RU2708335C1 - Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals - Google Patents
Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2708335C1 RU2708335C1 RU2019116271A RU2019116271A RU2708335C1 RU 2708335 C1 RU2708335 C1 RU 2708335C1 RU 2019116271 A RU2019116271 A RU 2019116271A RU 2019116271 A RU2019116271 A RU 2019116271A RU 2708335 C1 RU2708335 C1 RU 2708335C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- strain
- cattle
- dermatitis
- infectious
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 107
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 68
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 title claims abstract description 34
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 title claims description 39
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 title claims description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 15
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 title claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 7
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 claims description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 41
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 17
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 7
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 244000309464 bull Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004706 scrotum Anatomy 0.000 description 4
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 4
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 3
- 101000576973 Homo sapiens Mitochondrial-processing peptidase subunit beta Proteins 0.000 description 3
- 208000003930 Lumpy Skin Disease Diseases 0.000 description 3
- 102100025298 Mitochondrial-processing peptidase subunit beta Human genes 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 101800002638 Alpha-amanitin Proteins 0.000 description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000283705 Capra hircus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010011416 Croup infectious Diseases 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 241000700665 Sheeppox virus Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- CIORWBWIBBPXCG-SXZCQOKQSA-N alpha-amanitin Chemical compound O=C1N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N2C[C@H](O)C[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](O)CO)C(=O)N[C@@H](C2)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@H]1C[S@@](=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-SXZCQOKQSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 2
- 201000010549 croup Diseases 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000000544 hyperemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 2
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 241001112691 Goatpox virus Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000609846 Lumpy skin disease virus Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- RXGJTYFDKOHJHK-UHFFFAOYSA-N S-deoxo-amaninamide Natural products CCC(C)C1NC(=O)CNC(=O)C2Cc3c(SCC(NC(=O)CNC1=O)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N4CC(O)CC4C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)N2)[nH]c5ccccc35 RXGJTYFDKOHJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 241000434037 Volva Species 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000004007 alpha amanitin Substances 0.000 description 1
- CIORWBWIBBPXCG-UHFFFAOYSA-N alpha-amanitin Natural products O=C1NC(CC(N)=O)C(=O)N2CC(O)CC2C(=O)NC(C(C)C(O)CO)C(=O)NC(C2)C(=O)NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC1CS(=O)C1=C2C2=CC=C(O)C=C2N1 CIORWBWIBBPXCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000144987 brood Species 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009854 mucosal lesion Effects 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000004798 organs belonging to the digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000004861 thermometry Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 229960005502 α-amanitin Drugs 0.000 description 1
- JGQFVRIQXUFPAH-UHFFFAOYSA-N α-citronellol Chemical compound OCCC(C)CCCC(C)=C JGQFVRIQXUFPAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, в частности, к новому генотипу вируса заразного узелкового дерматита (ЗУД КРС), который может быть использован для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ЗУД КРС.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, in particular, to a new genotype of the virus of infectious nodular dermatitis (ASD of cattle), which can be used for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of itching of cattle.
Заразный узелковый дерматит (нодулярный дерматит) крупного рогатого скота (ЗУД КРС), кожно-узелковая сыпь, лоскутная болезнь кожи, кожная бугорчатка, Dermatitis nodularis bovum - трансграничная, эмерджентная инфекционная болезнь КРС, проявляющаяся персистентной лихорадкой, поражением лимфатической системы, отеком подкожной клетчатки и внутренних органов, образованием кожных узлов (бугров), поражением глаз и слизистых оболочек органов дыхания и пищеварения, потерей продуктивности и живой массы тела [2, 5, 9, 12].Infectious nodular dermatitis (nodular dermatitis) in cattle (RED), skin-nodular rash, patchwork skin disease, skin tubercle, Dermatitis nodularis bovum - a cross-border, emergent infectious disease of cattle, which manifests itself as persistent fever, subcutaneous lymphoma and lymphoma internal organs, the formation of skin nodes (bumps), damage to the eyes and mucous membranes of the respiratory and digestive organs, loss of productivity and live body weight [2, 5, 9, 12].
Возбудитель - ДНК-содержащий оболочечный вирус, имеет антигенное родство со штаммами вирусов, вызывающих оспу у овец и коз, которые отличаются на генетическом уровне, и вместе с ним образуют самостоятельный род Capripoxvirus семейства Poxviridae [2, 7, 11].The causative agent, a DNA-containing envelope virus, has antigenic affinity for strains of viruses that cause smallpox in sheep and goats, which differ at the genetic level, and together with it form an independent genus Capripoxvirus of the Poxviridae family [2, 7, 11].
ЗУД относят к особо опасным болезням животных, способным вызывать эпизоотии и наносить значительный экономический ущерб [10]. В соответствии с новой классификацией он включен в список болезней Международного эпизоотического бюро (МЭБ), подлежащих обязательному уведомлению (нотификации), в категорию «Болезни и инфекции крупного рогатого скота» [2, 9].Itching is considered an especially dangerous animal disease that can cause epizootics and cause significant economic damage [10]. In accordance with the new classification, it is included in the list of diseases of the International Epizootic Bureau (OIE), subject to mandatory notification (notification), in the category “Diseases and infections of cattle" [2, 9].
В течение длительного времени Россия оставалась благополучной по данному заболеванию. Впервые в Российской Федерации вспышки ЗУД КРС были зарегистрированы на территории Республики Дагестан в 2015 году, которые были вызваны полевым изолятом [3]. Однако уже в 2017 году при лабораторных исследованиях биологического материала, полученного из регионов Приволжского ФО, регистрировали наличие вакциноподобного штамма вируса ЗУД, принадлежащего к генетической линии Neethling. Для выяснения филогенетических свойств полученного штамма вируса ЗУД КРС использовали метод определения первичной нуклеотидной последовательности ряда локусов с помощью секвенирования. Результаты проведенных исследований и анализа фрагмента гена белка наружного капсида зрелого вириона показали, что выявленный штамм принадлежит к группе вакцинных вирусов типа Neethling и имеет 99% уровень гомологии с вакцинным штаммом LSDV Vaccine Neethling LW 1959.For a long time, Russia has remained successful in this disease. For the first time in the Russian Federation, outbreaks of cattle itching were recorded in the Republic of Dagestan in 2015, which were caused by a field isolate [3]. However, already in 2017, in laboratory studies of biological material obtained from the regions of the Volga Federal District, the presence of a vaccine-like strain of the itch virus belonging to the Neethling genetic line was recorded. To clarify the phylogenetic properties of the obtained strain of REDA virus, cattle used the method of determining the primary nucleotide sequence of a number of loci using sequencing. The results of studies and analysis of the gene fragment of the outer capsid protein of the mature virion showed that the identified strain belongs to the group of vaccine viruses of the Neethling type and has a 99% homology with the vaccine strain LSDV Vaccine Neethling LW 1959.
В настоящее время для профилактики данного заболевания применяют как гетерологичные, так и гомологичные вакцины. Применение гомологичных вакцин на основе аттенуированных штаммов вируса ЗУД, по всей вероятности, стало причиной появления новых генотипов вируса ЗУД [13]. Несмотря на то, что возможность мутации между полевыми штаммами вируса и аттенуированными считается незначительной, так как для этого необходимо, чтобы оба вируса размножались одновременно в одних и тех же клетках одного животного, однако же, в случае массовой профилактической вакцинации риск такой мутации существенно возрастает при условии циркуляции полевого вируса.Currently, both heterologous and homologous vaccines are used to prevent this disease. The use of homologous vaccines based on attenuated strains of the itch virus was most likely the cause of the emergence of new genotypes of the itch virus [13]. Despite the fact that the possibility of a mutation between the field strains of the virus and the attenuated ones is considered insignificant, since this requires that both viruses reproduce simultaneously in the same cells of the same animal, however, in the case of mass prophylactic vaccination, the risk of such a mutation increases significantly with condition of circulation of the field virus.
Известен штамм «ВНД КРС/Дагестан/2015» вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота, выделенный в 2015 году от коров, больных ЗУД КРС на территории Республики Дагестан, репродуцированный в перевиваемой культуре клеток яичников домашней козы (ЯДК-04) и субкультуре тестикул ягненка (ТЯ), с инфекционной активностью 4,5÷5,5 lg ТЦД50/см3 и используемый для изготовления средств диагностики ЗУД КРС [7].The known strain “GNI of cattle / Dagestan / 2015” of the virus of nodular dermatitis in cattle, isolated in 2015 from cows suffering from itching of cattle in the Republic of Dagestan, reproduced in a transplanted culture of ovarian ovarian cells (YaK-04) and a subculture of lamb testicles ( ТЯ), with an infectious activity of 4.5 ÷ 5.5 lg TCD 50 / cm 3 and used for the manufacture of diagnostic tools for cattle itching [7].
Известен штамм «Волгоградский» вируса нодулярного дерматита, выделенный из патологического материала от больных коров из Волгоградской области, репродуцированный в культуре клеток почки теленка (MDBK) с инфекционной активностью 5,0÷5,5 lg ТЦД50/см3 и используемый для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов [8].The known strain "Volgograd" virus of nodular dermatitis isolated from pathological material from sick cows from the Volgograd region, reproduced in a culture of calf kidney cells (MDBK) with an infectious activity of 5.0 ÷ 5.5 lg TCD 50 / cm 3 and used for virological, molecular genetic monitoring studies, the manufacture of vaccines and diagnostic drugs [8].
Недостатком вышеуказанных штаммов является наличие генетических сигнатур, специфичных только полевым изолятам.The disadvantage of the above strains is the presence of genetic signatures that are specific only to field isolates.
Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, заключается в расширении арсенала производственных штаммов вируса ЗУД КРС, обладающих новыми биологическими, а также генетическими характеристиками, включающими свойства как вакцинных, так и полевых вариантов вируса в нативном виде и пригодных для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ЗУД КРС.The problem to which the present invention is directed, is to expand the arsenal of production strains of the itch virus of cattle, with new biological and genetic characteristics, including the properties of both vaccine and field variants of the virus in their native form and suitable for the manufacture of biological products for diagnosis and specific prevention of cattle itching.
Указанная задача решена путем получения нового мутантного штамма вируса ЗУД КРС «Приволжский», используемого в качестве производственно-контрольного для изготовления средств диагностики заразного узелкового дерматита КРС и лекарственных препаратов, а также их контроля.This problem was solved by obtaining a new mutant strain of the VOLVA cattle virus virus “Privolzhsky”, used as a production control for the production of diagnostic tools for infectious cattle nodular dermatitis and drugs, as well as their control.
Изолят вируса заразного узелкового дерматита, послуживший источником для получения штамма «Приволжский», был выделен из проб биологического материала, полученного от коров с клиническими признаками заразного узелкового дерматита на территории Приволжского ФО Российской Федерации.The isolate of the virus of infectious nodular dermatitis, which served as the source for obtaining the Volga strain, was isolated from samples of biological material obtained from cows with clinical signs of infectious nodular dermatitis in the territory of the Volga Federal District of the Russian Federation.
Для получения штамма ЗУД КРС, обладающего оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали субкультуру клеток тестикул ягненка (ТЯ). В результате проведения серии последовательных пассажей изолята на данной культуре клеток был получен штамм вируса ЗУД «Приволжский» имеющий стабильные биотехнологические и антигенные свойства и пригодный для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ЗУД КРС. Накопление вируса ЗУД штамма «Приволжский» в культуре клеток ТЯ обеспечивалось на уровне от 4,5 до 5,5 lg ТЦД50/см3.A subculture of lamb testicle cells (TJ) was used to obtain the cattle pruritus strain with optimal biotechnological properties. As a result of a series of successive passages of the isolate on this cell culture, the Privolzhsky strain of the itching virus was obtained, which has stable biotechnological and antigenic properties and is suitable for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prophylaxis of cattle itching. The accumulation of the itch virus of the strain "Volga" in the cell culture of TB was provided at a level of from 4.5 to 5.5 lg TCD 50 / cm 3 .
Штамм вируса ЗУД КРС «Приволжский» депонирован в 2019 году в Коллекцию штаммов микроорганизмов ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») под регистрационным номером - №112 - деп / 19-2 - КШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».In 2009, the strain of the Volga RED cattle virus was deposited in the Collection of microorganism strains of the Federal Center for Animal Health (FSBI ARRIAH) under registration number - No. 112 - dep / 19-2 - KShM FSBI ARRIAH.
Сущность изобретения пояснена на графических изображениях, на которых:The invention is illustrated in the graphic images on which:
Фиг. 1 - монослой незараженной культуры клеток ЯДК-04 (контроль культуры клеток);FIG. 1 - monolayer of uninfected cell culture YADK-04 (control cell culture);
Фиг. 2 - клетки монослоя культуры клеток ЯДК-04, после инфицирования вирусом ЗУД КРС через 48 ч;FIG. 2 - cells of a monolayer of YADK-04 cell culture, after infection with the VIT cattle virus after 48 hours;
Фиг. 3 - монослой незараженной культуры клеток ТЯ (контроль культуры клеток);FIG. 3 - monolayer of non-infected cell culture of TB (control of cell culture);
Фиг. 4 - клетки монослоя культуры клеток ТЯ, после инфицирования вирусом ЗУД КРС через 48 ч.FIG. 4 - cells of the monolayer of cell culture of TB cells, after infection with the virus of itching cattle after 48 hours
Фиг. 5 - монослой незараженной культуры клеток ПБ (контроль культуры клеток);FIG. 5 - monolayer of uninfected PB cell culture (cell culture control);
Фиг. 6 - клетки монослоя культуры клеток ПБ, после инфицирования вирусом ЗУД КРС через 48 ч.FIG. 6 - cells of the monolayer of PB cell culture, after infection with the VIT cattle virus after 48 hours
Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма «Приволжский» вируса ЗУД КРС с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса.The invention is explained on the dendrogram, reflecting the phylogenetic relationship of the strain "Volga" virus, itching of cattle with epizootic and vaccine strains of the virus.
Фиг. 7 - по локусу гена белка наружного капсида зрелого вириона (ORF126) штамм «Приволжский» при сравнении с полевыми и вакцинными вирусами ЗУД КРС принадлежит к группе вакцинных вирусов;FIG. 7 - according to the locus of the gene of the outer capsid protein of the mature virion (ORF126), the Volga strain when compared with field and vaccine viruses, RED cattle belongs to the group of vaccine viruses;
Фиг. 8 - по локусу гена белка, связывающего альфа-аманитин (ORF009) штамм «Приволжский» при сравнении с полевыми и вакцинными вирусами ЗУД РКС принадлежит к группе полевых вирусов.FIG. 8 - according to the locus of the gene of the protein that binds alpha-amanitine (ORF009), the Privolzhsky strain when compared with field and vaccine viruses, RCC RCA belongs to the group of field viruses.
Штамм «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита характеризуется следующими признаками и свойствами:The strain "Volga" virus infectious nodular dermatitis is characterized by the following signs and properties:
Морфологические признакиMorphological features
Штамм «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита КРС относится к семейству Poxviridae, роду Capripoxvirus, виду Dermatitis nodularis bovum или Lumpy Skin Disease, и обладает морфологическими признаками, характерными для представителей каприпоквирусов: вирионы кирпичеобразной формы, имеют двойную липидную оболочку, плотную сердцевину и боковые тельца.The strain “Volga” of the cattle infectious nodular dermatitis virus virus belongs to the family Poxviridae, the genus Capripoxvirus, the species Dermatitis nodularis bovum or Lumpy Skin Disease, and has morphological characteristics characteristic of capropoqueviruses: brick-shaped virions, double-skinned, double-skinned .
Антигенные свойстваAntigenic properties
Антигенные свойства вируса ЗУД КРС полностью не изучены. В антигенном отношении вирус ЗУД родственен вирусу оспы овец и оспы коз. В реакции нейтрализации в культуре клеток показать существенное отличие вируса оспы овец от вируса ЗУД не удается [11].The antigenic properties of the cattle itch virus are not fully understood. Antigenically, the itch virus is related to the sheep pox virus and goat pox virus. In the neutralization reaction in cell culture, it is not possible to show a significant difference between the sheep pox virus and the itch virus [11].
У переболевших животных в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой в РМН на культуре клеток ЯДК-04.In sick animals, antibodies are formed in the blood serum that are detected in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and microneutralization reaction (RMN). The virus is stably neutralized by homologous antiserum in the RMN in the cell culture YADK-04.
Введение штамма «Приволжский» вируса ЗУД крупному рогатому скоту сопровождается образованием у них вируснейтрализующих антител в крови в титре 1:8÷1:128.The introduction of the Volga strain of the itch virus in cattle is accompanied by the formation of virus-neutralizing antibodies in their blood in a titer of 1: 8 ÷ 1: 128.
Патогенные свойстваPathogenic properties
Штамм патогенен для крупного рогатого скота. При экспериментальном заражении вируссодержащей суспензией быков черно-пестрой породы 1,5-летнего возраста вызывает следующие клинические признаки: повышение температуры тела (41÷41,5)°С, серозные истечения из носовой полости, угнетение животных, отказ от корма, а также проявление розеол (размером от 0,5 до 3 см, круглой, овальной или неправильной формы) на всем теле животного (круп, задние конечности, в области спины и на голове).The strain is pathogenic for cattle. When experimentally infected with a virus-containing suspension of black and white bulls of 1.5 years of age, it causes the following clinical signs: an increase in body temperature (41 ÷ 41.5) ° C, serous outflows from the nasal cavity, inhibition of animals, refusal to feed, and manifestation roseol (size from 0.5 to 3 cm, round, oval or irregular shape) on the entire body of the animal (croup, hind limbs, in the back and on the head).
КонтагиозностьContagiousness
Штамм контагиозен для крупного рогатого скота. Интактные животные заболевают ЗУД при совместном содержании с инфицированными животными.The strain is contagious for cattle. Intact animals develop itching when kept together with infected animals.
Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.Contamination with bacteria, fungi, mycoplasmas and extraneous viruses.
Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.The strain is not contaminated by bacteria, fungi, mycoplasmas and extraneous viruses.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита КРС размножается в субкультуре клеток тестикул ягнят (ТЯ), в субкультуре клеток почки барана (ПБ), а также в перевиваемой культуре клеток яичников домашней козы (ЯДК-04) [6]. Репродукция вируса сопровождается специфическим цитопатическим действием, приводящим к округлению, агрегации клеток и деструкции монослоя на 2÷3 сутки культивирования. Вирус накапливается в титре не менее 4,5 lg ТЦД50/см3 и сохраняет исходные характеристики при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения).The strain "Volga" virus of infectious cattle nodular dermatitis propagates in a subculture of cells of testicles of lambs (TB), in a subculture of cells of a kidney of a ram (PB), as well as in a transplanted cell culture of ovary cells of a domestic goat (YAC-04) [6]. Reproduction of the virus is accompanied by a specific cytopathic effect, leading to rounding, cell aggregation and destruction of the monolayer on 2–3 days of cultivation. The virus accumulates in the titer of at least 4.5 lg TCD 50 / cm 3 and retains its original characteristics when passaged in sensitive biological systems for 5 passages (observation period).
Молекулярно-генетическая характеристикаMolecular genetic characterization
Согласно анализу гена кодирующего наружный капсидный белок зрелого вириона штамм «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита является вакцинным, поскольку у всех вакцинных вирусов присутствует делеция 27 пар нуклеотидов, тогда как секвенирование локуса гена белка, связывающего альфа-аманитин, показало, что вирус по данному локусу принадлежит к генетической линии полевых изолятов. Данный факт свидетельствует о том, что геном штамма «Приволжский» заразного узелкового дерматита КРС, не имея признаков контаминации, сочетает в составе одной полногеномной последовательности геномные сегменты как вакцинного штамма, так и полевого изолята, это свидетельствует о том, что данный изолят представляет собой новый генотип, возникший путем мутации.According to the analysis of the gene encoding the outer capsid protein of the mature virion, the Volga strain of the virus of infectious nodular dermatitis is vaccine, since all vaccine viruses have a deletion of 27 nucleotide pairs, while sequencing of the locus of the alpha-amanitin binding protein gene showed that the virus at this locus Belongs to the genetic line of field isolates. This fact indicates that the genome of the Privolzhsky strain of cattle infectious nodular dermatitis, without signs of contamination, combines the genomic segments of both the vaccine strain and the field isolate as part of a single genome sequence, this indicates that this isolate is a new genotype arising by mutation.
Полногеномный анализ ПЦР показал более тесную нуклеотидную гомологию штамма «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита с вакцинными штаммами (>99,30%), чем с полевыми изолятами (>98,64%). Однако же, филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей (фиг. 7 и фиг. 8) указывает, что полученный штамм не принадлежит на 100% ни к одной из филогенетических групп. Это свидетельствует о том, что геном штамма «Приволжский» заразного узелкового дерматита КРС содержит нуклеотидные последовательности как вакцинного, так и полевого изолята.Full genome PCR analysis showed a closer nucleotide homology of the Volga strain of the virus of infectious nodular dermatitis with vaccine strains (> 99.30%) than with field isolates (> 98.64%). However, the phylogenetic analysis of the nucleotide sequences (Fig. 7 and Fig. 8) indicates that the obtained strain does not belong 100% to any of the phylogenetic groups. This indicates that the genome of the strain "Volga" infectious nodular dermatitis of cattle contains the nucleotide sequence of both the vaccine and field isolate.
Физические свойстваPhysical properties
Плавучая плотность в CsCl 1,19 г/см3. Наиболее стабилен при рН 6,6÷8,6.The floating density in CsCl is 1.19 g / cm 3 . The most stable at pH 6.6 ÷ 8.6.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Вирус стабилен в окружающей среде при комнатной температуре с сохранением инфекционной активности до 18 дн., в пораженных участках кожи - не менее 33 дн., в слюне - 11 дн., сперме быков - 22 дн., в культуре клеток при 4°С - 6 мес. Переносит 3-кратное замораживание и оттаивание, чувствителен к эфиру, хлороформу, высокой температуре. Сохраняет жизнеспособность в течение 10 лет при температуре минус 80°С.The virus is stable in the environment at room temperature while maintaining infectious activity for up to 18 days, in affected areas of the skin for at least 33 days, in saliva for 11 days, bull sperm for 22 days, and in cell culture at 4 ° C 6 months Tolerates 3-fold freezing and thawing, sensitive to ether, chloroform, high temperature. It remains viable for 10 years at a temperature of minus 80 ° C.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Антигенная активность - вирус индуцирует образование вируснейтрализующих антител в крови КРС на 14-й день после заражения в титре 1:8÷1:16.Antigenic activity - the virus induces the formation of virus-neutralizing antibodies in the blood of cattle on the 14th day after infection in a titer of 1: 8 ÷ 1: 16.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в культурах клеток ТЯ, ПБ и ЯДК-04 в течение 5 серийных пассажей (срок наблюдения).Stability - retains the original biological properties when passaged in the cultures of TB, PB, and YADK-04 cells for 5 serial passages (observation period).
Патогенность - патогенен для естественно восприимчивых животных.Pathogenicity - pathogenic to naturally susceptible animals.
Вирулентность - вирулентен для естественно восприимчивых животных.Virulence - virulence for naturally susceptible animals.
Свободен от контаминации бактериями, микоплазмами и посторонними вирусами.Free from contamination by bacteria, mycoplasmas and extraneous viruses.
Сущность предложенного изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the proposed invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1Example 1
Биологические и вирусологические методы включали адаптацию вируса, выделенного от больных коров, к культурам клеток ТЯ, ПБ и ЯДК-04.Biological and virological methods included adaptation of the virus isolated from diseased cows to cell cultures of TB, PB, and YADK-04.
Для получения расплодки вирусную суспензию вносили на освобожденный от ростовой среды монослой культуры клеток и экспонировали в течение часа в термостате при температуре 37°С. После этого вносили поддерживающую среду ПСП с добавлением 1÷2% фетальной сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубировали при 37°С до появления цитопатического действия (ЦПД) вируса, которое характеризовалось округлением клеток, скоплением их в виде агрегатов разного размера и, в дальнейшем, тотальной деструкцией и отслоением монослоя клеток. При поражении площади монослоя не менее 70-80% (округление, отслоение от стекла и агрегация клеток) культуральные матрасы промораживали при минус 80°С и после оттаивания при комнатной температуре производили сбор вируса с последующим отбором проб для исключения микробной контаминации и определения инфекционной активности вируса микротитрованием в культуре клеток ЯДК-04.To obtain a brood, a viral suspension was introduced onto a monolayer of cell culture freed from the growth medium and exposed for one hour in an incubator at a temperature of 37 ° C. After that, a support medium of PSP was added with the addition of 1 ÷ 2% fetal bovine serum. The infected culture was incubated at 37 ° C until the cytopathic effect (CPD) of the virus appeared, which was characterized by rounding of cells, their accumulation in the form of aggregates of different sizes and, subsequently, total destruction and exfoliation of the cell monolayer. When the monolayer area was affected by at least 70-80% (rounding, peeling from glass and cell aggregation), culture mattresses were frozen at minus 80 ° C and after thawing at room temperature, the virus was collected, followed by sampling to exclude microbial contamination and determine the infectious activity of the virus microtiter in cell culture YADK-04.
Титрование проводили в стерильных 96-луночных плоскодонных культуральных планшетах в объеме 0,2 см3/лунку. Предварительно готовили десятикратные разведения вируссодержащего материала на среде ПСП, начиная с 10-1 до 10-7. Подготовленные разведения вируса переносили, начиная с наивысшего разведения, в культуральные планшеты по 0,1 см3. К полученным разведениям вируса добавляли по 0,1 см3 клеточной суспензии ЯДК-04 на среде ПСП с содержанием 1÷2% фетальной сыворотки КРС. Планшет закрывали крышкой, помещали в СО2 - инкубатор с содержанием 5% СО2 при температуре 37°С и вели наблюдения с использованием инвертируемого микроскопа. Заключительный учет результатов титрования вируса проводили через 96÷120 ч инкубирования при условии сохранения целостности монослоя клеток в контрольных лунках. Расчет инфекционной активности проводили по методу Рида и Менча и выражали в lg ТЦД50/см3.Titration was performed in sterile 96-well flat-bottomed culture plates in a volume of 0.2 cm 3 / well. Tenfold dilutions of virus-containing material were preliminarily prepared in the PSP medium, starting from 10 -1 to 10 -7 . Prepared dilutions of the virus were transferred, starting from the highest dilution, into 0.1 cm 3 culture plates. To the dilutions of the virus, 0.1 cm 3 of a cell suspension of YaDK-04 was added on PSP medium with a content of 1 ÷ 2% fetal bovine serum. The tablet was closed with a lid, placed in a CO 2 incubator containing 5% CO 2 at a temperature of 37 ° C, and observations were made using an inverted microscope. The final recording of the results of virus titration was performed after 96 ÷ 120 h of incubation, provided that the integrity of the cell monolayer in the control wells was maintained. The calculation of infectious activity was carried out according to the method of Reed and Mench and expressed in lg TCD 50 / cm 3 .
Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 1. Инфекционная активность вируса в культурах клеток ТЯ, ПБ и ЯДК-04 составляла 4,5, 6,0, 5,0 lg ТЦД50/см3, соответственно.The results of the adaptation of the virus to various cell cultures are presented in table 1. The infectious activity of the virus in the cultures of TB, PB, and YADK-04 cells was 4.5, 6.0, 5.0 lg TCD 50 / cm 3 , respectively.
Данные, приведенные в таблице 1, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма «Приволжский» вируса ЗУД к использованным клеточным культурам.The data shown in table 1, indicate a good adaptive activity of the strain "Volga" virus itching to used cell cultures.
Проявление ЦПД в культуре клеток ЯДК-04 характеризовалось образованием большого числа сферических клеток. Через 96 ч культивирования большая часть клеток отслаивалась от стекла, собиралась в агрегаты разного размера, часть клеток деградировала до детрита (фиг. 1, фиг. 2).The manifestation of CPD in the culture of YADK-04 cells was characterized by the formation of a large number of spherical cells. After 96 hours of cultivation, most of the cells exfoliated from the glass, collected in aggregates of different sizes, some of the cells degraded to detritus (Fig. 1, Fig. 2).
При последовательной репродукции вируса ЗУД в культуре клеток ТЯ через 24 ч после заражения в монослое отмечали появление веретенообразных клеток, которые позже округлялись и через 48÷72 ч в большей части отслаивались от стекла (фиг. 3, фиг. 4).During sequential reproduction of the itching virus in the TB cell culture 24 hours after infection, spindle-shaped cells were observed in the monolayer, which were later rounded and mostly detached from the glass after 48–72 hours (Fig. 3, Fig. 4).
ЦПД в субкультуре клеток ПБ на 2 сутки инкубирования характеризовалось появлением веретенообразных и сферических клеток, которые в большей части отслаивались от стекла, частично агрегировались без образования явного клеточного детрита (фиг. 5, фиг. 6).The CPD in the subculture of PB cells on the 2nd day of incubation was characterized by the appearance of spindle-shaped and spherical cells, which for the most part exfoliated from the glass, partially aggregated without the formation of obvious cellular detritus (Fig. 5, Fig. 6).
Пример 2Example 2
Контроль стабильности биологической активности штамма определяли в течение 5 последовательных пассажей в культурах клеток ТЯ, ПБ и ЯДК-04. Результаты изучения стабильности штамма по его биологической активности в течение 5 пассажей представлены в таблице 2.The stability control of the biological activity of the strain was determined for 5 consecutive passages in the cultures of cells TY, PB and YADK-04. The results of the study of the stability of the strain by its biological activity for 5 passages are presented in table 2.
В ходе проведенных исследований установлено, что штамм вируса ЗУД КРС «Приволжский» в течение 5 последовательных пассажей в культурах клеток ТЯ, ПБ и ЯДК-04 проявлял стабильную биологическую активность, которая находилась в пределах 4,5÷5,5 lg ТЦД50/см3, 5,5÷6,0 lg ТЦД50/см3 и 5,0÷5,5 ТЦД50/см3, соответственно.In the course of the studies it was found that the strain of the itch cattle virus "Privolzhsky" for 5 consecutive passages in the cultures of cells TB, PB and YADK-04 showed stable biological activity, which was in the range of 4.5 ÷ 5.5 lg TCD 50 / cm 3 , 5.5 ÷ 6.0 log TCD 50 / cm 3 and 5.0 ÷ 5.5 TCD 50 / cm 3 , respectively.
Пример 3Example 3
Контроль отсутствия контаминации бактериями, грибами и микоплазмами (микробиологическими методами).Monitoring the absence of contamination by bacteria, fungi and mycoplasmas (microbiological methods).
Для проведения испытания на стерильность использовали 5 флаконов с образцом исследуемого штамма «Приволжский» вируса ЗУД. Подтверждение отсутствия контаминации бактериальной, грибной микрофлорой и микоплазмами проводили в соответствии с ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности» [1].To carry out the sterility test, 5 bottles were used with a sample of the studied Volga strain of the itch virus. Confirmation of the absence of contamination with bacterial, fungal microflora and mycoplasmas was carried out in accordance with GOST 28085-13 “Biological medicinal products for veterinary use. The method of bacteriological control of sterility ”[1].
Содержимое флаконов растворяли в стерильном физиологическом растворе до первоначального объема перед лиофилизацией (2 см3), т.е. ресуспендировали.The contents of the vials were dissolved in sterile physiological saline to the original volume before lyophilization (2 cm 3 ), i.e. resuspended.
Суспензию из каждого флакона по 1 см3 высевали в 3 пробирки с тиогликолевой средой. Две засеянные пробирки выдерживали в термостате в течение 14 суток: одну - при 21÷22°С, другую - при 37°С, а третью - выдерживали в течение 7 суток при (37±0,5)°С. Затем из нее делали пересев по 0,5 см3 по одной пробирке на следующие среды: МПА, МППБ, МПБ, Сабуро жидкий и по 1 см3 на МППБ.A suspension of each vial of 1 cm 3 was sown in 3 tubes with thioglycolic medium. Two seeded tubes were kept in the thermostat for 14 days: one at 21 ÷ 22 ° C, the other at 37 ° C, and the third was kept for 7 days at (37 ± 0.5) ° C. Then, 0.5 cm 3 of each tube was made from it in one test tube for the following media: MPA, MPPB, MPB, Saburo liquid and 1 cm 3 for MPPB.
Пересевы на МПА, МПБ, МППБ выдерживали еще в течение 7 суток при 37°С, а пересев на Сабуро - при 21÷22°С.Reseeding on MPA, MPB, MPPB was maintained for another 7 days at 37 ° C, and reseeding on Saburo - at 21 ÷ 22 ° C.
При микробиологическом испытании образца штамма проводили контроль стерильности сред: три пробирки с каждой средой выдерживали в термостате в течение 14 суток при 37°С, со средой Сабуро - при 21÷22°С.During microbiological testing of the strain sample, sterility of the media was monitored: three tubes with each medium were kept in an thermostat for 14 days at 37 ° С, with Saburo medium - at 21 ÷ 22 ° С.
Для исключения контаминации микоплазмами суспензию образца штамма по 0,5 см3 высевали в пробирку, содержащую 4,5 см3 жидкой среды Каган 0,3%, и выдерживали в термостате при 37°С.To exclude mycoplasma contamination, a suspension of the strain sample of 0.5 cm 3 was sown in a test tube containing 4.5 cm 3 of Kagan liquid medium 0.3% and kept in an incubator at 37 ° C.
При отсутствии роста микоплазм в течение 7 суток на жидкой среде (сохранение цвета индикатора) проводили через каждые 7 суток 2 последовательных пассажа на твердую среду Каган 1,3%.In the absence of growth of mycoplasmas for 7 days on a liquid medium (preserving the color of the indicator), 2 consecutive passages to a solid Kagan medium of 1.3% were performed every 7 days.
При отсутствии специфических для микоплазм колоний, врастающих в толщу агара, делали заключение о чистоте образца штамма.In the absence of colonies specific for mycoplasmas growing in the thickness of the agar, a conclusion was made on the purity of the strain sample.
В результате исследований установлено, что штамм «Приволжский» вируса ЗУД не контамирован бактериями, грибами и микоплазмами. Высевы ресуспендированного образца штамма вируса на соответствующие питательные среды были без проростов посторонней микрофлоры в течение всех сроков наблюдения.As a result of studies, it was found that the Volga strain of the itch virus is not contaminated by bacteria, fungi and mycoplasmas. Inoculation of the resuspended sample of the strain of the virus on the appropriate nutrient medium was without seedlings of extraneous microflora during all periods of observation.
Пример 3Example 3
Получение антигена вируса ЗУД КРС.Obtaining antigen of the itch virus of cattle.
Для приготовления антигена для диагностических целей двухсуточную культуру клеток ТЯ, ПБ или ЯДК-04, выращенную в 1,5-литровых клинских матрасах, предварительно слив с них ростовую среду, заражали вируссодержащей суспензией в дозе 0,3-0,5 ТЦД50/кл. Матрасы помещали на один час в термостат при температуре 37°С для контакта клеток культуры с вирусом. После этого вносили поддерживающую среду ПСП с добавлением 1÷2% сыворотки крови КРС. Инфицированную культуру инкубировали при 37°С до появления ЦПД вируса. При поражении площади монослоя не менее 70÷80% культуральные матрасы подвергали троекратному промораживанию при температуре минус 80°С и оттаиванию.For the preparation of antigen for diagnostic purposes, a two-day cell culture of TB, PB, or YaDK-04 cells grown in 1.5-liter wedge mattresses, after which the growth medium was drained from them, were infected with a virus-containing suspension at a dose of 0.3-0.5 TCD 50 / cl . Mattresses were placed for one hour in a thermostat at a temperature of 37 ° C for contact of culture cells with the virus. After that, a support medium of PSP was added with the addition of 1 ÷ 2% of serum of cattle. The infected culture was incubated at 37 ° C until the appearance of the virus CPP. If the monolayer area was affected by at least 70–80%, the culture mattresses were subjected to freezing three times at a temperature of minus 80 ° С and thawing.
Полученную вируссодержащую культуральную жидкость очищали от балластных белков и фрагментов клеток низкоскоростным центрифугированием при 4800 g в течение 40 минут.The resulting virus-containing culture fluid was purified from ballast proteins and cell fragments by low-speed centrifugation at 4800 g for 40 minutes.
Затем осветленную надосадочную жидкость центрифугировали при 45000 g в течение 45 минут, после чего надосадочную жидкость удаляли, а осадок ресуспендировали в 10 см3 буферном растворе TNE.Then, the clarified supernatant was centrifuged at 45,000 g for 45 minutes, after which the supernatant was removed and the sediment was resuspended in 10 cm 3 TNE buffer solution.
Очистку антигена проводили путем центрифугирования с использованием градиента плотности раствора сахарозы (30%, 45% и 60%) при 10600 g в течение 180 минут. Полученный осадок ресуспендировали в TNE буферном растворе в соотношении 1/100 от начального объема.Antigen was purified by centrifugation using a sucrose solution density gradient (30%, 45% and 60%) at 10,600 g for 180 minutes. The resulting precipitate was resuspended in TNE buffer solution at a ratio of 1/100 of the initial volume.
Полученный данным способом антиген использовали в серологических реакциях для определения уровня антител к вирусу ЗУД КРС, а также для изготовления диагностических сывороток.The antigen obtained by this method was used in serological reactions to determine the level of antibodies to the itch virus of cattle, as well as for the manufacture of diagnostic sera.
Результаты исследований, приведенные в таблице 3, свидетельствуют о том, что способом, описанным в примере 3, получен антиген с активностью в культуре клеток 7,0 lg ТЦД/см3, в ИФА 1:320÷1:640.The research results are shown in table 3, indicate that by the method described in example 3, an antigen with activity in the cell culture of 7.0 lg TCD / cm 3 in ELISA 1: 320 ÷ 1: 640 was obtained.
Пример 4Example 4
Получение гипериммунной сыворотки.Getting hyperimmune serum.
Штамм «Приволжский» используют для получения высокоактивной гипериммунной сыворотки, предназначенной для оценки иммунобиологических свойств вируса ЗУД КРС, а также контроля качества антигенного сырья, используемого при производстве диагностических препаратов.The strain "Volga" is used to obtain highly active hyperimmune serum, designed to assess the immunobiological properties of the itch virus of cattle, as well as quality control of antigenic raw materials used in the production of diagnostic drugs.
Для гипериммунизации животных применяли концентрированный очищенный антиген вируса ЗУД штамма «Приволжский», из которого готовили эмульсию с использованием масляного адъюванта Montanide ISA-70 производства фирмы "SEPPIC" (в соотношении 1:1).For hyperimmunization of animals, a concentrated purified antigen of the itch virus of the Privolzhsky strain was used, from which an emulsion was prepared using an oil adjuvant Montanide ISA-70 manufactured by SEPPIC (in a 1: 1 ratio).
Кроликов иммунизировали в дозе 2 см3 трехкратно по схеме:Rabbits were immunized in a dose of 2 cm 3 three times according to the scheme:
1) в мякиши задних конечностей;1) in the crumbs of the hind limbs;
2) через 7÷10 дней после первой иммунизации в подколенные лимфоузлы;2) 7 ÷ 10 days after the first immunization in the popliteal lymph nodes;
3) через 21 день после первой - внутримышечно.3) 21 days after the first - intramuscularly.
Через 10÷15 дней после окончания гипериммунизации доноров обескровливали и получали сыворотку крови для исследования на наличие антител. Титр антител определяли в РМН и ИФА.10-15 days after the end of hyperimmunization, donors were bled and received blood serum for testing for the presence of antibodies. The antibody titer was determined in RMN and ELISA.
Данные, представленные в таблице 4, свидетельствуют, что способом, описанным в примере 4, получены диагностические сыворотки со специфической активностью 1:1280÷1:2560 в ИФА и 1:128÷1:512 в РМН.The data presented in table 4 indicate that by the method described in example 4, diagnostic sera with specific activity of 1: 1280 ÷ 1: 2560 in ELISA and 1: 128 ÷ 1: 512 in RMN were obtained.
Пример 5Example 5
Определение антигенной активности и специфичности штамма «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита КРС.Determination of antigenic activity and specificity of the strain "Volga" virus of infectious cattle nodular dermatitis.
Антигенную активность штамма «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита КРС определяли на 5 быках. Для заражения животных использовали суспензию вируса (в объеме 2 см3), полученную после проведения 2-х пассажей в культуре клеток ЯДК-04 с титром инфекционной активности 5,0 lg ТЦД50/см3.Antigenic activity of the strain "Volga" virus of infectious cattle nodular dermatitis was determined on 5 bulls. For infection of animals, a virus suspension (in a volume of 2 cm 3 ) was used, obtained after 2 passages in a YADK-04 cell culture with an infectious activity titer of 5.0 lg TCD 50 / cm 3 .
После введения вируссодержащей суспензии у животных отбирали кровь для определения титра вируснейтрализующих антител в сыворотке крови.After administration of the virus-containing suspension, blood was taken from animals to determine the titer of virus-neutralizing antibodies in blood serum.
Вируснейтрализующую активность специфических антител сывороток крови определяли в РМН. С этой целью готовили двукратные разведения испытуемых сывороток крови КРС. К полученным разведениям сывороток добавляли равные объемы вируссодержащего культурального материала с титром инфекционной активности 2,0 lg ТЦД50/см3. Смеси вируса с сывороткой выдерживали в СО2 - инкубаторе при температуре 37°С в течение одного часа.Virus neutralizing activity of specific antibodies of blood serum was determined in RMN. For this purpose, two-fold dilutions of test cattle serum were prepared. Equal volumes of virus-containing culture material with an infectious activity titer of 2.0 lg TCD 50 / cm 3 were added to the obtained dilutions of sera. A mixture of virus and serum was kept in a CO 2 incubator at a temperature of 37 ° C for one hour.
После часового контакта во все лунки планшета вносили суспензию культуры клеток ЯДК-04 и помещали в помещали в СО2 - инкубатор с содержанием 5% CO2 при температуре 37°С на 96÷120 ч. Наблюдения проводили с использованием инвертируемого микроскопа, регистрируя лунки с выраженным ЦПД вируса и/или с цельным неповрежденным монослоем.After an hour of contact, a cell culture suspension of YaDK-04 was added to all wells of the plate and placed in a CO 2 incubator containing 5% CO 2 at a temperature of 37 ° C for 96–120 h. Observations were carried out using an inverted microscope, recording the wells with pronounced viral CPD and / or with a whole intact monolayer.
При постановке РМН использовали контроли на токсичность сывороток, контроли культуры клеток и дозы вируса.When stating RMN, controls for serum toxicity, control of cell culture and virus dose were used.
Результаты проведенных исследований показали, что титр вируснейтрализующих антител в сыворотках крови КРС находился в пределах 1:8÷1:128.The results of the studies showed that the titer of virus-neutralizing antibodies in the serum of cattle was in the range of 1: 8 ÷ 1: 128.
Специфичность штамма «Приволжский» вируса ЗУД КРС определяли в реакции микронейтрализации (РМН).The specificity of the strain "Volga" virus, itching cattle was determined in the reaction of microneutralization (RMN).
Для проведения РМН использовали сыворотки крови КРС, полученные на штамм «Приволжский». В качестве тест-системы использовали суспензию перевиваемой культуры клеток ЯДК-04.Serum cattle obtained for the Privolzhsky strain was used for RMN. As a test system used suspension of transplantable cell culture YADK-04.
Постановку РМН проводили в 96-луночных планшетах, используя штамм «Приволжский» в последовательных десятикратных разведениях и сыворотку крови КРС с постоянной дозой. В качестве контроля использовали нормальную сыворотку крови КРС. Реакцию учитывали через 5÷6 суток по мере развития цитопатического действия вируса в контрольных лунках, не содержащих исследуемые сыворотки. Титром вируса считали предельное ее разведение, тормозящее развитие цитопатического действия вируса в 50% зараженных лунок с культурой клеток. Индекс нейтрализации рассчитывали по стандартной формуле [4]. Результаты представлены в таблице 5.PMN was performed in 96-well plates using the Privolzhsky strain in serial ten-fold dilutions and a constant dose of cattle blood serum. Normal cattle serum was used as a control. The reaction was taken into account after 5–6 days as the cytopathic effect of the virus developed in control wells that did not contain the test sera. The titer of the virus was considered its limiting dilution, inhibiting the development of the cytopathic effect of the virus in 50% of infected wells with cell culture. The neutralization index was calculated by the standard formula [4]. The results are presented in table 5.
Из данных таблицы 5 видно, что цитопатический эффект вируса со специфической сывороткой крови КРС наблюдали в разведениях вируса от 10-1 до 10-2, титр вируса составлял 2,00 lg ТЦД50/см3. В лунках, куда вносили вирус с нормальной сывороткой, титр вируса составлял 5,77 lg ТЦД50/см3.From the data of table 5 it can be seen that the cytopathic effect of the virus with specific blood serum of cattle was observed in dilutions of the virus from 10 -1 to 10 -2 , the virus titer was 2.00 lg TCD 50 / cm 3 . In the wells where the virus was added with normal serum, the titer of the virus was 5.77 lg TCD 50 / cm 3 .
Индекс нейтрализации составил 2,88 lg ТЦД50/см3, это свидетельствует о том, что тип исследуемого вируса соответствует типу специфической сыворотки.The neutralization index was 2.88 lg TCD 50 / cm 3 , this indicates that the type of the studied virus corresponds to the type of specific serum.
Пример 5Example 5
Изучение биологических свойств штамма «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита КРС (определение патогенности для КРС).The study of the biological properties of the strain "Volga" virus of infectious cattle nodular dermatitis (determination of pathogenicity for cattle).
При внутривенном заражении КРС (5 голов) очищенной вируссодержащей культуральной жидкостью в объеме 2 см3 с титром инфекционной активности 5,0 lg ТЦД50/см3 инкубационный период составил 8÷9 дней. На 10 сутки после заражения у животных наблюдали характерные клинические признаки ЗУД: появление множественных бугров размером от 0,5 до 1 см и эрозий (на мошонке, слизистой оболочке ноздрей и носовом зеркале, размером до 1÷2 см в диаметре).During intravenous infection of cattle (5 animals) with a purified virus-containing culture fluid in a volume of 2 cm 3 with an infectious activity titer of 5.0 lg TCD 50 / cm 3, the incubation period was 8–9 days. On the 10th day after infection, the characteristic clinical signs of itching were observed in animals: the appearance of multiple tubercles from 0.5 to 1 cm in size and erosion (on the scrotum, mucous membrane of the nostrils and nasal mirror, up to 1 ÷ 2 cm in diameter).
На 14 сут количество нодул увеличилось в 2÷3 раза. Они были круглой, овальной и неправильной формы (размер от 1 до 3 см) и локализовались по всему телу и регистрировались на слизистой ноздрей и носовом зеркале. В отдельных местах нодулы объединялись и образовывали конгломераты размером до 5÷6 см. Конъюнктива глаз была гиперемирована. Поверхностные лимфатические узлы (предлопаточный, подчелюстной, подколенный и паховый) были увеличены примерно в 1,5 раза.On day 14, the number of nodules increased 2–3 times. They were round, oval and irregular in shape (size from 1 to 3 cm) and localized throughout the body and recorded on the mucous membrane of the nostrils and nasal mirror. In some places, the nodules combined and formed conglomerates up to 5–6 cm in size. The conjunctiva of the eyes was hyperemic. The superficial lymph nodes (pre-scapular, submandibular, popliteal and inguinal) were enlarged by about 1.5 times.
На 20 сут у животных клинические признаки заболевания сохранялись и характеризовались образованием множественных узлов размером от 0,5 до 2,5 см и более, расположенными по всей поверхности тела. Слизистая носовых ходов была гиперемирована, на мошонке наблюдались единичные эрозии, лихорадка сохранялась. Кроме того, наблюдали отеки подгрудка, суставов, множественные поражения на слизистой носовых ходов.On day 20 in animals, the clinical signs of the disease persisted and were characterized by the formation of multiple nodes measuring 0.5 to 2.5 cm or more, located over the entire surface of the body. The mucous membrane of the nasal passages was hyperemic, single erosion was observed on the scrotum, and the fever persisted. In addition, edema of the breast, joints, multiple lesions on the mucous membrane of the nasal passages were observed.
На 40÷45 сут на месте образования первых нодул в области морды, мошонки и внутренней поверхности бедра происходило образование струпьев.At 40–45 days, scabs formed in the area of the formation of the first nodules in the area of the muzzle, scrotum, and inner thigh surface.
Таким образом, при заражении естественно восприимчивых животных вируссодержащим материалом воспроизведена генерализованная форма инфекции. Специфичность заболевания животных подтверждена ПЦР исследованиями биоматериала и методом вирусовыделения в культуре клеток.Thus, upon infection of naturally susceptible animals with virus-containing material, a generalized form of infection is reproduced. The specificity of animal disease was confirmed by PCR studies of biomaterial and the method of virus isolation in cell culture.
Для изучения контагиозности штамма «Приволжский» вируса ЗУД КРС было сформировано 3 группы животных (быки черно-пестрой породы), по 5 голов в каждой группе.To study the contagiousness of the Privolzhsky strain of the itch cattle virus, 3 groups of animals were formed (bulls of black-motley breed), 5 animals in each group.
Животным первой группы вводили внутривенно очищенную культуральную вируссодержащую жидкость в объеме 2 см3 с титром инфекционной активности 5,0 lg ТЦД50/см3, животные второй группы являлись контрольными и содержались в одном боксе с инфицированными животными на протяжении всего опыта. Третья группа животных была сформирована на 36-е сутки с момента начала опыта и также являлась контрольной, данная группа содержалась вместе с зараженными животными и животными второй группы. Животные содержались в специализированном лабораторно-виварном комплексе, обеспечивающем защиту от проникновения насекомых и грызунов.Animals of the first group were injected with an intravenously purified culture virus-containing liquid in a volume of 2 cm 3 with an infectious activity titer of 5.0 lg TCD 50 / cm 3 , animals of the second group were control and kept in the same box with infected animals throughout the experiment. The third group of animals was formed on the 36th day after the start of the experiment and was also a control, this group was kept together with infected animals and animals of the second group. Animals were kept in a specialized laboratory-vivar complex, which provides protection against the penetration of insects and rodents.
За животными вели наблюдение в течение 64 суток. При этом ежедневно проводилась термометрия и регистрация клинических признаков данного заболевания, а также отбор проб биоматериала.The animals were monitored for 64 days. At the same time, thermometry and registration of clinical signs of this disease, as well as sampling of biomaterial, were performed daily.
Через 10 дней после инфицирования у животных первой группы отмечали развитие характерных клинических симптомов ЗУД: множественные бугры (нодулы) в области шеи, лопаток, крупе, на боках размером 0,5÷1,5 см, отдельные до 2,5÷3 см; эрозии на мошонке, слизистой оболочке ноздрей и носовом зеркале, размером до 1÷2 см в диаметре.10 days after infection in the animals of the first group, the development of characteristic clinical symptoms of itching was noted: multiple tubercles (nodules) in the neck, shoulder blades, croup, on the sides 0.5–1.5 cm in size, separate up to 2.5–3 cm; erosion on the scrotum, mucous membrane of the nostrils and nasal mirror, up to 1 ÷ 2 cm in diameter.
Через 21 день после инфицирования животных первой группы (или через 11 дней после развития характерной клинической картины) у контрольных животных второй группы регистрировали в ПЦР выделение генома ЗУД с носовыми истечениями.21 days after infection of the animals of the first group (or 11 days after the development of a characteristic clinical picture) in the control animals of the second group, the isolation of the itching genome with nasal discharge was recorded in PCR.
Через 30 дней после инфицирования животных первой группы (или через 20 дней после развития характерной клинической картины) у контрольных животных второй группы развивались характерные клинические симптомы ЗУД: увеличенные лимфоузлы, множественные узелковые поражения кожи, размером 0,5÷1,5 см, иногда до 3÷4 см, эрозийные поражения слизистых оболочек носа.30 days after infection of the animals of the first group (or 20 days after the development of a characteristic clinical picture), the control animals of the second group developed characteristic clinical symptoms of itching: enlarged lymph nodes, multiple nodular skin lesions, size 0.5 ÷ 1.5 cm, sometimes up to 3 ÷ 4 cm, erosive lesions of the mucous membranes of the nose.
Через 36 дней после инфицирования животных первой группы (или через 26 дней после развития характерной клинической картины) в бокс, где содержались животные группы 1 и 2 были дополнительно введены 5 здоровых животных (группа 3), с целью повторного воспроизведения опыта:36 days after infection of animals of the first group (or 26 days after the development of a characteristic clinical picture), 5 healthy animals were additionally introduced into the box where animals of groups 1 and 2 were kept (group 3), in order to repeat the experiment:
- через 6 дней после постановки (42÷й день опыта), у животных третьей группы регистрировали в ПЦР выделение генома ЗУД в окулярных смывах;- 6 days after the formulation (42nd day of the experiment), in animals of the third group, the isolation of the itch genome in ocular washes was recorded in PCR;
- через 24 дня после постановки (60÷й день опыта), у животных третьей группы регистрировали характерные симптомы ЗУД: множественные узелковые поражения кожи, размером 0,5÷1,5 см, иногда до 2÷2,5 см, эрозийные поражения слизистых оболочек.- 24 days after the formulation (60th day of the experiment), characteristic symptoms of pruritus were recorded in animals of the third group: multiple nodular skin lesions, 0.5–1.5 cm in size, sometimes up to 2–2.5 cm, erosive mucosal lesions shells.
Результаты изучения контагиозности штамма «Приволжский» вируса ЗУД КРС позволили сделать вывод о выявлении у возбудителя свойств, ранее не характерных для болезни - кроме основного, трансмиссивного пути распространения, полученный штамм приобрел выраженное свойство контактного пути заражения (передачи).The results of a study of the contagiousness of the Volga strain of cattle RCH itch virus made it possible to conclude that the pathogen revealed properties that were not previously characteristic of the disease — in addition to the main, transmissible pathway of distribution, the resulting strain acquired a pronounced property of the contact pathway of infection (transmission).
Пример 6Example 6
Идентификация и филогенетическое родство штамма (ПЦР).Identification and phylogenetic relationship of the strain (PCR).
Видовая принадлежность штамма «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита КРС к вирусу ЗУД подтверждена методом локусного секвенирования по Сангеру (Applied Biosystems, США). Установлено, что штамм «Приволжский» принадлежит к группе вирусов ЗУД КРС.The species affiliation of the Volga strain of the cattle infectious nodular dermatitis virus to the itch virus was confirmed by the Sanger method of locus sequencing (Applied Biosystems, USA). It was established that the strain "Volga" belongs to the group of viruses of pruritus cattle.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение штамма «Приволжский» вируса заразного узелкового дерматита (нодулярного дерматита) крупного рогатого скота для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики заразного узелкового дерматита крупного рогатого скота:Sources of information taken into account when compiling the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention of the Volga strain of the virus of infectious nodular dermatitis (nodular dermatitis) in cattle for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prophylaxis of infectious nodular dermatitis in cattle:
1. ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности».1. GOST 28085-13 “Biological medicinal products for veterinary use. The method of bacteriological control of sterility. "
2. Кодекс здоровья наземных животных МЭБ / Т. 1. - 23 изд. - Paris, 2014. - Гл. 1.2. Критерии включения болезней, инфекций и инфестаций в список МЭБ. - С. 5.2. OIE Terrestrial Animal Health Code / T. 1. - 23rd ed. - Paris, 2014 .-- Ch. 1.2. Criteria for listing diseases, infections and infestations on the OIE list. - S. 5.
3. Кононов А.В., Кононова С.В., Шумилова И.Н. [и др.] Культурально-биологические свойства возбудителя нодулярного дерматита крупного рогатого скота, выделенного на территории Российской Федерации в 2015 году: научное издание / // Ветеринария сегодня. - 2016. - №3. - С. 8-18.3. Kononov A.V., Kononova S.V., Shumilova I.N. [and others] Cultural and biological properties of the causative agent of nodular dermatitis in cattle isolated on the territory of the Russian Federation in 2015: scientific publication / // Veterinary Medicine today. - 2016. - No. 3. - S. 8-18.
4. Троценко, Н.И. Практикум по ветеринарной вирусологии / Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская. - М.: Колос, 2000. - 272 с.4. Trotsenko, N.I. Workshop on Veterinary Virology / N.I. Trotsenko, R.V. Belousova, E.A. Preobrazhenskaya. - M .: Kolos, 2000 .-- 272 p.
5. Официальный сайт Международного эпизоотического бюро (МЭБ) - URL: http://www.oie.int/eng/info/5. Official website of the International Epizootic Bureau (OIE) - URL: http://www.oie.int/eng/info/
6. Пат. 235537 РФ, МПК C12N 5/06 Линия клеток яичников домашней Capra hircus L. ЯДК-04 для репродукции вирусов животных / Герасимов В.Н., Герасимова Н.И., Дьяконов Л.П., Груздев К.Н., Захаров В.М., Манин Б.Л. - №2006114337/13; заявл. 26.04.2006, опубл. 10.10.20086. Pat. 235537 RF, IPC C12N 5/06 Ovarian cell line of domestic Capra hircus L. YaDK-04 for reproduction of animal viruses / Gerasimov V.N., Gerasimova N.I., Dyakonov L.P., Gruzdev K.N., Zakharov V .M., Manin B.L. - No. 2006114337/13; declared 04/26/2006, publ. 10/10/2008
7. Пат. 2606254 РФ, МПК C12N 7/00 Штамм вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота Dermatitis nodularis bovum, рода Capripoxvirus для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики нодулярного дерматита крупного рогатого скота / С.В. Кононова, А.В. Кононов, И.Н. Шумилова [и др.] - №2606254; заявл. 11.05.2016, опубл. 10.01.2017.7. Pat. 2606254 RF, IPC C12N 7/00 Strain of the virus of nodular dermatitis in cattle Dermatitis nodularis bovum, genus Capripoxvirus for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of nodular dermatitis in cattle / C.V. Kononova, A.V. Kononov, I.N. Shumilova [et al.] - No. 260,6254; declared 05/11/2016, publ. 01/10/2017.
8. Пат. 2647757 РФ, МПК C12N 7/00 Штамм " Волгоградский " вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота для вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов / С.П. Живодеров, Н.И. Сальников, Т.Р. Усадов [и др.] - №201615397; заявл. 21.11.2016, опубл. 19.03.2018.8. Pat. 2647757 RF, IPC C12N 7/00 Strain "Volgograd" virus nodular dermatitis in cattle for virological, molecular genetic, monitoring studies, the manufacture of vaccines and diagnostic drugs / S.P. Zhivoderov, N.I. Salnikov, T.R. Usadov [et al.] - No. 201615397; declared 11/21/2016, publ. 03/19/2018.
9. Россельхознадзор / Официальный сайт федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору. - URL: http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/foreign.html9. Rosselkhoznadzor / Official website of the Federal Service for Veterinary and Phytosanitary Surveillance. - URL: http://www.fsvps.ru/fsvps/iac/foreign.html
10. Beard, P.M. Lumpy skin disease: a direct threat to Europe. // Vet Rec., 2016, V. 28, P. 557-558.10. Beard, P.M. Lumpy skin disease: a direct threat to Europe. // Vet Rec., 2016, V. 28, P. 557-558.
11. Evaluation of different diagnostic methods for diagnosis of lumpy skin diseases in cows / W.S. Awad, A.K. Ibrahim, K. Mahran [et al.] // Trop. Anim. Health. Prod. - 2010. - Vol. 42. - P. 777-783.11. Evaluation of different diagnostic methods for diagnosis of lumpy skin diseases in cows / W.S. Awad, A.K. Ibrahim, K. Mahran [et al.] // Trop. Anim. Health Prod. - 2010 .-- Vol. 42. - P. 777-783.
12.
13. Sprygin A, Pestova Y, Prutnikov P, Kononov A. Detection of vaccine lumpy skin disease virus in cattle and Musca domestica L. flies in an outbreak of lumpy skin disease in Russia in 2017. Transboundary and Emerging Diseases. 2018. doi: 10.1111/tbed.12889.13. Sprygin A, Pestova Y, Prutnikov P, Kononov A. Detection of vaccine lumpy skin disease virus in cattle and Musca domestica L. flies in an outbreak of lumpy skin disease in Russia in 2017. Transboundary and Emerging Diseases. 2018.doi: 10.1111 / tbed.12889.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019116271A RU2708335C1 (en) | 2019-05-27 | 2019-05-27 | Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019116271A RU2708335C1 (en) | 2019-05-27 | 2019-05-27 | Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2708335C1 true RU2708335C1 (en) | 2019-12-05 |
Family
ID=68836626
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019116271A RU2708335C1 (en) | 2019-05-27 | 2019-05-27 | Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2708335C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2770815C1 (en) * | 2021-08-16 | 2022-04-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain "tyumen/2019" of the virus of infectious nodular dermatitis (lumpy dermatitis) of cattle dermatitis nodularis bovum of the genus capripoxvirus for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of infectious nodular dermatitis of cattle |
| RU2799604C1 (en) * | 2023-03-14 | 2023-07-07 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Lumpy skin disease virus of the capripoxvirus genus neethling-arriah strain for the manufacture of biological products for the specific prevention of infectious nodular dermatitis in cattle |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2606254C1 (en) * | 2016-05-11 | 2017-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain of nodular dermatitis virus of cattle dermatitis nodularis bovum, genus capripoxvirus to produce biopreparations for diagnosis and specific prevention of nodular dermatitis of cattle |
| RU2647757C1 (en) * | 2016-11-21 | 2018-03-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) | Volgogradsky strain of cattle nodular dermatitis virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
-
2019
- 2019-05-27 RU RU2019116271A patent/RU2708335C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2606254C1 (en) * | 2016-05-11 | 2017-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain of nodular dermatitis virus of cattle dermatitis nodularis bovum, genus capripoxvirus to produce biopreparations for diagnosis and specific prevention of nodular dermatitis of cattle |
| RU2647757C1 (en) * | 2016-11-21 | 2018-03-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) | Volgogradsky strain of cattle nodular dermatitis virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PESTOVA YA. E., et al., Real time PCR for the detection of field isolates of lumpy skin disease virus in clinical samples from cattle, Agricultural biology, 2018, v.53, N2, pp. 422-429. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2770815C1 (en) * | 2021-08-16 | 2022-04-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Strain "tyumen/2019" of the virus of infectious nodular dermatitis (lumpy dermatitis) of cattle dermatitis nodularis bovum of the genus capripoxvirus for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of infectious nodular dermatitis of cattle |
| RU2799604C1 (en) * | 2023-03-14 | 2023-07-07 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Lumpy skin disease virus of the capripoxvirus genus neethling-arriah strain for the manufacture of biological products for the specific prevention of infectious nodular dermatitis in cattle |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Robinson et al. | Parapoxviruses: their biology and potential as recombinant vaccines | |
| Bhanuprakash et al. | Pox outbreaks in sheep and goats at Makhdoom (Uttar Pradesh), India: evidence of sheeppox virus infection in goats | |
| RU2547589C2 (en) | New avian astrovirus | |
| Oğuzoğlu et al. | A sheeppox virus outbreak in Central Turkey in 2003: isolation and identification of capripoxvirus ovis | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2606254C1 (en) | Strain of nodular dermatitis virus of cattle dermatitis nodularis bovum, genus capripoxvirus to produce biopreparations for diagnosis and specific prevention of nodular dermatitis of cattle | |
| US5916570A (en) | Multivalent bovine coronavirus vaccine and method of treating bovine coronavirus infection | |
| RU2701808C2 (en) | Broad-spectrum vaccine against avian reovirus | |
| RU2708335C1 (en) | Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals | |
| CN109609468B (en) | Six-gene-deleted porcine pseudorabies virus, porcine pseudorabies vaccine and preparation method thereof | |
| Pervin et al. | Isolation, adaptation, and characterization of lumpy skin disease virus from cattle in Bangladesh | |
| Abisheva et al. | AK‐2011 strain for the development of a vaccine against equine rhinopneumonitis | |
| RU2770815C1 (en) | Strain "tyumen/2019" of the virus of infectious nodular dermatitis (lumpy dermatitis) of cattle dermatitis nodularis bovum of the genus capripoxvirus for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of infectious nodular dermatitis of cattle | |
| KR101092977B1 (en) | Avian Infectious Bronchitis Virus and Vaccine for Avian Infectious Bronchitis Comprising the Same | |
| CN118480515B (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus NADC30 virus strain and application thereof | |
| CN109735504B (en) | Canine distemper virus attenuated vaccine strain and its application | |
| RU2399668C1 (en) | Swine transmissible gastroenteritis "t=-96" virus strain used for manufacturing of diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2563522C1 (en) | STRAIN O №2102/Zabaikalsky/2010 FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF FMD VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PRODUCTS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE O | |
| RU2127602C1 (en) | Strain "bg" of avian infection bursitis virus and vaccine against avian infection bursitis | |
| RU2396977C1 (en) | Tissue-culture dry goat-pox virus-vaccine | |
| RU2266328C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2603255C1 (en) | STRAIN A N2155/Baikal/2013 OF MURRAIN VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY AND TO PRODUCE BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF MURRAIN TYPE A | |
| RU2266327C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2799604C1 (en) | Lumpy skin disease virus of the capripoxvirus genus neethling-arriah strain for the manufacture of biological products for the specific prevention of infectious nodular dermatitis in cattle | |
| RU2526570C2 (en) | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine |