RU2792679C1 - Bactericidal pharmaceutical composition for parenteral use in the form of lyophilizate with endolysin - Google Patents
Bactericidal pharmaceutical composition for parenteral use in the form of lyophilizate with endolysin Download PDFInfo
- Publication number
- RU2792679C1 RU2792679C1 RU2021128274A RU2021128274A RU2792679C1 RU 2792679 C1 RU2792679 C1 RU 2792679C1 RU 2021128274 A RU2021128274 A RU 2021128274A RU 2021128274 A RU2021128274 A RU 2021128274A RU 2792679 C1 RU2792679 C1 RU 2792679C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- endolysin
- pharmaceutical composition
- lysecd7
- smap
- bactericidal
- Prior art date
Links
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 16
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 title description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 11
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims abstract description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 7
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 claims description 5
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000590020 Achromobacter Species 0.000 claims description 3
- 241000020730 Burkholderia cepacia complex Species 0.000 claims description 3
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 claims description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000239110 Staphylococcus virus K Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 1
- SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N D-panthenol Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCCO SNPLKNRPJHDVJA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 235000004866 D-panthenol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011703 D-panthenol Substances 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 208000001860 Eye Infections Diseases 0.000 description 1
- 201000008225 Klebsiella pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010054160 Klebsiella sepsis Diseases 0.000 description 1
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 1
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035717 Pneumonia klebsiella Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 229960003949 dexpanthenol Drugs 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 208000011323 eye infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229960003943 hypromellose Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs
Изобретение относится к медицине, а именно лекарственным средствам, предназначенным для борьбы с инфекциями, вызываемыми грамотрицательными бактериями.SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely medicines intended for combating infections caused by Gram-negative bacteria.
Уровень техникиState of the art
Устойчивость бактерий к существующим антимикробным средствам является одной из основных проблем современности в области здравоохранения. Горизонтальный перенос генов позволяет бактериям быстро приобретать новые механизмы резистентности, что, наряду с неправильным использованием и злоупотреблением антибиотиками среди населения, а также в сельском хозяйстве и промышленности, приводит к появлению штаммов, частично или полностью невосприимчивых к антибиотикам. Всемирная организация здравоохранения обращает особое внимание на патогены группы ESKAPE, к которым относятся Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae и другие представители Enterobacteriaceae. Данные бактерии способны приобретать устойчивость сразу к нескольким антибактериальным средствам и чаще других вызывают опасные для жизни пациентов инфекции, в том числе и внутрибольничные. Перечисленные обстоятельства диктуют актуальность и востребованность разработки новейших средств, обладающих антибактериальными свойствами в отношении данных патогенных микроорганизмов.The resistance of bacteria to existing antimicrobial agents is one of the main problems of our time in the field of public health. Horizontal gene transfer allows bacteria to quickly acquire new mechanisms of resistance, which, along with the misuse and abuse of antibiotics among the population, as well as in agriculture and industry, leads to the emergence of strains that are partially or completely resistant to antibiotics. The World Health Organization pays special attention to the pathogens of the ESKAPE group, which include Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae and other representatives of Enterobacteriaceae. These bacteria are capable of acquiring resistance to several antibacterial agents at once and more often than others cause life-threatening infections in patients, including nosocomial infections. These circumstances dictate the relevance and demand for the development of new products with antibacterial properties in relation to these pathogenic microorganisms.
Из уровня техники из патента RU 2715694 С1 02.03.2020 фармацевтическая композиция для лечения глазных инфекций, вызванных метициллин-устойчивыми штаммами Staphylococcus aureus, включающая в качестве активного начала N-концевой СНАР-домен эндолизина бактериофага K Staphylococcus aureus, при следующем соотношении компонентов в лиофилизованной смеси, мас. % на сухой вес: N-концевой СНАР-домен эндолизина Бактериофага K Staphylococcus aureus 1,9 гипромеллоза 7,5 декспантенол 5,1 натрия хлорид 33,0 бензалкония хлорид 0,6 повидон 30,3 лимонная кислота моногидрат 0,8 двузамещенный натрия фосфат 10,8.From the prior art from patent RU 2715694 C1 02.03.2020 pharmaceutical composition for the treatment of eye infections caused by methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus, including the N-terminal CHAP domain of bacteriophage K Staphylococcus aureus endolysin as an active principle, with the following ratio of components in a lyophilized mixture , wt. % on dry weight: N-terminal CHAP domain of endolysin Bacteriophage K Staphylococcus aureus 1.9 hypromellose 7.5 dexpanthenol 5.1 sodium chloride 33.0 benzalkonium chloride 0.6 povidone 30.3 citric acid monohydrate 0.8 dibasic sodium phosphate 10.8.
Однако известная композиция не обладает антибактериальными свойствами по отношению к грамотрицательным бактериям и не может быть применена для лечения и профилактики инфекций, вызываемых ими. Также указанная композиция не предназначена для парентерального использования, в связи с чем не имеет системного действия.However, the known composition does not have antibacterial properties against gram-negative bacteria and cannot be used for the treatment and prevention of infections caused by them. Also, the specified composition is not intended for parenteral use, and therefore has no systemic effect.
Описание изобретенияDescription of the invention
Заявленная бактерицидная фармацевтическая композиция для парентерального применения в форме лиофилизата имеет следующий состав, мас. %:The claimed bactericidal pharmaceutical composition for parenteral use in the form of a lyophilizate has the following composition, wt. %:
• рекомбинантный модифицированный эндолизин LysECD7-SMAP - 0,1-0,5%,• recombinant modified endolysin LysECD7-SMAP - 0.1-0.5%,
• полоксамер 188 - 0,01%,• poloxamer 188 - 0.01%,
• фосфатный буферный раствор рН=7,5 - 99,49-99,89%.• Phosphate buffer solution pH=7.5 - 99.49-99.89%.
Задачами настоящей фармацевтической композиции для парентерального применения в форме лиофилизата являются лечение и профилактика различных видов системных инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями, чувствительными к действию эндолизина LysECD7-SMAP.The objectives of the present pharmaceutical composition for parenteral use in the form of a lyophilizate are the treatment and prevention of various types of systemic infections caused by gram-negative bacteria sensitive to the action of LysECD7-SMAP endolysin.
В частности, LysECD7-SMAP активен в отношении возбудителей различных инфекций, в том числе обладающих множественной лекарственной устойчивостью, включая Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Achromobacter spp, Burkholderia cepacia complex и Enterobacter spp. Кроме того, возможно применение препаратов на его основе в отношении Staphylococcus aureus и Listeria monocytogenes.In particular, LysECD7-SMAP is active against pathogens of various infections, including those with multidrug resistance, including Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Achromobacter spp, Burkholderia cepacia complex and Enterobacter spp. In addition, it is possible to use preparations based on it against Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes.
Бактерицидное средство - эндолизин - разрушает клеточную стенку грамположительных и грамотрицательных бактерий, вызывая их гибель.The bactericidal agent - endolysin - destroys the cell wall of gram-positive and gram-negative bacteria, causing their death.
Технический результат заключается в использовании фармацевтической композиции, обладающей выраженной специфической фармакологической (антибактериальной) активностью в отношении грамотрицательных бактерий при системном применении, включая бактерии с множественной лекарственной устойчивостью.The technical result consists in the use of a pharmaceutical composition with a pronounced specific pharmacological (antibacterial) activity against gram-negative bacteria when used systemically, including bacteria with multidrug resistance.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Указанный технический результат реализуется за счет определенного состава фармацевтической композиции, а также определенных дозировок ингредиентов, входящих в состав композиции.The specified technical result is realized due to a certain composition of the pharmaceutical composition, as well as certain dosages of the ingredients that make up the composition.
Бактерицидная фармацевтическая композиция для парентерального применения в форме лиофилизата имеет следующий состав, мас. %: рекомбинантный модифицированный эндолизин LysECD7-SMAP - 0,1-0,5%, полоксамер 188 - 0,01%, фосфатный буферный раствор рН=7,5 - 99,49-99,89%.The bactericidal pharmaceutical composition for parenteral use in the form of a lyophilizate has the following composition, wt. %: recombinant modified endolysin LysECD7-SMAP - 0.1-0.5%, poloxamer 188 - 0.01%, phosphate buffer solution pH=7.5 - 99.49-99.89%.
Пример 1Example 1
Действующим веществом в композиции является модифицированный эндолизин LysECD7-SMAP, аминокислотная последовательность которого представлена в перечне аминокислотных последовательностей Seq ID №1.The active substance in the composition is a modified endolysin LysECD7-SMAP, the amino acid sequence of which is presented in the list of amino acid sequences Seq ID No. 1.
Эндолизин получают биотехнологическим путем посредством создания генетической конструкции для экспрессии в штамме Е. coli Bl21(DE3)pLysS. Исходная кодирующая последовательность LysECD7-SMAP была искусственно синтезирована в векторе pALTA-LysECD7-SMAP и интегрирована в экспрессионный вектор рЕТ-42b (+), в результате чего получали плазмиду pET42b-LysECD7-SMAP.Endolysin is produced biotechnologically by creating a genetic construct for expression in E. coli strain Bl21(DE3)pLysS. The original LysECD7-SMAP coding sequence was artificially synthesized in the pALTA-LysECD7-SMAP vector and integrated into the pET-42b (+) expression vector, resulting in the pET42b-LysECD7-SMAP plasmid.
Субстанцию белка получают по следующей технологии: культивирование клеток-продуцентов Е. coli в ферментере с индукцией экспрессии белка, получение растворимых фракций лизатов биомассы клеток продуцента, их трехстадийная хроматографическая очистка (катионообменная хроматография на носителе Capto SP Impres, с последующей двухэтапной гель-эксклюзионной хроматографией на носителях Superdex 75 и Sephadex G25) и концентрирование препарата до концентрации 20 мг/мл.The protein substance is obtained according to the following technology: cultivation of E. coli producer cells in a fermenter with induction of protein expression, obtaining soluble fractions of producer cell biomass lysates, their three-stage chromatographic purification (cation-exchange chromatography on a Capto SP Impres carrier, followed by two-stage gel exclusion chromatography on carriers Superdex 75 and Sephadex G25) and concentrating the drug to a concentration of 20 mg/ml.
Далее для формуляции лекарственного препарата полученную ФС модифицированного эндолизина LysECD7-SMAP разбавляют стерильным раствором PBS, рН 7,5 до конечных концентраций 1 мг/мл, 2,5 мг/мл и 5 мг/мл, а затем смешивают с 10% раствором Полоксамера 188 до концентрации 0,01% и фильтруют с помощью одноразовых фильтрационных систем в асептических условиях. Растворы разливают в стерильные стеклянные флаконы и подвергают лиофильной сушке.Further, to formulate the drug, the obtained PS of the modified endolysin LysECD7-SMAP is diluted with a sterile solution of PBS, pH 7.5 to final concentrations of 1 mg/ml, 2.5 mg/ml and 5 mg/ml, and then mixed with a 10% solution of Poloxamer 188 to a concentration of 0.01% and filtered using disposable filtration systems under aseptic conditions. The solutions are poured into sterile glass vials and freeze-dried.
Пример 2Example 2
Оценка спектра действия и степени антибактериальной активности ГЛФ на основе LysECD7-SMAP проводилась в экспериментах in vitro в отношении широкого спектра различных представителей как грамотрицательных, так и грамположительных бактерий. Каждый вид был представлен 4-5 штаммами или клиническими изолятами с различной степенью устойчивости к антибиотикам. В концентрации 100 мкг/мл эндолизин проявлял бактерицидную активность в отношении 47 штаммов из 59 исследуемых с активностью выше 33,33%).The evaluation of the spectrum of action and the degree of antibacterial activity of GLF based on LysECD7-SMAP was carried out in experiments in vitro against a wide range of different representatives of both gram-negative and gram-positive bacteria. Each species was represented by 4-5 strains or clinical isolates with varying degrees of antibiotic resistance. At a concentration of 100 µg/ml, endolysin exhibited bactericidal activity against 47 strains out of 59 studied with an activity above 33.33%.
При этом спектр активности и эффективность в отношении грамотрицательных штаммов был ожидаемо выше, чем по отношению к грамположительным бактериям. Особенно ярко выраженная активность была отмечена к представителям таких видов как Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Achromobacter spp, Burkholderia cepacia complex и Enterobacter spp, медианное значение антибактериальной активности к ним составляло более 50%, а для двух видов - 100% (фиг. 1).At the same time, the spectrum of activity and efficiency in relation to gram-negative strains was expectedly higher than in relation to gram-positive bacteria. Especially pronounced activity was noted against representatives of such species as Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, Achromobacter spp, Burkholderia cepacia complex and Enterobacter spp, the median value of antibacterial activity to them was more than 50%, and for two species - 100 % (Fig. 1).
Также LysECD7-SMAP проявлял выраженную активность по отношению к грамположительным Staphylococcus aureus и Listeria monocytogenes. Таким образом, в спектр антибактериальной активности модифицированного эндолизина входят практически все представители социально значимой группы патогенных бактерий ESKAPE, а также другие важные возбудители инфекционных заболеваний различной этиологии.LysECD7-SMAP also showed a pronounced activity against Gram-positive Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes. Thus, the spectrum of antibacterial activity of the modified endolysin includes almost all representatives of the socially significant group of pathogenic bacteria ESKAPE, as well as other important pathogens of infectious diseases of various etiologies.
Пример 3Example 3
Самкам мышей линии BALB/c (24-26 г) внутрибрюшинно вводили взвесь клеток штамма K. pneumoniae М9 в дозе 1×103 КОЕ/животное. Спустя 2 часа после заражения внутривенно вводили исследуемую ГЛФ с концентрацией эндолизина 1, 2,5 и 5 мг/мл, плацебо или антибиотики гентамицин и ампициллин в соответствии с планом эксперимента. Лечение проводили ежедневно, 5 дней, 2 раза в сутки. В течение 10 суток за животными проводили наблюдение, учитывали их гибель и ежедневно регистрировали массу тела животных (фиг. 2). На 1, 3 и 7 сутки проводили оценку обсемененности селезенки и легких, а на 1 и 3 сутки - высевы из крови методом бактериологического посева различных разведений крови или гомогенатов органов на плотную питательную среду с дальнейшим культивированием в течение 18 ч при температуре 37°С, проводя подсчет выросших бактериальных колоний.Female mice of the BALB/c line (24-26 g) were intraperitoneally injected with a suspension of cells of the K. pneumoniae M9 strain at a dose of 1×10 3 CFU/animal. 2 hours after infection, the studied GLF was administered intravenously at endolysin concentrations of 1, 2.5 and 5 mg/ml, placebo or antibiotics gentamicin and ampicillin in accordance with the experimental plan. The treatment was carried out daily, 5 days, 2 times a day. Within 10 days, the animals were observed, their death was taken into account, and the body weight of the animals was recorded daily (Fig. 2). On the 1st, 3rd and 7th days, the contamination of the spleen and lungs was assessed, and on the 1st and 3rd days - seeding from the blood by bacteriological seeding of various dilutions of blood or organ homogenates on a solid nutrient medium with further cultivation for 18 hours at a temperature of 37°C, by counting the grown bacterial colonies.
С учетом оценки обсемененности паренхиматозных органов, а также высевов крови животных, двукратное внутривенное ежедневное введении ГЛФ в концентрации 2,5 мг/мл в течение 5 дней показало наибольшую эффективность при лечении бактериального клебсиеллезного сепсиса в изученной модели, при этом, в отдельных случаях, эффективность применения была сопоставима с применением гентамицина, к действию которого клетки модельного штамма чувствительны.Taking into account the assessment of contamination of parenchymal organs, as well as blood cultures of animals, twice intravenous daily administration of GLF at a concentration of 2.5 mg/ml for 5 days showed the greatest effectiveness in the treatment of bacterial Klebsiella sepsis in the studied model, while, in some cases, the effectiveness application was comparable to the use of gentamicin, to which the cells of the model strain are sensitive.
Пример 4Example 4
Самкам мышей линии BALB/c (24-26 г) интраназально вводили взвесь клеток штамма K. pneumoniae М9 в дозе 2×106 КОЕ/животное. Спустя 2 часа после заражения внутривенно вводили исследуемую ГЛФ с концентрацией эндолизина 2,5 мг/мл или плацебо в соответствии с планом эксперимента. Лечение проводили ежедневно, 5 дней, 1 или 2 раза в сутки. В течение 10 суток за животными проводили наблюдение, учитывали их гибель и ежедневно регистрировали массу тела животных. На 1, 3 и 7 сутки проводили оценку обсемененности селезенки и легких, а на 1 и 3 сутки - высевы из крови методом бактериологического посева различных разведений крови или гомогенатов органов на плотную питательную среду с дальнейшим культивированием в течение 18 ч при температуре 37°С, проводя подсчет выросших бактериальных колоний.Female mice of the BALB/c line (24-26 g) were intranasally injected with a suspension of cells of the K. pneumoniae M9 strain at a dose of 2×10 6 CFU/animal. 2 hours after infection, the studied GLF was administered intravenously at a concentration of endolysin 2.5 mg/ml or placebo in accordance with the experimental plan. The treatment was carried out daily, 5 days, 1 or 2 times a day. Within 10 days, the animals were observed, their death was taken into account, and the body weight of the animals was recorded daily. On the 1st, 3rd and 7th days, the contamination of the spleen and lungs was assessed, and on the 1st and 3rd days - seeding from the blood by bacteriological seeding of various dilutions of blood or organ homogenates on a solid nutrient medium with further cultivation for 18 hours at a temperature of 37°C, by counting the grown bacterial colonies.
В ходе проведенного исследования было показано, что при лечении клебсиеллезной пневмонии ГЛФ на основе модифицированного эндолизина LysECD7-SMAP в концентрациях 1, 2,5 и 5 мг/мл, выживаемость испытуемых мышей линии BALB/c значимо повышается при двукратном внутривенном ежедневном лечении. Кроме того, показано снижение обсемененности легких при введении препарата в дозе 2,5 мг/мл в течение 5 дней.In the course of the study, it was shown that in the treatment of Klebsiella pneumonia with GLF based on modified endolysin LysECD7-SMAP at concentrations of 1, 2.5 and 5 mg/ml, the survival rate of the tested mice of the BALB/c line significantly increases with twice daily intravenous treatment. In addition, a decrease in the contamination of the lungs with the introduction of the drug at a dose of 2.5 mg/ml for 5 days is shown.
Заявленная фармацевтическая композиция может быть получена специалистом на практике и при ее использовании обеспечивает реализацию заявленного назначения. Возможность осуществления на практике следует из того, что для каждого ингредиента, включенного в формулу изобретения на основании описания, известен материальный эквивалент, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «промышленная применимость» для изобретения и критерию «полнота раскрытия» для изобретения.The claimed pharmaceutical composition can be obtained by a specialist in practice and, when used, ensures the implementation of the claimed purpose. The possibility of implementation in practice follows from the fact that for each ingredient included in the claims based on the description, a material equivalent is known, which allows us to conclude that the criterion "industrial applicability" for the invention and the criterion "complete disclosure" for the invention.
ПЕРЕЧЕНЬ АМИНОКИСЛОТНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙAMINO ACID SEQUENCE LISTING
Seq ID №1
MFKLSQRSKD RLVGVHPDLV KVVHRALELT PVDFGITEGV RSLETQKKYV AEGKSKTMKS 60 MFKLSQRSKD RLVGVHPDLV KVVHRALELT PVDFGITEGV RSLETQKKYV AEGKSKTMKS 60
RHLHGLAVDV VAYPKDKDTW NMKYYRMIAD AFKQAGRELG VSVEWGGDWV SFKDGVHFQL 120 RHLHGLAVDV VAYPKDKDTW NMKYYRMIAD AFKQAGRELG VSVEWGGDWV SFKDGVHFQL 120
PHSKYPDPKL ERKLRRLKRK IAHKVKKY 148PHSKYPDPKL ERKLRRLKRK IAHKVKKY 148
Claims (8)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2792679C1 true RU2792679C1 (en) | 2023-03-23 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2829504C1 (en) * | 2024-04-26 | 2024-10-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | RECOMBINANT PLASMID DNA pQE-60_LysSte134, PROVIDING SYNTHESIS OF RECOMBINANT PROTEIN LysSte134, BACTERIAL STRAIN ESCHERICHIA COLI - PRODUCER OF RECOMBINANT PROTEIN LysSte134 AND RECOMBINANT PROTEIN LysSte134, HAVING ANTIBACTERIAL ACTION |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2250101C2 (en) * | 2000-02-29 | 2005-04-20 | Меилор Фармасьютикалз Лимитед | Anesthetizing formulas |
| RU2715694C1 (en) * | 2019-04-08 | 2020-03-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Pharmaceutical composition for treating eye infections caused by meticillin-resistant strains of staphylococcus aureus, which includes as active ingredient n-terminal chap-domain of endolysin of bacteriophage k staphylococcus aureus |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2250101C2 (en) * | 2000-02-29 | 2005-04-20 | Меилор Фармасьютикалз Лимитед | Anesthetizing formulas |
| RU2715694C1 (en) * | 2019-04-08 | 2020-03-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) | Pharmaceutical composition for treating eye infections caused by meticillin-resistant strains of staphylococcus aureus, which includes as active ingredient n-terminal chap-domain of endolysin of bacteriophage k staphylococcus aureus |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ANTONOVA N.P. et al, "Broad bactericidal activity of the myoviridae bacteriophage lysisns LysAm24, LysECD7, and LysSi3 against gram-negative eskape pathogens"; Research Gate, Viruses, 2019, N. 11, 284, p.1-16. ANTONOVA N.P. et al, "Modulation of endolysin Lys ECD7 bactericidal activity by different peptide tag fusion"; Biomolecules, 2020, N.10, p.440. * |
| ВОРОБЬЕВ А.М. и др. "Перспективы применения рекомбинантных белков бактериофагов для терапии инфекций, вызванных полурезистентными бактериями"; Материалы Всероссийской научно-практической интернет-конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора с международным участием"; Пермь, 5-9 октября 2020, с.190, 191. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2829504C1 (en) * | 2024-04-26 | 2024-10-30 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | RECOMBINANT PLASMID DNA pQE-60_LysSte134, PROVIDING SYNTHESIS OF RECOMBINANT PROTEIN LysSte134, BACTERIAL STRAIN ESCHERICHIA COLI - PRODUCER OF RECOMBINANT PROTEIN LysSte134 AND RECOMBINANT PROTEIN LysSte134, HAVING ANTIBACTERIAL ACTION |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8629100B2 (en) | Method of inhibiting clostridium difficile by administration of oritavancin | |
| CN102871996A (en) | Antibiotic composition and application thereof | |
| MX2007010129A (en) | ??-cyclodextrin derivatives as antibacterial agents. | |
| OA10059A (en) | Compositions and methods for treating infections caused by organisms sensitive to beta-lactam antibiotics | |
| JP2008540507A (en) | Pharmaceutical composition comprising an antibacterial agent and an active ingredient selected from carveol, thymol, eugenol, borneol and carvacrol | |
| CN114181293A (en) | Humanized antibacterial peptide LL-37 modified body and application thereof | |
| KR101700603B1 (en) | An anti-microbial peptide, Periplanetasin-1 isolated from Periplaneta americana and its synthetic composition | |
| US5834424A (en) | Use of lactoferrin for therapy of acute of chronic infectious diseases by the intracellular gram-positive pathogens streptococcus pyogenes and staphylococcus aureus | |
| EP0563844B1 (en) | Antimicrobial compositions and pharmaceutical preparations thereof | |
| Thankappan et al. | In vitro and in vivo antimicrobial activity of self-assembled melittin nanoparticles: A comparative study with melittin peptide | |
| CN103920137A (en) | Pharmaceutical composition having effect of resisting drug-tolerant gram positive bacteria | |
| ES2690725T3 (en) | Compositions comprising cefepime and tazobactam | |
| RU2628312C2 (en) | Antibacterial composition for prevention or treatment of hospital infections (versions), bacteriophage stamps used to obtain such composition | |
| RU2792679C1 (en) | Bactericidal pharmaceutical composition for parenteral use in the form of lyophilizate with endolysin | |
| KR101686428B1 (en) | An anti-microbial peptide, Periplanetasin-2 isolated from Periplaneta americana and its synthetic composition | |
| KR20180125866A (en) | Antimicrobial composition | |
| US20070264247A1 (en) | Use of Human Lysozyme in Preparation of Medicine for Treating Acne | |
| KR20150038611A (en) | Combinations with a backbone-cyclized peptide | |
| Baumgartner et al. | Comparative imipenem treatment of Staphylococcus aureus endocarditis in the rat | |
| CN114149483A (en) | Antibacterial peptide composition and application thereof | |
| EP3270925B1 (en) | Antibacterial compositions | |
| RU2813626C1 (en) | Modified endolysin and antibacterial compositions based thereon for treating infections caused by acinetobacter baumannii, pseudomonas aeruginosa, klebsiella pneumoniae, escherichia coli bacteria | |
| PL241880B1 (en) | Lipopeptides, pharmaceutical composition, cosmetic composition, and lipopeptides for use as medicine | |
| KR102381481B1 (en) | Novel Antimicrobial Peptides Or Peptide Analogues And Use Thereof | |
| WO2014167160A1 (en) | Peptide compounds suitable for use as antibiotic agents |