RU2705363C1 - Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом - Google Patents
Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705363C1 RU2705363C1 RU2019108760A RU2019108760A RU2705363C1 RU 2705363 C1 RU2705363 C1 RU 2705363C1 RU 2019108760 A RU2019108760 A RU 2019108760A RU 2019108760 A RU2019108760 A RU 2019108760A RU 2705363 C1 RU2705363 C1 RU 2705363C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- metformin
- saliva
- mixed
- mcl
- determining
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 33
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 title claims description 33
- XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N metformin Chemical compound CN(C)C(=N)NC(N)=N XZWYZXLIPXDOLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 32
- 229960003105 metformin Drugs 0.000 title claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 title claims description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N haloperidol Chemical compound C1CC(O)(C=2C=CC(Cl)=CC=2)CCN1CCCC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 5
- 229960003878 haloperidol Drugs 0.000 description 4
- 229960001534 risperidone Drugs 0.000 description 4
- RAPZEAPATHNIPO-UHFFFAOYSA-N risperidone Chemical compound FC1=CC=C2C(C3CCN(CC3)CCC=3C(=O)N4CCCCC4=NC=3C)=NOC2=C1 RAPZEAPATHNIPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 3
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 3
- 229960004979 fampridine Drugs 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-{[2-(3,4-dimethoxyphenyl)ethyl](methyl)amino}-2-(propan-2-yl)pentanenitrile Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC=C1CCN(C)CCCC(C#N)(C(C)C)C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 SGTNSNPWRIOYBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 4-aminopyridine Chemical compound NC1=CC=NC=C1 NUKYPUAOHBNCPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031662 Noncommunicable disease Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 2
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 206010013781 dry mouth Diseases 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001722 verapamil Drugs 0.000 description 2
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000017011 Glycated Hemoglobin A Human genes 0.000 description 1
- 108010014663 Glycated Hemoglobin A Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010039424 Salivary hypersecretion Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003693 atypical antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127236 atypical antipsychotics Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- PBAYDYUZOSNJGU-UHFFFAOYSA-N chelidonic acid Natural products OC(=O)C1=CC(=O)C=C(C(O)=O)O1 PBAYDYUZOSNJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002153 concerted effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037123 dental health Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000004807 desolvation Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000011037 discontinuous sequential dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000004190 glucose uptake Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229960004329 metformin hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- OETHQSJEHLVLGH-UHFFFAOYSA-N metformin hydrochloride Chemical compound Cl.CN(C)C(=N)N=C(N)N OETHQSJEHLVLGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 208000026451 salivation Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к определению лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом. Для этого 100 мкл интактной слюны переносится в микропробирки объемом 1,2 мл, добавляется 10 мкл раствора внутреннего стандарта в концентрации 1000 нг/мл, затем перемешивается на шейкере при 1200 об/мин в течение 2 мин, после чего проводится осаждение белков добавлением 300 мкл охлажденного до -20°С ацетонитрила, затем производится перемешивание на шейкере при 1200 об/мин в течение 4 мин, полученную смесь центрифугируют при 4000 об/мин при температуре +4°С в течение 15 минут, после чего надосадочная жидкость в количестве 50 мкл смешивается со 150 мкл воды и помещается в планшеты для определения концентрации метформина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, при этом линейный диапазон определения лекарственного препарата метформина составляет от 5 до 1600 нг/мл. Изобретение обеспечивает упрощение процесса обнаружения лекарственного препарата метформин, повышение точности диагностики токсического воздействия лекарственного препарата метформин. 4 ил., 4 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии.
Сахарный диабет - группа эндокринных заболеваний, связанных с нарушением усвоения глюкозы и развивающихся вследствие абсолютной или относительной недостаточности гормона инсулина, в результате чего развивается гипергликемия - стойкое увеличение содержания глюкозы в крови. Сахарный диабет представляет значимую проблему общественного здравоохранения. Сахарный диабет является одним из четырех приоритетных неинфекционных заболеваний (НИЗ). В течение последних нескольких десятилетий число случаев и распространенность диабета неуклонно растет. По оценкам, в 2014 году диабетом страдали 422 миллиона взрослых во всем мире по сравнению с 108 миллионами в 1980 году.
Первый Глобальный доклад Всемирной организации Здравоохранения (ВОЗ) по диабету подчеркивает огромные масштабы проблемы сахарного диабета и наличие потенциала для изменения нынешней ситуации, сформирована основа для принятия согласованных действий по борьбе с сахарным диабетом.
По данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) в Российской Федерации распространенность сахарного диабета составляет у женщин 10,3%, у мужчин - 8% от общей численности населения. По доступности лекарственных средств в медицинских учреждениях первичной медико-санитарной помощи больным сахарным диабетом второго типа на первом месте стоит лекарственный препарат метформин. [Глобальный доклад по диабету. Всемирная Организация Здравоохранения. - Резюме. - 2016 г. - с. 3-4.]. Лекарственный препарат метформин относится к группе гипогликемических синтетических препаратов. Применяется при инсулиннезависимом сахарном диабете. Фармакологическое действие - гипогликемическое, понижает концентрацию глюкозы (натощак и после приема пищи) в крови и уровень гликозилированного гемоглобина, повышает толерантность к глюкозе. Быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Незначительно связывается с белками плазмы, способен накапливаться в слюнных железах, печени и почках. Выводится почками в неизменном виде. Накопление лекарственного препарата в полости рта может происходить через барьеры слизистой оболочки, из десневой жидкости, из слюнных желез. Главным признаком выделенного в полость рта лекарственного препарата или его метаболита является привкус горечи в полости рта. Кроме того, целый ряд принимаемых лекарственных препаратов обладают ксерогенными свойствами и вызывают ощущение сухости слизистой рта. [N. Aravindha Babu et al. Drug Excretion in Saliva - A Review// // Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res. - 2014. - Vol. 26 (1), №11, P. 76-77.]
При проведении эпидемиологических исследований пациенты с сахарным диабетом предъявляли жалобы на сухость полости рта в 96% случаев и хроническую усталость в 85% случаев. [Румянцева Е.В., Наумова Я.Л., Кубрушко Т.В. Стоматологическое здоровье у больных сахарным диабетом 2 типа. // Успехи современного естествознания. - 2014. - №6. - С. 58-59.]. Таким лекарственным препаратом может быть метформин.
Необходим поиск новых методов определения лекарственных препаратов в смешанной слюне пациентов, которые позволят без специальной подготовки пациента к исследованию с минимальным риском для здоровья, и низкой финансовой стоимостью оценить количественное содержание лекарственного препарата с смешанной слюне.
Известен способ определения лекарственных препаратов в слюне- [И.П. Ремезова, Д.С. Лазарян, Т.И. Максименко. Химико-токсикологический анализ Рисперидона и Галоперидола в слюне. - Известия Самарского научного центра РАН, том 14, №5 (3), 2012, с. 751-753.]. Данная методика предполагает изолирование лекарственных препаратов рисперидона (группа атипичных нейролептиков) и галоперидола (группа типичных нейролептиков) из слюны. Обнаружение рисперидона и галоперидола в извлечениях из слюны предлагается проводить методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Разработана методика количественного определения рисперидона и галоперидола методом ультрафиолетовой (УФ) спектрофотометрии после очистки с помощью метода ТСХ, которая может быть использована в схеме их химико-токсикологического анализа. Данный способ имеет ряд недостатков: трудоемок, затратен, предложен для группы лекарственных препаратов- нейролептики.
Известен способ определения лекарственных препаратов в слюне методом тонкослойной хроматографии - [В.К. Шорманов, Л.П. Квачахия. Определение верапамила в биологическом материале. - Научные ведомости. Серия медицина. Фармация. 2014, №24 (195). выпуск 28. С. 227-230]. Методика позволяет проводить идентификацию и количественное определение верапамила в извлечениях из трупного материала с использованием методов тонкослойной хроматографии, а также инфракрасной (ИК)- и ультрафиолетовой (УФ) спектрофотометрии. Данный способ недостаточно точен и объективен, и он предложен для биологических проб, выделенных из трупного материала.
Известен также спектрофотометрический способ определения лекарственных препаратов в слюне- [Е.Г. Кулапина, С.В. Снесарев, О.И. Кулапина, И.А. Утц. Экспрессное определение цефтриаксона в смешанной слюне практически здоровых лиц и больных с инфекционно-соматической патологией. М., Антибиотики и химиотерапия. - 2011. 56. 7-8. C. 30-33].
Данная методика дает возможность спектроскопического определения цефтриаксона в жидкости ротовой полости. Диапазон определяемых концентраций составляет 1-50 мкг/мл. Методика характеризуется экспрессностью, простотой. Доказана возможность определения цефтриаксона в водных растворах, что может быть использовано при анализе лекарственных препаратов. Данный способ выбран за прототип. Недостатками способа является возможность определения только данной группы лекарственных препаратов, в связи с химической структурой лекарственного препарата.
Задачей изобретения является разработка метода определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне с целью дальнейшей диагностики токсического воздействия лекарственного препарата метформин на ткани полости рта и организм в целом, повышения объективности дозирования лекарственного препарата метформин.
Технический результат заключается в упрощении процесса обнаружения лекарственного препарата метформин, повышении точности диагностики токсического воздействия лекарственного препарат метформин.
Это достигается за счет того, что в смешанной слюне пациента методом высокоэффективной жидкостной хроматографии - тандемной масс-спектрометрии определяют концентрации лекарственного препарата метформин.
Смешанная слюна - это информативная биологическая жидкость, в состав которой входит смесь секретов трех пар больших и множества мелких слюнных желез, необходимая для диагностики и контроля лечения пациентов с патологией тканей полости рта и с соматическим заболеваниями. Смешанная слюна - динамическая среда, отражающая ежедневные изменения в организме человека. Главными преимуществами использования слюны в качестве образца являются нетравматичность и безболезненность сбора, безопасность биологического материала и меньшая трудоемкость в исследовании. Доступность протоков и особенности регуляции слюноотделения создают удобства для исследования секрета желез в диагностических целях и не требуют специальных условий для сбора материала, возможен ежедневный сбор слюны для определения, сбор в домашних условиях у пациентов с соматическими патологиями. Эти свойства позволяют использовать слюну в массовых медицинских программах с целью обнаружения различных заболеваний и контроля дозирования назначаемых лекарственных средств.
Способ осуществляется следующим образом:
Объекты исследования, растворители и реагенты.
Для количественного анализа использовали стандартный образец метформина гидрохлорида производства Шоуганг Фуканг, Китай. В качестве внутреннего стандарта использовали субстанцию фампридина производства SIGMA-ALDRICH, Германия.
В процессе исследования использовали следующие реагенты: ацетонитрил (ACN), LC/MS, Biosolve; ацетонитрил, HPLC-S, Biosolve; формиат аммония (AmF), Acros; деионизованная вода, сопротивлением 18 МОм*см на момент отбора (система водоподготовки Direct-Q 3 UV (1/PK), Millipore); диметилсульфоксид (ДМСО), Biochem Chemopharma.
Исследование выполнено на жидкостном хромато-масс-спектрометре с тройным квадруполем LCMS-8040 (Shimadzu Corporation, Япония) с программным обеспечением LabSolutions 5.80. Анализ всех определяемых соединений выполнен при ионизации в электроспрее при атмосферном давлении (ESI) в положительном режиме.
Хроматографическое разделение лекарственного препарата метформин осуществляли на хроматографической колонке YMC Triart Diol-HILIC, 3 μm, 2,0×50 mm в градиентном режиме элюирования при скорости потока 0,4 мл/мин. Температура колонки составляла 40°С. В качестве подвижных фаз использовали раствор 10 мМ формиата аммония в воде (подвижная фаза А) и ацетонитрил (подвижная фаза Б). Начальное соотношение фаз составляло 60/40 об. % (А/Б), объем вкола - 4 мкл. В этих условиях время удерживания для метформина составило 0,79 мин, для ВС фампридина 0,81 мин. Общее время анализа 4 мин. Подробнее параметры градиентного элюирования приводятся в Таблице 1
При разработке условий масс-спектрометрического детектирования раствор тестируемого соединения в растворе ACN:H2O (1:1) с 0,1% FA с концентрацией 100 нг/мл анализировали путем прямого ввода в масс-спектрометр при помощи шприцевого насоса при ионизации в электроспрее в режиме регистрации положительных ионов. При сканировании в режиме полного ионного тока (MS1) определяли молекулярный ион исследуемого соединения, основные ионы-продукты фиксировали в режиме MS2. Для количественного анализа параметры источника ионизации (температура линии десольватации - DL - и интерфейса - Heat Block (НВ), потоки газа распылителя (Nebulising Gas Flow) и газа-осушителя (Drying Gas Flow)), a также напряжения на первом (Q1 Pre Bias), третьем (Q3 Pre Bias) квадруполях и энергия соударений (СЕ) были оптимизированы для достижения максимально-возможного сигнала MRM-переходов, необходимых для количественного определения целевых соединений.
MRM-переходы для метформина составили 130,10>71,05 (95,10>78,00 - фампридин). Скорости потока газа-осушителя и газа-распылителя установили соответственно на 15 л/мин и 3 л/мин. Температуры DL и НВ составили соответственно 250°С и 400°С. Первый и третий квадруполи работали в режиме высокого разрешения. Для каждого MRM-перехода, используемого для количественного анализа, время накопления сигнала (dwell time) задавалось равным 100 миллисекундам (мсек) (Таблица 2).
Индивидуальные сток растворы метформина и внутреннего стандарта (ВС) готовили взятием точной навески, соответствующей 10 мг аналита с учетом чистоты и растворением в воде (метформин), либо ДМСО (ВС) до концентрации 1 мг/мл. Готовые сток-растворы индивидуальных соединений хранились при температуре <-65°С. Рабочие растворы готовились последовательным разбавлением исходных сток-растворов в растворе ацетонитрил/вода (1/1).
Калибровочные образцы и образцы контроля качества (КК) готовили добавлением 10 мкл соответствующего рабочего раствора аналита (исследуемого вещества) к 100 мкл интактной слюны для определения метформина, непосредственно перед проведением пробоподготовки. Интактную слюну готовили смешением слюны, полученной от 6 индивидуальных источников и заведомо не содержащей определяемые соединения.
Калибровочные образцы для метформина готовили в концентрациях 5, 10, 20, 40, 100, 200, 400, 600, 1000, 1600 нг/мл. Образцы контроля качества (КК) - в концентрациях 15 нг/мл (низкий контроль качества, НКК), 800 нг/мл (средний контроль качества, СКК) и 1600 нг/мл (высокий контроль качества, ВКК). Концентрация внутреннего стандарта (ВС) в образцах слюны составляла 100 нг/мл.
Для выделения аналитов использовался метод осаждения белков с последующим упариванием супернатанта. Пробы слюны (хранение при -20°С), а также интактную слюну, используемую для приготовления образцов контроля качества (КК) и калибровочных образцов, размораживали при комнатной температуре в течение не менее, чем 1,5 ч, перемешивали на вортексе до гомогенного состояния.
Определение метформина осуществлялось следующим образом: 100 мкл интактной слюны переносили в микропробирки на 1,2 мл, добавляли 10 мкл раствора внутреннего стандарта (ВС) (1000 нг/мл), перемешивали на шейкере при 1200 об/мин в течение 2 мин. Проводили осаждение белков добавлением 300 мкл охлажденного (-20°С) ацетонитрила. Перемешивали на шейкере при 1200 об/мин в течение 4 мин. Центрифугировали в течение 15 мин при 4000 об/мин (+4°С). Надосадочную жидкость в количестве 50 мкл переносили в 96-луночные микропланшеты, где смешивали со 150 мкл воды. Планшеты помещали в автосэмплер для проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)-МС/МС анализа.
В ходе разработки способа определения лекарственного препарата метформин с использованием стандартных растворов и модельных проб были найдены MRM-переходы для каждого из соединений, подобраны оптимальные параметры ионизации и хроматографического разделения, а также определен калибровочный диапазон для определяемого соединения.
На Фиг. 1 приводится хроматограмма метформина на уровне нижнего предела количественного определения (НПКО) (5 нг/мл). Правильная форма пика, отношение сигнал/шум, равное 15 говорят о том, что определение метформина возможно на уровне 5 нг/мл.
Отсутствие пиков аналита (исследуемого вещества) и внутреннего стандарта в пустых пробах говорит о селективности подобранных MRM-переходов и способа в целом.
Кроме того, отсутствие отклика аналита в бланковом образце (образец слюны с добавлением ВС, но без добавления аналита), говорят об отсутствии интерференции между целевым определяемым компонентом и внутренним стандартом (ВС).
Линейный диапазон определения лекарственного препарата метформин составил от 5 до 1600 нг/мл. Калибровочные кривые представляли собой линейную зависимость с нормированием 1/с и коэффициентом корреляции не менее 0,999. Пример калибровочной зависимости представлен на Фиг. 4
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ ХАРАКТЕРИЗУЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМИ ПРИМЕРАМИ.
Было проведено обследование 6 пациентов обоего пола (54-77 лет), обратившихся в одно из эндокринологических отделений г. Москвы. Исследование проводилось на основании письменного добровольного информированного согласия. Описанный выше метод определения лекарственного препарата метформин был успешно применен к анализу реальных проб слюны человека, отобранных после приема препарата, содержащего определяемый компонент.
Результаты определения метформина в пробах слюны приводятся в Таблице 3, где записью «BLOQ» обозначены концентрации менее НПКО (5 нг/мл для метформина).
Правильность полученных результатов определения подтверждается образцами контроля качества (КК), анализ которых проводился в рамках аналитической серии анализа проб дважды: до и после реальных проб слюны. Отклонение образцов контроля качества (КК) по точности составило не более 15% для каждого из образцов КК: 1,5 нг/мл (НКК), 60 нг/мл (СКК) и 150 нг/мл (ВКК), значения KB не превышали 6,0% для всех каждого из уровней КК (Таблица 4). Расчет статистических показателей в образцах КК проводили относительно номинального значения. Приведенные данные иллюстрируют достаточную точность определения содержания метформина в реальных пробах слюны человека (от 92 до 99%).
Краткое описание фигур.
На Фиг. 1 представлена хроматограмма метформина на уровне нижнего предела количественного определения (НПКО) (5 нг/мл).
На Фиг. 2 представлена хроматограмма образца интактной слюны.
На Фиг. 3 представлена хроматограмма бланкового образца слюны.
На Фиг. 4 приводится калибровочная кривая метформина.
Claims (1)
- Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом, включающий следующие этапы: 100 мкл интактной слюны переносится в микропробирки объемом 1,2 мл, добавляется 10 мкл раствора внутреннего стандарта в концентрации 1000 нг/мл, затем перемешивается на шейкере при 1200 об/мин в течение 2 мин, после чего проводится осаждение белков добавлением 300 мкл охлажденного до -20°С ацетонитрила, затем производится перемешивание на шейкере при 1200 об/мин в течение 4 мин, полученную смесь центрифугируют при 4000 об/мин при температуре +4°С в течение 15 минут, после чего надосадочная жидкость в количестве 50 мкл смешивается со 150 мкл воды и помещается в планшеты для определения концентрации метформина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, при этом линейный диапазон определения лекарственного препарата метформина составляет от 5 до 1600 нг/мл.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019108760A RU2705363C1 (ru) | 2019-03-26 | 2019-03-26 | Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019108760A RU2705363C1 (ru) | 2019-03-26 | 2019-03-26 | Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2705363C1 true RU2705363C1 (ru) | 2019-11-07 |
Family
ID=68500790
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019108760A RU2705363C1 (ru) | 2019-03-26 | 2019-03-26 | Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2705363C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114295745A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-08 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法 |
| CN117092046A (zh) * | 2023-08-03 | 2023-11-21 | 首都医科大学附属北京安定医院 | 一种检测精神病患者口腔是否藏匿药物的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080020477A1 (en) * | 2004-09-10 | 2008-01-24 | Pronovost Allan D | Salivary Glucose Monitoring |
| RU2339948C1 (ru) * | 2007-06-26 | 2008-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ определения суммарного количества альдоз в смешанной слюне |
-
2019
- 2019-03-26 RU RU2019108760A patent/RU2705363C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080020477A1 (en) * | 2004-09-10 | 2008-01-24 | Pronovost Allan D | Salivary Glucose Monitoring |
| RU2339948C1 (ru) * | 2007-06-26 | 2008-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ определения суммарного количества альдоз в смешанной слюне |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BEN-ARYEH H. et al. Oral health and salivary composition in diabetic patients //Journal of diabetes and its complications. - 1993. - Т. 7. - No. 1. - С. 57-62. * |
| КУЛАПИНА Е. Г. и др. Экспрессное определение цефтриаксона в смешанной слюне практически здоровых лиц и больных с инфекционно-соматической патологией //Антибиотики и химиотерапия. - 2011. - Т. 56. - No. 7-8. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114295745A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-08 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法 |
| CN114295745B (zh) * | 2021-12-23 | 2023-09-08 | 辽宁成大生物股份有限公司 | 一种水痘减毒活疫苗中二甲基亚砜残留量的检测方法 |
| CN117092046A (zh) * | 2023-08-03 | 2023-11-21 | 首都医科大学附属北京安定医院 | 一种检测精神病患者口腔是否藏匿药物的方法 |
| CN117092046B (zh) * | 2023-08-03 | 2024-03-08 | 首都医科大学附属北京安定医院 | 一种检测精神病患者口腔是否藏匿药物的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stříbrný et al. | GC/MS determination of ibotenic acid and muscimol in the urine of patients intoxicated with Amanita pantherina | |
| CN112630311A (zh) | 用于检测情感障碍的代谢标记物和试剂盒及使用方法 | |
| Barco et al. | A UHPLC–MS/MS method for the quantification of Δ9-tetrahydrocannabinol and cannabidiol in decoctions and in plasma samples for therapeutic monitoring of medical cannabis | |
| Mierzchala-Pasierb et al. | Altered profiles of serum amino acids in patients with sepsis and septic shock–Preliminary findings | |
| RU2558042C2 (ru) | Высокочувствительный способ определения количества компонентов, полученных из лекарственных трав | |
| RU2705363C1 (ru) | Способ определения лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом | |
| Wen et al. | A rapid and simple HPLC–MS/MS method for the simultaneous quantification of valproic acid and its five metabolites in human plasma and application to study pharmacokinetic interaction in Chinese epilepsy patients | |
| Jovanov et al. | Hydrophilic interaction chromatography coupled to tandem mass spectrometry as a method for simultaneous determination of guanidinoacetate and creatine | |
| US20200249227A1 (en) | Method for detecting and quantifying vitamins and thyroid analytes from a urine sample | |
| Tettey-Amlalo et al. | Rapid UPLC–MS/MS method for the determination of ketoprofen in human dermal microdialysis samples | |
| Surendran et al. | A LC-MS/MS method for simultaneous estimation of a novel anti-diabetic combination of saxagliptin and dapagliflozin using a polarity switch approach: application to in vivo rat pharmacokinetic study | |
| Govender et al. | The development and validation of a LC-MS/MS method for the quantitation of metformin, rifampicin and isoniazid in rat plasma using HILIC chromatography | |
| Gika et al. | Daptomycin determination by liquid chromatography–mass spectrometry in peritoneal fluid, blood plasma, and urine of clinical patients receiving peritoneal dialysis treatment | |
| Wang et al. | Advancing towards practice: A novel LC-MS/MS method for detecting retinol in dried blood spots | |
| CN110031568B (zh) | 一种测定人血浆中沙库巴曲、去乙基沙库巴曲和缬沙坦浓度的方法 | |
| Wu et al. | Determination of caprolactam and 6-aminocaproic acid in human urine using hydrophilic interaction liquid chromatography-tandem mass spectrometry | |
| Sun et al. | Ultra-performance liquid-chromatography with tandem mass spectrometry performing pharmacokinetic and biodistribution studies of croomine, neotuberostemonine and tuberostemonine alkaloids absorbed in the rat plasma after oral administration of Stemonae Radix | |
| Sun et al. | Simultaneous determination of ivabradine, metoprolol and their metabolites in rat plasma by ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry and its application in a pharmacokinetic study | |
| JP7753359B2 (ja) | ヒト血漿中のリゼルギン酸ジエチルアミド（ｌｓｄ）及び２，３－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－２－オキソリセルギド（ｏ－ｈ－ｌｓｄ）を定量化するための方法 | |
| Cai et al. | Determination of mildronate in human plasma and urine by UPLC–positive ion electrospray tandem mass spectrometry | |
| CN103487539A (zh) | 利用超快速液相色谱-串联三重四级杆质谱测定家蚕血淋巴中阿苯达唑及代谢物含量的方法 | |
| Li et al. | Comparative pharmacokinetics of Nootkatone in a RAT model of chronic kidney disease VERSUS Normal controls | |
| Godoy et al. | Detection of allopurinol and oxypurinol in canine urine by HPLC/MS-MS: Focus on veterinary clinical pharmacokinetics | |
| Xiong et al. | A UPLC–MS–MS method for quantification of harpagoside and cinnamic acid in rat plasma and its application to a pharmacokinetic study after oral administration of Yanyan tablets | |
| EP4530636A1 (en) | A method and system for monitoring a panel of antiarrhythmic drugs in blood |