glu Leu Lys Leu Pro Leu Pro Val Pro Ala Ala Val Ala Lys Val

805 810 815

Leu Pro Leu Thr Arg His Ala Phe Asn Leu Ile Thr Ser Leu Pro Arg

820 825 830

Val Thr Gly Lys Val Asp Val Lys

835 840

<210> 28

<211> 3268

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 28

atggcctcaa ctgttgctgg tagcatgcct gatgctttga aacaaagccg atatcatatg 60

aagagatgct tcgctaggtg aacacccttc ttgttctttt tgttttttcc ctctaccatt 120

tatgtcaaat ttcaatgcat aatgctaact actttttttc tttttgactt caaaattgga 180

cgtgaaaggt tcattgcaat gggaaggagg ttgatgaagc tgaaacattt aacagaagaa 240

atagaaaaaa ctattgaaga caaggcagaa agaaccaaga ttttggaggg ttcacttgga 300

aaaattatga gttccacaca ggtcagcacc atttaaccaa cttaattgaa taggaagaaa 360

aaaaaaagca aaagagttat tgcaaggcgt aacgatttcc tttgaaattt tcaggaggca 420

gctgttgtcc caccttatgt tgcttttgca gtaaggcaca atcctggctt ctgggattat 480

gtcaaagttg acgctgaaac tctctctgtg gaagctattt cagccaggga ctatctcaaa 540

ttcaaagaga tgatctttga tgaagattgg taactggaag attgtatcat tttaaagaaa 600

caatttttta atattcaaga ttagttttga tggttgaatg tgcaagcagg gcaaaggatg 660

aaaatgcact cgaagtagat tttggtgctt ttgactactc taatcatcgg ttagcccttt 720

cctcttctgt cggaaatggg ctaaacttca tctcgaaagt tttgtcttca aagtttggtg 780

gaaaggcaga agatgcccag cctttgcttg attacttact agctcttaat catcaaggag 840

aggtatggaa atggactacc ttcctttctt aaggaattat ataatgatgt atgttataaa 900

gatccttttt aaacattgac actttgcaga atctaatgat caatgagaat ctgaatggcg 960

tctctaagct tcaagcagca ttgatagtag ctgaagtttt tgtatcttcc tttcccaaag 1020

acacacctta taaagacttt gagcataagt aagcttttca aacgcttctg ttatcatatg 1080

caatatacca agaatatgtt gccttttgaa aagttgttta tgtttatgac ttgataatga 1140

aaatactagg ctcaaagaat ggggctttga gaaagggtgg ggtcacaatg caggaagagt 1200

aagagagaca atgagactgc tttccgagat aatccaagcg ccagatccca taaatatgga 1260

gtcctttttc agcaggcttc ctactacatt caacattgtt atcttctcca ttcatggtta 1320

ctttggccaa gcagatgtcc ttggtttgcc cgatactgga ggccaggttt acatacacag 1380

caatttatct ccttttgcct catatttact tattagcgac acttgcatta ttgaaatcac 1440

atttgtattt aacaggttgt ttatattctg gatcaagtaa gagccttaga ggaggaaatg 1500

ttacaaagaa tcaagcagca agggttaaat gtgaagccca agattcttgt ggtgagttat 1560

gcaaaaatat gcgtagccaa ggttttgaaa ttgttcagag gggattaaga tgatcgagat 1620

atttgtttcc ttcttccatt gatgtgtaca ggtcactcgt ctcattccag atgctcgagg 1680

gactacatgc aatcaggaga tggaacctat acttaactcg tcccattctc acatcctgag 1740

aattccattc aggacagaga aaggagttct tcgccaatgg gtttctcggt ttgatatcta 1800

tccttacttg gagaactatg ccaaggcaag tctcctacca aaattaccac ctattcatac 1860

actttattca gttttttgag ctaatcattc tcatttgtca cgtatgtgat taggatgctt 1920

ctgctaagat acttgagctc atggaaggta aaccagacct cattattggg aactacactg 1980

atggaaattt agtggcatct ctattggcca acaaacttgg agttactcag gttctacagc 2040

tgatcattta tctgatcaga ttttctacat tgttttcttg ataattaaac ggaaatctta 2100

tgagattgta acattttagg gaaccattgc tcatgcatta gagaaaacca agtatgaaga 2160

ttctgatgtc aagtggaagc agtttgattc caagtaccac ttttcttgcc aattcactgc 2220

cgatttattg gcaatgaatg ctgctgattt tatcattacc agcacatatc aagaaatcgc 2280

aggaaggtta gcactgactc tctcagtata tttggcaact taatgaatgt actgcttgtg 2340

gccaacacta aaagctatta ctcgtccttc agcgaaacta ggcctggaca atatgaaagt 2400

cacacagcat ttaccatgcc ggggctttat agagctgttt caggcatcaa tgtatttgat 2460

ccaaagttca acattgctgc tcctggggct gaacagtctg cctatttccc cttcactgag 2520

aaacagaaac gattcagcgc gtttcgtcct gctattgagg aactacttta cagtaatgag 2580

caaaacaacg agcacatgta agtctaattg ccccattttc ctaatctaac cattgcttaa 2640

atgttctgtt tttacttgat atgtggtact tatcagtgat attttttatt ggaacagtgg 2700

atttcttgca gaccgtaaaa aaccaattat attttcaatg gcaagatttg atacggtgaa 2760

gaacttgtca ggcttgactg agtggtatgg gaagaataag aagttgcgga acttggttaa 2820

cctcgttatc gttgggggat tcttcgatcc atcaaaatca aaagaccggg aggaagcagc 2880

tgaaatcaag aagatgcatg aattgattga gaaatacaag ctcaagggac aaatgagatg 2940

gatagcagct caaactgata aatatcaaaa cagtgagcta tatcgaacta ttgctgacac 3000

taaaggagct ttcgtccaac cggctttata tgaagctttt ggactaactg ttattgaagc 3060

aatgaattgt ggactgccta catttgctac taatcaaggc ggacctgcag aaatcattgt 3120

tgatggggtt tcaggcttcc atattgatcc ttacaatggg gatgaatcga gcaagaaaat 3180

agctgatttc tttgagaagt gtaaggttga ttctaaatat tggaacaaga tatgtggagg 3240

aggtctcaag cgcattgaag aatggtaa 3268

<210> 29

<211> 732

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 29

Met Ala Ser Thr Val Ala Gly Ser Met Pro Asp Ala Leu Lys Gln Ser

1 5 10 15

Arg Tyr His Met Lys Arg Cys Phe Ala Arg Phe Ile Ala Met Gly Arg

20 25 30

Arg Leu Met Lys Leu Lys His Leu Thr Glu Glu Ile Glu Lys Thr Ile

35 40 45

Glu Asp Lys Ala Glu Arg Thr Lys Ile Leu Glu Gly Ser Leu Gly Lys

50 55 60

Ile Met Ser Ser Thr Gln Glu Ala Ala Val Val Pro Pro Tyr Val Ala

65 70 75 80

Phe Ala Val Arg His Asn Pro Gly Phe Trp Asp Tyr Val Lys Val Asp

85 90 95

Ala Glu Thr Leu Ser Val Glu Ala Ile Ser Ala Arg Asp Tyr Leu Lys

100 105 110

Phe Lys Glu Met Ile Phe Asp Glu Asp Trp Ala Lys Asp Glu Asn Ala

115 120 125

Leu Glu Val Asp Phe Gly Ala Phe Asp Tyr Ser Asn His Arg Leu Ala

130 135 140

Leu Ser Ser Ser Val Gly Asn Gly Leu Asn Phe Ile Ser Lys Val Leu

145 150 155 160

Ser Ser Lys Phe Gly Gly Lys Ala Glu Asp Ala Gln Pro Leu Leu Asp

165 170 175

Tyr Leu Leu Ala Leu Asn His Gln Gly Glu Asn Leu Met Ile Asn Glu

180 185 190

Asn Leu Asn Gly Val Ser Lys Leu Gln Ala Ala Leu Ile Val Ala Glu

195 200 205

Val Phe Val Ser Ser Phe Pro Lys Asp Thr Pro Tyr Lys Asp Phe Glu

210 215 220

His Lys Leu Lys Glu Trp Gly Phe Glu Lys Gly Trp Gly His Asn Ala

225 230 235 240

Gly Arg Val Arg Glu Thr Met Arg Leu Leu Ser Glu Ile Ile Gln Ala

245 250 255

Pro Asp Pro Ile Asn Met Glu Ser Phe Phe Ser Arg Leu Pro Thr Thr

260 265 270

Phe Asn Ile Val Ile Phe Ser Ile His Gly Tyr Phe Gly Gln Ala Asp

275 280 285

Val Leu Gly Leu Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp

290 295 300

Gln Val Arg Ala Leu Glu Glu Glu Met Leu Gln Arg Ile Lys Gln Gln

305 310 315 320

Gly Leu Asn Val Lys Pro Lys Ile Leu Val Val Thr Arg Leu Ile Pro

325 330 335

Asp Ala Arg Gly Thr Thr Cys Asn Gln Glu Met Glu Pro Ile Leu Asn

340 345 350

Ser Ser His Ser His Ile Leu Arg Ile Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly

355 360 365

Val Leu Arg Gln Trp Asp Ala Ser Ala Lys Ile Leu Glu Leu Met Glu

370 375 380

Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn Tyr Thr Asp Gly Asn Leu Val

385 390 395 400

Ala Ser Leu Leu Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Gln Gly Thr Ile Ala

405 410 415

His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Glu Asp Ser Asp Val Lys Trp Lys

420 425 430

Gln Phe Asp Ser Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu

435 440 445

Leu Ala Met Asn Ala Ala Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Tyr Gln Glu

450 455 460

Ile Ala Gly Ser Glu Thr Arg Pro Gly Gln Tyr Glu Ser His Thr Ala

465 470 475 480

Phe Thr Met Pro Gly Leu Tyr Arg Ala Val Ser Gly Ile Asn Val Phe

485 490 495

Asp Pro Lys Phe Asn Ile Ala Ala Pro Gly Ala Glu Gln Ser Ala Tyr

500 505 510

Phe Pro Phe Thr Glu Lys Gln Lys Arg Phe Ser Ala Phe Arg Pro Ala

515 520 525

Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ser Asn Glu Gln Asn Asn Glu His Ile Gly

530 535 540

Phe Leu Ala Asp Arg Lys Lys Pro Ile Ile Phe Ser Met Ala Arg Phe

545 550 555 560

Asp Thr Val Lys Asn Leu Ser Gly Leu Thr Glu Trp Tyr Gly Lys Asn

565 570 575

Lys Lys Leu Arg Asn Leu Val Asn Leu Val Ile Val Gly Gly Phe Phe

580 585 590

Asp Pro Ser Lys Ser Lys Asp Arg Glu Glu Ala Ala Glu Ile Lys Lys

595 600 605

Met His Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Lys Leu Lys Gly Gln Met Arg Trp

610 615 620

Ile Ala Ala Gln Thr Asp Lys Tyr Gln Asn Ser Glu Leu Tyr Arg Thr

625 630 635 640

Ile Ala Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Leu Tyr Glu Ala

645 650 655

Phe Gly Leu Thr Val Ile Glu Ala Met Asn Cys Gly Leu Pro Thr Phe

660 665 670

Ala Thr Asn Gln Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val Asp Gly Val Ser

675 680 685

Gly Phe His Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Glu Ser Ser Lys Lys Ile

690 695 700

Ala Asp Phe Phe Glu Lys Cys Lys Val Asp Ser Lys Tyr Trp Asn Lys

705 710 715 720

Ile Cys Gly Gly Gly Leu Lys Arg Ile Glu Glu Trp

725 730

<210> 30

<211> 3937

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 30

atggctactg caccagccct aaatagatca gagtccatag ctgatagcat gccagaggcc 60

ttaaggcaaa gccggtacca catgaagaaa tgttttgcca agtacataga gcaaggaaag 120

aggatgatga aacttcataa cttgatggat gagttggaga aagtaattga tgatcctgct 180

gaaaggaacc atgttttgga aggcttactt ggctacatat tatgcactac aatggtatag 240

ctagattcat atgtacttat gatgccctta tattgtttcc tgatgtatta ctcttaaaac 300

cttctttgat caaatttaca ggaggctgca gttgttcctc cctacattgc ctttgccacg 360

agacagaatc ctggattctg ggaatatgtg aaagtgaatg ctaatgatct ttctgttgag 420

ggtattacag ctacagaata cttgaaattc aaggaaatga tagttgatga atgctggtat 480

agtatacgtt gcagcttatc ataccttttg tggttttata acttcaatca gaaaactcat 540

cagagttacc tttgtgtgaa catgaaatgc agggcaaaag atgaatatgc actggaaatt 600

gattttggag cagtagactt ctcaacgcct cgactgaccc tatcctcttc aattggcaat 660

ggtctcagtt atgtttccaa gtttctaact tcaaagctaa atgctacctc cgcgagtgca 720

cagtgtctgg ttgactactt gctcactttg aatcatcaag gagatgtacg tcaacaaaaa 780

tcaaactcca taagtaaact tgtcaactct aagaagaaaa aataggaaaa gaagattcac 840

gtaacaaatt ttctttatgt tcaactgcag aaactgatga tcaatgagac actcagcact 900

gtctcaaagc ttcaggctgc actggttgta gcagaagcat ctatttcctc tttaccaaca 960

gatacaccat atgagagctt tgagctaagg tgatttgttt tttcctctac ttccctccac 1020

ttgtgccatg ctacgtagta ctaagtaact tcaattcttg taaagattca aacagtgggg 1080

ttttgagaaa ggatggggtg atacagctga aagggtcagc gacaccatga gaacactgtc 1140

tgaggtgctt caggcaccag atccattgaa cattcagaag ttctttggaa gggttccaac 1200

tgttttcaat attgtattgt tctctgtcca tggatacttt ggccaagcag atgttcttgg 1260

cttgccagac actggtggtc aggtaagcat ttaatagctt ttacatttaa cttctatgca 1320

ttgacaataa aataattttt aacagtttga ccacttctgc tcttgttcaa caggtagttt 1380

atgttttgga tcaagttgta gcttttgaag aagaaatgct acaaagaatt aaacagcagg 1440

ggctcaatat taagcctcaa attcttgtgg tgagttccta gacaatcgac gtgactatgc 1500

aattatgtag aggctgttta gaaaagttaa tatcatatgt tgattgcaca gttaacccga 1560

ctgattccgg atgcaaaagg aacaaagtgc aaccaggaac tagaaccaat caagaataca 1620

aaacattcac acatcctcag agttccattt aggacagaaa aaggagtgct taatcaatgg 1680

gtttcacgat ttgatatcta tccatatctg gagagatata ctcaggtatg tatttttata 1740

tcaaccttgc tcatcaaaga tgtgttgttt cctcaattcc atttttcccc ttggcaaaag 1800

gatgctgctg acaaaatcgt cgagctaatg gaaggcaaac ctgatctaat cattggtaac 1860

tacactgatg ggaatctagt ggcttcacta atggctagaa aacttgggat aactctggta 1920

acttttctta atcatatttg atgttgcttc ttctccaagt tagttcttaa tctccactga 1980

cctagaccat ctttgcaaca gggaactatt gctcatgctt tggagaagac aaaatatgaa 2040

gactctgaca taaaattgaa ggaactcgat ccgaagtacc acttctcttg ccaattcaca 2100

gctgatttga ttgcaatgaa ttcagcagat ttcattatca ctagcacata ccaagaaata 2160

gctggaaggt aagaattaga gctaataagt aatgcattca tatgtatttc agcatcgctc 2220

tttcaccatc atcgaataca caccactact cagtaaatgt atttgctcaa aagtttgcaa 2280

cttaatggat ctcattcttg aatgcttcaa catatgcagc aaagataaac caggacagta 2340

tgagagccat agtgcattta cccttccagg gctttacaga gttgcttcag gtatcaatgt 2400

ctttgatcca aaatttaata ttgctgcacc tggggcagac cagtcggtgt atttccctta 2460

cacagaaaag cagaagcgtt tgactgcttt ccgccctgcc attgaggaac tgctttttag 2520

taaagtggac aatgacgagc acgtgtaagt ctaagtgtta aacttcagct tagtgcctag 2580

aacatcccac tgctctatgt attgatgttt cacttgtttc aaacagtgga tatttagaag 2640

acagaaagaa acctatcctg tttaccatgg caaggctgga cacagtgaag aacacatctg 2700

gactaacaga atggtatggc aagaacaaga ggctcagaag cttagttaac cttgttgtgg 2760

ttggtggttc ctttgatcct acaaaatcca aggataggga agaagcagct gaaataaaaa 2820

agatgcacat gctgatagag aaataccagc ttaagggtca gattagatgg atagcagctc 2880

agactgacag atacagaaat agtgaactct accgcacaat agcagattcc aaaggagctt 2940

ttgtgcagcc tgcattgtat gaagcatttg gtctaacagt cattgaggca atgaactgtg 3000

gattaccaac ctttgctacc aaccaaggtg gccctgctga gattattgtt gatggggtct 3060

caggctttca tattgatcca aataatgggg atgaatcaag caacaaaatt gccaactttt 3120

tccaaaaatg cagggaggat cctgagtatt ggaacaggat ttcagtccag ggtctaaacc 3180

gtatatatga atggtaactc acagataagc cattcaaatt gcaaagaggc acatatcttg 3240

cagaaaattt cttaatcctt aaatcctaat tttttgcagt tacacatgga agatctatgc 3300

aaacaaggta ttgaatatgg ggtccatcta tactttttgg aggacattgt acagagatca 3360

gaaacaagca aagcaaagat acatcgagac tttctacaat cttgagttta ggaacttggt 3420

atagtgctgc atgacattga cagtatacca caaacatctt tatgagatga attactttta 3480

ataaaattgt ttttaacctt tgcttcctta atggcactta ttgcaggtaa aaaatgtgcc 3540

tatcagaaag gacgaaacac cacaaggacc aaaggagagg gagaaagtta agccacagat 3600

atcacaaagg catgctctaa agcttttgcc tacagttttt caagagaccc tagtatattc 3660

tagtactaaa ttagaattat acagcatgca gcttttgctg ttcacctttc taaatcacca 3720

gttgtgtcaa tcaagttgac aaaatcaata aattgggatt ttccctttcc tatgcttgat 3780

tgttattact cctactttgt ttatggtagt cttccttcat tgttttctcc tgtacttctt 3840

ttactacaac tgtactgaca tactaattat ttctgtgtac caggcgctca caatcaaggt 3900

tgcagaagta agattagata aaattgctac tgcatga 3937

<210> 31

<211> 860

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 31

Met Ala Thr Ala Pro Ala Leu Asn Arg Ser Glu Ser Ile Ala Asp Ser

1 5 10 15

Met Pro Glu Ala Leu Arg Gln Ser Arg Tyr His Met Lys Lys Cys Phe

20 25 30

Ala Lys Tyr Ile Glu Gln Gly Lys Arg Met Met Lys Leu His Asn Leu

35 40 45

Met Asp Glu Leu Glu Lys Val Ile Asp Asp Pro Ala Glu Arg Asn His

50 55 60

Val Leu Glu Gly Leu Leu Gly Tyr Ile Leu Cys Thr Thr Met Glu Ala

65 70 75 80

Ala Val Val Pro Pro Tyr Ile Ala Phe Ala Thr Arg Gln Asn Pro Gly

85 90 95

Phe Trp Glu Tyr Val Lys Val Asn Ala Asn Asp Leu Ser Val Glu Gly

100 105 110

Ile Thr Ala Thr Glu Tyr Leu Lys Phe Lys Glu Met Ile Val Asp Glu

115 120 125

Cys Trp Ala Lys Asp Glu Tyr Ala Leu Glu Ile Asp Phe Gly Ala Val

130 135 140

Asp Phe Ser Thr Pro Arg Leu Thr Leu Ser Ser Ser Ile Gly Asn Gly

145 150 155 160

Leu Ser Tyr Val Ser Lys Phe Leu Thr Ser Lys Leu Asn Ala Thr Ser

165 170 175

Ala Ser Ala Gln Cys Leu Val Asp Tyr Leu Leu Thr Leu Asn His Gln

180 185 190

Gly Asp Lys Leu Met Ile Asn Glu Thr Leu Ser Thr Val Ser Lys Leu

195 200 205

Gln Ala Ala Leu Val Val Ala Glu Ala Ser Ile Ser Ser Leu Pro Thr

210 215 220

Asp Thr Pro Tyr Glu Ser Phe Glu Leu Arg Phe Lys Gln Trp Gly Phe

225 230 235 240

Glu Lys Gly Trp Gly Asp Thr Ala Glu Arg Val Ser Asp Thr Met Arg

245 250 255

Thr Leu Ser Glu Val Leu Gln Ala Pro Asp Pro Leu Asn Ile Gln Lys

260 265 270

Phe Phe Gly Arg Val Pro Thr Val Phe Asn Ile Val Leu Phe Ser Val

275 280 285

His Gly Tyr Phe Gly Gln Ala Asp Val Leu Gly Leu Pro Asp Thr Gly

290 295 300

Gly Gln Val Val Tyr Val Leu Asp Gln Val Val Ala Phe Glu Glu Glu

305 310 315 320

Met Leu Gln Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Ile Lys Pro Gln Ile

325 330 335

Leu Val Leu Thr Arg Leu Ile Pro Asp Ala Lys Gly Thr Lys Cys Asn

340 345 350

Gln Glu Leu Glu Pro Ile Lys Asn Thr Lys His Ser His Ile Leu Arg

355 360 365

Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Val Leu Asn Gln Trp Val Ser Arg

370 375 380

Phe Asp Ile Tyr Pro Tyr Leu Glu Arg Tyr Thr Gln Asp Ala Ala Asp

385 390 395 400

Lys Ile Val Glu Leu Met Glu Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn

405 410 415

Tyr Thr Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Met Ala Arg Lys Leu Gly

420 425 430

Ile Thr Leu Gly Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Glu

435 440 445

Asp Ser Asp Ile Lys Leu Lys Glu Leu Asp Pro Lys Tyr His Phe Ser

450 455 460

Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn Ser Ala Asp Phe Ile

465 470 475 480

Ile Thr Ser Thr Tyr Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp Lys Pro Gly

485 490 495

Gln Tyr Glu Ser His Ser Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val

500 505 510

Ala Ser Gly Ile Asn Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Ala Ala Pro

515 520 525

Gly Ala Asp Gln Ser Val Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Lys Gln Lys Arg

530 535 540

Leu Thr Ala Phe Arg Pro Ala Ile Glu Glu Leu Leu Phe Ser Lys Val

545 550 555 560

Asp Asn Asp Glu His Val Gly Tyr Leu Glu Asp Arg Lys Lys Pro Ile

565 570 575

Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Thr Val Lys Asn Thr Ser Gly Leu

580 585 590

Thr Glu Trp Tyr Gly Lys Asn Lys Arg Leu Arg Ser Leu Val Asn Leu

595 600 605

Val Val Val Gly Gly Ser Phe Asp Pro Thr Lys Ser Lys Asp Arg Glu

610 615 620

Glu Ala Ala Glu Ile Lys Lys Met His Met Leu Ile Glu Lys Tyr Gln

625 630 635 640

Leu Lys Gly Gln Ile Arg Trp Ile Ala Ala Gln Thr Asp Arg Tyr Arg

645 650 655

Asn Ser Glu Leu Tyr Arg Thr Ile Ala Asp Ser Lys Gly Ala Phe Val

660 665 670

Gln Pro Ala Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Ile Glu Ala Met

675 680 685

Asn Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Asn Gln Gly Gly Pro Ala Glu

690 695 700

Ile Ile Val Asp Gly Val Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Asn Asn Gly

705 710 715 720

Asp Glu Ser Ser Asn Lys Ile Ala Asn Phe Phe Gln Lys Cys Arg Glu

725 730 735

Asp Pro Glu Tyr Trp Asn Arg Ile Ser Val Gln Gly Leu Asn Arg Ile

740 745 750

Tyr Glu Cys Tyr Thr Trp Lys Ile Tyr Ala Asn Lys Val Leu Asn Met

755 760 765

Gly Ser Ile Tyr Thr Phe Trp Arg Thr Leu Tyr Arg Asp Gln Lys Gln

770 775 780

Ala Lys Gln Arg Tyr Ile Glu Thr Phe Tyr Asn Leu Glu Phe Arg Asn

785 790 795 800

Leu Val Lys Asn Val Pro Ile Arg Lys Asp Glu Thr Pro Gln Gly Pro

805 810 815

Lys Glu Arg Glu Lys Val Lys Pro Gln Ile Ser Gln Arg His Ala Leu

820 825 830

Lys Leu Leu Pro Thr Val Phe Gln Glu Thr Leu Ala Leu Thr Ile Lys

835 840 845

Val Ala Glu Val Arg Leu Asp Lys Ile Ala Thr Ala

850 855 860

<210> 32

<211> 3905

<212> ДНК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 32

atggctactg caccagccct gaaaagatca gagtccatag ctgatagcat gccagaggcc 60

ttaaggcaaa gccggtacca catgaagaaa tgttttgcca agtacataga gcaaggcaag 120

aggatgatga aacttcataa cttgatggat gaattggaga aagtaattga tgatcctgct 180

gaaaggaacc atgttttgga aggcttactt ggctacatat tatgtactac aatggtatag 240

ctagattcat atgtacttat gatgtcctta tattgtttcc ggaggcatta ttcttaaatc 300

cttctttgat caaatttgta ggaggctgca gttgttcctc cctatattgc cttcgccacg 360

agacagaatc ctggattctg ggaatatgtg aaagtcaatg ctaatgatct ttctgttgag 420

ggtattacag ctacagatta cttgaaattc aaggaaatga tagttgatga aagctggtat 480

agaatacttt gcagcttatc ataccttttg tggttttata atttcaatca gaaaactcat 540

cagagttacc tttgtgtgaa catgacatgc agggcaaaag atgaatatgc actggaaatt 600

gattttggag cagtagactt ctcaacgcct cgactgaccc tatcctcttc aattggaaat 660

ggtctcagtt atgtttccaa gtttctaact tcaaagctaa atgctacctc agcgagtgca 720

cagtgtctgg ttgactactt gctcactttg aatcaccaag gagatgtacg tcaacaaaaa 780

tcaaactcca taagtaaact tgtcaactct aagaagtaaa aataggaaaa gaagattcat 840

gtaacaaatt ttctttatgt tcaactgtag aaactgatga tcaatgagac actcggcact 900

gtctcaaagc ttcaggctgc actggttgta gcagaagcat ctatttcctc cttaccaaca 960

gatacaccat accagagctt tgagctaagg tgatttgttt tttcctctac ttccttccac 1020

ttttggtgtg ctacatagta ctaagtaact tcaattcttg taaagattca aacagtgggg 1080

ttttgagaaa ggatggggtg atacagctga aagggtccgc gacaccatga gaacactttc 1140

tgaggtactt caggcgccag atccattgaa cattgagaag ttctttggga gggttccaac 1200

tgttttcaat attgtattgt tctctgttca tggatacttt ggccaagcaa atgttcttgg 1260

cttgccagac acaggtggtc aggtaagcat ctaatagctt ttacatttaa cttctatgca 1320

ttgacaataa aataacttct acactaccaa ataatttttg aaagtttgac cacttcggct 1380

cttgttcaac aggtggttta tgttttggat caagttgtag cttttgaaga agaaatgctc 1440

caaagaatta aacagcaggg gctcaatatt aagcctcaaa ttcttgtggt gagctcctag 1500

acaatgacgt gactatgcaa ttaagtagag gctgtttaga aaagttaata tcatatgttg 1560

attgcacagt taacccgact gattccggac gccaaaggaa caaagtgcaa ccaggaacta 1620

gaaccaatca agaatacaaa acattcacac atcctcagag ttccatttag gacagaaaaa 1680

ggagtgctta atcaatgggt ttcacgattt gatatctatc catatctgga gagatatact 1740

caggtgtgta tttttatatc aaccctgctc atcaaagatg tgttgtttcc tcaattccat 1800

ttttcgcctt gacaaaagga cgctgctgac aaaatcatcg agctaatgga aggcaaacct 1860

gatctaatca ttggtaacta cactgatggg aatctagtgg cttctctaat ggctagaaag 1920

cttgggataa ctctggtaac ttttcttatc atatttgatg ttgtttcttc tccaagttgg 1980

ttcttaatgt caactaaccc agaccatctt tgtaacaggg aactattgct catgctctgg 2040

agaagacaaa atatgaagac tctgacatca aattgaagga actcgatccg aagtaccact 2100

tttcttgcca attcacagct gatttgattg caatgaattc agcagatttc attatcacaa 2160

gcacatatca agaaatagcc ggaaggtaag aattggaact acggaagcag agagctaata 2220

agtagtgcac tcatatattt cagcatcgct ctttcgcata atcgaataca caccactact 2280

cagtaaatgt acttgctcaa aagtttacaa gtttatggat cttattcttg aatgcttcaa 2340

catatgcagc aaagataggc caggacagta tgagagccat agtgcattta cccttccagg 2400

gctttacaga gttgcttcag gcatcaatgt ctttgatcct aaatttaata ttgctgcacc 2460

tggggcagac caatcggtgt atttccctta cacagaaaag cagacgcgtt tgactgcttt 2520

ccgccctgcc attgaggaac tgctttttag taaagtggac aatgacgagc acatgtaagt 2580

cttagtgtta aacttcagct ttcagcttag tgcctagaac attccactgg ctctatgtat 2640

taatgtttca cttgtttcaa acacagtgga tatttagaag acagaaagaa acctatcctg 2700

tttaccatgg caaggctgga cacagtgaag aacacatctg gactaacaga atggtatggc 2760

aagaacaaga ggctcagaag cttagttaac cttgttgtgg ttggtggttc ctttgatcct 2820

acaaaatcca aggatagaga agaagcagct gaaataaaaa agatgcacat gctgatagag 2880

aaataccagc ttaagggtca gatcagatgg atagcagctc agactgacag atatagaaac 2940

agtgaactct accgcacaat agcagattcc aaaggagctt ttgtgcagcc tgcattatat 3000

gaagcatttg gtctaacagt cattgaggca atgaactgtg gattaccaac ctttgctacc 3060

aaccaaggtg gccctgctga gattattgtt gatggggtct caggctttca tattgatcca 3120

aataatgggg atgaatcaag caacaaagtt gccaactttt tccaaaaatg cagggaggat 3180

cctgagtatt ggaacaggat ttcagtccag ggtctaaacc gtatatatga atggtaactc 3240

acagataagc cattcaaatt gcaaagaggc acatatcttg ctgaaaattt cttaatcctt 3300

taatcctaaa attttgcagt tacacatgga agatctatgc aaacaaggta ttgaatatgg 3360

ggtccatcta tactttttgg aggacattgt acagagatca gaaacaagca aagcaaagat 3420

acatcgagac tttctacaat cttgagttta ggaacttggt atagtgctgc atgacattga 3480

cagtatacca caaacatctt tatgagatga attactttta ataaaattgt ttttaacctt 3540

tgcctcctta atgacactta ttgcaggtaa aaaatgtgcc tatcagacag gacgaaacac 3600

cacaaggacc aaaggagagg agggagaaag ttaagccaca gatatcacaa aggcatgctc 3660

taaagctttt gcctatagtt tttcaggaga ccctagtata ttctagtact aaattagaat 3720

tatacagcat gcagcttgct tctgctgttc acctttctaa atcaccagtt atgtcaatca 3780

agttgacaaa atcaataaat tcggcttttc cctttcctat gcttgattgt tattactcct 3840

acttcgttta tggtagtctt ccttcattgt tttctcctgt acttctttta ctacaactgt 3900

actga 3905

<210> 33

<211> 913

<212> БЕЛОК

<213> Nicotiana tabacum

<400> 33

Met Ala Thr Ala Pro Ala Leu Lys Arg Ser Glu Ser Ile Ala Asp Ser

1 5 10 15

Met Pro Glu Ala Leu Arg Gln Ser Arg Tyr His Met Lys Lys Cys Phe

20 25 30

Ala Lys Tyr Ile Glu Gln Gly Lys Arg Met Met Lys Leu His Asn Leu

35 40 45

Met Asp Glu Leu Glu Lys Val Ile Asp Asp Pro Ala Glu Arg Asn His

50 55 60

Val Leu Glu Gly Leu Leu Gly Tyr Ile Leu Cys Thr Thr Met Glu Ala

65 70 75 80

Ala Val Val Pro Pro Tyr Ile Ala Phe Ala Thr Arg Gln Asn Pro Gly

85 90 95

Phe Trp Glu Tyr Val Lys Val Asn Ala Asn Asp Leu Ser Val Glu Gly

100 105 110

Ile Thr Ala Thr Asp Tyr Leu Lys Phe Lys Glu Met Ile Val Asp Glu

115 120 125

Ser Trp Ala Lys Asp Glu Tyr Ala Leu Glu Ile Asp Phe Gly Ala Val

130 135 140

Asp Phe Ser Thr Pro Arg Leu Thr Leu Ser Ser Ser Ile Gly Asn Gly

145 150 155 160

Leu Ser Tyr Val Ser Lys Phe Leu Thr Ser Lys Leu Asn Ala Thr Ser

165 170 175

Ala Ser Ala Gln Cys Leu Val Asp Tyr Leu Leu Thr Leu Asn His Gln

180 185 190

Gly Asp Lys Leu Met Ile Asn Glu Thr Leu Gly Thr Val Ser Lys Leu

195 200 205

Gln Ala Ala Leu Val Val Ala Glu Ala Ser Ile Ser Ser Leu Pro Thr

210 215 220

Asp Thr Pro Tyr Gln Ser Phe Glu Leu Arg Phe Lys Gln Trp Gly Phe

225 230 235 240

Glu Lys Gly Trp Gly Asp Thr Ala Glu Arg Val Arg Asp Thr Met Arg

245 250 255

Thr Leu Ser Glu Val Leu Gln Ala Pro Asp Pro Leu Asn Ile Glu Lys

260 265 270

Phe Phe Gly Arg Val Pro Thr Val Phe Asn Ile Val Leu Phe Ser Val

275 280 285

His Gly Tyr Phe Gly Gln Ala Asn Val Leu Gly Leu Pro Asp Thr Gly

290 295 300

Gly Gln Val Val Tyr Val Leu Asp Gln Val Val Ala Phe Glu Glu Glu

305 310 315 320

Met Leu Gln Arg Ile Lys Gln Gln Gly Leu Asn Ile Lys Pro Gln Ile

325 330 335

Leu Val Leu Thr Arg Leu Ile Pro Asp Ala Lys Gly Thr Lys Cys Asn

340 345 350

Gln Glu Leu Glu Pro Ile Lys Asn Thr Lys His Ser His Ile Leu Arg

355 360 365

Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Val Leu Asn Gln Trp Val Ser Arg

370 375 380

Phe Asp Ile Tyr Pro Tyr Leu Glu Arg Tyr Thr Gln Asp Ala Ala Asp

385 390 395 400

Lys Ile Ile Glu Leu Met Glu Gly Lys Pro Asp Leu Ile Ile Gly Asn

405 410 415

Tyr Thr Asp Gly Asn Leu Val Ala Ser Leu Met Ala Arg Lys Leu Gly

420 425 430

Ile Thr Leu Gly Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Glu

435 440 445

Asp Ser Asp Ile Lys Leu Lys Glu Leu Asp Pro Lys Tyr His Phe Ser

450 455 460

Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn Ser Ala Asp Phe Ile

465 470 475 480

Ile Thr Ser Thr Tyr Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp Arg Pro Gly

485 490 495

Gln Tyr Glu Ser His Ser Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val

500 505 510

Ala Ser Gly Ile Asn Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Ala Ala Pro

515 520 525

Gly Ala Asp Gln Ser Val Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Lys Gln Thr Arg

530 535 540

Leu Thr Ala Phe Arg Pro Ala Ile Glu Glu Leu Leu Phe Ser Lys Val

545 550 555 560

Asp Asn Asp Glu His Ile Gly Tyr Leu Glu Asp Arg Lys Lys Pro Ile

565 570 575

Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Thr Val Lys Asn Thr Ser Gly Leu

580 585 590

Thr Glu Trp Tyr Gly Lys Asn Lys Arg Leu Arg Ser Leu Val Asn Leu

595 600 605

Val Val Val Gly Gly Ser Phe Asp Pro Thr Lys Ser Lys Asp Arg Glu

610 615 620

Glu Ala Ala Glu Ile Lys Lys Met His Met Leu Ile Glu Lys Tyr Gln

625 630 635 640

Leu Lys Gly Gln Ile Arg Trp Ile Ala Ala Gln Thr Asp Arg Tyr Arg

645 650 655

Asn Ser Glu Leu Tyr Arg Thr Ile Ala Asp Ser Lys Gly Ala Phe Val

660 665 670

Gln Pro Ala Leu Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Ile Glu Ala Met

675 680 685

Asn Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Asn Gln Gly Gly Pro Ala Glu

690 695 700

Ile Ile Val Asp Gly Val Ser Gly Phe His Ile Asp Pro Asn Asn Gly

705 710 715 720

Asp Glu Ser Ser Asn Lys Val Ala Asn Phe Phe Gln Lys Cys Arg Glu

725 730 735

Asp Pro Glu Tyr Trp Asn Arg Ile Ser Val Gln Gly Leu Asn Arg Ile

740 745 750

Tyr Glu Cys Tyr Thr Trp Lys Ile Tyr Ala Asn Lys Val Leu Asn Met

755 760 765

Gly Ser Ile Tyr Thr Phe Trp Arg Thr Leu Tyr Arg Asp Gln Lys Gln

770 775 780

Ala Lys Gln Arg Tyr Ile Glu Thr Phe Tyr Asn Leu Glu Phe Arg Asn

785 790 795 800

Leu Val Lys Asn Val Pro Ile Arg Gln Asp Glu Thr Pro Gln Gly Pro

805 810 815

Lys Glu Arg Arg Glu Lys Val Lys Pro Gln Ile Ser Gln Arg His Ala

820 825 830

Leu Lys Leu Leu Pro Ile Val Phe Gln Glu Thr Leu Val Tyr Ser Ser

835 840 845

Thr Lys Leu Glu Leu Tyr Ser Met Gln Leu Ala Ser Ala Val His Leu

850 855 860

Ser Lys Ser Pro Val Met Ser Ile Lys Leu Thr Lys Ser Ile Asn Ser

865 870 875 880

Ala Phe Pro Phe Pro Met Leu Asp Cys Tyr Tyr Ser Tyr Phe Val Tyr

885 890 895

Gly Ser Leu Pro Ser Leu Phe Ser Pro Val Leu Leu Leu Leu Gln Leu

900 905 910

Tyr

<---

Claims (40)

1. Клетка растения табака, способная экспрессировать ген INV, содержащая:

(i) полинуклеотид, содержащий, состоящий или состоящий по существу из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 81% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 5 (NtINV4-S) или по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 7 (NtINV4-T);

(ii) полипептид, кодируемый полинуклеотидом, указанным в (i);

(iii) полипептид, содержащий, состоящий или состоящий по существу из последовательности, характеризующейся по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 6 (NtINV4-S) или по меньшей мере 85% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 8 (NtINV4-T); или

(iv) конструкцию, вектор или вектор экспрессии, содержащие выделенный полинуклеотид, указанный в (i),

при этом клетка растения табака содержит по меньшей мере одну модификацию, которая обеспечивает понижение (a) экспрессии или активности полинуклеотида или (b) экспрессии или активности полипептида, кодирующего полипептид, по сравнению с клеткой контрольного растения табака, в которой экспрессия или активность полинуклеотида или полипептида не были модифицированы,

причем пониженная экспрессия или пониженная активность обеспечивают понижение уровня одного или более редуцирующих сахаров в подвергнутом сушке листе растения, содержащего клетку растения табака, по сравнению с уровнем одного или более редуцирующих сахаров в подвергнутом сушке листе контрольного растения, содержащего клетку контрольного растения табака, при этом предпочтительно редуцирующий сахар представляет собой глюкозу или фруктозу, или их комбинацию.

2. Клетка растения табака по п. 1, в которой подвергнутый сушке лист, полученный из средней части растения, характеризуется сниженными уровнями глюкозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 63%, по сравнению с контрольным подвергнутым сушке листом, полученным из средней части растения; или

подвергнутый сушке лист, полученный из средней части растения, характеризуется сниженными уровнями фруктозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 43%, соответственно по сравнению с контрольным подвергнутым сушке листом, полученным из средней части растения; или

подвергнутый сушке лист, полученный из средней части растения, характеризуется сниженными уровнями глюкозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 63%, и сниженными уровнями фруктозы, составляющими по меньшей мере приблизительно 43%, соответственно по сравнению с контрольным подвергнутым сушке листом, полученным из средней части растения.

3. Клетка растения табака по п. 1 или 2, в которой по меньшей мере одна модификация представляет собой генетическую мутацию в полинуклеотиде и растение представляет собой Nicotiana tabacum.

4. Клетка растения табака по любому из предыдущих пунктов, дополнительно содержащая по меньшей мере одну модификацию в полинуклеотиде NtSUS или полипептиде, кодируемом им,

при этом предпочтительно полинуклеотид NtSUS или полипептид, кодируемый им, выбраны из группы, состоящей из NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S, NtSUS4-T или комбинации двух или более из них,

при этом более предпочтительно полинуклеотид NtSUS или полипептид, кодируемый им, выбраны из группы, состоящей из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S или комбинации двух или более из них.

5. Клетка растения табака по п. 4, содержащая по меньшей мере одну мутацию в полинуклеотиде(ах) NtINV4, указанном(ых) в (i) п. 1, или полипептиде(ах) NtINV4, указанном(ых) в (ii) п. 1 или в (iii) п. 1, и по меньшей мере одну мутацию в полинуклеотиде(ах) NtSUS или полипептиде(ах), кодируемом(ых) им(и).

6. Растение табака, имеющее пониженное содержание редуцирующих сахаров, образующихся во время сушки, причем растение содержит клетку растения табака по любому из пп. 1-5.

7. Часть растения табака, имеющего пониженное содержание редуцирующих сахаров, образующихся во время сушки, причем часть растения содержит клетку растения табака по любому из пп. 1-5.

8. Табачный растительный материал, подвергнутый сушке табачный растительный материал или гомогенизированный табачный растительный материал, имеющие пониженное содержание редуцирующих сахаров, образующихся во время сушки и содержащие клетку растения табака по любому из пп. 1-5.

9. Табачный растительный материал, подвергнутый сушке табачный растительный материал или гомогенизированный табачный растительный материал по п. 8, при этом табачный растительный материал выбран из группы, состоящей из биомассы, семени, стебля, цветков или листьев или комбинации двух или более из них; или

подвергнутый сушке растительный материал выбран из группы, состоящей из растительного материала трубоогневой сушки, растительного материала солнечной сушки или растительного материала воздушной сушки или комбинации двух или более из них.

10. Табачный продукт, имеющий пониженное содержание редуцирующих сахаров, образующихся во время сушки, и содержащий клетку растения табака по любому из пп. 1-5, часть растения по п. 7, содержащую клетку растения табака по любому из пп. 1-5, или табачный растительный материал по п. 8, содержащий клетку растения табака по любому из пп. 1-5.

11. Способ получения растения табака по п. 6, включающий стадии:

(a) получения клетки растения табака, предусматривающей по меньшей мере одну модификацию, по любому из пп. 1-5; и

(b) размножения клетки растения табака с получением растения табака.

12. Способ по п. 11, в котором на стадии (а) по меньшей мере одну модификацию вводят путем редактирования генома.

13. Способ по п. 11, в котором методы редактирования генома выбраны из CRISPR-опосредованного редактирования генома, мутагенеза, опосредованного нуклеазой с «цинковыми пальцами», химического или радиационного мутагенеза, гомологичной рекомбинации, олигонуклеотид-направленного мутагенеза и мутагенеза, опосредованного мегануклеазой.

14. Способ по п. 11 или 12, в котором на стадии (а) по меньшей мере одну модификацию вводят с применением полинуклеотида для обеспечения интерференции или путем введения по меньшей мере одной мутации или их комбинации.

15. Способ получения подвергнутого сушке растительного материала с пониженным количеством редуцирующих сахаров по сравнению с контрольным растительным материалом, включающий стадии:

(a) получения растения или его части по п. 6 или 7 или растительного материала по п. 8 или 9;

(b) сбора из них растительного материала и

(c) сушки растительного материала.

16. Способ получения жидкого табачного экстракта, включающий стадии:

(a) получения первого исходного табачного материала из растения или его части, содержащих клетку растения табака по любому из пп. 1-3;

(b) получения второго исходного табачного материала из растения или его части, содержащих клетку растения табака, предусматривающую по меньшей мере одну модификацию в полинуклеотиде NtSUS или полипептиде, кодируемом им,

(c) нагревания первого исходного табачного материала при первой температуре экстракции;

(d) нагревания второго исходного табачного материала при второй температуре экстракции;

(e) сбора летучих соединений, высвободившихся из первых исходных табачных материалов и вторых исходных табачных материалов в ходе нагревания; и

(f) объединения собранных летучих соединений, высвободившихся из первого и второго исходных табачных материалов, и образования жидкого табачного экстракта из объединенных летучих соединений.

17. Способ по п. 16, в котором полинуклеотид NtSUS или полипептид, кодируемый им, на стадии (b) выбраны из группы, состоящей из NtSUS2-T, NtSUS3-S, NtSUS3-T, NtSUS4-S, NtSUS4-T или комбинации двух или более из них.

18. Способ по п. 16, в котором полинуклеотид NtSUS или полипептид, кодируемый им, на стадии (b) выбраны из группы, состоящей из NtSUS2-S, NtSUS3-S, NtSUS3-T и NtSUS4-S или комбинации двух или более из них.

Images