RU2842809C2

RU2842809C2 - Hepatoprotective composition containing mixture of enzymatic and acid hydrolysates of porcine placenta

Info

Publication number: RU2842809C2
Application number: RU2023131970A
Authority: RU
Inventors: Кын Нам КИМ; Гыйн Вон ПЭ; Джее Сун ХВАНЬ; Сун Мюнь ЮН
Original assignee: Юбио Инк.
Filing date: 2021-06-30
Publication date: 2025-07-02

Abstract

FIELD: biotechnology.

SUBSTANCE: invention relates to biotechnology and is a composition for reducing liver damage, comprising, as an active ingredient, a mixture of an enzymatic hydrolyzate of porcine placenta and an acid hydrolyzate of porcine placenta, wherein enzymatic hydrolyzate of porcine placenta and acid hydrolyzate of porcine placenta are mixed in weight ratio from 1:0.1 to 1:10. Invention also relates to a composition for reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the composition also contains as an active ingredient a mixture of an enzymatic hydrolyzate of porcine placenta and an acid hydrolyzate of porcine placenta, wherein enzymatic hydrolyzate of porcine placenta and acid hydrolyzate of porcine placenta are mixed in weight ratio from 1:0.1 to 1:10.

EFFECT: invention provides high hepatoprotective effect and can be effectively used in pharmaceutical industry.

6 cl, 10 dwg, 9 tbl, 2 ex

Description

Область техники, к которой относится настоящее изобретениеField of technology to which the present invention relates

[1] Настоящее изобретение относится к гепатопротекторной композиции, содержащей смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[1] The present invention relates to a hepatoprotective composition comprising a mixture of an enzymatic hydrolysate of porcine placenta and an acid hydrolysate of porcine placenta.

[2] Предшествующий уровень техники настоящего изобретения[2] Prior Art of the Present Invention

[3] Среди органов человеческого организма печень представляет собой орган, в котором наиболее активно происходит обмен веществ in vivo, а острые или хронические нарушения могут возникать по различным причинам, таким как чрезмерное потребление включающей жирные ингредиенты пищи или алкоголя, вирусная инфекция, вредные вещества, такие как различные лекарства, и дефицит питательных веществ, которые приводят к жировой инфильтрации печени, гепатиту, желтухе, циррозу, раку печени и т.д. В частности, чрезмерное потребление жиров с пищей или чрезмерное употребление алкоголя вызывает жировую инфильтрацию печени, при которой в ткани печени накапливаются липиды, и в этом случае в сыворотке крови увеличивается содержание аспартаттрансаминазы (AST), аланинтрансаминазы (ALT), лактатдегидрогеназы (LDH) и т.п.[3] Among the organs of the human body, the liver is the organ with the most active metabolism in vivo, and acute or chronic disorders can occur due to various reasons such as excessive consumption of food containing fatty ingredients or alcohol, viral infection, harmful substances such as various drugs, and nutritional deficiency, which lead to fatty liver, hepatitis, jaundice, cirrhosis, liver cancer, etc. In particular, excessive intake of fat in food or excessive alcohol consumption causes fatty liver, in which lipids accumulate in the liver tissue, and in this case, the content of aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), lactate dehydrogenase (LDH), etc. increases in the blood serum.

[4] Между тем, плацента состоит из кровеносной хориальной мембраны и снабжает плод необходимым кислородом и питательными веществами, сохраняя при этом контакт между плодом и материнскими тканями. Кроме того, плацента играет важную роль в удалении продуктов жизнедеятельности плода. Плацента содержит различные питательные вещества и гормоны, необходимые для роста плода, а свиная плацента широко используется взрослыми людьми, особенно для облегчения симптомов менопаузы и в косметических целях. Плацента содержит незаменимые аминокислоты, мелатонин, компоненты нуклеиновых кислот, таких как РНК и ДНК, а также SOD (супероксиддисмутазу), которая является антиоксидантным ферментом, факторы роста и цитокины, гиалуроновую кислоту, антиоксиданты, цитокины, плацентарные пептиды, инсулиноподобные факторы роста, эпидермальные факторы роста (EGF) и факторы активации стареющих клеток (SCAF); таким образом, известно, что она полезна для восстановления после усталости и для повышения иммунитета. Кроме того, среди плацент млекопитающих белковая структура свиной плаценты имеет самую высокую гомологию с плацентой человека, а также о свиной плаценте сообщалось, как об источнике биоактивных цитокинов, которые контролируют дифференцировку клеток и развитие плода, как о важном источнике белков, различных питательных веществ, ДНК и РНК. Благодаря этим характеристикам свиная плацента применяется в пище и в медицине. Однако исследования состава плаценты, который может эффективно предотвращать или уменьшать повреждение печени, вызванное алкоголем, наркотической зависимостью и похмельем, все еще недостаточны.[4] Meanwhile, the placenta is made up of blood-bearing chorionic membrane and supplies the fetus with essential oxygen and nutrients while maintaining contact between the fetus and maternal tissues. In addition, the placenta plays an important role in removing fetal waste products. The placenta contains various nutrients and hormones necessary for fetal growth, and pig placenta is widely used by adults, especially to relieve menopausal symptoms and for cosmetic purposes. The placenta contains essential amino acids, melatonin, nucleic acid components such as RNA and DNA, and SOD (superoxide dismutase), which is an antioxidant enzyme, growth factors and cytokines, hyaluronic acid, antioxidants, cytokines, placental peptides, insulin-like growth factors, epidermal growth factors (EGF) and senescent cell activating factors (SCAF); thus, it is known to be useful for recovery from fatigue and to improve immunity. In addition, among mammalian placentas, the protein structure of pig placenta has the highest homology with human placenta, and pig placenta has been reported as a source of bioactive cytokines that control cell differentiation and fetal development, as an important source of proteins, various nutrients, DNA and RNA. Due to these characteristics, pig placenta has been used in food and medicine. However, research on the composition of placenta that can effectively prevent or reduce liver damage caused by alcohol, drug addiction and hangover is still insufficient.

[5] Краткое раскрытие настоящего изобретения[5] Summary of the Present Invention

Техническая задачаTechnical task

[6] Целью настоящего изобретения является создание функциональной оздоровительной пищевой гепатопротекторной композиции, содержащей в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[6] The aim of the present invention is to create a functional health food hepatoprotective composition containing as an active ingredient a mixture of enzymatic hydrolysate of pork placenta and acid hydrolysate of pork placenta.

[7] Другой целью настоящего изобретения является создание функциональной оздоровительной пищевой композиции для предотвращения или уменьшения повреждения печени, вызванного алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем, при этом композиция содержит в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[7] Another object of the present invention is to provide a functional health food composition for preventing or reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the composition contains as an active ingredient a mixture of enzymatic hydrolysate of pork placenta and acid hydrolysate of pork placenta.

[8] Еще одной целью настоящего изобретения является создание фармацевтической гепатопротекторной композиции, содержащей в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[8] Another aim of the present invention is to create a pharmaceutical hepatoprotective composition containing, as an active ingredient, a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta.

[9] Следующей целью настоящего изобретения является создание фармацевтической композиции для предотвращения или лечения поражения печени, вызванного алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем, при этом фармацевтическая композиция содержит в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[9] A further object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the pharmaceutical composition contains as an active ingredient a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta.

[10] Техническое решение[10] Technical solution

[11] Для достижения вышеуказанных целей настоящее изобретение предлагает функциональную оздоровительную пищевую гепатопротекторную композицию, содержащую в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[11] To achieve the above objectives, the present invention provides a functional health food hepatoprotective composition containing, as an active ingredient, a mixture of enzymatic hydrolysate of pork placenta and acid hydrolysate of pork placenta.

[12] Кроме того, настоящее изобретение относится к функциональной оздоровительной пищевой композиции для предотвращения или уменьшения повреждения печени, вызванного алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем, при этом композиция содержит в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[12] Furthermore, the present invention relates to a functional health food composition for preventing or reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the composition contains as an active ingredient a mixture of an enzymatic hydrolysate of pork placenta and an acid hydrolysate of pork placenta.

[13] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментативный гидролизат свиной плаценты может содержать один или несколько пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-3.[13] In one embodiment of the present invention, the enzymatic hydrolysate of porcine placenta may comprise one or more peptides having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1-3.

[14] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты могут быть смешаны в массовом соотношении 1:0,1-10, и, предпочтительно, в массовом соотношении 1:0,5-5; 1:0,6-5; 1:0,7-5; 1:0,8-5; 1:0,9-5; 1:1-5; 1:1-4; 1:1-3; 1:1, 1:2, 1:3, 1:4 или 1:5, но настоящее изобретение не ограничивается этим.[14] In one embodiment of the present invention, the enzymatic hydrolysate of pork placenta and the acid hydrolysate of pork placenta may be mixed in a weight ratio of 1:0.1-10, and preferably in a weight ratio of 1:0.5-5; 1:0.6-5; 1:0.7-5; 1:0.8-5; 1:0.9-5; 1:1-5; 1:1-4; 1:1-3; 1:1, 1:2, 1:3, 1:4 or 1:5, but the present invention is not limited thereto.

[15] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментативный гидролизат свиной плаценты может быть получен путем обработки протеиназой, при этом протеиназа может быть выбрана из группы, состоящей из папаина, протеазы, бромелаина и алкалазы, но настоящее изобретение не ограничивается этим.[15] In one embodiment of the present invention, the enzymatic hydrolysate of porcine placenta can be obtained by treatment with a proteinase, wherein the proteinase can be selected from the group consisting of papain, protease, bromelain and alcalase, but the present invention is not limited thereto.

[16] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения кислотный гидролизат свиной плаценты может быть получен посредством обработки кислотой, а указанная кислота может представлять собой соляную кислоту, серную кислоту, уксусную кислоту или лимонную кислоту, но настоящее изобретение не ограничивается ими.[16] In one embodiment of the present invention, the acid hydrolysate of pork placenta can be obtained by treatment with an acid, and said acid can be hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid or citric acid, but the present invention is not limited thereto.

[17] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения ферментативный гидролизат свиной плаценты может содержать пептиды в концентрации от 0,1 до 100 млн^-1 и, предпочтительно, от 1 до 25 млн^-1.[17] In one embodiment of the present invention, the enzymatic hydrolysate of porcine placenta may contain peptides in a concentration of from 0.1 to 100 ^ppm and, preferably, from 1 to 25 ^ppm .

[18] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты может составлять от 1 до 20 мас. % по отношению к общей массе функциональной оздоровительной пищевой композиции. При этом концентрация пептидов может составлять от 0,001 млн^-1 до 20 млн^-1 по отношению ко всей композиции.[18] In one embodiment of the present invention, the mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta may comprise from 1 to 20 wt. % relative to the total weight of the functional health food composition. In this case, the concentration of peptides may comprise from 0.001 ^ppm to 20 ^ppm relative to the entire composition.

[19] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения композиция может снижать уровень щелочной фосфатазы (ALP), уровень аспартаттрансаминазы (AST) или уровень аланинтрансаминазы (ALT) в сыворотке крови.[19] In one embodiment of the present invention, the composition may reduce the alkaline phosphatase (ALP) level, the aspartate transaminase (AST) level, or the alanine transaminase (ALT) level in the blood serum.

[20] Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической гепатопротекторной композиции, содержащей в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[20] Furthermore, the present invention relates to a pharmaceutical hepatoprotective composition containing, as an active ingredient, a mixture of an enzymatic hydrolysate of porcine placenta and an acidic hydrolysate of porcine placenta.

[21] Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для профилактики и лечения повреждений печени, вызванных алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем, при этом фармацевтическая композиция содержит в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[21] Furthermore, the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the pharmaceutical composition contains as an active ingredient a mixture of an enzymatic hydrolysate of porcine placenta and an acidic hydrolysate of porcine placenta.

[22] В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты может составлять от 5 до 30 мас. % по отношению к общей массе фармацевтической композиции. Кроме того, концентрация пептидов может составлять от 0,005 млн^-1 до 30 млн^-1 по отношению ко всей композиции.[22] In one embodiment of the present invention, the mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta may comprise from 5 to 30 wt. % relative to the total weight of the pharmaceutical composition. In addition, the concentration of peptides may comprise from 0.005 ^ppm to 30 ^ppm relative to the entire composition.

[23] Преимущества изобретения[23] Advantages of the invention

[24] Композиция по настоящему изобретению превосходно влияет на защиту печени и, в частности, превосходно влияет на предотвращение, уменьшение или лечение повреждений печени, вызванных алкоголем, и, таким образом, может эффективно использоваться в фармацевтической области и в пищевой промышленности.[24] The composition of the present invention has an excellent effect on protecting the liver, and in particular, has an excellent effect on preventing, reducing or treating liver damage caused by alcohol, and thus can be effectively used in the pharmaceutical field and the food industry.

[25] Краткое описание фигур[25] Brief description of figures

[26] на ФИГ. 1 показаны результаты ВЭЖХ ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[26] FIG. 1 shows the HPLC results of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta.

[27] на ФИГ. 2 показана LC/MS хроматограмма ферментативного гидролизата свиной плаценты.[27] FIG. 2 shows the LC/MS chromatogram of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta.

[28] на ФИГ. 3 показана хроматограмма ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (VVVE).[28] FIG. 3 shows the chromatogram of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and peptide (VVVE).

[29] на ФИГ. 4 показаны результаты MS/MS анализа ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (VVVE).[29] FIG. 4 shows the results of MS/MS analysis of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and peptide (VVVE).

[30] на ФИГ. 5 показана хроматограмма ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DGLHLR).[30] FIG. 5 shows the chromatogram of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and peptide (DGLHLR).

[31] на ФИГ. 6 показаны результаты MS/MS анализа ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DGLHLR).[31] FIG. 6 shows the results of MS/MS analysis of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and peptide (DGLHLR).

[32] на ФИГ. 7 показана хроматограмма ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DDFNPSVH).[32] FIG. 7 shows the chromatogram of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and peptide (DDFNPSVH).

[33] на ФИГ. 8 показаны результаты MS/MS анализа ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DDFNPSVH).[33] FIG. 8 shows the results of MS/MS analysis of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and peptide (DDFNPSVH).

[34] на ФИГ. 9 показаны результаты измерения активности алкогольдегидрогеназы (ADH) в ткани печени после введения ферментативного гидролизата свиной плаценты, кислотного гидролизата свиной плаценты или смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты (норм.: группа нормального контроля); Алк.: группа отрицательного контроля; Силимарин: группа положительного контроля; L: группа низких доз смеси гидролизатов свиной плаценты; М: группа средних доз смеси гидролизатов свиной плаценты; Н: группа высоких доз смеси гидролизатов свиной плаценты; Е-форма: группа введения ферментативного гидролизата свиной плаценты и А-форма: группа введения кислотного гидролизата свиной плаценты).[34] FIG. 9 shows the results of measuring the alcohol dehydrogenase (ADH) activity in the liver tissue after administration of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta, the acid hydrolysate of porcine placenta, or the mixture of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta (Norm.: normal control group; Alc.: negative control group; Silymarin: positive control group; L: low-dose mixed porcine placenta hydrolysate group; M: medium-dose mixed porcine placenta hydrolysate group; H: high-dose mixed porcine placenta hydrolysate group; E-form: enzymatic hydrolysate administration group; and A-form: acid hydrolysate administration group).

[35] на ФИГ. 10 показаны результаты измерения активности альдегиддегидрогеназы (ALDH) в ткани печени после введения ферментативного гидролизата свиной плаценты, кислотного гидролизата свиной плаценты или смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты (норм.: группа нормального контроля); Алк.: группа отрицательного контроля; Силимарин: группа положительного контроля; L: группа низких доз смеси гидролизатов свиной плаценты; М: группа средних доз смеси гидролизатов свиной плаценты; Н: группа высоких доз смеси гидролизатов свиной плаценты; Е-форма: группа введения ферментативного гидролизата свиной плаценты и А-форма: группа введения кислотного гидролизата свиной плаценты).[35] FIG. 10 shows the results of measuring the aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity in the liver tissue after administration of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta, the acid hydrolysate of porcine placenta, or the mixture of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta (Norm: normal control group; Alc: negative control group; Silymarin: positive control group; L: low-dose mixture of porcine placenta hydrolysates group; M: middle-dose mixture of porcine placenta hydrolysates group; H: high-dose mixture of porcine placenta hydrolysates group; E-form: enzymatic hydrolysate of porcine placenta administration group; and A-form: acid hydrolysate of porcine placenta administration group).

[36] Лучшее воплощение[36] Best incarnation

[37] В качестве лучшего варианта настоящего изобретения предложена функциональная оздоровительная пищевая гепатопротекторная композиция, содержащая в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[37] As the best embodiment of the present invention, a functional health-improving food hepatoprotective composition is proposed, containing as an active ingredient a mixture of enzymatic hydrolysate of pork placenta and acid hydrolysate of pork placenta.

[38] Далее, в качестве лучшего варианта настоящего изобретения предложена функциональная оздоровительная пищевая композиция для предотвращения или уменьшения повреждения печени, вызванного алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем, при этом композиция содержит в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[38] Further, as a best embodiment of the present invention, there is provided a functional health food composition for preventing or reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the composition contains as an active ingredient a mixture of an enzymatic hydrolysate of pork placenta and an acid hydrolysate of pork placenta.

[39] Подробное раскрытие настоящего изобретения[39] Detailed disclosure of the present invention

[40] Настоящее изобретение относится к функциональной оздоровительной пищевой композиции, содержащей в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты, а также к функциональной оздоровительной пищевой композиции для предотвращения или уменьшения повреждений печени, вызванных алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем.[40] The present invention relates to a functional health food composition containing, as an active ingredient, a mixture of an enzymatic hydrolysate of pork placenta and an acid hydrolysate of pork placenta, and to a functional health food composition for preventing or reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover.

[41] Ферментативный гидролизат свиной плаценты может содержать один или несколько пептидов, имеющих аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-3.[41] The enzymatic hydrolysate of porcine placenta may comprise one or more peptides having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1-3.

[42] Ферментативный гидролизат свиной плаценты может содержать пептиды в концентрации от 0,1 млн^-1 до 100 млн^-1, предпочтительно, от 1 млн^-1 до 25 млн^-1.[42] The enzymatic hydrolysate of porcine placenta may contain peptides in a concentration of from 0.1 ^ppm to 100 ^ppm , preferably from 1 ^ppm to 25 ^ppm .

[43] Термин «ферментативный гидролизат свиной плаценты» в соответствии с настоящим изобретением относится к гидролизату, полученному путем обработки свиной плаценты протеиназой.[43] The term "enzymatic hydrolysate of porcine placenta" according to the present invention refers to a hydrolysate obtained by treating porcine placenta with proteinase.

[44] Протеиназа может быть выбрана из группы, состоящей из папаина, протеазы, бромелаина и алкалазы, но настоящее изобретение не ограничивается ими.[44] The proteinase may be selected from the group consisting of papain, protease, bromelain and alcalase, but the present invention is not limited thereto.

[45] Термин «кислотный гидролизат свиной плаценты» в соответствии с настоящим изобретением относится к гидролизату, полученному путем обработки свиной плаценты кислотой.[45] The term "acid hydrolysate of porcine placenta" according to the present invention refers to a hydrolysate obtained by treating porcine placenta with acid.

[46] Кислота может представлять собой соляную кислоту, серную кислоту, уксусную кислоту или лимонную кислоту, но настоящее изобретение не ограничено ими.[46] The acid may be hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid or citric acid, but the present invention is not limited thereto.

[47] Ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты могут быть смешаны в массовом соотношении 1:0,1-10, и, предпочтительно, в массовом соотношении 1:0,5-5; 1:0,6-5; 1:0,7-5; 1:0,8-5; 1:0,9-5; 1:1-5; 1:1-4; 1:1-3; 1:1, 1:2, 1:3, 1:4 или 1:5, но настоящее изобретение не ограничивается этим.[47] The enzymatic hydrolysate of pork placenta and the acid hydrolysate of pork placenta may be mixed in a weight ratio of 1:0.1-10, and preferably in a weight ratio of 1:0.5-5; 1:0.6-5; 1:0.7-5; 1:0.8-5; 1:0.9-5; 1:1-5; 1:1-4; 1:1-3; 1:1, 1:2, 1:3, 1:4 or 1:5, but the present invention is not limited thereto.

[48] Функциональная оздоровительная пищевая композиция по настоящему изобретению может включать в целом любые пищевые продукты и может быть охарактеризована различными терминами, известными в данной области техники, такими как пищевой продукт функционального назначения и функциональный оздоровительный пищевой продукт.[48] The functional health food composition of the present invention may comprise generally any food products and may be characterized by various terms known in the art, such as functional food product and functional health food product.

[49] Термин «функциональный оздоровительный пищевой продукт», согласно настоящему изобретению, относится к пищевым продуктам, приготовленным и представленным в форме таблеток или капсул, порошков, гранул, жидкостей и пилюль с использованием сырья или ингредиентов, обладающих функциональностью, полезной для человеческого организма. Используемый здесь термин «функциональность» означает регулирование питательных веществ, имеющих значение для структуры и функций человеческого организма или получение полезных для оздоровительных целей эффектов, таких как физиологические эффекты. Функциональный оздоровительный пищевой продукт по настоящему изобретению может быть приготовлен способом, обычно используемым в данной области, и также может быть приготовлен путем добавления сырья и ингредиентов, обычно добавляемых в данной области техники во время приготовления. Кроме того, композиции вышеуказанных функциональных оздоровительных пищевых продуктов также могут быть приготовлены любым образом, при условии, что композиции признаны функциональными оздоровительными пищевыми продуктами. В отличие от обычных лекарственных средств, функциональная оздоровительная пищевая композиция по настоящему изобретению имеет преимущество, заключающееся в отсутствии побочных эффектов, которые могут возникнуть при приеме лекарственного средства в течение длительного периода времени, поскольку в отличие от обычных лекарственных препаратов она изготавливается с использованием пищи в качестве сырья и имеет превосходную портативность, и таким образом, ее можно принимать в качестве вспомогательного средства для улучшения влияния на предотвращение или уменьшение повреждения печени, вызванного алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем.[49] The term "functional health food" according to the present invention refers to foods prepared and presented in the form of tablets or capsules, powders, granules, liquids and pills using raw materials or ingredients having functionality useful for the human body. The term "functionality" used herein means regulating nutrients that are important for the structure and function of the human body or obtaining effects useful for health purposes, such as physiological effects. The functional health food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and can also be prepared by adding raw materials and ingredients commonly added in the art during preparation. In addition, the compositions of the above-mentioned functional health foods can also be prepared in any way, as long as the compositions are recognized as functional health foods. Unlike conventional medicines, the functional health food composition of the present invention has the advantage of not having side effects that may occur when taking a medicine for a long period of time, because unlike conventional medicines, it is made using food as a raw material and has excellent portability, and thus can be taken as an auxiliary agent to improve the effect of preventing or reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover.

[50] Функциональная оздоровительная пищевая композиция согласно настоящему изобретению может содержать активный ингредиент (смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты) в количестве от 1% до 20% (мас. %) по отношению к общей массе композиции, но настоящее изобретение не ограничивается этим, и количество смеси активного ингредиента может быть надлежащим образом определено в соответствии с каждой целью применения, такой как профилактика, оздоровление или лечение.[50] The functional health food composition according to the present invention may contain the active ingredient (a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta) in an amount of 1% to 20% (mass %) based on the total weight of the composition, but the present invention is not limited thereto, and the amount of the mixture of the active ingredient can be appropriately determined according to each purpose of use such as prevention, improvement or treatment.

[51] Композиции функционального оздоровительного пищевого продукта могут быть представлены в форме порошков, гранул, пилюль, таблеток, капсул, а также в форме любого обычного пищевого продукта или напитка.[51] The functional health food compositions may be in the form of powders, granules, pills, tablets, capsules, as well as in the form of any conventional food or beverage.

[52] Особых ограничений в отношении видов пищевых продуктов нет, и примеры пищевых продуктов, к которым может быть добавлено указанное вещество, могут включать мясо, колбасу, хлеб, шоколад, конфеты, закуски, пиццу, рамен, другую лапшу, жевательную резинку, молочные продукты, включая мороженое, различные супы, напитки, чай, коктейли, алкогольные напитки, витаминизированные продукты и тому подобное, и могут включать любые продукты питания в общепринятом понимании этого термина.[52] There are no specific restrictions on the types of food products, and examples of food products to which the said substance may be added may include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, pizza, ramen, other noodles, chewing gum, dairy products including ice cream, various soups, drinks, tea, cocktails, alcoholic beverages, fortified products and the like, and may include any food products in the generally accepted sense of the term.

[53] Как правило, при приготовлении пищевого продукта или напитка активный ингредиент может быть добавлен в количестве 15 массовых частей или менее, предпочтительно, 10 массовых частей или менее, на 100 массовых частей сырья. Однако в случае длительного приема с оздоровительными или гигиеническими целями или с целью контроля за здоровьем количество активного ингредиента может быть ниже или равно вышеуказанному диапазону. Кроме того, поскольку при использовании фракций природных веществ не возникает проблем с точки зрения безопасности, настоящее изобретение также может быть использовано в количестве, превышающем вышеуказанный диапазон, или равно ему.[53] Generally, when preparing a food or drink, the active ingredient may be added in an amount of 15 parts by mass or less, preferably 10 parts by mass or less, per 100 parts by mass of raw materials. However, in the case of long-term administration for health or hygienic purposes or for health management purposes, the amount of the active ingredient may be less than or equal to the above range. In addition, since there is no problem in terms of safety when using fractions of natural substances, the present invention can also be used in an amount greater than or equal to the above range.

[54] Находящиеся в числе функциональных пищевых продуктов, согласно настоящему изобретению, напитки в качестве дополнительного ингредиента могут содержать различные ароматизаторы или природные углеводы, как и обычные напитки. Описанные выше природные углеводы могут представлять собой моносахариды, такие как глюкоза и фруктоза, дисахариды, такие как мальтоза и сахароза, полисахариды, такие как декстрин и циклодекстрин, и сахарные спирты, такие как ксилит, сорбит и эритрит. В качестве подсластителя могут использоваться натуральные подсластители, такие как экстракты тауматина и стевии, и синтетические подсластители, такие как сахарин и аспартам. Доля природного углевода может составлять примерно от 0,01 до 0,04 г и, предпочтительно, примерно от 0,02 до 0,03 г на 100 мл напитка по настоящему изобретению.[54] Among the functional foods according to the present invention, the beverages may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient, like conventional beverages. The natural carbohydrates described above may be monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. As a sweetener, natural sweeteners such as thaumatin and stevia extracts and synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame may be used. The proportion of natural carbohydrate may be from about 0.01 to 0.04 g, and preferably from about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the beverage according to the present invention.

[55] Кроме того, функциональная оздоровительная пищевая композиция согласно настоящему изобретению может содержать различные питательные вещества, витамины, электролиты, ароматизаторы, красители, пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, защитные коллоидные загустители, средства, регулирующие рН, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирты, карбонизаторы, используемые в газированных напитках. Кроме того, функциональная оздоровительная пищевая композиция по настоящему изобретению может содержать мякоть для приготовления натурального фруктового сока, напитка на основе фруктового сока и овощного напитка. Эти ингредиенты можно использовать по отдельности или в комбинации. Доля дополнительных ингредиентов не ограничена, но для функциональной пищевой композиции по настоящему изобретению обычно выбирают диапазон от 0,01 до 0,1 массовых частей на 100 массовых частей.[55] In addition, the functional health food composition according to the present invention may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonators used in carbonated drinks. In addition, the functional health food composition according to the present invention may contain pulp for preparing natural fruit juice, a fruit juice-based drink and a vegetable drink. These ingredients can be used individually or in combination. The proportion of additional ingredients is not limited, but for the functional food composition of the present invention, a range of from 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight is usually selected.

[56][56]

[57] Кроме того, настоящее изобретение относится к фармацевтической гепатопротекторной композиции, которая содержит в качестве активного ингредиента смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты, а также к фармацевтической композиции для предотвращения и уменьшения поражения печени, вызванного алкоголем, наркотической зависимостью или похмельем.[57] Furthermore, the present invention relates to a pharmaceutical hepatoprotective composition which contains as an active ingredient a mixture of an enzymatic hydrolysate of porcine placenta and an acidic hydrolysate of porcine placenta, as well as to a pharmaceutical composition for preventing and reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover.

[58] Состав фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению специально не ограничен при условии, что она включает активный ингредиент, но предпочтительно активный ингредиент содержится в количестве от 5 до 30 мас. % по отношению к общей массе композиции. Однако настоящее изобретение не ограничивается этим. Кроме того, композиция может содержать пептиды в концентрации от 0,005 млн^-1 до 30 млн^-1 по отношению ко всей композиции. При этом, если концентрация пептида меньше указанного диапазона концентраций, трудно вызвать желаемый профилактический или терапевтический эффект, а если концентрация пептида превышает указанный диапазон концентраций, изменение ожидаемого эффекта может быть незначительным.[58] The composition of the pharmaceutical composition according to the present invention is not particularly limited as long as it includes an active ingredient, but the active ingredient is preferably contained in an amount of 5 to 30% by weight relative to the total weight of the composition. However, the present invention is not limited thereto. In addition, the composition may contain peptides at a concentration of 0.005 ^ppm to 30 ^ppm relative to the entire composition. Here, if the concentration of the peptide is less than the specified concentration range, it is difficult to cause the desired preventive or therapeutic effect, and if the concentration of the peptide exceeds the specified concentration range, the change in the expected effect may be insignificant.

[59] Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена и применена в виде лекарственной формы для перорального применения, такой как порошок, гранула, таблетка, капсула, суспензия, эмульсия, сироп и аэрозоль, в виде формы для наружного применения, суппозитория и стерильного раствора для инъекций, согласно обычным способам, и, соответственно, может включать подходящий носитель, вспомогательное вещество или разбавитель, обычно используемый при получении фармацевтической композиции для приготовления препарата.[59] The pharmaceutical composition of the present invention can be prepared and used as a dosage form for oral administration such as powder, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, syrup and aerosol, as a form for external use, suppository and sterile injection solution according to conventional methods, and accordingly may include a suitable carrier, excipient or diluent commonly used in the preparation of a pharmaceutical composition for the preparation of a preparation.

[60] Примеры носителя, вспомогательного вещества или разбавителя могут включать различные соединения или смеси, включая лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийский каучук, альгинат, желатин, фосфат кальция, силицид кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло и т.д.[60] Examples of the carrier, excipient or diluent may include various compounds or mixtures including lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicide, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methyl hydroxybenzoate, propyl hydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, mineral oil, etc.

[61] При составлении фармацевтической композиции она может быть приготовлена с использованием обычно используемых разбавителей или вспомогательных веществ, таких как наполнители, утяжеляющие агенты, связующие, смачивающие агенты, разрыхлители, поверхностно-активные вещества и т.д.[61] When formulating a pharmaceutical composition, it can be prepared using commonly used diluents or excipients such as fillers, weighting agents, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, etc.

[62] Твердые составы для перорального введения могут быть приготовлены путем смешивания композиции по меньшей мере с одним вспомогательным веществом, например, крахмалом, карбонатом кальция, сахарозой или лактозой, желатином и т.п. В дополнение к простому наполнителю также можно использовать смазывающие вещества, такие как стеарат магния и тальк.[62] Solid formulations for oral administration can be prepared by mixing the composition with at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, etc. In addition to a simple filler, lubricating agents such as magnesium stearate and talc can also be used.

[63] Жидкие составы для перорального введения включают суспензии, растворы, эмульсии, сиропы и т.п. и могут включать в себя различные вспомогательные вещества, например, смачивающие агенты, подсластители, освежители воздуха, консерванты и т.п., помимо воды и жидкого парафина, которые обычно используются, как простые разбавители.[63] Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups, etc., and may include various auxiliary substances such as wetting agents, sweeteners, air fresheners, preservatives, etc., in addition to water and liquid paraffin, which are usually used as simple diluents.

[64] Составы для парентерального введения включают стерилизованные водные растворы, неводные растворы, суспензии, эмульсии, лиофилизированные составы и суппозитории. В качестве основы для неводного раствора и суспензии может применяться пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло, такое как оливковое масло, и сложные эфиры для инъекций, такие как этилолеат. В качестве основы для суппозиториев могут быть использованы витепсол, макрогол, твин 61, масло какао, лауриновое масло, глицерин, желатин и тому подобное.[64] Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized formulations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate can be used as the base for the non-aqueous solution and suspension. Witepsol, macrogol, tween 61, cocoa butter, lauric oil, glycerin, gelatin, and the like can be used as the base for the suppositories.

[65] Предпочтительная дозировка фармацевтической композиции по настоящему изобретению может варьироваться в зависимости от состояния пациента, массы тела, стадии заболевания, лекарственной формы, пути и продолжительности введения, и может быть соответствующим образом подобрана специалистами в данной области техники. Однако для достижения предпочтительного эффекта фармацевтическая композиция может вводиться в дозе от 0,0001 до 2000 мг/кг в день и, предпочтительно, от 0,001 до 2000 мг/кг. Введение может осуществляться один раз или несколько раз в день. Однако объем настоящего изобретения не ограничивается вышеуказанной дозировкой.[65] The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the patient's condition, body weight, stage of the disease, dosage form, route and duration of administration, and can be appropriately selected by those skilled in the art. However, in order to achieve a preferred effect, the pharmaceutical composition can be administered at a dose of 0.0001 to 2000 mg/kg per day, and preferably 0.001 to 2000 mg/kg. The administration can be performed once or several times per day. However, the scope of the present invention is not limited to the above dosage.

[66] Согласно настоящему изобретению фармацевтическую композицию можно вводить млекопитающим, таким как крысы, мыши, домашний скот, и людям, с использованием различных способов. Введение может осуществляться с использованием любых способов введения, включая, например, пероральный, ректальный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутриматочный или посредством интрацеребровентрикулярных инъекций.[66] According to the present invention, the pharmaceutical composition can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, and humans using various routes. The administration can be carried out using any route of administration, including, for example, oral, rectal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine, or by intracerebroventricular injections.

[67][67]

[68] В дальнейшем настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на примеры. Указанные примеры предназначены для более детальной иллюстрации настоящего изобретения, но объем настоящего изобретения не ограничен приведенными примерами.[68] Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. These examples are intended to illustrate the present invention in more detail, but the scope of the present invention is not limited to the examples given.

ПРИМЕРЫEXAMPLES

[69][69]

[70] Пример 1. Получение ферментативного гидролизата свиной плаценты[70] Example 1. Obtaining enzymatic hydrolysate of pig placenta

[71] После размораживания свиной плаценты в приборе для оттаивания, свиную плаценту, из которой с верхним слоем воды были удалены посторонние вещества, помещали в машину для размягчения мяса, чтобы проще удалить кровь. После этого свиную плаценту несколько раз промывали 0,9% раствором NaCl, и свиную плаценту, из которой была удалена кровь, измельчали с помощью блендера, чтобы ускорить гидролиз. К подготовленной свиной плаценте добавляли 3% протеиназы (папаина) и проводили гидролиз в течение 20 часов. После завершения гидролиза протеиназу инактивировали нагреванием, а гидролизат свиной плаценты фильтровали посредством приведения в контакт с вспомогательным фильтрующим средством, адсорбировали и очищали. Затем к фильтрату гидролизата свиной плаценты добавляли 1,2х (по массе) этанола и, после выдерживания в течение 15-20 часов, сахара, белки и примеси, которые не были достаточно гидролизованы, удаляли с помощью фильтра. После концентрирования отфильтрованной жидкости, полученный продукт адсорбировали и очищали, используя 0,1-2% активированного угля, а использованный активированный уголь затем удаляли фильтрованием с помощью фильтра. Очищенный ферментативный гидролизат свиной плаценты, из которого был удален активированный уголь, подвергали антибактериальной обработке с использованием фильтра с размером пор 0,2 мкм для стерилизации отфильтрованной жидкости. В итоге получали экстракт плаценты высокой чистоты.[71] After the pig placenta was defrosted in a thawing machine, the pig placenta from which foreign matter had been removed with the upper layer of water was placed in a meat tenderizing machine to make it easier to remove blood. After that, the pig placenta was washed several times with 0.9% NaCl solution, and the pig placenta from which blood had been removed was ground with a blender to accelerate hydrolysis. 3% proteinase (papain) was added to the prepared pig placenta, and hydrolysis was carried out for 20 hours. After completion of hydrolysis, the proteinase was inactivated by heating, and the pig placenta hydrolyzate was filtered by contact with a filter aid, adsorbed, and purified. Then, 1.2x (by weight) ethanol was added to the filtrate of the porcine placenta hydrolysate, and after standing for 15-20 hours, sugars, proteins and impurities that were not sufficiently hydrolyzed were removed by a filter. After concentrating the filtered liquid, the resulting product was adsorbed and purified using 0.1-2% activated carbon, and the spent activated carbon was then removed by filtration using a filter. The purified enzymatic hydrolysate of porcine placenta from which the activated carbon was removed was subjected to antibacterial treatment using a filter with a pore size of 0.2 μm to sterilize the filtered liquid. As a result, a high-purity placenta extract was obtained.

[72][72]

[73] Пример 2. Получение кислотного гидролизата свиной плаценты[73] Example 2. Obtaining acid hydrolysate of pork placenta

[74] После размораживания свиной плаценты в приборе для оттаивания к 100 кг свиной плаценты, из которой с верхним слоем воды были удалены посторонние вещества, добавляли 70 кг 35%-ной (по объему) соляной кислоты, проводили расщепление при 110°С в течение 22 часов и фильтровали. После этого отфильтрованный гидролизованный продукт концентрировали, к полученному продукту для нейтрализации добавляли гидроксид натрия, доводя до рН 6-7, а затем адсорбировали и очищали с использованием активированного угля. Использованный активированный уголь удаляли фильтрованием с помощью фильтра. Очищенный кислотный гидролизат свиной плаценты, из которого был удален активированный уголь, подвергали антибактериальной обработке с использованием фильтра с размером пор 0,2 мкм для стерилизации отфильтрованной жидкости.[74] After thawing the pig placenta in a thawing apparatus, 70 kg of 35% (by volume) hydrochloric acid were added to 100 kg of pig placenta from which foreign substances were removed with the upper water layer, digested at 110°C for 22 hours, and filtered. After that, the filtered hydrolyzed product was concentrated, sodium hydroxide was added to the resulting product for neutralization to adjust the pH to 6-7, and then adsorbed and purified using activated carbon. The used activated carbon was removed by filtration using a filter. The purified acid hydrolysate of pig placenta from which the activated carbon was removed was subjected to antibacterial treatment using a filter with a pore size of 0.2 μm to sterilize the filtered liquid.

[75][75]

[76] Пример 3. Анализ ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты[76] Example 3. Analysis of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta

[77] Чтобы подтвердить свойства ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты, авторы настоящего изобретения провели эксперимент по анализу содержания азота, содержания аминокислот и хроматограмм ВЭЖХ полученного ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[77] In order to confirm the properties of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta, the present inventors conducted an experiment to analyze the nitrogen content, the amino acid content, and the HPLC chromatograms of the obtained enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta.

[78] В результате было установлено, что ферментативный гидролизат имел содержание аминокислот около 40%, а кислотный гидролизат свиной плаценты имел содержание аминокислот около 80% (Таблица 1). То есть было подтверждено, что содержание аминокислот в кислотном гидролизате свиной плаценты больше, чем в ферментативном гидролизате. Кроме того, как показано на фиг. 1, хроматограмма ВЭЖХ ферментативного гидролизата свиной плаценты отличалась от хроматограммы кислотного гидролизата свиной плаценты (фиг. 1).[78] As a result, it was found that the enzymatic hydrolysate had an amino acid content of about 40%, and the acid hydrolysate of porcine placenta had an amino acid content of about 80% (Table 1). That is, it was confirmed that the amino acid content of the acid hydrolysate of porcine placenta was greater than that of the enzymatic hydrolysate. In addition, as shown in Fig. 1, the HPLC chromatogram of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta was different from that of the acid hydrolysate of porcine placenta (Fig. 1).

[79][79]

[80] Таблица 1. Анализ ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты[80] Table 1. Analysis of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta

[81][81]

[82] Формула[82] Formula

[83][83]

Мол. мас. - молекулярная массаMol. mass - molecular weight

Пептиды (%)=100% - аминокислоты %.Peptides (%) = 100% - amino acids %.

[84][84]

[85] Пример 4. Идентификация и эффективность пептидов ферментативного гидролизата свиной плаценты[85] Example 4. Identification and efficiency of peptides from enzymatic hydrolysate of porcine placenta

[86] 4.1. Хромато-масс-спектрометрия ферментативного гидролизата свиной плаценты[86] 4.1. Chromatography-mass spectrometry of enzymatic hydrolysate of porcine placenta

[87] Ферментативный гидролизат свиной плаценты, полученный в Примере 1, перемешивали на вортексе с добавлением 500 мкл метанола (МеОН) к 100 мкл образца, образец центрифугировали, 600 мкл надосадочной жидкости переносили в новую пробирку и затем сушили в вакууме. После этого к высушенному образцу добавляли воду до объема 100 мкл, отфильтрованную жидкость секвенировали с использованием системы масс-спектрометра MicroQ - TOF III (Bruker Daltonics, 255748 Германия) и MS/MS ионизационного анализа.[87] The enzymatic hydrolysate of porcine placenta obtained in Example 1 was vortexed with the addition of 500 μl of methanol (MeOH) to 100 μl of sample, the sample was centrifuged, 600 μl of the supernatant was transferred to a new tube and then dried under vacuum. After that, water was added to the dried sample to a volume of 100 μl, the filtered liquid was sequenced using a MicroQ - TOF III mass spectrometer system (Bruker Daltonics, 255748 Germany) and MS/MS ionization analysis.

[88][88]

[89] Условия анализа[89] Analysis conditions

[90] Подвижная фаза:[90] Mobile phase:

[91] Подвижная фаза A: H₂O/FA=100/0,2 (об/об).[91] Mobile phase A: _H2O /FA=100/0.2 (v/v).

[92] Подвижная фаза В: Ацетонитрил/FA=100/0,2 (об/об).[92] Mobile phase B: Acetonitrile/FA=100/0.2 (v/v).

[93][93]

[94] Таблица 2. Условия хромато-масс-спектрометрического анализа[94] Table 2. Conditions for chromatograph mass spectrometric analysis

[95][95]

[96] В результате вышеуказанного анализа всего было проанализировано 17 пептидов, и 5 пептидов были идентифицированы в базе данных UniProt, как пептиды свиного происхождения (Таблица 3).[96] As a result of the above analysis, a total of 17 peptides were analyzed, and 5 peptides were identified in the UniProt database as peptides of porcine origin (Table 3).

[97][97]

[98] Таблица 3. Последовательности пептидов из ферментативного гидролизата свиной плаценты[98] Table 3. Peptide sequences from enzymatic hydrolysate of porcine placenta

[99][99]

[100] После этого в настоящем изобретении среди идентифицированных пяти пептидов свиного происхождения посредством подтверждения размера пика и воспроизводимости между партиями были выбраны три пептида свиного происхождения в качестве индикаторных веществ (фиг. 2 и Таблица 4).[100] Then, in the present invention, among the identified five peptides of porcine origin, three peptides of porcine origin were selected as indicator substances through confirmation of peak size and batch-to-batch reproducibility (Fig. 2 and Table 4).

[101][101]

[102] Таблица 4. Последовательности пептидов индексных компонентов ферментативного гидролизата свиной плаценты[102] Table 4. Peptide sequences of index components of enzymatic hydrolysate of porcine placenta

[103][103]

[104] После того, как в компании Anygen (www.anygen.com) были синтезированы пептиды, имеющие ту же массу и MS/MS формы ионизации, что и пептиды, идентифицированные в ферментативном гидролизате свиной плаценты, был проведен следующий эксперимент.[104] After peptides of the same mass and MS/MS ionization forms as the peptides identified in the enzymatic hydrolysate of porcine placenta were synthesized at Anygen (www.anygen.com), the following experiment was conducted.

[105] Было подтверждено, что содержание пептидов РЕР-1, РЕР-2 и РЕР-3 в гидролизате составляло от 1 до 25 млн^-1.[105] It was confirmed that the content of PEP-1, PEP-2 and PEP-3 peptides in the hydrolysate ranged from 1 to 25 ^ppm .

[106][106]

[107] 4.2. Проверка пептидов[107] 4.2. Peptide testing

[108] Чтобы подтвердить, что пептиды, синтезированные в Anygen, идентичны пептидам, присутствующим в ферментативном гидролизате свиной плаценты, был проведен тест на проверку пептидов посредством верификации пептидов РЕР-1, РЕР-2 и РЕР-3.[108] To confirm that the peptides synthesized in Anygen were identical to those present in the enzymatic hydrolysate of porcine placenta, a peptide verification test was conducted by verifying the peptides PEP-1, PEP-2, and PEP-3.

[109] В случае РЕР-1 проверка пептида проводилась двумя способами. Первый способ состоял в анализе хроматограмм ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (VVVE). Хроматограмму подтверждали добавлением (А) гидролизата свиной плаценты, (В) пептида (VVVE) и (С) синтетического пептида и гидролизата свиной плаценты. В результате было установлено, что гидролизат свиной плаценты и синтетический пептид имеют одинаковые пики. Таким образом, было подтверждено, что пептид соответствует компонентам, присутствующим в гидролизате свиной плаценты (фиг. 3). Второй способ состоял в подтверждении с использованием MS/MS спектров ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (VVVE). В результате спектр MS/MS ферментативного гидролизата свиной плаценты совпал с MS/MS спектром пептида (VVVE), так что было подтверждено, что пептид соответствует компонентам, присутствующим в гидролизате свиной плаценты (фиг. 4).[109] In the case of PEP-1, the peptide was verified in two ways. The first way was to analyze the chromatograms of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the peptide (VVVE). The chromatogram was confirmed by adding (A) the hydrolysate of porcine placenta, (B) the peptide (VVVE), and (C) the synthetic peptide and the hydrolysate of porcine placenta. As a result, it was found that the hydrolysate of porcine placenta and the synthetic peptide had the same peaks. Thus, it was confirmed that the peptide corresponded to the components present in the hydrolysate of porcine placenta (Fig. 3). The second way was to confirm using MS/MS spectra of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the peptide (VVVE). As a result, the MS/MS spectrum of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta matched with the MS/MS spectrum of the peptide (VVVE), so that it was confirmed that the peptide corresponded to the components present in the hydrolysate of porcine placenta (Fig. 4).

[110] В случае РЕР-2 первый способ состоял в анализе хроматограмм ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DGLHLR). Хроматограмму подтверждали добавлением (А) гидролизата свиной плаценты, (В) пептида (DGLHLR) и (С) синтетического пептида и гидролизата свиной плаценты. В результате было подтверждено, что гидролизат свиной плаценты и синтетический пептид имеют одинаковые пики. Таким образом, было подтверждено, что пептид соответствует компонентам, присутствующим в гидролизате свиной плаценты (фиг. 5). Далее, второй способ верификации пептида состоял в подтверждении с использованием MS/MS спектров ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DGLHLR). В результате MS/MS спектр ферментативного гидролизата свиной плаценты совпал с MS/MS спектром пептида (DGLHLR), так что было подтверждено, что пептид соответствует компонентам, присутствующим в гидролизате свиной плаценты (фиг. 6).[110] In the case of PEP-2, the first method was to analyze the chromatograms of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the peptide (DGLHLR). The chromatogram was confirmed by adding (A) the enzymatic hydrolysate of porcine placenta, (B) the peptide (DGLHLR), and (C) the synthetic peptide and the enzymatic hydrolysate of porcine placenta. As a result, it was confirmed that the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the synthetic peptide had the same peaks. Thus, it was confirmed that the peptide corresponded to the components present in the enzymatic hydrolysate of porcine placenta (Fig. 5). Next, the second method of verifying the peptide was to confirm using the MS/MS spectra of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the peptide (DGLHLR). As a result, the MS/MS spectrum of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta matched with the MS/MS spectrum of the peptide (DGLHLR), so that it was confirmed that the peptide corresponded to the components present in the hydrolysate of porcine placenta (Fig. 6).

[111] В случае РЕР-3 первый способ состоял в анализе хроматограмм ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DDFNPSVH). Хроматограмму подтверждали добавлением (А) гидролизата свиной плаценты, (В) пептида (DDFNPSVH) и (С) синтетического пептида и гидролизата свиной плаценты. В результате было подтверждено, что гидролизат свиной плаценты и синтетический пептид имеют одинаковые пики. Таким образом, было подтверждено, что пептид соответствует компонентам, присутствующим в ферментативном гидролизате свиной плаценты (фиг. 7). Далее, второй способ верификации пептида состоял в подтверждении с использованием MS/MS спектров ферментативного гидролизата свиной плаценты и пептида (DDFNPSVH). В результате MS/MS спектр ферментативного гидролизата свиной плаценты совпадает с MS/MS спектром пептида (DDFNPSVH), так что было подтверждено, что пептид соответствует компонентам, присутствующим в гидролизате свиной плаценты (фиг. 8).[111] In the case of PEP-3, the first method was to analyze the chromatograms of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the peptide (DDFNPSVH). The chromatogram was confirmed by adding (A) the enzymatic hydrolysate of porcine placenta, (B) the peptide (DDFNPSVH), and (C) the synthetic peptide and the enzymatic hydrolysate of porcine placenta. As a result, it was confirmed that the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the synthetic peptide had the same peaks. Thus, it was confirmed that the peptide corresponded to the components present in the enzymatic hydrolysate of porcine placenta (Fig. 7). Next, the second method of verifying the peptide was to confirm using MS/MS spectra of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the peptide (DDFNPSVH). As a result, the MS/MS spectrum of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta matched with the MS/MS spectrum of the peptide (DDFNPSVH), so that it was confirmed that the peptide corresponded to the components present in the hydrolysate of porcine placenta (Fig. 8).

[112][112]

[113] 4.3. Оценка цитотоксичности пептида на клетках HepG2[113] 4.3. Evaluation of peptide cytotoxicity on HepG2 cells

[114] После культивирования линии клеток гепатомы HepG2 добавляли три вида синтетических пептидов в определенной концентрации и проводили МТТ-тест (метилтиазолилтетразолия бромид, Sigma Aldrich) для подтверждения жизнеспособности клеток. Соответствующее количество (1×10⁵/лунку) клеток высевали в каждую ячейку 24-луночного планшета (BD, Falcon), чтобы подвергнуть воздействию образца в соответствии с концентрацией, и после культивирования в инкубаторе при 37°С в течение 24 часов подтверждали жизнеспособность клеток. Далее добавляли раствор МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида) и проводили реакцию в течение 4 часов, каждый раз добавляя по 400 мкл ДМСО для растворения нерастворимых кристаллов формазана, и измеряли поглощение света при длине волны 570 нм с использованием ридера ELISA (TECAN, Infinite М200 pro).[114] After culturing the HepG2 hepatoma cell line, three kinds of synthetic peptides were added at a certain concentration, and MTT (methyl thiazolyl tetrazolium bromide, Sigma Aldrich) assay was performed to confirm the cell viability. An appropriate number (1× ¹⁰⁵ /well) of cells were seeded in each well of a 24-well plate (BD, Falcon) to expose the sample according to the concentration, and after culturing in an incubator at 37°C for 24 hours, the cell viability was confirmed. Next, MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) solution was added and the reaction was carried out for 4 hours, each time adding 400 μl of DMSO to dissolve insoluble formazan crystals, and the light absorption was measured at a wavelength of 570 nm using an ELISA reader (TECAN, Infinite M200 pro).

[115] В результате оценки цитотоксичности, три вида пептидов РЕР-1, РЕР-2 и РЕР-3 показали отсутствие токсичности в концентрациях до 10 мкг/мл (Таблица 5).[115] As a result of cytotoxicity assessment, three types of peptides PEP-1, PEP-2 and PEP-3 showed no toxicity at concentrations up to 10 μg/ml (Table 5).

[116][116]

[117] 4.4. Способность пептида защищать гепатоциты[117] 4.4. The ability of the peptide to protect hepatocytes

[118] Клетки HepG2, которые представляют собой клеточную линию гепатомы, переносили в 24-луночный планшет в концентрации 1×10⁵ на лунку и культивировали. После этого, чтобы подтвердить защитную способность трех видов синтетических пептидов в отношении гепатоцитов, проводили культивирование с пептидами в определенных концентрациях в течение 23 часов, а затем обрабатывали 10 мМ t-BHP для повреждения гепатоцитов и культивировали еще в течение 90 минут. Далее добавляли раствор МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид) и проводили реакцию в течение 4 часов, каждый раз добавляя по 400 мкл ДМСО для растворения нерастворимых кристаллов формазана, и измеряли поглощение света при длине волны 570 нм с использованием ридера ELISA (TECAN, Infinite М200 pro).[118] HepG2 cells, which are a hepatoma cell line, were transferred into a 24-well plate at a concentration of 1×10 ⁵ per well and cultured. Then, in order to confirm the protective ability of three kinds of synthetic peptides on hepatocytes, they were cultured with the peptides at certain concentrations for 23 hours, and then treated with 10 mM t-BHP to damage hepatocytes and cultured for another 90 minutes. Next, MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) solution was added and reacted for 4 hours, adding 400 μL of DMSO each time to dissolve the insoluble formazan crystals, and the absorbance was measured at 570 nm using an ELISA reader (TECAN, Infinite M200 pro).

[119] В результате РЕР-2 и РЕР-3 при концентрации 10 мкг/мл показали высокую защитную способность в отношении гепатоцитов, составляющую 26% и 20% соответственно (Таблица 5).[119] As a result, PEP-2 and PEP-3 at a concentration of 10 μg/ml showed high protective ability against hepatocytes, amounting to 26% and 20%, respectively (Table 5).

[120][120]

[121] 4.5. Измерение биохимического показателя функции печени AST для пептидов[121] 4.5. Measurement of the biochemical liver function indicator AST for peptides

[122] Для оценки AST в каждую ячейку (1×10⁵/лунка) помещали три вида синтетических пептидов в определенной концентрации и проводили культивирование в течение 23 часов, а затем обрабатывали 20 мМ t-BHP и культивировали в течение 3 часов. После этого супернатант отбирали для измерения AST с использованием набора (BIOVISION; K753-100) для колориметрического анализа активности аспартаттрансаминазы (AST or SGOT). Далее, для количественного определения клеток удаляли супернатант, добавляли раствор МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида) и проводили реакцию в течение 4 часов, каждый раз добавляя по 400 мкл ДМСО для растворения нерастворимых кристаллов формазана, и измеряли поглощение света при длине волны 570 нм с использованием ридера ELISA (TECAN, Infinite М200 pro).[122] To evaluate AST, three kinds of synthetic peptides were added to each well (1×10 ⁵ /well) at a certain concentration and cultured for 23 hours, and then treated with 20 mM t-BHP and cultured for 3 hours. After that, the supernatant was collected for AST measurement using a colorimetric aspartate transaminase (AST or SGOT) activity assay kit (BIOVISION; K753-100). Next, to quantify the cells, the supernatant was removed, MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) solution was added, and the reaction was carried out for 4 hours, each time adding 400 μl of DMSO to dissolve insoluble formazan crystals, and the light absorption was measured at a wavelength of 570 nm using an ELISA reader (TECAN, Infinite M200 pro).

[123] В результате каждый из РЕР-2 и РЕР-3 в концентрации 10 мкг/мл продемонстрировал наиболее выраженную AST ингибирующую способность, значения которой составили 34% и 14% (Таблица 6). Как показали результаты оценки защитной способности в отношении гепатоцитов, было подтверждено, что лучшую эффективность показал РЕР-2.[123] As a result, each of PEP-2 and PEP-3 at a concentration of 10 μg/ml demonstrated the most pronounced AST inhibitory ability, the values of which were 34% and 14% (Table 6). As shown by the results of the evaluation of the protective ability in relation to hepatocytes, it was confirmed that PEP-2 showed the best efficiency.

[124][124]

[125] 4.6. Измерение биохимического показателя функции печени ALT для пептидов[125] 4.6. Measurement of the biochemical liver function indicator ALT for peptides

[126] Для оценки ALT в каждую ячейку (1×10⁵/лунка) помещали три вида синтетических пептидов в определенной концентрации и проводили культивирование в течение 23 часов, а затем обрабатывали 20 мМ t-BHP и культивировали в течение 3 часов. После этого супернатант отбирали для измерения ALT с использованием набора (BIOVISION; К752-100) для колориметрического/флуорометрического анализа активности аспартаттрансаминазы (AST или SGPT). Далее, для количественного определения клеток удаляли супернатант, добавляли раствор МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида) и проводили реакцию в течение 4 часов, каждый раз добавляя по 400 мкл ДМСО для растворения нерастворимых кристаллов формазана, и измеряли поглощение света при длине волны 570 нм с использованием ридера ELISA (TECAN, Infinite М200 pro).[126] To assess ALT, three kinds of synthetic peptides were added to each well (1×10 ⁵ /well) at a certain concentration and cultured for 23 hours, and then treated with 20 mM t-BHP and cultured for 3 hours. After that, the supernatant was collected for ALT measurement using a colorimetric/fluorometric aspartate transaminase (AST or SGPT) activity assay kit (BIOVISION; K752-100). Next, to quantify the cells, the supernatant was removed, MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) solution was added, and the reaction was carried out for 4 hours, each time adding 400 μl of DMSO to dissolve insoluble formazan crystals, and the light absorption was measured at a wavelength of 570 nm using an ELISA reader (TECAN, Infinite M200 pro).

[127] В результате было подтверждено, что РЕР-2 обладает превосходной ALT ингибирующей способностью. Концентрация образца, показывающая максимальную эффективность, составила 1 мкг/мл, а ее значение составило 34% (Таблица 5).[127] As a result, it was confirmed that PEP-2 has excellent ALT inhibitory ability. The sample concentration showing the maximum efficiency was 1 μg/mL, and its value was 34% (Table 5).

[128][128]

[129] Таблица 5. Тестирование пептидов, полученных из свиной плаценты, в отношении улучшения состояния печени[129] Table 5. Testing of porcine placenta-derived peptides for liver health improvement

[130][130]

[131] Пример 5. In vitro оценка ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты в отношении эффективности улучшения работы печени[131] Example 5. In vitro evaluation of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta for liver function improvement efficacy

[132] Авторы настоящего изобретения провели эксперимент по оценке цитотоксичности ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты путем обработки клеточных линий гепатомы человека ферментативным гидролизатом свиной плаценты и кислотным гидролизатом свиной плаценты, после чего измеряли жизнеспособность клеток. Вкратце, клеточную линию гепатомы человека HepG2 культивировали в матрасе для культивирования клеток, и когда клетки достигали 80% конфлюэнтности, клетки гепатомы человека HepG2 переносили в 24-луночный планшет в количестве 1,5×10⁵ клеток. После культивирования в течение 48 часов их обрабатывали каждым тестируемым веществом в каждой концентрации и культивировали еще в течение 24 часов. После этого добавляли раствор МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида) и проводили реакцию в течение 4 часов, каждый раз добавляя по 400 мкл ДМСО для растворения нерастворимых кристаллов формазана, и измеряли поглощение света при длине волны 570 нм с использованием ридера ELISA (TECAN, Infinite М200 pro).[132] The present inventors conducted an experiment to evaluate the cytotoxicity of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta by treating human hepatoma cell lines with the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta, and then measuring the cell viability. Briefly, the human hepatoma cell line HepG2 was cultured in a cell culture flask, and when the cells reached 80% confluency, the human hepatoma HepG2 cells were transferred to a 24-well plate at an amount of 1.5× ¹⁰⁵ cells. After culturing for 48 hours, they were treated with each test substance at each concentration and cultured for another 24 hours. After that, MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) solution was added and the reaction was carried out for 4 hours, each time adding 400 μl of DMSO to dissolve insoluble formazan crystals, and the light absorption was measured at a wavelength of 570 nm using an ELISA reader (TECAN, Infinite M200 pro).

[133] В результате было подтверждено, что ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты не являются токсичными до концентрации 0,5 мг/мл в пересчете на общий азот (Таблица 6).[133] As a result, it was confirmed that the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta were not toxic up to a concentration of 0.5 mg/mL based on total nitrogen (Table 6).

[134][134]

[135] Далее, авторы настоящего изобретения провели эксперимент, чтобы определить, обладают ли ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты гепатопротекторным действием. Клеточную линию гепатомы человека HepG2 культивировали в матрасе для культивирования клеток, и когда клетки достигали 80% конфлюэнтности, клетки гепатомы человека HepG2 переносили в 24-луночный планшет в количестве 1,5×10⁵ клеток. После культивирования в течение 48 часов их обрабатывали каждым тестируемым веществом в каждой концентрации и культивировали еще в течение 23 часов. После этого клетки вместе с тестируемым образцом обрабатывали трет-бутилгидропероксидом (t-BHP, 10 мМ) и выдерживали в течение 1 часа 30 минут. Спустя 1 час и 30 минут воздействия, МТТ сравнивали с группой лечения поражения печени, поврежденной t-BHP, для подтверждения гепатопротекторного действия.[135] Next, the present inventors conducted an experiment to determine whether the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acidic hydrolysate of porcine placenta had a hepatoprotective effect. The human hepatoma cell line HepG2 was cultured in a cell culture flask, and when the cells reached 80% confluency, the human hepatoma HepG2 cells were transferred to a 24-well plate at a concentration of 1.5× ¹⁰⁵ cells. After culturing for 48 hours, they were treated with each test substance at each concentration and cultured for another 23 hours. Thereafter, the cells along with the test sample were treated with tert-butyl hydroperoxide (t-BHP, 10 mM) and incubated for 1 hour and 30 minutes. After 1 hour and 30 minutes of exposure, MTT was compared with the t-BHP-damaged liver injury treatment group to confirm the hepatoprotective effect.

[136] Было подтверждено, что в результате обработки гепатоцитов t-BHP, генерируется большое количество ROS и гепатоциты повреждаются. Однако обработка ферментативным гидролизатом свиной плаценты защищала гепатоциты примерно на 40% при концентрации общего азота 0,05 мг/мл, а обработка кислотным гидролизатом свиной плаценты эффективно защищала гепатоциты примерно на 21% при концентрации общего азота 0,05 мг/мл (Таблица 6).[136] It was confirmed that the treatment of hepatocytes with t-BHP generated a large amount of ROS and damaged hepatocytes. However, treatment with enzymatic hydrolysate of porcine placenta protected hepatocytes by about 40% at a total nitrogen concentration of 0.05 mg/mL, and treatment with acid hydrolysate of porcine placenta effectively protected hepatocytes by about 21% at a total nitrogen concentration of 0.05 mg/mL (Table 6).

[137][137]

[138] Кроме того, авторы настоящего изобретения провели эксперимент, чтобы определить, влияют ли ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты на ингибирование гепатотоксичности. Клеточную линию гепатомы человека HepG2 культивировали в матрасе для культивирования клеток, и когда клетки достигали 80% конфлюэнтности, клетки гепатомы человека HepG2 переносили в лунки 24-луночного планшета в количестве 1,5×10⁵ клеток. После культивирования в течение 48 часов их обрабатывали каждым тестируемым веществом в каждой концентрации и культивировали еще в течение 23 часов. Через 23 часа клетки одновременно обрабатывали t-BHP (20 мМ) в течение 3 часов, а через 3 часа отбирали супернатант для определения количества аспартаттрансаминазы (AST) и аланинтрансаминазы (ALT), которые являются индикаторами поражения печени, с использованием наборов для определения активности AST и ALT. Кроме того, для подтверждения и определения числа клеток, их обрабатывали раствором МТТ.[138] In addition, the present inventors conducted an experiment to determine whether the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta have an effect on the inhibition of hepatotoxicity. The human hepatoma cell line HepG2 was cultured in a cell culture flask, and when the cells reached 80% confluency, the human hepatoma HepG2 cells were transferred to the wells of a 24-well plate at a number of 1.5×10 ⁵ cells. After culturing for 48 hours, they were treated with each test substance at each concentration and cultured for another 23 hours. After 23 hours, the cells were simultaneously treated with t-BHP (20 mM) for 3 hours, and the supernatant was collected after 3 hours to determine the amount of aspartate transaminase (AST) and alanine transaminase (ALT), which are indicators of liver injury, using AST and ALT activity kits. In addition, they were treated with MTT solution to confirm and determine the cell number.

[139] В результате было подтверждено, что обработка ферментативным гидролизатом свиной плаценты с концентрацией общего азота 0,1 мг/мл приводит к ингибированию AST на 91%, а обработка кислотным гидролизатом свиной плаценты с концентрацией общего азота 0,1 мг/мл приводит к ингибированию AST на 93%. Кроме того, было подтверждено, что обработка ферментативным гидролизатом свиной плаценты с концентрацией общего азота 0,1 мг/мл приводит к ингибированию ALT на 23%, тогда как при обработке кислотным гидролизатом свиной плаценты изменений не наблюдалось (Таблица 6).[139] As a result, it was confirmed that treatment with enzymatic hydrolysate of porcine placenta with a total nitrogen concentration of 0.1 mg/mL resulted in 91% inhibition of AST, while treatment with acidic hydrolysate of porcine placenta with a total nitrogen concentration of 0.1 mg/mL resulted in 93% inhibition of AST. In addition, it was confirmed that treatment with enzymatic hydrolysate of porcine placenta with a total nitrogen concentration of 0.1 mg/mL resulted in 23% inhibition of ALT, while no change was observed with acidic hydrolysate of porcine placenta (Table 6).

[140][140]

[141] Таблица 6. Анализ влияния ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты на улучшение функции печени[141] Table 6. Analysis of the effect of enzymatic hydrolysate of pork placenta and acid hydrolysate of pork placenta on improving liver function

[142][142]

[143] Пример 6. Анализ свойств смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты[143] Example 6. Analysis of the properties of a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta

[144] Чтобы оценить свойства смеси, в которой ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты смешаны в разных соотношениях, авторы настоящего изобретения провели эксперимент по смешиванию ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты в массовых соотношениях 1:1, 1:2, 1:3 и 1:4 и проанализировали содержание азота и содержание аминокислот в смесях.[144] In order to evaluate the properties of a mixture in which the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta are mixed in different ratios, the inventors of the present invention conducted an experiment by mixing the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acid hydrolysate of porcine placenta in weight ratios of 1:1, 1:2, 1:3 and 1:4 and analyzed the nitrogen content and the amino acid content of the mixtures.

[145] В результате было подтверждено, что с увеличением в смеси доли кислотного гидролизата свиной плаценты содержание аминокислот увеличивается (Таблица 7). В соответствии с этим для эксперимента выбрали смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты с массовым соотношением 1:3 и оценивали эффективность смеси при различных концентрациях: низкой, средней и высокой.[145] As a result, it was confirmed that with an increase in the proportion of acid hydrolysate of porcine placenta in the mixture, the content of amino acids increases (Table 7). Accordingly, a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta with a mass ratio of 1:3 was selected for the experiment and the effectiveness of the mixture was evaluated at different concentrations: low, medium and high.

[146][146]

[147] Таблица 7. Анализ ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты[147] Table 7. Analysis of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta

[148][148]

[149] Формула[149] Formula

[150][150]

Мол. мас - .молекулярная массаMol. mass - molecular weight

[151][151]

[152] Пример 7. Оценка in vivo эффективности ферментативного гидролизата свиной плаценты, кислотного гидролизата свиной плаценты и смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты при повреждении печени, связанном с алкоголем[152] Example 7. In vivo evaluation of the efficacy of enzymatic hydrolysate of porcine placenta, acid hydrolysate of porcine placenta, and a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta on alcohol-associated liver injury

[153] 7.1. Подготовка образцов[153] 7.1. Sample preparation

[154] Образцы порошка готовили распылительной сушкой ферментативного гидролизата свиной плаценты, кислотного гидролизата свиной плаценты и смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты. Соответственно, для подтверждения свойств образца порошка анализировали содержание азота и содержание аминокислот в образце порошка (Таблица 8).[154] Powder samples were prepared by spray drying the enzymatic hydrolysate of porcine placenta, acid hydrolysate of porcine placenta, and a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta. Accordingly, the nitrogen content and amino acid content of the powder sample were analyzed to confirm the properties of the powder sample (Table 8).

[155][155]

[156] Таблица 8. Ферментативный гидролизат свиной плаценты, кислотный гидролизат свиной плаценты и смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты[156] Table 8. Enzymatic hydrolysate of porcine placenta, acid hydrolysate of porcine placenta and a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta

[157][157]

[158] Формула[158] Formula

[159][159]

[160][160]

[161] 7.2. Выращивание животных[161] 7.2. Animal rearing

[162] Для настоящего изобретения были приобретены белые крысы SD в возрасте 7-8 недель (250 г), за изменениями массы тела и общим состоянием здоровья которых наблюдали в течение однонедельного периода карантина и акклиматизации, а затем использовали здоровых особей крыс. В течение эксперимента все группы, кроме первой получали свободный доступ к алкогольной диете (диета с жидким этанолом Lieber-DeCarlie) для крыс, которые были стерилизованы радиацией, в течение 4-х недель, а на 4-й неделе дополнительно перорально вводили алкоголь два раза в неделю (вторник/четверг), питьевая вода отдельно не выдавалась. Температуру в помещении для содержания крыс поддерживали на уровне 23±2°С, относительную влажность - на уровне 40-60%, проветривание осуществляли 10-12 раз в час. Кроме того, освещение было отрегулировано таким образом, чтобы световой период и период темноты составляли по 12 часов.[162] For the present invention, 7-8 week old SD albino rats (250 g) were purchased, observed for changes in body weight and general health during a one-week quarantine and acclimatization period, and then healthy rats were used. During the experiment, all groups except the first were given free access to an alcohol diet (Lieber-DeCarlie liquid ethanol diet) for rats that had been sterilized by radiation for 4 weeks, and on the 4th week, alcohol was additionally administered orally twice a week (Tuesday/Thursday), drinking water was not provided separately. The temperature in the rat-keeping room was maintained at 23±2°C, the relative humidity was at 40-60%, and ventilation was performed 10-12 times per hour. In addition, the lighting was adjusted such that the light period and dark period were 12 hours each.

[163][163]

[164] 7.3. Способ приготовления алкогольной диеты (диета с жидким этанолом Lieber-DeCarlie)[164] 7.3. Method of preparation of an alcohol diet (liquid ethanol diet Lieber-DeCarlie)

[165] Алкогольную диету готовили следующим способом: 1) в химическом стакане к необходимому количеству порошкового корма (132,28 г) добавляли 821 мл воды и 67 мл алкоголя (спирта); 2) добавляли достаточное количество воды и тщательно перемешивали воду, чтобы не было комочков; 3) добавляли воды до отметки на стакане 1 л; 4) тщательно перемешивали корм, помещали корм в блендер и перемешивали в течение 30 секунд; и 5) использовали зонд для кормления (120 мл).[165] The alcohol diet was prepared as follows: 1) in a beaker, 821 ml of water and 67 ml of alcohol were added to the required amount of powdered food (132.28 g); 2) sufficient water was added and the water was thoroughly mixed to avoid lumps; 3) water was added to the 1 L mark on the beaker; 4) the food was thoroughly mixed, the food was placed in a blender and mixed for 30 seconds; and 5) a feeding tube (120 ml) was used.

[166] Когда для жидкого рациона используется обычная кормушка, потери могут быть большими, поскольку жидкий корм переливается или легко прилипает к телу животного. Кроме того, поскольку площадь контакта с воздухом увеличена, легколетучий спирт может улетучиваться или основанный на нем рацион может окисляться, тем самым сильно влияя на эксперимент. Поэтому в данном эксперименте использовали кормушку для жидкой пищи.[166] When a conventional feeder is used for liquid diet, losses may be large because the liquid feed spills over or easily sticks to the animal's body. In addition, since the area of contact with air is increased, the highly volatile alcohol may evaporate or the alcohol-based diet may oxidize, thereby greatly affecting the experiment. Therefore, a liquid feeder was used in this experiment.

[167][167]

[168] 7.4. Экспериментальные группы[168] 7.4. Experimental groups

[169] Использовались следующие экспериментальные группы.[169] The following experimental groups were used.

[170] (1) Группа нормального контроля.[170] (1) Normal control group.

[171] (2) Группа отрицательного контроля: получавшая алкогольную диету (свободный доступ к пище в течение 4 недель) + 30% спирт (1,4 г/кг, перорально) дважды на 4-й неделе).[171] (2) Negative control group: received an alcohol diet (free access to food for 4 weeks) + 30% alcohol (1.4 g/kg, orally) twice at week 4).

[172] (3) Группа положительного контроля, получавшая силимарин (100 мг/кг/день, перорально) (Yang et al, 2015) + 30% спирт (1,4 г/кг, перорально) дважды на 4-й неделе.[172] (3) Positive control group received silymarin (100 mg/kg/day, orally) (Yang et al, 2015) + 30% alcohol (1.4 g/kg, orally) twice at week 4.

[173] (4) Группа, получавшая высокие дозы смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты (1:3) дополнительно вводили 2952 мг/кг/день, перорально, + алкогольная диета (свободный доступ к пище в течение 4 недель) + 30% спирт (1,4 г/кг перорально) дважды на 4-й неделе.[173] (4) The high-dose group receiving a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta (1:3) was additionally given 2952 mg/kg/day, orally, + alcohol diet (free access to food for 4 weeks) + 30% alcohol (1.4 g/kg orally) twice at week 4.

[174] (5) Группа, получавшая средние дозы смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты: дополнительно вводили 1771 мг/кг/день, перорально + алкогольная диета (свободный доступ к пище в течение 4 недель) + 30% спирт (1,4 г/кг перорально) дважды на 4-й неделе.[174] (5) Medium dose group receiving enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta mixture: additionally administered 1771 mg/kg/day, orally + alcohol diet (free access for 4 weeks) + 30% alcohol (1.4 g/kg orally) twice at week 4.

[175] (6) Группа, получавшая низкие дозы смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты (1:3): дополнительно вводили 590 мг/кг/день, перорально + алкогольная диета (свободный доступ к пище в течение 4 недель) + 30% спирт (1,4 г/кг перорально) дважды на 4-й неделе.[175] (6) Low-dose porcine placenta enzymatic hydrolysate/porcine placenta acid hydrolysate (1:3) mixture group: additionally administered 590 mg/kg/day, orally + alcohol diet (free access for 4 weeks) + 30% alcohol (1.4 g/kg orally) twice at week 4.

[176] (7) Группа, получавшая высокие дозы ферментативного гидролизата свиной плаценты: дополнительно вводили 2511 мг/кг/день перорально + алкогольная диета (свободный доступ к пище в течение 4 недель) + 30% спирт (1,4 г/кг перорально) дважды на 4-й неделе.[176] (7) High-dose enzymatic hydrolysate of porcine placenta group: additionally administered 2511 mg/kg/day orally + alcohol diet (free access for 4 weeks) + 30% alcohol (1.4 g/kg orally) twice at week 4.

[177] (8) Группа, получавшая высокие дозы кислотного гидролизата свиной плаценты: дополнительно вводили 3282 мг/кг/день перорально + алкогольная диета (свободный доступ к пище в течение 4 недель) + 30% спирт (1,4 г/кг перорально) дважды на 4-й неделе.[177] (8) High-dose acid hydrolysate of porcine placenta group: additionally administered 3282 mg/kg/day orally + alcohol diet (free access for 4 weeks) + 30% alcohol (1.4 g/kg orally) twice at week 4.

[178][178]

[179] 7.5. Эффективность улучшения функции печени при алкогольном повреждении печени[179] 7.5. Efficacy of improving liver function in alcoholic liver injury

[180] Авторы настоящего изобретения проводили эксперимент в течение 4 недель согласно протоколу, которому предшествовало предварительное выращивание подопытных животных в течение примерно 1 недели. Тестовые образцы готовили в заданной концентрации в объеме дневной дозы и вводили перорально один раз, а алкогольную диету готовили в соответствии с предписанным способом приготовления и давали ежедневно без ограничений. На 4-й неделе тестируемые образцы дополнительно вводили дважды перорально в заданной дозе. Через 4 недели эксперимента, после 12- часового голодания отбирали образцы крови с помощью сердечной пункции, кровь центрифугировали при 3000 об/мин, а затем с помощью наборов для сравнения и анализа концентраций в крови спирта и ацетальдегида проводили количественный анализ с использованием сыворотки крови. Затем кровь, которую собирали посредством сердечной пункции для оценки гепатотоксичности, помещали в пробирку с гепарином и центрифугировали при 10000 об/мин в течение 10 минут, после чего измеряли уровень печеночных ферментов для оценки гепатотоксичности. Часть ткани брали для оценки изменений ткани печени и внутрипеченочной активности ферментов ADH и ALDH. Для всех результатов значимость между тестовыми группами была подтверждена с помощью t-критерия Стьюдента и теста ANOVA, на основании средней и стандартной ошибок.[180] The present inventors conducted the experiment for 4 weeks according to a protocol preceded by pre-rearing the experimental animals for about 1 week. The test samples were prepared at a given concentration in the amount of a daily dose and orally administered once, and the alcohol diet was prepared according to the prescribed preparation method and given daily ad libitum. On the 4th week, the test samples were additionally administered orally twice at a given dose. After 4 weeks of the experiment, after a 12-hour fast, blood samples were collected by cardiac puncture, the blood was centrifuged at 3000 rpm, and then quantitative analysis was performed using blood serum using blood alcohol and acetaldehyde concentration comparison and analysis kits. Then, the blood collected by cardiac puncture for hepatotoxicity evaluation was placed in a heparin tube and centrifuged at 10,000 rpm for 10 minutes, and then the liver enzymes were measured to evaluate hepatotoxicity. A portion of the tissue was taken to evaluate the liver tissue changes and intrahepatic ADH and ALDH enzyme activities. For all results, the significance between test groups was confirmed by Student's t-test and ANOVA test, based on the mean and standard error.

[181] В настоящем изобретении была предпринята попытка проверить эффективность влияния свиной плаценты на общее состояние печени, ее способность к синтезу, а также на воспаление печени посредством измерения количества альбумина и общего белка, которые отражают синтезирующую способность печени, включая ALP, ALT и AST, отражающих заболевания печени через показатели в сыворотке. Значения измерений для каждого показателя сыворотки приведены в Таблице 9.[181] In the present invention, an attempt was made to test the effect of porcine placenta on the general condition of the liver, its synthetic ability, and liver inflammation by measuring the amount of albumin and total protein, which reflect the synthetic ability of the liver, including ALP, ALT, and AST, which reflect liver diseases through serum indices. The measurement values for each serum index are shown in Table 9.

[182] Таким образом, сывороточный альбумин вместе с общим количеством белка является показателем синтезирующей способности печени, но значимой разницы в показателях для каждой группы выявлено не было.[182] Thus, serum albumin together with the total amount of protein is an indicator of the synthetic capacity of the liver, but no significant difference in the indicators was found for each group.

[183] Щелочная фосфатаза (ALP) в основном распределяется в печени, костной ткани, кишечном тракте, лейкоцитах и т.п., а повышение уровней происходит главным образом за счет печени и костной ткани. В настоящем изобретении при введении тестируемых веществ (силимарин, экстракт свиной плаценты) ALP имела тенденцию к снижению по сравнению с группой отрицательного контроля, особенно значительное снижение ALP было подтверждено в группе средних доз смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты; а также в группе ферментативного гидролизата свиной плаценты.[183] Alkaline phosphatase (ALP) is mainly distributed in the liver, bone tissue, intestinal tract, leukocytes, etc., and the increase in levels is mainly due to the liver and bone tissue. In the present invention, when the test substances (silymarin, porcine placenta extract) were administered, ALP tended to decrease compared with the negative control group, especially, a significant decrease in ALP was confirmed in the medium dose group of the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta; and also in the enzymatic hydrolysate of porcine placenta group.

[184] ALT и AST являются типичными представителями аминотрансфераз, которые отражают функции печени. Было подтверждено, что уровень ALT в группе отрицательного контроля, которой вводили спирт, был повышен приблизительно в 3,5 раза по сравнению с группой нормального контроля, а при введении тестируемых веществ (силимарин, экстракт свиной плаценты) уровень ALT был снижен по сравнению с группой отрицательного контроля. В частности, при введении смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты наблюдалось дозозависимое снижение уровня ALT, причем уровень ALT наиболее заметно снижался при высоких дозах смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты.[184] ALT and AST are typical representatives of aminotransferases that reflect liver function. It was confirmed that the ALT level in the negative control group administered with alcohol was increased by approximately 3.5 times compared with the normal control group, and when the test substances (silymarin, porcine placenta extract) were administered, the ALT level was decreased compared with the negative control group. In particular, when a mixture of porcine placenta enzymatic hydrolysate and porcine placenta acid hydrolysate was administered, a dose-dependent decrease in ALT was observed, and the ALT level was most significantly decreased at high doses of the mixture of porcine placenta enzymatic hydrolysate and porcine placenta acid hydrolysate.

[185] В дополнение к этому, в группе отрицательного контроля, которой вводили спирт, уровень AST был значительно повышен из-за гепатотоксичности по сравнению с группой нормального контроля, а во всех экспериментальных группах, за исключением группы высоких доз ферментативного гидролизата, уровень AST значительно снижался при введении тестовых препаратов. В частности, было подтверждено, что при введении смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты уровень AST дозозависимо снижался, как и ALT.[185] In addition, in the negative control group administered with alcohol, the AST level was significantly increased due to hepatotoxicity compared with the normal control group, and in all experimental groups except the high-dose enzymatic hydrolysate group, the AST level was significantly decreased by the administration of the test drugs. In particular, it was confirmed that when a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta was administered, the AST level was dose-dependently decreased, as was ALT.

[186][186]

[187] Таблица 9. Биохимический сывороточный тест экстракта свиной плаценты, отражающий алкогольное повреждение печени[187] Table 9. Biochemical serum test of porcine placenta extract reflecting alcohol-induced liver damage

[188][188]

[189] Кроме того, результаты измерения активности ADH, которая представляет собой фермент, метаболизирующий алкоголь в ткани печени, показали, что активность ADH была повышена в группе отрицательного контроля (0,85), которой вводили спирт, по сравнению с группой нормального контроля (0,37) (Фиг. 9). В дополнение к этому активность ADH имела тенденцию к снижению в группах в следующем порядке: силимарин > низкая доза смеси свиной плаценты > средняя доза смеси свиной плаценты > высокая доза смеси свиной плаценты. Таким образом, активность ADH в смеси снижалась в большей степени, чем в группах, получавших отдельно ферментативный гидролизат свиной плаценты и кислотный гидролизат свиной плаценты. Причем в группе, которой вводили кислотный гидролизат свиной плаценты, активность фермента значительно возрастала (фиг. 9).[189] In addition, the results of measuring the activity of ADH, which is an enzyme that metabolizes alcohol in the liver tissue, showed that the ADH activity was increased in the negative control group (0.85) administered with alcohol compared with the normal control group (0.37) (Fig. 9). In addition, the ADH activity tended to decrease in the groups in the following order: silymarin > low dose of pork placenta mixture > medium dose of pork placenta mixture > high dose of pork placenta mixture. Thus, the ADH activity in the mixture decreased to a greater extent than that in the groups separately receiving the enzymatic hydrolysate of pork placenta and the acid hydrolysate of pork placenta. Moreover, the enzyme activity increased significantly in the group administered with the acid hydrolysate of pork placenta (Fig. 9).

[190] В дополнение к этому, в результате измерения активности ALDH, фермента, метаболизирующего алкоголь в ткани печени, активность ALDH была повышена в группе отрицательного контроля, которой вводили спирт, по сравнению с группой нормального контроля, причем активность ALDH, увеличившаяся за счет фермент-индуцирующего действия, как правило, снижалась в группе, которой вводили силимарин или экстракт свиной плаценты (фиг. 10). Смесь ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты ингибировала фермент-индуцирующее действие спирта дозозависимым образом, причем активность ALDH наиболее явно ингибировалась в группе, получавшей высокие дозы смеси свиной плаценты (фиг. 10). Влияние ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты было практически одинаковым (фиг. 10). В случае смеси активность ALDH ингибировалась сильнее, чем в группах раздельного введения.[190] In addition, as a result of measuring the activity of ALDH, an alcohol-metabolizing enzyme in the liver tissue, the ALDH activity was increased in the negative control group administered with alcohol compared with the normal control group, and the ALDH activity, which was increased by the enzyme-inducing action, was generally decreased in the group administered with silymarin or porcine placenta extract (Fig. 10). The mixture of porcine placenta enzymatic hydrolysate and porcine placenta acid hydrolysate inhibited the enzyme-inducing action of alcohol in a dose-dependent manner, and the ALDH activity was most clearly inhibited in the group receiving the high dose of porcine placenta mixture (Fig. 10). The effects of porcine placenta enzymatic hydrolysate and porcine placenta acid hydrolysate were almost the same (Fig. 10). In the case of the mixture, ALDH activity was more strongly inhibited than in the separate administration groups.

[191][191]

[192] Пример получения 1. Получение функциональной оздоровительной пищевой композиции[192] Example of production 1. Production of a functional health food composition

[193] К жидкой фруктозе (0,5 мас. %), олигосахариду (2 мас. %), сахару (2 мас. %) и соли (0,5 мас. %) добавляли воду для достижения нужных концентраций, полученный раствор равномерно перемешивали с раствором, который получали растворением смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислотного гидролизата свиной плаценты (смешанных в массовом соотношении 1:3) в дистиллированной воде с концентрацией 100 мг/100 мл (0,1 мас. %) или 15000 мг/100 мл (15 мас. %) и сразу стерилизовали для приготовления функционального оздоровительного напитка.[193] Water was added to liquid fructose (0.5 wt%), oligosaccharide (2 wt%), sugar (2 wt%) and salt (0.5 wt%) to achieve the desired concentrations, the resulting solution was uniformly mixed with a solution obtained by dissolving a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta (mixed in a weight ratio of 1:3) in distilled water at a concentration of 100 mg/100 ml (0.1 wt%) or 15000 mg/100 ml (15 wt%) and immediately sterilized to prepare a functional health drink.

[194][194]

[195] Пример получения 2. Получение фармацевтической композиции[195] Example of production 2. Production of a pharmaceutical composition

[196] В 5 мл дистиллированной воды или физиологического раствора растворяли 1 мг смеси ферментативного гидролизата свиной плаценты и кислого гидролизата свиной плаценты (смешанных в массовом соотношении 1:3), стерилизовали и получали раствор для инъекций. В качестве альтернативы, после лиофилизации во флаконе смесь получали в виде порошка. Капсулы готовили путем наполнения желатиновой капсулы 100 мг гидролизата свиной плаценты, 100 мг кукурузного крахмала, 100 мг лактозы и 2 мг стеарата магния.[196] 1 mg of a mixture of enzymatic hydrolysate of porcine placenta and acid hydrolysate of porcine placenta (mixed in a weight ratio of 1:3) was dissolved in 5 ml of distilled water or saline, sterilized, and an injection solution was obtained. Alternatively, after lyophilization in a vial, the mixture was obtained as a powder. Capsules were prepared by filling a gelatin capsule with 100 mg of hydrolysate of porcine placenta, 100 mg of corn starch, 100 mg of lactose, and 2 mg of magnesium stearate.

--->--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSEQUENCE LIST

110 УБИО ИНК.110 UBIO INC.

120 ГЕПАТОПРОТЕКТОРНАЯ КОМПОЗИЦИЯ,СОДЕРЖАЩАЯ СМЕСЬ ФЕРМЕНТАТИВНОГО И КИСЛОТНОГО ГИДРОЛИЗАТОВ СВИНОЙ ПЛАЦЕНТЫ120 HEPATOPROTECTIVE COMPOSITION CONTAINING A MIXTURE OF ENZYMATIC AND ACID HYDROLYSATES OF PORCINE PLACENTA

130 PCT2021-009130 PCT2021-009

150 KR 10-2020-0178858150 KR 10-2020-0178858

151 2020-12-18151 2020-12-18

160 3160 3

170 KoPatentIn 3.0170 KoPatentIn 3.0

210 1210 1

211 4211 4

212 PRT212 PRT

213 Искусственная последовательность213 Artificial Sequence

220220

223 PEP-1 (Пептид-1)223 PEP-1 (Peptide-1)

400 1400 1

Val Val Val GluVal Val Val Glu

11

210 2210 2

211 6211 6

212 PRT212 PRT

220220

223 PEP-2 (Пептид-2)223 PEP-2 (Peptide-2)

400 2400 2

Asp Gly Leu His Leu ArgAsp Gly Leu His Leu Arg

1 51 5

210 3210 3

211 8211 8

212 PRT212 PRT

220220

223 PEP-3 (Пептид-3)223 PEP-3 (Peptide-3)

400 3400 3

Asp Asp Phe Asn Pro Ser Val HisAsp Asp Phe Asn Pro Ser Val His

1 51 5

<---<---

Claims

1. A composition for reducing liver damage, containing as an active ingredient a mixture of an enzymatic hydrolysate of porcine placenta and an acidic hydrolysate of porcine placenta, wherein the enzymatic hydrolysate of porcine placenta and the acidic hydrolysate of porcine placenta are mixed in a weight ratio of 1:0.1 to 1:10.

2. A composition for reducing liver damage caused by alcohol, drug addiction or hangover, wherein the composition contains as an active ingredient a mixture of enzymatic hydrolysate of pork placenta and acidic hydrolysate of pork placenta, wherein the enzymatic hydrolysate of pork placenta and acidic hydrolysate of pork placenta are mixed in a weight ratio of 1:0.1 to 1:10.

3. The composition according to claim 1, wherein the enzymatic hydrolysate of porcine placenta contains one or more peptides having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1-3.

4. The composition according to claim 1, wherein the enzymatic hydrolysate of pork placenta is obtained by treatment with proteinase.

5. The composition according to claim 1, wherein the acid hydrolysate of pork placenta is obtained by treatment with acid.

6. The composition according to claim 5, wherein the acid is hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid or citric acid.