RU2841261C1 - Полициклические ингибиторы кэп-зависимой эндонуклеазы для лечения или профилактики гриппа - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы I , где X представляет собой N; Y отсутствует или представляет собой -СН₂-; Z представляет собой NR¹; R¹ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила; R² представляет собой фенил, который необязательно замещен одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, С_1-6 алкила, С_1-6 галогеналкила, OCHF₂ или -ОС_1-6 алкила; R³ представляет собой водород, гидрокси или С_1-6 алкил; R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, С_1-6 алкила, C_1-6 галогеналкила, СН₂СН₂ОН, СН₂СН₂ОСН₃ или циклопропилметила; R^4a выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила; R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила; R⁶ представляет собой водород, С_1-6 алкил; или R⁴ и R⁶ могут быть взяты с атомами углерода, к которым они присоединены, с образованием С_4-6 циклоалкильной группы; R⁷ представляет собой водород или C_1-3 алкил; R⁸ представляет собой водород, С_1-6 алкил; R⁹ представляет собой водород, циано или С_1-6 алкил, где указанный алкил необязательно замещен одним-тремя атомами галогена; или его фармацевтически приемлемой соли, а также и к фармацевтическим композициям, и к способам применения указанных соединений для лечения или профилактики гриппа, опосредованным возможностью ингибирования кэп-зависимых эндонуклеаз. Технический результат: получены новые соединения, которые являются ингибиторами кэп-зависимых эндонуклеаз и могут применяться для лечения опосредованных указанной активностью заболеваний, например, гриппа. 7 н. и 9 з.п. ф-лы, 6 табл., 40 пр.

Description

Уровень техники изобретения

Вирусы гриппа, принадлежащие к семейству Orthomyxoviridae, классифицируются по типам: грипп А, В, С или D. Сезонные эпидемические заболевания, вызванные гриппом А и гриппом В, которые одновременно циркулируют по всему миру, представляют собой наибольшую проблему для общественного здравоохранения. Вирусы гриппа А характеризуются комбинацией поверхностных белков, гемагглютинина (НА, Н) и нейраминидазы (NA, N), присутствующих на вирионе. Вирусы H1N1 и H3N2 способны инфицировать и вызывать заболевания у человека. Вирусы гриппа В относятся к одной из двух линий, Victoria-подобной или Yamagata-подобной, обе из которых вызывают заболевания человека.

Частицы вируса гриппа А и В состоят из липидной мембраны клетки, выстланной матриксным белком вируса M1. Эта оболочка включает 8 сегментов генома РНК с отрицательной цепью, каждый из которых кодирует один или несколько вирусных белков. Находящиеся на поверхности белки гемагглютинин, М2 и нейраминидаза опосредуют проникновение в клетку-хозяина, сбрасывание оболочки и высвобождение зарождающихся вирусных частиц из инфицированных клеток, соответственно. Сегментированный геном упакован в виде рибонуклеопротеинового комплекса, состоящего из нуклеопротеин-покрытой РНК, связанной с гетеротримерной полимеразой. Полимераза, состоящая из субъединиц PA, РВ1 и РВ2, имеет решающее значение как для репликации вирусного генома, так и для транскрипции мРНК. Субъединица РВ1 содержит активный сайт полимеразы, в то время как субъединицы РВ2 и РА, помимо их роли в репликации генома, работают вместе для захвата (РВ2) и удаления кэпа (РА) из пре-мРНК клетки-хозяина, облегчая транскрипцию вирусной мРНК.

Сезонный грипп представляет собой респираторное заболевание, характеризующееся внезапным повышением температуры тела, кашлем, болью в горле, головной болью, миалгией и недомоганием. Симптомы варьируются от легких до тяжелых и могут привести к смерти инфицированного человека. Во всем мире от 3 до 5 миллионов человек ежегодно заболевают тяжелой формой гриппа и примерно 0,5 миллиона умирают. Люди с ослабленным иммунитетом, в том числе очень молодые люди и люди старше 65 лет, подвергаются наибольшему риску заболеваемости и смертности, связанных с гриппом.

Существуют вакцины для профилактики заболевания гриппом, однако эффективность таких вакцин варьируется от года к году, а их совокупная эффективность для здоровых взрослых оценивается в 59% (Osterholm et al, CIDRAP report (2012)). Штаммы вируса гриппа, способные избегать иммунитета хозяина, передаются избирательно; таким образом, для обеспечения защиты от циркулирующего в настоящее время вируса, вакцины против сезонного гриппа необходимо ежегодно изменять и вводить повторно. Вакцины, обеспечивающие длительную многосезонную защиту или защиту широкого спектра действия, в настоящее время недоступны.

Несколько малых молекул, нацеленных на вирус гриппа, были одобрены для терапевтического и/или ограниченного профилактического использования в одной или нескольких странах, включая ингибиторы ионных каналов М2, ингибиторы NA, аналог нуклеозида и недавно одобренный ингибитор, нацеленный на эндонуклеазную активность белка РА. В качестве терапии низкомолекулярные ингибиторы гриппа необходимо вводить в течение 48 часов после появления симптомов, чтобы они были эффективными и сокращали продолжительность вирусовыделения и респираторных симптомов. В настоящее время циркулирующие штаммы вируса гриппа устойчивы к утвержденным ингибиторам М2, поэтому использование ингибиторов М2 больше не рекомендуется. Аналог пурина фавипиравир одобрен для использования только в Японии, и соображения безопасности ограничивают его использование. Ранее, растущий уровень циркулирующих лекарственно-устойчивых вариантов вируса ограничивал эффективность нескольких ингибиторов нейраминидазы; однако после пандемии H1N1 2009 года уровень лекарственной устойчивости был низким. Устойчивость к ингибитору кэп-зависимой эндонуклеазы балоксавир марбоксилу была высокой на поздних стадиях клинических испытаний, когда вирус, несущий мутацию в аминокислоте 38 белка РА, был выделен у 9,7% взрослых и 23,4% детей участников клинического исследования (Hayden et al, N Engl J Med., 37 9 (10):913-923 (2018); Hirotsu et al, Clin Infect Dis., ciz908 (2019)). Неизвестно, могут ли эти мутантные вирусы, которые значительно снижают противовирусную активность in vitro, эффективно передаваться от человека к человеку (Omoto et al, Sci Rep., 8(1):9633 (2018); Noshi et al, Antiviral Res., 160:109-117 (2018)).

В настоящее время существует ограниченное количество вариантов лечения и профилактики гриппа и серьезные опасения по поводу устойчивости к лекарственным средствам при использовании одобренных методов лечения. Кроме того, неспособность сезонных вакцин обеспечить последовательную, надежную, долговременную, защиту широкого спектра от заболевания гриппом в сочетании с угрозой появления новых зоонозных вирусов гриппа с пандемическим потенциалом требует продолжения разработки как профилактических, так и терапевтических средств, нацеленных на вирус гриппа.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I:

и их фармацевтически приемлемым солям. Соединения формулы I являются ингибиторами кэп-зависимой эндонуклеазы и как таковые могут быть полезны при лечении, ингибировании или облегчении одного или нескольких болезненных состояний, при которых может помочь ингибирование вируса, содержащего кэп-зависимую эндонуклеазу, включая грипп. Соединения по настоящему изобретению могут быть дополнительно использованы в комбинации с другими терапевтически эффективными средствами, включая, но не ограничиваясь ими, другие лекарственные средства, подходящие для лечения гриппа. Кроме того, изобретение относится к способам получения соединений формулы I и фармацевтическим композициям, которые содержат соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I:

где X представляет собой N или СН;

Y отсутствует, представляет собой CHR⁵, -CH₂-CHR⁵-, -СН₂-CHR⁵-CH₂-, S, SO или SO₂;

Z представляет собой NR¹ или CR¹R^1a;

R¹ выбран из группы, состоящей из водорода, С_1-6 алкила, С_1-3 алкил(С_3-7 циклоалкил), С_1-3 алкил (гетероциклил), (С_1-6 алкил)OR^x и C_1-3 галогеналкила, где указанная циклоалкильная группа может быть моноциклической или бициклической и необязательно замещена одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена и R^x;

R^1a выбран из группы, состоящей из водорода, C_1-6 алкила, C_1-3 алкил (циклопропил), (C_1-6 алкил)OR^x и С_1-3 галогеналкила;

R² представляет собой арил, гетероарил, циклоалкил или гетероциклил, где указанный арил может быть моноциклическим или бициклическим, где указанные арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклил необязательно замещены одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, циклопропила, R^x, R^y, SR^x и OR^x;

R³ представляет собой водород, гидрокси, C_1-6 алкил, OR^x или С_1-3 галогеналкил;

или R² и R³ могут быть взяты с атомом углерода или гетероатомом, к которому они присоединены, с образованием дигидроиндена, 1,2,3,4-тетрагидронафталина, хромана, 2,3-дигидробензо[b]тиофена, дигидробензофурана или тиохромана;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, N₃, NH(C=O)R^x, SR^x, C_1-6 алкила, C_2-6 алкенила, O(C_1-6 алкил), O(C_2-6 алкенил), (C_1-3 алкил)R^y, O(C_1-3 алкил)R^y, R^y и гетероарила, где указанные алкильные группы необязательно замещены одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, R^x, R^y, OR^x, циано и фенила, где указанные гетероарильные и алкенильные группы необязательно замещены одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы состоящий из галогена, R^x и (C_1-3 алкил)OR^x;

или R² и R⁴ могут быть взяты с атомом углерода или гетероатомом, к которому они присоединены, с образованием дигидроиндена, 1,2,3,4-тетрагидронафталина, 2,3-дигидробензо[b]тиофена, дигидробензофурана, хромана или тиохромана;

R^4a выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила, где указанная алкильная группа необязательно замещена одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена и OR^x;

или R⁴ и R^4a могут быть взяты с атомом углерода или гетероатомом, к которому они присоединены, с образованием оксогруппы или С_4-6 циклоалкильной группы, которая может быть моноциклической или бициклической, которая необязательно замещена одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, C_1-3 алкила и C_1-3 галогеналкила;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода, C_1-6 алкила, C_1-3 алкил (циклопропил) и (C_1-6 алкил)OR^x;

R⁶ представляет собой водород, C_1-6 алкил, SR^x, NR^x(C=O)C_1-6 алкил или (С_2-3 алкенил)R^y;

или R⁴ и R⁶ могут быть взяты с атомами углерода, к которым они присоединены, с образованием С_4-6 циклоалкильной группы;

R⁷ представляет собой водород или C_1-3 алкил;

R⁸ представляет собой водород, C_1-6 алкил или (C_1-6 алкил)OR^x;

R⁹ представляет собой водород, циано или C_1-6 алкил, где указанный алкил необязательно замещен одним-тремя атомами галогена;

R^x выбран из группы, состоящей из водорода и C_1-6 алкила, где указанный алкил необязательно замещен одним-тремя атомами галогена;

R^y выбран из группы, состоящей из фенила и С_3-6 циклоалкила, где указанные фенильная и циклоалкильная группы необязательно замещены одним-тремя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, циано и R^x;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В варианте осуществления изобретения X представляет собой N. В другом варианте осуществления изобретения X представляет собой СН.

В варианте осуществления изобретения Y отсутствует. В другом варианте осуществления изобретения Y представляет собой CHR⁵. В классе варианта осуществления Y представляет собой СН₂. В другом варианте осуществления изобретения Y представляет собой -CH₂-CHR⁵-. В классе варианта осуществления Y представляет собой -СН₂-СН₂-. В другом варианте осуществления изобретения Y представляет собой -CH₂-CHR⁵-CH₂-. В классе варианта осуществления Y представляет собой -СН₂-СН₂-СН₂-. В другом варианте осуществления изобретения Y представляет собой S. В другом варианте осуществления изобретения Y представляет собой SO. В другом варианте осуществления изобретения Y представляет собой SO₂.

В варианте осуществления изобретения R¹ представляет собой метил.

В варианте осуществления изобретения R² представляет собой фенил, который необязательно замещен одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, СН₃, CF₃, OCHF₂ и ОСН₃.

В варианте осуществления изобретения R³ представляет собой водород, метил, этил или гидрокси.

В варианте осуществления изобретения R⁴ представляет собой водород, метил, этил, пропил, трифторэтил, СН₂СН₂ОН, СН₂СН₂ОСН₃ или циклопропилметил.

В варианте осуществления изобретения R⁵ представляет собой водород. В другом варианте осуществления изобретения R⁵ представляет собой метил.

В варианте осуществления изобретения R⁶ представляет собой водород.

В варианте осуществления изобретения, R⁴ и R⁶ могут быть взяты с атомами углерода, к которым они присоединены, с образованием С_4-6 циклоалкильной группы.

В варианте осуществления изобретения R⁷ представляет собой водород. В другом варианте осуществления изобретения R⁷ представляет собой метил.

Ссылка на предпочтительные классы и подклассы, изложенные выше, подразумевает включение всех комбинаций конкретных и предпочтительных групп, если не указано иное.

Конкретные варианты осуществления настоящего изобретения включают, но не ограничиваются ими, соединения 1А - 167, определенные в настоящем документе как примеры 1-40, или их фармацевтически приемлемые соли.

В объем настоящего изобретения также включена фармацевтическая композиция, которая состоит из соединения формулы I, как описано выше, и фармацевтически приемлемого носителя. Предполагается, что изобретение также включает фармацевтическую композицию, состоящую из фармацевтически приемлемого носителя и любого из соединений, раскрытых в настоящей заявке. Эти и другие аспекты изобретения будут очевидны из идей, содержащихся в настоящем документе.

Изобретение также включает композиции для ингибирования кэп-зависимой эндонуклеазы в вирусе, лечения заболевания, вызванного вирусом, имеющим кэп-зависимую эндонуклеазу, лечения гриппа и профилактики гриппа у млекопитающих, включающие соединение по изобретению в фармацевтически приемлемом носителе. Эти композиции могут необязательно включать другие противовирусные средства. Композиции могут быть внесены в кровь, продукты крови или органы млекопитающих для воздействия на желаемое ингибирование.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить в форме фармацевтически приемлемой соли. Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных оснований или кислот, включая неорганические или органические основания и неорганические или органические кислоты. Соли основных соединений, охватываемые термином «фармацевтически приемлемая соль», относятся к нетоксичным солям соединений в соответствии с настоящим изобретением, которые, как правило, получают путем осуществления взаимодействия свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой. Типичные соли основных соединений в соответствии с настоящим изобретением включают, но не ограничиваются ими, следующие: ацетат, аскорбат, адипат, альгинат, аспират, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, камсилат, карбонат, хлорид, клавуланат, цитрат, циклопентанпропионат, диэтилуксусную, диглюконат, дигидрохлорид, додецилсульфанат, эдетат, эдизилат, эстолат, эзилат, этансульфонат, муравьиная, фумарат, глюцептат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гликолиларсанилат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, 2-гидроксиэтансульфонат, гидроксинафтоат, йодид, изоникотиновая, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, метансульфонат, мукат, 2-нафталинсульфонат, напсилат, никотинат, нитрат, N-метилглюкаминаммониевая соль, олеат, оксалат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, пектинат, персульфат, фосфат/дифосфат, пимелиновая, фенилпропионовая, полигалактуронат, пропионат, салицилат, стеарат, сульфат, основный ацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тиоцианат, тозилат, триэтиодид, трифторацетат, ундеконат, валерат и т.п. Кроме того, если соединения по настоящему изобретению несут кислотный фрагмент, то их подходящие фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются ими, соли, полученные из неорганических оснований, в том числе алюминия, аммония, кальция, меди, трехвалентного железа, двухвалентного железа, лития, магния, марганца, двухвалентного марганца, калия, натрия, цинка и т.п. Также включены соли аммония, кальция, магния, калия и натрия. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, циклических аминов, дициклогексиламинов и основных ионообменных смол, такие как аргинин, бетаин, кофеин, холин, N,N-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этиламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и т.п. Также включены основные содержащие азот группы, которые могут быть кватернизованы с такими средствами, как галоиды низшего алкила, такие как метил, этил, пропил и бутилхлорид, бромиды и йодиды; диалкилсульфаты, такие как диметил, диэтил, дибутил; и диамилсульфаты, длинноцепочечные галоиды, такие как децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бромиды и йодиды, аралкилгалоиды, такие как бензил и фенэтилбромиды, и другие.

Такие соли могут быть получены известными способами, например, путем смешивания соединения по настоящему изобретению в эквивалентном количестве и раствора, содержащего желаемые кислоту, основание или подобное, а затем сбора желаемой соли путем фильтрования соли или отгонки растворителя. Соединения по настоящему изобретению и их соли могут образовывать сольваты с растворителем, таким как вода, этанол или глицерин. Соединения по настоящему изобретению могут образовывать соль присоединения кислоты и соль с основанием в одно и то же время в соответствии с типом заместителя боковой цепи.

Если соединения формулы I одновременно содержат кислотные и основные группы в молекуле, то настоящее изобретение также предусматривает кроме упомянутых форм солей внутренние соли или бетаины (цвиттерионы).

Настоящее изобретение охватывает все стереоизомерные формы соединений формулы I. Если не указана конкретная стереохимия, настоящее изобретение охватывает все такие изомерные формы этих соединений. Все центры асимметрии, которые имеются в соединениях формулы I, независимо друг от друга могут иметь (R)-конфигурацию или (S)-конфигурацию. Если связи с хиральным углеродом изображены в виде прямых линий в структурных формулах в соответствии с настоящим изобретением, то следует понимать, что формулой охватываются обе (R)- и (S)-конфигурации хирального углерода, а следовательно каждый отдельный энантиомер и их смеси. Если изображена конкретная конфигурация, то предполагается энантиомер (либо (R), либо (S) в данном центре). Подобным образом, если название соединения упоминается без хирального обозначения для хирального углерода, то следует понимать, что это название охватывает как (R), так и (S)-конфигурации хирального углерода, а, следовательно, и отдельные энантиомеры и их смеси. Получение конкретных стереоизомеров или их смесей может быть определено в примерах, в которых получают такие стереоизомеры или смеси, но это никоим образом не ограничивает включение всех стереоизомеров и их смесей в объем настоящего изобретения.

Если не указан конкретный энантиомер или диастереомер, изобретение включает все возможные энантиомеры и диастереомеры и смеси двух или более стереоизомеров, например, смеси энантиомеров и/или диастереомеров во всех соотношениях. Таким образом, энантиомеры являются предметом настоящего изобретения в энантиомерно чистой форме, как левовращающие, так и правовращающие антиподы, в форме рацематов и в форме смесей двух энантиомеров во всех соотношениях. В случае цис/транс-изомерии настоящее изобретение относится как к цис-форме, так и к трансформе, а также к смесям этих форм во всех соотношениях. Получение отдельных стереоизомеров может быть выполнено, при необходимости, путем разделения смеси традиционными способами, например, с помощью хроматографии или кристаллизации, с помощью применения стереохимически однородных исходных материалов для синтеза или с помощью стереоселективного синтеза. Необязательно дериватизация может быть выполнена перед разделением стереоизомеров. Разделение смеси стереоизомеров может быть выполнено при промежуточной стадии в ходе синтеза соединения формулы I или оно может быть выполнено на конечном рацемическом продукте. Абсолютная стереохимия может быть определена с помощью рентгеновской кристаллографии кристаллических продуктов или кристаллических промежуточных соединений, которые дериватизируют, при необходимости, с реагентом, содержащим стереогенный центр известной конфигурации. Если соединения по настоящему изобретению способны к таутомеризации, то все отдельные таутомеры, а также их смеси попадают в объем настоящего изобретения. Настоящее изобретение относится ко всем таким изомерам, а также солям, сольватам (включая гидраты) и сольватированным солям таких рацематов, энантиомерам, диастереомерам и таутомерам, и их смесям.

В соединениях по настоящему изобретению атомы могут демонстрировать свой природный изотопный состав, или один или несколько из атомов могут быть искусственно обогащены конкретным изотопом, имеющим то же атомное число, но атомную массу или массовое число, отличающиеся от атомной массы или массового числа, преимущественно встречающихся в природе. Настоящее изобретение предусматривает все подходящие изотопные вариации конкретно и в общих чертах описываемых соединений. Например, разные изотопные формы водорода (Н) включают протий (1_H) и дейтерий (2_Н). Протий является преобладающим изотопом водорода, встречающимся в природе. Обогащение дейтерием может обеспечить определенные терапевтические преимущества, такие как увеличение in vivo время полужизни или снижение необходимых дозировок, или может обеспечить соединение, применимое в качестве стандарта для характеристики биологических образцов. Изотопно-обогащенные соединения могут быть получены без излишних экспериментов с помощью обычных методик, хорошо известных специалистам в данной области, или с помощью процессов, аналогичных описываемым в общих схемах процессов и примерах в настоящем документе с использованием соответствующих изотопно-обогащенных реагентов и/или промежуточных соединений.

Когда какая-либо переменная встречается более одного раза в любом компоненте, ее определение в каждом случае не зависит от каждого другого случая. Кроме того, комбинации заместителей и переменных являются допустимыми только в том случае, если такие комбинации приводят к стабильным соединениям. Линии, проведенные в кольцевых системах от заместителей, показывают, что указанная связь может быть присоединена к любому из замещаемых атомов кольца. Если кольцевая система является бициклической, то следует понимать, что связь будет присоединена к любому из подходящих атомов на любом кольце бициклической группы.

Следует понимать, что один или несколько атомов кремния (Si) могут быть включены в соединения по настоящему изобретению вместо одного или нескольких атомов углерода специалистом в данной области для получения соединений, которые являются химически стабильными и которые могут быть легко синтезированы методами, известными в данной области из легкодоступных исходных веществ. Углерод и кремний отличаются своим ковалентным радиусом, что ведет к различиям в расстоянии связи и пространственному получению при сравнении с аналогичной связью С-элемента и Si-элемента. Эти различия приводят к тонким изменениям размера и формы соединений, содержащих кремний, по сравнению с углеродом. Специалисту в данной области будет понятно, что различия в размере и форме может привести к незначительным или драматическим изменениям активности, растворимости, потери заданной активности, свойствам укладывания и так далее. (Diass, J.О. et al. Organometallics (2006) 5:1188-1198; Showell, G.A. et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2006) 16:2555-2558).

Следует понимать, что заместители и группы заместителей на соединениях по настоящему изобретению могут быть выбраны специалистом в данной области так, чтобы получить соединения, которые являются химически стабильными и которые могут быть легко синтезированы методами, известными в данной области, а также методами, изложенными ниже, из легкодоступных исходных веществ. Если заместитель сам замещен более чем одной группой, то следует понимать, что эти множественные группы может быть на том же углероде или на других углеродах, при условии, что образуется стабильная структура. Фразу «необязательно замещенная» (одним или несколькими заместителями) следует понимать как означающую, что рассматриваемая группа либо незамещена, либо может быть замещена одним или несколькими заместителями.

Кроме того, соединения по настоящему изобретению могут существовать в аморфной форме и/или в одной или нескольких кристаллических формах, и, таким образом, все аморфные и кристаллические формы, а также их смеси, соединений формулы I, охватываются объемом настоящего изобретения. Кроме того, некоторые из соединений по настоящему изобретению могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидрат) или с традиционными органическими растворителями. Такие сольваты и гидраты, в частности, фармацевтически приемлемые сольваты и гидраты, соединений по настоящему изобретению таким же образом охватываются объемом настоящего изобретения наряду с несольватированными и ангидридными формами.

Также в случае, если в соединениях по настоящему изобретению присутствует карбоновая кислота (-СООН) или спиртовая группа, могут быть использованы фармацевтически приемлемые сложные эфиры производных карбоновых килот, такие как метиловые, этиловые, или пивалоилоксиметиловые, или ацильные производные спиртов, такие как О-ацетильные, О-пивалоильные, О-бензоильные и О-аминоацильные. Такие сложные эфиры и ацильные группы, известные в уровне техники, предусматриваются с целью модификации характеристик растворимости или гидролиза для применения в качестве составов замедленного высвобождения или пролекарств.

Любая модификация фармацевтически приемлемого пролекарства соединения по настоящему изобретению, которая обеспечивает в результате превращение in vivo в соединение, охватываемое объемом настоящего изобретения, также попадает в объем настоящего изобретения. Например, сложные эфиры необязательно могут быть получены путем эстерификации доступной карбоновокислотной группы или путем образования сложного эфира на доступной гидроксигруппе в соединении. Подобным образом, могут быть получены лабильные амиды. Фармацевтически приемлемые сложные эфиры или амиды соединений по настоящему изобретению могут быть получены для действия в качестве пролекарств, которые могут быть обратно гидролизованы в кислоту (или -COO- в зависимости от рН жидкости или ткани, в которой происходит превращение) или гидроксиформу, в частности, in vivo, и в таком качестве охватываются объемом настоящего изобретения. Примеры фармацевтически приемлемых модификаций пролекарства включают, без ограничения, -С_1-6алкильные сложные эфиры и -С_1-6алкильные, замещенные фенилом, сложные эфиры.

Следовательно, соединения общих структурных формул, вариантов осуществления и конкретные соединения, описываемые и заявляемые в настоящем документе, охватывают соли, все их возможные стереоизомеры и таутомеры, физические формы (например, аморфные и кристаллические формы), сольватные и гидратные формы и любую комбинацию таких форм, а также их соли, их пролекарственные формы и соли их пролекарственных форм, где такие формы возможны, если не указано иное.

Термины, используемые в настоящем документе, имеют свое обычное значение, и значение таких терминов является независимым в каждом его случае. Несмотря на это и за исключением случаев, когда указано иное, следующие определения применяются во всем описании и формуле изобретения. Химические названия, общие названия и химические структуры могут использоваться взаимозаменяемо для описания одной и той же структуры. Эти определения применяются независимо от того, используется ли термин сам по себе или в сочетании с другими терминами, если не указано иное. Таким образом, определение «алкил» применяется к «алкилу», а также к «алкильным» фрагментам «гидроксиалкила», «галогеналкила», «-О-алкила» и т.д.

При использовании в настоящем документе и во всем описании следующие термины, если не указано иное, следует понимать как имеющие следующие значения:

«Субъект» представляет собой человека или млекопитающее, отличное от человека. В одном варианте осуществления субъект представляет собой человека. В другом варианте осуществления субъект представляет собой примата. В другом варианте осуществления субъект представляет собой обезьяну. В другом варианте осуществления субъект представляет собой шимпанзе. В еще одном варианте осуществления субъект представляет собой макаку-резус.

Используемые в настоящем документе термины «лечение» и «терапия» относятся ко всем процессам, в которых может иметь место замедление, прерывание, устранение, контроль или остановка прогрессирования заболевания или расстройства, описанного в настоящем документе. Эти термины не обязательно означают полное устранение всех симптомов заболевания или расстройства.

Термины «предотвращение» или «профилактика», используемые в настоящем документе, относятся к снижению вероятности заражения заболеванием или расстройством, описанным в настоящем документе, или к уменьшению тяжести заболевания или расстройства, описанного в настоящем документе.

Термин «алкил», используемый в настоящем документе, относится к алифатической углеводородной группе, в которой один из атомов водорода заменен связью. Алкильная группа может быть прямой или разветвленной и содержать от примерно 1 до примерно 20 атомов углерода. В одном варианте осуществления алкильная группа содержит от примерно 1 до примерно 12 атомов углерода. В различных вариантах осуществления алкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода (С₁-С₆ алкил) или от примерно 1 до примерно 4 атомов углерода (С₁-С₄ алкил). Неограничивающие примеры алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, неопентил, изопентил, н-гексил, изогексил и неогексил. В одном варианте осуществления алкильная группа является линейной. В другом варианте осуществления алкильная группа является разветвленной. Если не указано иное, алкильная группа является незамещенной.

Термин «галогеналкил», используемый в настоящем документе, относится к алкильной группе, как определено выше, в которой один или несколько атомов водорода алкильной группы заменены атомом галогена. В одном варианте осуществления галогеналкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода. В другом варианте осуществления галогеналкильная группа замещена от 1 до 3 атомами F. Неограничивающие примеры галогеналкильных групп включают CH₂F, -CHF₂, -CF₃, -CH₂Cl и -CCl₃. Термин «C₁-C₆ галогеналкил» относится к галогеналкильной группе, имеющей от 1 до 6 атомов углерода.

Термин «галоген», используемый в настоящем документе, означает -F, -Cl, -Br или -I.

Термин «циклоалкил» означает моноциклическую или бициклическую насыщенную алифатическую углеводородную группу, имеющую указанное число атомов углерода. Например, «циклоалкил» включает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и так далее. Бициклические циклоалкильные кольцевые системы включают конденсированные кольцевые системы, в которых два кольца имеют два общих атома, и спирокольцевые системы, в которых два кольца имеют один общий атом.

Термин «арил», используемый в настоящем документе, представляет собой стабильную бициклическую или трициклическую кольцевую систему, содержащую до 10 атомов в каждом кольце, где по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, а все кольцевые атомы представляют собой углерод. Бициклические и трициклические кольцевые системы включают конденсированные кольцевые системы, в которых два кольца имеют два общих атома, и спирокольцевые системы, в которых два кольца имеют общий атом.

Термин «гетероарил», используемый в настоящем документе, представляет собой стабильную моноциклическую или бициклическую кольцевую систему, содержащую до 10 атомов в каждом кольце, где по меньшей мере одно кольцо является ароматическим, и по меньшей мере одно кольцо содержит от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группы состоящий из О, N и S. Бициклические гетероарильные кольцевые системы включают конденсированные кольцевые системы, в которых два кольца имеют общие два атома, и спиро кольцевые системы, в которых два кольца имеют общий один атом. Гетероарильные группы в объеме данного определения включают, но не ограничиваются ими: азаиндолил, бензоимидазолил, бензизоксазолил, бензофуранил, бензофуразанил, бензопиразолил, бензотриазолил, бензотиофенил, бензоксазолил, карбазолил, карболинил, циннолинил, дигидроинденил, фуранил, индолинил, индолил, индолазинил, индазолил, изобензофуранил, изоиндолил, изохинолил, изотиазолил, изоксазолил, нафталинил, нафтпиридинил, оксадиазолил, оксазолил, оксазолин, изоксазолин, пиранил, пиразинил, пиразолил, пиразолопиримидинил, пиридазинил, пиридопиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролил, хиназолинил, хинолил, хиноксалинил, тетразолил, тетразолопиридил, тиадиазолил, тиазолил, тиенил, триазолил, дигидробензоимидазолил, дигидробензофуранил, дигидробензотиофенил, дигидробензоксазолил, дигидроиндолил, дигидрохинолинил, дигидробензодиоксинил, дигидропиразолоксазинил, дигидропиразолиотиазиндиоксидил, метилендиоксибензол, бензотиазолил, бензотиенил, хинолинил, изохинолинил, оксазолил, тетра-гидрохинолин и 3-оксо-3,4-дигидро-2N-бензо[b][1,4]тиазин. Если гетероарил содержит атомы азота, то следует учитывать, что соответствующие ему N-оксиды также охватываются данным определением.

Термин «гетероцикл», «гетероциклоалкил» или «гетероциклил», используемый в настоящем документе, означает стабильную неароматическую моноциклическую или бициклическую кольцевую систему, содержащую до 10 атомов в каждом кольце, если не указано иное, содержащую от 1 до 4 гетероатомов, выбранных из группа, состоящей из О, N, S, SO или SO₂. Бициклические гетероциклические кольцевые системы включают конденсированные кольцевые системы, в которых два кольца имеют два общих атома, и спирокольцевые системы, в которых два кольца имеют общий атом. Таким образом, «гетероциклил» включает, но не ограничивается ими, следующие: азаспирононанил, азаспирооктанил, азетидинил, диоксанил, оксадиазаспиродеценил, оксаспирооктанил, оксазолидинонил, пиперазинил, пиперидинил, пирролидинил, морфолинил, тиоморфолинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, дигидропиперидинил, тетрагидротиофенил и тому подобное. Если гетероцикл содержит азот, то следует учитывать, что соответствующие ему N-оксиды также охватываются данным определением.

Диатомит «Celite®» (Fluka) представляет собой диатомовую землю и может называться «целитом».

Термин «замещенный» означает, что один или несколько атомов водорода в указанном атоме замещены атомом, выбранным из указанной группы, при условии, что нормальная валентность указанного атома при существующих условиях не превышена, и что замещение приводит к получению стабильного соединения. Комбинации заместителей и/или переменных допустимы, только если такие комбинации приводят к стабильным соединениям. Под «стабильным соединением» или «стабильной структурой» понимается соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение до приемлемой степени чистоты из реакционной смеси и составление в эффективное терапевтическое средство.

Термин «по существу очищенная форма», используемый в настоящем документе, относится к физическому состоянию соединения после того, как соединение было выделено в результате процесса синтеза (например, из реакционной смеси), природного источника или их комбинации. Термин «по существу очищенная форма» также относится к физическому состоянию соединения после того, как соединение получено с помощью процесса или процессов очистки, описанных в настоящем документе или хорошо известных специалистам в данной области (например, хроматография, перекристаллизация и т.п.), с достаточной чистоты, чтобы его можно было охарактеризовать стандартными аналитическими методиками, описанными в настоящем документе или хорошо известными специалистам в данной области.

Следует также отметить, что любой углерод, а также гетероатом с ненасыщенными валентностями в тексте, на схемах, примерах и таблицах в настоящем документе, как полагают, имеет достаточное количество атомов водорода для насыщения валентности.

Когда функциональная группа в соединении называется «защищенной», это означает, что группа находится в модифицированной форме для предотвращения нежелательных побочных реакций на защищенном месте, когда соединение подвергают реакции. Подходящие защитные группы могут быть определены специалистами в данной области, а также с помощью стандартных руководств, таких как, например, Т.W. Greene et al, Protective Groups in Organic Synthesis (1991), Wiley, New York.

Если какой-либо заместитель или переменная (например, R^x) встречается более одного раза в любом компоненте или в формуле I, его определение в каждом случае будет независимым в каждом случае, если не указано иное.

Используемый в настоящем документе, термин «композиция» включает продукт, содержащий указанные ингредиенты в указанных количествах, а также любой продукт, полученный в результате комбинации указанных ингредиентов в указанных количествах.

Изобретение также относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I и/или необязательно стереоизомерную форму соединения формулы I или фармацевтически приемлемую соль стереоизомерной формы соединения формулы I вместе с фармацевтически подходящим и фармацевтически приемлемым носителем, добавкой и/или другими активными веществами и вспомогательными веществами.

Термин «пациент», используемый в настоящем документе, означает млекопитающих, таких как приматы, человек, овцы, лошади, крупный рогатый скот, свиньи, собаки, кошки, крысы и мыши.

Термин «грипп» включает сезонный грипп, пандемический грипп, птичий грипп, свиной грипп и заболевание гриппом у человека или животных. Сезонный грипп вызывается вирусами гриппа А и/или гриппа В.

Медикаменты в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены пероральным, ингаляционным, ректальным или чрескожным введением или с помощью подкожной, внутрисуставной, внутрибрюшинной или внутривенной инъекции. Пероральное введение является предпочтительным. Возможно покрытие соединениями формулы (I) стентов и других поверхностей, которые приводятся в контакт с кровью в организме.

Настоящее изобретение также относится к процессу получения медикамента, который предусматривает приведение по меньшей мере одного соединения формулы (I) в подходящую форму введения с использованием фармацевтически подходящего и фармацевтически приемлемого носителя и необязательно дополнительных подходящих активных веществ, добавок или вспомогательных средств.

Подходящими твердыми или галеновыми лекарственными формами являются, например, гранулы, порошки, покрытые таблетки, таблетки, (микро)капсулы, суппозитории, сиропы, соки, суспензии, эмульсии, капли или инъекционные растворы и препараты с пролонгированным высвобождением активного вещества, для получения которых используют традиционные эксципиенты, такие как среды-носители, разрыхлители, связующие, покрывающие средства, вещества, способствующие набуханию, вещества, способствующие скольжению, или смазывающие средства, ароматизаторы, посластители и солюбилизаторы. Обычно используемыми вспомогательными веществами, которые могут быть упомянуты, являются магния карбонат, титана диоксид, лактоза, маннит и другие сахара, тальк, лактоза, желатин, крахмал, целлюлоза и ее производные, животные и растительные масла, такие как жир печени трески, подсолнечное, арахисовое или кунжутное масло, полиэтиленгликоль и растворители, такие как, например, стерильная вода и одно- или многоатомные спирты, такие как глицерин.

Режим введения доз с использованием ингибиторов кэп-зависимой эндонуклеазы по настоящему изобретению выбирают в соответствии с множеством факторов, включая тип, вид, возраст, массу, пол и состояние здоровья пациента; тяжесть состояния, подлежащего лечению; путь введения; почечная и печеночная функция пациента; и конкретное используемое соединение или его соль. Обычно, квалифицированный врач или ветеринар может легко определить и назначить эффективное количество лекарственного средства, необходимое для предотвращения, обращения или прекращения прогрессирования состояния.

Пероральные дозировки ингибиторов кэп-зависимой эндонуклеазы при использовании для достижения указанных эффектов будут варьироваться от примерно 0,01 мг на кг массы тела в день (мг/кг/день) до примерно 30 мг/кг/день, предпочтительно 0,025-7,5 мг/кг/день, более предпочтительно 0,1-2,5 мг/кг/день и наиболее предпочтительно 0,1-0,5 мг/кг/день (если не указано иное, количества активных ингредиентов основываются на свободном основании). Например, 80-кг пациент может получать от примерно 0,8 мг/день до 2,4 г/день, примерно 2-600 мг/день, более предпочтительно 8-200 мг/день и наиболее предпочтительно 8-40 мг/кг/день. Соответственным образом полученный медикамент для введения один раз в день, таким образом, может содержать от 0,8 мг до 2,4 г, предпочтительно от 2 мг до 600 мг, более предпочтительно от 8 мг до 200 мг и наиболее предпочтительно от 8 мг до 4 0 мг, например, 8 мг, 10 мг, 20 мг и 40 мг. Преимущественно ингибиторы кэп-зависимой эндонуклеазы можно вводить в разделенных дозах два, три или четыре раза в день. Для введения два раза в день соответственным образом полученный медикамент может сожержать от 0,4 мг до 4 г, предпочтительно от 1 мг до 300 мг, более предпочтительно от 4 мг до 100 мг и наиболее предпочтительно от 4 мг до 20 мг, например, 4 мг, 5 мг, 10 мг и 20 мг.

Внутривенно больной может получать активный ингредиент в количествах, достаточных для доставки 0,025-7,5 мг/кг/день, предпочтительно 0,1-2,5 мг/кг/день и более предпочтительно 0,1-0,5 мг/кг/день. Такие количества можно вводить множеством подходящих способов, например, большие объемы активного ингредиента с низкими концентрациями на протяжении одного длительного периода времени или несколько раз в день, низкие объемы активного ингредиента с высокими концентрациями на протяжении короткого периода времени, например, один раз в день. Как правило, может быть получен типичный внутривенный состав, который содержит активный ингредиент с концентрацией примерно 0,01-1,0 мг/мл, например, 0,1 мг/мл, 0,3 мг/мл и 0,6 мг/мл, и вводится в количествах в сутки от 0,01 мл/кг массы пациента до 10,0 мл/кг массы пациента, например, 0,1 мл/кг, 0,2 мл/кг, 0,5 мл/кг. В одном примере 8 0-кг пациент, получающий 8 мл два раза в день внутривенного состава, содержащего активный ингредиент с концентрацией 0,5 мг/мл, получает 8 мг активного ингредиента в день. В качестве буферов можно использовать глюкуроновую кислоту, L-молочную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту или любую фармацевтически приемлемую кислоту/конъюгированное основание с приемлемой буферной способностью в диапазоне рН, приемлемом для внутривенного введения. Выбор подходящего буфера и рН состава в зависимости от растворимости лекарственного средства, подлежащего введению, легко может быть сделан специалистом в данной области.

Соединения формулы I можно вводить как в виде монотерапии, так и в комбинации с другими терапевтическими средствами, включая другие противовирусные средства или средства для лечения гриппа.

Ингибиторы кэп-зависимой эндонуклеазы также можно вводить совместно с подходящими противовирусными средствами, включая, но не ограничиваясь ими, ингибиторы ионных каналов М2, ингибиторы нейраминидазы, аналоги нуклеозидов и ингибиторы, нацеленные на эндонуклеазную активность белка РА.

В качестве альтернативы или дополнительно один или несколько дополнительных фармакологически активных средств можно вводить в комбинации с соединением по изобретению. Дополнительное активное соединение (или соединения) предназначено для обозначения фармацевтически активного средства (или средств), которое активно в организме, включая пролекарства, которые превращаются в фармацевтически активную форму после введения, которая отличается от соединения по изобретению, и также включает свободную кислоту, свободное основание и фармацевтически приемлемые соли указанных дополнительных активных средств, когда такие формы продаются на коммерческой основе или химически возможны иным образом. Как правило, любое подходящее дополнительное активное средство или средства, включая, но не ограничиваясь ими, ингибиторы ионных каналов М2, ингибиторы нейраминидазы, аналоги нуклеозидов и ингибиторы, направленные на эндонуклеазную активность белка РА, можно использовать в любой комбинации с соединением по изобретению в единичной лекарственной форме (комбинация лекарственных средств с фиксированной дозой) или может быть введена пациенту в виде одной или нескольких отдельных лекарственных форм, что позволяет одновременное или последовательное введение активных средств (совместное введение отдельных активных средств).

Типичные дозы ингибиторов кэп-зависимой эндонуклеазы по изобретению в комбинации с другими подходящими ингибиторами ионных каналов М2, ингибиторами нейраминидазы, аналогами нуклеозидов и ингибиторами, нацеленными на эндонуклеазную активность белка РА, могут быть такими же, как дозы ингибиторов кэп-зависимой эндонуклеазы, вводимых без совместного введения дополнительных ингибиторов ионных каналов М2, ингибиторов нейраминидазы, аналогов нуклеозидов и ингибиторов, направленных на эндонуклеазную активность белка РА, или могут быть значительно меньше тех доз ингибиторов тромбина, которые вводятся без совместного введения ингибиторов ионных каналов М2, ингибиторов нейраминидазы, аналогов нуклеозида и ингибиторов, нацеленных на эндонуклеазную активность белка РА, в зависимости от терапевтических потребностей пациента.

Соединения вводят млекопитающему в терапевтически эффективном количестве. Под «терапевтически эффективным количеством» подразумевается количество соединения по настоящему изобретению, которое при введении млекопитающему отдельно или в комбинации с дополнительным терапевтическим средством является эффективным для лечения (т.е. предотвращения, ингибирования или облегчения) вирусного состояния или лечения прогрессирования заболевания у хозяина.

Соединения по настоящему изобретению предпочтительно вводить млекопитающему отдельно в терапевтически эффективном количестве. Однако соединения по настоящему изобретению также могут быть введены млекопитающему в комбинации с дополнительным терапевтическим средством, как определяется ниже, в терапевтически эффективном количестве. При введении в комбинации комбинация соединений предпочтительно, но не обязательно, является синергической комбинацией. Синергия, как описано, например, в Chou and Talalay, Adv. Enzyme Regul. 1984, 22, 27-55, наблюдается, если эффект (в данном случае ингибирование желаемой цели) соединений при введении в комбинации превышает аддитивный эффект каждого из соединений при отдельном введении в качестве единственного средства. В целом, синергический эффект наиболее четко проявляется при субоптимальных концентрациях соединений. Синергия может выражаться в более низкой цитотоксичности, в повышенном антикоагулянтном эффекте или в каком-либо другом полезном эффекте комбинации по сравнению с отдельными компонентами.

Фразы «введенные в комбинации» или «комбинированная терапия» означают, что соединение по настоящему изобретению и одно или несколько дополнительных терапевтических средств вводят одновременно млекопитающему, подлежащему лечению. При введении в комбинации каждый компонент может быть введен в одно и то же время или последовательно в любом порядке в различные моменты времени. Таким образом, каждый компонент может быть введен отдельно, но достаточно близко по времени, чтобы обеспечить желаемый терапевтический эффект.

Объем настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления, раскрываемыми в примерах, которые предназначены для иллюстрации некоторых аспектов настоящего изобретения, и любые варианты осуществления, которые являются функционально эквивалентными, входят в объем настоящего изобретения. Действительно, различные модификации настоящего изобретения в дополнение к тем, что показаны и описаны в настоящем документе, будут очевидными для специалистов в данной области и попадают в объем прилагаемой формулы изобретения.

ОБЩИЕ СПОСОБЫ

Несколько способов получения соединений по настоящему изобретению проиллюстрированы на следующих схемах и примерах. Исходные вещества и необходимые промежуточные соединения (Int) в некоторых случаях имеются в продаже или могут быть получены в соответствии с процедурами, описанными в литературе, или как показано в настоящем документе. Соединения по настоящему изобретению могут быть получены с использованием реакций, как показано на следующих схемах, в дополнение к другим стандартным манипуляциям, которые известны в литературе или приведены в качестве примеров в экспериментальных процедурах. Нумерация заместителей, как показано на схемах, необязательно коррелирует с нумерацией, используемой в формуле изобретения, и часто для ясности один заместитель показан присоединенным к соединению там, где возможно множество заместителей, в соответствии с определениями, приведенными выше. Реакции, используемые для получения соединений по настоящему изобретению, осуществляют с использованием реакций, показанных на схемах и примерах в настоящем документе, в дополнение к другим стандартным манипуляциям, таким как сложноэфирный гидролиз, отщепление защитных групп и т.п., как может быть известно из литературы или иллюстрируется в экспериментальных процедурах. Исходные вещества получают в соответствии с процедурами, известными в данной области, или как показано в настоящем документе.

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены различными способами. В некоторых случаях конечный продукт может быть дополнительно модифицирован, например, путем манипуляции с заместителями. Эти манипуляции могут включать, но не ограничиваться ими, реакции восстановления, окисления, алкилирования, ацилирования и гидролиза, которые широко известны специалистам в данной области. В некоторых случаях порядок проведения приведенных выше схем реакции может быть изменен для облегчения реакции или во избежание появления нежелательных продуктов реакции. Поскольку схемы являются иллюстрацией, изобретение не следует рассматривать как ограниченное описанными химическими реакциями и условиями. Получение различных исходных веществ, используемых в настоящем документе, находится в компетенции специалиста в данной области. Следующие примеры приведены для более полного понимания изобретения. Эти примеры являются только иллюстративными и не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение каким-либо образом. Абсолютная стереохимия отдельных стереоизомеров в примерах и промежуточных соединениях не определяется, если иное не указано в примере или явно в номенклатуре.

Когда хиральное разрешение было достигнуто хроматографией с использованием хиральных колонок, хиральные колонки, используемые для хирального разделения SFC, перечислены в таблицах. Некоторые из используемых хиральных колонок представляли собой CHIRALPAK AD, CHIRALCEL OJ, CHIRALPAK AS, CHIRALPAK AY, CHIRALPAK IA, CHIRALPAK AD-H и CHIRALPAK AS-H. В дальнейшем они будут обозначаться двух- или трехбуквенными сокращениями. По соглашению, быстро-элюируемый изомер из хирального разрешения всегда указывается первым в этой таблице, за которым сразу следует медленно-элюируемый изомер из того же разрешения. Если было выделено более двух изомеров, они всегда перечисляются в таблицах в порядке их элюирования, например, пик 1, затем пик 2, пик 3 и так далее.

Катализаторы используются в следующих процедурах. «Граббс II» также известен как «катализатор Граббса 2-го поколения» и (1,3-Бис(2,4,6-триметилфенил)-2-имидазолидинилиден)дихлор(фенилметилен)(трициклогексилфосфин)рутений; карбонилтрис(трифенилфосфин)родия(I) гидрид; катализатор Уилкинсона известен также как хлоридотрис(трифенилфосфин)родий(I); все они доступны от Millipore Sigma.

ОБЩАЯ СХЕМА

Способы получения соединений формулы (I)

Соединения формулы (I) могут быть получены из известных или легко полученных исходных материалов с использованием способов, известных специалистам в области органического синтеза. Способы, применимые для получения соединений формулы (I), представлены в примерах ниже и обобщены на схемах 1, 2, 3, 4, 5 и 6 ниже. Альтернативные пути синтеза и аналогичные структуры будут очевидны специалистам в области органического синтеза.

Схема 1

Диол iii получали в результате многостадийного синтеза из коммерчески доступных соединений i, альдегида iv или кетона vii. Затем его окисляли периодинаном Десс-Мартина с получением альдегида ix. Альдегид может быть подвергнут взаимодействию с соединением формулы х с получением соединения формулы xi. Прямое восстановление соединения xi с последующей циклизацией дает соединение формулы xiii. Альтернативно, защита соединения xi с последующей двухстадийной последовательностью также позволяет получить соединение формулы xiii. Хиральное разрешение для разделения диастереомеров соединения формулы xiii с последующим удалением защиты позволяет получить соединение формулы xiiii, которые соответствуют соединениям формулы (I).

Схема 2

Соединение гидразона формулы ii может быть получено путем конденсации соединения формулы i и соответствующего кетона или альдегида, которые, в свою очередь, могут впоследствии взаимодействовать с органометаллическим реагентом с получением соединения формулы iii. Гидроформилирование соединения формулы iii с последующей циклизацией с получением соединения формулы v. Хиральное разрешение для разделения диастереомеров соединения формулы v с последующим удалением защиты дает соединение формулы vi, которое соответствует соединениям формулы (I).

Схема 3

Соединение формулы iii может быть получено по существу способом, использованным на схеме 2. Двух-, трех- или четырехуглеродное удлинение соединения iii посредством кросс-метатезиса дает соединение формулы iv. Последовательное восстановление и окисление соединения iv дает альдегидное соединение формулы v, которое делает возможной дальнейшую циклизацию с получением соединения vi. Хиральное разрешение для разделения диастереомеров соединения формулы vi с последующим удалением защиты дает соединение формулы vii, которое соответствует соединениям формулы (I).

Схема 4

Соединение формулы iii может быть получено по существу способом, использованным на схеме 2. Затем его подвергали взаимодействию с соответствующим альдегидом с образованием аминаля iv, что позволяет провести реакцию обмена с замыканием цикла с получением соединения формулы v. Восстановление углерод-углеродной двойной связи и последующее хиральное разрешение для разделения диастереомеров с последующим удалением защиты дает соединение формулы vi, которое соответствует соединениям формулы (I).

Схема 5

Соединение формулы iii может быть получено по существу способом, использованным на схеме 2. Затем его подвергают взаимодействию с соответствующим органометаллическим реагентом с образованием аминаля iv, который позволяет проводить окисление с получением соединения формулы v. Циклизация и последующее хиральное разрешение для разделения диастереомеров с последующим удалением защиты дает соединение формулы vii, которое соответствует соединениям формулы (I).

Схема 6

Соединение формулы xiii, описанное на схеме 1, может быть получено из соединения формулы xi посредством восстановительной циклизации. Хиральное разрешение для разделения диастереомеров соединения формулы xiii, с последующим удалением защиты дает соединение формулы xiiii, которое соответствует соединениям формулы (I).

В способах получения соединений по настоящему изобретению, представленных на приведенных выше схемах, функциональные группы в различных фрагментах и заместителях (в дополнение к тем, которые уже явно отмечены на приведенных выше схемах) могут быть чувствительными или реакционноспособными в используемых условиях реакции и/или в присутствии используемых реагентов. Такая чувствительность/реактивность может препятствовать протеканию желаемой реакции, снижая выход желаемого продукта или, возможно, даже препятствуя его образованию. Соответственно, может быть необходимо или желательно защитить чувствительные или реакционноспособные группы на любой из рассматриваемых молекул. Защита может быть достигнута с помощью обычных защитных групп, таких как группы, описанные в Protective Groups in Organic Chemistry, ed. J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973 and in T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 3rd edition, 1999, and 2nd edition, 1991. Защитные группы могут быть удалены на удобной последующей стадии с использованием способов, известных в данной области. В качестве альтернативы интерферирующая группа может быть введена в молекулу после рассматриваемой стадии реакции.

Специалист в области органического синтеза поймет, что синтез соединений с несколькими реакционноспособными функциональными группами, такими как -ОН и NH₂, может потребовать защиты определенных функциональных групп (т.е. дериватизация с целью химической совместимости с условиями реакции). Подходящие защитные группы для различных функциональных групп этих соединений и способы их установки и удаления хорошо известны в области органической химии. Краткое описание многих из этих способов можно найти в Greene & Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 3rd edition (1999).

Специалисту в области органического синтеза также понятно, что один путь синтеза соединений формулы (I) может быть более желательным в зависимости от выбора дополнительных заместителей. Кроме того, специалистам в данной области понятно, что в некоторых случаях порядок реакций может отличаться от представленного в настоящем документе, чтобы избежать несовместимости функциональных групп, и, таким образом, соответствующим образом скорректировать путь синтеза.

Соединения формул vii, х, xv и xvii могут быть дополнительно получены с использованием способов, хорошо известных специалистам в области органического синтеза, или, например, способов, описанных в приведенных ниже примерах, для полного раскрытия объема соединений формулы (I).

Используемые исходные вещества и промежуточные соединения, полученные с использованием способов, представленных на схемах 1-6, могут быть выделены и очищены, если это необходимо, с использованием обычных методов, включая, но не ограничиваясь ими, фильтрацию, дистилляцию, кристаллизацию, хроматографию и т.п. Такие вещества могут быть охарактеризованы с использованием обычных средств, включая физические константы и спектральные данные.

Следующие сокращения могут использоваться в следующих экспериментах:

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры служат только для иллюстрации настоящего изобретения и осуществления его на практике. Примеры не следует рассматривать как ограничивающие объем или сущность настоящего изобретения. В указанных примерах все температуры представлены в градусах Цельсия, если не указано иное, и "комнатная температура" относится к температуре в диапазоне от приблизительно 20°С до приблизительно 25°С. Реакции, чувствительные к влажности или воздуху, проводят в атмосфере азота с использованием безводных растворителей и реагентов. Ход реакций определяли либо с помощью аналитической тонкослойной хроматографии (TLC), проводимой с помощью пластин с предварительным покрытием для проведения TLC Е. Merck, силикагель 60F-254, толщина слоя 0,25 мм, либо с помощью жидкостной хромато-масс-спектрометрии (LC-MS). Для данных ВЭЖХ/МС два используемые условия ВЭЖХ являлись следующими: 1) LC2 (колонка Waters С18 XTerra™ 3,5 мкм 2,1×20 мм с градиентом 10:90-98:2 об./об. CH₃CN/H₂O+об. 0,05% TFA в течение 1,25 мин, затем удерживая при 98:2 об./об. CH₃CN/H₂O+об. 0,05% TFA в течение 0,75 мин; скорость потока: 1,5 мл/мин, длина волны УФ: 254 нм); 2) LC4 (колонка Waters С18 XTerra 3,5 мкм 2,1×20 мм с градиентом 10:90-98:2 об./об. CH₃CN/H₂O+об. 0,05% TFA в течение 3,25 мин, затем удерживая при 98:2 об./об. CH₃CN/H₂O+об. 0,05% TFA в течение 0,75 мин; скорость потока: 1,5 мл/мин, длина волны УФ: 254 нм).

Анализ по массам проводили с электрораспылительной ионизацией в режиме обнаружения положительных ионов. Спектры ¹Н ЯМР регистрировали на приборах Varian или Bruker при 400-500 МГц. Химические сдвиги указаны в ppm (частях на миллион) в слабом и сильном поле от тетраметилсилана (TMS) и относятся либо к резонансам внутреннего TMS, либо растворителя (¹Н ЯМР: δ 7,27 для CDCl₃, δ 2,50 для (CD₃) (CHD₂)SO, и ¹³С ЯМР: δ 77,02 для CDCl₃, δ 39,51 для (CD₃)₂SO. Постоянная спин-спинового взаимодействия (J) выражены в герцах (Гц), и спиновые мультиплетности указаны как с (синглет), д (дублет), дд (двойной дублет), т (триплет), м (мультиплет) и уш. (уширенный). Хиральное разделение проводили на препаративных системах SFC Waters Thar 80 или Berger MG II.

Концентрирование растворов проводили на роторном испарителе при пониженном давлении или с помощью лиофилизации. Флэш-хроматографию проводили на предварительно заполненных силикагелевых колонках с использованием коммерческой системы MPLC. Соединения, описанные в настоящем документе, были синтезированы в виде рацемических смесей, если иное не указано в экспериментальных процедурах.

Пример 1

Получение соединений 1А и 1В

7-гидрокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-1a

К раствору бензальдегида (10 г, 94 ммоль) в THF (100 мл) при 0°С добавляли пент-4-ен-1-илмагния бромид (23,23 г, 134 ммоль) в атмосфере N₂. Смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 4 ч. По окончании к вышеуказанной смеси добавляли 100 мл водного раствора NH₄Cl. Смесь экстрагировали EtOAc (3×60 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г флэш-колонки с силикагелем, используя 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1a. ¹Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,34-7,38 (м, 4Н), 7,27-7,31 (м, 1Н), 5,79 (тдд, J=6,68, 10,22, 17,01 Гц, 1Н), 5,74-5,84 (м, 1Н), 4,93-5,03 (м, 2Н), 4,69 (ушир.т, J=6,56 Гц, 1Н), 2,09 (кв, J=7,12 Гц, 2Н), 1,70-1,87 (м, 3Н), 1,49-1,59 (м, 1Н), 1,34-1,45 (м, 1Н).

Стадия В - Синтез соединения Int-1b

К раствору Int-1a (8 г, 45,4 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли ацетилхлорид (5,34 г, 68,1 ммоль) и TEA (18,98 мл, 136 ммоль) при 0°С. Смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 16 ч. По окончании к вышеуказанной реакционной смеси добавляли 50 мл водного раствора NH₄Cl. Смесь экстрагировали EtOAc (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, используя 0~5% EtOAc/PE в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1b. ¹Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,27-7,38 (м, 5Н), 5,72-5,81 (м, 2Н), 4, 93-5,04 (м, 2Н), 2,06-2,10 (м, 5Н), 1, 88-1,97 (м, 1Н), 1,75-1,84 (м, 1Н), 1,45 (ttd, J=5,23, 7,51, 18,18 Гц, 1Н), 1,30-1,39 (м, 1Н).

Стадия С - Синтез соединения Int-1c

К раствору Int-1b (6 г, 27,5 ммоль) в t-BuOH (120 мл) и воде (30 мл) добавляли NaHCO₃ (23, 09 г, 275 ммоль) и перйодат натрия (35,3 г, 165 ммоль) при 20°С. Затем тетраоксид осмия (6,99 мл, 0,275 ммоль) добавляли при 20°С. Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 3 часов. По окончании, в реакционную смесь добавляли 200 мл EtOAc. Смесь фильтровали. Фильтрат промывали водой (3×50 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% EtOAc/PE в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1c. ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 9,63 (т, J=1,37 Гц, 1Н), 7, 26-7,39 (м, 5Н), 5,65 (дд, J=5,87, 7,83 Гц, 1Н), 2,42-2,48 (м, 2Н), 2,05 (с, 3Н), 1,67-1,89 (м, 2Н), 1,36-1,59 (м, 2Н).

Стадия D - Синтез соединения Int-1e

К раствору Int-1d (1 г, 3,66 ммоль) в DMF (10 мл) и АсОН (1 мл) добавляли Int-1c (1,3 г, 5,90 ммоль) при 25°С в 40 мл герметичной пробирке. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 5 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали и очищали на 80 г флэш-колонке с силикагелем с 1-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1e. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₉N₃O₅: 475,21; Найдено: 476,2 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-1f

К раствору Int-1e (1,11 г, 2,334 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли SEMC1 (0,828 мл, 4,67 ммоль) и TEA (0,976 мл, 7,00 ммоль) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 16 ч. По окончании, реакционную смесь очищали непосредственно на 80 г колонке с силикагелем с 0-5% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1f. LCMS анал. рассч. для C₃₃H₄₃N₃O₆Si: 605,3; Найдено: 606,4 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-1g

К раствору Int-1f (110 мг, 0,182 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли K₂CO₃ (25,10 мг, 0,182 ммоль) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 3 часов. По завершении смесь концентрировали и очищали с помощью препаративной ТСХ с пластиной с силикагелем с 6% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1g. LCMS анал. рассч. для C₃₁H₄₁N₃O₅Si: 563,3; Найдено: 564, 2 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-1h

К раствору Int-1g (100 мг, 0,177 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли метансульфонилхлорид (0,429 мл, 5,50 ммоль) и триэтиламин (0,099 мл, 0,710 ммоль) при 25°С.Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 16 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали с получением неочищенного продукта.

К раствору указанного выше неочищенного продукта (103 мг, 0,177 ммоль) в THF (1 мл) добавляли TBAF (1 мл, 1,000 ммоль) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной TLC с пластиной с силикагелем с 6% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-1h. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₅N₃O₃: 415,2; Найдено: 416,3 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения Int-1i и Int-1j

Int-1h (150 мг, 0,361 ммоль) разделяли с помощью SFC с получением первого элюируемого пика Int-1i и второго элюируемого пика Int-1j. Условие SFC: колонка Daicel^@ chiralpak AS (250*30 мм, 10 мкм); 45% EtOH с 0,1%NH₃H₂O; 70 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₅N₃O₃: 415,2; Найдено: 416,3 (М+Н)⁺.

Стадия I - Синтез соединения 1А и 1В

К перемешиваемой смеси Int-1i (15 мг, 0,036 ммоль) в ACN (1 мл) добавляли бромид магния (6,65 мг, 0,036 ммоль) при 20°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N₂. По окончании, очищали с помощью ВЭЖХ на колонке С18 (YMC-Actus Triart 150*30 мм*5 мкм), используя 0-100% ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 1А. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₃: 325,1; Найдено: 326,0 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,08-7,73 (м, 5Н), 7,03 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 5,84 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 5,30 (т, J=2,90 Гц, 1Н), 4,22 (дд, J=2,75, 11,60 Гц, 1Н), 3,24 (с, 3Н), 2,53 (тд, J=2,75, 15,26 Гц, 1Н), 2,16-2,33 (м, 2Н), 1,85-2,01 (м, 2Н), 1,66-1,79 (м, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 1А из примера 1, соединение 1В получали из Int-1j. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₃: 325,1; Найдено: 326,0 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,29 (ушир. с, 5Н), 6,96 (д, J=7,53 Гц, 1Н), 5,73 (д, J=7,53 Гц, 1Н), 5,28 (с, 1Н), 4,20 (дд, J=2, 76,11, 80 Гц, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 2, 49-2,54 (м, 1Н), 2,17-2,27 (м, 2Н), 1,86-1,97 (м, 2Н), 1,74 (ушир.т, J=13,55 Гц, 1Н).

Пример 2

Получение соединений 2А и 2В

1-(4-фторфенил)-7-гидрокси-5-метил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-2a

Раствор 5-(4-фторфенил)-5-оксопентановой кислоты (8 г, 38,1 ммоль) в DCM (14 0 мл) и МеОН (50 мл) добавляли по каплям к (диазометил)триметилсилану (34,3 мл, 68,5 ммоль). Полученную реакционную смесь концентрировали. К остатку добавляли 200 мл DCM при 0°С, с последующим добавлением диизобутилалюминия гидрида (133 мл, 133 ммоль). Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа, затем добавляли 10 мл МеОН и 5 мл воды при 0°С. Далее перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут и фильтровали через целит.Фильтрат концентрировали с получением Int-2a. LCMS анал. рассч. для C₁₁H₁₅FO₂: 198,1; Найдено: 181,3 (М-ОН)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-2b

Раствор Int-2a (2 г, 10,09 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли к периодинану Десса-Мартина (8,56 г, 20,18 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Концентрировали для удаления большей части DCM. К вышеуказанному остатку добавляли 20 мл DCM и смесь фильтровали. Фильтрат загружали на 80 г колонку с силикагелем, с 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-2b. LCMS анал. рассч. для C₁₁H₁₁FO₂: 194,1; Найдено: 195,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-2c

К раствору Int-2b (1,8 г, 6,59 ммоль) в DMF (5 мл) и АсОН (0,5 мл) добавляли Int-1d (1,4 г, 7,21 ммоль) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 2 ч. По завершении смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 1-5% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-2c. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₄FN₃O₄: 449,2; Найдено: 450,4 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-2d

К перемешиваемому раствору Int-2c (500 мг, 1,112 ммоль) в DCM (8 мл) и МеОН (40 мл) добавляли боргидрид натрия (42,1 мг, 1,112 ммоль) при комнатной температуре. Перемешивали при этой температуре в течение 30 минут. По окончании, реакцию гасили 1 мл 1 н водного раствора HCl и концентрировали. Остаток загружали на 80 г колонку с силикагелем с 0-100% 30% EtOH в EtOAc/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-2d. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₆FN₃O₄: 451,5; Найдено: 452,4 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-2e

Смесь Int-2d (410 мг, 0,908 ммоль) и 2-(трибутил-15-фосфанилиден)ацетонитрила (438 мг, 1,816 ммоль) в толуоле (10 мл) нагревали при 120°С в течение 4 ч. По завершении смесь охлаждали и полученную реакционную смесь загружали в колонку с силикагелем 80 г с 0-100% 30% EtOH в EtOAc/гексан в качестве элюента для удаления примеси фосфина. Затем смесь загружали на колонку С18 (100 г) с 0-100% ACN в воде в качестве элюента, с получением минорного изомера Infc-2e и основного изомера Int-2f. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₄FN₃O₃: 433,2; Найдено: 434,4 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-2g и Int-2h

Int-2h (185 мг, 0,427 ммоль) разделяли с помощью SFC с получением первого элюируемого пика Int-2g и второго элюируемого пика Int-2h. Условие SFC: колонка Daicel^@ chiralpak AS-H (250*21 мм, 10 мкм); 45% EtOH с 0,2% DIPA; 70 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₄FN₃O₃: 433,2; Найдено: 434,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения 2А и 2В

В раствор Int-2g (52 мг, 0,120 ммоль) в МеОН (3 мл) добавляли палладий на угле (25,5 мг, 0,02 4 ммоль). Полученную смесь перемешивали под водородом из баллона при комнатной температуре в течение 30 минут. По окончании, фильтровали через целит и фильтрат загружали на колонку 50 г ISCO^@ С18 с 0-100% ACN в воде (с модификатором 0,01% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 2А. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₈FN₃O₃: 343,1; Найдено: 344,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,19 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 7,05 (ушир., 5Н), 6,14 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,35 (с, 1Н), 4,30 (дд, J=11,7, 2,7 Гц, 1Н), 3,27 (с, 3Н), 2, 59-2,52 (м, 1Н), 2,32-2,19 (м, 2Н), 1,96 (дд, J=22,6, 14,9 Гц, 2Н), 1,90 (с, 1Н), 1, 82-1,70 (м, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 2А из примера 2, соединение 2 В получали из Int-2h. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₈FN₃O₃: 343,1; Найдено: 344,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,20 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 7,04 (ушир., 5Н), 6,15 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,36 (с, 1Н), 4,29 (дд, J=11,7, 2,5 Гц, 1Н), 3,26 (с, 2Н), 2,56 (д, J=15,4 Гц, 1Н), 2,31-2,19 (м, 1Н), 2,01-1,94 (м, 1Н), 1,91 (д, J=13,9 Гц, 1Н), 1,81-1,69 (м, 1Н).

Примеры в таблице 1 получали с использованием процедур, аналогичных описанным в примере 2, из соответствующего исходного вещества.

Пример 3

Получение соединений 17А и 17В

1-(2-(дифторметокси)-5-фторфенил)-7-гидрокси-5-метил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-17a

К перемешиваемому раствору Int-1c (500 мг, 1,830 ммоль) и 2-(дифторметокси)-5-фторбензальдегида (417 мг, 2,195 ммоль) в сухом диоксане (8 мл) при комнатной температуре добавляли TFA (141 мкл, 1,830 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. По окончании смесь концентрировали. Остаток повторно растворяли в DCM, и добавляли TEA (306 мкл, 2,195 ммоль). Смесь очищали на колонке с силикагелем 120 г с использованием системы Isco с 0-20% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-17a. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₁₈F₃N₃O₄: 445,1; найдено 446,3 (М+Н)⁺

Стадия В - Синтез соединения Int-17b

К перемешиваемому раствору Int-17a (500 мг, 1,123 ммоль) в сухом THF (18 мл) добавляли 4-пентен-1-магния бромид (0,5 М в 2-Me-THF) (6736 мкл, 3,37 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 14 мин. По окончании, реакцию гасили дополнительным количеством воды (~30 мл) и экстрагировали EtOAc (3×60 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 8 0 г флэш-колонки с силикагелем, с использованием системы Isco с 0-100% EtOH-EtOAc (3:1)/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-17b. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₈F₃N₃O₄: 515,2; найдено 516,4 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-17c

Во флакон 40 мл с перемешиваемым раствором Int-17b (210 мг, 0,407 ммоль) в THF (3 мл) и воде (1 мл) добавляли тетраоксид осмия (2,5% в t-BuOH) (102 мкл, 8,15 мкмоль) при комнатной температуре, затем добавляли перйодат натрия (261 мг, 1,222 ммоль). Флакон закрывали предохранительной крышкой и перемешивали при комнатной температуре в течение 7 ч. По окончании, смесь разбавляли EtOAc (~100 мл), твердое вещество фильтровали и промывали EtOAc (~20 мл). Фильтрат дважды промывали 10% водным раствором Na₂S₂O₃ (30 мл × 2). Органическую фазу отделяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением Int-17c. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₆F₃N₃O₅: 517,2; найдено 518,4 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-17d

Во флакон 40 мл с перемешиваемым раствором Int-17c (184 мг, 0,356 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли АсОН (539 мкл) при комнатной температуре. Флакон закрывали предохранительной крышкой и перемешивали при 120°С в течение 8 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, затем очищали с помощью колонки 100 г Gold С18 с обращенной фазой на системе Isco с 0-100% ацетонитрил-вода (с буфером 0,05% TFA) в качестве растворителя для элюирования. Фракции нужной массы объединяли и лиофилизировали, затем повторно растворяли в DCM (~15 мл), добавляли TEA (49,6 мкл, 0,356 ммоль), и смесь пропускали через колонку с силикагелем 40 г, используя систему Isco с EtOH/EtOAc (3:1)/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-17d. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₄F₃N₃O₄: 499,2; найдено 500,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-17e и Int-17f

Соединение Int-17d (48,5 мг, 0,097 ммоль) разделяли хиральной SFC с получением первого элюируемого пика Int-17e (21,5 мг, 0,043 ммоль) и второго элюируемого пика Int-17f (21,8 мг, 0,044 ммоль). Условие SFC: колонка Daicel^@ chiralpak AD-H (250*21 мм, 10 мкм); 20% IPA с 0,2% DIPA; 70 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₄F₃N₃O₄: 499,2; Найдено: 500,3 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения 17А и 17В

В круглодонную колбу (50 мл) добавляли Pd на угле (22,37 мг, 0,021 ммоль), затем добавляли Int-17f (21 мг, 0,042 ммоль) в EtOH (12 мл). Колба была снабжена водородным баллоном. Систему дегазировали и повторно заполняли Н₂ дважды. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере Н₂ в течение 45 мин. По окончании катализатор отфильтровывали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью 30 г колонки Isco С18 gold с 0-100% ацетонитрил/вода (забуференной 0,05% TFA) в качестве элюента с получением соединения 17А. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₈F₃N₃O₄: 409,1; найдено 410,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,61 (д, J=9,1 Гц, 1Н), 7,18 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 7,12 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 7,05 (д, J=4,2 Гц, 1Н), 6,58 (т, J=73,2 Гц, 1Н), 6,05 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 5,33 (с, 1Н), 4,84 (с, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,55 (д, J=15,4 Гц, 1Н), 2,24 (т, J=14,6 Гц, 2Н), 1,95-1,93 (м, 2Н), 1,77-1,74 (м, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 17 В из примера 3, соединение 17А получали из Int-17e. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₈F₃N₃O₄: 409,1; найдено 410,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,61 (д, J=8,6 Гц, 1Н), 7,31-6,96 (м, 3Н), 6,57 (т, J=73,2 Гц, 1Н), 6,03 (д, J=7, 2 Гц, 1Н), 5,33 (с, 1Н), 4,84 (с, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,55 (д, J=15,7 Гц, 1Н), 2,24 (т, J=14,1 Гц, 2Н), 2,0-1,9 (м, 2Н), 1,77-1,74 (м, 1Н).

Пример 4

Получение соединений 18А и 18В

7-гидрокси-1,5-диметил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-18a

К перемешиваемой суспензии Int-1c (5670 мг, 20,75 ммоль) и ацетофенона (5 мл, 41,5 ммоль) в сухом диоксане (40 мл) при комнатной температуре добавляли TFA (1758 мкл, 22,82 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. По окончании смесь концентрировали. Остаток повторно растворяли в 40 мл DCM, затем добавляли TEA (3181 мкл, 22,82 ммоль). Смесь загружали на 330 г флэш-колонку с силикагелем с 0-20% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-18a. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₁N₃O₃: 375, 2; Найдено: 376,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-18b

К тщательно перемешиваемому раствору Int-18a (5380 мг, 14,33 ммоль) в сухом THF (18 мл) добавляли аллилмагния бромид (1,0 М в диэтиловом эфире) (4,01Е+04 мкл, 40,1 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 15 мин. По окончании, реакцию гасили добавлением насыщенного NH₄Cl (~50 мл) и разделяли между EtOAc (100 мл) и водой (~50 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc еще два раза (2×80 мл). Объединенный органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 220 г флэш-колонки с силикагелем с 0-100%EtOH-EtOAc (3:1)/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-18b. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₇N₃O₃: 417,2; Найдено: 418,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-18c

В сосуд высокого давления 350 мл с дициклогексил(2',6'-диметокси-[1,1'-бифенил]-2-ил)фосфаномом (S-phos) (703 мг, 1,731 ммоль), димером хлор(1,5-циклооктадиен)иридия(I) [Ir(cod)Cl]₂ (240 мг, 0,357 ммоль) и DCC (3682 мг, 17,84 ммоль) добавляли Int-18b (2980 мг, 7,14 ммоль) и муравьиную кислоту (1,1 мл, 28,6 ммоль) в сухом ацетонитриле (70 мл) в атмосфере N₂ при комнатной температуре. Флакон закрывали предохранительной крышкой. Смесь нагревали до 75°С в течение ночи и затем 90°С в течение трех дней. По окончании реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc (~60 мл), затем фильтровали. Твердое вещество промывали EtOAc/DCM (20 мл/20 мл). Объединенный фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г флэш-колонки с силикагелем с 0-100%EtOH-EtOAc (3:1)/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-18c и Int-18d. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₇N₃O₃: 429,2; Найдено: 430,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-18d

Во флакон 40 мл с перемешиваемым раствором Int-18c (230 мг, 0,535 ммоль) в DMF (6 мл) добавляли АсОН (609 мкл) при комнатной температуре. Флакон закрывали предохранительной крышкой. Смесь перемешивали при 120°С в течение 3 дней. По окончании, смесь охлаждали до комнатной температуры, затем очищали на колонке С18 100 г с обращенной фазой с 0-100% ацетонитрил-вода (с буфером 0,05% TFA) до Int-18d. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₇N₃O₃: 429, 2; Найдено: 430,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-18e и Int-18f

Int-18d (974 мг, 2,268 ммоль) разделяли с помощью SFC с получением первого элюируемого пика Int-18e и второго элюируемого пика Int-18f. Условие SFC: колонка Chiral OD-H (250*21 мм, 10 мкм); 45% EtOH; 70 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₇N₃O₃: 429,2; Найдено: 430,3 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения 18А и 18В

В круглодонную колбу (150 мл) с Int-18e (420 мг, 0,978 ммоль) добавляли палладий на угле (10%) (312 мг, 0,293 ммоль), затем добавляли EtOH (80 мл) в атмосфере N₂. Колба была снабжена водородным баллоном. Систему дегазировали и повторно заполняли Н₂ дважды. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. По окончании катализатор отфильтровывали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью 150 г колонки С18 с обращенной фазой с 0-100% ACN в воде в качестве растворителя для элюирования, с получением 18А. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃: 339,2; Найдено: 340,6 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,58 (д, J=5,7 Гц, 2Н), 7,38 (д, J=7,3 Гц, 3Н), 6,52 (д, J=7,1 Гц, 1Н), 5,73 (д, J=7,1 Гц, 1Н), 5,30 (с, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 2,60 (д, J=13,3 Гц, 2Н), 2,30 (т, J=13,0 Гц, 1Н), 1,89 (дд, J=24,2, 13,9 Гц, 3Н), 1,65 (с, 3Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 18А из примера 4, соединение 18В получали из Int-18f. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃: 339,2; Найдено: 340,6 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,59 (д, J=5,7 Гц, 2Н), 7,40 (д, J=7,8 Гц, 3Н), 6,71 (д, J=6,9 Гц, 1Н), 6,13 (д, J=7,0 Гц, 1Н), 5,36 (с, 1Н), 3,33 (с, 3Н), 3,26 (с, 2Н), 2, 67-2, 59 (м, 1Н), 2,34 (т, J=14,0 Гц, 1Н), 1,99-1,87 (м, 3Н), 1,65 (с, 3Н).

Примеры в таблице 2 получали с использованием процедур, аналогичных описанным в примере 4, из соответствующего исходного вещества.

Пример 5

Получение соединений 56А, 56В, 56С и 56D

5-(циклопропилметил)-7-гидрокси-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-56a

Раствор метил 3-(бензилокси)-1-((трет-бутоксикарбонил)амино)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-2-карбоксилата (5 г, 13,36 ммоль) в EtOH (50 мл) добавляли к циклопропилметанамину (4,70 г, 40,1 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 8 ч. По окончании смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 220 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-5% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Вос-защищенного промежуточного соединения (5,5 г, 11,97 ммоль).

Вышеуказанное промежуточное соединение (5 г, 12,09 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли к TFA (12 мл) при 0°С. Реакционный раствор перемешивали при 30°С в течение 1 ч. По окончании смесь концентрировали и очищали на 220 г флэш-колонке с силикагелем, элюируя 0-10% МеОН в DCM с получением Int-56a. LCMS анал. рассч. для C₁₇H₁₉N₃O₃: 313,1; Найдено: 314,1 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-56b

К раствору Int-56a (200 мг, 0, 638 ммоль) в DMF (2,0 мл) и АсОН (0,2 мл) добавляли Int-1c (211 мг, 0, 957 ммоль) при 20°С в 40 мл герметичной пробирке. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 4 ч. По завершении смесь концентрировали и очищали на 50 г флэш-колонке с силикагелем с 0-10% МеОН в DCM с получением Int-56b. LCMS анал. рассч. для C₃₀H₃₃N₃O₅: 515,2; Найдено: 515,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-56c

К раствору Int-56b (600 мг, 1,164 ммоль) в THF (10 мл) добавляли NaHMDS (2,327 мл, 2,327 ммоль) при -78°С в атмосфере N₂. Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 30 минут, затем добавляли SEMC1 (0,248 мл, 1,396 ммоль). Полученную реакционную смесь медленно нагревали до комнатной температуры, в течение 2 ч. По окончании, гасили NH₄Cl (1 н, 20 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×30 мл). Объединенный органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 100% EtOAc в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-56c и Int-56d. LCMS анал. рассч. для C₃₆H₄₇N₃O₆Si: 645,3; Найдено: 646,4 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-56d

К раствору Tnt-56с (160 мг, 0,248 ммоль) в МеОН (3 мл) добавляли K₂CO₃ (41,1 мг, 0,297 ммоль) при 20°С. Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 3 ч. По окончании, добавляли воду (10 мл). Смесь экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением Int-56d. LCMS анал. рассч. для C₃₄H₄₅N₃O₅Si: 603,3; Найдено: 604,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-56e

К раствору Int-56d (145 мг, 0,240 ммоль) в DCM (3 мл) добавляли триэтиламин (0,1 мл, 0,720 ммоль) и метансульфонилхлорид (0,054 г, 0,480 ммоль) при 0°С. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. По окончании, добавляли 10 мл DCM, и смесь промывали 15 мл 0,5 н. раствора HCl и насыщенным солевым раствором. Органические вещества сушили над Na₂SO₄ и концентрировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт использовали в следующей реакции без очистки.

Вышеуказанный неочищенный продукт (210 мг, 0,337 ммоль) в THF (2 мл) добавляли к TBAF (2,70 мл, 2,70 ммоль) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. По завершении смесь концентрировали и очищали на колонке С18 (YMC-Actus Triart С18 150*30 мм*5 мкм) с 10%-100% ACN в воде (с 0,5% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-56e. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₉N₃O₃: 455,2; Найдено: 456,2 М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-56f и Int-56g

Int-23e (20 мг, 0,044 ммоль) разделяли с помощью SFC с получением первого элюируемого пика Int-56f и второго элюируемого пика Int-56g. Условие SFC: колонка Regis^@ Whelk O1 (250*21 мм, 5 мкм); 50% EtOH с 0,1% NH₃H₂O в качестве модификатора; 70 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₉N₃O₃: 455,2; Найдено: 456,2 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения 56А и 56В

К перемешиваемой смеси Int-56f (7 мг, 0,015 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) добавляли бромид магния (2,83 мг, 0,015 ммоль) при 20°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N₂. По окончании, смесь очищали на колонке С18 (YMC-Actus Triart С18 150*30 мм*5 мкм) с 10%-100% ACN в воде (с 0,5% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением 23А. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₃: 365,2; Найдено: 366,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-d⁴) δ 7,30 (ушир. с, 5Н), 7,10 (д, J=7,34 Гц, 1Н), 5,95 (д, J=7,34 Гц, 1Н), 5,53 (ушир. с, 1Н), 4,22 (дд, J=2,69, 11,74 Гц, 1Н), 4,15 (дд, J=8,07, 14,67 Гц, 1Н), 3,25-3,29 (м, 1Н), 2,58 (ушир. д, J=15,41 Гц, 1Н), 2,24-2,32 (м, 2Н), 1,97 (ушир. д, J=13,69 Гц, 1Н), 1,85-1,92 (м, 1Н), 1,72-1,81 (м, 1Н), 1,14-1,21 (м, 1Н), 0,54-0,62 (м, 2Н), 0,41-0,46 (м, 2Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 56А из примера 5, соединение 56В получали из Int-56g. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₃: 365,2; Найдено: 366,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-d⁴) δ 7,30 (ушир. с, 5Н), 7,07 (д, J=7,58 Гц, 1Н), 5,89 (д, J=7,58 Гц, 1Н), 5,52 (ушир. с, 1Н), 4,12-4,23 (м, 2Н), 3,24-3,30 (м, 1Н), 2,57 (ушир. д, J=15,41 Гц, 1Н), 2,24-2,32 (м, 2Н), 1,96 (ушир. д, J=13,6 9 Гц, 1Н), 1,88 (ушир. д, J=13,69 Гц, 1Н), 1,74 (кв, J=13, 78 Гц, 1H), 1,12-1,21 (м, 1H), 0,53-0,63 (м, 2H), 0,41-0,46 (м, 2H).

Стадия H - Синтез соединения Int-56h

К раствору Int-56b (350 мг, 0, 67 9 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли K₂CO₃ (113 мг, 0,815 ммоль) и перемешивали при 20°С в течение 3 часов. По завершении реакции, добавляли воду (10 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные органические вещества сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-56h. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₃₁N₃O₄: 473,2; Найдено: 474,2 (М+Н)⁺.

Стадия I - Синтез соединения Int-56i

К раствору Int-56h (295 мг, 0,623 ммоль) в Т₃Р (1586 мг, 2,492 ммоль) добавляли метансульфоновую кислоту (59,9 мг, 0,623 ммоль) в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 50°С в течение 16 ч. По окончании, реакционную смесь очищали на колонке С18 (YMC-Actus Triart С18 150*30 мм*5 мкм) с 10%-100% ACN в воде (с 0,5% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-56i. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₉N₃O₃: 455,2; Найдено: 456,2 (М+Н)⁺.

Стадия J - Синтез соединения Int-56j и Int-56k

Int-56i (80 мг, 0,176 ммоль) разделяли SFC с получением первого элюируемого пика Int-56j и второго элюируемого пика Int-56k. Условие SFC: колонка Daicele chiralpak AD-H (250*30 мм, 10 мкм); 30% EtOH с 0,1% NH₃H₂O в качестве модификатора; 70 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₉N₃O₃: 455, 2; Найдено: 456, 2 (М+Н)⁺.

Стадия K - Синтез соединения 56С и 56D

К перемешиваемой смеси Int-56j (30 мг, 0,066 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) добавляли бромид магния (12,12 мг, 0,066 ммоль) при 20°С и перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N2. По окончании, реакционную смесь очищали на колонке С18 (YMC-Actus Triart С18 150*30 мм*5 мкм) с 10%-100% ACN в воде (с 0,5% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением 56С. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₃: 365,2; Найдено: 366,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-d⁴) δ 8,29 (д, J=7,09 Гц, 1Н), 7,20-7,27 (м, 1Н), 7,15 (ушир.т, J=7,46 Гц, 2Н), 7,05 (ушир. д, J=7,58 Гц, 2Н), 6,89 (д, J=7,09 Гц, 1Н), 5,39-5,44 (м, 1Н), 4,71 (ушир. д, J=6,36 Гц, 1Н), 3,73 (дд, J=7,58, 14,43 Гц, 1Н), 3,28 (ушир. д, J=6,85 Гц, 1Н), 2,67 (ушир. д, J=13,45 Гц, 1Н), 2,46-2,59 (м, 1Н), 2,19-2,43 (м, 3Н), 1,87-1,97 (м, 1Н), 1,06-1,17 (м, 1Н), 0,49-0,62 (м, 2Н), 0,38 (ушир. д, J=2,93 Гц, 2Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 56С из примера 5, соединение 56D получали из Int-56k. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₃: 365,2; Найдено: 366,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-d⁴) δ 8,31 (д, J=7,34 Гц, 1Н), 7,20-7,27 (м, 1Н), 7,15 (ушир.т, J=7,46 Гц, 2Н), 7,04 (ушир. д, J=7,58 Гц, 2Н), 6,92 (д, J=7,34 Гц, 1Н), 5,40-5,44 (м, 1Н), 4,71 (ушир. д, J=6,36 Гц, 1Н), 3,73 (дд, J=7,58, 14,67 Гц, 1Н), 3,26-3,30 (м, 1Н), 2,67 (ушир. д, J=13,45 Гц, 1Н), 2,47-2,59 (м, 1Н), 2,19-2,43 (м, 3Н), 1,87-1,97 (м, 1Н), 1,05-1,17 (м, 1Н), 0,48-0,63 (м, 2Н), 0,33-0,43 (м, 2Н).

Пример 6

Получение соединений 57А и 57В

4-гидрокси-6-метил-11-фенил-6а,7,8,9,10,11-гексагидро-3Н-пиридо[1',2':1,6][1,2,4]триазино[2,3-а]азепин-3,5(6Н)-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-57a

К раствору магния (3,35 г, 138 ммоль) в безводном THF (15 мл) добавляли 12 (2,335 г, 9,20 ммоль) и 6-бромгекс-1-ен (2,5 мл, 18,40 ммоль). Полученную смесь кипятили с обратным холодильником при 80°С в течение 10 мин. Охлаждали до комнатной температуры. Еще 4 экв. 6-бромгекс-1-ена (10,0 мл, 73,6 ммоль) в безводном THF (15 мл) добавляли по каплям. Смесь перемешивали при 80°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и использовали непосредственно на следующей стадии (28,33 мл в THF примерно 2,165 М).

Стадия В - Синтез соединения Int-57b

К раствору Int-1c (1 г, 3,66 ммоль) в EtOH (10 мл) добавляли бензальдегид (0, 777 г, 7,32 ммоль) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 10 ч. По завершении смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-100% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-57b. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₁₉N₃O₃: 361, 1; Найдено: 362, 2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-57c

К раствору Int-57b (100 мг, 0, 277 ммоль) в THF (5 мл) добавляли Int-57a (1 мл, 2,147 ммоль, 2,147 М в THF) при 0°С и перемешивали при этой температуре в течение 1 ч. По окончании, гасили водн. NH₄Cl (10 мл). Смесь экстрагировали 2×50 мл EtOAc. Объединенные органические вещества сушили над MgSO₄ и концентрировали. Остаток очищали с помощью 8 0 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-57c. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₃₁N₃O₃: 445,2; Найдено: 446,3 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-57d

К раствору Int-57c (630 мг, 1,414 ммоль) в воде (15 мл) и t-BuOH (15 мл) добавляли перйодат натрия (1512 мг, 7,07 ммоль), затем калия осмата (VI) дигидрат (130 мг, 0,353 ммоль) при 25°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. По окончании, гасили водн. Na₂SO₃ (50 мл) и экстрагировали DCM (3×50 мл). Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-57d. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₉N₃O₄: 447,2; Найдено: 448,1 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-57e

К раствору Int-57d (400 мг, 0,894 ммоль) в ACN (30 мл) добавляли MsOH (0,174 мл, 2,68 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 2,5 ч. По окончании смесь концентрировали и очищали препаративной ВЭЖХ, используя колонку Boston Green ODS (150*30 мм*5 мкм) с водой ACN в воде (модификатор 0,1%TFA) с получением Int-57e (150 мг, 0,349 ммоль). LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₇N₃O₃: 447,2; Найдено: 430,2 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-57f и Int-57g

Int-57e (250 мг, 0,582 ммоль) разделяли SFC с получением первого элюируемого пика Int-57f и второго элюируемого пика Int-57g. Условие SFC: колонка Daicele chiralpak IG (250*30 мм, 10 мкм); 55% EtOH с 0,1% NH₃H₂O; 80 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₇N₃O₃: 447,2; Найдено: 430,2 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения 57А и 57В

К раствору Int-57f (80 мг, 0,186 ммоль) в ACN (5 мл) добавляли MgBr₂ (171 мг, 0,931 ммоль) при 25°С и смесь перемешивали в течение 4 ч. По окончании, добавляли МеОН (1 мл). Смесь очищали препаративной ВЭЖХ на колонке Phenomenex Synergi С18 (150*30 мм*4 мкм) с использованием 0-100% ACN в воде (с 0,1% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением 57А (55,57 мг, 0,164 ммоль). LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃: 339,1; Найдено: 340,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (400 МГц, метанол-d⁴) δ 7,85 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 7,17 (ушир. с, 5Н), 6,29 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,33 (дд, J=7,6, 9,05 Гц, 1Н), 4,79 (ушир. д, J=10,8 Гц, 1Н), 3,28 (с, 3Н), 2,53-2, 67 (м, 2Н), 2,10-2,27 (м, 2Н), 2,05 (ушир. дд, J=3,67, 13,94 Гц, 1Н), 1,90-1,99 (м, 2Н), 1,59-1,72 (м, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 57А из примера 6, соединение 57 В получали из Int-57g. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃: 339,1; Найдено: 340,2 (М+Н)⁺. ¹H ЯМР (400 МГц, метанол-d⁴) δ 7,85 (д, J=7,34 Гц, 1Н), 7,17 (ушир. с, 5Н), 6,27 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,33 (дд, J=7,5, 9,2 Гц, 1Н), 4,79 (ушир. д, J=10,5 Гц, 1Н), 3,28 (с, 3Н), 2,51-2,67 (м, 2Н), 2, 09-2,25 (м, 2Н), 2,05 (ушир. дд, J=3,8, 13,8 Гц, 1Н), 1,89-2,00 (м, 2Н), 1, 60-1,73 (м, 1Н).

Пример 7

Получение соединений 58А, 58В, 58С и 58D

4-(бензилокси)-6-метил-12-фенил-6,6а,7,8,9,10,11,12-октагидропиридо[1',2':1,6][1,2,4]триазино[2,3-а]азоцин-3,5-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-58a

К раствору бензальдегида (5 г, 47,1 ммоль) в THF (50 мл) добавляли аллилмагния бромид (141 мл, 141 ммоль, 1 M в Et₂O) при 0°С. Смесь перемешивали при 25°С в течение 4 ч. По окончании, смесь гасили водн. NH4Cl (25 мл) и экстрагировали EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колонки с силикагелем с 0-10% EtOAc в петролейном эфире с получением Int-58a. ¹H ЯМР (400 МГц, Хлороформ-d) δ: 7,26~7,35 (м, 5Н), 5, 77-5, 85 (м, 1Н), 5,12-5,18 (м, 2Н), 4,72 (д, J=8 Гц, 1Н), 2,48-2,52 (м, 2Н), 2,16 (brs, 1Н).

Стадия В - Синтез соединения Int-58b

К раствору 1-фенилбут-3-ен-1-ола (500 мг, 3,37 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TEA (0, 940 мл, 6,75 ммоль) и метансульфонилхлорид (0, 394 мл, 5,06 ммоль) при 0°С, и смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. По окончании, смесь гасили водой (10 мл) и экстрагировали МТВЕ (3×10 мл). Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением 1-фенилбут-3-ен-1-ил метансульфоната, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия С - Синтез соединения Int-58с

К раствору Int-1d (350 мг, 0,85 9 ммоль) в DMF (1 мл) и АсОН (0,1 мл) добавляли пент-4-енал (38,7 мг, 1,288 ммоль) при 25°С. Раствор перемешивали при 120°С в течение 4 ч. По окончании, смесь фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на 12 г флэш-колонке с силикагелем с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-58c. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃: 339,2; Найдено: 340,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-58d

К раствору Int-58c (750 мг, 2,210 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли NaH (265 мг, 6,63 ммоль) и 1-фенилбут-3-ен-1-ил метансульфонат (750 мг, 3,31 ммоль) при 0°С. Раствор перемешивали при 0°С в течение 1 ч. По окончании, реакцию гасили водным NH₄Cl (5 мл) и разбавляли водой (20 мл). Смесь экстрагировали DCM (3×30 мл). Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 40 г флэш-колонки с силикагелем с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-58d. LCMS анал. рассч. для C₂₉H₃₁N₃O₃: 469, 2; Найдено: 470, 2 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединений Int-58d-P1, Int-58d-P2, Int-58d-P3 и Int-58d-P4

Смесь Int-58d (200 мг, 0,426 ммоль) разделяли с получением смеси Int-58d-P1 и Int-58d-P2 (110 мг, 0,223 ммоль) в качестве первых элюируемых изомеров и смеси Int-58d-P3 и Int-58d-P4 (90 мг, 0,168 ммоль) в качестве вторых элюируемых изомеров. Условие SFC: REGIS (с, s) WHELK-O1 колонка (250 мм * 30 мм, 5 мкм); 55% EtOH с 0,1% NH₃H₂O; 60 мл/мин.

Смесь Int-58d-P1 и Int-58d-P2 (110 мг, 0,234 ммоль) далее разделяли с помощью SFC с получением первого элюируемого пика Int-25d-P1 и второго элюируемого пика Int-58d-P2. Условие SFC: DAICEL CHIRALPAK AD-H (250 мм * 30 мм, 5 мкм); 55% EtOH с 0,1% NH₃H₂O; 65 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₉H₃₁N₃O₃: 469,2; Найдено: 470,2 (М+Н)⁺.

Смесь Int-58d-P3 и Int-58d-P4 (90 мг, 0,192 ммоль) далее разделяли с помощью SFC с получением первого элюируемого пика Int-58d-P3 и второго элюируемого пика Int-58d-P4. Условие SFC: Phenomenex-Amylose-1 (250 мм * 30 мм, 5 мкм); 55% EtOH с 0,1% NH₃H₂O; 50 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₉H₃₁N₃O₃: 469, 2; Найдено: 470,2 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединений Int-58e-P1, Int-58e-P2, Int-58е-Р3 и Int-58e-P4

К раствору Int-58d-P2 (50 мг, 0,106 ммоль) в DCE (8 мл) добавляли (1,3-димезитилимидазолидин-2-илиден)(2-изопропоксибензилиден)рутения(VI) хлорид (13,34 мг, 0,021 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°С в течение 16 ч. По окончании, реакцию гасили водой и экстрагировали DCM (3×10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (10 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной TLC с с элюированием 0-10% МеОН в DCM с получением (Z)-4-(бензилокси)-6-метил-12-фенил-6,6а,7,8,11,12-гексагидропиридо[1',2':1,6][1,2,4]триазино[2,3-а]азоцин-3,5-диона в виде смеси.

Вышеупомянутую смесь в сочетании с другой партией (150 мг) очищали с помощью YMC-Actus Pro C18 (150 мм * 30 мм 5 мкм) с ACN в воде (с модификатором 0,1% IFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением смеси, которую дополнительно очищали с помощью препаративной TLC с элюированием 0-10% МеОН в DCM с получением Int-58e-P1 в качестве первого пика и Int-58e-P2 в качестве второго пика. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₇N₃O₃: 441,2; Найдено: 442,4 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, используемому для получения соединений Int-58e-P1 и Int-58e-P2 из примера 7, соединения Int-58е-Р3 и Int-58e-P4 получали из Int-58d-P3. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₇N₃O₃: 441,2; Найдено: 442,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединений 58A, 58В, 58С и 58D

К раствору Int-58e-P4 (25 мг, 0, 057 ммоль) в МеОН (2 мл) добавляли Pd на угле (24,10 мг, 0,011 ммоль). Реакционную смесь дегазировали под вакуумом и продували Н2 3 раза. Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 1 ч под баллоном с Н₂. По окончании, реакционную смесь фильтровали и очищали препаративной ВЭЖХ с использованием колонки YMC-Actus Pro С18 (150 мм * 30 мм 5 мкм) с ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением 58D. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃: 353,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГЦ, метанол-d⁴) δ 7,96 (дд, J=7,2, 3,7 Гц, 1Н), 6,78-7,61 (м, 5Н), 6,64 (ушир.т, J=7,2 Гц, 1Н), 5,15 (ушир. д, J=11,6 Гц, 1Н), 4,57-4,66 (м, 1Н), 3,00 (с, 3Н), 2,32-2,48 (м, 1Н), 1,55-2,09 (м, 8Н), 1,23-1,39 (м, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 58D из примера 7, соединения 58А, 58В и 58С получали из Int-58e-P1, Int-58e-P2 и Int-58e-P3.

58А: LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃: 353,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺, 1Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,83-8,06 (м, 1Н), 7,02-7,36 (м, 5Н), 6,37-6,66 (м, 1Н), 5,13 (ушир. д, J=9, 6 Гц, 1Н), 4,39-4,65 (м, 1Н), 2,97-3,13 (м, 3Н), 2,24-2,48 (м, 1Н), 1,51-2,07 (м, 9Н),

58В: LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃: 353,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,84-7,99 (м, 1Н), 6,98-7,54 (м, 5Н), 6,49-6,75 (м, 1Н), 5,15 (ушир. дд, J=11,4, 3,0 Гц, 1Н), 4,43-4,64 (м, 1Н), 2,98-3,10 (м, 3Н), 2,30-2,46 (м, 1Н), 1,54-2,10 (м, 8Н), 1,31 (ушир. д, J=10,7 Гц, 1Н),

58С: LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃: 353,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,65-7,87 (м, 1Н), 6,87-7,27 (м, 5Н), 6,29-6,55 (м, 1Н), 4,90-5,11 (м, 1Н), 4,20-4,49 (м, 1Н), 2,83-3,01 (м, 3Н), 2,12-2,32 (м, 1Н), 1, 38-1, 92 (м, 9Н),

Пример 8

Получение соединений 59А и 59В

7-гидрокси-4а,5-диметил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-59b

К раствору Int-59b (1,2 г, 4,21 ммоль) в THF (130 мл) добавляли аллилмагния бромид (12,62 мл, 12,62 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь нагревали до 0°С и перемешивали в течение 2 ч. По окончании, реакционную смесь гасили водн. NH₄Cl, затем разбавляли водой (2 мл) и экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенный органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с использованием 40 г флэш-колонки с силикагелем на ISCO^® с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-59b. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₂₁N₃O₃: 327,2; Найдено: 328,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-59c

К смеси Int-59b (200 мг, 0,611 ммоль) в DCE (10 мл) добавляли этилакрилат (0,455 мл, 4,28 ммоль) и Граббс II (207 мг, 0,244 ммоль) в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 58°С в течение 15 ч. По окончании смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 12 г колонки с силикагелем на ISCO^® с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-59c. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₅N₃O₅: 399,2; Найдено: 400,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-59d.

К смеси Int-59c (200 мг, 0,501 ммоль) в МеОН (4 мл) добавляли палладий на угле (53,3 мг, 0,501 ммоль). Смесь дегазировали и повторно заполняли Н2 и перемешивали при 20°С в течение 2 ч. По окончании, смесь фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью 2 4 г колонки с силикагелем на ISCO^® с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-59d. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₇N₃O₅: 401,2; Найдено: 402,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-59e

К смеси Int-59d (200 мг, 0,4 98 ммоль) в THF (4 мл) добавляли метилмагния бромид (1,495 мл, 1,495 ммоль, 3М в Et₂O) в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 20°С в течение 0,5 ч. По окончании, реакционную смесь гасили водным раствором NH₄Cl (10 мл). Смесь экстрагировали DCM (2×10 мл). Объединенные органические слои сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением Int-59е. Неочищенный продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₄N₃O₄: 371,2; Найдено: 372,2 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-59f

К смеси Int-59е (7 мг, 0,019 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) добавляли метансульфоновую кислоту (20 мг, 0,2 08 ммоль) в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 70°С в течение 1,5 ч. По окончании смесь концентрировали. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с использованием колонки Phenomenex Synergi С18 (150 мм * 30 мм * 4 мкм) с 0-100% ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-59f. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃: 353,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺.

Стадия F - Получение соединений Int-59f-P1 и Int-59f-P2

Int-59f (33,5 мг, 0,095 ммоль) разделяли SFC с получением первого элюируемого пика Int-59f-P1 и второго элюируемого пика Int-59f-P2. Условие SFC: колонка Daicel^@ chiralpak AD (250*30 мм, 10 мкм); 40% IPA с 0,1% NH₃H₂O в качестве модификатора; 60 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃: 353,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединений 59А и 59В

К перемешиваемой смеси Int-59f-P1 (15 мг, 0,042 ммоль) в ACN (3 мл) добавляли бромид магния (23,44 мг, 0,127 ммоль) при 20°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 2 ч в атмосфере N₂. По окончании, реакцию гасили МеОН (0,2 мл). Смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ на колонке Phenomenex Synergi С18 (150 мм * 30 мм * 4 мкм) с 0-100% ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением 59А. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃: 339,2; Найдено: 340,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,01-7,50 (м, 5Н), 6,01 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 4,12 (дд, J=2,90, 11,75 Гц, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,59 (ушир. дд, J=2,52, 15,34 Гц, 1Н), 2,17-2,30 (м, 1Н), 2,03-2,15 (м, 1Н), 1,98 (ушир. д, J=13,73 Гц, 1Н), 1,86-1,94 (м, 1Н), 1,72 (tg, J=3,47, 13,61 Гц, 1Н), 1,43 (с, 3Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 59А из примера 8, соединение 59 В получали из Int-59f -Р2. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁H₃O₃: 339,2; Найдено: 340,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,07-7,46 (м, 5Н), 6,01 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 4,12 (дд, J=2,82, 11,83 Гц, 1Н), 3,20-3,29 (м, 3Н), 2,59 (дд, J=2,67, 15,34 Гц, 1Н), 2,25 (дкв, J=4,04, 12,84 Гц, 1Н), 2,05-2,16 (м, 1Н), 1,98 (тд, J=2,86, 13,66 Гц, 1Н), 1,85-1,93 (м, 1Н), 1,66-1,78 (м, 1Н), 1,40-1,46 (м, 3Н).

Пример 9

Получение соединений 60А и 60В

6-гидрокси-4-метил-1-фенил-2,3,3а,4-тетрагидро-1Н-пиридо[2,1-f]пирроло[1,2-b] [1,2,4]триазин-5,7-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-60a

К раствору Int-1c (1 г, 3,66 ммоль) в EtOH (10 мл) добавляли бензальдегид (0,777 г, 7,32 ммоль) в атмосфере N₂. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 10 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали и очищали на 40 г флэш-колонке с силикагелем с 0~10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-60a. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₁₉N₃O₃: 361,1; Найдено: 362,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-60b

Раствор 10-(3,5-диметоксифенил)-9-мезитил-1,3,6,8-тетраметоксиакридин-10-ия тетрафторбората (8,87 мг, 0,014 ммоль), Na₂CO₃ (73,3 мг, 0,692 ммоль) и Int-60a (50 мг, 0,138 ммоль) в диоксане (1384 мкл) барботировали N₂ в течение 2 мин, затем добавляли 1,1,1,3,3,3-гексаметил-2-(триметилсилил)трисилан-2-ол (36,6 мг, 0,138 ммоль) и 3-бром-1,1-диметоксипропан (101 мг, 0,553 ммоль). Полученную смесь облучали лампами Kessil (Kessil KSH150B Grow Light Blue (34 Вт) на расстоянии 7 см от реакционных сосудов в течение 15 ч при 20°С) в течение 16 ч. По окончании, неочищенный продукт очищали на колонке с обращенной фазой С18 (YMC-Actus Triart С18 150*30 мм*5 мкм) с 30-100% ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) с получением Int-60b. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₃₁N₃O₅: 465,2; Найдено: 466,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-60c

К раствору Int-60b (10 мг, 0,021 ммоль) в ACN (1 мл) и H₂O (0,2 мл) добавляли MsOH (4,18 мкл, 0, 064 ммоль). Смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. По окончании, реакционную смесь очищали непосредственно препаративной ВЭЖХ (колонка: YMC-Actus Triart С18 150*30 мм*5 мкм) с 30-100% ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) с получением Int-60c. LCMS анал. рассч. для C₂₄H₂₃N₃O₃: 401,2; Найдено: 402,0 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-60d и Int-60e

Int-27c (35 мг, 0,087 ммоль) разделяли SFC с получением первого элюируемого пика Int-60d и второго элюируемого пика Int-60е. Условие SFC: колонка Daicel^@ chiralpak AD-H (250*30 мм, 5 мкм); 30% EtOH с 0,1% NH₃H₂O; 60 мл/мин. LCMS анал. рассч. для C₂₄H₂₃N₃O₃: 401,2; Найдено: 402,0 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения 60А

К раствору Int-60d (17 мг, 0,042 ммоль) в ACN (2 мл) добавляли бромид магния (39,0 мг, 0,212 ммоль) при 25°С и перемешивали в течение 16 ч. По окончании, смесь разбавляли МеОН (0,2 мл) и очищали ВЭЖХ с обращенной фазой (Agela DuraShell С18 150 мм * 25 мм * 5 мкм) с 0-100% ACN в воде (с 0,1% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением 60А. LCMS анал. рассч. для C₁₇H₁₇N₃O₃: 311,2; Найдено: 312,1 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,34-7,46 (м, 1Н), 7,38 (ушир. д, J=8,24 Гц, 4Н), 7,07 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 6,23 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 5,41 (д, J=3,97 Гц, 1Н), 4,30-4,52 (м, 1Н), 2,50-2,72 (м, 3Н), 2,12-2,19 (м, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 60А из примера 9, получали соединение 60В. LCMS анал. рассч. для C₁₇H₁₇N₃O₃: 311,2; Найдено: 312,1 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,33-7,49 (м, 5Н), 7,09 (д, J=7,48 Гц, 1Н), 6,27 (д, J=7,32 Гц, 1Н), 5,42 (д, J=4,12 Гц, 1Н), 4,36-4,51 (м, 1Н), 2,50-2,74 (м, 3Н), 2,05-2,25 (м, 1Н).

Пример 10

Получение соединений 61А и 61В

б-гидрокси-1,4-диметил-1-фенил-2,3,3а,4-тетрагидро-1Н-пиридо[2,1-f]пирроло[1,2-b][1,2,4]триазин-5,7-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-61a

К перемешиваемому раствору Int-17b (420 мг, 1,006 ммоль) в безводном THF (12 мл) при 0°С добавляли 9-борабицикло[3,3,1]нонан (0,5 М в THF) (8,05 мл, 4,02 ммоль) по каплям. Полученный раствор перемешивали при 0°С в течение 0,5 ч, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. К реакционной смеси дополнительно добавляли 9-BBN (0,5 М в THF) (4,02 мл, 2,012 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре еще 2 часа. По окончании, к охлажденной смеси раствор ацетата натрия (825 мг, 10,06 ммоль) добавляли по каплям в воде (5 мл) и перекись водорода (35% в воде) (1,321 мл, 15,09 ммоль) при 0°С.Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 3 0 мин, затем при комнатной температуре в течение 5 ч. Полученную реакционную смесь затем разделяли между EtOAc (100 мл) и водой (25 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc еще два раза (2×50 мл). Объединенные органические фазы промывали 10% Na₂S₂O₃ в воде (~50 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 100 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-100% EtOAc в EtOH (3:1)/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-61a. LCMS т/z рассч. для C₂₅H₂₉N₃O₄: 435,2; найдено 436,4 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-61b

К перемешиваемой суспензии Int-61a (240 мг, 0,551 ммоль) в DCM (9184 мкл) добавляли периодинан Десса-Мартина (280 мг, 0,661 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. По окончании, реакционную смесь разбавляли DCM (200 мл) и промывали насыщ. NaHCO₃ (~50 мл), и затем 10% Na₂S₂O₃ в воде (~50 мл). Органическую фазу отделяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением Int-61b. LCMS m/z рассч. для C₂₅H₂₇N₃O₄: 433,2; найдено 434,4 (M+H)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-61c

К перемешиваемому раствору Int-61b (100 мг, 0,231 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли АсОН (262 мкл) при комнатной температуре. Затем смесь перемешивали при 120°С в течение 2 ч. По окончании, смесь охлаждали до комнатной температуры, затем очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием системы Isco (колонка RediSepRf Gold С18 100 г) с 0-100% ацетонитрил-вода (забуференной 0,05% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением формы соли TFA Int-61c (88 мг, 0,166 ммоль). Вышеупомянутый продукт затем повторно растворяли в DCM, нейтрализовали добавлением TEA (32 мкл, 0,23 ммоль), и повторно очищали флэш-хроматографией с использованием системы Isco (40 г колонка с силикагелем gold) с 0-100% EtOAc-EtOH (3:1)/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением в форме свободного основания Int-62c. LCMS m/z рассч. для C₂₅H₂₅N₃O₃: 415,2; найдено 416,3 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-61d и Int-61e

Int-28c (32 мг, 0,077 ммоль) разделяли SFC с получением первого элюируемого пика Int-61d и второго элюируемого пика Int-61е. Условие SFC: колонка Daicel^@ chiralpak OJ-H (250*21 мм, 5 мкм); 30% IPA с 0,2% DIPA; 50 мл/мин. LCMS m/z рассч. для C₂₅H₂₅N₃O₃: 415,2; найдено 416,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения 61А

В круглодонную колбу добавляли палладий (10% на угле) (17,93 мг, 0,017 ммоль), затем добавляли Int-61d. (14 мг, 0,034 ммоль) в EtOH (12 мл). Колба была снабжена водородным баллоном. Систему дегазировали и продували Н₂ дважды. Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере Н₂ в течение 40 мин. По окончании катализатор отфильтровывали, и фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с использованиемсистемы Gilson System (колонка Sunfire Prep 30×150 мм) с 5-100% ацетонитрил-вода (забуференной 0,05% TFA) в качестве растворителя для элюирования, с получением 61А. LCMS m/z рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₃: 325,1; найдено 326,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,65 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,45 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 7,35 (т, J=7,0 Гц, 1Н), 7,16 (д, J=1,4 Гц, 1Н), 6,35 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,47 (д, J=3,7 Гц, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,59 (дд, J=14,0, 7,2 Гц, 1Н), 2,51-2,41 (м, 1Н), 2,40-2,30 (м, 1Н), 2,23 (дд, J=12,5, 7,8 Гц, 1Н), 1,44 (с, 3Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 61А из примера 10, соединение 61В получали из Int-61е. LCMS m/z рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₃: 325,1; найдено 326,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d4) δ 7,65 (д, J=8,1 Гц, 2Н), 7,46 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 7,36 (т, J=1,1 Гц, 1Н), 7,23 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 6,48 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,49 (д, J=3,7 Гц, 1Н), 3,33 (с, 9Н), 3,18 (с, 3Н), 2,60 (дд, J=14,2, 7,3 Гц, 1Н), 2,53-2,41 (м, 1Н), 2,41-2,31 (м, 1Н), 2,24 (дд, J=12,6, 7,9 Гц, 1Н), 1,44 (с, 3Н).

Примеры в таблице 3 получали с использованием процедур, аналогичных описанным в примере 10, из соответствующего исходного вещества.

Пример 11

Получение соединений 64А, 64В, 64С и 64D

2-аллил-1-(2-хлорфенил)-7-гидрокси-5-метил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-64a

В атмосфере азота, TMS-диазометан (16,68 мл, 33,4 ммоль, 2М) добавляли к раствору 5-(2-хлорфенил)-5-оксопентановой кислоты (5,04 г, 22,24 ммоль) в смеси DCM (50 мл) и метанола (16,6 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, затем концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-50% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64a. LCMS анал. рассч. для C₁₂H₁₃ClO₃: 240,1; Найдено: 241,2 (М+Н)⁺

Стадия В - Синтез соединения Int-64b

К раствору Int-64a (4,64 г, 19,28 ммоль) в THF (20 мл) в атмосфере N₂ добавляли бис(триметилсилил)амид калия (19,33 мл, 19,33 ммоль, 1М) при комнатной температуре, затем 3-бромпроп-1-ен (3,50 г, 28,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По окончании, добавляли метанол (10 мл). Смесь концентрировали и добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (50 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные органические фракции сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на 80 г флэш-колонке с силикагелем с 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением метил 4-(2-хлорбензоил)гепт-6-еноат. Затем вещество разделяли на хиральной колонке AD-H (50х 250 мм, 5 мкм) с 10% МеОН в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64b-пик1 и Int-64b-пик2. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₁₇ClO₃: 280,1; Найдено: 281,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-64с-пик 1

К раствору Int-64b-пик1 (993 мг, 3,54 ммоль) в THF (35,4 мл) добавляли LAH (18 9 мг, 4,98 ммоль) порционно при 0°С и перемешивали в течение 1 ч. По окончании, к вышеуказанной реакционной смеси последовательно добавляли воду (0,38 мл), 15% NaOH (0,19 мл), и воду (0,95 мл). Затем разбавляли EtOAc (10 мл) и добавляли безводный MgSO₄ (4 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч, фильтровали и концентрировали с получением Int-64с-пик 1. LCMS анал. рассч. для C₁₄H₁₉ClO₂: 254,1; Найдено: 277,3 (M+Na)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-64с-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64с-пик 2. LCMS анал. рассч. для C₁₄H₁₉ClO₂: 254,1; Найдено: 277,2 (M+Na)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-64d-пик1

Периодинан Десса-Мартина (3090 мг, 7,29 ммоль) добавляли к раствору Int-64с-пик1 (928 мг, 3,64 ммоль) в дихлорметане (36,40 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. По окончании, реакционную смесь фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64d-пик1. LCMS анал. рассч. для C₁₄H₁₅ClO₂: 250,08; Найдено: 251,15 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-64d-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64d-пик 2. LCMS анал. рассч. для C₁₄H₁₅ClO₂: 250,0; Найдено: 250,9 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-64e-пик 1

В герметичную пробирку, Int-64d-пик1 (710 мг, 2,83 ммоль) добавляли к 1-амино-3-(бензилокси)-N-метил-4-оксо-1,4-дигидропиридин-2-карбоксамиду (774 мг, 2,83 ммоль) в DMF (5,5 мл) и АсОН (0,550 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 1,5 ч. По окончании, реакционную смесь охлаждали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64e-пик 1 (1902 мг, 2,158 ммоль). LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₈ClN₃O₄: 505,18; Найдено: 506,26 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-64е-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64е-пик 2. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₈ClN₃O₄: 505,2; Найдено: 506.3 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-64f-пик 1

К перемешиваемому раствору Int-64e-пик 1 (199 мг, 0,393 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли DIEA (0,137 мл, 0,787 ммоль), затем SEMC1 (0,070 мл, 0,393 ммоль) при 0°С. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По завершении смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 40 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64f-пик 1. LCMS анал. рассч. для C₃₄H₄₂ClN₃O₅Si: 635,26; Найдено: 636,52 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-64f-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64f-пик 2. LCMS анал. рассч. для: C₃₄H₄₂ClN₃O₅Si: 635,3; Найдено: 636,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-64g-пик 1

В атмосфере N₂, Int-64f-пик 1 (193 мг, 0,303 ммоль) в смеси дихлорметана (4 мл) и метанола (2 мл) охлаждали до -5°С, затем добавляли NaBH₄ (9,18 мг, 0,243 ммоль) и смесь перемешивали в течение 1,5 ч. По окончании, реакцию гасили 0,4 мл 1н HCl и концентрировали. Остаток очищали с помощью 40 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64g-пик 1. LCMS анал. рассч. для C₃₄H₄₄ClN₃O₅Si: 637,27; Найдено: 638, 54 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-64g-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64g-пик 2. LCMS анал. рассч. для C₃₄H₄₄ClN₃O₅Si: 637,3; Найдено: 638,4 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения Int-64h-пир 1

Раствор Int-64g-пик 1 (166 мг, 0,260 ммоль) в 5,0 мл DCM охлаждали до 0°С и добавляли триэтиламин (0,181 мл, 1,30 ммоль), затем метансульфонилхлорид (0,07 мл, 0,898 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. По окончании, реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл) и промывали водой. Органический слой отделяли, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением Int-64b-пик1. LCMS анал. рассч. для C₃₅H₄₆ClN₃O₇SSi: 715,25; Найдено: 716,36 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-64h-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64h-пик 2. LCMS анал. рассч. для C₃₅H₄₆ClN₃O₇SSi: 715,3; Найдено: 716,4 (М+Н)⁺.

Стадия I - Синтез соединения Int-64i-пик1а

Тетрабутиламмония фторид (1,577 мл, 1,577 ммоль, 1М) добавляли к раствору Int-64h-пик 1 (226 мг, 0,315 ммоль) в 5 мл THF. Полученную реакционную смесь нагревали при 60°С в течение 2 ч. Добавляли дополнительно тетрабутиламмония фторид (1,577 мл, 1,577 ммоль, 1М) и смесь нагревали в течение 1,5 ч. По окончании полученную реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 24 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением рацемической смеси. Смесь разделяли с помощью хиральной AS-H колонки (21×250 мм, 5 мкм) с 40% IPA в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-64i-пик1а и Int-64i-пик1b. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₈ClN₃O₃: 489,18; Найдено: 490,35 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-31i-пик 1 из примера 11, получали соединение Int-64i-пик 2а и Int-64i-пик2b. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₂₈ClN₃O₃: 489,2; Найдено: 490,3 (М+Н)⁺.

Стадия J - Синтез соединения 64А

К раствору Int-64i-пик 1а (20 мг, 0,041 ммоль) в 1 мл DMF добавляли хлорид лития (17,30 мг, 0,408 ммоль) и перемешивали при 100°С в течение 2,5 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с использованием обращенно-фазовой колонки С18 с 0-100% ацетонитрила в воде (0,05% TFA модификатор) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 64А. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₂ClN₃O₃: 399,1; Найдено: 400,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,83 (дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1Н), 7,48 (тд, J=7,5, 1,4 Гц, 1Н), 7,41-7,25 (м, 2Н), 7,06 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,95 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 5,65 (дддд, J=16,8, 10,2, 7,9, 6,5 Гц, 1Н), 5,33 (т, J=3,0 Гц, 1Н), 5,02-4,95 (м, 1Н), 4,95-4,87 (м, 1Н), 4,79 (д, J=10,6 Гц, 1H), 3,26 (с, 3Н), 2,58 (дкв, J=15,4, 3,2 Гц, 1Н), 2,44-2,22 (м, 2Н), 2,07-1,93 (м, 1Н), 1,89-1,72 (м, 2Н), 1,48 (qd, J=14,1, 3,4 Гц, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 64А из примера 11, получали соединение 64В. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₂ClN₃O₃: 399,13; Найдено: 400,34 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,84 (дд, J=7,8, 1,6 Гц, 1Н), 7,49 (тд, J=7,6, 1,4 Гц, 1Н), 7,39-7,25 (м, 2Н), 7,10 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 6,02 (дд, J=7,4, 1,3 Гц, 1Н), 5,65 (дддд, J=16,8, 10,2, 7,9, 6,5 Гц, 1Н), 5,35 (т, J=3,1 Гц, 1Н), 4,98 (ддд, J=10,1, 2,1, 1,0 Гц, 1Н), 4,92 (дд, J=17,0, 1,8 Гц, 1Н), 4,79 (д, J=10,6 Гц, 1Н), 3,27 (с, 3Н), 2,59 (дкв, J=15,6, 3,2 Гц, 1Н), 2,33 (дддт, J=48,0, 15,4, 14,0, 4,0 Гц, 2Н), 2,07-1,93 (м, 1Н), 1,89-1,73 (м, 2Н), 1,48 (тдд, J=14,0, 11,9, 3,5 Гц, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 64А из примера 11, получали соединение 64С. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₂ClN₃O₃: 399,1; Найдено: 400,2 (М+Н)+, 1Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,84 (дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1Н), 7,49 (тд, J=7,5, 1,4 Гц, 1Н), 7,35 (ддд, J=8,8, 7,2, 1,6 Гц, 1Н), 7,29 (дд, J=8,1, 1,4 Гц, 1Н), 7,14 (дд, J=7,4, 1,0 Гц, 1Н), 6,08 (дд, J=1,4, 1,6 Гц, 1Н), 5,65 (дддд, J=16,8, 10,2, 7,9, 6,5 Гц, 1Н), 5,36 (т, J=3,1 Гц, 1Н), 4,98 (ддт, J=10,1, 2,0, 1,0 Гц, 1Н), 4,92 (дд, J=16,8, 1,7 Гц, 1Н), 4,80 (д, J=10,6 Гц, 1Н), 3,27 (с, 3Н), 2,59 (дкв, J=15,6, 3,2 Гц, 1Н), 2,38 (дтт, J=10,5, 8,1, 4,1 Гц, 1Н), 2,29 (ддт, J=17,3, 15,5, 3,7 Гц, 1Н), 2,08-1,93 (м, 1Н), 1,89-1,79 (м, 1Н), 1,84-1,73 (м, 1Н), 1,49 (тдд, J=14,1, 11,3, 3,5 Гц, 1Н).).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 64С из примера 11, получали соединение 64D. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₂ClN₃O₃: 399,1; Найдено: 400,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,84 (дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1Н), 7,49 (тд, J=7,6, 1,4 Гц, 1Н), 7,35 (ддд, J=8,8, 7,2, 1,6 Гц, 1Н), 7,29 (дд, J=8,2, 1,3 Гц, 1Н), 7,15 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 6,09 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,65 (дддд, J=16,8, 10,2, 7,9, 6,5 Гц, 1Н), 5,36 (т, J=3,1 Гц, 1Н), 5,02-4,94 (м, 1Н), 4,99-4,87 (м, 1Н), 4,80 (д, J=10,6 Гц, 1Н), 3,27 (с, 3Н), 2,60 (дкв, J=15,5, 3,2 Гц, 1Н), 2,39 (дтт, J=10,5, 8,1, 4,1 Гц, 1Н), 2,29 (ддт, J=15,5, 14,0, 3,6 Гц, 1Н), 2,08-1,93 (м, 1Н), 1,89-1,79 (м, 1Н), 1,84-1,73 (м, 1Н), 1,49 (тдд, J=14,1, 11,9, 3,5 Гц, 1Н).

Пример 12

Получение соединений 65А и 65В

1-(2-хлорфенил)-7-гидрокси-5-метил-2-пропил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия A - Синтез соединения 65А

К раствору Int 64i-пик1а (33 мг, 0,067 ммоль) в 5 мл этилацетата добавляли Pd на С (7,17 мг, 0,067 ммоль). Смесь дегазировали, продували Н₂ и перемешивали в атмосфере баллоного Н₂ в течение 5 ч. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке С18 с ацетонитрилом в воде (с 0,05% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 65А. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₄ClN₃O₃: 401,2; Найдено: 402,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,81 (дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1Н), 7,48 (тд, J=7,6, 1,4 Гц, 1Н), 7,37-7,25 (м, 2Н), 7,13 (дд, J=7,4, 3,4 Гц, 1Н), 6,09-6,02 (м, 1Н), 5,35 (т, J=3,1 Гц, 1Н), 4,77 (д, J=10,5 Гц, 1Н), 3,28 (с, 3Н), 2,60 (дкв, J=15,5, 3,3 Гц, 1Н), 2,35-2,22 (м, 2Н), 2,08 (дкв, J=14,0, 3,8 Гц, 1Н), 1,50-1,29 (м, 2Н), 1,23-1,09 (м, 1Н), 1,05 (дтд, J=14,4, 9,6, 4,7 Гц, 1Н), 0,95 (дддд, J=13,6, 10,0, 6,2, 3,3 Гц, 1Н), 0,76 (т, J=7,3 Гц, 3Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 65А из примера 12, соединение 65В получали из Int-64i-пик1b. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₄ClN₃O₃: 401,2; Найдено: 402,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,82 (дд, J=7,9, 1,6 Гц, 1Н), 7,48 (тд, J=7,5, 1,4 Гц, 1Н), 7,34 (ддд, J=8,7, 7,2, 1,6 Гц, 1Н), 7,28 (дд, J=8,1, 1,4 Гц, 1Н), 7,15 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 6,09 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,36 (т, J=3,1 Гц, 1Н), 4,77 (д, J=10,5 Гц, 1Н), 3,28 (с, 3Н), 2,60 (дкв, J=15,5, 3,3 Гц, 1Н), 2,35-2,23 (м, 2Н), 2,08 (дкв, J=13,9, 3,7 Гц, 1Н), 1,51-1,29 (м, 2Н), 1,16 (дддд, J=13,2, 10,0, 7,4, 6,2 Гц, 1Н), 1,05 (дтд, J=14,4, 9,6, 4,7 Гц, 1Н), 0,95 (дддд, J=13,7, 10,0, 6,2, 3,3 Гц, 1Н), 0,76 (т, J=7,3 Гц, 3Н).

Пример 13

Получение соединений 66А и 66В

1-(2-хлорфенил)-7-гидрокси-2-(2-гидроксиэтил)-5-метил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия A - Синтез соединения Int-66a1

К раствору Int 64i-пик1а (33,7 мг, 0,069 ммоль) в смеси ацетона (0,5 мл) и воды (0,5 мл) в атмосфере N₂ при 0°С добавляли перйодат натрия (58,8 мг, 0,275 ммоль), затем калия осмат дигидрат (1,014 мг, 2,75 мкмоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. По окончании, реакционную смесь фильтровали и концентрировали. Остаток обрабатывали этилацетатом. Органический слой промывали раствором тиосульфата натрия, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением Int-66a1. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₆ClN₃O₄: 491,2; Найдено: 492,2 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-66a1 из примера 13, получали Int-66a2. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₆ClN₃O₄: 491,2; Найдено: 492,1 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-66b1

К раствору Int-66a1 (30 мг, 0,061 ммоль) в смеси DCM (4 мл) и МеОН (2 мл) добавляли боргидрид натрия (2,307 мг, 0,061 ммоль) при 0°С и перемешивали в течение 1,5 ч. По окончании, реакцию гасили 1н HCl (0,06 мл) и концентрировали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с силикагелем с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-66b1. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₈ClN₃O₄: 493,2; Найдено: 494,4 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-66b1 из примера 13, получали Int-66b2. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₈ClN₃O₄: 493,2; Найдено: 494,1 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения 66А

Хлорид лития (45,3 мг, 1,06 ммоль) добавляли к раствору Int-66b1 (26,4 мг, 0,053 ммоль) в 2 мл DMF. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 4,5 ч. По окончании, смесь охлаждали и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке С18 с ацетонитрилом в воде (с 0,05% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 66А. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₂ClN₃O₄: 403,1; Найдено 404,2: (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,82 (т, J=7,9 Гц, 1Н), 7,48 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,41-7,25 (м, 2Н), 7,12 (дд, J=9,5, 7,5 Гц, 1Н), 6,02 (дд, J=20,0, 7,4 Гц, 1Н), 5,36 (д, J=2,7 Гц, 1Н), 4,82 (дд, J=14,9, 10,7 Гц, 1Н), 4, 34-4, 24 (м, 1Н), 3,47 (т, J=6,5 Гц, 1Н), 3,28 (с, 3Н), 2,61 (ддд, J=15,4, 7,0, 3,3 Гц, 1Н), 2,44 (дт, J=10,5, 5,3 Гц, 1Н), 2, 36-2, 22 (м, 1Н), 2,12 (дкв, J=10,1, 3,4 Гц, 1Н), 1,68-1,38 (м, 2Н), 1,25 (кв, J=6,6 Гц, 1Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 66А из примера 13, получали соединение 66В. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₂ClN₃O₄: 403,1; Найдено: 404,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,85-7,78 (м, 1Н), 7,52-7,42 (м, 1Н), 7,42-7,26 (м, 2Н), 7,13 (дд, J=10,0, 7,4 Гц, 1Н), 6,08-5,99 (м, 1Н), 5,36 (кв, J=2,8 Гц, 1Н), 4,82 (дд, J=14,8, 10,6 Гц, 1Н), 4,29 (дд, J=7,5, 5,5 Гц, 1Н), 3,50-3,42 (м, 1Н), 3,28 (с, 3Н), 2,61 (ддкв, J=13,7, 6,4, 3,2 Гц, 1Н), 2,44 (квт, J=9,9, 5,1 Гц, 1Н), 2, 36-2,24 (м, 1Н), 2,12 (ддкв, J=13,8, 7,1, 3,7 Гц, 1Н), 1,62-1,39 (м, 2Н), 1,33-1,21 (м, 1Н).

Пример 14

Получение соединения 67

1-(2-хлорфенил)-7-гидрокси-2-(2-метоксиэтил)-5-метил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия A - Синтез соединения Int-67a

К раствору соединения 66А (3,6 мг, 6,95 мкмоль) в DMF (1 мл) в атмосфере N₂ добавляли гидрид натрия (1,668 мг, 0,042 ммоль), затем йодметан (1,912 мкл, 0,03 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. По окончании, полученную реакционную смесь фильтровали и очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке С18 с 0-100% ацетонитрила в воде (с 0,05% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-67a. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₆ClN₃O₄: 431,2; Найдено: 432, 2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения 67

Хлорид лития (4,658 мг, 0,110 ммоль) добавляли к раствору Int-67a. (2 мг, 0, 0037 ммоль) в 2 мл DMF и нагревали до 100°С в течение 2,5 ч. По окончании смесь концентрировали. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке С18 с 0-100% ацетонитрила в воде (с 0,05% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 67. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₄ClN₃O₄: 417,2; Найдено: 418,2 (М+Н)⁺. ¹H ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,80 (дд, J=7,8, 1,6 Гц, 1Н), 7,46 (тд, J=7,4, 1,3 Гц, 1Н), 7,32 (тд, J=7,7, 7,2, 1,6 Гц, 1Н), 7,28 (дд, J=8,1, 1,4 Гц, 1Н), 7,02 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 5,87 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 5,32 (т, J=3,1 Гц, 1Н), 4,78 (д, J=10,7 Гц, 1Н), 3,28-3,18 (м, 4Н), 2,58 (дд, J=15,4, 3,2 Гц, 1Н), 2,40 (д, J=11,2 Гц, 1Н), 2,33-2,21 (м, 1Н), 2,08 (дд, J=13,8, 3,8 Гц, 1Н), 1,54-1,42 (м, 1Н), 1,31 (с, 2Н), 1,31-1,20 (м, 1Н).

Пример 15

Получение соединения 68А, 68В, 68С, 68D

3,3-дифтор-7'-гидрокси-5'-метил-1'-фенил-3',4',4а',5'-тетрагидро-1'Н-спиро[циклопентан-1,2'-дипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин]-6',8'-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-68a

К раствору 3,3-дифторциклопентан-1-карбоновой кислоты (10 г, 66,6 ммоль) в 250 мл DCM при 0°С добавляли HATU (25,3 г, 66,6 ммоль) и N-этил-N-изопропилпропан-2-амин (25,8 г, 200 ммоль). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. По окончании, реакционную смесь промывали водой (~100 мл), насыщенным солевым раствором (100 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 220 г колонки с силикагелем с 0-80% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-68a. LCMS анал. рассч. для C₈H₁₃F₂NO₂: 193,19; Найдено: 194,4 (М+Н)⁺

Стадия В - Синтез соединения Int-68b

В атмосфере N₂, Int-68a (10,5 г, 54,3 ммоль) растворяли в 200 мл THF, затем добавляли фенилмагния бромид (70,7 мл, 1 М, 70,7 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. По окончании, добавляли насыщенный NH₄Cl (~100 мл) и органический слой экстрагировали EtOAc (2 00 мл). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили (NaSO4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 220 г колонки с силикагелем, с 0-80% EtOAc/гексан в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-68b. LCMS анал. рассч. для C₁₂H₁₂F₂O: 210,22; Найдено: 211,1 (М+Н)⁺

Стадия С - Синтез соединения Int-68с

В атмосфере N₂, к раствору Int-68b (2,508 г, 11,93 ммоль) в THF (100 мл) при 0°С добавляли трет-бутилакрилат (1,77 г, 13,50 ммоль), затем трет-бутоксид натрия (6,75 мл, 2 М, 13,50 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. По окончании, смесь выливали в водн. раствор NH₄Cl и экстрагировали EtOAc (30 мл). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором (15 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г колонки с силикагелем, с 0-50% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-68c. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₄F₂O₃: 338,39; Найдено: 361,01 (M+Na)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-68d

К раствору Int-68c (1,705 г, 5,04 ммоль) в THF (45 мл) при 0°С добавляли LAH (0,269 г, 7,09 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. По окончании, гасили 0,54 мл H₂O, 0,27 мл 15% NaOH, 1,35 мл H₂O, затем разбавляли EtOAc (25 мл) и перемешивали с MgSO₄ (5 г) при комнатной температуре в течение 1 ч. Фильтровали и концентрировали с получением Int-68d. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₂₀F₂O₂: 270,32; Найдено: 253,2 (М-ОН)⁺

Стадия Е - Синтез соединения Int-68e

Периодинан Десса-Мартина (4971 мг, 11,72 ммоль) добавляли к раствору Int-68d (1440 мг, 5,33 ммоль) в дихлорметане (50 мл) при 0°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. По окончании, реакционную смесь фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г флэш-колонки с силикагелем, с 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-68e. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₁₆F₂O₂: 266,11; Найдено: 267,2 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-68f

К раствору Int-68e (52 8 мг, 1,98 ммоль) в DMF (8,5 мл) добавляли уксусную кислоту (0,9 мл), затем 1-амино-3-метокси-N-метил-4-оксо-1,4-дигидропиридин-2-карбоксамид (391 мг, 1,983 ммоль) и нагревали до 120°С в течение 2,5 ч. По окончании смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью 80 г колонки с силикагелем, с 0-10% МеОН в CH₂Cl₂ с получением Int-1f. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₅F₂N₃O₄: 445, 18; Найдено: 446, 2 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-68g

К раствору Int-68f (633 мг, 1,42 ммоль) в трифторэтаноле (15 мл) добавляли триэтилсилан (1,362 мл, 8,53 ммоль) и трифлатную кислоту (0,757 мл, 8,53 ммоль), затем смесь перемешивали при 35°С в течение 16 ч. Реакционную смесь охлаждали и нейтрализовали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (16 мл). Смесь экстрагировали DCM. Органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток сначала очищали на 120 г колонке с силикагелем с 0-10% МеОН в CH₂Cl₂, затем препаративной ВЭЖХ с использованием колонки SunFire С18 OBD Prep Column (19×100 мм, 5 мкм) с ACN в воде (с 0,05% TFA модификатором) с получением рацемического Int-68g. Вещество разделяли на хиральной колонке AS-H (21×250 мм, 5 мкм) с 70 мл/мин 25% EtOH (с 0,2% DIPA) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-68g-пик1, Int-68g-пик2, Int-68g-пик3 и Int-68g-пик4. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₅F₂N₃O₃: 429,19; Найдено: 430,2 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения 68А, 68В, 68С и 68D

Хлорид лития (47 мг, 1,1 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси Int-68g-пик1 (4 мг, 9,31 мкмоль) в DMF (1 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 100°С в течение 5 ч. По окончании, смесь охлаждали. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ на колонке SunFire С18 OBD Prep Column (19×100 мм, 5 мкм) с ACN в воде (с 0,05% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 68А. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₃F₂N₃O₃: 415,17; Найдено: 416,17 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7, 93 (д, J=7,9 Гц, 1Н), 7,77 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 7,43 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,35 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,21 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 6,93 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 6,02 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,37 (т, J=2,8 Гц, 1Н), 4,40 (с, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,91 (ддд, J=13,6, 9,0, 4,0 Гц, 1Н), 2,50-2,34 (м, 2Н), 2,09 (т, J=13,0 Гц, 1Н), 2,00-1,88 (м, 3Н), 1,88-1,68 (м, 3Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения 68А из примера 15, получали 68В. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₃F₂N₃O₃: 415,17; Найдено: 416,17 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,95-7,79 (м, 2Н), 7,41 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 7,33 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,21 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,00 (д, J=1,5 Гц, 1Н), 6,06 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,37 (т, J=2,9 Гц, 1Н), 4,40 (с, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 3,22-2,97 (м, 1Н), 2,51 (дкв, J=15,8, 3,1 Гц, 1Н), 2, 44-2, 22 (м, 2Н), 1,97-1,71 (м, 3Н), 1,60 (т, J=7,5 Гц, 2Н), 1,11 (тдд, J=21,0, 13,0, 8,6 Гц, 1Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения 68А из примера 15, получали 68С. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₃F₂N₃O₃: 415,17; Найдено: 416,17 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,93 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 7,77 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 7,43 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 7,35 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,21 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 6,93 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 6,01 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,37 (т, J=2,8 Гц, 1Н), 4,40 (с, 1Н), 3,25 (с, 3Н), 2,91 (ддд, J=13,6, 9,1, 4,0 Гц, 1Н), 2,52-2,32 (м, 2Н), 2,18-2,03 (м, 1Н), 2,01-1,90 (м, 2Н), 1,90-1,64 (м, 4Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения 68А из примера 15, получали 68D. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₃F₂N₃O₃: 415,17; Найдено: 416,19 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d₄) δ 7,86 (д, J=7,4 Гц, 2Н), 7,41 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,34 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,21 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 7,00 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 6,07 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 5,37 (т, J=2, 8 Гц, 1Н), 4,41 (с, 1Н), 3,27 (с, 3Н), 3,18-3,06 (м, 1Н), 2,51 (дкв, J=15,9, 3,1 Гц, 1Н), 2,39-2,25 (м, 2Н), 1,91-1,74 (м, 3Н), 1,60 (т, J=7,6 Гц, 2Н), 1,11 (тдд, J=21,1, 13,3, 8,7 Гц, 1Н).

Примеры в таблице 4 получали с использованием процедур, аналогичных описанным в примере 15, из соответствующего исходного вещества.

Пример 16

Получение соединений 130A и 130В

7-гидрокси-3-изобутил-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-130a

Раствор 4-изобутилдигидро-2п-пиран-2,6(3h)-диона (0,8 г, 4,70 ммоль) в толуоле (25 мл) добавляли к смеси of (-)-спартеина (1,404 мл, 6,11 ммоль) и фенилмагния хлорида (3,06 мл, 6,11 ммоль) в толуоле (15 мл) в атмосфере N₂ при -78°С. Смесь перемешивали в течение 7 ч перед гашением насыщенным раствором хлорида аммония (12 мл) и 2 н NaOH (47 мл). Смесь экстрагировали 50 мл эфира. Водный слой подкисляли 6 н. HCl до рН 2. Экстрагировали EtOAc (2×50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением Int-130a. LCMS анал. рассч. для С₁₅Н₂₀О₃ 248,1; Найдено: 249,4 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-130b

TMS-диазометан (3,56 мл, 7,13 ммоль) добавляли к Int-130a (885 мг, 3,56 ммоль) в смеси DCM (9,0 мл) и МеОН (3,0 мл) при 0°С. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа. По завершении смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с силикагелем, с 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением 510 мг рацемической смеси. Рацемическое соединение разделяли на хиральной колонке AD-H (21×250 мм, 5 мкм) с 5% IPA (0,1% DIPA) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130b-пик1 и Int-130b-пик2. LCMS анал. рассч. для C₁₆H₂₂O₃: 262,2; Найдено: 263,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-130c

Алюмогидрид лития (39 мг, 1,02 8 ммоль) добавляли к раствору Int-130b-пик1 (181,4 мг, 0,691 ммоль) в THF (10 мл) в атмосфере N₂ при 0°С. Смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 ч. По окончании, последовательно добавляли воду (0,08 мл), 15% раствор NaOH (0,04 мл) и воду (0,2 мл). Разбавляли этилацетатом (50 мл) и добавляли MgSO₄ (2 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 ч. Фильтровали и концентрировали с получением Int-130c. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₂₄O₂: 236,2; Найдено: 260,2 (M+Na)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-130d.

Периодинан Десса-Мартина (607 мг, 1,430 ммоль) добавляли к раствору Int-130с (169 мг, 0,715 ммоль) в DCM (10 мл) при 0°С. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По окончании, реакционную смесь фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с силикагелем, с 0-100% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130d. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₂₀O₂: 232,2; Найдено: 233,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-130е

Раствор Int-130d (0,0536 г, 0,231 ммоль) и 1-амино-3-(бензилокси)-N-метил-4-оксо-1,4-дигидропиридин-2-карбоксамида (0,063 г, 0,231 ммоль) в DMF (2,5 мл) с уксусной кислотой (0,25 мл) нагревали в герметичной пробирке при 120°С в течение 2 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130e. LCMS анал. рассч. для C₂₉H₃₃H₃O₄: 487,3; Найдено: 488,4 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-130f

К раствору Int-130e (41 мг, 0, 08 4 ммоль) в DCM (5,0 мл) добавляли DIEA (0,032 мл, 0,185 ммоль), затем SEMC1 (0,016 мл, 0,0 92 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии с силикагелем, с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130f. LCMS анал. рассч. для C₃₅H₄₇N₃O₅Si: 617,3; Найдено: 618,5 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-130g

Int-130f (3 9,5 мг, 0,064 ммоль) в смеси DCM (2 мл) и МеОН (1 мл) была при 0°С и добавляли NaBH4 (4,84 мг, 0,128 ммоль). Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 2 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130g. LCMS анал. рассч. для C₃₅H₄₉N₃O₅Si: 619,3; Найдено: 620,3 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения Int-130h

Int-130g (31,2 мг, 0,060 ммоль) в DCM (3,0 мл) охлаждали до 0°С, затем добавляли триэтиламин (0,042 мл, 0,300 ммоль) и метансульфонилхлорид (0,014 мл, 0,180 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. По окончании, реакционную смесь разбавляли DCM (15 мл) и промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением Int-130h. LCMS анал. рассч. для C₃₅H₄₈ClN₃O₄Si: 437,3; Найдено: 638,3 (М+Н)⁺.

Стадия I - Синтез соединения Int-130i

Тетрабутиламмония фторид (0,501 мл, 0,501 ммоль) добавляли к раствору Int-130h (64 мг, 0,100 ммоль) в THF (5 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь нагревали при 60°С в течение 16 ч. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130i (20 мг, 0,057 ммоль). Int-130i разделяли с использованием хиральной колонки AD-H (21×250 мм, 5 мкм) с 30% IPA (0,2% DIPA) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-130i-пик1 и Int-130i-пик2. LCMS анал. рассч. для C₂₉H₃₃N₃O₃: 471,2; Найдено: 472,3 (М+Н)⁺.

Стадия J - Синтез соединения 130А

К раствору Int-130i-пик 1 (3 мг, 0,0064 ммоль) в DMF (1 мл) добавляли хлорид лития (8,08 мг, 0,19 ммоль) и смесь перемешивали при 100°С в течение 3 часов. По окончании реакционную смесь концентрировали. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке С18 с ACN в воде (0,05% TFA модификатор) в качестве растворителя для элюирования, с получением соединения 130А. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₇M₃O₃: 381,2; Найдено: 382,3 (М+Н)⁺. ¹H ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,30 (с, уш, 5Н), 7,13 (д, d=7,4 Гц, 1Н), 5,86 (д, J=7, 4 Гц, 1Н), 5,35-5,25 (м, 1Н), 4,40 (дд, J=11,6, 2,5 Гц, 1Н), 3,20 (с, 3Н), 2,59-2,41 (м, 3Н), 2,21 (с, b, 1Н), 1,95-1,85 (м, 1Н), 1,70 (дт, J=13,6, 6,6 Гц, 1Н), 1,61 (ддд, J=15,2, 9,2, 6,1 Гц, 1Н), 1,49 (дт, J=13,9, 7,2 Гц, 1Н), 0,98 (дд, J=19,8, 6,5 Гц, 6Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 130A из примера 16, получали соединение 130В. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₇N₃O₃: 381,2 Найдено: 382,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,72 (с, 1Н), 7,46 (с, 1Н), 7,32 (т, J=7,3 Гц, 1Н), 7,14 (с, 1Н), 7,07 (д, J=7,4 Гц, 1Н), 6,75 (с, 1Н), 5,92 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,34 (с, 1Н), 4,31 (д, J=10,5 Гц, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,54 (д, J=12,6 Гц, 1Н), 2,07-1,86 (м, 4Н), 1,76 (тт, J=13,7, 6,8 Гц, 1Н), 1,31 (т, J=6,4 Гц, 2Н), 0,98 (т, J=6,3 Гц, 6Н).

Пример 17

Получение соединений 131А, 131В, 131С, 131D, 131Е и 131F

5-этил-7-гидрокси-10-(метоксиметил)-1-фенил-2-(2,2,2-трифторэтил)-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-[1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия A - Синтез соединения Int-131a

В атмосфере N₂, 3-(бензилокси)-4-оксо-6-(((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)метил)-4Н-пиран-2-карбоновую кислоту (5 г, 13,87 ммоль) растворяли в 100 мл 1:1 МеОН/CH₂Cl₂ и затем охлаждали до 0°С. (Триметилсилил)дизаометан (6,94 мл, 13,87 ммоль) добавляли по каплям. Полученную смесь перемешивали при 0°С. По завершении смесь концентрировали с получением Int-131a. Неочищенный продукт использовали без дополнительной очистки. LCMS анал. рассч. для С₂₀Н₂₂О₇: 374,3; Найдено: 375,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-131b

К раствору Int-131a. (5,1 г, 13,62 ммоль) в МеОН (15 мл) при комнатной температуре в атмосфере N₂ добавляли хлорид водорода в диоксане (10,22 мл, 40,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа. По завершении смесь концентрировали. Остаток разбавляли 100 мл EtOAc, с последующей промывкой 100 мл нас.водного раствора NaHCO₃. Органический слой сушили над MgSO₄ и концентрировали с получением Int-131b. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₁₄O₆: 290,2; Найдено: 291,0 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-131с

К перемешиваемому раствору Int-131b (5 г, 17,23 ммоль) в DMF (150 мл) при 0°С добавляли йодметан (2,93 г, 20,67 ммоль), затем гидрид натрия (0,827 г, 20,67 ммоль). Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа. По окончании, медленно гасили 100 мл воды. Смесь экстрагировали 2×100 мл EtOAc. Объединенные органические вещества сушили над MgSO₄ и концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г колонки с силикагелем с 0-10% МеОН в DCM в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-131c. LCMS анал. рассч. для C₁₆H₁₆O₆: 304,3; Найдено: 305,0 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-131d.

Раствор пиридиний-п-толуолсульфоната (4,68 г, 18,63 ммоль) и Int-131d. (2,1 г, 6,90 ммоль) в DMA (40 мл) нагревали до 60°С. После этого к реакционному раствору медленно добавляли раствор трет-бутилкарбазата (1,277 г, 9,66 ммоль) в DMA (10 мл) в течение 10 мин. Реакционный раствор перемешивали при 60°С в течение 48 ч. По окончании, к смеси добавляли 50 мл воды. Смесь экстрагировали 2×50 мл EtOAc. Объединенный органический слой сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали на колонке с силикагелем 120 г, используя 0-100% EtOAc/гексан в качестве элюирующего растворителя, с получением Int-131d. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₆N₂O₇: 418,4; Найдено: 419,2 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-131e

Смесь Int-131d (1,2 г, 2,87 ммоль) и этанамина в THF (14,34 мл, 28,7 ммоль) нагревали при 80°С в течение ночи. По завершении смесь концентрировали. К вышеуказанному остатку, добавляли 5 мл DCM и 5 мл TFA. Перед концентрацией смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Полученный остаток загружали на 100 г колонку с обращенной фазой С18 с 0-40% ACN в воде (0,05% TFA модификатор) с получением Int-131e. LCMS анал. рассч. для C₁₇H₂₁N₃O₄: 331,4 Найдено: 332,1 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-131f

Int-131e (240 мг, 0,724 ммоль) и 4-бензоил-6,6,6-трифторгексаналь смешивали в герметичной пробирке для микроволновой обработки 20 мл. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 2,5 часов. По окончании, реакционную смесь охлаждали и концентрировали. Остаток очищали с помощью MPLC ISCO Combi-flash на ISCO Redi-Sep 24 колонке, элюируя 0-10% CH₂Cl₂/МеОН, с получением Int-131f. LCMS анал. рассч. для C₃₀H₃₂F₃N₃O₅: 571,6; Найдено: 572,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-131g

В атмосфере N₂, к раствору Int-131f (590 мг, 1,032 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли DIEA (0,397 мл, 2,271 ммоль) и SEM-Cl (0,201 мл, 1,135 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение ночи, затем концентрировали. Остаток очищали с помощью MPLC ISCO Combi-flash на колонке ISCO Redi-Sep 40 г, элюируя 0-10% CH₂Cl₂/МеОН, с получением Int-131g. LCMS анал. рассч. для C₃₆H₄₆F₃N₃O₆Si: 304; Найдено: 305,0 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения Int-131h

В атмосфере N₂, к раствору Int-131g (680 мг, 0, 969 ммоль) в DCM (10 мл)/МеОН (5 мл) добавляли NaBH₄ (36,7 мг, 0,969 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часов. По окончании, реакционную смесь снова охлаждали до 0°С и гасили 1 н. HCl (0,5 мл), затем концентрировали. Остаток очищали с помощью MPLC ISCO Combi-flash на колонке ISCO Redi-Sep 40 ч, элюируя 0-10% CH₂Cl₂/МеОН, с получением Int-131h. LCMS анал. рассч. для C₃₆H₄₈F₃N₃O₆Si: 703,8; Найдено: 704,6 (М+Н)⁺.

Стадия I - Синтез соединения Int-131i

В атмосфере N₂, к раствору Int-131h (605 мг, 0,860 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TEA (599 мкл, 4,30 ммоль), затем Ms-Cl (201 мкл, 2,58 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,0 ч. По окончании, реакционную смесь разбавляли DCM (15 мл) и затем промывали водой, насыщенным солевым раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали с получением Int-131i, которое использовали для следующей стадии без очистки. LCMS анал. рассч. для C₃₇H₅₀F₃N₃O₈SSi: 781,9 Найдено: 782,4 (М+Н)⁺.

Стадия J- Синтез соединения Int-131j

В атмосфере N₂, к раствору Int-131i (712 мг, 0,911 ммоль) в THF (10 мл) добавляли TBAF в THF (3,821 мкл, 3,821 ммоль) при 60°С. Реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 4,0 часов, охлаждали и концентрировали. Остаток очищали с помощью MPLC ISCO Combi-flash на колонке ISCO Redi-Sep 40 г, элюируя 0-20% CH₂Cl₂/МеОН с получением 2 фракций. Обе фракции подвергали разрешению SFC. Менее полярная фракция дала 2 пика из разрешения SFC Int-131j-пик1 и Int-131j-пик2. Более полярная фракция дала 4 пика с разрешением SFC Int-131j-пик3, Int-131j-пик4, Int-131j-пик5 и d Int-131j-пик6. (Условия SFC: Колонка Daicel@ chiralpak OD-H (250*21 мм, 5 мкм); 35% EtOH с 0,1% DIEA; 70 мл/мин). LCMS анал. рассч. для C₃₀H₃₂F₃N₃O₄: 555,6 Найдено: 556,5 (М+Н)⁺.

Стадия K - Синтез соединения Int-131h

Int-131j-пик1 (7 мг, 0,013 ммоль) растворяли в МеОН (1 мл). Колбу дважды продували азотом, затем добавляли Pd/C (9,39 мг, 8,82 мкмоль). Продували водородом 3 раза и перемешивали под баллоном с Н₂ в течение 1 часа. Полученную реакционную смесь фильтровали через шприцевой фильтр перед концентрацией. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (С-18 колонка), элюируя 0-90% ацетонитрил/вода (с модификатором 0,1% TFA), с получением 131А. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₆F₃N₃O₄: 465,4; Найдено: 466,3 (М+Н)⁺. ¹H ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,34-6,85 (м, 6Н), 5,27 (с, 1Н), 4,93 (д, J=13,2 Гц, 1Н), 4,63 (д, J=13,2 Гц, 1Н), 4,57 (с, 1Н), 3,59 (с, 3Н), 2,93-2,81 (м, 2Н), 2,51 (с, 3Н), 1,97 (д, 3=9,1 Гц, 1Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 131А из примера 17, получали соединение 131В. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₆F₃N₃O₄: 465,4; Найдено: 466,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,33-6,92 (м, 6Н), 5,29 (с, 1Н), 4,95 (д, J=13,4 Гц, 1Н), 4,68 (д, J=13,4 Гц, 1Н), 4,56 (с, 1Н), 3,60 (с, 3Н), 2,93-2,68 (м, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 1,98 (д, 3=9,2 Гц, 1Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 131А из примера 17, получали соединение 131С. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₆F₃N₃O₄: 465,4; Найдено: 466,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,84-6,57 (м, 6Н), 6,18 (с, 1Н), 5,36 (с, 1Н), 4,52 (д, J=14,6 Гц, 1Н), 4,14 (д, J=10,9 Гц, 1Н), 3,90 (д, J=14,6 Гц, 1Н), 3,26 (с, 3Н), 2,86 (кв, J=10,4 Гц, 1Н), 2,64-1,52 (м, 7Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 131А из примера 17, получали соединение 131D. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₆F₃N₃O₄: 465,4; Найдено: 466,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,53-7,22 (м, 7Н), 6,29 (с, 1Н), 5,42 (с, 1Н), 4,76-4,64 (м, 2Н), 4,22 (д, J=14,3 Гц, 1Н), 3,38 (с, 4Н), 3,33 (с, 5Н), 2,84-2,67 (м, 2Н), 2,68-2,44 (м, 4Н), 2,10-1,96 (м, 2Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 131А из примера 17, получали соединение 131Е. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₆F₃N₃O₄: 465,4; Найдено: 466,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,30 (тт, J=15,8, 6,8 Гц, 5Н), 6,24 (с, 1Н), 5,41 (с, 1Н), 4,76-4,64 (м, 2Н), 4,22 (д, J=14,2 Гц, 1Н), 3,50-3,34 (м, 5Н), 2,83-2,66 (м, 2Н), 2,65-2,43 (м, 3Н), 2,10-1,92 (м, 2Н).

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 131А из примера 17, получали соединение 131F. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₆F₃N₃O₄: 465,4; Найдено: 466,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, Хлороформ-d) δ 7,79 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 7,54 (д, J=6,9 Гц, 1Н), 7,42 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 7,17 (д, J=7,1 Гц, 1Н), 6,73 (д, J=7,2 Гц, 1Н), 6,29 (д, J=15,0 Гц, 1Н), 5,42 (с, 1Н), 4,63-4,38 (м, 2Н), 4,19 (т, J=12,5 Гц, 1Н), 3,96 (т, J=14,8 Гц, 1Н), 3, 36-3,26 (м, 6Н), 2,92 (д, J=10,1 Гц, 1Н), 2,61 (д, J=15,0 Гц, 1Н), 2,48-1,48 (м, 5Н).

Примеры в таблице 5 получали с использованием процедур, аналогичных описанным в примере 17, из соответствующего исходного вещества.

Пример 18

Получение соединений 133

7-гидрокси-5-метил-6,8-диоксо-1-фенил-2-(2,2,2-трифторэтил)-1,2,3,4,4а,5,6,8-октагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-9-карбонитрил

Стадия А - Синтез соединения Int-133a

В высушенной пламенем колбе в атмосфере N₂, 118В (320 мг, 0,785 ммоль) растворяли в безводном DCM (10 мл) и безводном МеОН (3 мл). TMS-диазометан (2М в эфире) (707 мкл, 1,414 ммоль) добавляли по каплям в течение 15 минут и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Через 2 часа, добавляли TMS-диазометан (2М в эфире) (450 мкл) и перемешивали при комнатной температуре в течение еще часа. Еще добавляли TMS-диазометан (2М в эфире) (500 мкл) и реакционную смесь перемешивали в течение еще часа при комнатной температуре. Реакцию гасили уксусной кислотой (180 мкл, 3,14 ммоль) и перемешивали в течение нескольких минут до разбавления водой и DCM. Смесь экстрагировали DCM (3х) и объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM и очищали на силикагеле с нормальной фазой (колонка 24 г ISCO gold), элюируя в условиях градиента 0-100% (26% EtOH-EtOAc/EtOAc). Соответствующие фракции собирали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток сушили путем концентрирования при пониженном давлении с толуол/ACN и затем сушили в высоком вакууме с получением Int-133a. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₂F₃N₃O₃: 421,4; Найдено: 422,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-133b

Int-133a. (255 мг, 0, 605 ммоль) в атмосфере N₂ растворяли в безводном DCM (10 мл). К этому раствору добавляли N-бромсукцинимид (162 мг, 0,908 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 минут. Добавляли еще N-бромсукцинимид (115 мг) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 45 минут.По окончании, объем реакционной смеси уменьшали при пониженном давлении и загружали непосредственно на силикагель с нормальной фазой (колонка 24 г ISCO gold), элюируя в условиях градиента 0-40% (26% EtOH-EtOAc/EtOAc). Соответствующие фракции собирали и концентрировали при пониженном давлении и затем сушили в высоком вакууме с получением Int-133b. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₁BrF₃N₃O₃: 499,1; Найдено: 500,0 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-133с

В пробирку для микроволновой реакции в атмосфере N₂, смешивали Int-133b (175 мг, 0,350 ммоль) и цианид цинка (205 мг, 1,749 ммоль) в безводном DMF (4 мл) и продували потоком газа N₂. Добавляли бис(три-трет-бутилфосфин)палладий(0) (89 мг, 0,175 ммоль) и реакционную смесь герметично закрывали и нагревали до 100°С в предварительно нагретом блоке в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали и разделяли между DCM и водой. Смесь экстрагировали DCM (4х) и объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали, и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM/EtOAc и очищали на силикагеле с нормальной фазой (колонка 12 г ISCO gold), элюируя в условиях градиента 0-20% (26% EtOH-EtOAc/EtOAc). Соответствующие фракции собирали и концентрировали при пониженном давлении и затем сушили в высоком вакууме с получением Int-133c. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₁F₃N₄O₃: 446,4; Найдено: 447,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения 133

Int-133c (9 мг, 0,020 ммоль) и бромид магния (12 мг, 0,065 ммоль) смешивали в безводном THF (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток повторно растворяли в смеси 5:1 DMF/вода, и очищали градиентным элюированием с обращенной фазой (25-75% CH₃CN/ вода (0,1% TFA модификатор) на колонке Sunfire Prep (С18, 30×150 мм) в течение 12 мин. Соответствующие фракции лиофилизировали с получением 133. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₁₉F₃N₄O₃: 432,4; Найдено: 433,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, ацетонитрил-d3) δ 12,36 (с, 1Н), 7,67 (д, J=7,8 Гц, 1Н), 7,54 (т, J=7,6 Гц, 1Н), 7,41 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,21 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,13 (с, 1Н), 6,81 (д, J=7,3 Гц, 1Н), 5,19 (с, 1Н), 4,00 (д, J=10,6 Гц, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,63-2,54 (м, 1Н), 2,50-2,43 (м, 1Н), 2,23-2,14 (м, 1Н), 2,13-2,07 (м, 1Н), 2,04-1,96 (м, 1Н), 1,78-1,66 (м, 1Н), 1,57-1,47 (м, 1Н).

Пример 19

Получение соединения 134

7-гидрокси-5-метил-1-фенил-9-(1Н-тетразол-5-ил)-2-(2,2,2-трифторэтил)-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Во флаконе смешивали Int-133c (11 мг, 0,025 ммоль), азид натрия (3,20 мг, 0,049 ммоль) и хлорид цинка (3,36 мг, 0,025 ммоль) в DMF (1 мл). Флакон герметично закрывали и нагревали до 100°С в предварительно нагретом блоке в течение 3 часов. Затем в реакционную смесь повторно загружали азид натрия (16 мг) и хлорид цинка (2 мг) и перемешивали в течение ночи при 100°С. По окончании, реакционную смесь разбавляли водой и очищали градиентным элюированием с обращенной фазой (15-65% CH₃CN/ вода (0,1%TFA) на колонке Sunfire Prep С18 (30×150 мм) в течение 12 мин. Соответствующие фракции лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₀F₃N₇O₃: 475,4; Найдено: 476,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, ацетонитрил-d³) δ 12,30 (с, 1Н), 7,77 (д, J=7,7 Гц, 1Н), 7,71 (с, 1Н), 7,46 (т, J=7,5 Гц, 1Н), 7,11 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 7,02 (т, J=7,4 Гц, 1Н), 6,78 (д, J=7,5 Гц, 1Н), 5,27 (с, 1Н), 4,06 (д, J=10,7 Гц, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,67-2,57 (м, 1Н), 2,53-2,46 (м, 1Н), 2,29-2,21 (м, 1Н), 2,19-2,10 (м, 1Н), 2,06-1,97 (м, 1Н), 1,79-1,67 (м, 1Н), 1,62-1,52 (м, 1Н).

Пример 20

Получение соединений 135А и 135В

2,7-дигидрокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-135a

Смесь 3-метокси-N-метил-4-оксо-1-((1-фенилбут-3-ен-1-ил)амино)-1,4-дигидропиридин-2-карбоксамида (154,00 г, 471,553 ммоль,), циннамаля (124,50 г, 943,106 ммоль) и трифторуксусной кислоты (80,64 г, 707,3301 ммоль,) в DCE (1,00 л) перемешивали при 120°С в течение 3 дней. После охлаждения, реакционную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем и элюировали (30% EtOH/EA)/РЕ=0-60% с получением Int-135a. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₇N₃O₃: 441,2; Найдено: 442,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-135b и Int-135с

Смесь Int-135a (10,00 г, 22,648 ммоль), TFA (2,59 г, 22,715 ммоль) и катализатора Ховейда-Граббс 2-го поколения (5,79 г, 6,820 ммоль) перемешивали в течение 4 ч при 80°С. После охлаждения, реакционную смесь концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем с 0-15% дихлорметан/метанол с получением смеси (110 г), который далее очищали на колонке Sunfire Prep С18 с 30-80% ACN в воде (0,05% TFA модификатор) в качестве растворителя для элюирования, с получением 40 г смеси. Смесь дополнительно очищали с помощью препаративной SFC с колонкой CHIRAL ART Cellulose-SB (S-5 мкм 50*250 мм, 50 мм*250 мм, 5 мкм; подвижная фаза, CO₂ (50%) и МеОН) с получением Int-1b (22,52 г, 5,562 ммоль) и Int-1c (3,17 г, 0,783 ммоль). LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₉N₃O₃: 337,2; Найдено: 338,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-135d

К раствору Int-135c (0,300 г, 0,89 ммоль) в диоксане (9 мл) добавляли диоксид селена (0,197 г, 1,78 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 95°С в течение ночи. После охлаждения, смесь концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии ISCO с обращенной фазой С18 с использованием 0-50% H₂O/ACN с модификатором 0,05% TFA в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-135d (0,09 г, 0,276 ммоль). LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₉N₃O₄: 353,1; Найдено: 354,1 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-135е

К раствору Int-135d (0,142 г, 0,40 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли 10% Pd-C (0,070 г) при 25°С с перемешиванием. Полученную черную суспензию помещали в атмосферу водорода (баллон) в течение 3 часов. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и твердое вещество тщательно промывали МеОН. Объединенный фильтрат концентрировали с получением Int-135e. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₄: 355,2; Найдено: 356,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Получение соединений Int-135f и Int-135g.

Int-135e (0,57 г) разделяли SFC с использованием колонки AD-H (50×250 мм) и 40% МеОН в качестве сорастворителя с получением Int-135f (пик 1) и Int-135g (пик 2). LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₄: 355,2; Найдено: 356,3 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтезы соединений 135А и 135В

К раствору Int-135f (10,0 мг, 0,04 ммоль) в ACN (1 мл) добавляли MgBr₂ (36,8 мг, 0,20 ммоль) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 3 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ (колонка Sunfire Prep С18) с использованием 0,05% TFA в качестве модификатора, с получением 135А (10,6 мг). LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₄: 341,2; Найдено: 342,6 (М+Н)⁺.

По существу, следуя способу, использованному для получения соединения 135А стадии F, получали соединение 135В. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₄: 341,2; Найдено: 342,6 (М+Н)⁺.

Пример 21

Получение соединения 136А и 136В

2,7-дигидрокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-136a

Раствор DEAD (0,20 мл 40% раствора в толуоле, 0,458 ммоль) добавляли по каплям к смеси Int-135d (54 мг, 0,153 ммоль), 4-нитробензойной кислоты (77 мг, 0,453 ммоль) и трифенилфосфина (120 мг, 0,453 ммоль) в безводном THF (3 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (ISCO 4 г колонка), с использованием 0-5% МеОН в DCM в качестве элюента, с получением Int-136a. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₂H₄O₇: 502,2; Найдено: 503,2 (М+1)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-136b

К раствору Int-136a. (48,8 мг, 0, 097 ммоль) в МеОН (1 мл) добавляли карбонат калия (1 мг) при комнатной температуре. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (ISCO 12 г колонка), используя 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-136b. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₉H₃O₄: 353,1; Найдено: 354,3 (М+Н)⁺.

Стадия С, D, Е - Получение соединений 136А и 136В

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединения 136А и 136В. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₄: 341,1; Найдено: 342,3 (М+1)⁺.

Пример 22

Получение соединения 137А, 137В, 137С и 137D

2,7-дигидрокси-1,5-диметил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-137a

Раствор 3-метокси-N-метил-4-оксо-1-((2-фенилпент-4-ен-2-ил)амино)-1,4-дигидропиридин-2-карбоксамида (97,00 г, 284,115 ммоль), SeO₂ (157,63 г, 1420,58 ммоль), трет-бутилгидропероксида (285 мл в декане, 5 экв.) в DCM (2,91 л) перемешивали в течение 32 ч при 40°С в атмосфере азота. Реакционную смесь охлаждали до -10°С на бане со льдом/солью. Затем гасили добавлением 2 л водного раствора Na₂S₂O₃. Твердые вещества отфильтровывали. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном три раза и объединенный органический слой концентрировали. Остаток наносили на колонку с силикагелем на 330 г с дихлорметан/метанолом (20:1) в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-137a. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₃N₃O₄: 357,4; Найдено: 358,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-137b

В 2 л реактор высокого давления объемом помещали ACN (680,00 мл), Int-137a (34,00 г, 95,129 ммоль), BiPhePhos (1,50 г, 1,906 ммоль), карбонилтрис(трифенилфосфин)родий(I) гидрид (1,75 г, 1,903 ммоль), СО (0,5 Мра). В вышеуказанный реактор вводили Н₂(g) (0,5 МПа) при 80°С. Полученную смесь перемешивали при 80°С в течение 20 ч. По завершении смесь охлаждали. Реакционную смесь концентрировали до 10 В и использовали непосредственно на следующей стадии.

Стадия С - Синтез соединений Int-137с и Int-137d

В 1-л 4-горлую круглодонную колбу помещали реакционную смесь из предыдущей стадии и АсОН (68 г). Полученный раствор перемешивали при 80°С в течение 3 дней. По окончании полученную смесь концентрировали. Остаток разбавляли ACN и очищали с помощью Flash-Prep-HPLC с обращенной фазой С18 (220 г) с 10-100% ACN в H₂O в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-137c и Int-137d. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₄: 369,2; Найдено: 370,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Получение соединений Int-137е и Int-137f

Int-137c (1,0 г) разделяли SFC с использованием колонки OD-Н (21 × 250 мм) с 35% МеОН в качестве сорастворителя с получением Int-137e (пик 1: 0,433 г) и Int-137f (пик 2: 0,423 г). LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₄: 369,2; Найдено: 370,2 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Получение соединений Int-137g и Int-137h.

Int-137d (1,0 г) разделяли SFC с использованием колонки OJ-Н (21×250 мм) и 30% МеОН и 0,2% DIPA в качестве сорастворителя с получением Int-137g (пик 1) и Int-137f (пик 2). LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₄: 369,2; Найдено: 370,3 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединений 137A, 137В, 137С и 137D.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединения 137А, 137В, 137С и 137D. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₄: 355,2; Найдено: 356,2 (М+Н)⁺.

Пример 23

Получение соединений 138А и соединения 138В

7-гидрокси-1,5-диметил-1-фенил-3,4,4а,5-тетрагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-2,6,8(1Н)-трион

Стадия А - Синтез соединения Int-138a

Периодинан Десса-Мартина (0,230 г, 0,541 ммоль) добавляли к раствору Int-137с (0,100 г, 0,271 ммоль) в дихлорметане (5 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-5% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-138a (0,083 г, 0,228 ммоль). LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₁N₃O₄: 367,2; Найдено: 368,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Получение соединений Int-138b и Int-138c.

Int-138a (0,083 г) разделяли SFC с использованием колонки AD-H (21 × 250 мм) и 30% IPA и 0,2% DIPA в качестве сорастворителя с получением Int-138b (пик 1) и Int-138c (пик 2). LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₁N₃O₄: 367,2; Найдено: 368,3 (М+1)⁺.

Стадия С - Синтез соединений 138А и 138В.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединения 138А и 138В. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₉N₃O₄: 355,2; Найдено: 354,2 (М+Н)⁺.

Пример 24

Получение соединения 139

(1R,2S,4aS)-2-азидо-7-гидрокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-139a

Триэтиламин (0,197 мл, 1,42 ммоль) добавляли к раствору Int-137d (0,250 г, 0,707 ммоль) и метилсульфонилхлорида (0,082 мл, 1,05 ммоль) в безводном дихлорметане (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, и добавляли дополнительные порции триэтиламина (0,197 мл) и метансульфонилхлорида (0,082 мл). После перемешивания еще 1 ч., летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле с использованием 0-5% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-139a. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₁N₃O₆S: 432,1; Найдено: 432,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-139b

Азид натрия (0,113 г, 1,74 ммоль) добавляли к раствору Int-139а (0,250 г, 0,579 ммоль) в безводном DMF (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. После охлаждения летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-5% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-139b. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₈N₆O₃: 378,2; Найдено: 379,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-139c

Катализатор Уилкинсона (0,012 г, 1,74 ммоль) добавляли к раствору Int-139b (0,024 г, 0,063 ммоль) в смеси THF (1 мл) и метанола (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-5% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-139c. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₀N₆O₃: 380,3; Найдено: 381,3 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения 139

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 139. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₈N₆O₃: 366,2; Найдено: 367,3 (М+Н)⁺.

Пример 25

Получение соединения 140

Стадия А - Синтез соединения Int-140a

Pd-C (10%, 10 мг) добавляли к раствору Int-139b (19,5 мг, 0,052 ммоль) в метаноле (3 мл). Полученную черную суспензию помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Реакционную смесь фильтровали через слой целита. Твердое вещество тщательно промывали метанолом. Объединенный фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением Int-140a. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₂N₄O₃: 354,2; Найдено: 355,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-140b

Трифторуксусный ангидрид (0,007 мл, 0,053 ммоль) добавляли к раствору Int-140a (12,5 мг, 0,035 ммоль) и триэтиламина (0,009 мл, 0,07 ммоль) в безводном дихлорметане (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-140b. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₁F₃N₄O₄: 450,2; Найдено: 451,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения 140

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 140. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₁₉F₃N₄O₄: 436,2; Найдено: 437,3 (М+Н)⁺.

Пример 26

Получение соединения 141

(1R,2S,4a5)-7-гидрокси-2-(4-(гидроксиметил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4a,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-141a

Смесь сульфата меди (II) (264 мг, 1,05 ммоль) и натрия (R)-2- ((S)-1,2-дигидроксиэтил)-4-гидрокси-5-оксо-2,5-дигидрофуран-3-олата (2,094 мг, 10,57 мкмоль) в воде (1 мл) добавляли к смеси Int-5b (40,0 мг, 0,106 ммоль) и пропаргилового спирта (6,79 мл, 0,116 ммоль) в ^tBuOH (1 мл) при комнатной температуре. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Дополнительные порции сульфата меди (II) (264 мг, 1,05 ммоль) и натрия (R)-2-((S)-1,2-дигидроксиэтил)-4-гидрокси-5-оксо-2,5-дигидрофуран-3-олата (2,094 мг, 10,57 мкмоль) добавляли в воду (1 мл) и перемешивание продолжали еще 24 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-141a. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₂N₆O₄: 434,2; Найдено: 435,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-141b

Pd-C (10%, 10 мг) добавляли к раствору Int-141a (20 мг, 0,046 ммоль) в метаноле (3 мл). Полученную суспензию помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и тщательно промывали метанолом. Объединенный фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением Int-141b. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₄N₆O₄: 436,2; Найдено: 437,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения 141

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 141. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₂N₆O₄: 422,2; Найдено: 423,3 (М+Н)⁺.

Пример 27

Получение соединения 142

(1R,2S,4aS)-2-азидо-7-гидрокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-142a

Катализатор Уилкинсона (12 мг, 0,013 ммоль) добавляли к раствору Int-139b (24 мг, 0,063 ммоль) в метаноле (1 мл) и THF (1 мл). Полученную смесь помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием 0-100% ACN в воде в качестве элюента (0,05% TFA в качестве модификатора). Объединенные фракции концентрировали при пониженном давлении с получением Int-142a. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₀N₆O₃: 380,2; Найдено: 381,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения 142

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 142. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₈N₆O₃: 366,1; Найдено: 367,3 (М+1)⁺.

Пример 28

Получение соединений 143А и 143В

Стадия А - Синтез соединения Int-143a

Тиоацетат калия (338 мг, 2,96 ммоль) добавляли к раствору Int-139a (426 мг, 0,987 ммоль) в безводном DMF (25 мл) и THF (1 мл). Полученную смесь нагревали до 40°С в атмосфере азота в течение 4 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-143a. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₁N₃O₄S: 411,1; Найдено: 411,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-143b

Катализатор Уилкинсона (112 мг, 0,122 ммоль) добавляли к раствору Int-143a (50 мг, 0,122 ммоль) в метаноле (4 мл) и THF (4 мл). Полученную смесь помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-5% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-143b. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₄S: 413,1; Найдено: 414,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Получение соединений Int-143c и Int-143d.

Int-143b (0,016 г) разделяли SFC с использованием колонки AD-H (21×250 мм) и 30% EtOH в качестве сорастворителя с получением Int-9с (пик 1) и Int-9d (пик 2). LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₄S: 413,1; Найдено: 414,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединений Int-143e и Int-143f

Водный 1 М гидроксид натрия (0,034 мл, 0,034 ммоль) добавляли к раствору Int-143c (7 мг, 0,017 ммоль) в THF (1 мл). Полученную смесь нагревали до 40°С в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением Int-143e. Остаток использовали на следующей стадии без очистки. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₇N₃O₃S: 413,2; Найдено: 414,2 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-143e, получали соединение Int-143f. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₇N₃O₃S: 413,2; Найдено: 414,2 (М+1)⁺.

Стадия Е - Синтез соединений 143А и 143В

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединения 143А и 143В. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₅N₃O₃S: 399,1; Найдено: 400,1 (М+Н)⁺.

Пример 29

Получение соединений 244 и 145

N-((1S,4S,4aS)-7-гидрокси-5-метил-6,8-диоксо-1-фенил-1,2,3,4,4а,5,6,8-октагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-4-ил)ацетамид и N-((1S,4S,4aS)-7-гидрокси-5-метил-6,8-диоксо-1-фенил-1,2,3,4,4а,5,6,8-октагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-4-ил)-N-метилацетамид

Стадия А - Синтез соединения Int-144a

Триэтиламин (0,059 мл, 0,424 ммоль) добавляли к раствору Int-136b (0,250 г, 0,707 ммоль) и метилсульфонилхлорида (0,022 мл, 0,283 ммоль) в безводном дихлорметане (2 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-144a. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₁N₃O₆S: 431,2; Найдено: 432,6 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-144b и соединения Int-144c

Азид натрия (25,8 мг, 0,396 ммоль) добавляли к раствору Int-144a. (57 мг, 0, 7 07 ммоль) в безводном DMF (2 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием 0-100% ACN в воде в качестве элюента (0,05% TFA в качестве модификатора) с получением Int-144b и Int-144c. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₁₈N₆O₃: 378,1; Найдено: 379,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-144d и Int-145а

Pd-C (10%, 5 мг) добавляли к раствору Int-144b (14 мг, 0,037 ммоль) в метаноле (3 мл). Полученную суспензию помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и твердое вещество тщательно промывали метанолом. Объединенный фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением смеси Int-144d и Int-145a. Это использовали на следующей стадии без очистки.

Стадия D - Синтез соединения Int-144е и Int-145b

Уксусный ангидрид (1 капля из пипетки) добавляли к смеси Int-144d и 145а. (13 мг) и триэтиламина (0,05 мл) в безводном дихлорметане (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием 0-100% ACN в воде в качестве элюента (0,05% TFA в качестве модификатора) с получением Int-144е, LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₄N₄O₄: 386,2; Найдено: 397,2 (М+Н)⁺, и Int-145b, LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₆N₄O₄: 410,2; Найдено: 411,3 (М+Н)⁺, соответственно.

Стадия Е - Синтез соединений 144 и 145

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединения 144 и 145. 144: LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₂N₄O₄: 382,2; Найдено: 383,3 (М+1)⁺. 145: LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₄N₄O₄: 396,2; Найдено: 397,3 (М+Н)⁺.

Пример 30

Получение соединений 146А и 146В

2-(изопропилтио)-7-метокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединений Int-146a и Int-146b

Тиоацетат калия (144 мг, 1,259 ммоль) добавляли к раствору Int-144a (181 мг, 0,420 ммоль) в безводном DMF (8 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 4 ч. После охлаждения летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-146a и Int-146b. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₁N₃O₄S: 411,2; Найдено: 412,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-146c

Катализатор Уилкинсона (117 мг, 0,126 ммоль) добавляли к раствору Int-146b (52 мг, 0,126 ммоль) в метаноле (4 мл) и THF (4 мл). Полученную смесь помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-146c. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₄S: 413,2; Найдено: 414,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Получение соединений Int-146d и Int-146e.

Int-146c (0,048 г) разделяли SFC с использованием колонки OD (21×250 мм) и 35% EtOH в качестве сорастворителя с получением Int-146d (пик 1) и Int-146e (пик 2). LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₄S: 413,2; Найдено: 414,3 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединений Int-146f и Int-146g

Водный 1 М гидроксид натрия (0,076 мл, 0,076 ммоль) добавляли к раствору Int-146d (15,7 мг, 0,038 ммоль) и изопропил йодида (4 мл, 0,038 ммоль) в THF (1 мл). Полученную смесь перемешивали в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением Int-146f. Остаток использовали на следующей стадии без очистки. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₂N₃O₃S: 413,2; Найдено: 414,3 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения Int-146f, получали соединение Int-146g. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₂N₃O₃S: 413,2; Найдено: 414,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения 146А и 146В

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединения 146А и 146В. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₅N₃O₃S: 399,2; Найдено: 400,2 (М+Н)⁺.

Пример 31

Получение соединения 147

(1S,4S,4aS)-7-гидрокси-5-метил-4-(метилтио)-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединений Int-147a

Водный 1 М гидроксид натрия (0,170 мл, 0,170 ммоль) добавляли к раствору Int-146a (35 мг, 0,085 ммоль) и йодметана (11 мл, 0,170 ммоль) в THF (2 мл). Полученную смесь нагревали при 40°С в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток использовали на следующей стадии без очистки. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₁N₃O₃S: 383,1; Найдено: 384,7 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-147b

Катализатор Уилкинсона (74,8 мг, 0,081 ммоль) добавляли к раствору Int-147a (неочищенный продукт со стадии А) в метаноле (3 мл) и THF (3 мл). Полученную смесь помещали в атмосферу водорода (баллон) на ночь. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой using 0-100% ACN в воде в качестве элюента (0,05% TFA в качестве модификатора) с получением Int-147b. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₃S: 385,2; Найдено: 386,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения 147

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 147. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₁N₃O₃S: 371,2; Найдено: 372,3 (М+Н)⁺.

Пример 32

Получение соединения 148

7-гидрокси-5,12а-диметил-2а,3,4,4а,5,12а-гексагидро-1Н-изохромено[3',4':5,6]пиридо[1,2-b]пиридо[2,1-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия A - Синтез соединений Int-148a

Хлорид цинка (29,5 мг, 0,217 ммоль) добавляли к раствору Int-137d (20 мг, 0,054 ммоль) и MOMCl (0,107 мл, 1,41 ммоль) в безводном дихлорметане (1 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-148a. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₄: 381,2; Найдено: 382,3 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения 148.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 148. LCMS анал. рассч. для C₁₈H₁₉N₃O₃S: 367,2; Найдено: 368,3 (М+Н)⁺.

Пример 33

Получение соединения 149

(1R,2R)-4-((E)-бензилиден)-2,7-дигидрокси-1,5-диметил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f]-[1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-149a

p-TsOH (5,15 мг, 0,03 ммоль) добавляли к раствору Int-137d (20 мг, 0,054 ммоль) и бензальдегида (0,100 мл, 0,987 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (1 мл) в 5 м сосуде для микроволновой обработки. Сосуд закрывали крышкой и помещали в микроволновый реактор при 120°С в течение 2 ч. После охлаждения летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-149a. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₇N₃O₄: 457,2; Найдено: 458,4 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения 149

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 148. LCMS анал. рассч. для C₂₆H₂₅N₃O₄: 443,2; Найдено: 444,3 (М+Н)⁺.

Пример 34

Получение соединения 250

Cis-16-гидрокси-2-метил-2,2а,3,4,4а,5,6,10b-октагидробензо[h]пиридо[1',2':1,6][1,2,4]триазино[2,3-а]хинолин-1,15-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-150a

Тетралон (2,66 мл, 20,0 ммоль) в безводном THF (20 мл) добавляли к гидриду натрия (2,48 г, 60% суспензия в минеральном масле, 62,0 ммоль) в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По каплям добавляли раствор диметилкарбоната (4,25 мл, 50,0 ммоль) в безводном THF (20 мл) при нагревании реакционной смеси до 80°С. Когда добавление было завершено, реакционную смесь поддерживали при температуре в течение 2 часов. После охлаждения смесь разделяли между дихлорметаном и водн. 1н HCl. Водную фазу отделяли и дополнительно экстрагировали дихлорметаном (2х). Объединенные органические фазы сушили (MgSO₄). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% EtOAc в гексанах в качестве элюента, с получением Int-150a. LCMS анал. рассч. для C₁₂H₁₂O₃: 204,1; Найдено: 205,1 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-150b

Int-150a (1,60 г, 7,83 ммоль) в безводном DMF (10 мл) добавляли к гидриду натрия (0,94 г, 60% суспензия в минеральном масле, 23,5 ммоль) в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, и 4-бромбут-1-ен добавляли в одной порции. Полученную реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение ночи. После охлаждения, смесь разделяли между дихлорметаном и насыщ. водн. хлоридом аммония. Водную фазу отделяли и дополнительно экстрагировали дихлорметаном (2х). Объединенные органические фазы сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с 0-100% EtOAc in гексан в качестве элюента, с получением Int-150b. LCMS анал. рассч. для C₁₆H₁₈O₃: 258,1; Найдено: 259,2 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-150с

Водный 1,0 М гидроксид натрия (9,68 мл, 9,68 ммоль) добавляли к раствору Int-150b (0,500 г, 1,94 ммоль) в THF (15 мл). Полученную реакционную смесь нагревали при 100°С в течение ночи. После охлаждения, смесь разделяли между дихлорметаном и водн. 1н HCl. Водную фазу отделяли и дополнительно экстрагировали дихлорметаном (2х). Объединенные органические фазы сушили (MgSO₄) и летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% EtOAc в гексанах в качестве элюента, с получением Int-150c. LCMS анал. рассч. для C₁₄H₁₆O: 200,1; Найдено: 201,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-150d

Трифлатную кислоту (0,141 мл, 1,59 ммоль) добавляли к раствору 1-амино-3-метокси-N-метил-4-оксо-1,4-дигидропиридин-2-карбоксамида (0,157 г, 0,80 ммоль), Int-150c (0,159 г, 0,80 ммоль) и диацетата палладия (0,65 мг, 2,89 ммоль) в безводном диоксане (5 мл) в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-150d. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₅N₃O₃: 379,2; Найдено: 380,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-150e

Боргидрид натрия (61,8 мг, 1,63 ммоль) добавляли к раствору Int-150d (0,062 г, 0,334 ммоль) в метаноле (1 мл) в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-150e. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₇N₃O₃: 381,2; Найдено: 382,4 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-150f

Тетраоксид осмия (9 мл, 4% раствор в ьВиОН, 1,41 ммоль), затем перйодат натрия (45,4 мг, 0,212 ммоль) добавляли к раствору Int-150e (27 мг, 0,07 ммоль) в смеси THF (1 мл) и воды (0,3 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи, затем гасили добавлением водн. 10% тиосульфат натрия и перемешивали в течение 1 ч. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток тщательно экстрагировали 20% МеОН в дихлорметане (50 мл). Объединенный экстракт сушили (сульфатом натрия). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-150f. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₅N₃O₄: 383,2; Найдено: 384,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-150g

Int-150f (13 мг, 0, 034 ммоль) в смеси DMF (1 мл) и АсОН (0,1 мл) нагревали при 120°С в течение 1 ч. После охлаждения летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-150g. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₃: 365,2; Найдено: 366,1 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения 150

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 150. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₁N₃O₃: 351,2; Найдено: 352,1 (М+1)⁺.

Пример 35

Получение соединения 151

Стадия А - Синтез соединения Int-151a

Int-137c (20 мг, 0,054 ммоль) добавляли к суспензии гидрида натрия (6,5 мг, 60% суспензия в минеральном масле, 0,162 ммоль) в безводном THF в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. 3-Бром-3,3-дифторпроп-1-ен (8,5 мг (0,054 ммоль) в безводном THF (0,5 мл) добавляли к вышеуказанной выше реакционной смеси. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. По окончании, гасили добавлением насыщ. водн. хлорида аммония (0,5 мл). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали ВЭЖХ с обращенной фазой с получением Int-151a. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₅F₂N₃O₄: 445,2; Найдено: 446,4 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения 151

Следуя по существу способу, использованному для получения соединений 135А и 135В, получали соединение 151. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₃F₂N₃O₄: 431,2; Найдено: 432,3 (М+1)⁺.

Пример 36

Получение соединений 152А и 152В

2-этокси-7-гидрокси-5-метил-1-фенил-1,2,3,4,4а,5-гексагидродипиридо[1,2-b:2',1'-f][1,2,4]триазин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-151a

Гидрид натрия (5,7 мг, 60% суспензия в минеральном масле, 0,143 ммоль) добавляли к раствору Int-134d (50 мг, 0,142 ммоль) в безводном DMF (2,4 мл), охлажденному на бане со льдом в атмосфере азота. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Добавляли йодоэтан (0,024 мл, 0,297 ммоль). Полученной реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры в течение 3 часов. Смесь разделяли между EtOAc и водой. Органическую фазу отделяли, промывали насыщенным солевым раствором, сушили (сульфатом натрия). Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, с использованием 0-10% МеОН в дихлорметане в качестве элюента, с получением Int-151a. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₃N₃O₄: 381,2; Найдено: 382,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-151b

Pd-C (10%, 12,6 мг) добавляли к раствору Int-151a (45 мг, 0,118 ммоль) в МеОН (2,4 мл). Полученную суспензию помещали в атмосферу водорода (баллон) на 5 часов. Смесь фильтровали и промывали МеОН (1 мл). Фильтрат концентрировали с получением Int-151b, который использовалися на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия С - Получение соединений Int-151c и Int-151d.

Int-151b (неочищенное соединение из стадии В) разделяли SFC с использованием колонки AD-H (21 × 250 мм) и 20% МеОН в качестве сорастворителя с получением Int-151c и Int-151d. LCMS анал. рассч. для C₂₁H₂₅N₃O₄: 383,2; Найдено: 384,3 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения 152А и 152В

Хлорид лития (1,66 мг, 0,039 ммоль) добавляли к раствору Int-151c (3 мг, 7,82 ммоль) в DMF (0,16 мл). Полученную реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 3 часов. После охлаждения, раствор очищали непосредственно с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой, используя 0-100% ACN в воде в качестве элюента (0,05% TFA в качестве модификатора), с получением 152А. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₄: 369,2; Найдено: 370,3 (М+Н)⁺.

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 152А, получали соединение 152В. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₃N₃O₄: 369,2; Найдено: 370,3 (М+Н)⁺.

Примеры в таблице 6 получали с использованием процедур, аналогичных описанным в примере 36, из соответствующего исходного вещества.

Пример 38

Получение соединений 165А и 165В

1,7-дигидрокси-5-метил-1-фенил-1,3,4,4а,5,11а-гексагидро-2Н-пиридо[1,2-а]хиноксалин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-165a

Боргидрид натрия (52,7 мг, 1,394 ммоль) добавляли к раствору 5,6-дигидро-[1,1'-бифенил]-3(4Н)-она (400 мг, 2,323 ммоль) в МеОН (4,0 мл) при 0°С двумя равными порциями в течение 5 мин. После перемешивания смеси в течение 3 0 минут при температуре окружающей среды, смесь разбавляли 20 мл EtOAc, промывали 1 н HCl (2 мл), водой (2×3 мл), насыщенным солевым раствором и сушили над сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат концентрировали. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на колонке с силикагелем с 0-15% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-165a. LCMS анал. рассч. для C₁₂H₁₄O: 174,2; Найдено: 175,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-165b

DIAD (603 мкл, 3,10 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси N-метил-2-нитробензолсульфонамида (447 мг, 2,066 ммоль), Int-165а (360 мг, 2,0 66 ммоль) и 2-(дифенилфосфанил)пиридина (816 мг, 3,10 ммоль) в DCM (20 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Без отработки, смесь загружали на 100 г колонку с силикагелем, с 0-90% EtOAc в гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-165b. LCMS анал. рассч. для С₁₉Н₂₀ N₂O₄S: 372,4; Найдено: 395,2 (M+Na)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-165c

Бензенетиол (1302 мг, 11,81 ммоль) добавляли к смеси Int-165b (2,2 г, 5,89 ммоль) и карбоната калия (3266 мг, 23,63 ммоль) в ацетонитриле (100 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. По завершении смесь концентрировали. Остаток повторно растворяли в DCM (100 мл), фильтровали, концентрировали и очищали на 100 г колонке с силикагелем с 0-5% EtOAc в МеОН в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-165c. LCMS анал. рассч. для C₁₃H₁₇N: 187,3; Найдено: 188,2 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-165d

К перемешиваемому раствору Int-165c (300 мг, 1,6 ммоль) и 4-(бензилокси)-5-бром-3-метоксипиколиновой кислоты (650 мг, 1,922 ммоль) в DMF (16 мл) добавляли N-этил-N-изопропилпропан-2-амин (621 мг, 4,81 ммоль), затем HATU (914 мг, 2, 4 03 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. По окончании, реакционную смесь загружали в 100 г колонку с силикагелем с 0-100% 30% EtOH в EtOAc/гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-165d. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₇BrN₂O₃: 507,4; Найдено: 507,3, 509,3 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-165е

К перемешиваемому раствору Int-165d (670 мг, 1,320 ммоль) в THF (11 мл) и воде (2,2 мл) добавляли 4-метилморфолин 4-оксид (309 мг, 2,64 ммоль), оксид осмия(VIII) (83 9 мкл, 0,132 ммоль). Полученный раствор нагревали при 50°С в течение 24 ч. По завершении смесь охлаждали, добавляли 0,5 г метабисульфита натрия и смесь перемешивали в течение 1 ч, затем фильтровали. Фильтрат концентрировали. Остаток загружали на 120 г колонку с силикагелем с 0-100% 30% EtOH в EtOAc/гексане в качестве растворителя для элюирования, с получением Int-165e. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₉BrN₂O₅: 541,4; Найдено: 541,3, 543,3 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-165f

К перемешиваемому раствору Int-165e (650 мг, 1,20 ммоль) в МеОН (12 мл) добавляли палладий на угле (128 мг, 0,120 ммоль). Полученную смесь продували N₂ и соединяли с баллонным Н₂ на 1 ч. По окончании, реакционную смесь фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали с получением Int-165f. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₄N₂O₅: 372,4; Найдено: 373,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-165g и Int-165h

К перемешиваемому раствору Int-165f (410 мг, 1,101 ммоль) в DCM (11 мл) добавляли триэтиламин (334 мг, 3,30 ммоль) и метансульфонилхлорид (277 мг, 2,422 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. По завершении смесь концентрировали для удаления большей части DCM. К остатку добавляли 20 мл EtOAc и 5 мл 0,2 н водного раствора HCl. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄ и концентрировали с получением неочищенного продукта.

К неочищенному продукту добавляли 10 мл DMF и карбонат калия (761 мг, 5,50 ммоль). Смесь перемешивали при 100°С в течение 4 ч. По окончании, смесь фильтровали. Фильтрат загружали на колонку С18 (220 г) с 0-100% ACN в воде (с 0,05% TFA модификатором) в качестве растворителя для элюирования, для рацемической смеси (82 мг, 0,231 ммоль). Рацемическую смесь далее разделяли с помощью SFC на колонке AD-H (4,6×250 мм, 5 мкм) с 30% МеОН в качестве растворителя для элюирования, с получением элюируемого пика перед основным компонентом Int-165g и более позднего элюируемого пика Int-165h. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₂N₂O₄: 354,4; Найдено: 355,4 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения 165А

Хлорид лития (11,96 мг, 0,282 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси Int-165g (10 мг, 0,028 ммоль) в DMF (1 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. По окончании, смесь охлаждали. Смесь очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой на колонке 40 г С18 с ACN в воде (с модификатором 0,1% TFA) с получением соединения 165А. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₀N₂O₄: 340, 4; Найдено: 341,4 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 8,3-8,1 (br, 1Н), 7,3-6,95 (м, 6Н), 4,85 (с, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 2,98 (с, 3Н), 2,75-2,62 (br, 1Н), 2,62-2,39 (br, 1Н), 2,27-2,02 (м, 4Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 165А, получали соединение 165В из Int-165h. LCMS анал. рассч. для C₁₉H₂₀N₂O₄: 340,4; Найдено: 341,3 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 8,27-8,07 (br, 1Н), 7,3-6,9 (м, 6Н), 4,83 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 2,97 (с, 3Н), 2,73-2,62 (br, 1Н), 2,62-2,39 (br, 1Н), 2,26-2,04 (м, 4Н).

Пример 39

Получение соединений 166А и 166В

1,7-дигидрокси-5-метил-1-фенил-2-пропил-1,3,4,4а,5,11a-гексагидро-2Н-пиридо[1,2-а]хиноксалин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-166a

В смесь 3-этоксициклогекс-2-ен-1-она (5 г, 35,7 ммоль), гексаметилфосфорамида (12,78 г, 71,3 ммоль) и 1-йодпропана (7,28 г, 42,8 ммоль) в THF (178 мл) добавляли литий диизопропиламид (35,7 мл, 71,3 ммоль) по каплям при -78°С в атмосфере N₂. Смесь медленно нагревали до комнатной температуры в течение 2 часов. Реакцию гасили водным раствором хлорида аммония при 0°С, и нагревали до комнатной температуры, с перемешиванием. Смесь экстрагировали эфиром. Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над MgSO₄ и концентрировали. Остаток хроматографировали на силикагеле. (10:3 гексан-этилацетат) с получением Int-166a. LCMS анал. рассч. для C₁₁H₁₈O₂: 182,2; Найдено: 183,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-166b

К раствору Int-166a (3,3 г, 18,11 ммоль) в THF (91 мл) добавляли фенилмагния бромид (23,54 мл, 23,54 ммоль) при -78°С. Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 10 мин, затем нагревали до 0°С в течение 30 минут. По окончании, гасили 100 мл водного раствора NH₄Cl. Смесь экстрагировали 3×100 мл EtOAc. Объединенный органический слой сушили над MgSO₄ и концентрировали с получением 5 г неочищенного продукта.

Вышеупомянутый неочищенный продукт добавляли к 100 мл МеОН и 50 мл воды, затем добавляли 2 мл TFA. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 часов. По завершении смесь концентрировали для удаления большей части МеОН. Остаток добавляли к 100 мл EtOAc. Органический слой отделяли и сушили над MgSO₄ и концентрировали. Остаток загружали на 220 г колонку с силикагелем с 20% EtOAc в гексане в качестве элюента, с получением Int-166b. LCMS анал. рассч. для C₁₅H₁₈O: 214,3; Найдено: 215,6 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-166с

Смесь Int-166b (3,5 г, 16,33 ммоль), метанамина в МеОН (40,8 мл, 82 ммоль) добавляли к 0,2 мл TFA и 5 г безводного MgSO₄. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали. К вышеуказанному остатку добавляли 100 мл DCM и 10 мл МеОН, затем боргидрид натрия (0,989 г, 26,1 ммоль) порционно. По окончании, гасили 10 мл 2 N водного раствора HCl. Реакционную смесь сушили над MgSO₄ и концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г колонки с силикагелем с 0-20% МеОН в DCM в качестве элюента, с получением Int-166c. LCMS анал. рассч. для C₁₆H₂₃N: 229,4 Найдено: 230,4 (М+Н)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-166d.

Смесь Int-166с (1700 мг, 7,41 ммоль), 4-(бензилокси)-5-бром-3-метоксипиколиновой кислоты (2506 мг, 7,41 ммоль), триэтиламина (1500 мг, 14,82 ммоль) и HATU (3382 мг, 8,8 9 ммоль) в DCM (100 мл) перемешивали при комнатной температуре 5 часов. По окончании, добавляли 100 мл 0,2 водного раствора HCl. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄ и концентрировали. Остаток загружали на 120 г колонку с силикагелем с 0-100% EtOAc в гексане с получением Int-166d. LCMS анал. рассч. для C₃₀H₃₃BrN₂O₃: 549,5 Найдено: 550,4 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-166е

К перемешиваемому раствору Int-166d (2,3 г, 4,19 ммоль) в THF (35,9 мл)/вода (5,98 мл) добавляли 4-метилморфолин 4-оксид (0,981 г, 8,37 ммоль) и оксид осмия (VIII) (2,66 мл, 0,419 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 50°С в течение ночи. По окончании, добавляли 5 г твердого метабисульфита натрия и 5 г MgSO₄. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью 120 г колонки С18 с 0-100% ACN в воде с модификатором 0,05% TFA с получением Int-166e. LCMS анал. рассч. для C₃₀H₃₅BrN₂O₅: 583,5; Найдено: 584,4 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения Int-166f

К перемешиваемому раствору Int-166e (1,1 г, 1,885 ммоль) в метаноле (20 мл)/БСМ (2 мл) добавляли палладий на угле (0,201 г, 0,189 ммоль). Полученную смесь гидрогенизовали под баллоном с Н₂ при комнатной температуре в течение 1 часа. По окончании, смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали с получением Int-166f. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₃₀N₂O₅: 414,5; Найдено: 415,4 (М+Н)⁺.

Стадия G - Синтез соединения Int-166g

К перемешиваемому раствору Int-166f (760 мг, 1,834 ммоль) в 20 мл THF добавляли триэтиламин (649 мг, 6,42 ммоль) и метансульфонилхлорид (462 мг, 4,03 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа. По завершении, смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали и добавляли 50 мл EtOAc. Промывали 0,1 н. водным раствором HCl и сушили над MgSO₄. Концентрировали с получением неочищенного продукта.

К вышеуказанному неочищенному продукту добавляли DMF (20 мл) и карбонат калия (1267 мг, 9,17 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 100°С в течение ночи. По завершении смесь охлаждали и добавляли 100 мл воды и 100 мл EtOAc. Органический слой отделяли и сушили над MgSO₄. Концентрировали и остаток загружали на 100 г колонку С18 с 0-100% ACN в воде (0,05% TFA модификатор) в качестве элюента, с получением Int-166g (320 мг, 0,807 ммоль), который подвергали разделению SFC (AD-H, 4,6×250 мм, EtOH) с получением Int-166g-пик1 и Int-166g-пик2. LCMS анал. рассч. для C₂₃H₂₈N₂O₄: 396,5; Найдено: 397,4 (М+Н)⁺.

Стадия Н - Синтез соединения 166А и 166В

Int-166g-пик1 (15 мг, 0, 038 ммоль) растворяли в суспензии LiCl (16,04 мг, 0,378 ммоль) в DMF (1000 мкл) и смесь перемешивали при 100°С в течение 1 часа. Суспензию фильтровали. Фильтрат очищали препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (на колонке SunFire С18 OBD Prep), элюируя 10-90% ацетонитрил/вода с модификатором 0,1% TFA с получением 166А. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₆N₂O₄: 382,5; Найдено: 383,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 8,14 (с, 1Н), 7,26-6,94 (м, 5Н), 4,68 (с, 1Н), 4,38 (с, 1Н), 3,06 (с, 3Н), 2,67 (д, J=12,4 Гц, 1Н), 2,30-2,00 (м, 5Н), 1,68-1,26 (м, 5Н).

Следуя по существу способу, использованному для получения соединения 166А, получали соединение 166В из Int-166g-пик2. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₆H₂O₄: 382,5; Найдено: 383,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 8,14 (с, 1Н), 7,26-6,94 (м, 5Н), 4,68 (с, 1Н), 4,38 (с, 1Н), 3,06 (с, 3Н), 2,67 (д, J=12,4 Гц, 1Н), 2,30-2,00 (м, 5Н), 1,68-1,28 (м, 5Н).

Пример 40

Получение соединений 167

7-гидрокси-1-метокси-5-метил-1-фенил-1,3,4,4а,5,11а-гексагидро-2Н-пиридо[1,2-а]хиноксалин-6,8-дион

Стадия А - Синтез соединения Int-167a

К перемешиваемому раствору дибензил (3-гидроксициклогексан-1,2-диил) дикарбамата (2 г, 5,02 ммоль) в CH₂Cl₂ (50,2 мл) добавляли периодинан Десса-Мартина (3,19 г, 7,53 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Добавляли каплю воды и отфильтровывали осадок через слой целита. Фильтрат концентрировали. Остаток загружали на 120 г колонку с силикагелем с 0-100% 30% EtOH в EtOAc/гексане в качестве элюента, с получением Int-167a. LCMS анал. рассч. для C₂₂H₂₄N₂O₅: 396,4; Найдено: 397,2 (М+Н)⁺.

Стадия В - Синтез соединения Int-167b

К перемешиваемому раствору Int-167a (1800 мг, 4,54 ммоль) в THF (50 мл) добавляли фениллитий (9559 мкл, 18,16 ммоль) при -78°С. Полученную смесь медленно нагревали до 0°С в течение 1 часа. По окончании, гасили 20 мл водного раствора NH₄C1. Смесь экстрагировали 2×30 мл EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и концентрировали. Остаток очищали с помощью 100 г колонки с силикагелем с 0-100% 30% EtOH в EtOAc/гексан с получением Int-167b. Переносили на следующую стадию без дополнительной очистки. LCMS анал. рассч. для C₂₈H₃₀N₂O₅ : 474,5; Найдено: 475,3 (М+Н)⁺.

Стадия С - Синтез соединения Int-167c

К перемешиваемому раствору Int-167b (700 мг, 1,475 ммоль) в МеОН (20 мл) добавляли палладий на угле (157 мг, 0,148 ммоль). Полученную смесь гидрогенизовали под баллоном с Н₂ в течение 3 часов. Смесь фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали с получением Int-167c. LCMS анал. рассч. для C₁₂H₁₈N₂O: 206,3; Найдено 207,3 (M+H)⁺.

Стадия D - Синтез соединения Int-167d

Перемешиваемый раствор Int-167c (399 мг, 1,454 ммоль), 2,3-диамино-1-фенилциклогексан-1-ол (300 мг, 1,454 ммоль) в н-метилимидазоле (5 мл) нагревали при 80°С в течение ночи. По завершении смесь охлаждали. Реакционную смесь загружали на 100 г колонку С18 с 0-100% ACN в воде в качестве элюента, с получением неочищенного продукта. Затем неочищенный продукт загружали на Gilson с использованием колонки SunFire С18 OBD Prep с 0-100% ACN в воде (0,1% TFA модификатор) в качестве элюента, с получением Int-167d. LCMS анал. рассч. для C₂₅H₂₄N₂O₄: 416,5; Найдено 417,2 (М+Н)⁺.

Стадия Е - Синтез соединения Int-167e

К перемешиваемому раствору Int-167d (40 мг, 0,096 ммоль) в DMF (960 мкл) добавляли йодметан (40,9 мг, 0,288 ммоль) и гидрид натрия (11,52 мг, 0,288 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 1 часа. По окончании, гасили 2 каплями 1 н. водного раствора хлорида аммония. Смесь загружали на 50 г колонку С18, с 0-100% ACN в воде (0,05% TFA в качестве модификатора) в качестве элюента, с получением Int-167e. LCMS анал. рассч. для C₂₇H₂₈N₂O₄: 444,5; Найдено 445,2 (М+Н)⁺.

Стадия F - Синтез соединения 167

Pd/C (5,75 мг, 5,40 мкмоль) добавляли к перемешиваемой, охлажденной до комнатной температуры смеси Int-167e (24 мг, 0,054 ммоль) в метаноле. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем реакционную смесь фильтровали. Фильтрат загружали на колонку 50 г С18, элюируя 0-100% ацетонитрил/вода (0,05% TFA) с получением 167. LCMS анал. рассч. для C₂₀H₂₂N₂O₄: 354,4; Найдено: 355,2 (М+Н)⁺. ¹Н ЯМР (500 МГц, метанол-d⁴) δ 7,38 (с, 2Н), 4,73 (с, 1Н), 4,41 (с, 1Н), 3,33 (с, 13Н), 3,25 (с, 3Н), 3,13 (с, 3Н), 2,05 (с, 2Н).

Анализ противовирусного средства нейраминидазы вируса гриппа А

Флуоресцентный анализ, отслеживающий активность фермента нейраминидазы (NA) вируса гриппа в инфицированных клетках, был разработан для оценки противовирусных соединений против вируса гриппа А. Активность NA обеспечивает высвобождение вирионов гриппа из инфицированных клеток, но она также функциональна в системах клеточных культур, которые сохраняют инфекционный вирус на поверхности клеток, таких как эпителиальные клетки почки собак Madin-Darby (MDCK), которые требуют химического вмешательства для высвобождения вируса. Активность NA можно отслеживать по увеличению флуоресценции MUNAN (4-метилумбеллиферон), высвобождаемого в качестве продукта ферментативного расщепления субстрата 2'-(4-метилумбеллиферил)-α-D-N-ацетилнейраминовой кислоты (MUNANA). Количество флуоресценции прямо пропорционально количеству активности фермента NA, которое увеличивается по мере репликации вируса.

Клетки MDCK (Sigma) инкубировали при 37°С в атмосфере 5% CO₂ и влажности >85% в среде для роста DMEM с глутамаксом и пируватом (Thermo Fisher) с 5% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сывороткой (Thermo Fisher) и 1% Pen-Strep (Thermo-Fisher). В день анализа клетки промывали 15-20 мл PBS (Thermo Fisher), затем добавляли 1,5 мл 0,25% раствора трипсин-EDTA (Thermo Fisher) и инкубировали при 37°С в течение 2-5 мин. После удаления клеток из планшета, для ресуспендирования клеток добавляли 6-8 мл среды для роста. Клетки подсчитывали в счетчике ViCell (Beckman) и доводили плотность клеток до 80000 клеток/мл добавлением среды для роста. FLU A (PR/8/34) при 3,4Е+08 БОЕ/мл разводили 1:25000 в клеточной суспензии MDCK.

Соединения, разведенные в DMSO, титровали (10-точечное, 3-кратное разведение) и добавляли с помощью акустического дозирования (200 нл, Labcyte Echo) в 384-луночный микропланшет из черного полистирола, обработанный тканевой культурой (Corning). Суспензию клеток и вируса (25 мкл) вносили в каждую лунку аналитического планшета. Планшеты кратковременно центрифугировали до (300 об/мин × 30 с) и инкубировали при 37°С в атмосфере 5% CO₂, и влажности >85% в течение 48 ч. Для определения активности NA субстрат MUNANA (MP Biomedical) разводили в dH₂O в концентрации 2,5 мМ. Далее субстрат разводили в буфере для анализа (66,6 мМ MES, 8 мМ CaCl₂, рН 6,5) до концентрации 200 мкМ. В каждую лунку планшета вносили по 6 мкл разведенного субстрата, встряхивали в течение 1 мин для перемешивания и возвращали в инкубатор на 1 ч при 37°С. Затем в каждую лунку добавляли по 25 мкл стоп-раствора MUNANA (0,2 М карбонат натрия, Fisher) в dH₂O с последующим встряхиванием в течение 1 мин. Для измерения интенсивности флуоресценции (Em=355 нм, Em=460 нм) каждой лунки использовали планшетный ридер Envision (Perkin Elmer).

Первоначальные данные для каждой тест-лунки нормализовали к среднему сигналу лунок со 100% ингибированием (максимальный эффект; 100% ингибирование) и только инфицированных вирусом клеток (минимальный эффект; 0% ингибирование) для расчета % ингибирования по следующей формуле: % ингибирования=100*(исследуемое соединение - максимальный эффект)/(минимальный эффект - максимальный эффект). Данные анализировали с использованием ActivityBase (IDBS), и построили кривые доза-эффект путем построения графика процент ингибирования (ось Y) в зависимости от Log₁₀ концентрации соединения (ось X). Значения IC₅₀ рассчитывали с использованием нелинейной регрессии, четырехпараметрической сигмоидальной модели доза-эффект.

Соединения по настоящему изобретению исследовали в описанном анализе, и результаты приведены в таблице ниже.

Claims (41)

1. Соединение формулы

где X представляет собой N;

Y отсутствует или представляет собой -СН₂-;

Z представляет собой NR¹;

R¹ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила;

R² представляет собой фенил, который необязательно замещен одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, С_1-6 алкила, С_1-6 галогеналкила, OCHF₂ или -ОС_1-6 алкила;

R³ представляет собой водород, гидрокси или С_1-6 алкил;

R⁴ выбран из группы, состоящей из водорода, С_1-6 алкила, C_1-6 галогеналкила, СН₂СН₂ОН, СН₂СН₂ОСН₃ или циклопропилметила;

R^4a выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила;

R⁵ выбран из группы, состоящей из водорода и С_1-6 алкила;

R⁶ представляет собой водород, С_1-6 алкил;

или R⁴ и R⁶ могут быть взяты с атомами углерода, к которым они присоединены, с образованием С_4-6 циклоалкильной группы;

R⁷ представляет собой водород или C_1-3 алкил;

R⁸ представляет собой водород, С_1-6 алкил;

R⁹ представляет собой водород, циано или С_1-6 алкил, где указанный алкил необязательно замещен одним-тремя атомами галогена;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где R¹ представляет собой метил; или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п. 1 или 2, где R² представляет собой фенил, который необязательно замещен одним или двумя заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, СН₃, CF₃, OCHF₂ и ОСН₃; или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по любому из пп. 1-3, где R³ представляет собой водород, метил, этил или гидрокси; или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по любому из пп. 1-4, где R⁴ представляет собой водород, метил, этил, пропил, трифторэтил, СН₂СН₂ОН, СН₂СН₂ОСН₃ или циклопропилметил; или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по любому из пп. 1-5, где R⁴ и R⁶ могут быть взяты с атомами углерода, к которым они присоединены, с образованием С_4-6 циклоалкильной группы; или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение, выбранное из

или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Фармацевтическая композиция, ингибирующая кэп-зависимую эндонуклеазу, включающая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

9. Способ лечения заболевания, вызванного вирусом, имеющим кэп-зависимую эндонуклеазу, включающий введение композиции по п. 8 млекопитающему, нуждающемуся в этом.

10. Способ ингибирования кэп-зависимой эндонуклеазы в вирусе, включающий введение композиции по п. 8 млекопитающему, нуждающемуся в этом.

11. Способ лечения гриппа у млекопитающего, вызванного вирусом, имеющим кэп-зависимую эндонуклеазу, включающий введение композиции по п. 8 млекопитающему, нуждающемуся в этом.

12. Способ профилактики гриппа у млекопитающего, вызванного вирусом, имеющим кэп-зависимую эндонуклеазу включающий введение композиции по п. 8 млекопитающему, нуждающемуся в этом.

13. Способ по п. 11, где млекопитающее представляет собой человека.

14. Способ по п. 12, где млекопитающее представляет собой человека.

15. Соединение по любому из пп. 1-7 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в получении лекарственного средства для лечения или профилактики гриппа вызванного вирусом, имеющим кэп-зависимую эндонуклеазу у млекопитающего, нуждающегося в этом.

16. Соединение по любому из пп. 1-7 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии для лечения или профилактики заболевания, вызванного вирусом, имеющим кэп-зависимую эндонуклеазу.