RU2721947C1 - Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе - Google Patents
Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2721947C1 RU2721947C1 RU2019127166A RU2019127166A RU2721947C1 RU 2721947 C1 RU2721947 C1 RU 2721947C1 RU 2019127166 A RU2019127166 A RU 2019127166A RU 2019127166 A RU2019127166 A RU 2019127166A RU 2721947 C1 RU2721947 C1 RU 2721947C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- area
- myeloma
- cadherin
- renal
- patients
- Prior art date
Links
- 230000004044 response Effects 0.000 title claims abstract description 48
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001446 anti-myeloma Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims abstract description 27
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 2
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 10
- 206010073599 Myeloma cast nephropathy Diseases 0.000 description 9
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 8
- 238000011862 kidney biopsy Methods 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 7
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 6
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 5
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 5
- GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N bortezomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)B(O)O)NC(=O)C=1N=CC=NC=1)C1=CC=CC=C1 GXJABQQUPOEUTA-RDJZCZTQSA-N 0.000 description 5
- 229960001467 bortezomib Drugs 0.000 description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 5
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 5
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 5
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 4
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 3
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 3
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 3
- XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L water blue Chemical compound CC1=CC(/C(\C(C=C2)=CC=C2NC(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=C(\C=C2)/C=C/C\2=N\C(C=C2)=CC=C2S([O-])(=O)=O)=CC(S(O)(=O)=O)=C1N.[Na+].[Na+] XOSXWYQMOYSSKB-LDKJGXKFSA-L 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 2
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 2
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002784 sclerotic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003658 Atrial Fibrillation Diseases 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 206010009192 Circulatory collapse Diseases 0.000 description 1
- 101100532699 Drosophila melanogaster scyl gene Proteins 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 241000500121 Mirax Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030302 Oliguria Diseases 0.000 description 1
- 208000002774 Paraproteinemias Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000006842 hematologic response Effects 0.000 description 1
- 238000010820 immunofluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000007491 morphometric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 230000004942 nuclear accumulation Effects 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008756 pathogenetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000000512 proximal kidney tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000012959 renal replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 206010040560 shock Diseases 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, а именно к прогнозированию почечного ответа на противомиеломную терапию при миеломной каст-нефропатии с острым почечным повреждением с потребностью в диализе. Прогнозирование проводят путем исследования биоптатов пораженной почки, при этом осуществляют окрашивание не менее двух биоптатов пораженной почки, один из которых окрашивают по Массону, другой иммуногистохимически, исследуя с антителом к Е-кадгерину, после чего количественный анализ морфологических изменений в биоптатах пораженных почек проводят методом компьютерной морфометрии, определяют площадь интерстиция, площадь фиброза интерстиция и площадь экспрессии Е-кадгерина, затем рассчитывают индекс фиброза интерстиция (ФИ) как отношение площади ФИ к площади интерстиция ×100, в %, и индекс площади экспрессии Е-кадгерина как отношение площади экспрессии Е-кадгерина к площади интерстиция ×100, %. При значении индекса площади экспрессии Е-кадгерина менее 10% в сочетании со значением индекса площади фиброза интерстиция более 40% прогнозируют отсутствие почечного ответа на эффективную противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе. Изобретение обеспечивает высокую достоверность прогноза почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе. 4 ил., 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию при миеломной каст-нефропатии с острым почечным повреждением (ОПП) с потребностью в диализе.
У 13% пациентов множественной миеломой (ММ) развивается ОПП с потребностью в диализе, обусловленное миеломной каст-нефропатией [Knudsen LM, Nielsen В, Gimsing Р, Geisler С. Autologous stem cell transplantation in multiple myeloma: outcome in patients with renal failure. Eur J Haematol 2005; 75:27-33]. Стандартом лечения в подобных ситуациях являются трехкомпонентные бортезомибсодержащие программы с высокими дозами дексаметазона, обеспечивающие достижение гематологического ответа у 71% пациентов. Однако, несмотря на высокую частоту общего гематологического ответа, почечный ответ при диализзависимой почечной недостаточности не превышает 30-38% [Рехтина И.Г., Менделеева Л.П., Варламова Е.Ю., Бирюкова Л.С. Сравнение эффективности бортезомибсодержащих программ в достижении раннего гематологического и почечного ответа у больных миеломной нефропатией с диализзависимой почечной недостаточностью. Гематол. и трансфузиол., 2015, 4:4-7]. С целью повышения эффективности терапии ОПП предпринимались попытки сочетания химиотерапии с экстракорпоральной элиминацией легких цепей. Однако, несмотря на раннее начало терапии и быструю редукцию моноклональных легких цепей функция почек улучшается только у 33-66% пациентов. А у части пациентов почечная недостаточность необратима, несмотря на самые эффективные методы лечения. Важно отметить, что интенсивные протоколы терапии у пациентов с тяжелыми ОПП, сопряжены с частыми и тяжелыми инфекционными осложнениями, приводящими к высокой ранней летальности. В этой связи возникает вопрос об оправданности столь интенсивного лечения у всех пациентов, так как у части из них имеются необратимые изменения в почках.
Несмотря на то, что морфологические изменения в почках при миеломной каст-нефропатии хорошо изучены, критерии необратимости почечной недостаточности не известны. Сложность решения этой проблемы обусловлена рядом причин. Во-первых, почечный ответ зависит от гематологического ответа на химиотерапию, которая существенно изменилась с появлением таргетных препаратов. Во-вторых, стандартным подходом к оценке изменений в почках остается полуколичественный анализ, основанный на приблизительной (визуальной) оценке. Некоторые исследователи неблагоприятным фактором считают распространенный интерстициальный фиброз и тубулярную атрофию, другие - количество белковых цилиндров (30 и более в 10 полях зрения) в просветах канальцев [
L, Thierry A, Debiais-Delpech С, Chevret S, Javaugue V, Desport E, et al. Prognostic value of kidney biopsy in myeloma cast nephropathy: a retrospective study of 70 patients. Nephrol Dial Transpl. 2015; 0:1-9]. При этом остается не ясным, что следует относить к распространенному фиброзу интерстиция. По принятой полуколичественной градации, вторая степень включает диапазон от 25% до 50% от площади интерстиция, а 3-я - более 50%. Таким образом, имеющиеся данные противоречивы, их прогностическое значение не изучалось.
Одним из ключевых патогенетических механизмов формирования интерстициального фиброза и тубулярной атрофии является эпителиально-мезенхимальная трансформация (ЭМТ) эпителия проксимальных канальцев. В предыдущих исследованиях показана выраженность и значимость этого процесса при миеломной каст-нефропатии [Hertig A, Bormard G, Ulinski Т, Colombat М, Jouanneau С, Baugey Е, et al. Tubular nuclear accumulation of Snail and epithelial phenotypic changes in human myeloma cast nephropathy. Hum. Pathol. 2011. 42(8):1142-1148]. Однако данные о влиянии ЭМТ на возможность улучшения функции почек не изучались.
С применением цифровых технологий стала доступна методика компьютерной морфометрии, позволяющая провести точный количественный анализ патологических изменений в нефробиоптате. Однако компьютерная морфометрия нефробиоптатов пациентов миеломной каст-нефропатией с отдельной оценкой всех патологических изменений ранее не проводилась.
Таким образом, в настоящее время отсутствуют проспективные многоцентровые исследования прогноза почечного ответа на противомиеломную терапию у больных с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе. Существующие рекомендации в основном основаны на опыте отдельных исследователей. Наибольшую проблему представляют пациенты с тяжелым ОПП, так как именно у больных этой категории реже отмечается улучшение функции почек, выше ранняя летальность, короче общая выживаемость. Именно эта группа больных нуждается в разработке новых подходов к терапии, направленных на быстрое достижение максимального гематологического ответа, что возможно, позволит улучшить функцию почек у большинства пациентов.
Следовательно, выявление предикторов почечного ответа при ОПП с потребностью в диализе имеет большое практическое значение для разработки индивидуальных подходов к терапии, что позволило бы избежать неоправданного риска тяжелых осложнений.
Технический результат заключается в высокой достоверности прогноза почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе.
Технический результат достигается тем, что прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе проводят путем исследования биоптатов пораженной почки, при этом осуществляют окрашивание не менее двух биоптатов пораженной почки, один из которых окрашивают по Массону, другой иммуногистохимически, исследуя с антителом к Е-кадгерину, после чего количественный анализ морфологических изменений в биоптатах пораженных почек проводят методом компьютерной морфометрии, определяют площадь интерстиция, площадь фиброза интерстиция и площадь экспрессии Е-кадгерина, затем рассчитывают индекс фиброза интерстиция (ФИ), как отношение площади ФИ к площади интерстиция ×100, в % и индекс площади экспрессии Е-кадгерина, как отношение площади экспрессии Е-кадгерина к площади интерстиция ×100, % и при значении индекса площади экспрессии Е-кадгерина менее 10% в сочетании со значением индекса площади фиброза интерстиция более 40% прогнозируют отсутствие почечного ответа на эффективную противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе.
Прогностическую модель вероятности почечного ответа при миеломной каст-нефропатии с ОПП с потребностью в диализе ранее не разрабатывали.
Способ осуществляется следующим образом.
Стандартный протокол исследования биоптатов пораженных почек включает исследование не менее двух биоптатов пораженных почек. Полученные биоптаты фиксируют в формалине (10% раствор), далее производят проводку по спиртам восходящей концентрации и заключение в парафин. Затем готовят срезы с парафиновых блоков толщиной 3-4 мкм. Одни из которых окрашивают трихромом по Массону, а другие окрашивают иммуногистохимически, исследуя с антителами к Е-кадгерину (клон NCH-38). Методику иммуногистохимического исследования выполняют классическим способом. Срезы с парафиновых блоков, толщиной 3-4 мкм, монтируют на предметные стекла, покрытые поли-L-лизином. После этапа высушивания и депарафинизации проводят демаскировку антигенов методом высокотемпературного нагревания. С целью блокирования появления фонового окрашивания стекла промывают в проточном Tris-солевом буфере (рН 7) в течение 10 минут, снова промывают дистиллированной водой, не допуская подсыхания срезов. На этапе иммунного окрашивания на срезы наносят первичные антитела. Титр антител и время инкубации предварительно подбирают опытным путем индивидуально для каждого антитела. Для выявления связавшихся антител используют систему детекции на полимерной основе фирмы Leica в течение 30 мин. Далее срезы обрабатывают раствором диаминобензидина от 1 до 3 минут и промывают в дистиллированной воде. Перед заключением под покровное стекло срезы инкубируют последовательно в этаноле, затем в ксилоле. В завершении подготовленные препараты заключают под покровное стекло с использованием специальной бальзамической среды фирмы Leica. Для определения экспрессии белков просматривают корковое вещество нефробиоптатов при 100-кратном увеличении.
Количественный анализ морфологических изменений в биоптатах пораженных почек проводят методом компьютерной морфометрии. Методика состоит из нескольких этапов и подробно изложена в свободном для доступа файле [http://links.lww.com/TP/A493]. Используемый алгоритм количественной оценки площади ФИ и площади экспрессии Е-кадгерина основан на анализе цветного цифрового изображения, полученного при световой микроскопии, с помощью специальной оптической системы и программного обеспечения. Использовалась цветная камера Nikon DXM1200, установленная на Микроскоп Nikon Eclipse E1000 М (Nikon, Япония), сканер Zeiss Mirax Scan (Zeiss, Германия) с объективом 20, NA 0,8 и камерой CCD Marlin, для экспортирта оптического изображение в цифровой формат (tiff).
Методом количественного анализа определяют следующие показатели:
1. Площадь интерстиция, (ПИ)
2. Площадь фиброза интерстиция (ПФИ)
3. Площадь экспрессии Е-кадгерина (ПЭ Е-кадгерина)
4. Индекс фиброза интерстиция, %.
(Отношение площади ФИ к площади интерстиция ×100).
5. Индекс площади экспрессии Е-кадгерина, %
(Отношение площади экспрессии Е-кадгерина к площади интерстиция ×100).
Для этого расчет ПИ проводят путем цифровой обработки и компьютерного морфометрического анализа оптического изображения коркового вещества биоптата пораженной почки, окрашенных по Массону, при этом последовательно измеряют площадь коркового вещества почки (sКВ), а также составляющие его следующие структуры: площадь всех клубочков, в том числе склерозированных (sКлуб), площадь просвета канальцев (sПКан), площадь цилиндров, в том числе и патологических в просветах канальцев (sЦил), затем рассчитывают ПИ по формуле: ПИ=sКВ-(sКлуб+sПКан+sЦил).
Расчет ПФИ проводят путем вычисления площади фиброзной патологической ткани в интерстиции на всем протяжении коркового вещества биоптата почки, с помощью компьютерной морфометрии - автоматически выделяя пораженную зону, окрашенную анилиновым синим трихромом по Массону, (синий цвет) согласно заданному цветовому диапазону, после чего проводят автоматический подсчет площади всей выделенной области.
Расчет площади экспрессии Е-кадгерина проводят путем вычисления на всем протяжении коркового вещества биоптата почки зоны экспрессии антитела, с помощью компьютерной морфометрии - автоматически выделяя данную зону, окрашенную иммуногистохимически в коричневый цвет, согласно заданному цветовому диапазону, после чего проводят автоматический подсчет площади всей выделенной области.
На основании полученных данных осуществляют расчет индекса фиброза интерстиция, %, как отношение ПФИ к ПИ ×100 и индекса площади экспрессии Е-кадгерина, %, как отношение ПЭ Е-кадгерина к ПИ ×100.
В обследование было включено 25 пациентов с миеломной каст-нефропатией и ОПП с потребностью в диализе, у которых в результате индукционной химиотерапии был достигнут гематологический ответ. Диагноз миеломной каст-нефропатии был установлен на основании световой и иммунофлуоресцентной микроскопии биоптатов почек. У всех пациентов биопсия пораженных почек выполнялась до начала противомиеломной терапии. Помимо основных показателей индекса фиброза интерстиция, % и индекса площади экспрессии Е-кадгерина, % было проведено исследование показателей числа склерозированных клубочков, %, (отношение числа склерозированных клубочков к общему числу клубочков ×100); числа белковых цилиндров в 1 поле зрения (отношение числа белковых цилиндров во всех полях зрения к числу полей зрения); индекса площади клеточной воспалительной инфильтрации, % (отношение площади клеточной инфильтрации к площади интерстиция ×100); индекса площади экспрессии виментина, % (отношение площади экспрессии виментина к площади интерстиция ×100); индекса площади экспрессии альфа-гладкомышечного актина, % (отношение площади экспрессии альфа-гладкомышечного актина к площади интерстиция ×100). Медиана времени от диагностики ОПП до выполнения биопсии почки составила 14 дней (0-73). Из 25 пациентов у 17 был достигнут почечный ответ (независимость от гемодиализа), у 8 - почечный ответ отсутствовал. Методом компьютерной морфометрии был проведен количественный анализ патологических изменений в биоптате почки. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Из всех анализируемых параметров статистически значимые различия были выявлены по индексам площади экспрессии Е-кадгерина и площади ФИ.
Для определения значимости показателя ФИ, определяемого методом компьютерной морфометрии, в качестве прогностического маркера вероятности почечного ответа был проведен ROC-анализ (см. фиг 1). Полученная кривая позволяет сделать вывод о том, что количественный показатель ФИ обладает хорошей надежностью прогноза почечного ответа, с учетом значения площади под кривой. Таким образом, данный диагностический признак может быть использован в прогностической оценке.
На фиг. 1 показана ROC-кривая прогноза почечного ответа по индексу фиброза интерстиция. ФИ - фиброз интерстиция. Значения над ROC-кривой - оценка вероятности почечного ответа, соответствующая выбранному порогу ФИ. Показатель площади под кривой (0,79) указывает на достоверность прогноза почечного ответа по значениям ФИ.
Методом ROC-анализа доказана также высокая надежность (p<0,05) распространенности экспрессии Е-кадгерина в прогнозировании почечного ответа (см фиг. 2). На фиг. 2 показана ROC-кривая прогноза почечного ответа по индексу площади экспрессии Е-кадгерина в нефробиоптате. Показатель площади под кривой равен 0,75 (существенно выше чем 0,5), что указывает на хорошую надежность прогноза почечного ответа по численным значениям экспрессии Е-кадгерина. Числовые значения над ROC-кривой - оценка вероятности почечного ответа, соответствующая выбранному порогу экспрессии Е-кадгерина.
Корреляционный анализ не выявил статистически значимой связи между индексами площади экспрессии Е-кадгерина и ФИ (Rs=-0,335, р=0,065).
При объединении этих двух наиболее значимых факторов площадь под ROC-кривой увеличилась до 0,84 (у каждого признака в отдельности было 0,79 и 0,75), что говорит об увеличении точности прогноза почечного ответа или его отсутствия (см. фиг. 3). На фиг. 3 показана ROC-кривая прогноза почечного ответа по двум морфометрическим параметрам (индексу площади фиброза интерстиция и индексу площади экспрессии Е-кадгерина). Показатель площади под кривой равен 0,84 (существенно выше чем 0,5), что указывает на очень хорошую надежность прогноза почечного ответа по численным значениям площади фиброза интерстиция и экспрессии Е-кадгерина. Числовые значения над ROC-кривой -оценка вероятности почечного ответа, соответствующая выбранному порогу измерений.
Далее с помощью метода двумерного дискриминантного анализа была разработана прогностическая модель для двух признаков: площади ФИ и экспрессии Е-кадгерина. Определены их пороговые значения - для индекса площади Е-кадгерина менее 10%, для индекса площади ФИ более 40%. На основании чего создано логическое правило (новый комплексный признак), которое определяет неблагоприятную группу по почечному ответу среди всех пациентов: почечного ответ не достигается с вероятностью 93,3%, если индекс площади Е-кадгерина менее 10% и индекс площади ФИ более 40% (отношение шансов (OR)=24.5).
На фиг. 4 показана модель прогнозирования почечного ответа у больных миеломной каст-нефропатией с ОПП с потребностью в диализе. Характеристика этого правила. Если пациент отнесен в неблагоприятную группу, то его вероятность отсутствия почечного ответа на эффективную противомиеломную терапию в 24 раза больше, чем у пациента, отнесенного к благоприятной группе. Из пациентов, которые по индексам площади экспрессии Е-кадгерина и ФИ оказались в неблагоприятной группе, только в 6,67% (1 из 14 человек) был получен почечный ответ в результате противомиеломной терапии.
Площадь экспрессии эпителиального маркера Е-кадгерина менее 10% в сочетании с площадью фиброза интерстиция более 40% от площади интерстиция - прогностические факторы отсутствия почечного ответа при эффективности противомиеломной терапии у больных миеломной каст-нефропатией с острым почечным повреждением с потребностью в диализе.
Примеры осуществления способа
Пример 1.
Пациент П., 70 лет. Множественная миелома у данного пациента дебютировала с развития острого почечного повреждения (креатинин крови 960 мкмоль/л, олигурия 300 мл/сут, СКФ <5 мл/мин), в связи с чем, пациенту был начат экстренный гемодиализ. С диагностической целью выполнена биопсия почек, по результатам которой выявлена миеломная каст-нефропатия. Клинический диагноз: Множественная миелома, протекающая с парапротеинемией B-J-каппа, III стадия по R-ISS. Миеломная каст-нефропатия. Острое почечное повреждение стадия L (по классификации RIFLE); Сопутствующее заболевание: Ишемическая болезнь сердца: постинфарктный кардиосклероз. Пароксизмальная форма мерцательной аритмии. Недостаточность кровообращения ПА стадии. При полуколичественном морфологическом исследовании степень выраженности ФИ была определена как II степень. Было проведено исследование биоптатов пораженных почек путем световой микроскопии, окрашенных анилиновым синим трихромом по Массону и иммуногистохимического окрашивания и исследования с антителами к Е-кадгерину описанного выше. Количественный анализ морфологических изменений в биоптатах пораженных почек методом компьютерной морфометрии показал следующее: площадь интерстиция (ПИ), мкм=3832391,6; площадь фиброза интерстиция (ПФИ), мкм=1366241,8. Отсюда индекс фиброза интерстиция, % равен 1366241,8/3832391,6×100=35,6%.
Площадь интерстиция, (ПИ), мкм=3832391,6; площадь экспрессии Е-кадгерина (ПЭ Е-кадгерина), мкм=552235,2. При этом индекс площади экспрессии Е-кадгерина составил 552235,2/3832391,6×100=14,4%.
С учетом представленной нами модели пациент относится к благоприятной группе почечного ответа на противомиеломную терапию. Нами проведено лечение по стандартной 3-х компонентной схеме XT (бортезомиб, циклофосфамид, дексаметазон), без редукции доз препаратов. Лечение осложнилось развитием двусторонней пневмонии, рецидивирующим нарушением ритма. В результате терапии после 2-х курсов получен гематологический ответ. Через 1,5 месяца от начала лечения функция почек улучшилась, и удалось полностью отказаться от заместительной почечной терапии.
Таким образом, прогнозирование почечного ответа повлияло на выбор терапии. Восстановление функции почек и прекращение гемодиализа оправдывает выбор тактики интенсивной терапии, несмотря на развитие тяжелых осложнений у пациента пожилого возраста с тяжелой сопутствующей патологией.
Пример 2.
Пациентка М., 58 лет. На фоне развития тяжелого острого почечного повреждения (креатинин крови 1500 мкмоль/л, СКФ <5 мл/мин) был экстренно начат гемодиализ. С диагностической целью была выполнена биопсия пораженных почек, установлен диагноз миеломной каст-нефропатии. В последующем диагноз множественной миеломы был подтвержден. При морфологическом полуколичественном исследовании степень выраженности ФИ соответствовала 2 степени, т.е. неопределенному для прогноза обратимости почечного повреждения интервалу. Было проведено исследование биоптатов пораженных почек путем световой микроскопии, окрашенных анилиновым синим трихромом по Массону и иммуногистохимического окрашивания и исследования с антителами к Е-кадгерину описанного выше. Количественный анализ морфологических изменений в биоптатах почек методом компьютерной морфометрии показал следующее: площадь интерстиция (ПИ), мкм=2417793,8; площадь фиброза интерстиция (ПФИ), мкм=1308802,5. Отсюда индекс фиброза интерстиция, % равен 1308802,5/2417793,8×100=54,1%.
Площадь интерстиция, (ПИ), мкм=2417793,8; площадь экспрессии Е-кадгерина (ПЭ Е-кадгерина), мкм=213795,4. При этом индекс площади экспрессии Е-кадгерина составил 213795,4/2417793,8×100=8,8%.
На основании прогностической модели прогнозируют отсутствие почечного ответа на эффективную противомиеломную терапию, почечное повреждение необратимо даже при быстром и эффективном химиотерапевтическом воздействии.
Больной проведено 2 курса химиотерапии по стандартной бортезомибсодержащей программе (бортезомиб, циклофосфамид, дексаметазон), в результате чего был достигнут глубокий гематологический ответ (ОхЧР). Лечение осложнилось развитием двусторонней пневмонии, сепсисом, что потребовало перевода в отделение реанимации. Несмотря на быстрое достижение глубокого гематологического ответа, функция почек не улучшилась (и в дальнейшем тоже), на основании чего констатирована терминальная стадия хронической болезни почек с потребностью в гемодиализе.
Использование прогностической модели позволило установить крайне низкую вероятность почечного ответа. Более правильной тактикой в данном случае было бы проведение химиотерапии в менее интенсивном режиме, что позволило бы избежать развития жизнеугрожающих осложнений.
Claims (1)
- Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе проводят путем исследования биоптатов пораженной почки, при этом осуществляют окрашивание не менее двух биоптатов пораженной почки, один из которых окрашивают по Массону, другой иммуногистохимически, исследуя с антителом к Е-кадгерину, после чего количественный анализ морфологических изменений в биоптатах пораженных почек проводят методом компьютерной морфометрии, определяют площадь интерстиция, площадь фиброза интерстиция и площадь экспрессии Е-кадгерина, затем рассчитывают индекс фиброза интерстиция (ФИ) как отношение площади ФИ к площади интерстиция ×100, в %, и индекс площади экспрессии Е-кадгерина как отношение площади экспрессии Е-кадгерина к площади интерстиция ×100, %, и при значении индекса площади экспрессии Е-кадгерина менее 10% в сочетании со значением индекса площади фиброза интерстиция более 40% прогнозируют отсутствие почечного ответа на эффективную противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019127166A RU2721947C1 (ru) | 2019-08-29 | 2019-08-29 | Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе |
| EA202000150A EA202000150A1 (ru) | 2019-08-29 | 2020-06-02 | Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019127166A RU2721947C1 (ru) | 2019-08-29 | 2019-08-29 | Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2721947C1 true RU2721947C1 (ru) | 2020-05-25 |
Family
ID=70803233
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019127166A RU2721947C1 (ru) | 2019-08-29 | 2019-08-29 | Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA202000150A1 (ru) |
| RU (1) | RU2721947C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2596117B1 (en) * | 2010-07-23 | 2017-12-27 | President and Fellows of Harvard College | Methods of detecting kidney-associated diseases or conditions |
-
2019
- 2019-08-29 RU RU2019127166A patent/RU2721947C1/ru active
-
2020
- 2020-06-02 EA EA202000150A patent/EA202000150A1/ru unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2596117B1 (en) * | 2010-07-23 | 2017-12-27 | President and Fellows of Harvard College | Methods of detecting kidney-associated diseases or conditions |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| DIMOPOULOS M. A. et al. International Myeloma Working Group recommendations for the diagnosis and management of myeloma-related renal impairment //J Clin Oncol. - 2016. - Т. 34. - No. 13. - С. 1544-1557. * |
| DIMOPOULOS M. A. et al. International Myeloma Working Group recommendations for the diagnosis and management of myeloma-related renal impairment //J Clin Oncol. - 2016. - Т. 34. - No. 13. - С. 1544-1557. HERTIG A. et al. Tubular nuclear accumulation of snail and epithelial phenotypic changes in human myeloma cast nephropathy //Human pathology. - 2011. - Т. 42. - No. 8. - С. 1142-1148. * |
| HERTIG A. et al. Tubular nuclear accumulation of snail and epithelial phenotypic changes * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA202000150A1 (ru) | 2021-03-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Libbey et al. | Use of abdominal fat tissue aspirate in the diagnosis of systemic amyloidosis | |
| Smeets et al. | Detection of activated parietal epithelial cells on the glomerular tuft distinguishes early focal segmental glomerulosclerosis from minimal change disease | |
| Lee et al. | The search for a peripheral biopsy indicator of α-synuclein pathology for Parkinson disease | |
| Sethi et al. | Membranous nephropathy in syphilis is associated with neuron-derived neurotrophic factor | |
| Cohen et al. | The spectrum of kidney involvement in lymphoma: a case report and review of the literature | |
| Suzuki et al. | Labial salivary gland biopsy for diagnosing immunoglobulin light chain amyloidosis: a retrospective analysis | |
| Gibier et al. | Intratubular amyloid in light chain cast nephropathy is a risk factor for systemic light chain amyloidosis | |
| Abu Abed et al. | Immunofluorescence labelling of human and murine neutrophil extracellular traps in paraffin-embedded tissue | |
| JP6654432B2 (ja) | 生化学的血清マーカーおよび組織マーカーとしてのｂａｇ３ | |
| KR20180011725A (ko) | 간외 담관암, 간내 담관암, 또는 담낭암의 진단용 바이오 마커 | |
| JP7609413B2 (ja) | 腎組織の蛍光イメージングによる解析方法 | |
| RU2721947C1 (ru) | Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе | |
| JP2011149859A (ja) | 食道癌マーカー | |
| Gibier et al. | Paraffin Immunofluorescence Increases Light-Chain Detection in Extra-Renal Light Chain Amyloidosis and Other Light-Chain–Associated Diseases | |
| Patel et al. | Angiogenic effects of Type 2 diabetes on the dental pulp | |
| US20060263371A1 (en) | Prognostic indicator | |
| EA040417B1 (ru) | Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе | |
| CN112557664B (zh) | Cryab在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒 | |
| CN114774546B (zh) | 一种与人骨肉瘤相关的分子标记物trim22及其应用 | |
| CN110954701B (zh) | 一种肝纤维化或肝硬化的诊断试剂盒 | |
| CN103983687A (zh) | 人源hsf2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用 | |
| Deebajah et al. | GATA3 Is a Useful Immunohistochemical Marker to Differentiate Variants of Renal Tubular Lesions from Different Segments of Renal Tubules | |
| Khalaniia et al. | Pathomorphology of peripheral organs of immunogenesis in cats with spontaneous feline infectious peritonitis | |
| CN114774547B (zh) | 一种与人骨肉瘤相关的分子标记物usp13及其应用 | |
| Jovanović et al. | Light chain deposition disease |