RU2708393C1 - Лиофилизированные композиции антибактериального белка - Google Patents
Лиофилизированные композиции антибактериального белка Download PDFInfo
- Publication number
- RU2708393C1 RU2708393C1 RU2018124794A RU2018124794A RU2708393C1 RU 2708393 C1 RU2708393 C1 RU 2708393C1 RU 2018124794 A RU2018124794 A RU 2018124794A RU 2018124794 A RU2018124794 A RU 2018124794A RU 2708393 C1 RU2708393 C1 RU 2708393C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- staphylococcus
- antibacterial
- amino acid
- composition
- poloxamer
- Prior art date
Links
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 159
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 157
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 145
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 144
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 63
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 43
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims abstract description 31
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims abstract description 26
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims abstract description 22
- 241000191984 Staphylococcus haemolyticus Species 0.000 claims abstract description 21
- 229940037649 staphylococcus haemolyticus Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 241001147686 Staphylococcus arlettae Species 0.000 claims abstract description 17
- 241001033898 Staphylococcus equorum Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000192085 Staphylococcus gallinarum Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000192087 Staphylococcus hominis Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000191980 Staphylococcus intermedius Species 0.000 claims abstract description 17
- 241001147689 Staphylococcus kloosii Species 0.000 claims abstract description 17
- 241000147121 Staphylococcus lentus Species 0.000 claims abstract description 17
- 241001134656 Staphylococcus lugdunensis Species 0.000 claims abstract description 17
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 241001147687 Staphylococcus auricularis Species 0.000 claims abstract description 16
- 241000192086 Staphylococcus warneri Species 0.000 claims abstract description 16
- 241000192101 Staphylococcus muscae Species 0.000 claims abstract description 15
- 241000193817 Staphylococcus pasteuri Species 0.000 claims abstract description 15
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 claims abstract description 15
- 241000191973 Staphylococcus xylosus Species 0.000 claims abstract description 14
- 241000191965 Staphylococcus carnosus Species 0.000 claims abstract description 13
- 241000520126 Staphylococcus delphini Species 0.000 claims abstract description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 206010041925 Staphylococcal infections Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 241001147698 Staphylococcus cohnii Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000201854 Staphylococcus chromogenes Species 0.000 claims abstract description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 34
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 30
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 29
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims description 17
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 14
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical group OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 14
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 claims description 14
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims description 13
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims description 13
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 13
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 110
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 21
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 14
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 8
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 2
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 206010035039 Piloerection Diseases 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 2
- 229940093476 ethylene glycol Drugs 0.000 description 2
- 210000000744 eyelid Anatomy 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 2
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 2
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 2
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000005371 pilomotor reflex Effects 0.000 description 2
- -1 polyoxypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 2
- 239000001974 tryptic soy broth Substances 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 206010015995 Eyelid ptosis Diseases 0.000 description 1
- 108010051815 Glutamyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- 241000257229 Musca <genus> Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241001134658 Streptococcus mitis Species 0.000 description 1
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000002788 crimping Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 201000003004 ptosis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229920000428 triblock copolymer Polymers 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 238000012108 two-stage analysis Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области медицины и предназначена для лечения стафилококковых инфекций. Лиофилизированная композиция для лечения стафилококковых инфекций содержит смесь антибактериальных белков, обладающих способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus, а также содержит полоксамер, сахар и аминокислоту. Указанная смесь состоит из первого антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второго антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2. В другом воплощении обеспечивается антибактериальная композиция для лечения стафилококковых инфекций, содержащая вышеуказанную смесь антибактериальных белков, полоксамер, сахар, аминокислоту и воду, где концентрация антибактериальных белков составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл. Также обеспечивается способ изготовления лиофилизированной композиции для лечения стафилококковых инфекций. Использование группы изобретений позволяет повысить стабильность композиции в течение соответствующего периода времени и позволяет вводить ее инъекционным путем, что повышает эффективность лечения стафилококковых инфекций. 3 н. и 26 з.п. ф-лы, 7 табл., 3 ил., 5 пр.
Description
Настоящая заявка заявляет приоритет по первоначальной заявке США 62/277588, поданной 12 января 2016 года, которая включена посредством ссылки для всех целей, как если бы она была полностью изложена в данном документе.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к лиофилизированным композициям антибактериального белка, конкретнее антибактериального белка, специфичного по меньшей мере в отношении одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus.
Обсуждение родственной области
Бактериофаг представляет собой любой из целого ряда вирусоподобных микроорганизмов, которые инфицируют бактерии, и данный термин обычно используется в своей сокращенной форме, "фаг". Бактериофаг, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичный в отношении Staphylococcus aureus, был выделен и депонирован в корейской коллекции сельскохозяйственных культур (KACC), государственного института сельскохозяйственной биотехнологии (NIAB) 14 июня 2006 года (учетный номер: KACC 97001Р). Несмотря на то, что данный бактериофаг является эффективным в отношении предупреждения и лечения инфекций Staphylococcus aureus, применение этого бактериофага имеет некоторые недостатки.
Антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток Staphylococcus aureus, получали из данного бактериофага, и данный антибактериальный белок можно использовать для предупреждения и лечения заболевания, вызываемого Staphylococcus aureus. См., Патент США 8232370.
Кроме того, данный антибактериальный белок демонстрировал антибактериальную активность, специфичную ко всем следующим видам: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus.
При получении фармацевтической композиции, содержащей антибактериальный белок, композиция должна быть изготовлена таким образом, чтобы активность антибактериального белка поддерживалась в течение соответствующего периода времени. Потеря активности или стабильности антибактериального белка может быть результатом химической или физической нестабильности белка, например, вследствие денатурации, агрегации или окисления. Композиция может таким образом быть фармацевтически неприемлемой. Применение эксципиентов, как известно, повышает стабильность биологически активного белка, но стабилизирующие эффекты данных эксципиентов непредсказуемы и сильно зависят от природы биологически активного белка и данных эксципиентов.
Остается потребность в композициях, содержащих антибактериальный белок в качестве активного ингредиента, и чтобы данные композиции были стабильными в течение соответствующего периода времени и подходящими для инъекции. Композиции будет полезны для введения при лечении заболевания, вызываемого бактериальной инфекцией.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно настоящему изобретению предложена лиофилизированная композиция, включающая антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамер; сахар; и аминокислоту.
В одном из аспектов концентрация антибактериального белка в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
В другом аспекте антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.
В другом аспекте антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В другом аспекте антибактериальный белок представляет собой смесь первого антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второго антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В другом аспекте антибактериальный белок включает 15-35 мол. % первого антибактериального белка и 65-85 мол. % второго антибактериального белка.
В другом аспекте антибактериальный белок включает 25 мол. % первого антибактериального белка и 75 мол. % второго антибактериального белка.
В другом аспекте концентрация полоксамера в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
В другом аспекте полоксамер представляет собой полоксамер 188.
В другом аспекте сахар представляет собой D-сорбит.
В другом аспекте концентрация сахара в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л.
В другом аспекте аминокислота представляет собой L-гистидин.
В другом аспекте концентрация аминокислоты в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
Согласно настоящему изобретению предложена антибактериальная композиция, включающая антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамер; сахар; аминокислоту и воду. Антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и концентрация антибактериального белка составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
Согласно настоящему изобретению предложена антибактериальная композиция, включающая антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамер; сахар; аминокислоту и воду. Антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, и концентрация антибактериального белка составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
Согласно настоящему изобретению предложена антибактериальная композиция, включающая антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамер; сахар; аминокислоту и воду. Антибактериальный белок включает первый антибактериальный белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второй антибактериальный белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, и концентрация антибактериального белка составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
В одном из аспектов антибактериальный белок включает 15-35 мол. % первого антибактериального белка и 65-85 мол. % второго антибактериального белка.
В другом аспекте антибактериальный белок включает 25 мол. % первого антибактериального белка и 75 мол. % второго антибактериального белка.
В другом аспекте полоксамер представляет собой полоксамер 188. В другом аспекте концентрация полоксамера составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
В другом аспекте сахар представляет собой D-сорбит.
В другом аспекте концентрация сахара составляет от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л.
В другом аспекте аминокислота представляет собой L-гистидин. В другом аспекте концентрация аминокислоты составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
Согласно настоящей заявке предложен способ изготовления лиофилизированной композиции, включающий образование смеси, состоящей из антибактериального белка, обладающего киллинговой активностью, специфичной к по меньшей мере одному из или всем следующим видам: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамера; сахара и аминокислоты, и подвергание данной смеси лиофилизации.
В одном из аспектов концентрация антибактериального белка в смеси перед лиофилизацией составляет примерно от 0,1 мг/мл до 30 мг/мл.
В другом аспекте антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.
В другом аспекте антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В другом аспекте антибактериальный белок представляет собой смесь первого антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второго антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В другом аспекте антибактериальный белок включает 15-35 мол. % первого антибактериального белка и 65-85 мол. % второго антибактериального белка.
В другом аспекте антибактериальный белок включает 25 мол. % первого антибактериального белка и 75 мол. % второго антибактериального белка.
В другом аспекте концентрация полоксамера в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
В другом аспекте полоксамер представляет собой полоксамер 188. В другом аспекте сахар представляет собой D-сорбит.
В другом аспекте концентрация сахара в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л.
В другом аспекте аминокислота представляет собой L-гистидин.
В другом аспекте концентрация аминокислоты в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
Следует понимать, что как приведенное выше общее описание, так и последующее подробное описание приведены в качестве примера и являются пояснительными и предназначены для обеспечения дополнительного объяснения заявленного изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
Сопровождающие графические материалы, которые включены для обеспечения дополнительного понимания изобретения и включены в и составляют часть данного описания, иллюстрируют воплощения изобретения и совместно с описанием служат для объяснения принципов данного изобретения. В графических материалах:
Фиг. 1 представляет собой результат эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии, анализируемой в момент времени ноль для лиофилизированной композиции.
Фиг. 2 представляет собой результат эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии, анализируемой спустя 1 месяц хранения лиофилизированной композиции.
Фиг. 3 представляет собой результат эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии, анализируемой спустя 6 месяцев хранения лиофилизированной композиции.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРОИЛЛЮСТРИРОВАННЫХ ВОПЛОЩЕНИЙ
Сейчас подробно будет сделана ссылка на воплощения настоящего изобретения, пример которых проиллюстрирован в сопровождающих графических материалах.
Используемое здесь выражение "по меньшей мере один из или все следующие виды стафилококка" означает любой один, два, три, четыре, пять, шесть … вплоть до двадцати двух видов стафилококка, выбранных из группы, состоящей из Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus.
Известно, что белки являются относительно нестабильными в водном состоянии и подвергаются химической и физической деградации, приводящей к потере биологической активности во время обработки и хранения. Лиофилизация (известная также как лиофильная сушка) представляет собой способ защиты белков во время хранения.
Лиофилизированная композиция включает антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамер; сахар и аминокислоту.
Способ производства лиофилизированной композиции включает образование смеси, состоящей из антибактериального белка, обладающего способностью к уничтожению клеток, специфичной к по меньшей мере одному из или всем следующим видам: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамера; сахара и аминокислоты, и подвергание данной смеси лиофилизации.
Концентрация антибактериального белка в растворе перед лиофилизацией может составлять от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 30 мг/мл, от 0,5 мг/мл до 30 мг/мл, от 1,0 мг/мл до 30 мг/мл, от 1,5 мг/мл до 30 мг/мл, от 5 мг/мл до 30 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 25 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 20 мг/мл, от 0,5 мг/мл до 25 мг/мл, от 0,5 мг/мл до 20 мг/мл или от 1,0 мг/мл до 20 мг/мл.
Антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или представляет собой смесь первого антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второго антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
Когда антибактериальный белок представляет собой смесь первого антибактериального белка и второго антибактериального белка, антибактериальный белок может включать 15-35 мол. % первого антибактериального белка и 65-85 мол. % второго антибактериального белка. Например, антибактериальный белок включает 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 мол. % первого антибактериального белка и 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 или 85 мол. % второго антибактериального белка.
Полоксамеры представляют собой неионные триблоксополимеры, состоящие из центральной гидрофобной цепи полиоксипропилена (поли(пропиленоксида)) и двух гидрофильных цепей полиоксиэтилена (поли(этиленоксида)). Концентрация полоксамера в растворе перед лиофилизацией может составлять от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л, от 0,1 г/л до 10 г/л, от 0,2 г/л до 10 г/л, от 0,1 г/л до 8 г/л, от 0,2 г/л до 8 г/л, от 0,1 г/л до 6 г/л или от 0,2 г/л до 6 г/л. Предпочтительно, полоксамер представляет собой полоксамер 188.
Предпочтительными сахарами, используемыми в лиофилизированной композиции, являются, например, D-сорбит, сахароза, глюкоза, лактоза, трегалоза, глицерин, этиленгликоль, маннит, ксилит и инозит. Более предпочтительно, сахаром является D-сорбит. Концентрация сахара в растворе перед лиофилизацией может составлять от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л, от 1 г/л до 600 г/л, от 5 г/л до 600 г/л, от 1 г/л до 500 г/л, от 5 г/л до 500 г/л, от 1 г/л до 400 г/л или от 5 г/л до 400 г/л.
Предпочтительными аминокислотами, используемыми в лиофилизированной композиции, являются, например, L-гистидин, L-глицин и L-аргинин. Более предпочтительно, аминокислотой является L-гистидин. Концентрация аминокислоты в растворе перед лиофилизацией может составлять от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л, от 0,1 г/л до 10 г/л, от 0,5 г/л до 10 г/л, от 0,1 г/л до 8 г/л, от 0,5 г/л до 8 г/л, от 0,1 г/л до 6 г/л или от 0,5 г/л до 6 г/л.
Антибактериальные композиции включают антибактериальный белок, обладающий способностью к уничтожению клеток, специфичной к по меньшей мере одному из или всем следующим видам: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамер; сахар; аминокислоту и воду. Антибактериальный белок состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или включает первый антибактериальный белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второй антибактериальный белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
Концентрация антибактериального белка в антибактериальной композиции может составлять от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 30 мг/мл, от 0,5 мг/мл до 30 мг/мл, от 1,0 мг/мл до 30 мг/мл, от 1,5 мг/мл до 30 мг/мл, от 5 мг/мл до 30 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 25 мг/мл, от 0,1 мг/мл до 20 мг/мл, от 0,5 мг/мл до 25 мг/мл, от 0,5 мг/мл до 20 мг/мл или от 1,0 мг/мл до 20 мг/мл.
Когда антибактериальный белок представляет собой смесь первого антибактериального белка и второго антибактериального белка, антибактериальный белок может включать 15-35 мол. % первого антибактериального белка и 65-85 мол. % второго антибактериального белка. Например, антибактериальный белок включает 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 или 35 мол. % первого антибактериального белка и 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84 или 85 мол. % второго антибактериального белка.
Концентрация полоксамера в антибактериальной композиции может составлять от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л, от 0,1 г/л до 10 г/л, от 0,2 г/л до 10 г/л, от 0,1 г/л до 8 г/л, от 0,2 г/л до 8 г/л, от 0,1 г/л до 6 г/л или от 0,2 г/л до 6 г/л. Предпочтительно, полоксамер представляет собой полоксамер 188.
Предпочтительными сахарами, используемыми в антибактериальной композиции, являются, например, D-сорбит, сахароза, глюкоза, лактоза, трегалоза, глицерин, этиленгликоль, маннит, ксилит и инозит. Концентрация сахара в антибактериальной композиции может составлять от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л, от 1 г/л до 600 г/л, от 5 г/л до 600 г/л, от 1 г/л до 500 г/л, от 5 г/л до 500 г/л, от 1 г/л до 400 г/л или от 5 г/л до 400 г/л.
Предпочтительные аминокислоты, используемые в антибактериальной композиции, представляют собой, например, L-гистидин, L-глицин и L-аргинин. Более предпочтительно, аминокислота представляет собой L-гистидин. Концентрация аминокислоты в антибактериальной композиции может составлять от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л, от 0,1 г/л до 10 г/л, от 0,5 г/л до 10 г/л, 0,1 г/л до 8 г/л, от 0,5 г/л до 8 г/л, от 0,1 г/л до 6 г/л или от 0,5 г/л до 6 г/л.
Способ изготовления лиофилизированной композиции включает образование смеси, состоящей из антибактериального белка, обладающего способностью к уничтожению клеток, специфичной к по меньшей мере одному из или всем следующим видам: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus; полоксамера; сахара и аминокислоты, и подвергание данной смеси лиофилизации.
Практические и в настоящее время предпочтительные воплощения настоящего изобретения являются иллюстративными, как показано в следующих примерах.
Однако, понятно, что специалисты в данной области, на основании данного описания могут осуществить модификации и улучшения в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
Пример 1: Получение антибактериального белка
Экспрессионную плазмиду антибактериального белка по настоящему изобретению конструировали посредством общепринятого субклонирования гена, кодирующего антибактериальный белок по настоящему изобретению, который представлен SEQ ID NO: 3, в вектор pBAD-TOPO (Invitrogen). Клетку Escherichia coli BL21, трансформированную полученной плазмидой, использовали в качестве хозяина-продуцента антибактериального белка по настоящему изобретению.
Экспрессию антибактериального белка по настоящему изобретению индуцировали 0,2% арабинозой при оптической плотности при 600 нм (OD600) 2,0, и индуцированные бактериальные клетки затем инкубировали в течение еще 10 часов при 19°С. Бактериальные клетки выделяли посредством центрифугирования (6000×g в течение 20 минут), и полученный осадок клеток ресуспендировали в лизирующем буфере [50 мМ Na2HPO4 (pH 7,5), 10 мМ этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA), 1 мМ дитиотреитол (DTT)] и разрушали с использованием традиционной ультразвуковой обработки в течение 5 минут (импульс 1 секунда с перерывом между импульсами 3 секунды). После центрифугирования (13000×g в течение 20 минут) супернатант выделяли и подвергали двухстадийной хроматографии, включающей ионообменную хроматографию (колонка быстрого потока SP; GE Healthcare) и хроматографию гидрофобного взаимодействия (колонка Toyopearl PPG-600M; Tosoh Bioscience).
Для большей информативности, полученного хозяина-продуцента инокулировали в среду TSB (триптиказо-соевый бульон) (гидролизат казеина, 17 г/л; гидролизат сои, 3 г/л; декстроза, 2,5 г/л; NaCl, 5 г/л; гидроортофосфат калия, 2,5 г/л) и инкубировали при 37°С. Когда концентрация клеток достигала 2,0 OD600, добавляли L-арабинозу в конечной концентрации 0,2% для индукции экспрессии антибактериального белка. Клетки культивировали при 19°С в течение еще 10 часов с момента индукции. Культуральный бульон центрифугировали при 6000×g в течение 20 минут с получением клеточного осадка. Осадок суспендировали в 50 мМ буфере Na2HPO4 (рН 7,5), содержащем 10 мМ EDTA и 1 мМ DTT (10 мл буфера на 1 г клеток). Клетки в суспензии разрушали посредством общепринятой обработки ультразвуком. Клеточный лизат центрифугировали при 13000×g в течение 20 минут для удаления клеточного дебриса. Супернатант подвергали двухстадийной хроматографии, включая ионообменную хроматографию (Буфер А: 25 мМ Na2HPO4 (рН 7,5), 10 мМ EDTA; Буфер В: 25 мМ Na2HPO4 (рН 7,5), 10 мМ EDTA, 1 М NaCl; Буфер С: 25 мМ Na2HPO4 (рН 7,5), 10 мМ EDTA, 50 мМ NaCl, 0,5% Triton Х-100; Процедура: загрузка образца → 1,6 CV (объем колонки) буфера А → 30 CV буфера С → 20 CV буфера А → 5 CV 22% буфера В → градиентное элюирование (20 CV 22-100% буфера В)) и хроматографию гидрофобного взаимодействия (Буфер А: 10 мМ L-гистидин (рН 7,5), 1 М NaCl; Буфер В: 10 мМ L-гистидин (рН 7,5), 1 М мочевина; Процедура: загрузка образца (образец, очищенный посредством ионообменной хроматографии) → 10 CV буфера А → градиентное элюирование (10 CV 0-100% буфера В)). Раствор белка затем фильтровали с помощью 0,2 мкм фильтра.
Для определения состава антибактериальных белков, состоящих из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, проводили двухстадийный анализ. Сначала, жидкостную хроматографию (LC)-Macc спектрометрию (MS) осуществляли с использованием образца белка, обработанного протеазой. Раствор белка, полученный согласно способу, описанному выше, подвергали замене буфера через фильтрование на центрифуге в 50 мМ буфера Tris-HCl (рН 7,6) и разбавляли до концентрации 2,5 мг/мл 6 М раствором мочевины. Разбавленный раствор белка подвергали обработке протеазой. В качестве протеазы использовали модифицированную свиную Glu-C протеазу со степенью чистоты для секвенирования (Promega, Madison, WI, США), и обработку протеазой проводили в соответствии с протоколом производителя. После обработки протеазой раствор белка, обработанный протеазой, подвергали обращенно-фазовой HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография) и Q-TOF-MS (квадрупольная-времяпролетная масс-спектрометрия). Посредством анализа пиков, пики HPLC и MS, соответствующие пептидному фрагменту MAKTQAE, происходящему из антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и пептидному фрагменту AKTQAE, происходящему из антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, идентифицировали на основе оцениваемой картины протеазного расщепления и расчетов массы. Дополнительно, пики HPLC и MS подтверждали сравнением профиля пиков, полученного при использовании в качестве образцов химически синтезированных пептидов (MAKTQAE и AKTQAE). Затем, долю в составе антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, в композиции антибактериального белка определяли посредством анализа обращенно-фазовой HPLC с образцом белка, обработанным протеазой, и химически синтезированными пептидами (MAKTQAE и AKTQAE) на основе корреляции концентрации пептида с соответствующей ей площадью пика. В результате анализа с тремя партиями антибактериального белка определяли, что доля в составе антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, составляла 25, 27 и 29 мол. %.
Пример 2: Получение фармацевтической композиции с лиофилизированной композицией
Фармацевтическую композицию для лечения стафилококковых инфекций, содержащую антибактериальные белки по настоящему изобретению, получали посредством лиофилизации. Получали лиофилизированную композицию, имеющую следующий состав:
Способ изготовления заключается в замене буфера раствора белка, полученного в Примере 1, на буфер, содержащий указанные ингредиенты, концентрировании полученного раствора, регулировании концентрации антибактериального белка в растворе, фильтровании раствора с отрегулированной концентрацией и лиофилизировании фильтрата.
Описание каждой стадии способа приведено ниже:
Замена буфера раствора белка, полученного в Примере 1, на буфер (1,56 г/л L-гистидина (рН 6,0), 50 г/л D-сорбита, 1,47 г/л CaCl2⋅Н2О и 1 г/л полоксамера 188) с использованием стандартной диафильтрации.
Концентрирование полученного раствора с использованием центрифужного фильтра (10 K).
Регулирование концентрации антибактериального белка с помощью буфера (1,56 г/л L-гистидина (рН 6,0), 50 г/л D-сорбита, 1,47 г/л CaCl2⋅Н2О и 1 г/л полоксамера 188) с получением 18 мг/мл, исходя из концентрации белка, определенной традиционным анализом на основе бицинхониновой кислоты (ВСА).
Фильтрование раствора с отрегулированной концентрацией с использованием 0,2 мкм фильтра.
Добавление 1 мл фильтрованного раствора в 3 мл стеклянную пробирку и помещение наполненной пробирки в планшет из нержавеющей стали.
Загрузка планшета в лиофилизатор и лиофилизация продукта с использованием следующего цикла лиофилизации:
Уравновешивание при 4°С в течение примерно 20 минут.
Доведение температуры полки до -40°С и поддержание в течение 12 часов.
Доведение температуры в конденсаторе до -50°С.
Вакуумирование камеры.
При достижении вакуумом значения 1500 мторр, повышение температуры полки вплоть до -20°С и поддержание в течение 16 часов.
Повышение температуры полки вплоть до 20°С в режиме повышения на 10°С в 1 час и поддержание в течение 4 часов.
Снятие вакуума.
Закупоривание и герметизация закупоренных пробирок соответствующими съемными обжимными колпачками.
Лиофилизированную композицию хранили при 4°С и тестировали на стабильность и биологическую активность, как указано ниже. Перед анализом композиции ее растворяли с использованием воды для инъекции (0,92 мл). Стабильность определяли с использованием эксклюзионной высокоэффективной жидкостной хроматографии (SEC-HPLC). SEC-HPLC осуществляли с помощью колонки BioSep™-SEC-S 2000 (Phenomenex, Torrance, СА). Подвижную фазу (10 мМ Tris, 0,5 М NaCl, 1 М мочевина, рН 7,5) наносили при скорости потока 1,0 мл/мин. Инъецировали 50 мкл образца, и за элюированием образца наблюдали в течение 30 мин посредством измерения поглощения при 280 нм. Результаты показаны на Фиг. 1-3.
Биологическую активность оценивали с использованием анализа уменьшения помутнения. Анализ уменьшения помутнения осуществляли следующим образом: образец добавляли к суспензии штамма Staphylococcus aureus АТСС 33591 (CD600 равна 0,5) в 10 мМ фосфатно-солевом буферном растворе (PBS) (рН 7,2) до конечной концентрации антибактериального белка 0,1 мкг/мл. Изменения в плотности бактериальных клеток (CD600) записывали каждые 30 секунд в течение 15 минут. Из данного эксперимента получали TOD50 (полу-log падение в исходной концентрации жизнеспособных бактерий в минутах).
В Таблице 2 обобщены результаты аналитических тестов, связанные со стабильностью и биологической активностью композиции. Значения определяли в 4 контрольных точках: в момент времени ноль, спустя 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев хранения, при температуре хранения 4°С. В тесте на стабильность количество интактного белка в момент времени ноль рассматривали как 100%. В тесте на биологическую активность анализировали отличие от значения TOD50, определенного в момент времени ноль.
Из таблицы 2 можно сделать вывод о том, стабильность и биологическая активность лиофилизированной композиции по настоящему изобретению хорошо сохранялись после 6 месяцев хранения.
Пример 3: Сравнение лиофилизированной композиции и жидкой композиции Биологическую активность лиофилизированной композиции и жидкой композиции сравнивали с использованием анализа уменьшения помутнения в Примере 2. В качестве лиофилизированной композиции использовали лиофилизированную композицию, хранившуюся 1 месяц. Перед анализом биологической активности ее ресуспендировали с использованием воды для инъекции (0,92 мл). В качестве жидкой композиции использовали фильтрованный раствор, свежеприготовленный в соответствии с процедурой, описанной в Примере 2. В данном эксперименте использовали следующие штаммы.
В анализе на уменьшение помутнения применяемая конечная концентрация антибактериального белка составляла 0,1 мкг/мл для следующих штаммов: Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus saprophyticus,and Staphylococcus xylosus. For the testing against Staphylococcus arlettae, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus lentus и Staphylococcus warneri, применяемая конечная концентрация антибактериального белка составляла 0,5 мкг/мл. Для тестирования против Staphylococcus pasteuri применяемая конечная концентрация антибактериального белка составляла 1,0 мкг/мл. Разницу значений TOD50 сравнивали у двух композиций. Результат представлен в Таблице 4.
Результат, показанный в Таблице 4, очевидно указывает на то, что лиофилизированная композиция по настоящему изобретению может обеспечивать очень похожую антибактериальную активность и эффективность антибактериальных свойств с жидкой композицией. Кроме того, результат, показанный в Таблице 4, показывает, что лиофилизрованная композиция по настоящему изобретению обладает быстрой и эффективной бактерицидной активности против разных штаммов Staphylococcus. TOD50 лиофилизированной композиции по настоящему изобретению составляло меньше чем 20 минут против почти всех тестируемых штаммов Staphylococcus.
В то же время исследовали антибактериальную активность лиофилизированной композиции по настоящему изобретению против штаммов, отличных от Staphylococcus. В качестве штаммов, отличных от Staphylococcus, тестировали 2 штамма Enterococcus faecalis, 3 штамма Enterococcus faecium, 2 штамма Streptococcus mitis, 1 штамм Streptococcus uberis, 5 штаммов Escherichia coli, 2 штамма Clostridium perfringens и 3 штамма Salmonella. В результате лиофилизированная композиция по настоящему изобретению не обладала антибактериальной активностью в отношении данных тестируемых штаммов, отличных от Staphylococcus (Таблица 5). Данный результат указывает на то, что антибактериальная активность лиофилизированной композиции по настоящему изобретению является специфичной в отношении Staphylococcus.
Таким образом, сделан вывод о том, что лиофилизированная композиция по настоящему изобретению была специфична в отношении Staphylococcus и обладает широким антибактериальным спектром в пределах Staphylococcus, указывая на то, что лиофилизированная композиция по настоящему изобретению может быть использована в качестве терапевтического агента при стафилококковых инфекциях.
Пример 4: Терапевтический эффект лиофилизированной композиции на одиночную стафилококковую инфекцию
Терапевтический эффект лиофилизированной композиции по настоящему изобретению на одиночные стафилококковые инфекции исследовали с использованием животной модели. В данном эксперименте в качестве модельных штаммов Staphylococcus отбирали Staphylococcus epidermidis и Staphylococcus haemolyticus. В качестве лиофилизированной композиции использовали лиофилизированную композицию после 1 месяца хранения. Перед применением в эксперименте с животными ее ресуспендировали с использованием воды для инъекции (0,92 мл). В качестве жидкой композиции использовали фильтрованный раствор, свежеприготовленный в соответствии с процедурой, описанной в Примере 2.
Для эксперимента с Staphylococcus epidermidis использовали самок мышей ICR [линия, свободная от специфической патогенной микрофлоры (SPF)], массой 23 г плюс/минус 20% (возраст 5 недель). В итоге, 30 мышам, разделенным на три группы (10 мышей на группу) внутривенно инъецировали инокуляты штамма Staphylococcus epidermidis CCARM 3751 (1×108 КОЕ (колониеобразующая единица)/мышь). Животному первой группы (т.е., контрольной группы), вводили внутривенно три раза только буфер (1,56 г/л L-гистидина (рН 6,0), 50 г/л D-сорбита, 1,47 г/л CaCl2⋅Н2О и 1 г/л полоксамера 188) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Животному из группы обработки восстановленным раствором лиофилизированной композиции внутривенно три раза вводили восстановленный раствор лиофилизированной композиции (доза: 25 мг/кг) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Животному из группы обработки жидкой композицией внутривенно три раза вводили жидкую композицию (доза: 25 мг/кг) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Ежедневно регистрировали число мертвых мышей и наблюдали за клиническими признаками. Способность восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции избавляться от бактерий в кровяном русле исследовали с использованием крови, собранной через 5 суток после бактериального заражения (экспериментальная конечная точка), путем стандартного подсчета колоний.
Для эксперимента со Staphylococcus haemolyticus использовали самок мышей ICR [линия, свободная от специфической патогенной микрофлоры (SPF)], массой 22 г плюс/минус 20% (возраст 5 недель). В итоге, 30 мышам, разделенным на три группы (10 мышей на группу), внутривенно инъецировали инокуляты штамма Staphylococcus haemolyticus CCARM 3733 (1×108 КОЕ/мышь). Животному первой группы (т.е. контрольной группы) вводили три раза внутривенно только буфер (1,56 г/л L-гистидина (рН 6,0), 50 г/л D-сорбита, 1,47 г/л CaCl2⋅Н2О и 1 г/л полоксамера 188) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Животному из группы обработки восстановленным раствором лиофилизированной композиции внутривенно вводили восстановленный раствор лиофилизированной композиции (доза: 25 мг/кг) три раза в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Животному из группы обработки жидкой композицией внутривенно три раза вводили жидкую композицию (доза: 25 мг/кг) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Ежедневно регистрировали число мертвых мышей и наблюдали за клиническими признаками. Способность восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции избавляться от бактерий в кровяном русле исследовали с использованием крови, собранной через 5 суток после бактериального заражения (экспериментальная конечная точка), путем стандартного подсчета колоний.
В результате, наблюдали очевидные терапевтические эффекты. Два эксперимента продемонстрировали похожие результаты. В отношении клинических признаков, несмотря на то, что мыши в группах обработки были нормальными в течение всего экспериментального периода, мыши в контрольных группах демонстрировали разные клинические признаки, начиная с 2 суток после бактериального заражения, включая эритему края века, пониженную локомоторную активность, потерю шерсти, пилоэрекцию и вращательное поведение. Внутривенные инъекции восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции значимо повышали выживаемость (Таблица 6).
Более того, внутривенные инъекции восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции значительно уменьшали количество бактерий в крови. Среднее значение КОЕ/мл составляло больше 1×106 в сыворотке, собранной у мышей контрольной группы в эксперименте со Staphylococcus epidermidis, и больше 1×105 в сыворотке, собранной у мышей контрольной группы в эксперименте со Staphylococcus haemolyticus, тогда как у мышей всех групп обработки не наблюдалось бактериальных колоний.
Исходя из вышеуказанных результатов, было подтверждено, что лиофилизированная композиция по настоящему изобретению может обеспечивать очень похожий терапевтический эффект в лечении одиночных стафилококковых инфекций с жидкой композицией. Кроме того, результат, показанный в Таблице 6, демонстрирует, что лиофилизированную композицию по настоящему изобретению можно эффективно использовать для лечения стафилококковых инфекций.
Пример 5: Терапевтический эффект лиофилизированной композиции на множественную стафилококковую инфекцию
Терапевтический эффект лиофилизированной композиции по настоящему изобретению на множественные стафилококковые инфекции исследовали с использованием животной модели. В данном эксперименте в качестве модельных штаммов Staphylococcus отбирали Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus lugdunensis и Staphylococcus warneri. В качестве лиофилизированной композиции использовали лиофилизированную композицию, хранившуюся 1 месяц. Перед применением в эксперименте с животными ее ресуспендировали с использованием воды для инъекции (0,92 мл). В качестве жидкой композиции использовали фильтрованный раствор, свежеприготовленный в соответствии с процедурой, описанной в Примере 2.
Использовали самок мышей ICR [линия, свободная от специфической патогенной микрофлоры (SPF)], массой 22 г плюс/минус 20% (возраст 5 недель). В итоге, 30 мышам, разделенным на три группы (10 мышей на группу), внутривенно инъецировали смешанные инокуляты Staphylococcus epidermidis CCARM 3751, Staphylococcus lugdunensis CCARM 3734 и Staphylococcus warneri KCTC 3340 (ATCC 27836) (1×108 КОЕ каждого/мышь). Животному первой группы (т.е. контрольной группы) три раза внутривенно вводили только буфер (1,56 г/л L-гистидина (рН 6,0), 50 г/л D-сорбита, 1,47 г/л CaCl2⋅Н2О и 1 г/л полоксамера 188) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Животному из группы обработки восстановленным раствором лиофилизированной композиции три раза внутривенно вводили восстановленный раствор лиофилизированной композиции (доза: 25 мг/кг) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Животному из группы обработки жидкой композицией три раза внутривенно вводили жидкую композицию (доза: 25 мг/кг) в моменты времени 30 минут, 12 часов и 24 часа после бактериального заражения. Ежедневно регистрировали число мертвых мышей и наблюдали за клиническими признаками. Способность восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции избавляться от бактерий в кровяном русле исследовали с использованием крови, собранной через 5 суток после бактериального заражения (экспериментальная конечная точка), путем стандартного подсчета колоний.
В результате, наблюдали очевидные терапевтические эффекты. В отношении клинических признаков, несмотря на то, что мыши в группах обработки были нормальными в течение всего экспериментального периода, мыши в контрольной группе демонстрировали разные клинические признаки, включая эритему края века, пониженную локомоторную активность, потерю шерсти, птоз и пилоэрекцию. Внутривенные инъекции восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции значимо повышали выживаемость (Таблица 7).
Кроме того, внутривенные инъекции восстановленного раствора лиофилизированной композиции и жидкой композиции значимо уменьшали бактериальное число в крови. Среднее значение КОЕ/мл составляло больше 1×106 в сыворотке, собранной у мышей контрольной группы, тогда как у мышей всех групп обработки не наблюдалось бактериальных колоний.
Исходя из вышеуказанных результатов, было подтверждено, что лиофилизированная композиция по настоящему изобретению может обеспечивать очень похожий терапевтический эффект в лечении множественных стафилококковых инфекций с жидкой композицией. Кроме того, результат, показанный в Таблице 7, демонстрирует, что лиофилизированную композицию по настоящему изобретению можно эффективно использовать для лечения стафилококковых инфекций.
Специалистам в данной области будет очевидно, что в настоящем изобретении могут быть сделаны разные модификации и варианты, не отступая от сущности и объема изобретения. Таким образом, предполагается, что настоящее изобретение охватывает модификации и варианты данного изобретения, при условии, что они попадают в пределы объема прилагаемой формулы изобретения и ее эквивалентов.
Claims (36)
1. Лиофилизированная композиция для лечения стафилококковых инфекций, содержащая смесь антибактериальных белков, обладающих способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus, где указанная смесь состоит из первого антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второго антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2,
полоксамер, сахар и аминокислоту.
2. Лиофилизированная композиция по п. 1, где концентрация антибактериальных белков в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
3. Лиофилизированная композиция по п. 1, где указанная смесь включает 15-35 мол.% первого антибактериального белка и 65-85 мол.% второго антибактериального белка.
4. Лиофилизированная композиция по п. 3, где указанная смесь включает 25 мол.% первого антибактериального белка и 75 мол.% второго антибактериального белка.
5. Лиофилизированная композиция по п. 1, где концентрация полоксамера в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
6. Лиофилизированная композиция по п. 1, где полоксамер представляет собой полоксамер 188.
7. Лиофилизированная композиция по п. 1, где сахар представляет собой D-сорбит.
8. Лиофилизированная композиция по п. 1, где концентрация сахара в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л.
9. Лиофилизированная композиция по п. 1, где аминокислота представляет собой L-гистидин.
10. Лиофилизированная композиция по п. 1, где концентрация аминокислоты в растворе перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
11. Антибактериальная композиция для лечения стафилококковых инфекций, содержащая:
смесь антибактериальных белков, обладающих способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus, полоксамер, сахар, аминокислоту и воду,
где указанная смесь включает первый антибактериальный белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второй антибактериальный белок, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, и
где концентрация антибактериальных белков составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
12. Антибактериальная композиция по п. 11, где указанная смесь включает 15-35 мол.% первого антибактериального белка и 65-85 мол.% второго антибактериального белка.
13. Антибактериальная композиция по п. 12, где указанная смесь включает 25 мол.% первого антибактериального белка и 75 мол.% второго антибактериального белка.
14. Антибактериальная композиция по п. 11, где полоксамер представляет собой полоксамер 188.
15. Антибактериальная композиция по п. 11, где концентрация полоксамера составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
16. Антибактериальная композиция по п. 11, где сахар представляет собой D-сорбит.
17. Антибактериальная композиция по п. 11, где концентрация сахара составляет от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л.
18. Антибактериальная композиция по п. 11, где аминокислота представляет собой L-гистидин.
19. Антибактериальная композиция по п. 11, где концентрация аминокислоты составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
20. Способ изготовления лиофилизированной композиции для лечения стафилококковых инфекций, включающий:
образование смеси, состоящей из смеси антибактериальных белков, обладающих способностью к уничтожению клеток, специфичной в отношении по меньшей мере одного из или всех следующих видов: Staphylococcus arlettae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus auricularis, Staphylococcus carnosus, Staphylococcus carprae, Staphylococcus chromogenes, Staphylococcus cohnii, Staphylococcus delphini, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus equorum, Staphylococcus gallinarum, Staphylococcus haemolyticus, Staphylococcus hominis, Staphylococcus intermedius, Staphylococcus kloosii, Staphylococcus lentus, Staphylococcus lugdunensis, Staphylococcus muscae, Staphylococcus pasteuri, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus warneri и Staphylococcus xylosus, где указанная белковая смесь состоит из первого антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, и второго антибактериального белка, состоящего из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2;
полоксамера; сахара; и аминокислоты; и
подвергание данной смеси лиофилизации.
21. Способ по п. 20, где концентрация антибактериальных белков в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 мг/мл до примерно 30 мг/мл.
22. Способ по п. 20, где указанная белковая смесь включает 15-35 мол.% первого антибактериального белка и 65-85 мол.% второго антибактериального белка.
23. Способ по п. 22, где указанная белковая смесь включает 25 мол.% первого антибактериального белка и 75 мол.% второго антибактериального белка.
24. Способ по п. 20, где концентрация полоксамера в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
25. Способ по п. 20, где полоксамер представляет собой полоксамер 188.
26. Способ по п. 20, где сахар представляет собой D-сорбит.
27. Способ по п. 20, где концентрация сахара в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 1 г/л до примерно 600 г/л.
28. Способ по п. 20, где аминокислота представляет собой L-гистидин.
29. Способ по п. 20, где концентрация аминокислоты в смеси перед лиофилизацией составляет от примерно 0,1 г/л до примерно 10 г/л.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662277588P | 2016-01-12 | 2016-01-12 | |
| US62/277,588 | 2016-01-12 | ||
| PCT/IB2017/050091 WO2017122114A1 (en) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | Freeze-dried formulations of antibacterial protein |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019138064A Division RU2734308C2 (ru) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | Лиофилизированные композиции антибактериального белка |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2708393C1 true RU2708393C1 (ru) | 2019-12-06 |
Family
ID=59310884
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019138064A RU2734308C2 (ru) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | Лиофилизированные композиции антибактериального белка |
| RU2018124794A RU2708393C1 (ru) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | Лиофилизированные композиции антибактериального белка |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019138064A RU2734308C2 (ru) | 2016-01-12 | 2017-01-09 | Лиофилизированные композиции антибактериального белка |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20190183803A1 (ru) |
| EP (1) | EP3402466A4 (ru) |
| JP (1) | JP7085482B2 (ru) |
| KR (2) | KR20250004941A (ru) |
| CN (2) | CN108463215A (ru) |
| AU (1) | AU2017208117B2 (ru) |
| CA (1) | CA3010565C (ru) |
| MX (1) | MX2018008544A (ru) |
| MY (1) | MY193907A (ru) |
| RU (2) | RU2734308C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201811478TA (ru) |
| UA (1) | UA125388C2 (ru) |
| WO (1) | WO2017122114A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201804014B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744331C1 (ru) * | 2020-07-07 | 2021-03-05 | Общество с ограниченной ответственностью "ГЕМАТЕК" | Изотонический инфузионный раствор |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BR112018014175A2 (en) * | 2016-01-12 | 2018-12-26 | Intron Biotechnology, Inc. | antibacterial composition and method for treating staph infections with antibacterial composition |
| CN111588841A (zh) * | 2019-02-21 | 2020-08-28 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种可气溶胶化的seb类毒素疫苗干粉吸入剂 |
| WO2022145518A1 (ko) * | 2020-12-29 | 2022-07-07 | 주식회사 바이오빛 | 항균 단백질을 포함하는 하드 코팅용 조성물 및 이의 제조 방법 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997004801A1 (en) * | 1995-07-27 | 1997-02-13 | Genentech, Inc. | Stabile isotonic lyophilized protein formulation |
| WO2002008266A2 (en) * | 2000-07-19 | 2002-01-31 | Pharmacia & Upjohn Company | Complete nucleotide sequence of staphylococcus aureus ribosomal protein s16 gene and methods for the identification of antibacterial substances |
| WO2009118754A2 (en) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Astron Research Limited | A process for preparing a stable lyophilized composition |
| US20100004321A1 (en) * | 2006-06-29 | 2010-01-07 | Paul Ross | Recombinant Staphylococcal Phage Lysin as an Antibacterial Agent |
| US20100144619A1 (en) * | 2006-08-04 | 2010-06-10 | Intron Biotechnology, Inc. | Antimicrobial Protein Specific to Staphylococcus Aureus |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1322211A (zh) * | 1998-10-05 | 2001-11-14 | 武田药品工业株式会社 | 除去n－末端蛋氨酸的方法 |
| JP2002253270A (ja) * | 2000-07-31 | 2002-09-10 | Takeda Chem Ind Ltd | 組換え蛋白質の製造方法 |
| KR100910961B1 (ko) * | 2007-09-13 | 2009-08-05 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 황색포도상구균의 균막 처치에 효과적인 박테리오파지 또는그것 유래의 용균단백질 |
| US8377866B2 (en) * | 2009-02-12 | 2013-02-19 | Intron Biotechnology, Inc. | Antimicrobial protein derived from Podoviridae bacteriophage specific to Staphylococcus aureus |
| BR112012027055B1 (pt) | 2010-04-20 | 2019-09-17 | Octapharma Ag | Método para estabilizar uma proteína do plasma de sangue humano, composição, e uso da melezitose |
| CN102648978B (zh) | 2011-04-19 | 2013-09-25 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种稳定的蛋白药物制剂及其制备方法 |
| CN102367441B (zh) * | 2011-06-20 | 2014-09-17 | 安徽安科生物工程（集团）股份有限公司 | 一种去甲硫氨酸重组人干扰素-α2b的制备方法 |
| WO2013180316A1 (ko) * | 2012-05-29 | 2013-12-05 | 주식회사 인트론바이오테크놀로지 | 박테리오파지 리신 단백질들의 안정성을 개선할 수 있는 조성물 |
| JP6457387B2 (ja) * | 2012-08-05 | 2019-01-23 | エイビーエスシーアイ・エルエルシー | 誘導性共発現系 |
| CN104805066B (zh) * | 2015-05-18 | 2018-04-24 | 武汉菲吉乐科生物科技有限公司 | 一种葡萄球菌裂解酶及其应用 |
-
2017
- 2017-01-09 KR KR1020247042520A patent/KR20250004941A/ko active Pending
- 2017-01-09 CN CN201780006445.2A patent/CN108463215A/zh active Pending
- 2017-01-09 WO PCT/IB2017/050091 patent/WO2017122114A1/en not_active Ceased
- 2017-01-09 UA UAA201813043A patent/UA125388C2/uk unknown
- 2017-01-09 JP JP2018536378A patent/JP7085482B2/ja active Active
- 2017-01-09 MX MX2018008544A patent/MX2018008544A/es unknown
- 2017-01-09 CA CA3010565A patent/CA3010565C/en active Active
- 2017-01-09 CN CN202310739229.6A patent/CN116831993A/zh active Pending
- 2017-01-09 RU RU2019138064A patent/RU2734308C2/ru active
- 2017-01-09 MY MYPI2018002703A patent/MY193907A/en unknown
- 2017-01-09 EP EP17738260.3A patent/EP3402466A4/en active Pending
- 2017-01-09 SG SG11201811478TA patent/SG11201811478TA/en unknown
- 2017-01-09 RU RU2018124794A patent/RU2708393C1/ru active
- 2017-01-09 AU AU2017208117A patent/AU2017208117B2/en active Active
- 2017-01-09 US US16/300,567 patent/US20190183803A1/en not_active Abandoned
- 2017-01-09 KR KR1020187021864A patent/KR20180114011A/ko not_active Ceased
-
2018
- 2018-06-15 ZA ZA2018/04014A patent/ZA201804014B/en unknown
-
2021
- 2021-02-11 US US17/173,867 patent/US20210161821A1/en active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997004801A1 (en) * | 1995-07-27 | 1997-02-13 | Genentech, Inc. | Stabile isotonic lyophilized protein formulation |
| WO2002008266A2 (en) * | 2000-07-19 | 2002-01-31 | Pharmacia & Upjohn Company | Complete nucleotide sequence of staphylococcus aureus ribosomal protein s16 gene and methods for the identification of antibacterial substances |
| US20100004321A1 (en) * | 2006-06-29 | 2010-01-07 | Paul Ross | Recombinant Staphylococcal Phage Lysin as an Antibacterial Agent |
| US20100144619A1 (en) * | 2006-08-04 | 2010-06-10 | Intron Biotechnology, Inc. | Antimicrobial Protein Specific to Staphylococcus Aureus |
| WO2009118754A2 (en) * | 2008-03-28 | 2009-10-01 | Astron Research Limited | A process for preparing a stable lyophilized composition |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744331C1 (ru) * | 2020-07-07 | 2021-03-05 | Общество с ограниченной ответственностью "ГЕМАТЕК" | Изотонический инфузионный раствор |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116831993A (zh) | 2023-10-03 |
| WO2017122114A1 (en) | 2017-07-20 |
| NZ749843A (en) | 2024-09-27 |
| CA3010565A1 (en) | 2017-07-20 |
| RU2019138064A3 (ru) | 2020-05-29 |
| EP3402466A1 (en) | 2018-11-21 |
| CN108463215A (zh) | 2018-08-28 |
| AU2017208117B2 (en) | 2022-07-14 |
| ZA201804014B (en) | 2019-04-24 |
| KR20180114011A (ko) | 2018-10-17 |
| MX2018008544A (es) | 2019-05-15 |
| UA125388C2 (uk) | 2022-03-02 |
| RU2734308C2 (ru) | 2020-10-15 |
| CA3010565C (en) | 2024-05-14 |
| SG11201811478TA (en) | 2019-01-30 |
| US20190183803A1 (en) | 2019-06-20 |
| KR20250004941A (ko) | 2025-01-08 |
| MY193907A (en) | 2022-10-31 |
| US20210161821A1 (en) | 2021-06-03 |
| AU2017208117A1 (en) | 2018-07-26 |
| EP3402466A4 (en) | 2019-09-04 |
| JP2019501931A (ja) | 2019-01-24 |
| JP7085482B2 (ja) | 2022-06-16 |
| BR112018014181A2 (pt) | 2018-12-26 |
| RU2019138064A (ru) | 2019-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210161821A1 (en) | Freeze-dried formulations of antibacterial protein | |
| KR20010022237A (ko) | 리소스타핀을 단독 또는 항생제와의 조합으로 포함하는포도상구균 감염 치료용 약제학적 조성물 | |
| CN112218659A (zh) | 用于治疗葡萄球菌感染的治疗性噬菌体组合物 | |
| US12121575B2 (en) | Periodontitis vaccine and related compositions and methods of use | |
| CN111588859B (zh) | 一种冻干保护剂及其应用和冻干苗及其制备方法 | |
| RU2729934C2 (ru) | Антибактериальная композиция и способ лечения стафилококковых инфекций антибактериальной композицией | |
| JP2020520980A (ja) | 療法バクテリオファージ組成物 | |
| EP3928782A1 (en) | Bacteriophage based therapy | |
| JP2006519217A (ja) | 抗菌剤 | |
| KR102044421B1 (ko) | 탄저균 특이적 용균능을 갖는 항균 단백질의 안정한 보관을 위한 동결건조 제형 및 이의 제조방법 | |
| BR112018014181B1 (pt) | Método para produzir uma formulação desidratada por congelamento de proteína antibacteriana | |
| KR20190051474A (ko) | 벼메뚜기에서 유래한 옥시야신-6 펩타이드 및 이를 함유하는 항균, 항진균 또는 항알레르기성 조성물 | |
| EP0420743B1 (fr) | Vaccin protecteur contre l'hémophilose porcine | |
| EA044863B1 (ru) | Вакцина и связанные композиции для лечения пародонтита и способ применения | |
| HK40040296A (en) | Therapeutics bacteriophage compositions for treating staphylococcus infection | |
| KR20200062921A (ko) | 탄저균 특이적 항균능을 갖는 약학적 조성물 및 이의 제조방법 | |
| KR20190139209A (ko) | 면역시스템을 조절하기 위한 면역원성 조성물 및 개체에서의 세균 감염 치료 방법 |