RU2702360C1

RU2702360C1 - Method for prediction of early recurrence in patients with classical hodgkin's lymphoma

Info

Publication number: RU2702360C1
Application number: RU2019118745A
Authority: RU
Inventors: Егор Васильевич Баторов; Наталья Викторовна Пронкина; Вера Васильевна Сергеевичева; Светлана Анатольевна Сизикова; Галина Юрьевна Ушакова; Татьяна Андреевна Аристова; Александр Анатольевич Останин; Елена Рэмовна Черных
Priority date: 2019-06-17
Filing date: 2019-06-17
Publication date: 2019-10-08

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to medicine, to oncohematology, namely to a prediction of developing early recurrence in patients with classical Hodgkin's lymphoma after high-dose chemotherapy and transplantation of autologous hemopoietic stem cells (auto-THSC). That is ensured by flow cytometry and an estimate of the relative content of one of the lymphocyte populations using a threshold value, according to the invention, when the lymphopenia emerges after transplantation in the patient's peripheral blood, the absolute amount of CD45⁺CD3⁺ T-cells, and with content of CD45⁺CD3⁺ T-cells more than 717 cells/mcl, higher probability of developing early recurrence after auto-THSC, and if CD45⁺CD3⁺ T-cells content less than 717 cells/mcl, higher probability of preserving remission within first year after auto-THSC.

EFFECT: invention provides the possibility to isolate patients with LH, having significantly higher probability of early recurrence after HDCT with autologous-THSC, which enables to timely correct the further management of the patient, and also the invention is simple and economic, due to absence of special sample preparation and necessity to spend intracellular estimation of the maintenance of a marker, and also due to use of the minimum quantity of investigated material and absence of necessity to spend additional blood intake in period of exit of patient from leukopenia.

1 cl, 2 dwg, 4 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогнозирования развития раннего рецидива у больных классической лимфомой Ходжкина после трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток.The invention relates to medicine, namely to oncohematology, and can be used to predict the development of early relapse in patients with classical Hodgkin’s lymphoma after transplantation of autologous hematopoietic stem cells.

Классическая лимфома Ходжкина (ЛХ) - потенциально излечимое лимфопролиферативное заболевание, характеризующееся значительным вовлечением в патогенез опухолевого микроокружения. Опухолевые клетки Ходжкина и Березовского-Рид-Штернберга происходят из пре-апоптотических В-клеток зародышевого центра лимфоузла [

R, Hansmann M-L. The Hodgkin and Reed/Sternberg cell. Int J Biochem Cell Biol. 2005; 37(3):511-517]. Роль в возникновении болезни играют инфицирование вирусом Эбштейна-Барр и определенные мутации. В отличие от большинства других опухолей, при ЛХ малигнизированные клетки составляют не более 1% от массы опухоли, основной субстрат которой состоит из реактивных неопухолевых иммунокомпетентных клеток и клеток стромального микроокружения [Pileri SA, Ascani S, Leoncini L, et al. Hodgkin's lymphoma: the pathologist's viewpoint. J Clin Pathol. 2002; 55(3):162-176]. Именно активность неопухолевых клеток обеспечивает выживание клеток Ходжкина и Березовского-Рид-Штернберга, увеличение опухолевой массы, подавление противоопухолевого иммунного ответа и развитие клинических проявлений [Pileri SA, Ascani S, Leoncini L, et al. Hodgkin's lymphoma: the pathologist's viewpoint. J Clin Pathol. 2002; 55(3):162-176; Montanari F, Diefenbach CS. Hodgkin Lymphoma: Targeting the Tumor Microenvironment as a Therapeutic Strategy. Clin Adv Hematol Oncol. 2015; 13(8):518-524].Classical Hodgkin’s lymphoma (HL) is a potentially treatable lymphoproliferative disease characterized by significant involvement of the tumor microenvironment in the pathogenesis. Hodgkin and Berezovsky-Reed-Sternberg tumor cells originate from pre-apoptotic B cells of the germinal center of the lymph node [

R, Hansmann ML. The Hodgkin and Reed / Sternberg cell. Int J Biochem Cell Biol. 2005; 37 (3): 511-517]. Ebstein-Barr virus infection and certain mutations play a role in the onset of the disease. Unlike most other tumors, with HL, malignant cells make up no more than 1% of the tumor mass, the main substrate of which consists of reactive non-tumor immunocompetent cells and stromal microenvironment cells [Pileri SA, Ascani S, Leoncini L, et al. Hodgkin's lymphoma: the pathologist's viewpoint. J Clin Pathol. 2002; 55 (3): 162-176]. It is the activity of non-tumor cells that ensures the survival of Hodgkin and Berezovsky-Reed-Sternberg cells, an increase in tumor mass, suppression of the antitumor immune response and the development of clinical manifestations [Pileri SA, Ascani S, Leoncini L, et al. Hodgkin's lymphoma: the pathologist's viewpoint. J Clin Pathol. 2002; 55 (3): 162-176; Montanari F, Diefenbach CS. Hodgkin Lymphoma: Targeting the Tumor Microenvironment as a Therapeutic Strategy. Clin Adv Hematol Oncol. 2015; 13 (8): 518-524].

Заболеваемость ЛХ высока среди лиц молодого трудоспособного возраста и составляет 12-19% от всех опухолей в возрасте 15-29 лет. [Pearce MS, Parker L, Windebank KP, Cotterill SJ, Craft AW. Cancer in adolescents and young adults aged 15-24 years: A report from the North of England young person's malignant disease registry, UK. Pediatr Blood Cancer. 2005; 45(5):687-693; Mendler JH, Friedberg JW. Salvage therapy in Hodgkin's lymphoma. Oncologist. 2009; 14(4):425-432]. Благодаря отработанным протоколам лучевой терапии и химиотерапии (XT), на ранних стадиях ЛХ является одной из наиболее курабельных злокачественных опухолей.The incidence of HL is high among young working age people and accounts for 12-19% of all tumors aged 15-29 years. [Pearce MS, Parker L, Windebank KP, Cotterill SJ, Craft AW. Cancer in adolescents and young adults aged 15-24 years: A report from the North of England young person's malignant disease registry, UK. Pediatr Blood Cancer. 2005; 45 (5): 687-693; Mendler JH, Friedberg JW. Salvage therapy in Hodgkin's lymphoma. Oncologist. 2009; 14 (4): 425-432]. Thanks to the established protocols of radiation therapy and chemotherapy (XT), in the early stages of HF is one of the most curable malignant tumors.

Однако в России в настоящее время около половины больных ЛХ выявляются на поздних стадиях болезни, из них 20-30% резистентны к протоколам XT I линии, а рецидив возникает у 30-50% пациентов, достигших ремиссии [Mendler JH, Friedberg JW. Salvage therapy in Hodgkin's lymphoma. Oncologist. 2009; 14(4):425-432; Петрова Г.Д., Мелкова К.H., Чернявская Т.З. и др. Аутологичная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток при первично-рефрактерном течении лимфомы Ходжкина: мнимый цугцванг или промежуточный ход? Клин, онкогематол. 2015; 8(3):321-330; Canellos GP, Rosenberg SA, Friedberg JW, Lister ТА, Devita VT. Treatment of Hodgkin lymphoma: a 50-year perspective. J Clin Oncol. 2014; 32(3):163-168].However, in Russia at present, about half of patients with HL are detected in the late stages of the disease, of which 20-30% are resistant to XT I line protocols, and relapse occurs in 30-50% of patients who have achieved remission [Mendler JH, Friedberg JW. Salvage therapy in Hodgkin's lymphoma. Oncologist. 2009; 14 (4): 425-432; Petrova G.D., Melkova K.N., Chernyavskaya T.Z. et al. Autologous hematopoietic stem cell transplantation in the primary refractory course of Hodgkin's lymphoma: an imaginary zugzwang or an intermediate course? Wedge, oncohematol. 2015; 8 (3): 321-330; Canellos GP, Rosenberg SA, Friedberg JW, Lister TA, Devita VT. Treatment of Hodgkin lymphoma: a 50-year perspective. J Clin Oncol. 2014; 32 (3): 163-168].

Первично-резистентное или рецидивирующее течение ЛХ является показанием для проведения высокодозной химиотерапии (ВДХТ) с последующей трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК). При этом рецидив или прогрессия болезни развиваются примерно у половины больных после ауто-ТГСК, обычно в течение первого года, и ассоциированы с плохой общей выживаемостью [Crump М. Management of Hodgkin lymphoma in relapse after autologous stem cell transplant. Hematol Am Soc Hematol Educ Progr. 2008; 2008(1):326-333; Alinari L, Blum KA. How I treat relapsed classical Hodgkin lymphoma after autologous stem cell transplant. Blood. 2016; 127(3):287-295].The primary resistant or recurrent course of HL is an indication for high-dose chemotherapy (VHTT) followed by transplantation of autologous hematopoietic stem cells (auto-HSCT). In this case, relapse or progression of the disease develops in about half of patients after auto-HSCT, usually during the first year, and is associated with poor overall survival [Crump M. Management of Hodgkin lymphoma in relapse after autologous stem cell transplant. Hematol Am Soc Hematol Educ Progr. 2008; 2008 (1): 326-333; Alinari L, Blum KA. How I treat relapsed classical Hodgkin lymphoma after autologous stem cell transplant. Blood. 2016; 127 (3): 287-295].

В связи с этим продолжается поиск эффективных и воспроизводимых методов прогноза развития раннего рецидива ЛХ после ВДХТ с ауто-ТГСК.In this regard, the search for effective and reproducible methods for predicting the development of early recurrence of HL after VDHT with auto-HSCT continues.

Для прогноза характера течения впервые выявленной ЛХ или рецидива болезни, а также для оценки эффективности терапии принято использовать определение различных клинических и лабораторных параметров. В клинической практике принято использовать системы факторов прогноза, предложенных тремя исследовательскими группами: EORTC (European Organization for the Research and Treatment of Cancer), GHSG (German Hodgkin's lymphoma Study Group) и NCIC/ECOG (National Cancer Institute of Canada и Eastern Cooperative Oncology Group). При распределении по группам риска оценивают стадию болезни (по классификации Ann Arbor), объем и локализацию опухоли, наличие экстранодального поражения, В-симптомов (лихорадка >38°С неинфекционного генеза, потеря веса, ночная потливость), скорость оседания эритроцитов, возраст. Для поздних стадий болезни предложено несколько модификаций Международного прогностического счета (International Prognostic Score, IPS), в которых может учитываться возраст (≥45 лет), пол (мужской), стадия болезни (IV), уровень гемоглобина (<10,5 г/дл), лейкоцитоз (≥15×10⁹/л) или лимфопения (<0,6×10⁹/л или <8%), гипоальбуминемия. Наличие каждого из показателей снижает выживаемость, свободную от неудач, на 7-8% [

PJ, Angelopoulou МК, Vassilakopoulos ТР. Prognostic factors in Hodgkin lymphoma. Semin Hematol. 2016; 53(3):155-164].To predict the nature of the course of the first detected HL or relapse of the disease, as well as to evaluate the effectiveness of therapy, it is customary to use the definition of various clinical and laboratory parameters. In clinical practice, it is customary to use prediction factor systems proposed by three research groups: EORTC (European Organization for the Research and Treatment of Cancer), GHSG (German Hodgkin's lymphoma Study Group) and NCIC / ECOG (National Cancer Institute of Canada and Eastern Cooperative Oncology Group ) When distributed into risk groups, the stage of the disease (according to the Ann Arbor classification), the volume and localization of the tumor, the presence of extranodal lesions, B-symptoms (fever> 38 ° C of non-infectious origin, weight loss, night sweating), erythrocyte sedimentation rate, age are assessed. For late stages of the disease, several modifications of the International Prognostic Score (IPS) have been proposed, which can take into account age (≥45 years), gender (male), stage of the disease (IV), hemoglobin level (<10.5 g / dl ), leukocytosis (≥15 × 10 ⁹ / L) or lymphopenia (<0.6 × 10 ⁹ / L or <8%), hypoalbuminemia. The presence of each of the indicators reduces the failure-free survival by 7-8% [

PJ, Angelopoulou MK, Vassilakopoulos TP. Prognostic factors in Hodgkin lymphoma. Semin Hematol. 2016; 53 (3): 155-164].

Общим недостатком этих методов является то, что оценка перечисленных факторов риска проводится при постановке диагноза ЛХ и рассчитана для определенных курсов XT I линии. Изменение тактики лечения на более интенсивную может приводить к снижению точности прогноза [

PJ, Angelopoulou МК, Vassilakopoulos ТР. Prognostic factors in Hodgkin lymphoma. Semin Hematol. 2016; 53(3):155-164; Diefenbach CS, Li H, Hong F, et al. Evaluation of the International Prognostic Score (IPS-7) and a Simpler Prognostic Score (IPS-3) for advanced Hodgkin lymphoma in the modern era. Br J Haematol. 2015; 171(4):530-538]. Поэтому предложенные подходы характеризуются недостаточно высокой чувствительностью и специфичностью.A common drawback of these methods is that the assessment of these risk factors is carried out during the diagnosis of HL and is calculated for certain courses of XT I line. Changing the treatment tactics to a more intensive one can lead to a decrease in the accuracy of the prognosis [

PJ, Angelopoulou MK, Vassilakopoulos TP. Prognostic factors in Hodgkin lymphoma. Semin Hematol. 2016; 53 (3): 155-164; Diefenbach CS, Li H, Hong F, et al. Evaluation of the International Prognostic Score (IPS-7) and a Simpler Prognostic Score (IPS-3) for advanced Hodgkin lymphoma in the modern era. Br J Haematol. 2015; 171 (4): 530-538]. Therefore, the proposed approaches are characterized by insufficiently high sensitivity and specificity.

Известны способы прогнозирования эффективности терапии ЛХ на основании лучевых методов исследования. По данным патента [RU 2462192, А61В 6/03, 2012] пациенту проводят спиральную компьютерную томографию (КТ) до начала XT, выбирают скан с наибольшим уровнем поражения и рассчитывают площадь; после окончания XT повторно назначают спиральную КТ и на том же уровне вновь рассчитывают площадь. Оценка регрессии проводится по данным проведенных измерений; для адекватного ответа регрессия опухолевой массы должна быть равной или превышать 80% по максимальному поперечному размеру и более 85% по площади поражения, что соответствует адекватному ответу на лечение. В соответствии с результатами рассматривают дальнейшую тактику ведения пациента [патент RU 2462192, А61В 6/03, 2012].Known methods for predicting the effectiveness of HL therapy based on radiation research methods. According to the patent [RU 2462192, АВВ 6/03, 2012], the patient undergoes a spiral computed tomography (CT) scan before the start of XT, a scan with the highest level of damage is selected, and the area is calculated; after the end of XT, a spiral CT is reassigned and the area is again calculated at the same level. Regression assessment is carried out according to measurements; for an adequate response, the regression of the tumor mass should be equal to or greater than 80% in the maximum transverse size and more than 85% in the lesion area, which corresponds to an adequate response to treatment. In accordance with the results, further tactics of patient management are considered [patent RU 2462192, A61B 6/03, 2012].

Недостатками данного способа является то, что оценка описанных параметров рассчитана только для курсов XT I линии, без учета дальнейшего лечения, некоторая субъективность оценки, а также отсутствие данных о чувствительности и специфичности метода.The disadvantages of this method is that the assessment of the described parameters is calculated only for XT I line courses, without taking into account further treatment, some subjectivity of the assessment, as well as the lack of data on the sensitivity and specificity of the method.

Прогностическая значимость на всех этапах терапии описана для метода позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ). По данным нескольких исследований, ПЭТ-позитивные пациенты отличаются значимо меньшими показателями выживаемости до прогрессии по сравнению с ПЭТ-негативными больными [

PJ, Angelopoulou МК, Vassilakopoulos ТР. Prognostic factors in Hodgkin lymphoma. Semin Hematol. 2016; 53(3):155-164].The prognostic significance at all stages of therapy is described for the method of positron emission tomography (PET). According to several studies, PET-positive patients have significantly lower survival rates before progression compared to PET-negative patients [

Недостатки данного метода: высокая стоимость способа, невысокая разрешающая способность, а также значительная субъективность оценки.The disadvantages of this method: the high cost of the method, low resolution, as well as a significant subjectivity of the assessment.

Прогностическую ценность, не зависящую от терапии (в том числе от ВДХТ с ауто-ТГСК), имеет определение уровней экспрессии генов ALDH1A1, APOL6, В2М, CD300A, CD68, CXCL11, GLUL, HLA-A, HLA-C, IFNG, IL15RA, IRF1, LMO2, LYZ, PRF1, RAPGEF2, RNF144B, STAT1, TNFSF10, WDR83, CCL17, COL6A1, PDGFRA, описанный в патенте США [US 2014303034, C12Q 1/68, 2014]. Измерение уровней экспрессии может включать подсчет молекул РНК с использованием цифрового профилирования, такого как платформа nanostring. Оценка сравнивается с пороговым значением, указывающим на результат.The prognostic value independent of therapy (including VDHT with auto-HSCT) is determined by the expression levels of the ALDH1A1, APOL6, B2M, CD300A, CD68, CXCL11, GLUL, HLA-A, HLA-C, IFNG, IL15RA genes, IRF1, LMO2, LYZ, PRF1, RAPGEF2, RNF144B, STAT1, TNFSF10, WDR83, CCL17, COL6A1, PDGFRA described in US patent [US 2014303034, C12Q 1/68, 2014]. Measuring expression levels may include counting RNA molecules using digital profiling, such as a nanostring platform. The score is compared with a threshold value indicating the result.

Недостатками этого подхода является необходимость получения образца опухолевой ткани, трудоемкость подготовки проб, возможность использования только при помощи определенного оборудования, расходных материалов и программного обеспечения, поставляемого авторами метода.The disadvantages of this approach are the need to obtain a sample of tumor tissue, the complexity of sample preparation, and the possibility of using it only with the help of certain equipment, consumables, and software supplied by the authors of the method.

Известен способ прогнозирования неблагоприятного течения ЛХ после XT I линии на основании сравнительного анализа РНК фактора роста фибробластов-2 и синдекана-1 в образце ткани лимфатического узла и периферической крови методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией у исследуемого пациента и у пациента с доказанным хорошим ответом на терапию [патент СА 2941666, C12Q 1/68, 2015]. В зависимости от выраженности экспрессии РНК маркеров по сравнению с контрольными образцами, делают прогноз о дальнейшем течении болезни у исследуемого пациента.A known method for predicting an adverse course of HL after XT I line based on a comparative analysis of RNA of fibroblast growth factor-2 and syndecan-1 in a sample of lymph node tissue and peripheral blood by reverse transcription polymerase chain reaction in a patient and a patient with a proven good response to therapy [patent CA 2941666, C12Q 1/68, 2015]. Depending on the severity of expression of RNA markers in comparison with control samples, a prognosis is made on the further course of the disease in the patient under study.

Недостатками данного способа являются необходимость поиска контрольного пациента и получения его биологических образцов для сравнительного исследования, относительная сложность подготовки проб, дороговизна исследования, а также то, что оценка описанных параметров рассчитана только для курсов XT I линии.The disadvantages of this method are the need to search for a control patient and obtain biological samples for a comparative study, the relative complexity of sample preparation, the high cost of the study, and the fact that the assessment of the described parameters is calculated only for XT I line courses.

В публикациях описаны способы, которые позволяют прогнозировать увеличение общей и беспрогрессивной выживаемости после ауто-ТГСК у больных ЛХ с помощью определения абсолютного количества лимфоцитов периферической крови более 500 клеток/мкл на 15-й день после ауто-ТГСК

Vidriales MB, Caballero MD, et al. The number of tumor infiltrating T-cell subsets in lymph nodes from patients with Hodgkin lymphoma is associated with the outcome after first line ABVD therapy. Leuk Lymphoma. 2017; 58(5):1144-1152; Porrata LF, Inwards DJ, Micallef IN, et al. Early lymphocyte recovery post-autologous haematopoietic stem cell transplantation is associated with better survival in Hodgkin's disease. Br J Haematol. 2002; 117(3):629-633].The publications describe methods that can predict an increase in overall and non-progressive survival after auto-HSCT in patients with HL by determining the absolute number of peripheral blood lymphocytes of more than 500 cells / μl on the 15th day after auto-HSCT

Vidriales MB, Caballero MD, et al. The number of tumor infiltrating T-cell subsets in lymph nodes from patients with Hodgkin lymphoma is associated with the outcome after first line ABVD therapy. Leuk Lymphoma. 2017; 58 (5): 1144-1152; Porrata LF, Inwards DJ, Micallef IN, et al. Early lymphocyte recovery post-autologous haematopoietic stem cell transplantation is associated with better survival in Hodgkin's disease. Br J Haematol. 2002; 117 (3): 629-633].

К недостаткам перечисленных выше маркеров течения болезни после ауто-ТГСК можно отнести их недостаточную изученность. В частности, нет информации по чувствительности и специфичности описываемых прогностических факторов.The disadvantages of the above markers of the course of the disease after auto-HSCT include their lack of knowledge. In particular, there is no information on the sensitivity and specificity of the described prognostic factors.

Ранее также был предложен способ прогноза развития раннего рецидива после ауто-ТГСК, у больных гемобластозами, в том числе ЛХ [патент RU 2337712, G01N 33/53, 2008]. Способ основан на оценке комплекса показателей иммунного статуса у больных гемобластозами в период предшествующий ВДХТ с ауто-ТГСК, по следующим показателям: иммунологический регуляторный индекс (ИРИ, CD4/CD8), относительное количество CD4⁺- и CD8⁺ Т-клеток в S,G₂/M фазах клеточного цикла, относительное количество CD4⁺- и CD8⁺ Т-клеток в стадии апоптоза, относительное количество CD4⁺- и CD8⁺ Т-клеток памяти, абсолютное количество CD16⁺NK-клеток, реакция ГЗТ, уровень экспрессии HLA-DR молекул на моноцитах и содержание IgM в сыворотке крови. Прогноз строится с помощью последовательной процедуры Вальда с учетом диагностической информативности (значений диагностических коэффициентов, ДК) анализируемых показателей. При суммарной величине положительных ДК >=+13,0 прогнозируют развитие раннего рецидива, а при суммарной величине отрицательных ДК <=-17,0 - прогнозируют благоприятный исход ауто-ТГСК.Earlier, a method was proposed for predicting the development of early relapse after auto-HSCT in patients with hemoblastoses, including HL [patent RU 2337712, G01N 33/53, 2008]. The method is based on the assessment of a complex of indicators of the immune status in patients with hemoblastosis during the period preceding VDHT with auto-HSCT, according to the following indicators: immunological regulatory index (IRI, CD4 / CD8), the relative number of CD4 ⁺ and CD8 ⁺ T cells in S, G ₂ / M phases of the cell cycle, the relative number of CD4 ⁺ - and CD8 ⁺ T cells in the apoptosis stage, the relative number of CD4 ⁺ - and CD8 ⁺ T-cells in memory, the absolute number of CD16 ⁺ NK cells, HRT reaction, the level of HLA- expression Monocyte DR molecules and serum IgM content. The forecast is built using the Wald sequential procedure, taking into account the diagnostic information content (values of diagnostic coefficients, DC) of the analyzed indicators. With a total value of positive DK> = + 13.0, the development of early relapse is predicted, and with a total value of negative DK <= - 17.0, a favorable outcome of auto-HSC is predicted.

Недостатками данного метода прогноза являются необходимость оценки большого числа разнородных параметров (относительного содержания 6 субпопуляций клеток методом проточной цитометрии, определения концентрации IgM в сыворотке турбодиметрическим методом, проведения реакции ГЗТ). Кроме того, у очень большого числа больных (в 47,5% случаев) прогноз оказывается неопределенным, поскольку суммарная величина как положительных, так и отрицательных диагностических коэффициентов не достигает заданных пороговых значений (ДКпор=+13 или ДКпор=-17).The disadvantages of this forecast method are the need to evaluate a large number of heterogeneous parameters (the relative content of 6 cell subpopulations by flow cytometry, determine the concentration of IgM in serum by a turbodimetric method, and the HRT reaction). In addition, in a very large number of patients (in 47.5% of cases), the prognosis is uncertain, since the total value of both positive and negative diagnostic coefficients does not reach the specified threshold values (DKpor = + 13 or DKpor = -17).

Наиболее близким к заявленному изобретению является способ прогнозирования раннего рецидива у больных гемобластозами, в том числе лимфомой Ходжкина (ЛХ) после высокодозной химиотерапии (ВДХТ) с трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК), включающий проточную цитометрию и оценку относительного содержания одной из популяций Т-клеток с использованием ее порогового значения (патент RU 2498312, G01N 33/533, 2013). Этот способ прогнозирует ранний рецидив на основе оценки относительного содержания CD4⁺FOXP3⁺ регуляторных Т-клеток методом проточной цитометрии у больных гемобластозами после ауто-ТГСК [19]. В соответствии со способом обследование больных гемобластозами проводят после процедуры трансплантации в период восстановления лимфоцитов периферической крови до уровня >500 клеток/мкл, при этом определяют относительное количество циркулирующих CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток в периферической крови больных гемобластозами, и при содержании CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде. Показано, что в течение 12 месяцев после ауто-ТГСК чувствительность способа составляет 72,7%, специфичность - 77,8%.Closest to the claimed invention is a method for predicting early relapse in patients with hemoblastosis, including Hodgkin’s lymphoma (HL) after high-dose chemotherapy (VHT) with autologous hematopoietic stem cell transplantation (auto-HSCT), including flow cytometry and estimation of the relative content of one of the populations T cells using its threshold value (patent RU 2498312, G01N 33/533, 2013). This method predicts an early relapse based on the assessment of the relative content of CD4 ⁺ FOXP3 ⁺ regulatory T cells by flow cytometry in patients with hemoblastosis after auto-HSC [19]. In accordance with the method, the examination of patients with hemoblastoses is carried out after the transplantation procedure during the recovery of peripheral blood lymphocytes to a level> 500 cells / μl, and the relative number of circulating CD4 ⁺ FOXP3 ⁺ T cells in the peripheral blood of patients with hemoblastoses is determined, and with the content of CD4 ⁺ FOXP3 ⁺ T cells more than 9.1% predict the development of early relapse in the post-transplant period. It was shown that within 12 months after auto-HSCT, the sensitivity of the method is 72.7%, specificity - 77.8%.

Однако данный способ прогнозирования является трудоемким в плане пробоподготовки, так как необходимо определение внутриклеточного содержания транскрипционного фактора FQXP3 среди циркулирующих CD4⁺ Т-лимфоцитов, что усложняет и удорожает способ, а также отсутствуют данные об эффективности метода для отдельных заболеваний, в том числе для ЛХ.However, this forecasting method is laborious in terms of sample preparation, since it is necessary to determine the intracellular content of the transcription factor FQXP3 among circulating CD4 ⁺ T-lymphocytes, which complicates and increases the cost of the method, and there is no data on the effectiveness of the method for individual diseases, including LH.

Целью настоящего изобретения является уменьшение трудоемкости способа прогноза раннего рецидива у больных классической лимфомой Ходжкина после ВДХТ с ауто-ТГСК.The aim of the present invention is to reduce the complexity of the method for predicting early relapse in patients with classical Hodgkin's lymphoma after VDHT with auto-HSCT.

Задача решается тем, что в способе прогноза развития раннего рецидива у больных классической лимфомой Ходжкина после высокодозной химиотерапии (ВДХТ) и трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто-ТГСК), включающем проточную цитометрию и оценку абсолютного содержания одной из популяций лимфоцитов с использованием ее порогового значения, после процедуры трансплантации в период восстановления лимфоцитов периферической крови до уровня >500 клеток/мкл определяют абсолютное количество CD45⁺CD3⁺ Т-клеток, и при содержании CD45⁺CD3⁺ Т-клеток более 717 клеток/мкл прогнозируют более высокую вероятность развития раннего рецидива после ауто-ТГСК, а при содержании CD45⁺CD3⁺ Т-клеток менее 717 клеток/мкл прогнозируют более высокую вероятность отсутствия раннего рецидва ЛХ после ауто-ТГСК.The problem is solved in that in a method for predicting the development of early relapse in patients with classical Hodgkin’s lymphoma after high-dose chemotherapy (VHT) and transplantation of autologous hematopoietic stem cells (auto-HSCT), including flow cytometry and estimation of the absolute content of one of the lymphocyte populations using its threshold value after transplantation procedure during the recovery of peripheral blood lymphocytes to a level of> 500 cells / ml determine the absolute amount of CD45 ^⁺ CD3 ⁺ T cells, and comprise and CD45 ^⁺ CD3 ⁺ T cells more than 717 cells / l predict a high probability of early relapse after autologous HSCT, and when the content of CD45 ^⁺ CD3 ⁺ T cells less than 717 cell / ml predict a high probability of absence of early retsidva LH after auto -TGSK.

Таким образом, в предложенном способе прогноз развития раннего рецидива у больных ЛХ после ауто-ТГСК основан на оценке абсолютного содержания CD45⁺CD3⁺ Т-клеток в периферической крови больных после восстановления лимфоцитов в раннем посттрансплантационном периоде (в среднем, 13-17 дней после ауто-ТГСК). CD45⁺CD3⁺ Т-клетки составляют основной пул лимфоцитов периферической крови, оценка их содержания не представляет сложностей, определение относительного количества CD45⁺CD3⁺ Т-клеток осуществляется с помощью исследования поверхностных маркеров, что значительно упрощает способ. Способ, на наш взгляд, является новым и обладает изобретательским уровнем.Thus, in the proposed method, the prognosis of the development of early relapse in patients with HL after auto-HSCT is based on an assessment of the absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells in the peripheral blood of patients after lymphocyte recovery in the early post-transplant period (on average, 13-17 days after auto -TGSK). CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells make up the main pool of peripheral blood lymphocytes, their content is not difficult to assess, the relative number of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells is determined by studying surface markers, which greatly simplifies the method. The method, in our opinion, is new and has an inventive step.

Способ осуществляют следующим образом:The method is as follows:

1. После трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток пациенту с ЛХ в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл забирают 3-5 мл венозной крови. Параллельно в плановом порядке проводят рутинный общеклинический анализ крови с лейкоцитарной формулой для оценки абсолютного количества лимфоцитов периферической крови.1. After transplantation of autologous hematopoietic stem cells to a patient with HL during the recovery of lymphocytes to a level> 500 cells / μl, 3-5 ml of venous blood is taken. In parallel, a routine general clinical blood test with a leukocyte formula is carried out in a planned manner to assess the absolute number of peripheral blood lymphocytes.

2. Для исследования, используется периферическая кровь без предварительной обработки. 100 мкл клеточной взвеси переносится в стандартную пробирку для проточной цитометрии. К исследуемым образцам добавляют анти-CD45 и анти-CD3 моноклональные антитела в соответствии с инструкциями производителя, и инкубируют 30 мин в темноте при комнатной температуре. После этого в пробу добавляют 500 мкл раствора для фиксации и лизиса эритроцитов (BD FACS Lysing Solution, Becton Dickinson, США) в соответствии с инструкцией производителя, обеспечивающего разрушение эритроцитов.2. For research, peripheral blood is used without preliminary treatment. 100 μl of cell suspension is transferred to a standard tube for flow cytometry. Anti-CD45 and anti-CD3 monoclonal antibodies were added to the test samples in accordance with the manufacturer's instructions and incubated for 30 minutes in the dark at room temperature. After that, 500 μl of erythrocyte fixation and lysis solution (BD FACS Lysing Solution, Becton Dickinson, USA) is added to the sample in accordance with the manufacturer's instructions for the destruction of red blood cells.

3. После подготовки пробы исследуют на проточном цитометре с использованием соответствующего программного обеспечения. Цитометрию проводят с использованием параметров прямого и бокового светорассеяния для определения лимфоцитарного гейта, из которого строят график каналов флюоресценции. Определяют относительное содержание двойных позитивных CD45⁺CD3⁺ Т-клеток. Возможно применение моноклональных антител и проточных цитометров разных фирм-производителей в соответствии с инструкциями.3. After preparation, the samples are examined on a flow cytometer using appropriate software. Cytometry is carried out using the parameters of direct and lateral light scattering to determine the lymphocytic gate, from which a graph of fluorescence channels is built. The relative content of double positive CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells is determined. It is possible to use monoclonal antibodies and flow cytometers from different manufacturers in accordance with the instructions.

4. По результатам проточной цитометрии и данным общеклинического анализа крови вычисляют абсолютное количество CD45⁺CD3⁺ Т-клеток: (относительное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток (%) × абсолютное количество лимфоцитов (клеток/мкл)) /100%.4. According to the results of flow cytometry and general clinical blood analysis, the absolute number of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells is calculated: (relative content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells (%) × absolute number of lymphocytes (cells / μl)) / 100%.

5. По абсолютному содержанию CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови на момент восстановления лимфоцитов после ВДХТ с ауто-ТГСК выносят прогностическое заключение о вероятности развития раннего рецидива в посттрансплантационном периоде.5. The absolute content of peripheral blood CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells at the time of lymphocyte recovery after VDHT with auto-HSCT makes a prognostic conclusion on the likelihood of early relapse in the post-transplant period.

При разработке предлагаемого метода прогноза в группе больных ЛХ, перенесших ВДХТ с ауто-ТГСК, была проведена оценка прогностической значимости относительного содержания CD45⁺CD3⁺ Т-клеток и выделены значения, обладающие диагностической ценностью для определения благоприятного и неблагоприятного течения посттрансплантационного периода.When developing the proposed prognosis method in the group of patients with HL who underwent VHT with auto-HSCT, the prognostic significance of the relative content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was assessed and values with diagnostic value were determined to determine the favorable and adverse course of the post-transplant period.

Заявляемый способ был разработан на основании анализа выживаемости до рецидива двух групп больных ЛХ (n=63), которым была выполнена ВДХТ с ауто-ТГСК, в зависимости от установленного значения CD45⁺CD3⁺ Т-клеток на день выхода из лимфопении после ауто-ТГСК. Ранний рецидив заболевания (в течение первого года после ауто-ТГСК) был зарегистрирован у 13 больных. Сравнение количества субпопуляций Т-клеток на момент выхода из лимфопении у больных с оппозитными исходами выявил, что пациенты с ранним рецидивом отличались более высоким абсолютным содержанием CD45⁺CD3⁺ клеток, по сравнению с пациентами (n=50), сохранившими полную и частичную ремиссию: 960 клеток/мкл (613-1460 клеток/мкл) против 461 клеток/мкл (273-714 клеток/мкл); p_U=0,0028. На рис. 1 показано абсолютное содержание CD45+CD3+ Т-клеток периферической крови больных классической лимфомой Ходжкина после ВДХТ с ауто-ТГСК в зависимости от течения посттрансплантационного периода. Пациенты с ранним рецидивом (n=13, серый столбик) отличались более высоким абсолютным содержанием CD45⁺CD3⁺ клеток по сравнению с пациентами (n=50), сохранившими полную и частичную ремиссию: 960 клеток/мкл (613-1460 клеток/мкл) против 461 клеток/мкл (273-714 клеток/мкл).The inventive method was developed on the basis of the analysis of survival until relapse of two groups of patients with HL (n = 63) who underwent VDHT with auto-HSCT, depending on the established value of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells on the day of exit from lymphopenia after auto-HSCT . An early relapse of the disease (during the first year after auto-HSCT) was recorded in 13 patients. Comparison of the number of T-cell subpopulations at the time of exit from lymphopenia in patients with opposite outcomes revealed that patients with early relapse had a higher absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ cells, compared with patients (n = 50) who retained complete and partial remission: 960 cells / μl (613-1460 cells / μl) versus 461 cells / μl (273-714 cells / μl); p _U = 0.0028. In fig. Figure 1 shows the absolute content of CD45 + CD3 + T cells in the peripheral blood of patients with classical Hodgkin’s lymphoma after VDHT with auto-HSCT depending on the course of the post-transplant period. Patients with early relapse (n = 13, gray bar) had a higher absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ cells compared to patients (n = 50) who retained complete and partial remission: 960 cells / μl (613-1460 cells / μl) against 461 cells / μl (273-714 cells / μl).

Данные представлены в виде медианы и интерквартильного диапазона. Значимость различий - по U-критерию Манна-Уитни (двусторонний).Data are presented as median and interquartile range. The significance of the differences is according to the Mann-Whitney U-test (two-sided).

Для оценки прогностической значимости признака был использован анализ ROC-кривых с вычислением площади под ROC-кривой (AUC). AUC составила 0.76 (95% доверительный интервал (ДИ): 0,63-0,89; р=0,0037). На рис. 2 показан ROC-анализ прогностической значимости абсолютного содержания CD45+CD3+ Т-клеток периферической крови больных классической лимфомой Ходжкина после ВДХТ с ауто-ТГСК.To assess the prognostic significance of the trait, an analysis of ROC curves was used with calculation of the area under the ROC curve (AUC). AUC was 0.76 (95% confidence interval (CI): 0.63-0.89; p = 0.0037). In fig. Figure 2 shows a ROC analysis of the prognostic significance of the absolute content of CD45 + CD3 + T cells in peripheral blood of patients with classical Hodgkin’s lymphoma after VHTT with auto-HSCT.

Определено пороговое значение абсолютного содержания CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови на день восстановления лимфоцитов после ауто-ТГСК у больных ЛХ, равное 717 клеток/мкл. При данном значении чувствительность метода - 69%, специфичность - 75%, отношение правдоподобия (отношение вероятности получить положительный результат для пациента с рецидивом к вероятности получить положительный результат для пациента в ремиссии) - 2,77.The threshold value of the absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells of peripheral blood on the day of lymphocyte recovery after auto-HSCT in patients with HL was determined, equal to 717 cells / μl. With this value, the sensitivity of the method is 69%, specificity is 75%, the likelihood ratio (the ratio of the probability of getting a positive result for a patient with relapse to the probability of getting a positive result for a patient in remission) is 2.77.

У девяти из 13 пациентов с ранним рецидивом после ауто-ТГСК абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток на момент выхода из лимфопении было выше порогового значения (717 клеток/мкл). Всего абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток >717 клеток/мкл на момент выхода из лимфопении было выялено у 21 пациента. Абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток <717 клеток/мкл на момент выхода из лимфопении было определено у 42 пациентов. Из них рецидив ЛХ в течение первого года после ауто-ТГСК зарегистрирован у четырех больных, 38 пациентов сохранили полную или частичную ремиссию. Доля ложноотрицательных результатов - 9,5% (4/42).In nine of 13 patients with early relapse after auto-HSCT, the absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells at the time of exit from lymphopenia was higher than the threshold value (717 cells / μl). In total, the absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells> 717 cells / μl at the time of exit from lymphopenia was revealed in 21 patients. The absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells <717 cells / μl at the time of exit from lymphopenia was determined in 42 patients. Of these, relapse of HL during the first year after auto-HSCT was registered in four patients, 38 patients retained complete or partial remission. The proportion of false negative results is 9.5% (4/42).

Таким образом, у больных ЛХ абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови >717 клеток/мкл на момент выхода из лимфопении после ВДХТ с ауто-ТГСК может рассматриваться как неблагоприятный прогностический фактор, свидетельствующий о повышенной вероятности развития раннего рецидива заболевания (в течение первого года после ауто-ТГСК).Thus, in patients with HL, the absolute content of peripheral blood CD45 ⁺ CD3 ⁺ T-cells> 717 cells / μL at the time of recovery from lymphopenia after VDHT with auto-HSCT can be considered as an unfavorable prognostic factor indicating an increased likelihood of developing an early relapse of the disease (in during the first year after auto-HSCT).

Клинические примерыClinical examples

Пример №1. Больной С., 32 года, болен с мая 2015 г., диагноз: лимфома Ходжкина, IV ст., нодулярный склероз, 1 ранний рецидив с поражением надключичных, забрюшинных лимофузлов, лимфоузлов ворот печени и селезенки, экстранодальным поражением (хвост поджелудочной железы). Проведено шесть курсов XT I линии, достигнута ремиссия. В дальнейшем констатирован ранний рецидив ЛХ, проведено три курса XT II линии, достигнута 2-я ремиссия, проведена мобилизация и сепарация периферических гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Криоконсервировано 11,4×10⁶/кг веса ГСК. Режим кондиционирования: BEAM. ВДХТ с ауто-ТГСК - в январе 2017 г. После восстановления кроветворения и выхода из лейкопении была проведена оценка абсолютного количества CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови. Абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток составило 1153 клеток/мкл, превысив установленный пороговый уровень. Таким образом, был определен прогноз высокого риска раннего рецидива ЛХ после ВДХТ с ауто-ТГСК. Действительно, пациент без тяжелых осложнений перенес АТГСК и быстро восстановил кроветворение, но в августе 2017 г. (через 6 месяцев после трансплантации) у него был диагностирован рецидив ЛХ.Example No. 1. Patient S., 32 years old, ill since May 2015, diagnosis: Hodgkin’s lymphoma, stage IV, nodular sclerosis, 1 early relapse with damage to the supraclavicular, retroperitoneal lymph nodes, lymph nodes of the gates of the liver and spleen, extranodal lesion (pancreas tail). Six courses of XT I line were conducted, remission was achieved. Later, an early recurrence of HL was observed, three XT II courses were carried out, 2nd remission was achieved, mobilization and separation of peripheral hematopoietic stem cells (HSCs) was carried out. Cryopreserved 11.4 × 10 ⁶ / kg of HSC weight. Air conditioning: BEAM. VDT with auto-HSCT - in January 2017. After restoration of hematopoiesis and exit from leukopenia, the absolute number of peripheral blood CD45 ⁺ CD3 ⁺ T-cells was assessed. The absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was 1153 cells / μl, exceeding the established threshold level. Thus, the prognosis of a high risk of early recurrence of HL after VDHT with auto-HSCT was determined. Indeed, the patient without severe complications suffered ATGSC and quickly restored hematopoiesis, but in August 2017 (6 months after transplantation) he was diagnosed with recurrence of HL.

Пример №2. Больной Б., 22 года, болен с марта 2013 г., диагноз: лимфома Ходжкина, IV ст., нодулярный склероз, поражение периферических, забрюшинных лимофузлов, средостения, экстранодальное поражение (легкое, печень), 1 ранний рецидив. Проведено шесть курсов XT I линии, достигнута ремиссия. В дальнейшем констатирован ранний рецидив ЛХ, проведено четыре курса XT II линии, достигнута 2-я частичная ремиссия, проведена мобилизация и сепарация периферических ГСК. Криоконсервировано 8,5×10⁶/кг веса ГСК. Режим кондиционирования: BEAM. ВДХТ с ауто-ТГСК - в июне 2015 г. После восстановления кроветворения, и выхода из лейкопении была проведена оценка абсолютного количества CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови. Абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток составило 1059 клеток/мкл, превысив установленный пороговый уровень. Таким образом, был определен прогноз высокого риска раннего рецидива ЛХ после ВДХТ с ауто-ТГСК. Действительно, в марте 2016 г. (через 9 месяцев после трансплантации) у него был диагностирован рецидив ЛХ.Example No. 2. Patient B., 22 years old, sick since March 2013, diagnosis: Hodgkin’s lymphoma, stage IV, nodular sclerosis, lesion of peripheral, retroperitoneal lymph nodes, mediastinum, extranodal lesion (lung, liver), 1 early relapse. Six courses of XT I line were conducted, remission was achieved. Later, an early relapse of HL was observed, four XT II courses were carried out, the 2nd partial remission was achieved, and peripheral HSCs were mobilized and separated. Cryopreserved 8.5 × 10 ⁶ / kg of HSC weight. Air conditioning: BEAM. VDHT with auto-HSCT - in June 2015. After restoration of hematopoiesis and withdrawal from leukopenia, the absolute number of peripheral blood CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was assessed. The absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was 1059 cells / μl, exceeding the established threshold level. Thus, the prognosis of a high risk of early recurrence of HL after VDHT with auto-HSCT was determined. Indeed, in March 2016 (9 months after transplantation), he was diagnosed with recurrence of HL.

Пример №3. Пациентка М., 26 лет, больна с июня 2014 г., диагноз: лимфома Ходжкина, IV ст., нодулярный склероз, с поражением надключичных, подмышечных, внутригрудных, забрюшинных, паховых лимфоузлов, крыла подвздошной кости, крестца, первично-резистентное течение. Проведено четыре курса XT I линии, в связи с резистентным течением заболевания переведена на XT II линии. После шести курсов XT II линии достигнут частичный ответ на терапию, проведена мобилизация и сепарация периферических ГСК. Криоконсервировано 3,0×10⁶/кг веса ГСК. Режим кондиционирования: BEAM. ВДХТ с ауто-ТГСК - в феврале 2016 г. После восстановления кроветворения и выхода из лейкопении была проведена оценка абсолютного количества CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови. Абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток составило 45 клеток/мкл, не достигая установленного порогового уровня. Был определен прогноз низкого риска развития раннего рецидива после ауто-ТГСК. Действительно, несмотря на значительный предшествующий объем поражения и экстранодальные очаги, в динамике последующего клинического наблюдения у пациентки сохраняется ремиссия ЛХ (наблюдение в течение 37 мес.после ауто-ТГСК).Example No. 3. Patient M., 26 years old, sick since June 2014, diagnosed with Hodgkin’s lymphoma, stage IV, nodular sclerosis, with lesions of the supraclavicular, axillary, hilar, retroperitoneal, inguinal lymph nodes, iliac wing, sacrum, primary resistant course. Four courses of XT I line were carried out, in connection with the resistant course of the disease, it was transferred to XT II line. After six courses of XT II line, a partial response to therapy was achieved, and peripheral HSCs were mobilized and separated. Cryopreserved 3.0 × 10 ⁶ / kg HSC weight. Air conditioning: BEAM. VDT with auto-HSCT - in February 2016. After restoration of hematopoiesis and exit from leukopenia, the absolute number of peripheral blood CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was assessed. The absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was 45 cells / μl, not reaching the set threshold level. A prognosis of a low risk of developing early relapse after auto-HSCT was determined. Indeed, despite the significant previous lesion volume and extranodal foci, the patient remains in remission in the dynamics of subsequent clinical observation of HL remission (observation for 37 months after auto-HSCT).

Пример №4. Больной Н., 32 года, болен с июня 2006 г., диагноз: лимфома Ходжкина, IVAb ст., нодулярный склероз, поражение шейных, медиастинальных, забрюшинных лимофузлов, экстранодальное поражение, 2-й поздний рецидив. Всего проведено 20 курсов XT I линии, в связи со 2-м поздним рецидивом ЛХ проведено два курса XT II линии, достигнута 3-я частичная ремиссия, проведена мобилизация и сепарация периферических ГСК. Криоконсервировано 16,0×10⁶/кг веса ГСК. Режим кондиционирования: BEAM. ВДХТ с ауто-ТГСК - в марте 2016 г. После восстановления кроветворения и выхода из лейкопении была проведена оценка абсолютного количества CD45⁺CD3⁺ Т-клеток периферической крови. Абсолютное содержание CD45⁺CD3⁺ Т-клеток составило 150 клеток/мкл, не достигая установленного порогового уровня. Был определен прогноз низкого риска развития раннего рецидива после ВДХТ с ауто-ТГСК. Действительно, в динамике последующего клинического наблюдения у пациента сохраняется ремиссия ЛХ (наблюдение в течение 36 мес после ауто-ТГСК).Example No. 4. Patient N., 32 years old, sick since June 2006, diagnosis: Hodgkin’s lymphoma, IVAb art., Nodular sclerosis, lesions of the cervical, mediastinal, retroperitoneal lymph nodes, extranodal lesion, 2nd late relapse. In total, 20 courses of XT I line were carried out, in connection with the 2nd late relapse of HL, two courses of XT II line were carried out, 3rd partial remission was achieved, mobilization and separation of peripheral HSCs was carried out. Cryopreserved 16.0 × 10 ⁶ / kg of HSC weight. Air conditioning: BEAM. VDT with auto-HSCT - in March 2016. After restoration of hematopoiesis and exit from leukopenia, the absolute number of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells of peripheral blood was assessed. The absolute content of CD45 ⁺ CD3 ⁺ T cells was 150 cells / μl, not reaching the set threshold level. The prognosis of a low risk of developing early relapse after VDHT with auto-HSCT was determined. Indeed, in the dynamics of subsequent clinical observation, the patient retains remission of HL (observation for 36 months after auto-HSCT).

Предложенный способ позволяет выделить больных ЛХ, которые имеют значимо большую вероятность развития раннего рецидива после ВДХТ с ауто-ТГСК, что позволяет своевременно скорректировать тактику дальнейшего ведения больного.The proposed method allows to identify patients with HL who have a significantly greater likelihood of developing an early relapse after VHTT with auto-HSCT, which allows you to timely adjust the tactics of further management of the patient.

Предложенный способ прогноза раннего рецидива у больных классической лимфомой Ходжкина после ВДХТ с ауто-ТГСК является более простым и экономичным, за счет отсутствия специальной пробоподготовки и необходимости проводить внутриклеточную оценку содержания маркера, а также за счет использования минимального количества исследуемого материала и отсутствия необходимости проводить дополнительный забор крови в период выхода больного из лейкопении.The proposed method for predicting early relapse in patients with classical Hodgkin’s lymphoma after VHTT with auto-HSCT is simpler and more economical, due to the lack of special sample preparation and the need to conduct intracellular assessment of the marker content, as well as due to the use of a minimal amount of the studied material and the absence of the need for additional sampling blood during the patient’s exit from leukopenia.

Claims

A method for predicting the development of early relapse in patients with classical Hodgkin’s lymphoma after high-dose chemotherapy and transplantation of autologous hematopoietic stem cells (auto-HSCT), including flow cytometry and the estimation of the relative content of one of the lymphocyte populations using its threshold value, characterized in that at the time of exit from lymphopenia after transplantation in the peripheral blood of the patient is determined absolute amount of CD45 ^⁺ CD3 ⁺ T cells, and when the content of CD45 ^⁺ CD3 ⁺ T cells more than 717 cell / mk predict a higher probability of early relapse after autologous HSCT, and when the content of CD45 ^⁺ CD3 ⁺ T cells less than 717 cells / l predict a higher probability of survival of remission during the first year after autologous HSCT.