RU2731314C1 - Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей - Google Patents
Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2731314C1 RU2731314C1 RU2019134905A RU2019134905A RU2731314C1 RU 2731314 C1 RU2731314 C1 RU 2731314C1 RU 2019134905 A RU2019134905 A RU 2019134905A RU 2019134905 A RU2019134905 A RU 2019134905A RU 2731314 C1 RU2731314 C1 RU 2731314C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- cartilage
- spheroids
- subject
- perichondrium
- Prior art date
Links
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 title claims abstract description 58
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 6
- 230000008439 repair process Effects 0.000 title description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 37
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims abstract description 23
- QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N costic aldehyde Natural products C1CCC(=C)C2CC(C(=C)C=O)CCC21C QTCANKDTWWSCMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N iso-beta-costal Natural products C1C(C(=C)C=O)CCC2(C)CCCC(C)=C21 ISTFUJWTQAMRGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 75
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical group O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 210000002236 cellular spheroid Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000009816 chondrogenic differentiation Effects 0.000 claims description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims description 4
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 4
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003848 cartilage regeneration Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 17
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 4
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 4
- 230000002520 cambial effect Effects 0.000 description 4
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 4
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000002648 chondrogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 210000003035 hyaline cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 210000000492 nasalseptum Anatomy 0.000 description 2
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N Meprobamate Chemical compound NC(=O)OCC(C)(CCC)COC(N)=O NPPQSCRMBWNHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 201000009859 Osteochondrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- -1 hyaluronic acid benzyl ester Chemical class 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 238000002690 local anesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003349 osteoarthritic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000008113 selfheal Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/30—Joints
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области медицины, а именно к тканевой инженерии, регенеративной медицине, травматологии и ортопедии, и раскрывает способ получения трансплантата в виде клеточных сфероидов и трансплантат для восстановления хряща субъекта, полученные указанным способом. Способ включает в себя выделение клеток из надхрящницы собственного реберного хряща субъекта, культивирование выделенных клеток, перенесение клеток в агарозные планшеты из расчета 20000 клеток на 1 лунку агарозного планшета и их последующее культивирование с образованием клеточных сфероидов. Изобретение позволяет получать трансплантат в виде клеточных сфероидов из надхрящницы ребра субъекта, обладающих выраженным регенерационным потенциалом, для эффективного восстановления хряща, в частности суставного хряща. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.
Description
Область техники
Изобретение относится к области медицины, а именно к тканевой инженерии, регенеративной медицине, травматологии и ортопедии.
Уровень техники
Целостность суставного хряща - непременное условие нормального функционирования сустава. Способность хряща (покрывающего суставную поверхность кости) к полноценному самовосстановлению ограничена, так как это аваскулярная и аневральная ткань, обедненная собственными камбиальными клетками (лишена надхрящницы). Из-за этих структурных особенностей циркулирующие клетки-предшественники, присутствующие в крови и костном мозге, не проникают в достаточном количестве поврежденную область, чтобы способствовать репаративному процессу. Вполне обоснованно мнение, что до настоящего времени эффективный способ восстановления целостности хряща еще не разработан.
Хрящевые и костно-хрящевые дефекты в настоящее время остаются открытой проблемой тканевой инженерии опорно-двигательной системы. Поэтому при существенном повреждении суставного хряща приходится удалять сустав пациента целиком и заменять его эндопротезом.
Проблема крайне актуальна, так как повреждение и деградация суставного хряща приводит к остеоартриту (ОА), преимущественно у пожилых людей, и это одна из ведущих причин боли и инвалидности в этой многочисленной возрастной группе населения.
Известны многочисленные способы заполнения хрящевых дефектов тканеинженерными конструктами, изготовленными с применением скаффолд-технологии - сокультивирования клеток с матрицами-носителями, в настоящее время называемые матрикс ассоциированной имплантацией хондроцитов (matrix-associated chondrocyte implantation - MACI). Предложены разные варианты матриц-носителей (скаффолдов), например, синтетическая матрица на основе бензилового эфира гиалуроновой кислоты (Hyalograft C, HYAFF 11) [1], синтетическая матрица на основе полиглактина и поли-n-диоксанона (Bioseed C) [2], мембрана из свиного коллагена (ChondroGiude) [3]. Существенными особенностями некоторых вариантов этих технологий являются попытки поддержания хондрогенной дифференцировки собственных хондроцитов в процессе культивирования за счет специальных хондрогенных дифференцировочных сред, сдерживающих наращивание клеточной массы, что усложняет наращивание хондроцитов взрослых людей в необходимых количествах. Организму приходится самостоятельно утилизировать каркас матрицы за счет воспалительной реакции на инородное тело, что затрудняет регенерацию хряща.
Недостатки культивирования любых клеток на матрицах (биодеградируемых носителях) общеизвестны. Клетки неравномерно распределены внутри матрицы, это связано с наличием градиентов парциальных давлений кислорода и углекислого газа, а также разной доступности питательных веществ и скорости удаления метаболитов в зависимости от глубины залегания клеток в тканеинженерном конструкте. Слабое звено подобных технологий - отсутствие естественных механизмов адгезии матрицы к реципиентным поверхностям (известные способы крепления ненадежны). Технология требует разрушить здоровую часть суставной поверхности для забора хряща для выделения клеток в лаборатории. Поэтому необходимо дополнительная артроскопическая операция и ее анестезиологическое сопровождение.
Известны бесскаффолдные технологии восстановления хрящей. Трехмерное культивирование хондроцитов в отсутствии пригодной для клеточной адгезии подложки приводит к формированию клеточных сфероидов (хондросфер) [4]. Хрящевые сфероиды обладают уникальной способностью к тканевому слиянию, способны к слиянию между собой с образованием более крупных сфероидов, а также к распластыванию на поверхности адгезивного пластика и реципиентного ложа [5].
Известен способ производства трехмерных живых хрящеподобных микротканей in vitro и их применения в качестве трансплантационного материала (US 7.887,843 B2 Method for in vitro production of three-dimentional vital cartilage tissue and use thereof as transplant material (co.don® AG, Teltow, DE). Данный способ включает в себя получение клеточных сфероидов из культивированных хондроцитов суставного хряща в 96-ти луночных планшетах из неадгезивного пластика. Требуется дополнительный технологический этап работы с клеточным материалом - взаимное слияние сфероидов в 24-хлуночном планшете для увеличения размеров сфероидов, что свидетельствует об ограниченном потенциале самостоятельного роста сфероидов, полученных таким путем. Полученные сфероиды используют для частичного замещения (заполнения в плотности от 3 до 70 сфероидов на см2) дефектов суставных поверхностей костей с целью формирования нового хряща в зоне повреждения. Длительное пребывание хондроцитов в 3D-культуре может приводить к гибели клеток, особенно в центре сфероидов. Хрящевая ткань сустава содержит единственную популяцию дифференцированных клеток - хондроцитов, пролиферативный потенциал которых ограничен.
Также из уровня техники известен способ производства сфероидов из клеток хряща в агарозных микропланшетах, содержащих 81 лунку диаметром 800 мкм или 256 лунок диаметром 300 мкм [5]. Сфероиды формировали из культивированных хондропрогениторных клеток носовой перегородки в хондрогенной дифференцировочной среде (DMEM, альбумин человеческий 1,25 мкг/мл, аскорбиновая кислота 50 мкг/мл, инсулин 6,25 мкг/мл, пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл, инсулин-трансферрин - селенит (однократная концентрация)). Плотность посева составляла 2 млн клеток на микропланшет. Для сфероидов, полученных данным способом, характерно наличие фибриллярного внеклеточного матрикса - коллагена 2 типа. Также у сфероидов большого диаметра (полученных в 81-луночном планшете) наблюдалась тенденция к росту (увеличению диаметра по отношению к исходному). Существенным недостатком этого способа является ограниченное количество забираемого для выделения клеток исходного материала, которое можно получить из хряща перегородки носа, не создав заметный косметический дефект, что приводит к необходимости длительного культивирования клеток для накопления нужной биомассы клеток, при этом в процессе формирования сфероидов происходит постепенная гибель клеток, сфероиды уменьшаются в размерах.
Таким образом, несмотря на имеющиеся способы восстановления хрящей, все они характеризуются рядом недостатков и ограничений, поэтому сохраняется необходимость в разработке и создании новых способов и подходов к решению указанной проблемы.
Раскрытие изобретения
Задача настоящего изобретения состоит в разработке нового способа получения трансплантата на основе клеточных сфероидов для эффективного восстановления хряща, в частности, суставного хряща.
Предлагается получение трансплантата в виде клеточных сфероидов для восстановления хряща субъекта на основе клеток надхрящницы собственного реберного хряща субъекта.
Техническим результатом данного изобретения является получение трансплантата на основе клеточных сфероидов, обладающих выраженным регенеративным потенциалом, для эффективного восстановления хряща, в частности, суставного хряща, при этом получение сфероидов не сопровождается гибелью клеток в агарозных лунках. Кроме того, способ по изобретению исключает необходимость использования дифференцирующих хондрогенных сред, замедляющих наращивание клеточной биомассы. Помимо этого, настоящее изобретение обеспечивает снижение травматизации субъекта в процессе забора материала для восстановления хряща, при этом не требуется дополнительной госпитализации, анестезиологического пособия и исключается операционная травма неповрежденной части суставного хряща. Забор надхрящницы реберного хряща субъекта проводится в амбулаторных условиях под местной анестезией.
Дополнительно, способ по изобретению позволяет получить сфероиды из надхрящницы реберного хряща быстрее и большего объема по сравнению со сфероидами на основе клеток хряща. Использование трансплантата на основе более крупных сфероидов из надхрящницы облегчает их трансплантацию, а восстановление хряща происходит быстрее и эффективнее. Репаративная регенерация хряща происходит из камбиальных (прогениторных) клетки надхрящницы.
Достижение указанного технического результата обеспечивается при осуществлении способа получения трансплантата на основе клеточных сфероидов для восстановления хряща субъекта на основе клеток надхрящницы собственного реберного хряща субъекта, включающего следующие этапы:
а) выделение клеток из надхрящницы собственного реберного хряща субъекта;
б) культивирование выделенных на стадии а) клеток в адгезивной культуре без хондрогенной дифференцировочной среды;
в) перенесение клеток, полученных на стадии б), в агарозные планшеты и их последующее культивирование с образованием клеточных сфероидов.
В частных вариантах воплощения изобретения субъект представляет собой человека.
В частных вариантах воплощения изобретения хрящ представляет собой суставной хрящ, хрящи носа, гортани, трахеи и бронхов, ушной раковины или хрящ межпозвоночных дисков.
В частных вариантах воплощения изобретения культивирование клеток на стадии б) осуществляется в течение 20-30 дней. В частных вариантах воплощения изобретения перенесение клеток на стадии в) осуществляется из расчета 20 000 клеток на 1 лунку агарозного планшета.
В частных вариантах слияние клеток в клеточные сфероиды осуществляется в агарозных лунках (лунках агарозного планшета), где они пребывают до 21 дня. В частных вариантах воплощения изобретения слияние клеток в клеточные сфероиды осуществляется через 7-15 дней. В частных вариантах воплощения изобретения размер сфероидов составляет 250-700 мкм.
Настоящее изобретение также относится к трансплантату для восстановления хряща субъекта, включающему клеточные сфероиды на основе клеток надхрящницы собственного реберного хряща субъекта и полученному способом по изобретению.
В частных вариантах воплощения изобретения, хрящ представляет собой суставной хрящ, хрящи носа, гортани, трахеи и бронхов, ушной раковины или хрящ межпозвоночных дисков.
В частных вариантах воплощения изобретения субъект представляет собой человека.
В частных вариантах воплощения изобретения размер сфероидов составляет 250-700 мкм.
Технический результат настоящего изобретения также достигается за счет применения клеток надхрящницы собственного реберного хряща субъекта для получения трансплантата в виде клеточных сфероидов.
Краткое описание чертежей
Фигура 1. Динамика изменения размера сфероидов из суставного хряща и надхрящницы ребра в процессе их культивирования через 1, 7 и 14 дней.
Фигура 2. Динамика изменения размера сфероидов из суставного хряща и надхрящницы ребра в процессе их культивирования через 1, 7 и 14 дней:
а) суставной хрящ, концентрация 10000 клеток на сфероид;
б) суставной хрящ, концентрация 20000 клеток на сфероид;
в) надхрящница, концентрация 10000 клеток на сфероид;
г) надхрящница, концентрация 20000 клеток на сфероид.
Фигура 3. Гистологическое строение сфероидов из суставного хряща и надхрящницы ребра в процессе их культивирования через 1, 7 и 14 дней.
Фигура 4. Процесс покрытия сфероидами, полученными способом по изобретению, зоны дефекта суставной поверхности субъекта.
Определения и термины
Различные термины, относящиеся к объектам настоящего изобретения, используются выше и также в описании и в формуле изобретения. Если иное не оговаривается, все технические и научные термины, используемые в данной заявке, имеют то же самое значение, которое понятно для специалистов в данной области. Ссылки на методики, используемые при описании данного изобретения, относятся к хорошо известным методам, включая изменения этих методов и замену их эквивалентными методами, известными специалистам.
В описании данного изобретения термины «включает» и «включающий» интерпретируются как означающие «включает, помимо всего прочего». Указанные термины не предназначены для того, чтобы их истолковывали как «состоит только из».
В описании данного изобретения термин «ткань» относится к системе клеток и неклеточных структур, обладающих общностью строения, в ряде случаев общностью происхождения, и специализированных на выполнении определенных функций.
Используемый в данной заявке термин «трансплантат» относится к сфероидам, а термин «трансплантация» - это пересадка указанных сфероидов в организм субъекта, как правило, для устранения дефекта хряща.
Используемый в данном документе термин «дефект хряща» относится к хрящевой ткани, если она отсутствует, уменьшено ее количество или она иначе повреждена. Дефект хрящевой ткани может быть, в том числе, результатом заболевания, лечения заболевания или травмы.
Используемый в данной заявке термин «хондрогенная среда» означает среду, необходимую для дифференцировки клеток в хондрогенном направлении.
Используемый в данной заявке термин «сфероиды» относится к плотно упакованным клеточным агрегатам шарообразной формы, сформированных путем трехмерного культивирования. Их важным свойством является способность к взаимной адгезии и последующему тканевому слиянию, а также к адгезии к элементам внеклеточного матрикса.
Подробное раскрытие изобретение
Технический результат достигается тем, что в качестве источника хондропрогениторных клеток для производства сфероидов используется надхрящница, являющаяся для хряща камбиальной зоной, поставляющей прогениторные клетки для его обновления и репаративной регенерации, и, следовательно, содержащая большее количество камбиальных клеток. Следует отметить, что реберный и суставной хрящи относятся к гиалиновой хрящевой ткани. При формировании сфероидов из клеток надхрящницы в этом случае не происходит уменьшения их диаметра.
Выделение хондропрогенитоных клеток из надхрящницы происходит путем ее механического измельчения на мелкие кусочки с последующей их ферментативной диссоциацией.
Для получения первичной культуры выделенные из надхрящницы клетки высевают в пластиковые флаконы с культуральной средой следующего состава: DMEM (или DMEM /F12) 450 мл, L-глутамин 292 мг, эмбриональная телячья сыворотка 50 мл, пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл, при 100% влажности, температуре 37°С, 5% СО2 (данная среда и условия используются на всех этапах последующего культивирования).
Субкультивирование монослойной культуры хондропрогениторных клеток осуществляют до третьего пассажа со сменой среды каждые 2-3 дня.
После третьего пассажа клетки снимают с пластиковых флаконов трипсином/ЭДТА. Полученную клеточную взвесь отмывают от трипсина/ЭДТА, в том числе с помощью среды DMEM с 10% сывороткой с последующим центрифугированием (10 минут при 200g) и переносят в 81-луночные агарозные планшеты с диаметром лунки 800 мкм в концентрации до 1,6 млн клеток на планшет, где в лунках из культивируемых клеток начинают формироваться сфероиды. Таким образом, формирование клеточных сфероидов происходит в безскаффолдной 3-хмерной культуре клеток с использованием микроформованных неадгезивных гидрогелей (Scaffold-free 3-Dimensional Cell Culture Utilizing Micro-Molded Non-Adhesive Hydrogels).
Для получения агарозных планшетов используют силиконовую форму 3D Petri Dish (Microtissues®, США) в соответствии с протоколом производителя: раствор агарозы распределяют в силиконовые формы, в результате чего получается микроформованный (микромодулированный) неадгезивный агарозный гидрогель - агарозный (микро)планшет (форма, образованная из агарозного гидрогеля, имеющая лунки одинакового размера, в частном варианте воплощения - 81 лунку диаметром 800 мкм).
Сфероиды пребывают в лунках агарозного планшета на протяжении до 21 суток со сменой среды каждые 2-3 дня.
Для трансплантации сфероидов их собирают из планшетов и переносят в пробирку, где они осаждаются на дно без дополнительного центрифугирования. После этого сфероиды помещают в шприц и трансплантируют субъекту в зону дефекта через иглу или аппликатор, диаметром не менее 1 мм2. Трансплантация может производиться артроскопически.
Осуществление изобретения
Пример 1
Взятие надхрящницы осуществляли с реберного хряща овец. Для отделения надхрящницы от нижележащего хряща под нее вводили изотонический раствор. В качестве контроля у тех же животных с мыщелков бедренных костей были взяты фрагменты суставного хряща.
Выделение клеток из надхрящницы реберного и суставного хряща производили путем предварительного механического измельчения с последующей ферментативной диссоциацией кусочков тканей.
Для получения первичной культуры выделенные клетки высевали в пластиковые флаконы с культуральной средой следующего состава: DMEM 450 мл, L-глутамин 292 мг, эмбриональная телячья сыворотка 50 мл, пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл, при 100% влажности, температуре 37°С, 5% СО2 (данная среда и условия используются на всех этапах последующего культивирования). Субкультивирование монослойной культуры хондропрогениторных клеток осуществляли до третьего пассажа со сменой среды каждые 2-3 дня.
После третьего пассажа клетки снимали с пластика (пластиковых флаконов) трипсином/ЭДТА. Полученную клеточную взвесь отмывали от трипсина/ЭДТА, в том числе средой DMEM с 10% сывороткой и с последующим центрифугированием (10 минут при 200g), затем переносили в 81-луночные агарозные планшеты с диаметром лунки 800 мкм в концентрации до 1,6 млн. клеток на планшет, после чего начинали формироваться сфероиды.
Культивирование сфероидов производили в течение 14 суток со сменой среды каждые 2-3 дня.
В результате сфероиды из надхрящницы вдвое увеличивались в размере в процессе культивирования, а сфероиды из суставного хряща - уменьшались (Фиг. 1, Фиг. 2). Обычно сфероиды, полученные из клеток хряща, уменьшаются в размерах внутри агарозных лунок со временем. Это связано с биологическими особенностями клеток хряща, неоптимальными условиями культивирования, гибелью части клеток и утратой структурных элементов. Поэтому результат, полученный с использованием клеток надхрящницы, не был абсолютно ожидаемым для специалиста.
Таким образом, при выращивании (получении) сфероидов согласно способу по изобретению в агарозных лунках получают сфероиды из надхрящницы реберного хряща, которые увеличивают свою биомассу в агарозных лунках, в отличие от сфероидов из суставного хряща.
Гистологически сфероиды из суставного хряща на сроке культивирования 14 суток состояли главным образом из клеток, в то время как сфероиды из надхрящницы согласно предлагаемому изобретению уже на 7 сутки культивирования содержали волокнистый внеклеточный матрикс. (Фиг. 3). Таким образом, в результате проведенного эксперимента показано, что равное исходное количество клеток произвело разную биомассу сфероидов: сфероидов, полученных способом по изобретению, из надхрящницы, было больше, чем сфероидов из суставного хряща, соответственно больший объем дефекта может быть заполнен. Кроме того, производство волокнистого внеклеточного матрикса при 3D-культивировании - свидетельство более высокой функциональной активности и жизнеспособности клеток.
Пример 2
В дефекты суставной поверхности диаметром 4 мм, сформированные на фрагментах мыщелков бедренных костей овец, помещали сфероиды из надхрящницы реберного хряща (гиалинового), полученные согласно предлагаемому изобретению, до полного покрытия ими зоны дефекта (Фиг. 4). В качестве контроля использованы сфероиды из гиалиновой хрящевой ткани - суставного хряща. После заполнения сфероидами фрагменты мыщелков бедренных костей овец культивировали в пластиковом флаконе со средой следующего состава: DMEM 450 мл, L-глутамин 292 мг, эмбриональная телячья сыворотка 50 мл, пенициллин 100 ед./мл, стрептомицин 100 мкг/мл, при 100% влажности, температуре 37°С, 5% СО2, в течение 7 дней со сменой среды каждые 3 дня.
Отмечено, что на первые сутки культивирования сфероиды из надхрящницы сливались между собой и взаимодействовали со структурами зоны дефекта, распластываясь на реципиентном ложе. К седьмым суткам культивирования дефект был полностью покрыт соединительной тканью из привнесенных сфероидов. Размер сфероидов из надхрящницы оптимален для эффективного закрытия дефекта суставной поверхности, а за счет пластичности (способности к слиянию между собой и распластыванию на поверхности дефекта) тканевое слияние сфероидов и приживление сфероидов происходит быстро.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.
Список литературы, которая включена в настоящее описание изобретения в качестве ссылок:
1. Marcacci M Zaffagnini S, Kon E, Visani A, Iacono F, Loreti I. Arthroscopic autologous chondrocyte transplantation: technical note. [Журнал] // Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc. - 2002 г.. - 3 : Т. 10. - стр. 154-159.
2. Ossendorf C Kaps C, Kreuz PC, Burmester GR, Sittinger M, Erggelet C. Treatment of posttraumatic and focal osteoarthritic cartilage defects of the knee with autologous polymer-based three-dimensional chondrocyte grafts: 2-year clinical results. [Журнал] // Arthritis Res Ther. - 2007 г.. - 2 : Т. 9.
3. Behrens P Ehlers EM, Köchermann KU, Rohwedel J, Russlies M, Plötz W. New therapy procedure for localized cartilage defects. Encouraging results with autologous chondrocyte implantation [Журнал] // MMW Fortschr Med. . - 1999 г.. - 45 : Т. 141. - стр. 49-51.
4. Anderer U Libera J. In vitro engineering of human autogenous cartilage. [Журнал] // J Bone Miner Res. . - 2002 г.. - 8 : Т. 17. - стр. 1420-1429.
5. Stuart MP Matsui RAM, Santos MFS, Côrtes I, Azevedo MS, Silva KR, Beatrici A, Leite PEC, Falagan-Lotsch P, Granjeiro JM, Mironov V, Baptista LS. Successful Low-Cost Scaffold-Free Cartilage Tissue Engineering Using Human Cartilage Progenitor Cell Spheroids Formed by Micromolded Nonadhesive Hydrogel. [Журнал] // Stem Cells Int. . - 2017 г.
Claims (15)
1. Способ получения трансплантата в виде клеточных сфероидов для восстановления хряща субъекта на основе клеток надхрящницы собственного реберного хряща субъекта, включающий следующие этапы:
а) выделение клеток из надхрящницы собственного реберного хряща субъекта;
б) культивирование выделенных на стадии а) клеток без хондрогенной дифференцировочной среды, причем для получения первичной культуры выделенные клетки высевают в пластиковые флаконы с культуральной средой следующего состава: DMEM 450 мл, L-глутамин 292 мг, эмбриональная телячья сыворотка 50 мл, пенициллин 100 ед/мл, стрептомицин 100 мкг/мл, при 100% влажности, температуре 37°С, 5% СО2;
в) перенесение клеток, полученных на стадии б), в агарозные планшеты из расчета 20000 клеток на 1 лунку агарозного планшета и их последующее культивирование с образованием клеточных сфероидов.
2. Способ по п.1, в котором субъект представляет собой человека.
3. Способ по п.1, в котором хрящ представляет собой суставной хрящ, хрящ носа, гортани, трахеи, бронхов, ушной раковины или межпозвоночных дисков.
4. Способ по п.1, в котором культивирование клеток на стадии б) осуществляется в течение 20-30 дней.
5. Способ по п.1, в котором перенесение клеток на стадии в) осуществляется из расчета 20000 клеток на 1 лунку агарозного планшета.
6. Способ по п.1, в котором слияние клеток в клеточные сфероиды осуществляется в лунках агарозного планшета, где клетки пребывают до 21 дня.
7. Способ по п.6, в котором слияние клеток в клеточные сфероиды осуществляется через 7-15 дней.
8. Способ по п.1, в котором размер сфероидов составляет 250-700 мкм.
9. Трансплантат для восстановления хряща субъекта, включающий клеточные сфероиды на основе клеток надхрящницы собственного реберного хряща субъекта, полученные способом по п.1.
10. Трансплантат по п.1, в котором хрящ представляет собой суставной хрящ, хрящ носа, гортани, трахеи, бронхов, ушной раковины или межпозвоночных дисков.
11. Трансплантат по п.1, в котором субъект представляет собой человека.
12. Трансплантат по п.1, в котором размер сфероидов составляет 250-700 мкм.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019134905A RU2731314C1 (ru) | 2019-10-30 | 2019-10-30 | Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей |
| PCT/RU2019/000780 WO2021086222A1 (ru) | 2019-10-30 | 2019-10-31 | Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019134905A RU2731314C1 (ru) | 2019-10-30 | 2019-10-30 | Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2731314C1 true RU2731314C1 (ru) | 2020-09-01 |
Family
ID=72421584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019134905A RU2731314C1 (ru) | 2019-10-30 | 2019-10-30 | Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2731314C1 (ru) |
| WO (1) | WO2021086222A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2750021C1 (ru) * | 2020-08-26 | 2021-06-21 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Международный Центр Медицинских Исследований И Разработок" (Ооо "Мц Миир") | Способ восстановления диафизов длинных трубчатых костей с применением клеточных технологий |
| RU2800991C2 (ru) * | 2022-01-21 | 2023-08-01 | Алексей Вячеславович Ковалев | Способ биофабрикации трансплантата в виде клеточных сфероидов для регенеративных технологий восстановления хряща субъекта на основе надхрящницы собственного реберного хряща субъекта и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга этого же субъекта |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60230593D1 (de) * | 2001-02-06 | 2009-02-12 | Massachusetts Inst Technology | Peptidgerüstverkapselung von gewebszellen und verwendungen davon |
| EP2677027A1 (de) * | 2012-06-21 | 2013-12-25 | Hochschule Lausitz | Verfahren zur Herstellung von funktionalem Fusionsgewebe aus humanen Chondrozyten |
| RU2675930C1 (ru) * | 2017-07-21 | 2018-12-25 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (ФГБНУ "НИИОПП") | Клеточная культура и биотрансплантат для регенерации костной ткани на ее основе |
-
2019
- 2019-10-30 RU RU2019134905A patent/RU2731314C1/ru active
- 2019-10-31 WO PCT/RU2019/000780 patent/WO2021086222A1/ru not_active Ceased
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60230593D1 (de) * | 2001-02-06 | 2009-02-12 | Massachusetts Inst Technology | Peptidgerüstverkapselung von gewebszellen und verwendungen davon |
| EP2677027A1 (de) * | 2012-06-21 | 2013-12-25 | Hochschule Lausitz | Verfahren zur Herstellung von funktionalem Fusionsgewebe aus humanen Chondrozyten |
| RU2675930C1 (ru) * | 2017-07-21 | 2018-12-25 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (ФГБНУ "НИИОПП") | Клеточная культура и биотрансплантат для регенерации костной ткани на ее основе |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CESARZ Z. et al. Spheroid Culture of Stem Cells. Stem Cells International, 2016, 1-11. doi:10.1155/2016/9176357. * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2750021C1 (ru) * | 2020-08-26 | 2021-06-21 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Международный Центр Медицинских Исследований И Разработок" (Ооо "Мц Миир") | Способ восстановления диафизов длинных трубчатых костей с применением клеточных технологий |
| RU2800991C2 (ru) * | 2022-01-21 | 2023-08-01 | Алексей Вячеславович Ковалев | Способ биофабрикации трансплантата в виде клеточных сфероидов для регенеративных технологий восстановления хряща субъекта на основе надхрящницы собственного реберного хряща субъекта и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга этого же субъекта |
| RU2800991C9 (ru) * | 2022-01-21 | 2023-09-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова" Минздрава России) | Способ биофабрикации трансплантата в виде клеточных сфероидов для регенеративных технологий восстановления хряща субъекта на основе надхрящницы собственного реберного хряща субъекта и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга этого же субъекта |
| RU2807692C2 (ru) * | 2022-04-29 | 2023-11-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова" Минздрава России) | Способ получения трансплантата - тканеинженерной надхрящницы на основе клеточных сфероидов |
| RU2819284C2 (ru) * | 2022-06-29 | 2024-05-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова" Минздрава России) | Способ получения тканеинженерной надкостницы из клеточных сфероидов для восстановления костных дефектов субъекта |
| RU2814138C1 (ru) * | 2023-06-15 | 2024-02-22 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Казанский Государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ сокультивирования трехмерных клеточных культур нижних дыхательных путей человека для получения клеточной модели для исследований in vitro |
| RU2822238C1 (ru) * | 2023-07-21 | 2024-07-03 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТО им. Н.Н. Приорова" Минздрава России) | Трансплантат - тканеинженерная надхрящница для восстановления хряща субъекта |
| RU2845500C1 (ru) * | 2024-06-21 | 2025-08-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр травмотологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Тканеинженерная конструкция для восстановления диафиза трубчатой кости |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021086222A1 (ru) | 2021-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nathan et al. | Cell-based therapy in the repair of osteochondral defects: a novel use for adipose tissue | |
| US11357889B2 (en) | Native soft tissue matrix for therapeutic applications | |
| Passaretti et al. | Cultured chondrocytes produce injectable tissue-engineered cartilage in hydrogel polymer | |
| US5197985A (en) | Method for enhancing the implantation and differentiation of marrow-derived mesenchymal cells | |
| US5226914A (en) | Method for treating connective tissue disorders | |
| JP5764807B2 (ja) | 軟骨欠損の修復に用いる外科用グラフト | |
| CN101203601B (zh) | 用于组织填充的分化的未成熟脂肪细胞和生物可降解支架的移植 | |
| JP2010501547A5 (ru) | ||
| CN103041450A (zh) | 用于修复周围神经损伤的细胞基质修饰的组织工程神经移植物及其制备方法 | |
| JP6434014B2 (ja) | 球状軟骨細胞治療剤の製造方法 | |
| US20040030404A1 (en) | Method for cultivating a cartilage replacement and a biomatrix produced according to this method | |
| EP2004806A2 (en) | Methods to maintain, improve and restore the cartilage phenotype of chondrocytes | |
| WO2012001124A1 (en) | Mesenchymal cells and multilayer membrane for the treatment of osteochondral lesions | |
| JP3680067B2 (ja) | 移植用軟骨細胞の製法 | |
| Bhumiratana et al. | Engineering physiologically stiff and stratified human cartilage by fusing condensed mesenchymal stem cells | |
| CN216169072U (zh) | 一种分步组装式软骨-骨多孔仿生支架 | |
| RU2731314C1 (ru) | Способ производства клеточных сфероидов для восстановления хрящей | |
| US20170306283A1 (en) | Trypsin-free cell stamp system and use thereof | |
| Ghiasi et al. | Use of mesenchymal adult stem cell for cartilage regeneration by hydrogel | |
| EP3470096A1 (en) | Elastin reduction allowing recellularization of cartilage implants | |
| RU2167662C1 (ru) | Способ восстановления целостности костей и трансплантат для его осуществления | |
| JP2006314759A (ja) | 移植用軟骨組成物 | |
| RU2800991C9 (ru) | Способ биофабрикации трансплантата в виде клеточных сфероидов для регенеративных технологий восстановления хряща субъекта на основе надхрящницы собственного реберного хряща субъекта и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга этого же субъекта | |
| RU2800991C2 (ru) | Способ биофабрикации трансплантата в виде клеточных сфероидов для регенеративных технологий восстановления хряща субъекта на основе надхрящницы собственного реберного хряща субъекта и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга этого же субъекта | |
| RU2744664C1 (ru) | Способ производства сфероидов из культивируемых клеток надкостницы для обеспечения репаративного остеогенеза |