RU2718671C1 - Method for reversing genetically determined inhibition of growth of a malignant tumor in experiment - Google Patents
Method for reversing genetically determined inhibition of growth of a malignant tumor in experiment Download PDFInfo
- Publication number
- RU2718671C1 RU2718671C1 RU2019124739A RU2019124739A RU2718671C1 RU 2718671 C1 RU2718671 C1 RU 2718671C1 RU 2019124739 A RU2019124739 A RU 2019124739A RU 2019124739 A RU2019124739 A RU 2019124739A RU 2718671 C1 RU2718671 C1 RU 2718671C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- melanoma
- mice
- growth
- c57bl
- tumor
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 27
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 title claims description 6
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 title 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 56
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims abstract description 33
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 claims description 17
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 claims description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 3
- 210000001991 scapula Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 29
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 9
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 8
- 102100031358 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 239000010437 gem Substances 0.000 description 8
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 8
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 6
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 4
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 3
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 3
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 3
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 2
- 208000007256 Nevus Diseases 0.000 description 2
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 2
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000003061 melanogenesis Effects 0.000 description 2
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000933 neural crest Anatomy 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 102200055464 rs113488022 Human genes 0.000 description 2
- 238000011012 sanitization Methods 0.000 description 2
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010027145 Melanocytic naevus Diseases 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004504 Urokinase Plasminogen Activator Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010042352 Urokinase Plasminogen Activator Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 208000006431 amelanotic melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 208000007047 blue nevus Diseases 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000000104 diagnostic biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 238000011773 genetically engineered mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000007773 growth pattern Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 206010024217 lentigo Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000005741 malignant process Effects 0.000 description 1
- 208000017226 melanocytic skin neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 102000009816 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040001269 urokinase plasminogen activator receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G09—EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
- G09B—EDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
- G09B23/00—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
- G09B23/28—Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Mathematical Analysis (AREA)
- Mathematical Physics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Algebra (AREA)
- Computational Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Mathematical Optimization (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Pure & Applied Mathematics (AREA)
- Business, Economics & Management (AREA)
- Educational Administration (AREA)
- Educational Technology (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии и может быть использовано для изучения патогенеза меланомы.The invention relates to medicine, namely to experimental oncology and can be used to study the pathogenesis of melanoma.
Модели генно-инженерных (GEM) мышей успешно применялись на протяжении десятилетий при моделировании рака человека (см. Frese K.K, Tuveson D.A. Maximizing mouse cancer models. Nat Rev Cancer. 2007; 7(9): 645-658). Мыши обеспечивают соответствующую платформу проспективных исследований для изучения конкретных гипотез и причинных ассоциаций при заболеваниях человека. Более того, постоянный прогресс в генной инженерии позволяет более точно контролировать пространственные и временные гены, улучшая способность повторять события в канцерогенезе и прогрессировании заболевания (см. Lewandoski М. Conditional control of gene expression in the mouse. Nat Rev Genet. 2001; 2(10): 743-755).Models of genetically engineered (GEM) mice have been successfully used for decades in modeling human cancer (see Frese K.K, Tuveson D.A. Maximizing mouse cancer models. Nat Rev Cancer. 2007; 7 (9): 645-658). Mice provide an appropriate platform for prospective studies to study specific hypotheses and causal associations in human diseases. Moreover, continuous progress in genetic engineering allows more precise control of spatial and temporal genes, improving the ability to repeat events in carcinogenesis and disease progression (see Lewandoski M. Conditional control of gene expression in the mouse. Nat Rev Genet. 2001; 2 (10 ): 743-755).
Известно, что меланома возникает в результате злокачественной трансформации меланоцитов, которые представляют собой специализированные пигмент-продуцирующие клетки, происходящие из развивающегося нервного гребня (см. Lin J.Y., Fisher D.E. Melanocyte biology and skin pigmentation. Nature. 2007; 445(7130): 843-850).Melanoma is known to result from the malignant transformation of melanocytes, which are specialized pigment-producing cells originating from a developing neural crest (see Lin JY, Fisher DE Melanocyte biology and skin pigmentation. Nature. 2007; 445 (7130): 843- 850).
У человека меланоциты преимущественно расположены в эпидермальном слое кожи, но также присутствуют в луковицах волосяного фолликула, глазах, внутреннем ухе, слизистых оболочках, центральной нервной системе и при более низкой плотности во многих внутренних органах (см. Dupin Е., Le Douarin N.M. Development of melanocyte precursors from the vertebrate neural crest. Oncogene. 2003; 22(20): 3016- 3023). Следовательно, меланома в основном развивается в коже, но может встречаться и в других местах.In humans, melanocytes are predominantly located in the epidermal layer of the skin, but are also present in the follicle bulbs, eyes, inner ear, mucous membranes, central nervous system and at a lower density in many internal organs (see Dupin E., Le Douarin NM Development of melanocyte precursors from the vertebrate neural crest. Oncogene. 2003; 22 (20): 3016-3023). Therefore, melanoma mainly develops in the skin, but can also occur in other places.
Этиология, гистопатология и генетические характеристики меланом очень разнообразны, что приводит к очень сложному и гетерогенному заболеванию.The etiology, histopathology and genetic characteristics of melanomas are very diverse, which leads to a very complex and heterogeneous disease.
Клинически меланома классифицируется в соответствии с характером ее роста (поверхностное распространение меланомы - лентиго), анатомическим расположением (кожная, слизистая или акральная меланома) или состоянием пигментации (меланотическая и амеланотическая меланома) (см. Bastian B.C. The molecular pathology of melanoma: an integrated taxonomy of melanocytic neoplasia. Annu Rev Pathol. 2014; 9: 239-271). Меланома может быть представлена несколькими из этих фенотипов; например, кожная меланома. Более того, последние достижения в геномном анализе позволяют классифицировать молекулярные подтипы меланомы, а их связь с патологическими признаками открывают новые возможности для диагностики (см. Cancer Genome Atlas, N. Genomic Classification of Cutaneous Melanoma. Cell. 2015; 161(7): 1681-1896). Мы сосредоточимся на кожной меланоме, так как это наиболее частый тип у людей.Clinically, melanoma is classified according to the nature of its growth (surface distribution of melanoma - lentigo), the anatomical location (skin, mucous, or acral melanoma) or the state of pigmentation (melanotic and amelanotic melanoma) (see Bastian BC The molecular pathology of melanoma: an integrated taxonomy of melanocytic neoplasia. Annu Rev Pathol. 2014; 9: 239-271). Melanoma can be represented by several of these phenotypes; for example, cutaneous melanoma. Moreover, recent advances in genomic analysis allow the classification of molecular subtypes of melanoma, and their association with pathological features opens up new diagnostic possibilities (see Cancer Genome Atlas, N. Genomic Classification of Cutaneous Melanoma. Cell. 2015; 161 (7): 1681 -1896). We will focus on cutaneous melanoma, as this is the most common type in humans.
Меланома кожи является самым смертоносным типом рака кожи и в последние несколько десятилетий его заболеваемость постоянно увеличивается (см. Siegel R.L., Miller K.D., Jemal A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 2015; 65(1): 5-29). Меланома может возникать из доброкачественного поражения, называемого невусом, с нерегулярной морфологией, пигментацией и характером роста.Skin melanoma is the deadliest type of skin cancer and its incidence has been steadily increasing over the past few decades (see Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 2015; 65 (1): 5-29) . Melanoma can arise from a benign lesion called nevus, with irregular morphology, pigmentation, and growth patterns.
На ранней стадии прогрессирования трансформированные меланоциты расширяются горизонтально в эпидермисе, приводя к фазе радиального роста меланомы. По мере продвижения к фазе вертикального роста клетки меланомы проникают в нижележащую дерму. На поздних стадиях клетки метастатической меланомы достигают сосудистых и лимфатических узлов, а затем распространяются в дистальные отделы (см. Miller A.J., Mihm М.С., Jr Melanoma. N Engl J Med. 2006; 355(1): 51-65). Метастатическая меланома по своей природе устойчива к большинству обычных химиотерапевтических средств и показатели выживаемости пациентов обычно низкие. Таким образом, определение ключевых элементов развития меланомы и их взаимодействия имеет решающее значение для разработки более эффективных стратегий профилактики и лечения.At an early stage of progression, transformed melanocytes expand horizontally in the epidermis, leading to a phase of radial growth of melanoma. As they move to the phase of vertical growth, melanoma cells penetrate the underlying dermis. In the later stages, metastatic melanoma cells reach the vascular and lymph nodes, and then spread to the distal sections (see Miller A.J., Mihm M.S., Jr Melanoma. N Engl J Med. 2006; 355 (1): 51-65). Metastatic melanoma is inherently resistant to most conventional chemotherapeutic agents and patient survival rates are usually low. Thus, identifying the key elements of melanoma development and their interaction is crucial for developing more effective prevention and treatment strategies.
В этом отношении моделирование необходимо для расшифровки системы, демонстрирующей высокую сложность, такой как рак, и для определения основных факторов, способствующих заболеванию. В общем, процесс моделирования состоит из пяти этапов: 1) определение вопроса для оценки и используемой системы; 2) определение задействованных критических переменных; 3) тестирование модели; 4) сравнение полученных и ожидаемых результатов; 5) корректировка системы для улучшения модели и подтверждения новой гипотезы (см. Thomas R.M., Van Dyke Т., Merlino G., Day C.P. Concepts in Cancer Modeling: A Brief History. Cancer Res. 2016; 76(20): 5921-5925).In this regard, modeling is necessary to decipher a system that demonstrates high complexity, such as cancer, and to identify the main factors contributing to the disease. In general, the modeling process consists of five stages: 1) determining the issue for evaluation and the system used; 2) determination of the critical variables involved; 3) model testing; 4) comparison of the obtained and expected results; 5) adjusting the system to improve the model and confirm the new hypothesis (see Thomas RM, Van Dyke T., Merlino G., Day CP Concepts in Cancer Modeling: A Brief History. Cancer Res. 2016; 76 (20): 5921-5925 )
Как только объем вопроса, нацеленного на исследование (например, этиология, патогенез или терапевтические ответы), будет установлен, соответствующие «движущие факторы» должны быть предположены и внедрены в модельную систему. Затем модель подвергается определенному маневру для проверки гипотезы, например, УФ-облучению, активации онкогена или терапевтическому лечению. Результаты должны быть сопоставлены с данными в человеческой популяции: эпидемиологическими, патогенетическими или геномными, чтобы оценить актуальность гипотезы. Неожиданные или непредсказуемые результаты предоставят информацию для определения новой комбинации движущих факторов для следующего цикла моделирования. В этом смысле GEM являются мощным инструментом для моделирования рака человека и сыграли особенно важную роль в нашем современном понимании меланомогенеза и прогрессирования.Once the scope of the research-focused question (eg, etiology, pathogenesis, or therapeutic responses) is established, the corresponding “driving factors” must be assumed and incorporated into the model system. The model then undergoes a certain maneuver to test a hypothesis, for example, UV radiation, activation of an oncogen, or therapeutic treatment. The results should be compared with data in the human population: epidemiological, pathogenetic or genomic in order to assess the relevance of the hypothesis. Unexpected or unpredictable results will provide information to determine a new combination of driving factors for the next modeling cycle. In this sense, GEMs are a powerful tool for modeling human cancer and have played a particularly important role in our current understanding of melanogenesis and progression.
Этапы развития предшественников меланоцитов у людей и мышей во многом похожи, что делает мышей пригодными для моделирования меланоцитарной патологии человека. Более того, современные технологии генной инженерии позволяют гибко контролировать множественные генетические аллели независимо друг от друга, что позволяет построить модель для проверки многофакторной гипотезы. Модели GEM были использованы для решения трех основных аспектов биологии меланомы: исходные события и мутации, необходимые для злокачественной трансформации, идентификация биомаркеров для диагностики и разработка новых и улучшение известных методов лечения. Современные технологии генной инженерии позволяют гибко контролировать множественные генетические аллели независимо друг от друга, что позволяет построить модель для проверки многофакторной гипотезы (см.
В частности, модели GEM могут быть использованы в диагностических и терапевтических исследованиях. Клинический исход меланомы сильно зависит от стадии заболевания на момент постановки диагноза. GEM помогут различить доброкачественные и злокачественные поражения и поражения с высоким риском развития метастазирования, что позволяет обнаруживать диагностические биомаркеры. Кроме того, меланома может возникать из нормальных меланоцитов без предраковой стадии. Например, до 80% меланом не имеют гистологических признаков ранее существовавших невусов.In particular, GEM models can be used in diagnostic and therapeutic studies. The clinical outcome of melanoma is highly dependent on the stage of the disease at the time of diagnosis. GEM will help to distinguish between benign and malignant lesions and lesions with a high risk of metastasis, which allows the detection of diagnostic biomarkers. In addition, melanoma can arise from normal melanocytes without a precancerous stage. For example, up to 80% of melanomas do not have histological signs of pre-existing nevi.
Исследования в моделях GEM могут дать представление и об этом наблюдении. GEM обеспечивают платформу для доклинического тестирования эффективности лекарств и идентификации биомаркеров с предсказательной реакцией и механизмов устойчивости. Хорошим примером является CreER T2, BRAF V600E модель мыши Pten flox/flox, которая внесла значительный вклад в лучшее понимание молекулярных механизмов устойчивости к ингибиторам BRAF V600E (см. Sullivan R.J., Flaherty K.Т. Resistance to BRAF-targeted therapy in melanoma. Eur J Cancer. 2013; 49(6): 1297-1304; см. Smith M.P., Sanchez-Laorden В., O'Brien K., Brunton H., Ferguson J., Young H., Dhomen N., Flaherty K.T., Frederick D.T., Cooper Z.A., Wargo J.A., Marais R., Wellbrock C. The immune microenvironment confers resistance to MAPK pathway inhibitors through macrophage-derived TNF alpha. Cancer Discov. 2014; 4(10): 1214-1229).Studies in GEM models can provide insight into this observation. GEM provides a platform for preclinical testing of drug efficacy and the identification of predictive response biomarkers and resistance mechanisms. A good example is the CreER T2, a BRAF V600E mouse model of Pten flox / flox, which has made a significant contribution to a better understanding of the molecular mechanisms of resistance to BRAF V600E inhibitors (see Sullivan RJ, Flaherty K. T. Resistance to BRAF-targeted therapy in melanoma. Eur J Cancer. 2013; 49 (6): 1297-1304; see Smith MP, Sanchez-Laorden B., O'Brien K., Brunton H., Ferguson J., Young H., Dhomen N., Flaherty KT, Frederick DT, Cooper ZA, Wargo JA, Marais R., Wellbrock C. The immune microenvironment confers resistance to MAPK pathway inhibitors through macrophage-derived TNF alpha. Cancer Discov. 2014; 4 (10): 1214-1229).
За последние два десятилетия мышиные модели сыграли жизненно важную роль в продвижении нашего понимания молекулярных основ процесса меланомагенеза. С учетом того, что в моделирование мышей внедряются все более изощренные молекулярные технологии и сравнительно недавний взрыв геномных данных, ведущий к выявлению более редких генов-драйверов, продвинувших наше понимание генеза, прогрессирования и метастазирования меланомы. Несколько основных направлений остаются недооцененными и недостаточно изученными.Over the past two decades, mouse models have played a vital role in promoting our understanding of the molecular basis of the melanogenesis process. Given that increasingly sophisticated molecular technologies and a relatively recent explosion of genomic data are being introduced into mouse modeling, the discovery of rarer driver genes that have advanced our understanding of the genesis, progression, and metastasis of melanoma. Several key areas remain underestimated and insufficiently studied.
Например, связь между старением и меланомой или молекулярными подтипами и гетерогенностью меланомы остается недостаточно изученной и может принести большую пользу от разработки соответствующих моделей. Будущие исследования на моделях GEM позволят определить, являются ли молекулярные механизмы инициации меланомы общими или различными между этими категориями. Исследования показали, что спектры ультрафиолета могут вызывать меланому у мышей HGF/SF-Tg по разным механизмам (см. Noonan F.P., Zaidi M.R., Wolnicka-Glubisz A., Anver M.R., Bahn J., Wielgus A., Cadet J., Douki Т., Mouret S., Tucker M.A., Popratiloff A., Merlino G., DeFabo E.C. Melanoma induction by ultraviolet A but not ultraviolet В radiation requires melanin pigment. Nat Commun. 2012; 3: 884). Такие результаты помогут установить связь между канцерогенными механизмами и гетерогенностью опухоли, облегчая анализ геномных данных по меланоме человека.For example, the relationship between aging and melanoma or the molecular subtypes and heterogeneity of melanoma remains poorly understood and can greatly benefit from the development of appropriate models. Future studies on GEM models will determine whether the molecular mechanisms of melanoma initiation are common or different between these categories. Studies have shown that ultraviolet spectra can cause melanoma in HGF / SF-Tg mice by different mechanisms (see Noonan FP, Zaidi MR, Wolnicka-Glubisz A., Anver MR, Bahn J., Wielgus A., Cadet J., Douki T., Mouret S., Tucker MA, Popratiloff A., Merlino G., DeFabo EC Melanoma induction by ultraviolet A but not ultraviolet B radiation requires melanin pigment. Nat Commun. 2012; 3: 884). Such results will help establish a link between carcinogenic mechanisms and tumor heterogeneity, facilitating the analysis of genomic data on human melanoma.
«Активатор плазминогена типа урокиназы» или просто «урокиназа» (uPA) является ключевой сериновой протеазой, участвующей в превращении неактивного плазминогена в активный плазмин, который, в свою очередь, функционирует в ряде событий канцерогенеза. Несколько исследований продемонстрировали участие системы uPA-uPAR на ранних стадиях образования опухоли. Например, прогрессирование меланомы было нарушено у мышей с дефицитом uPA (см. Shapiro R.L., Duquette J.G., Roses D.F., Nunes I., Harris M.N., Kamino H., et al. Induction of primary cutaneous melanocytic neoplasms in urokinase-type plasminogen activator (uPA)-deficient and wild-type mice: cellular blue nevi invade but do not progress to malignant melanoma in uPA-deficient animals. Cancer Res. 1996; 56(15): 3597-3604).An “urokinase-type plasminogen activator” or simply “urokinase” (uPA) is a key serine protease involved in the conversion of inactive plasminogen to active plasmin, which in turn functions in a number of carcinogenesis events. Several studies have demonstrated the involvement of the uPA-uPAR system in the early stages of tumor formation. For example, melanoma progression was impaired in uPA-deficient mice (see Shapiro RL, Duquette JG, Roses DF, Nunes I., Harris MN, Kamino H., et al. Induction of primary cutaneous melanocytic neoplasms in urokinase-type plasminogen activator ( uPA) -deficient and wild-type mice: cellular blue nevi invade but do not progress to malignant melanoma in uPA-deficient animals. Cancer Res. 1996; 56 (15): 3597-3604).
Установлено, что РНК-опосредованное ингибирование как uPA, так и uPAR одновременно запускает апоптоз в клетках рака молочной железы через активацию различных белков каспазы (см. Subramanian R., Gondi C.S., Lakka S.S., Jutla A., Rao J.S. siRNA-mediated simultaneous downregulation of uPA and its receptor inhibits angiogenesis and invasiveness triggering apoptosis in breast cancer cells. Int J Oncol. 2006; 28(4): 831-839.10.3892/ijo.28.4.831).It was found that RNA-mediated inhibition of both uPA and uPAR simultaneously triggers apoptosis in breast cancer cells through the activation of various caspase proteins (see Subramanian R., Gondi CS, Lakka SS, Jutla A., Rao JS siRNA-mediated simultaneous downregulation of uPA and its receptor inhibits angiogenesis and invasiveness triggering apoptosis in breast cancer cells. Int J Oncol. 2006; 28 (4): 831-839.10.3892 / ijo.28.4.831).
Было показано, что компоненты системы uPA могут увеличивать пролиферацию клеток посредством протеолитической активации различных типов факторов роста, таких как фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), EGF, фактор роста фибробластов-2 (FGF-2) и TGF-β, а также молекулы адгезии, такие как интегрины α5β1 (см. Aguirre-Ghiso J.A., Liu D., Mignatti A., Kovalski K., Ossowski L. Urokinase receptor and fibronectin regulate the ERKMAPK to p38MAPK activity ratios that determine carcinoma cell proliferation or dormancy in vivo. Mol Biol Cell. 2001; 12(4): 863-879.10.1091/mbc.12.4.863; см. Duffy M.J., McGowan P.M., Gallagher W.M. Cancer in vasion and metastasis: changing views. Journal of Pathology. 2008; 214(3): 283-293; см. Ulisse S., Baldini E., Sorrenti S., D'Armiento M. The urokinase plasminogen activator system: a target for anti-cancer therapy. Curr Cancer Drug Targets. 2009; 9(1): 32-71.10.2174/ 156800909787314002).It has been shown that components of the uPA system can increase cell proliferation by proteolytic activation of various types of growth factors, such as vascular endothelial growth factor (VEGF), EGF, fibroblast growth factor-2 (FGF-2) and TGF-β, as well as adhesion molecules such as α5β1 integrins (see Aguirre-Ghiso JA, Liu D., Mignatti A., Kovalski K., Ossowski L. Urokinase receptor and fibronectin regulate the ERKMAPK to p38 MAPK activity ratios that determine carcinoma cell proliferation or dormancy in vivo. Mol Biol Cell. 2001; 12 (4): 863-879.10.1091 / mbc. 12.4.863; see Duffy MJ, McGowan PM, Gallagher WM Cancer in vasion and metastasis: changing views. Journal of Pathology. 2008; 214 (3 ): 283-293; see Ulisse S., Baldini E., Sorrenti S., D'Armien to M. The urokinase plasminogen activator system: a target for anti-cancer therapy. Curr Cancer Drug Targets. 2009; 9 (1): 32-71.10.2174 / 156800909787314002).
Считается доказанным, что хроническая боль не симптом какого-то заболевания, а самостоятельная патология, требующая изучения и лечения (см. Яхно Н.Н., Кукушкин М.Л. Хроническая боль: медико-биологические и социально-экономические аспекты. Вестник РАМН. 2012; 9: 54-58). Боль снижает сопротивляемость организма к развитию злокачественных опухолей и является одним из самых постоянных симптомов у онкологических больных, при прогредиентном течении заболевания частота ее увеличивается (см. Кит О.И., Франциянц Е.М., Котиева И.М., Каплиева И.В., Трепитаки Л.К., Бандовкина В.А., Розенко Л.Я., Черярина Н.Д., Погорелова Ю.А. Некоторые механизмы повышения злокачественности меланомы на фоне хронической боли у самок мышей. Российский журнал боли. 2017; 2(53): 14-20; см. Leppert W., Zajaczkowska R., Wordliczek J., Dobrogowski J., Woron J., Krzakowski M. Pathophysiology and clinical characteristics of pain in most common locations in cancer patients. J. Physiology and Pharmacology. 2016; 67(6): 787-799).It is considered proven that chronic pain is not a symptom of a disease, but an independent pathology that requires study and treatment (see Yakhno N.N., Kukushkin M.L. Chronic pain: biomedical and socio-economic aspects. Vestnik RAMS. 2012; 9: 54-58). Pain reduces the body's resistance to the development of malignant tumors and is one of the most persistent symptoms in cancer patients, with a progressive course of the disease its frequency increases (see Kit O.I., Frantsiants E.M., Kotieva I.M., Kaplieva I. V., Trepitaki L.K., Bandovkina V.A., Rozenko L.Ya., Cheryarina ND, Pogorelova Yu.A. Some mechanisms for increasing the malignancy of melanoma against the background of chronic pain in female mice.Russian Journal of Pain. 2017 ; 2 (53): 14-20; see Leppert W., Zajaczkowska R., Wordliczek J., Dobrogowski J., Woron J., Krzakowski M. Pathophysiology and clinical charact eristics of pain in most common locations in cancer patients. J. Physiology and Pharmacology. 2016; 67 (6): 787-799).
Техническим результатом настоящего изобретения является разработка способа активации роста экспериментальной меланомы B16/F10 у мышей, нокаутированных по гену uPA.The technical result of the present invention is to develop a method of activating the growth of experimental melanoma B16 / F10 in mice knocked out by the uPA gene.
Поставленная цель достигается тем, что мышам линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu воспроизводят хроническую нейрогенную боль путем перевязки седалищных нервов с обеих сторон, через 2 недели подкожно под лопатку вводят суспензию опухолевых клеток мышиной меланомы B16/F10 в физиологическом растворе в объеме 0,5 мл и в разведении 1:10.This goal is achieved by the fact that mice of the C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice reproduce chronic neurogenic pain by ligation of the sciatic nerves on both sides, after 2 weeks, a suspension of tumor cells of murine B16 / F10 melanoma in physiological solution is injected subcutaneously in physiological saline in a volume of 0.5 ml and a dilution of 1:10.
Измененный генотип мышей способствует торможению злокачественного роста меланомы. Создание модели хронической нейрогенной боли за 2 недели до перевивки меланомы приводит к интенсификации злокачественного процесса. Сравнение двух вариантов медленного и быстрого роста меланомы позволяет выявить патогномоничные признаки, влияющие на развитие меланомы кожи.The altered genotype of mice inhibits the malignant growth of melanoma. The creation of a model of chronic neurogenic pain 2 weeks before the inoculation of melanoma leads to an intensification of the malignant process. A comparison of two options for the slow and rapid growth of melanoma allows us to identify pathognomonic signs that affect the development of skin melanoma.
Изобретение «Способ отмены генетически детерминированного ингибирования злокачественной опухоли в эксперименте» является новым, так как оно неизвестно в области экспериментальных исследований в онкологии о модификации роста меланомы B16/F10 у мышей.The invention, “A method for canceling genetically determined inhibition of a malignant tumor in an experiment,” is new, as it is unknown in the field of experimental studies in oncology about modification of growth of B16 / F10 melanoma in mice.
Новизна изобретения заключается в использовании мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu, в организме которых развитие меланомы B16/F10 идет по замедленному «сценарию», при ее стандартной подкожной перевивке. Воспроизведение модели хронической нейрогенной боли, предваряющее подкожную перевивку меланомы B16/F10, у мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu усиливает злокачественный потенциал меланомы - активизирует ее рост, отменяя генетически детерминированное замедление развития меланомы.The novelty of the invention lies in the use of C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice, in the body of which the development of B16 / F10 melanoma proceeds according to a delayed “scenario” with its standard subcutaneous inoculation. Reproduction of a model of chronic neurogenic pain preceding subcutaneous inoculation of B16 / F10 melanoma in C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice enhances the malignant potential of melanoma - activates its growth, reversing the genetically determined slowdown in melanoma development.
Изобретение «Способ отмены генетически детерминированного ингибирования злокачественной опухоли в эксперименте» является промышленно применимым, так как может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях онкологического профиля для воспроизведения экспериментальной модели интенсификации хронической нейрогенной болью замедленного роста меланомы кожи у мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu.The invention, “A method for canceling genetically determined inhibition of a malignant tumor in an experiment”, is industrially applicable, as it can be used in cancer research institutions to reproduce an experimental model of chronic neurogenic pain intensification of the delayed growth of skin melanoma in C57BL / 6-PlautmI.IBug mice -ThisPlau6FDhu / GFDhu.
Характеристика животных линии C57BL/6-Plautm1. 1BugThisPlauGFDhu/ GFDhu: окраска шерсти - черная, метод модификации - целевая мутация (нокаут) с получением белка (uPA), неспособного связываться с рецептором активатора плазминогена урокиназного типа. Животные-мутанты могут использоваться в исследованиях хронического воспаления ткани, механизмов фибринолиза, онкогенеза и роста сосудов в тканях.Characterization of animals line C57BL / 6-Plautm1. 1BugThisPlauGFDhu / GFDhu: the color of the coat is black, the modification method is the target mutation (knockout) to produce a protein (uPA) that is unable to bind to the urokinase-type plasminogen activator receptor. Mutant animals can be used in studies of chronic tissue inflammation, mechanisms of fibrinolysis, oncogenesis, and vascular growth in tissues.
«Способ отмены генетически детерминированного ингибирования злокачественной опухоли в эксперименте» выполняется следующим образом."The method of canceling genetically determined inhibition of a malignant tumor in the experiment" is as follows.
Разнополым мышам линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu предварительно создают модель хронической нейрогенной боли. Все манипуляции с животными производятся в боксе. Инструменты, посуду, руки дезинфицируют общепринятым способом. Каждому животному вводят ксила-золетиловый наркоз: за 10 минут до основного наркоза с целью премедикации животному внутримышечно вводят ксилазин (препарат Ксила) в дозе 0,05 мл/кг массы тела (по инструкции), затем - Золетил-50 в дозе 10 мг/100 г массы тела.C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice of different sexes have previously created a model of chronic neurogenic pain. All manipulations with animals are made in boxing. Tools, dishes, hands are sanitized in the usual way. Xylo-zoethyl anesthesia is administered to each animal: 10 minutes before the main anesthesia, xylazine (Xyla preparation) is administered intramuscularly to the animal in an dose of 0.05 ml / kg body weight (according to instructions), then Zoetil-50 at a dose of 10 mg / 100 g of body weight.
После наступления медикаментозного сна ассистент фиксирует мышь в положении на животе, удаляет шерсть сзади в районе проекции седалищных нервов и смазывает кожу 70% спиртом. Экспериментатор в стерильных условиях выделяет седалищный нерв, накладывает на него лигатуру, ушивает рану послойно и обрабатывает шов 5% спиртовым раствором йода.After the onset of drug sleep, the assistant fixes the mouse in a position on the abdomen, removes hair from behind in the area of the projection of the sciatic nerves and lubricates the skin with 70% alcohol. Under sterile conditions, the experimenter isolates the sciatic nerve, ligates it, sutures the wound in layers and processes the suture with 5% iodine alcohol solution.
Через 2 недели после заживления операционной раны подкожно под лопатку вводят взвесь меланомы B16/F10 в той же дозе и объеме, что и у мышей без боли. Контролем служат мыши линии C57BL/6 соответствующего пола с меланомой B16/F10, перевитой в той же дозе и объеме, как и у мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu, на фоне хронической нейрогенной боли.2 weeks after the healing of the wound, a suspension of B16 / F10 melanoma is injected subcutaneously under the scapula in the same dose and volume as in mice without pain. Controls are C57BL / 6 mice of the corresponding sex with B16 / F10 melanoma inoculated in the same dose and volume as in C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice against chronic neurogenic pain.
Объем опухолевого узла замеряли перед гибелью животных - через 3 или 4 недели.The volume of the tumor node was measured before the death of the animals after 3 or 4 weeks.
В таблице 1 представлены результаты изучения влияния хронической нейрогенной боли на злокачественный рост меланомы В16 у самцов и самок мышей с нормальным и измененным геномом.Table 1 presents the results of a study of the effect of chronic neurogenic pain on the malignant growth of B16 melanoma in male and female mice with a normal and altered genome.
Разнополым мышам линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu подкожно вводят 0,5 мл взвеси опухолевых клеток мышиной меланомы B16/F10 в физиологическом растворе в разведении 1:10. Для этого, соблюдая все условия асептики, описанные выше, ассистент фиксирует мышь спиной кверху, предварительно удалив шерсть и обработав кожу 5% спиртовым раствором йода чуть ниже правой лопатки. Экспериментатор рукой в стерильной перчатке захватывает кожную складку, в центре которой прокалывает кожу и вводит опухолевую взвесь. Затем извлекает иглу, место введения плотно прижимает ватным тампоном, смоченным в 70% спирте с небольшим добавлением йода, на 1 минуту, чтобы исключить вытекание вводимой взвеси. Контролем служат мыши линии C57BL/6 соответствующего пола с перевивкой меланомы B16/F10 в той же дозе и объеме, что и у мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu.C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice of the same sex were injected subcutaneously with 0.5 ml of suspension of tumor cells of murine B16 / F10 melanoma in physiological saline at a 1:10 dilution. To do this, observing all the aseptic conditions described above, the assistant fixes the mouse with its back upward, after removing the coat and treating the skin with 5% alcohol iodine solution just below the right shoulder blade. The experimenter with his hand in a sterile glove captures the skin fold, in the center of which pierces the skin and introduces a tumor suspension. Then it removes the needle, the injection site is tightly pressed with a cotton swab dipped in 70% alcohol with a small addition of iodine, for 1 minute, to prevent leakage of the introduced suspension. Controls are C57BL / 6 mice of the corresponding sex with grafting of B16 / F10 melanoma in the same dose and volume as in C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice.
Другой группе животных: разнополым мышам линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu предварительно создают модель хронической нейрогенной боли. Все манипуляции с животными производятся в боксе. Инструменты, посуду, руки дезинфицируют общепринятым способом. Каждому животному вводят ксила-золетиловый наркоз: за 10 минут до основного наркоза с целью премедикации животному внутримышечно вводят ксилазин (препарат Ксила) в дозе 0,05 мл/кг массы тела (по инструкции), затем - Золетил-50 в дозе 10 мг/100 г массы тела.Another group of animals: C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice of different sexes pre-create a model of chronic neurogenic pain. All manipulations with animals are made in boxing. Tools, dishes, hands are sanitized in the usual way. Xylo-zoethyl anesthesia is administered to each animal: 10 minutes before the main anesthesia, xylazine (Xyla preparation) is administered intramuscularly to the animal in an dose of 0.05 ml / kg body weight (according to instructions), then Zoetil-50 at a dose of 10 mg / 100 g of body weight.
После наступления медикаментозного сна ассистент фиксирует мышь в положении на животе, удаляет шерсть сзади в районе проекции седалищных нервов и смазывает кожу 70% спиртом. Экспериментатор в стерильных условиях выделяет седалищный нерв, накладывает на него лигатуру, ушивает рану послойно и обрабатывает шов 5% спиртовым раствором йода.After the onset of drug sleep, the assistant fixes the mouse in a position on the abdomen, removes hair from behind in the area of the projection of the sciatic nerves and lubricates the skin with 70% alcohol. Under sterile conditions, the experimenter isolates the sciatic nerve, ligates it, sutures the wound in layers and processes the suture with 5% iodine alcohol solution.
Через 2 недели после заживления операционной раны подкожно под лопатку вводят взвесь меланомы B16/F10 в той же дозе и объеме, что и у мышей без боли. Контролем служат мыши линии C57BL/6 соответствующего пола с меланомой B16/F10, перевитой в той же дозе и объеме, как и у мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu, на фоне хронической нейрогенной боли.2 weeks after the healing of the wound, a suspension of B16 / F10 melanoma is injected subcutaneously under the scapula in the same dose and volume as in mice without pain. Controls are C57BL / 6 mice of the corresponding sex with B16 / F10 melanoma inoculated in the same dose and volume as in C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu mice against chronic neurogenic pain.
Объем опухолевого узла замеряли перед гибелью животных - через 3 или 4 недели.The volume of the tumor node was measured before the death of the animals after 3 or 4 weeks.
Как видно из результатов, представленных в таблице 1, объем опухолевого узла у мышей линии C57BL/6 была практически одинаковой и у самцов, и у самок. Уменьшение объема опухоли под влиянием хронической нейрогенной боли у животных этой линии было связано с меньшей продолжительностью их жизни.As can be seen from the results presented in table 1, the volume of the tumor node in C57BL / 6 mice was almost the same in both males and females. The decrease in tumor volume under the influence of chronic neurogenic pain in animals of this line was associated with a shorter life span.
Объем опухолевого узла у мышей-нокаутов без хронической нейрогенной боли был меньше, чем у соответствующих животных линии C57BL/6: у самцов - в 1,97 раза, у самок - в 1,87 раза. Объем опухолевого узла у мышей-нокаутов с хронической нейрогенной болью был больше, чем у соответствующих животных линии C57BL/6 с хронической нейрогенной болью: у самцов - в 1,9 раза, у самок - в 3,8 раза. Объем опухолевого узла у мышей-нокаутов с хронической нейрогенной болью был больше, чем у животных линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu без хронической нейрогенной боли: у самцов - в 2,8 раза, у самок - в 9 раз.The volume of the tumor node in knockout mice without chronic neurogenic pain was less than in the corresponding animals of the C57BL / 6 line: in males - 1.97 times, in females - 1.87 times. The volume of the tumor node in knockout mice with chronic neurogenic pain was greater than in the corresponding animals of the C57BL / 6 line with chronic neurogenic pain: in males - 1.9 times, in females - 3.8 times. The volume of the tumor node in knockout mice with chronic neurogenic pain was greater than in animals of the C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu line without chronic neurogenic pain: in males - 2.8 times, in females - 9 times.
Очевидно, что хроническая нейрогенная боль стимулирует рост меланомы у мышей обоего пола линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu, т.е. отменяет генетически детерминированное замедление роста опухоли, вызванное нокаутом гена урокиназы.It is obvious that chronic neurogenic pain stimulates the growth of melanoma in mice of both sexes of the C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu line, i.e. cancels the genetically determined slowdown in tumor growth caused by urokinase gene knockout.
Технико-экономическая эффективность «Способа отмены генетически детерминированного ингибирования злокачественной опухоли в эксперименте» заключается в том, что предварительное перед перевивкой меланомы В16 создание у мышей линии C57BL/6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu/GFDhu хронической нейрогенной боли приводит к интенсификации роста меланомы, замедленного нокаутом по гену урокиназы. Это дает возможность изучать патогенез меланомы, что важно для клиники, а также проводить поиск мишеней для таргетной терапии меланомы. Способ экономичен, доступен.The technical and economic efficiency of the “Method of canceling genetically determined inhibition of a malignant tumor in an experiment” consists in the preliminary creation of chronic neurogenic pain in mice of the C57BL / 6-PlautmI.IBug-ThisPlau6FDhu / GFDhu line before the grafting of B16 melanoma. urokinase gene knockout. This makes it possible to study the pathogenesis of melanoma, which is important for the clinic, as well as to search for targets for targeted therapy of melanoma. The method is economical, affordable.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019124739A RU2718671C1 (en) | 2019-08-01 | 2019-08-01 | Method for reversing genetically determined inhibition of growth of a malignant tumor in experiment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019124739A RU2718671C1 (en) | 2019-08-01 | 2019-08-01 | Method for reversing genetically determined inhibition of growth of a malignant tumor in experiment |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2718671C1 true RU2718671C1 (en) | 2020-04-13 |
Family
ID=70277689
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019124739A RU2718671C1 (en) | 2019-08-01 | 2019-08-01 | Method for reversing genetically determined inhibition of growth of a malignant tumor in experiment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2718671C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2796892C1 (en) * | 2022-10-25 | 2023-05-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of the melanoma tumor nodes formation in the body of experimental animals |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650587C1 (en) * | 2017-04-26 | 2018-04-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of the melanoma b16 malignant growth in mice modification with chronic pain |
| US20190082664A1 (en) * | 2017-09-14 | 2019-03-21 | The Jackson Laboratory | Humanized mouse model for cancer metastasis |
-
2019
- 2019-08-01 RU RU2019124739A patent/RU2718671C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2650587C1 (en) * | 2017-04-26 | 2018-04-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of the melanoma b16 malignant growth in mice modification with chronic pain |
| US20190082664A1 (en) * | 2017-09-14 | 2019-03-21 | The Jackson Laboratory | Humanized mouse model for cancer metastasis |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Pérez-Guijarro E et al. Genetically engineered mouse models of melanoma, Cancer. 2017 Jun 1, 123, S11, 2089-2103. * |
| Кит О.И. и др. Динамика тканевой системы регуляторов плазминогена при меланоме кожи на фоне хронической боли у самок мышей, Известия высших учебных заведений, Северо-Кавказский регион, Естественные науки, Трансляционная медицина, 2018, т.5, 2, с.38-46. * |
| Кит О.И. и др. Динамика тканевой системы регуляторов плазминогена при меланоме кожи на фоне хронической боли у самок мышей, Известия высших учебных заведений, Северо-Кавказский регион, Естественные науки, Трансляционная медицина, 2018, т.5, 2, с.38-46. Pérez-Guijarro E et al. Genetically engineered mouse models of melanoma, Cancer. 2017 Jun 1, 123, S11, 2089-2103. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2796892C1 (en) * | 2022-10-25 | 2023-05-29 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method of the melanoma tumor nodes formation in the body of experimental animals |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Witte et al. | Lymphangiogenesis and lymphangiodysplasia: from molecular to clinical lymphology | |
| Dörr | Pathogenesis of normal tissue side effects | |
| Hilton et al. | Schwannomas and their pathogenesis | |
| Lungu et al. | In vivo imaging and characterization of hypoxia-induced neovascularization and tumor invasion | |
| Jakobiec | Conjunctival melanoma: unfinished business | |
| Schwartz et al. | Infantile haemangiomas: a challenge in paediatric dermatology | |
| Tam et al. | Latanoprost stimulates ocular lymphatic drainage: an in vivo nanotracer study | |
| Simonsen et al. | Intertumor heterogeneity in vascularity and invasiveness of artificial melanoma brain metastases | |
| Arceu et al. | Ultrasound morphologic features of steatocystoma multiplex with clinical correlation | |
| CN108721649A (en) | A kind of design, synthesis and the application of cancer target near-infrared fluorescent developer | |
| Hochman et al. | Skin cancer of the head and neck | |
| RU2718671C1 (en) | Method for reversing genetically determined inhibition of growth of a malignant tumor in experiment | |
| Arun D.. Singh et al. | Clinical ophthalmic oncology | |
| CN113350371A (en) | Research on inhibition effect of gas neuroprotective agent on NLRP3 inflammation corpuscle and application thereof | |
| Rütten | Adnexal tumors | |
| Lagziel et al. | Hemosiderotic dermatofibroma: a rare and atypical variant capable of clinically resembling melanoma | |
| Rennie | Things that go bump in the light. The differential diagnosis of posterior uveal melanomas | |
| JP2024505392A (en) | Treatment of brain metastases and CNS metastases with ildin or hydroxyureamethylacylfulvene | |
| Katowitz et al. | Benign pediatric orbital tumors | |
| Abraham et al. | Differential Diagnosis of Skin Nodules and Cysts | |
| Płatkowska et al. | Minimally Invasive Plasma Device Management of Multiple Benign Skin Cancers Associated with Rare Genodermatoses—Case Series and Review of the Therapeutic Methods | |
| Manjandavida et al. | Eyelid Tumors: The Entire Spectrum | |
| Oshita et al. | A Multicenter, Open-Label, Single-Arm Phase I Trial of Dual-Wield Parenchymal Transection: A New Technique of Liver Resection Using the Cavitron Ultrasonic Surgical Aspirator and Water-Jet Scalpel Simultaneously (HiSCO-14 Trial) | |
| Krema | Eyelid Tumors | |
| ROSSI et al. | Risk Factors |