RU2754927C1 - Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины - Google Patents
Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины Download PDFInfo
- Publication number
- RU2754927C1 RU2754927C1 RU2020143507A RU2020143507A RU2754927C1 RU 2754927 C1 RU2754927 C1 RU 2754927C1 RU 2020143507 A RU2020143507 A RU 2020143507A RU 2020143507 A RU2020143507 A RU 2020143507A RU 2754927 C1 RU2754927 C1 RU 2754927C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biomass
- microorganisms
- lysobacter
- clay
- mixture
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxosilane;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3].O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 23
- 229910052901 montmorillonite Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 14
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 29
- 241001248650 Lysobacter sp. Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000004927 clay Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000010907 mechanical stirring Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 4
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 abstract description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 16
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 12
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 6
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 5
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 230000010189 intracellular transport Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 230000005672 electromagnetic field Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 3
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 3
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 3
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 241000235048 Meyerozyma guilliermondii Species 0.000 description 2
- 241001149594 Trichoderma deliquescens Species 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 241000186073 Arthrobacter sp. Species 0.000 description 1
- 241000589173 Bradyrhizobium Species 0.000 description 1
- 241000589174 Bradyrhizobium japonicum Species 0.000 description 1
- 241000959699 Bradyrhizobium lupini Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical class [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000223197 Fusarium lateritium Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000863031 Lysobacter Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000589194 Rhizobium leguminosarum Species 0.000 description 1
- 241000187561 Rhodococcus erythropolis Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000589196 Sinorhizobium meliloti Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108091000100 Tyrosine Phenol-Lyase Proteins 0.000 description 1
- 241000235015 Yarrowia lipolytica Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001420 bacteriolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000010796 biological waste Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000002894 chemical waste Substances 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGANSGVIUGARFR-UHFFFAOYSA-N dipotassium dioxosilane oxo(oxoalumanyloxy)alumane oxygen(2-) Chemical compound [O--].[K+].[K+].O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O YGANSGVIUGARFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052900 illite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052622 kaolinite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- KQMKBWMQSNKASI-AVSFGBOWSA-N lysobactin Chemical compound O1C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](N)CC(C)C)[C@H]1C1=CC=CC=C1 KQMKBWMQSNKASI-AVSFGBOWSA-N 0.000 description 1
- KQMKBWMQSNKASI-UHFFFAOYSA-N lysobactin Natural products O1C(=O)C(CO)NC(=O)C(C(O)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C(O)C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(N)CC(C)C)C1C1=CC=CC=C1 KQMKBWMQSNKASI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010011530 lysobactin Proteins 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 229910052627 muscovite Inorganic materials 0.000 description 1
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 1
- VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L nonaaluminum;magnesium;tripotassium;1,3-dioxido-2,4,5-trioxa-1,3-disilabicyclo[1.1.1]pentane;iron(2+);oxygen(2-);fluoride;hydroxide Chemical compound [OH-].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[F-].[Mg+2].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2 VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 150000003377 silicon compounds Chemical class 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
Landscapes
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины. Способ включает смешивание предварительно обогащенной и активированной 10%-ной соляной кислотой монтмориллонитовой глины с биологическим материалом в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. Причем монтмориллонитовую глину после активации промывают очищенной дистиллированной водой до нейтральной среды, сушат при температуре не более 105°C и измельчают на шаровой мельнице до размеров частиц не более 10 мкм; а биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. предварительно заливают 0,05 М трис-гидрохлорида буферным раствором с рН 7,5 и перемешивают, причем при перемешивании смесь постепенно нагревают до 45°С в течение 5 минут, далее охлаждают до комнатной температуры и центрифугируют, после чего сливают супернатант и к остатку обработанной биомассы в виде L-формы Lysobacter sp. при постоянном механическом перемешивании постепенно добавляют измельченную глину в соотношении носитель : биомасса, равном 1:(2-4), при температуре 25°C; смесь тщательно перемешивают в течение не менее 40 минут и затем подвергают лиофильной сушке при температуре минус 40-45°C в течение 24 часов до уровня 3-7% влажности композиции. Изобретение позволяет осуществить продление срока хранения бактериальных клеток Lysobacter sp. на носителе из монтмориллонитовой глины, с возможностью обеспечения восстановления их активности при нанесении на раневую поверхность. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 5 пр.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве для получения средства для лечения ран у животных.
В настоящее время известны многочисленные способы иммобилизации микроорганизмов и клеток. Для иммобилизации применяют различные носители: гели, Са-альгинатный гель, н-алканы с C14-C16, природные сорбенты. Но все описанные способы имеют один большой недостаток они преимущественно применяются для очистки сточных вод или для очистки водной среды от загрязнения нефтепродуктами.
Известен способ иммобилизации клеток путем смешения клеток с гелем, отличающийся тем, что, с целью удлинения сроков сохранения жизнеспособности клеток млекопитающих, взвесь клеток смешивают с водным раствором, содержащим метилцеллюлозу 0,3 - 1,5%, альгинат натрия 0,2 - 1% и галактан сульфата 0,1 - 0,5%, в соотношении 1 : (1 - 4), затем полученную смесь смешивают с коллагеном, взятым в количестве 0,3 - 1,5% от массы образуемого гелия.(патент SU № 1 264 575 A1 от 1984.10.23)
Известен способ иммобилизации клеток микроорганизмов с β-тирозиназной активностью путем включения их в гель, иммобилизацию приводят в присутствии стабилизатора - ацетата аммония или пирувата натрия или тирозина, при этом в качестве геля используют полиакриламидный гель, а из микроорганизмов используют штамм Citrobcioter reund №62. Иммобилизацию клеток проводят в фосфатном буфере рН 7-8 с добавлением ацетата аммония, либо в ацетатном буфере при рН 8. В буфере смешивают суспензию клеток, растворы акриламида и метиленбисакриламида, тетраметилендиамина и персульфата аммония. Реакционный сосуд погружают в баню со льдом. Полимеризация заканчивается через минуту. Блок полученного полиакриламидного геля с включенными клетками протирают через полиэтиленовое сито с размером пор 1*1 мм и отмывают от свободных клеток. В гель включается 89% клеток (патент SU 922142 A1 от 1982.04.23).
Известен способ получения биопрепарата для очистки водной среды от загрязнения нефтепродуктами. Способ получения биопрепарата заключается в том, что вещество носителя, вещество-фактор роста микроорганизмов и биомассу микроорганизмов-нефтедеструкторов, иммобилизованную посредством рассосредоточения биомассы микроорганизмов-нефтедеструкторов в массе вещества носителя физически соединяют с веществом носителя. В качестве вещества носителя применена композиция из Са-альгинатного геля, н-алканов с C14-C16 и вещества-фактора роста микроорганизмов. Иммобилизацию микроорганизмов-нефтедеструкторов осуществляют посредством рассосредоточения биомассы микроорганизмов-нефтедеструкторов в массе вещества носителя с физическим соединением их с веществом носителя, для чего приготавливают 1% водную смесь с альгинатом натрия (например, в количестве 100 мл для упомянутого количества суспензии биомассы), тщательно ее перемешивают и выдерживают в течение 2-3 часов для завершения абсорбции фрагментами альгината натрия. К полученной таким образом смеси с альгинатом натрия добавляют факторы роста, например, кукурузный экстракт в количестве 10 г на 100 мл смеси. Физическое соединение микроорганизмов-нефтедеструкторов с веществом носителя осуществлено посредством образования капель из смеси суспензированной биомассы с ингредиентами композиции вещества носителя и полимеризации капель с образованием гранул в водном растворе, содержащем ионы Са. Гранулы фильтруют, промывают и помещают в физиологический раствор. (патент РФ №2255052 от 2003.01.17)
Известен способ получения биосорбента, заключающийся в иммобилизации в гидрофобный сорбент нефти биомассы штаммов микромицета Fusarium lateritium НК-204 или Gliocladium deliquescens НК-205 или Gliocladium deliquescens НК-206 или консорциума этих штаммов, посредством обрастания мицелием грибов сорбента, помещенного на питательную среду. Далее полученный препарат сушат. Сорбент выполнен из гидрофобного сорбента нефти на основе торфа. Мицелий грибов составляет 20 - 50% по сухому весу. (патент RU (11) №2299181, №2318736, №2299181 от 2005.08.03)
Известен способ получения биосорбента, включающий иммобилизацию на нефтяном гидрофобном сорбенте дрожжевых грибов Candida lipolytica, Candida guilliermondii, Pichia guilliermondii и культур бактерий Rhodococcus erythropolis, Arthrobacter sp. в количестве от 10 до 50% (по сухому весу) посредством обрастания мицелием грибов сорбента с последующей сушкой на воздухе. (патент RU №2318736 от 2006.02.10)
Известен способ иммобилизации клеток микроорганизмов в гидрофобный олеофильный сорбент, заключающийся в смешивании двух аэрозолей до заданной степени насыщения сорбента биоагентом. Первый аэрозоль состоит из газовой среды, в которой во взвешенном состоянии находятся частицы сорбента. Второй аэрозоль состоит из газовой среды, в которой во взвешенном состоянии находится смесь или масла, или нефтепродукта и культуральной жидкости с биоагентом. Частицы сорбента имеют размер - 1÷3 мм в диаметре. Размер капель масляного или нефтяного аэрозоля 15÷25 мкм. Капли масляного или нефтяного аэрозоля попадают на поверхность и в поры гидрофобного сорбента, обеспечивая быстрый контакт и внедрение микробных клеток в разветвленную структуру гидрофобного сорбента. Процесс иммобилизации микробных клеток, содержащихся в масле или в нефти, выполняется в камере, где потоки сорбента и эмульсии подаются с заданной интенсивностью, температурой, давлением. Иммобилизацию продолжают до содержания микробных клеток в сорбенте не менее 109 живых клеток на 1 г сорбента. Эта величина определена расчетно и обеспечивается в производстве посредством забора проб и последующего лабораторного контроля. (патент РФ № 2420579 C2 от 2009.08.11)
Известен способ получения композиции, содержащей высушенные бактерии, который предусматривает культивирование одного или нескольких видов живых бактерий; смешивание культивируемой бактерии с одним или несколькими носителями; обработку бактерии импульсными электромагнитными полями 2 мВ/см при 50 Гц и 55 В; инкубирование смеси культура:носитель в течение по крайней мере приблизительно 6 ч и сушку бактерии таким образом, чтобы снизить уровень влажности до величины приблизительно от 1 до приблизительно 6 мас.%.
Согласно данному изобретению предпочтительные носители представляют собой один или несколько из следующих: носитель из цеолита, носитель из глины, природное соединение кремния с естественным содержанием воды, сходным с конечным содержанием влаги в смеси культура: носитель после сушки, как правило, в диапазоне от 3 до 7,5% (мас./мас.). Культивируемую бактерию и носитель смешивают таким образом, что соотношение культуры и носителя составляет от приблизительно 1:3 до приблизительно 1:5. Обработку PEMF (импульсными электромагнитными полями) проводят на одной или нескольких следующих стадиях: в ходе культивирования бактерии; в ходе смешивания культивируемой бактерии с носителем; после смешивания культивируемой бактерии с носителем; в ходе инкубации смеси культура:носитель; в течение высушивания смеси культура:носитель; в любое время после нанесения указанной смеси на семя или компонент семени; в любое время после высушивания смеси культура:носитель; в любое время после повторной гидратации высушенной смеси культура:носитель.
Предпочтительно, микроорганизм и/или смесь культура микроорганизма: носитель сушат комнатным воздухом в лотках или сходных контейнерах. Предпочтительно, сушку комнатным воздухом проводят при температуре приблизительно 10-30°C, как правило, приблизительно 20-24°C, и при относительной влажности менее чем 75%, предпочтительно, приблизительно 30-60%, более предпочтительно, приблизительно 32,5-35%. При сушке комнатным воздухом высушивание может занимать от 1 до 5 суток, предпочтительно, от 1 до 4 суток, приемлемо, 3-4 суток. Соответственно, в ходе сушки комнатным воздухом для выживания микроорганизма может быть полезно наличие в атмосфере ионов Ca2+. В качестве еще одной альтернативы сушку можно проводить помещением смеси культура: носитель в контейнер, например, контейнер Milli-WrapRTM, где контейнер допускает испарение влаги.
Уровень влаги постепенно снижают до величины приблизительно от 1% до приблизительно 6% (мас./мас.).
Стадию сушки можно проводить в нестерильных условиях.
Высушенный продукт можно измельчать с использованием мельницы с воздушным сепаратором до конечного размера частиц приблизительно от 0,1 до приблизительно 150 микрон.
Соответственно, в одном из вариантов осуществления смесь культура: носитель можно инкубировать при приблизительно 10-15°C и при содержании влаги приблизительно 18-33% (масса во влажном состоянии) с последующей сушкой при 20°C над насыщенным хлоридом кальция в течение 3-4 суток при обеспечении относительной влажности приблизительно 32,5% или с последующей быстрой сушкой в течение менее чем 24 часов. Содержание влаги в смеси культура:носитель можно снижать до величины приблизительно от 4 до приблизительно 7%.
Полученная композиция может быть использована для нанесения на семена или другой репродуктивный материал растения, для введения в среду для роста растений, для очистки сточных вод и/или очистки химических/биологических отходов, для очистки загрязненных почв, для введения приемлемого микроорганизма в пищевые продукты и/или корма для животных, для обеспечения молочнокислыми бактериями в медицинских целях. Сочетание смешивания культивируемой бактерии с одним или несколькими носителями и обработки микроорганизмов в композиции значительно повышает исходную выживаемость и срок хранения композиции. (патент РФ № 2370525 C2 от 2005.03.30)
Недостатком способа является необходимость обработки импульсными электромагнитными полями. Кроме того, полученные продукты не предназначены для лечения ран у животных.
За прототип выбрано техническое решение по патенту US5695541 (A) (опубликован 1997-12-09), в котором раскрывается способ иммобилизации высушенных микроорганизмов, а именно видов микроорганизмов, выбранных из B. japonicum, R. meliloti, R. leguminosarum biovar trifolii, Viceae и phaseoli, видов Bradyrhizobium для арахиса и B. lupini, путем смешивания микроорганизмов с носителем, а именно смеси каолинита и монтмориллонита, имеющей pH диапазон примерно от 5 до 8. Массовое отношение культуры к носителю на стадии смешивания находится в диапазоне от 1:2 до 1:4. Затем инкубируют смесь культура-носитель в течение, по меньшей мере, одного дня при температуре в диапазоне от 20 до 30°C и уровня влажности в диапазоне примерно от 25 до 33 мас. % по сырому весу смеси, так чтобы количество микроорганизмов в указанной смеси увеличилось; затем сушат полученную смесь в течение по меньшей мере около одного дня при температуре в диапазоне от 20 до 30°С до влажности не менее чем около 15 вес. % на влажной основе. Дополнительно выдерживают смесь в течение примерно 3-14 дней при относительной влажности в диапазоне от 35 до 60%, так что уровень влажности смеси постепенно снижается до примерно 1-5 мас. % по влажной основе. Измельчают с формированием частиц указанного состава, имеющих размер в диапазоне от примерно 0,1 до 150 микрон. Данное изобретение относится к усовершенствованному процессу медленной сушки бактериальных сельскохозяйственных инокулянтов и других композиций, которые способствуют повышенной жизнеспособности бактерий для борьбы с насекомыми, грибами и т.п., или микроорганизмов, которые обладают эффектами стимуляции роста.
Недостатком является то, что сорбционная активность глины использована не в полной мере, а также то, что полученный продукт не может быть использован для лечения ран животных.
Задачей группы изобретений является разработка способа иммобилизации микроорганизмов Lysobacter sp. на монтмориллонитовые глины с целью получения средства для лечения ран животных.
Технический результат изобретения – продление срока хранения бактериальных клеток Lysobacter sp. на носителе из монтмориллонитовой глины, с возможностью обеспечения восстановления их активности при нанесении на раневую поверхность.
Бактериальные клетки Lysobacter sp. выбраны, так как из уровня техники известно, что они продуцируют антибактериальные и антимикробные агенты (Боннер, Д. П., Дж. О'Салливан, С. К. Танака, Дж. М. Кларк и Р. Р. Уитни. 1988. Лизобактин-новое антибактериальное средство, продуцируемое Lysobacter sp. II. биологические свойства. Дзюдо (Токио) 41:1745-51) (Hashizume, H., S. Hirosawa, R. Sawa, Y. Muraoka, D. Ikeda, H. Naganawa и M. Igarashi. 2004. Трипропептины, новые антимикробные агенты, производимые Lysobacter sp. J Antibiot (Токио) 57:52-8.
Поставленная задача решается путем предложенного ниже способа иммобилизации микроорганизмов Lysobacter sp. на монтмориллонитовые глины (далее МСГ), в состав которых могут входить иллит, кварц, мусковит:
- при этом МСГ предварительно обогащают и затем активируют соляной кислотой 10%, после чего промывают очищенной дистиллированной водой до нейтральной среды, сушат при температуре не более 105°C и измельчают на шаровой мельнице до размеров частиц не более 10 мкм;
- биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. заливают 0,05 М трис – гидрохлорида буферным раствором с рН 7,5 и перемешивают, при перемешивании смесь постепенно нагревают до 45°С в течение 5 минут. Далее охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют и супернатант сливают. Такая обработка вызывает остановку клеточного цикла, нарушение внутриклеточных транспортных процессов, а главное способствует накоплению трегалозы, что способствует образованию L-формы микроорганизма, обладающей бактериолитической активностью в отношении живых условно-патогенных и патогенных бактерий, включая и множественно устойчивые штаммы (интернет-источник http://mbio.bas-net.by/wp-content/uploads/2015/09/07_Kudryakova_2015.pdf);
- затем к остатку обработанной биомассы в виде L-формы Lysobacter sp. при постоянном механическом перемешивании постепенно добавляют обогащенную и активированную МСГ в соотношении носитель: биомасса равном 1:(2-4) при температуре 25°C;
- смесь тщательно перемешивают в течение не менее 40 минут;
- затем подвергают лиофильной сушке при температуре минус 40-45°C в течение 24 часов до уровня 3-7% влажности композиции.
Изобретение может быть проиллюстрировано следующими примерами его конкретного осуществления.
Пример 1.
Биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. 20 гр заливают 40 мл 0,05 М трис – гидрохлорида буферным раствором рН 7.5, перемешивают, центрифугируют и супернатант сливают. Затем подвергают лиофильной сушке в течение 24 часов до уровня 3-7% влажности композиции.
Пример 2.
Биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. 20 гр заливают 40 мл 0,05 М трис – гидрохлорида буферным раствором рН 7.5, перемешивают и постепенно нагревают до 45°C в течение 5 минут. Далее охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют и супернатант сливают. Такая обработка вызывает остановку клеточного цикла, нарушение внутриклеточных транспортных процессов, а главное способствует накоплению трегалозы, что способствует образованию L-формы микроорганизма. Затем подвергают лиофильной сушке в течение 24 часов до уровня 3-7% влажности композиции.
Пример 3.
Иммобилизация микроорганизмов на монтмориллонитовые глины в соотношении носитель: биомасса равном 1:2.
Проводят подготовку монтмориллонит содержащей глины, для чего осуществляют седиментационное обогащение монтмориллонит содержащей глины в воде путем выдержки суспензии в течение 24 часов, взмучивают в течение одной минуты и отстаивают суспензию в течение 20 минут, затем отбирают надосадочную суспензию с размером глиняных частиц менее 10 мкм из верхнего 10-сантиметрового слоя, отстаивают еще 10 минут и после седиментации суспензии декантируют осветленную воду, затем сушат осадок обогащенной МСГ в сушильном шкафу при 70-105°С. При наличии соответствующего оборудования процесс сушки можно проводить при температуре до 900°С, что сокращает длительность процесса, но повышает его энергоемкость. После обогащенную МСГ измельчают до однородной консистенции. Затем МСГ активируют соляной кислотой 10%, после чего промывают очищенной дистиллированной водой до нейтральной среды, сушат при температуре не более 105°С и измельчают на шаровой мельнице до размеров частиц не более 10 мкм.
Биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. в количестве 20 гр заливают 40 мл 0,05 М трис – гидрохлорида буферным раствором рН 7.5, перемешивают и постепенно нагревают до 45°С течение 5 минут. Далее охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют и супернатант сливают. Такая обработка вызывает остановку клеточного цикла, нарушение внутриклеточных транспортных процессов, а главное способствует накоплению трегалозы, что способствует образованию L-формы микроорганизма. Затем к остатку обработанной биомассы при температуре 25°C постепенно добавляют 10 гр МСГ при постоянном механическом перемешивании. Смесь тщательно перемешивают в течение не менее 40 минут. Затем подвергают лиофильной сушке в течение 24 часов до уровня 3% влажности композиции.
Пример 4.
Иммобилизация микроорганизмов на монтмориллонитовые глины в соотношении носитель: биомасса равном 1:3.
Монтмориллонитовую глину готовят как в примере 3.
Биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. в количестве 30 гр заливают 60 мл 0,05 М трис – гидрохлорида буферным раствором рН 7.5, перемешивают и постепенно нагревают до 45°С в течение 5 минут. Далее охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют и супернатант сливают. Такая обработка вызывает остановку клеточного цикла, нарушение внутриклеточных транспортных процессов, а главное способствует накоплению трегалозы, что способствует образованию L-формы микроорганизма. Затем к остатку обработанной биомассы при температуре 25°C постепенно добавляют 10 гр. МСГ при постоянном механическом перемешивании. Смесь тщательно перемешивают в течение не менее 40 минут. Затем подвергают лиофильной сушке в течение 24 часов до уровня 5 % влажности композиции.
Пример 5.
Иммобилизация микроорганизмов на монтмориллонитовые глины в соотношении носитель: биомасса равном 1:4.
Монтмориллонитовую глину готовят как в примере 3.
Биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. в количестве 40 гр заливают 80 мл 0,05 М трис – гидрохлорида буферным раствором рН 7.5, перемешивают и постепенно нагревают до 45°С течение 5 минут. Далее охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют и супернатант сливают. Такая обработка вызывает остановку клеточного цикла, нарушение внутриклеточных транспортных процессов, а главное способствует накоплению трегалозы, что способствует образованию L-формы микроорганизма. Затем к остатку обработанной биомассы при температуре 25°C постепенно добавляют 10 гр МСГ при постоянном механическом перемешивании . Смесь тщательно перемешивают в течение не менее 40 минут. Затем подвергают лиофильной сушке в течение 24 часов до уровня 7% влажности композиции.
Исходную выживаемость после иммобилизации микроорганизмов Lysobacter sp. на монтмориллонитовые глины по примерам 1-5, определяли методом Pour Plate, при котором образец суспендируют в чашке Петри с использованием расплавленного агара, охлажденного примерно до 40-45°С (чуть выше точки затвердевания, чтобы минимизировать гибель клеток, вызванную нагреванием). После застывания питательного агара планшет инкубируют.
Результаты (на основе колониеобразующих единиц CFU) представлены в приведенной ниже таблице.
*p≤0,05 по критерию Стьюдента
Из таблицы следует, что температурный шок перед иммобилизацией микроорганизма путем постепенного нагревания биомассы до 45°С с последующим сочетанием с предложенным носителем повышает исходную выживаемость в течение длительного срока хранения.
Таким образом, предложенный способ иммобилизации микроорганизмов Lysobacter sp. на обогащенные и активированные монтмориллонитовые глины приводит к повышенной жизнеспособности микроорганизма в течение длительного срока хранения. Ограничение жизнедеятельности микроорганизмов перед нанесением на монтмориллонитовые глины позволяет сохранить качественный и количественный состав исходного биоматериала и обеспечить восстановление их активности при нанесении на раневую поверхность.
Claims (2)
1. Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины, включающий смешивание предварительно обогащенной и активированной 10%-ной соляной кислотой монтмориллонитовой глины с биологическим материалом в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp., причем монтмориллонитовую глину после активации промывают очищенной дистиллированной водой до нейтральной среды, сушат при температуре не более 105°C и измельчают на шаровой мельнице до размеров частиц не более 10 мкм; а биологический материал в виде биомассы микроорганизмов Lysobacter sp. предварительно заливают 0,05 М трис-гидрохлорида буферным раствором с рН 7,5 и перемешивают, причем при перемешивании смесь постепенно нагревают до 45°С в течение 5 минут, далее охлаждают до комнатной температуры и центрифугируют, после чего сливают супернатант и к остатку обработанной биомассы в виде L-формы Lysobacter sp. при постоянном механическом перемешивании постепенно добавляют измельченную глину в соотношении носитель : биомасса, равном 1:(2-4), при температуре 25°C; смесь тщательно перемешивают в течение не менее 40 минут и затем подвергают лиофильной сушке при температуре минус 40-45°C в течение 24 часов до уровня 3-7% влажности композиции.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обогащенную монтмориллонитсодержащую глину получают используя седиментационный способ путем выдержки суспензии монтмориллонитовой глины в воде в течение 24 часов, затем суспензию взмучивают в течение одной минуты и отстаивают в течение 20 минут, затем отбирают надосадочную суспензию с размером глиняных частиц менее 10 мкм из верхнего 10-сантиметрового слоя, отстаивают еще 10 минут и после седиментации суспензии декантируют осветленную воду, затем сушат осадок обогащенной глины и измельчают до однородной консистенции.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020143507A RU2754927C1 (ru) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020143507A RU2754927C1 (ru) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2754927C1 true RU2754927C1 (ru) | 2021-09-08 |
Family
ID=77670255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020143507A RU2754927C1 (ru) | 2020-12-28 | 2020-12-28 | Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2754927C1 (ru) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU922142A1 (ru) * | 1980-06-30 | 1982-04-23 | Московский Ордена Ленина, Ордена Октябрьской Революции И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова | Способ иммобилизации клеток микроорганизмов с @ -тирозиназной активностью |
| US5695541A (en) * | 1990-11-13 | 1997-12-09 | Liphatech, Inc. | Process for preparation of bacterial agricultural products |
| RU2318736C2 (ru) * | 2006-02-10 | 2008-03-10 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Биосорбент для очистки водоемов от нефтепродуктов на основе штаммов бактерий и дрожжевых грибов |
| RU2370525C2 (ru) * | 2004-03-31 | 2009-10-20 | Даниско А/С | Способ получения композиции, содержащей высушенные бактерии, и ее применение |
| RU2412913C2 (ru) * | 2008-12-25 | 2011-02-27 | Автономная некоммерческая организация "Национальный комитет по науке и промышленности" | Способ очистки воды от нефти и нефтепродуктов |
-
2020
- 2020-12-28 RU RU2020143507A patent/RU2754927C1/ru active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU922142A1 (ru) * | 1980-06-30 | 1982-04-23 | Московский Ордена Ленина, Ордена Октябрьской Революции И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова | Способ иммобилизации клеток микроорганизмов с @ -тирозиназной активностью |
| US5695541A (en) * | 1990-11-13 | 1997-12-09 | Liphatech, Inc. | Process for preparation of bacterial agricultural products |
| RU2370525C2 (ru) * | 2004-03-31 | 2009-10-20 | Даниско А/С | Способ получения композиции, содержащей высушенные бактерии, и ее применение |
| RU2318736C2 (ru) * | 2006-02-10 | 2008-03-10 | Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук | Биосорбент для очистки водоемов от нефтепродуктов на основе штаммов бактерий и дрожжевых грибов |
| RU2412913C2 (ru) * | 2008-12-25 | 2011-02-27 | Автономная некоммерческая организация "Национальный комитет по науке и промышленности" | Способ очистки воды от нефти и нефтепродуктов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liffourrena et al. | Alginate-perlite encapsulated Pseudomonas putida A (ATCC 12633) cells: Preparation, characterization and potential use as plant inoculants | |
| US4155737A (en) | Microbiological process for controlling the productivity of cultivated plants | |
| CN108949739A (zh) | 一种用于深度处理高浓度畜禽养殖废水的复合微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN109082393A (zh) | 一种可用于处理城市污水微生物菌剂及其制备方法 | |
| Hrenović et al. | Immobilisation of Acinetobacter calcoaceticus using natural carriers | |
| Soriano et al. | The nitrifying bacteria in soils from Rothamsted classical fields and elsewhere | |
| RU2754927C1 (ru) | Способ иммобилизации микроорганизмов на монтмориллонитовые глины | |
| CN106381293A (zh) | 一种多糖‑聚氨酯共固定化生物吸附剂及其制备方法 | |
| CN113321318B (zh) | 一种基于微生物复合改性提高粘土治理有害藻华效率的方法 | |
| CN108529754B (zh) | 一种聚乙烯醇-氧化锌复合微球及其制备方法和应用 | |
| TWI762145B (zh) | 小球藻、其用於廢水處理的方法及含其之生物製劑 | |
| Ghosh et al. | Integration of organic and inorganic amendments with native bioagents for bio-intensive management of vascular bacterial wilt on eggplant (Solanum melongena) | |
| RU2698659C1 (ru) | Способ грануляции пироугля с иммобилизованными микроорганизмами и гранулы, полученные указанным способом | |
| RU2160718C1 (ru) | Способ очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов | |
| Afianti et al. | The influence of differences in silicate concentration on the growth of microalgae Thalassiosira sp. at the laboratory scale | |
| CN113929221A (zh) | 一种用于处理水产养殖尾水的微生物复合菌群 | |
| JPS62106822A (ja) | イオウ酸化菌を利用する脱硫化方法 | |
| RU2628692C2 (ru) | Биосорбент для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов | |
| RU2656146C1 (ru) | Биосорбент для очистки воды от углеводородных загрязнений и способ его получения | |
| Guzman et al. | Sorption of Escherichia coli in agricultural soils influenced by swine manure constituents | |
| Chang et al. | Application of PVA-derived porous media to accelerate biodegradation (composting) of organic solid substrates | |
| Aurelie et al. | Modification of The Bacterial Abundance Properties of Water by Immersed Non-Activated Charcoal | |
| RU2819374C1 (ru) | Способ иммобилизации микроорганизмов на биочаре | |
| Paul et al. | Kurthia gibsonii Mb126 immobilised chitinase against Aspergillus flavus, a fungal pathogen linked to lemon postharvest deterioration | |
| RU2778857C1 (ru) | Препарат для переработки органических отходов быта человека, животноводства и птицеводства |