RU2791519C1 - Способ проведения ПЦР с аллель-специфичными зондами для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина - Google Patents
Способ проведения ПЦР с аллель-специфичными зондами для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2791519C1 RU2791519C1 RU2021132788A RU2021132788A RU2791519C1 RU 2791519 C1 RU2791519 C1 RU 2791519C1 RU 2021132788 A RU2021132788 A RU 2021132788A RU 2021132788 A RU2021132788 A RU 2021132788A RU 2791519 C1 RU2791519 C1 RU 2791519C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- allele
- kappa
- csn3
- alleles
- cattle
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 title claims abstract description 28
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 title claims abstract description 21
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 title claims abstract description 15
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 101001024425 Mus musculus Ig gamma-2A chain C region secreted form Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 7
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 abstract description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 9
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 6
- 235000021246 κ-casein Nutrition 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 101000761239 Bos taurus Kappa-casein Proteins 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 101150051397 csn3 gene Proteins 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 3
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007799 cork Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 235000021248 S1-casein Nutrition 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 244000144980 herd Species 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229940108461 rennet Drugs 0.000 description 1
- 108010058314 rennet Proteins 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики, генетики и селекции сельскохозяйственных животных, в частности к оценке аллельного полиморфизма гена, каппа-казеина (CSN3) крупного рогатого скота молекулярно-генетическим методом исследования. Предложен способ проведения ПЦР с аллель-специфичными зондами для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина. В способе используют: прямой общий праймер CSN3-RT-F-114 с нуклеотидной последовательностью 5'-agagcccacctgagatcaac-3'; обратный общий праймер CSN3-RT-R-114 с нуклеотидной последовательностью 5'-tcttggctgttattcattttgc-3'; В-аллель-специфичный флуоресцентно-меченый зонд Probe 1 с нуклеотидной последовательностью FAM-caactgcggtctaaatactctaaggag-BHQ1; А-аллель-специфичный флуоресцентно-меченый зонд Probe 2 с нуклеотидной последовательностью HEX-caactgcagtctaaaaactctaaggag-BHQ1. Изобретение позволяет расширить арсенал способов генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина (CSN3) на основе ПЦР в реальном времени и повышение их надежности. 3 ил.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики, генетики и селекции сельскохозяйственных животных, в частности к оценке аллельного полиморфизма гена, каппа-казеина (CSN3) крупного рогатого скота молекулярно-генетическим методом исследования.
Каппа-казеин - белок молока, который отвечает за взаимодействие с сычужным ферментом и образование казеинового сгустка, тем самым являясь основным белком для сыроварения. От конформационной структуры данного белка зависит качество сыродельческой продукции и общий выход сыра и, соответственно, количество используемого сырья для его производства. Белок входящий в состав молока полученного от коров с гомозиготным генотипом ВВ гена каппа-казеина, обладает лучшими коагуляционными свойствами, что сказывается на сокращении времени образования казеинового сгустка на 24% и повышении общего выхода сыра из данного молока на 10% [Ng-Kwai Hang, K.F. Genetic variants of milk proteins and cheese yield / K.F. Ng-Kwai Hang // IDF Seminar Cheese yield and factors affecting its control. - Cork. - 1993. - P. 160-166]. Знание информации о генотипе животного по данному гену, позволит производителям молока формировать стада животных для получения узконаправленной продукции.
Ген каппа-казеина (CSN3) располагается в 6 хромосоме и на текущий момент имеет 13 аллелей, из которых А и В являются самыми часто встречаемыми [Grosclaude, F. Deterministe genetique des caseines kappa du lait de vasche; etroite liaison du locus kappa-casein avec les loci alfa S1-casein et beta-casein / F. Grosclaude, [et al.] // Comptes rendus de I academic des Sciences. - 1965. - P. 5299]. Основой, влияющей на технологические свойства белка каппа-казеина, являются замены в поз. 136 и 148 белковой цепи IV экзона. Это замена аминокислоты треонин (аллель А) на изолейцин (аллель В) вследствие нуклеотидной замены (SNP) С>Т и аспаргина на аланин вследствие нуклеотидной замены А>С в позициях 136 и 148, соответственно [Robitaille,G., Britten, M., Morisset, J. and Petitclerc, D. // Polymorphism in the bovine kappa-casein (CSN3) gene and the 5'-flanking region: sequence analysis of CSN3 A and В alleles// Anim. Genet. 36 (2), 184-185 (2005)]. При этом, по данным базы данных NCBI в IV экзоне имеются еще 2 синонимические мутации (SNP), отличающие аллель А от аллеля В, одна из которых, позиция 168 A>G (А1а>А1а) подтверждена Федерацией разведения крупного рогатого скота Ирландии [Matthew McClure, Jennifer McClure, //Genetic Disease and Trait Information for IDB Genotyped Animals in Ireland//ICBF, Highfield House, Shinagh, Bandon, Co. Cork, 2016].
Известен способ (прототип) проведения ПЦР в реальном времени для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена CSN3 (патент РФ №2701648, опубликован 01.10.2019). Согласно прототипу, способ проведения ПЦР в реальном времени для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена CSN3, состоит в том, что используют 5'-флуоресцентно-меченый прямой А-аллель-специфический праймер CSN3-A: 5'-FAM-ACTGTAGCTACTCTAGACGA-3', 5'-флуоресцентно-меченый прямой В-аллель-специфический праймер CSN3-B: 5-VIC-ACTGTAGCTACTCTAGATGC-3', обратный общий праймер CSN3-R: 5'-GCTCTCAATAACTTCTGGAGAA-3', анти-праймер CSN3-S, меченый гасителем флуоресценции с 3'-конца олигонуклеотида: 5'-TCTAGAGTAGCTACAGT-3'-BHQ1. В данном методе проведения ПЦР в реальном времени используются аллельспецифичные праймеры, которые имеют аллельспецифичный нуклеотид на 3' конце и мечены с 5' конца флюоресцентной краской, а также два дополнительных праймера, один из которых мечен флюоресцентным гасителем. В результате в данном способе аллельспецифичные праймеры подобраны к одной SNP в позиции 136 белковой цепи IV экзона.
Недостатком данного метода можно обозначить использование в реакции аллель-специфичных праймеров, которые при использовании неоптимальных условий проведения реакции способны неспецифично отжигаться на матрице ДНК, что может приводить к получению ложноположительных результатов и снижению надежности способа.
Техническим результатом патентуемого способа является расширение арсенала способов генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина (CSN3) на основе ПЦР в реальном времени и повышение их надежности.
Технический результат достигается тем, что способ проведения ПЦР с аллель-специфичными зондами для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина отличается тем, что используются:
- прямой общий праймер CSN3-RT-F-114: 5'-agagcccacctgagatcaac-3'
- обратный общий праймер CSN3-RT-R-114: 5'-tcttggctgttattcattttgc-3'
- В-аллель-специфичный флуоресцентно-меченый зонд Probe 1: FAM-caactgcggtctaaatactctaaggag-BHQ1
- А-аллель-специфичный флуоресцентно-меченый зонд Probe 2: HEX-caactgcagtctaaaaactctaaggag-BHQ1
Перечень графических материалов.
На фиг. 1 представлена схема расположения праймеров и ДНК-зондов в IV экзоне гена каппа-казеина (CSN3). Внешними границами отмечены последовательности праймеров. Жирным шрифтом отмечены последовательности зондов.
На фиг. 2 представлен результат ПЦР "в реальном времени" с применяемыми праймерами и ДНК-зондами.
На фиг. 3 представлена диаграмма распределения аллелей А и В в гене CSN3: по каналу HEX (ось Y, синие маркеры) результат исследования гомозиготного образца по аллелю А (генотип АА); по каналу FAM (ось X, оранжевый маркер) - результат исследования гомозиготного образца по аллелю В (генотип ВВ); в середине диаграммы (зеленые маркеры) - результат исследования гетерозиготного образца АВ; черные маркеры - отрицательный образец.
Патентуемый способ заключается в проведении ПЦР в реальном времени для генотипирования крупного рогатого скота по аллельным вариантам А/В гена каппа-казеина (CSN3). Заявленный способ отличается тем, что используются два общих для аллельных вариантов праймера: прямой общий праймер CSN3-RT-F-114: 5'-agagcccacctgagatcaac-3' и обратный общий праймер CSN3-RT-R-114: 5'-tcttggctgttattcattttgc-3' фланкирующие участок гена каппа-казеина длиной 114 п. н., и два аллель-специфичных флуоресцентно-меченых зонда типа TaqMan: Probe 1: FAM-caactgcggtctaaatactctaaggag-BHQ1 и Probe 2: HEX-caactgcagtctaaaaactctaaggag-BHQ1 (фиг. 1).
В отличие от прототипа (патент на изобретение 2701648 опубл. 01.10.2019), в заявленном изобретении точки мутации и детекция конечного результата иные: патентуемый способ осуществляется с помощью двух аллель-специфичных TaqMan зондов подобраных к участку IV экзона гена каппа-казеина, содержащего 2 синонимические мутации (SNP), располагающиеся на расстоянии друг от друга в 8 п.о., и отличающиеся друг от друга двумя mismatch-нуклеотидами. Использование данной конструкции олигонуклеотидных ДНК-зондов приводит к большей разнице в температурах плавления между mismatch и комплементарным ДНК-зондом и усилению конкурентных условий при одновременном присутствии обоих ДНК-зондов в реакционной смеси, что приводит к полному ингибированию неспецифического связывания олигонуклеотидных зондов.
Также в патентуемом способе используются контрольные материалы, искусственно сконструированные на основе плазмиды рЕТ-23b (+) и имеющие в своем составе участок гена каппа-казеина крупного рогатого скота, гомологичного к разработанным ДНК-зондам и олигонуклеотидным праймерам. Проводят выделение ДНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием указанных олигонуклеотидных праймеров и ДНК-зондов. Реакционную смесь для ПЦР готовят из расчета количества имеющихся образцов и дополнительно контрольные образцы в количестве 4 шт.: отрицательный, положительный с генотипом АА, положительный с генотипом АВ, положительный с генотипом ВВ. Смешанные реактивы содержащие 50 мМ KCl, 50 мМ TPIS-HCl, 200 нМ dNTP, 2,5 мМ MgCl2, праймеры (в концентрации 0,2 рМ/мкл), аллель-специфические зонды (в концентрации 0,1 рМ/мкл), разливают в ПЦР-пробирки или ПЦР-планшеты объемом 0,2 мл в количестве 19 мкл и добавляют 1 мкл выделенной ДНК или контрольных образцов. Пробирки помещают в амплификатор с функцией «real-time». Для анализа используется следующий протокол:
инициация: 37°С - 5 минут,
предварительная денатурация: 94°С - 5 минут,
цикл из 40 повторов,
денатурация: 94°С - 15 секунд,
совмещенный отжиг и элонгация: 60°С - 1 минута,
считывание уровня флюоресценции каждый цикл по окончанию этапа отжига и элонгации.
Интерпретация результатов осуществляется на основании пересечения кривой флюоресценции в соответствующих каналах детекции с пороговой линией и по конечному уровню флюоресценции. Пересечение пороговой линии и величина уровня флюоресценции в пределах 25-29 и 1200-1800, соответственно, в канале FAM и отсутствие в канале HEX, интерпретируется как гомозигота ВВ. Пересечение пороговой линии и величина уровня флюоресценции в пределах 22-27 и 1800-2300, соответственно, в канале HEX и отсутствие в канале FAM, интерпретируется как гомозигота АА. Пересечение пороговой линии и величина уровня флюоресценции в пределах 24-30 и 900-1500, соответственно, в обоих каналах, интерпретируется как гетерозигота АВ (фиг 2, 3).
Разработанный нами способ был апробирован на 250 образцах ДНК коров черно-пестрого голштинизированного скота. По результатам генотипирования 22% животных являлись гетерозиготами (генотип АВ), 68,8% - гомозиготами по аллелю А (генотип АА) и 9,2% животных - гомозитотами по аллелю В (генотип ВВ). Валидацию способа проводили с помощью классического метода ПЦР-ПДРФ анализа для диагностики аллельного полиморфизма гена каппа-казеина, основаного на применении рестриктазы Hinfl (Medrano, J.F. Genotyping of bovine kappa-casein loci following DNA sequence amplification / J.F. Medrano, E. Aguilar-Cordova // Bio. Technology. - 1990. - V.8. - P. 144-145). Результаты обоих способов генотипирования полностью совпали. На той же выборке патентуемый способ сравнивали со способом по прототипу: для 245-ти образцов результаты обоих способов и результаты ПЦР-ПДРФ анализа совпали. Пять образца с генотипом АВ определялись по методу прототипа как АА (ошибка составила 2%).
Таким образом, по результатам практических исследований, направленных на апробацию заявляемого способа, нами получен обеспечиваемый этим способом технический результат, выраженный в способности дифференциации аллельного полиморфизма гена каппа-казеина крупного рогатого скота (идентификация генотипов АА, ВВ, АВ).
Предлагаемое изобретение позволит перерабатывающим предприятиям повысить собственную производительность и снизить себестоимость конечной продукции, что позволит увеличить оборот на 20%.
Claims (6)
- Способ проведения ПЦР с аллель-специфичными зондами для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина, отличающийся тем, что используются:
- - прямой общий праймер CSN3-RT-F-114: 5'-agagcccacctgagatcaac-3',
- - обратный общий праймер CSN3-RT-R-114: 5'-tcttggctgttattcattttgc-3',
- - В-аллель-специфичный флуоресцентно-меченый зонд Probe 1: FAM-caactgcggtctaaatactctaaggag-BHQ1,
- - А-аллель-специфичный флуоресцентно-меченый зонд Probe 2: HEX-caactgcagtctaaaaactctaaggag-BHQ1,
- при этом пересечение пороговой линии и величина уровня флюоресценции в пределах 25-29 и 1200-1800, соответственно, в канале FAM и отсутствие в канале HEX интерпретируется как гомозигота ВВ; пересечение пороговой линии и величина уровня флюоресценции в пределах 22-27 и 1800-2300, соответственно, в канале HEX и отсутствие в канале FAM интерпретируется как гомозигота АА, пересечение пороховой линии и величина уровня флюоресценции в пределах 24-30 и 900-1500, соответственно, в обоих каналах интерпретируется как гетерозигота АВ.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2791519C1 true RU2791519C1 (ru) | 2023-03-09 |
Family
ID=
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2337141C2 (ru) * | 2006-09-25 | 2008-10-27 | Рамиль Ришадович Вафин | Способ проведения аллель-специфичной пцр для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям а и в гена каппа-казеина |
| RU2701648C2 (ru) * | 2018-02-19 | 2019-10-01 | Рамиль Ришадович Вафин | Способ проведения ПЦР в реальном времени для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена CSN3 |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2337141C2 (ru) * | 2006-09-25 | 2008-10-27 | Рамиль Ришадович Вафин | Способ проведения аллель-специфичной пцр для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям а и в гена каппа-казеина |
| RU2701648C2 (ru) * | 2018-02-19 | 2019-10-01 | Рамиль Ришадович Вафин | Способ проведения ПЦР в реальном времени для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена CSN3 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MEDRANO, J.F., et al., Genotyping of bovine kappa-casein loci following DNA sequence amplification Bio. Technology, 1990, v.8, p. 144-145. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2010200649B2 (en) | Leptin promoter polymorphisms and uses thereof | |
| EP2310528B1 (en) | A genetic marker test for brachyspina and fertility in cattle | |
| CN101215607B (zh) | 一种检测鸡蛋鱼腥味突变等位基因的方法及其试剂盒 | |
| RU2791519C1 (ru) | Способ проведения ПЦР с аллель-специфичными зондами для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина | |
| US20170058362A1 (en) | Method of identifying the presence of foreign alleles in a desired haplotype | |
| RU2788734C2 (ru) | Набор последовательностей праймеров и аллель-специфических зондов для дифференциации аллелей каппа-казеина у крупного рогатого скота | |
| MX2007008623A (es) | Marcadores de adn para el crecimiento de ganado. | |
| Kyseľová et al. | Simultaneous identification of CSN3 and LGB genotypes in cattle by high-resolution melting curve analysis | |
| CN117402977A (zh) | 一种基于acox2基因snp标记检测奶牛产奶性状的方法及应用 | |
| KR20130128603A (ko) | 한우의 육량 판정용 단일염기다형 및 이를 이용한 한우의 육량 판정 방법 | |
| US20060275793A1 (en) | Association between markers in the leptin gene and carcass traits in commercial feedlot steer and heifers | |
| Ladyka et al. | Study of beta-casein gene polymorphism in dairy cattle populations of Ukraine | |
| KR102001528B1 (ko) | 한국 재래돼지 식별용 유전자 마커 및 이의 용도 | |
| RU2646140C1 (ru) | Набор последовательности праймеров и аллельспецифических зондов для одновременной генодиагностики четырех мутантных аллелей каппа-казеина у крупного рогатого скота | |
| US20250098650A1 (en) | Selection method for domestic animal breeding | |
| KR101845711B1 (ko) | Ociad2 유전자 유래의 유전체 각인 판별용 snp 마커 및 이를 이용한 판별 방법 | |
| US20070026404A1 (en) | Production characteristics of cattle | |
| US8101354B2 (en) | Method for screening for a tobiano coat color genotype | |
| RU2734964C1 (ru) | Способ определения продуктивности коров крупного рогатого скота по полиморфизму в гене lep | |
| Santana et al. | High-resolution melting (HRM) method for genotyping Kappa-Casein (CSN3) alleles in buffaloes | |
| Viitala | Identification of genes controlling milk production in dairy cattle: Doctoral Dissertation | |
| RU2691995C2 (ru) | Способ одновременной генодиагностики четырех мутантных аллелей каппа-казеина у крупного рогатого скота и тест-система для его осуществления | |
| Remus-Alexandru et al. | Analysis of Beta-Lactoglobulin and Kappa-Casein genotypes in cattle | |
| CN117417990A (zh) | 一种鉴定奶牛产奶量、乳脂量和乳蛋白量的方法 |