RU2735982C2 - Способ прогнозирования радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей - Google Patents
Способ прогнозирования радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2735982C2 RU2735982C2 RU2020118118A RU2020118118A RU2735982C2 RU 2735982 C2 RU2735982 C2 RU 2735982C2 RU 2020118118 A RU2020118118 A RU 2020118118A RU 2020118118 A RU2020118118 A RU 2020118118A RU 2735982 C2 RU2735982 C2 RU 2735982C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tumor
- cells
- radiosensitivity
- patients
- cancer
- Prior art date
Links
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 73
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 title claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 167
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 55
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims abstract description 49
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 claims abstract description 38
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 claims abstract description 38
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 25
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 19
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 62
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 28
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 12
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 9
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 abstract description 18
- 230000005855 radiation Effects 0.000 abstract description 13
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 abstract description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 abstract 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 14
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 13
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 10
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 7
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 7
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 206010073306 Exposure to radiation Diseases 0.000 description 3
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000610551 Homo sapiens Prominin-1 Proteins 0.000 description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- 102100040120 Prominin-1 Human genes 0.000 description 3
- 238000011869 Shapiro-Wilk test Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 208000026037 malignant tumor of neck Diseases 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000005369 Aldehyde Dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020002663 Aldehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102100040069 Aldehyde dehydrogenase 1A1 Human genes 0.000 description 2
- 101710150756 Aldehyde dehydrogenase, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 102100033511 Keratin, type I cytoskeletal 17 Human genes 0.000 description 2
- 108010066325 Keratin-17 Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000006607 hypermethylation Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006335 response to radiation Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 101150025032 13 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000052030 Aldehyde Dehydrogenase 1 Family Human genes 0.000 description 1
- 101710196131 Aldehyde dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100022622 Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 102000007372 Ataxin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010032963 Ataxin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 102100039848 Beta-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoprotein beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100024210 CD166 antigen Human genes 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- -1 Cod105 Proteins 0.000 description 1
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 1
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 1
- 241001290006 Fissurella Species 0.000 description 1
- 102100023513 Flotillin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710164820 Flotillin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010016803 Fluid overload Diseases 0.000 description 1
- 102100024165 G1/S-specific cyclin-D1 Human genes 0.000 description 1
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000972916 Homo sapiens Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 2-beta-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000887635 Homo sapiens Beta-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoprotein beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000980840 Homo sapiens CD166 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000898034 Homo sapiens Hepatocyte growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000937642 Homo sapiens Malonyl-CoA-acyl carrier protein transacylase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101001009683 Homo sapiens Neuronal membrane glycoprotein M6-a Proteins 0.000 description 1
- 101000742859 Homo sapiens Retinoblastoma-associated protein Proteins 0.000 description 1
- 101000632266 Homo sapiens Semaphorin-3C Proteins 0.000 description 1
- 101000868152 Homo sapiens Son of sevenless homolog 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 101710159002 L-lactate oxidase Proteins 0.000 description 1
- 101150017554 LGR5 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027329 Malonyl-CoA-acyl carrier protein transacylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102100030394 Neuronal membrane glycoprotein M6-a Human genes 0.000 description 1
- 101150044441 PECAM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 102100026858 Protein-lysine 6-oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 1
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100038042 Retinoblastoma-associated protein Human genes 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 101000930003 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Diacylglycerol O-acyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100027980 Semaphorin-3C Human genes 0.000 description 1
- 208000009415 Spinocerebellar Ataxias Diseases 0.000 description 1
- 101150080074 TP53 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002710 external beam radiation therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004547 gene signature Effects 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical class C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000003026 hypopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 238000009099 neoadjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 108700025694 p53 Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000002638 palliative care Methods 0.000 description 1
- 210000003681 parotid gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 201000003624 spinocerebellar ataxia type 1 Diseases 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 208000011479 upper respiratory tract disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
- A61N5/00—Radiation therapy
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и радиологии, и раскрывает способ прогнозирования радиочувствительности рака верхних дыхательных путей. Способ включает окрашивание суспензии биопсийных клеток с использованием моноклональных антител к CD44, CD24, CD45 и ДНК-связывающего красителя Хёхст33342, с помощью проточной цитометрии выявляют опухолевые стволовые клетки с иммунофенотипом CD44+CD24-/lowи определяют их относительное количество среди ядросодержащих СD45-Хёхст33342+клеток, затем сравнивают относительное количество опухолевых стволовых клеток до лечения и после облучения в дозе 10 Гр, далее по изменению этого показателя прогнозируют степень регрессии новообразования под действием ионизирующего излучения. Предложенный способ повышает точность оценки показаний к проведению лучевой терапии больных раком ВДП и может быть использовано для прогнозирования индивидуальной радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей на начальных этапах лучевой и химиолучевой терапии. 5 пр., 5 табл., 5 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии и радиологии, и может быть использовано для прогнозирования индивидуальной радиочувствительности злокачественных новообразований (ЗНО) верхних дыхательных путей (ВДП) на начальных этапах лучевой и химиолучевой терапии.
В индустриально развитых странах около 70% онкологических больных получают лучевую терапию в виде основного, адъювантного, неоадъювантного и паллиативного лечения (Андреев В.Г. и др. Терапевтическая радиология . Руководство для врачей / Под редакцией А.Ф. Цыба, Ю.С. Мардынского. М.: Медкнига, 2010. 552 с.). Тенденция к возрастанию роли ионизирующих излучений в лечении злокачественных новообразований обусловлена высокой эффективностью и органосохраняющей направленностью его воздействия на пораженный орган, позволяющей добиться выздоровления на фоне хорошей социальной и семейной реабилитации (Терновой C.К. и др. Лучевая диагностика и терапия: Учебник для студентов медицинских вузов в 3-х томах. М.: Медицина, 2008).
Вместе с тем известно, что радиочувствительность рака ВДП (как и других локализаций) сильно различается на индивидуальном уровне при одних и тех же клинико-морфологических показателях опухолевого процесса (анатомическая область, стадия, гистологический тип, степень дифференцировки опухолевых клеток). Этот факт делает неэффективным использование радиотерапии у части больных и определяет необходимость выявления таких пациентов ещё до начала или на первых этапах лечения с целью его оптимизации.
Среди причин широкой индивидуальной вариабельности радиочувствительности ЗНО следует указать такие хорошо известные биологические факторы как различия в оксигенации опухолей и пролиферативной активности опухолевых клеток (Деденков А.Н. и др. Прогнозирование реакции опухолей на лучевую и лекарственную терапию// М.: Медицина, 1987, 159 с.; Diehn M. et al. Association of Reactive Oxygen Species Levels and Radioresistance in Cancer Stem Cells// Nature. 2009. V. 458. N7239. P. 780–783; Быченков О.А. и др. Способ определения радиочувствительности опухоли слизистых оболочек полости рта, RU2387472). В последние годы интенсивно исследуются молекулярно-биологические показатели (профиль генной экспрессии, различные мутации, наличие папиломовирусной инфекции), также влияющие на радиочувствительность опухолей (Rieckmann T. et al. HNSCC cell lines positive for HPV and p16 possess higher cellular radiosensitivity due to an impaired DSB repair capacity// Radiotherapy and Oncology. 2013. V.107, N2. P. 242-246; Beck T.N. et al. Head and neck squamous cell carcinoma: Ambiguous human papillomavirus status, elevated p16, and deleted retinoblastoma 1// Head Neck. 2017. V.39. N3:E34-E39; Foy J.P. et al. A 13-gene expression-based radioresistance score highlights the heterogeneity in the response to radiation therapy across HPV-negative HNSCC molecular subtypes// BMC Med. 2017. V. 15. N1:165).
Известны биомаркеры и методы прогнозирования клинического исхода рака головы и шеи, включающего рак ВДП, на основе таких характеристик опухоли как профиль генной экспрессии (Pradhan S. et al. A chip and a method for head & neck cancer prognosis, WO/2019/220459), экспрессия ряда микроРНК (Ko Y-H. Biomarker microRNA for prediction of prognosis of head and neck cancer, WO/2017/073862), уровень экспрессии p16ink4a и ССND1 (Hayes D. et al. Method for head & neck cancer prognosis, WO/2013/192089), гиперметилирование промоторов ряда генов (Guerrero-Preston R. et al. Hypermethylation biomarkers associated with poor survival outcomes for head & neck squamous cell cancer, WO/2015/066170), мутации гена ТР53 (Lichtarge O. Biological action of missense genotype perturbations on phenotype, WO/2014/007863), белковая экспрессия цитокератина 17 (Shroyer K. et al. Keratin 17 as a biomarker for head & neck cancers, WO/2015/175858). Все указанные методы позволяют прогнозировать общую и (или) безрецидивную выживаемость больных, но в этих источниках нет сведений о возможности прогнозирования степени регрессии ЗНО, которая является непосредственным показателем радиочувствительности опухоли.
Известен способ оценки радиочувствительности рака верхних дыхательных путей (Замулаева И.А. и др. RU 2505817), основанный на определении частоты гемопоэтических стволовых клеток с иммунофенотипом CD34+CD45low в периферической крови больных до лечения.
Однако все вышеупомянутые методы прогнозирования не учитывают наличие в ЗНО фракции опухолевых стволовых клеток (ОСК), которые резистентны к воздействию многих противоопухолевых агентов, включая ионизирующее излучение (Zhu P. et al. Cancer stem cells and tumorigenesis// Biophysics Reports. 2018. V 4. №4. P. 178-188; Lytle N.K. et al. Stem cells fate in cancer growth, progression and therapy resistance// Nature Reviews. 2018. V.18. P. 669-680; Battle E., Clevers H. Cancer stem cells revisited// Nature Medicine. 2017. V.23. N.8. P. 1124-1134; Матчук О.Н. и др. Чувствительность клеток SP линии меланомы B16 к действию редко- и плотноионизирующего излучения// Радиационная биология. Радиоэкология. 2012. Т.52. №3. С. 261-267; Матчук О.Н., Замулаева И.А. Количественные изменения популяции стволовых клеток рака шейки матки линии Hela под влиянием фракционированного γ-облучения in vitro// Радиация и риск. 2019. Т.28. №2. C.112-123). Принимая во внимание резистентность ОСК к противоопухолевой терапии, полагают, что именно ОСК обеспечивают репопуляцию опухолевых клеток в ходе лечения, и именно эти клетки, сохранившие жизнеспособность и пролиферативный потенциал в ходе лучевой и химиотерапии, могут являться причиной развития рецидивов и метастазов после окончания лечения.
Известны различные методы выявления ОСК, которые включают использование лектинов различного происхождения (Carre V., Lacroix A. Method for isolating and detecting cancer stem cells, WO/2018/224761), (Carre V, Lacroix A. Method for isolating and detecting cancer stem cells, WO/2019/171010), (Lacroix A. et al. Method for detecting cancer stem cells, WO/2017/093696), микро РНК (Renaud S. et al. MiRNA as biomarkers and regulators of cancer stem cells, WO/2017/207623), CD133-связывающих аптамеров РНК (Duan W. CD133 aptamers for detection of cancer stem cells, WO/2014/019024), флуоресцентных аналогов глюкозы (Satake N., Nitin N. Methods of selecting and isolating cancer stem cells, WO/2016/073737), маркеров CD 133, CD13, SSA, ST6 GALNAC 1, GCNT3, MGAT 5 (Miyoshi E et al. Method for isolating cancer stem cells, WO/2012/039430), SEMA3C, LOX, GPM6A, HGF/SF, ALDH1 (Dekel B. et al. Identification of cancer stem cell markers and use of same for diagnosis and treatment, WO/2015/198334), Lgr5 или Lgr6 (Clevers J. et al. A Method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells, WO/2009/022907), CD20, CD24, CD34, CD38, CD44, CD45, Cod105, CD133, CD166, EpCAM, ESA, SCA1, Pecam, Stro1 (Gupta P.et al. Methods for identification and use of agents targeting cancer stem cells, WO/2009/126310). В том числе для выявления стволовых клеток рака ВДП используют антитела к поверхностным маркерам СD44 и CD24, при этом детекцию иммунореактивности проводят с помощью методов иммуногистохимии или проточной цитометрии. Известно, что ОСК ВДП характеризуются:
- высокой экспрессией CD44 (CD44+) (Okamoto A. et al. Expansion and characterization of cancer stem-like cells in squamous cell carcinoma of the head and neck//Oral Oncol. 2009. V.45. N7. P.633-639; Prince M.E. et al. Identification of a subpopulation of cells with cancer stem cell properties in head and neck squamous cell carcinoma//Proc Natl Acad Sci USA. 2007. V.104. N3. P. 973-978; Kokko L.L. et al. Significance of site-specific prognosis of cancer stem cell marker CD44 in head and neck squamous-cell carcinoma//Oral Oncol. 2011. V.47. N6. P. 510-516; Chen J. et al. Significance of CD44 expression in head and neck cancer: a systemic review and meta-analysis// BMC Cancer. 2014. V.14: 15; Chai L. et al. CD44 expression is predictive of poor prognosis in pharyngolaryngeal cancer: systematic review and meta-analysis// Tohoku J Exp Med. 2014. V.232. N1. P. 9-19);
- отсутствием или низкой экспрессией CD24 (CD24-/low) (Chen C. et al. Evidence for epithelial-mesenchymal transition in cancer stem cells of head and neck squamous cell carcinoma//PLoS One. 2011. V. 6. N1:e16466; Chen Y.C. et al. Aldehyde dehydrogenase 1 is a putative marker for cancer stem cells in head and neck squamous cancer//Biochem Biophys Res Commun. 2009. V. 385. N3. P. 307-313; Facompre N. et al. Stem-like cells and therapy resistance in squamous cell carcinomas// Adv Pharmacol. 2012. V. 65. P.235-265; Han J. et al. Identification and characterization of cancer stem cells in human head and neck squamous cell carcinoma// BMC Cancer. 2014. V. 14:173; Modur V. et al. CD24 Expression May Play a Role as a Predictive Indicator and a Modulator of Cisplatin Treatment Response in Head and Neck Squamous Cellular Carcinoma//PLoS One. 2016. V. 11. N6: e0156651; Okamoto A. et al. Expansion and characterization of cancer stem-like cells in squamous cell carcinoma of the head and neck//Oral Oncol. 2009. V.45. N7. P.633-639; Albers A.A. Stem cells in squamous head and neck cancer// Crit Rev Oncol Hematol. 2012. V. 81. N3. P. 224-240).
Поэтому OСК ВДП могут быть выявлены по иммунофенотипу CD44+CD24-/low.
Известны многочисленные данные об ассоциации высокого количества ОСК или высокой экспрессии маркеров, связанных с ОСК, до лечения с низкой выживаемостью больных раком ВДП, что является основой для создания методов прогнозирования агрессивности ЗНО и эффективности лечения таких больных (Chen J. et al. Significance of CD44 expression in head and neck cancer: a systemic review and meta-analysis// BMC Cancer. 2014. V.14:15; Kokko L.L. et al. Significance of site-specific prognosis of cancer stem cell marker CD44 in head and neck squamous-cell carcinoma//Oral Oncol. 2011. V.47. N6. P. 510-516; Chai L. et al. CD44 expression is predictive of poor prognosis in pharyngolaryngeal cancer: systematic review and meta-analysis//Tohoku J Exp Med. 2014. V.232. N1. P. 9-19; van der Heijden M. et al. Biological Determinants of Chemo-Radiotherapy Response in HPV-Negative Head and Neck Cancer: A Multicentric External Validation// Front Oncol. 2020. V.9:1470; Qian X. et al. Prognostic significance of ALDH1A1-positive cancer stem cells in patients with locally advanced, metastasized head and neck squamous cell carcinoma// J Cancer Res Clin Oncol. 2014. V. 140. N7. P.1151-1158; Szafarowski T. et al. Assessment of cancer stem cell marker expression in primary head and neck squamous cell carcinoma shows prognostic value for aldehyde dehydrogenase (ALDH1A1)//Eur J Pharmacol. 2020. V. 867:172837; Athanassiou-Papaefthymiou M. et al. Evaluation of CD44 variant expression in oral, head and neck squamous cell carcinomas using a triple approach and its clinical significance//Int J Immunopathol Pharmacol. 2014. V. 27. N3. P. 337-349; Linge A. et al. HPV status, cancer stem cell marker expression, hypoxia gene signatures and tumour volume identify good prognosis subgroups in patients with HNSCC after primary radiochemotherapy: A multicentre retrospective study of the German Cancer Consortium Radiation Oncology Group (DKTK-ROG)// Radiother Oncol. 2016. V.121. N3. P. 364-373).
Однако, цитированные выше методы, основанные на количественной оценке ОСК в ЗНО ВДП до лечения, позволяют прогнозировать общую и (или) безрецидивную выживаемость больных, но не степень регрессии ЗНО, которая является непосредственным показателем радиочувствительности опухоли. Кроме того, эти методы не учитывают реакцию пула ОСК на лечебное воздействие.
Прототипом предлагаемого технического решения является способ прогнозирования результатов радиохимиотерапии местнораспространенного рака головы и шеи, включая рак гортани, гортаноглотки, носоглотки, ротоглотки, околоушной железы, по экспрессии маркера CD44 до лечения (Koukourakis M.I. et al. Cancer stem cell phenotype relates to radio-chemotherapy outcome in locally advanced squamous cell head–neck cancer// British Journal of Cancer. 2012. V. 106. P. 846-853). Группу исследования составляли больные с неоперабельными опухолями или с рецидивами заболевания, которым проводили платиносодержащую химиотерапию и радиотерапию в режиме гипофракционирования дозы (2,7 Гр х 20-22 фракции в течение 4-5 недель) с ежедневным введением цитопротекторного средства Амифостин. В биопсином материале 74 больных до лечения оценивали экспрессию ряда мембранных и цитоплазматических маркеров стволового состояния клеток (СD44, CD24, ALDH1, Oct4 и др.) с помощью метода иммуногистохимии. Через 2-4 месяца после завершения радиохимиотерапии оценивали ответ опухоли (первичного очага и лимфатических узлов) на лечение, разделяя больных на 2 группы с полным или неполным ответом по данным компьютерной томографии. Высокая доля CD44+ клеток до лечения и стадия N+ были статистически значимо ассоциированы с неполным ответом (р=0,04), причем оба параметра имели независимое прогностическое значение. Кроме того, экспрессия CD44 и ряд других биологических и клинико-морфологических параметров имели прогностическое значение в отношении безрецидивной выживаемости. Экспрессия СD24 не имела прогностического значения ни в отношении ближайших, ни в отношении отдаленных результатов лечения.
Однако в работе не проводилось одновременного определения экспрессии CD44 и CD24 на одних и тех же клетках, поэтому прогностическое значение количества клеток с иммунофенотипом CD44+CD24-/low до лечения не изучалось, как не изучалось и прогностическое значение ответа этих клеток в ходе лечения. В работе также не приводится сведений о чувствительности и специфичности методов прогнозирования ответа опухоли на лечение или безрецидивной выживаемости ни по одному из изученных показателей, в том числе по экспрессии CD44. Важно, что все оценки прогностического значения CD44+ клеток относятся к гипофракционированному облучению неоперабельных или рецидивных опухолей. Прогностическое значение этих клеток при использовании стандартных режимов фракционирования дозы (по 2,0Гр на фракцию) для лечения первичных операбельных опухолей не выяснялось.
Техническим результатом заявленного изобретения является прогнозирование радиочувствительности ЗНО ВДП на основе радиационного ответа популяции ОСК после первых сеансов лучевой терапии и формировании группы больных с неблагоприятным прогнозом результатов лечения по критерию низкой степени регрессии опухоли.
Указанный технический результат достигается тем, что также как и в известном способе получают биопсийные образцы опухолевой ткани до лечения и оценку экспрессии CD44 и CD24 с использованием моноклональных антител.
Особенностью заявляемого способа является то, что относительное количество опухолевых стволовых клеток определяют после облучения в суммарной очаговой дозе 10Гр и сравнивают с таковым до лечения, затем по изменению этого показателя прогнозируют степень регрессии новообразования под действием ионизирующего излучения, и если:
- относительное количество опухолевых стволовых клеток увеличивается более чем на 1% по сравнению с их исходным количеством до лечения, то прогнозируют низкую радиочувствительность опухоли;
- относительное количество опухолевых стволовых клеток увеличивается не более чем на 1% включительно, сохраняется на одинаковом уровне или уменьшается по сравнению с исходным количеством этих клеток до лечения, то прогнозируют высокую радиочувствительность опухоли.
Сущность изобретения заключается в том, что у больного раком ВДП берут биопсийный материал опухолевой ткани до лечения и после первых пяти сеансов лучевой терапии в режиме стандартного фракционирования дозы, т.е. после облучения в суммарной очаговой дозе (СОД) 10 Гр, определяют относительное количество CD44+CD24-/low ОСК и оценивают его изменение, по которому прогнозируют характер реакции ЗНО на лучевую или химиолучевую терапию. Так, если в биопсийном материале больного после облучения в СОД 10Гр наблюдается сильное увеличение относительного количества ОСК (выше 1,0 %) по сравнению с исходным уровнем до лечения, то прогнозируют низкую радиочувствительность опухоли (т.е. низкую степень её регрессии - менее 50% - по завершении первого этапа лучевой терапии в СОД 45-50 Гр). Если наблюдается уменьшение, сохранение на исходном уровне или слабое увеличение (до 1% включительно) относительного количества ОСК, то прогнозируют высокую радиочувствительность опухоли (т.е. высокую степень её регрессии - 50% и более).
Изобретение поясняется подробным описанием, примерами выполнения и иллюстрациями, на которых изображено:
Фиг. 1 - Точечный график распределения клеток биопсийного материала рака ВДП по интенсивности окрашивания антителами к CD45, меченными конъюгатом фикоэритрина c цианином-5 (ФЭ-Сy5), и ДНК-связывающим красителем Хёхст33342 (R1 – регион ядросодержащих клеток, не связывающих антитела к CD45).
Фиг. 2 – Точечные графики распределения клеток, взятых из региона R1 (фиг. 1), по интенсивности связывания антител к CD44 и CD24, меченных флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) и ФЭ, соответственно. Представлены образцы двух опухолей с низким (А) и высоким (Б) относительным количеством искомых CD44+CD24-/low клеток.
R2- регион клеток с иммунофенотипом CD44+CD24low, R3- регион CD44+CD24- клеток.
Фиг. 3 – Распределение биопсийных образцов рака ВДП до лечения по относительному количеству CD44+CD24-/low ОСК.
Фиг. 4 – Распределение биопсийных образцов рака ВДП после облучения в СОД 10Гр по относительному количеству CD44+CD24-/low ОСК.
Фиг. 5 – Распределение биопсийных образцов рака ВДП по изменению относительного количества CD44+CD24-/low ОСК после облучения в СОД 10Гр. По оси абсцисс показана разность: (относительное количество ОСК после лечения, %) – (относительное количество ОСК до лечения, %). Таким образом, положительные величины указывают на повышение относительного количества ОСК после облучения, отрицательные – на уменьшение этого показателя.
Способ осуществляют в несколько этапов.
I этап.
Сбор образцов и окрашивание клеток биопсийного материала больных раком ВДП с помощью моноклональных антител (МКАТ), меченных флуорохромами, и ДНК-связывающего красителя выполняют следующим образом:
- после местной аппликационной анестезии 10% раствором лидокаина в форме спрея, с использованием биопсийных щипцов Блексли, под видео-эндоскопическим контролем берут наиболее выраженные фрагменты опухолевой ткани объёмом не менее 1мм3;
- биопсийный материал помещают во флакон с полной питательной средой RPMI, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. С помощью механического измельчения биопсийного материала получают суспензию опухолевых клеток, в которую добавляют 0,5 мл 0,01М фосфатного солевого буфера (ФСБ), рН 7,2, содержащего 0,15 М NаCl, тщательно перемешивают и фильтруют через нейлоновый фильтр с диаметром пор 40 мкм;
- определяют концентрацию ядросодержащих клеток в суспензии с помощью камеры Горяева по стандартной методике. Из каждого образца полученной суспензии отбирают 2 аликвоты по 105 клеток;
- в маркированную пробирку вносят аликвоту клеток и МКАТ к CD44, меченные ФИТЦ, к CD24, меченные ФЭ, и к CD45, меченные фикоэритрином-Cy5 (Becton Dickinson - BD, США) из расчета по 20 мкл МКАТ на 1 млн. ядросодержащих клеток. Вторую аликвоту клеток используют для контроля неспецифического связывания с МКАТ к гемоцианину Fissurella того же изотипа и меченные теми же флуорохромами, что и специфические антитела к указанным выше поверхностным маркерам. Контрольные МКАТ добавляют также из расчета по 20 мкл на 1 млн. ядросодержащих клеток. Обе пробы инкубируют при комнатной температуре в темноте в течение 30 минут;
- производят двукратное отмывание клеток суспензии от не связавшихся антител в 1 мл ФСБ, с помощью центрифугирования (300хg в течение 5 минут);
- в пробирку с осадком вносят 200 мкл ФСБ и ДНК-связывающий краситель Хехст 33342 в конечной концентрации 6,25 мкг/мл. Смесь перемешивают и инкубируют в темноте в течение 15 минут;
- суспензию окрашенных клеток фильтруют через нейлоновый фильтр с диаметром пор 40 мкм.
II этап.
Получение данных с помощью проточной цитометрии выполняют следующим образом:
- образец, подготовленный как описано на I этапе, анализируют на проточном цитофлуориметре FACS Vantage (BD, США), оснащенном лазерами с длиной волны 364 и 488 нм, или на других проточных цитофлуориметрах с указанными характеристиками;
- для измерения флуоресценции ФИТЦа используют узкополосные фильтры 530/30 нм, для ФЭ – 575/30 нм, для Хехста 33342 – 424/20 нм;
- в каждом образце анализируют до 100 тысяч клеток. Данные об интенсивности прямого и бокового светорассеяния, флуоресценции ФИТЦа, ФЭ, ФЭ-Cy5 и Хехста 33342 сохраняют файл. Полученные результаты записывают в цифровом виде;
- сохраненные файлы обрабатывают с помощью программы CellQuestPro (BD, USA) или другого программного обеспечения с необходимыми характеристиками.
III этап.
Обработка данных, собранных с помощью проточной цитометрии, в соответствии с алгоритмом идентификации ОСК по следующим критериям:
- сильная экспрессия маркера CD44 (СD44+);
- отсутствие или слабая экспрессия маркера CD24 (СD24-/low);
- отсутствие экспрессии общелейкоцитарного маркера СD45 (СD45-), что позволяет провести отрицательную селекцию лейкоцитов и повысить точность количественного анализа ОСК;
- интенсивное окрашивание Хёхстом33342 (Хёхст+), что позволяет дифференцировать ядросодержащие клетки от дебриса, эритроцитов, конгломератов тромбоцитов и др. неспецифических событий, что в конечном итоге обеспечивает высокую точность количественного анализа ОСК.
В частности, анализ проточноцитометрических данных с целью выявления и определения относительного количества ОСК в биопсии включает:
- построение точечного графика распределения клеток по интенсивности флуоресценции МКАТ к CD45 и интенсивности флуоресценции Хёхста 33342 (Фиг. 1). На графике выделяют регион ядросодержащих клеток (R1), характеризующихся отсутствием флуоресценции маркера CD45;
- построение точечного графика распределения клеток по интенсивности флуоресценции МКАТ к CD44 и CD24 (Фиг. 2). График строят только для клеток, удовлетворяющих условиям R1. На графике выделяют регионы клеток (R2 и R3) c иммунофенотипами CD44+CD24- и CD44+CD24low, соответственно, учитывая флуоресценцию клеток в контроле неспецифического связывания. Далее определяют количество клеток в регионах R2 и R3;
- расчет относительного количества ОСК, выражаемого в процентах, путем деления суммарного количества клеток в R2 и R3 на число клеток в R1.
Таким образом, определяют относительное количество CD44+CD24-/low ОСК среди CD45-Хёхст+ ядросодержащих клеток.
IV этап.
Прогнозирование радиочувствительности опухоли осуществляют следующим образом:
- сравнивают относительное количество ОСК, вычисленное на III этапе до лечения и после облучения в СОД 10Гр;
- если относительное количество ОСК в биопсии больного после облучения в СОД
10Гр более чем на 1% выше по сравнению с таковым до лечения (т.е. под влиянием радиационного воздействия происходит достаточно сильное увеличение относительного количества ОСК), прогнозируют низкую радиочувствительность опухоли, поскольку сильное увеличение количества ОСК происходит у 91% больных с низкой регрессией опухоли (<50%) после завершения первого этапа лучевой терапии в СОД 45-50Гр;
- если относительное количество ОСК в биопсии больного после облучения в СОД
10Гр увеличивается относительно слабо (на 1% и менее), остается без изменений или уменьшается по сравнению с таковым до лечения, вероятность высокой регрессии опухоли (≥50%) после завершения первого этапа лучевой терапии в СОД 45-50Гр составляет 92%, поэтому прогнозируется высокая радиочувствительность опухоли.
Способ иллюстрируется следующими примерами выполнения.
Пример №1 - Относительное количество ОСК в биопсийном материале рака ВДП до лечения в общей группе больных, а также в подгруппах больных с разными клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса и степенью регрессии опухоли.
Относительное количество ОСК определено у 123 больных раком ВДП до лечения. Больные были госпитализированы в отделение лучевого и хирургического лечения заболеваний верхних дыхательных путей (отдел лучевого и хирургического лечения заболеваний головы, шеи МРНЦ им.А.Ф. Цыба - филиал ФГБУ НМИЦ радиологии Минздрава России) в 2010-2014 годах. Средний возраст (±SE) больных составил 57,2±0,8 лет. Плоскоклеточный рак был верифицирован гистологически у всех больных, при этом у 36% больных диагностирован неороговевающий рак, у 43% - ороговевающий, у 18%- другие гистотипы плоскоклеточного рака. Стадия Т1 наблюдалась у 7, Т2- у 41,Т3- у 51 и Т4-у 24 больных. Регионарные лимфатические узлы были вовлечены в опухолевый процесс у 63 больных (N+), у остальных больных признаков поражения лимфатических узлов не отмечено (N0). Все больные, кроме одного, находились в стадии М0.
У всех больных лечение начинали с проведения одновременной химиолучевой терапии (схема PF). В схеме полихимиотерапии применялись два препарата – цисплатин и 5-фторурацил. В первый день лечения, до начала лучевой терапии, на фоне гипергидратации внутривенно вводили цисплатин из расчета 100 мг/м2 площади поверхности тела. Затем больному начинали внутривенное введение 5-фторурацила в дозе 3000 мг непрерывно в течение 72 часов при помощи инфузионного шприцевого насоса. Лучевую терапию начинали одновременно с непрерывным введением 5-фторурацила. Цикл химиотерапии повторяли на 22-й день лечения. Пациентам с неполной регрессий регионарных метастазов выполнялось плановое иссечение лимфоузлов через 4-6 недель после завершения химиолучевой терапии. В случае выявления остаточной опухоли либо локального рецидива больным выполнялось хирургическое вмешательство, объем которого определялся распространенностью новообразования.
Облучение осуществлялось на гамма-терапевтических установках. Для проведения дистанционной лучевой терапии на область первичной опухоли была применена методика облучения по 2 Гр пять раз в неделю.
После облучения в СОД 45-50 Гр определяли степень регрессии опухоли. При низкой степени регрессии опухоли (менее 50%) радиочувствительность опухоли расценивали как низкую, лучевую терапию прерывали и осуществляли хирургическое лечение. При выраженной регрессии опухоли (более 50%), лучевую терапию продолжали до СОД 60-62 Гр. При развитии лучевых эпителиитов делали вынужденный перерыв на 10-12 дней. Всего за курс лечения проводили 2 цикла полихимиотерапии.
На Фиг. 3 видно распределение относительного количества ОСК в общей группе больных до лечения. Этот показатель широко варьировал от 0,1 до 26,8 %. Данные об относительном количестве ОСК не подчинялись нормальному распределению (по критерию Шапиро-Уилка), поэтому в дальнейшем для описательной статистики этого показателя использовались значения медианы и размах квартилей (Q1-Q3), а сравнение этого показателя в подгруппах больных проводилось по непараметрическому критерию Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.
В таблице 1 указано относительное количество ОСК в подгруппах больных с различными клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса. Не обнаружено значимых различий относительного количества CD44+CD24-/low клеток у больных до лечения при разных стадиях заболевания, гистологических типах опухоли, поражении регионарных лимфатических узлов (таблица 1). Относительное количество ОСК до лечения статистически значимо не отличалось при разной степени регрессии (радиочувствительности) опухолей, составляя по медиане 4,1% в случаях высокой степени регрессии опухоли (≥50%) и 2,6% в случаях низкой регрессии (р=0,07).
Таблица 1.
Сравнение относительного количества CD44+CD24-/low клеток в биоптатах больных ВДП до лечения в подгруппах с различными клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса
| Показатели | Кол-во больных | Относительное количество CD44+CD24-/low клеток, % Медиана (Q1÷Q3) |
p | |
| Стадия | I+II | 48 | 3,2 (1,5÷7,0) | 0,73 |
| III+IV | 75 | 3,5 (1,4÷6,6) | ||
| Статус регионарных лимфоузлов | N0 | 60 | 3,2 (1,6÷6,6) | 0,61 |
| N+ | 63 | 3,7 (1,3÷7,2) | ||
| Гистологический тип плоскоклеточного рака | Ороговевающий | 52 | 3,8 (1,4÷7,0) | 0,08 |
| Неороговевающий | 44 | 2,4 (1,2÷7,0) | ||
| Другие типы | 22 | 4,2 (2,8÷7,5) | ||
Пример №2 - Относительное количество ОСК в биопсийном материале рака ВДП после облучения в СОД 10Гр на фоне полихимиотерапии в общей группе больных, а также в подгруппах больных с различными клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса и степенью регрессии опухоли.
Относительное количество ОСК определено у 39 больных после облучения в СОД 10Гр. Больные были госпитализированы в то же отделение лучевого и хирургического лечения заболеваний верхних дыхательных путей (как в примере 1) в 2010-2014 годах.
Средний возраст (±SE) больных составил 59,4±1,1% лет. Плоскоклеточный рак был верифицирован гистологически у всех больных, при этом у 28,2% больных диагностирован неороговевающий рак, у 35,9% - ороговевающий. Стадия Т1 наблюдалась у 5, Т2 - у 13, Т3 - у 10, Т4 -у 11 больных. Регионарные лимфатические узлы были вовлечены в опухолевый процесс у 22 больных, у остальных больных признаков поражения лимфатических узлов не отмечено. Все больные находились в стадии М0.
Лечение больных и оценку радиочувствительности опухоли по степени её регрессии в ответ на лечение выполняли, аналогично примеру 1.
Распределение относительного количества ОСК в общей группе больных после облучения в СОД 10Гр иллюстрируется на Фиг. 4. Этот показатель широко варьировал от 0,3 до 37%. Как и до лечения, данные об относительном количестве ОСК после облучения не подчинялись нормальному распределению (по критерию Шапиро-Уилка), поэтому для описательной статистики этого показателя также использовались значения медианы и размах квартилей (Q1-Q3), а сравнение этого показателя в подгруппах больных проводилось по непараметрическому критерию Манна-Уитни.
Не обнаружено значимых различий пострадиационного количества ОСК при разных стадиях заболевания, гистологических типах опухоли, поражении регионарных лимфатических узлов (таблица 2). Важно, что относительное количество ОСК после облучения не отличалось при разной степени регрессии (радиочувствительности) опухолей: медиана этого показателя составляла 5,4% в случаях высокой степени (≥50%) регрессии опухоли и 5,0% в случаях низкой (< 50% ) регрессии (р=0,46).
Таблица 2.
Сравнение относительного количества CD44+CD24-/low клеток в биоптатах больных ВДП после облучения в СОД 10 Гр в подгруппах с различными
клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса
| Показатели |
Кол-во больных | Относительное количество CD44+CD24-/low клеток после облучения в дозе 10 Гр, % Mедиана (Q1÷Q3) |
p | |
| Стадия | I+II | 18 | 6,8 (3,6÷10,0) | 0,23 |
| III+IV | 21 | 4,4 (1,8÷8,1) | ||
| Статус регионарных лимфоузлов | N0 | 22 | 5,2 (3,7÷10,1) | 0,61 |
| N+ | 17 | 5,7 (1,8÷8,8) | ||
| Гистологический тип плоскоклеточного рака | Ороговевающий | 14 | 6,1 (3,7÷8,9) | 0,40 |
| Неороговевающий | 11 | 5,7 (1,8÷7,1) | ||
| Другие типы | 14 | 6,7 (3,6÷11,4) | ||
Пример №3 - Изменение относительного количества ОСК в биопсийном материале рака ВДП после облучения в СОД 10Гр в общей группе больных, а также в подгруппах больных с различными клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса и степенью регрессии опухоли.
Относительное количество ОСК до лечения и после облучения в СОД 10 Гр сравнивали в группе 39 больных, подробно описанной в примере 2. Лечение больных и оценку радиочувствительности опухоли по степени её регрессии в ответ на лечение выполняли аналогично по примеру 1.
Изменение относительного количества ОСК в общей группе больных после облучения в СОД 10Гр иллюстрируется Фиг. 5. Данные о пострадиационном изменении относительного количества ОСК характеризовались нормальным распределением (по критерию Шапиро-Уилка), поэтому для описательной статистики этого показателя использовались средние значения и стандартные ошибки (±SE), а сравнение изменений пула ОСК в подгруппах больных проводилось по критерию Стьюдента. Установлена высокая индивидуальная вариабельность изменений относительного количества ОСК в биопсийном материале больных после облучения в СОД 10Гр: от уменьшения на 23,7% до увеличения на 36,1%, в среднем этот показатель увеличивался на 2,7±1,3%. У 76,9% больных (30/39) отмечено увеличение относительного количества ОСК после указанного воздействия по сравнению с исходным уровнем. Причем у 66,7% больных (26/39) относительное количество ОСК увеличивалось более чем на 1,0%. Величина изменений этого показателя после облучения в СОД 10 Гр не коррелировала с клинико-морфологическими показателями (таблица 3).
При сравнении изменений пула ОСК в подгруппах больных c разной степенью регрессии (радиочувствительностью) опухоли показано:
- в подгруппе 28 больных с высокой степенью регрессией опухоли (более 50%) среднее
количество ОСК статистически значимо не изменялось после облучения, составляя 5,0±1,1% до лечения и 6,2±0,8% после радиационного воздействия в дозе 10Гр (р=0,37);
- в подгруппе 11 больных с низкой регрессией опухоли среднее количество ОСК
статистически значимо увеличивалось после облучения на 6,6±3,4%, составляя 3,8±1,5% до лечения и 10,4±3,3% после него (р=0,007).
Таким образом, в результате проведенного проспективного исследования был обнаружен разный ответ пула ОСК на первые сеансы облучения в СОД 10Гр в опухолях с высокой и низкой степенью регрессии, оцениваемой после облучения в СОД 45-50Гр. При высокой степени регрессии опухолей относительное количество ОСК в среднем не изменялось статистически значимо, свидетельствуя о примерно одинаковой радиочувствительности опухолевых стволовых и не стволовых клеток. В то же время в опухолях с низкой радиочувствительностью ОСК демонстрировали более высокую радиорезистентность по сравнению с остальными клетками, поскольку относительное количество ОСК в среднем увеличивалось.
Таблица 3.
Изменение относительного количества CD44+CD24-/low клеток в биоптатах больных раком ВДП после облучения в СОД 10 Гр в подгруппах с различными клинико-морфологическими показателями опухолевого процесса
| Показатели | Кол-во больных | Изменение относительного количества CD44+CD24-/low клеток после облучения в дозе 10 Гр, % Среднее ±SE |
p | |
| Стадия | I+II | 18 | 1,6±1,9 | 0,45 |
| III+IV | 21 | 3,7±1,9 | ||
| Статус регионарных лимфоузлов | N0 | 22 | 2,1±1,6 | 0,58 |
| N+ | 17 | 3,6±2,3 | ||
| Гистологический тип плоскоклеточного рака | Ороговевающий | 14 | 0,2±2.3 | 0,15* 0,29** |
| Неороговевающий | 11 | 6,1±3,4 | ||
| Другие типы | 14 | 2,6±1,1 | ||
* При сравнении подгрупп больных с ороговевающим и неороговевающим раком.
**При сравнении подгрупп больных с ороговевающим раком и другими гистологическими типами.
Пример 4 - ROC-анализ эффективности (специфичности и чувствительности) способа прогнозирования радиочувствительности ЗНО ВДП по критерию изменения относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр.
В группе 39 больных, описанной в примерах 2 и 3, методом ROC-анализа установлен оптимальный дискриминатор (для показателя «Изменение относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр»), разделяющий пациентов на группы с относительно высокой и низкой вероятностью неблагоприятного результата лечения (низкой радиочувствительностью опухоли). Оказалось, что при уменьшении, сохранении на одном уровне или слабом увеличении (до 1% включительно) исходного количества ОСК низкая радиочувствительность опухоли отмечается только у 1/13 (7,7%) больных, в то время как при сильном увеличении этого показателя более чем на 1% - у 10/26 (38,5%) больных, т.е. в 5 раз чаще (р=0,046 по критерию Фишера) (таблица 4).
Чувствительность такого способа прогнозирования низкой радиочувствительности опухоли составляет 0,91 (95% доверительный интервал 0,62-0,98), специфичность – 0,43 (95% доверительный интервал 0,28-0,58), положительная прогностическая значимость – 0,38, отрицательная прогностическая значимость – 0,92. Величина AUC (area under curve), характеризующая прогностическую эффективность показателя, равна 0,67, что позволяет расценивать изменение количества ОСК после облучения в СОД 10Гр как средний по мощности классификатор.
Таблица 4.
Сопоставление характера изменений относительного количества ОСК после облучения в СОД 10 Гр (по сравнению с исходным значением до лечения) у больных раком ВДП с высокой и низкой радиочувствительностью опухоли, определенной по степени её регрессии (в таблице указано число больных)
| Изменение количества ОСК после облучения в СОД 10 Гр | Радиочувствительность опухоли | |
| Низкая (степень регрессии <50%) | Высокая (степень регрессии ≥50%) | |
| Сильное увеличение (более 1,0%) | 10 | 16 |
| Уменьшение, сохранение на исходном уровне или слабое увеличение (до 1,0% включительно ) | 1 | 12 |
Пример 5 - Множественный регрессионный анализ радиочувствительности ЗНО ВДП с помощью программы Статистика 6.0 (Stat Soft, Inc., США).
В группе 39 больных, описанной в примерах 2-4, выполнен множественный регрессионный анализ зависимости радиочувствительности опухоли (степени регрессии первичного опухолевого очага) от ряда возможных предикторов, включающих возраст больного, стадию заболевания Т1-4, поражение регионарных лимфатических узлов (N+/N0), гистологический тип (ороговевающий/неороговевающий/другие типы плоскоклеточного рака), а также относительное количество ОСК до лечения, относительное количество ОСК после облучения в СОД 10Гр, изменение относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр (сильное увеличение/ слабое увеличение, сохранение на исходном уровне или уменьшение в соответствии с таблицей 4). Три показателя, продемонстрировавшие наиболее сильную взаимосвязь с регрессией опухоли, были выбраны для построения модели множественной регрессии: изменение относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр, стадия Т и гистологический тип опухоли. Как показано в таблице 5, модель в целом характеризовалась статистической значимостью при р=0,03, причем только один показатель (изменение относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр) имел независимое прогностическое значение для радиочувствительности опухоли.
Таблица 5.
Результаты множественного регрессионного анализа зависимости радиочувствительности опухоли от изменения относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр, стадии заболевания и гистологического типа опухоли
| Показатели (предикторы) | Beta | Величина p для предиктора | R | Величина p для всей модели в целом |
| Изменение относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр | -0,362 | 0,02 | 0,47 | 0,03 |
| Стадия Т | -0,254 | 0,10 | ||
| Гистологический тип опухоли | 0,187 | 0,22 |
Примечание: Beta - стандартизированный угловой коэффициент регрессии (в единицах SD), R - коэффициент множественной корреляции.
Доказательство достижения технического результата.
Как показывают примеры 1-3, существует высокая индивидуальная вариабельность относительного количества CD44+CD24-/low ОСК до лечения, после облучения в СОД 10 Гр и, как следствие, изменений этого показателя под влиянием первых сеансов лучевой терапии, что лежит в основе данного способа прогнозирования радиочувствительности опухолей. Причем все 3 показателя не ассоциированы с клинико-морфологическими характеристиками опухолевого процесса.
Пример 4 доказывает, что при повышении относительного количества ОСК более чем на 1% после облучения в дозе 10 Гр в 5 раз чаще отмечается низкая радиочувствительность опухоли (которая регистрируется по низкой степени её регрессии после завершения первого этапа химиолучевой терапии), чем при уменьшении количества ОСК, сохранении на исходном уровне или слабом увеличении (до 1% включительно) (р=0,046). Интегральный показатель (AUC) чувствительности и специфичности такого способа прогнозирования радиочувствительности опухоли составляет 0,67.
Пример 5 подтверждает прогностическое значение показателя «Изменение относительного количества ОСК после облучения в СОД 10Гр» с помощью множественного регрессионного анализа. Более того, именно этот показатель имеет независимое и большее прогностическое значение, чем стадия заболевания и гистологический тип опухоли.
Предложенный способ повышает точность оценки показаний к проведению лучевой терапии больных раком ВДП и, таким образом, улучшает планирование лечения. Кроме того, выявление пациентов с ЗНО, резистентными к стандартным вариантам радиационного воздействия, способствует разработке оптимальной стратегии их лечения, включая использование особых режимов фракционирования дозы редкоионизирующего излучения, использование адронной терапии, комбинированных методов лечения и т.д.
Claims (3)
- Способ прогнозирования радиочувствительности рака верхних дыхательных путей, включающий получение биопсийных образцов опухолевой ткани до лечения и оценку экспрессии CD44 и CD24 с использованием моноклональных антител, отличающийся тем, что биопсийный материал до лечения и после облучения в суммарной очаговой дозе 10 Гр дезагрегируют, полученную суспензию клеток окрашивают с использованием моноклональных антител к CD44, CD24, CD45 и ДНК-связывающего красителя Хёхст33342, с помощью проточной цитометрии выявляют опухолевые стволовые клетки с иммунофенотипом CD44+CD24-/low и определяют их относительное количество среди ядросодержащих СD45-Хёхст33342+ клеток, затем сравнивают относительное количество опухолевых стволовых клеток до лечения и после облучения в дозе 10 Гр, далее по изменению этого показателя прогнозируют степень регрессии новообразования под действием ионизирующего излучения, и если:
- - относительное количество опухолевых стволовых клеток увеличивается более чем на 1% по сравнению с их исходным количеством до лечения, то прогнозируют низкую радиочувствительность опухоли;
- - относительное количество опухолевых стволовых клеток увеличивается не более чем на 1% включительно, сохраняется на одинаковом уровне или уменьшается по сравнению с исходным количеством этих клеток до лечения, то прогнозируют высокую радиочувствительность опухоли.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020118118A RU2735982C2 (ru) | 2020-06-02 | 2020-06-02 | Способ прогнозирования радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020118118A RU2735982C2 (ru) | 2020-06-02 | 2020-06-02 | Способ прогнозирования радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020118118A RU2020118118A (ru) | 2020-07-23 |
| RU2020118118A3 RU2020118118A3 (ru) | 2020-10-16 |
| RU2735982C2 true RU2735982C2 (ru) | 2020-11-11 |
Family
ID=71741530
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020118118A RU2735982C2 (ru) | 2020-06-02 | 2020-06-02 | Способ прогнозирования радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2735982C2 (ru) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2107297C1 (ru) * | 1996-10-24 | 1998-03-20 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Способ диагностики реакции опухоли при лечении онкологических больных |
| JP5352037B2 (ja) * | 2000-08-03 | 2013-11-27 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 充実腫瘍幹細胞の単離及び用途 |
| RU2505817C1 (ru) * | 2012-07-04 | 2014-01-27 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Медицинский Радиологический Научный Центр" Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации (ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России) | Способ оценки радиочувствительности рака верхних дыхательных путей |
-
2020
- 2020-06-02 RU RU2020118118A patent/RU2735982C2/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2107297C1 (ru) * | 1996-10-24 | 1998-03-20 | Московский областной научно-исследовательский клинический институт | Способ диагностики реакции опухоли при лечении онкологических больных |
| JP5352037B2 (ja) * | 2000-08-03 | 2013-11-27 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 充実腫瘍幹細胞の単離及び用途 |
| RU2505817C1 (ru) * | 2012-07-04 | 2014-01-27 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение "Медицинский Радиологический Научный Центр" Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации (ФГБУ МРНЦ Минздравсоцразвития России) | Способ оценки радиочувствительности рака верхних дыхательных путей |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Koukourakis M.I. et al. Cancer stem cell phenotype relates to radio-chemotherapy outcome in locally advanced squamous cell head-neck cancer// British Journal of Cancer. 2012. V. 106. P. 846-853. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2020118118A3 (ru) | 2020-10-16 |
| RU2020118118A (ru) | 2020-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yankaskas et al. | A microfluidic assay for the quantification of the metastatic propensity of breast cancer specimens | |
| Janot et al. | Prognostic value of clinicopathological parameters in head and neck squamous cell carcinoma: a prospective analysis | |
| Cai et al. | BCAT2 shapes a noninflamed tumor microenvironment and induces resistance to anti‐PD‐1/PD‐L1 immunotherapy by negatively regulating proinflammatory chemokines and anticancer immunity | |
| Hermann et al. | TIMP1 expression underlies sex disparity in liver metastasis and survival in pancreatic cancer | |
| Ye et al. | Smoldering mantle cell lymphoma | |
| Zhang et al. | Clinical predictive value of naïve and memory T cells in advanced NSCLC | |
| Caltabiano et al. | ADAM 10 expression in primary uveal melanoma as prognostic factor for risk of metastasis | |
| Choi et al. | Overexpression of CD24: association with invasiveness in urothelial carcinoma of the bladder | |
| JP2023538868A (ja) | Ｐｄｅ４ｄ７相関遺伝子に基づく放射線療法に対する前立腺癌被験者の反応の予測 | |
| He et al. | PBK/TOPK in the differential diagnosis of cholangiocarcinoma from hepatocellular carcinoma and its involvement in prognosis of human cholangiocarcinoma | |
| Snacel-Fazy et al. | SMAC mimetic drives microglia phenotype and glioblastoma immune microenvironment | |
| Lee et al. | Genetic analysis of ovarian microcystic stromal tumor | |
| Ke et al. | Mechanical signal modulates prostate cancer immune escape by USP8-mediated ubiquitination-dependent degradation of PD-L1 and MHC-1 | |
| US20220136068A1 (en) | Methods of detecting and treating venetoclax-resistant acute myeloid leukemia | |
| RU2735982C2 (ru) | Способ прогнозирования радиочувствительности злокачественных новообразований верхних дыхательных путей | |
| Zhu et al. | The critical role of RasGRP4 in the growth of diffuse large B cell lymphoma | |
| Esposito et al. | Early assessment of IL8 and PD1+ Treg predicts response and guides treatment monitoring in cemiplimab-treated cutaneous squamous cell carcinoma | |
| US20220347267A1 (en) | Methods to improve patient response to immune checkpoint inhibitors and functional tests to predict response | |
| RU2353928C1 (ru) | Способ прогнозирования эффективности лечения рецидивов и метастазов рака шейки матки | |
| CN120476309A (zh) | 方法和治疗 | |
| Ge et al. | Identifying adipocyte-derived exosomal miRNAs as potential novel prognostic markers for radiotherapy of esophageal squamous cell carcinoma | |
| Shen et al. | The status of WIF1 methylation in cell-free DNA is associated with the insusceptibility for gefitinib in the treatment of lung cancer | |
| EP2568290B1 (en) | Methods for prognosis of diffuse large B-cell lymphoma | |
| CN107012235A (zh) | 检测fgl2基因或fgl2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用 | |
| JPWO2007099852A1 (ja) | 固形癌のチロシンキナーゼ阻害剤に対する感受性を検査する方法及び検査キット |