RU2708891C1 - Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота - Google Patents
Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота Download PDFInfo
- Publication number
- RU2708891C1 RU2708891C1 RU2018122231A RU2018122231A RU2708891C1 RU 2708891 C1 RU2708891 C1 RU 2708891C1 RU 2018122231 A RU2018122231 A RU 2018122231A RU 2018122231 A RU2018122231 A RU 2018122231A RU 2708891 C1 RU2708891 C1 RU 2708891C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- coronavirus
- adhesive
- att25
- antigens
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 76
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 30
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title abstract description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 34
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 claims abstract description 30
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims abstract description 29
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 22
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- DZHMRSPXDUUJER-UHFFFAOYSA-N [amino(hydroxy)methylidene]azanium;dihydrogen phosphate Chemical compound NC(N)=O.OP(O)(O)=O DZHMRSPXDUUJER-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract 2
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 229940031418 trivalent vaccine Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 34
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 12
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 12
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 4
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 2
- 241000702673 Bovine rotavirus Species 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 244000309714 Clostridium perfringens type C Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 108010020147 Protein Corona Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010067470 Rotavirus infection Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000010227 enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 1
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к вирусологии, и может быть использовано для получения вакцины против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота. Вакцина в качестве активного вещества содержит смесь инактивированной суспензии штамма ротавируса РМ, семейства Reoviridae, рода Rotavirus, инактивированной суспензии штамма коронавируса КЛ-2 семейства Coronaviridae, рода Coronavirus, с активностью каждого из вирусных штаммов 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины, выращенных в перевиваемой культуре клеток МДВК или ЛЭК, и адгезивных антигенов К99, F41, Атт25 бактерий Escherichia coli; очистку адгезивных антигенов К99, F41, Атт25 бактерий Escherichia coli, взятых в равном соотношении (1:1:1), с концентрацией 50-100 млдр микробных клеток в 1 см3 вакцины, проводят при увеличенной до 1,5-3,0 М концентрации раствора фосфатно-мочевинного буфера. Использование данного изобретения позволяет получить ассоциированную трехвалентную вакцину, проявляющую повышенную иммуногенность в ассоциации с адгезивными штаммами Escherichia coli. 1 з.п. ф-лы, 4 пр., 4 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к ветеринарной микробиологии и вирусологии.
Вакцина содержит активное вещество и целевые добавки.
В качестве активного вещества вакцина содержит смесь инактивированной суспензии штамма ротавируса РМ, семейства Reoviridae, рода Rotavirus (справка о депонировании №193/19 от 04.02.2004 г), инактивированной суспензии штамма коронавируса КЛ-2 семейства Coronaviridae, рода Coronavirus (справка о депонировании №3064/37 от 02.06.1989 г), с активностью каждого из вирусных штаммов 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины и адгезивных антигенов бактерий Escherichia coli, взятых в равном соотношении с концентрацией 50-100 млдр. микробных клеток в 1 см3 вакцины.
Вакцину рекомендуется применять в хозяйствах, неблагополучных по таким кишечным заболеваниям вирусно-бактериальной этиологии, как рота-, коронавирусная и колибактериозная инфекция телят.
Колибактериоз (эшерихиоз) - широко распространенное во всем мире инфекционное заболевание новорожденных сельскохозяйственных животных, проявляющееся в виде диареи, сепсиса и сопровождающееся высокой заболеваемостью, смертностью и снижением привесов у переболевших животных.
С другой стороны, массовые энтериты и энтероколиты новорожденных телят, обусловленные рота-, коронавирусами имеют высокую инцидентность с E.coli. В этой связи, важное значение придается активной иммунизации коров-матерей с целью получения от них молозива и молока с высоким уровнем антител против рота-, коронавируса и колибактериоза для
выпаивания новорожденным телятам и создания у них пассивного иммунитета к данным инфекциям.
Адгезивность микроорганизмов один из основных факторов патогенности. 60% циркулирующих в хозяйствах штаммов E.coli - возбудителей колибактериоза обладают различными адгезивными антигенами и их сочетаниями. Наиболее часто у телят обнаруживают адгезины К99, F41, Att25. Активная защита от факторов адгезии микроорганизмов с помощью специфических препаратов может быть особенно эффективна при кишечных инфекциях животных, особенно вызываемых E.coli.
В нашей стране были предложены серии коммерческих сорбированных инактивированных противовирусных вакцин - против ротавирусного энтерита телят «РОТА-ВАК ВИЭВ», вакцина инактивированная гидроокисьалюминиевая против коронавирусного энтерита крупного рогатого скота «КОР-ВАК ВИЭВ», вакцина ассоциированная инактивированная против ротавирусного, коронавирусного энтеритов телят и вирусной диареи крупного рогатого скота, «РОДИКОР-ВАК ВИЭВ» (Гулюкин М.И., Мникова Л.А., Ишкова Т.А., Соколова Н.Л., Жидков С.А. Разработка и внедрение в практику эффективной системы диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. 2015. Т. 78. С. 179-186).
Разработан ряд вакцин на основе адгезивных антигенов. В частности, в ВИЭВ предложена вакцина против колибактериоза молодняка сельскохозяйственных животных на основе адгезивных антигенов К99, К88ав, К88ас, К88ад, F41, Атт25, 987Р, а также конъюгата термостабильного (ST) и термолабильного (LT) энтеротоксинов эшерихий (Соколова Н.А., Головко А.Н., Курашвили Т.К. и др. Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных, патент RU 2053792, С1, 10.02.1996).
Вакцины обладали высокими иммуногенными свойствами и широким
спектром действия на отдельных возбудителей колибактериоза молодняка сельскохозяйственных животных - телят, поросят и ягнят.
Известна поливалентная вакцина с адгезивными антигенами против колибактериоза (эшерихиоза) телят, которая включает 50% антигенной части E.coli А20 (Атт25), E.coli F41, E.coli К88 (F4) E.coli К99 (F5) и 50% адъюванта Montanide ISA-206 (Амосова Л.А., Ломако Ю.В., Новикова О.Н., Зубовская И.В., Карпович В.К., Пукшлис А.И. Экспериментальные исследования по разработке технологии изготовления и применения вакцины поливалентной с адгезивными антигенами против колибактериоза (эшерихиоза) телят / Эпизоотология, иммунобиология, фармакология, санитария. - 2015. - №1. - С. 3-7.).
Была сконструированна ассоциированная вакцина против коронавирусной и ротавирусной инфекции, колибактериоза и клостридиоза телят - которая содержит инактивированные рота и коронавирусы крупного рогатого скота, инактивированные адгезинпродуцирующие штаммы E.coli с антигенами К99 и F41, бета-токсоид Clostridium perfringens тип С (штамм ВТ).
Все имеющиеся коммерческие вакцины включают в свой состав неполный спектр возбудителей диареи новорожденных телят, либо не все специфические адгезивные антигены, характерные для возбудителей эшерихиозов. В указанных вакцинах в качестве бактериального компонента использована инактивированная клеточная суспензия, представляющая смесь антигенов клеточной стенки, не отвечающих за колонизирующую способность бактерий.
Известна также ассоциированная инактивированная гидроокисьалюминиевая вакцина против рота-, -корона, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят (Гаффаров Х.З., Спиридонов Ч.Н., Иванов А.В. и др. патент RU 2137499, С1, 10.02.2000)
Ассоциированная вакцина имеет низкую антигенную и иммуногенную активность вакцинных штаммов, и как следствие отсутствие иммунитета у
животных к эшерихиозу, протекающему в форме колидиареи и колиэнтеротоксемии.
Наиболее близкой по технической сущности, выбранной в качестве прототипа, является вакцина инактивированная против вирусной диареи, рота-, короновирусной болезни и эшерихиоза крупного рогатого скота (Патент RU №2403063 C1; А61К 39/295, А61Р 31/00; 28.08.2009) (прототип).
Комбинированная вакцина имеет относительно невысокий титр иммуногенной активности входящих в ее состав вирусных суспензий, наличие клеток эшерихий и перегруженности антигенами ее состава.
Задачей исследований являлось - получение вакцины с высокими иммуногенными свойствами, расширенным профилактическим спектром действия на кишечные инфекции телят вирусно-бактериальной этиологии.
Нами предложена вакцина, ассоциированная инактивированная против ротавирусного, коронавирусного энтерита и эшерихиоза крупного рогатого скота.
Сравнительный анализ заявляемого способа получения вакцины и прототипа показывает, что предлагаемая вакцина отличается тем, что в ее составе объединены очищенные адгезивные антигены К99, F41, Атт25 с вирусным материалом, а сами адгезины получены при помощи, увеличенной до 1,5-3,0 М концентрации раствора фосфатно-мочевинного буфера.
Сущность изобретения заключается в следующем.
В состав вакцины входят ротавирус крупного рогатого скота штамм РМ, выращенный в перевиваемой культуре клеток МДВК или ЛЭК; коронавирус крупного рогатого скота, штамм КЛ-2, выращенный в тех же культурах и очищенные адгезины штаммов E.coli - К99, F41, Att25. Вакцина инактивирована формалином и сорбирована на гидроокиси алюминия.
Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота представляет собой жидкость светло-желтого цвета, при хранении образуется рыхлый белый осадок, легко разбивающийся в гомогенную взвесь при встряхивании.
Вакцина стабильна и сохраняет активность при температуре 2-8°C не менее 12 мес.
Вакцину вводят стельным животным двукратно за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 мл подкожно в область средней трети шеи или в паховую складку.
Пример 1.
Технологический процесс состоит из нескольких стадий: стадии получения вирусного и эшерихиозного компонентов, добавление адъюванта, смешивание всех компонентов вакцины с последующей расфасовкой готовой продукции.
А. Стадия получения вирусного компонента вакцины.
Культивирование рота и коронавирусов проводят в культурах клеток ЛЭК или МДВК одномоментно или в несколько циклов с постепенным накоплением вирусного материала, хранят до изготовления вакцины при -10-20°C. Каждую партию рота-, коронавирусов проверяют на стерильность путем высева на питательные среды, и исследуют активность в ИФА (не ниже 1:16) для рота-, и в РГА (не ниже 1:512) для коронавируса. Суспензии, содержащие отдельно рота и коронавирус инактивируют формалином в конечной концентрации 0,05%.
После инактивации антигенная активность суспензии штамма ротавируса РМ должна составлять 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины, суспензии штамма коронавируса КЛ-2 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины.
Б. Стадия получения бактериального компонента вакцины.
Отбирают штаммы-продуценты адгезивных антигенов К99, F41, Att25 (референтные или полевые культуры E.coli), реагирующие в реакции агглютинации со стандартными моноспецифическими антиадгезивными сыворотками в титрах 1:320 - 1:1280 и выше, обладающие иммуногенными свойствами. Засевают в бульон Хоттингера или любую другую среду, способствующую экспрессии адгезивных антигенов. Культивирование проводят при 37-38°C в течение 6-8 ч при шюттулировании. Полученную
бульонную культуру центрифугируют при 3000-5000 об/мин в течение 30-40 мин при 4-10°C. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в 1,5-3,0 М растворе фосфатно-мочевинного буфера до концентрации 50×109-100×109 микр. кл./мл. Полученную суспензию прогревают в водяной бане при 60-64°C в течение 20-25 мин при периодическом встряхивании (60 U/мин), после чего охлаждают и центрифугируют при 10000-15000 об/мин в течение 10-20 мин.
Супернатант сливают в стерильную посуду, инактивируют путем добавления 0,3-0,4% формалина и выдерживают при 37-38°C в течение суток, после чего проверяют на стерильность. Добавляют гидроокись алюминия до конечной концентрации 25%.
В. Стадия объединения вирусного и бактериального компонентов вакцины.
Для получения комплексного препарата, приготовленные указанным способом компоненты адгезинов и вирусов берут в равных соотношениях (1:1:1) и смешивают в стерильной посуде, т.е. в 1 см3 вакцины содержится 1 часть суспензии штамма ротавируса РМ, 1 часть штамма коронавируса КЛ-2 и 1 часть адгезивных антигенов бактерий Escherichia coli. В свою очередь адгезивные антигены бактерий Escherichia coli К99, F41, Атт25 тоже берутся в равном соотношении.
Приготовленную вакцину расфасовывают в стерильные стеклянные флаконы и герметично закрывают. Хранят 12 мес. при температуре +2-8°C.
Способы получения адгезивных антигенов для вакцины с апробацией на лабораторных мышах.
Вариант 1. Способ получения вакцины осуществляется, как описано выше, но для отделения от бактерий адгезивных антигенов используют 1,5 М концентрацию раствора фосфатно-мочевинного буфера.
Полученный препарат при однократном введении белым мышам стимулирует выработку антител к адгезинам в титрах 1:160-1:640 (в реакции агглютинации).
Вариант 2. Способ получения вакцины осуществляется, как описано выше, но для получения отдельных адгезивных антигенов используют 2,0 М концентрацию раствора фосфатно-мочевинного буфера.
Такой препарат при однократном введении белым мышам стимулирует выработку антител к адгезинам в титрах 1:640-1:1280 (в РА).
Вариант 3. Способ получения вакцины осуществляется, как описано выше, но для получения очищенных адгезивных антигенов используют 3,0 М концентрацию раствора фосфатно-мочевинного буфера.
Пример 2. Оценка антигенной активности вакцины на лабораторных животных.
Полученный препарат при однократной иммунизации белых мышей стимулирует выработку антител к адгезинам в титрах 1:320-1:1280 (в РА).
В опыте на крысах (Таб. 1) антигены входящие в вакцину вводили без адъювантов в трех вариантах ротавирус (РВ) и адгезивные антигены E.coli, коронавирус (KB) и адгезивные антигены E.coli, а также все антигены вместе подкожно в область спины по 3 мл дважды с интервалом 20 дней.
Кровь брали через 14, 21 и 28 дней после второй иммунизации и исследовали на наличие специфических антител методом ИФА для вирусов и РА для адгезивных антигенов. На всех сроках исследования отмечается повышение титров антител к антигенным компонентам вакцины. К вирусным
компонентам вакцины совместно с адгезивными антигенами E.coli, титры достигали величины 1:6400 к РВ и 1:400 к КР со снижением к 28-м суткам. Титры к адгезивным антигенам при совместном применении с вирусами были к К99 1:320, к F41 1:80 и Att25 1:1280, с постепенным снижением к 28-м суткам.
Морским свинкам и кроликам трехвалентную вакцину с адъювантом вводили внутримышечно двукратно с интервалом 7 дней. Через 14 дней после первой и второй иммунизации брали кровь для определения антител к компонентам вакцины.
Результаты по изучению антигенных свойств трехвалентной вакцины на морских свинках и кроликах показали, что введение вакцины животным стимулирует образование специфических антител против всех компонентов вакцины (Таб. 2). Установлено, что гидроокись алюминия является эффективным адъювантом при иммунизации лабораторных животных.
Так, при исследовании сыворотки крови морских свинок и кроликов, иммунизированных вакциной, методом иммуноферментного анализа установлено следующее: титры антител к рота,- и коронавирусам после двух вакцинаций выросли до значения 1:1600 - 1:3200 при начальных показаниях в среднем 1:200. Титры антител к адгезивным антигенам E.coli в РА на 14 день после второй иммунизации у морских свинок и кроликов достигали для К99 1:80 и 1:960, для F41 1:448 и 1:960, Att25 1:1296 и 1:800 соответственно. Полученные результаты свидетельствовали о том, что изготовленная
лабораторная серия вакцины характеризовалась выраженными антигенными свойствами.
Пример 3. Производственное испытание экспериментальных серий вакцины в опытах на коровах.
Иммуногенные свойства ассоциированной вакцины изучались на стельных коровах и телятах в хозяйствах Вологодской области в 2015-2017 гг. В период испытания ассоциированной вакциной было иммунизировано 76 стельных коров, контрольная группа состояла из 23 голов.
Вакцину вводили животным за 40 и 20 дней до отела в объеме 5 - 6 мл в область шеи. У животных до введения вакцины, за 40 и 20 дней до предполагаемого отела отбирали пробы сывороток крови, а после отела на 1, 2 и 3 день отбирали пробы молозива. Сыворотки крови и фекалии телят отбирали на 3 и 7 день для исследования на наличие антител к рота-, и коронавирусам КРС и бактериальным компонентам вакцины. Результаты приведены в (Таб. 3).
Установлено, что иммунизация стельных коров существенно влияет на накопление специфических антител в крови и молозиве животных и не оказывает отрицательного воздействия на физиологические показатели организма. Так, перед вакцинацией титр антител в пробах сыворотки крови
коров равнялся 1:400-1:800 для вирусов и 1:10-1:80 для адгезинов, за 20 дней перед отелом значение титров возросло до 1:1600-1:3200 для вирусов и до 1:278-1:1105 для адгезинов.
В молозиве первого дня отмечали наивысший титр специфических антител. Так, к рота- и коронавирусам титры антител достигали величины - 1:25600, к адгезивному антигену К99-1:3595, к F41-1:2324, к Att25-1:7498.
По сравнению с молозивом от контрольных животных титры антител к адгезинам выросли в 17-268 раз.
В молозиве 2 и 3-го дня антител содержалось значительно меньше, но их титры все равно превышали контрольные значения в 8-100 раз.
Пример 4. Производственное испытание экспериментальных серий вакцины в опытах на телятах.
Иммуногенные свойства вакцины определяли также по степени заболеваемости новорожденных телят, полученных от вакцинированных и контрольных коров. Молозиво выпаивали телятам через 2-4 часа после рождения. За телятами вели наблюдение и ежедневно клинически обследовали. При этом учитывали количество специфических антител, получаемых животным с молозивом матери, частоту, продолжительность, тяжесть болезни телят. В результате проведенных исследований, установлена прямая коррелятивная связь между количеством антител в молозиве коров и наличием их в сыворотке крови и фекалиях телят, которым выпаивали иммунное молозиво. Так, в сыворотке крови 3 дневных телят от иммунизированных коров титры антител против адгезинов К99, F41, Att25 были соответственно в 13, 10 и 32 раза выше, чем у контрольных животных (Таб. 4). Фекалии телят, которым выпаивали молозиво от вакцинированных коров, содержали антитела в 65% случаев, а в фекалиях телят контрольной группы антитела выявляли лишь у одного теленка. Титры копроантител к адгезивным антигенам у телят от иммунизированных коров в 6-28 раз превышали титры у контрольных животных.
Около 20% телят от вакцинированных коров в течение первой недели
заболели с клиническим проявлением диареи, однако заболевание протекало в легкой форме, длилось не более 3-4 суток и заканчивалось выздоровлением.
У контрольных телят, полученных от неиммунизированных коров, заболевание протекало длительно, в острой форме, сопровождалось тяжелой диареей с большим количеством слизи, обезвоживанием, повышением температуры тела, истощением. Из всех заболевших пало 4 теленка (17,3%).
В результате проведенных исследований были изучены иммуногенные свойства трехвалентной вакцины против рота-коронавирусной инфекций и колиэнтеритов телят и даны характеристики защитных свойств молозива от коров вакцинированных трехвалентной вакциной и их влияние на резистентность телят.
На основании полученных результатов разработана и утверждена нормативно-техническая документация на трехвалентную ассоциированную вакцину против рота-, коронавирусной инфекций и колиэнтеритов телят, включающая инструкцию по изготовлению вакцины, инструкцию по ее применению, СТО (стандарт организации ФГБНУ ВИЭВ).
Таким образом, разработанная вакцина позволит правильно организовать мероприятия по профилактике и борьбе с желудочно-кишечными болезнями телят. Применение вакцины позволит значительно снизить заболеваемость и отход телят, облегчит течение болезни, уменьшит возможность инфицирования здоровых телят. Разработанная вакцина соответствует уровню, предъявляемого к препаратам данного
предназначения, поскольку в ее состав входят рота-, коронавирусные компоненты вирусов, проявляющих высокую инцидентность в ассоциации с адгезивными штаммами E.coli, а очищенные адгезины, обеспечивают значительно более высокий уровень антител по сравнению с использованием цельной бактериальной клетки или ее других компонентов.
Вакцина апробирована с положительным результатом на крупном рогатом скоте в неблагополучных хозяйствах. Это подтверждает безвредность препарата, повышенную иммуногенную активность компонентов вакцины в сравнении с другими препаратами, выраженную в индукции иммунного ответа у коров-матерей к разным вариантам антигенов возбудителей, циркулирующих в хозяйстве.
Результаты апробации свидетельствуют о том, что вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота обладает высокими иммуногенными свойствами, обеспечивает создание напряженного колострального иммунитета и обладает протективными свойствами.
Учитывая широкое распространение желудочно-кишечных заболеваний в хозяйствах РФ и необходимость вакцинации большого количества животных, экономический эффект от применения разрабатываемой вакцины может быть существенным.
Список литературы
1. Гулюкин М.И., Мникова Л.А., Ишкова Т.А., Соколова Н.Л., Жидков С.А. Разработка и внедрение в практику эффективной системы диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. 2015. Т. 78. С. 179-186.
2. Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И. и др. Вакцина инактивированная против вирусной диареи, рота-, короновирусной болезни и эшерихиоза крупного рогатого скота / патент RU №2403063 C1; А61К 39/295, А61Р 31/00, 28.08.2009. Прототип.
3. Соколова Н.А., Головко А.Н., Курашвили Т.К. и др. Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных / патент RU 2053792, С1, 10.02.1996.
4. Амосова Л.А., Ломако Ю.В., Новикова О.Н., Зубовская И.В., Карпович B.К., Пукшлис А.И. Экспериментальные исследования по разработке технологии изготовления и применения вакцины поливалентной с адгезивными антигенами против колибактериоза (эшерихиоза) телят / Эпизоотология, иммунобиология, фармакология, санитария. - 2015. - №1. - C. 3-7.
5. Гаффаров Х.З., Спиридонов Ч.Н., Иванов А.В. и др. Ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят / патент RU 2137499, С1, 10.02.2000.
Claims (2)
1. Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота, включающая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит смесь инактивированной суспензии штамма ротавируса РМ, семейства Reoviridae, рода Rotavirus, инактивированной суспензии штамма коронавируса КЛ-2 семейства Coronaviridae, рода Coronavirus, с активностью каждого из вирусных штаммов 105,5 - 106,5 ТЦД50 в см3 вакцины, выращенных в перевиваемой культуре клеток МДВК или ЛЭК, и адгезивных антигенов К99, F41, Атт25 бактерий Escherichia coli; очистку адгезивных антигенов К99, F41, Атт25 бактерий Escherichia coli, взятых в равном соотношении (1:1:1), с концентрацией 50-100 млдр микробных клеток в 1 см3 вакцины, проводят при увеличенной до 1,5-3,0 М концентрации раствора фосфатно-мочевинного буфера.
2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант гидроокись алюминия.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018122231A RU2708891C1 (ru) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018122231A RU2708891C1 (ru) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2708891C1 true RU2708891C1 (ru) | 2019-12-12 |
Family
ID=69006471
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018122231A RU2708891C1 (ru) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2708891C1 (ru) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2145236C1 (ru) * | 1999-04-30 | 2000-02-10 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят |
| UA45698A (uk) * | 2001-06-07 | 2002-04-15 | Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини | Вакцина "рококол" інактивована проти ешерихіозу та рота-, коронавірусних інфекцій телят |
| RU2325183C1 (ru) * | 2006-12-08 | 2008-05-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Способ получения вакцины против эшерихиоза животных |
| RU2403063C1 (ru) * | 2009-08-28 | 2010-11-10 | Автономная некоммерческая организация "Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных" (АНО "НИИ ДПБ") | Вакцина инактивированная комбинированная против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза крупного рогатого скота |
| RU2517733C1 (ru) * | 2012-12-26 | 2014-05-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Вакцина ассоциированная против аденовирусной, герпесвирусной инфекцией, парагриппа-3 и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная |
-
2018
- 2018-06-19 RU RU2018122231A patent/RU2708891C1/ru active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2145236C1 (ru) * | 1999-04-30 | 2000-02-10 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт | Ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят |
| UA45698A (uk) * | 2001-06-07 | 2002-04-15 | Інститут Експериментальної І Клінічної Ветеринарної Медицини | Вакцина "рококол" інактивована проти ешерихіозу та рота-, коронавірусних інфекцій телят |
| RU2325183C1 (ru) * | 2006-12-08 | 2008-05-27 | Открытое Акционерное Общество "Институт Биотехнологий Ветеринарной Медицины" | Способ получения вакцины против эшерихиоза животных |
| RU2403063C1 (ru) * | 2009-08-28 | 2010-11-10 | Автономная некоммерческая организация "Научно-исследовательский институт диагностики и профилактики болезней человека и животных" (АНО "НИИ ДПБ") | Вакцина инактивированная комбинированная против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза крупного рогатого скота |
| RU2517733C1 (ru) * | 2012-12-26 | 2014-05-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный Центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности" (ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ") | Вакцина ассоциированная против аденовирусной, герпесвирусной инфекцией, парагриппа-3 и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Durel et al. | Immune response of mature cows subjected to annual booster vaccination against neonatal calf diarrhoea with two different commercial vaccines: A non-inferiority study | |
| RU2403063C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и эшерихиоза крупного рогатого скота | |
| RU2145236C1 (ru) | Ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят | |
| RU2723709C1 (ru) | Способ профилактики рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота | |
| RU2708891C1 (ru) | Вакцина против рота-, коронавирусной инфекции и эшерихиоза крупного рогатого скота | |
| Valsamidis et al. | Immune response of European sea bass (Dicentrarchus labrax L.) against combination of antigens from three different pathogens | |
| RU2549434C2 (ru) | Способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки | |
| CN101914144A (zh) | 金黄色葡萄球菌荚膜多糖和蛋白质偶联物及制备方法和用途 | |
| RU2650628C1 (ru) | Способ получения вакцины ассоциированной против колибактериоза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции телят и поросят | |
| Sudjarwo et al. | Production and characterization protein of anti HIV specific immunoglobulin Y for Immunotherapy | |
| RU2813771C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у телят | |
| RU2813752C1 (ru) | Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят | |
| RU2053792C1 (ru) | Способ получения вакцины против колибактериоза сельскохозяйственных животных | |
| Spiridonov et al. | Clinical trial results of an associated vaccine against cattle clostridiosis and escherichiosis | |
| RU2022563C1 (ru) | Способ получения вакцины против колибактериоза поросят | |
| RU2814593C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у поросят | |
| RU2764600C1 (ru) | Вакцина против эшерихиоза телят и поросят | |
| RU2806810C1 (ru) | Вакцина гидроокись алюминиевая масляная против эшерихиоза телят и поросят | |
| RU2766249C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у телят | |
| RU2753410C2 (ru) | Способ получения анатоксин-вакцины против эшерихиоза животных | |
| RU2147892C1 (ru) | Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота | |
| RU2766549C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у поросят | |
| RU2301680C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
| RU2457859C1 (ru) | Вакцина против вирусной диареи крупного рогатого скота | |
| KR102886354B1 (ko) | 유산균 사균체를 포함하는 난황 항체 생산용 백신 조성물 및 이를 이용한 난황 항체의 생산 방법 |