RU2767532C1 - Peptide having bronchoprotective action, pharmaceutical composition based thereon and method for use thereof - Google Patents
Peptide having bronchoprotective action, pharmaceutical composition based thereon and method for use thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2767532C1 RU2767532C1 RU2021115142A RU2021115142A RU2767532C1 RU 2767532 C1 RU2767532 C1 RU 2767532C1 RU 2021115142 A RU2021115142 A RU 2021115142A RU 2021115142 A RU2021115142 A RU 2021115142A RU 2767532 C1 RU2767532 C1 RU 2767532C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- asp
- pro
- bronchial mucosa
- cells
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 21
- 230000000178 bronchoprotective effect Effects 0.000 title description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims abstract description 42
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 claims abstract description 29
- SYTKSRDPWIKBJF-WDSKDSINSA-N N[C@@H](CC(=O)N1[C@H](C(=O)O)CCC1)C(=O)O Chemical compound N[C@@H](CC(=O)N1[C@H](C(=O)O)CCC1)C(=O)O SYTKSRDPWIKBJF-WDSKDSINSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 6
- 206010006458 Bronchitis chronic Diseases 0.000 abstract description 27
- 208000007451 chronic bronchitis Diseases 0.000 abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 10
- 230000009993 protective function Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 24
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 6
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 6
- 108010008951 Chemokine CXCL12 Proteins 0.000 description 5
- 102000006573 Chemokine CXCL12 Human genes 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 4
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 4
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- XYXYXSKSTZAEJW-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 XYXYXSKSTZAEJW-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 3
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 3
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- HGXFFTIKNYSXPL-IBGZPJMESA-N (2s)-2-benzyl-2-(phenylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C([C@@](CC(=O)O)(NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 HGXFFTIKNYSXPL-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 2
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 2
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000003172 expectorant agent Substances 0.000 description 2
- -1 fluoroquinolones Chemical class 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 230000000510 mucolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 244000208874 Althaea officinalis Species 0.000 description 1
- 235000006576 Althaea officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000009079 Bronchial Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000014181 Bronchial disease Diseases 0.000 description 1
- 206010006440 Bronchial obstruction Diseases 0.000 description 1
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 241000288140 Gruiformes Species 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 235000013628 Lantana involucrata Nutrition 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 235000006677 Monarda citriodora ssp. austromontana Nutrition 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 240000007673 Origanum vulgare Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 238000011869 Shapiro-Wilk test Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 240000000377 Tussilago farfara Species 0.000 description 1
- 235000004869 Tussilago farfara Nutrition 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N albuterol Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005174 ambroxol Drugs 0.000 description 1
- JBDGDEWWOUBZPM-XYPYZODXSA-N ambroxol Chemical compound NC1=C(Br)C=C(Br)C=C1CN[C@@H]1CC[C@@H](O)CC1 JBDGDEWWOUBZPM-XYPYZODXSA-N 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002555 auscultation Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- TXHIDIHEXDFONW-UHFFFAOYSA-N benzene;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.C1=CC=CC=C1 TXHIDIHEXDFONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVCLBQFBKZQOAF-NSHDSACASA-N benzyl (2s)-pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound O=C([C@H]1NCCC1)OCC1=CC=CC=C1 VVCLBQFBKZQOAF-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- SHHQVKBVIDNTGA-MERQFXBCSA-N benzyl (2s)-pyrrolidine-2-carboxylate;4-methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1.O=C([C@H]1NCCC1)OCC1=CC=CC=C1 SHHQVKBVIDNTGA-MERQFXBCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229960003870 bromhexine Drugs 0.000 description 1
- OJGDCBLYJGHCIH-UHFFFAOYSA-N bromhexine Chemical compound C1CCCCC1N(C)CC1=CC(Br)=CC(Br)=C1N OJGDCBLYJGHCIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 230000003182 bronchodilatating effect Effects 0.000 description 1
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 1
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 206010013663 drug dependence Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 229940066493 expectorants Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229940124307 fluoroquinolone Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000002398 geroprotective effect Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 208000030208 low-grade fever Diseases 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 description 1
- 235000001035 marshmallow Nutrition 0.000 description 1
- XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N methyluracil Natural products CN1C=CC(=O)NC1=O XBCXJKGHPABGSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 1
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 1
- 229940066491 mucolytics Drugs 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 206010037833 rales Diseases 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 229960002052 salbutamol Drugs 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000019116 sleep disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022925 sleep disturbance Diseases 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000035900 sweating Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/05—Dipeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и фармацевтики, а именно к лекарственным средствам для улучшения функциональной активности клеток слизистой оболочки бронхов при хроническом бронхите. Изобретение может быть использовано как средство, снижающее апоптоз и активирующее пролиферацию и защитные функции клеток слизистой оболочки бронхов. Группа изобретений обеспечивает применение пептида β-аспартил-пролина в качестве средства для улучшения функциональной активности клеток слизистой оболочки бронхов, а также применения этого пептида для изготовления фармацевтической композиции, которая может использоваться в качестве средства дополнительной терапии при лечении хронического бронхита.The invention relates to the field of biotechnology and pharmaceuticals, namely to medicines for improving the functional activity of cells of the bronchial mucosa in chronic bronchitis. The invention can be used as a means of reducing apoptosis and activating the proliferation and protective functions of cells of the bronchial mucosa. EFFECT: group of inventions provides the use of β-aspartyl-proline peptide as a means for improving the functional activity of cells of the bronchial mucosa, as well as the use of this peptide for the manufacture of a pharmaceutical composition that can be used as an additional therapy in the treatment of chronic bronchitis.
Изобретение относится к лекарственным средствам, улучшающим функциональную активность клеток слизистой оболочки бронхов при хроническом бронхите. The invention relates to drugs that improve the functional activity of cells of the bronchial mucosa in chronic bronchitis.
Хронический бронхит – диффузный прогрессирующий воспалительный процесс в бронхах, приводящий к морфологической перестройке бронхиальной стенки и перибронхиальной ткани. Обострения хронического бронхита возникают несколько раз в год и протекают с усилением кашля, выделением гнойной мокроты, одышкой, бронхиальной обструкцией, субфебрилитетом. Хронический бронхит является наиболее распространенным заболеванием из группы хронических неспецифических заболеваний легких (ХНЗЛ). В структуре ХНЗЛ хронический бронхит составляет около 90%. Распространенность хронического бронхита в России колеблется от 10% до 20%, а рост заболеваемости ХНЗЛ составляет 6-7% в год. Фармакотерапия хронического бронхита включает назначение противомикробных, муколитических, бронходилатирующих, иммуномодулирующих препаратов, обладающих побочными эффектами и вызывающих аллергические реакции [Федосеев Г.Б., Трофимов Б.И., Рогачева Н.Н., Разумовская Т.С. Роль нейтрофилов и бактериальной инфекции респираторного тракта у больных бронхиальной астмой и хронической обструктивной болезнью легких // Российский аллергологический журнал. 2011. № 2. С. 34-43]. Для проведения антибактериальной терапии используются пенициллины, макролиды, цефалоспорины, фторхинолоны, тетрациклины - внутрь, парентерально или эндобронхиально. Одними из самых распространенных антибиотиков для лечения хронического бронхита являются Амосин, Амоксициллин и Кларитромицин. При трудноотделяемой вязкой мокроте применяются муколитические и отхаркивающие средства (Амброксол, Ацетилцистеин и др.). С целью купирования бронхоспазма при хроническом бронхите показаны бронхолитики (Эуфиллин, Теофиллин, Салбутамол). Обязателен прием иммунорегулирующих средств (Левамизол, Метилурацил). Кроме того, общепринятая тактика лечения хронического бронхита часто не может быть применима вследствие наличия сопутствующих заболеваний [Чучалин А.Г. Хроническая обструктивная болезнь легких и сопутствующие заболевания //Пульмонология. - 2008. - № 2. - С. 5-14; Чучалин А.Г., Цой А.Н., Архипов В.В. Диагностика и лечение пневмоний с позиций медицины доказательств// Врачебный консилиум. 2002. Т. 4. № 12. С. 620-626; Справочник лекарственных средств VIDAL (рег. №: П N012626/01 от 23.08.10) http://www.vidal.ru/]. Chronic bronchitis is a diffuse progressive inflammatory process in the bronchi, leading to morphological restructuring of the bronchial wall and peribronchial tissue. Exacerbations of chronic bronchitis occur several times a year and occur with increased cough, purulent sputum, shortness of breath, bronchial obstruction, low-grade fever. Chronic bronchitis is the most common chronic nonspecific lung disease (COPD). In the structure of COPD, chronic bronchitis is about 90%. The prevalence of chronic bronchitis in Russia ranges from 10% to 20%, and the increase in the incidence of COPD is 6-7% per year. Pharmacotherapy of chronic bronchitis includes the appointment of antimicrobial, mucolytic, bronchodilatory, immunomodulatory drugs that have side effects and cause allergic reactions [Fedoseev G.B., Trofimov B.I., Rogacheva N.N., Razumovskaya T.S. The role of neutrophils and bacterial infection of the respiratory tract in patients with bronchial asthma and chronic obstructive pulmonary disease // Russian Allergological Journal. 2011. No. 2. S. 34-43]. For antibacterial therapy, penicillins, macrolides, cephalosporins, fluoroquinolones, tetracyclines are used orally, parenterally or endobronchially. Some of the most common antibiotics for the treatment of chronic bronchitis are Amosin, Amoxicillin and Clarithromycin. With difficult-to-separate viscous sputum, mucolytic and expectorant agents are used (Ambroxol, Acetylcysteine, etc.). In order to stop bronchospasm in chronic bronchitis, bronchodilators are indicated (Eufillin, Theophylline, Salbutamol). It is mandatory to take immunoregulatory agents (Levamisole, Methyluracil). In addition, the generally accepted tactics for the treatment of chronic bronchitis often cannot be applied due to the presence of concomitant diseases [Chuchalin A.G. Chronic obstructive pulmonary disease and concomitant diseases // Pulmonology. - 2008. - No. 2. - S. 5-14; Chuchalin A.G., Tsoi A.N., Arkhipov V.V. Diagnosis and treatment of pneumonia from the standpoint of evidence medicine// Medical consultation. 2002. V. 4. No. 12. S. 620-626; Directory of VIDAL medicines (registration number: P N012626/01 dated 08.23.10) http://www.vidal.ru/ ].
Пептид β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH обладает направленным действием на клетки слизистой оболочки бронхов, повышая их пролиферативную активность и снижая уровень апоптоза, который резко возрастает при хроническом бронхите. При этом пептид β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH не обладает побочными эффектами, которые описаны для известных бронхопротекторных препаратов. Peptide β-aspartyl-proline of the formula H-Asp(Pro)-OH has a directed effect on the cells of the bronchial mucosa, increasing their proliferative activity and reducing the level of apoptosis, which increases sharply in chronic bronchitis. At the same time, the β-aspartyl-proline peptide of the formula H-Asp(Pro)-OH does not have side effects that are described for known bronchoprotective drugs.
Структурных аналогов и аналогов по механизму действия и биологической активности представленный пептид не имеет.The presented peptide has no structural analogues and analogues in terms of the mechanism of action and biological activity.
Настоящим изобретением поставлена и решена задача получения пептида, обладающего биологической активностью, проявляющейся в активации пролиферации, снижении апоптоза, а также активации защитной функции клеток слизистой оболочки бронхов, и применения этого пептида для изготовления фармацевтической композиции для лечения хронического бронхита. The present invention has set and solved the problem of obtaining a peptide with biological activity, manifested in the activation of proliferation, the reduction of apoptosis, and the activation of the protective function of cells of the bronchial mucosa, and the use of this peptide for the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic bronchitis.
Технический результат изобретения заключается в создании пептида, активирующего пролиферацию, снижающего апоптоз, а также активирующего защитные функции клеток слизистой оболочки бронхов, и применения этого пептида для изготовления фармацевтической композиции для лечения хронического бронхита за счет регуляции их пролиферации, апоптоза и функциональной активности.The technical result of the invention consists in creating a peptide that activates proliferation, reduces apoptosis, and also activates the protective functions of cells of the bronchial mucosa, and the use of this peptide for the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of chronic bronchitis by regulating their proliferation, apoptosis and functional activity.
Указанный технический результат в отношении указанных объектов достигается за счет того, что предлагается пептид β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH.The specified technical result in relation to these objects is achieved due to the fact that the peptide β-aspartyl-proline of the formula H-Asp(Pro)-OH is proposed.
Обнаружено, что пептид β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH обладает биологической активностью, заключающейся в активации пролиферации, снижении апоптоза, а также активации защитной функции слизистой оболочки бронхов. При повышении пролиферации и параллельном снижении апоптоза стабилизируется функциональная активность клеток слизистой оболочки бронхов, задача которых в организме заключается в защите дыхательной системы от действия негативных факторов, в том числе патологических агентов, вызывающих воспалительные заболевания, включая хронический бронхит.It was found that the peptide β-aspartyl-proline of the formula H-Asp(Pro)-OH has biological activity, which consists in the activation of proliferation, the reduction of apoptosis, and the activation of the protective function of the bronchial mucosa. With an increase in proliferation and a parallel decrease in apoptosis, the functional activity of cells of the bronchial mucosa is stabilized, the task of which in the body is to protect the respiratory system from the action of negative factors, including pathological agents that cause inflammatory diseases, including chronic bronchitis.
Предлагается применение пептида β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH для приготовления лекарственного средства для лечения хронического бронхита.The proposed use of the peptide β-aspartyl-proline formula H-Asp(Pro)-OH for the preparation of a drug for the treatment of chronic bronchitis.
Другой аспект настоящего изобретения касается фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала эффективное количество пептида β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH и фармацевтически приемлемый носитель. Another aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising, as an active principle, an effective amount of a β-aspartyl-proline peptide of the formula H-Asp(Pro)-OH and a pharmaceutically acceptable carrier.
При этом фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для парентерального, перорального, интраназального, ингаляционного, местного способа введения. While the pharmaceutical composition is in a form suitable for parenteral, oral, intranasal, inhalation, local administration.
Следующий аспект настоящего изобретения касается способа профилактики и лечения дисфункции клеток слизистой оболочки бронхов, в том числе при хроническом бронхите, заключающегося во введении пациенту фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала пептид формулы H-Asp(Pro)-OH в дозе 0,1-100 мкг/кг массы тела, по крайней мере, один раз в день в течение периода, необходимого для достижения терапевтического эффекта. При этом введение осуществляют парентерально, перорально, интраназально, ингаляционно или местно.The next aspect of the present invention relates to a method for the prevention and treatment of cell dysfunction of the bronchial mucosa, including chronic bronchitis, which consists in administering to the patient a pharmaceutical composition containing a peptide of the formula H-Asp(Pro)-OH at a dose of 0.1- 100 mcg/kg body weight at least once a day for the period necessary to achieve a therapeutic effect. In this case, the introduction is carried out parenterally, orally, intranasally, inhalation or locally.
Пептид β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH получают классическим методом пептидного синтеза в растворе. Peptide β-aspartyl-proline of the formula H-Asp(Pro)-OH is obtained by the classical method of peptide synthesis in solution.
Регулирующее действие пептида H-Asp(Pro)-OH на пролиферацию, апоптоз и функциональную активность клеток слизистой оболочки бронхов выявлено при его экспериментальном изучении. The regulatory effect of the H-Asp(Pro)-OH peptide on proliferation, apoptosis, and functional activity of bronchial mucosal cells was revealed during its experimental study.
Изучение биологической активности проводили в органотипических и диссоциированных культурах клеток слизистой оболочки бронхов крыс в норме и при старении.The study of biological activity was carried out in organotypic and dissociated cell cultures of the bronchial mucosa of rats in normal and aging conditions.
Понятие «фармацевтическая композиция» подразумевает различные лекарственные формы, содержащие пептид H-Asp(Pro)-OH, которые могут найти лечебное применение в медицине в качестве средства, стимулирующего функции клеток слизистой оболочки бронхов. The concept of "pharmaceutical composition" means various dosage forms containing the peptide H-Asp(Pro)-OH, which can be used in medicine as a means of stimulating the function of cells of the bronchial mucosa.
Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению, эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, являющегося активным началом, смешивают с фармацевтически приемлемыми носителями согласно принятым в фармацевтике способам компаундирования [см., например, Гаврилов А.С. Фармацевтическая технология. Изготовление лекарственных препаратов / А.С. Гаврилов - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2016. - 760 с.; Краснюк И.И. Фармацевтическая технология. Технология лекарственных форм: учебник / И. И. Краснюк, Г. В. Михайлова, Л. И. Мурадова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2016. - 560 с.; Технология изготовления лекарственных форм: учебник / В. А. Гроссман - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2018. - 336 с.0; Фармацевтическая технология. Изготовление лекарственных препаратов [Электронный ресурс]: учеб. пособие / Лойд В. Аллен, А. С. Гаврилов - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 512 с.; Контроль качества лекарственных средств [Электронный ресурс]: учебник / под ред. Т. В. Плетенёвой - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 560 с.; Фармацевтическая технология. Технология лекарственных форм [Электронный ресурс]: учебник / И. И. Краснюк, Г. В. Михайлова, Л. И. Мурадова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 560 с.].To obtain pharmaceutical compositions of the present invention, an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide, which is the active principle, is mixed with pharmaceutically acceptable carriers according to compounding methods adopted in pharmaceuticals [see, for example, Gavrilov A.S. Pharmaceutical technology. Manufacturing of medicines / A.S. Gavrilov - M.: GEOTAR-Media, 2016. - 760 p.; Krasnyuk I.I. Pharmaceutical technology. Technology of dosage forms: textbook / I. I. Krasnyuk, G. V. Mikhailova, L. I. Muradova. - M.: GEOTAR-Media, 2016. - 560 p.; Manufacturing technology of dosage forms: textbook / V. A. Grossman - M.: GEOTAR-Media, 2018. - 336 p.0; Pharmaceutical technology. Manufacturing of medicines [Electronic resource]: textbook. allowance / Loyd W. Allen, A. S. Gavrilov - M.: GEOTAR-Media, 2014. - 512 p.; Quality control of medicines [Electronic resource]: textbook / ed. T. V. Pleteneva - M.: GEOTAR-Media, 2014. - 560 p.; Pharmaceutical technology. Technology of dosage forms [Electronic resource]: textbook / I. I. Krasnyuk, G. V. Mikhailova, L. I. Muradova. - M.: GEOTAR-Media, 2013. - 560 p.].
Понятие «эффективное количество» подразумевает использование такого количества активного начала, которое в соответствии с его количественными показателями активности и токсичности, а также на основании знаний специалиста должно быть эффективным в лекарственной форме.The concept of "effective amount" means the use of such an amount of the active principle, which, in accordance with its quantitative indicators of activity and toxicity, and also on the basis of the knowledge of a specialist, should be effective in dosage form.
Носитель может иметь различные формы, которые зависят от лекарственной формы препарата, желаемой для введения в организм.The carrier may take various forms, which depend on the dosage form of the drug desired for administration to the body.
Изобретение иллюстрируется примером синтеза пептида β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH (пример 1), примером испытания токсичности (пример 2), оценки биологической активности и механизма действия пептида в культурах клеток слизистой оболочки бронхов крыс в норме и при старении, демонстрирующими его фармакологические свойства и подтверждающими возможность получения профилактического и/или лечебного эффекта (пример 3), примером клинического применения фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида β-аспартил-пролин формулы H-Asp(Pro)-OH, для лечения больных хроническим бронхитом (пример 4).The invention is illustrated by an example of the synthesis of the peptide β-aspartyl-proline of the formula H-Asp(Pro)-OH (example 1), an example of a toxicity test (example 2), an assessment of the biological activity and mechanism of action of the peptide in cell cultures of the bronchial mucosa of rats in normal and at aging, demonstrating its pharmacological properties and confirming the possibility of obtaining a preventive and / or therapeutic effect (example 3), an example of the clinical use of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the peptide β-aspartyl-proline of the formula H-Asp(Pro)-OH, for the treatment of patients with chronic bronchitis (example 4).
Cхема синтеза пептида H-Asp(Pro)-OHScheme for the synthesis of the H-Asp(Pro)-OH peptide
1. Название соединения: β-аспартил-пролин1. Compound name: β-aspartyl-proline
2. Структурная формула: H-Asp(Pro)-OH2. Structural formula: H-Asp(Pro)-OH
3. Брутто-формула без противоиона: C9H14N2O5 3. Gross formula without counterion: C 9 H 14 N 2 O 5
4. Молекулярный вес без противоиона: 230,224. Molecular weight without counterion: 230.22
5. Противоион - ацетат 5. Counterion - acetate
6. Внешний вид: белый аморфный порошок без запаха6. Appearance: odorless white amorphous powder
7. Способ синтеза: пептид получен классическим методом синтеза в растворе по схеме:7. Method of synthesis: the peptide was obtained by the classical method of synthesis in solution according to the scheme:
8. Характеристика готового препарата8. Characteristics of the finished product
— Растворимость: растворим в воде, изотоническом растворе хлорида натрия 0,9 % для инъекций; нерастворим в спирте 95 %, хлороформе, эфире и других органических растворителях.- Solubility: soluble in water, isotonic sodium chloride solution 0.9% for injection; insoluble in alcohol 95%, chloroform, ether and other organic solvents.
— Прозрачность и цветность раствора: раствор 0,05 г препарата в 10 мл воды прозрачен и бесцветен.- Transparency and color of the solution: a solution of 0.05 g of the drug in 10 ml of water is transparent and colorless.
— рН 0,001 % раствора: 4,0-5,0 (потенциометрически).- pH 0.001% solution: 4.0-5.0 (potentiometrically).
— Содержание влаги: не более 10 %.— Moisture content: no more than 10%.
— Удельное оптическое вращение: [α]D 22: от -30° до -34° (c=1, H2O).— Specific optical rotation: [α] D 22 : -30° to -34° (c=1, H 2 O).
— Содержание основного вещества по ВЭЖХ: не менее 97 %.— The content of the main substance according to HPLC: not less than 97%.
— Тонкослойная хроматография: ТСХ-индивидуален, Rf = 0,80 (ацетонитрил-вода 1:3)— Thin layer chromatography: TLC-individual, R f = 0.80 (acetonitrile-water 1:3)
Пример 1. Синтез пептидаExample 1 Peptide Synthesis
1) Z-Asp(OSu)-OH (I), β-N-оксисукцинимидный эфир N-бензилоксикарбонил(α-бензил)-аспарагиновой кислоты. 2,21 г (6,2 ммоль) мелкоизмельченного порошка N-бензилоксикарбонил(α-бензил)-аспарагиновой кислоты растворяют в 50 мл диметилформамида и добавляют 0,71 г (6,2 ммоль) мелкоизмельченного порошка N-оксисукцинимида. 1,27 г (6,2 ммоль) порошка N, N'-дициклогексилкарбодиимида растворяют в 20 мл диметилформамида. Оба раствора охлаждают до температуры –15 °С. Растворы объединяют и перемешивают при охлаждении льдом в течение 24 часов. Полученный раствор активированного эфира используют на следующей стадии.1) Z-Asp(OSu)-OH (I), β-N-oxysuccinimide ester of N-benzyloxycarbonyl(α-benzyl)-aspartic acid. 2.21 g (6.2 mmol) of finely divided powder of N-benzyloxycarbonyl(α-benzyl)-aspartic acid are dissolved in 50 ml of dimethylformamide and 0.71 g (6.2 mmol) of finely divided powder of N-oxysuccinimide are added. 1.27 g (6.2 mmol) of N,N'-dicyclohexylcarbodiimide powder are dissolved in 20 ml of dimethylformamide. Both solutions are cooled down to -15°C. The solutions are combined and stirred under ice-cooling for 24 hours. The resulting activated ester solution is used in the next step.
2) Z-Asp(Pro-OBzl)-OBzl (II), α-бензиловый эфир N-бензилоксикарбонил-(β-пролилбензилат)-аспарагиновой кислоты. К раствору активированного эфира Z-Asp(OSu)-OH (I), полученного на предыдущей стадии, добавляют 1,49 г (6,2 ммоль) мелкоизмельченного порошка тозилата бензилового эфира пролина и 0,86 мл триэтиламина. Перемешивают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 суток. Затем в реакционную смесь при перемешивании постепенно вливают 150 мл 2н раствора серной кислоты, продукт выпадает в виде масла, который затем растворяют в 50 мл этилацетата.2) Z-Asp(Pro-OBzl)-OBzl (II), N-benzyloxycarbonyl-(β-prolylbenzilate)-aspartic acid α-benzyl ester. 1.49 g (6.2 mmol) of finely ground proline benzyl ester tosylate powder and 0.86 ml of triethylamine are added to the solution of the activated ester Z-Asp(OSu)-OH (I) obtained in the previous step. Stir the reaction mixture at room temperature for 2 days. Then, 150 ml of a 2N sulfuric acid solution are gradually poured into the reaction mixture with stirring, the product precipitates in the form of an oil, which is then dissolved in 50 ml of ethyl acetate.
Затем содержимое реакционной колбы расслаивают в делительной воронке, нижнюю водную фазу сливают в стакан вместимостью 250 мл, а верхнюю органическую фазу - в стакан вместимостью 500 мл. Процедуру повторяют трижды с новыми порциями этилацетата (по 30 мл), затем все этилацетатные порции объединяют в исходной делительной воронке, в которую добавляют 20 мл 2 н раствора серной кислоты и осуществляют экстракцию, повторяя процедуру дважды. Затем этилацетатный раствор промывают последовательно водой (30 мл), дважды раствором бикарбоната натрия (30 мл), дважды раствором серной кислоты (30 мл) и водой (30 мл). Затем в этилацетатный раствор добавляют около 20 мг безводного сульфата натрия и оставляют на 10-12 часов.Then the contents of the reaction flask are stratified in a separating funnel, the lower aqueous phase is poured into a beaker with a capacity of 250 ml, and the upper organic phase is poured into a beaker with a capacity of 500 ml. The procedure is repeated three times with new portions of ethyl acetate (30 ml each), then all ethyl acetate portions are combined in the original separating funnel, into which 20 ml of 2 N sulfuric acid solution is added and extraction is carried out, repeating the procedure twice. The ethyl acetate solution is then washed successively with water (30 ml), twice with sodium bicarbonate solution (30 ml), twice with sulfuric acid solution (30 ml) and water (30 ml). Then about 20 mg of anhydrous sodium sulfate is added to the ethyl acetate solution and left for 10-12 hours.
Отфильтрованный этилацетатный раствор упаривают в вакууме при температуре не выше 40 °С на вакуумном роторном испарителе (Buchi Rotavapor R-114 или аналогичном) до прекращения отгонки растворителя и образования на дне колбы густого сиропа, который растворяют в 20 мл этилацетата, добавляя к раствору при постоянном перемешивании порциями гексан до появления устойчивой мути (около 20 мл). Колбу с полученной мутной системой оставляют в холодильнике при температуре 4 °С в течение не менее 2 суток для завершения процесса кристаллизации.The filtered ethyl acetate solution is evaporated in vacuum at a temperature not exceeding 40 ° C on a vacuum rotary evaporator (Buchi Rotavapor R-114 or similar) until the distillation of the solvent stops and a thick syrup forms at the bottom of the flask, which is dissolved in 20 ml of ethyl acetate, adding to the solution at constant stirring in portions of hexane until a stable turbidity appears (about 20 ml). The flask with the resulting cloudy system is left in the refrigerator at 4 °C for at least 2 days to complete the crystallization process.
Выпавший кристаллический продукт отфильтровывают под вакуумом через пористый фильтр Шота, 2 раза промывают гексаном (5 мл), далее продукт переносят в чашку Петри без крышки. Окончательно продукт высушивают над пятиокисью фосфора в вакууме при температуре не выше 40 °С до постоянного веса.The precipitated crystalline product is filtered under vacuum through a porous Schott filter, washed 2 times with hexane (5 ml), then the product is transferred to a Petri dish without a lid. Finally, the product is dried over phosphorus pentoxide in vacuum at a temperature not exceeding 40 °C to constant weight.
3) H-Asp(Pro)-OH (III), β-аспартил-пролин. α-Бензиловый эфир N-бензилоксикарбонил-(β-пролилбензилат)-аспарагиновой кислоты, полученный на предыдущей стадии, растворяют в смеси метанола (60 мл), дистиллированной воды (20 мл) и уксусной кислоты (20 мл) в присутствии 3 мл катализатора палладия на угле (Pd/C). 3) H-Asp(Pro)-OH (III), β-aspartyl-proline. The α-benzyl ester of N-benzyloxycarbonyl-(β-prolylbenzilate)-aspartic acid obtained in the previous step is dissolved in a mixture of methanol (60 ml), distilled water (20 ml) and acetic acid (20 ml) in the presence of 3 ml of a palladium catalyst on coal (Pd/C).
Контроль за полнотой деблокирования проводят в режиме ТСХ на пластинках Silu-fol в системе бензол-ацетон (2:1), деблокированный продукт имеет нулевую подвижность, исходный продукт имеет Rf=0,73. Реакция деблокирования считается законченной, если имеются только следовые количества исходного продукта (визуально).Control over the completeness of deblocking is carried out in TLC mode on Silu-fol plates in the benzene-acetone system (2:1), the deblocked product has zero mobility, the initial product has Rf=0.73. The release reaction is considered complete if there are only trace amounts of the original product (visually).
Объединенный фильтрат упаривают в вакууме при температуре не выше 40 °С. The combined filtrate is evaporated in vacuo at a temperature not exceeding 40 °C.
Для очистки 280 мг препарата растворяют в 4 мл 0,01 % трифторуксусной кислоты и подвергают высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке с обращенной фазой 50х250мм Diasorb-130-C16T, 7mkm. Хроматограф Beckman System Gold, 126 Sol-vent Module,168 Diode Array Detector Module. Условия хроматографирования - А: 0,1 % трифторуксусная кислота; В: 50 % раствор ацетонитрила в 0,1 % трифторуксусной кислоте; градиент В 0 → 5 % за 80 мин. Объем пробы 5 мл, детекция при длине волны 215 нм, сканирование при длинах волн 190-600 нм, скорость потока 10 мл/мин. For purification, 280 mg of the drug is dissolved in 4 ml of 0.01% trifluoroacetic acid and subjected to high performance liquid chromatography on a 50x250mm reversed phase column Diasorb-130-C16T, 7mkm. Beckman System Gold Chromatograph, 126 Sol-vent Module, 168 Diode Array Detector Module. Chromatography conditions - A: 0.1% trifluoroacetic acid; B: 50% acetonitrile in 0.1% trifluoroacetic acid; gradient B 0 → 5% in 80 min. Sample volume 5 ml, detection at 215 nm, scanning at 190-600 nm, flow rate 10 ml/min.
Отбирают фракции основного пика, свободного от примесей (в примерном интервале 50,0 мин. - 68,0 мин.), объединяют их и упаривают в вакууме до образования сиропа, повторяя упаривание ещё 5 раз каждый раз с новой порцией (10 мл) 10 % уксусной кислоты. Остаток в колбе сушат в вакууме при температуре не выше 40 °С над твердым КОН в течение не менее 2 суток. После сушки продукт не должен иметь запаха.The fractions of the main peak, free from impurities (in the approximate range of 50.0 min. - 68.0 min.), are selected, combined and evaporated in vacuum until a syrup is formed, repeating the evaporation 5 more times each time with a new portion (10 ml) 10 % acetic acid. The residue in the flask is dried in vacuum at a temperature not exceeding 40 °C over solid KOH for at least 2 days. After drying, the product should be odorless.
После упаривания и сушки в вакууме остаток растворяют в 20 мл деионизованной воды и лиофилизируют. After evaporation and drying in vacuo, the residue is taken up in 20 ml of deionized water and lyophilized.
4) Анализ готового препарата.4) Analysis of the finished product.
Содержание основного вещества определяют методом ВЭЖХ на колонке Phenomenex C 18 LUNA 4,6x150 мм. A: 0,1 % TFA, B: MeCN; Градиент B 0-100 % – 10 мин. Скорость потока 1 мл/ мин. Детекция при длине волны 220 нм, сканирование при длинах волн 190-600 нм, проба 20 мкл. Содержание основного вещества не менее 97 %.The content of the main substance is determined by HPLC on a Phenomenex C 18 LUNA 4.6x150 mm column. A: 0.1% TFA, B: MeCN; Gradient B 0-100% - 10 min. Flow rate 1 ml/min. Detection at a wavelength of 220 nm, scanning at a wavelength of 190-600 nm, sample 20 µl. The content of the main substance is not less than 97%.
ТСХ: на хроматограммах образцов, обработанных раствором нингидрина, допускается наличие только двух пятен (препарата и ГСО) фиолетового цвета с совпадающими Rf; на хроматограммах образцов, обработанных раствором бензидина, допускается наличие только двух пятен (препарата и ГСО) темно-синего цвета с совпадающими Rf (ацетонитрил-вода 1:3, пластинки ПТСХ-П-В-УФ Sorbfil, силикагель СТХ-1ВЭ 8-12 мкм, проявление хлор/бензидин).TLC: on the chromatograms of samples treated with a solution of ninhydrin, only two spots (preparation and GSO) of purple color with matching R f are allowed; on the chromatograms of samples treated with a solution of benzidine, the presence of only two spots (preparation and GSO) of dark blue color with matching R f is allowed (acetonitrile-water 1: 3, PTSH-P-V-UV Sorbfil plates, silica gel STX-1VE 8- 12 µm, chlorine/benzidine development).
Содержание влаги: не более 10 % (гравиметрически по потере массы при сушке 20 мг при температуре 100 °C).Moisture content: no more than 10% (gravimetrically by loss of mass on drying 20 mg at 100 °C).
рН 0,01 % раствора: от 4,0 до 5,0 (потенциометрически).pH 0.01% solution: 4.0 to 5.0 (potentiometrically).
Удельное оптическое вращение: от –30 до –34° в пересчете на сухое вещество (0,1 % водный раствор, температура 23 °С, D-линия спектра натрия).Specific optical rotation: from -30 to -34° on a dry matter basis (0.1% aqueous solution, temperature 23°C, sodium D-line).
Пример 2. Изучение токсичности пептида H-Asp(Pro)-OHExample 2 Study of the toxicity of the peptide H-Asp(Pro)-OH
Общетоксическое действие пептида H-Asp(Pro)-OH исследовали в соответствии с требованиями «Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств. ФГБУ «НЦЭСМП» Минздравсоцразвития России. Часть 1» (Москва, Гриф и К, 2012. 944 с.) острой токсичности при однократном введении препарата, а также хронической токсичности при длительном введении пептида. The general toxic effect of the H-Asp(Pro)-OH peptide was studied in accordance with the requirements of the “Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. FSBI "NCESMP" of the Ministry of Health and Social Development of Russia. Part 1” (Moscow, Grif and K, 2012. 944 p.) acute toxicity with a single administration of the drug, as well as chronic toxicity with prolonged administration of the peptide.
Исследование острой токсичности проведено на 110 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 20-24 г. Животные были рандомизированно разделены на 11 равных групп по 10 животных в каждой группе. Препарат вводили животным однократно внутримышечно или внутрижелудочно (через зонд) в дозах 1 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг (в несколько тысяч раз превышающих терапевтическую дозу (ТД), рекомендуемую для клинического изучения, которая составляет 0,0014 мг/кг) в объеме 0,25 мл изотонического 0,9 % раствора натрия хлорида. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9 % раствор NaCl. The study of acute toxicity was carried out on 110 outbred male mice weighing 20-24 g. The animals were randomly divided into 11 equal groups of 10 animals in each group. The drug was administered to animals once intramuscularly or intragastrically (through a tube) at doses of 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg (several thousand times higher than the recommended therapeutic dose (TD)). for clinical study, which is 0.0014 mg / kg) in a volume of 0.25 ml of isotonic 0.9% sodium chloride solution. Animals of the control group received 0.9% NaCl solution in the same volume.
В течение 72 часов и далее через 14 суток ни в одной группе животных гибели мышей не обнаружено. Не отмечено каких-либо изменений общего состояния, поведения, двигательной активности, волосяного и кожного покрова, физиологических отправлений животных.Within 72 hours and then after 14 days, no death of mice was detected in any group of animals. There were no changes in the general condition, behavior, physical activity, hair and skin, physiological functions of animals.
Таким образом, дипептид H-Asp(Pro)-OH в дозах, превышающих терапевтическую, рекомендуемую для клинических испытаний, в несколько тысяч раз, не вызывает острых токсических реакций при внутримышечном или внутрижелудочном введении, что указывает на большую терапевтическую широту препарата.Thus, the H-Asp(Pro)-OH dipeptide at doses several thousand times higher than the therapeutic recommended for clinical trials does not cause acute toxic reactions when administered intramuscularly or intragastrically, which indicates a greater therapeutic breadth of the drug.
Хроническую токсичность дипептида H-Asp(Pro)-OH, полученного заявляемым способом, изучали при длительном введении его крысам с массой тела 150-250 мг. Животным ежедневно вводили внутримышечно или внутрижелудочно (через зонд) препарат в дозах 0,1 мг/кг (70 ТД), 1,0 мг/кг (700 ТД), 3 мг/кг (2000 ТД) в 0,5 мл физиологического раствора в течение 30 дней. Наблюдение за животными вели в течение 60 дней после начала эксперимента. Отмечали поведение животных, потребление корма и воды, состояние волосяного покрова и слизистых оболочек. Взвешивание животных проводилось еженедельно. В начале и при завершении эксперимента проводили гематологические и биохимические исследования. Оценивали функции сердечно-сосудистой системы, печени, поджелудочной железы, почек и надпочечников. После окончания введения препарата животных подвергали патоморфологическому исследованию с целью оценки состояния различных отделов головного и спинного мозга, сердца, аорты, легких, печени, почек, органов эндокринной и иммунной систем.The chronic toxicity of the dipeptide H-Asp(Pro)-OH, obtained by the claimed method, was studied during its long-term administration to rats weighing 150-250 mg. Animals were injected daily intramuscularly or intragastrically (through a tube) with the drug at doses of 0.1 mg/kg (70 TD), 1.0 mg/kg (700 TD), 3 mg/kg (2000 TD) in 0.5 ml of saline within 30 days. Animals were observed for 60 days after the start of the experiment. Animal behavior, food and water consumption, the condition of the hairline and mucous membranes were noted. Animals were weighed weekly. At the beginning and at the end of the experiment, hematological and biochemical studies were performed. The functions of the cardiovascular system, liver, pancreas, kidneys and adrenal glands were evaluated. After the end of the administration of the drug, the animals were subjected to pathomorphological examination in order to assess the state of various parts of the brain and spinal cord, heart, aorta, lungs, liver, kidneys, organs of the endocrine and immune systems.
При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.When assessing the general condition of animals, morphological and biochemical parameters of peripheral blood, the morphological state of internal organs, the state of the cardiovascular and respiratory systems, liver and kidney function, no pathological changes were found in the body.
Изучение острой и хронической токсичности дипептида H-Asp(Pro)-OH свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата внутримышечно или внутрижелудочно в дозах, превышающих терапевтическую в 70-2000 раз.The study of acute and chronic toxicity of the dipeptide H-Asp(Pro)-OH indicates the absence of side effects with prolonged use of the drug intramuscularly or intragastrically at doses exceeding the therapeutic dose by 70-2000 times.
Пример 3. Влияние пептида H-Asp(Pro)-OH на пролиферацию, апоптоз и защитные функции клеток слизистой оболочки бронхов крыс в органотипической и диссоциированной культурах при их старении.Example 3. Effect of the H-Asp(Pro)-OH peptide on proliferation, apoptosis and protective functions of rat bronchial mucosa cells in organotypic and dissociated cultures during their aging.
Органотипическое культивирование ткани слизистой оболочки бронхов молодых 3-месячных (n=60) и старых 20-месячных крыс линии Wistar (n=60) проводили в питательной среде следующего состава из расчёта на 100 мл: раствор Хенкса 38 мл, среда Игла 36 мл, фетальная бычья сыворотка 25 мл, глюкоза 40 % – 1,0 мл, гентамицин 100 Ед/мл. После извлечения слизистой оболочки бронхов ткань помещали в стерильную чашку Петри с коллагеновым покрытием дна и разделяли на эксплантаты (фрагменты величиной около 1 мм3). Эксплантаты культивировали 3 суток в 3 мл питательной среды в СО2-инкубаторе при температуре 36,7 °С в среде с 5 % содержанием СО2. Пептид H-Asp(Pro)-OH добавляли в культуры в концентрации 0,05 нг/мл, т.к. ранее она оказалась наиболее эффективной в этом эксперименте. В контрольные культуры добавляли аналогичное количество питательной среды. В качестве группы сравнения в культуры добавляли аминокислоты, входящие в состав пептида H-Asp(Pro)-OH: аспарагиновая кислота (Asp) и пролин (Pro) в концентрации 0,05 нг/мл.Organotypic cultivation of the tissue of the bronchial mucosa of young 3-month-old (n=60) and old 20-month-old Wistar rats (n=60) was carried out in a nutrient medium of the following composition per 100 ml: Hank's solution 38 ml, Eagle's medium 36 ml, fetal bovine serum 25 ml, glucose 40% - 1.0 ml, gentamicin 100 U / ml. After removing the bronchial mucosa, the tissue was placed in a sterile Petri dish with a collagen-coated bottom and divided into explants (fragments about 1 mm 3 in size). The explants were cultivated for 3 days in 3 ml of nutrient medium in a CO2 incubator at a temperature of 36.7°C in a medium with 5 % CO2 content. Peptide H-Asp(Pro)-OH was added to the cultures at a concentration of 0.05 ng/ml, because previously it proved to be the most effective in this experiment. A similar amount of nutrient medium was added to control cultures. As a comparison group, amino acids included in the H-Asp(Pro)-OH peptide were added to the cultures: aspartic acid (Asp) and proline (Pro) at a concentration of 0.05 ng/ml.
В эксплантатах слизистой оболочки бронхов после 3 суток культивирования определяются две зоны: центральная и периферическая. Центральная зона представлена клетками, исходно размещёнными на коллагеновой подложке. Периферическая зона (зона роста) состоит из выселившихся по окружности вновь образованных клеток. Для количественной оценки роста эксплантатов определяли индекс площади (ИП), который рассчитывали, как отношение площади всего эксплантата к площади центральной зоны.In the explants of the bronchial mucosa after 3 days of cultivation, two zones are determined: central and peripheral. The central zone is represented by cells initially placed on a collagen substrate. The peripheral zone (growth zone) consists of newly formed cells that have settled around the circumference. To quantify the growth of explants, the area index (AI) was determined, which was calculated as the ratio of the area of the entire explant to the area of the central zone.
Диссоциированную культуру клеток получали из слизистой оболочки бронхов молодой крысы лини Wistar (3 мес.). Кусочки слизистой оболочки бронхов подвергали действию 0,2 % коллагеназы II в течение 10 минут при температуре 37°С в термостате и центрифугировали в течение 5 мин при скорости вращения 400 g. В клетки добавляли 2 мл среды RPMI c добавлением 20 % фетальной бычьей сыворотки, HEPES 1,5 % и антибиотиков 50 000 ЕД/фл пенициллина G и 50 мг/фл стрептомицина. Клетки выращивали во флаконах с обработанной поверхностью вместимостью 50 мл в 5 мл культуральной среды (20 % фетальной бычьей сыворотки, 82,5 % RPMI, 1,5 % НЕРЕS, L-глутамин) при температуре 36,7 °С в среде с 5 % содержанием СО2. Через 5-7 дней, когда первичная культура достигала монослоя, проводилось процедура ее пересеивания в концентрации 5х103 клеток на флакон 50 мл. При каждом пересеве раствор с пептидом добавляли в культуральную среду в концентрации 100 нг/мл. Пассирование проводили через 3 дня на четвертый, когда культура достигала монослоя. Культивирование проводили до 3 пассажа. A dissociated cell culture was obtained from the bronchial mucosa of a young Wistar rat (3 months old). Pieces of the bronchial mucosa were exposed to 0.2% collagenase II for 10 minutes at a temperature of 37°C in a thermostat and centrifuged for 5 minutes at a rotation speed of 400 g. Cells were supplemented with 2 ml of RPMI supplemented with 20% fetal bovine serum, 1.5% HEPES, and antibiotics 50,000 U/vial penicillin G and 50 mg/vial streptomycin. Cells were grown in 50 ml surface-treated flasks in 5 ml culture medium (20% fetal bovine serum, 82.5% RPMI, 1.5% HEPES, L-glutamine) at 36.7°C in medium with 5% CO content2. After 5-7 days, when the primary culture reached the monolayer, it was subcultured at a concentration of 5x103 cells per 50 ml vial. At each passage, the solution with the peptide was added to the culture medium at a concentration of 100 ng/mL. Passaging was carried out after 3 days on the fourth, when the culture reached a monolayer. Cultivation was carried out up to 3 passages.
Для иммуноцитохимического исследования органотипических и диссоциированных культур слизистой оболочки бронхов клетки фиксировали 96° спиртом. Блокаду эндогенной пероксидазы проводили 3 % водным раствором перекиси водорода в течение 15 мин. Пермеабилизацию мембран клеток проводили 0,5 % раствором Triton Х100. Затем использовали первичные моноклональные антитела к CXCL12 (1:200, Vectorlab), Ki67 (1:150, Vectorlab), p53 (1:50, Dako). Инкубацию со вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (EnVision Detection System, Peroxidase/DAB, Rabbit, Mouse), проводили в течение 30 минут. Для оценки результатов иммуноцитохимического окрашивания проводили морфометрическое исследование с использованием системы компьютерного анализа микроскопических изображений, состоящей из микроскопа Nikon Eclipse E400, цифровой камеры Nikon DXM1200, персонального компьютера на базе Intel Pentium 4 и программы «Видеотест-Морфология 5.2». В каждом случае анализировали 5 полей зрения при увеличении 100. Площадь экспрессии рассчитывали, как отношение площади, занимаемой иммунопозитивными клетками, к общей площади клеток в поле зрения и выражали в процентах. Этот параметр характеризует количество клеток, в которых экспрессируется исследуемый маркер. For immunocytochemical studies of organotypic and dissociated cultures of the bronchial mucosa, the cells were fixed with 96° alcohol. Blockade of endogenous peroxidase was performed with 3% aqueous hydrogen peroxide solution for 15 min. Cell membranes were permeabilized with 0.5% Triton X100 solution. Then, primary monoclonal antibodies to CXCL12 (1:200, Vectorlab), Ki67 (1:150, Vectorlab), p53 (1:50, Dako) were used. Incubation with horseradish peroxidase conjugated secondary antibodies (EnVision Detection System, Peroxidase/DAB, Rabbit, Mouse) was performed for 30 minutes. To evaluate the results of immunocytochemical staining, a morphometric study was performed using a computer analysis system for microscopic images, consisting of a Nikon Eclipse E400 microscope, a Nikon DXM1200 digital camera, an Intel Pentium 4-based personal computer, and the Videotest-Morphology 5.2 program. In each case, 5 fields of view were analyzed at a magnification of 100. The area of expression was calculated as the ratio of the area occupied by immunopositive cells to the total area of cells in the field of view and expressed as a percentage. This parameter characterizes the number of cells in which the studied marker is expressed.
Статистическая обработка данных включала в себя подсчет среднего арифметического, стандартного отклонения и доверительного интервала для каждой выборки и проводилась в программе Statistica. Для анализа вида распределения использовали критерий Шапиро-Уилка. Для проверки статистической однородности нескольких выборок были использованы непараметрические процедуры однофакторного дисперсионного анализа (критерий Крускала–Уоллиса). Критический уровень достоверности нулевой гипотезы принимали равным 0,05.Statistical data processing included the calculation of the arithmetic mean, standard deviation and confidence interval for each sample and was carried out in the Statistica program. To analyze the type of distribution, the Shapiro-Wilk test was used. To test the statistical homogeneity of several samples, nonparametric procedures of one-way analysis of variance (Kruskal–Wallis test) were used. The critical confidence level of the null hypothesis was taken equal to 0.05.
В органотипических культурах клеток слизистой оболочки бронхов молодых крыс под действием пептида H-Asp(Pro)-OH ИП достоверно повышался по сравнению с контролем на 28±3%. В органотипических культурах клеток слизистой оболочки бронхов старых крыс под действием пептида H-Asp(Pro)-OH ИП статистически значимо повышался по сравнению с контролем на 40±1%. Добавление в органотипические культуры слизистой оболочки бронхов молодых и старых крыс аминокислот (Asp, Pro) не приводило к достоверному повышению ИП – соответственно, на 4±1% и 8±2% по сравнению с контролем. Таким образом, пептид H-Asp(Pro)-OH стимулирует рост органотипической культуры тканей слизистой оболочки бронхов крыс, причем его эффект более выражен при воздействии на культуры, полученные от старых животных. При этом аминокислоты, входящие в состав изучаемого пептида, не влияют на ИП зоны роста эксплантатов тканей слизистой оболочки бронхов молодых и старых крыс, что указывает на важную роль пептидной связи в структуре пептида H-Asp(Pro)-OH в стимуляции роста клеток слизистой оболочки бронхов. In organotypic cell cultures of the bronchial mucosa of young rats under the action of the H-Asp(Pro)-OH peptide, PI significantly increased by 28±3% compared to the control. In organotypic cell cultures of the bronchial mucosa of old rats under the action of the H-Asp(Pro)-OH peptide, PI increased statistically significantly compared to the control by 40±1%. The addition of amino acids (Asp, Pro) to the organotypic cultures of the bronchial mucosa of young and old rats did not lead to a significant increase in PI, by 4±1% and 8±2%, respectively, compared with the control. Thus, the H-Asp(Pro)-OH peptide stimulates the growth of an organotypic tissue culture of the bronchial mucosa of rats, and its effect is more pronounced when exposed to cultures obtained from old animals. At the same time, the amino acids included in the composition of the studied peptide do not affect the IP of the growth zone of explants of tissues of the bronchial mucosa of young and old rats, which indicates the important role of the peptide bond in the structure of the H-Asp(Pro)-OH peptide in stimulating the growth of mucosal cells. bronchi.
— В контрольных культурах клеток слизистой оболочки бронхов, полученных от старых крыс, площадь экспрессии пролифератропного протеина Ki67 была в 3,1 раза ниже по сравнению с культурами, выделенными из ткани молодых животных. Пептид H-Asp(Pro)-OH в 3,58 раза повышал площадь экспрессии Ki67 в органотипических культурах слизистой оболочки бронхов молодых крыс. В органотипических культурах слизистой оболочки бронхов старых крыс пептид H-Asp(Pro)-OH повышал площадь экспрессии Ki67 в 1,91 раза. Результаты изучения влияния пептида H-Asp(Pro)-OH на индекс площади зоны роста эксплантатов слизистой оболочки бронхов коррелируют с данными по экспрессии белка Ki67, который является маркером пролиферации клеток. Таким образом, влияние дипептида H-Asp(Pro)-OH на зону роста эксплантатов слизистой оболочки бронхов может быть связано с его стимулирующим действием на экспрессию белка Ki67. - In control cultures of cells of the bronchial mucosa obtained from old rats, the area of expression of the proliferatropic protein Ki67 was 3.1 times lower compared to cultures isolated from the tissue of young animals. Peptide H-Asp(Pro)-OH increased the Ki67 expression area by 3.58 times in organotypic cultures of the bronchial mucosa of young rats. In organotypic cultures of the bronchial mucosa of old rats, the peptide H-Asp(Pro)-OH increased the expression area of Ki67 by 1.91 times. The results of studying the effect of the H-Asp(Pro)-OH peptide on the area index of the growth zone of explants of the bronchial mucosa correlate with the data on the expression of the Ki67 protein, which is a marker of cell proliferation. Thus, the effect of the dipeptide H-Asp(Pro)-OH on the growth zone of explants of the bronchial mucosa may be associated with its stimulating effect on the expression of the Ki67 protein.
В контрольных культурах клеток слизистой оболочки бронхов, полученных от молодых и старых крыс, площадь экспрессии хемокина CXCL12 не различалась. В органотипических культурах слизистой оболочки бронхов молодых крыс пептид H-Asp(Pro)-OH повышал площадь экспрессии хемокина CXCL12 в 4,62 раза по сравнению с контролем и не влиял на площадь экспрессии хемокина CXCL12 в органотипических культурах слизистой оболочки бронхов старых крыс. In control cultures of cells of the bronchial mucosa obtained from young and old rats, the area of expression of the chemokine CXCL12 did not differ. In organotypic cultures of the bronchial mucosa of young rats, the peptide H-Asp(Pro)-OH increased the area of expression of the chemokine CXCL12 by 4.62 times compared with the control and did not affect the area of expression of the chemokine CXCL12 in organotypic cultures of the bronchial mucosa of old rats.
В контрольных культурах клеток слизистой оболочки бронхов, полученных от старых крыс, площадь экспрессии проапоптотического белка р53 была в 2,7 раза выше по сравнению с культурами, выделенными из ткани молодых животных. Пептид H-Asp(Pro)-OH в 13 раз снижал площадь экспрессии р53 в органотипических культурах слизистой оболочки бронхов молодых крыс и в 1,8 раза - в органотипических культурах клеток бронхов старых крыс.In control cultures of cells of the bronchial mucosa obtained from old rats, the area of expression of the proapoptotic p53 protein was 2.7 times higher compared to cultures isolated from the tissues of young animals. Peptide H-Asp(Pro)-OH decreased the p53 expression area by 13 times in organotypic cultures of the bronchial mucosa of young rats and by 1.8 times in organotypic cultures of bronchial cells of old rats.
В первичной диссоциированной культуре клеток слизистой оболочки бронхов молодых крыс пептид H-Asp(Pro)-OH повышал экспрессию пролифератропного протеина Ki67 в 1,5 раза и снижал экспрессию проапоптотического протеина р53 в 1,4 раза по сравнению с контролем. Пептид H-Asp(Pro)-OH не влиял на экспрессию хемокина CXCL12 в диссоциированной культуре клеток слизистой оболочки бронхов молодых крыс. In the primary dissociated cell culture of the bronchial mucosa of young rats, the H-Asp(Pro)-OH peptide increased the expression of the proliferatropic protein Ki67 by 1.5 times and decreased the expression of the proapoptotic protein p53 by 1.4 times compared with the control. The H-Asp(Pro)-OH peptide did not affect the expression of the CXCL12 chemokine in a dissociated cell culture of the bronchial mucosa of young rats.
Таким образом, пептид H-Asp(Pro)-OH активирует пролиферацию (увеличение ИП, экспрессии Ki67), защитные функции клеток слизистой оболочки бронхов (повышение экспрессии хемокина CXCL12), снижает апоптоз (уменьшение экспрессии р53) у крыс разного возраста. Описанные эффекты пептида могут быть обусловлены его структурой, а именно наличием пептидной связи, так как отдельно взятые аминокислоты в составе пептида не влияют на рост органотипической культуры слизистой оболочки бронхов крыс. Эти данные указывают на геропротекторные и бронхопротекторные свойства пептида H-Asp(Pro)-OH.Thus, the H-Asp(Pro)-OH peptide activates proliferation (increased IP, Ki67 expression), protective functions of bronchial mucosal cells (increased expression of the chemokine CXCL12), and reduces apoptosis (decrease in p53 expression) in rats of different ages. The described effects of the peptide may be due to its structure, namely, the presence of a peptide bond, since individual amino acids in the peptide do not affect the growth of the organotypic culture of the rat bronchial mucosa. These data point to the geroprotective and bronchoprotective properties of the H-Asp(Pro)-OH peptide.
Пример 4. Клиническое применение фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, для лечения больных хроническим бронхитомExample 4 Clinical Use of a Pharmaceutical Composition Containing an Effective Amount of the H-Asp(Pro)-OH Peptide for the Treatment of Patients with Chronic Bronchitis
Клиническое исследование проводили с участием 116 больных в возрасте от 35 до 76 лет, в том числе 63 мужчины и 53 женщины, с диагнозом хронический бронхит, фаза ремиссии, которых разделили на 7 групп. A clinical study was conducted with the participation of 116 patients aged 35 to 76 years, including 63 men and 53 women, diagnosed with chronic bronchitis, remission phase, who were divided into 7 groups.
В контрольную группу вошли 15 человек, сопоставимых по диагнозу, полу и возрасту с пациентами основной группы. Пациенты контрольной группы получали только общепринятую терапию: бромгексин по 1 таблетке 3 раза в день, грудной сбор № 1 (корни алтея, листья мать-и-мачехи, трава душицы) по ½ стакана настоя 3 раза в день в течение 2 недель.The control group included 15 people matched by diagnosis, sex and age with patients of the main group. Patients in the control group received only conventional therapy: Bromhexine 1 tablet 3 times a day, chest collection No. 1 (marshmallow roots, coltsfoot leaves, oregano herb) ½ cup of infusion 3 times a day for 2 weeks.
Пациенты основной группы (101 человек) дополнительно к общепринятому лечению получали фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH. Они были разделены на 2 группы: пациенты группы 1 (n=54) получали фармацевтическую композицию перорально 2 раза в день в течение 30 дней, пациенты группы 2 (n=47) – внутримышечно 1 раз в день в течение 15 дней. Были использованы фармацевтические композиции с различной концентрацией пептида H-Asp(Pro)-OH: 0,1 мкг/кг массы тела (подгруппа 2.1), 1,0 мкг/кг массы тела (подгруппа 1.1), 2,0 мкг/кг массы тела (подгруппа 2.2), 10,0 мкг/кг массы тела (подгруппы 1.2 и 2.3) и 100,0 мкг/кг (подгруппа 1.1).Patients of the main group (101 people), in addition to conventional treatment, received a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide. They were divided into 2 groups: patients of group 1 (n=54) received the pharmaceutical composition orally 2 times a day for 30 days, patients of group 2 (n=47) - intramuscularly 1 time per day for 15 days. Pharmaceutical compositions with different concentrations of H-Asp(Pro)-OH peptide were used: 0.1 µg/kg body weight (subgroup 2.1), 1.0 µg/kg body weight (subgroup 1.1), 2.0 µg/kg body weight body weight (subgroup 2.2), 10.0 µg/kg body weight (subgroups 1.2 and 2.3) and 100.0 µg/kg (subgroup 1.1).
Пациенты из всех групп предъявляли жалобы на кашель с мокротой, преимущественно в утренние часы, общую слабость, потливость, одышку при физической нагрузке, периодически возникающие приступы удушья, нарушение сна, головные боли. Все обследуемые пациенты злоупотребляли курением.Patients from all groups complained of cough with sputum, mainly in the morning, general weakness, sweating, shortness of breath during physical exertion, recurrent asthma attacks, sleep disturbance, headaches. All examined patients abused smoking.
Установлено, что применение фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, дополнительно к общепринятой терапии у больных хроническим бронхитом в 82% случаев способствовало улучшению самочувствия, снижению частоты приступов кашля, приступов удушья, уменьшению количества отделяемой мокроты. Положительная динамика субъективных показателей в контрольной группе отмечалась у 63% больных. Аускультация легких больных всех групп в динамике свидетельствовала об уменьшении сухих свистящих и жужжащих хрипов. It has been established that the use of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide, in addition to conventional therapy in patients with chronic bronchitis, in 82% of cases contributed to an improvement in well-being, a decrease in the frequency of coughing attacks, asthma attacks, and a decrease in the amount of sputum discharge. Positive dynamics of subjective indicators in the control group was observed in 63% of patients. Auscultation of the lungs of patients of all groups in dynamics testified to a decrease in dry whistling and buzzing rales.
Исследование функции внешнего дыхания показало, что на фоне лечения с применением фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, показатели внешнего дыхания улучшаются достоверно больше, чем у больных контрольной группы (табл. 1). The study of the function of external respiration showed that during treatment with the use of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide, the indicators of external respiration improved significantly more than in patients in the control group (Table 1).
Результаты исследования функции внешнего дыхания свидетельствуют о достаточно скомпенсированном патологическом процессе в легких, но, вместе с тем, имеются явления нарушенной бронхиальной проходимости, в основном, за счет спазма мелких бронхиол. Так, показатель жизненной емкости легких (ЖЕЛ) у мужчин до начала лечения составлял 77,1% от нормального показателя (5000 мл в среднем для мужчин), у женщин – 76,8% от нормального значения (3700 мл в среднем для женщин). При этом форсированный объем легких (ФЖЕЛ) был на 10,1% и 15,7% у мужчин и женщин, соответственно, ниже показателя ЖЕЛ. Снижение ЖЕЛ почти на 25% относительно нормальных показателей и ФЖЕЛ на 10-15% относительно ЖЕЛ свидетельствует о патологическом процессе в легких и бронхах легкой или средней степени тяжести, что коррелирует с клиническими проявлениями хронического бронхита у пациентов. Применение фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH при обоих способах введения и при разных дозировках, оказывало положительное воздействие на динамику развития этого процесса. Как следует из таблицы 1, показатели ЖЕЛ и ФЖЕЛ у пациентов основной группы, получавших пептид H-Asp(Pro)-OH перорально в дозах 100 мкг, 1 мг и 10 мг, приближались к нижней границе нормальных значений, при этом они были достоверно выше по сравнению с показателями до лечения. По результатам, представленным в таблице 2, у пациентов, получавших пептид H-Asp(Pro)-OH внутримышечно в дозировках 200 мкг и 1,0 мг, показатели ЖЕЛ и ФЖЕЛ достоверно не отличались от нормальных значений для мужчин и женщин, соответственно, а в дозировке 10 мкг были достоверно выше показателей до лечения и после лечения общепринятыми средствами.The results of the study of the function of external respiration indicate a sufficiently compensated pathological process in the lungs, but, at the same time, there are phenomena of impaired bronchial patency, mainly due to spasm of small bronchioles. Thus, the indicator of lung capacity (VC) in men before treatment was 77.1% of the normal value (5000 ml on average for men), in women - 76.8% of the normal value (3700 ml on average for women). At the same time, the forced lung volume (FVC) was 10.1% and 15.7% in men and women, respectively, lower than the VC index. A decrease in VC by almost 25% relative to normal values and FVC by 10-15% relative to VC indicates a pathological process in the lungs and bronchi of mild or moderate severity, which correlates with the clinical manifestations of chronic bronchitis in patients. The use of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide at both routes of administration and at different dosages had a positive effect on the dynamics of this process. As follows from Table 1, the VC and FVC indices in patients of the main group who received the H-Asp(Pro)-OH peptide orally at doses of 100 μg, 1 mg, and 10 mg approached the lower limit of normal values, while they were significantly higher compared with pre-treatment levels. According to the results presented in Table 2, in patients receiving H-Asp(Pro)-OH peptide intramuscularly at doses of 200 μg and 1.0 mg, VC and FVC did not significantly differ from normal values for men and women, respectively, and at a dosage of 10 mcg were significantly higher than before and after treatment with conventional means.
В то же время, у пациентов контрольной группы, получавших только общепринятое лечение, показатели внешнего дыхания улучшились по сравнению с исходными значениями, но данные изменения не были статистически достоверны.At the same time, in patients of the control group who received only conventional treatment, external respiration indicators improved compared to baseline values, but these changes were not statistically significant.
Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о терапевтической эффективности фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH от 10 мкг (0,1 мкг/кг) до 10 мг (100 мкг/кг), и целесообразности ее применения в комплексном лечении хронического бронхита, в том числе и бронхита курильщиков.Thus, the results of the study indicate the therapeutic efficacy of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide from 10 μg (0.1 μg/kg) to 10 mg (100 μg/kg), and the feasibility of its use. in the complex treatment of chronic bronchitis, including bronchitis of smokers.
В процессе применения фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, побочного действия, осложнений, противопоказаний и лекарственной зависимости не выявлено.In the process of using a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide, side effects, complications, contraindications and drug dependence were not detected.
Таблица 1 - Влияние фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, на показатели внешнего дыхания у больных хроническим бронхитом при применении per osTable 1 - The effect of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide on external respiration parameters in patients with chronic bronchitis when used per os
* - р<0,05 по сравнению с показателем до лечения.* - p<0.05 compared with the index before treatment.
Таблица 2 – Влияние фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество пептида H-Asp(Pro)-OH, на показатели внешнего дыхания у больных хроническим бронхитом при применении внутримышечноTable 2 - The effect of a pharmaceutical composition containing an effective amount of the H-Asp(Pro)-OH peptide on external respiration parameters in patients with chronic bronchitis when administered intramuscularly
* - р<0,05 по сравнению с показателем до лечения.* - p<0.05 compared with the index before treatment.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021115142A RU2767532C1 (en) | 2021-05-27 | 2021-05-27 | Peptide having bronchoprotective action, pharmaceutical composition based thereon and method for use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021115142A RU2767532C1 (en) | 2021-05-27 | 2021-05-27 | Peptide having bronchoprotective action, pharmaceutical composition based thereon and method for use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2767532C1 true RU2767532C1 (en) | 2022-03-17 |
Family
ID=80737166
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021115142A RU2767532C1 (en) | 2021-05-27 | 2021-05-27 | Peptide having bronchoprotective action, pharmaceutical composition based thereon and method for use thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2767532C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020188022A1 (en) * | 2000-10-30 | 2002-12-12 | Annovis. Inc. | Methods for modulation, stimulation, and inhibition of glutamate reuptake |
| RU2255757C1 (en) * | 2004-06-22 | 2005-07-10 | Санкт-Петербургская Общественная Организация "Санкт-Петербургский Институт Биорегуляции И Геронтологии Сзо Рамн" | Peptide compound recovering function of respiratory organs |
-
2021
- 2021-05-27 RU RU2021115142A patent/RU2767532C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020188022A1 (en) * | 2000-10-30 | 2002-12-12 | Annovis. Inc. | Methods for modulation, stimulation, and inhibition of glutamate reuptake |
| RU2255757C1 (en) * | 2004-06-22 | 2005-07-10 | Санкт-Петербургская Общественная Организация "Санкт-Петербургский Институт Биорегуляции И Геронтологии Сзо Рамн" | Peptide compound recovering function of respiratory organs |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Anderegg, Giorgio et al. "Correlation between Metal Complex Formation and Biological Activity of Nicotianamine Analoguest", Journal of the Chemical Society. Chemical communications, 1989, No 10, p. 647 - 650. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3902406B2 (en) | Tetrapeptide showing anti-aging effect, pharmacological substance based on the peptide, and use thereof | |
| EP3678705B1 (en) | Conjugates of montelukast and peptides | |
| RU2144374C1 (en) | Method of preparing of oxidized glutathione-cis- diaminodichloroplatinum complex and pharmaceutical compositions based on this complex for controlling metabolism, proliferation, and differentiation, and mechanisms of apoptosis of normal and transformated cells | |
| RU2767532C1 (en) | Peptide having bronchoprotective action, pharmaceutical composition based thereon and method for use thereof | |
| SU638243A3 (en) | Method of purifying gamma-alpha-glutamyltaurine | |
| RU2449805C1 (en) | Peptide pharmaceutical composition, based drug for gastroduodenal diseases caused by helicobacter pylori, and method of using it | |
| UA92387C2 (en) | Peptide exhibiting stress protective action, pharmaceutical composition based thereon and use thereof | |
| CN111135141A (en) | Preparation method of composite hydrogel for nasal cavity | |
| CN101678069A (en) | Treatment of allergic disease with immunomodulator compounds | |
| CN111269292B (en) | Housefly polypeptide with function of promoting tissue repair and preparation method and application thereof | |
| WO2025124457A1 (en) | Use of ergothioneine in preparation of collagen peptide intestinal absorption promoter | |
| RU2110275C1 (en) | Method of synthesis of peptide showing anabolic activity, stimulating body mass increase, development of epidermal layer and hair growth | |
| US7183430B2 (en) | Compounds which can block the response to chemical substances or thermal stimuli or mediators of inflammation of nociceptors, production method thereof and compositions containing same | |
| RU2317097C2 (en) | Plant-originated heterocarpine protein having anti-cancer properties | |
| RU2299741C1 (en) | Peptide normalizing metabolism in osseous and cartilage tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using | |
| US7625870B2 (en) | Peptide substance restoring respiratory organs function | |
| RU2769051C1 (en) | Peptide that improves the functional properties of the vascular endothelium, a pharmaceutical composition based on it and the method for its application | |
| RU2768475C1 (en) | Peptide with neurostimulation activity and restore learning and memory formation, pharmaceutical composition on its basis and method for its application | |
| KR0156623B1 (en) | Epithelial cell damage treatment composition | |
| TWI843149B (en) | A formyl peptide receptor 1 antagonist and uses thereof | |
| RU2667466C1 (en) | Peptide compound, restoring function of respiratory bodies and inflammable immunomodulating action | |
| JPS647048B2 (en) | ||
| CN111285922B (en) | A Drosophila polypeptide that promotes tissue repair and its preparation method and application | |
| US11931392B2 (en) | Use of Magnolia figo extract in the manufacture of compound for inhibiting growth of lung cancer cells | |
| RU2297239C1 (en) | Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using |