RU2796987C1 - Yamal strain of avian influenza virus of alphainfluenzavirus genus of influenza a virus subtype h5n1 species for the manufacture of biological products for the specific prevention of avian influenza type a subtype h5 - Google Patents
Yamal strain of avian influenza virus of alphainfluenzavirus genus of influenza a virus subtype h5n1 species for the manufacture of biological products for the specific prevention of avian influenza type a subtype h5 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2796987C1 RU2796987C1 RU2022121292A RU2022121292A RU2796987C1 RU 2796987 C1 RU2796987 C1 RU 2796987C1 RU 2022121292 A RU2022121292 A RU 2022121292A RU 2022121292 A RU2022121292 A RU 2022121292A RU 2796987 C1 RU2796987 C1 RU 2796987C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- subtype
- strain
- avian influenza
- yamal
- Prior art date
Links
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 title claims abstract description 40
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title claims description 52
- 241000894007 species Species 0.000 title description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 56
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 claims abstract description 5
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 claims abstract description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 abstract description 48
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 abstract description 48
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 abstract description 26
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 25
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 13
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 9
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 241001473385 H5N1 subtype Species 0.000 description 47
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 39
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 33
- 239000000463 material Substances 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 14
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 5
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 5
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 4
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940043274 prophylactic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000714230 Avian leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241001516406 Avian orthoreovirus Species 0.000 description 1
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 1
- QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N Chloramine Chemical compound ClN QDHHCQZDFGDHMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011703 Cyanosis Diseases 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 229920000837 Heparan sulfate analogue Polymers 0.000 description 1
- 241001136801 Larus canus Species 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000006758 Marek Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010066226 Metapneumovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- MJNIWUJSIGSWKK-UHFFFAOYSA-N Riboflavine 2',3',4',5'-tetrabutanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)C(OC(=O)CCC)C(OC(=O)CCC)CN1C2=CC(C)=C(C)C=C2N=C2C1=NC(=O)NC2=O MJNIWUJSIGSWKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003711 chorioallantoic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000012502 diagnostic product Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 201000009837 laryngotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- -1 mirodez basic Chemical compound 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к получению нового штамма вируса гриппа птиц подтипа Н5 и может быть использовано при разработке и изготовлении средств специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н5.SUBSTANCE: invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, namely to obtaining a new strain of H5 subtype avian influenza virus and can be used in the development and manufacture of means for specific prophylaxis of H5 subtype avian influenza.
Грипп птиц - контагиозное вирусное заболевание, которое вызывает сезонные эпизоотии и панзоотии с различным уровнем смертности в зависимости от степени патогенности возбудителей [1].Avian influenza is a contagious viral disease that causes seasonal epizootics and panzootics with varying mortality rates depending on the degree of pathogenicity of pathogens [1].
Возбудитель - РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Orthomyxoviridae (по классификации International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) - 00.046), роду Alphainfluenzavirus (ID: 197911 no классификации The National Center for Biotechnology Information (NCBI), к виду Influenza A virus (ID 00.046.0.01.001).The causative agent is an RNA-containing virus belonging to the Orthomyxoviridae family (according to the classification of the International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) - 00.046), the genus Alphainfluenzavirus (ID: 197911 no classification of The National Center for Biotechnology Information (NCBI), to the species Influenza A virus (ID 00.046.0.01.001).
Вирус гриппа А широко распространен в природе, поражает многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного экологических комплексов. От диких птиц выделены вирусы со всеми известными сочетаниями поверхностных белков, при этом инфекция у диких птиц протекает в виде энтерита, без видимых признаков заболевания. Это указывает на высокую степень адаптации вирусов гриппа А к диким птицам, которые являются естественными хозяевами вирусов гриппа. Вирус сохраняется в воде в течении длительного времени (6-8 месяцев), инфицирование происходит водно-фекальным путем [2].Influenza A virus is widespread in nature, infects many species of mammals and birds, mainly aquatic and semi-aquatic ecological complexes. Viruses with all known combinations of surface proteins have been isolated from wild birds, while infection in wild birds occurs in the form of enteritis, without visible signs of the disease. This indicates a high degree of adaptation of influenza A viruses to wild birds, which are the natural hosts of influenza viruses. The virus persists in water for a long time (6-8 months), infection occurs through the water-fecal route [2].
Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: НА и NA.Influenza A virus is characterized by a high degree of variability, especially for the surface glycoproteins of the virion: HA and NA.
Установлено, что антитела хозяина к НА и NA обеспечивают основу гуморального иммунитета, при этом ведущую роль играют протективные антитела к НА. Известно 18 антигенных подтипов НА (H1-H18) и 11 подтипов NA (N1-N11). Вирус гриппа обладает сегментированным геномом, состоящим их 8 сегментов, которые обладают высокой способностью к реассортации [2, 3].It has been established that host antibodies to HA and NA provide the basis for humoral immunity, with protective antibodies to NA playing the leading role. There are 18 known antigenic subtypes of HA (H1-H18) and 11 subtypes of NA (N1-N11). The influenza virus has a segmented genome consisting of 8 segments, which have a high ability to reassort [2, 3].
Различные комбинации НА и NA способны привести к появлению высоковирулентных штаммов вируса, вызывающих высокий процент смертности. В настоящее время наблюдается распространение высокопатогенного гриппа птиц (ВГП) вызванного вирусом типа А, подтипа Н5, на территории Евразии. Считается, что этот подтип является одним из наиболее опасных в плане возникновения пандемий [4].Various combinations of HA and NA can lead to the emergence of highly virulent strains of the virus that cause a high percentage of mortality. Currently, there is a spread of highly pathogenic avian influenza (HAI) caused by type A virus, subtype H5, in the territory of Eurasia. It is believed that this subtype is one of the most dangerous in terms of the occurrence of pandemics [4].
Вирусы низкопатогенного гриппа птиц (НПГ) подтипа Н5 показывают практически одинаково низкую патогенность в экспериментальных условиях при тестировании с помощью IVPI, однако в полевых условиях они часто демонстрируют заболеваемость и смертность от средней до высокой степени [6].Low pathogenicity avian influenza (LPAI) viruses of the H5 subtype show almost equally low pathogenicity under experimental conditions when tested by IVPI, but in the field they often show moderate to high morbidity and mortality [6].
При сравнении выделенных изолятов вируса гриппа птиц обнаруживается чрезвычайно высокая их генетическая и антигенная вариабельность. Это обстоятельство вынуждает вести постоянный поиск новых изолятов вируса гриппа птиц, пригодных для изготовления диагностических и вакцинных препаратов [5, 7].When comparing isolated avian influenza virus isolates, their extremely high genetic and antigenic variability is found. This circumstance forces a constant search for new avian influenza virus isolates suitable for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations [5, 7].
Известны штаммы вируса гриппа птиц, выделенные на территории Российской Федерации, используемые для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.Known strains of avian influenza virus isolated in the Russian Federation, used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations.
Известен штамм вируса гриппа птиц A/Goose/Krasnoozerskoye/627/05 субтип H5N1 для изучения активности лечебных и профилактических препаратов против вируса гриппа. Данное изобретение относится в медицинской вирусологии. Штамм используется для изучения биологии вируса гриппа, а также эффективности лечебных и профилактических препаратов против гриппа [8].Known strain of avian influenza virus A/Goose/Krasnoozerskoye/627/05 subtype H5N1 to study the activity of therapeutic and prophylactic drugs against the influenza virus. This invention relates to medical virology. The strain is used to study the biology of the influenza virus, as well as the effectiveness of therapeutic and prophylactic drugs against influenza [8].
Известен штамм А/БАК/РОССИЯ/05 субтип H5N1 вируса птичьего гриппа подтипа H5N1. Однако указанный штамм может быть использован только для получения антигена и создания вакцинных и диагностических препаратов. Данных о патогенных свойствах штамма для лабораторных животных, в т.ч. мышей, нет [9].Known strain A/BAK/RUSSIA/05 subtype H5N1 of the avian influenza virus subtype H5N1. However, this strain can only be used to obtain an antigen and create vaccine and diagnostic preparations. Data on the pathogenic properties of the strain for laboratory animals, incl. mice, no [9].
Известен штамм вируса гриппа птиц A/Chicken/Kurgan/05/2005 субтип H5N1 для моделирования инфекции, вызываемой вирусом гриппа птиц субтипа H5N1, на мышах в экспериментах по изучению активности противовирусных препаратов и эффективности вакцин [10].Known strain of avian influenza virus A/Chicken/Kurgan/05/2005 subtype H5N1 for modeling infection caused by avian influenza virus subtype H5N1 in mice in experiments to study the activity of antiviral drugs and the effectiveness of vaccines [10].
Известен штамм A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 вируса гриппа птиц Influenza virus avicum типа А подтипа Н5 для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5 [12].A strain A/goose/Kalmykia/813/16 H5N8 of the avian influenza virus Influenza virus avicum type A subtype H5 is known to control the antigenic and immunogenic activity of vaccines against avian influenza and for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of avian influenza type A subtype H5 [12] .
Известен штамм A/chiken/Kostroma/3175/17 H5N2 вируса гриппа птиц подтипа H5N2 Infuenza A virus рода Alphainfluenzavirus для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин против гриппа птиц и для изготовления антигенсодержащих диагностикумов [13].A strain A/chiken/Kostroma/3175/17 H5N2 of the avian influenza virus subtype H5N2 Infuenza A virus of the genus Alphainfluenzavirus is known to control the antigenic and immunogenic activity of avian influenza vaccines and to manufacture antigen-containing diagnosticums [13].
Известен штамм вируса гриппа птиц A/common gull/Chany/2006 H5N1 субтипа, используемый для приготовления антигенсодержащего диагностического или вакцинного препарата [14].Known strain of avian influenza virus A/common gull/Chany/2006 H5N1 subtype used to prepare an antigen-containing diagnostic or vaccine preparation [14].
Известен штамм вируса гриппа A /H5N2/ ГВК №2340 птиц для моделирования гриппозной инфекции. Предложенный штамм является непатогенным для птиц и людей. Полученный штамм предназначен для изучения генетических основ преодоления межвидового барьера, выявления филогенетических и экологических связей вирусов, выделенных в разное время, в различных географических регионах [15].Known strain of influenza virus A /H5N2/ GVK No. 2340 birds to simulate influenza infection. The proposed strain is non-pathogenic for birds and humans. The resulting strain is intended to study the genetic basis for overcoming the interspecies barrier, revealing the phylogenetic and ecological relationships of viruses isolated at different times in different geographic regions [15].
Известен штамм A/duck/Novosibirsk/56/05 H5N1 вируса гриппа птиц, выделенный на территории Западной Сибири, который используется для моделирования вирусной инфекции в научных экспериментах при изучении эффективности противовирусных препаратов на культурах клеток. Однако указанный штамм имеет следующие недостатки: штамм имеет пониженную продуктивность при культивировании на клетках МДСК - максимальная концентрация вируса 6,5 lg ТЦД5 0/мл. Штамм предназначен для производства профилактических и диагностических препаратов и, исходя из представленных данных о патогенности для культур клеток и отсутствия данных о патогенности для животных, в т.ч. мышей, может быть использован для оценки противовирусной активности различных соединений только на культуре клеток [16].Known strain A/duck/Novosibirsk/56/05 H5N1 avian influenza virus isolated in Western Siberia, which is used to simulate a viral infection in scientific experiments when studying the effectiveness of antiviral drugs in cell cultures. However, this strain has the following disadvantages: the strain has reduced productivity when cultivated on MDSC cells - the maximum concentration of the virus is 6.5 lg TCD5 0/ml. The strain is intended for the production of prophylactic and diagnostic preparations and, based on the data on pathogenicity for cell cultures and the lack of data on pathogenicity for animals, incl. mice, can be used to assess the antiviral activity of various compounds only in cell culture [16].
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм «Новосибирский» вируса гриппа птиц Influenza virus avicum для контроля иммуногенной и антигенной активности вакцин и изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики гриппа птиц [11]. Это производственный высокопатогенный штамм вируса гриппа птиц типа А подтипа H5N1.The closest to the proposed invention in terms of essential features is the Novosibirsk strain of the avian influenza virus Influenza virus avicum to control the immunogenic and antigenic activity of vaccines and the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of avian influenza [11]. This is an industrial highly pathogenic strain of avian influenza virus type A subtype H5N1.
Техническая проблема заключается в расширении арсенала актуальных производственных штаммов низкопатогенного вируса гриппа птиц типа А подтипа Н5 и обладающих антигенной и иммуногенной активностью при введении птице, сохраняющих иммуногенные свойства после инактивации, обеспечивая тем самым получение вакцинных препаратов, создающих эффективную защиту домашней птицы против высокопатогенного вируса гриппа А подтипа Н5.The technical problem is to expand the arsenal of current production strains of low pathogenic avian influenza virus type A subtype H5 and have antigenic and immunogenic activity when administered to birds, retaining immunogenic properties after inactivation, thereby ensuring the production of vaccine preparations that create effective protection for poultry against highly pathogenic influenza A virus subtype H5.
Указанная проблема решена путем получения штамма «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа А подтипа Н5, который может использоваться для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н5.This problem was solved by obtaining the Yamal strain of a low-pathogenic influenza A virus of the H5 subtype, which can be used for the manufacture of biological products for the specific prevention of H5 subtype avian influenza.
Вирусный изолят A/wildduck/YaNAO/956-12, послуживший источником для получения штамма «Ямал», был выделен в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2021 г. из проб патологического материала от дикой утки, отобранного на территории Ямало-Ненецкого АО Российской Федерации.The A/wildduck/YaNAO/956-12 virus isolate, which served as the source for obtaining the Yamal strain, was isolated at the Federal State Budgetary Institution ARRIAH in 2021 from samples of pathological material from a wild duck taken on the territory of the Yamalo-Nenets Autonomous Okrug of the Russian Federation.
Для получения штамма «Ямал» вируса гриппа птиц, обладающего оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали метод предельных разведений на СПФ-эмбрионах кур. Из ранее выделенного изолята был получен штамм «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа птиц А подтипа H5N1, имеющий стабильные биотехнологические свойства и пригодный для использования при проведении лабораторных исследований и изготовления диагностических препаратов и препаратов специфической профилактики данного заболевания. Штамм адаптирован к репродукции в 9-11-суточных эмбрионах кур. Вирус способен вызывать гибель эмбрионов кур в течение 48-96 ч инкубации при температуре 37±0,5°С и влажности 60±10%.To obtain the Yamal strain of avian influenza virus, which has optimal biotechnological properties, the method of limiting dilutions on SPF chicken embryos was used. From the previously isolated isolate, the Yamal strain of the low-pathogenic avian influenza A virus of the H5N1 subtype was obtained, which has stable biotechnological properties and is suitable for use in laboratory research and the manufacture of diagnostic preparations and preparations for the specific prevention of this disease. The strain is adapted to reproduction in 9-11 day old chicken embryos. The virus is capable of causing the death of chicken embryos within 48-96 hours of incubation at a temperature of 37±0.5°C and a humidity of 60±10%.
Идентификация и филогенетическое родство штамма «Ямал».Identification and phylogenetic relationship of the Yamal strain.
Подтип H5N1 штамма «Ямал» идентифицирован методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) и нуклеотидного секвенирования, в РТГА (реакция торможения гемагглютинации) и РИНА (реакция ингибиции нейраминидазной активности).The H5N1 subtype of the Yamal strain was identified by polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequencing, in RTHA (hemagglutination inhibition test) and RINA (neuraminidase activity inhibition test).
При проведении филогенетического анализа нуклеотидной последовательности фрагмента гена НА участка 837-1097 н.о. было установлено, что она идентична последовательности вируса гриппа птиц A/wildduck/YaNAO/956-12, а сайт разрезания - RETR - характерен для низкопатогенного вируса гриппа птиц.When conducting a phylogenetic analysis of the nucleotide sequence of the HA gene fragment of the region 837-1097 n. it was found to be identical to the A/wildduck/YaNAO/956-12 avian influenza virus sequence, and the cut site, RETR, was characteristic of the low pathogenic avian influenza virus.
Штамм «Ямал» вируса гриппа птиц типа А подтипа H5N1, депонирован 24 сентября 2021 г. во Всероссийскую государственную коллекцию экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №366 - деп/21-28- ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».The Yamal strain of avian influenza virus type A, subtype H5N1, was deposited on September 24, 2021 in the All-Russian State Collection of Exotic Types of Foot and Mouth Virus and Other Animal Pathogens (GKSM) of FGBI ARRIAH under registration number: No. 366 - dep/21-28- GKSHM FGBU "ARRIAH".
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма «Ямал» вируса гриппа птиц для приготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц А подтипа Н5.The possibility of using the Yamal strain of avian influenza virus for the preparation of biological preparations for the specific prevention of avian influenza A subtype H5 has been experimentally confirmed.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении (фиг.1). На фиг.1 представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма «Ямал» подтипа Н5 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса гриппа птиц подтипа Н5. Дендрограмма основана на сравнении нуклеотидных последовательностей участка гена гемагглютинина.The essence of the invention is illustrated in the graphic image (figure 1). Figure 1 shows a dendrogram reflecting the phylogenetic relationship of the strain "Yamal" subtype H5 with epizootic and vaccine strains of avian influenza subtype H5. The dendrogram is based on a comparison of the nucleotide sequences of the hemagglutinin gene region.
Показано, что исследуемый штамм «Ямал» относится к ветви низкопатогенных вирусов гриппа птиц подтипа Н5.It was shown that the studied strain "Yamal" belongs to the branch of low pathogenic avian influenza viruses of subtype H5.
Сущность изобретения пояснена следующим перечнем последовательностей:The essence of the invention is illustrated by the following sequence listing:
SEQ ID №1: представляет последовательность нуклеотидов фрагмента гена гемагглютинина штамма «Ямал» подтипа H5N1;SEQ ID No. 1: represents the nucleotide sequence of the fragment of the hemagglutinin gene of the strain "Yamal" subtype H5N1;
SEQ ID №2: представляет последовательность аминокислот фрагмента гемагглютинина штамма «Ямал» подтипа H5N1.SEQ ID No. 2: represents the amino acid sequence of the hemagglutinin fragment of the strain "Yamal" subtype H5N1.
Штамм «Ямал» подтипа H5N1 низкопатогенного вируса гриппа птиц характеризуется следующими признаками и свойствами.The Yamal strain of the H5N1 subtype of the low pathogenic avian influenza virus is characterized by the following features and properties.
Морфологическая характеристикаMorphological characteristics
Штамм «Ямал» вируса гриппа птиц относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, подтипу H5N1 и обладает морфологическими признаками, характерными для низкопатогенного вируса гриппа типа А.The Yamal strain of avian influenza virus belongs to the family Orthomyxoviridae, genus Alphainfluenzavirus, species Influenza A virus, subtype H5N1, and has morphological features characteristic of a low pathogenic influenza virus type A.
Вирионы вируса гриппа - оболочечные, плеоморфные. Диаметр сфероподобных частиц около 80-120 нм; нитевидные частицы около 17 нм в диаметре, длиной 250 нм и более. На поверхности вириона находятся шипообразные выступы (до 14 нм), образованные гомотримерами НА. В промежутках между кластерами НА у вирусов типа А размещаются молекулы NA.Influenza virus virions are enveloped, pleomorphic. The diameter of spherical particles is about 80-120 nm; filamentous particles about 17 nm in diameter, 250 nm or more in length. On the surface of the virion, there are spike-like protrusions (up to 14 nm) formed by HA homotrimers. NA molecules are located between HA clusters in type A viruses.
Липидная мембрана окружает петлеобразные филаменты нуклеокапсидов с восемью фрагментами вирусного генома, каждый из которых представлен линейной одноцепочечной антисмысловой РНК.The lipid membrane surrounds loop-like filaments of nucleocapsids with eight fragments of the viral genome, each of which is represented by a linear single-stranded antisense RNA.
Общая длина генома составляет около 13600 нуклеотидов (нт). Наиболее крупный фрагмент (№1) содержит около 2350 н.о.; №2 - чуть менее 2350 н.о.; №3, как правило, - 2250 н.о.; №4 - 1780 н.о.; №5 - 1575 н.о.; №6 - 1420 н.о.; №7 - 1050 н.о.; №8 - 900 н.о.The total length of the genome is about 13,600 nucleotides (nt). The largest fragment (No. 1) contains about 2350 bp; No. 2 - a little less than 2350 n.d.; No. 3, as a rule, - 2250 n.d.; No. 4 - 1780 n.d.; No. 5 - 1575 n.d.; No. 6 - 1420 n.d.; No. 7 - 1050 n.d.; No. 8 - 900 N.O.
На обоих концах каждой геномной цепи РНК содержатсяAt both ends of each RNA genomic strand are
повторяющиеся отрезки, причем повторы 5' -концевого участка (у вирусов типа А они имеют вид 5' -AGUAGAAACAAGG) комплементарны инвертированным повторам, расположенным на 3' -конце. Кроме того, 3' -концевые участки некоторых фрагментов генома содержат консервативные отрезки, типичные для вирусных штаммов, поражающих субъектов определенного биологического вида [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses].repeating segments, and the repeats of the 5'-terminal region (in type A viruses they look like 5'-AGUAGAAACAAGG) are complementary to the inverted repeats located at the 3'-end. In addition, the 3'-terminal regions of some genome fragments contain conservative segments typical of viral strains that infect subjects of a certain biological species [ICTV-International Committee on Taxonomy of Viruses].
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа птиц относится к семейству Orthomyxoviridae, роду Alphainfluenzavirus, виду Influenza A virus, типу А, подтипу H5N1.According to its antigenic properties, the Yamal strain of the low pathogenic avian influenza virus belongs to the family Orthomyxoviridae, genus Alphainfluenzavirus, species Influenza A virus, type A, subtype H5N1.
У переболевшей птицы в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в РТГА. Гемагглютинирующая активность штамма «Ямал» подавляется специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц подтипа H5N1 («IZSVe», Италия), что подтверждает принадлежность штамма «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа птиц к подтипу Н5. Активность сыворотки подтипа Н5 в РГТА составила 8 log2, активность других сывороток была ниже 4 log2 (таблица 1). Нейраминидазная активность штамма подавляется специфической сывороткой к вирусу гриппа птиц (ВГП) подтипа H5N1 («IZSVe», Италия) (таблица 2).In a sick bird, antibodies are formed in the blood serum, which are detected in RTGA. The hemagglutinating activity of the Yamal strain is inhibited by a specific serum for the H5N1 avian influenza virus (IZSVe, Italy), which confirms that the Yamal strain of the low pathogenic avian influenza virus belongs to the H5 subtype. The activity of serum subtype H5 in RGTA was 8 log 2 , the activity of other sera was below 4 log 2 (table 1). The neuraminidase activity of the strain is inhibited by specific serum to the avian influenza virus (AIV) subtype H5N1 (IZSVe, Italy) (table 2).
Согласно результатам серологических исследований штамм «Ямал» отнесен к вирусу гриппа птиц подтипа H5N1.According to the results of serological studies, the Yamal strain was assigned to the H5N1 avian influenza virus.
Биотехнологические свойстваBiotechnological properties
Оптимальными условиями культивирования штамма «Ямал» подтипа H5N1 низкопатогенного вируса гриппа А являются следующие:The optimal cultivation conditions for the Yamal strain of the H5N1 subtype of the low pathogenic influenza A virus are as follows:
- система культивирования - развивающиеся эмбрионы кур в возрасте 9-11 суток;- cultivation system - developing chicken embryos at the age of 9-11 days;
- метод заражения - инокуляция при помощи шприца в аллантоисную полость;- method of infection - inoculation with a syringe into the allantoic cavity;
- продолжительность культивирования вируса составляет 48-96 ч.- the duration of the cultivation of the virus is 48-96 hours.
При культивировании вирус штамма «Ямал» накапливается в титре не менее 8,2 lg ТЦД50/см3 и сохраняет исходные характеристики при пассировании в чувствительных биологических системах в течение не менее 5 пассажей (срок наблюдения).When cultivated, the Yamal strain virus accumulates in a titer of at least 8.2 lg TCD 50 /cm 3 and retains its original characteristics when passaged in sensitive biological systems for at least 5 passages (observation period).
Инактивированный вирус индуцирует антитела, выявляемые методами реакции торможения гемагглютинирующей активности (РТГА) (таблица 4). Так, через 28 суток после однократной иммунизации цыплят инактивированной цельной вакциной из штамма «Ямал» вируса гриппа птиц А подтипа H5N1 в прививном объеме 0,5 см3/гол средний титр антител по группе к НА, обеспечивающим реакцию торможения гемагглютинации, составил 11,2±0,3 log2.The inactivated virus induces antibodies detected by the hemagglutination inhibition test (HITA) (Table 4). So, 28 days after a single immunization of chickens with an inactivated whole vaccine from the Yamal strain of avian influenza A virus subtype H5N1 in an inoculation volume of 0.5 cm 3 / head, the average titer of antibodies in the group to HA, which provides the hemagglutination inhibition reaction, was 11.2 ± 0.3log2 .
Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno- and chemotaxonomic characteristics
Штамм «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа птиц типа А подтипа Н5 является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 250 МД.The Yamal strain of low pathogenic avian influenza virus type A subtype H5 is an RNA-containing virus with a molecular weight of 250 MD.
Геном вируса гриппа представлен однонитевой РНК негативной полярности в виде 8 нитей (сегментов) в комплексе с белком нуклеопротеина (NP).The genome of the influenza virus is represented by single-stranded RNA of negative polarity in the form of 8 strands (segments) in complex with a nucleoprotein (NP) protein.
Вирионы вируса гриппа имеют наружную липопротеиновую оболочку, чаще сферической формы. Диаметр сферических форм около 80-120 нм. Вирусные частицы содержат РНК - 1%, белки - 70%, жиры - 20%, углеводы -до 8%.Influenza virus virions have an outer lipoprotein envelope, often spherical in shape. The diameter of spherical shapes is about 80-120 nm. Virus particles contain RNA - 1%, proteins - 70%, fats - 20%, carbohydrates - up to 8%.
Антигенная вариабельность и таксономическая классификация вируса основана на идентификации двух основных поверхностных белков - гемагглютинина и нейраминидазы.The antigenic variability and taxonomic classification of the virus is based on the identification of two major surface proteins, hemagglutinin and neuraminidase.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «Ямал» низкопатогенного вируса ГП чувствителен к детергентам, формальдегиду, этанолу, миродез базик, хлорамину Б быстро инактивируется при прогревании (56°С), ультрафиолетовом облучении и при рН ниже 5,0.The Yamal strain of the low pathogenic GP virus is sensitive to detergents, formaldehyde, ethanol, mirodez basic, chloramine B and is rapidly inactivated by heating (56°C), ultraviolet irradiation and at pH below 5.0.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.Immunogenic activity - immunogenic as part of an inactivated vaccine.
Реактогенность - реактогенными свойствами в составе инактивированной вакцины не обладает. Иммунизация цыплят в дозе, в два раза превышающей прививную, не вызывает видимых клинических изменений в общем состоянии птицы, а также локальных поражений ткани в месте введения.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties as part of an inactivated vaccine. Immunization of chickens at a dose twice the vaccination dose does not cause visible clinical changes in the general condition of the bird, as well as local tissue lesions at the injection site.
Патогенные свойстваPathogenic properties
Вирулентность - низкая. Вызывает гибель одного из 10 зараженных цыплят в дозе 7,9 lg ЭИД50. Интравенозный индекс патогенности 0,29, что характерно для низкопатогенных штаммов вируса гриппа А.Virulence is low. Causes the death of one in 10 infected chickens at a dose of 7.9 lg EID 50 . The intravenous pathogenicity index is 0.29, which is typical for low pathogenic strains of the influenza A virus.
Контагиозность - контагиозен. Не иммунные цыплята заражаются при совместном содержании с зараженными.Contagious - contagious. Non-immune chickens become infected when kept together with infected ones.
Стабильность фенотипа штамма при пассажах в системе культивирования. Штамм ««Ямал» подтипа H5N1 низкопатогенного вируса гриппа А обладает стабильным фенотипом при культивировании в куриных эмбрионах в течение 5 пассажей.Stability of the strain phenotype during passages in the culture system. The Yamal strain of the H5N1 subtype of the low pathogenic influenza A virus has a stable phenotype when cultivated in chicken embryos for 5 passages.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Стабильность фенотипа и генотипа штамма «Ямал» подтипа H5N1 низкопатогенного вируса гриппа АExample 1. Stability of the phenotype and genotype of the strain "Yamal" subtype H5N1 of low pathogenic influenza A virus
Для исследований использовали исходный посевной материал штамма «Ямал» подтипа H5N1 низкопатогенного вируса гриппа А, пассаж №2 в СПФ-эмбрионах кур, объем фасовки 2 см3 и вирусную суспензию, прошедшую 5 последовательных пассажей от исходного материла штамма.For research, we used the initial inoculum of the Yamal strain of the H5N1 subtype of the low pathogenic influenza A virus, passage No. 2 in SPF chicken embryos, the packaging volume was 2 cm3 , and the viral suspension that had passed 5 successive passages from the initial material of the strain.
Стабильность фенотипа вируса оценивали в сравнительном аспекте по титрам инфекционной и гемагглютинирующей активности вируссодержащих суспензий не пассированного (исходный посевной материал) и пассированного (5 пассажей) в куриных эмбрионах (КЭ). Результаты определения активности вируссодержащего материала не пассированного и пассированного в КЭ материалов представлены в таблице 3.The stability of the virus phenotype was evaluated in a comparative aspect by the titers of infectious and hemagglutinating activity of virus-containing suspensions of non-passaged (initial inoculum) and passaged (5 passages) in chick embryos (CE). The results of determining the activity of the virus-containing material of non-passivated and passivated materials in CE are presented in Table 3.
Показатели инфекционной и гемагглютинирующей активности сравниваемых суспензий были очень близки, и статистически не отличались, при Р>0,05.The indicators of infectious and hemagglutinating activity of the compared suspensions were very similar and did not differ statistically at P>0.05.
Стабильность генотипа вируса оценивали, сравнивая нуклеотидные последовательности гена НА (837-1097 н.о.) в исходном посевной материале и пассированном (5 раз) в куриных эмбрионах материалах.The stability of the virus genotype was assessed by comparing the nucleotide sequences of the HA gene (837–1097 nt) in the original inoculum and passaged (5 times) in chick embryos.
Нуклеотидная (соответственно и аминокислотная), последовательность фрагмента гена НА, выявленная в составе восстановленных суспензий не пассированного и пассированного в КЭ материалов была одинаковой.The nucleotide (respectively, amino acid) sequence of the HA gene fragment revealed in the composition of the reconstituted suspensions of non-passaged and CE-passaged materials was the same.
Таким образом, штамм обладает фенотипической стабильностью при проведении 5 последовательных пассажей в СПФ-эмбрионах кур, сравниваемые материалы имели одинаковую генетическую последовательность фрагмента гена НА, которая была идентифицирована как штамм «Ямал» подтипа H5N1 низкопатогенного вируса гриппа А. Пример 2. Определение патогенностиThus, the strain has phenotypic stability during 5 consecutive passages in SPF chicken embryos, the compared materials had the same genetic sequence of the HA gene fragment, which was identified as the Yamal strain of the H5N1 subtype of the low pathogenic influenza A virus. Example 2. Determination of pathogenicity
Патогенность штамма «Ямал» вируса гриппа А подтипа H5N1 определяли согласно требования МЭБ, двумя способами.The pathogenicity of the Yamal strain of the influenza A virus subtype H5N1 was determined according to the OIE requirements using two methods.
Первый способ. Восемь восприимчивых цыплят в возрасте 30 дн. заражали внутривенно вирусным материалом с инфекционной активностью 9,6 lg ЭИД50/см3 из разведения 1/10 в объеме 0,2 см3. Через 6 дн. после заражения пал 1 цыпленок с признаками нарушения кровеносной системы (цианоз гребня, лап) и расстройства желудочно-кишечного тракта (диарея). Остальные цыплят не болели и через 10 дн. (период наблюдения) после заражения были живы.First way. Eight susceptible chicks at 30 days of age. infected intravenously with viral material with an infectious activity of 9.6 lg EID 50 /cm 3 from a dilution of 1/10 in a volume of 0.2 cm 3 . After 6 days after infection, 1 chicken died with signs of a violation of the circulatory system (cyanosis of the comb, paws) and disorders of the gastrointestinal tract (diarrhea). The rest of the chickens did not get sick and after 10 days. (observation period) after infection were alive.
Второй способ. Заключался в определении интравенного индекса патогенности (ИВИП) для 42 дневных восприимчивых цыплят.Результаты определения индекса патогенности представлены в таблице 5.The second way. It consisted in determining the intravenous pathogenicity index (IVIP) for 42 day old susceptible chickens. The results of determining the pathogenicity index are presented in table 5.
Было установлено, что ИВИП составляет 0,29, что свидетельствует о низкой патогенности исследуемого штамма.It was found that IVIP is 0.29, which indicates a low pathogenicity of the studied strain.
Таким образом, штамм «Ямал» вируса гриппа А подтипа H5N1 был охарактеризован как низкопатогенный.Thus, the Yamal strain of influenza A virus subtype H5N1 was characterized as low pathogenic.
Пример 3. Определение отсутствия контаминации чужеродными вирусами, бактериями и грибамиExample 3. Determination of the absence of contamination by foreign viruses, bacteria and fungi
Для приготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц подтипа Н5 необходимо использовать штамм, свободный от контаминации чужеродными вирусами, бактериями и грибами. Подтверждение отсутствия контаминации бактериальной и грибной микрофлорой проводили в соответствии с ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности» [17]. Отсутствие контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том 1, с. 1201-1222 [18].For the preparation of biological preparations for the specific prevention of H5 subtype avian influenza, it is necessary to use a strain free from contamination by foreign viruses, bacteria and fungi. Confirmation of the absence of contamination by bacterial and fungal microflora was carried out in accordance with GOST 28085-13 “Biological medicinal products for veterinary use. Method of bacteriological control of sterility” [17]. The absence of contamination with mycoplasmas was carried out in accordance with the requirements of the Global Fund XIV, volume 1, p. 1201-1222 [18].
В результате исследований установлено, что штамм «Ямал» вируса гриппа птиц А не контаминирован бактериями, грибами и микоплазмами. В результате испытаний с применением методов полимеразной цепной реакции (ТП TP) и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) было установлено, что штамм «Ямал» вируса гриппа птиц не контаминирован вирусами ньюкаслской болезни, инфекционного бронхита кур, инфекционного ларинготрахеита птиц, инфекционной бурсальной болезни, реовирусом птиц, синдрома снижения яйценоскости-76, инфекционного энцефаломиелита птиц, анемии цыплят, оспы птиц, лейкоза птиц подтипа J, болезни Марека и метапневмовирусной инфекции.As a result of the research, it was found that the Yamal strain of avian influenza A virus is not contaminated with bacteria, fungi and mycoplasmas. As a result of tests using polymerase chain reaction (TP TP) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), it was found that the Yamal strain of avian influenza virus is not contaminated with viruses of Newcastle disease, infectious bronchitis of chickens, infectious avian laryngotracheitis, infectious bursal disease, avian reovirus, egg drop syndrome-76, infectious avian encephalomyelitis, chick anemia, fowl pox, subtype J avian leukemia, Marek's disease, and metapneumovirus infection.
Пример 4. Получение антигена Н5 на основе штамма «Ямал» вируса гриппа птиц А подтипа H5N1Example 4. Obtaining the H5 antigen based on the Yamal strain of avian influenza A virus subtype H5N1
Для приготовления антигена ампулы с лиофилизированным штаммом «Ямал» вируса гриппа птиц А подтипа H5N1 вскрывали, и разводили содержимое каждой ампулы в 2 см3 забуференного физиологического раствора. Восстановленный таким образом материал разводили стерильным забуференным физраствором (рН 7,2-7,4) до рабочей концентрации 5,0-5,3 lg ЭИД50/см3, добавляли антибиотики из расчета 400 мкг стрептомицина сульфата и 400 ЕД бензилпенициллина натриевой соли на 1 см3 восстановленной вируссодержащей суспензии. Приготовленный таким образом вируссодержащий материал использовали для заражения куриных эмбрионов. Контроль стерильности матрикса осуществляли высевом на бактериальные среды.To prepare the antigen, ampoules with a lyophilized Yamal strain of avian influenza A virus subtype H5N1 were opened, and the contents of each ampule were diluted in 2 cm 3 of buffered saline. The thus recovered material was diluted with sterile buffered saline (pH 7.2-7.4) to a working concentration of 5.0-5.3 lg EID 50 / cm 1 cm 3 of the recovered virus-containing suspension. The thus prepared virus-containing material was used to infect chicken embryos. The sterility of the matrix was controlled by inoculation on bacterial media.
После процедуры подготовки рабочего разведения вируссодержащего материала, отобранные эмбрионы, размещенные в пластиковых решетках с ячейками воздушной камерой вверх обрабатывали 1%-ным раствором йода. В подготовленных эмбрионах стерильным стилетом прокалывали отверстия в области воздушной камеры для инокуляции вируса.After the procedure for preparing the working dilution of the virus-containing material, the selected embryos, placed in plastic grids with cells with the air chamber up, were treated with a 1% iodine solution. In the prepared embryos, holes were pierced in the area of the air chamber with a sterile stylet for virus inoculation.
Рабочее разведение вируссодержащего материала вносили шприцом-автоматом (типа «Socorex») с иглой диаметром 0,5 мм и длиной 15 мм в аллантоисную полость в объеме 0,1 см3. После заражения отверстие в скорлупе заклеивали стерильной воск-парафиновой смесью.The working dilution of the virus-containing material was introduced with a syringe-automatic device (Socorex type) with a needle 0.5 mm in diameter and 15 mm long into the allantoic cavity in a volume of 0.1 cm 3 . After infection, the hole in the shell was sealed with a sterile wax-paraffin mixture.
Зараженные куриные эмбрионы вируссодержащим материалом вируса гриппа птиц штамм «Ямал» подтипа H5N1 инкубировали 96 ч при температуре (37,5±0,5)°С и относительной влажности 50-70%. Овоскопию зараженных эмбрионов проводили ежедневно. Сбор вируссодержащего материала проводили от куриных эмбрионов через 48-96 ч инкубации. По окончании инкубации эмбрионы помещали в холодильную камеру с температурой 2-8°С на 12-24 ч с целью исключения во время сбора материала минимального попадания эритроцитов в аллантоисную жидкость.Infected chicken embryos with virus-containing material of the avian influenza virus strain "Yamal" subtype H5N1 were incubated for 96 hours at a temperature of (37.5±0.5)°C and a relative humidity of 50-70%. Ovoscopy of infected embryos was performed daily. The collection of virus-containing material was carried out from chicken embryos after 48-96 hours of incubation. At the end of the incubation, the embryos were placed in a refrigerator with a temperature of 2-8°C for 12-24 hours in order to exclude minimal ingress of erythrocytes into the allantoic fluid during the collection of the material.
Перед вскрытием эмбрионы выдерживали 2-3 ч при комнатной температуре до испарения конденсата (влаги) на скорлупе.Before opening, the embryos were kept for 2-3 hours at room temperature until the condensate (moisture) on the shell evaporated.
Скорлупу над воздушной камерой дезинфицировали фламбированием и срезали глазными остроконечными стерильными ножницами по границе воздушной камеры. Затем, соблюдая правила асептики, стерильным пинцетом вскрывали подскорлупную и подлежащую хориоаллантоисную оболочки. Собирали экстраэмбриональную жидкость (ЭЭЖ) эмбрионов в стерильные флаконы вместимостью 200-500 см3. При сборе экстраэмбриональной жидкости следует избегать попадания желтка и белка эмбриона. Собранный материал центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10-15 мин с целью осаждения эритроцитов. Из флакона отбирали пробу в количестве 1,0 см3 для определения титра гемагглютинина инфекционной активности вируса гриппа птиц. Заполненные бутыли с вируссодержащим материалом перекрывали стерильными резиновыми пробками и передавали на инактивацию.The shell above the air chamber was disinfected by flambéing and cut off with eye sharp sterile scissors along the border of the air chamber. Then, observing the rules of asepsis, sterile tweezers opened the subshell and underlying chorioallantoic membranes. Collected extraembryonic fluid (EEZh) embryos in sterile vials with a capacity of 200-500 cm 3 . When collecting extraembryonic fluid, the yolk and albumen of the embryo should be avoided. The collected material was centrifuged at 1000 rpm for 10-15 min in order to sediment erythrocytes. A sample of 1.0 cm 3 was taken from the vial to determine the hemagglutinin titer of the infectious activity of the avian influenza virus. Filled bottles with virus-containing material were closed with sterile rubber stoppers and transferred for inactivation.
Отходы эмбрионов собирали в пакеты, обеззараживали и передавали для уничтожения путем сжигания в кремационной печи.Embryo waste was collected in bags, decontaminated and transferred for destruction by burning in a cremation oven.
Инактивацию вируссодержащего материала проводили рабочим раствором димера аминоэтилэтиленимина (АЭЭИ) в бутылях, с концентрацией инактиванта - 0,25%, рН инактиванта 8,2 - 8,3, при температуре (25,5±0,5)°С. Время инактивации составляло 36 ч.The inactivation of the virus-containing material was carried out with a working solution of aminoethylethyleneimine dimer (AEEI) in bottles, with an inactivant concentration of 0.25%, an inactivant pH of 8.2-8.3, at a temperature of (25.5±0.5)°C. The inactivation time was 36 h.
Предварительно готовили навески тимеросала (мертиолята, тиомерсаля) из расчета 0,085 г на 1 л инактивируемого вируссодержащего материала (с учетом димера АЭЭИ).Pre-prepared weighed portions of thimerosal (merthiolate, thiomersal) at the rate of 0.085 g per 1 liter of inactivated virus-containing material (taking into account the AEEI dimer).
В стерильном боксе приготовленные навески АЭЭИ и тимеросала вносили в бутыли с вируссодержащим материалом, емкости перекрывали стерильными пробками и тщательно перемешивали с периодичностью 1 ч. По окончании процесса инактивации из бутыли отбирали пробы на стерильность и контроль полноты инактивации.In a sterile box, prepared weighed portions of AEEI and thimerosal were added to bottles with virus-containing material, the containers were blocked with sterile stoppers and thoroughly mixed at intervals of 1 h.
Вируссодержащий материал с инфекционной активностью не ниже 9,6-9,8 lg ЭИД50/см3 и гемагглютинирующей активностью 9,5-10,0 log2 ТЦД50/см3 хранили при температуре не выше минус 2-8°С и использовали для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.Virus-containing material with an infectious activity of at least 9.6-9.8 lg EID 50 /cm 3 and a hemagglutination activity of 9.5-10.0 log 2 TCD 50 /cm 3 was stored at a temperature not higher than minus 2-8°C and used for the manufacture of vaccine and diagnostic products.
Пример 5. Определение инфекционной и гемагглютинирующей активности антигена вируса гриппа птиц А штамма «Ямал» подтипа H5N1.Example 5. Determination of the infectious and hemagglutinating activity of the antigen of the avian influenza A virus strain "Yamal" subtype H5N1.
Оценку инфекционной активности материала проводили на развивающихся СПФ-эмбрионах кур. Лиофилизированный вирусный посевной материал в количестве трех флаконов ресуспендировали: в каждый флакон добавляли физиологический раствор до первоначального объема материала перед лиофилизацией, объединяли содержимое флаконов, получая среднюю пробу.The infectious activity of the material was assessed on developing SPF chicken embryos. Freeze-dried viral inoculum in the amount of three vials was resuspended: physiological saline was added to each vial to the initial volume of the material before lyophilization, the contents of the vials were combined, obtaining an average sample.
Готовили последовательные десятикратные разведения средней пробы вируссодержащего материала на физиологическом растворе до 10-9 включительно.Sequential tenfold dilutions of the average sample of virus-containing material were prepared in physiological saline up to 10 -9 inclusive.
Проводили заражение в аллантоисную полость 4 эмбрионам каждого разведения (с 10-6 до 10-9) вируссодержащего материала по 0,1 см3.Infection was carried out in the allantoic cavity of 4 embryos of each dilution (from 10 -6 to 10 -9 ) of virus-containing material by 0.1 cm 3 .
Инфицированные эмбрионы инкубировали в течение 96 ч при температуре (37,5±0,5)°С и относительной влажности 50-70%. Овоскопию зараженных эмбрионов проводили ежедневно.Infected embryos were incubated for 96 hours at a temperature of (37.5±0.5)°C and a relative humidity of 50-70%. Ovoscopy of infected embryos was performed daily.
Гибель эмбрионов в течение первых 24 ч считали неспецифической. Через 96 ч инкубации все эмбрионы охлаждали при температуре 4-8°С в течение 12-18 ч и вскрывали.The death of embryos during the first 24 hours was considered nonspecific. After 96 hours of incubation, all embryos were cooled at 4-8°C for 12-18 hours and opened.
Индивидуально от каждого эмбриона отбирали аллантоисную жидкость и исследовали в реакции гемагглютинации (РГА) микрометодом для выявления гемагглютинирующей активности вируса по ниже описанной методике.Allantoic fluid was taken individually from each embryo and examined in the hemagglutination test (HGA) by a micromethod to detect the hemagglutination activity of the virus according to the method described below.
Для постановки РГА готовили двукратные разведения антигена от 1:2 до 1:4096. Для этого во все лунки планшета вносили физиологический раствор в объеме 0,05 см3. В первую лунку добавляли подготовленные пробы ЭЭЖ в объеме 0,05 см3, трехкратно пипетировали и переносили 0,05 см3 во вторую лунку и т.д. Из последней лунки после трехкратного пипетирования 0,05 см3 испытуемого материала удаляли в 2%-ый раствор едкого натрия или другой подобный дезинфектант.Two-fold dilutions of the antigen from 1:2 to 1:4096 were prepared for setting the RGA. To do this, physiological saline in a volume of 0.05 cm 3 was added to all wells of the tablet. Prepared EEA samples in a volume of 0.05 cm3 were added to the first well, pipetted three times, and 0.05 cm3 was transferred to the second well, and so on. From the last well, after pipetting three times, 0.05 cm 3 of the test material was removed into a 2% sodium hydroxide solution or other similar disinfectant.
Затем во все лунки вносили 1%-ную суспензию эритроцитов в объеме 0,05 см3.Then all the wells were made 1% suspension of erythrocytes in a volume of 0.05 cm 3 .
Планшет аккуратно встряхивали и оставляли при температуре 18-22°С или 4-8°С на 40-60 минут.The tablet was gently shaken and left at a temperature of 18-22°C or 4-8°C for 40-60 minutes.
Для контроля эритроцитов на отсутствие спонтанной агглютинации и определения времени учета реакции в две-три лунки планшета с двойным объемом физраствора (0,1 см3) добавляли 0,05 см3 1%-ной суспензии эритроцитов.To control erythrocytes for the absence of spontaneous agglutination and determine the reaction time, 0.05 cm 3 of a 1% suspension of erythrocytes was added to two or three wells of a plate with a double volume of saline (0.1 cm 3 ).
Реакцию учитывали при полном оседании эритроцитов в виде «пуговки» в отрицательных контрольных лунках.The reaction was taken into account in the complete sedimentation of erythrocytes in the form of a "button" in the negative control wells.
РГА оценивали положительно при оседании эритроцитов в виде «зонтика», отрицательный результат - в виде «пуговки» при отсутствии спонтанной агглютинации в контроле.RHA was evaluated positively in case of erythrocyte sedimentation in the form of an "umbrella", a negative result - in the form of a "button" in the absence of spontaneous agglutination in the control.
Инфекционная активность вирусного материала штамма «Ямал» составила 8,2 lg ЭИД50/МЛ.The infectious activity of the viral material of the Yamal strain was 8.2 lg EID 50 /ML.
Оценку гемагглютинирующей активности вируса проводили в реакции гемагглютинации (РГА) микрометодом. Для проведения испытания лиофилизированный вирусный посевной материал в количестве трех флаконов ресуспендировали: в каждый флакон добавляли физиологический раствор до первоначального объема материала перед лиофилизацией, объединяли содержимое флаконов, получая среднюю пробу.The evaluation of the hemagglutinating activity of the virus was carried out in the hemagglutination test (HHA) by the micromethod. For the test, lyophilized viral inoculum in the amount of three vials was resuspended: physiological saline was added to each vial to the initial volume of the material before lyophilization, the contents of the vials were combined, obtaining an average sample.
Методика постановки РГА описана выше.The method of setting the RGA is described above.
Гемагглютинирующий титр посевного коллекционного материала штамма «Ямал» вируса гриппа А составил 1:1024 (10 log2).The hemagglutination titer of the inoculum collection material of the Yamal strain of influenza A virus was 1:1024 (10 log 2 ).
Пример 6. Получение экспериментальной модели вакцины, на основе антигена штамма «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа А подтипа H5N1Example 6. Obtaining an experimental vaccine model based on the antigen of the Yamal strain of low pathogenic influenza A virus subtype H5N1
В качестве вируссодержащего материала (антигена) при изготовлении вакцины против гриппа птиц Н5 используют экстраэмбриональную жидкость инфицированных эмбрионов кур. При этом к вируссодержащему материалу предъявляют следующие требования: инфекционный титр вируса должен составлять не ниже 7,0 lg ЭИД50/см3, гемагглютинирующая активность должна быть не ниже 1:128. Антиген приготовленный по примеру 4 соответствует данным требованиям.The extra-embryonic fluid of infected chicken embryos is used as a virus-containing material (antigen) in the manufacture of the H5 avian influenza vaccine. At the same time, the following requirements are imposed on the virus-containing material: the infectious titer of the virus must be at least 7.0 lg EID 50 /cm 3 , the hemagglutination activity must be at least 1:128. The antigen prepared according to example 4 meets these requirements.
Антиген штамма «Ямал» низкопатогенного вируса гриппа А подтипа H5N1, используемый для составления вакцины имел следующие количественные характеристики: 9,6 lg ЭИД50 инфекционная активность и гемагглютинирующая активность 1:1024.Antigen strain "Yamal" low pathogenic influenza A virus subtype H5N1 used to compile the vaccine had the following quantitative characteristics: 9.6 lg EID 50 infectious activity and hemagglutination activity 1:1024.
Вакцину изготавливали из экстраэмбриональной жидкости эмбрионов кур, инфицированных низкопатогенным вирусом гриппа А подтипа H5N1 штамм «Ямал», инактивированной димером аминоэтилэтиленимина, с добавлением масляного адъюванта Montanide ISA 70 VG в соотношении 30÷70. Инфицированную экстраэмбриональную жидкость эмбрионов кур -антиген пригодный для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа А готовили как описано в примере 4.The vaccine was prepared from the extraembryonic fluid of chicken embryos infected with low-pathogenic influenza A virus subtype H5N1 strain Yamal, inactivated with aminoethylethyleneimine dimer, with the addition of Montanide ISA 70 VG oil adjuvant in a ratio of 30÷70. The infected extraembryonic fluid of chicken embryos - an antigen suitable for the manufacture of biological products for the specific prevention of influenza A was prepared as described in example 4.
Процедура получения готовой формы вакцины состояла в следующем: антиген смешивали с масляным адъювантом в соотношении 30÷70 (% по весу) и эмульгировали на высокоскоростном лабораторном смесителе Silverson (Англия) при скорости 6000 об/мин в течение 5 мин.The procedure for obtaining the finished form of the vaccine was as follows: the antigen was mixed with an oil adjuvant in a ratio of 30–70 (% by weight) and emulsified on a Silverson high-speed laboratory mixer (England) at a speed of 6000 rpm for 5 min.
Пример 7. Протективная активность инактивированной вакцины из антигена штамма «Ямал» низкопатогенного гриппа птиц подтипа Н5 в отношении высокопатогенного гриппа птиц подтипа H5N1.Example 7. Protective activity of the inactivated vaccine from the antigen of the Yamal strain of low pathogenic avian influenza subtype H5 against highly pathogenic avian influenza subtype H5N1.
В качестве исследуемого лекарственного средства испытывали инактивированную вакцину против гриппа птиц Н5. Были приготовлены 3 экспериментальные модели вакцины с разной концентрацией антигена вируса низкопатогенного гриппа птиц А подтипа H5N1 штамма «Ямал», содержащие цельную, 1/25, 1/50 дозы. Приготовленные антигены были эмульгированы в масляном адъюванте Montanide ISA 70 VG в соотношении 30÷70 (по весу) посредством перекачки 25 раз через иглу 21G. В итоге были получены 3 эмульсии со следующими характеристиками: однородные белого цвета, стерильные, стабильные (высота верхней прозрачной фракции не более 10 мм), вязкость в пределах 40-50 мм2/с, антиген полностью инактивирован.An inactivated H5 avian influenza vaccine was tested as an investigational drug. 3 experimental models of the vaccine were prepared with different concentrations of antigen of low pathogenic avian influenza A virus subtype H5N1 strain "Yamal", containing whole, 1/25, 1/50 doses. The prepared antigens were emulsified in oil adjuvant Montanide ISA 70 VG at a ratio of 30÷70 (by weight) by pumping 25 times through a 21G needle. As a result, 3 emulsions were obtained with the following characteristics: homogeneous white, sterile, stable (the height of the upper transparent fraction is not more than 10 mm), viscosity is in the range of 40-50 mm 2 /s, the antigen is completely inactivated.
В эксперименте были использованы цыплята яичного направления продуктивности в возрасте 21-28 дн. из благополучного по острым инфекционным болезням птиц хозяйства в количестве 70 гол.In the experiment, chickens of the egg direction of productivity at the age of 21-28 days were used. from a farm that is safe for acute infectious diseases of birds in the amount of 70 goals.
Для контроля иммуногенности использовали иммунологический метод - контрольное заражение вакцинированных животных.To control the immunogenicity, an immunological method was used - control infection of vaccinated animals.
Цыплят разделили на 4 опытные группы методом случайного отбора, при это было сформировано 3 группы по 20 гол. в каждой и одна группа (контрольная) в количестве 10 гол. Цыплят 3-ех опытных групп прививали экспериментальными вакцинами в объеме 0,5 мл внутримышечно, цыплята контрольной группы оставались не привиты. Через 21 дн. после вакцинации цыплят опытных группы заражали вирусом высокопатогенного гриппа птиц штамма A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 в дозе 106 ЭИД50. Срок наблюдения за цыплятами составил 14 суток.Chickens were divided into 4 experimental groups by random selection, while 3 groups of 20 goals were formed. in each and one group (control) in the amount of 10 goal. Chickens of 3 experimental groups were vaccinated with experimental vaccines in a volume of 0.5 ml intramuscularly, chickens of the control group remained unvaccinated. After 21 days after vaccination, the chickens of the experimental group were infected with highly pathogenic avian influenza virus strain A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1 at a dose of 10 6 EID 50 . The observation period for chickens was 14 days.
Иммуногенность вакцины оценивали по результатам контрольного заражения с учетом количества павших и живых цыплят в группах, после чего стандартным статистическим методом подсчитывали 50% протективную дозу (ПД5о).The immunogenicity of the vaccine was assessed by the results of the control infection, taking into account the number of dead and live chickens in the groups, after which the 50% protective dose (PD 5 o) was calculated by the standard statistical method.
В таблице 6 представлены результаты клинического наблюдения за цыплятами после заражения в течение 14 суток. Из данных таблицы 6 видно, что только в группе цыплят, иммунизированных вакциной из цельного антигена все цыплята остались живы, при этом не наблюдалось признаков болезни. В группах, цыплят, иммунизированных вакцинами с разведением антигена наблюдали гибель цыплят в количестве 14 и 15 голов, соответственно. В дальнейшем на основании фактических данных по результатам контрольного заражения провели статистическую обработку результатов методом прямолинейной регрессии. Зависимость Y (защита от заражения) от X (степень разведения антигена) имеет видTable 6 presents the results of clinical observation of chickens after infection for 14 days. From the data in Table 6 it can be seen that only in the group of chickens immunized with the vaccine from the whole antigen, all the chickens remained alive, while no signs of the disease were observed. In groups of chickens immunized with antigen dilution vaccines, the death of chickens was observed in the amount of 14 and 15 heads, respectively. Subsequently, based on the actual data on the results of control infection, statistical processing of the results was carried out using the straight-line regression method. The dependence of Y (protection from infection) on X (degree of dilution of the antigen) has the form
Y = (-1,528)X + 1,961,Y = (-1.528)X + 1.961,
на этом основании XPD50=1,961/1,528=1,283, т.е. для получения концентрации соответствующей одной PD50 в заданном объеме цельный материал необходимо развести в 19,20 раза (в цельном материале содержится 19,20 PD50).on this basis, X PD50 = 1.961 / 1.528 = 1.283, i.e. to obtain a concentration corresponding to one PD 50 in a given volume, the whole material must be diluted 19.20 times (the whole material contains 19.20 PD 50 ).
Таким образом, протективная активность экспериментальной вакцины против гриппа птиц подтипа Н5, изготовленной на основе низкопатогенного гриппа птиц вируса Н5 составила 19,2 ПД50 в отношении заражения высокопатогенным вирусом гриппа А шт. A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1.Thus, the protective activity of the experimental vaccine against avian influenza of the H5 subtype, made on the basis of the low pathogenic avian influenza of the H5 virus, was 19.2 PD50 against infection with the highly pathogenic influenza A virus pcs. A/chicken/Primorsky/85/08 H5N1.
Пример 8. Иммуногенная активность инактивированной вакцины из антигена штамма «Ямал» низкопатогенного гриппа птиц А подтипа Н5 в отношении высокопатогенного гриппа птиц подтипа H5N8Example 8. Immunogenic activity of the inactivated vaccine from the antigen of the Yamal strain of low pathogenic avian influenza A subtype H5 against highly pathogenic avian influenza subtype H5N8
В эксперименте использовали цыплят яичного направления продуктивности в возрасте 21-28 суток из благополучного по острым инфекционным болезням птиц хозяйства в количестве 40 гол.In the experiment, chickens of the egg direction of productivity were used at the age of 21-28 days from a farm safe for acute infectious diseases of birds in the amount of 40 heads.
Были приготовлены 3 образца экспериментальной модели вакцин, приготовленной по примеру 6, но с разной концентрацией антигена, содержащие 1/25, 1/50 и 1/100 дозы.Were prepared 3 samples of the experimental model of vaccines, prepared according to example 6, but with different concentrations of antigen, containing 1/25, 1/50 and 1/100 of the dose.
Цыплят разделили на 4 опытных групп методом случайного отбора по 10 гол. в каждой. Цыплята 3-х опытных групп были привиты экспериментальными вакцинами в объеме 0,5 см3 внутримышечно, цыплята контрольной группы остались не привиты. Через 21 сутки после вакцинации цыплятам опытных групп внутримышечно ввели вирус высокопатогенного гриппа птиц штамма A/duck/KChR/1590-20/20 подтипа H5N8 в дозе не менее 6,7 lg ЭИД50/0,5 см3. Срок наблюдения за цыплятами составил 8 дней.Chickens were divided into 4 experimental groups by random selection of 10 heads. in each. Chickens of 3 experimental groups were vaccinated with experimental vaccines in a volume of 0.5 cm 3 intramuscularly, chickens of the control group were not vaccinated. 21 days after vaccination, the chickens of the experimental groups were intramuscularly injected with highly pathogenic avian influenza virus strain A/duck/KChR/1590-20/20 subtype H5N8 at a dose of at least 6.7 lg EID 50 /0.5 cm 3 . The observation period for chickens was 8 days.
Иммуногенность вакцины оценивали в остром опыте, методом контрольного заражения по ПД50 (50% протективная доза), которую подсчитывали стандартным статистическим методом. Учитывали количество павших и живых цыплят в группах, после чего подсчитывали 50% протективную дозу (ПД50) с использованием формулы Кербера.The immunogenicity of the vaccine was evaluated in an acute experiment, by the challenge method according to PD50 (50% protective dose), which was calculated by a standard statistical method. The number of dead and live chickens in the groups was taken into account, after which the 50% protective dose (PD50) was calculated using the Kerber formula.
где:
В таблице 7 представлены дынные об устойчивости цыплят, привитых вакциной, из штамма «Ямал» гриппа птиц А подтипа H5N1 к контрольному заражению высокопатогенным штаммом A7duck/KChR/l 590-20/20 вируса гриппа птиц подтипа H5N8.Table 7 presents data on the resistance of chickens vaccinated with the vaccine from the Yamal strain of avian influenza A subtype H5N1 to control infection with a highly pathogenic strain A7duck/KChR/l 590-20/20 of avian influenza virus subtype H5N8.
Расчет ПД50 вакцины, из штамма «Ямал» гриппа птиц А подтипа H5N1 представлен уравнением:Calculation of the PD50 of the vaccine from the Yamal strain of avian influenza A subtype H5N1 is represented by the equation:
Из данных представленных в таблице 7 видно, что цыплята привитые вакциной, приготовленной на основе штамма «Ямал» вируса гриппа птиц А подтипа H5N1, обладали высокой устойчивостью к заражению высокопатогенным вирусом гриппа А подтипа H5N8. С использованием статистических методов было установлено, что ПД50 данной вакцины составляет 79 усл.ед.From the data presented in Table 7, it can be seen that chickens vaccinated with a vaccine prepared on the basis of the Yamal strain of avian influenza A virus subtype H5N1 were highly resistant to infection with highly pathogenic influenza A virus subtype H5N8. Using statistical methods, it was found that the PD50 of this vaccine is 79 conventional units.
Таким образом, показатель иммуногенности вакцины, изготовленной из штамма «Ямал» вируса гриппа птиц А подтипа H5N1 выше минимального (79), равного 50 ПД50 в соответствии с требованиями МЭБ.Thus, the immunogenicity index of the vaccine made from the Yamal strain of avian influenza A virus subtype H5N1 is higher than the minimum (79) equal to 50 PD50 in accordance with the OIE requirements.
В результате анализа подтвердили эффективность изготовленного вакцинного препарата из штамма «Ямал» вируса гриппа птиц А подтипа H5N1 и возможность применения данного штамма для специфической профилактики птиц от данного заболевания.As a result of the analysis, the effectiveness of the vaccine preparation made from the Yamal strain of avian influenza A virus subtype H5N1 and the possibility of using this strain for the specific prevention of birds from this disease were confirmed.
Таким образом, заявляемый штамм «Ямал» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа H5N1 необходим для создания биопрепаратов, используемых для специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5.Thus, the claimed strain "Yamal" of the avian influenza virus of the genus Alphainfluenzavirus of the species Influenza A virus subtype H5N1 is necessary for the creation of biological products used for the specific prevention of avian influenza type A subtype H5.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Штамм «Ямал»» вируса гриппа птиц рода Alphainfluenzavirus вида Influenza A virus подтипа H5N1 для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц типа А подтипа Н5»:Sources of information taken into account when compiling the description of the invention for the application for the issuance of a patent of the Russian Federation for the invention "Strain "Yamal"" of the avian influenza virus of the genus Alphainfluenzavirus of the species Influenza A virus subtype H5N1 for the manufacture of biological products for the specific prevention of avian influenza type A subtype H5 ":
1. Ортомиксовирусы. Руководство по вирусологии. / Каверин Н.В., Львов Д.К., Щелканов М.Ю. - М.: МИА, 2013, С.307 - 313.1. Orthomyxoviruses. Guide to Virology. / Kaverin N.V., Lvov D.K., Shchelkanov M.Yu. - M.: MIA, 2013, S.307 - 313.
2. Анализ маркерных замен изолята вируса гриппа 132 A/chicken/Astrakhan/2171-1/2020 H5N8, выделенного на территории Астраханской области / Н. Г. Зиняков, А. В. Андриясов, Е. В. Овчинникова [и др.] // Ветеринария сегодня. - 2021. - №2(37). - С.132-137. - DOI 10.29326/2304-196Х-2021 -2-37-132-137.2. Zinyakov N. G., Andriyasov A. V., Ovchinnikova E. V. [and others] // Veterinary medicine today. - 2021. - No. 2 (37). - P.132-137. - DOI 10.29326/2304-196Х-2021-2-37-132-137.
3. Evolutionary dynamics of Н5 highly pathogenic avian influenza viruses (clade 2.3.4.4B) circulating in Bulgaria in 2019-2021/Zecchin B, Goujgoulova G, Monne I, Salviato A, Schivo A,Slavcheva I, et al. // Viruses. 2021; 13:2086.3. Evolutionary dynamics of H5 highly pathogenic avian influenza viruses (clade 2.3.4.4B) circulating in Bulgaria in 2019-2021/Zecchin B, Goujgoulova G, Monne I, Salviato A, Schivo A, Slavcheva I, et al. // Viruses. 2021; 13:2086.
4. Antigenic and genetic characteristics of zoonotic influenza A viruses and development of candidate vaccine viruses for pandemic preparedness. -URL:https://www.who.int/influenza/vaccines/viras/202103_zoonotic_vaccinevirus update.pdf (дата обращения 11.03.21).4. Antigenic and genetic characteristics of zoonotic influenza A viruses and development of candidate vaccine viruses for pandemic preparedness. -URL: https://www.who.int/influenza/vaccines/viras/202103_zoonotic_vaccinevirus update.pdf (accessed 03/11/21).
5. Генетический анализ нуклеотидных последовательностей гена нейраминидазы изолятов вируса высокопатогенного гриппа птиц A/H5N8, выделенных на территории Российской Федерации в 2020 году / П. Б. Акшалова, Н. Г. Зиняков, А. В. Андриясов [и др.] // Ветеринария сегодня. -2021. - №4(39). - С.301-307. - DOI 10.29326/2304-196Х-2021-10-4-301-307.5. Genetic analysis of the nucleotide sequences of the neuraminidase gene of isolates of the highly pathogenic avian influenza A/H5N8 virus isolated in the Russian Federation in 2020 / P. B. Akshalova, N. G. Zinyakov, A. V. Andriyasov [et al.] // Veterinary today. -2021. - No. 4 (39). - P.301-307. - DOI 10.29326/2304-196Х-2021-10-4-301-307.
6. Н5 low pathogenic avian influenza viruses maintained in wild birds in China. / Tian J, Li M, Bai X, Li Y, Wang X, Wang F, Shi J, Zeng X, Tian G, Li Y. Vet Microbiol. 2021 Dec;263:109268. doi: 10.1016/j.vetmic.2021.109268. Epub 2021 Oct 29. PMID: 34781191.6. H5 low pathogenic avian influenza viruses maintained in wild birds in China. / Tian J, Li M, Bai X, Li Y, Wang X, Wang F, Shi J, Zeng X, Tian G, Li Y. Vet Microbiol. 2021 Dec;263:109268. doi: 10.1016/j.vetmic.2021.109268. Epub 2021 Oct 29. PMID: 34781191.
7. Emergence and spread of novel H5N8, H5N5 and H5N1 clade 2.3.4.4 highly pathogenic avian influenza in 2020 / Lewis N.S, Banyard A.C, Whittard E., Karibayev Т., Al Kafagi Т., etc. // Emerg Microbes Infect. 2021 Dec; 10(1): P. 148-151.7. Emergence and spread of novel H5N8, H5N5 and H5N1 clade 2.3.4.4 highly pathogenic avian influenza in 2020 / Lewis N.S, Banyard A.C, Whittard E., Karibayev T., Al Kafagi T., etc. // Emerg Microbes Infect. Dec 2021; 10(1): P. 148-151.
8. Патент РФ №2366709, МПК C12N 7/00, 2008 г. 8. RF patent No. 2366709,
9. Патент РФ №2300564, МПК C12N 7/00, C12R 1/93, 2005 г. 9. RF patent No. 2300564,
10. Патент РФ №2361917, МПК C12N 7/00, А61К 39/145, 2008 г. 10. RF patent No. 2361917,
11. Патент РФ №2323 740, МПК C12N 7/00, 2008 г. 11. RF patent No. 2323 740,
12. Патент РФ №2647566, МПК А61К 39/145, C12N 7/00, 2017 г. 12. RF patent No. 2647566, IPC A61K 39/145,
13. Патент РФ №2736788, МПК C12N 7/00, 2020 г. 13. RF patent No. 2736788,
14. Патент РФ №2400536, МПК C12N 7/00, 2009 г. 14. RF patent No. 2400536,
15. Патент РФ №2163637, C12N 15/44, C12N 7/00, С07К 14/11, А61К 39/145, 2001 г. 15. RF patent No. 2163637, C12N 15/44,
16. Патент РФ №2309983, МПК C12N 7/00, 2007 г16. RF patent No. 2309983,
17. ГОСТ 28085-13 «Средства лекарственные биологические для ветеринарного применения. Метод бактериологического контроля стерильности».17. GOST 28085-13 “Biological medicinal products for veterinary use. Method of bacteriological control of sterility.
18. ГФ XIV, т.2, с. 2997-3008 Испытания на присутствие микоплазм (ОФС.1.7.2.0031.15).18. GF XIV, v.2, p. 2997-3008 Tests for the presence of mycoplasmas (OFS.1.7.2.0031.15).
Перечень последовательностейSequence listing
--->--->
<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing
1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">
<ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="ru" <ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="en"
dtdVersion="V1_3" fileName="Influenza virus A .xml" dtdVersion="V1_3" fileName="Influenza virus A .xml"
softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.1.2"
productionDate="2022-09-19">productionDate="2022-09-19">
<ApplicationIdentification> <ApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>EN</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>2022121292</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>2022121292</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2022-08-03</FilingDate> <FilingDate>2022-08-03</FilingDate>
</ApplicationIdentification> </ApplicationIdentification>
<ApplicantFileReference>045016</ApplicantFileReference> <ApplicantFileReference>045016</ApplicantFileReference>
<EarliestPriorityApplicationIdentification> <EarliestPriorityApplicationIdentification>
<IPOfficeCode>RU</IPOfficeCode> <IPOfficeCode>EN</IPOfficeCode>
<ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText> <ApplicationNumberText>0</ApplicationNumberText>
<FilingDate>2022-08-03</FilingDate> <FilingDate>2022-08-03</FilingDate>
</EarliestPriorityApplicationIdentification> </EarliestPriorityApplicationIdentification>
<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное <ApplicantName languageCode="en">Federal State
бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья budgetary institution "Federal Health Center
животных" (ФГБУ ВНИИЗЖ)</ApplicantName>animals" (FGBU ARRIAH)</ApplicantName>
<ApplicantNameLatin>FGBI ARRIAH</ApplicantNameLatin> <ApplicantNameLatin>FGBI ARRIAH</ApplicantNameLatin>
<InventionTitle languageCode="ru">Штамм «Ямал»» вируса гриппа птиц <InventionTitle languageCode="en">Yamal strain of avian influenza virus
рода Alphainfluenzavirus вида Influenza А virus подтипа Н5N1 для of the genus Alphainfluenzavirus of the species Influenza A virus subtype H5N1 for
изготовления биопрепаратов для специфической профилактики гриппа птиц production of biological preparations for the specific prevention of avian influenza
типа А подтипа Н5</InventionTitle>type A subtype H5</InventionTitle>
<SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity> <SequenceTotalQuantity>2</SequenceTotalQuantity>
<SequenceData sequenceIDNumber="1"> <SequenceData sequenceIDNumber="1">
<INSDSeq> <INSDSeq>
<INSDSeq_length>360</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>360</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>RNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>RNA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature> <INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..360</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..360</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>
<INSDQualifier> <INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>other RNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>other RNA</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q3"> <INSDQualifier id="q3">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>Influenza virus </INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>Influenza virus </INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>
</INSDFeature> </INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>atggagaaaatagtgcttcttcttgcaatggtcagtcttgttaaaagtg <INSDSeq_sequence>atggagaaaatagtgcttcttcttgcaatggtcagtcttgttaaaagtg
accagatttgcattggttaccatgcaaacaactcgacagaacaggttgacacaataatggaaaagaatgtaccagatttgcattggttaccatgcaaacaactcgacagaacaggttgacacaataatggaaaagaatgt
tactgtcacacatgcccaagacatactagaaaaggcacacaacgggaagctctgcagcctaaatggagtgtactgtcacacatgcccaagacatactagaaaaggcacacaacgggaagctctgcagcctaaatggagtg
aagcctctcattctgagggattgtagtgtagctggatggcttctaggaaaccccatgtgtgacgaattccaagcctctcattctgagggattgtagtgtagctggatggcttctaggaaaccccatgtgtgacgaattcc
tcaatgtgccagaatggtcttacatagtggagaaggacaacccagtcaatggcctctgctacccaggggatcaatgtgccagaatggtcttacatagtggagaaggacaacccagtcaatggcctctgctacccagggga
cttcaacgactatgaagaactaaaacaccta</INSDSeq_sequence>cttcaacgactatgaagaactaaaacaccta</INSDSeq_sequence>
</INSDSeq> </INSDSeq>
</SequenceData> </SequenceData>
<SequenceData sequenceIDNumber="2"> <SequenceData sequenceIDNumber="2">
<INSDSeq> <INSDSeq>
<INSDSeq_length>116</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>116</INSDSeq_length>
<INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>AA</INSDSeq_moltype>
<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>
<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>
<INSDFeature> <INSDFeature>
<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>
<INSDFeature_location>1..116</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..116</INSDFeature_location>
<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>
<INSDQualifier> <INSDQualifier>
<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>protein</INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
<INSDQualifier id="q6"> <INSDQualifier id="q6">
<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>
<INSDQualifier_value>Influenza virus </INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>Influenza virus </INSDQualifier_value>
</INSDQualifier> </INSDQualifier>
</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>
</INSDFeature> </INSDFeature>
</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>
<INSDSeq_sequence>MEKIVLLLAMVSLVKSDQICIGYHANNSEQVDIMEKNVVHAQDILEKAH <INSDSeq_sequence>MEKIVLLLAMVSLVKSDQICIGYHANNSEQVDIMEKNVVHAQDILEKAH
NGKLCSLNGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFLNVPEWSYIVEKDNPVNGLCYPGDFNDYEELKHL</INGKLCSLNGVKPLILRDCSVAGWLLGNPMCDEFLNVPEWSYIVEKDNPVNGLCYPGDFNDYEELKHL</I
NSDSeq_sequence>NSDSeq_sequence>
</INSDSeq> </INSDSeq>
</SequenceData> </SequenceData>
</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>
<---<---
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2796987C1 true RU2796987C1 (en) | 2023-05-30 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2840524C1 (en) * | 2024-09-30 | 2025-05-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | H5 influenza vaccine for carnivores |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2309983C2 (en) * | 2005-11-25 | 2007-11-10 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского Российской академии медицинских наук | Method for initial isolation of influenza virus a strain, strain virus a/duck/novosibirsk/56/05 h5n1 for preparation for diagnosis, prophylaxis and therapeutical agents, and for evaluation of antiviral activity of various compounds |
| RU2323740C1 (en) * | 2006-08-21 | 2008-05-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2309983C2 (en) * | 2005-11-25 | 2007-11-10 | Государственное учреждение Научно-исследовательский институт вирусологии им. Д.И. Ивановского Российской академии медицинских наук | Method for initial isolation of influenza virus a strain, strain virus a/duck/novosibirsk/56/05 h5n1 for preparation for diagnosis, prophylaxis and therapeutical agents, and for evaluation of antiviral activity of various compounds |
| RU2323740C1 (en) * | 2006-08-21 | 2008-05-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | "NOVOSIBIRSKY" STRAIN OF BIRD FLUE Influenzae virus avicum TO CONTROL IMMUNOGENIC AND ANTIGENIC ACTIVITY OF VACCINES AND TO MANUFACTURE BIOMEDICINES FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF BIRD FLUE |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 0. ZECCHIN В. et al. Evolutionary dynamics of Н5 highly pathogenic avian influenza viruses (clade 2.3.4.4B) circulating in Bulgaria in 2019-2021, Viruses. 2021; 13:2086. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2840524C1 (en) * | 2024-09-30 | 2025-05-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" ФГБУ "ВНИИЗЖ" | H5 influenza vaccine for carnivores |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | Preparation of a standardized, efficacious agricultural H5N3 vaccine by reverse genetics | |
| Naqi et al. | Establishment of persistent avian infectious bronchitis virus infection in antibody-free and antibody-positive chickens | |
| CN101309701A (en) | Vaccines and methods to treat canine influenza | |
| Grund et al. | Avian paramyxovirus serotype 1 isolates from the spinal cord of parrots display a very low virulence | |
| CN103497934B (en) | Avian infectious bronchitis virus vaccine strain (HF2 strain) and application thereof | |
| CN109097340A (en) | A kind of aviadenovirus, a kind of quadruple vaccine and preparation method thereof | |
| CN101843900B (en) | Bird flu inactivated vaccine and preparation method thereof | |
| CN111763659B (en) | Novel coronavirus, culture method thereof and novel inactivated coronavirus vaccine | |
| RU2796987C1 (en) | Yamal strain of avian influenza virus of alphainfluenzavirus genus of influenza a virus subtype h5n1 species for the manufacture of biological products for the specific prevention of avian influenza type a subtype h5 | |
| RU2443429C2 (en) | Associated inactivated newcastle disease, infectious bronchitis, egg drop syndrome 76, infectious bursal disease and reovirus tenosynovitis emulsion vaccine | |
| CN105802918B (en) | Chicken's infectious bronchitis nephritis strain and its vaccine composition, preparation method and application | |
| CN117224667B (en) | A kind of avian influenza, Newcastle disease virus vaccine composition and its application | |
| Srivastav et al. | To study the production and standardization of veterinary vaccines | |
| Alsakini et al. | Adjuvant effects of novel water/oil emulsion formulations on immune responses against infectious bronchitis (IB) vaccine in mice | |
| CN101947317B (en) | A large-scale preparation method of H5N1 avian influenza virus-like particle vaccine | |
| CN109055320A (en) | One plant of infectious bronchitis virus separation strains and the application in vaccine preparation | |
| Cross | Newcastle Disease—Vaccine Production | |
| CN105866424B (en) | Testing method for potency of vaccine against duck Tembusu viral diseases | |
| Miyamae | Protective effects of nasal immunization in mice with various kinds of inactivated Sendai virus vaccines | |
| RU2821028C1 (en) | Newcastle disease virus "vniizzh g7" strain for production of biopreparations for diagnosis and specific prevention of newcastle disease of birds | |
| RU2144562C1 (en) | Turkey herpes virus strain "vniizzh/n 110" for preparing vaccine against mareck's disease | |
| RU2323741C2 (en) | Anti- bird flue inactivated emulsion vaccine | |
| CN111494614A (en) | Triple inactivated vaccine and preparation method thereof | |
| RU2158304C2 (en) | Strain "vnivip-dep" for preparing vaccine against reoviral tendinous synovitis in chickens | |
| RU2233671C1 (en) | Inactivated vaccine against egg yield reducing syndrome-76 in poultry |