RU2727054C1 - Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции - Google Patents
Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2727054C1 RU2727054C1 RU2020116322A RU2020116322A RU2727054C1 RU 2727054 C1 RU2727054 C1 RU 2727054C1 RU 2020116322 A RU2020116322 A RU 2020116322A RU 2020116322 A RU2020116322 A RU 2020116322A RU 2727054 C1 RU2727054 C1 RU 2727054C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- cov
- sars
- length
- primers
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 title claims description 8
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 title description 3
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract description 20
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000013615 primer Substances 0.000 claims description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 abstract description 10
- 239000012620 biological material Substances 0.000 abstract description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 101100281953 Homo sapiens GAPDH gene Proteins 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 3
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 241000206766 Pavlova Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 1
- 241001351225 Sergey Species 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 235000012162 pavlova Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ выявления кДНК вируса SARS-CoV-2. Использование специфичных праймеров позволяет выявлять генетический материал вируса SARS-CoV-2 в исследуемых образцах методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Одна пара праймеров подобрана к гену orf1ab. Их последовательности: SEQ ID NO: 1-5' cagtctgtaccgtctgcgg 3', SEQ ID NO: 2-5' cagtactagtgcctgtgccg 3'. Длина ампликона составляет 158 п.н. Две пары праймеров подобраны к гену N. Их последовательности и длина ампликонов: SEQ ID NO: 3-5' ggtggaccctcagattcaactgg 3', SEQ ID NO: 4-5' ttttaccgtcaccaccacgaa 3', длина ПЦР-продукта 250 п.н.; SEQ ID NO: 5-5' cgcattggcatggaagtcac 3', SEQ ID NO: 6-5' tgtctctgcggtaaggcttg 3', длина ПЦР-продукта 203 п.н. После проведения ПЦР продукты реакции разделяют в электрофорезе с маркером длины. По наличию и длине ампликонов способ позволяет выявлять и идентифицировать наличие вируса SARS-CoV-2 в биологическом материале. Изобретение может найти применение в медицине при лабораторной диагностике COVID-19. 2 ил., 4 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выявления кДНК вируса SARS-CoV-2 и может найти применение в медицине при лабораторной диагностике COVID-19. Вирус SARS-CoV-2 относится к группе коронавирусов и является возбудителем потенциально тяжелой острой респираторной инфекции COVID-19. Для лабораторной диагностики COVID-19 может быть использован иммунологический способ, основанный на выявлении антител к вирусу, описанный в статье [Li Z. et al. Development and Clinical Application of A Rapid IgM-IgG Combined Antibody Test for SARS-CoV-2 Infection Diagnosis // Journal of Medical Virology. - 2020.]. Способ обладает высокой специфичностью, но синтез антител в организме отстает от размножения вирусов, что часто не позволяет своевременно выявить заболевание. Другим надежным способом выявления вируса является способ секвенирования нового поколения (next generation sequencing, NGS), описанный в статье [Nasir J. A. et al. Rapid Design of a Bait Capture Platform for Culture-and Amplification-Free Next-Generation Sequencing of SARS-CoV-2. - 2020.]. Способ надежен, но приборы для его осуществления недостаточно распространены, что в условиях эпидемии делает его малоприменимым. Наиболее распространенным и удобным способом лабораторной диагностики COVID-19 является выявление кДНК вируса SARS-CoV-2 при помощи набора синтетических олигонуклеотидных праймеров и реакции ПЦР в реальном времени. Этот способ рекомендован центром по контролю и профилактике заболеваний США (CDC) и представлен на их сайте [https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html]. Именно его мы выбрали в качестве прототипа.
Способ предусматривает, что предварительно из образца биоматериала выделена тотальная РНК одним из рекомендованных наборов реактивов. Затем, с помощью рекомендованных китов, осуществляется синтез первой цепи кДНК методом обратной транскрипции. Непосредственное выявление кДНК вируса SARS-CoV-2 проводят с использованием набора синтетических праймеров и флуоресцентных зондов в реакции ПЦР в реальном времени. Способ позволяет быстро, в течение часа-полутора получить результат. При осуществлении способа ставятся положительный и отрицательный контроли, что позволяет снизить вероятность получения ложноположительного и ложноотрицательного результатов.
Способ заключается в следующем. Используют набор синтетических олигонуклеотидных праймеров и зондов следующего состава, указанного в Табл. 1.
Праймеры гомологичны трем локусам гена N вируса SARS-CoV-2, а также гену рибонуклеазы человека. Меченые зонды служат для регистрации реакции TaqMan ПЦР в реальном времени. Ставят пробы, в число которых входят исследуемый образец, отрицательный контроль (без наличия ДНК), положительный контроль (содержащий кДНК вируса) с ожидаемым значением порогового цикла. С пробами проводят реакцию ПЦР в реальном времени. О наличии вируса SARS-CoV-2 в исследуемой пробе судят по следующим критериям. Кривая амплификации с праймерами на рибонуклеазу человека в исследуемой пробе и положительном контроле должна пересекать пороговую линию до 35-го цикла, все отрицательные контроли со всеми праймерами не должны пересекать пороговую линию, положительный контроль и исследуемая проба с праймерами на гены вируса должны пересекать пороговую линию на ожидаемом цикле.
Этот способ быстрый (до 2-х часов) и производителен. Однако, на наш взгляд, обладает рядом недостатков. Праймеры на целевую молекулы сконструированы на один ген. Из-за склонности вируса к мутированию это может угрожать надежности способа. Размеры ампликонов в прототипе 71 п.н., 66 п.н. и 71 п.н. Их размер не дает возможности различать их по подвижности во время электрофореза в 1-1,5% агарозном геле. Впрочем, метод ПЦР в реальном времени, для которого был осуществлен дизайн праймеров и не рассчитан на определения размеров ПЦР-продукта. Он предназначен для определения числа копий целевой молекулы. Но для цели качественного выявления вируса в биологическом материале использование прибора для проведения ПЦР в реальном времени нам представляется избыточным. Достаточно более распространенных и менее требовательных простых термоциклеров. В условиях пандемии это может стать важным для масштабных анализов при лечебных и карантинных мероприятиях.
Задача нашего изобретения - сделать способ более доступным и точным. Поставленная цель достигается тем, что мы предлагаем использовать синтетические олигонуклеотидные праймеры следующих последовательностей:
SEQ ID NO: 1-5' cagtctgtaccgtctgcgg 3',
SEQ ID NO: 2-5' cagtactagtgcctgtgccg 3'
SEQ ID NO: 3-5' ggtggaccctcagattcaactgg 3',
SEQ ID NO: 4-5' ttttaccgtcaccaccacgaa 3'
SEQ ID NO: 5-5' cgcattggcatggaagtcac 3',
SEQ ID NO: 6-5' tgtctctgcggtaaggcttg 3'.
Мы подобрали праймеры таким образом, чтобы реакция ПЦР могла быть осуществлена в простом термоциклере, а результат мог оценивается при проведении электрофоретического разделения ампликонов. Размер полученных ампликонов (158 п.н., 250 п.н. и 203 п.н.) дает четкие, хорошо различаемые по подвижности полосы на электрофореграмме, позволяет легко осуществлять фотодокументацию результатов. Размеры ампликонов позволяют надежно и специфично выявлять кДНК коронавируса SARS-CoV-2. Две пары праймеров (SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4), (SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6) отжигаются на гене N, а одна пара (SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2) - на гене orf1ab. Для контроля на качество исследуемого материала мы используем праймеры к гену GAPDH человека (прямой - 5'-AGATCCCTCCAAAATCAAGTGG-3', обратный - 5'-GGCAGAGATGATGACCCTTTT-3'), с длиной ампликона 130 п.н. Этот ген обладает высокой экспрессией и часто используется для нормализации результатов по определению уровней транскрипции.
Заявленный способ реализуется следующим образом. Материалом исследования служит кДНК, полученная предварительно из биологического материала пациента путем выделения тотальной РНК и проведения реакции обратной транскрипции известными наборами реактивов. Олигонуклеотидные праймеры подобраны таким образом, чтобы отжиг мог быть осуществлен при 60°С, два ампликона синтезировались на гене N, а один -на гене orf1ab, длина ПЦР-продуктов находилась в диапазоне 150-250 п.н. В результате мы подобрали следующие олигонуклеотидные праймеры (Табл. 2).
Каждый исследуемый образец кДНК амплифицируют с каждой из трех пар праймеров. Кроме того, каждый образец амплифицируют с парой праймеров на ген GAPDH человека для того, чтобы убедиться в корректном выделении РНК из биологического материала и проведении реакции обратной транскрипции. Это позволит избежать ложноотрицательного результата. К каждой паре праймеров ставят отрицательный контроль, без матрицы, для исключения ложноположительных результатов за счет контаминации реактивов. После проведения ПЦР образцы наносят в 1,5% агарозный гель и проводят электрофорез в присутствии бромистого этидия. Позитивный результат выявления кДНК вируса SARS-CoV-2 следует, если амплификация исследуемого образца кДНК с парами праймеров (SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2), (SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4), (SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6) приводит к синтезу ПЦР-продуктов длиной 158, 250 и 203 п.н. соответственно. При этом в пробах отрицательных контролей должны отсутствовать ПЦР-продукты этих размеров. Отрицательный результат выявления кДНК вируса SARS-CoV-2 следует, если амплификация исследуемого образца кДНК с парами праймеров (SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2), (SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4), (SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6) не приводит к синтезу ПЦР-продуктов длиной 158, 250 и 203 п.н. соответственно. При этом в пробе с праймерами на ген GAPDH человека должен амплифицироваться ПЦР-продукт соответствующей длины.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения способа.
Пример 1.
У больной П. из цельной крови была выделена тотальная РНК. После проведения реакции обратной транскрипции образец направлен для выявления кДНК вируса SARS-CoV-2. От момента завершения синтеза первой цепи кДНК до постановки реакции ПЦР образец хранили на льду.
Поставили полимеразную цепную реакцию в пробах следующего состава (Табл. 3).
Режим амплификации: 95°С - 5 мин, (95°С - 10 сек, 60°С - 30 сек) х 40, 72°С - 10 мин. После амплификации образцы в объеме 5 мкл нанесли в лунки 1,5% агарозного геля с бромидом этидия и провели электрофорез. Схема нанесения образцов в лунки геля приведена в таблице 4.
По окончании электрофореза гель поместили в трансиллюминатор и сфотографировали.
На электрофореграмме (Фиг. 1) мы наблюдали наличие ПЦР-продуктов соответствующих длин в лунках 1, 3, 5, 7. И одновременно отсутствие ПЦР-продуктов в лунках с отрицательным контролем - 2, 4, 6 и 8. На основании этого мы сделали вывод о наличии в организме П. коронавируса SARS-CoV-2. В дальнейшем на основании клинических и лабораторных показателей П. был поставлен диагноз COVID-19.
Пример 2. У пациента С. с симптомами ОРЗ и находящегося в карантине взят образец эпителия мазком из ротоглотки. Из биоматериала была выделена тотальная РНК. После проведения реакции обратной транскрипции образец направлен для выявления кДНК вируса SARS-CoV-2. Провели полимеразную цепную реакцию, электрофорез образцов и фотографирование геля, как описано в примере 1.
На электрофореграмме (Фиг. 2) мы не наблюдали амплификации фрагментов целевой молекулы. Тем не менее праймеры на ген GAPDH человека дали ПЦР-продукт соответствующей длины. Это значит, что процедуры выделения РНК из биоматериала и синтеза кДНК проведены корректно, но вируса SARS-CoV-2 в биоматериале не выявлено. Впоследствии С. был отпущен из карантина, у него на обнаружен COVID-19.
Таким образом, способ позволяет выявлять и идентифицировать наличие вируса SARS-CoV-2 в биологическом материале по наличию и длине ампликонов.
--->
Перечень последовательностей
| <110> | ДРОЗД Сергей Феликсович (DROZDS.F.), ПАВЛОВА Галина Валериевна (PAVLOVAG.V.), ГОЛОВИН Андрей Викторович (GOLOVINA.V.) |
| <120> | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции. |
| <160> | 6 |
| <210> | 1 |
| <211> | 19 |
| <212> | DNA |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <400> | 1 |
| cagtctgtaccgtctgcgg | |
| <210> | 2 |
| <211> | 20 |
| <212> | DNA |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <400> | 2 |
| cagtactagtgcctgtgccg | |
| <210> | 3 |
| <211> | 23 |
| <212> | DNA |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <400> | 3 |
| ggtggaccctcagattcaactgg | |
| <210> | 4 |
| <211> | 21 |
| <212> | DNA |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <400> | 4 |
| ttttaccgtcaccaccacgaa | |
| <210> | 5 |
| <211> | 20 |
| <212> | DNA |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <400> | 5 |
| cgcattggcatggaagtcac | |
| <210> | 6 |
| <211> | 20 |
| <212> | DNA |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <400> | 6 |
| tgtctctgcggtaaggcttg | |
<---
Claims (8)
- Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции, отличающийся тем, что праймеры имеют нуклеотидные последовательности:
- SEQ ID NO: 1-5' cagtctgtaccgtctgcgg 3',
- SEQ ID NO: 2-5' cagtactagtgcctgtgccg 3'
- SEQ ID NO: 3-5' ggtggaccctcagattcaactgg 3',
- SEQ ID NO: 4-5' ttttaccgtcaccaccacgaa 3'
- SEQ ID NO: 5-5' cgcattggcatggaagtcac 3',
- SEQ ID NO: 6-5' tgtctctgcggtaaggcttg 3',
- и гомологичны консервативным участкам генов orf1ab и N, а в результате проведения ПЦР амплифицируются фрагменты, соответствующие размерам 158 п.н., 250 п.н. и 203 п.н.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020116322A RU2727054C1 (ru) | 2020-04-24 | 2020-04-24 | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020116322A RU2727054C1 (ru) | 2020-04-24 | 2020-04-24 | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2727054C1 true RU2727054C1 (ru) | 2020-07-17 |
Family
ID=71616757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020116322A RU2727054C1 (ru) | 2020-04-24 | 2020-04-24 | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2727054C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111733295A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-10-02 | 广州领上源生物科技有限公司 | 用于检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒 |
| CN112111602A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-12-22 | 安徽微分基因科技有限公司 | 一种巢式等温扩增结合基因编辑检测covid-19病毒的试剂盒及方法 |
| RU2762759C1 (ru) * | 2021-06-30 | 2021-12-22 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Способ пробоподготовки образцов изолятов коронавируса SARS-CoV-2 и олигонуклеотидные праймеры для его реализации |
| WO2022029157A3 (en) * | 2020-08-06 | 2022-06-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compositions and methods for the detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-2), influenza a, and influenza b |
| RU2795939C2 (ru) * | 2022-08-12 | 2023-05-15 | Закрытое Акционерное Общество (ЗАО) "ЭКОлаб" | Набор реагентов для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 методом прямой полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2504585C1 (ru) * | 2012-10-22 | 2014-01-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") | Набор олигодезоксирибонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда для идентификации рнк коронавируса человека, ассоциированного с тяжелым острым респираторным синдромом |
| CN105018644B (zh) * | 2015-07-17 | 2018-05-29 | 江苏省疾病预防控制中心 | 一种呼吸道病原体检测试剂盒 |
| RU2670148C2 (ru) * | 2013-02-14 | 2018-10-18 | Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Колорадо | Способы прогнозирования риска интерстициальной пневмонии |
-
2020
- 2020-04-24 RU RU2020116322A patent/RU2727054C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2504585C1 (ru) * | 2012-10-22 | 2014-01-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") | Набор олигодезоксирибонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда для идентификации рнк коронавируса человека, ассоциированного с тяжелым острым респираторным синдромом |
| RU2670148C2 (ru) * | 2013-02-14 | 2018-10-18 | Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Колорадо | Способы прогнозирования риска интерстициальной пневмонии |
| CN105018644B (zh) * | 2015-07-17 | 2018-05-29 | 江苏省疾病预防控制中心 | 一种呼吸道病原体检测试剂盒 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111733295A (zh) * | 2020-07-31 | 2020-10-02 | 广州领上源生物科技有限公司 | 用于检测新型冠状病毒的引物组及试剂盒 |
| WO2022029157A3 (en) * | 2020-08-06 | 2022-06-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Compositions and methods for the detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-2), influenza a, and influenza b |
| CN112111602A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-12-22 | 安徽微分基因科技有限公司 | 一种巢式等温扩增结合基因编辑检测covid-19病毒的试剂盒及方法 |
| RU2762759C1 (ru) * | 2021-06-30 | 2021-12-22 | Федеральное бюджетное учреждение науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Способ пробоподготовки образцов изолятов коронавируса SARS-CoV-2 и олигонуклеотидные праймеры для его реализации |
| RU2795939C2 (ru) * | 2022-08-12 | 2023-05-15 | Закрытое Акционерное Общество (ЗАО) "ЭКОлаб" | Набор реагентов для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 методом прямой полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2727054C1 (ru) | Способ выявления кДНК коронавируса SARS-CoV-2 с помощью синтетических олигонуклеотидных праймеров в полимеразной цепной реакции | |
| US11149322B2 (en) | Methods and compositions for human papillomaviruses and sexually transmitted infections detection, identification and quantification | |
| CN115029459A (zh) | 一种基于CRISPR-Cas12a可视化检测多杀性巴氏杆菌的试剂盒及应用 | |
| CN101712973B (zh) | 常温核酸扩增链替换反应试剂及常温核酸扩增方法 | |
| CN111286559B (zh) | 检测非洲猪瘟病毒的引物、探针及试剂盒 | |
| CN114085929B (zh) | 一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和疫苗株的试剂盒 | |
| CN103484571A (zh) | 传染性皮下及造血组织坏死病毒的lamp检测引物组、检测试剂盒及检测方法 | |
| CN110760601B (zh) | 一种同时检测布鲁氏菌、流产衣原体和产气荚膜梭菌的引物组、试剂盒及应用 | |
| CN110607398B (zh) | 一种荧光可视化快速检测猪流行性腹泻病毒的rt-lamp试剂盒 | |
| CN109628640B (zh) | 一种快速检测鲤春病毒血症病毒的rpa-lfd引物、方法和试剂盒 | |
| CN116802322A (zh) | 检测牛呼吸系统疾病综合征相关病原体的测定工具、试剂盒和方法 | |
| CN109762910B (zh) | 一种用于同时检测两型包虫病的引物及试剂盒 | |
| CN104975077B (zh) | 猪源附红细胞体荧光定量pcr检测试剂盒及其应用 | |
| CN117844954A (zh) | 同时检测布鲁氏菌、流产衣原体和弓形虫的引物组及应用 | |
| CN101560573B (zh) | 一种检测牛腺病毒3型的荧光定量pcr试剂盒 | |
| CN103789430A (zh) | 一种快速检测血液中附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的试剂盒及应用 | |
| KR101768955B1 (ko) | 에볼라 바이러스 진단용 프라이머 세트 및 이의 용도 | |
| CN116814857A (zh) | 猫细小病毒及其试剂盒和荧光重组酶聚合酶扩增的方法 | |
| KR101617142B1 (ko) | 개선된 검출 정확성을 제공해 줄 수 있는 핵산검사 기반의 조류 인플루엔자 바이러스 검출 키트 | |
| RU2644233C2 (ru) | Способ экспресс-диагностики лейкоза крупного рогатого скота | |
| RU2795939C2 (ru) | Набор реагентов для выявления РНК вируса SARS-CoV-2 методом прямой полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2762759C1 (ru) | Способ пробоподготовки образцов изолятов коронавируса SARS-CoV-2 и олигонуклеотидные праймеры для его реализации | |
| RU2814548C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК возбудителя манхеймиоза (Mannheimia haemolytica) в биологическом материале животных и кормах с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2726432C1 (ru) | Тест-система для определения ДНК вируса нодулярного дерматита (LSDV) в биологическом материале животных методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле | |
| RU2700254C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК вируса ринотрахеита (bovine herpes virus 1, BoHV-1) у крупного рогатого скота |