RU2725135C1 - Hemoprotective agent - Google Patents
Hemoprotective agent Download PDFInfo
- Publication number
- RU2725135C1 RU2725135C1 RU2019137277A RU2019137277A RU2725135C1 RU 2725135 C1 RU2725135 C1 RU 2725135C1 RU 2019137277 A RU2019137277 A RU 2019137277A RU 2019137277 A RU2019137277 A RU 2019137277A RU 2725135 C1 RU2725135 C1 RU 2725135C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemoprotective
- cytostatic
- inhibitors
- agent
- bone marrow
- Prior art date
Links
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 14
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 abstract description 11
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 abstract description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 230000017128 negative regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 abstract 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 229940009100 aurothiomalate Drugs 0.000 description 8
- XJHSMFDIQHVMCY-UHFFFAOYSA-M aurothiomalic acid Chemical compound OC(=O)CC(S[Au])C(O)=O XJHSMFDIQHVMCY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000031146 intracellular signal transduction Effects 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 4
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 4
- SDHTXBWLVGWJFT-XKCURVIJSA-N oridonin Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@@]3(O)OC2 SDHTXBWLVGWJFT-XKCURVIJSA-N 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N UNPD107823 Natural products O1C2COP(O)(=O)OC2C(O)C1N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 229940095074 cyclic amp Drugs 0.000 description 3
- 230000000633 hematostimulatory effect Effects 0.000 description 3
- CAQAFLRZJHXSIS-UHFFFAOYSA-N oridonin Natural products CC1(C)C=CC(O)C23COC(O)(C(O)C12)C45C(O)C(CCC34)C(=C)C5=O CAQAFLRZJHXSIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 2
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 2
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 210000000267 erythroid cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003039 myelosuppressive effect Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- CLLFEJLEDNXZNR-UUOKFMHZSA-N (4ar,6r,7r,7as)-6-(6-amino-8-chloropurin-9-yl)-2-hydroxy-2-oxo-4a,6,7,7a-tetrahydro-4h-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-7-ol Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1Cl CLLFEJLEDNXZNR-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 101150018665 MAPK3 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000003474 anti-emetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002927 anti-mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940125683 antiemetic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002111 antiemetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000033366 cell cycle process Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009120 supportive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/242—Gold; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, гематологии и онкологии.The invention relates to medicine, specifically to pharmacology, hematology and oncology.
Высокая частота встречаемости миелосупрессивных состояний, развивающихся в результате химиотерапии опухолевых заболеваний [1], является основанием необходимости применения гемостимулирующих (используются после химиотерапии) и гемопротекторных (используются перед химиотерапией) средств в медицинской практике.The high frequency of occurrence of myelosuppressive conditions developing as a result of chemotherapy of tumor diseases [1] is the basis for the need for hemostimulating (used after chemotherapy) and hemoprotective (used before chemotherapy) drugs in medical practice.
Известны гемопротекторные средства [2-5].Known hemoprotective agents [2-5].
Недостатком данных средств является зачастую их низкая эффективность [5, 6].The disadvantage of these funds is often their low efficiency [5, 6].
Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала высокоэффективных гемопротекторных средств.The problem solved by the present invention is to expand the arsenal of highly effective hemoprotective agents.
Поставленная задача достигается применением ингибиторов транскрипционного фактора NF-кВ (ядерный фактор «каппа-би», nuclear factor kappaB, nuclear factor κ-light-chain-enhancer of activated В cells) в качестве гемопротекторного средства.The task is achieved by the use of inhibitors of the transcription factor NF-kV (nuclear factor "kappa-bi", nuclear factor kappaB, nuclear factor κ-light-chain-enhancer of activated B cells) as a hemoprotective agent.
Новым в предлагаемом изобретении является использование в качестве гемопротекторного средства ингибиторов NF-кB.New in the invention is the use of NF-kB inhibitors as a hemoprotective agent.
Химиотерапия представляет собой один из основных методов лечения онкологических заболеваний. Однако применение противоопухолевых средств зачастую приводит к развитию тяжелых побочных эффектов [1]. Мишенью цитостатических агентов являются, в первую очередь, митотически активные клеточные элементы. К данной категории, помимо опухолевых, относятся клетки здоровых тканей с высокой способностью к физиологическому клеточному обновлению, в том числе костный мозг [6].Chemotherapy is one of the main treatments for cancer. However, the use of anticancer agents often leads to the development of severe side effects [1]. The target of cytostatic agents are, first of all, mitotically active cellular elements. In addition to tumor cells, this category includes cells of healthy tissues with a high ability for physiological cell renewal, including bone marrow [6].
Одним из путей повышения безопасности химиотерапии является профилактика повреждающего действия цитостатических препаратов на здоровые ткани и органы [3]. Для предупреждения развития миелосупрессивных состояний используют гемопротекторы, вводимые в организм (в отличие от гемостимуляторов) перед проведением химиотерапии либо в промежутках между ее курсами (например, дикарбамин [1].One way to increase the safety of chemotherapy is to prevent the damaging effects of cytotoxic drugs on healthy tissues and organs [3]. To prevent the development of myelosuppressive conditions, hemoprotectors are introduced into the body (as opposed to haemostimulants) before chemotherapy or in the intervals between its courses (for example, dicarbamine [1].
Согласно современным представлениям, функционирование клеток осуществляется, в том числе посредством системы внутриклеточной сигнальной трансдукции. В связи с этим перспективной выглядит возможность разработки гемопротекторов в рамках «Стратегии фармакологической регуляции внутриклеточной сигнальной трансдукции в регенераторно-компетентных клетках» [7, 8], предполагающей использование в качестве мишеней воздействия отдельных звеньев внутриклеточной сигнальной трансдукции, ответственных за функционирование прогениторных клеток и элементов микроокружения тканей. Принципиальная возможность создания подобных средств для гематологии подтверждена экспериментально при использовании активаторов РКА в качестве средств гемопротекции [9]. Однако существующие на сегодняшний день активаторы РКА имеют ряд недостатков, не позволяющих их применять в клинике [10].According to modern concepts, the functioning of cells is carried out, including through the system of intracellular signal transduction. In this regard, the development of hemoprotectors within the framework of the “Strategy for the pharmacological regulation of intracellular signal transduction in regeneratively competent cells” [7, 8], which involves the use of individual units of intracellular signal transduction responsible for the functioning of progenitor cells and microenvironment elements as targets, looks promising. tissues. The fundamental possibility of creating such tools for hematology is confirmed experimentally by using RCA activators as hemoprotection agents [9]. However, the current RCA activators have a number of disadvantages that do not allow their use in the clinic [10].
В связи с этим целесообразным является поиск иных мишеней среди элементов внутриклеточной сигнальной трансдукции для таргетных гемопротекторов и гемостимуляторов.In this regard, it is advisable to search for other targets among the elements of intracellular signal transduction for targeted hemoprotectors and hemostimulators.
В настоящее время известны лишь общие представления о том, что процессы пролиферации и дифференцировки кроветворных клеток регулируются cAMP-, PI3K-и МАР-опосредованными сигнальными путями [7, 8]. Вместе с тем известно, что важную роль в регуляции функций различных клеточных элементов играет ядерный фактор транскрипции - NF-кВ (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells). Данная сигнальная молекула участвует в экспрессии более чем 400 генов, вовлеченных, в том числе в управление процессами клеточного цикла (пролиферация, дифференцировка), апоптоза, воспаления и иммунного ответа [11, 12]. Причем, считается, что NF-кВ обладает стимулирующими эффектами в отношении пролиферации и апоптоза клеток. Данные обстоятельства послужили основой разработки иммуносупрессирующих средств - ингибиторов NF-кВ (в том числе ауротиомалата) [11, 12], реализующих свои эффекты за счет антимитотической и апоптозиндуцирующей активностей [12]. Более того, известна способность ингибиторов NF-кВ нарушать процессы кроветворения и вызывать падение числа зрелых клеточных элементов в периферической крови за счет их антипролиферативного действия в отношении кроветворных клеток-предшественников костного мозга [13]. Данные эффекты были выявлены при введении ингибиторов NF-кВ вне курсов химиотерапии. В то же время известно, что участие и роль отдельных внутриклеточных сигнальных молекул в регуляции функций клеток во многом определяются особенностями воздействующих на них внешних факторов [14].At present, only general ideas are known that the proliferation and differentiation of hematopoietic cells are regulated by cAMP, PI3K, and MAP-mediated signaling pathways [7, 8]. At the same time, it is known that the nuclear factor transcription, NF-kB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells), plays an important role in the regulation of the functions of various cellular elements. This signaling molecule is involved in the expression of more than 400 genes involved, including in the control of cell cycle processes (proliferation, differentiation), apoptosis, inflammation, and the immune response [11, 12]. Moreover, it is believed that NF-KB has stimulating effects in relation to cell proliferation and apoptosis. These circumstances served as the basis for the development of immunosuppressive agents - NF-kV inhibitors (including aurothiomalate) [11, 12], which realize their effects due to antimitotic and apoptosis-inducing activities [12]. Moreover, the ability of NF-kV inhibitors to disrupt hematopoiesis and cause a decrease in the number of mature cellular elements in peripheral blood due to their antiproliferative effect against hematopoietic bone marrow progenitor cells is known [13]. These effects were identified with the introduction of NF-kV inhibitors outside of chemotherapy courses. At the same time, it is known that the participation and role of individual intracellular signaling molecules in the regulation of cell functions is largely determined by the characteristics of external factors acting on them [14].
Вместе с тем возможность стимуляции процессов кроветворения с помощью ингибиторов NF-кВ, в том числе при цитостатических воздействиях, не известна. Эксперимент показал непредсказуемые результаты.At the same time, the possibility of stimulating hematopoiesis processes using NF-kV inhibitors, including during cytostatic effects, is not known. The experiment showed unpredictable results.
Факт применения ингибиторов NF-кВ с достижением нового технического результата, заключающегося в гемопротекции, для специалиста является неочевидным.The fact of the use of NF-kV inhibitors with the achievement of a new technical result, consisting in hemoprotection, is not obvious for a specialist.
Новые свойства не вытекают явным образом из уровня техники в данной области и не обнаружены в патентной и научно-технической литературе.New properties do not follow explicitly from the prior art in this field and are not found in the patent and scientific literature.
Предлагаемое изобретение может быть использовано в медицине.The present invention can be used in medicine.
Исходя из вышеизложенного следует считать, что заявляемое техническое решение соответствует критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».Based on the foregoing, it should be considered that the claimed technical solution meets the criteria: "Novelty", "Inventive step", "Industrial applicability".
Эксперименты были проведены на 60 мышах линии С57В 1/6. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ.The experiments were conducted on 60 mice line C57B 1/6. Animals are obtained from the Department of Experimental Biological Models NIIIFiRM them. E.D. Goldberg Tomsk Scientific and Technical Center.
Исследования проводили в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), Приказом 199н от 15.08.2016 «Об утверждении Правил надлежащей лабораторной практики», ГОСТ 33044-2014 «Принципы надлежащей лабораторной практики» (2015), Федеральным Законом от 12 апреля 2010 г. №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств», «Методическими рекомендациями по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ» Руководства по проведению доклинических исследований новых лекарственных средств (2013) [15].The studies were carried out in accordance with the rules of laboratory practice (GLP), Order 199n dated 08/15/2016 "On approval of the Rules of Good Laboratory Practice", GOST 33044-2014 "Principles of Good Laboratory Practice" (2015), Federal Law of April 12, 2010 No. 61-ФЗ “On the circulation of drugs”, “Methodological recommendations for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances” of the Guidelines for preclinical studies of new drugs (2013) [15].
Пример 1Example 1
Эффективность гемопротекции оценивали на модели цитостатической миелосупрессии.The effectiveness of hemoprotection was evaluated on a model of cytostatic myelosuppression.
Цитостатическую миелосупрессию моделировали путем однократного внутрибрюшинного введения раствора 5-фторурацила (5-ФУ) (Фторурацил-ЛЭНС, «ЛЭНС-ФАРМ», Россия) в максимально переносимой дозе (МПД) - 228 мг/кг.Cytostatic myelosuppression was modeled by a single intraperitoneal injection of a solution of 5-fluorouracil (5-FU) (Fluorouracil-LENS, LENS-PHARM, Russia) at a maximum tolerated dose (MPD) of 228 mg / kg.
Мыши опытных групп однократно за 2 дня до введения цитостатика получали внутрибрюшинно ингибиторы NF-кВ: ауротиомалат («Calbiochem», США) в дозе 2 мг/кг, и оридонин («Calbiochem», США) в дозе 40 мкг/кг. Интактные животные получали растворитель в эквивалентном объеме (0,2 мл). Указанные дозы ингибиторов были эквимолярными и определены в качестве наиболее эффективных на основании данных предварительных экспериментов. Кроме того, в качестве контроля использовали группу мышей, получавших ауротиомалат однократно внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг без 5-ФУ.The mice of the experimental groups once 2 days before the administration of the cytostatic agent received intraperitoneal NF-kB inhibitors: auroothiomalate (Calbiochem, USA) at a dose of 2 mg / kg, and Oridonin (Calbiochem, USA) at a dose of 40 μg / kg. Intact animals received a solvent in an equivalent volume (0.2 ml). The indicated doses of the inhibitors were equimolar and determined as the most effective based on the data of preliminary experiments. In addition, a group of mice that received aurothiomalate once intraperitoneally at a dose of 2 mg / kg without 5-FU was used as a control.
На 4, 6, 8 и 12 сутки после введения цитостатика животных умерщвляли путем ингаляции СО2. У опытных и контрольных мышей стандартными методами определяли показатели периферической крови и костномозгового кроветворения. С помощью культуральных методов оценивали содержание коммитированных клеток-предшественников эритро- (КОЕ-Э) и гранулоцитопоэза (КОЕ-ГМ) в костном мозге [15].On days 4, 6, 8, and 12 after administration of the cytostatic, the animals were killed by inhalation of CO 2 . In experimental and control mice, the parameters of peripheral blood and bone marrow hematopoiesis were determined by standard methods. Using culture methods, the content of committed erythro- (CFU-E) and granulocytopoiesis (CFU-GM) precursor cells in the bone marrow was evaluated [15].
Статистическую обработку полученных данных проводили методом вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента. В случаях отклонения распределения вариант в выборках от нормального для оценки достоверности различий применяли непараметрический критерий Уилкоксона-Манна-Уитни.Statistical processing of the obtained data was carried out by the method of variation statistics using t-student criterion. In cases of deviation of the distribution, the option in the samples from normal to assess the significance of the differences, the non-parametric Wilcoxon-Mann-Whitney test was used.
Введение 5-ФУ проводило к закономерному [15] развитию миелосупрессии. Отмечалось падение содержания незрелых (4, 6, 8-е сут), зрелых (4-12-е сут) нейтрофильных гранулоцитов, эритроидных клеток (4-12-е сут), а также других морфологически распознаваемых в костном мозге (табл. 1).The introduction of 5-FU led to the natural [15] development of myelosuppression. There was a drop in the content of immature (4, 6, 8 days), mature (4-12 days) neutrophilic granulocytes, erythroid cells (4-12 days), as well as other morphologically recognizable in the bone marrow (Table 1 )
Отражением указанных изменений костномозгового кроветворения явилось снижение числа ретикулоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов в периферической крови практически на протяжении всего эксперимента (табл. 2).A reflection of these changes in bone marrow hematopoiesis was a decrease in the number of reticulocytes, neutrophils, lymphocytes and monocytes in peripheral blood almost throughout the entire experiment (Table 2).
В основе развития миелосупрессии лежало повреждающее действие цитостатического агента на кроветворные предшественники костного мозга [6, 15]. Имело место резкое падение числа КОЕ-Э и КОЕ-ГМ (табл. 3) При этом в дальнейшем отмечалась активация компенсаторной реакции [6] со стороны пула прекурсоров гемопоэза. Отмечалось увеличение числа КОЕ-Э и КОЕ-ГМ на 8-е сут опыта (табл. 3).The development of myelosuppression was based on the damaging effect of the cytostatic agent on hematopoietic bone marrow precursors [6, 15]. There was a sharp drop in the number of CFU-E and CFU-GM (Table 3). Furthermore, later on, activation of the compensatory reaction [6] from the pool of hematopoietic precursors was noted. An increase in the number of CFU-E and CFU-GM was noted on the 8th day of the experiment (Table 3).
Профилактическое введение обоих ингибиторов NF-кВ существенно корригировало изменения гемопоэза, вызываемые цитостатиком. Наблюдалось увеличение клеточности костного мозга. Имело место значительное возрастание содержания незрелых и зрелых нейтрофильных гранулоцитов, достигающее максимальных значений при применении ауротиомалата на 4 сут опыта: до 983,3% и 415,4% от цитостатического контроля соответственно. Кроме того, в костном мозге мышей, получавших как оридонин, так и ауротиомалат, наблюдалось увеличение числа эритроидных клеток до 1120% и 1280% от цитостатического контроля на 8 сутки опыта соответственно (табл. 1).The prophylactic administration of both NF-kV inhibitors significantly corrected the changes in hematopoiesis caused by the cytostatic agent. An increase in bone marrow cellularity was observed. There was a significant increase in the content of immature and mature neutrophilic granulocytes, reaching maximum values when using aurothiomalate on the 4th day of the experiment: up to 983.3% and 415.4% of the cytostatic control, respectively. In addition, an increase in the number of erythroid cells up to 1120% and 1280% of the cytostatic control on the 8th day of the experiment, respectively, was observed in the bone marrow of mice receiving both Oridonin and Aurothiomalate.
Коррекция нарушений гемопоэза приводило к закономерным изменениям клеточности периферической крови. При профилактическом введении оридонина и ауротиомалата на 8 сут опыта имело место повышение числа циркулирующих сегментоядерных нейтрофилов (до 1200% и 1400% от цитостатического контроля соответственно) и ретикулоцитов (до 191,8% и 235,7%) от цитостатического контроля соответственно). Кроме того, регистрировалось увеличение количества моноцитов в периферической крови (табл. 2).Correction of hematopoiesis disorders led to regular changes in the cellularity of peripheral blood. With the prophylactic administration of Oridonin and Aurothiomalate on the 8th day of the experiment, there was an increase in the number of circulating segmented neutrophils (up to 1200% and 1400% of the cytostatic control, respectively) and reticulocytes (up to 191.8% and 235.7%) of the cytostatic control, respectively). In addition, an increase in the number of monocytes in peripheral blood was recorded (Table 2).
В то же время введение ауротиомалата интактным животным приводило к подавлению всех ростков кроветворения с 4-х по 8-е сут эксперимента. Восстановление показателей костномозгового кроветворения отмечалось лишь к концу периода наблюдения (на 12 сут) (табл. 1). Отражением снижения интенсивности процессов костномозгового кроветворения интактных мышей после применения ауротиомалата явилось развитие нейропении (табл. 2), что полностью соответствовало сведениям литературы [13].At the same time, administration of aurothiomalate to intact animals led to the suppression of all blood-forming sprouts from the 4th to the 8th day of the experiment. The restoration of indicators of bone marrow hematopoiesis was noted only at the end of the observation period (by 12 days) (Table 1). A reflection of a decrease in the intensity of bone marrow hematopoiesis in intact mice after the use of auroothiomalate was the development of neuropenia (Table 2), which fully corresponded to the literature [13].
Исследование механизмов гемопротекторного действия ингибиторов NF-кB выявило зависимость формирования картины крови и костного мозга от состояния пула костномозговых родоначальных клеток. Профилактическое введение исследуемых веществ увеличивало содержание КОЕ-Э и КОЕ-ГМ в гемопоэтической ткани мышей, подвергшихся цитостатическому воздействию: на 4, 6-е и 4, 12-е сут опыта при использовании оридонина и ауротиомалата соответственно (табл. 3). Введение ауротиомалата интактным животным, напротив, уменьшало содержание кроветворных предшественников в костном мозге (табл. 3).The study of the mechanisms of hemoprotective action of NF-kB inhibitors revealed the dependence of the formation of blood and bone marrow patterns on the state of the pool of bone marrow progenitor cells. Prophylactic administration of the studied substances increased the content of CFU-E and CFU-GM in the hematopoietic tissue of mice subjected to cytostatic effects: on the 4th, 6th, and 4th, 12th day of the experiment using oridonine and aurothiomalate, respectively (Table 3). The administration of aurothiomalate to intact animals, on the contrary, reduced the content of hematopoietic precursors in the bone marrow (Table 3).
Полученные результаты свидетельствуют о наличии выраженных гемопротекторных свойств [15] у ингибиторов NF-кВ в условиях цитостатического воздействия. Механизмом действия данных модификаторов внутриклеточной сигнальной трансдукции являлось повышение функциональной активности родоначальных гемопоэтических клеток.The results obtained indicate the presence of pronounced hemoprotective properties [15] of NF-kV inhibitors under conditions of cytostatic exposure. The mechanism of action of these modifiers of intracellular signal transduction was an increase in the functional activity of the parent hematopoietic cells.
В целом, проведенные исследования свидетельствуют о высокой эффективности применения ингибиторов NF-кВ в качестве гемопротекторного средства при цитостатических воздействиях.In general, the conducted studies indicate the high efficiency of the use of NF-kV inhibitors as a hemoprotective agent for cytostatic effects.
Цитируемая литература:References cited:
1) Assessment of erythroid and granulocytic hematopoietic lineages in patients with non-small-cell lung carcinoma / T.Y. Polyakova [et al.] // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2017. T. 163. №4. C. 469-474.1) Assessment of erythroid and granulocytic hematopoietic lineages in patients with non-small-cell lung carcinoma / T.Y. Polyakova [et al.] // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2017. T. 163. No. 4. C. 469-474.
2) Моисеенко, B.M. Волков O.H. Симптоматическая терапия больных распространенным раком ободочной кишки / В.М. Моисеенко, О.Н. Волков // Практическая онкология. 2000. №1. С. 38-42.2) Moiseenko, B.M. Volkov O.H. Symptomatic therapy of patients with advanced colon cancer / V.M. Moiseenko, O.N. Volkov // Practical Oncology. 2000. No1. S. 38-42.
3) Птушкин, В.В. Профилактика осложнений химиотерапии / В.В. Птушкин // Русский медицинский журнал. 2004. Том 12. №11.3) Ptushkin, V.V. Prevention of complications of chemotherapy / V.V. Ptushkin // Russian Medical Journal. 2004. Volume 12. No. 11.
4) Симптоматическое лечение осложнений современной химиотерапии и текущего опухолевого процесса. Краткий обзор работ, посвященных теме преодоления неспецифических расстройств // Научно-информационный медицинский журнал. Весна. 2004. №1.4) Symptomatic treatment of complications of modern chemotherapy and the current tumor process. A brief review of the works devoted to the topic of overcoming nonspecific disorders // Scientific Information Medical Journal. Spring. 2004. No. 1.
5) Стенина, М.Б. Поддерживающая терапия при проведении современной химиотерапии (гемоцитокины и антиэметики) / М.Б. Стенина // Русский медицинский журнал. 1999. №10. С. 455-457.5) Stenina, M.B. Supportive therapy during modern chemotherapy (hemocytokines and antiemetics) / M.B. Stenina // Russian Medical Journal. 1999. No. 10. S. 455-457.
6) Механизмы протективного действия «дикарбамина» в отношении системы крови при цитостатическом воздействии / В.Е. Небольсин [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 150. №9. С. 312-316.6) Mechanisms of the protective effect of "dicarbamine" in relation to the blood system with cytostatic effects / V.E. Nebolsin [et al.] // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2010.V. 150. No. 9. S. 312-316.
7) Participation of Pi3k, Марк Erk1/2 and P38 in the realization of growth potential of mesenchymal precursor cells under in vitro conditions / G.N. Zyuzkov [et al.] // Bulletin Of Experimental Biology And Medicine. 2014. T. 156. №4. C. 556-559.7) Participation of Pi3k, Mark Erk1 / 2 and P38 in the realization of growth potential of mesenchymal precursor cells under in vitro conditions / G.N. Zyuzkov [et al.] // Bulletin Of Experimental Biology And Medicine. 2014. T. 156. No. 4. C. 556-559.
8) PI3K, МАРК EPK1/2 and P38 are involved in the realization of growth potential of mesenchymal progenitor cells under the infl uence of basic fibroblast growth factor / G.N. Zyuzkov [et al.] // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2014. T. 157. №4. C. 436-439.8) PI3K, MAPK EPK1 / 2 and P38 are involved in the implementation of growth potential of mesenchymal progenitor cells under the influence of basic fibroblast growth factor / G.N. Zyuzkov [et al.] // Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2014. T. 157. No. 4. C. 436-439.
9) Патент (RU) на изобретение №2696586 «Гемопротекторное средство» (опубл. 05.08.2019, Бюл. №22). Авторы: Зюзьков Т.Н., Удут Е.В., Мирошниченко Л.А., Полякова Т.Ю., Ставрова А.А., Симанина Е.В., Жданов В.В.9) Patent (RU) for the invention No. 2696586 "Hemoprotective agent" (publ. 05.08.2019, Bull. No. 22). Authors: Zyuz'kov T.N., Udut E.V., Miroshnichenko L.A., Polyakova T.Yu., Stavrova A.A., Simanina E.V., Zhdanov V.V.
10) Propper, D.J. Phase I Study of the Novel Cyclic AMP (cAMP) Analogue 8-Chloro-cAMP in Patients with Cancer: Toxicity, Hormonal, and Immunological Effects / Propper D.J., Saunders M.P., Salisbury A.J. e.a. // Clin. Cancer Res. 1999. Vol. 5. P. 1682-1689.10) Propper, D.J. Phase I Study of the Novel Cyclic AMP (cAMP) Analogue 8-Chloro-cAMP in Patients with Cancer: Toxicity, Hormonal, and Immunological Effects / Propper D.J., Saunders M.P., Salisbury A.J. e.a. // Clin. Cancer Res. 1999. Vol. 5. P. 1682-1689.
11) Герштейн, Е.С. Ключевые компоненты NF-кВ-сигнального пути в опухолях больных раком молочной железы / Е.С. Герштейн, A.M. Щербаков, Е.В. Ошкина, Н.Е. Кушлинский, Н.А. Огнерубов // Вестник ТГУ. 2013. Т. 18, вып. 6. С. 3292-97.11) Gerstein, E.S. Key components of the NF-kB signaling pathway in tumors of patients with breast cancer / E.S. Gerstein, A.M. Shcherbakov, E.V. Oshkina, N.E. Kushlinsky, N.A. Ognerubov // Bulletin of TSU. 2013.Vol. 18, no. 6, p. 3292-97.
12) Клаан, Н.К. Ядерный фактор каппа В (NF-кВ) в качестве мишени для действия природных противоопухолевых соединений / Н.К. Клаан, Т.А. Пронина, Л.П. Акиньшина, В.В. Решетникова // Российский биотерапевтический журнал. 2014. №1, Т. 13. С. 3-8.12) Klaan, N.K. Nuclear factor Kappa B (NF-kV) as a target for the action of natural antitumor compounds / N.K. Klaan, T.A. Pronina, L.P. Akinshina, V.V. Reshetnikova // Russian Biotherapeutic Journal. 2014. No. 1, T. 13. S. 3-8.
13) Howell, A. Depression of bone marrow colony formation in gold-induced neutropenia / Howell A., Gumpel J.M., Watts R.W. // Br Med J. 1975. №1(5955). C. 432-34.13) Howell, A. Depression of bone marrow colony formation in gold-induced neutropenia / Howell A., Gumpel J.M., Watts R.W. // Br Med J. 1975. No. 1 (5955). C. 432-34.
14) Зюзьков, Г.Н. Участие цАМФ/РКА-опосредованных сигнальных путей в реализации функций регенераторно-компетентных клеток нервной ткани при этанолиндуцированной нейродегенерации / Зюзьков Г.Н., Мирошниченко Л.А., Полякова Т.Ю., Ставрова Л.А., Ошанина Е.В., Агафонов В.И., Жданов В.В. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2019. Т. 167, №6. С. 677-681.14) Zyuzkov, G.N. The participation of cAMP / PKA-mediated signaling pathways in the implementation of the functions of regeneratively competent cells of the nervous tissue during ethanol-induced neurodegeneration / Zyuzkov G.N., Miroshnichenko L.A., Polyakova T.Yu., Stavrova L.A., Oshanina E.V. , Agafonov V.I., Zhdanov V.V. // Bulletin of experimental biology and medicine. 2019.Vol. 167, No. 6. S. 677-681.
15) Методические рекомендации по изучению гемостимулирующей активности фармакологических веществ Руководство по проведению доклинических исследований новых лекарственных средств. Часть первая Под ред. А.Н. Миронова / A.M. Дыгай [и др.]. М.: Гриф и К, 2013. С. 759-766.15) Guidelines for the study of hemostimulating activity of pharmacological substances. Guidelines for preclinical studies of new drugs. Part One Ed. A.N. Mironova / A.M. Digay [et al.]. M .: Grif and K, 2013.S. 759-766.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019137277A RU2725135C1 (en) | 2019-11-19 | 2019-11-19 | Hemoprotective agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019137277A RU2725135C1 (en) | 2019-11-19 | 2019-11-19 | Hemoprotective agent |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2725135C1 true RU2725135C1 (en) | 2020-06-30 |
Family
ID=71510216
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019137277A RU2725135C1 (en) | 2019-11-19 | 2019-11-19 | Hemoprotective agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2725135C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4599436A (en) * | 1983-03-28 | 1986-07-08 | Canadian Patents And Development Limited | Forms of aurothiomalate having therapeutic advantage |
| WO2009067245A2 (en) * | 2007-11-20 | 2009-05-28 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for tissue repair |
| RU2473560C2 (en) * | 2005-11-02 | 2013-01-27 | Дьюк Юниверсити | Combined chemotherapy and immunotherapy |
-
2019
- 2019-11-19 RU RU2019137277A patent/RU2725135C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4599436A (en) * | 1983-03-28 | 1986-07-08 | Canadian Patents And Development Limited | Forms of aurothiomalate having therapeutic advantage |
| RU2473560C2 (en) * | 2005-11-02 | 2013-01-27 | Дьюк Юниверсити | Combined chemotherapy and immunotherapy |
| WO2009067245A2 (en) * | 2007-11-20 | 2009-05-28 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Compositions and methods for tissue repair |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| CAO Y. et al. Oridonin stabilizes retinoic acid receptor alpha through ROS-activated NF-kB signaling. BMC Cancer. 2015 Apr 10; 15:248 Реферат [он лайн] [найдено 11.02.2020] (найдено из интернет:www.ncbi.nlm/nih.gov/pubmed/25886043). * |
| QING K. et al. Synergistic effect of oridonin and a PI3K/mTOR inhibitor on the non-germinal center B-cell-like subtype of diffuse large B cell lymphoma. J. Hematol. Oncol. 2016 Aug 23; 9(1): 72. Реферат, фиг.1. * |
| QING K. et al. Synergistic effect of oridonin and a PI3K/mTOR inhibitor on the non-germinal center B-cell-like subtype of diffuse large B cell lymphoma. J. Hematol. Oncol. 2016 Aug 23; 9(1): 72. Реферат, фиг.1. ZHANG W. et al. Homoharringtonine synergy with oridonin in treatment of t(8; 21) acute myeloid leukemia. Front Med. 2019 Jun; 13(3): 388-397, реферат, раздел Introduction, fig.6. CAO Y. et al. Oridonin stabilizes retinoic acid receptor alpha through ROS-activated NF-kB signaling. BMC Cancer. 2015 Apr 10; 15:248 Реферат [он лайн] [найдено 11.02.2020] (найдено из интернет:www.ncbi.nlm/nih.gov/pubmed/25886043). * |
| ZHANG W. et al. Homoharringtonine synergy with oridonin in treatment of t(8; 21) acute myeloid leukemia. Front Med. 2019 Jun; 13(3): 388-397, реферат, раздел Introduction, fig.6. * |
| БЫЧКОВ М.Б. и др. Окончательные результаты кооперированных исследований препарата дикарбамин в качестве гематопротектора при комбинированной химиотерапии онкологических больных. Вопросы онкологии. 2009 N5 с.627-633, реферат. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU764807B2 (en) | Use of L-carnitine and its alkanoyl derivatives in the preparation of medicaments with anticancer activity | |
| Swenson et al. | Intravenous lidocaine is as effective as epidural bupivacaine in reducing ileus duration, hospital stay, and pain after open colon resection: a randomized clinical trial | |
| US20130022609A1 (en) | Method of treating androgen independent prostate cancer | |
| CN102083430A (en) | Antitumor effects of cannabinoid compositions | |
| RU2455002C2 (en) | Composition containing oridonin and applicable for treating resistant malignant tumours | |
| KR100424503B1 (en) | Metastasis suppressory agents | |
| JP2005504799A (en) | Protopanaxadiol and protopanaxatriol and their use as synergistic anticancer agents | |
| JP2018517759A (en) | Compositions and uses comprising carboplatin | |
| CN116726021B (en) | Combined medicine of DRP1 inhibitor and iron death inducer and anti-tumor application thereof | |
| CN107375258B (en) | Anti-tumor combined medicine and application thereof in preparing anti-cancer medicine | |
| EA007474B1 (en) | Induction method for cell differentiation | |
| RU2725135C1 (en) | Hemoprotective agent | |
| HK1223844A1 (en) | Method for the management of cancer and treatment of cancer comorbidities | |
| JP2021535163A (en) | Treatment of neuroblastoma with taurolidine hydrolyzate | |
| RU2485956C2 (en) | New composition for treating side effects of anti-cancer therapy | |
| US20090131391A1 (en) | Inhibitor for differentiation of hematopoietic precursor cells | |
| JP6489517B2 (en) | Differentiation-promoting agents and brain tumor therapeutic agents for cancer stem cells | |
| RU2696586C1 (en) | Hemoprotective agent | |
| CN102283839A (en) | Application of sanguinarine for preparing sensitization drugs for improving cisplatin anti-tumour effect | |
| Cai et al. | Study on the mechanism of Dexmedetomidine’s effect on postoperative cognitive dysfunction in elderly people | |
| Zhang et al. | [Retracted] Effects of Sevoflurane on Apoptosis of Myocardial Cells in IRI Rats | |
| CN113456643B (en) | Pharmaceutical composition containing plinabulin and application thereof | |
| CN116271057A (en) | A combined pharmaceutical composition for preventing or treating follicular lymphoma and its application | |
| WO2023280238A1 (en) | Use of pharmaceutical composition comprising chlorogenic acid in preparation of drug for treating early alzheimer's disease | |
| RU2500435C1 (en) | Method of treating patients suffering lung cancer |