RU2756619C2

RU2756619C2 - Liquid composition of an antibody against tnf alpha

Info

Publication number: RU2756619C2
Application number: RU2019130728A
Authority: RU
Inventors: Сора ЮН; Ён Кён КО; Чжинон СО
Original assignee: ЭлДжи КЕМ, ЛТД.
Priority date: 2017-03-16
Filing date: 2018-03-16
Publication date: 2021-10-04
Also published as: AU2018236651B2; JP2020510079A; RU2019130728A3; AU2018236651A1; NZ757965A; JP7109849B2; ZA201906696B; KR20180106974A; KR20200096472A; BR112019019162A2; CN110621303A; UA123847C2; JP2022097600A; MA46988A1; KR102342292B1; MY197202A; CO2019010860A2; RU2019130728A; PH12019502075A1; WO2018169348A1

Abstract

FIELD: pharmaceutics.SUBSTANCE: group of inventions relates to the field of pharmaceutics, namely to a liquid composition of an antibody against TNF-α and a method for its preparation. The liquid composition contains an antibody against TNF-α, a stabilizer, which is polyol, amino acid other than arginine, or a combination thereof, a surfactant, methionine and arginine in certain concentrations, wherein the liquid composition does not contain an additional buffer. The method for preparation of a liquid composition includes mixing an antibody against TNF-α, a stabilizer, a surfactant, methionine and arginine.EFFECT: group of inventions provides improved stability of an antibody against TNF-α in a liquid composition containing a stabilizer, a surfactant and arginine, without an additional buffer, due to the addition of an antioxidant – methionine.13 cl, 18 tbl, 2 dwg, 14 ex

Description

Область изобретенияScope of invention

Настоящее изобретение относится к жидкой композиции антитела против TNF-α, и конкретно к жидкой композиции адалимумаба.The present invention relates to a liquid anti-TNF-α antibody composition, and specifically to a liquid adalimumab composition.

Предшествующий уровень техникиPrior art

Фактор некроза опухоли альфа (TNF-α) представляет собой цитокин, продуцируемый различными типами клеток, такими как моноциты, макрофаги и т.п., путем стимулирования эндотоксина и т.п. TNF-α представляет собой основной медиатор основных воспалительных, иммунологических и патофизиологических реакций, которые активируют рецепторы TNF и вызывают ответы, такие как активация Т-клеток, пролиферация тимоцитов и т.п. (Grell, М., et al. (1995) Cell, 83: 793-802).Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is a cytokine produced by various types of cells such as monocytes, macrophages and the like by stimulating endotoxin and the like. TNF-α is a major mediator of major inflammatory, immunological and pathophysiological responses that activate TNF receptors and elicit responses such as T cell activation, thymocyte proliferation, and the like. (Grell, M., et al. (1995) Cell, 83: 793-802).

Адалимумаб представляет собой моноклональное антитело - рекомбинантный человеческий иммуноглобулин G1, который ингибирует иммунные ответы, индуцируемые TNF-α, путем избирательного связывания с TNF-α in vivo. Адалимумаб разработан В ASP Bioresearch Corporation в 1993 и одобрен Abbott Laboratories для продажи в качестве средства для лечения ревматоидного артрита. Адалимумаб в настоящее время представлен на рынке под товарным знаком HUMIRA^®, и после получения одобрения для продажи в качестве терапевтического агента для лечения ревматоидного артрита HUMIRA^® используют для лечения болезни Крона, анкилозирующего спондилита, псориатического артрита, неспецифического язвенного колита и т.п.Adalimumab is a monoclonal antibody, recombinant human immunoglobulin G1, that inhibits TNF-α-induced immune responses by selectively binding to TNF-α in vivo. Adalimumab was developed by the ASP Bioresearch Corporation in 1993 and approved by Abbott Laboratories for sale as a treatment for rheumatoid arthritis. Adalimumab currently is marketed under the trademark HUMIRA ^®, and after obtaining approval for sale as a therapeutic agent for treating rheumatoid arthritis HUMIRA ^® used to treat Crohn's disease, ankylosing spondylitis, psoriatic arthritis, ulcerative colitis etc.

Адалимумаб представляет собой первое полностью человеческое антитело, разработанное в качестве лекарственного средства. Адалимумаб разработан путем применения технологии фагового дисплея и обладает увеличенной аффинностью путем индукции мутации в CDR (гипервариабельных участках). Адалимумаб, также называемый D2E7, состоит из 1330 аминокислот и имеет молекулярную массу приблизительно 148 кДа (патент США №6090382). Адалимумаб представляет собой ингибитор TNF-α, который связывается с TNF и блокирует реакции, вызываемые TNF, за счет того, что предупреждает взаимодействие TNF с рецепторами TNF на клеточной поверхности (т.е. р55 и р75).Adalimumab is the first fully human antibody developed as a drug. Adalimumab is developed using phage display technology and has increased affinity by inducing mutations in CDRs (hypervariable regions). Adalimumab, also called D2E7, consists of 1330 amino acids and has a molecular weight of approximately 148 kDa (US Pat. No. 6,090,382). Adalimumab is a TNF-α inhibitor that binds to TNF and blocks TNF-mediated responses by preventing TNF from interacting with TNF receptors on the cell surface (i.e., p55 and p75).

Кроме того, лекарственные средства в виде антитела представляют собой вид белкового лекарственного средства, и физическая и химическая денатурация может возникать ввиду различных факторов. Помимо белковой денатурации может возникать химическая денатурация, такая как окисление, деамидирование и изомеризация, или может возникать структурная денатурация, такая как фрагментация или агрегация. Когда белок денатурирует, тогда возможно, что белок может утратить свою собственную фармакологическую активность и таким образом вызывать неблагоприятные иммунные ответы in vivo в качестве побочного действия. Когда антитело фрагментировано, тогда его связывающая аффинность или время удерживания в организме изменяется, и, таким образом, фармакологическая активность антитела изменяется. Дополнительно, представлены исследования того, что фрагментированные антитела могут вызывать агрегирование антител. Дополнительно, фармакологическая активность может быть уменьшена путем агрегации. В соответствии с исследованиями в качестве результата сравнения имеющихся в продаже продуктов бета интерферона, подтверждено, что продукты, имеющие высокое содержание агрегатов и частиц с высокой степенью вероятности имеют высокую процентную долю нейтрализующих антител в организме (Barnard et ah, 2013, J. Pharm. Sci. 102: 915). Если нейтрализующие антитела продуцируются in vivo, тогда нейтрализующие антитела связываются с белковым лекарственным средством, когда лекарственное средство инъецируется в организм, таким образом, нарушая безопасность, фармакологическое действие и фармакокинетику белкового лекарственного средства. Дополнительно, также представлено, что денатурация и агрегация эпоэтина альфа представляют собой причины увеличенной иммуногенности лекарственных средств на основе эпоэтина альфа. Соответственно, в случае белковых лекарственных средств весьма важно получать белковые лекарственные средства в подходящих композициях таким образом, чтобы не утратить свою физиологическую активность во время периода хранения, и также чтобы белки не фрагментировались, не агрегировались или не образовывали частицы. Соответственно, проводятся активные исследования на композициях различных белковых лекарственных средств.In addition, antibody drugs are a kind of protein drug, and physical and chemical denaturation can occur due to various factors. In addition to protein denaturation, chemical denaturation such as oxidation, deamidation and isomerization may occur, or structural denaturation such as fragmentation or aggregation may occur. When the protein is denatured, then it is possible that the protein may lose its own pharmacological activity and thus induce adverse immune responses in vivo as a side effect. When an antibody is fragmented, then its binding affinity or retention time in the body changes, and thus the pharmacological activity of the antibody changes. Additionally, studies are presented showing that fragmented antibodies can cause antibody aggregation. Additionally, pharmacological activity can be reduced by aggregation. In accordance with studies comparing commercially available interferon beta products, it has been confirmed that products with a high content of aggregates and particles are highly likely to have a high percentage of neutralizing antibodies in the body (Barnard et ah, 2013, J. Pharm. Sci . 102: 915). If neutralizing antibodies are produced in vivo, then the neutralizing antibodies bind to the protein drug when the drug is injected into the body, thereby compromising the safety, pharmacological action, and pharmacokinetics of the protein drug. Additionally, it is also presented that denaturation and aggregation of epoetin alfa are the reasons for the increased immunogenicity of drugs based on epoetin alfa. Accordingly, in the case of proteinaceous drugs, it is very important to formulate proteinaceous drugs in suitable compositions so that they do not lose their physiological activity during the storage period, and also that the proteins do not fragment, aggregate or form particles. Accordingly, active research is being carried out on compositions of various proteinaceous drugs.

Задача исследования белковых композиций заключается в том, чтобы найти оптимальную комбинацию путем соответствующего смешивания нескольких добавок с учетом свойства каждого продукта, таким образом, что продукт может стабильно храниться до его введения пациенту. Основная задача добавок заключается в стабилизации белков и контроля за физическими свойствами смешанных материалов. Добавки могут быть разделены на поверхностно-активные вещества, стабилизаторы, консерванты, буферы, изотонические агенты и т.п. в зависимости от их задач и характеристик. В случае лекарственных средств на основе антитела вводят большее количество белка по сравнению с другими белковыми лекарственными средствами для достижения эффективных терапевтических действий. В случае подкожной инъекции важно разработать высококонцентрированную композицию вследствие сложностей, связанных с доставкой большого объема одномоментно, таких как боли у пациента, продукция и т.п. По мере увеличения концентрации белка увеличивается межмолекулярное взаимодействие, таким образом вызывая проблемы, такие как увеличенная агрегация, увеличенная вязкость, желатинизация, осаждение и т.п. Среди них чрезмерное увеличение вязкости затрудняет продукцию, и также усложняет введение пациенту вследствие увеличения давления при инъекции. Таким образом, исследуются различные способы предупреждения и уменьшения вязкости высококонцентрированного раствора антитела.The challenge in protein formulation research is to find the optimal combination by mixing several additives appropriately, taking into account the properties of each product, so that the product can be stored stably before being administered to a patient. The main task of additives is to stabilize proteins and control the physical properties of the mixed materials. Additives can be classified into surfactants, stabilizers, preservatives, buffers, isotonic agents, and the like. depending on their tasks and characteristics. In the case of antibody-based drugs, more protein is administered as compared to other proteinaceous drugs to achieve effective therapeutic effects. In the case of subcutaneous injection, it is important to develop a highly concentrated composition due to the difficulties associated with delivering a large volume at once, such as patient pain, production, and the like. As the protein concentration increases, intermolecular interactions increase, thus causing problems such as increased aggregation, increased viscosity, gelation, precipitation, and the like. Among them, an excessive increase in viscosity makes production difficult, and also complicates administration to a patient due to an increase in injection pressure. Thus, various methods of preventing and reducing the viscosity of a highly concentrated antibody solution are being investigated.

Описание изобретенияDescription of the invention

Техническая задачаTechnical challenge

Задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить жидкую композицию антитела против TNF-α.An object of the present invention is to provide a liquid anti-TNF-α antibody composition.

Также задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способ получения жидкой композиции.It is also an object of the present invention to provide a method for producing a liquid composition.

Также задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способ улучшения стабильности антитела против TNF-α, с использованием композиции, содержащей стабилизатор, поверхностно-активное вещество и аргинин.It is also an object of the present invention to provide a method for improving the stability of an anti-TNF-α antibody using a composition comprising a stabilizer, a surfactant and arginine.

Также задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способ улучшения стабильности антитела против TNF-α, с использованием композиции, содержащей стабилизатор, поверхностно-активное вещество и аргинин без буфера.It is also an object of the present invention to provide a method for improving the stability of an anti-TNF-α antibody using a composition containing a stabilizer, a surfactant and unbuffered arginine.

Техническое решениеTechnical solution

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

Кроме того, каждое из раскрытых здесь объяснений и примеров воплощений может быть применено в отношении других объяснений и примеров воплощений. То есть все из комбинаций раскрытых здесь различных факторов относятся к объему настоящего изобретения. Кроме того, объем настоящего изобретения не должен ограничиваться конкретным описанием, приведенным ниже.In addition, each of the explanations and examples disclosed herein may be applied to other explanations and examples of embodiments. That is, all of the combinations of various factors disclosed herein are within the scope of the present invention. In addition, the scope of the present invention should not be limited to the specific description below.

Дополнительно, специалист в данной области техники способен осознать или подтвердить с использованием не более чем стандартных экспериментов количество эквивалентов конкретных воплощений изобретения, описанных в настоящем изобретении. Дополнительно, предполагается, что такие эквиваленты включены в настоящее изобретение.Additionally, one skilled in the art will be able to recognize or confirm, using no more than standard experimentation, the number of equivalents of the particular embodiments of the invention described herein. Additionally, such equivalents are intended to be included in the present invention.

Для достижения вышеприведенных задач в аспекте настоящего изобретения предложена жидкая композиция антитела против TNF-α.To achieve the above objects, an aspect of the present invention provides a liquid anti-TNF-α antibody composition.

Использованный здесь термин "антитело против TNF-α" относится к антителу, которое связывается с TNF-α и регулирует его биологическую активность. Более конкретно, антитело может связываться с TNF-α и ингибировать связывание между TNF-α и его рецепторами, таким образом, ингибируя передачу сигнала с TNF-α. Дополнительно, антитело против TNF-α может представлять собой моноклональное антитело.As used herein, the term "anti-TNF-α antibody" refers to an antibody that binds to TNF-α and regulates its biological activity. More specifically, the antibody can bind to TNF-α and inhibit the binding between TNF-α and its receptors, thus inhibiting TNF-α signaling. Additionally, the anti-TNF-α antibody can be a monoclonal antibody.

Антитело против TNF-α может находиться в форме полноразмерного антитела или фрагмента антитела, содержащего его антигенсвязывающую область, но антитело против TNF-α не ограничивается конкретно ими.The anti-TNF-α antibody may be in the form of a full-length antibody or an antibody fragment containing an antigen-binding region thereof, but the anti-TNF-α antibody is not specifically limited thereto.

Более конкретно, антитело против TNF-α может представлять собой моноклональное антитело - рекомбинантный человеческий иммуноглобулин G1, и еще более конкретно, может представлять собой адалимумаб. Информация о адалимумабе легко может быть получена специалистом в данной области техники из известных баз данных.More specifically, the anti-TNF-α antibody may be a monoclonal antibody, recombinant human immunoglobulin G1, and even more specifically, may be adalimumab. Information about adalimumab can easily be obtained by a person skilled in the art from known databases.

Это антитело может быть получено с помощью технологии рекомбинантных ДНК с использованием системы экспрессии на основе клеток млекопитающих, но способ получения не ограничивается этим.This antibody can be produced by recombinant DNA technology using a mammalian cell expression system, but the production method is not limited thereto.

Это антитело может содержаться в жидкой композиции по настоящему изобретению в терапевтически эффективном количестве. В конкретном воплощении антитело может быть представлено в концентрации от 1 мг/мл до 250 мг/мл, конкретно от 20 мг/мл до 200 мг/мл, более конкретно от 50 мг/мл до 200 мг/мл и еще более конкретно в концентрации 50 мг/мл, 100 мг/мл или 130 мг/мл, но концентрация антитела не ограничивается конкретно ими.This antibody can be contained in the liquid composition of the present invention in a therapeutically effective amount. In a specific embodiment, the antibody may be present at a concentration of 1 mg / ml to 250 mg / ml, specifically 20 mg / ml to 200 mg / ml, more particularly 50 mg / ml to 200 mg / ml, and even more particularly at a concentration 50 mg / ml, 100 mg / ml, or 130 mg / ml, but the concentration of the antibody is not specifically limited to them.

Жидкая композиция по настоящему изобретению может содержать стабилизатор, поверхностно-активное вещество и аргинин дополнительно к антителу против TNF-α. Жидкая композиция может представлять собой композицию в виде раствора, способную стабильно сохранять антитело против TNF-α.The liquid composition of the present invention may contain a stabilizer, a surfactant, and arginine in addition to an anti-TNF-α antibody. The liquid composition may be a solution composition capable of stably retaining an anti-TNF-α antibody.

Конкретно, стабильность антитела против TNF-α может быть измерена с использованием любого анализа измерения стабильности белка, хорошо известного в области техники. Стабильность может быть измерена при выбранной температуре в течение выбранного промежутка времени. Для быстрого теста композицию можно хранить при более высокой или "повышенной температуре" (например, при 40°С в течение от 2 недель до 1 месяца или больше), при этом измеряют стабильность в зависимости от времени.Specifically, the stability of an anti-TNF-α antibody can be measured using any protein stability measurement assay well known in the art. Stability can be measured at a selected temperature for a selected period of time. For a quick test, the composition can be stored at a higher or "elevated temperature" (eg, 40 ° C for 2 weeks to 1 month or more) and stability is measured over time.

В настоящем изобретении "обеспечение стабильности антитела против TNF-α" означает, что утрата активного ингредиента в определенных условиях хранения (конкретно при определенной температуре) в течение определенного периода времени меньше определенного количества (например меньше чем 10%). Обычно, когда остаточный уровень антитела против TNF-α в композиции составляет 90% или более, тогда конкретно приблизительно 92% более при 5±3°С в течение 2 лет, при 25±2°С в течение 6 месяцев или 40±2°С в течение от 1 до 2 месяцев, эти композиции могут быть интерпретированы как стабильные.In the present invention, "ensuring stability of the anti-TNF-α antibody" means that the loss of the active ingredient under certain storage conditions (specifically at a certain temperature) over a certain period of time is less than a certain amount (eg, less than 10%). Typically, when the residual level of anti-TNF-α antibody in the composition is 90% or more, then specifically about 92% more at 5 ± 3 ° C for 2 years, at 25 ± 2 ° C for 6 months or 40 ± 2 ° With a period of 1 to 2 months, these compositions can be interpreted as stable.

Стабилизатор, содержащийся в жидкой композиции по настоящему изобретению, может представлять собой полиол, аминокислоту или их комбинацию. Аминокислота может представлять собой аминокислоту, отличающуюся от аргинина.The stabilizer contained in the liquid composition of the present invention can be a polyol, an amino acid, or a combination thereof. The amino acid can be an amino acid other than arginine.

Конкретно, стабилизатор может представлять собой 1) один из видов пол иола; 2) комбинацию одного из видов полиола и одного из видов аминокислоты; 3) комбинацию одного из видов полиола, первой аминокислоты и второй аминокислоты; 4) комбинацию первого полиола и второго полиола; 5) комбинацию первого полиола, второго полиола и одного из видов аминокислоты; 6) комбинацию первого полиола, второго полиола, первой аминокислоты и второй аминокислоты; или 7) одного из видов аминокислоты.Specifically, the stabilizer can be 1) one of the types of polyol; 2) a combination of one of the types of polyol and one of the types of amino acids; 3) a combination of one of the types of polyol, the first amino acid and the second amino acid; 4) a combination of the first polyol and the second polyol; 5) a combination of the first polyol, the second polyol and one of the types of amino acids; 6) a combination of a first polyol, a second polyol, a first amino acid, and a second amino acid; or 7) one type of amino acid.

Более конкретно, этот полиол может представлять собой маннит, сахарозу, трегалозу, PEG (полиэтиленгликоль) или их комбинацию, и более конкретно, сахарозу, трегалозу, PEG или их комбинацию. PEG может конкретно представлять собой PEG400 или PEG4000, но конкретно не ограничивается ими. В вышеприведенной композиции полиол может быть представлен в концентрации от 0,1 мг/мл до 100 мг/мл.More specifically, this polyol can be mannitol, sucrose, trehalose, PEG (polyethylene glycol), or a combination thereof, and more specifically, sucrose, trehalose, PEG, or a combination thereof. PEG can be specifically PEG400 or PEG4000, but is not specifically limited to them. In the above composition, the polyol may be present at a concentration of 0.1 mg / ml to 100 mg / ml.

Более конкретно, аминокислота, отличающаяся от аргинина, может представлять собой глицин лейцин, изолейцин, фенилаланин или пролин. В вышеприведенной композиции аминокислота может быть представлена в концентрации от 1 мМ до 300 мМ.More specifically, an amino acid other than arginine may be glycine leucine, isoleucine, phenylalanine, or proline. In the above composition, the amino acid may be present in a concentration of 1 mM to 300 mM.

Дополнительно, используемый здесь термин "аминокислота" также включает все из них в форме аналогов, сольватов, гидратов, стереоизомеров и фармацевтически приемлемых солей соответствующей аминокислоты, которые демонстрируют по существу то же самое действие.Additionally, as used herein, the term "amino acid" also includes all of them in the form of analogs, solvates, hydrates, stereoisomers, and pharmaceutically acceptable salts of the corresponding amino acid that exhibit substantially the same effect.

Используемый здесь термин "фармацевтически приемлемая соль" включает фармацевтически приемлемые неорганические кислоты, органические кислоты или соли, полученные из оснований. Примеры подходящих кислот могут включать соляную кислоту, бромноватую кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, перхлорную кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, ортофосфорную кислоту, гликолевую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, янтарную кислоту, толуол-пара-сульфоновую кислоту, винную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, метансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, малоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту и т.п. Примеры солей, полученных из подходящих оснований, могут включать соль щелочного металла, такого как натрий, калий и т.п.; щелочно-земельного металла, такого как магний и т.п.; аммиака и т.п.As used herein, the term "pharmaceutically acceptable salt" includes pharmaceutically acceptable inorganic acids, organic acids, or salts derived from bases. Examples of suitable acids may include hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, nitric acid, perchloric acid, fumaric acid, maleic acid, phosphoric acid, glycolic acid, lactic acid, salicylic acid, succinic acid, toluene-p-tartaric acid , acetic acid, citric acid, methanesulfonic acid, formic acid, benzoic acid, malonic acid, naphthalene-2-sulfonic acid, benzenesulfonic acid and the like. Examples of salts derived from suitable bases may include a salt of an alkali metal such as sodium, potassium and the like; alkaline earth metal such as magnesium and the like; ammonia, etc.

Дополнительно, используемый здесь термин "сольват" означает, что аминокислота или ее соль образует комплекс с молекулой растворителя.Additionally, as used herein, the term "solvate" means that an amino acid or a salt thereof forms a complex with a solvent molecule.

Более конкретно, стабилизатор может представлять собой стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из (1) сахарозы или трегалозы, (2) PEG, имеющего среднечисловую молекулярную массу от 200 до 600 или PEG, имеющего среднечисловую молекулярную массу от 1000 до 8000; (3) глицина или лейцина; и (4) комбинации по меньшей мере двух из (1)-(3), но стабилизатор не ограничивается конкретно ими.More specifically, the stabilizer may be a stabilizer selected from the group consisting of (1) sucrose or trehalose, (2) PEG having a number average molecular weight of 200 to 600, or PEG having a number average molecular weight of 1000 to 8000; (3) glycine or leucine; and (4) combinations of at least two of (1) to (3), but the stabilizer is not particularly limited thereto.

В более конкретном воплощении стабилизатор может представлять собой стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из 1) любого из сахарозы, трегалозы и PEG400; 2) комбинации сахарозы или трегалозы с глицином или лейцином; 3) комбинации сахарозы или трегалозы с глицином и лейцином; 4) комбинации сахарозы или трегалозы с PEG4000; 5) комбинации сахарозы или трегалозы с PEG4000 и глицином; 6) комбинации сахарозы или трегалозы с PEG4000 и лейцином; 7) комбинации сахарозы или трегалозы с PEG4000, глицином и лейцином; и 8) глицина, но стабилизатор не ограничивается конкретно ими.In a more specific embodiment, the stabilizer can be a stabilizer selected from the group consisting of 1) any of sucrose, trehalose, and PEG400; 2) combinations of sucrose or trehalose with glycine or leucine; 3) combinations of sucrose or trehalose with glycine and leucine; 4) combinations of sucrose or trehalose with PEG4000; 5) combinations of sucrose or trehalose with PEG4000 and glycine; 6) combinations of sucrose or trehalose with PEG4000 and leucine; 7) combinations of sucrose or trehalose with PEG4000, glycine and leucine; and 8) glycine, but the stabilizer is not particularly limited thereto.

Поверхностно-активное вещество, которое должно быть в жидкой композиции по настоящему изобретению, может представлять собой не ионное поверхностно-активное вещество. Более конкретно, поверхностно-активное вещество может представлять собой полисорбат или полоксамер.The surfactant to be in the liquid composition of the present invention may be a non-ionic surfactant. More specifically, the surfactant can be polysorbate or poloxamer.

Конкретно, поверхностно-активное вещество может представлять собой полисорбат 80, полисорбат 20 или полоксамер 188, но поверхностно-активное вещество не ограничивается конкретно ими.Specifically, the surfactant may be polysorbate 80, polysorbate 20, or poloxamer 188, but the surfactant is not specifically limited to them.

В вышеприведенной композиции поверхностно-активное вещество может быть представлено в концентрации от 0,1 мг/мл до 5 мг/мл.In the above composition, the surfactant may be present at a concentration of 0.1 mg / ml to 5 mg / ml.

Аргинин, который должен быть в жидкой композиции по настоящему изобретению, может быть представлен в форме соли, и, более конкретно, в форме фармацевтически приемлемой соли.The arginine to be in the liquid composition of the present invention may be in the form of a salt, and more particularly in the form of a pharmaceutically acceptable salt.

Более конкретно, аргинин может находиться в форме аргинина гидрохлорид, но аргинин не ограничивается конкретно им.More specifically, arginine may be in the form of arginine hydrochloride, but arginine is not particularly limited thereto.

В вышеприведенной композиции аргинин может быть представлен в концентрации от 0,1 мМ до 200 мМ. Более конкретно, аргинин может быть представлен в концентрации от 0,1 мМ до 140 мМ, когда антитело представлено в композиции в концентрации 100 мг/мл, тогда как аргинин может быть представлен в концентрации от 0,1 мМ до 100 мМ, когда антитело представлено в композиции в концентрации 50 мг/мл, но концентрация аргинина не ограничивается конкретно ими.In the above composition, arginine may be present at a concentration of 0.1 mM to 200 mM. More specifically, arginine may be present at a concentration of 0.1 mM to 140 mM when the antibody is present in the composition at a concentration of 100 mg / ml, while arginine can be present at a concentration of 0.1 mM to 100 mM when the antibody is present in the composition at a concentration of 50 mg / ml, but the concentration of arginine is not specifically limited thereto.

Аргинин может быть в жидкой композиции по настоящему изобретению в виде агента, уменьшающего вязкость.Arginine can be in the liquid composition of the present invention as a viscosity-lowering agent.

За счет содержания аргинина жидкая композиция по настоящему изобретению может иметь вязкость от приблизительно 1 сП до 6 сП, но вязкость не ограничивается конкретно ими. Вязкость может быть измерена с использованием различных способов, известных в области техники, например тем же самым образом, как описано в примере 1, но способ измерения не ограничивается конкретно ими.Due to the content of arginine, the liquid composition of the present invention may have a viscosity of about 1 cp to 6 cp, but the viscosity is not particularly limited thereto. The viscosity can be measured using various methods known in the art, for example, in the same manner as described in Example 1, but the measurement method is not particularly limited thereto.

Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать антиоксидант.The liquid composition of the present invention may further comprise an antioxidant.

Используемый здесь "антиоксидант" может действовать таким образом, что ингибирует образование примесей, которое может происходить вследствие реакции окисления белков в растворенном состоянии.As used herein, the "antioxidant" can act in such a way as to inhibit the formation of impurities that can occur due to the oxidation reaction of proteins in the dissolved state.

Примеры антиоксиданта могут включать гидросульфат натрия, аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, лимонную кислоту, бутилгидроксианизол (ВНА), бутилгидрокситолуол (ВНТ), тиоглицерин, пропилгаллат, метионин, аскорбат натрия, цитрат натрия, сульфид натрия, сульфит натрия, EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота) и другие антиоксиданты, но антиоксидант не ограничивается ими.Examples of an antioxidant may include sodium hydrogen sulfate, ascorbic acid, ascorbyl palmitate, citric acid, butyl hydroxyanisole (BHA), butyl hydroxytoluene (BHT), thioglycerin, propyl gallate, methionine, sodium ascorbate, sodium citrate, sodium sulfide, sodium sulfite others, EDTA antioxidants, but antioxidant is not limited to them.

В вышеприведенной композиции антиоксидант (конкретно метионин) может быть представлен в концентрации от 1 мМ до 50 мМ, но антиоксидант не ограничивается конкретно ими.In the above composition, the antioxidant (specifically methionine) may be present at a concentration of 1 mM to 50 mM, but the antioxidant is not particularly limited thereto.

Дополнительно, жидкая композиция по настоящему изобретению может иметь рН от 4 до 6, но рН не ограничивается конкретно ими.Additionally, the liquid composition of the present invention may have a pH of 4 to 6, but the pH is not particularly limited thereto.

Кроме того, жидкая композиция может не содержать дополнительно соль и/или буфер, но жидкая композиция не ограничивается конкретно ими.In addition, the liquid composition may not additionally contain salt and / or buffer, but the liquid composition is not specifically limited thereto.

В неограничивающем воплощении композиция, содержащая антитело против TNF-α в концентрации 50 мг/мл или выше, может не содержать дополнительно соль и/или буфер.In a non-limiting embodiment, a composition comprising an anti-TNF-α antibody at a concentration of 50 mg / ml or higher may not additionally contain salt and / or buffer.

Как подтверждено в одном воплощении настоящего изобретения, композиция по настоящему изобретению, не содержащая соль и буфер, может обеспечивать большую стабильность антитела против TNF-α к нагреванию по сравнению с композициями, не содержащими соль, буфер, или оба из них, но композиция по настоящему изобретению не ограничивается конкретно ими.As confirmed in one embodiment of the present invention, the composition of the present invention, containing no salt and buffer, can provide greater stability of the anti-TNF-α antibody to heat compared to compositions containing no salt, buffer, or both, but the composition of the present the invention is not particularly limited to them.

Кроме того, если дополнительный буфер не добавляют в композицию лекарственного средства на основе антитела в высокой концентрации (например, лекарственное средство, в котором антитела представлены в концентрации 50 мг/мл или более высокой), или дополнительную добавку не добавляют в композицию в таком количестве, которое приводит к тому, что осмотическое давление в растворе выходит за пределы диапазона осмотического давления, близкого к осмотическому давлению жидкостей организма, боль в момент введения может быть уменьшена, тем самым повышая удобство пациенту.In addition, if an additional buffer is not added to the antibody drug composition at a high concentration (for example, a drug in which antibodies are present at a concentration of 50 mg / ml or higher), or an additional additive is not added to the composition in such an amount, which causes the osmotic pressure in the solution to go beyond the osmotic pressure range close to the osmotic pressure of body fluids, pain at the time of administration can be reduced, thereby enhancing patient comfort.

Кроме того, жидкая композиция по настоящему изобретению может оказывать следующие действия, но эти действия не ограничиваются конкретно ими.In addition, the liquid composition of the present invention can have the following actions, but these actions are not specifically limited to them.

Жидкая композиция, содержащая аргинин, по настоящему изобретению может демонстрировать относительно низкое содержание высокомолекулярных (HMW) продуктов за счет подавления агрегации белков антитела против TNF-α по сравнению с композицией, не содержащей аргинин; и/или может включать относительно низкое количество кислотных вариантов антитела за счет подавления продукции кислотных вариантов антитела по сравнению с композицией, не содержащей аргинин. В частности, жидкая композиция, содержащая аргинин, по настоящим изобретению, может обладать действием, уменьшающим денатурацию антитела, и/или действиями, уменьшающими агрегацию и образование частиц в ответ на определенные физические стрессы.The arginine-containing liquid composition of the present invention can exhibit relatively low high molecular weight (HMW) products by suppressing the aggregation of anti-TNF-α antibody proteins as compared to the arginine-free composition; and / or may include a relatively low amount of acidic antibody variants by suppressing the production of acidic antibody variants compared to a composition lacking arginine. In particular, the arginine-containing liquid composition of the present invention may have an action to reduce antibody denaturation and / or actions to reduce aggregation and particle formation in response to certain physical stresses.

Композиция раствора, содержащая аргинин, по настоящему изобретению, может дополнительно содержать консервант. Консервант относится к соединению, добавляемому в фармацевтическую композицию, действующему в качестве антимикробного агента. Примеры консервантов могут включать хлорид бензалкония, бензэтоний, хлоргексидин, фенол, м-крезол, бензиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлорбутанол, о-крезол, n-крезол, хлоркрезол, нитрат фенилртути, тимеросал, бензойную кислоту и т.п., но консервант не ограничен ими. Эти консерванты могут быть использованы сами по себе или в любой комбинации по меньшей мере двух из них.The arginine-containing solution composition of the present invention may further contain a preservative. A preservative refers to a compound added to a pharmaceutical composition to act as an antimicrobial agent. Examples of preservatives may include benzalkonium chloride, benzethonium, chlorhexidine, phenol, m-cresol, benzyl alcohol, methylparaben, propylparaben, chlorobutanol, o-cresol, n-cresol, chlorocresol, phenylmercuric nitrate, thimerosal, benzoic acid, and the like. the preservative is not limited to them. These preservatives can be used by themselves or in any combination of at least two of them.

Жидкая композиция по настоящему изобретению может быть в форме фармацевтической композиции.The liquid composition of the present invention may be in the form of a pharmaceutical composition.

Дополнительно, жидкая композиция по настоящему изобретению может содержать различные фармацевтически приемлемые носители дополнительно к описанным выше ингредиентам.Additionally, the liquid composition of the present invention may contain various pharmaceutically acceptable carriers in addition to the ingredients described above.

Композиции по настоящему изобретению могут быть использованы для предупреждения или лечения ревматоидного артрита, псориаза, псориатического артрита, аксиального спондилоартрита (например анкилозирующего спондилита, тяжелого аксиального спондилоартрита без ретгенографического доказательства анкилозирующего спондилита), васкулита, болезни Альцгеймера, неспецифического язвенного колита, синдрома Бехчета, гнойного гидраденита, увеита, ювенильного идиопатического артрита, бляшковидного псориаза у детей или болезни Крона (включающей болезнь Крона у детей и болезнь Крона у взрослых), но заболевания, которые предупреждаются или лечатся, не ограничиваются ими.The compositions of the present invention can be used to prevent or treat rheumatoid arthritis, psoriasis, psoriatic arthritis, axial spondyloarthritis (e.g. ankylosing spondylitis, severe axial spondylitis without retrogenographic evidence of ankylosing spondylitis), vasculitis, Alzheimer's disease, hydradechial syndrome, ulcer , uveitis, juvenile idiopathic arthritis, plaque psoriasis in children, or Crohn's disease (including Crohn's disease in children and Crohn's disease in adults), but diseases that can be prevented or treated are not limited to them.

Композиции по настоящему изобретению могут быть введены в организм путем перорального введения или парентерального введения, включающего подкожные, внутримышечные, внутриперитонеальные, внутригрудинные, чрескожные и внутривенные инъекции и инфузии, но введения не ограничиваются ими.The compositions of the present invention can be administered to the body by oral administration or parenteral administration, including but not limited to subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal, intrasternal, transdermal and intravenous injections and infusions.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ получения жидкой композиции антитела против TNF-α, включающий смешивание антитела против TNF-α, стабилизатора, поверхностно-активного вещества и аргинина друг с другом.In yet another aspect of the present invention, there is provided a method for preparing a liquid anti-TNF-α antibody composition comprising mixing an anti-TNF-α antibody, a stabilizer, a surfactant and arginine with each other.

Вышеприведенные термины являются такими же как разъяснено выше. Дополнительно, очевидно, что все конкретные воплощения этих терминов также применяются в настоящем аспекте.The above terms are the same as explained above. Additionally, it will be appreciated that all specific embodiments of these terms also apply in the present aspect.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ улучшения стабильности антитела против TNF-α с использованием композиции, которая содержит стабилизатор, поверхностно-активное вещество и аргинин.In another aspect, the present invention provides a method for improving the stability of an anti-TNF-α antibody using a composition that contains a stabilizer, a surfactant, and arginine.

Также задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить способ улучшения стабильности антитела против TNF-α с использованием композиции, которая содержит стабилизатор, поверхностно-активное вещество и аргинин без буфера.It is also an object of the present invention to provide a method for improving the stability of an anti-TNF-α antibody using a composition that contains a stabilizer, a surfactant and unbuffered arginine.

Полезные свойства изобретенияUseful properties of the invention

Жидкая композиция антитела против TNF-α по настоящему изобретению, конкретно жидкая композиция адалимумаба, может уменьшать образование побочных продуктов хранения адалимумаба, таким образом, обеспечивая длительное хранение. Дополнительно, фармакологическое действие адалимумаба может стабильно сохраняться в течение длительного периода времени путем предупреждения денатурации и агрегации, вызываемых в ответ на физические стрессы во время процессов производства и транспортировки. Соответственно, жидкая композиция по настоящему изобретению может эффективно использоваться в терапевтической области, ассоциирующейся с фармакологической эффективностью адалимумаба.The liquid anti-TNF-α antibody composition of the present invention, specifically the liquid adalimumab composition, can reduce the formation of storage byproducts of adalimumab, thus allowing long-term storage. Additionally, the pharmacological action of adalimumab can be stably maintained over a long period of time by preventing denaturation and aggregation caused in response to physical stress during manufacturing and transportation processes. Accordingly, the liquid composition of the present invention can be effectively used in the therapeutic field associated with the pharmacological efficacy of adalimumab.

Краткое описание графических материаловBrief description of graphic materials

Фиг. 1 демонстрирует вязкость каждого образца в примере 1 в соответствии с дополнительными композициями.FIG. 1 shows the viscosity of each sample in example 1 in accordance with additional compositions.

Фиг. 2 демонстрирует количество частиц в каждом из образцов и соответствующих им холостых образцов в примере 7 до и после пропускания через насос.FIG. 2 shows the number of particles in each of the samples and their corresponding blank samples in example 7 before and after passing through the pump.

Подробное описание изобретенияDetailed description of the invention

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие примеры. Тем не менее, эти примеры приведены исключительно для иллюстративных задач, и изобретение не ограничивается этими примерами.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, these examples are provided for illustrative purposes only, and the invention is not limited to these examples.

Пример 1Example 1

Эффект уменьшения вязкости раствора адалимумаба в зависимости от добавок и подтверждение стабильностиEffect of reducing the viscosity of adalimumab solution depending on additives and confirmation of stability

Для проверки добавок, используемых для получения жидкой композиции адалимумаба, получали композицию 1, содержащую комбинацию сахарозы (55 мг/мл), метионина (5 мМ), полисорбата 80 (1 мг/мл) и адалимумаба (100 мг/мл) при рН 5,2.To test the additives used to prepare the liquid formulation of adalimumab, formulation 1 was prepared containing a combination of sucrose (55 mg / ml), methionine (5 mM), polysorbate 80 (1 mg / ml) and adalimumab (100 mg / ml) at pH 5 , 2.

Дополнительно получали композиции 2-13 путем дополнительного добавления каждого из гидрохлорида аргинина, гидрохлорида лизина, лейцина, изолейцина, фенилаланина, глутаминовой кислоты, глицина, пролина, аланина, хлорида натрия, хлорида кальция и хлорида магния в состав композиции 1, и вязкость каждой композиции измеряли с использованием аппарата mVROC (Rheosense Inc.). Типы и концентрации добавок, добавляемых в композиции, и вязкость каждой композиции представлены в таблице 1 ниже и фиг. 1.Compositions 2-13 were additionally prepared by additionally adding each of arginine hydrochloride, lysine hydrochloride, leucine, isoleucine, phenylalanine, glutamic acid, glycine, proline, alanine, sodium chloride, calcium chloride and magnesium chloride to composition 1, and the viscosity of each composition was measured using the mVROC apparatus (Rheosense Inc.). The types and concentrations of additives added to the compositions and the viscosity of each composition are shown in Table 1 below and FIG. 1.

В отношении вязкости для каждой из композиции, представленной в таблице 1, вязкость для композиции 1, состоящей из сахарозы, метионина, полисорбата 80 и адалимумаба, составила 3,23. Для сравнения вязкость композиций, содержащих аминокислоты, такие как лейцин, изолейцин, фенилаланин, глицин и пролин, находилась в диапазоне от 3,20 до 3,28, таким образом, не демонстрируя какого-либо существенного различия относительно композиции 1. Наоборот, в случаях, когда добавляли гидрохлорид аргинина, гидрохлорид лизина, глутаминовую кислоту, хлорид натрия, хлорид кальция, хлорид магния и т.п., подтвердили то, что вязкости находились в диапазоне от 2,94 до 3,14, таким образом, демонстрируя уменьшение по сравнению с композицией 1.With respect to the viscosity for each of the composition shown in Table 1, the viscosity for composition 1, consisting of sucrose, methionine, polysorbate 80 and adalimumab, was 3.23. For comparison, the viscosity of compositions containing amino acids such as leucine, isoleucine, phenylalanine, glycine and proline ranged from 3.20 to 3.28, thus not showing any significant difference relative to composition 1. On the contrary, in the cases when arginine hydrochloride, lysine hydrochloride, glutamic acid, sodium chloride, calcium chloride, magnesium chloride and the like were added, it was confirmed that the viscosities were in the range of 2.94 to 3.14, thus showing a decrease in comparison with composition 1.

Для сравнения стабильности каждой из композиций, каждую из них стерилизовали путем фильтрования через фильтр (размер пор: 0,2 мкм), распределяли в стеклянные шприцы (объем: приблизительно 1,0 мл) в количестве 0,4 мл в каждый, запечатывали и хранили при 40°С в течение 2 месяцев. После хранения каждый образец анализировали при помощи SE-HPLC (эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография) для определения содержания высокомолекулярных примесей (HMW) (например олигомеров, агрегатов и т.п.) и низкомолекулярных примесей (LMW) (т.е. фрагментов молекул адалимумаба). Сначала в таблице 2, представленной ниже, приведены результаты SE-HPLC для композиций, обладающих уменьшенной вязкостью, (композиции 2, 3, 7, 11, 12 и 13) и для композиции 1 в качестве контрольной группы. Дополнительно, в таблице 3, представленной ниже, приведены результаты SE-HPLC для композиций, не обладающих значительным изменением вязкости, (композиции 4, 5, 6, 8, 9 и 10) и для композиции 1 в качестве контрольной группы.To compare the stability of each of the compositions, each was sterilized by filter filtration (pore size: 0.2 μm), dispensed into glass syringes (volume: approximately 1.0 ml) in an amount of 0.4 ml each, sealed and stored. at 40 ° C for 2 months. After storage, each sample was analyzed by SE-HPLC (size exclusion high performance liquid chromatography) to determine the content of high molecular weight impurities (HMW) (e.g. oligomers, aggregates, etc.) and low molecular weight impurities (LMW) (i.e. fragments of adalimumab molecules) ... First, Table 2 below shows the SE-HPLC results for formulations having reduced viscosity (formulations 2, 3, 7, 11, 12 and 13) and for formulation 1 as a control group. Additionally, Table 3 below shows the SE-HPLC results for compositions without significant viscosity change (compositions 4, 5, 6, 8, 9 and 10) and for composition 1 as a control group.

В отношении таблицы 2 выше представленные HMW, LMW и общие количества примесей до хранения похожи между композициями. Однако общее количество примесей после хранения при 40°С в течение 2 месяцев составило соответственно 7,10% в композиции 11, содержащей хлорид натрия, 7,38% в композиции 12, содержащей хлорид кальция, и 7,42% в композиции 13, содержащей хлорид магния, таким образом, демонстрируя значительное увеличение по сравнению с 6,59% для композиции 1 (т.е. контрольная группа). Наоборот, в случаях композиций 2, 3 и 7, в которых соответственно содержится гидрохлорид аргинина, гидрохлорид лизина и глутаминовая кислота, представленные общие количества примесей после хранения при 40°С в течение 2 месяцев находятся в диапазоне от 6,45% до 6,61%, таким образом, поддерживая уровни общего количества примесей около 6,59%, как в композиции 1 (т.е. контрольная группа).With respect to Table 2 above, the presented HMW, LMW and total impurities before storage are similar between compositions. However, the total amount of impurities after storage at 40 ° C for 2 months was respectively 7.10% in composition 11 containing sodium chloride, 7.38% in composition 12 containing calcium chloride, and 7.42% in composition 13 containing magnesium chloride, thus showing a significant increase over 6.59% for composition 1 (ie control group). Conversely, in the cases of compositions 2, 3 and 7, which respectively contain arginine hydrochloride, lysine hydrochloride and glutamic acid, the reported total impurities after storage at 40 ° C for 2 months are in the range from 6.45% to 6.61 %, thus maintaining total impurity levels of about 6.59% as in composition 1 (ie, control group).

В отношении таблицы 3 выше, в случае композиций, в которые добавлены аминокислоты, такие как лейцин, изолейцин, фенилаланин, глицин, пролин и т.п., представленные общие количества примесей после хранения при 40°С в течение 2 месяцев находятся в диапазоне от 5,94% до 6,17%, таким образом, демонстрируя значительное уменьшение по сравнению с 6,59% для композиции 1 (т.е. контрольная группа). В соответствии с этими результатами подтвердили, что аминокислоты, такие как лейцин, изолейцин, фенилаланин, глицин, пролин и т.п. могут вносить вклад в стабильность адалимумаба.With respect to Table 3 above, in the case of compositions to which amino acids such as leucine, isoleucine, phenylalanine, glycine, proline, etc. have been added, the reported total impurities after storage at 40 ° C for 2 months range from 5.94% to 6.17%, thus showing a significant decrease compared to 6.59% for composition 1 (ie control group). In accordance with these results, it was confirmed that amino acids such as leucine, isoleucine, phenylalanine, glycine, proline and the like. may contribute to the stability of adalimumab.

Пример 2Example 2

Оценка стабильности 1 в зависимости от содержания гидрохлорида аргининаStability score 1 versus arginine hydrochloride content

Для оценки стабильности композиций адалимумаба в зависимости от содержания гидрохлорида аргинина, композиции получали следующим образом.To assess the stability of the adalimumab compositions depending on the content of arginine hydrochloride, the compositions were prepared as follows.

Композицию 14 получали таким образом, что она содержит сахарозу (55 мг/мл), метионин (5 мМ), полисорбат 80 (1 мг/мл) и адалимумаб (100 мг/мл). Композиции 15 и 16 получали путем добавления соответственно гидрохлорида аргинина (20 мМ) и гидрохлорида аргинина (40 мМ) в состав композиции 14 и заполнения в стеклянные шприцы объемом 1 мл в количестве 0,4 мл. Каждый шприц хранили при 40°С в течение 2 месяцев и затем подвергали анализу при помощи SE-HPLC для определения стабильности. Состав каждой композиции и содержащиеся в ней HMW до и после хранения представлены в таблице 4 ниже.Composition 14 was prepared to contain sucrose (55 mg / ml), methionine (5 mM), polysorbate 80 (1 mg / ml) and adalimumab (100 mg / ml). Formulations 15 and 16 were prepared by adding respectively arginine hydrochloride (20 mM) and arginine hydrochloride (40 mM) to formulation 14 and filling 0.4 ml into 1 ml glass syringes. Each syringe was stored at 40 ° C for 2 months and then subjected to SE-HPLC analysis to determine stability. The composition of each composition and the HMWs contained therein before and after storage are shown in Table 4 below.

В отношении результатов SE-HPLC в таблице 4, когда содержание гидрохлорида аргинина увеличивали с 0 мМ (композиция 14) до 20 мМ (композиция 15) и 40 мМ (композиция 16), тогда количество HMW в образцах до хранения было похожим, находясь в диапазоне от 0,16% до 0,17%. Однако содержание HMW после хранения при 40°С в течение 2 месяцев составляло 1,00% в композиции 14 (не содержащей гидрохлорид аргинина) и 0,82% в композициях 15 и 16 (содержащих соответственно 20 мМ гидрохлорида аргинина и 40 мМ гидрохлорида аргинина), таким образом, демонстрируя то, что композиции, содержащие 20 мМ гидрохлорида аргинина и 40 мМ гидрохлорида аргинина обладали уменьшенными уровнями HMW по сравнению с композицией, не содержащей гидрохлорид аргинина. Соответственно, подтвердили, что гидрохлорид аргинина обладает действием, предотвращающим агрегацию адалимумаба.With respect to the SE-HPLC results in Table 4, when the content of arginine hydrochloride was increased from 0 mM (composition 14) to 20 mM (composition 15) and 40 mM (composition 16), then the amount of HMW in the samples before storage was similar, being in the range from 0.16% to 0.17%. However, the HMW content after storage at 40 ° C for 2 months was 1.00% in composition 14 (not containing arginine hydrochloride) and 0.82% in compositions 15 and 16 (containing 20 mM arginine hydrochloride and 40 mM arginine hydrochloride, respectively) thus demonstrating that compositions containing 20 mM arginine hydrochloride and 40 mM arginine hydrochloride had reduced HMW levels compared to a composition containing no arginine hydrochloride. Accordingly, it was confirmed that arginine hydrochloride has an anti-aggregation action of adalimumab.

Пример 3Example 3

Сравнение образования вариантов антитела, отличающихся зарядом, в зависимости от содержания аргининаComparison of the formation of antibody variants differing in charge depending on the arginine content

Для сравнения уровней образования вариантов антитела, отличающихся зарядом, в зависимости от содержания аргинина, получали композицию, содержащую аргинин, и композицию, не содержащую аргинин; хранили при 40°С в течение 1 месяца и сравнивали свойства продуцировать варианты, отличающиеся зарядом, при помощи CEX-HPLC (катионообменная высокоэффективная жидкостная хроматография). Каждая из композиций и содержания вариантов, отличающихся зарядом, до и после хранения представлены в таблице 5 ниже.To compare the formation levels of antibody variants differing in charge depending on the arginine content, a composition containing arginine and a composition not containing arginine was prepared; stored at 40 ° C for 1 month and compared the properties of producing variants differing in charge using CEX-HPLC (cation exchange high performance liquid chromatography). Each of the compositions and the contents of the charge variants before and after storage are shown in Table 5 below.

Получали композицию А, содержащую сахарозу (55 мг/мл), метионин (5 мМ), полисорбат 80 (PS80: 1 мг/мл) и адалимумаб (100 мг/мл), и получали композицию В, дополнительно содержащую гидрохлорид аргинина (20 мМ) в составе композиции А. Содержание кислотных вариантов в этих двух композициях до хранения при 40°С в течение 1 месяца было похожим. При сравнении этих двух композиций после хранения подтвердили, что композиция В, содержащая гидрохлорид аргинина, имела меньшее содержание кислотных вариантов антитела и более высокое содержание КО по сравнению с композицией А.Received composition A containing sucrose (55 mg / ml), methionine (5 mm ) in composition A. The content of acid variants in these two compositions before storage at 40 ° C for 1 month was similar. By comparing the two compositions after storage, it was confirmed that composition B containing arginine hydrochloride had a lower content of acidic antibody variants and a higher content of KO compared to composition A.

Соответственно, подтвердили, что гидрохлорид аргинина уменьшает образование кислотных вариантов адалимумаба.Accordingly, it was confirmed that arginine hydrochloride reduces the formation of acidic variants of adalimumab.

Пример 4Example 4

Композиции в зависимости от типов поверхностно-активных веществ и сравнение стабильности этих композицийCompositions depending on the types of surfactants and comparison of the stability of these compositions

Для сравнения стабильности жидких композиций адалимумаба в зависимости от типов поверхностно-активных веществ получали композиции, имеющие следующие составы.To compare the stability of liquid adalimumab compositions depending on the types of surfactants, compositions were prepared having the following compositions.

Как композицию 14 в примере 2, получали композицию 17, содержащую сахарозу (55 мг/мл), метионин (5 мМ), полисорбат 80 (1 мг/мл) и адалимумаб (100 мг/мл). Дополнительно, получали композиции 18 и 19 путем изменения типа поверхностно-активного вещества на полисорбат 20 и полоксамер 188, при этом фиксируя количество поверхностно-активного вещества на том же самом уровне.As composition 14 in Example 2, composition 17 was prepared containing sucrose (55 mg / ml), methionine (5 mM), polysorbate 80 (1 mg / ml) and adalimumab (100 mg / ml). Additionally, formulations 18 and 19 were prepared by changing the type of surfactant to polysorbate 20 and poloxamer 188, while fixing the amount of surfactant at the same level.

Каждую из композиций стерилизовали путем фильтрования, заполняли каждую в стеклянный шприц объемом 1 мл в количестве 0,4 мл и хранили при 40°С в течение 1 месяца. Количества примесей в виде HMW и LMW в образцах до и после хранения анализировали при помощи SE-HPLC. Составы композиций 17-19 и содержания в этих композициях в соответствии с SE-HPLC до и после хранения при 40°С в течение 1 месяца анализировали, и результаты представлены в таблице 6 ниже.Each of the compositions was sterilized by filtration, filled each into a 1 ml glass syringe in an amount of 0.4 ml, and stored at 40 ° C for 1 month. The amounts of impurities in the form of HMW and LMW in the samples before and after storage were analyzed using SE-HPLC. The compositions of compositions 17-19 and the contents of these compositions according to SE-HPLC before and after storage at 40 ° C. for 1 month were analyzed and the results are shown in Table 6 below.

В отношении результатов, представленных в таблице 6, содержания HMW и LMW до и после хранения при 40°С в течение 1 месяца не изменяются существенным образом в зависимости от типов поверхностно-активных веществ.With regard to the results shown in Table 6, the contents of HMW and LMW before and after storage at 40 ° C for 1 month did not change significantly depending on the types of surfactants.

То есть, показатели стабильности композиции, содержащей полисорбат 80, композиции, содержащей полисорбат 20, и композиции, содержащей полоксамер 188, были сопоставимы.That is, the stability indicators of the composition containing polysorbate 80, the composition containing polysorbate 20, and the composition containing poloxamer 188 were comparable.

Соответственно, подтвердили, что действия полисорбата 80, полисорбата 20 и полоксамера 188 на стабильность адалимумаба были сопоставимы. Accordingly, it was confirmed that the effects of polysorbate 80, polysorbate 20 and poloxamer 188 on the stability of adalimumab were comparable.

Пример 5Example 5

Композиции в зависимости от типов полиолов и сравнение стабильностей этих композицийCompositions depending on the types of polyols and comparison of the stability of these compositions

Для сравнения стабильности жидких композиций адалимумаба в зависимости от типов полиолов получали композиции, имеющие следующие составы.To compare the stability of liquid adalimumab compositions depending on the types of polyols, compositions were prepared having the following compositions.

Как композицию 14 в примере 2, композицию 20 получали таким образом, что она содержит сахарозу (55 мг/мл), метионин (5 мМ), полисорбат 80 (1 мг/мл) и адалимумаб (100 мг/мл) (так же как в композиции 17 в примере 4). Дополнительно, композиции 21-23 получали путем изменения типа полиола на трегалозу, PEG400 и PEG4000, при этом фиксируя общее количество полиола на том же самом уровне.As composition 14 in Example 2, composition 20 was prepared to contain sucrose (55 mg / ml), methionine (5 mM), polysorbate 80 (1 mg / ml) and adalimumab (100 mg / ml) (as well as in composition 17 in example 4). Additionally, compositions 21-23 were prepared by changing the type of polyol to trehalose, PEG400 and PEG4000, while fixing the total amount of polyol at the same level.

Каждую композицию стерилизовали путем фильтрования, заполняли в стеклянные шприцы объемом 1 мл в количестве 0,4 мл и хранили при 40°С в течение 1 месяца. Количества примесей в виде HMW и LMW в образцах до и после хранения анализировали при помощи SE-HPLC.Each composition was sterilized by filtration, filled into 1 ml glass syringes in an amount of 0.4 ml, and stored at 40 ° C for 1 month. The amounts of impurities in the form of HMW and LMW in the samples before and after storage were analyzed using SE-HPLC.

Составы композиций 20-23 и содержания в этих композициях в соответствии с SE-HPLC до и после хранения при 40°С в течение 1 месяца анализировали, и результаты представлены в таблице 7 ниже.The compositions of compositions 20-23 and the contents of these compositions according to SE-HPLC before and after storage at 40 ° C. for 1 month were analyzed and the results are shown in Table 7 below.

В отношении результатов, представленных в таблице 7 выше, можно видеть, что содержания HMW и LMW значительно варьируют в зависимости от типов полиола до и после хранения при 40°С в течение 1 месяца. Содержание примесей в виде HMW и LMW во всех композициях было близким друг другу до хранения при 40°С в течение 1 месяца. Тем не менее, после хранения при 40°С в течение 1 месяца композиции 20-22, которые содержали соответственно сахарозу, трегалозу и PEG400, демонстрировали относительно низкое содержание HMW по сравнению с композицией 23, которая содержала PEG4000. Представленное содержание LMW близко среди этих композиций. Соответственно, подтвердили, что существует различие в стабильности среди композиций в зависимости от используемых типов полиолов, и показали, что среди них сахароза и трегалоза являются более эффективными в отношении улучшения стабильности, чем другие типы полиолов.With regard to the results presented in Table 7 above, it can be seen that the contents of HMW and LMW vary significantly depending on the types of polyol before and after storage at 40 ° C for 1 month. The content of impurities in the form of HMW and LMW in all compositions was close to each other before storage at 40 ° C for 1 month. However, after storage at 40 ° C for 1 month, compositions 20-22, which contained sucrose, trehalose and PEG400, respectively, exhibited relatively low HMW content compared to composition 23, which contained PEG4000. The LMW content presented is close among these compositions. Accordingly, it was confirmed that there is a difference in stability among the compositions depending on the types of polyols used, and among them, sucrose and trehalose were shown to be more effective in improving stability than other types of polyols.

Пример 6Example 6

Сравнение стабильности композиций, состоящих из полиола, аргинина, метионина, поверхностно-активного вещества и дополнительного стабилизатора, и композиции HUMIRA^® Comparison of the stability of compositions consisting of polyol, arginine, methionine, surfactant and optional stabilizer and HUMIRA ^® formulation

Образцы получали с различными композициями путем изменения типов поверхностно-активных веществ и полиолов, присутствия/отсутствия дополнительного стабилизатора, содержания гидрохлорида аргинина и т.п. в композиции, где в качестве стабилизатора использовали 5 мМ метионин, и получали композицию в имеющейся в продаже композиции Humira^®. Эти образцы хранили при 40°С и затем подвергали анализу при помощи SE-HPLC для сравнения стабильности этих композиций. Составы каждой из этих композиций представлены в таблице 8, и содержания примесей до и после хранения при 40°С в течение 2 месяцев представлены в таблице 9.Samples were prepared with different compositions by changing the types of surfactants and polyols, the presence / absence of an additional stabilizer, the content of arginine hydrochloride, and the like. in the composition, wherein the stabilizer used is 5 mM methionine, and the composition is prepared in a commercially available Humira ^® composition. These samples were stored at 40 ° C and then subjected to SE-HPLC analysis to compare the stability of these compositions. The compositions of each of these compositions are shown in Table 8, and the impurity contents before and after storage at 40 ° C for 2 months are shown in Table 9.

В отношении таблицы 8 сахарозу, трегалозу, комбинацию сахарозы и PEG4000, и коминацию трегалозы и PEG4000 использовали в качестве полиолов, тогда как полисорбат 80 и полоксамер 188 использовали в качестве поверхностно-активных веществ.With respect to Table 8, sucrose, trehalose, a combination of sucrose and PEG4000, and a combination of trehalose and PEG4000 were used as polyols, while polysorbate 80 and poloxamer 188 were used as surfactants.

Аргинин использовали в концентрации 0 мМ, 20 мМ или 40 мМ, и для подтверждения ролей дополнительных добавок разрабатывали композиции с использованием глицина (Gly), лейцина (Leu) или комбинации глицина и лейцина, и стабильность получающихся в результате композиций адалимумаба (100 мг/мл) сравнивали со стабильностью имеющейся в продаже композиции HUMIRA^®. Дополнительно, в отношении стабильности адалимумаба (50 мг/мл) имеющуюся в продаже композицию HUMIRA^® сравнивали с составом композиции 44, который был тем же самым, что и композиция 26, за исключением содержания адалимумаба.Arginine was used at a concentration of 0 mM, 20 mM, or 40 mM, and formulations were developed using glycine (Gly), leucine (Leu), or a combination of glycine and leucine, and the stability of the resulting formulations of adalimumab (100 mg / ml ) was compared with the stability of the composition HUMIRA ^® commercially available. Further, with respect to stability adalimumab (50mg / ml) available commercially HUMIRA ^® composition compared to the composition 44, which was the same as Composition 26 except the content of adalimumab.

В качестве результата сравнения стабильности композиций в таблице 9 подтвердили, что все композиции обладают превосходной стабильностью по сравнению с имеющейся в продаже композицией HUMIRA^®. Общее содержание примесей до хранения находилось в диапазоне от 0,57 до 0,74, и было близко друг другу. Однако в отношении стабильности этих композиций после хранения при 40°С в течение 2 месяцев подтвердили, что другие композиции адалимумаба имеют меньшее содержание примесей по сравнению с имеющейся в продаже композицией HUMIRA^®, имеющей содержание адалимумаба 100 мг/мл (композиция 43) и имеющейся в продаже композицией HUMIRA^®, имеющей содержание адалимумаба 50 мг/мл (композиция 45).As a result of comparing the stability of the compositions in Table 9 confirmed that all compositions have superior stability as compared to the commercially available composition HUMIRA ^®. The total impurity content before storage ranged from 0.57 to 0.74, and were close to each other. However, the stability of these formulations after storage at 40 ° C for 2 months confirmed that other adalimumab compositions have minimal content of impurities when compared to the commercially available composition HUMIRA ^®, having a content of adalimumab 100 mg / ml (formulation 43) and existing in Sales composition HUMIRA ^®, adalimumab having a content of 50 mg / ml (formulation 45).

Соответственно, подтвердили, что композиции по настоящему изобретению, состоящие из различных полиолов и поверхностно-активных веществ, гидрохлорида аргинина и дополнительного стабилизатора, более стабильны, чем имеющиеся в продаже композиции HUMIRA^® в отношении увеличения содержания примесей.Accordingly, we confirmed that the compositions of the present invention consisting of various polyols and surfactants, additional arginine hydrochloride and stabilizer are more stable than commercially available compositions HUMIRA ^® in increasing the content of impurities.

Дополнительно, хотя общее содержание примесей было приблизительно на 0,4% выше в композициях примера 5 после хранения при 40°С в течение 1 месяца, когда в качестве полиола в примере 5 использовали PEG 4000, по сравнению с композициями, в которых в качестве полиола использовали сахарозу или трегалозу, было показано, что в композициях указанного примера общее содержание примесей в адалимумабе при использовании сахарозы или трегалозы вместе с PEG4000, являются близкими с теми композициями, где сахарозу или трегалозу использовали по отдельности, хотя период хранения составил 2 месяца. Соответственно, подтвердили, что когда дополнительную добавку добавляют для достижения дополнительного эффекта, такого как антиокисление и т.п., замена части сахарозы или трегалозы на PEG, который обладает более высокой молекулярной массой, может быть использована в качестве способа поддержания осмотического давления и стабильности.Additionally, although the total impurity content was about 0.4% higher in the compositions of Example 5 after storage at 40 ° C for 1 month, when PEG 4000 was used as the polyol in Example 5, compared to compositions in which the polyol used sucrose or trehalose, it was shown that in the compositions of this example, the total impurities in adalimumab when using sucrose or trehalose together with PEG4000 are similar to those compositions where sucrose or trehalose was used separately, although the shelf life was 2 months. Accordingly, it was confirmed that when an additional additive is added to achieve an additional effect such as antioxidation and the like, replacing a portion of the sucrose or trehalose with PEG which has a higher molecular weight can be used as a method for maintaining osmotic pressure and stability.

Пример 7Example 7

Оценка сравнительной стабильности имеющейся в продаже композиции HUMIRA^® и композиций, содержащих гидрохлорид аргинина, в ответ на механический стрессEvaluation of comparative stability of the commercially available composition and HUMIRA ^® formulations containing arginine hydrochloride, in response to mechanical stress

Для сравнения стабильности имеющейся в продаже композиции HUMIRA^® и композиций, содержащих гидрохлорид аргинина, в ответ на механический стресс получали композиции, имеющие следующие составы, и давали возможность для пропускания через ротационно-поршневой насос, и, таким образом, оценивали количество частиц до и после пропускания через насос.To compare the stability of the commercially available compositions HUMIRA ^® and compositions comprising arginine hydrochloride, in response to mechanical stress was prepared a composition having the following compositions, and were allowed to pass through the rotary piston pump, and thus evaluated by the number of particles before and after passing through the pump.

Дополнительно, для подтверждения того, имеют ли измеряемые частицы происхождение из адалимумаба, получали плацебо путем исключения только адалимумаба в композиции каждого образца, давали им возможность для пропускания через ротационно-поршневой насос в тех же самых условиях, и, таким образом, оценивали количество частиц до и после пропускания через насос. Для оценки количества частиц использовали устройство для визуализации с микропотоком от Protein Simple. Композиция каждого образца представлена в таблице 10, и количество частиц в каждом образце и соответствующих им плацебо до и после пропускания через насос представлены в таблице 11 и фиг. 2.Additionally, to confirm whether the particles to be measured were of adalimumab origin, a placebo was prepared by excluding only adalimumab in the composition of each sample, allowing them to be passed through a rotary piston pump under the same conditions, and thus evaluating the number of particles to and after passing through the pump. A microflow imager from Protein Simple was used to estimate the number of particles. The composition of each sample is shown in Table 10, and the number of particles in each sample and their corresponding placebos before and after pumping are shown in Table 11 and FIG. 2.

В соответствии с представленным в таблице 10 композиция 46 и композиция 47 имеют один и тот же дополнительный состав, и содержание адалимумаба в композиции 46 составляет 100 мг/мл, а его содержание в композиции 47 составляет 50 мг/мл. В случае композиции 48 состав и содержание адалимумаба скорректировали таким образом, чтобы оно было таким же, как в имеющейся в продаже HUMIRA^®. Каждую композицию пропускали через ротационно-поршневой насос и анализировали количество частиц до и после пропускания. В результате, как представлено в таблице 11 и на фиг. 2, подтвердили, что композиция 46 содержала 85743 частиц/мл, композиция 47 содержала 53734 частиц/мл, и композиция 46 с высоким содержанием адалимумаба содержала более высокое количество частиц по сравнению с композицией 47, имеющей низкое содержание адалимумаба.As shown in Table 10, composition 46 and composition 47 have the same additional composition, and the content of adalimumab in composition 46 is 100 mg / ml, and its content in composition 47 is 50 mg / ml. In the case of composition 48 and composition content adalimumab adjusted so that it was the same as in commercially available HUMIRA ^®. Each composition was passed through a rotary piston pump and particle counts were analyzed before and after passing. As a result, as shown in Table 11 and FIG. 2, it was confirmed that composition 46 contained 85,743 particles / ml, composition 47 contained 53734 particles / ml, and composition 46 with a high adalimumab content contained a higher amount of particles compared to composition 47 having a low adalimumab content.

Наоборот, в случае композиции 48, т.е. имеющейся в продаже композиции HUMIRA^®, количество частиц, которые пропускали через насос, составляло 150617 частиц/мл, таким образом, демонстрируя более высокое количество частиц по сравнению с количеством частиц в композициях 46 и 47. Дополнительно, концентрации частиц в плацебо всех композиций после прохождения через насос составляли 3618 частиц/мл и 7938 частиц/мл, и, таким образом, подтвердили, что частицы, измеряемые в образцах, содержащих адалимумаб, после прохождения через насос, имели происхождение из адалимумаба. Соответственно, подтвердили, что композиции, содержащие гидрохлорид аргинина, могут эффективно защищать адалимумаб от механического стресса по сравнению с имеющейся в продаже композицией HUMIRA^®.On the contrary, in the case of composition 48, i.e. commercially available HUMIRA ^® formulation, the amount of particles which passed through a pump, was 150,617 particles / ml, thus demonstrating a higher amount of particles compared to the amount of particles in compositions 46 and 47. Further, the concentration of particles in the placebo all formulations after passing through the pump were 3618 particles / ml and 7938 particles / ml, and thus confirmed that the particles measured in the samples containing adalimumab, after passing through the pump, were of adalimumab origin. Accordingly, we confirmed that the formulations containing arginine hydrochloride, adalimumab can effectively protect against mechanical stress as compared to a commercially available composition HUMIRA ^®.

Пример 8Example 8

Эксперимент по уменьшающему вязкость действию в зависимости от концентрации гидрохлорида аргининаExperiment on the viscosity-lowering action depending on the concentration of arginine hydrochloride

Для исследования диапазона концентраций аргинина, при которых вязкость раствора адалимумаба может быть уменьшена при добавлении к нему аргинина, были проведены следующие эксперименты. В качестве контрольной группы, не содержащей гидрохлорид аргинина (ArgHCl), получали образцы, содержащие адалимумаб (100 мг/мл) и полисорбат 80 (1 мг/мл) или адалимумаб (50 мг/мл) и полисорбат 80 (1 мг/мл). В качестве экспериментальной группы получали образцы, содержащие гидрохлорид аргинина, путем постепенного увеличения концентрации гидрохлорида аргинина, добавляемого в каждый состав контрольной группы от 20 мМ до 180 мМ (конечная концентрация). рН всех образцов составлял приблизительно 5,2. Вязкости приготовленных образцов измеряли с использованием прибора mVROC от Rheosense. Результаты измерения вязкости представлены в таблице 12.To investigate the range of arginine concentrations at which the viscosity of an adalimumab solution can be reduced by adding arginine to it, the following experiments were carried out. As a control group that did not contain arginine hydrochloride (ArgHCl), samples were obtained containing adalimumab (100 mg / ml) and polysorbate 80 (1 mg / ml) or adalimumab (50 mg / ml) and polysorbate 80 (1 mg / ml) ... As an experimental group, samples containing arginine hydrochloride were prepared by gradually increasing the concentration of arginine hydrochloride added to each control group from 20 mM to 180 mM (final concentration). The pH of all samples was approximately 5.2. The viscosities of the prepared samples were measured using an mVROC instrument from Rheosense. The results of measuring the viscosity are presented in table 12.

В вышеприведенной таблице 12, отражающей вязкости композиций, в которые добавляли адалимумаб (100 мг/мл), полисорбат 80 (1 мг/мл) и гидрохлорид аргинина (ArgHCl) в различных концентрациях, вязкость раствора, содержащего адалимумаб (100 мг/мл) и полисорбат 80 (1 мг/мл) без ArgHCl составляла 2,71 сП. Когда ArgHCl добавляли в раствор до конечной концентрации от 20 мМ до 120 мМ, тогда подтверждали, что вязкости этих композиций уменьшались по сравнению с вязкостью композиции, в которую ArgHCl не добавляли. В случае, где ArgHCl добавляли до конечной концентрации 140 мМ, вязкость композиции была близка вязкости в том случае, где ArgHCl не добавляли. В случаях, где ArgHCl добавляли до конечной концентрации 160 мМ или выше, действие, уменьшающее вязкость, не обнаруживали и вязкости были увеличены по сравнению с композицией, в которую ArgHCl не добавляли.In the above table 12, reflecting the viscosities of the compositions to which adalimumab (100 mg / ml), polysorbate 80 (1 mg / ml) and arginine hydrochloride (ArgHCl) were added at various concentrations, the viscosity of a solution containing adalimumab (100 mg / ml) and polysorbate 80 (1 mg / ml) without ArgHCl was 2.71 cps. When ArgHCl was added to the solution to a final concentration of 20 mM to 120 mM, then it was confirmed that the viscosities of these compositions were decreased compared to the viscosity of the composition to which ArgHCl was not added. In the case where ArgHCl was added to a final concentration of 140 mM, the viscosity of the composition was close to that in the case where ArgHCl was not added. In cases where ArgHCl was added to a final concentration of 160 mM or higher, no viscosity-lowering effect was detected and viscosities were increased compared to the composition to which ArgHCl was not added.

В случае композиций, содержащих адалимумаб (50 мг/мл) и полисорбат 80 (1 мг/мл), вязкость раствора, не содержащего ArgHCl, составляла 1,47 сП, и в случаях, где ArgHCl добавляли до концентрации от 20 мМ до 80 мМ, тогда вязкости находились в диапазоне от 1,42 до 1,45, таким образом, оказываясь меньше по сравнению с композицией, в которую ArgHCl не добавляли. В случаях, где ArgHCl добавляли до конечной концентрации 100 мМ, тогда вязкость была близка вязкости, где ArgHCl не добавляли, и в тех случаях, где ArgHCl добавляли до конечной концентрации 120 мМ или выше, тогда вязкости увеличивались по сравнению с тем случаем, где ArgHCl не добавляли.In the case of compositions containing adalimumab (50 mg / ml) and polysorbate 80 (1 mg / ml), the viscosity of the solution without ArgHCl was 1.47 cP, and in cases where ArgHCl was added to a concentration of 20 mM to 80 mM then the viscosities were in the range of 1.42 to 1.45, thus being lower compared to the composition to which ArgHCl was not added. In cases where ArgHCl was added to a final concentration of 100 mM, then the viscosity was close to the viscosity where ArgHCl was not added, and in cases where ArgHCl was added to a final concentration of 120 mM or higher, then the viscosities increased compared to the case where ArgHCl not added.

Соответственно, подтвердили, что в случае раствора адалимумаба (100 мг/мл) вязкость может быть уменьшена путем добавления в него ArgHCl в концентрации 140 мМ или меньше, и в случае раствора адалимумаба (50 мг/мл) вязкость может быть уменьшена путем добавления в него ArgHCl в концентрации 100 мМ или меньше.Accordingly, it was confirmed that in the case of an adalimumab solution (100 mg / ml), the viscosity can be reduced by adding ArgHCl at a concentration of 140 mM or less, and in the case of an adalimumab solution (50 mg / ml), the viscosity can be reduced by adding ArgHCl at a concentration of 100 mM or less.

Пример 9Example 9

Эксперимент 1, подтверждающий действие буферов и солей в композициях адалимумабаExperiment 1 Confirming the Effect of Buffers and Salts in Adalimumab Formulations

Для определения действий буферов и солей на стабильность адалимумаба получали образцы композиций без буферов и солей, и получали образцы композиций, в которых буфер или соль добавляли в вышеприведенные композиции, и эти композиции хранили при 40°С в течение 2 недель и 1 месяца. Стабильность этих образцов сравнивали при помощи SE-HPLC и измеряли рН каждого образца.To determine the effects of buffers and salts on the stability of adalimumab, formulation samples were prepared without buffers and salts, and formulation samples were prepared in which a buffer or salt was added to the above formulations, and these formulations were stored at 40 ° C for 2 weeks and 1 month. The stability of these samples was compared using SE-HPLC and the pH of each sample was measured.

В таблице 13 представлены результаты анализа при помощи SE-HPLC композиций образцов в исходный для каждого образца момент времени, после хранения при 40°С в течение 2 недель и после хранения при 40°С в течение 1 месяца. Композицию А-1 получали таким образом, что она содержит адалимумаб (100 мг/мл) и PS80 (1 мг/мл), и композиции А-2 - А-5 получали таким образом, что они содержат буфер или соль в композиции А-1. Дополнительно, композиции А-6 - А-10 получали путем корректирования концентрации адалимумаба в композиции А-1 - А-5 до 50 мг/мл. Рассматривая результаты анализа при помощи SE-HPLC каждого из образцов, когда сравнивали композицию А-1 без буфера и композицию А-2 с буфером (или сравнивали композиции А-6 и А-7 с различными концентрациями адалимумаба), тогда обнаружили, что композиции без буфера демонстрировали меньшее увеличение HMW и LMW, таким образом, подтверждая, что эти композиции являются более стабильными.Table 13 shows the results of SE-HPLC analysis of the sample compositions at baseline for each sample, after storage at 40 ° C for 2 weeks and after storage at 40 ° C for 1 month. Composition A-1 was prepared so that it contains adalimumab (100 mg / ml) and PS80 (1 mg / ml), and compositions A-2 through A-5 were prepared so that they contain a buffer or salt in composition A- 1. Additionally, compositions A-6 to A-10 were prepared by adjusting the concentration of adalimumab in composition A-1 to A-5 to 50 mg / ml. Considering the results of SE-HPLC analysis of each of the samples, when comparing composition A-1 without buffer and composition A-2 with buffer (or comparing compositions A-6 and A-7 with different concentrations of adalimumab), then it was found that compositions without buffers showed less increases in HMW and LMW, thus confirming that these compositions are more stable.

Дополнительно, когда сравнивали композиции А-1 и А-6 и композиции, содержащие соль, включающую NaCl, сульфат аммония, сульфат натрия и т.п., тогда обнаружили, что композиции без соли демонстрировали меньшее увеличение HMW и LMW по сравнению с композициями с солью. Соответственно, подтвердили, что предпочтительно, чтобы композиции адалимумаба не содержали соль, исходя из аспекта стабильности.Additionally, when comparing compositions A-1 and A-6 and compositions containing a salt including NaCl, ammonium sulfate, sodium sulfate, etc., then it was found that the compositions without salt showed less increases in HMW and LMW compared to compositions with salt. Accordingly, it was confirmed that it is preferable that the compositions of adalimumab contain no salt in terms of stability.

Дополнительно, все из образцов поддерживали таким образом, чтобы они имели постоянный рН 5,2 до хранения, через 2 недели после хранения и 1 месяц после хранения. Соответственно, подтвердили, что адалимумаб в концентрации 50 мг/мл или более высокой, обладает достаточным собственным буферным действием, таким образом, не требуя применения буфера, и могут быть составлены композиции, обладающие улучшенной стабильностью, без использования буфера.Additionally, all of the samples were maintained so that they had a constant pH of 5.2 before storage, 2 weeks after storage, and 1 month after storage. Accordingly, it was confirmed that adalimumab at a concentration of 50 mg / ml or higher has sufficient buffering effect of its own, thus without requiring the use of a buffer, and compositions having improved stability can be formulated without the use of a buffer.

Пример 10Example 10

Эксперимент 2, подтверждающий влияние буферов и солей в композициях адалимумабаExperiment 2 confirming the effect of buffers and salts in adalimumab formulations

Для определения действий буферов и солей на стабильность адалимумаба получали образцы композиций, состоящих из адалимумаба (100 мг/мл или 50 мг/мл), стабилизатора (сахароза (55 мг/мл) или глицин (160 мМ)), гидрохлорида аргинина (ArgHCl: 50 мМ), метионина (5 мМ) и полисорбата 80 (1 мг/мл), и получали образцы композиций, в которых буфер или соль добавлены в вышеприведенные композиции. Для сравнения получали образцы с композицией Humira^®, содержащие адалимумаб (100 мг/мл) или адалимумаб (50 мг/мл), и каждую композицию заполняли в стеклянные шприцы в количестве 0,4 мл на шприц, хранили при 55°С в течение одной недели, и стабильность сравнивали при помощи SE-HPLC и измеряли рН. Подробная информация о каждой композиции и содержании мономеров до и после хранения при 55°С в течение 1 недели представлена в таблице 14 ниже.To determine the effects of buffers and salts on the stability of adalimumab, samples of compositions were obtained consisting of adalimumab (100 mg / ml or 50 mg / ml), a stabilizer (sucrose (55 mg / ml) or glycine (160 mM)), arginine hydrochloride (ArgHCl: 50 mM), methionine (5 mM) and polysorbate 80 (1 mg / ml), and formulation samples were prepared in which a buffer or salt was added to the above formulations. For comparison, samples prepared with the composition Humira ^®, containing adalimumab (100 mg / ml) or adalimumab (50 mg / ml), and each composition was filled into glass syringe in an amount of 0.4 mL per syringe, stored at 55 ° C for one weeks, and the stability was compared using SE-HPLC and measured the pH. Details of each composition and monomer content before and after storage at 55 ° C for 1 week are shown in Table 14 below.

Во-первых, все из образцов поддерживали таким образом, чтобы они имели постоянный рН 5,2 до и после хранения при 55°С в течение 1 недели. Соответственно, подтвердили, что адалимумаб в концентрации 50 мг/мл или выше обладает достаточным собственным буферным действием в композициях и подобных им композициях, представленных в таблице 14 выше.First, all of the samples were maintained so that they had a constant pH of 5.2 before and after storage at 55 ° C for 1 week. Accordingly, it was confirmed that adalimumab at a concentration of 50 mg / ml or higher has a sufficient intrinsic buffering effect in the compositions and similar compositions shown in Table 14 above.

Как представлено в таблице 14 выше, содержание мономера в образцах было близким друг к другу, находясь в диапазоне от 98,8% до 99,0%. После хранения при 55°С в течение 1 недели было продемонстрировано, что содержание мономеров отличается между композициями. Содержание мономера в образце А-11 для композиции адалимумаба (100 мг/мл), сахарозы (55 мг/мл), ArgHCl (50 мМ), метионина (5 мМ) и полисорбата 80 (1 мг/мл) составило 94,8% после хранения. Однако в случае образцов А-12 - А-16, где использовали соли хлорида натрия, сульфата аммония, хлорида магния и хлорида кальция, или цитрата натрия в качестве буфера, содержания мономеров после хранения находились в диапазоне от 94,1% до 94,7%, будучи меньшей величиной по сравнению с содержанием в образце, имеющем состав, в котором соль и буфер не использовали. В случае образца А-17, когда Gly (160 мМ) использовали в качестве стабилизатора вместо сахарозы, тогда содержание мономера после хранения составило 95,2%; однако в случае образцов А-18 - А-23, когда использовали соли и буферы, тогда содержания мономера после хранения находились в диапазоне от 94,0% до 94,9%, таким образом, будучи меньше по сравнению с содержанием в образце, имеющем состав, в котором соль и буфер не использовали. Даже в том случае, когда композицию получали путем уменьшения содержания адалимумаба до 50 мг/мл, когда сахарозу использовали в качестве стабилизатора без использования соли и буфера (т.е. образец А-25), тогда содержание мономера после хранения составляло 95,2%, и когда глицин (Gly) использовали в качестве стабилизатора без использования соли и буфера (т.е. образец А-32), тогда содержание мономера после хранения составляло 95,6%. Тем не менее, когда дополнительные соль/буфер использовали в каждой из композиций, в случае композиций (образцы А-26 - А-31), в которых содержалась сахароза, тогда содержание мономеров после хранения находилось в диапазоне от 93,5% до 95,0%, и в случаях композиций (образцы А-33 - А-38), в которых содержался Gly, содержание мономеров после хранения находилось в диапазоне от 93,6% до 95,4%, таким образом, демонстрируя то, что содержание мономеров в композициях, в которых использовали дополнительную соль/буфер, было меньше по сравнению с содержанием в композициях, в которых соль и буфер не использовали. Соответственно, подтвердили, что, когда дополнительная соль и буфер не используются в композициях, в которых содержатся адалимумаб, аргинин, стабилизатор и поверхностно-активные вещества, тогда стабильность адалимумаба может быть улучшена, и что возможно получить композицию, обладающую улучшенной стабильностью, с использованием самого адалимумаба, обладающего собственным буферным действием, без использования дополнительного буфера.As shown in Table 14 above, the monomer content of the samples was close to each other, ranging from 98.8% to 99.0%. After storage at 55 ° C for 1 week, it was demonstrated that the monomer content differs between the compositions. The monomer content in sample A-11 for the composition of adalimumab (100 mg / ml), sucrose (55 mg / ml), ArgHCl (50 mM), methionine (5 mM) and polysorbate 80 (1 mg / ml) was 94.8% after storage. However, in the case of samples A-12 - A-16, which used salts of sodium chloride, ammonium sulfate, magnesium chloride and calcium chloride, or sodium citrate as a buffer, the monomer contents after storage ranged from 94.1% to 94.7 %, being less than the content in the sample having a composition in which salt and buffer were not used. In the case of sample A-17, when Gly (160 mM) was used as a stabilizer instead of sucrose, then the monomer content after storage was 95.2%; however, in the case of samples A-18 to A-23, when salts and buffers were used, then the monomer contents after storage were in the range from 94.0% to 94.9%, thus being less than in the sample having a formulation in which salt and buffer were not used. Even when the composition was prepared by reducing the adalimumab content to 50 mg / ml, when sucrose was used as a stabilizer without the use of salt and buffer (i.e. sample A-25), then the monomer content after storage was 95.2% , and when glycine (Gly) was used as a stabilizer without using salt and buffer (i.e., Sample A-32), then the monomer content after storage was 95.6%. However, when additional salt / buffer was used in each of the compositions, in the case of compositions (samples A-26 - A-31), which contained sucrose, then the monomer content after storage was in the range from 93.5% to 95, 0%, and in the cases of compositions (samples A-33 - A-38), which contained Gly, the monomer content after storage was in the range from 93.6% to 95.4%, thus demonstrating that the monomer content in the compositions in which the additional salt / buffer was used was less compared to the content in the compositions in which the salt and buffer were not used. Accordingly, it was confirmed that when the additional salt and buffer are not used in compositions containing adalimumab, arginine, stabilizer and surfactants, then the stability of adalimumab can be improved, and that it is possible to obtain a composition having improved stability using itself adalimumab, which has its own buffering effect, without the use of additional buffer.

Однако по сравнению с образцами А-24 и А-39, имеющими композицию Humira^®, в котором содержание адалимумаба было тем же самым, содержание мономеров в композициях, в которых содержались соль и буфер, после хранения при 55°С в течение 1 недели было большим по сравнению с содержанием мономеров в образцах, имеющих композицию Humira^®, после хранения при 55°С в течение 1 недели.However, compared with samples A-24 and A-39 having a composition Humira ^®, wherein the content of adalimumab was the same, the content of monomers in compositions which contained a salt and a buffer after storage at 55 ° C for 1 week was large compared to the monomer content in the samples having the composition Humira ^®, after storage at 55 ° C for 1 week.

Соответственно, исходя из аспекта стабильности предпочтительно, чтобы дополнительную соль и буфер не использовали в композициях адалимумаба, в которых содержатся аргинин, поверхностно-активные вещества и стабилизаторы; тем не менее, подтвердили, что композиции, содержащие аргинин, поверхностно-активные вещества и стабилизаторы более стабильны по сравнению с имеющимися в продаже композициями Humira^® независимо от того, содержат ли композиции дополнительную соль и буфер.Accordingly, from a stability aspect, it is preferred that the additional salt and buffer are not used in adalimumab compositions containing arginine, surfactants and stabilizers; nevertheless, it confirmed that the formulations containing arginine, surfactants and stabilizers are more stable compared with commercially available compositions Humira ^®, regardless of whether the composition contain additional salt and a buffer.

Пример 11Example 11

Эксперимент, подтверждающий стабилизирующее действие полиолов в композициях адалимумабаExperiment confirming the stabilizing effect of polyols in adalimumab compositions

Для сравнения стабилизирующего действия полиолов, которые используют для улучшения стабильности адалимумаба в растворе, раствор адалимумаба (112 мг/мл адалимумаба) и композицию, содержащую адалимумаб в концентрации 112 мг/мл и каждый из полиолов в концентрации 42 мг/мл, получали следующим образом. Содержание HMW, LMW и мономеров анализировали с использованием SE-HPLC после повторения процесса замораживания/оттаивания (FT) в течение 5 циклов и 10 циклов при -70°С и 5°С, соответственно.To compare the stabilizing effect of polyols used to improve the stability of adalimumab in solution, a solution of adalimumab (112 mg / ml adalimumab) and a composition containing adalimumab at 112 mg / ml and each of the polyols at 42 mg / ml were prepared as follows. The content of HMW, LMW and monomers was analyzed using SE-HPLC after repeating the freeze / thaw (FT) process for 5 cycles and 10 cycles at -70 ° C and 5 ° C, respectively.

В таблице 15 представлены композиции образцов и результаты анализа при помощи SE-HPLC образцов в соответствии с моментами отбора образцов в тесте стабильности. В вышеприведенных результатах, когда каждый образец подвергали процессу повторного замерзания/оттаивания, увеличение HMW и LMW в композициях, в которые добавляли маннит, сахарозу или трегалозу, демонстрировало тенденцию к уменьшению по сравнению с композицией, в которую полиол не добавляли, таким образом, подтверждая присутствие стабилизирующего действия со стороны полиолов. Сравнивая стабилизирующее действие каждого полиола в зависимости от его типа, когда добавляли сахарозу или трегалозу, тогда содержание HMW и LMW было близко содержанию в образцах до того, как они претерпят процесс замораживания/оттаивания, и, дополнительно, представленная чистота близка чистоте до процесса замораживания/оттаивания даже после того, как они претерпят 10 циклов процесса замораживания/оттаивания, таким образом, подтверждая значительное стабилизирующее действие со стороны полиолов. Наоборот, в случае образца, содержащего маннит, когда образец подвергают процессу повторного замораживания/оттаивания, подтвердили, что содержание HMW демонстрирует тенденцию к увеличению, и чистота образца уменьшалась во время процесса замораживания/оттаивания. Соответственно, подтвердили, что сахароза и трегалоза обладают большим стабилизирующим действием по сравнению с маннитом.Table 15 shows the sample compositions and the results of SE-HPLC analysis of the samples according to the sampling points in the stability test. In the above results, when each sample was subjected to a refreeze / thaw process, the increase in HMW and LMW in compositions to which mannitol, sucrose, or trehalose was added tended to decrease compared to a composition to which no polyol was added, thus confirming the presence of stabilizing action on the part of polyols. Comparing the stabilizing effect of each polyol depending on its type, when sucrose or trehalose was added, then the content of HMW and LMW was close to the content in the samples before they underwent the freezing / thawing process, and, additionally, the purity presented was close to the purity before the freezing process. thawing even after they have undergone 10 cycles of the freeze / thaw process, thus confirming the significant stabilizing effect on the part of the polyols. On the contrary, in the case of a sample containing mannitol, when the sample was subjected to a repeated freeze / thaw process, it was confirmed that the HMW content tended to increase, and the purity of the sample decreased during the freeze / thaw process. Accordingly, sucrose and trehalose were confirmed to have a greater stabilizing effect than mannitol.

Пример 12Example 12

Эксперимент по замораживанию/оттаиванию композиций адалимумаба для подтверждения и сравнения стабилизирующих действий аргинина, метионина, глицина и сахарозыFreeze / thaw experiment of adalimumab compositions to confirm and compare the stabilizing effects of arginine, methionine, glycine and sucrose

Для подтверждения действия аргинина, метионина, глицина и сахарозы на стабилизацию во время процесса замораживания/оттаивания концентрированных растворов, образцы получали в соответствии с представленным ниже. Каждый образец в количестве 1 мл добавляли во флакон из поликарбоната (5 мл), подвергали 5 циклам процесса замораживания/оттаивания во время приготовления и при -70°С и 5°С, соответственно, и анализировали с использованием SE-HPLC. Состав каждого образца и результаты SE-HPLC для каждого образца до и после процесса замораживания/оттаивания представлены ниже.To confirm the stabilization effect of arginine, methionine, glycine and sucrose during the freeze / thaw process of concentrated solutions, samples were prepared as shown below. Each sample in an amount of 1 ml was added to a polycarbonate vial (5 ml), subjected to 5 cycles of freeze / thaw during preparation and at -70 ° C and 5 ° C, respectively, and analyzed using SE-HPLC. The composition of each sample and the SE-HPLC results for each sample before and after the freeze / thaw process are presented below.

Получали образцы, содержащие адалимумаб (130 мг/мл) и полисорбат 80 (1 мг/мл) и содержащие дополнительный стабилизатор. Представленные содержания примесей в каждом из образцов до процесса замораживания/оттаивания близки друг другу в отношении как HMW, так и LMW. После процесса замораживания/оттаивания представленное содержание LMW было близким во всех из образцов; тем не менее, представленное содержание HMW варьировало в зависимости от типа и содержания дополнительного стабилизатора. В случае образца, в который дополнительный стабилизатор не добавляли, содержание HMW после 5 циклов процесса замораживания/оттаивания увеличивалось до 1,76%, тогда как в случае образца, содержащего гидрохлорид аргинина (50 мМ), содержание HMW после 5 циклов процесса замораживания/оттаивания значительно уменьшалось до 0,67%. В случае композиции, где метионин добавляли дополнительно к гидрохлориду аргинина (50 мМ), дополнительное уменьшение содержания HMW не подтверждалось тогда, когда композиция содержала метионин в концентрации 5 мМ, тогда как содержание HMW дополнительно уменьшалось на приблизительно 0,52% тогда, когда композиция содержала метионин в концентрации 25 мМ. В случаях, когда глицин или сахарозу добавляли дополнительно к гидрохлориду аргинина и метионину, подтвердили, что содержание HMW после 5 циклов процесса замораживания/оттаивания дополнительно уменьшалось, находясь в диапазоне от 0,41% до 0,43%, и как композиция, содержавшая глицин, так и композиция, содержавшая сахарозу, демонстрировали подобную стабильность. Соответственно, подтвердили, что все из метионина, аргинина, глицина и сахарозы вносят вклад в стабильность адалимумаба. Дополнительно, подтвердили, что похожие уровни стабильности могут быть достигнуты тогда, когда композиции получали при помощи подходящих комбинаций с использованием полиола или аминокислоты в качестве стабилизатора.Samples were prepared containing adalimumab (130 mg / ml) and polysorbate 80 (1 mg / ml) and containing an additional stabilizer. The reported impurity contents in each of the samples before the freeze / thaw process are close to each other with respect to both HMW and LMW. After the freeze / thaw process, the reported LMW content was similar in all of the samples; however, the HMW content presented varied depending on the type and content of the additional stabilizer. In the case of the sample to which no additional stabilizer was added, the HMW content after 5 cycles of the freeze / thaw process increased to 1.76%, while in the case of the sample containing arginine hydrochloride (50 mM), the HMW content after 5 cycles of the freeze / thaw process decreased significantly to 0.67%. In the case of a composition where methionine was added in addition to arginine hydrochloride (50 mM), an additional decrease in the HMW content was not confirmed when the composition contained methionine at a concentration of 5 mM, while the HMW content was further decreased by about 0.52% when the composition contained methionine at a concentration of 25 mM. In cases where glycine or sucrose was added in addition to arginine hydrochloride and methionine, it was confirmed that the HMW content after 5 cycles of the freeze / thaw process was further reduced, ranging from 0.41% to 0.43%, and as a composition containing glycine and the composition containing sucrose exhibited similar stability. Accordingly, all of methionine, arginine, glycine and sucrose were confirmed to contribute to the stability of adalimumab. Additionally, it was confirmed that similar levels of stability could be achieved when the compositions were prepared using suitable combinations using a polyol or amino acid as stabilizer.

Пример 13Example 13

Сравнительные эксперименты по стабильности между композициями, содержащими глицин, композициями, содержащими сахарозу, и имеющимися в продаже композициями Humira^® Comparative experiments on the stability between the formulations containing glycine, compositions comprising sucrose, and commercially available compositions Humira ^®

Для сравнения стабильности композиций, содержащих глицин, композиций, содержащих сахарозу, и имеющихся в продаже композиций Humira^®, получали образцы, содержащие адалимумаб в концентрации 100 мг/мл или 50 мг/мл, гидрохлорид аргинина (ArgHCl) в концентрации 50 мМ, полисорбат 80 (PS80) в концентрации 1 мг/мл и метионин в концентрации 5 мМ, и затем дополнительные образцы получали путем добавления глицина, комбинаций глицина и метионина или сахарозы в качестве дополнительного стабилизатора в вышеприведенные композиции. Дополнительно, получали образцы, содержащие имеющиеся в продаже композиции Humira^® и содержащие адалимумаб в концентрации 100 мг/мл или 50 мг/мл. Каждый из вышеприведенных образцов заполняли в стеклянные шприцы объемом 1 мл в количестве 0,4 мл на шприц. После хранения каждого шприца при 40°С в течение 4 недель содержания HMW и LMW в каждом образце анализировали при помощи SE-HPLC. Состав каждой композиции и результаты SE-HPLC представлены в таблице 17 ниже.To compare the stability of formulations containing glycine, compositions comprising sucrose, and commercially available compositions Humira ^®, were prepared samples containing adalimumab at a concentration of 100 mg / ml or 50 mg / ml, arginine hydrochloride (ArgHCl) at a concentration of 50 mM, polysorbate 80 (PS80) at a concentration of 1 mg / ml and methionine at a concentration of 5 mM, and then additional samples were obtained by adding glycine, combinations of glycine and methionine or sucrose as an additional stabilizer to the above compositions. Additionally, samples were prepared containing compositions are available commercially in Humira ^®, containing adalimumab at a concentration of 100 mg / ml or 50 mg / ml. Each of the above samples was filled into 1 ml glass syringes at 0.4 ml per syringe. After storing each syringe at 40 ° C for 4 weeks, the contents of HMW and LMW in each sample were analyzed by SE-HPLC. The composition of each composition and the SE-HPLC results are shown in Table 17 below.

Образцы, имеющие композиции, содержащие гидрохлорид аргинина, полисорбат 80, метионин и адалимумаб, демонстрировали похожие уровни стабильности до хранения при 40°С в течение 4 недель. В то же время, образцы, содержащие имеющиеся в продаже композиции Humira^®, демонстрировали более высокое содержание HMW приблизительно на 0,1% после получения и сравнения с другими образцами. В отношении суммы содержаний HMW и LMW после хранения все из образцов, содержащие гидрохлорид аргинина, демонстрировали относительно низкие значения: то есть от 2,81% до 2,99%, когда адалимумаб содержался в концентрации 100 мг/мл; и от 2,56% до 2,71%, когда адалимумаб содержался в концентрации 50 мг/мл. Тем не менее, в случае имеющихся в продаже композиций Humira^®, сумма содержаний HMW и LMW после хранения составляла 4,03%, когда адалимумаб содержался в концентрации 100 мг/мл; и 4,06%, когда адалимумаб содержался в концентрации 50 мг/мл, таким образом, демонстрируя более высокие уровни содержаний HMW и LMW по сравнению с образцами, имеющими композиции, содержащие аргинин. Соответственно, подтвердили, что композиции, содержащие комбинации добавок, описанных в примерах настоящего изобретения; то есть композиции, содержащие аргинин, и композиции, содержащие полиол или аминокислоту в качестве дополнительного стабилизатора, обладают превосходством над имеющимися в продаже композициями Humira^® в отношении стабильности.Samples having compositions containing arginine hydrochloride, polysorbate 80, methionine and adalimumab showed similar levels of stability before storage at 40 ° C for 4 weeks. At the same time, samples that contain commercially available Humira ^® composition exhibited a higher content of HMW about 0.1% after receipt and comparison with other samples. With regard to the sum of the HMW and LMW contents after storage, all of the samples containing arginine hydrochloride showed relatively low values: that is, from 2.81% to 2.99% when adalimumab was contained at a concentration of 100 mg / ml; and from 2.56% to 2.71% when adalimumab is contained at a concentration of 50 mg / ml. However, in the case of commercially available compositions Humira ^®, the amount of HMW and LMW content after storage was 4.03% when adalimumab contained in a concentration of 100 mg / ml; and 4.06% when adalimumab was contained at a concentration of 50 mg / ml, thus demonstrating higher levels of HMW and LMW compared to samples having compositions containing arginine. Accordingly, it was confirmed that compositions containing combinations of additives described in the examples of the present invention; i.e. compositions comprising arginine and compositions comprising a polyol or an amino acid as additional stabilizer exhibit advantage over commercially available in formulations Humira ^® with respect to stability.

Пример 14Example 14

Сравнительные эксперименты по стабильности композиций адалимумаба в зависимости от концентрации адалимумаба, сахарозы, глицина, лейцина, метионина, хлорида натрия (NaCl) и аргининаComparative experiments on the stability of adalimumab compositions depending on the concentration of adalimumab, sucrose, glycine, leucine, methionine, sodium chloride (NaCl) and arginine

Для сравнения стабильности композиций адалимумаба образцы различных композиций получали путем комбинирования адалимумаба, гидрохлорида аргинина (ArgHCl), хлорида натрия (NaCl), полисорбата 80 (PS80), метионина (Met), сахарозы, глицина (Gly) и лейцина (Leu). Дополнительно, получали образцы, содержащие имеющиеся в продаже композиции Humira^®, и содержащие адалимумаб в концентрации 100 мг/мл или 50 мг/мл для задач сравнения. Каждую композицию заполняли в стеклянный шприц объемом 1 мл в количестве 0,4 мл, хранили при 40°С в течение 4 недель, и содержание мономеров до и после хранения анализировали при помощи SE-HPLC. Композиции и результаты SE-HPLC представлены ниже.To compare the stability of the adalimumab formulations, samples of various formulations were prepared by combining adalimumab, arginine hydrochloride (ArgHCl), sodium chloride (NaCl), polysorbate 80 (PS80), methionine (Met), sucrose, glycine (Gly), and leucine (Leu). Additionally, samples were prepared containing commercially available Humira ^® formulation comprising adalimumab and at a concentration of 100 mg / ml or 50 mg / ml for comparison tasks. Each composition was filled into a 1 ml glass syringe in an amount of 0.4 ml, stored at 40 ° C for 4 weeks, and the monomer content before and after storage was analyzed by SE-HPLC. The compositions and results of SE-HPLC are presented below.

Содержание мономеров во всех образцах до хранения при 40°С было близко друг другу, находясь в диапазоне от 99,27% до 99,33% независимо от композиции. В отношении содержания мономеров в образцах (А-40 - А-61), содержащих адалимумаб (100 мг/мл), после хранения при 40°С в течение 4 недель в случае образцов (А-40 - А-55), в которых хлорид натрия не содержался, содержание мономеров находилось в диапазоне от 97,04% до 97,23%, тогда как в случае образцов, содержащих хлорид натрия (А-56 - А-61, за исключением А-62, которая представляла собой композицию Humira^®), содержание мономеров находилось в диапазоне от 96,85% до 97,00%, таким образом, демонстрируя слегка меньшее содержание мономеров по сравнению с композициями, в которых хлорид натрия не содержался. Однако отличие в содержании мономеров между этими образцами в зависимости от содержания хлорида натрия, сахарозы, метионина, глицина и лейцина после хранения при 40°С в течение 4 недель является относительно незначительным, и представленное содержание мономеров в композициях (А-40 - А-61) было выше, чем 95,64%, содержание мономера в А-62, которая представляет собой композицию Humira^®, содержащую адалимумаб в той же самой концентрации, по меньшей мере на 1%.The monomer content in all samples before storage at 40 ° C was close to each other, ranging from 99.27% to 99.33% regardless of the composition. With regard to the content of monomers in samples (A-40 - A-61) containing adalimumab (100 mg / ml), after storage at 40 ° C for 4 weeks in the case of samples (A-40 - A-55), in which sodium chloride was not contained, the monomer content ranged from 97.04% to 97.23%, while in the case of samples containing sodium chloride (A-56 - A-61, with the exception of A-62, which was a Humira ^® ), the monomer content was in the range from 96.85% to 97.00%, thus showing slightly lower monomer content compared to compositions that did not contain sodium chloride. However, the difference in the content of monomers between these samples depending on the content of sodium chloride, sucrose, methionine, glycine and leucine after storage at 40 ° C for 4 weeks is relatively insignificant, and the presented content of monomers in the compositions (A-40 - A-61 ) was higher than 95.64% of the monomer content in the a-62 which is a composition Humira ^®, containing adalimumab at the same concentration, at least 1%.

В том случае, когда адалимумаб содержался в концентрации 50 мг/мл, тогда результаты анализа были теми же самыми как в композициях, в которых адалимумаб содержался в концентрации 100 мг/мл. В отношении содержания мономеров в образцах, содержащих адалимумаб (50 мг/мл) (А-63 - А-85) после хранения при 40°С в течение 4 недель, в случае образцов А-63 - А-79, в которых хлорид натрия не содержался, содержание мономеров находилось в диапазоне от 97,15% до 97,38%, тогда как в случае образцов, содержащих хлорид натрия (А-80 - А-85, за исключением А-86, которая представляет собой композицию Humira^®), содержание мономеров находилось в диапазоне от 96,81% до 97,06%, таким образом, демонстрируя слегка меньшее содержание мономеров по сравнению с теми композициями, в которых хлорид натрия не содержался. Тем не менее, представленное отличие в содержании мономеров между этими образцами в зависимости от содержания хлорида натрия, сахарозы, метионина, глицина и лейцина после хранения при 40°С в течение 4 недель является относительно незначительным, и представленное содержание мономеров в композициях (А-63 - А-85) было выше, чем 95,47%, содержание мономера в А-86, которая представляет собой композицию Humira^®, содержащую адалимумаб в той же самой концентрации, по меньшей мере на 1%.In the case where adalimumab was contained at a concentration of 50 mg / ml, then the analysis results were the same as in the compositions in which adalimumab was contained at a concentration of 100 mg / ml. Regarding the content of monomers in samples containing adalimumab (50 mg / ml) (A-63 - A-85) after storage at 40 ° C for 4 weeks, in the case of samples A-63 - A-79, in which sodium chloride was not contained, the content of monomers in a range of 97.15% to 97.38%, while in the case of the samples containing sodium chloride (a-80 - a-85, a-86 except that the composition is Humira ^®) , the monomer content was in the range from 96.81% to 97.06%, thus showing slightly lower monomer content compared to those compositions in which sodium chloride was not contained. However, the reported difference in monomer content between these samples versus sodium chloride, sucrose, methionine, glycine and leucine after storage at 40 ° C for 4 weeks is relatively small, and the reported monomer content of the compositions (A-63 - a-85) was higher than 95.47%, the monomer content of the a-86 which is a composition Humira ^®, containing adalimumab at the same concentration, at least 1%.

Соответственно, подтвердили, что комбинации добавок и их композиций, описанные в примерах в соответствии с настоящим изобретением, то есть, композиции, содержащие аргинин, превосходят имеющиеся в продаже композиции Humira^® в отношении стабильности.Accordingly, confirmed that the combination of additives and formulations described in Examples according to the present invention, i.e., compositions containing the arginine surpass commercially available compositions Humira ^® with respect to stability.

Исходя из вышеизложенного, специалист в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение, сможет понять, что настоящее изобретение может быть воплощено в других конкретных формах без модификации технических концепций или существенных характеристик настоящего изобретения. В этой связи раскрытые здесь примеры воплощений приведены исключительно для иллюстративных задач и их не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения. Наоборот, предполагается, что настоящее изобретение охватывает не только примеры воплощений, но также различные альтернативы, модификации, эквиваленты и другие воплощения, которые могут быть включены в пределы сущности и объема настоящего изобретения, как определено приложенной формулой изобретения.Based on the foregoing, one skilled in the art to which the present invention relates will be able to understand that the present invention may be embodied in other specific forms without modifying the technical concepts or essential characteristics of the present invention. In this regard, the exemplary embodiments disclosed herein are for illustrative purposes only and should not be construed as limiting the scope of the present invention. On the contrary, the present invention is intended to cover not only exemplary embodiments, but also various alternatives, modifications, equivalents, and other embodiments that may be included within the spirit and scope of the present invention as defined by the appended claims.

Claims

1. Liquid composition of antibodies against TNF-α containing antibody against TNF-α at a concentration of 50 mg / ml to 130 mg / ml, a stabilizer, a surfactant at a concentration of 0.5 mg / ml to 1.5 mg / ml, methionine at a concentration of 2.5 mM to 35 mM and arginine at a concentration of 20 mM to 120 mM,

where the stabilizer is a polyol, an amino acid other than arginine, or a combination thereof,

where the polyol is present at a concentration of 25 mg / ml to 82.5 mg / ml, and where an amino acid other than arginine is present at a concentration of 10 mM to 160 mM,

moreover, the liquid composition does not contain an additional buffer.

2. The liquid composition of claim 1, wherein the polyol is selected from sucrose, trehalose, polyethylene glycol (PEG), and a combination thereof.

3. The liquid composition of claim 1, wherein the amino acid is selected from glycine, leucine, isoleucine, phenylalanine, proline, and combinations thereof.

4. A liquid composition according to claim 1, wherein the stabilizer is selected from the group consisting of:

(1) sucrose or trehalose;

(2) PEG having a number average molecular weight of 200 to 600, or PEG having a number average molecular weight of 1000 to 8000;

(3) glycine or leucine; and

(4) combinations of at least two of (1) - (3).

5. The liquid composition of claim 1, wherein the surfactant is a nonionic surfactant.

6. The liquid composition of claim 1, wherein the surfactant is polysorbate or poloxamer.

7. The liquid composition of claim 6, wherein the surfactant is Polysorbate 80, Polysorbate 20, or Poloxamer 188.

8. The liquid composition of claim 1, wherein the arginine is in the form of a salt.

9. The liquid composition of claim 8, wherein the arginine is in the form of arginine hydrochloride.

10. The liquid composition of claim 1, wherein the anti-TNF-α antibody is adalimumab.

11. The liquid composition of claim 1, wherein the anti-TNF-α antibody is present at a concentration of 75 mg / ml to 130 mg / ml.

12. Liquid composition according to any one of paragraphs. 1-11, having a pH of 4 to 6.

13. A method for preparing a liquid composition according to claim 1, comprising mixing an anti-TNF-α antibody, a stabilizer, a surfactant, methionine and arginine.