RU2728724C2 - Method of producing a virus-free human immunoglobulin g solution for intramuscular administration - Google Patents
Method of producing a virus-free human immunoglobulin g solution for intramuscular administration Download PDFInfo
- Publication number
- RU2728724C2 RU2728724C2 RU2018132668A RU2018132668A RU2728724C2 RU 2728724 C2 RU2728724 C2 RU 2728724C2 RU 2018132668 A RU2018132668 A RU 2018132668A RU 2018132668 A RU2018132668 A RU 2018132668A RU 2728724 C2 RU2728724 C2 RU 2728724C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- viruses
- solution
- immunoglobulin
- virus
- filtration
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 title description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 73
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 49
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 46
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 37
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims abstract description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims abstract description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 3
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 claims description 10
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 59
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 17
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 17
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 9
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 7
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 7
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 241000725618 Duck hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 2
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 description 2
- 208000004006 Tick-borne encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 231100000704 bioconcentration Toxicity 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- -1 heptanoate ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 2
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 208000034762 Meningococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229960005480 sodium caprylate Drugs 0.000 description 1
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39516—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum from serum, plasma
- A61K39/39525—Purification
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к биофармацевтической промышленности, и может быть использовано для получения вирусологически безопасных препаратов из плазмы крови, в частности иммуноглобулина G человека для внутримышечного введения.The invention relates to biotechnology, in particular to the biopharmaceutical industry, and can be used to obtain virologically safe drugs from blood plasma, in particular human immunoglobulin G for intramuscular administration.
Иммуноглобулины человека для внутримышечного введения производят двух видов: нормальные (поливалентные), которые содержат усредненный уровень различных антител, характерный для популяции доноров, и специфические или гипериммунные, в которых согласно рекомендациям ВОЗ количество отдельных видов антител должно быть в 5 и более раз выше, чем в нормальных препаратах.Human immunoglobulins for intramuscular administration are produced of two types: normal (polyvalent), which contain an average level of various antibodies characteristic of the donor population, and specific or hyperimmune, in which, according to WHO recommendations, the number of individual types of antibodies should be 5 or more times higher than in normal preparations.
Иммуноглобулин человека нормальный для внутримышечного введения применяется для профилактики гепатита А, кори, коклюша, менингококковой инфекции, полиомиелита. Иммуноглобулины человека специфические предназначены для профилактики и лечения конкретных заболеваний, например, клещевого энцефалита, гепатита В, бешенства, стафилококковой инфекции, а иммуноглобулин человека противоаллергический для лечения аллергических заболеваний. Лечебный эффект препаратов достигается благодаря их уникальному составу - концентрату антител, содержащихся в иммунологически активной фракции плазмы крови здоровых доноров, в том числе доноров, иммунизированных определенными антигенами.Normal human immunoglobulin for intramuscular administration is used for the prevention of hepatitis A, measles, whooping cough, meningococcal infection, poliomyelitis. Specific human immunoglobulins are intended for the prevention and treatment of specific diseases, for example, tick-borne encephalitis, hepatitis B, rabies, staphylococcal infection, and antiallergic human immunoglobulin for the treatment of allergic diseases. The therapeutic effect of the drugs is achieved due to their unique composition - a concentrate of antibodies contained in the immunologically active fraction of the blood plasma of healthy donors, including donors immunized with certain antigens.
Являясь уникальной биологической субстанцией, плазма крови доноров, несмотря на предпринимаемые меры безопасности, может содержать различные инфекционные агенты, наиболее опасными из которых являются вирусы. Это требует применения специальных технологических подходов для снижения риска вирусной контаминации [1]. Традиционно для выделения иммуноглобулинов используют метод спиртового фракционирования, который признан эффективным против большинства известных вирусов. Однако недостатком его является то, что в зависимости от условий проведения процесса распределение патогенов по фракциям плазмы может быть неравномерным, что, в свою очередь, не позволяет гарантировать безопасность получаемых препаратов [2].Being a unique biological substance, the blood plasma of donors, despite the safety measures taken, may contain various infectious agents, the most dangerous of which are viruses. This requires the use of special technological approaches to reduce the risk of viral contamination [1]. Traditionally, for the isolation of immunoglobulins, the alcohol fractionation method is used, which is recognized as effective against most of the known viruses. However, its disadvantage is that, depending on the conditions of the process, the distribution of pathogens in plasma fractions may be uneven, which, in turn, does not allow guaranteeing the safety of the drugs obtained [2].
Известен способ получения иммуноглобулина G человека из иммуноглобулиновой фракции плазмы крови человека путем растворения ее в буфере в условиях кислого рН в диапазоне от 4,6-4,95, добавления в промежуточный раствор каприлат и/или гептаноат-ионов, установления рН 4,8-4,95 для формирования осадка примесных белков, инкубации супернатанта в присутствии каприлат- и/или гептаноат-ионов при их концентрации 10-30 мМ для инактивации вирусов, проведения, как минимум, одной хроматографии при рН 5,0-5,2, а также включения в процесс по выбору дополнительных стадий инактивации/удаления вирусов, а именно, сольвент-детергентной обработки, нанофильтрации или глубинной фильтрации, причем контакт с фильтром должен проводиться при рН 3,5-4,5, предпочтительно рН 4,0±0,1 [3].A known method of obtaining human immunoglobulin G from the immunoglobulin fraction of human blood plasma by dissolving it in a buffer under conditions of acidic pH in the range of 4.6-4.95, adding caprylate and / or heptanoate ions to the intermediate solution, adjusting the pH to 4.8- 4.95 for the formation of a precipitate of impurity proteins, incubation of the supernatant in the presence of caprylate and / or heptanoate ions at a concentration of 10-30 mM to inactivate viruses, at least one chromatography at pH 5.0-5.2, and also the inclusion in the process of optional stages of inactivation / removal of viruses, namely, solvent-detergent treatment, nanofiltration or depth filtration, and contact with the filter should be carried out at pH 3.5-4.5, preferably pH 4.0 ± 0, 13].
Недостатком данного способа является многостадийность технологического процесса, а также использование каприлата натрия, который может оказать негативное влияние на структуру молекулы иммуноглобулина G. Кроме того, по данным наших исследований выбранные условия противовирусной фильтрации на глубинных фильтрах, а именно, при рН 3,5-4,5, предпочтительно 4,0±0,1, не обеспечивают эффективного уровня редукции вирусов.The disadvantage of this method is the multi-stage technological process, as well as the use of sodium caprylate, which can have a negative effect on the structure of the immunoglobulin G molecule. In addition, according to our research, the selected conditions of antiviral filtration on depth filters, namely, at pH 3.5-4 , 5, preferably 4.0 ± 0.1, do not provide an effective level of virus reduction.
Наиболее близким техническим решением к заявляемому, выбранным в качестве прототипа, является способ получения иммуноглобулина человека нормального для внутримышечного введения, производство которого осуществляется по ФС №42-3198-95, включает выделение фракции II Кона (осадка В) методом спиртового фракционирования, растворение ее в воде для инъекций, дополнительную очистку раствора иммуноглобулина фильтрацией и ультрафильтрацией, стерилизующую фильтрацию.The closest technical solution to the claimed one, selected as a prototype, is a method for producing normal human immunoglobulin for intramuscular administration, the production of which is carried out according to FS No. 42-3198-95, includes the isolation of fraction II Cohn (sediment B) by the method of alcohol fractionation, dissolving it in water for injection, additional purification of the immunoglobulin solution by filtration and ultrafiltration, sterilizing filtration.
Известный способ не предусматривает использования дополнительных стадий инактивации и/или элиминации вирусов. В России данным способом выпускались иммуноглобулины человека (нормальный и специфические) до введения в действие ОФС.1.8.1.0001.15 «Лекарственные препараты из плазмы крови человека», в соответствии с которой предусматривается внедрение в технологию производства нескольких стадий вирусной инактивации и/или элиминации вирусов [4].The known method does not provide for the use of additional stages of inactivation and / or elimination of viruses. In Russia, this method was used to produce human immunoglobulins (normal and specific) before the introduction of the OFS.1.8.1.0001.15 "Medicines from human blood plasma", in accordance with which it is planned to introduce several stages of viral inactivation and / or elimination of viruses into the production technology [4].
Техническая проблема, решаемая предлагаемым изобретением, - усовершенствование технологии производства препаратов иммуноглобулинов человека для внутримышечного введения, позволяющей получать вирусологически безопасные препараты с сохранением физико-химических свойств и специфической активности.The technical problem solved by the proposed invention is the improvement of the technology for the production of human immunoglobulin preparations for intramuscular administration, which makes it possible to obtain virologically safe preparations while maintaining the physicochemical properties and specific activity.
Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение качества и безопасности выпускаемых препаратов иммуноглобулинов за счет введения в технологический процесс дополнительных стадий удаления и инактивации вирусов, эффективность которых подтверждена экспериментально.The technical result of the claimed invention is to improve the quality and safety of manufactured immunoglobulin preparations due to the introduction into the technological process of additional stages of removal and inactivation of viruses, the effectiveness of which has been confirmed experimentally.
Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения вирусбезопасного раствора иммуноглобулина G для внутримышечного введения, включающем выделение иммуноглобулиновой фракции II Кона (осадка В) из плазмы крови здоровых доноров методом спиртового фракционирования и дополнительную очистку от примесей и вирусов, удаление вирусов осуществляют методом глубинной фильтрации на фильтрующем материале с анионообменным эффектом, способным удерживать патогенные агенты абсорбцией в сочетании с механическим захватом, при рН раствора от 6,0 до 7,0, предпочтительно 6,4-6,6, а инактивацию вирусов проводят при инкубации стерильного раствора иммуноглобулина при низком рН, а именно, не более 4,5, температуре не менее 36°С в течение 24 часов и более, с последующей очисткой ультрафильтрацией с одновременной корректировкой белка и рН, введением в раствор стабилизатора, проведением стерилизующей фильтрации, при этом последовательность технологических стадий и оптимальные условия процесса для каждой стадии, направленной на редукцию вирусов, определяют в процессе валидационных испытаний при преднамеренном заражении исследуемого материала модельными вирусами, как с липидной оболочкой, так и без липидной оболочки, моделировании производственного процесса в лабораторном масштабе и определении уровня вирусной редукции в логарифмах.The specified technical result is achieved by the fact that in the method of obtaining a virus-safe solution of immunoglobulin G for intramuscular administration, including the isolation of Kona's immunoglobulin fraction II (sediment B) from the blood plasma of healthy donors by the method of alcohol fractionation and additional purification from impurities and viruses, the removal of viruses is carried out by the method of depth filtration on a filtering material with an anion-exchange effect, capable of retaining pathogenic agents by absorption in combination with mechanical capture, at a pH of the solution from 6.0 to 7.0, preferably 6.4-6.6, and the inactivation of viruses is carried out by incubation of a sterile solution of immunoglobulin at low pH, namely, not more than 4.5, a temperature of at least 36 ° C for 24 hours or more, followed by purification by ultrafiltration with simultaneous adjustment of the protein and pH, adding a stabilizer to the solution, carrying out sterilizing filtration, while the sequence of technological stages and optimal process conditions d For each stage aimed at reducing viruses, it is determined during validation tests during the deliberate infection of the test material with model viruses, both with a lipid envelope and without a lipid envelope, modeling the production process on a laboratory scale and determining the level of viral reduction in logarithms.
Вирусную редукцию определяют для каждой стадии процесса: на этапе выделения фракции II Кона (осадка В) методом спиртового фракционирования, глубинной фильтрации и инкубации стерильного раствора иммуноглобулина при низком значении рН.Viral reduction is determined for each stage of the process: at the stage of isolation of Cohn's fraction II (sediment B) by alcohol fractionation, depth filtration and incubation of a sterile immunoglobulin solution at a low pH value.
В качестве модельных вирусов с липидной оболочкой используют вирус гепатита В человека, вирус гепатита С, вирус иммунодефицита человека I типа, вирус гепатита В утят, возбудителя вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота.Human hepatitis B virus, hepatitis C virus, human immunodeficiency virus type I, hepatitis B virus in ducklings, and the causative agent of viral diarrhea - disease of mucous membranes of cattle are used as model viruses with a lipid membrane.
В качестве модельных вирусов без липидной оболочки используют парвовирус В19 и полиовирус.Parvovirus B19 and poliovirus are used as lipid-free model viruses.
Сущность изобретения состоит в том, что оптимальные условия для удаления и инактивации вирусов, обеспечивающие должный уровень их редукции и, соответственно, вирусную безопасность препарата, устанавливают в процессе валидационных испытаний.The essence of the invention lies in the fact that the optimal conditions for the removal and inactivation of viruses, ensuring the proper level of their reduction and, accordingly, the viral safety of the drug, are established during the validation tests.
Ограничения, накладываемые стандартами Надлежащей производственной практики (GMP), не допускают намеренного внесения вирусов в зону производства. Эффективность стадий удаления и инактивации вирусов для производственных процессов проверяют путем преднамеренного заражения исследуемого материала модельными вирусами, моделирования производственного процесса в лабораторных условиях и определения уровня вирусной редукции в логарифмах (log10) при разных условиях [5]. Каждую технологическую стадию моделируют отдельно, уменьшая процесс в 1000 и более раз. Выбор вирусов для проведения исследований осуществляют, исходя из возможных рисков и биологических особенностей патогенных агентов. Для исследования выбирают представителей ДНК и РНК-содержащих вирусов, как с липидной оболочкой, так и без нее. Исходная концентрация модельных вирусов должна быть максимально высокой, чтобы адекватно оценить уровень вирусной редукции, при этом объем добавляемой вирусной суспензии не должен превышать 10%, чтобы не изменить состав исходного материала.Good Manufacturing Practice (GMP) restrictions prevent the deliberate introduction of viruses into the production area. The efficiency of the virus removal and inactivation steps for production processes is checked by deliberately infecting the test material with model viruses, simulating the production process in laboratory conditions, and determining the level of viral reduction in logarithms (log 10 ) under different conditions [5]. Each technological stage is modeled separately, reducing the process by 1000 and more times. The choice of viruses for research is carried out based on the possible risks and biological characteristics of pathogenic agents. For research, representatives of DNA and RNA-containing viruses are selected, both with and without a lipid envelope. The initial concentration of model viruses should be as high as possible to adequately assess the level of viral reduction, while the volume of the added viral suspension should not exceed 10%, so as not to change the composition of the initial material.
Уровень вирусной редукции (R) определяют до и после обработки для каждой стадии процесса: выделения фракции II Кона (осадка В) методом спиртового фракционирования, глубинной фильтрации и инкубации стерильного раствора иммуноглобулина при низком значении рН.The level of viral reduction (R) is determined before and after treatment for each stage of the process: isolation of Cohn's fraction II (sediment B) by alcohol fractionation, depth filtration, and incubation of a sterile immunoglobulin solution at a low pH value.
Для расчета используют следующую формулу (1):For the calculation, use the following formula (1):
V1 - объем (масса) исходного материалаV 1 - volume (mass) of the starting material
T1- концентрация вируса в исходном материале,T 1 - the concentration of the virus in the source material,
V2 - объем (масса) в материале после моделирования технологической стадии,V 2 - volume (mass) in the material after modeling the technological stage,
Т2 - концентрация вируса в материале после моделирования технологической стадии [6].Т 2 is the concentration of the virus in the material after modeling the technological stage [6].
Для оптимизации параметров технологического процесса валидационные испытания проводят один раз. В дальнейшем повторные испытания могут быть выполнены при необходимости внесения изменений в технологию.Validation tests are performed once to optimize the process parameters. In the future, repeated tests can be performed if it is necessary to make changes to the technology.
В соответствии с требованиями ВОЗ снижение титра вируса на уровне 4 log10 или более, указывает на эффективность стадии инактивации/удаления для конкретного вируса, подвергающегося исследованию [7].In accordance with the WHO requirements, a decrease in the virus titer at a level of 4 log 10 or more indicates the effectiveness of the inactivation / removal stage for a particular virus under investigation [7].
Способ осуществляют следующим образом.The method is carried out as follows.
Сырьем для получения иммуноглобулина человека нормального и специфических для внутримышечного введения является плазма крови здоровых доноров, в том числе иммунизированных против гепатита В, клещевого энцефалита, бешенства, стафилококковой инфекции и других инфекционных заболеваний. Плазму контролируют на вирусную безопасность в соответствии с ФС.3.3.2.0001.15 [8]. Показатели активности специфических антител для иммунной плазмы, предназначенной для производства специфических иммуноглобулинов, должны соответствовать регламентным.The raw material for obtaining normal and specific human immunoglobulin for intramuscular administration is the blood plasma of healthy donors, including those immunized against hepatitis B, tick-borne encephalitis, rabies, staphylococcal infection and other infectious diseases. Plasma is monitored for viral safety in accordance with FS.3.3.2.0001.15 [8]. The indicators of the activity of specific antibodies for immune plasma intended for the production of specific immunoglobulins must correspond to the regulatory ones.
Иммуноглобулиновую фракцию II Кона (осадок В), полученную методом спиртового фракционирования, растворяют в охлажденной до 2-8°С стерильной воде для инъекций до регламентируемых показателей концентрации белка, обычно 2,5-5,5%, устанавливают рН 6,5-7,5 и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Раствор выстаивают от 8 часов до 30 дней при температуре 2-8°С для формирования осадка денатурированных белков, полимеров и нестабильных примесей, сформировавшийся осадок удаляют центрифугированием или фильтрацией. Далее в растворе иммуноглобулина G устанавливают рН 6,0-7,0, предпочтительно 6,4-6,6, и пропускают через фильтрующий материал с анионообменным эффектом, способный удерживать вирусы абсорбцией в сочетании с механическим захватом, например ZetaPlus® VR06 (производство компании 3М), с допустимой скоростью потока не более 0,25 мл/см2/мин при температуре (20-28)°С. Данные параметры глубинной фильтрации были выбраны в ходе валидационных испытаний на модельных вирусах в лабораторных условиях и являются оптимальными, так как снижение или увеличение рН от заданной величины уменьшает способность фильтрующего материала сорбировать вирусные частицы. Проводят стерилизующую фильтрацию. Для дополнительной инактивации вирусов в растворе иммуноглобулинов проводят инкубацию стерильного раствора иммуноглобулина при низком значении рН не более 4,5 и прогревании его при температуре не менее 36°С и времени инкубации 24 ч и более. Затем проводят разбавление раствором натрия хлорида 0,9% с последующим концентрированием препарата до первоначального объема методом ультрафильтрации, одновременно корректируя белок по показателю преломления по рефрактометру до 1,356-1,358 и рН до 6,5-7,5. После этого в емкость с раствором иммуноглобулина добавляют расчетное количество глицина для стабилизации физических свойств, устанавливают содержание белка в растворе иммуноглобулина до регламентированных параметров и передают на осветляющую и стерилизующую фильтрацию, после чего разливают препарат в ампулы или флаконы.Immunoglobulin fraction II Cohn (sediment B), obtained by alcohol fractionation, is dissolved in sterile water for injection cooled to 2-8 ° C until the regulated protein concentration, usually 2.5-5.5%, is set at pH 6.5-7 , 5 and subjected to clarifying and sterilizing filtration. The solution is left to stand for 8 hours to 30 days at a temperature of 2-8 ° C to form a precipitate of denatured proteins, polymers and unstable impurities, the formed precipitate is removed by centrifugation or filtration. Then, in the solution of immunoglobulin G, the pH is adjusted to 6.0-7.0, preferably 6.4-6.6, and passed through a filter material with an anion-exchange effect, capable of retaining viruses by absorption in combination with mechanical capture, for example ZetaPlus® VR06 (manufactured by the company 3M), with a permissible flow rate of no more than 0.25 ml / cm 2 / min at a temperature of (20-28) ° C. These parameters of depth filtration were selected during validation tests on model viruses in laboratory conditions and are optimal, since a decrease or increase in pH from a given value reduces the ability of the filtering material to adsorb viral particles. Sterilizing filtration is carried out. For additional inactivation of viruses in a solution of immunoglobulins, a sterile solution of immunoglobulin is incubated at a low pH value of not more than 4.5 and warmed up at a temperature of at least 36 ° C and an incubation time of 24 hours or more. Then dilution is carried out with a solution of sodium chloride 0.9%, followed by concentration of the drug to the initial volume by ultrafiltration, while correcting the protein by refractive index using a refractometer to 1.356-1.358 and pH to 6.5-7.5. After that, the calculated amount of glycine is added to the container with the immunoglobulin solution to stabilize the physical properties, the protein content in the immunoglobulin solution is set to the regulated parameters and transferred to clarifying and sterilizing filtration, after which the drug is poured into ampoules or vials.
Для оценки уровня вирусной редукции спиртового фракционирования процесс моделировали в лабораторных условиях путем его уменьшения в 1000 раз, соблюдая критические параметры, указанные в промышленном регламенте. Иммуноглобулин G человека выделяли из пулов плазмы крови, искусственно контаминированных актуальными гемотрансмиссивными вирусами с липидной оболочкой, а именно: вирусом гепатита С (ВГС) и вирусом гепатита В (ВГВ) и без липидной оболочки: парвовирусом В19 (B19V). Оценивали концентрацию ДНК B19V, РНК ВГС, ДНК ВГВ методом количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в исходной плазме и по стадиям процесса и определяли уровень вирусной редукции с учетом изменения концентрации нуклеиновых кислот исследуемых вирусов и объема (веса) фракций в процессе фракционирования.To assess the level of viral reduction of alcohol fractionation, the process was simulated in laboratory conditions by decreasing it by a factor of 1000, observing the critical parameters specified in the industrial regulations. Human immunoglobulin G was isolated from blood plasma pools artificially contaminated with topical blood-borne viruses with a lipid envelope, namely, hepatitis C virus (HCV) and hepatitis B virus (HBV), and without a lipid envelope: parvovirus B19 (B19V). The concentration of B19V DNA, HCV RNA, HBV DNA was assessed by quantitative polymerase chain reaction (PCR) in the initial plasma and by stages of the process, and the level of viral reduction was determined taking into account the change in the concentration of nucleic acids of the studied viruses and the volume (weight) of fractions during the fractionation process.
Установлено, что уровень вирусной редукции при получении фракции II Кона (осадка В) методом спиртового фракционирования составил более 5 log10 для ВГВ и более 4 log10 для ВГС и B19V. Таким образом, процесс спиртового фракционирования плазмы крови, выполненный в соответствии с действующим регламентом производства для производства иммуноглобулина G человека, можно признать эффективным в удалении значимых гемотрансмиссивных вирусов.It was found that the level of viral reduction when obtaining Cohn's fraction II (sediment B) by alcohol fractionation was more than 5 log 10 for HBV and more than 4 log 10 for HCV and B19V. Thus, the process of alcohol fractionation of blood plasma, carried out in accordance with the current production regulations for the production of human immunoglobulin G, can be considered effective in removing significant blood-borne viruses.
Исследования, подтверждающие эффективность удаления вирусов методом глубинной фильтрации на материале ZetaPlus® VR06, и выбор оптимальных параметров противовирусной фильтрации были выполнены с использованием вируса полиомиелита (PV, вирус без липидной оболочки) и вируса гепатита В уток (ВГВУ, модель с липидной оболочкой вируса гепатита В человека), которые добавляли в раствор иммуноглобулина перед проведением процесса. Воспроизведение процесса фильтрации в лабораторных условиях осуществляли с использованием капсюлей BioCap25 ZetaPlus® VR06 с площадью фильтрации 25 см2 (производство компании 3М). Основные параметры рассчитывали, исходя из рекомендуемой производителем удельной скорости фильтрации (0,25 мл/см2/мин) и объема производственной серии иммуноглобулина G человека для внутримышечного введения. Фильтрацию вируссодержащих растворов иммуноглобулина G человека для внутримышечного введения с установленной вирусной нагрузкой, концентрацией белка не более 6% проводили при комнатной температуре (20-28°С) в диапазоне рН от 4,5 до 7,5. Отбирали образцы фильтрата для оценки вирусной нагрузки через каждые 100 мл. Определяли вирусную нагрузку в образцах до и после фильтрации и рассчитывали фактор вирусной редукции по формуле (1).Studies confirming the effectiveness of virus removal by depth filtration using ZetaPlus® VR06 material and the choice of optimal antiviral filtration parameters were performed using poliomyelitis virus (PV, lipid-free virus) and duck hepatitis B virus (HBV, hepatitis B virus lipid-coated model human), which were added to the immunoglobulin solution before the process. Reproduction of the filtration process under laboratory conditions was carried out using BioCap25 ZetaPlus® VR06 capsules with a filtration area of 25 cm 2 (manufactured by 3M). The main parameters were calculated based on the manufacturer's recommended specific filtration rate (0.25 ml / cm 2 / min) and the volume of a production batch of human immunoglobulin G for intramuscular administration. Filtration of vaccinated solutions of human immunoglobulin G for intramuscular administration with an established viral load, protein concentration not exceeding 6% was carried out at room temperature (20-28 ° C) in the pH range from 4.5 to 7.5. Filtrate samples were taken to assess viral load every 100 ml. The viral load in the samples before and after filtration was determined and the viral reduction factor was calculated using the formula (1).
В результате проведенных испытаний были установлены оптимальные параметры фильтрации, позволяющие эффективно удалять исследуемые вирусы и обеспечивать надежный уровень вирусной редукции исследуемых вирусов, включая представителя вирусов без липидной оболочки, 4 log и более: рекомендуемая скорость потока 0,25 мл/см2/мин, рН раствора от 6,0 до 7,0, оптимально 6,4-6,6, максимальная нагрузка на фильтр не более 80 л на 1 м2 фильтрующей поверхности. Воспроизводимость указанного режима была подтверждена в опытах с тремя сериями растворов иммуноглобулинов G человека для внутримышечного введения.As a result of the tests carried out, the optimal filtration parameters were established, which make it possible to effectively remove the studied viruses and ensure a reliable level of viral reduction of the studied viruses, including a representative of viruses without a lipid envelope, 4 log and more: recommended flow rate 0.25 ml / cm 2 / min, pH solution from 6.0 to 7.0, optimally 6.4-6.6, the maximum load on the filter is not more than 80 liters per 1 m 2 of the filtering surface. The reproducibility of this regimen was confirmed in experiments with three series of solutions of human immunoglobulins G for intramuscular administration.
Исследования, подтверждающие эффективность инактивации вирусов на стадии инкубации стерильного раствора иммуноглобулина при низком значении рН путем прогрева растворов иммуноглобулинов G человека для внутримышечного введения при рН не более 4,5, температуре не менее 36°С в течение 24 часов и более, выполнены с использованием трех вирусов с липидной оболочкой: вируса иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), ВГВУ (модель вируса гепатита В человека), возбудителя вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота (ВВД-БС КРС, модель вируса гепатита С человека). Вируссодержащую суспензию («спайк») вносили в раствор иммуноглобулина на соответствующей стадии, определяли вирусную нагрузку, устанавливали в растворах рН в диапазоне 4,0-7,0, прогревали при температуре от 36 до 38°С в течение 1-120 часов, после инкубации определяли вирусную нагрузку в образцах. Уровень вирусной редукции определяли по формуле (1). Оптимальным считали режим инактивации (рН, время), обеспечивающий уровень вирусной редукции не менее 4 log10 в двух последовательных контрольных точках процесса (время). Испытания, выполненные в модельных опытах на трех сериях растворов иммуноглобулинов G человека для внутримышечного введения, показали, снижение титра инфекционности вирусов на 4 log10 и более при рН не более 4,5, температуре не менее 36°С в течение 24 часов и более, что в соответствии с требованиями ВОЗ позволяет считать данную технологическую стадию эффективной для инактивации вирусов.Studies confirming the effectiveness of inactivation of viruses at the stage of incubation of a sterile solution of immunoglobulin at a low pH value by heating solutions of human immunoglobulins G for intramuscular administration at a pH of no more than 4.5, a temperature of at least 36 ° C for 24 hours or more, were performed using three viruses with a lipid envelope: human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1), HBV (model of human hepatitis B virus), the causative agent of viral diarrhea - disease of the mucous membranes of cattle (VVD-BS cattle, model of human hepatitis C virus). The virus-containing suspension ("spike") was introduced into the immunoglobulin solution at the appropriate stage, the viral load was determined, adjusted in pH solutions in the range of 4.0-7.0, heated at a temperature from 36 to 38 ° C for 1-120 hours, after incubation, the viral load in the samples was determined. The level of viral reduction was determined by the formula (1). The optimal mode of inactivation was considered (pH, time), providing a level of viral reduction of at least 4 log 10 at two successive control points of the process (time). Tests performed in model experiments on three series of solutions of human immunoglobulins G for intramuscular administration showed a decrease in the titer of viral infectivity by 4 log 10 or more at a pH of not more than 4.5, a temperature of at least 36 ° C for 24 hours or more, which, in accordance with WHO requirements, allows us to consider this technological stage as effective for inactivation of viruses.
Таким образом, эффективность инактивации/удаления вирусов при получении препаратов иммуноглобулина G человека для внутримышечного введения заявленным способом была подтверждена с использованием семи различных вирусов: двух вирусов без липидной оболочки (вируса полиомиелита и парвовируса В19) и пяти вирусов с липидной оболочкой: ВИЧ-1, ВГВ, ВГВУ в качестве модели вируса гепатита В человека, ВГС, ВВД-БС КРС в качестве модели вируса гепатита С. Было подтверждено, что процесс спиртового фракционирования и каждая из двух дополнительных стадий, как глубинная фильтрация на материале с анионообменным эффектом ZetaPlus VR06 при рН 6,0-7,0, так и инкубация стерильного раствора иммуноглобулина G человека при рН не более 4,5, температуре не менее 36°С в течение 24 часов и более, способны снижать на каждой стадии титр вирусов на 4 log и более.Thus, the effectiveness of inactivation / removal of viruses in the preparation of human immunoglobulin G preparations for intramuscular administration by the claimed method was confirmed using seven different viruses: two viruses without a lipid envelope (poliomyelitis virus and parvovirus B19) and five viruses with a lipid envelope: HIV-1, HBV, HBV as a model of human hepatitis B virus, HCV, VVD-BS cattle as a model of hepatitis C virus. It was confirmed that the alcohol fractionation process and each of two additional stages as depth filtration on material with anion exchange effect ZetaPlus VR06 at pH 6.0-7.0, and incubation of a sterile solution of human immunoglobulin G at a pH of not more than 4.5, a temperature of at least 36 ° C for 24 hours or more, are able to reduce the titer of viruses by 4 log or more at each stage.
В результате проведенных исследований был установлен суммарный уровень вирусной редукции при получении препаратов иммуноглобулина G человека для внутримышечного введения (нормального и специфических), который для вирусов без липидной оболочки составил более 8 log10, для вирусов с липидной оболочкой, а именно, ВИЧ-1 более 4 log10, ВГВ более 14 log10, ВГС более 9 log10. Данные по уровню редукции приведены в таблице 1.As a result of the studies, the total level of viral reduction was established when receiving preparations of human immunoglobulin G for intramuscular administration (normal and specific), which for viruses without a lipid envelope was more than 8 log 10 , for viruses with a lipid envelope, namely, HIV-1 more 4 log 10 , HBV more than 14 log 10 , HCV more than 9 log 10 . The data on the reduction level are shown in table 1.
На основании представленных данных продукт, полученный заявленным способом, может рассматриваться как вирусбезопасный. Преимуществом является то, что предложенный способ не предполагает использование химических реагентов, которые могут оказать негативное влияние на молекулу иммуноглобулина G человека.Based on the data presented, the product obtained by the claimed method can be considered as virus-safe. The advantage is that the proposed method does not involve the use of chemical reagents that can have a negative effect on the human immunoglobulin G molecule.
Пример 1. 4,0 кг спиртовой фракции II Кона (осадок В) растворяют в охлажденной до 2-8°С воде до концентрации белка 2,5%, устанавливают рН 6,5 и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Раствор выстаивают 8 часов при температуре 2-8°С. Образовавшийся осадок денатурированных белков, полимеров и нестабильных примесей удаляют осветляющей фильтрацией. В растворе иммуноглобулина G устанавливают рН 6,0 и пропускают через фильтрующий материал Zeta Plus® VR06, соблюдая рекомендуемую скорость потока и нагрузку на фильтрующую поверхность. Затем с помощью 0,1 н раствора соляной кислоты в растворе устанавливают рН 4,0 и прогревают его при температуре 38°С в течение 48 часов. Раствор разбавляют пятикратным объемом раствора натрия хлорида 0,9% и проводят концентрирование до первоначального объема с одновременной коррекцией белка по показателю преломления по рефрактометру 1,356-1,358 и рН до 6,5-7,5. В емкость с раствором иммуноглобулина добавляют расчетное количество глицина до конечной концентрации 0,3 М (2,25±0,05)%. Проводят осветляющую и стерилизующую фильтрацию через соответствующие фильтромембраны, заправленные в фильтродержатель. Фильтрат собирают в стерильную емкость. Отбирают пробу для контроля качества по показателям спецификации. Для стабилизации физических показателей стерильный раствор иммуноглобулина выдерживают в течение 1-1,5 мес. при температуре от 18 до 25°С. Раствор разливают в ампулы или флаконы.Example 1. 4.0 kg of Cohn's alcohol fraction II (precipitate B) is dissolved in water cooled to 2-8 ° C to a protein concentration of 2.5%, the pH is adjusted to 6.5 and subjected to clarifying and sterilizing filtration. The solution is allowed to stand for 8 hours at a temperature of 2-8 ° C. The formed precipitate of denatured proteins, polymers and unstable impurities is removed by clarifying filtration. The immunoglobulin G solution is adjusted to pH 6.0 and passed through Zeta Plus® VR06 filter material, observing the recommended flow rate and load on the filter surface. Then, using a 0.1 N hydrochloric acid solution in the solution, the pH is adjusted to 4.0 and heated at 38 ° C for 48 hours. The solution is diluted with a five-fold volume of 0.9% sodium chloride solution and concentration is carried out to the initial volume with simultaneous correction of the protein by refractive index by a refractometer 1.356-1.358 and pH up to 6.5-7.5. A calculated amount of glycine is added to a container with an immunoglobulin solution to a final concentration of 0.3 M (2.25 ± 0.05)%. Clarifying and sterilizing filtration is carried out through the corresponding filter membranes, charged in the filter holder. The filtrate is collected in a sterile container. A sample is taken for quality control according to the specification. To stabilize the physical parameters, a sterile solution of immunoglobulin is kept for 1-1.5 months. at a temperature of 18 to 25 ° C. The solution is poured into ampoules or vials.
Пример 2. 4,5 кг спиртовой фракции II Кона (осадок В) растворяют в охлажденной до 2-8°С воде до концентрации белка 5,5%, устанавливают рН 7,5 и подвергают осветляющей и стерилизующей фильтрации. Раствор выстаивают 30 дней при температуре 2-8°С. Образовавшийся в процессе отстаивания осадок денатурированных белков, полимеров и нестабильных примесей удаляют осветляющей фильтрацией. В растворе иммуноглобулина G устанавливают рН 6,5 и пропускают через фильтрующий материал Zeta Plus® VR06. Затем с помощью 0,1 н раствора соляной кислоты в растворе устанавливают рН 4,5 и прогревают его при температуре 36°С в течение 24 часов. Раствор разбавляют пятикратным объемом раствора натрия хлорида 0,9% и проводят концентрирование до первоначального объема с одновременной коррекцией рН до 7,5. Содержание белка доводят до 9,5-10,5% и вносят глицин до конечной концентрации 0,3 М (2,25±0,05)%. Проводят стерилизующую фильтрацию. Фильтрат собирают в стерильную емкость. Отбирают пробу для контроля качества по показателям спецификации. Для стабилизации физических показателей стерильный раствор иммуноглобулина выдерживают в течение 1-1,5 мес. при температуре от 18 до 25°С, а затем разливают в ампулы или флаконы.Example 2. 4.5 kg of Cohn's alcohol fraction II (precipitate B) is dissolved in water cooled to 2-8 ° C to a protein concentration of 5.5%, the pH is adjusted to 7.5 and subjected to clarifying and sterilizing filtration. The solution is allowed to stand for 30 days at a temperature of 2-8 ° C. The precipitate of denatured proteins, polymers and unstable impurities formed in the process of settling is removed by clarifying filtration. The immunoglobulin G solution is adjusted to pH 6.5 and passed through Zeta Plus® VR06 filter media. Then, using a 0.1 N hydrochloric acid solution in the solution, the pH is adjusted to 4.5 and heated at 36 ° C for 24 hours. The solution is diluted with a five-fold volume of 0.9% sodium chloride solution and concentration is carried out to the original volume while the pH is adjusted to 7.5. The protein content is adjusted to 9.5-10.5% and glycine is added to a final concentration of 0.3 M (2.25 ± 0.05)%. Sterilizing filtration is carried out. The filtrate is collected in a sterile container. A sample is taken for quality control according to the specification. To stabilize the physical parameters, the sterile immunoglobulin solution is kept for 1-1.5 months. at a temperature of 18 to 25 ° C, and then poured into ampoules or vials.
Пример 3. Иммунную плазму, содержащую антитела к стафилококковому экзотоксину, объединяют в производственную загрузку. В производственном пуле содержание антиальфастафилолизина составляет не менее 2 МЕ/мл. Проводят выделение специфической иммуноглобулиновой фракции (осадка В) спиртовым методом при низких температурах. Полученную в процессе фракционирования спиртовую фракцию II Кона (осадок В) в количестве 4,5 кг заливают охлажденной стерильной водой для инъекций в соотношении 1:5 и перемешивают при температуре (2-4)°С до получения однородного раствора. Доводят концентрацию белка в растворе до 4,5%, устанавливают рН 7,0. Раствор иммуноглобулина фильтруют через стерилизующие фильтры и выстаивают 14 дней при температуре (2-8)°С. Образовавшийся осадок удаляют фильтрацией. Устанавливают в растворе иммуноглобулина значения рН 6,5 и пропускают через фильтрующий материал Zeta Plus® VR06. Добавляют кислоты соляной раствор 0,1 н до значения рН 4,0 и проводят стерилизующую фильтрацию. Стерильный раствор иммуноглобулина для дополнительной инактивации вирусов прогревают при 36°С в течение 48 часов. Раствор разбавляют пятикратным объемом раствора натрия хлорида 0,9% и проводят концентрирование до первоначального объема с одновременной коррекцией рН до 7,0. Корректируют содержание белка до 9,5%. Стабилизируют глицином из расчета 15-30 г глицина на 1 л раствора иммуноглобулина. Проводят стерилизующую фильтрацию. Отбирают пробу для контроля качества по показателям спецификации. Содержание анти-альфастафилолизина в готовом препарате составляет не менее 20 МЕ/мл. Разливают препарат в ампулы или флаконы.Example 3. Immune plasma containing antibodies to staphylococcal exotoxin is combined into a production batch. In the production pool, the content of antialfastaphylolysin is at least 2 IU / ml. The specific immunoglobulin fraction (sediment B) is isolated by the alcohol method at low temperatures. The alcohol fraction II Kona (sediment B) obtained in the process of fractionation in an amount of 4.5 kg is poured with cooled sterile water for injection in a ratio of 1: 5 and stirred at a temperature of (2-4) ° C until a homogeneous solution is obtained. Bring the protein concentration in the solution to 4.5%, set the pH to 7.0. The immunoglobulin solution is filtered through sterilizing filters and allowed to stand for 14 days at a temperature of (2-8) ° C. The formed precipitate is removed by filtration. Set in the immunoglobulin solution to pH 6.5 and pass through Zeta Plus® VR06 filter material. Add 0.1N acid saline solution to pH 4.0 and sterilize filtration. A sterile solution of immunoglobulin for additional inactivation of viruses is heated at 36 ° C for 48 hours. The solution is diluted with a five-fold volume of 0.9% sodium chloride solution and concentration is carried out to the original volume while the pH is adjusted to 7.0. The protein content is adjusted to 9.5%. Stabilize with glycine at the rate of 15-30 g of glycine per 1 liter of immunoglobulin solution. Sterilizing filtration is carried out. A sample is taken for quality control according to the specification. The content of anti-alfastaphilolysin in the finished product is at least 20 IU / ml. The drug is poured into ampoules or vials.
Пример 4. Эффективность удаления вирусов при выделении иммуноглобулиновой фракции II Кона (осадка В) методом спиртового фракционирования проверяют путем преднамеренного заражения материала значимыми вирусами и моделирования производственного процесса в лабораторных условиях. В плазму для фракционирования, проверенную на отсутствие вирусных маркеров, вносят растворы стандартных образцов, аттестованных по содержанию ДНК ВГВ, РНК ВГС, ДНК B19V, до конечной концентрации вирусных нуклеиновых кислот не менее 5 log10 МЕ/мл, при этом объем добавляемых вируссодержащих растворов не должен превышать 10% от общего объема плазмы. Замеряют объем полученного пула плазмы. Определяют концентрацию нуклеиновых кислот вирусов в сформированном модельном пуле методом ПЦР.Example 4. The efficiency of virus removal in the isolation of Kona's immunoglobulin fraction II (sediment B) by the alcohol fractionation method is checked by deliberately contaminating the material with significant viruses and simulating the production process in laboratory conditions. In plasma for fractionation, tested for the absence of viral markers, solutions of standard samples certified for the content of HBV DNA, HCV RNA, B19V DNA are added to the final concentration of viral nucleic acids of at least 5 log 10 IU / ml, while the volume of added vaccinated solutions is not must exceed 10% of the total plasma volume. The volume of the plasma pool obtained is measured. Determine the concentration of viral nucleic acids in the formed model pool by PCR.
Выделяют из контаминированного вирусами модельного пула плазмы фракцию II Кона (осадок В) методом спиртового фракционирования. Определяют количество выделенного осадка В. Тестируют образец полученного осадка В, предварительно разведенного стерильным изотоническим раствором натрия хлорида до гомогенного состояния в весовом соотношении 1:4, на количественное содержание ДНК ВГВ, РНК ВГС, ДНК B19V методом ПЦР. Рассчитывают концентрацию вирусных нуклеиновых кислот в осадке В с учетом фактора разведения. Устанавливают уровень вирусной редукции в модельном процессе по формуле (1).Cohn's fraction II (sediment B) is isolated from the virus-contaminated model pool of plasma by the method of alcohol fractionation. Determine the amount of precipitate isolated B. Test a sample of the obtained precipitate B, previously diluted with sterile isotonic sodium chloride solution to a homogeneous state in a weight ratio of 1: 4, for the quantitative content of HBV DNA, HCV RNA, B19V DNA by PCR. Calculate the concentration of viral nucleic acids in the sediment B taking into account the dilution factor. The level of viral reduction in the model process is set according to the formula (1).
Уровень вирусной редукции составил (5,29±0,19) log10, (4,24±0,04) log10 и (4,56±0,14) log10 для вирусов ВГВ, ВГС и B19V, соответственно, что позволяет считать процесс спиртового фракционирования плазмы крови эффективным в удалении вирусов.The level of viral reduction was (5.29 ± 0.19) log 10 , (4.24 ± 0.04) log 10 and (4.56 ± 0.14) log 10 for HBV, HCV and B19V viruses, respectively, which allows us to consider the process of alcoholic fractionation of blood plasma to be effective in removing viruses.
Пример 5. Для оптимизации параметров противовирусной фильтрации проводят серию модельных опытов с вирусом гепатита В уток в качестве модели ВГВ - одного из наиболее устойчивых гемотрансмиссивных вирусов человека с липидной оболочкой и вируса полиомиелита человека (PV) в качестве модели вирусов без липидной оболочки. Испытания проводят в лабораторных условиях.Example 5. To optimize the parameters of antiviral filtration, a series of model experiments is carried out with duck hepatitis B virus as a model of HBV, one of the most resistant blood-borne human viruses with a lipid envelope, and human polio virus (PV) as a model of viruses without a lipid envelope. The tests are carried out under laboratory conditions.
В растворы фракции II Кона (осадка В), полученные после стадий осветляющей и стерилизующей фильтрации, выдерживания в течение 14 дней и осветляющей фильтрации, с содержанием белка 4,5% вносят отдельно ВГВУ и PV до конечной концентрации вирусного генома в растворе не менее 104 копий/мл. Для каждого контаминированного раствора иммуноглобулина готовят серию образцов по 500 мл каждая с рН раствора от 4,5 до 7,5. Определяют концентрацию вирусных геномов в растворах до начала фильтрации методом ПЦР. Образцы пропускают через капсюли BioCap25 ZetaPlus® VR06 с площадью фильтрации 25 см2 (один образец - один фильтр) со скоростью потока 6 мл/мин (удельный поток 0,25 мл/см2/мин) при комнатной температуре, отбирая аликвоты фильтрата через каждые 100 мл. Фильтр предварительно промывают водой очищенной стерильной объемом 150 мл при скорости потока до 50 мл/мин. Подачу раствора на фильтр осуществляют перистальтическим насосом. Нулевой точкой эксперимента считают время появления фильтрата на выходе из фильтра. Определяют концентрацию ДНК ВГВУ и РНК PV в образцах фильтрата методом ПЦР. Оценивают уровень вирусной редукции в каждой тестируемой точке фильтрации по формуле (1).In solutions of Cohn's fraction II (sediment B), obtained after the stages of clarifying and sterilizing filtration, aging for 14 days and clarifying filtration, with a protein content of 4.5%, HLVU and PV are added separately until the final concentration of the viral genome in solution is not less than 10 4 copies / ml. For each contaminated immunoglobulin solution, prepare a series of samples of 500 ml each with a pH of the solution from 4.5 to 7.5. Determine the concentration of viral genomes in solutions prior to filtration by PCR. The samples are passed through BioCap25 ZetaPlus® VR06 capsules with a filtration area of 25 cm 2 (one sample - one filter) at a flow rate of 6 ml / min (specific flow 0.25 ml / cm 2 / min) at room temperature, taking an aliquot of the filtrate every 100 ml The filter is pre-washed with purified sterile water with a volume of 150 ml at a flow rate of up to 50 ml / min. The solution is fed to the filter with a peristaltic pump. The zero point of the experiment is the time when the filtrate appears at the exit from the filter. Determine the concentration of HBVU DNA and PV RNA in the filtrate samples by PCR. The level of viral reduction at each tested filtration point is estimated using the formula (1).
Эффективным считают режим глубинной фильтрации, обеспечивающий уровень вирусной редукции не менее 4 log10.The depth filtration mode is considered effective, providing a level of viral reduction of at least 4 log 10 .
В ходе проведения экспериментов было установлено, что уровень вирусной редукции 4 log10 и более обеспечивает глубинная фильтрация растворов иммуноглобулинов с рН 6,0-7,0, оптимально 6,4-6,6, при комнатной температуре со скоростью потока 0,25 мл/см2/мин и максимальной нагрузке на фильтр 40-80 л на 1 кв. м фильтрующей поверхности.In the course of the experiments, it was found that the level of viral reduction of 4 log 10 and more is provided by in-depth filtration of solutions of immunoglobulins with pH 6.0-7.0, optimally 6.4-6.6, at room temperature with a flow rate of 0.25 ml / cm 2 / min and a maximum filter load of 40-80 liters per 1 sq. m filtering surface.
Пример 6. Эффективность вирусинактивирующей стадии инкубации стерильных растворов иммуноглобулинов при низком значении рН и определение оптимального режима инактивации осуществляют с использованием в качестве модели ВГВУ, ВВД- БС КРС и ВИЧ-1. Особенностью методологического подхода для оценки эффективности вирусной инактивации является работа с биологическими моделями живых систем в опытах in vivo и in vitro, позволяющая оценивать жизнеспособность вирусов. Для модельных опытов используют растворы фракции II Кона (осадок В) на соответствующей стадии технологического процесса. Растворы раздельно контаминируют ВГВУ, ВВД-БС КРС и ВИЧ-1, при этом объем вносимых вирусных суспензий в растворах иммуноглобулина не должен превышать 10%, а содержание вирусов в исходных растворах должно быть не менее 4 log10 доз в соответствующих единицах измерения. Готовят серию контаминированных образцов иммуноглобулина с рН от 4,0 до 7,0. Определяют биоконцентрацию модельного вируса в образцах до вирусинактивирующей обработки. Инкубируют полученные растворы при температуре от 36 до 38°С в течение 1, 5, 24, 48, 120 ч. После инактивирующего воздействия определяют биоконцентрацию ВВД-БС КРС и ВИЧ-1 в условиях in vitro путем титрования экспериментальных образцов на чувствительных культурах клеток. Устанавливают отсутствие инфекционности ВГВУ путем моделирования ВГВУ-инфекции уток in vivo. Рассчитывают уровень вирусной редукции по формуле (1). Оптимальным считают режим инактивации (рН, время), обеспечивающий уровень вирусной редукции не менее 4 log10 в двух последовательных контрольных точках процесса (время).Example 6. The efficiency of the virus-inactivating stage of incubation of sterile solutions of immunoglobulins at a low pH value and determination of the optimal mode of inactivation is carried out using VHVU, VVD-BS cattle and HIV-1 as a model. A feature of the methodological approach for assessing the effectiveness of viral inactivation is the work with biological models of living systems in experiments in vivo and in vitro, which makes it possible to assess the viability of viruses. For model experiments, solutions of Kohn's fraction II (precipitate B) are used at the appropriate stage of the technological process. The solutions are separately contaminated with VHVU, VVD-BS cattle and HIV-1, while the volume of viral suspensions introduced in immunoglobulin solutions should not exceed 10%, and the content of viruses in the initial solutions should be at least 4 log 10 doses in appropriate units. A series of contaminated immunoglobulin samples are prepared with a pH of 4.0 to 7.0. Determine the bioconcentration of the model virus in the samples before the virus-inactivating treatment. The resulting solutions are incubated at a temperature of 36 to 38 ° C for 1, 5, 24, 48, 120 hours. After the inactivating action, the bioconcentration of VVD-BS cattle and HIV-1 is determined in vitro by titrating experimental samples on sensitive cell cultures. Establish the absence of infectivity of HLVV by modeling HLVV infection of ducks in vivo. The level of viral reduction is calculated using the formula (1). The optimal mode of inactivation is considered (pH, time), providing a level of viral reduction of at least 4 log 10 in two consecutive control points of the process (time).
Оптимальным режимом является инкубация растворов иммуноглобулинов в течение 24-48 часов при значении рН менее 4,5 при температуре 36°С и выше, обеспечивающая уровень вирусной редукции более 4 log10 для ВИЧ-1 и более 5 log10 для ВГВУ и ВВД-БС КРС.The optimal mode is the incubation of immunoglobulin solutions for 24-48 hours at a pH value of less than 4.5 at a temperature of 36 ° C and above, providing a level of viral reduction of more than 4 log 10 for HIV-1 and more than 5 log 10 for HLV and VVD-BS Cattle.
Качественные характеристики производственных серий препаратов иммуноглобулинов G человека для внутримышечного введения (нормального и специфических), полученных заявленным способом, представлены в табл.2.The qualitative characteristics of the production series of preparations of human immunoglobulins G for intramuscular administration (normal and specific) obtained by the claimed method are presented in Table 2.
Таким образом, предлагаемый способ получения раствора иммуноглобулина G человека для внутримышечного введения (нормального и специфических) обеспечивает высокий уровень очистки и вирусной безопасности и позволяет получать препараты с сохраненными физико-химическими свойствами и специфической активностью.Thus, the proposed method for preparing a solution of human immunoglobulin G for intramuscular administration (normal and specific) provides a high level of purification and viral safety and makes it possible to obtain preparations with preserved physical and chemical properties and specific activity.
ЛитератураLiterature
1. Обеспечение инфекционной безопасности препаратов из плазмы крови доноров (обзор литературы)/Н.В.Зубкова // Гематология и трансфузиология. - 2014. - №2. - С. 44-49.1. Ensuring the infectious safety of drugs from the blood plasma of donors (literature review) / N.V. Zubkova // Hematology and transfusiology. - 2014. - No. 2. - S. 44-49.
2. Экспериментальное изучение удаления вирусов гепатита В, С и парвовируса В19 при фракционировании плазмы этиловым спиртом / Н.В. Зубкова [и др.] // Биопрепараты. - 2016. - Т. 16, №1 (57). - С. 43-48.2. Experimental study of the removal of hepatitis B, C and parvovirus B19 viruses by fractionation of plasma with ethyl alcohol. Zubkova [et al.] // Biopreparations. - 2016. - T. 16, No. 1 (57). - S. 43-48.
3. Пат. №2337109. МПК С07К 16/06, A61L 2/00. Препарат иммуноглобулина IgG и способ его получения [Электрон. ресурс] / А. Бухахер, Г. Иберер, Ю. Ремиш; заявл. 25.02.2005; опубл. 27.10.2008 - Электрон. Дан. - Режим доступа: // http://www.freepatent.ru/patents/2337109.3. Pat. No. 2337109. IPC S07K 16/06, A61L 2/00. The preparation of immunoglobulin IgG and the method for its production [Electron. resource] / A. Bukhaher, G. Iberer, J. Remish; declared 02.25.2005; publ. 10/27/2008 - Electron. Dan. - Access mode: // http://www.freepatent.ru/patents/2337109.
4. Лекарственные препараты из плазмы крови человека (ОФС 1.8.1.0001.15) [Электрон. ресурс] / Государственная Фармакопея РФ XIII издание. - 2015. - Т. 2. - С. 862-866. - Электрон. дан. - Режим доступа: http://www.femb.ru/feml.4. Medicines from human blood plasma (OFS 1.8.1.0001.15) [Electron. resource] / State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIII edition. - 2015. - T. 2. - S. 862-866. - Electron. Dan. - Access mode: http://www.femb.ru/feml.
5. Правила организации производства контроля качества лекарственных средств / Приказ Минпромторга России от 14.06.2013 г. №916.5. Rules for organizing the production of quality control of medicines / Order of the Ministry of Industry and Trade of Russia dated June 14, 2013 No. 916.
6. Virus Validation Studies: the design contribution and interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses [Electronic resource] European Medicines Agency // CPMP/BWP/268/95 - Электрон. дан. - Режим доступа: // http://www.emea.europa.eu.6. Virus Validation Studies: the design contribution and interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses [Electronic resource] European Medicines Agency // CPMP / BWP / 268/95 - Electron. Dan. - Access mode: // http://www.emea.europa.eu.
7. WHO Guidance document on viral inactivation and removal procedure intended to assure the viral safety of blood plasma products [Electronic resource] / WHO Technical Report, Series №924, Annex 4. - 2004. - Электрон. дан. - Режим доступа: //http://ww.who.int/bloodproducts/ publications /WHO_TRS_924_A4.pdf.7. WHO Guidance document on viral inactivation and removal procedure intended to assure the viral safety of blood plasma products [Electronic resource] / WHO Technical Report, Series No. 924, Annex 4. - 2004. - Electron. Dan. - Access mode: //http://ww.who.int/bloodproducts/ publications /WHO_TRS_924_A4.pdf.
8. Плазма для фракционирования (ФС.3.3.2.0001.15) [Электрон, ресурс] / Государственная Фармакопея РФ XIII издание. - 2015. - Т. 3. - С. 1206-1212. - Электрон. дан. - Режим доступа: http://www.femb.ru/feml.8. Plasma for fractionation (FS.3.3.2.0001.15) [Electron, resource] / State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIII edition. - 2015 .-- T. 3. - S. 1206-1212. - Electron. Dan. - Access mode: http://www.femb.ru/feml.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018132668A RU2728724C2 (en) | 2018-09-13 | 2018-09-13 | Method of producing a virus-free human immunoglobulin g solution for intramuscular administration |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018132668A RU2728724C2 (en) | 2018-09-13 | 2018-09-13 | Method of producing a virus-free human immunoglobulin g solution for intramuscular administration |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018132668A RU2018132668A (en) | 2020-03-13 |
| RU2018132668A3 RU2018132668A3 (en) | 2020-03-13 |
| RU2728724C2 true RU2728724C2 (en) | 2020-07-30 |
Family
ID=69898917
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018132668A RU2728724C2 (en) | 2018-09-13 | 2018-09-13 | Method of producing a virus-free human immunoglobulin g solution for intramuscular administration |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2728724C2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114306659A (en) * | 2022-01-04 | 2022-04-12 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | Full-automatic temperature control fixed tank type globulin inactivation device and use method |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2487725C1 (en) * | 2012-03-15 | 2013-07-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) | Method for preparing concentrated immunoglobulin preparation for subcutaneous application |
| US20170198009A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-07-13 | Instituto Grifols, S.A. | Method for the preparation of immunoglobulins |
-
2018
- 2018-09-13 RU RU2018132668A patent/RU2728724C2/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2487725C1 (en) * | 2012-03-15 | 2013-07-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) | Method for preparing concentrated immunoglobulin preparation for subcutaneous application |
| US20170198009A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-07-13 | Instituto Grifols, S.A. | Method for the preparation of immunoglobulins |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| BIESERT L., Virus validation studies of immunoglobulin preparations.Clin Exp Rheumatol. 1996 May-Jun;14 Suppl 15:S47-52. * |
| BOS OJ., et al., Virus validation of pH 4-treated human immunoglobulin products produced by the Cohn fractionation process.Biologicals. 1998 Dec;26(4):267-76. * |
| BOS OJ., et al., Virus validation of pH 4-treated human immunoglobulin products produced by the Cohn fractionation process.Biologicals. 1998 Dec;26(4):267-76. RISTOL P., et al., [Evaluation of viral safety of a high-purity human factor VIII concentrate submitted to 2 specific virus inactivation treatments (FANDHI)].Sangre (Barc). 1996 Apr;41(2):131-6. BIESERT L., Virus validation studies of immunoglobulin preparations.Clin Exp Rheumatol. 1996 May-Jun;14 Suppl 15:S47-52. ZUBKOVA NV., et al., Estimation of efficiency of solvent-detergent method for virus inactivation in the technology of immunoglobulin production on the model of duck hepatitis B virus.Bull Exp Biol Med. 2013 Oct;155(6):821-4. * |
| RISTOL P., et al., [Evaluation of viral safety of a high-purity human factor VIII concentrate submitted to 2 specific virus inactivation treatments (FANDHI)].Sangre (Barc). 1996 Apr;41(2):131-6. * |
| ZUBKOVA NV., et al., Estimation of efficiency of solvent-detergent method for virus inactivation in the technology of immunoglobulin production on the model of duck hepatitis B virus.Bull Exp Biol Med. 2013 Oct;155(6):821-4. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2018132668A (en) | 2020-03-13 |
| RU2018132668A3 (en) | 2020-03-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5129805B2 (en) | Purification process for isolation of purified vesicular stomatitis virus from cell culture | |
| RU2197264C2 (en) | Method of preparing surface antigen proteins from influenza virus, anti-influenza vaccine | |
| US11629339B2 (en) | Aseptic purification process for viruses | |
| WO2017109229A1 (en) | Virus purification | |
| US20100260798A1 (en) | Method for purifying the rabies virus | |
| RU2010111747A (en) | METHOD FOR PRODUCING ANTIVIRAL VACCINE | |
| Farcet et al. | Hepatitis E virus and the safety of plasma products: investigations into the reduction capacity of manufacturing processes | |
| HK1248763A1 (en) | Aseptic purification process for viruses | |
| WO2007007344A1 (en) | Inactivated poliomyelitis vaccine derived from sabin strain of polio virus | |
| RU2728724C2 (en) | Method of producing a virus-free human immunoglobulin g solution for intramuscular administration | |
| CN102406930A (en) | Method for preparing seasonal influenza virus split vaccine | |
| Nowak et al. | Choice of parvovirus model for validation studies influences the interpretation of the effectiveness of a virus filtration step | |
| de Castro Barbosa et al. | Influence of SARS-CoV-2 inactivation by different chemical reagents on the humoral response evaluated in a murine model | |
| US20240024459A1 (en) | Method for producing an antigen corresponding to the inactivated sars-cov-2 virus, antigen corresponding to the inactivated sars-cov-2 virus, antigenic composition, kits, and uses thereof | |
| AU2013306080A1 (en) | Virus purification and formulation process | |
| US20080213753A1 (en) | Method for the verification of the removal of viruses to validate filters and filtering processes | |
| JP2000510107A (en) | Biological material free of viral and molecular pathogens and method for producing the same | |
| Jagannathan et al. | Kinetics analysis of beta-propiolactone with tangential flow filtration (TFF) | |
| Stohlman et al. | Rescue of a positive stranded RNA virus from antigen negative neuroblastoma cells | |
| RU2257916C1 (en) | Liquid preparation containing immunoglobulin efficient against marburg fever from horse blood serum (horse immunoglobulin marburg) | |
| Lothert | Steric exclusion chromatography: Advancement of a laboratory-based platform technology into a key component of viral vector and vaccine production processes | |
| RU2673546C1 (en) | Method for producing liquid immunoglobulin against ebola fever from horse blood serum | |
| CN107794249A (en) | The method that infection, purification, inactivation and concentration foot and mouth disease virus produce vaccine antigen | |
| RU2078816C1 (en) | Method of preparing the inactivated vaccine for prophylaxis of venezuelan encephalomyelitis | |
| Berting et al. | Effective poxvirus removal by sterile filtration during manufacture of plasma derivatives |