RU2741245C1 - Способ ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию белка зрительного аррестина в сыворотке крови - Google Patents
Способ ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию белка зрительного аррестина в сыворотке крови Download PDFInfo
- Publication number
- RU2741245C1 RU2741245C1 RU2020108806A RU2020108806A RU2741245C1 RU 2741245 C1 RU2741245 C1 RU 2741245C1 RU 2020108806 A RU2020108806 A RU 2020108806A RU 2020108806 A RU2020108806 A RU 2020108806A RU 2741245 C1 RU2741245 C1 RU 2741245C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- arrestin
- microchip
- blood serum
- cell carcinoma
- renal cell
- Prior art date
Links
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 39
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims abstract description 24
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 102000003916 Arrestin Human genes 0.000 title description 13
- 108090000328 Arrestin Proteins 0.000 title description 13
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 title description 9
- 102100022135 S-arrestin Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 101710125072 Phosrestin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 25
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 abstract 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- 102100026440 Arrestin-C Human genes 0.000 description 5
- 102000008081 Arrestins Human genes 0.000 description 5
- 108010074613 Arrestins Proteins 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 208000004422 Ocular Paraneoplastic Syndromes Diseases 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 208000024031 melanoma associated retinopathy Diseases 0.000 description 5
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 102100029649 Beta-arrestin-1 Human genes 0.000 description 3
- 102100029648 Beta-arrestin-2 Human genes 0.000 description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 101000785755 Homo sapiens Arrestin-C Proteins 0.000 description 3
- -1 JA Karam Substances 0.000 description 3
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 3
- 108010032969 beta-Arrestin 1 Proteins 0.000 description 3
- 108010032967 beta-Arrestin 2 Proteins 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 3
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 11-cis-retinal Chemical compound O=C/C=C(\C)/C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-IOUUIBBYSA-N 0.000 description 2
- 102100026424 Arrestin domain-containing protein 3 Human genes 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000785775 Homo sapiens Arrestin domain-containing protein 3 Proteins 0.000 description 2
- 101000901226 Homo sapiens S-arrestin Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 102000004330 Rhodopsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000820 Rhodopsin Proteins 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 102000000072 beta-Arrestins Human genes 0.000 description 2
- 108010080367 beta-Arrestins Proteins 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 108091008695 photoreceptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 101150069463 vps26a gene Proteins 0.000 description 2
- 102100026444 Arrestin domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100026442 Arrestin domain-containing protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100021038 Arrestin domain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100021036 Arrestin domain-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 108050003620 Arrestin-C Proteins 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 102000004437 G-Protein-Coupled Receptor Kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091004242 G-Protein-Coupled Receptor Kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 101000785762 Homo sapiens Arrestin domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000785765 Homo sapiens Arrestin domain-containing protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000784133 Homo sapiens Arrestin domain-containing protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000784139 Homo sapiens Arrestin domain-containing protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000844721 Homo sapiens Deleted in malignant brain tumors 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101001014223 Homo sapiens MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Proteins 0.000 description 1
- 101001133056 Homo sapiens Mucin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001111714 Homo sapiens RING-box protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000796022 Homo sapiens Thioredoxin-interacting protein Proteins 0.000 description 1
- 102100031520 MAPK/MAK/MRK overlapping kinase Human genes 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 101001000628 Rattus norvegicus Peripheral myelin protein 22 Proteins 0.000 description 1
- 102000018210 Recoverin Human genes 0.000 description 1
- 108010076570 Recoverin Proteins 0.000 description 1
- 206010038486 Renal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010038923 Retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 108090000799 Rhodopsin kinases Proteins 0.000 description 1
- 101710117586 S-arrestin Proteins 0.000 description 1
- 206010042602 Supraventricular extrasystoles Diseases 0.000 description 1
- 101710137302 Surface antigen S Proteins 0.000 description 1
- 102100031344 Thioredoxin-interacting protein Human genes 0.000 description 1
- 102000006612 Transducin Human genes 0.000 description 1
- 108010087042 Transducin Proteins 0.000 description 1
- 108010031127 Transferrin-Binding Protein B Proteins 0.000 description 1
- 102400000091 Tumor necrosis factor-binding protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100035071 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010041622 arrestin3 Proteins 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002435 cytoreductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000013059 nephrectomy Methods 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 208000012111 paraneoplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 210000004560 pineal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 210000003569 retinal bipolar cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001116 retinal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
- H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
- H01F1/42—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of organic or organo-metallic materials, e.g. graphene
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Power Engineering (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и клинической биохимии, и предназначено для диагностики почечно-клеточной карциномы. Образец сыворотки крови пациента прокачивают через микрочип на основе мембраны из регенерированной целлюлозы с иммобилизованными первичными моноклональными антителами к аррестину 1 в течение времени, обеспечивающего связывание аррестина 1 с моноклональными антителами. После этого через микрочип в магнитном поле пропускают суперпарамагнитные частицы, модифицированные вторичными антителами к аррестину 1, и фиксируют появление светящихся активных зон с антителами к аррестину 1 со связавшимися суперпарамагнитными частицами. При превышении сигнала, соответствующего количеству частиц в активной зоне, над фоновым значением сигнала не менее чем на два стандартных отклонения фонового сигнала, делают вывод о наличии в образце сыворотки крови белка зрительного аррестина 1 и диагностируют почечно-клеточную карциному. Изобретение обеспечивает возможность определения наличия белка аррестина 1 в сыворотке крови пациентов с предполагаемой патологией. 2 табл., 3 пр., 3 ил.
Description
Область техники
Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии и клинической биохимии. Изобретение может быть использовано для ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию зрительного аррестина 1 в сыворотке крови пациентов с применением иммунохимических методов детекции.
Уровень техники
Почечно-клеточная карцинома (ПКК) - вторая наиболее встречаемая злокачественная патология среди уронефрологических онкологических заболеваний (R.L. Siegel, K.D. Miller, A. Jemal, Cancer Statistics, 2017, CA: a cancer journal for clinicians, 67 (2017) 7-30 DOI: 10.3322/caac.21387). Она характеризуется как агрессивный и инвазивный рак с высокой частотой метастазирования. Вдобавок, у ПКК нет специфических симптомов, поэтому она обычно диагностируется случайно на поздней стадии во время диспансеризации или других рутинных исследований по поводу другой патологии. Примерно у 40% пациентов с диагностированной локальной ПКК в итоге развиваются метастазы (A.J. Wein, L.R. Kavoussi, M.F. Campbell, Campbell-Walsh urology / editor-in-chief, Alan J. Wein; [editors, Louis R. Kavoussi … et al.], 10th ed., Elsevier Saunders, Philadelphia, PA, 2012). Смертность при ПКК довольно высокая: пятилетняя выживаемость при I стадии ПКК 80-95%, примерно 80% при II стадии ПКК, 60% при III стадии ПКК и менее 10% при IV стадии (Е. Jonasch, J. Gao, W.K. Rathmell, Renal cell carcinoma, Bmj, 349 (2014) g4797 DOI: 10.1136/bmj.g4797). Более того, опухолевая инвазия на I-II стадиях ПКК ассоциируется с неблагоприятным прогнозом - пятилетняя выживаемость у таких пациентов составляет менее 60%. Что касается метастатической ПКК, прогноз практически всегда фатальный - десятилетняя выживаемость менее 5% (A.J. Wein, L.R. Kavoussi, M.F. Campbell, Campbell-Walsh urology / editor-in-chief, Alan J. Wein; [editors, Louis R. Kavoussi … et al.], 10th ed., Elsevier Saunders, Philadelphia, PA, 2012). В случае ПКК местное хирургическое лечение является золотым стандартом. Установленная практика при данной патологии - циторедуктивная нефректомия с последующей системной медикаментозной терапией.
Как и при других видах онкологических заболеваний, ранняя диагностика и своевременное начало лечения ПКК приводят к благоприятным исходам заболевания. Тем не менее в настоящее время не существует методов специфической ранней диагностики ПКК. Обнаружение биомаркеров в биологических жидкостях или в самой опухоли может быть достаточно информативным. Несмотря на это, гетерогенность опухоли и сложность процедуры биопсии на ранней стадии заболевания являются ограничивающими факторами. С другой стороны, менее инвазивной процедурой является взятие крови для обнаружения биомаркеров. Однако серологические биомаркеры подвергаются деградации циркулирующими в крови протеазами и нуклеазами, что, таким образом, уменьшает вероятность их обнаружения и требует применения более чувствительных методов их детекции (Т.С. Ngo, C.G. Wood, J.A. Karam, Biomarkers of renal cell carcinoma, Urologic oncology, 32 (2014) 243-251 DOI: 10.1016/j.urolonc.2013.07.011).
В настоящее время наиболее часто диагностические мероприятия по поводу ПКК начинают проводить после случайного обнаружения объемного образования в почке рутинными методами УЗИ, КТ, МРТ. Проведенная впоследствии процедура биопсии позволяет поставить диагноз ПКК. Также для диагностики ПКК используются такие биомаркеры как vimentin, CK-7, CK-20, CD 20, MUC1, AMACR и др. (J.R. Srigley, В. Delahunt, J.N. Eble, L. Egevad, J.I. Epstein, D. Grignon, O. Hes, H. Moch, R. Montironi, S.K. Tickoo, M. Zhou, P. Argani, I.R.T. Panel, The International Society of Urological Pathology (ISUP) Vancouver Classification of Renal Neoplasia, The American journal of surgical pathology, 37 (2013) 1469-1489 DOI: 10.1097/PAS.0b013e318299f2d1). Однако все перечисленные биомаркеры являются диагностическими, т.е. используются для уточнения подтипа уже установленного диагноза почечно-клеточная карцинома. Более того, перечисленные биомаркеры не детектируются поодиночке, но исследуются в панели, т.н. профили экспрессии. Таким образом, в настоящее время не существует биомаркера, подходящего для ранней (скрининговой) диагностики ПКК.
Наиболее близким к предлагаемому в настоящей заявке способу является детекция белков Tu М2-PK, VEGF, TATI, СА9 (М.О. Golovastova, D.O. Korolev, L.V. Tsoy, V.A. Varshavsky, W.H. Xu, A.Z. Vinarov, E.Y. Zernii, P.P. Philippov, A.A. Zamyatnin, Jr., Biomarkers of Renal Tumors: the Current State and Clinical Perspectives, Current urology reports, 18 (2017) 3 DOI: 10.1007/s11934-017-0655-1), характеризующихся различной специфичностью при разных видах опухолей.
Следует отметить, что в случае с ПКК редко наблюдается экспрессия хорошо изученных раково-зародышевых антигенов, таких как RAGE-1, MAGE-A4, SAGE, NY-ESO-1 (M.J. Scanlan, А.О. Gure, A.A. Jungbluth, L.J. Old, Y.T. Chen, Cancer/testis antigens: an expanding family of targets for cancer immunotherapy, Immunological reviews, 188 (2002) 22-32; N. Soga, Y. Hori, K. Yamakado, H. Ikeda, N. Imai, S. Kageyama, K. Nakase, A. Yuta, N. Hayashi, H. Shiku, Y. Sugimura, Limited expression of cancer-testis antigens in renal cell carcinoma patients, Molecular and clinical oncology, 1 (2013) 326-330 DOI: 10.3892/mco.2012.40). Тем не менее существуют другие белки, экспрессирующиеся в норме в иммунопривилегированных тканях, таких как центральная нервная система и сетчатка глаза, которые могут также аберрантно экспрессироваться в опухолевых клетках вследствие злокачественной трансформации. Такие белки классифицируются в две группы в зависимости от их происхождения: онконевральные и раково-сетчаточные антигены (PCA).
Несколько РСА были классифицированы как опухоле-ассоциированные антигены (ОАА) (A.V. Bazhin, D. Schadendorf, N. Willner, С. De Smet, A. Heinzelmann, N.K. Tikhomirova, V. Umansky, P.P. Philippov, S.B. Eichmuller, Photoreceptor proteins as cancer-retina antigens, International journal of cancer, 120 (2007) 1268-1276 DOI: 10.1002/ijc.22458). Многие из них экспрессируются в нейронах сетчатки глаза, где они участвуют в зрительной трансдукции. Возможность продукции антител к сетчаточным белкам у пациентов с паранеопластическим синдромом, таким как меланома-ассоциированная ретинопатия (MAP), показывает возможность аберрантной экспрессии сетчаточных белков в соответствующей опухоли (А.Н. Milam, J.C. Saari, S.G. Jacobson, W.P. Lubinski, L.G. Feun, K.R. Alexander, Autoantibodies against retinal bipolar cells in cutaneous melanoma-associated retinopathy, Investigative ophthalmology & visual science, 34 (1993) 91-100; M.J. Potter, C.E. Thirkill, O.M. Dam, A.S. Lee, A.H. Milam, Clinical and immunocytochemical findings in a case of melanoma-associated retinopathy, Ophthalmology, 106 (1999) 2121-2125 DOI: 10.1016/S0161-6420(99)90493-1). Было показано, что клетки меланомы могут экспрессировать такие РСА как родопсин, трансдуцин, cGMP-фосфодиэстеразу 6, родопсин киназу, рековерин и аррестин 1 (A.V. Bazhin, D. Schadendorf, N. Willner, С. De Smet, A. Heinzelmann, N.K. Tikhomirova, V. Umansky, P.P. Philippov, S.B. Eichmuller, Photoreceptor proteins as cancer-retina antigens, International journal of cancer, 120 (2007) 1268-1276 DOI: 10.1002/ijc.22458). Таким образом, по аналогии с меланома-ассоциированной ретинопатией, экспрессия РСА в клетках опухоли при ПКК может привести к значительному повышению уровня указанных антигенов в крови. Это может быть использовано для ранней диагностики ПКК. При этом в уровне техники отсутствуют сведения, раскрывающие возможность использования зрительного аррестина - аррестина 1 как одного из РСА, в качестве биомаркера для ранней диагностики ПКК. Известно, что в состав всех белков-аррестинов, включенных в так называемый аррестиновый клан, входит аррестиновый домен, который является уникальным предком всех аррестинов. Клан состоит из двух семейств: семейство аррестинов и так называемое семейство Vps26-родственных белков, которые также называются α-аррестины, или arrestin-domain-containing proteins (ARRDCs; белки, содержащие аррестиновый домен) для обозначения соответствующих белков у млекопитающих (С.Е. Alvarez, On the origins of arrestin and rhodopsin, BMC evolutionary biology, 8 (2008) 222 DOI: 10.1186/1471-2148-8-222). Семейство аррестинов состоит из 4 белков, которые в свою очередь подразделяются еще на 2 группы: зрительные аррестины, которые включают в себя аррестин 1 (S-antigen, SAG, S-arrestin, аррестин палочек, зрительный аррестин) и аррестин 4 (X-arrestin, ARR3, аррестин колбочек), и β-аррестины, которые включают в себя аррестин 2 (β-аррестин или β-аррестин-1, ARRB1) и аррестин 3 (β-аррестин-2, ARRB2) (E.V. Gurevich, V.V. Gurevich, Arrestins: ubiquitous regulators of cellular signaling pathways, Genome biology, 7 (2006) 236 DOI: 10.1186/gb-2006-7-9-236). В свою очередь, семейство Vps26-родственных белков или α-аррестинов у млекопитающих состоит из 6 белков: ARRDC1, ARRDC2, ARRDC3/TLIMP, ARRDC4, ARRDC5 и TXNIP/TBP-2 (L. Puca, С. Brou, Alpha-arrestins - new players in Notch and GPCR signaling pathways in mammals, Journal of cell science, 127 (2014) 1359-1367 DOI: 10.1242/jcs.142539). Полная классификация аррестинового клана для млекопитающих приведена в табл. 1.
Несмотря на то, что открытый первым аррестин 1 был обнаружен в клетках сетчатки глаза, впоследствии выяснилось, что белки аррестинового семейства встречаются повсеместно. Любая животная клетка экспрессирует как минимум один тип аррестина (E.V. Gurevich, V.V. Gurevich, Arrestins: ubiquitous regulators of cellular signaling pathways, Genome biology, 7 (2006) 236 DOI: 10.1186/gb-2006-7-9-236). Однако существует два исключения - это зрительные аррестины. Хотя те или иные β- и α-аррестины постоянно присутствуют в протеоме всех живых клеток, аррестин 1 и аррестин 4 имеют строго специфическую локализацию в организме человека - клетки сетчатки глаза и шишковидной железы. Экспрессия аррестина 1 была обнаружена в клетках меланомы у пациентов с MAP, что позволяет отнести аррестин 1 к РСА.
Авторами настоящего изобретения было выявлено, что помимо повсеместно встречаемых аррестинов в опухолях почки с высокой частотой встречается экспрессия зрительного аррестина 1. Таким образом, было предложено использовать феномен аберрантной экспрессии аррестина 1 при ранней диагностике ПКК.
Раскрытие изобретения
Технической проблемой, решаемой настоящим изобретением, является разработка малоинвазивного способа ранней диагностики ПКК.
Техническим результатом заявляемого изобретения является возможность определения наличия белка аррестина 1 в сыворотке крови пациентов с предполагаемой патологией иммунохимическим методом детекции.
Поставленная задача решается способом диагностики почечно-клеточной карциномы, согласно которому образец сыворотки крови пациента прокачивают через микрочип на основе мембраны из регенерированной целлюлозы с иммобилизованными первичными моноклональными антителами к аррестину 1 в течение времени, обеспечивающем связывание аррестина 1 с моноклональными антителами, после чего через микрочип в магнитном поле пропускают суперпарамагнитные частицы, модифицированные вторичными антителами к аррестину 1, и фиксируют появление светящихся активных зон с антителами к аррестину 1 со связавшимися суперпарамагнитными частицами, определяют значение сигнала, соответствующее количеству связанных магнитных частиц на 1 мм2 в каждой активной зоне микрочипа и значение фонового сигнала, соответствующее количеству магнитных частиц на 1 мм2 вне активной зоны микрочипа и при превышении сигнала, соответствующего количеству частиц в активной зоне, над фоновым значением сигнала не менее чем на два стандартных отклонения фонового сигнала, делают вывод о наличии в образце сыворотки крови белка зрительного аррестина 1 и диагностируют почечно-клеточную карциному.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 приведен пример результатов иммуноанализа образцов сывороток, полученных от пациентов с ПКК.
На фиг. 2 приведен результат иммуноанализа положительного контроля: рекомбинантный зрительный аррестин 1 (1 мкг/мл), окрашенный в сэндвич-анализе с помощью козьих моноклональных антител к зрительному аррестину 1 на микрочипе и поликлональных мышиных антител на магнитных частицах.
На фиг. 3 приведен пример результатов иммуноанализа отрицательного контроля: сыворотки, полученной от здорового человека.
Осуществление изобретения
В рамках проведенных в Институте молекулярной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) исследований было показано, что РСА аррестин 1 довольно часто может аберрантно экспрессироваться в клетках опухоли почки пациентов с ПКК. Для определения наличия экспрессии аррестина 1 проводилась иммуногистохимия образцов опухоли почки пациентов с диагностированной ПКК. В результате, в 17 образцах из 29, что соответствует 58.6%, была обнаружена аберрантная экспрессия аррестина 1 при ПКК. В табл. 2 представлены данные проведенного исследования.
Настоящее изобретение поясняется конкретным примером выполнения, который наглядно демонстрирует возможность достижения требуемого технического результата, но при этом не ограничивает заявленный объем притязаний.
Наличие аррестина 1 в сыворотке крови определялось с помощью высокочувствительного иммуноанализа на микрочипах с иммобилизованными первичными антителами к аррестину 1, использующего на стадии выявления антигена сканирование поверхности магнитными частицами, покрытыми вторичными антителами, при приложении магнитного поля. Такой «активный» способ детекции позволяет преодолеть диффузионный барьер и значительно повысить чувствительность и уменьшить время анализа. Предварительно на мембране из регенерированной целлюлозы (диализной мембране) методом электрораспыления изготавливаются микрочипы с моноклональными антителами к аррестину 1 (Shlyapnikov Y.M., Shlyapnikova Е.А., Simonova М.А., Shepelyakovskaya A.O., Brovko F.A., Komaleva R.L., Grishin E.V., Morozov V.N. Rapid simultaneous ultrasensitive immunodetection of five bacterial toxins. Anal. Chem. 2012. V. 84(13), 5596-5603). Ранее показано, что микрочипы, хранящиеся в 50%-ном глицерине при -20°С, сохраняют работоспособность, по крайней мере, в течение месяца.
Заявляемый способ ранней диагностики ПКК может быть осуществлен следующим образом. У пациента производят забор венозной крови натощак с утра. Далее, после сворачивания цельную кровь центрифугируют, отбирают сыворотку, которую в дальнейшем используют для анализа. Возможно замораживание образцов сыворотки при -80°С для хранения и дальнейшего использования. Иммуноанализ проводят в проточной ячейке с закрепленным микрочипом, помещенной под обычный медицинский микроскоп с темнопольным осветителем. Конструкция ячейки описана в (Morozov V.N., Morozova T.Y. Active bead-linked immunoassay on protein microarrays. Anal. Chim. Acta. 2006, 564, 40-52). На первом этапе анализа 300 мкл образца сыворотки крови прокачивают через ячейку в течение 30 минут для связывания аррестина 1 с первичными моноклональными антителами на микрочипе. Затем под ячейку помещают магнит и пропускают через ячейку 5×10-4% (по массе) суспензию суперпарамагнитных частиц (Dynabeads Myone, диаметр 1 мкм), которые заранее модифицируют вторичными поликлональными антителами к аррестину 1 (по методике, описанной в Morozov V.N., Morozova T.Y. Active bead-linked immunoassay on protein microarrays. Anal. Chim. Acta. 2006, 564, 40-52) в стандартном фосфатном буфере с добавкой 1% бычьего сывороточного альбумина. Магнитное поле прижимает частицы к микрочипу и вынуждает их сканировать поверхность, облегчая процесс связывания антигена с антителом. Как правило, эта процедура занимает около 1 минуты. Поскольку одна связь антиген-антитело способна удерживать магнитную частицу, отдельные молекулы аналита на поверхности микрочипа могут быть помечены и обнаружены при сканировании. Изображения микрочипов получают с помощью USB-камеры. Сигнал (поверхностная плотность связанных магнитных частиц) в зоне, где иммобилизованы антитела, и фоновый сигнал (поверхностная плотность частиц вне этой зоны) определяют вручную или с помощью программного обеспечения, подсчитывающего яркие пятна, соответствующие размеру магнитных частиц на темном фоне. Детальное описание алгоритма работы программного обеспечения дано в (Shlyapnikov Y.M., Shlyapnikova Е.А., Morozov V.N. Carboxymethylcellulose film as a substrate for microarray fabrication. Anal. Chem. 2014. V. 86(4), 2082-2089). Далее, no результатам детекции делают вывод о наличии или отсутствии аррестина 1 в сыворотке пациента: образец классифицируют как положительный, если количество связавшихся магнитных частиц в активной зоне микрочипа превышает фон (количество частиц вне активной зоны) не менее чем на 2 стандартных отклонения фонового сигнала (Shlyapnikov Y.M., Shlyapnikova Е.А., Morozov V.N. Carboxymethylcellulose film as a substrate for microarray fabrication. Anal. Chem. 2014. V. 86(4), 2082-2089). В противном случае образец сыворотки классифицируют как отрицательный и делают вывод об отсутствии аррестина 1 в сыворотке пациента.
Пример 1. Через ячейку с микрочипом, на котором иммобилизованы моноклональные антитела к аррестину 1, прокачивали 300 мкл сыворотки пациента, больного РП, со скоростью 10 мкл/мин с помощью шприцевого дозатора SK500I (Китай). После этого через ячейку со скоростью 5-6 мкл/мин пропускали суперпарамагнитные частицы, модифицированные вторичными антителами к аррестину 1, суспендированные в концентрации 5×10-4% (по массе) в стандартном фосфатном буфере с добавкой 0,1% Твин 20 и 1% бычьего сывороточного альбумин в течение 2 минут. Темнопольное изображение микрочипа фиксировалось цифровой камерой, на котором фиксировалось появление светящихся зон с антителами к аррестину 1 со связавшимися магнитными частицами. Количество связанных магнитных частиц в каждой зоне определяли с помощью программного обеспечения, описанного в (Shlyapnikov Y.M., Shlyapnikova Е.А., Morozov V.N. Carboxymethylcellulose film as a substrate for microarray fabrication. Anal. Chem. 2014. V. 86(4), 2082-2089), подсчитывающего яркие пятна определенного размера на темном фоне. Эксперимент повторили три раза с образцами сыворотки, полученными от трех различных больных. Значения сигнала (число магнитных частиц на 1 мм2 в активной зоне микрочипа) составили: 1350, 890, 1180. Соответствующие значения фонового сигнала (число магнитных частиц на 1 мм2 вне активной зоны микрочипа) составили: 42, 28, 34; значения стандартного отклонения фонового сигнала составили: 30, 21, 27. Для всех трех образцов сигнал превосходит фон +2 стандартных отклонения фона, таким образом, результат анализа всех трех образцов был признан положительным. Пример изображения микрочипа со связанными магнитными частицами приведен на фиг. 1.
Пример 2. Положительный контроль
Через ячейку с микрочипом, на котором иммобилизованы моноклональные антитела к аррестину 1, прокачивали 300 мкл раствора рекомбинантного аррестина 1 с концентрацией 1 мкг/мл в стандартном фосфатном буфере с добавкой 0,1% Твин 20 и 1% бычьего сывороточного альбумина со скоростью 10 мкл/мин с помощью шприцевого дозатора SK500I. После этого через ячейку со скоростью 5-6 мкл/мин пропускали суперпарамагнитные частицы, модифицированные вторичными антителами к аррестину 1, в концентрации 5×10-4% (по массе) в стандартном фосфатном буфере с добавкой 1% бычьего сывороточного альбумина. Время прокачивания составляло 1-2 минуты. Темнопольное изображение микрочипа фиксировалось цифровой камерой, на котором фиксировалось появление светящихся зон с антителами к аррестину 1 со связавшимися магнитными частицами. Количество связанных магнитных частиц в каждой зоне определяли с помощью программного обеспечения, подсчитывающего яркие пятна определенного размера на темном фоне. Значение сигнала (число магнитных частиц на 1 мм2 в активной зоне микрочипа) составило: 4210. Соответствующее значение фонового сигнала (число магнитных частиц на 1 мм2 вне активной зоне микрочипа) составило: 17; значение стандартного отклонения фонового сигнала составило: 13. Сигнал превосходит фон +2 стандартных отклонения фона, таким образом, результат анализа был признан положительным. Изображение микрочипа со связанными магнитными частицами приведено на фиг. 2.
Пример 3. Отрицательный контроль
Через ячейку с микрочипом, на котором иммобилизованы моноклональные антитела к аррестину 1, прокачивали 300 мкл сыворотки здорового человека без признаков онкологической патологии со скоростью 10 мкл/мин с помощью шприцевого дозатора SK500I. После этого через ячейку со скоростью 5-6 мкл/мин пропускали суперпарамагнитные частицы, модифицированные вторичными антителами к аррестину 1, в концентрации 5×10-4% (по массе) в стандартном фосфатном буфере с добавкой 1% бычьего сывороточного альбумина в течение 1-2 минут. Темнопольное изображение микрочипа фиксировалось цифровой камерой, на котором фиксировалось появление светящихся зон с антителами к аррестину 1 со связавшимися магнитными частицами. Количество связанных магнитных частиц в каждой зоне определяли с помощью программного обеспечения, подсчитывающего яркие пятна определенного размера на темном фоне. Эксперимент повторили два раза с образцами сыворотки, полученными от двух здоровых добровольцев. Значения сигнала (число магнитных частиц на 1 мм2 в активной зоне микрочипа) составили: 46, 61. Соответствующие значения фонового сигнала (число магнитных частиц на 1 мм2 вне активной зоне микрочипа) составили: 20, 47; значения стандартного отклонения фонового сигнала составили: 19, 35. Для обоих образцов сигнал не превосходит фон + 2 стандартных отклонения фона, таким образом, результат анализа обоих образцов был признан отрицательным. Таким образом сделан вывод об отсутствии в сыворотке крови аррестина 1. Пример изображения микрочипа со связанными магнитными частицами приведен на фиг. 3.
Claims (1)
- Способ диагностики почечно-клеточной карциномы, характеризующийся тем, что образец сыворотки крови пациента прокачивают через микрочип на основе мембраны из регенерированной целлюлозы с иммобилизованными первичными моноклональными антителами к аррестину 1 в течение времени, обеспечивающего связывание аррестина 1 с моноклональными антителами, после чего через микрочип в магнитном поле пропускают суперпарамагнитные частицы, модифицированные вторичными антителами к аррестину 1, и фиксируют появление светящихся активных зон с антителами к аррестину 1 со связавшимися суперпарамагнитными частицами, определяют значение сигнала, соответствующее количеству связанных магнитных частиц на 1 мм2 в каждой активной зоне микрочипа, и значение фонового сигнала, соответствующее количеству магнитных частиц на 1 мм2 вне активной зоны микрочипа, и при превышении сигнала, соответствующего количеству частиц в активной зоне, над фоновым значением сигнала не менее чем на два стандартных отклонения фонового сигнала, делают вывод о наличии в образце сыворотки крови белка зрительного аррестина 1 и диагностируют почечно-клеточную карциному.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020108806A RU2741245C1 (ru) | 2020-02-28 | 2020-02-28 | Способ ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию белка зрительного аррестина в сыворотке крови |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020108806A RU2741245C1 (ru) | 2020-02-28 | 2020-02-28 | Способ ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию белка зрительного аррестина в сыворотке крови |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2741245C1 true RU2741245C1 (ru) | 2021-01-22 |
Family
ID=74213271
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020108806A RU2741245C1 (ru) | 2020-02-28 | 2020-02-28 | Способ ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию белка зрительного аррестина в сыворотке крови |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2741245C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2805811C1 (ru) * | 2022-06-09 | 2023-10-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук (ИТЭБ РАН) | Способ диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию зрительных белков аррестина и рековерина в моче |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2612021C1 (ru) * | 2016-01-12 | 2017-03-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский национальный исследовательский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского" | Способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка при хронических процессах язвообразования органа |
| KR20190133559A (ko) * | 2018-05-23 | 2019-12-03 | 주식회사 큐어바이오 | 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도 |
-
2020
- 2020-02-28 RU RU2020108806A patent/RU2741245C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2612021C1 (ru) * | 2016-01-12 | 2017-03-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский национальный исследовательский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского" | Способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка при хронических процессах язвообразования органа |
| KR20190133559A (ko) * | 2018-05-23 | 2019-12-03 | 주식회사 큐어바이오 | 단편화된 grs 폴리펩타이드, 이의 변이체 및 이들의 용도 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BALDIN A.V. et al. Autoantibody against arrestin-1 as a potential biomarker of renal cell carcinoma. Biochimie. 2019 Feb; 157: 26-37. * |
| BALDIN A.V. et al. Autoantibody against arrestin-1 as a potential biomarker of renal cell carcinoma. Biochimie. 2019 Feb; 157: 26-37. GOLOVASTOVA M.O. et al. Biomarkers of Renal Tumors: the Current State and Clinical Perspectives. Curr Urol Rep. 2017 Jan; 18(1): 3. * |
| GOLOVASTOVA M.O. et al. Biomarkers of Renal Tumors: the Current State and Clinical Perspectives. Curr Urol Rep. 2017 Jan; 18(1): 3. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2805811C1 (ru) * | 2022-06-09 | 2023-10-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук (ИТЭБ РАН) | Способ диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию зрительных белков аррестина и рековерина в моче |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110753845B (zh) | 用于实体瘤诊断的生物标志物绝对定量的方法和装置 | |
| CN107407626B (zh) | 评估癌症的疾病状况的方法 | |
| Matsuda et al. | Lectin microarray-based sero-biomarker verification targeting aberrant O-linked glycosylation on mucin 1 | |
| JP6485759B2 (ja) | 末梢循環腫瘍細胞単位の悪性度の検出方法及びそのキット | |
| US20120309018A1 (en) | Cancer detection markers | |
| Wu et al. | PD-L1 detection on circulating tumor-derived extracellular vesicles (T-EVs) from patients with lung cancer | |
| Gidwani et al. | A nanoparticle-lectin immunoassay improves discrimination of serum CA125 from malignant and benign sources | |
| US20120295814A1 (en) | CA-125 Immune Complexes as Biomarkers of Ovarian Cancer | |
| Gidwani et al. | Europium nanoparticle-based sialyl-tn monoclonal antibody discriminates epithelial ovarian Cancer–Associated CA125 from benign sources | |
| WO2005043165A2 (en) | Specific method for cancer detection | |
| CN107250796B (zh) | 用于鉴别对雄激素受体靶向疗法的抵抗性的循环肿瘤细胞诊断 | |
| JP2020515826A (ja) | 抗体アッセイ | |
| Cheng et al. | An approach to the simultaneous detection of multiple biomarkers for the early diagnosis of liver cancer using quantum dot nanoprobes | |
| CN103842823B (zh) | 用于胸膜间皮瘤患者的早期发现的分子标志物及其表达分析方法 | |
| CN106680515B (zh) | 用于肺癌诊断的多分子标志物组合 | |
| RU2741245C1 (ru) | Способ ранней диагностики почечно-клеточной карциномы по наличию белка зрительного аррестина в сыворотке крови | |
| WO2018030511A1 (ja) | エクソソームの膜に存在するタンパク質の検出方法 | |
| CN108450001A (zh) | 作为转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)患者的治疗选择的生物标志物的雄激素受体变体7 | |
| CN109932510B (zh) | 一种宫颈癌生物标志物及其检测试剂盒 | |
| CN117890592A (zh) | 一种用于筛查、诊断多种癌症的生物标志物及应用 | |
| CN115785214A (zh) | 基于自身抗体的多肽标志物及其在早期肺癌诊断中的应用 | |
| JP2006308576A (ja) | 膵液による膵管内乳頭粘液性腺癌および膵臓癌の検出法及び検出キット | |
| US11791043B2 (en) | Methods of prognosing early stage breast lesions | |
| CN111239412A (zh) | 聚焦肝细胞肝癌的蛋白小芯片的制备方法 | |
| KR102735773B1 (ko) | 혈액 내 단백질 바이오마커를 포함하는 암 진단용 키트 |