RU2796357C1 - HUMAN SKIN MELANOMA CELL LINE mel-Alx-LP - Google Patents
HUMAN SKIN MELANOMA CELL LINE mel-Alx-LP Download PDFInfo
- Publication number
- RU2796357C1 RU2796357C1 RU2022130227A RU2022130227A RU2796357C1 RU 2796357 C1 RU2796357 C1 RU 2796357C1 RU 2022130227 A RU2022130227 A RU 2022130227A RU 2022130227 A RU2022130227 A RU 2022130227A RU 2796357 C1 RU2796357 C1 RU 2796357C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell line
- skin melanoma
- alx
- mel
- melanoma
- Prior art date
Links
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 title claims abstract description 31
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 title claims abstract description 25
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 title claims abstract description 23
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 101000664703 Homo sapiens Transcription factor SOX-10 Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 102100038808 Transcription factor SOX-10 Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 7
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 abstract description 3
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 57
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 10
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 5
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 5
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- MISZALMBODQYFT-URVXVIKDSA-N 125-69-9 Chemical compound Br.C([C@@H]12)CCC[C@]11CCN(C)[C@H]2CC2=CC=C(OC)C=C21 MISZALMBODQYFT-URVXVIKDSA-N 0.000 description 2
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 2
- 229940125431 BRAF inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229950001969 encorafenib Drugs 0.000 description 2
- 210000003237 epithelioid cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 2
- CMJCXYNUCSMDBY-ZDUSSCGKSA-N lgx818 Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C)CNC1=NC=CC(C=2C(=NN(C=2)C(C)C)C=2C(=C(NS(C)(=O)=O)C=C(Cl)C=2)F)=N1 CMJCXYNUCSMDBY-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002829 mitogen activated protein kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003990 molecular pathway Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000007325 Amelogenin Human genes 0.000 description 1
- 108010007570 Amelogenin Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101000984753 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase B-raf Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010090206 SOXE Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000012950 SOXE Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 102100027103 Serine/threonine-protein kinase B-raf Human genes 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229950003054 binimetinib Drugs 0.000 description 1
- ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N binimetinib Chemical compound OCCONC(=O)C=1C=C2N(C)C=NC2=C(F)C=1NC1=CC=C(Br)C=C1F ACWZRVQXLIRSDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000008846 dynamic interplay Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000004904 long-term response Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 229960003862 vemurafenib Drugs 0.000 description 1
- GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N vemurafenib Chemical compound CCCS(=O)(=O)NC1=CC=C(F)C(C(=O)C=2C3=CC(=CN=C3NC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1F GPXBXXGIAQBQNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000007482 whole exome sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, биотехнологии, а именно к получению клеточной линии. Полученная клеточная линия может быть использована как модельная система для изучения процессов канцерогенеза и метастазирования in vitro, поиска новых потенциальных мишеней в терапии меланомы кожи, а также тестирования противоопухолевых препаратов и новых терапевтических подходов. Клеточная линия mel-Alx-LP обладает стабильными культуральными, морфологическими и молекулярными характеристиками.The invention relates to the field of medicine, biotechnology, and in particular to the production of a cell line. The resulting cell line can be used as a model system for studying the processes of carcinogenesis and metastasis in vitro, searching for new potential targets in the treatment of skin melanoma, as well as testing anticancer drugs and new therapeutic approaches. The mel-Alx-LP cell line has stable cultural, morphological, and molecular characteristics.
Клеточная линия также может быть использована в качестве положительного контроля при проведении иммуногистохимического и иммуноцитохимического анализов при выявлении маркеров меланомы кожи, поскольку характеризуется стабильной экспрессией меланоцитарных маркеров: SOX10, MITF.The cell line can also be used as a positive control for immunohistochemical and immunocytochemical analyzes in detecting skin melanoma markers, since it is characterized by stable expression of melanocytic markers: SOX10, MITF.
Меланома кожи составляет ~5% всех случаев рака кожи, на нее приходится >75% смертей от рака кожи [1]. 5-летняя относительная выживаемость пациентов с локализованным или региональным заболеванием составляет 98% и 64%, соответственно. Напротив, у пациентов с метастатической меланомой 5-летняя выживаемость снижается до 23%.Skin melanoma accounts for ~5% of all skin cancer cases and accounts for >75% of skin cancer deaths [1]. The 5-year relative survival rates for patients with localized or regional disease are 98% and 64%, respectively. In contrast, in patients with metastatic melanoma, the 5-year survival rate is reduced to 23%.
Метастатическая меланома исторически считалась не поддающимся лечению заболеванием, пока в 2011 и 2014 годах FDA не одобрило терапевтические стратегии на основе таргетной терапии и иммунотерапии.Metastatic melanoma was historically considered a untreatable disease until the FDA approved therapeutic strategies based on targeted therapy and immunotherapy in 2011 and 2014.
Для пациентов с BRAFV600E/K mutant меланомой значительная эффективность наблюдалась при комбинации ингибитора BRAF и ингибитора МЕК, с частотой ответа ~76% [2]. При этом >80% пациентов в дальнейшем рецидивируют на коктейле BRAF/MEK-ингибиторов, оставляя их пригодными только для анти-PD-1 и анти-СТLА4 иммунотерапии [3].For patients with BRAF V600E/K mutant melanoma, significant efficacy has been observed with the combination of a BRAF inhibitor and a MEK inhibitor, with a response rate of ~76% [2]. At the same time, >80% of patients subsequently relapse on the BRAF/MEK inhibitor cocktail, leaving them suitable only for anti-PD-1 and anti-CTLA4 immunotherapy [3].
Активность комбинированной терапии ингибиторами контрольных точек с использованием анти-PD-l и анти-СТLА-4 антител продемонстрировала длительный ответ, что представляет собой терапевтическую стратегию, подходящую для всех генотипов. Однако 60-70% пациентов с меланомой не отвечают на терапию ингибиторами контрольных точек из-за токсичности, внутренней резистентности и других не до конца понятных причин. При этом сохраняющиеся клетки меланомы, которые не отвечают на текущие стандартные стратегии лечения представляют собой проблему, которую пытаются преодолеть исследователи и клиницисты [4].The activity of combination therapy with checkpoint inhibitors using anti-PD-1 and anti-CTLA-4 antibodies demonstrated a long-term response, which is a therapeutic strategy suitable for all genotypes. However, 60-70% of patients with melanoma do not respond to checkpoint inhibitor therapy due to toxicity, intrinsic resistance, and other reasons that are not fully understood. At the same time, persistent melanoma cells that do not respond to current standard treatment strategies represent a problem that researchers and clinicians are trying to overcome [4].
Лечение метастатической меланомы является сложной задачей. Хотя таргетная и иммунная терапия позволили увеличить выживаемость у пациентов, в большинстве случаев опухолевые клетки вырабатывают резистентность к терапии. Динамические взаимодействия клеток меланомы с другими клеточными и ацеллюлярными компонентами микроокружения опухоли обеспечивают дополнительные механизмы гомеостатической регуляции, критически важные для эффективности терапии [5]. Несмотря на последние технологические достижения в изучении меланомы кожи до сих пор остается вопросом, какую роль играет микроокружение в резистентности меланомы к проводимой терапии.Treatment of metastatic melanoma is challenging. Although targeted and immune therapies have improved patient survival, in most cases, tumor cells develop resistance to therapy. Dynamic interactions of melanoma cells with other cellular and acellular components of the tumor microenvironment provide additional mechanisms of homeostatic regulation that are critical for the effectiveness of therapy [5]. Despite recent technological advances in the study of melanoma of the skin, the role of the microenvironment in the resistance of melanoma to therapy remains a question.
Для разработки новых стратегий терапии меланомы кожи, способных преодолеть нынешнее клиническое плато, наблюдаемое при лечении пациентов с помощью таргетных и иммунных терапевтических стратегий, необходимо, чтобы модельные системы меланом были максимально приближены к естественной опухолевой системе, воспроизводя многообразные сложные механизмы резистентности in vivo у пациентов.To develop new strategies for the treatment of melanoma of the skin that can overcome the current clinical plateau observed in the treatment of patients with targeted and immune therapeutic strategies, it is necessary that melanoma model systems be as close as possible to the natural tumor system, reproducing the diverse complex mechanisms of resistance in vivo in patients.
С помощью традиционных клеточных культур возможно исследовать фенотипический портрет опухоли, цитотоксичность, пролиферацию, подвижность, инвазивность, адаптацию к гипоксическим условиям, приводящие к ее устойчивости и диссеминации, изучить чувствительность к лекарственным препаратам, экспрессию белков и пластичность молекулярных путей, геномные и генетические характеристики (секвенирование РНК, секвенирование целого экзома).With the help of traditional cell cultures, it is possible to study the phenotypic portrait of a tumor, cytotoxicity, proliferation, mobility, invasiveness, adaptation to hypoxic conditions, leading to its resistance and dissemination, to study drug sensitivity, protein expression and plasticity of molecular pathways, genomic and genetic characteristics (sequencing RNA, whole exome sequencing).
В общей сложности в мире насчитывается >2000 клеточных линий меланомы. Проведенные для большинства этих клеточных линий в ходе систематических скринингов генетические и молекулярные тесты, а также высокопроизводительных скринингов лекарственных препаратов, позволили получить исчерпывающую информацию об основных генах и молекулярных путях, ответственных за прогрессирование меланомы и ее резистентность к терапии. А создание трехмерных моделей из двухмерных культур с введением культур клеток стромы позволяет усложнить взаимодействия опухолевых клеток и микроокружения, что значительно приближает такую модель к естественным условиям.In total, there are >2000 melanoma cell lines worldwide. For most of these cell lines, systematic genetic and molecular tests, as well as high-throughput drug screenings, have provided comprehensive information on the main genes and molecular pathways responsible for the progression of melanoma and its resistance to therapy. And the creation of three-dimensional models from two-dimensional cultures with the introduction of stromal cell cultures makes it possible to complicate the interactions of tumor cells and the microenvironment, which significantly brings such a model closer to natural conditions.
Поэтому важной и актуальной задачей на сегодняшний день является расширение арсенала охарактеризованных клеточных линий с целью применения их в качестве модельных систем для исследования процессов канцерогенеза, тестирования противоопухолевых препаратов и апробации новых терапевтических подходов в лечении злокачественных новообразований, а также для поиска новых потенциальных мишеней.Therefore, an important and urgent task today is to expand the arsenal of characterized cell lines with the aim of using them as model systems for studying the processes of carcinogenesis, testing anticancer drugs and testing new therapeutic approaches in the treatment of malignant neoplasms, as well as to search for new potential targets.
Наиболее близкой к заявляемой клеточной линии - прототипом, является линия NCI-H838 [Н838] Lung Adenocarcinoma Human из коллекции АТСС с коллекционным номером CRL-5844 (https://www.atcc.org/products/crl-5844). По данным проведенного STR-анализа с исследованием маркеров, присутствующих в базе АТСС, процент совпадения составляет 82%. Клеточная линия NCI-H838 была получена из метастазов аденокарциномы легкого в лимфатический узел. Культура характеризуется эпителиальной морфологией и адгезионным типом роста.Closest to the claimed cell line - the prototype is the line NCI-H838 [H838] Lung Adenocarcinoma Human from the ATCC collection with collection number CRL-5844 (https://www.atcc.org/products/crl-5844). According to the conducted STR-analysis with the study of markers present in the ATCC database, the percentage of coincidence is 82%. The NCI-H838 cell line was derived from lung adenocarcinoma metastases to a lymph node. The culture is characterized by epithelial morphology and adhesive type of growth.
Техническим результатом изобретения является расширение арсенала клеточных линий, обладающих метастатическим потенциалом и туморогенностью, которые могут быть использованы для тестирования активности новых противоопухолевых препаратов, а также для поиска новых потенциальных мишеней в терапии меланомы кожи и разработки новых терапевтических подходов в лечении злокачественных новообразований. Клеточная линия также может быть использована в качестве положительного контроля при проведении иммуногистохимическогоThe technical result of the invention is the expansion of the arsenal of cell lines with metastatic potential and tumorigenicity, which can be used to test the activity of new antitumor drugs, as well as to search for new potential targets in the treatment of skin melanoma and the development of new therapeutic approaches in the treatment of malignant neoplasms. The cell line can also be used as a positive control for immunohistochemistry.
и иммуноцитохимического анализов при выявлении маркеров меланомы кожи, поскольку характеризуется стабильной экспрессией меланоцитарных маркеров: SOX10, MITF.and immunocytochemical analyzes in the detection of skin melanoma markers, since it is characterized by a stable expression of melanocytic markers: SOX10, MITF.
Указанный технический результат изобретения достигается новой клеточной линией меланомы кожи человека mel-Alx-LP, сохраняющей ключевые характеристики опухолевого образца: экспрессия маркеров меланомы кожи, способность к инвазии и миграции, высокий пролиферативный потенциал, из которого культура была получена, хранится в специализированной коллекции культур клеток ЦКП "Коллекция культур клеток позвоночных" Института Цитологии РАН под номером РККК(П) 812Д.The specified technical result of the invention is achieved by a new human skin melanoma cell line mel-Alx-LP, which retains the key characteristics of the tumor sample: expression of skin melanoma markers, the ability to invade and migrate, high proliferative potential, from which the culture was obtained, is stored in a specialized collection of cell cultures Center for Collective Use "Collection of Vertebrate Cell Cultures" of the Institute of Cytology of the Russian Academy of Sciences under the number RKKK(P) 812D.
Получение клеточной линии mel-Alx-LP было осуществлено следующим путем:Obtaining cell line mel-Alx-LP was carried out in the following way:
Клеточная линия mel-Alx-LP была выделена из метастаза злокачественной меланомы кожи человека в паховом лимфоузле. Образец характеризовался высокой митотической активностью (21 митозов на 1 кв.мм опухоли).The mel-Alx-LP cell line was isolated from human malignant melanoma metastasis in the inguinal lymph node. The sample was characterized by high mitotic activity (21 mitoses per 1 sq. mm of tumor).
Интраоперационно полученные фрагменты опухолевой ткани помещали в стерильную пробирку, содержащую полную питательную среду (DMEM/F-12, 10% FBS, пенициллин 25000 Ед/500 мл среды + стрептомицин 25 мг/500 мл среды), и транспортировали в лабораторию. Образцы переносили в ламинар и измельчали на стерильной чашке Петри стерильным скальпелем с добавлением 5-7 мл DMEM/F-12 на кусочки размером не более 2 мм3. Далее кусочки опухоли помещали в стерильный медикон (Medicon, Sterile, BD™) и подвергали механической дезагрегации внутри медимашины (Medimachine, BD™) в течение 1 мин. Полученную клеточную суспензию пропускают через стерильные фильтры диаметром 50-70 мкм с помощью стерильного шприца 1 см3. Центрифугировали полученную фильтрованную клеточную взвесь при 1000 об/мин в течение 5 мин, аккуратно убирали супернатант и высаживали во флакон объемом 25 см2 с добавлением 5 мл питательной среды DMEM/F-12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), антибиотики (пенициллин со стрептомицином в концентрации: 100 ед/мл и 100 мкг/мл соответственно). Клетки инкубировали при 37°С, 5% СО2, 100% влажности.Intraoperatively obtained tumor tissue fragments were placed in a sterile tube containing complete nutrient medium (DMEM/F-12, 10% FBS, penicillin 25000 U/500 ml of medium + streptomycin 25 mg/500 ml of medium) and transported to the laboratory. The samples were transferred to a laminar and crushed on a sterile Petri dish with a sterile scalpel with the addition of 5-7 ml of DMEM/F-12 into pieces no larger than 2 mm 3 in size. Next, the tumor pieces were placed in a sterile medicon (Medicon, Sterile, BD™) and subjected to mechanical disaggregation inside the medimachine (Medimachine, BD™) for 1 min. The resulting cell suspension is passed through sterile filters with a diameter of 50-70 μm using a sterile syringe 1 cm 3 . The resulting filtered cell suspension was centrifuged at 1000 rpm for 5 min, the supernatant was carefully removed and planted in a 25 cm 2 vial with the addition of 5 ml of DMEM/F-12 nutrient medium containing 10% fetal bovine serum (FBS), antibiotics ( penicillin with streptomycin at a concentration of 100 units / ml and 100 μg / ml, respectively). Cells were incubated at 37°C, 5% CO 2 , 100% humidity.
Стабильно пролиферирующая культура была получена на 10 пассаже.A stably proliferating culture was obtained at passage 10.
Условия культивирования клеточной линии mel-Alx-LP представлены следующим образом.The culturing conditions for the mel-Alx-LP cell line are as follows.
Тип роста - адгезионный.Growth type - adhesive.
Во флаконы объемом 25 см2 в 5 мл среды засевают 1×106 клеток.In vials with a volume of 25 cm 2 in 5 ml of medium, 1×10 6 cells are seeded.
Клетки культивируют в питательной среде DMEM/F-12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), антибиотики (пенициллин со стрептомицином в концентрации: 100 ед/мл и 100 мкг/мл соответственно) в культуральном флаконе объемом 25 см2 и инкубируют при 37°С, 5% СО2, 100% влажности.The cells are cultured in a DMEM/F-12 nutrient medium containing 10% fetal bovine serum (FBS), antibiotics (penicillin with streptomycin at a concentration of 100 U/ml and 100 μg/ml, respectively) in a 25 cm 2 culture flask and incubated at 37°C, 5% CO 2 , 100% humidity.
Пересев 1 раз в 3-4 дня в соотношении 1:1 с использованием равных объемов 0,25% раствора Трипсина и 0,02% раствора Версена.Reseeding 1 time in 3-4 days in a ratio of 1:1 using equal volumes of 0.25% Trypsin solution and 0.02% Versen solution.
Жизнеспособность клеток оценивают по включению трипанового синего с помощью автоматических счетчиков или камеры Горяева. Жизнеспособность клеток после пересева составляет от 90-99%.Cell viability is assessed by the inclusion of trypan blue using automatic counters or a Goryaev camera. Cell viability after reseeding ranges from 90-99%.
Морфологические признаки клеточной линии mel-Alx-LP характеризуются следующим образом:Morphological features of the mel-Alx-LP cell line are characterized as follows:
Клетки представлены преимущественно эпителиоидно-клеточной морфологией (75%) и веретеновидно-клеточными чертами (25%). Ядра крупные, округлые. Единичные клетки двуядерные и многоядерные.Cells are predominantly epithelioid cell morphology (75%) and spindle cell features (25%). The nuclei are large, rounded. Single cells are binuclear and multinuclear.
Мультиплексный анализ 19-ти STR-маркеров и локуса амелогенина человека представлен в табл.Multiplex analysis of 19 STR markers and the human amelogenin locus is presented in Table 1.
Проведен анализ выявленного генотипа по референсной базе АТСС.The identified genotype was analyzed using the ATCC reference database.
Результаты поиска по референсной базе: Максимальная степень совпадения генотипа установлена для клеточной линии - NCI-H838Lung AdenocarcinomaHuman (82%). Согласно рекомендациям АТСС: идентичными могут считаться клеточные линии, демонстрирующие 100% совпадение по исследованным маркерам присутствующим в базе АТСС. Клеточные линии, демонстрирующие не менее чем 80% совпадение генотипов по исследованным маркерам присутствующим в базе АТСС, могут считаться родственными (произошедшими от общей линии-предшественника). Клеточные линии, демонстрирующие менее чем 80% совпадение генотипов по исследованным маркерам присутствующим в базе АТСС, не могут достоверно считаться родственными линиями на основании полученных данных (Capes-Davis et al., Match criteria for human cell line authentication: Where do we draw the line? Int. J. Cancer. 2012 Nov 8. doi:0.1002/ijc.27931).Reference database search results: The maximum degree of genotype match was established for the cell line - NCI-H838Lung AdenocarcinomaHuman (82%). According to the ATCC recommendations: cell lines demonstrating 100% match for the studied markers present in the ATCC database can be considered identical. Cell lines demonstrating at least 80% genotype match for the studied markers present in the ATCC database can be considered related (derived from a common precursor line). Cell lines showing less than 80% genotype match for the studied markers present in the ATCC database cannot be reliably considered related lines based on the data obtained (Capes-Davis et al., Match criteria for human cell line authentication: Where do we draw the line (Int. J. Cancer. 2012 Nov 8. doi:0.1002/ijc.27931).
Маркерные признаки клеточной линии mel-Alx-LP:Marker features of the mel-Alx-LP cell line:
SOX10 - 40-45% экспрессируют клетки эпителиоидно-клеточной морфологии, 5% - веретеновидной морфологии клетки, оставшиеся клетки утратили экспрессию этого маркера. MITF - 40-45%, из которых 20% окрашиваются наиболее ярко.SOX10 - 40-45% express cells of epithelioid-cell morphology, 5% - spindle-shaped cell morphology, the remaining cells have lost the expression of this marker. MITF - 40-45%, of which 20% stain most brightly.
Маркер пролиферации Ki-67 выявлен в 92% клеток.Proliferation marker Ki-67 was detected in 92% of cells.
Условия криоконсервации клеточной линии mel-Alx-LP следующие:The conditions for cryopreservation of the mel-Alx-LP cell line are as follows:
Криосреда: эмбриональная телячья сыворотка 90%, DMSO 10%.Cryomedia: fetal calf serum 90%, DMSO 10%.
Объем клеток на криопробирку: 1,5-3×106 клеток/мл.Volume of cells per cryovial: 1.5-3×10 6 cells/ml.
Клетки ресуспендируют в криосреде до образования гомогенной суспензии, переносят в криопробирки. Криопробирки помещают в контейнер-холодильник для поддержания постоянной скорости охлаждения 1°С/мин., контейнер помещают в холодильник на -80°С на 24 часа. Для длительного хранения пробирки переносят в криобанк на -196°С.Cells are resuspended in a cryogenic medium until a homogeneous suspension is formed, and transferred to cryovials. Cryotubes are placed in a refrigerator container to maintain a constant cooling rate of 1°C/min., the container is placed in a refrigerator at -80°C for 24 hours. For long-term storage, the tubes are transferred to a cryobank at -196°C.
Размораживание линии проводят при 37°С.The defrosting of the line is carried out at 37°C.
Клетки разводят в 10 мл бессывороточной среды и осаждают центрифугированием, ресуспендируют в 5 мл той же среды, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, антибиотики (пенициллин со стрептомицином в концентрации: 100 ед/мл и 100 мкг/мл соответственно), переносят в культуральный флакон объемом 25 см2 и инкубируют при 37°С, 5% СO2, 100% влажности.Cells are diluted in 10 ml of serum-free medium and precipitated by centrifugation, resuspended in 5 ml of the same medium containing 10% fetal calf serum, antibiotics (penicillin with streptomycin at a concentration of 100 U/ml and 100 μg/ml, respectively), transferred to a culture flask volume of 25 cm 2 and incubated at 37°C, 5% CO 2 , 100% humidity.
Жизнеспособность клеток оценивают по включению трипанового синего с помощью автоматических счетчиков или камеры Горяева. Жизнеспособность клеток после криоконсервации 85-99%.Cell viability is assessed by the inclusion of trypan blue using automatic counters or a Goryaev camera. Cell viability after cryopreservation is 85-99%.
Контаминация клеточной линии меланомы кожи mel-Alx-LP была исследована следующим образом.The contamination of the skin melanoma cell line mel-Alx-LP was investigated as follows.
Методом ПЦР были произведены исследования на наличие микоплазмы - микоплазма не была обнаружена. При длительном культивировании в среде контаминация бактериями и грибами не была обнаружена.The PCR method was used to study the presence of mycoplasma - mycoplasma was not detected. During long-term cultivation in the medium, contamination by bacteria and fungi was not detected.
Использование клеточной линии меланомы кожи mel-Alx-LP представлено следующими примерами.The use of the skin melanoma cell line mel-Alx-LP is represented by the following examples.
Пример 1. Использование клеточной линии меланомы кожи mel-Alx-LP в качестве положительного контроля для фактора транскрипции SOX10 (SRY-Box Transcription Factor 10)Example 1 Use of the mel-Alx-LP skin melanoma cell line as a positive control for the SOX10 transcription factor (SRY-Box Transcription Factor 10)
Клетки культивируют в питательной среде DMEM/F-12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), антибиотики (пенициллин со стрептомицином в концентрации: 100 ед/мл и 100 мкг/мл соответственно) в культуральном флаконе объемом 25 см2 и инкубируют при 37°С, 5% СО2, 100% влажности. Через 3-е суток осуществляют пересев клеток в соотношении 1:1 с использованием равных объемов 0,25% раствора Трипсина и 0,02% раствора Версена.The cells are cultured in a DMEM/F-12 nutrient medium containing 10% fetal bovine serum (FBS), antibiotics (penicillin with streptomycin at a concentration of 100 U/ml and 100 μg/ml, respectively) in a 25 cm 2 culture flask and incubated at 37°C, 5% CO 2 , 100% humidity. After 3 days, cells are reseeded in a ratio of 1:1 using equal volumes of 0.25% Trypsin solution and 0.02% Versen solution.
При достижении конфлюэнтного монослоя, супернатант удаляют, добавляют 1 мл раствора: 0,25% раствора Трипсина и 0,02% раствора Версена (в соотношении 1:1) и помещают в СO2-инкубатор при 37°С, 5% СО2, 100% влажности на 2 минуты. По истечении указанного времени флакон достают из инкубатора, с помощью автоматического дозатора на 1 мл снимают клетки со дна флакона, помещают в стерильную пробирку (15 мл) с добавлением DMEM/F-12, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) и центрифугируют 5 минут при 1000 об/мин.When a confluent monolayer is reached, the supernatant is removed, 1 ml of a solution of 0.25% Trypsin solution and 0.02% Versene solution (in a ratio of 1:1) is added and placed in a CO 2 incubator at 37 ° C, 5% CO 2 , 100% humidity for 2 minutes. After the specified time has elapsed, the vial is removed from the incubator, cells are removed from the bottom of the vial using a 1 ml automatic dispenser, placed in a sterile tube (15 ml) with the addition of DMEM/F-12 containing 10% fetal calf serum (FBS) and centrifuged 5 minutes at 1000 rpm.
По окончании центрифугирования супернатант удаляют, а клетки отмывают в однократном растворе фосфатного буфера (PBS).At the end of centrifugation, the supernatant is removed and the cells are washed in a single phosphate buffer solution (PBS).
Далее готовят клеточные блоки на основе 2% агара и обрабатывают блок так же как биопсийный материал: фиксация в 10% забуференном формалине (до 12 ч), проводка, заливка в парафин и микротомия. Контрольный срез с клеточной линией монтируют на одно стекло с исследуемым образцом.Next, cell blocks are prepared on the basis of 2% agar and the block is processed in the same way as biopsy material: fixation in 10% buffered formalin (up to 12 hours), wiring, embedding in paraffin and microtomy. The control section with the cell line is mounted on the same slide with the test sample.
Для иммуногистохимического исследования производят депарафинизацию, регидратацию, демаскировку и обработку перекисью полученных срезов.For immunohistochemical studies, deparaffinization, rehydration, unmasking and peroxide treatment of the obtained sections are performed.
Первичные моноклональные антитела против SOX10 (ЕР268, Rabbit Monoclonal Antibody, Cell Marque) инкубируют в течении 30 минут при 25°С. После инкубации промывали TBS-буфером трижды. В качестве системы визуализации используют систему EnVision FLEX, High рН (Link) (Agilent), инкубацию со вторичными антителами производят в течении 30 минут при 25°С. После инкубации промывали TBS-буфером и производят визуализацию диаминобензидином при комнатной температуре 10 мин. Промывают TBS-буфером и осуществляли докраску ядер клеток гематоксилином Майера. Образцы обезвоживают серией погружений в изопропиловый спирт, ксилол и заключают.Primary monoclonal antibodies against SOX10 (EP268, Rabbit Monoclonal Antibody, Cell Marque) are incubated for 30 minutes at 25°C. After incubation, they were washed with TBS buffer three times. The EnVision FLEX system, High pH (Link) (Agilent) is used as an imaging system, incubation with secondary antibodies is carried out for 30 minutes at 25°C. After incubation, they were washed with TBS buffer and visualized with diaminobenzidine at room temperature for 10 minutes. The cells were washed with TBS buffer and the cell nuclei were stained with Mayer's hematoxylin. Samples are dehydrated by a series of immersions in isopropyl alcohol, xylene and sealed.
В результате с помощью светового микроскопа наблюдают экспрессию SOX10 клеточной линией mel-Alx-LP в виде ядерного окрашивания.As a result, the expression of SOX10 by the mel-Alx-LP cell line was observed using a light microscope as nuclear staining.
Пример 2. Использование клеточной линии меланомы кожи mel-Alx-LP в качестве модельной системы для оценки цитотоксического эффекта противоопухолевых препаратов.Example 2 Use of the mel-Alx-LP skin melanoma cell line as a model system for evaluating the cytotoxic effect of anticancer drugs.
Клеточные линии высаживают в плоскодонные 96-луночные планшеты и помещают в СО2-инкубатор (+37°С, 5-6.5% СО2) на 3 суток. Весь планшет делят на следующие группы: контрольная группа - 3 лунки; экспериментальные группы: добавление исследуемого противоопухолевого препарата в различных концентрациях - 3 лунки.Cell lines are planted in flat-bottomed 96-well plates and placed in CO 2 -incubator (+37°C, 5-6.5% CO 2 ) for 3 days. The entire tablet is divided into the following groups: control group - 3 wells; experimental groups: addition of the studied antitumor drug at various concentrations - 3 wells.
Через 3 суток в среду добавляют исследуемый противоопухолевый препарат.Время инкубации в условиях СО2-инкубатора (+37°С, 5-6.5% СО2) составляет определяют заранее. По окончании культивирования с препаратом получают изображения монослойных культур с помощью с помощью фазового контрастного микроскопа Zeiss Primo Vert (4×0,10) (Zeiss, Germany).After 3 days, the investigated antitumor drug is added to the medium. The incubation time in the conditions of a CO 2 incubator (+37°C, 5-6.5% CO 2 ) is determined in advance. At the end of cultivation with the preparation, images of monolayer cultures are obtained using a phase contrast microscope Zeiss Primo Vert (4×0.10) (Zeiss, Germany).
Затем в лунки, где культивировались монослойные клеточные линии, вносят по 10 μl МТТ (Roche, Basel, Switzerland) в конечной концентрации 0.5 мг/мл и инкубируют в течении 4 часов в условиях СО2-инкубатора (+37°С, 5-6.5% СO2).Then, 10 μl of MTT (Roche, Basel, Switzerland) at a final concentration of 0.5 mg/ml are added to the wells where monolayer cell lines were cultivated and incubated for 4 hours in a CO 2 -incubator (+37°C, 5-6.5 % CO 2 ).
Через 4 часа удаляют супернатант и добавляли 100 μ1 DMSO на 1 ч. Оптическую плотность (ОП) полученных растворов измеряют на спектрофотометре для микропланшетов iMark (Bio-Rad Laboratories, США) на длине волны 595 nm. Для перевода единиц оптической плотности в проценты жизнеспособности используют формулу: (ОП исследуемого образца - ОП контрольной группы)* 100%.After 4 hours, the supernatant was removed and 100 μ1 DMSO was added for 1 hour. The optical density (OD) of the obtained solutions was measured on an iMark microplate spectrophotometer (Bio-Rad Laboratories, USA) at a wavelength of 595 nm. To convert units of optical density to percent viability, use the formula: (OD of the test sample - OD of the control group) * 100%.
В результате получают кривую зависимости дозы-эффекта, характеризующей изменение влияния противоопухолевого препарата в зависимости от концентрации на клеточную линию.As a result, a dose-response curve is obtained, which characterizes the change in the effect of the anticancer drug depending on the concentration on the cell line.
Новая клеточная линия меланомы кожи человека mel-Alx-LP позволяет расширить арсенал клеточных линий, обладающих метастатическим потенциалом и туморогенностью, которые могут быть использованы для тестирования активности новых противоопухолевых препаратов, а также для поиска новых потенциальных мишеней в терапии меланомы кожи и разработки новых терапевтических подходов в лечении злокачественных новообразований. Клеточная линия также может быть использована в качестве положительного контроля при проведении иммуногистохимического и иммуноцитохимического анализов при выявлении маркеров меланомы кожи, поскольку характеризуется стабильной экспрессией меланоцитарных маркеров: SOX10, MITF.The new human skin melanoma cell line mel-Alx-LP allows expanding the arsenal of cell lines with metastatic potential and tumorigenicity, which can be used to test the activity of new anticancer drugs, as well as to search for new potential targets in the treatment of skin melanoma and develop new therapeutic approaches. in the treatment of malignant neoplasms. The cell line can also be used as a positive control for immunohistochemical and immunocytochemical analyzes in detecting skin melanoma markers, since it is characterized by stable expression of melanocytic markers: SOX10, MITF.
Источники информации: Information sources:
1. Matthews NH, Li WQ, Qureshi AA, et al. Epidemiology of Melanoma. In: Ward WH, Farma JM, editors. Cutaneous Melanoma: Etiology and Therapy. Brisbane (AU): Codon Publications; 2017 Dec 21. Chapter 1. doi: 10.15586/codon.cutaneousmelanoma.2017.chl.1. Matthews NH, Li WQ, Qureshi AA, et al. epidemiology of melanoma. In: Ward WH, Farma JM, editors. Cutaneous Melanoma: Etiology and Therapy. Brisbane (AU): Codon Publications; 2017 Dec 21. Chapter 1. doi: 10.15586/codon.cutaneousmelanoma.2017.chl.
2 Dummer, R. et al. Overall survival in patients with BRAF-mutant melanoma receiving encorafenib plus binimetinib versus vemurafenib or encorafenib(COLUMBUS): a multicentre, open-label, randomised, phase 3 trial. Lancet Oncol. 19, 1315-1327 (2018). 2 Dummer, R. et al. Overall survival in patients with BRAF-mutant melanoma receiving encorafenib plus binimetinib versus vemurafenib or encorafenib(COLUMBUS): a multicentre, open-label, randomised, phase 3 trial. Lancet Oncol. 19, 1315-1327 (2018).
3. Schreuer, M. et al. Combination of dabrafenib plus trametinib for BRAF andMEK inhibitor pretreated patients with advanced BRAF(V600)-mutantmelanoma: an open-label, single arm, dual-centre, phase 2 clinical trial. Lancet Oncol. 18, 464-472 (2017).3. Schreuer, M. et al. Combination of dabrafenib plus trametinib for BRAF andMEK inhibitor pretreated patients with advanced BRAF(V600)-mutant melanoma: an open-label, single arm, dual-centre, phase 2 clinical trial. Lancet Oncol. 18, 464-472 (2017).
4. Rogiers, A. et al. Long-term survival, quality of life, and psychosocial outcomes in advanced melanoma patients treated with immune checkpoint inhibitors. J. Oncol.2019, 5269062 (2019).4. Rogiers, A. et al. Long-term survival, quality of life, and psychosocial outcomes in advanced melanoma patients are treated with immune checkpoint inhibitors. J. Oncol. 2019, 5269062 (2019).
5. Falcone I, Conciatori F, Bazzichetto C, Ferretti G, Cognetti F, Ciuffreda L, Milella M. Tumor Microenvironment: Implications in Melanoma Resistance to Targeted Therapy and Immunotherapy. Cancers (Basel). 2020 Oct 6;12(10):2870. doi: 10.3390/cancersl2102870.5. Falcone I, Conciatori F, Bazzichetto C, Ferretti G, Cognetti F, Ciuffreda L, Milella M. Tumor Microenvironment: Implications in Melanoma Resistance to Targeted Therapy and Immunotherapy. Cancers (Basel). 2020 Oct 6;12(10):2870. doi: 10.3390/cancersl2102870.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2796357C1 true RU2796357C1 (en) | 2023-05-22 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014074874A1 (en) * | 2012-11-09 | 2014-05-15 | Regents Of The University Of Minnesota | Osteosarcoma diagnostic and prognostic methods |
| RU2722867C1 (en) * | 2019-12-16 | 2020-06-04 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Osteogenic human sarcoma cell line 793 ossar rvv |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014074874A1 (en) * | 2012-11-09 | 2014-05-15 | Regents Of The University Of Minnesota | Osteosarcoma diagnostic and prognostic methods |
| RU2722867C1 (en) * | 2019-12-16 | 2020-06-04 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Osteogenic human sarcoma cell line 793 ossar rvv |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Du et al. | CD44 is of functional importance for colorectal cancer stem cells | |
| CN112779209B (en) | Primary mammary epithelial cell culture medium, culture method and application thereof | |
| Yang et al. | M2 bone marrow-derived macrophage-derived exosomes shuffle microRNA-21 to accelerate immune escape of glioma by modulating PEG3 | |
| Chiou et al. | Positive correlations of Oct-4 and Nanog in oral cancer stem-like cells and high-grade oral squamous cell carcinoma | |
| US11920163B2 (en) | Method for culturing a subpopulation of circulating epithelial tumour cells from a body fluid | |
| Piwocka et al. | Navigating challenges: optimising methods for primary cell culture isolation | |
| Nagai et al. | Dendritic cell-based immunotherapy pulsed with Wilms tumor 1 peptide and mucin 1 as an adjuvant therapy for pancreatic ductal adenocarcinoma after curative resection: a phase I/IIa clinical trial | |
| CN109122669B (en) | A kind of cell cryogenic fluid and application thereof for preparing dry tumor cell quality control product | |
| Liu et al. | STING inhibitors sensitize platinum chemotherapy in ovarian cancer by inhibiting the CGAS-STING pathway in cancer-associated fibroblasts (CAFs) | |
| McDonnell et al. | Tumor cells, rather than dendritic cells, deliver antigen to the lymph node for cross-presentation | |
| Takahashi et al. | Establishment and characterization of novel cell lines from sinonasal undifferentiated carcinoma | |
| US20130012404A1 (en) | Culture method, evaluation method and storage method for cancer-tissue-derived cell mass or aggregated cancer cell mass | |
| Tutty et al. | Cancer cell culture: the basics and two-dimensional cultures | |
| CN108866000B (en) | Human epidermal growth factor tyrosine kinase inhibitor acquired drug-resistant lung cancer cell line and establishment method and application thereof | |
| Somboonpatarakun et al. | Cytotoxicity of fourth-generation anti-Trop2 CAR-T cells against breast cancer | |
| De Vita et al. | Establishment of a primary culture of patient-derived soft tissue sarcoma | |
| Ozel et al. | Neutrophil-specific targeting of STAT3 impairs tumor progression via the expansion of cytotoxic CD8+ T cells | |
| RU2796357C1 (en) | HUMAN SKIN MELANOMA CELL LINE mel-Alx-LP | |
| Domogauer et al. | A mimic of the tumor microenvironment: a simple method for generating enriched cell populations and investigating intercellular communication | |
| RU2402602C1 (en) | CELL LINE OF HUMAN MELANOMA mel Rac, APPLIED FOR OBTAINING ANTITUMOUR VACCINE | |
| Qiu et al. | Identification and characterization of CD133pos subpopulation cells from a human laryngeal Cancer cell line | |
| Weinhäuser et al. | M2-polarized macrophages control LSC fate by enhancing stemness, homing, immune evasion and metabolic reprogramming | |
| RU2717654C1 (en) | HUMAN BREAST CANCER CELL LINE BrCCh4e | |
| RU2287577C1 (en) | HUMAN MELANOMA CELLULAR LINE mel IL USED IN PREPARING ANTITUMOR VACCINE | |
| US20190049456A1 (en) | Method for detecting or separating/obtaining circulating tumor cell employing cell proliferation method |