RU2714257C2 - КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ В СТАБИЛЬНОМ СОСТОЯНИИ ОДНОЦЕПОЧЕЧНУЮ МОЛЕКУЛУ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, КОТОРАЯ ПОДАВЛЯЕТ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА TGF-β1 - Google Patents
КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ В СТАБИЛЬНОМ СОСТОЯНИИ ОДНОЦЕПОЧЕЧНУЮ МОЛЕКУЛУ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, КОТОРАЯ ПОДАВЛЯЕТ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА TGF-β1 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2714257C2 RU2714257C2 RU2018119672A RU2018119672A RU2714257C2 RU 2714257 C2 RU2714257 C2 RU 2714257C2 RU 2018119672 A RU2018119672 A RU 2018119672A RU 2018119672 A RU2018119672 A RU 2018119672A RU 2714257 C2 RU2714257 C2 RU 2714257C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- buffer
- test composition
- nucleic acid
- content
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 460
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 85
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 85
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 119
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 claims abstract description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 111
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 61
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 54
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 38
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 27
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 24
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 16
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 16
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 14
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 14
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 14
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 12
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 claims description 12
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 claims description 12
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 claims description 12
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 claims description 12
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 12
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 claims description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 claims description 3
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 3
- 125000001500 prolyl group Chemical class [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims 4
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 312
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 230
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 121
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 98
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 61
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 54
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 37
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 35
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 31
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 29
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 27
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 27
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 25
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 24
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 23
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 23
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 21
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 19
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 19
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 14
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 14
- 239000006171 Britton–Robinson buffer Substances 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 12
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 10
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 10
- 238000009517 secondary packaging Methods 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 8
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 8
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 229960002816 potassium chloride Drugs 0.000 description 6
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 6
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101500025614 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N triethylammonium acetate Chemical compound CC(O)=O.CCN(CC)CC AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 150000003147 proline derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O VLEIUWBSEKKKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 2
- -1 glucono-σ-lactone Chemical compound 0.000 description 2
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- KVMLCRQYXDYXDX-UHFFFAOYSA-M potassium;chloride;hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].[K+] KVMLCRQYXDYXDX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- IXGNPUSUVRTQGW-UHFFFAOYSA-M sodium;perchlorate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O IXGNPUSUVRTQGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 235000019263 trisodium citrate Nutrition 0.000 description 2
- OZDAOHVKBFBBMZ-DFWYDOINSA-N (2s)-2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- GJMPSRSMBJLKKB-UHFFFAOYSA-N 3-methylphenylacetic acid Chemical compound CC1=CC=CC(CC(O)=O)=C1 GJMPSRSMBJLKKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MOMKYJPSVWEWPM-UHFFFAOYSA-N 4-(chloromethyl)-2-(4-methylphenyl)-1,3-thiazole Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=NC(CCl)=CS1 MOMKYJPSVWEWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N Metaphosphoric acid Chemical compound OP(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000800132 Mus musculus Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N N-methylglucamine Chemical compound CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBBZMMPHUWSWHV-BDVNFPICSA-N 0.000 description 1
- GKKYVDHUZBHXGE-UHFFFAOYSA-N O.O.O.O.O.O.[Na].[Na] Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na].[Na] GKKYVDHUZBHXGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLINHMUFWFWBMU-UHFFFAOYSA-N Triisopropanolamine Chemical compound CC(O)CN(CC(C)O)CC(C)O SLINHMUFWFWBMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229960001040 ammonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000005388 borosilicate glass Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- NEEHYRZPVYRGPP-IYEMJOQQSA-L calcium gluconate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O NEEHYRZPVYRGPP-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- MDAVASCOAJMZHZ-UHFFFAOYSA-L calcium;2-hydroxypropanoate;hydrate Chemical compound O.[Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MDAVASCOAJMZHZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVTYICIALWPMFW-UHFFFAOYSA-N diisopropanolamine Chemical compound CC(O)CNCC(C)O LVTYICIALWPMFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043276 diisopropanolamine Drugs 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 239000002526 disodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000019262 disodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dodecahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O DGLRDKLJZLEJCY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(carboxymethyl)-2-hydroxybutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MQRJBSHKWOFOGF-UHFFFAOYSA-L disodium;carbonate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O MQRJBSHKWOFOGF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O PYLIXCKOHOHGKQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- RXMQCXCANMAVIO-CEOVSRFSSA-L magnesium;(2s)-2-amino-4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [H+].[H+].[Mg+2].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O.[O-]C(=O)[C@@H](N)CC([O-])=O RXMQCXCANMAVIO-CEOVSRFSSA-L 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 229960003194 meglumine Drugs 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 1
- VRVKOZSIJXBAJG-TYYBGVCCSA-M monosodium fumarate Chemical compound [Na+].OC(=O)\C=C\C([O-])=O VRVKOZSIJXBAJG-TYYBGVCCSA-M 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004109 potassium acetate Drugs 0.000 description 1
- GNHOJBNSNUXZQA-UHFFFAOYSA-J potassium aluminium sulfate dodecahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Al+3].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O GNHOJBNSNUXZQA-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000001508 potassium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960002635 potassium citrate Drugs 0.000 description 1
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011082 potassium citrates Nutrition 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BUCIWTBCUUHRHZ-UHFFFAOYSA-K potassium;disodium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[K+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O BUCIWTBCUUHRHZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940001593 sodium carbonate Drugs 0.000 description 1
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogenphosphate monohydrate Chemical compound O.[Na+].OP(O)([O-])=O BBMHARZCALWXSL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940083608 sodium hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000019983 sodium metaphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M sodium propionate Chemical compound [Na+].CCC([O-])=O JXKPEJDQGNYQSM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004324 sodium propionate Substances 0.000 description 1
- 235000010334 sodium propionate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003212 sodium propionate Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229940032330 sulfuric acid Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- WYXIGTJNYDDFFH-UHFFFAOYSA-Q triazanium;borate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]B([O-])[O-] WYXIGTJNYDDFFH-UHFFFAOYSA-Q 0.000 description 1
- 229940117957 triethanolamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000406 trisodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydroxy-[[phosphonatomethyl(phosphonomethyl)amino]methyl]phosphinate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)(=O)CN(CP(O)([O-])=O)CP([O-])([O-])=O SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960004418 trolamine Drugs 0.000 description 1
- 229960000281 trometamol Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, точнее к композиции стабилизированной молекулы одноцепочечной нуклеиновой кислоты, которая может быть использована в медицине в качестве ингибитора экспрессии гена TGF-бета1, а также в профилактике или лечении легочного фиброза или острого повреждения легкого. Изобретение позволяет стабилизировать в растворе молекулу нуклеиновой кислоты, состоящую из нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, при температуре окружающей среды в интервале pH от 4,6 до 6,5. Содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°C, относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения. 5 н. и 14 з.п. ф-лы, 23 ил., 18 табл., 9 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к композиции, содержащей одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты, ингибирующую экспрессию гена TGF-β1, которая представляет собой новую композицию, в частности, фармацевтическую композицию, отличающуюся повышенной стабильностью молекулы нуклеиновой кислоты.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Легочный фиброз представляет собой заболевание, при котором в строме легкого развивается фиброз, вызванный травмой и коллапсом легочных альвеол. Во многих случаях причина остается неизвестной. Когда причина не установлена, легочный фиброз обычно называют идиопатическим легочным фиброзом (ИЛФ). По мере прогрессирования фиброза легкие затвердевают и способность к кислородному обмену снижается. В настоящее время не существует радикального лечения этого заболевания и лечение по существу является симптоматическим.
Известно, что TGF-β является цитокином, регулирующим пролиферацию и дифференциацию клеток, и, как считают, он также играет важную роль в фиброидном изменении печени или легких. Таким образом, он привлекает внимание в качестве мишени при лечении легочного фиброза.
Применение нуклеиновых кислот в медицине считают технологией нового поколения в области разработки лекарственных средств, поскольку она отличается легкостью производства низкомолекулярных фармацевтических препаратов, а также эффективностью и безопасностью, характерными для использования лекарственных средств на основе антител. Однако прогресс в разработке фармацевтических препаратов достигается не так быстро, как ожидалось, из-за препятствий, которые создает нестабильность молекул нуклеиновой кислоты в организме, побочных эффектов вследствие стимуляции врожденного иммунного ответа, отсутствия разработанных эффективных систем доставки лекарств (СДЛ) и тому подобного.
В случае респираторных заболеваний, легочный фиброз является обоснованно выбранным заболеванием для применения терапии нуклеиновыми кислотами из-за возможности топического введения лекарственных средств в легкие. Для решения проблем с молекулами нуклеиновой кислоты, таких как стабильность в организме и индукция врожденного иммунного ответа, были разработаны одноцепочечные молекулы нуклеиновой кислоты, на концах которых двухцепочечные нуклеиновые кислоты киРНК или микроРНК связаны при помощи различных линкеров (например, патентные документы 1-5). Hamasaki с соавторами сообщали о значительном ослаблении симптомов при интратрахеальном введении одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, имеющей следующую структуру с содержанием ингибирующей экспрессию TGF-β1 последовательности (далее в тексте настоящего документа называемой «PK-0051»), мышам в животной модели легочного фиброза и острого повреждения легких (не патентный документ 1).
5'-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3' (SEQ ID NO: 1)
(Подчеркиванием выделена ингибирующая экспрессию TGF-β1 последовательность. P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I)).
Список документов
Патентные документы
патентный документ 1: WO 2012/017919
патентный документ 2: WO 2013/103146
патентный документ 3: WO 2012/005368
патентный документ 4: WO 2012/077446
патентный документ 5: WO 2013/133393
Не патентный документ
не патентный документ 1: PLoS One, 2012, 7(8): e42655.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Проблемы, решаемые с помощью изобретения
Как правило, поскольку нуклеиновые кислоты подвержены распаду в растворах и являются нестабильными, с ними очень сложно проводить манипуляции при температуре окружающей среды. Вследствие этого, принято хранить их в лиофилизированном состоянии, либо добавлять 50% этанол в буфер Tris-ЭДТА (TE) и хранить при температуре -20°C без замораживания. Учитывая данные обстоятельства, существует потребность в разработке стабильного, легкого в обращении препарата нуклеиновой кислоты, способного обеспечивать стабильность присутствующей нуклеиновой кислоты в качестве активного ингредиента при температуре окружающей среды.
Таким образом, целью настоящего изобретения является предложение композиции, в частности, фармацевтической композиции, содержащей в стабильном состоянии одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты (PK-0051), достоверно имеющую лечебный эффект при легочном фиброзе или остром повреждении легких, в виде раствора при температуре окружающей среды, а также способа ее получения.
Средства для решения проблем
Авторы настоящего изобретения провели интенсивные исследования в попытке решить вышеупомянутые проблемы и неожиданно обнаружили, что молекула PK-0051 может стабильно храниться в течение долгого срока, если растворять PK-0051 в буфере и контролировать, чтобы значение pH раствора PK-0051 находилось в пределах конкретного диапазона, в результате чего было создано настоящее изобретение.
Таким образом, настоящее изобретение включает следующее.
[1] Композиция, содержащая одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты, состоящую из нуклеотидной последовательности 5'-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3' (SEQ ID NO: 1)
(в последовательности P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I))
и буфер, которая имеет следующие характерные признаки:
(a) находится в форме раствора при температуре окружающей среды; и
(b) содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°C, относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
[2] Композиция по п. [1], отличающаяся тем, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 40°C, относительной влажности 75% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
[3] Композиция по п. [1] или [2], отличающаяся тем, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 60°C в течение 4 недель составляет не менее 60% относительно содержания в момент начала хранения.
[4] Композиция по п. [1], отличающаяся тем, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты, подвергнутой общей световой экспозиции 1,2 миллиона люкс⋅час, составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
[5] Композиция по любому из пунктов [1] - [4], отличающаяся тем, что буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,0 и не более 9,0.
[6] Композиция по любому из пунктов [1] - [4], отличающаяся тем, что буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,4 и не более 7,4.
[7] Композиция по любому из пунктов [1] - [4], отличающаяся тем, что буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 7,0.
[8] Композиция по любому из пунктов [1] - [4], отличающаяся тем, что буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5.
[9] Композиция по любому из пунктов [1] - [8], отличающаяся тем, что буфер содержит одно или более буферных средств, выбранных из гидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия, гидрофосфата динатрия, хлорида натрия, гидрохлорида аргинина, цитрата натрия, цитрата тринатрия дигидрата, L-глутамата мононатрия, ацетата натрия, карбоната натрия, гидрокарбоната натрия, лактата натрия, фосфата монокалия, гидроксида натрия, меглумина, глицина, лимонной кислоты и уксусной кислоты.
[10] Композиция по любому из пунктов [1] - [9], отличающаяся тем, что буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
[11] Композиция по любому из пунктов [1] - [10], дополнительно содержащая изотоническое средство.
[12] Композиция по п. [11], отличающаяся тем, что изотоническое средство представляет собой одно или более средств, выбранных из D-сорбита, хлорида натрия, глицерина, D-маннита, хлорида калия, лактита и сахарозы.
[13] Композиция по любому из пунктов [1] - [12], предназначенная для профилактики или лечения легочного фиброза или острого повреждения легких.
[14] Способ получения композиции по любому из пунктов [1] - [13], включающий растворение вышеуказанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, поддерживающем pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 7,0, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
[15] Способ получения композиции по любому из пунктов [1] - [13], включающий растворение вышеуказанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, поддерживающем pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
[16] Способ по п. [14] или [15], отличающийся тем, что буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
[17] Способ по любому из пунктов [14] - [16], отличающийся тем, что композиция предназначена для профилактики или лечения легочного фиброза или острого повреждения легких.
[18] Способ стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в композиции, включающий растворение молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, поддерживающем pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 7,0, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
[19] Способ стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в композиции, включающий растворение молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, поддерживающем pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5, и хранение раствора при температуре окружающей среды.
[20] Способ по п. [18] или [19], отличающийся тем, что буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
[21] Способ по любому из пунктов [18] - [20], отличающийся тем, что раствор представляет собой композицию для профилактики или лечения легочного фиброза или острого повреждения легких.
ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В соответствии с настоящим изобретением может быть предложена новая и легкая в обращении фармацевтическая композиция, отличающаяся повышенной стабильностью одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты в качестве активного ингредиента и не требующая повторного растворения при использовании.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фиг. 1 приведены результаты теста на стабильность при 25°C раствора PK-0051, полученного с использованием буфера при каждом значении pH.
На Фиг. 2 приведены результаты теста на стабильность при 40°C раствора PK-0051, полученного с использованием буфера при каждом значении pH.
На Фиг. 3 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием буфера при каждом значении pH.
На Фиг. 4 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием 0,05 M цитратного буфера (pH 4,0-7,5).
На Фиг. 5 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием 0,1 M цитратного буфера (pH 4,0-7,8).
На Фиг. 6 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием 0,05 M фосфатного буфера (pH 4,0-7,9).
На Фиг. 7 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием смеси 0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,0-7,8).
На Фиг. 8 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием смеси 0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,0-7,8).
На Фиг. 9 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием смеси 0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,0-7,8).
На Фиг. 10 приведены результаты теста на стабильность при 40°C раствора PK-0051, полученного с использованием цитратного буфера в каждой концентрации.
На Фиг. 11 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051, полученного с использованием цитратного буфера в каждой концентрации.
На Фиг. 12 приведены результаты теста на стабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,5).
На Фиг. 13 приведены результаты теста на стабильность раствора PK-0051 с концентрацией 10 мг/мл (pH 6,5).
На Фиг. 14 приведены результаты теста на стабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,0).
На Фиг. 15 показано относительное количество чTGF-β1 в легочной ткани в каждой из групп введения PK-0051.
На Фиг. 16 показано количество гидроксипролина в легочной ткани в каждой из групп введения PK-0051.
На Фиг. 17 приведены результаты теста на стабильность при 60°C раствора PK-0051 с концентрацией 10, 20, 40 и 80 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)).
На Фиг. 18 приведены результаты теста на фотостабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 5,5)). Для измерений использовали метод ионообменной ВЭЖХ.
На Фиг. 19 приведены результаты теста на фотостабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)). Для измерений использовали метод ионообменной ВЭЖХ.
На Фиг. 20 приведены результаты теста на фотостабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 6,5)). Для измерений использовали метод ионообменной ВЭЖХ.
На Фиг. 21 приведены результаты теста на фотостабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 5,5)). Для измерений использовали метод обращенно-фазовой ВЭЖХ.
На Фиг. 22 приведены результаты теста на фотостабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)). Для измерений использовали метод обращенно-фазовой ВЭЖХ.
На Фиг. 23 приведены результаты теста на фотостабильность раствора PK-0051 с концентрацией 1 мг/мл (0,05 M цитратный буфер (pH 6,5)). Для измерений использовали метод обращенно-фазовой ВЭЖХ.
ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к содержащей молекулу нуклеиновой кислоты композиции, в которой может стабильно сохраняться одноцепочечная молекула нуклеиновой кислоты PK-0051, содержащая нуклеотидную последовательность, ингибирующую экспрессию гена TGF-β1, в форме раствора при температуре окружающей среды (далее в настоящем документе также называемой «композиция по настоящему изобретению»). Используемый в настоящем документе термин «температура окружающей среды» означает диапазон температур 15-30°C, и термин «стабильное сохранение» означает, что не менее 80% молекулы нуклеиновой кислоты, присутствующей в момент начала хранения (после изготовления композиции), сохраняется без распада в течение (1) не менее 4 недель, предпочтительно (2) не менее 24 недель (примерно 6 месяцев), более предпочтительно (3) не менее 200 недель (примерно 3,7 лет). Такую стабильность при хранении в каждом случае можно подтверждать или предсказывать на основании результатов следующего теста на стабильность.
(1) Содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 25°C, относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
(2) Содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 40°C, относительной влажности 75% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
(3) Содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения при 60°C в течение 4 недель составляет не менее 60%, предпочтительно не менее 70%, более предпочтительно не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения. Альтернативно, содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после выдерживания при 105°C в течение 15 мин или при 121°C в течение 15 мин составляет не менее 60%, предпочтительно не менее 70%, более предпочтительно не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
Композиция по настоящему изобретению может стабильно сохраняться в условиях высокой температуры. Кроме того, она может стабильно сохраняться даже при замораживании-размораживании.
Кроме того, термин «стабильно сохраняемая», предпочтительно, включает понятие «стабильно сохраняемая на свету». Термин «стабильно сохраняемая на свету» означает, что не менее 80% молекулы нуклеиновой кислоты, присутствующей в момент начала хранения (после изготовления композиции), сохраняется без распада даже в условиях общей световой экспозиции 1,2 миллиона люкс⋅час. Такую стабильность при хранении можно подтверждать или предсказывать на основании того факта, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции после хранения под флуоресцентной лампой дневного света (освещенность 1580 люкс) с лампой D65 в качестве источника света в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
В настоящем документе содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции определяют с использованием раствора (100%), полученного путем растворения молекулы нуклеиновой кислоты в том же количестве, что и в тестируемом образце, в воде для инъекций, и растворов, полученных путем смешивания указанного раствора и воды для инъекций в соотношениях 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4 (90%, 80%, 70% и 60%, соответственно), в качестве образцов для построения калибровочной кривой, нанося 10 мкл каждого из образцов для построения калибровочной кривой на колонку для ВЭЖХ для измерения площади пиков, строя график на основании измеренных значений соответствующих образцов для построения калибровочной кривой, с теоретическими значениями содержания (%) на горизонтальной оси (X) и значениями площади пика на вертикальной оси (Y), получая линию регрессии (Y=aX+b) (калибровочную кривую) методом наименьших квадратов и сопоставляя значение площади пика для тестируемого образца, измеренное методом ВЭЖХ в тех же условиях, с калибровочной кривой для определения теоретического содержания (%). Условия для измерений вышеуказанным методом ВЭЖХ являются следующими.
Обращенно-фазовая ВЭЖХ
Измерительный прибор: система для ВЭЖХ LC-10A SHIMAZU (ОФ-ВЭЖХ) производства Shimadzu Corporation
Детектор: спектрофотометр для измерения поглощения в ультрафиолетовой области (измерение при длине волны: 254 нм) (производства Shimadzu Corporation)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм) (производства Japan Waters)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ ТЭАА (pH 7,0), 0,5% ацетонитрила
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрила
Подача подвижной фазы: соотношение при смешивании подвижной фазы A и подвижной фазы B изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации.
Таблица 1
| Время (мин) после впрыска | Подвижная фаза A (об%) | Подвижная фаза B (об%) |
| 0→12 | 100→60 | 0→40 |
поток: 1,0 мл/мин
Ионообменная ВЭЖХ
Измерительный прибор: система для ВЭЖХ LC-20A SHIMAZU (АО-ВЭЖХ) производства Shimadzu Corporation
Детектор: спектрофотометр для измерения поглощения в ультрафиолетовой области (измерение при длине волны: 260 нм)
Колонка: DNAPac PA-100 (4×250 мм)
Температура колонки: 80°C
Подвижная фаза A: 25 мМ трис-HCl (pH 8,0), 8 M мочевина, 10% ацетонитрила
Подвижная фаза B: подвижная фаза A, 700 мМ перхлорат натрия моногидрат
Подача подвижной фазы: соотношение при смешивании подвижной фазы A и подвижной фазы B изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации.
Таблица 2
| Время (мин) после впрыска | Подвижная фаза A (об%) | Подвижная фаза B (об%) |
| 0→20 | 90→60 | 10→40 |
поток: 1,0 мл/мин
1. Молекула нуклеиновой кислоты
Молекула нуклеиновой кислоты, содержащаяся в композиции по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента, имеет следующую нуклеотидную последовательность.
5'-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3' (SEQ ID NO: 1)
(в последовательности P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I)).
В вышеприведенной нуклеотидной последовательности подчеркнутая последовательность представляет собой нуклеотидную последовательность, комплементарную мРНК TGF-β1 человека, и является последовательностью, ингибирующей экспрессию TGF-β1, которая связывается с мРНК, оказывая действие РНК-интерференции.
Молекула нуклеиновой кислоты, содержащаяся в композиции по настоящему изобретению, может быть получена методом, известным как таковой. Например, она может быть получена методом, описанным в WO 2013/133393, PLoS One, 2012, 7(8): e42655.
Хотя содержание молекулы нуклеиновой кислоты в композиции по настоящему изобретению не имеет конкретных ограничений, в случае, когда композиция представляет собой фармацевтическую композицию, оно, как правило, составляет 0,0001-60 масс%, предпочтительно 0,001-15 масс%, более предпочтительно 0,01-1 масс%, в расчете на массу всей фармацевтической композиции.
2. Буфер
Композиция по настоящему изобретению содержит буфер. В настоящем изобретении буфер представляет собой раствор (в частности, водный раствор), оказывающий буферное действие и имеющий в составе буферное средство. В настоящем изобретении буферное средство представляет собой стабилизатор pH водного раствора, и можно выбирать средство, которое обычно используют в области производства лекарственных средств.
В настоящем изобретении распад молекулы нуклеиновой кислоты в композиции может быть предотвращен с помощью буфера.
В качестве буфера, используемого по настоящему изобретению, может быть упомянут буфер, который поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,0 и не более 9,0. Буфер, который поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,4 и не более 7,4, является предпочтительным, буфер, который поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 7,0, является более предпочтительным и буфер, который поддерживает pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5, является еще более предпочтительным.
В качестве буферного средства, используемого по настоящему изобретению, в частности, можно упомянуть одно или более буферных средств, выбранных из аскорбиновой кислоты, L-аспартата магния, сульфита натрия, L-аргинина, гидрохлорида L-аргинина, бензойной кислоты, бензоата натрия, эпсилон-аминокапроновой кислоты, хлорида аммония, хлорида калия, хлорида натрия, хлорида глюкозамина, гидрохлорида триэтаноламина, разбавленной соляной кислоты, лимонной кислоты, безводной лимонной кислоты, безводного цитрата натрия, гидрата лимонной кислоты, цитрата натрия гидрата, цитрата натрия дигидрата, цитрата натрия, цитрата динатрия, цитрата тринатрия, цитрата тринатрия дигидрата, цитрата калия, глицилглицина, глицина, глюконо-σ-лактона, глюконовой кислоты, глюконата кальция гидрата, L-глутаминовой кислоты, L-глутамата мононатрия, креатинина, хлорбутанола, гидрофосфата динатрия, дигидрофосфата натрия, янтарной кислоты, сукцината динатрия гексагидрата, уксусной кислоты, ацетата аммония, ацетата калия, ацетата натрия гидрата, диизопропаноламина, диэтаноламина, виннокаменной кислоты, L-тартрата натрия, гидроксида калия, гидроксида натрия, таурина, карбоната натрия, карбоната натрия гидрата, гидрокарбоната натрия, триизопропаноламина, триэтаноламина, трометамола, диоксида углерода, молочной кислоты, лактата кальция гидрата, раствора лактата натрия, L-гистидина, 4-(2-гидроксиэтила), ледяной уксусной кислоты, глюкозы, фумарата мононатрия, пропионата натрия, хлорида бензалкония, растворителя из смешанных ароматических углеводородов, бората аммония, малеиновой кислоты, безводного ацетата натрия, безводного карбоната натрия, гидрофосфата динатрия ангидрата, фосфата тринатрия ангидрата, дигидрофосфата натрия ангидрата, метафосфата натрия, метансульфоновой кислоты, серной кислоты, сульфата алюминия-калия гидрата, фосфорной кислоты, моногидрофосфата натрия гептагидрата, фосфата тринатрия, двухосновного фосфата натрия гидрата, гидрофосфата динатрия гидрата, дигидрофосфата натрия гидрата, дигидрофосфата калия, дигидрофосфата натрия, дигидрофосфата натрия моногидрата. Из них, в качестве буферного средства предпочтительно использовать буфер, содержащий лимонную кислоту или ее соль, или ее гидрат, либо фосфорную кислоту или ее соль, или ее гидрат.
Таким образом, в качестве буфера, используемого для композиции по настоящему изобретению, предпочтительно использовать буфер, содержащий лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
В настоящем изобретении буфер предпочтительно содержит кислоту, указанную среди перечисленных выше буферных средств, и ее соль, либо соли кислот двух или более видов, указанных среди перечисленных выше буферных средств. Более предпочтительно использовать буфер, содержащий лимонную кислоту и ее соль (например, лимонную кислоту и цитрат натрия, лимонную кислоту и цитрат тринатрия, и тому подобное), буфер, содержащий фосфорную кислоту и ее соль (например, фосфорную кислоту и дигидрофосфат натрия, и тому подобное), а также буфер, содержащий фосфаты двух видов (например, гидрофосфат динатрия и дигидрофосфат натрия). Особенно предпочтительными являются/является буфер, содержащий лимонную кислоту и ее соль, и/или буфер, содержащий фосфаты двух видов.
Количество буфера, используемого для композиции по настоящему изобретению, может быть любым при условии, что он способен поддерживать желательный диапазон pH. Например, количество можно соответствующим образом определять, чтобы содержание буферного средства в композиции попадало в следующий диапазон. То есть, содержание буферного средства в композиции по настоящему изобретению как правило, составляет 0,0001-40 масс%, предпочтительно 0,0005-20 масс%, более предпочтительно 0,001-10 масс%, в расчете на массу всей композиции.
3. Другие добавки
Композиция по настоящему изобретению также может содержать растворитель. Примеры растворителя включают фармацевтически приемлемые органические растворители (например, этанол, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, глицерин и так далее), воду, воду для инъекций, физиологический солевой раствор, раствор глюкозы и тому подобное. Растворители одного или более видов можно использовать в сочетании.
В настоящем изобретении молекулу нуклеиновой кислоты предпочтительно растворяют заранее в растворителе и смешивают с буфером, поскольку молекула нуклеиновой кислоты может быть растворена за короткое время. В качестве растворителя предпочтительно использовать воду. В настоящей спецификации, если не указано иначе, выражение «молекулу нуклеиновой кислоты растворяют в буфере» означает не только то, что молекулу нуклеиновой кислоты в сухом виде непосредственно растворяют в буфере, но также и то, что, как упомянуто выше, молекулу нуклеиновой кислоты сначала растворяют в растворителе, таком как вода и тому подобное, и полученный раствор смешивают с буфером.
В настоящем изобретении содержание растворителя, как правило, составляет не менее 0,0001 масс% и не более 100 масс%, предпочтительно не менее 0,001 масс% и не более 100 масс%, более предпочтительно не менее 0,005 масс% и не более 100 масс%, в виде общего количества в расчете на массу всей композиции.
Композиция по настоящему изобретению, необязательно, дополнительно содержит изотоническое средство. Примеры изотонического средства включают глюкозу, D-сорбит, хлорид натрия, глицерин, D-маннит, хлорид калия, лактит, сахарозу, глюкозу и тому подобное. Предпочтительными изотоническими средствами являются D-сорбит, хлорид натрия, глицерин, D-маннит, хлорид калия, лактит и сахароза, и более предпочтительными являются хлорид натрия, хлорид калия и сахароза. Изотонические средства одного или более видов можно использовать в сочетании.
Если используют изотоническое средство, коэффициент осмотического давления композиции по настоящему изобретению (отношение осмолярности композиции по настоящему изобретению к осмолярности, создаваемой физиологическим солевым раствором) предпочтительно составляет 0,6-1,4, более предпочтительно 0,8-1,2, еще более предпочтительно 1,0.
Если композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, композицию можно формулировать, например, в виде ингаляционной жидкости, инъекции, жидкости и тому подобного, известным методом и вводить парентеральным путем введения (например, трансназальным введением, внутривенным введением, инстилляцией, внутримышечным введением, подкожным введением и так далее). Кроме того, ее можно вводить перорально в соответствующей лекарственной форме (например, капсуле и так далее). Предпочтительным способом введения является ингаляция капельных частиц с использованием небулайзера.
Если фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой инъекцию, ее также можно получать в виде препарата липосом, инкапсулирующих молекулу нуклеиновой кислоты, путем растворения молекулы нуклеиновой кислоты в буфере и создания контакта полученного раствора с молекулами - компонентами липидной мембраны. Препарат липосом можно, предпочтительно, использовать в качестве инъекции для системного введения, например, внутривенной инъекции, внутримышечной инъекции и тому подобного.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать фармацевтически приемлемую добавку, когда это необходимо, в дополнение к вышеуказанным компонентам. Если фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой инъекцию, примеры добавки включают изотоническое средство (например, глюкозу, D-сорбит, хлорид натрия, глицерин, D-маннит, хлорид калия, лактит, сахарозу, глюкозу и так далее), смягчающее средство (например, бензиловый спирт и так далее), консервант (например, метилбензоат, параоксибензоаты, хлорбутанол, бензиловый спирт и так далее) и тому подобное. Предпочтительными добавками являются метилбензоат, D-сорбит, хлорид натрия, глицерин, D-маннит, хлорид калия, лактит и сахароза. Более предпочтительными добавками являются хлорид натрия, хлорид калия и сахароза.
Если фармацевтическая композиция по настоящему изобретению сформулирована в виде ингаляционного средства, например, раствор, полученный путем растворения молекулы нуклеиновой кислоты в растворителе, таком как вода и тому подобное, смешивают с водным раствором, в который добавлено буферное средство (например, лимонная кислота и ее соль, фосфорная кислота и ее соль), смесь фильтруют для удаления бактерий и полученный раствор лекарственного средства помещают в герметично закрытый контейнер, такой как флакон, ампула и тому подобное, для получения ингаляционного средства. Например, молекулу нуклеиновой кислоты смешивают с водным раствором, содержащим воду и буферное средство (например, лимонную кислоту и ее соль, фосфорную кислоту и ее соль), растворяют с помощью обработки ультразвуком и тому подобного, фильтруют для удаления бактерий, и полученный раствор лекарственного средства помещают в герметично закрытый контейнер, такой как флакон, ампула и тому подобное, для получения ингаляционного средства. Хотя используемый герметично закрытый контейнер, как правило, представляет собой контейнер из прозрачного боросиликатного стекла, также можно использовать контейнер, в котором контактирующая с жидкостью часть внутренней поверхности стекла обладает свойством кварцевой поверхности.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению полезна для лечения или профилактики заболеваний, отличающихся аномальным усилением экспрессии TGF-β1, в частности, легочного фиброза и острого повреждения легких, поскольку она содержит в качестве активного ингредиента молекулу нуклеиновой кислоты, способную ингибировать экспрессию TGF-β1. В настоящем изобретении термин «лечение» означает ослабление заболевания и улучшение прогноза, а термин «профилактика» означает предотвращение начала и отсрочку начала заболевания.
Доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению также варьируется в зависимости от приемлемости лекарственного средства для субъекта, пути введения, степени тяжести заболевания и тому подобного. Например, если ее вводят в качестве лекарственного средства от легочного фиброза в виде ингаляционной жидкости взрослому человеку, доза молекулы нуклеиновой кислоты в качестве активного ингредиента составляет от примерно 0,001 до примерно 20 мг/кг массы тела, предпочтительно от примерно 0,005 до примерно 5 мг/кг массы тела, более предпочтительно от примерно 0,01 до примерно 1 мг/кг массы тела, при этом ее можно вводить одной или несколькими порциями в сутки.
Настоящее изобретение также относится к способу стабилизации молекулы нуклеиновой кислоты в композиции, который включает добавление буфера к молекуле нуклеиновой кислоты, или способу получения стабильной композиции, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты. В качестве буфера, используемого в данном способе, можно упомянуть те, которые аналогичны вышеуказанным примерам буферов для композиции по настоящему изобретению, и аналогичный буфер является предпочтительным.
Количество добавляемого буфера в способе стабилизации/получения по настоящему изобретению может быть любым при условии, что pH может поддерживаться в нужном диапазоне. Например, количество буферного средства можно соответствующим образом определять, чтобы оно попадало в следующий диапазон. То есть, добавляемое количество буферного средства в способе стабилизации/получения по настоящему изобретению, как правило, составляет 0,0001-40 масс%, предпочтительно 0,0005-20 масс%, более предпочтительно 0,001-10 масс%, в расчете на массу всей композиции, получаемой данным способом.
Далее настоящее изобретение объяснено более подробно с помощью примеров, которые не следует истолковывать, как ограничивающие.
ПРИМЕРЫ
Пример получения 1 (синтез одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты)
Одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты PK-0051, содержащую последовательность, ингибирующую экспрессию TGF-β1, синтезировали на синтезаторе нуклеиновых кислот (торговое название: ABI Expedite (зарегистрированная торговая марка) 8909 Nucleic Acid Synthesis System, Applied Biosystems) фосфорамидитным методом. Для вышеуказанного синтеза фосфорамидиты РНК (2'-O-TBDMSi, торговое название, Samchully Pharm. Co., Ltd.) использовали в качестве РНК амидитов (далее в настоящем документе так же). У вышеуказанного амидита снимали защиту общепринятым методом. Синтезированную РНК очищали методом ВЭЖХ. Каждую РНК после очистки лиофилизировали.
В качестве области линкера использовали L-пролиндиамидамидит. Подчеркиванием выделена последовательность, ингибирующая экспрессию гена TGF-β1 человека.
5'-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3' (SEQ ID NO: 1)
(P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I)).
Пример 1 (Оценка влияния pH на стабильность при разной температуре хранения)
Оценивали термальную стабильность PK-0051-содержащей композиции прототипа ингаляционного препарата нуклеиновой кислоты.
1. Получение тестируемой композиции
Тестируемую композицию 1 готовили следующим образом.
97,0 мл 0,04 M соляной кислоты, 50 мл 0,04 M хлорида калия и 53 мл воды для инъекций смешивали, получая 0,04 M буфер соляная кислота-хлорид калия (pH 1,0). Используя буфер, готовили раствор PK-0051 с концентрацией 0,1 мг/мл.
Тестируемую композицию 2 готовили следующим образом.
10 мл 0,04 M фосфорной кислоты, 10 мл 0,04 M борной кислоты и 10 мл 0,04 M уксусной кислоты смешивали, и значение pH смеси доводили до 2,0 2Н NaOH, получая 0,04 M буфер Бриттона-Робинсона. Используя буфер, готовили раствор PK-0051 с концентрацией 0,1 мг/мл.
Тестируемые композиции 3-12 готовили способом, аналогичным способу приготовления тестируемой композиции 2, за исключением того, что значение pH доводили до каждого нужного значения pH с помощью 2Н NaOH.
тестируемая композиция 1: PK-0051 (0,04 M буфер соляная кислота-хлорид калия (pH 1,5)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 2: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 2,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 3: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 3,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 4: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 5: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 5,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 6: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 7: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 8: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 8,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 9: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 9,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 10: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 10,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 11: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 11,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 12: PK-0051 (0,04 M буфер Бриттона-Робинсона (pH 12,0)), (0,1 мг/мл).
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 1-12, соответственно, разливали в четыре 5-мл стеклянных флакона, в каждый по 1 мл композиции, и по одному флакону с соответствующими композициями хранили в камерах для теста на стабильность (производства ESPEC CORP.) при 4°C, 25°C/60%RH, 40°C/75%RH и 60°C. Из каждой из тестируемых композиций отбирали по 50 мкл и проводили измерения методом ВЭЖХ каждую неделю в течение 4 недель. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод расчета содержания и метод измерения описаны ниже.
Содержание PK-0051 в тестируемой композиции определяли с использованием раствора (100%), полученного путем растворения PK-0051 в том же количестве, что и в тестируемой композиции, в воде для инъекций, и растворов, полученных путем смешивания указанного раствора и воды для инъекций в соотношениях 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4 (90%, 80%, 70% и 60%, соответственно), в качестве образцов для построения калибровочной кривой, нанося 10 мкл каждого из образцов для построения калибровочной кривой на колонку для ВЭЖХ для измерения площади пиков, строя график на основании измеренных значений соответствующих образцов для построения калибровочной кривой, с теоретическими значениями содержания (%) на горизонтальной оси (X) и значениями площади пика на вертикальной оси (Y), получая линию регрессии (Y=aX+b) (калибровочную кривую) методом наименьших квадратов и сопоставляя значение площади пика для тестируемой композиции, измеренное методом ВЭЖХ в тех же условиях, с калибровочной кривой для определения теоретического содержания (%).
Метод измерения
Измерения образцов для построения калибровочной кривой (60% - 100%) и тестируемых композиций проводили в следующих условиях:
Детектор: спектрофотометр для измерения поглощения в ультрафиолетовой области (измерение при длине волны: 254 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ ТЭАА (pH 7,0), 0,5% ацетонитрила
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрила
Подача подвижной фазы: соотношение при смешивании подвижной фазы A и подвижной фазы B изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (Таблица 3).
Таблица 3
| Время (мин) после впрыска | Подвижная фаза A (об%) | Подвижная фаза B (об%) |
| 0→12 | 100→60 | 0→40 |
поток: 1,0 мл/мин
3. Результаты
Результаты представлены на Фиг. 1 - Фиг. 3. Заметное уменьшение содержания отсутствовало в диапазоне pH 5-7 в самых жестких условиях хранения в течение 4 недель при 60°C.
Как правило, нуклеиновая кислота легко подвержена влиянию температуры, и считается, что ее хранение при температуре окружающей среды или выше в течение долгого времени невозможно. Результаты показали, что одноцепочечную нуклеиновую кислоту можно хранить в течение долгого срока даже при температуре окружающей среды или выше, контролируя значение pH раствора.
Пример 2 (Оценка стабильности при разных значениях pH в случае использования цитратного буфера и/или фосфатного буфера)
Оценивали различные буферы PK-0051-содержащих композиций прототипа ингаляционного препарата нуклеиновой кислоты и стабильность при каждом значении pH.
1. Тестируемая композиция
Тестируемые композиции 13-48 готовили следующим образом.
0,1 M водный раствор цитрата натрия и 0,1 M водный раствор лимонной кислоты смешивали, получая 0,1 M цитратный буфер, имеющий значение pH, которое в каждом случае доводили до pH 4,0-7,5. Раствор PK-0051 с концентрацией 2,35 мг/мл (2,13 мл), приготовленный с водой для инъекций, воду для инъекций (0,37 мл) и 0,1 M цитратный буфер (2,5 мл) с каждым значением pH смешивали, получая 5 мл каждой из тестируемых композиций 13-48 с концентрацией 1 мг/мл.
Тестируемые композиции 49-68 готовили следующим образом.
0,1 M водный раствор цитрата натрия и 0,1 M водный раствор лимонной кислоты смешивали, получая 0,1 M цитратный буфер, имеющий значение pH, которое в каждом случае доводили до pH 4,0-7,8. Раствор PK-0051 с концентрацией 5,8 мг/мл (0,086 мл), приготовленный с водой для инъекций, и 0,1 M цитратный буфер (4,914 мл) с каждым значением pH смешивали, получая 5 мл каждой из тестируемых композиций 49-68 с концентрацией 0,1 мг/мл.
Тестируемые композиции 69-108 готовили следующим образом.
0,1 M водный раствор дигидрофосфата натрия и 0,1 M раствор гидрофосфата динатрия смешивали, получая 0,1 M фосфатный буфер, имеющий значение pH, которое в каждом случае доводили до pH 4,0-7,9. Раствор PK-0051 с концентрацией 1,2 мг/мл (0,495 мл), приготовленный с водой для инъекций, воду для инъекций (2,505 мл) и 0,1 M фосфатный буфер (3,000 мл) с каждым значением pH смешивали, получая 6 мл каждой из тестируемых композиций 69-108 с концентрацией 0,1 мг/мл.
Тестируемые композиции 109-168 готовили следующим образом.
0,1 M водный раствор цитрата натрия и 0,1 M водный раствор лимонной кислоты смешивали, получая 0,1 M цитратный буфер, имеющий значение pH, которое в каждом случае доводили до pH 4,0-7,8. Аналогично, 0,1 M водный раствор дигидрофосфата натрия и 0,1 M раствор гидрофосфата динатрия смешивали, получая 0,1 M фосфатный буфер, имеющий значение pH, которое в каждом случае доводили до pH 4,0-7,8. 0,1 M цитратный буфер и 0,1 M фосфатный буфер, имеющие одинаковые значения pH, смешивали в соотношении 8:2 (4 мл:1 мл), 5:5 (3 мл:3 мл) и 2:8 (1 мл:4 мл), получая 0,1 M цитрат-фосфатный буфер (8:2), 0,1 M цитрат-фосфатный буфер (5:5) и 0,1 M цитрат-фосфатный буфер (2:8), с каждым значением pH 4,0-7,8.
Раствор PK-0051 с концентрацией 5,8 мг/мл (0,1 мл), приготовленный с водой для инъекций, воду для инъекций (2,9 мл) и 0,1 M цитрат-фосфатный буфер (8:2) (3,0 мл) с каждым значением pH смешивали, получая 6 мл каждой из тестируемых композиций 109-128 с концентрацией 0,1 мг/мл. Тестируемые композиции 129-148 получали способом, аналогичным способу получения тестируемых композиций 109-128, за исключением того, что использовали 0,1 M цитрат-фосфатный буфер (5:5) (3,0 мл) вместо 0,1 M цитрат-фосфатного буфера (8:2) (3,0 мл) с каждым значением pH. Тестируемые композиции 149-168 получали способом, аналогичным способу получения тестируемых композиций 109-128, за исключением того, что использовали 0,1 M цитрат-фосфатный буфер (2:8) (3,0 мл) вместо 0,1 M цитрат-фосфатного буфера (8:2) (3,0 мл) с каждым значением pH.
1-1. 0,05 M цитратный буфер (pH 4,0-7,5)
тестируемая композиция 13: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,0)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 14: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,1)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 15: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,2)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 16: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,3)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 17: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,4)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 18: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,5)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 19: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,6)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 20: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,7)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 21: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,8)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 22: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 4,9)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 23: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,0)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 24: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,1)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 25: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,2)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 26: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,3)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 27: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,4)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 28: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,5)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 29: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,6)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 30: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,7)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 31: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,8)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 32: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,9)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 33: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 34: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,1)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 35: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,2)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 36: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,3)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 37: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,4)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 38: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,5)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 39: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,6)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 40: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,7)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 41: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,8)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 42: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,9)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 43: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 7,0)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 44: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 7,1)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 45: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 7,2)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 46: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 7,3)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 47: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 7,4)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 48: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 7,5)), (1 мг/мл)
1-2. 0,1 M цитратный буфер (pH 4,0-7,8)
тестируемая композиция 49: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 50: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 4,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 51: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 4,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 52: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 4,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 53: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 4,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 54: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 5,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 55: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 5,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 56: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 5,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 57: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 5,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 58: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 5,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 59: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 60: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 6,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 61: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 6,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 62: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 6,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 63: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 64: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 65: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 7,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 66: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 7,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 67: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 7,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 68: PK-0051 (0,1 M цитратный буфер (pH 7,8)), (0,1 мг/мл)
1-3. 0,05 M фосфатный буфер (pH 4,0-7,9)
тестируемая композиция 69: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 70: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 71: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 72: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,3)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 73: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 74: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,5)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 75: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 76: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,7)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 77: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 78: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 4,9)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 79: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 80: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 81: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 82: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,3)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 83: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 84: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,5)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 85: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 86: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,7)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 87: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 88: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 5,9)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 89: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 90: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 91: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 92: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,3)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 93: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 94: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,5)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 95: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 96: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,7)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 97: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 98: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 6,9)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 99: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 100: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 101: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 102: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,3)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 103: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 104: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,5)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 105: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 106: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,7)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 107: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 108: PK-0051 (0,05 M фосфатный буфер (pH 7,9)), (0,1 мг/мл)
1-4. 0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,0-7,8)
тестируемая композиция 109: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 110: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 111: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 112: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 113: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 4,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 114: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 5,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 115: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 5,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 116: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 5,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 117: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 5,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 118: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 5,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 119: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 120: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 6,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 121: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 6,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 122: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 6,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 123: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 124: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 125: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 7,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 126: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 7,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 127: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 7,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 128: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (8:2) (pH 7,8)), (0,1 мг/мл)
1-5. 0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,0-7,8)
тестируемая композиция 129: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 130: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 131: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 132: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 133: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 4,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 134: PK-005 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 5,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 135: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 5,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 136: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 5,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 137: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 5,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 138: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 5,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 139: PK-005 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 140: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 6,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 141: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 6,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 142: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 6,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 143: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 144: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 145: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 7,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 146: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 7,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 147: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 7,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 148: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (5:5) (pH 7,8)), (0,1 мг/мл)
1-6. 0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,0-7,8)
тестируемая композиция 149: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 150: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 151: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 152: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 153: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 4,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 154: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 5,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 155: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 5,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 156: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 5,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 157: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 5,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 158: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 5,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 159: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 160: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 6,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 161: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 6,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 162: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 6,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 163: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 164: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 7,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 165: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 7,2)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 166: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 7,4)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 167: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 7,6)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 168: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер:0,05 M фосфатный буфер (2:8) (pH 7,8)), (0,1 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 13-168, соответственно, разливали в пять 5-мл стеклянных флаконов, в каждый по 1 мл композиции, и хранили в камерах для теста на стабильность (производства ESPEC CORP.) при 60°C. Измерения для тестируемых композиций проводили методом ВЭЖХ в неделю 4. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод измерения и метод расчета содержания были аналогичны тем, которые использовали в примере 1.
3. Результаты
Результаты приведены на Фиг. 4 - Фиг. 9. Независимо от используемого буфера содержание составляло не менее 80% в диапазоне значений pH от примерно 4,6 до примерно pH 7,4 через 4 недели хранения при 60°C.
Пример 3 (Оценка стабильности в цитратном буфере и его концентрации)
Оценивали термальную стабильность PK-0051-содержащей композиции прототипа ингаляционного препарата нуклеиновой кислоты.
1. Тестируемая композиция
Тестируемую композицию 169 готовили следующим образом.
0,1 M водный раствор цитрата натрия и 0,1 M водный раствор лимонной кислоты смешивали, получая 0,1 M цитратный буфер с pH 6,8. Раствор PK-0051 с концентрацией 20 мг/мл (0,1 мл), приготовленный с водой для инъекций, воду для инъекций (9,9 мл) и 0,1 M цитратный буфер (10 мл) с pH 6,8 смешивали, получая 20 мл тестируемой композиции 169 с концентрацией 0,1 мг/мл.
Тестируемую композицию 170 готовили следующим образом.
0,1 M водный раствор цитрата натрия и 0,1 M водный раствор лимонной кислоты смешивали, получая 0,1 M цитратный буфер с pH 6,8. Его разбавляли в 10 раз, получая 0,01 M цитратный буфер с pH 6,8. Раствор PK-0051 с концентрацией 14,2 мг/мл (0,0704 мл), приготовленный с водой для инъекций, воду для инъекций (4,9296 мл) и 0,01 M цитратный буфер (5 мл) с pH 6,8 смешивали, получая 10 мл тестируемой композиции 170 с концентрацией 0,1 мг/мл.
тестируемая композиция 169: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 170: PK-0051 (0,005 M цитратный буфер (pH 6,8)), (0,1 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 169 и 170, соответственно, разливали в девять 5-мл стеклянных флаконов, в каждый по 1 мл композиции, и по четыре флакона с соответствующими композициями хранили в камерах для теста на стабильность при 40°C/75%RH и 60°C, и по одному флакону с соответствующими композициями хранили при 4°C. Измерения для тестируемых композиций проводили методом ВЭЖХ каждую неделю в течение 4 недель. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод измерения и метод расчета содержания были аналогичны тем, которые использовали в примере 1.
3. Результаты
Результаты приведены на Фиг. 10 и Фиг. 11. Результаты показали, что заметное изменение содержания отсутствовало в цитратном буфере с концентрациями 0,005 M и 0,05 M даже в случае хранения при 60°C в течение 4 недель. На основании этих результатов можно сделать вывод, что эффект на стабильность нуклеиновой кислоты может сохраняться за счет контроля концентрации цитратного буфера, даже при увеличении концентрации одноцепочечной нуклеиновой кислоты.
Пример 4 (Оценка стабильности PK-0051-содержащей композиции (pH 6,5))
Готовили PK-0051-содержащие композиции с концентрациями 10 мг/мл и 1 мг/мл (pH 6,5) и оценивали их стабильность.
1. Тестируемая композиция
PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 10 мг/мл (pH 6,5) готовили следующим образом.
Гидрат лимонной кислоты (21,0 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,1 M раствор лимонной кислоты. Аналогично, цитрат тринатрия дигидрат (29,4 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,1 M раствор цитрата натрия. 0,1 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 6,5, получая 0,1 M цитратный буфер (pH 6,5). PK-0051 (10 г), синтезированную, как описано в примере получения 1, растворяли в воде для инъекций (500 мл). В раствор добавляли 0,1 M цитратный буфер (pH 6,5) (500 мл) и смесь перемешивали. Композицию пропускали через 0,22-мкм фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ), получая PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 10 мг/мл (pH 6,5).
PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,5) готовили способом, аналогичным способу, описанному выше, за исключением того, что количество PK-0051 было изменено на 1,0 г.
Используя PK-0051-содержащие композиции с концентрациями 10 мг/мл и 1 мг/мл (pH 6,5) в качестве тестируемых композиций 171 и 172, оценивали стабильность.
тестируемая композиция 171: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,5)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 172: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,5)), (10 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 171 и 172, соответственно, разливали в девять 5-мл стеклянных флаконов, в каждый по 1 мл композиции, и по четыре флакона с соответствующими композициями хранили в камерах для теста на стабильность при 25°C/60%RH, 40°C/75%RH и 60°C, и по одному флакону с соответствующими композициями хранили при 4°C. Измерения для тестируемых композиций проводили методом ВЭЖХ каждую неделю в течение 4 недель. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод измерения был аналогичен тому, который описан в примере 1.
Содержание PK-0051 в тестируемой композиции определяли с использованием раствора (100%), полученного путем растворения PK-0051 в воде для инъекций до концентрации 1 мг/мл, и растворов, полученных путем смешивания указанного раствора и воды для инъекций в соотношениях 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4 (90%, 80%, 70% и 60%, соответственно), в качестве образцов для построения калибровочной кривой, нанося 10 мкл каждого из образцов для построения калибровочной кривой на колонку для ВЭЖХ для измерения площади пиков, строя график на основании измеренных значений соответствующих образцов для построения калибровочной кривой, с теоретическими значениями содержания (%) на горизонтальной оси (X) и значениями площади пика на вертикальной оси (Y), получая линию регрессии (Y=aX+b) (калибровочную кривую) методом наименьших квадратов и сопоставляя значение площади пика для тестируемой композиции, измеренное методом ВЭЖХ в тех же условиях, с калибровочной кривой для определения теоретического содержания (%). Содержание PK-0051 в тестируемой композиции 172 определяли способом, аналогичным тому, который описан выше, за исключением того, для ВЭЖХ использовали 1 мкл.
3. Результаты
Результаты приведены на Фиг. 12 и Фиг. 13. Результаты показали, что заметное изменение содержания отсутствовало даже в случае хранения при 60°C в течение 4 недель. Полученные результаты продемонстрировали, что PK-0051-содержащие композиции с концентрациями 1 мг/мл и 10 мг/мл (pH 6,5) имеют высокую стабильность.
Пример 5 (Оценка стабильности PK-0051-содержащей композиции (pH 6,0))
Готовили PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,0) и оценивали стабильность.
1. Тестируемая композиция
Гидрат лимонной кислоты (21,014 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,1 M раствор лимонной кислоты. Аналогично, цитрат тринатрия дигидрат (29,41 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,1 M раствор цитрата натрия. 0,1 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 6,0, получая 0,1 M цитратный буфер (pH 6,0). PK-0051 (347 мг), синтезированную, как описано в примере получения 1, растворяли в воде для инъекций (5 мл). В данный раствор (0,144 мл) добавляли воду для инъекций (4,856 мл) и 0,1 M цитратный буфер (pH 6,0) (5 мл), и смесь перемешивали. Композицию пропускали через 0,22-мкм фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ), получая PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,0).
Используя PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,0) в качестве тестируемой композиции 173, оценивали стабильность.
тестируемая композиция 173: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (1 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемую композицию 173 разливали в пять 5-мл стеклянных флаконов, в каждый по 1 мл композиции, один флакон хранили при 4°C и четыре флакона хранили в камерах для теста на стабильность при 60°C. Измерения для тестируемой композиции проводили методом ВЭЖХ каждую неделю в течение 4 недель. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод измерения и метод расчета содержания были аналогичны тем, которые использовали в примере 1.
3. Результаты
Результаты приведены на Фиг. 14. Результаты показали, что заметное изменение содержания отсутствовало даже в случае хранения при 60°C в течение 4 недель. Полученные результаты продемонстрировали, что PK-0051-содержащая композиция с концентрацией 1 мг/мл (pH 6,0) имеет высокую стабильность.
Пример 6 (Ингибирующий эффект на легочный фиброз в мышиной модели спонтанного легочного фиброза)
С использованием мышиной модели спонтанного легочного фиброза (трансгенная мышь с TGF-β1 человека, описанная в Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 2012, 46(3), 397-406 и PLoS One, 2012, 7(8): e42655, далее в настоящем документе называемая TG мышь), подтверждали ингибирующий эффект композиции по настоящему изобретению на легочный фиброз. Вышеуказанный эффект подтверждали, используя количество гидроксипролина в легочной ткани в качестве показателя в соответствии с методом, описанным в PLoS One, 2012 (ссылка приведена выше).
1. Тестируемая композиция
PK-0051-содержащую композицию с концентрацией 10 мг/мл (pH 6,5), полученную в примере 4, разбавляли 0,05 M цитратным буфером (pH 6,5) и использовали в качестве тестируемой композиции. Разбавление выполняли, исходя из массы тела TG мышей в день введения тестируемой композиции.
2. Разделение животных на группы и введение тестируемой композиции
С использованием прибора Micro CT (R_mCT2, производства Rigaku Corporation) оценивали фиброз в легких TG мышей, и мышей разделяли на группы таким образом, чтобы степень легочного фиброза и масса тела животных в момент разделения на группы были эквивалентными среди соответствующих групп.
Описание соответствующих групп введения приведено далее. В каждой группе введения использовали 11 самцов мышей. Под анестезией изофлураном вводили тестируемую композицию в общей сложности 4 раза в трахею TG мышей с использованием микрораспылителя (MSA-250-M: производства PENNCENTURY).
- группа введения 1
0,05 M цитратный буфер (pH 6,5) вводили TG мышам один раз/неделю.
- группа введения 2
тестируемую композицию вводили TG мышам в дозе 5 мг/кг массы тела один раз/две недели.
- группа введения 3
тестируемую композицию вводили TG мышам в дозе 5 мг/кг массы тела один раз/неделю.
3. Сбор образцов легочной ткани
Для анестезии TG мышам внутрибрюшинно вводили пентобарбитал (1,22 мг/150 мкл/мышь - 1,62 мг/200 мкл/мышь), собирали образцы крови, парные легкие выделяли и замораживали для получения гомогенизированных образцов.
4. Количественное определение чTGF-β1 в легочной ткани
Парные легкие гомогенизировали в клеточном дезинтеграторе с гранулами (MS-100, производства TOMY SEIKO CO., LTD.) и получали супернатант центрифугированием. Уровень чTGF-β1 в супернатанте определяли с использованием набора для определения TGF-β1 человека методом ELISA (производства BD).
5. Количественное определение гидроксипролина в легочной ткани
Парные легкие после гомогенизации сушили, инкубируя при 110°C в течение ночи, и вновь тонко измельчали при помощи клеточного дезинтегратора с гранулами. К измельченным парным легким добавляли 6Н HCl (1 мл) и смесь инкубировали в вытяжном шкафу при 110°C в течение ночи. Затем смесь инкубировали в вытяжном шкафу при 110°C в течение ночи. В смесь добавляли 2 мл PBS, инкубировали при 60°C в течение 1 часа и пропускали через фильтр, получая образец для измерения количества гидроксипролина. Количество гидроксипролина определяли методом, описанным в PLoS One. 2012; 7(8): e42655.
6. Результаты
Результаты приведены на Фиг. 15 и Фиг. 16. На Фиг. 15 приведен график, показывающий уровень TGF-β1 у животных в каждой группе введения, при этом на вертикальной оси указан уровень TGF-β1 в легочной ткани. На Фиг. 16 приведен график, показывающий количество гидроксипролина у животных в каждой группе введения, при этом на вертикальной оси указано количество гидроксипролина в легочной ткани. У TG мышей в группе 3 введения раствора молекулы нуклеиновой кислоты (0,1 мг/кг) уровень TGF-β1 и количество гидроксипролина в легочной ткани были значительно снижены по сравнению с TG мышами в группе 1 введения 0,05 M цитратного буфера (pH 6,5).
Полученные результаты показали, что PK-0051, представляющая собой молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению, ингибирует экспрессию целевого TGF-β1 также in vivo и ингибирует легочный фиброз.
Пример 7 (Оценка стабильности PK-0051-содержащих композиций с концентрациями 10, 20, 40 и 80 мг/мл (pH 6,0))
Готовили PK-0051-содержащие композиции с концентрациями 10, 20, 40 и 80 мг/мл (pH 6,0) и оценивали их стабильность.
1. Тестируемая композиция
Тестируемую композицию 174 готовили следующим образом. Гидрат лимонной кислоты (105,07 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,5 M раствор лимонной кислоты. Аналогично, цитрат тринатрия дигидрат (147,05 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,5 M раствор цитрата натрия. 0,5 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,5 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 6,0, получая 0,5 M цитратный буфер (pH 6,0). PK-0051 (840 мг) растворяли в воде для инъекций (8 мл) и использовали в качестве маточного раствора. 4,02 мл воды для инъекций и 0,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли к 0,48 мл маточного раствора, смесь перемешивали и пропускали через 0,22-мкм фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ).
Тестируемую композицию 175 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 174, за исключением того, что 3,55 мл воды для инъекций и 0,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 0,95 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 176 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 174, за исключением того, что 2,6 мл воды для инъекций и 0,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1,9 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 177 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 174, за исключением того, что 0,69 мл воды для инъекций и 0,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 3,81 мл маточного раствора.
тестируемая композиция 174: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (10 мг/мл)
тестируемая композиция 175: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (20 мг/мл)
тестируемая композиция 176: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (40 мг/мл)
тестируемая композиция 177: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (80 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 174-177, соответственно, разливали в четыре 5-мл стеклянных флакона, в каждый по 1 мл композиции, и хранили в камерах для теста на стабильность при 60°C. Тестируемые композиции доставали каждую неделю и разбавляли в 10 раз. Проводили измерения методом ВЭЖХ, используя 10 мкл тестируемой композиции 174, 5 мкл тестируемой композиции 175, 3 мкл тестируемой композиции 176 и 2 мкл тестируемой композиции 177. Измерения проводили до недели 4. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод расчета содержания и метод измерения описаны ниже.
Используя раствор (100%), полученный путем разведения в 10 раз тестируемой композиции 174, хранящейся отдельно при 4°C, и растворов, полученных путем смешивания указанного раствора и воды для инъекций в соотношениях 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4 (90%, 80%, 70% и 60%, соответственно), в качестве образцов для построения калибровочной кривой, 10 мкл каждого из образцов для построения калибровочной кривой наносили на колонку для ВЭЖХ для измерения площади пиков. Линию регрессии (Y=aX+b) (калибровочную кривую) получали методом наименьших квадратов, строя график на основании измеренных значений соответствующих образцов для построения калибровочной кривой, с теоретическими значениями содержания (%) на горизонтальной оси (X) и значениями площади пика на вертикальной оси (Y). Значение площади пика для тестируемой композиции 174, измеренное методом ВЭЖХ в тех же условиях, сопоставляли с калибровочной кривой для определения теоретического содержания (%). Содержание для тестируемой композиции 175 определяли способом, аналогичным вышеописанному способу, за исключением того, что для ВЭЖХ использовали каждый образец для построения калибровочной кривой (5 мкл), полученный с использованием тестируемой композиции 175. Содержание для тестируемой композиции 176 определяли способом, аналогичным вышеописанному способу, за исключением того, что для ВЭЖХ использовали каждый образец для построения калибровочной кривой (3 мкл), полученный с использованием тестируемой композиции 176. Содержание для тестируемой композиции 177 определяли способом, аналогичным вышеописанному способу, за исключением того, что для ВЭЖХ использовали каждый образец для построения калибровочной кривой (2 мкл), полученный с использованием тестируемой композиции 177.
Метод измерения
Измерения образцов для построения калибровочной кривой (60% - 100%) и соответствующих тестируемых композиций проводили в следующих условиях:
Ионообменная ВЭЖХ
Измерительный прибор: система для ВЭЖХ LC-20A SHIMAZU (АО-ВЭЖХ) производства Shimadzu Corporation
Детектор: спектрофотометр для измерения поглощения в ультрафиолетовой области (измерение при длине волны: 260 нм)
Колонка: DNAPac PA-100 (4×250 мм)
Температура колонки: 80°C
Подвижная фаза A: 25 мМ трис-HCl (pH 8,0), 8 M мочевина, 10% ацетонитрила
Подвижная фаза B: подвижная фаза A, 700 мМ перхлорат натрия моногидрат
Подача подвижной фазы: соотношение при смешивании подвижной фазы A и подвижной фазы B изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (Таблица 4).
Таблица 4
| Время (мин) после впрыска | Подвижная фаза A (об%) | Подвижная фаза B (об%) |
| 0→20 | 90→60 | 10→40 |
поток: 1,0 мл/мин
3. Результаты
Результаты приведены в Таблице 5 и на Фиг. 17. После хранения при 60°C в течение 4 недель содержание PK-0051 составляло примерно 97%, когда концентрация PK-0051 составляла 10 мг/мл, примерно 95%, когда концентрация составляла 20 мг/мл, примерно 91%, когда концентрация составляла 40 мг/мл, и примерно 85%, когда концентрация составляла 80 мг/мл. Полученные результаты показали, что уменьшение содержания относительно содержания в момент начала хранения возрастает при возрастании концентрации. Напротив, когда концентрация PK-0051 составляла 10 мг/мл или 20 мг/мл, уменьшение содержания относительно содержания в момент начала хранения было менее 10%. Кроме того, даже при концентрации PK-0051 80 мг/мл, в случае которой содержание после хранения было самым низким, уменьшение содержания составляло примерно 15%. Таким образом, было показано, что PK-0051 имеет высокую стабильность даже в самых жестких условиях хранения в течение 4 недель при 60°C.
Таблица 5
| Период хранения (недели) | Содержание (%)PK-0051 | |||
| 10 мг/мл | 20 мг/мл | 40 мг/мл | 80 мг/мл | |
| 0 | 100,20 | 100,05 | 99,67 | 98,50 |
| 1 | 98,42 | 99,39 | 99,34 | 101,43 |
| 2 | 99,41 | 99,20 | 98,38 | 94,01 |
| 3 | 97,63 | 97,79 | 95,81 | 91,48 |
| 4 | 96,63 | 94,95 | 91,35 | 84,94 |
Пример 8 (Оценка стабильности (фотостабильности) PK-0051-содержащей композиции с концентрацией 1 мг/мл (pH 5,5, 6,0 и 6,5))
Стабильность PK-0051 вод воздействием света оценивали с использованием прозрачных стеклянных флаконов и флаконов из темного стекла, в каждом из которых находилась PK-0051-содержащая композиция, и которые были дополнительно упакованы в бумажные коробки.
1. Тестируемая композиция
Тестируемую композицию 178 готовили следующим образом. Гидрат лимонной кислоты (21,014 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,1 M раствор лимонной кислоты. Аналогично, цитрат тринатрия дигидрат (29,41 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,1 M раствор цитрата натрия. 0,1 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 5,5, получая 0,1 M цитратный буфер (pH 5,5). PK-0051 (210 мг) растворяли в воде для инъекций (10 мл) и использовали в качестве маточного раствора. 9,5 мл воды для инъекций и 10,5 мл 0,1 M цитратного буфера (pH 5,5) добавляли к 1 мл маточного раствора, смесь перемешивали и пропускали через 0,22-мкм фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ).
Тестируемую композицию 179 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 178, за исключением того, что 0,1 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 6,0, получая 0,1 M цитратный буфер (pH 6,0), и 9,5 мл воды для инъекций и 10,5 мл 0,1 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 180 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 178, за исключением того, что 0,1 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,1 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 6,5, получая 0,1 M цитратный буфер (pH 6,5), и 9,5 мл воды для инъекций и 10,5 мл 0,1 M цитратного буфера (pH 6,5) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
тестируемая композиция 178: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 5,5)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 179: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (1 мг/мл)
тестируемая композиция 180: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,5)), (1 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 178-180, соответственно, разливали в десять 5-мл прозрачных стеклянных флаконов и десять 5-мл флаконов из темного стекла (прозрачные емкости и непрозрачные емкости). Кроме того, прозрачные емкости и непрозрачные емкости, аналогично содержащие тестируемые композиции 178-180, упаковывали в бумажные коробки (вторичную упаковку для прозрачных емкостей и вторичную упаковку для непрозрачных емкостей). Их хранили в камерах для теста на стабильность при 25°C/60%RH под флуоресцентной лампой дневного света (освещенность 1580 люкс) с лампой D65 в качестве источника света до того момента, когда общая световая экспозиция достигала 1,2 миллиона люкс⋅час (период хранения 32 дня, общая световая экспозиция 1213743 люкс⋅час). Когда общая световая экспозиция достигала 0,3 миллиона люкс⋅час, 0,6 миллиона люкс⋅час, 0,9 миллиона люкс⋅час и 1,2 миллиона люкс⋅час, тестируемые композиции доставали и использовали по 10 мкл из них для измерений методом обращенно-фазовой ВЭЖХ и ионообменной ВЭЖХ. Рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод расчета содержания и метод измерения описаны ниже.
Тестируемую композицию 178 (100%), полученную, как описано выше (прозрачные емкости, непрозрачные емкости, вторичная упаковка для прозрачных емкостей и вторичная упаковка для непрозрачных емкостей), и хранящуюся в темном месте при 4°C, и воду для инъекций смешивали в соотношениях 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4, и растворы (90%, 80%, 70% и 60%) использовали в качестве образцов для построения калибровочной кривой. Каждый образец для построения калибровочной кривой (10 мкл) наносили на колонку для обращенно-фазовой ВЭЖХ и ионообменной ВЭЖХ, и измеряли площадь пика. Линию регрессии (Y=aX+b) (калибровочную кривую) получали методом наименьших квадратов, строя график на основании измеренных значений каждого образца для построения калибровочной кривой, с теоретическими значениями содержания (%) на горизонтальной оси (X) и значениями площади пика на вертикальной оси (Y). Значение площади пика для тестируемой композиции 178, измеренное методом обращенно-фазовой ВЭЖХ и ионообменной ВЭЖХ в тех же условиях, сопоставляли с калибровочной кривой для определения теоретического содержания (%). Содержание для тестируемых композиций 179 и 180 определяли способом, аналогичным описанному выше способу.
Метод измерения
Измерения образцов для построения калибровочной кривой (60% - 100%) и каждой из тестируемых композиций проводили в следующих условиях. Измерения методом ионообменной ВЭЖХ проводили способом, аналогичным способу примера 7.
Обращенно-фазовая ВЭЖХ
Измерительный прибор: система для ВЭЖХ LC-10A SHIMAZU (ОФ-ВЭЖХ) производства Shimadzu Corporation
Детектор: спектрофотометр для измерения поглощения в ультрафиолетовой области (измерение при длине волны: 260 нм)
Колонка: X-Bridge OST C18 (2,5 мкм, 4,6×50 мм)
Температура колонки: 40°C
Подвижная фаза A: 50 мМ ТЭАА (pH 7,0), 0,5% ацетонитрила
Подвижная фаза B: 100% ацетонитрила
Подача подвижной фазы: соотношение при смешивании подвижной фазы A и подвижной фазы B изменяли следующим образом для контроля градиента концентрации (Таблица 6).
Таблица 6
| Время (мин) после впрыска | Подвижная фаза A (об%) | Подвижная фаза B (об%) |
| 0→12 | 100→60 | 0→40 |
поток: 1,0 мл/мин
3. Результаты
Результаты приведены в Таблицах 7-9 и на Фиг. 18-23. Из полученных результатов стало очевидно, что тестируемые композиции демонстрировали отсутствие заметных изменений содержания при определении методом обращенно-фазовой ВЭЖХ или ионообменной ВЭЖХ и являются стабильными под воздействием света. На основании данных результатов можно сделать вывод, что композиция по настоящему изобретению не теряет качества препарата под воздействием света, даже находясь в условиях освещенности, составляющей 1,2 миллиона люкс⋅час, на протяжении периода времени от производства до использования, и с ней можно обращаться так же, как и с не подвергнутыми воздействию света препаратами. Кроме того, считается, что вместо флаконов из темного стекла могут быть использованы более дешевые флаконы из прозрачного стекла.
Таблица 7
Тест на фотостабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 5,5)
| Образец | Люкс⋅час | Содержание (%)PK-0051 | |
| Ионообменная ВЭЖХ | Обращенно-фазовая ВЭЖХ | ||
| Прозрачная емкость темное место при 4°C |
0 | 101,55 | 99,13 |
| Прозрачная емкость 0,05 M цитратный буфер (pH 5,5) |
30 | 101,10 | 100,95 |
| 60 | 100,85 | 99,50 | |
| 90 | 100,28 | 96,83 | |
| 120 | 99,73 | 98,70 | |
| Прозрачная емкость с вторичной упаковкой 0,05 M цитратный буфер (pH 5,5) |
30 | 102,32 | 99,92 |
| 60 | 102,30 | 100,77 | |
| 90 | 101,86 | 99,13 | |
| 120 | 102,76 | 99,68 | |
| Непрозрачная емкость 0,05 M цитратный буфер (pH 5,5) |
30 | 101,99 | 100,38 |
| 60 | 101,79 | 100,26 | |
| 90 | 101,61 | 100,03 | |
| 120 | 102,23 | 100,60 | |
| Непрозрачная емкость с вторичной упаковкой 0,05 M цитратный буфер (pH 5,5) |
30 | 101,79 | 100,35 |
| 60 | 101,87 | 100,52 | |
| 90 | 102,43 | 99,70 | |
| 120 | 102,20 | 99,12 | |
Таблица 8
Тест на фотостабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)
| Образец | Люкс⋅час | Содержание (%)PK-0051 | |
| Ионообменная ВЭЖХ | Обращенно-фазовая ВЭЖХ | ||
| Прозрачная емкость темное место при 4°C |
0 | 102,83 | 98,35 |
| Прозрачная емкость 0,05 M цитратный буфер (pH 6,0) |
30 | 102,24 | 98,83 |
| 60 | 101,65 | 97,75 | |
| 90 | 100,57 | 98,09 | |
| 120 | 102,62 | 97,93 | |
| Прозрачная емкость с вторичной упаковкой 0,05 M цитратный буфер (pH 6,0) |
30 | 102,41 | 98,21 |
| 60 | 102,35 | 99,07 | |
| 90 | 103,23 | 98,07 | |
| 120 | 103,00 | 99,18 | |
| Непрозрачная емкость 0,05 M цитратный буфер (pH 6,0) |
30 | 102,46 | 98,44 |
| 60 | 102,17 | 98,60 | |
| 90 | 102,94 | 97,98 | |
| 120 | 104,15 | 99,33 | |
| Непрозрачная емкость с вторичной упаковкой 0,05 M цитратный буфер (pH 6,0) |
30 | 103,70 | 98,52 |
| 60 | 102,12 | 98,68 | |
| 90 | 103,16 | 98,83 | |
| 120 | 104,11 | 98,65 | |
Таблица 9
Тест на фотостабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,5)
| Образец | Люкс⋅час | Содержание (%)PK-0051 | |
| Ионообменная ВЭЖХ | Обращенно-фазовая ВЭЖХ | ||
| Прозрачная емкость темное место при 4°C |
0 | 102,41 | 98,20 |
| Прозрачная емкость 0,05 M цитратный буфер (pH 6,5) |
30 | 102,57 | 98,53 |
| 60 | 102,12 | 98,77 | |
| 90 | 103,14 | 97,82 | |
| 120 | 101,23 | 98,71 | |
| Прозрачная емкость с вторичной упаковкой 0,05 M цитратный буфер (pH 6,5) |
30 | 102,15 | 98,26 |
| 60 | 101,71 | 98,92 | |
| 90 | 102,85 | 98,00 | |
| 120 | 102,54 | 98,20 | |
| Непрозрачная емкость 0,05 M цитратный буфер (pH 6,5) |
30 | 101,83 | 99,63 |
| 60 | 103,21 | 98,62 | |
| 90 | 103,97 | 99,12 | |
| 120 | 102,73 | 98,74 | |
| Непрозрачная емкость с вторичной упаковкой 0,05 M цитратный буфер (pH 6,5) |
30 | 103,23 | 98,33 |
| 60 | 103,04 | 98,36 | |
| 90 | 102,43 | 98,85 | |
| 120 | 101,85 | 98,37 | |
Пример 9 (Оценка стабильности PK-0051-содержащей композиции с коэффициентом осмотического давления, скорректированным изотоническим средством)
С использованием различных изотонических средств (NaCl, KCl, глицерин, D-маннит, лактит, D-сорбит и сахароза) коэффициент осмотического давления PK-0051-содержащей композиции доводили до 1±0,1 и оценивали стабильность.
1. Тестируемая композиция
Тестируемую композицию 181 готовили следующим образом. Гидрат лимонной кислоты (105,07 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,5 M раствор лимонной кислоты. Аналогично, цитрат тринатрия дигидрат (147,05 г) растворяли в воде для инъекций (1 л), получая 0,5 M раствор цитрата натрия. 0,5 M раствор лимонной кислоты добавляли к 0,5 M раствору цитрата натрия для доведения значения pH до 6,0, получая 0,5 M цитратный буфер (pH 6,0). 1 г NaCl растворяли в 10 мл воды для инъекций, получая 10% раствор. PK-0051 (210 мг) растворяли в воде для инъекций (140 мл) и использовали в качестве маточного раствора. 0,68 мл 10% раствора NaCl, 11,82 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли к 1 мл маточного раствора, смесь перемешивали и пропускали через 0,22-мкм фильтр из поливинилиденфторида (ПВДФ).
Тестируемую композицию 182 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что KCl использовали вместо NaCl, и 0,85 мл 10% раствора KCl, 11,65 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 183 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что глицерин использовали вместо NaCl, и 1,8 мл 10% раствора глицерина, 10,7 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 184 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что D-маннит использовали вместо NaCl, и 3,75 мл 10% раствора D-маннита, 8,75 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 185 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что лактит использовали вместо NaCl, и 7,05 мл 10% раствора лактита, 5,45 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 186 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что D-сорбит использовали вместо NaCl, и 3,75 мл 10% раствора D-сорбита, 8,75 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 187 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что сахарозу использовали вместо NaCl, и 7 мл 10% раствора сахарозы, 5,5 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 188 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что 12,5 мл воды для инъекций и 1,5 мл 0,5 M цитратного буфера (pH 6,0) добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
Тестируемую композицию 189 готовили способом, аналогичным способу, используемому для приготовления тестируемой композиции 181, за исключением того, что 12,65 мл воды для инъекций и 1,35 мл 10% раствора NaCl добавляли и смешивали с 1 мл маточного раствора.
тестируемая композиция 181: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/NaCl (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 182: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/KCl (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 183: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/глицерин (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 184: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/D-маннит (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 185: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/лактит (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 186: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/D-сорбит (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 187: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/сахароза (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 188: PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (0,1 мг/мл)
тестируемая композиция 189: PK-0051 (NaCl (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл)
2. Метод оценки
Тестируемые композиции 181-189, соответственно, разливали в четырнадцать 5-мл стеклянных флакона, в каждый по 1 мл композиции, и хранили в камерах для теста на стабильность при 25°C/60%RH, 40°C/75%RH и 60°C. Через одну и две недели проводили измерения для каждой из тестируемых композиций (30 мкл) методом обращенно-фазовой ВЭЖХ и ионообменной ВЭЖХ.
Тестируемые композиции 181-189 подвергали ускоренному испытанию стабильности в условиях (105°C и 121°C в течение 5 мин и 15 мин), соответствующих хранению при 60°C в течение 4 недель. Тестируемые композиции 181-189, соответственно, подвергали обработке в автоклаве в условиях четырех видов: 105°C в течение 5 мин, 105°C в течение 15 мин, 121°C в течение 5 мин и 121°C в течение 15 мин, и по 30 мкл использовали для измерений методом обращенно-фазовой ВЭЖХ и ионообменной ВЭЖХ.
После измерений методом ВЭЖХ рассчитывали содержание PK-0051 и оценивали стабильность на основании уменьшения содержания (%) относительно содержания в момент начала хранения. Метод расчета содержания и метод измерения описаны ниже.
Растворы (90%, 80%, 70% и 60%), полученные путем смешивания тестируемой композиции 188 (100%) и воды для инъекций в соотношении 9:1, 8:2, 7:3 и 6:4, соответственно, использовали в качестве образцов для построения калибровочной кривой, 30 мкл каждого из образцов для построения калибровочной кривой наносили на ВЭЖХ для измерения площади пиков, строили график на основании измеренных значений соответствующих образцов для построения калибровочной кривой, с теоретическими значениями содержания (%) на горизонтальной оси (X) и значениями площади пика на вертикальной оси (Y), линию регрессии (Y=aX+b) (калибровочную кривую) получали методом наименьших квадратов и сопоставляли значение площади пика для тестируемой композиции, измеренное методом ВЭЖХ в тех же условиях, что и образцы для построения калибровочной кривой, с калибровочной кривой, определяя теоретическое содержание (%).
Метод измерения
Измерения образцов для построения калибровочной кривой (60% - 100%) и тестируемых композиций проводили в следующих условиях. Измерение методом ионообменной ВЭЖХ проводили методом измерения, аналогичным тому, который описан в примере 7. Измерение методом обращенно-фазовой ВЭЖХ проводили методом измерения, аналогичным тому, который описан в примере 8, за исключением того, что 50 мМ ТЭАА (pH 7,3) использовали в качестве подвижной фазы A и измерения проводили при длине волны 254 нм.
3. Результаты
Результаты приведены в Таблицах 10-18. Тестируемые композиции 181-188 продемонстрировали отсутствие заметного уменьшения содержания PK-0051 после хранения при 25°C, 40°C или 60°C в течение 2 недель. В тестируемых композициях 181-188 было отмечено уменьшение в пределах примерно 15% содержания PK-0051 после обработки в автоклаве (105°C и 121°C в течение 5 мин и 15 мин), таким образом, композиции показали высокую стабильность. С другой стороны, тестируемая композиция 189 продемонстрировала отсутствие заметного уменьшения содержания PK-0051 после хранения при 25°C, 40°C или 60°C в течение 2 недель; однако было обнаружено значительное уменьшение содержания PK-0051 после обработки в автоклаве (121°C в течение 5 мин и 15 мин) (уменьшение примерно 24% в случае 121°C в течение 5 мин, уменьшение примерно 41% в случае 121°C в течение 15 мин). Полученные результаты также показали, что стабильность уменьшается вследствие воздействия NaCl в отсутствие 0,05 M цитратного буфера (pH 6,0). Приведенные выше результаты продемонстрировали, что изотоническое средство не приводит к уменьшению стабильности PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0).
Таблица 10
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/NaCl (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 181 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/NaCl (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,70 | 103,70 |
| 1 неделя | 102,08 | 101,15 | ||
| 2 недели | 102,73 | 101,45 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,70 | 103,70 | |
| 1 неделя | 102,37 | 101,19 | ||
| 2 недели | 101,32 | 101,02 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,70 | 103,70 | |
| 1 неделя | 102,36 | 100,99 | ||
| 2 недели | 101,39 | 98,83 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,70 | 103,70 | |
| 5 мин | 99,43 | 101,67 | ||
| 15 мин | 98,06 | 97,32 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,70 | 103,70 | |
| 5 мин | 95,16 | 96,58 | ||
| 15 мин | 90,00 | 86,90 | ||
Таблица 11
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/KCl (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 182 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/KCl (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,05 | 102,22 |
| 1 неделя | 101,41 | 98,79 | ||
| 2 недели | 102,24 | 100,44 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,05 | 102,22 | |
| 1 неделя | 101,70 | 100,47 | ||
| 2 недели | 102,07 | 99,52 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,05 | 102,22 | |
| 1 неделя | 101,46 | 100,02 | ||
| 2 недели | 100,94 | 98,44 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,05 | 102,22 | |
| 5 мин | 99,65 | 99,94 | ||
| 15 мин | 97,27 | 96,70 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,05 | 102,22 | |
| 5 мин | 95,44 | 95,16 | ||
| 15 мин | 88,63 | 85,79 | ||
Таблица 12
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/глицерин (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 183 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/глицерин (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,27 | 102,24 |
| 1 неделя | 101,73 | 101,23 | ||
| 2 недели | 102,55 | 97,82 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,27 | 102,24 | |
| 1 неделя | 101,52 | 101,35 | ||
| 2 недели | 102,98 | 102,18 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,27 | 102,24 | |
| 1 неделя | 102,09 | 99,25 | ||
| 2 недели | 100,87 | 99,72 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,27 | 102,24 | |
| 5 мин | 100,22 | 100,87 | ||
| 15 мин | 98,78 | 97,78 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,27 | 102,24 | |
| 5 мин | 95,17 | 95,77 | ||
| 15 мин | 91,04 | 86,41 | ||
Таблица 13
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/D-маннит (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 184 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/D-маннит (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,86 | 102,32 |
| 1 неделя | 102,42 | 101,18 | ||
| 2 недели | 102,59 | 98,52 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,86 | 102,32 | |
| 1 неделя | 102,40 | 101,57 | ||
| 2 недели | 102,85 | 100,76 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,86 | 102,32 | |
| 1 неделя | 102,00 | 101,13 | ||
| 2 недели | 101,20 | 100,12 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,86 | 102,32 | |
| 5 мин | 100,35 | 100,79 | ||
| 15 мин | 98,86 | 97,25 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,86 | 102,32 | |
| 5 мин | 95,58 | 95,85 | ||
| 15 мин | 90,14 | 86,95 | ||
Таблица 14
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/лактит (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 185 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/лактит (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 102,18 | 102,70 |
| 1 неделя | 102,37 | 101,06 | ||
| 2 недели | 101,12 | 102,50 | ||
| 40°C | Начало хранения | 102,18 | 102,70 | |
| 1 неделя | 103,15 | 101,60 | ||
| 2 недели | 101,84 | 101,04 | ||
| 60°C | Начало хранения | 102,18 | 102,70 | |
| 1 неделя | 102,63 | 101,45 | ||
| 2 недели | 101,62 | 100,04 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 102,18 | 102,70 | |
| 5 мин | 100,15 | 100,79 | ||
| 15 мин | 99,01 | 98,17 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 102,18 | 102,70 | |
| 5 мин | 95,54 | 96,00 | ||
| 15 мин | 90,80 | 87,74 | ||
Таблица 15
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/D-сорбит (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 186 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/D-сорбит (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,42 | 102,53 |
| 1 неделя | 101,93 | 100,91 | ||
| 2 недели | 102,21 | 99,73 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,42 | 102,53 | |
| 1 неделя | 102,16 | 101,24 | ||
| 2 недели | 101,99 | 102,88 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,42 | 102,53 | |
| 1 неделя | 102,01 | 100,98 | ||
| 2 недели | 100,04 | 99,18 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,42 | 102,53 | |
| 5 мин | 99,66 | 100,91 | ||
| 15 мин | 98,05 | 96,94 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,42 | 102,53 | |
| 5 мин | 95,35 | 94,84 | ||
| 15 мин | 90,10 | 85,32 | ||
Таблица 16
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)/сахароза (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 187 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)/сахароза (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 102,10 | 103,37 |
| 1 неделя | 102,49 | 101,67 | ||
| 2 недели | 101,15 | 102,00 | ||
| 40°C | Начало хранения | 102,10 | 103,37 | |
| 1 неделя | 102,60 | 99,59 | ||
| 2 недели | 102,90 | 101,39 | ||
| 60°C | Начало хранения | 102,10 | 103,37 | |
| 1 неделя | 102,56 | 103,63 | ||
| 2 недели | 101,52 | 101,59 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 102,10 | 103,37 | |
| 5 мин | 100,44 | 101,87 | ||
| 15 мин | 99,24 | 96,84 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 102,10 | 103,37 | |
| 5 мин | 95,52 | 95,98 | ||
| 15 мин | 90,15 | 87,35 | ||
Таблица 17
Термальная стабильность PK-0051 в 0,05 M цитратном буфере (pH 6,0)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 188 PK-0051 (0,05 M цитратный буфер (pH 6,0)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,72 | 100,97 |
| 1 неделя | 102,32 | 101,09 | ||
| 2 недели | 102,98 | 103,16 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,72 | 103,27 | |
| 1 неделя | 102,37 | 101,54 | ||
| 2 недели | 102,67 | 101,55 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,72 | 103,27 | |
| 1 неделя | 102,45 | 103,33 | ||
| 2 недели | 102,07 | 101,72 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,72 | 103,27 | |
| 5 мин | 100,51 | 100,92 | ||
| 15 мин | 99,04 | 97,67 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,72 | 103,27 | |
| 5 мин | 95,83 | 98,21 | ||
| 15 мин | 89,65 | 87,45 | ||
Таблица 18
Термальная стабильность PK-0051 в NaCl (коэффициент осмотического давления 1)
| Образец | Температура хранения или температура обработки в автоклаве | Период хранения | Содержание (%) PK-0051 | |
| обращенно-фазовая ВЭЖХ | ионообменная ВЭЖХ | |||
| Тестируемая композиция 189 PK-0051(NaCl (коэффициент осмотического давления 1)), (0,1 мг/мл) |
25°C | Начало хранения | 101,19 | 102,38 |
| 1 неделя | 101,13 | 100,86 | ||
| 2 недели | 101,98 | 101,07 | ||
| 40°C | Начало хранения | 101,19 | 102,38 | |
| 1 неделя | 101,71 | 101,30 | ||
| 2 недели | 101,89 | 100,17 | ||
| 60°C | Начало хранения | 101,19 | 102,38 | |
| 1 неделя | 99,57 | 100,41 | ||
| 2 недели | 95,09 | 91,67 | ||
| автоклав 105°C |
Начало хранения | 101,19 | 102,38 | |
| 5 мин | 95,59 | 96,12 | ||
| 15 мин | 93,82 | 94,94 | ||
| автоклав 121°C |
Начало хранения | 101,19 | 102,38 | |
| 5 мин | 78,25 | 75,92 | ||
| 15 мин | 62,71 | 58,85 | ||
ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ
В соответствии с настоящим изобретением, одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты PK-0051, способную ингибировать экспрессию TGF-β1, можно стабильно хранить в растворенном состоянии при температуре окружающей среды в течение длительного срока. Таким образом, настоящее изобретение чрезвычайно полезно тем, что оно позволяет иметь фармацевтический препарат на основе нуклеиновой кислоты, который удобно хранить и транспортировать, который не нуждается в повторном растворении для использования и чрезвычайно прост в обращении.
Данная заявка основана на патентной заявке № 2015-215207, поданной в Японии (дата подачи: 30 октября 2015 г.), полное содержание которой включено в настоящий документ.
Claims (45)
1. Композиция для ингибирования экспрессии гена TGF-β1, содержащая эффективное количество одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей из нуклеотидной последовательности 5'-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3'
(в последовательности P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I))
и буфер, которая имеет следующие характерные признаки:
(a) находится в форме раствора при температуре окружающей среды; и
(b) содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°C, относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения,
где буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 6,5, и
где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 40°C, относительной влажности 75% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 60°C в течение 4 недель составляет не менее 60% относительно содержания в момент начала хранения.
4. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержание молекулы нуклеиновой кислоты, подвергнутой общей световой экспозиции 1,2 миллиона люкс⋅час, составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения.
5. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5.
6. Композиция по любому из пп. 1-5, дополнительно содержащая изотоническое средство.
7. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что изотоническое средство представляет собой одно или более средств, выбранных из D-сорбита, хлорида натрия, глицерина, D-маннита, хлорида калия, лактита и сахарозы.
8. Композиция для профилактики или лечения легочного фиброза, содержащая эффективное количество одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей из нуклеотидной последовательности 5’-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3’
(в последовательности P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I))
и буфер, которая имеет следующие характерные признаки:
(a) находится в форме раствора при температуре окружающей среды; и
(b) содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°C, относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения,
где буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 6,5, и
где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
9. Композиция для профилактики или лечения острого повреждения легких, содержащая эффективное количество одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей из нуклеотидной последовательности 5’-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3’
(в последовательности P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I))
и буфер, которая имеет следующие характерные признаки:
(a) находится в форме раствора при температуре окружающей среды; и
(b) содержание молекулы нуклеиновой кислоты после хранения при 25°C, относительной влажности 60% в течение 4 недель составляет не менее 80% относительно содержания в момент начала хранения,
где буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 6,5, и
где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
10. Способ получения композиции по любому из пп. 1-9, включающий растворение вышеуказанной молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, поддерживающем pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 6,5, и хранение раствора при температуре окружающей среды,
где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
11. Способ по п. 10, где буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5.
12. Способ по п. 10 или 11, где композиция предназначена для ингибирования экспрессии гена TGF-β1.
13. Способ по п. 10 или 11, отличающийся тем, что композиция предназначена для профилактики или лечения легочного фиброза.
14. Способ по п. 10 или 11, отличающийся тем, что композиция предназначена для профилактики или лечения острого повреждения легких.
15. Способ стабилизации одноцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты, состоящей из нуклеотидной последовательности 5'-AGCAGAGUACACACAGCAUAUACC-P-GGUAUAUGCUGUGUGUACUCUGCUUC-P-G-3'
(в последовательности P означает линкер, являющийся производным пролина, который имеет следующую формулу (I))
в композиции, включающий растворение молекулы нуклеиновой кислоты в буфере, поддерживающем pH композиции на уровне не менее 4,6 и не более 6,5, и хранение раствора при температуре окружающей среды,
где буфер содержит лимонную кислоту и/или фосфорную кислоту.
16. Способ по п.15, где буфер поддерживает pH композиции на уровне не менее 5,5 и не более 6,5.
17. Способ по п. 15 или 16, где раствор представляет собой композицию для ингибирования экспрессии гена TGF-β1.
18. Способ по п. 15 или 16, отличающийся тем, что раствор представляет собой композицию для профилактики или лечения легочного фиброза.
19. Способ по п. 15 или 16, отличающийся тем, что раствор представляет собой композицию для профилактики или лечения острого повреждения легких.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2015215207 | 2015-10-30 | ||
| JP2015-215207 | 2015-10-30 | ||
| PCT/JP2016/082164 WO2017073767A1 (ja) | 2015-10-30 | 2016-10-28 | ＴＧＦ－β１遺伝子の発現を抑制する一本鎖核酸分子を安定に含有する組成物 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018119672A RU2018119672A (ru) | 2019-12-02 |
| RU2018119672A3 RU2018119672A3 (ru) | 2019-12-02 |
| RU2714257C2 true RU2714257C2 (ru) | 2020-02-13 |
Family
ID=58631737
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018119672A RU2714257C2 (ru) | 2015-10-30 | 2016-10-28 | КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ В СТАБИЛЬНОМ СОСТОЯНИИ ОДНОЦЕПОЧЕЧНУЮ МОЛЕКУЛУ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, КОТОРАЯ ПОДАВЛЯЕТ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА TGF-β1 |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10751426B2 (ru) |
| EP (1) | EP3369816B1 (ru) |
| JP (1) | JP6609637B2 (ru) |
| KR (1) | KR102099711B1 (ru) |
| CN (1) | CN108350457B (ru) |
| AU (1) | AU2016346703B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018008613A2 (ru) |
| CA (1) | CA3002786C (ru) |
| ES (1) | ES2988534T3 (ru) |
| IL (1) | IL258861B (ru) |
| MX (1) | MX2018005146A (ru) |
| PL (1) | PL3369816T3 (ru) |
| RU (1) | RU2714257C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201803410RA (ru) |
| WO (1) | WO2017073767A1 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI830718B (zh) * | 2018-02-09 | 2024-02-01 | 日商住友化學股份有限公司 | 核酸分子之製造方法 |
| BR112020017769A2 (pt) * | 2018-03-30 | 2021-01-05 | Toray Industries, Inc. | Método e kit para produzir uma molécula de rna de fita simples, e, molécula de oligorna de fita simples. |
| ES2981806T3 (es) * | 2018-10-02 | 2024-10-10 | Toray Industries | Método para producir moléculas de ARN monocatenario en horquilla |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2126262C1 (ru) * | 1992-09-17 | 1999-02-20 | Амген Боулдер Инк. | Фармацевтическая композиция |
| US20100099149A1 (en) * | 2006-10-06 | 2010-04-22 | Dna Genotek Inc. | Stabilizing compositions and methods for extraction of ribonucleic acid |
| WO2014059430A1 (en) * | 2012-10-14 | 2014-04-17 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Delivery of small interfering rna and micro rna through membrane-disruptive, responsive nanoscalle hydrogels |
| RU2553375C2 (ru) * | 2010-02-12 | 2015-06-10 | Интас Биофармасьютикалс Лимитед | Жидкий состав фолликулостимулирующего гормона |
| WO2015093495A1 (ja) * | 2013-12-16 | 2015-06-25 | 株式会社ボナック | ＴＧＦ－β１遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子 |
Family Cites Families (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4956727B2 (ja) * | 2005-08-30 | 2012-06-20 | 倉敷紡績株式会社 | Ｒｎａ分離精製方法 |
| TW201336514A (zh) | 2006-04-13 | 2013-09-16 | Alcon Res Ltd | ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）所媒介之與脾酪胺酸激酶相關之發炎症狀的抑制作用（二） |
| CA2709875C (en) | 2008-01-02 | 2019-07-16 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Improved compositions and methods for the delivery of nucleic acids |
| JP5608998B2 (ja) * | 2009-03-31 | 2014-10-22 | 東洋紡株式会社 | 保存安定性に優れた核酸増幅検出試薬キット |
| KR20180044433A (ko) * | 2010-03-24 | 2018-05-02 | 알엑스아이 파마슈티칼스 코포레이션 | 진피 및 섬유증성 적응증에서의 ｒｎａ 간섭 |
| US8785121B2 (en) | 2010-07-08 | 2014-07-22 | Bonac Corporation | Single-stranded nucleic acid molecule for controlling gene expression |
| ES2550487T3 (es) | 2010-07-08 | 2015-11-10 | Bonac Corporation | Molécula de ácido nucleico monocatenario para controlar la expresión génica |
| US8691782B2 (en) * | 2010-08-03 | 2014-04-08 | Bonac Corporation | Single-stranded nucleic acid molecule having nitrogen-containing alicyclic skeleton |
| ES2528285T3 (es) | 2010-08-03 | 2015-02-06 | Bonac Corporation | Molécula de ácido nucleico monocatenario que tiene esqueleto alicíclico que contiene nitrógeno |
| KR20190006576A (ko) | 2010-08-16 | 2019-01-18 | 오스트레일리안 뉴클리어 사이언스 앤드 테크놀로지 오가니제이션 | 생체분자의 전달을 위한 세라믹 입자를 포함하는 미립자 물질 및 미립자 물질을 포함하는 약학적 조성물 |
| AR083445A1 (es) * | 2010-10-14 | 2013-02-27 | Univ Mie | siARN CONTRA LA FIBROSIS |
| KR20130139254A (ko) | 2010-11-09 | 2013-12-20 | 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 피부 침투 및 세포 진입（ｓｐａｃｅ） 펩타이드 및 그의 사용방법 |
| JP5854595B2 (ja) | 2010-12-07 | 2016-02-09 | 株式会社Ｓｈｏｅｉ | ヘルメット用ラチェットバックル |
| WO2013077446A1 (ja) | 2011-11-26 | 2013-05-30 | 株式会社ボナック | 遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子 |
| SI2791160T1 (sl) * | 2011-12-16 | 2022-07-29 | Modernatx, Inc. | Sestave modificirane MRNA |
| CN110055247A (zh) | 2012-01-07 | 2019-07-26 | 株式会社博纳克 | 具有氨基酸骨架的单链核酸分子 |
| WO2013133393A1 (ja) | 2012-03-07 | 2013-09-12 | 学校法人東京医科大学 | Ｖｅｇｆ遺伝子の発現抑制用一本鎖核酸分子 |
| SI2828332T1 (sl) * | 2012-03-21 | 2017-09-29 | Engene, Inc. | Dvojno derivatizirani hitozan nanodelci in postopki za izdelavo in uporabo istih za in vivo transfer gena |
| CN102895190A (zh) * | 2012-10-16 | 2013-01-30 | 百奥迈科生物技术有限公司 | 脂质体制剂、制备方法及其应用 |
| CN105051064A (zh) | 2013-01-24 | 2015-11-11 | 葛兰素史克知识产权开发有限公司 | 抗TNF-α抗原结合蛋白 |
| CA2888286C (en) | 2013-03-06 | 2020-03-24 | Biomics Biotechnologies Co., Ltd. | Liposome formulation, its preparation and application |
| CN106068324B (zh) * | 2013-12-27 | 2020-12-29 | 株式会社博纳克 | 控制基因表达的人工匹配型miRNA及其用途 |
| SG11201705312PA (en) * | 2014-12-29 | 2017-07-28 | Bonac Corp | Composition containing nucleic acid molecule stably |
-
2016
- 2016-10-28 PL PL16859995.9T patent/PL3369816T3/pl unknown
- 2016-10-28 ES ES16859995T patent/ES2988534T3/es active Active
- 2016-10-28 MX MX2018005146A patent/MX2018005146A/es unknown
- 2016-10-28 US US15/771,305 patent/US10751426B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2016-10-28 EP EP16859995.9A patent/EP3369816B1/en active Active
- 2016-10-28 BR BR112018008613-4A patent/BR112018008613A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-10-28 JP JP2017547914A patent/JP6609637B2/ja active Active
- 2016-10-28 AU AU2016346703A patent/AU2016346703B2/en active Active
- 2016-10-28 RU RU2018119672A patent/RU2714257C2/ru active
- 2016-10-28 CA CA3002786A patent/CA3002786C/en active Active
- 2016-10-28 CN CN201680064120.5A patent/CN108350457B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2016-10-28 WO PCT/JP2016/082164 patent/WO2017073767A1/ja not_active Ceased
- 2016-10-28 KR KR1020187015234A patent/KR102099711B1/ko active Active
- 2016-10-28 SG SG11201803410RA patent/SG11201803410RA/en unknown
-
2018
- 2018-04-23 IL IL258861A patent/IL258861B/en unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2126262C1 (ru) * | 1992-09-17 | 1999-02-20 | Амген Боулдер Инк. | Фармацевтическая композиция |
| US20100099149A1 (en) * | 2006-10-06 | 2010-04-22 | Dna Genotek Inc. | Stabilizing compositions and methods for extraction of ribonucleic acid |
| RU2553375C2 (ru) * | 2010-02-12 | 2015-06-10 | Интас Биофармасьютикалс Лимитед | Жидкий состав фолликулостимулирующего гормона |
| WO2014059430A1 (en) * | 2012-10-14 | 2014-04-17 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Delivery of small interfering rna and micro rna through membrane-disruptive, responsive nanoscalle hydrogels |
| WO2015093495A1 (ja) * | 2013-12-16 | 2015-06-25 | 株式会社ボナック | ＴＧＦ－β１遺伝子発現制御のための一本鎖核酸分子 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HAMASAKI T. et al., Efficacy of a Novel Class of RNA Interference Therapeutic Agents, PLOS One, 2012, v. 7 (8), e42655, p. 1-15. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3002786A1 (en) | 2017-05-04 |
| US10751426B2 (en) | 2020-08-25 |
| RU2018119672A (ru) | 2019-12-02 |
| KR102099711B1 (ko) | 2020-04-14 |
| WO2017073767A1 (ja) | 2017-05-04 |
| AU2016346703B2 (en) | 2020-07-02 |
| CA3002786C (en) | 2021-09-07 |
| IL258861B (en) | 2021-12-01 |
| ES2988534T3 (es) | 2024-11-20 |
| HK1258326A1 (en) | 2019-11-08 |
| EP3369816A1 (en) | 2018-09-05 |
| AU2016346703A1 (en) | 2018-06-21 |
| CN108350457B (zh) | 2021-10-01 |
| KR20180066250A (ko) | 2018-06-18 |
| MX2018005146A (es) | 2018-08-23 |
| EP3369816A4 (en) | 2019-06-26 |
| CN108350457A (zh) | 2018-07-31 |
| SG11201803410RA (en) | 2018-05-30 |
| EP3369816B1 (en) | 2024-03-13 |
| RU2018119672A3 (ru) | 2019-12-02 |
| IL258861A (en) | 2018-06-28 |
| JP6609637B2 (ja) | 2019-11-20 |
| PL3369816T3 (pl) | 2024-07-22 |
| US20180339064A1 (en) | 2018-11-29 |
| JPWO2017073767A1 (ja) | 2018-10-04 |
| BR112018008613A2 (pt) | 2018-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6182262B2 (ja) | 抗がん剤を含む安定な水溶性医薬組成物 | |
| FI119639B (fi) | Menetelmä kiteisen vedettömän mykofenolaattimofetiilin ja sen intravenoosivalmisteen valmistamiseksi | |
| JP6832281B2 (ja) | バンコマイシンの水溶液製剤 | |
| ES2566787T3 (es) | Composición farmacéutica líquida que comprende nitisinona | |
| US20210251945A1 (en) | Compounds and pharmaceutical uses thereof | |
| RU2714257C2 (ru) | КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ В СТАБИЛЬНОМ СОСТОЯНИИ ОДНОЦЕПОЧЕЧНУЮ МОЛЕКУЛУ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, КОТОРАЯ ПОДАВЛЯЕТ ЭКСПРЕССИЮ ГЕНА TGF-β1 | |
| BR112019018615B1 (pt) | Composto antimicrobiano e sua composiqao farmaceutica | |
| ES2927948T3 (es) | Peptidomimético de horquilla beta con actividad inhibidora de elastasa y formas de dosificación en aerosol del mismo | |
| ES2399569T3 (es) | Composición farmacéutica líquida estable a base de trazodona | |
| JPH11507936A (ja) | ラモトリジン含有医薬組成物 | |
| US20160051679A1 (en) | Pemetrexed Formulation | |
| HK1258326B (en) | Composition stably containing single-stranded nucleic acid molecule that suppresses expression of tgf-beta1 gene | |
| US8815833B2 (en) | Stable amifostine liquid concentrate | |
| US20180289710A1 (en) | Pemetrexed formulations | |
| CN113491668B (zh) | 注射用药物组合制剂及其制备方法与应用 | |
| ES2356828T3 (es) | Preparados para gotas que comprenden dimentindeno. | |
| ES2350670B1 (es) | Composicion veterinaria de ketoprofeno | |
| CN104771371B (zh) | 4-(3,5-二甲氧苯基)-5-(3-羟基-4-甲氧基苯基)咪唑制剂 | |
| CN119606954A (zh) | 一种替韦立马组合物及其制备方法和应用 |