[go: up one dir, main page]

RU2639500C1 - Geroprotector for model animals - Google Patents

Geroprotector for model animals Download PDF

Info

Publication number
RU2639500C1
RU2639500C1 RU2016135655A RU2016135655A RU2639500C1 RU 2639500 C1 RU2639500 C1 RU 2639500C1 RU 2016135655 A RU2016135655 A RU 2016135655A RU 2016135655 A RU2016135655 A RU 2016135655A RU 2639500 C1 RU2639500 C1 RU 2639500C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
aicar
grown
flies
lss
nematodes
Prior art date
Application number
RU2016135655A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Светлана Юрьевна Еремина
Наталия Григорьевна Шостак
Елена Сергеевна Зеленцова
Ольга Александровна Каткова-Жукоцкая
Константин Владимирович Лобанов
Рустэм Саидович Шакулов
Сергей Юрьевич Фуников
Александр Сергеевич Миронов
Михаил Борисович Евгеньев
Вадим Львович Карпов
Евгений Александрович Нудлер
Original Assignee
Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) filed Critical Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран)
Priority to RU2016135655A priority Critical patent/RU2639500C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2639500C1 publication Critical patent/RU2639500C1/en

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: pharmacology.SUBSTANCE: invention relates to application of 5-aminoimidazole-4-carboxamidiborofuranoside (AICAR) as a geroprotector in a nutrient medium for model animals. In case of nematodes, the geroprotective effect of AICAR is achieved in concentrations of 0.05 mM and 0.1 mM. In case of drosophila flies, the geroprotective effect of AICAR is achieved in concentrations of 0.5 mM and 1.0 mM.EFFECT: increased life expectancy of model animals.3 cl, 5 dwg, 3 ex

Description

Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION

Изобретение относится к биотехнологии, биоинженерии и молекулярной биофармакологии, так как предлагаемое соединение может быть использовано как средство, обладающее геропротекторной активностью.The invention relates to biotechnology, bioengineering and molecular biopharmacology, since the proposed compound can be used as a tool with geroprotective activity.

Уровень техникиState of the art

Пожилой и старческий возраст характеризуется значительным увеличением вероятности наступления смерти. Кроме того, резко увеличивается количество проявлений различных патологий, совместимых с жизнью, но понижающих ее качество. В последние десятилетия в мире наблюдается значительный интерес к изучению механизмов старения и поиску новых препаратов и средств, направленных на продление жизни и увеличение активного творческого периода.Old and senile age is characterized by a significant increase in the likelihood of death. In addition, the number of manifestations of various pathologies that are compatible with life, but lowering its quality, is sharply increasing. In recent decades, there has been a significant interest in the study of aging mechanisms and the search for new drugs and tools aimed at prolonging life and increasing the active creative period.

Понятие «геропротекторная активность» подразумевает биологически активное действие, замедляющее старение и продлевающее жизнь.The term "geroprotective activity" means a biologically active effect that slows down aging and prolongs life.

АИКАР - природное соединение, аналог и предшественник аденозина. Структурная формула АИКАР представлена на Фиг. 1. Будучи активатором протеинкиназы, активируемой АМФ, (АМФК), АИКАР имеет широкий терапевтический потенциал, поскольку он нормализует углеводный и липидный обмен и ограничивает пролиферацию опухолевых клеток.AICAR is a natural compound, analog and precursor of adenosine. The structural formula of AICAR is shown in FIG. 1. Being an activator of AMP-activated protein kinase (AMPK), AICAR has a wide therapeutic potential because it normalizes carbohydrate and lipid metabolism and limits the proliferation of tumor cells.

При всем разнообразии структурной организации генов, кодирующих ферменты биосинтеза пуриновых нуклеотидов, у различных организмов биохимия этого процесса консервативна: формирование пуринового цикла осуществляется на платформе рибозо-5-фосфата (все интермедиаты - нуклеотиды) с использованием одноуглеродного компонента (формиата и/или n10-формилтетрагидрофолата) [1]. Одноуглеродные соединения востребованы на двух этапах биосинтеза пуринов и соответственно при их недостатке могут накапливаться предшественники - фосфорибозилглицинамидрибонуклеотид и 5-аминоимидазол-4-карбоксамидрибонуклеотид (АИКАР-Ф). Среди них АИКАР-Ф занимает особое положение, так как его формилирование и последующая циклизация завершают формирование пуринового гетероцикла с образованием инозин-монофосфата (ИМФ).With all the variety of structural organization of genes encoding the purine nucleotide biosynthesis enzymes, the biochemistry of this process is conservative in various organisms: the purine cycle is formed on the ribose-5-phosphate platform (all intermediates are nucleotides) using a single-carbon component (formate and / or n10-formyl tetrahydrofolate ) [one]. Monocarbon compounds are in demand at two stages of purine biosynthesis and, correspondingly, when they are deficient, precursors can accumulate - phosphoribosylglycine adribonucleotide and 5-aminoimidazole-4-carboxamidribonucleotide (AICAR-F). Among them, AICAR-F occupies a special position, since its formylation and subsequent cyclization complete the formation of the purine heterocycle with the formation of inosine monophosphate (IMP).

Процесс превращения АИКАР-Ф в ИМФ в клетках прокариот контролируется геном purH, который кодирует два домена с активностями АИКАР-Ф-формилтрансферазы и ИМФ-циклогидролазы [2, 3]. Дальнейшие модификации ИМФ приводят к образованию АМФ и ГМФ.The process of conversion of AICAR-F to IMP in prokaryotic cells is controlled by the purH gene, which encodes two domains with the activities of AICAR-F-formyl transferase and IMP-cyclohydrolase [2, 3]. Further modifications of IMP lead to the formation of AMP and GMF.

Несмотря на незавершенность структуры пуринового гетероцикла, АИКАР-Ф является природным аналогом АМФ, замещающим его в некоторых ферментативных реакциях in vivo. Наибольшее внимание за последнее десятилетие привлекает возможность замещения АМФ в реакциях активации АМФК (АМФ-активируемая протеинкиназа) млекопитающих. АМФК - глобальный регулятор метаболических процессов, обеспечивающих энергетический статус организма эукариот [4, 5]. Для активации АМФК in vivo удобно использовать нуклеозид АИКАР, который в клетках быстро фосфорилируется с образованием АИКАР-Ф, аналога АМФ. Появление АИКАР имитирует накопление АМФ и провоцирует перестройку энергетических процессов, направленную на преодоление мнимого энергетического стресса. Благодаря способности активировать АМФК препараты АИКАР обладают широким терапевтическим потенциалом, поскольку они нормализуют углеводный [6] и липидный обмен [7]. Имитируя состояние энергетического стресса, АИКАР подавляет рост опухолевых клеток [8]. Показана эффективность АИКАР в предупреждении сахарного диабета 2 типа [9]. АИКАР индуцирует апоптоз, он эффективен при хронических [10] и острых лейкозах [11].Despite the incomplete structure of the purine heterocycle, AICAR-F is a natural analogue of AMP, replacing it in some enzymatic reactions in vivo. The greatest attention over the last decade has been attracted by the possibility of substitution of AMP in mammalian AMPK (AMP-activated protein kinase) activation reactions. AMPK is a global regulator of metabolic processes that ensure the energy status of an eukaryotic organism [4, 5]. To activate AMPK in vivo, it is convenient to use the AICAR nucleoside, which is rapidly phosphorylated in cells to form AICAR-F, an analogue of AMP. The emergence of AICAR imitates the accumulation of AMP and provokes a restructuring of energy processes aimed at overcoming imaginary energy stress. Due to the ability to activate AMPK, AICAR drugs have a wide therapeutic potential, since they normalize carbohydrate [6] and lipid metabolism [7]. Mimicking the state of energy stress, AICAR inhibits the growth of tumor cells [8]. The effectiveness of AICAR in the prevention of type 2 diabetes mellitus has been shown [9]. AICAR induces apoptosis; it is effective in chronic [10] and acute leukemia [11].

В настоящее время считается общепринятым представление о том, что продолжительность жизни различных организмов увеличивается при некотором ограничении потребления высококалорийной пищи, т.е. при умеренном энергетическом стрессе [12]. На биохимическом уровне энергетический стресс проявляется в уменьшении количества основного носителя энергии - АТФ и, соответственно, возрастании АМФ. В ответ на увеличение соотношения АМФ/АТФ клетки усиливают энергообразующие процессы и ограничивают потребление энергии. Известно, что АИКАР в результате фосфорилирования становится природным аналогом АМФ и способен имитировать энергетический стресс [13].At present, it is generally accepted that the life expectancy of various organisms increases with some restriction in the consumption of high-calorie foods, i.e. with moderate energy stress [12]. At the biochemical level, energy stress is manifested in a decrease in the amount of the main energy carrier - ATP and, accordingly, an increase in AMP. In response to an increase in the ratio of AMP / ATP, cells enhance energy-generating processes and limit energy consumption. It is known that AICAR as a result of phosphorylation becomes a natural analogue of AMP and is able to mimic energy stress [13].

Исходя из вышесказанного, нам представилось логичным исследовать свойства АИКАР как геропротектора широкого действия.Based on the foregoing, it seemed logical to us to investigate the properties of AICAR as a broad-acting geroprotector.

Рассматривая возможный молекулярный механизм геропротекторного действия АИКАР, прежде всего, следует принять во внимание способность АИКАР активировать фермент АМФК, который является глобальным регулятором энергетического метаболизма в клетках эукариот [14]. Известно, что повышенный уровень активности АМФК является причиной увеличения продолжительности жизни у ряда мутантов С. elegans [15].When considering the possible molecular mechanism of the geroprotective action of AICAR, first of all, one should take into account the ability of AICAR to activate the enzyme AMPK, which is a global regulator of energy metabolism in eukaryotic cells [14]. It is known that an increased level of AMPK activity is the reason for the increase in life expectancy in a number of C. elegans mutants [15].

Геропротекторную активность АИКАР исследовали при его экспериментальном изучении на двух филогенетически весьма отдаленных организмах. В качестве модельных организмов использовали почвенных нематод Caenorhabditis elegans и плодовых мушек Drosophila melanogaster, исследуя показатели продолжительности жизни.The AICAR geroprotective activity was investigated during its experimental study on two phylogenetically very distant organisms. Soil nematodes Caenorhabditis elegans and fruit flies Drosophila melanogaster were used as model organisms, studying life expectancy indicators.

Нематоды являются удобным модельным объектом для поиска новых веществ с геронтологической активностью из-за легкости культивирования, возможности добавления препаратов непосредственно в среду роста и быстрого анализа изменения продолжительности жизни червяков. Так, было показано, что резвератрол в присутствии деацетилазы Sir-2.1 увеличивает продолжительность жизни нематод [16]. К увеличению продолжительности жизни нематод приводит и добавление в питательную среду этозуксимида, триметадиона и 3,3-диэтил-2-пиролидинона, регулирующих нейромышечную активность и являющихся антиконвульсионными препаратами [17].Nematodes are a convenient model object for searching for new substances with gerontological activity due to the ease of cultivation, the possibility of adding drugs directly to the growth medium, and a quick analysis of changes in the life span of worms. So, it was shown that resveratrol in the presence of de-acetylase Sir-2.1 increases the life expectancy of nematodes [16]. The addition of etosuximide, trimethadione, and 3,3-diethyl-2-pyrolidinone, which regulate neuromuscular activity and are anticonvulsant drugs, also leads to an increase in the lifespan of nematodes [17].

Мухи-дрозофилы с коротким жизненным циклом и хорошо изученной биологией и генетикой также служат весьма популярным объектом для исследования молекулярных механизмов старения [18].Drosophila flies with a short life cycle and well-studied biology and genetics also serve as a very popular object for studying the molecular mechanisms of aging [18].

5-аминоимидазол-4-карбоксамидрибофуранозид (АИКАР) проявляет биологическую активность, а именно - геропротекторную активность, за счет активации АМФК.5-aminoimidazole-4-carboxamidribofuranoside (AICAR) exhibits biological activity, namely geroprotective activity, due to the activation of AMPA.

Изобретательской задачей данной заявки на патент является расширение арсенала веществ, которые могут быть использованы в качестве новых эффективных геропротекторов - средств, продлевающих жизнь человека и улучшающих ее качество.The inventive objective of this patent application is to expand the arsenal of substances that can be used as new effective geroprotectors - agents that prolong human life and improve its quality.

Задача решается путем применения АИКАР в опытах, демонстрирующих его геропротекторные свойства при добавлении в корм модельных животных и подтверждающих возможность его использования в качестве универсального геропротектора.The problem is solved by using AICAR in experiments demonstrating its geroprotective properties when model animals are added to the feed and confirming the possibility of its use as a universal geroprotector.

Краткое описание фигурBrief Description of the Figures

Фигура 1. Структурная формула АИКАРFigure 1. The structural formula of AICAR

Фигура 2. Графики выживаемости (построение графиков и их обработка методом сигмоидальной аппроксимации экспериментальных данных проводились с использованием программы SciDAVis 0.2.1.). В скобках приведены значения СПЖ. Приведенные на рисунке цифровые значения в процентах отражают увеличение средней продолжительности жизни относительно нематод, выращенных на штамме Е. coli ОР50 на NGM-среде без добавления раствора АИКАР.Figure 2. Survival graphs (construction of graphs and their processing by the sigmoidal approximation of experimental data were carried out using the SciDAVis 0.2.1 program.). In parentheses are the values of the LIF. The numerical values shown in the figure in percent reflect an increase in the average life expectancy relative to nematodes grown on E. coli strain OP50 in NGM medium without adding an AICAR solution.

Фигура 3. Графики выживаемости (построение графиков и их обработка методом сигмоидальной аппроксимации экспериментальных данных проводились с использованием программы SciDAVis 0.2.1.). В скобках приведены значения СПЖ. Приведенные на рисунке цифровые значения в процентах отражают увеличение средней продолжительности жизни относительно нематод, выращенных на штамме В. subtilis Mu8purH на NGM-среде без добавления раствора АИКАР.Figure 3. Survival graphs (construction of graphs and their processing by the sigmoidal approximation of experimental data were carried out using the SciDAVis 0.2.1 program.). In parentheses are the values of the LIF. The numerical values shown in the figure in percent reflect an increase in average life expectancy relative to nematodes grown on B. subtilis Mu8purH strain on NGM medium without adding AICAR solution.

Фигура 4. Графики выживаемости самок линии 1118 D. melanogaster (построение графиков и их обработка методом сигмоидальной аппроксимации экспериментальных данных проводились с использованием программы SciDAVis 0.2.1.). В скобках приведены значения СПЖ. Приведенные на рисунке цифровые значения в процентах отражают увеличение средней продолжительности жизни самок w1118 относительно особей, выращенных на корме без добавления раствора АИКАР.Figure 4. Survival graphs of females of the 1118 D. melanogaster line (the graphs were plotted and processed using the sigmoid approximation of experimental data using the SciDAVis 0.2.1 program.). In parentheses are the values of the LIF. The percentages given in the figure represent the increase in the average life expectancy of the w1118 females relative to individuals grown on food without adding AICAR.

Фигура 5. Графики выживаемости самцов линии 1118 D. melanogaster (построение графиков и их обработка методом сигмоидальной аппроксимации экспериментальных данных проводились с использованием программы SciDAVis 0.2.1.). В скобках приведены значения СПЖ. Приведенные на рисунке цифровые значения в процентах отражают увеличение средней продолжительности жизни самцов w1118 относительно особей, выращенных на корме без добавления раствора АИКАР.Figure 5. Survival graphs of males of the 1118 D. melanogaster line (graphing and processing by sigmoidal approximation of experimental data were carried out using the SciDAVis 0.2.1 program.). In parentheses are the values of the LIF. The numerical values shown in the figure in percent reflect an increase in the average life expectancy of males w1118 relative to individuals grown on food without the addition of AICAR solution.

Осуществление изобретенияThe implementation of the invention

Пример 1. Влияние экзогенного АИКАР (0,05 мМ и 0,1 мМ) на продолжительность жизни С. elegans N2 Bristol («дикий» тип) при выращивании на Е. coli ОР50Example 1. The effect of exogenous AICAR (0.05 mm and 0.1 mm) on the life expectancy of C. elegans N2 Bristol ("wild" type) when grown on E. coli OP50

Нематод С. elegans N2 Bristol («дикий» тип) выращивали из отмытых от посторонней микрофлоры яиц в течение 2-х генераций, затем инкубировали до возраста L4 на чашках Петри со средой NGM при температуре 20°С. Далее пересаживали на чашки для опыта с NGM-средой и NGM-средой с добавлением раствора АИКАР в концентрации 0,05 мМ и 0,1 мМ. В качестве корма использовался штамм кишечной палочки Е. coli ОР50. Нематоды были пересажены в количестве не менее 100 особей на точку (одну из используемых концентраций). Пересадку осуществляли через день на аналогичные среды в течение всего эксперимента.The nematode C. elegans N2 Bristol ("wild" type) was grown from eggs washed from extraneous microflora for 2 generations, then incubated until age L4 in Petri dishes with NGM medium at a temperature of 20 ° C. Next, they were transplanted onto experimental plates with NGM medium and NGM medium with the addition of AICAR solution at a concentration of 0.05 mM and 0.1 mM. E. coli OP50 strain of Escherichia coli was used as food. Nematodes were transplanted in an amount of at least 100 individuals per point (one of the used concentrations). Transplantation was carried out every other day on similar media throughout the experiment.

Продолжительность жизни нематод оценивалась путем определения временного интервала, который соответствует выживаемости 50% популяции (СПЖ).Life expectancy of nematodes was estimated by determining the time interval that corresponds to the survival rate of 50% of the population (LSS).

Среда NGM: пептон - 2,5 г/л, NaCl - 3 г/л, агар - 17 г/л, холестерин - 5 мг/л, 1 мМ MgSO4, 1 мМ CaCl2, 25 мМ КРО4 буфер рН6.NGM medium: peptone - 2.5 g / l, NaCl - 3 g / l, agar - 17 g / l, cholesterol - 5 mg / l, 1 mM MgSO 4 , 1 mM CaCl 2 , 25 mM KRO 4 pH6 buffer.

Штамм Е. coli ОР50 выращивали в среде LB в течение 16 часов при температуре 37°С на качалке (n=220 оборотов/мин). Затем засевали по 40 мкл ночной культуры чашки с NGM и NGMc раствором АИКАР и выращивали в термостате при температуре 30°С в течение 16 часов.The strain E. coli OP50 was grown in LB medium for 16 hours at a temperature of 37 ° C on a shaker (n = 220 rpm). Then, 40 μl of a night culture of a plate with NGM and NGMc AICAR solution were inoculated and grown in an incubator at a temperature of 30 ° C for 16 hours.

При выращивании С. elegans N2 на NGM-среде без добавления АИКАР СПЖ находится в пределах 17 дней (см. Фиг. 2).When C. elegans N2 was grown on an NGM medium without the addition of AICAR, the LSS was within 17 days (see Fig. 2).

При выращивании С. elegans N2 на NGM-среде с добавлением раствора АИКАР в концентрации 0,05 мМ и 0,1 мМ СПЖ находится в пределах 19,6-19.7 дней, что отражает увеличение СПЖ на 14% и 14.5% соответственно относительно нематод, выращенных NGM-среде без добавления раствора АИКАР (см. Фиг. 2).When C. elegans N2 was grown on an NGM medium with the addition of an AICAR solution at a concentration of 0.05 mM and 0.1 mM, the LSS was within 19.6-19.7 days, which reflects an increase in LSS by 14% and 14.5%, respectively, relative to nematodes, grown NGM medium without addition of AICAR solution (see Fig. 2).

Пример 2. Влияние экзогенного АИКАР (0,05 мМ и 0,1 мМ) на продолжительность жизни С. elegans N2 Bristol («дикий» тип) при выращивании на В. subtilis Mu8purHExample 2. The effect of exogenous AICAR (0.05 mm and 0.1 mm) on the life expectancy of C. elegans N2 Bristol ("wild" type) when grown on B. subtilis Mu8purH

С. elegans N2 Bristol («дикий» тип) выращивали из отмытых от посторонней микрофлоры яиц в течение 2-х генераций, затем инкубировали до возраста L4 на чашках Петри со средой NGM при температуре 20°С и пересаживали на чашки для опыта с NGM-средой и NGM-средой с добавлением раствора АИКАР в концентрации 0,05 мМ и 0,1 мМ. В качестве корма использовался штамм В. subtilis Mu8purH (штамм с делецией по гену purH - пуриновый ауксотроф). Нематоды были пересажены в количестве не менее 100 особей на точку (используемые концентрации АИКАР). Пересадку осуществляли через день на аналогичные среды в течение всего эксперимента.C. elegans N2 Bristol ("wild" type) was grown from eggs washed from extraneous microflora for 2 generations, then incubated until age L4 in Petri dishes with NGM medium at a temperature of 20 ° C and transplanted onto experimental plates with NGM- medium and NGM-medium with the addition of AICAR solution at a concentration of 0.05 mm and 0.1 mm. The strain B. subtilis Mu8purH (strain with purH gene deletion - purine auxotroph) was used as food. Nematodes were transplanted in an amount of at least 100 individuals per point (used concentration of AICAR). Transplantation was carried out every other day on similar media throughout the experiment.

Продолжительность жизни нематод оценивалась путем определения временного интервала, который соответствует выживаемости 50% популяции (СПЖ).Life expectancy of nematodes was estimated by determining the time interval that corresponds to the survival rate of 50% of the population (LSS).

Штамм В. subtilis Mu8purH выращивали в среде LB в течение 18 часов при температуре 37°С на качалке n=220 оборотов/мин. Затем засевали по 20 мкл ночной культуры чашки с NGM и NGM с раствором АИКАР и выращивали в термостате при температуре 37°С в течение 16 часов.The strain B. subtilis Mu8purH was grown in LB medium for 18 hours at a temperature of 37 ° C on a rocking chair n = 220 rpm. Then, 20 μl of overnight culture were seeded with NGM and NGM plates with AICAR solution and grown in an incubator at 37 ° C for 16 hours.

При выращивании С. elegans N2 на NGM-среде без добавления АИКАР СПЖ находится в пределах 15,8 дней (см. Фиг. 3).When C. elegans N2 was grown on an NGM medium without the addition of AICAR, the LSS was within 15.8 days (see Fig. 3).

При выращивании С. elegans N2 на NGM-среде с добавлением раствора АИКАР в концентрации 0,05 мМ и 0,1 мМ СПЖ находится в пределах 18.0-18.1 дней, что отражает увеличение СПЖ на 13.9% и 14.6% соответственно относительно нематод, выращенных NGM-среде без добавления раствора АИКАР (см. Фиг. 3).When C. elegans N2 was grown on an NGM medium supplemented with an AICAR solution at a concentration of 0.05 mM and 0.1 mM, the LSS was within 18.0-18.1 days, which reflects an increase in LSS by 13.9% and 14.6%, respectively, relative to nematodes grown by NGM -environment without adding AICAR solution (see Fig. 3).

Таким образом, полученные данные показывают, что на модели С. elegans при выращивании нематод на Е. coli и В. subtilis АИКАР проявляет достоверную геропротекторную активность.Thus, the data obtained show that, in the C. elegans model, when growing nematodes on E. coli and B. subtilis, AICAR exhibits significant geroprotective activity.

Пример 3. Влияние экзогенного АИКАР (0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ, 5 мМ и 10 мМ) на продолжительность жизни самок и самцов Drosophila melanogaster линии w1118Example 3. The effect of exogenous AICAR (0.1 mm, 0.5 mm, 1 mm, 5 mm and 10 mm) on the life expectancy of females and males of Drosophila melanogaster line w1118

Простота содержания, возможность использовать в одном эксперименте большое количество одновозрастных особей, относительно короткая продолжительность жизни - эти характеристики позволяют использовать дрозофилу как модель в исследовании различных аспектов процесса старения и, в частности, тестировать вещества, влияющие на продолжительность жизни мухи [19].The simplicity of maintenance, the ability to use in a single experiment a large number of individuals of the same age, a relatively short life span — these characteristics make it possible to use Drosophila as a model in the study of various aspects of the aging process and, in particular, to test substances that affect the life span of a fly [19].

В опытах по анализу влияния АИКАР на продолжительность жизни D. melanogaster использовали линию мух w1118, полученную из сток центра Блумингтон (Indiana University, Bloomington, Indianam USA). Мух содержали в стандартных условиях на корме следующего состава: дрожжи - 66 г/л, изюм - 30 г/л, манная крупа - 30 г/л, агар - 6 г/л, сахар - 60 г/л, пропионовая кислота - 5 мл/л.In experiments to analyze the effect of AICAR on the life span of D. melanogaster, the w1118 flies line was obtained from the Bloomington stock center (Indiana University, Bloomington, Indianam USA). The flies were kept under standard conditions on feed of the following composition: yeast - 66 g / l, raisins - 30 g / l, semolina - 30 g / l, agar - 6 g / l, sugar - 60 g / l, propionic acid - 5 ml / l

Молодых мух в возрасте 4-5 дней, вылетевших из синхронных кладок, рассаживали в 50 мл стеклянные стаканчики с 2 мл корма, содержавшего раствор АИКАР в концентрациях: 1) 0,1 мМ; 2) 0,5 мМ; 3) 1 мМ; 4) 5 мМ и 5) 10 мМ. В каждую пробирку помещали по 10 самок и 4 самца.Young flies aged 4-5 days, flying out of synchronized clutches, were placed in 50 ml glass cups with 2 ml of feed containing AICAR solution in concentrations: 1) 0.1 mm; 2) 0.5 mm; 3) 1 mm; 4) 5 mM and 5) 10 mM. 10 females and 4 males were placed in each tube.

Через 2 дня мух-родителей из каждой пробирки пересаживали в новую пробирку со свежим кормом, содержащим АИКАР соответствующей концентрации. По прошествии еще 2 дней мух-родителей удаляли и следили за развитием потомства. Имаго, вылетающих из пробирок с АИКАР указанных концентраций, собирали и рассаживали по 10-12 мух в пробирки с обычным кормом, отдельно самок и самцов, по 100 особей на каждую точку. Пересадку дрозофил на свежий корм проводили каждые 2-3 дня в течение всего эксперимента.After 2 days, the parent flies from each tube were transplanted into a new tube with fresh feed containing AICAR of the appropriate concentration. After another 2 days, the parent flies were removed and the development of offspring was monitored. Adults departing from test tubes with AICAR of the indicated concentrations were collected and planted 10-12 flies into test tubes with ordinary food, separately of females and males, 100 individuals for each point. Drosophila transplantation to fresh food was carried out every 2-3 days throughout the experiment.

Продолжительность жизни D. melanogaster оценивали путем определения временного интервала, который соответствует выживаемости 50% популяции (СПЖ).Life expectancy of D. melanogaster was assessed by determining the time interval that corresponds to the survival rate of 50% of the population (LSS).

При выращивании мух без добавления АИКАР в корм СПЖ находится в пределах 67 дней (см. Фиг. 4). При выращивании от эмбриона до имаго на корме с добавлением раствора АИКАР в концентрации 0,5 мМ СПЖ самок находится в пределах 76 дней, что отражает увеличение СПЖ на 13% относительно мух, выращенных на корме без добавления раствора АИКАР (см. Фиг. 4).When flies are grown without the addition of AICAR to the feed, the LSS is within 67 days (see Fig. 4). When growing from embryo to imago on the feed with the addition of AICAR solution at a concentration of 0.5 mM, the LSS of females is within 76 days, which reflects a 13% increase in SGL relative to flies grown on the feed without adding the AICAR solution (see Fig. 4) .

При развитии личинок на корме с добавлением АИКАР в концентрации 1 мМ - СПЖ самок находится в пределах 73 дней, что отражает увеличение СПЖ на 9% относительно мух, выращенных на корме без добавления раствора АИКАР (см. Фиг. 4).With the development of larvae in the feed with the addition of AICAR at a concentration of 1 mM, the LSS of females is within 73 days, which reflects an increase in LSS by 9% relative to flies grown on the feed without the addition of AICAR solution (see Fig. 4).

Проведенные опыты показали, что самцы и самки мух по-разному реагировали на присутствие тестируемого соединения (АИКАР) в среде.The experiments showed that males and females of flies reacted differently to the presence of the test compound (AICAR) in the medium.

Так при выращивании самцов на корме без АИКАР СПЖ изучаемой линии мух находится в пределах 72 дней (см. Фиг. 5).So when growing males on feed without AIKAR, the LSS of the studied line of flies is within 72 days (see Fig. 5).

При развитии на корме с добавлением раствора АИКАР в концентрации 0,5 мМ СПЖ самцов находится в пределах 88 дней, что отражает увеличение СПЖ на 22% относительно мух, выращенных на корме без добавления раствора АИКАР (см. Фиг. 5).When developed in the feed with the addition of the AICAR solution at a concentration of 0.5 mM, the male LSS is within 88 days, which reflects an increase in the LSS by 22% relative to flies grown on the feed without the addition of the AICAR solution (see Fig. 5).

При развитии на корме с добавлением раствора АИКАР в концентрации 1 мМ - СПЖ самцов находится в пределах 83 дней, что отражает увеличение СПЖ на 15% относительно мух, выращенных на корме без добавления АИКАР (см. Фиг. 5).When developing on the feed with the addition of the AICAR solution at a concentration of 1 mM, the male LSS is within 83 days, which reflects an increase in the LMS by 15% relative to flies grown on the feed without the addition of the AICAR (see Fig. 5).

Данные эксперимента по анализу влияния АИКАР на продолжительность жизни самок и самцов линии w1118 D. melanogaster свидетельствуют о том, что и на данной модели АИКАР, в представленных концентрациях, проявляет достоверную геропротекторную активность.Experimental data on the influence of AICAR on the life expectancy of females and males of the w1118 D. melanogaster line indicate that on this model, AICAR, in the concentrations presented, exhibits reliable geroprotective activity.

Источники информацииInformation sources

1. Buchanan J.M., Hartman S.C. Enzymic reactions in the synthesis of the purines // Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 1959. V. 21. P. 199-261.1. Buchanan J.M., Hartman S.C. Enzymic reactions in the synthesis of the purines // Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 1959. V. 21. P. 199-261.

2. Zalkin H., Nygaard P. Biosynthesis of purine nucleotides. InEscherichia coli and Salmonella. Washington, Dc.: ASM Press. 1996. P. 561-579.2. Zalkin H., Nygaard P. Biosynthesis of purine nucleotides. InEscherichia coli and Salmonella. Washington, Dc .: ASM Press. 1996.P. 561-579.

3. Switzer R.L., Zalkin H., Saxild H.H. Purine, pyrimidine, and pyridine nucleotide metabolism. In Bacillus subtilis and its closest relatives: from genes to cells. Washington, Dc.: ASM Press, 2002. P. 255-269.3. Switzer R.L., Zalkin H., Saxild H.H. Purine, pyrimidine, and pyridine nucleotide metabolism. In Bacillus subtilis and its closest relatives: from genes to cells. Washington, Dc .: ASM Press, 2002. P. 255-269.

4. Hardie D.G., Carling D., Carlson M. The AMP-activated/SNF1 protein kinase subfamily: metabolic sensors of the eukaryotic cells? // Ann. Rev. Biochem. 1998. V. 67. P. 821-855.4. Hardie D.G., Carling D., Carlson M. The AMP-activated / SNF1 protein kinase subfamily: metabolic sensors of the eukaryotic cells? // Ann. Rev. Biochem. 1998. V. 67. P. 821-855.

5. Hardie D.G., Salt I.P., Hawley S.A., Davies S.P. AMP-activated protein kinase: an ultrasensitive system for monitoring cellular energy charge // Biochem. J. 1999. V. 338. P. 717-722.5. Hardie D.G., Salt I.P., Hawley S.A., Davies S.P. AMP-activated protein kinase: an ultrasensitive system for monitoring cellular energy charge // Biochem. J. 1999. V. 338. P. 717-722.

6. Rutter G.A., Xavier G.S., Leclerc I. Roles of 5'-AMP-activated protein kinase (AMPK) in mammalian glucose homoeostasis // Biochemical Journal. 2003. V. 375 (2), P. 1-16.6. Rutter G.A., Xavier G.S., Leclerc I. Roles of 5'-AMP-activated protein kinase (AMPK) in mammalian glucose homoeostasis // Biochemical Journal. 2003. V. 375 (2), P. 1-16.

7. Gaidhu M.P., Fediuc S., Anthony N.M., So M., Mirpourian M., Perry R.L. and Ceddia R.B. Prolonged AICAR-induced AMP-kinase activation promotes energy dissipation in white adipocytes: novel mechanisms integrating HSL and ATGL. // J. Lipid Res. 2009. V. 50. P. 704-715.7. Gaidhu M.P., Fediuc S., Anthony N.M., So M., Mirpourian M., Perry R.L. and Ceddia R.B. Prolonged AICAR-induced AMP-kinase activation promotes energy dissipation in white adipocytes: novel mechanisms integrating HSL and ATGL. // J. Lipid Res. 2009. V. 50. P. 704-715.

8. Swinnen J.V., Beckers A., Brusselmans K., Organe S., Segers J., Timmermans L., Vanderhoydonc F., Deboel L., Derua R., Waelkens E. et al. Mimicry of a cellular low energy status blocks tumor cell anabolism and suppresses the malignant phenotype // Cancer res. 2005. V. 65. P. 2441-2448.8. Swinnen J.V., Beckers A., Brusselmans K., Organe S., Segers J., Timmermans L., Vanderhoydonc F., Deboel L., Derua R., Waelkens E. et al. Mimicry of a cellular low energy status blocks tumor cell anabolism and suppresses the malignant phenotype // Cancer res. 2005. V. 65. P. 2441-2448.

9. Pold R., Jensen L.S., Jessen N., Buhl E.S., Schmitz O., Flyvbjerg A., Fujii N., Goodyear L.J., Gotfredsen C.F., Brand C.L. et al. Long-term AICAR administration and exercise prevents diabetes in ZDF rats// Diabetes. 2005. V. 54. P. 928-934.9. Pold R., Jensen L.S., Jessen N., Buhl E.S., Schmitz O., Flyvbjerg A., Fujii N., Goodyear L.J., Gotfredsen C.F., Brand C.L. et al. Long-term AICAR administration and exercise prevents diabetes in ZDF rats // Diabetes. 2005. V. 54. P. 928-934.

10. Campas C., Lopez J.M., Santidrian A.F., Barragan M., Bellosillo В., Colomer D., Gil J. Acadesine activates AMPK and induces apoptosis in B-cell chronic lymphocytic leukemia cells but not in T-lymphocytes // Blood. 2003. V. 101. P. 3674-3680.10. Campas C., Lopez JM, Santidrian AF, Barragan M., Bellosillo B., Colomer D., Gil J. Acadesine activates AMPK and induces apoptosis in B-cell chronic lymphocytic leukemia cells but not in T-lymphocytes // Blood . 2003. V. 101. P. 3674-3680.

11. Sengupta T.K., Leclerc G.M., Hsieh-Kinzer T.T. Cytotoxic effect of 5-aminoimidazole-4-carboxamide-1-(β-4-ribofuranoside (AICAR) on childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells: implication for targeted therapy // Mol. cancer. 2007. V. 6. №46. P. 1-12.11. Sengupta T.K., Leclerc G.M., Hsieh-Kinzer T.T. Cytotoxic effect of 5-aminoimidazole-4-carboxamide-1- (β-4-ribofuranoside (AICAR) on childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells: implication for targeted therapy // Mol. Cancer. 2007. V. 6. No. 46 . P. 1-12.

12. Bordone L., Guarente L. Calorie restriction, SIRT1 and metabolism: understanding longevity //Nat. Rev. Mol Cell Biol. 2005. V.6. P. 298-305.12. Bordone L., Guarente L. Calorie restriction, SIRT1 and metabolism: understanding longevity // Nat. Rev. Mol Cell Biol. 2005. V.6. P. 298-305.

13. Hardie D.G. The AMP-activated protein kinase pathway - new players upstream and downstream // J. Cell Sci. 2004. V. 117. P. 5479-5487.13. Hardie D.G. The AMP-activated protein kinase pathway - new players upstream and downstream // J. Cell Sci. 2004. V. 117. P. 5479-5487.

14. Curtis R., O'Connor G., DiStefano P.S. Aging networks in Caenorhabditis elegans: AMP-activated protein kinase (aak-2) links multiple aging and metabolism pathways // Aging Cell 2006. V. 5. P. 119-126.14. Curtis R., O'Connor G., DiStefano P.S. Aging networks in Caenorhabditis elegans: AMP-activated protein kinase (aak-2) links multiple aging and metabolism pathways // Aging Cell 2006. V. 5. P. 119-126.

15. Carling D., Mayer F.V., Sanders M.J., Gamblin S.J. AMP-activated protein kinase: nature's energy sensor // Nat. Chem. Biol. 2011. V. 7. P. 512-518.15. Carling D., Mayer F.V., Sanders M.J., Gamblin S.J. AMP-activated protein kinase: nature's energy sensor // Nat. Chem. Biol. 2011. V. 7. P. 512-518.

16. Kaeberlein M., McDonagh Т., Heltweg В., Hixon J., Westman E.A., Caldwell S.D., Napper A., Curtis R., DiStefano P.S., Fields S., Bedalov A., Kennedy В. K.Substrate-specific activation of sirtuins by resveratrol// J. Biol. Chem. 2005b. Vol. 280, N 17. P. 17038-17045.16. Kaeberlein M., McDonagh T., Heltweg B., Hixon J., Westman EA, Caldwell SD, Napper A., Curtis R., DiStefano PS, Fields S., Bedalov A., Kennedy B. K.Substrate- specific activation of sirtuins by resveratrol // J. Biol. Chem. 2005b. Vol. 280, N 17. P. 17038-17045.

11. Evason K., Huang C, Yamben I., Covey D.F., Kornfeld K.Anticonvulsant medications extend worm life-span // Science. 2005. Vol. 307. P. 258-262.11. Evason K., Huang C, Yamben I., Covey D.F., Kornfeld K. Anticonvulsant medications extend worm life-span // Science. 2005. Vol. 307. P. 258-262.

18. Proshkina E.N., Shaposhnikov M.V., Sadritdinova A.F., Kudryavtseva A.V., Moskalev A.A. Basic mechanisms of longevity: A case study of Drosophila pro-longevity genes. Ageing Res Rev. 2015 Nov; 24 (Pt B): 218-31.18. Proshkina E.N., Shaposhnikov M.V., Sadritdinova A.F., Kudryavtseva A.V., Moskalev A.A. Basic mechanisms of longevity: A case study of Drosophila pro-longevity genes. Ageing Res Rev. 2015 Nov; 24 (Pt B): 218-31.

19. Jafari M. Drosophila melanogaster as a model system for the evaluation of anti-aging compounds. Fly (Austin) 2010; 4 (3): 253-7. Doi:10.4161/fly.4.3.11997.)19. Jafari M. Drosophila melanogaster as a model system for the evaluation of anti-aging compounds. Fly (Austin) 2010; 4 (3): 253-7. Doi: 10.4161 / fly.4.3.11997.)

Claims (3)

1. Применение 5-аминоимидазол-4-карбоксамидрибофуранозида (АИКАР) в качестве геропротектора, состоящее в добавлении данного соединения в питательную среду модельных животных.1. The use of 5-aminoimidazole-4-carboxamidribofuranoside (AICAR) as a geroprotector, consisting in adding this compound to the nutrient medium of model animals. 2. Применение по п.1, характеризующееся тем, что в случае нематод геропротекторный эффект достигается в концентрациях 0,05 мМ и 0,1 мМ.2. The use according to claim 1, characterized in that in the case of nematodes, the geroprotective effect is achieved at concentrations of 0.05 mm and 0.1 mm. 3. Применение по п.1, характеризующееся тем, что в случае мух-дрозофил геропротекторный эффект достигается в концентрациях 0,5 мМ и 1,0 мМ.3. The use according to claim 1, characterized in that in the case of flies-Drosophila geroprotective effect is achieved in concentrations of 0.5 mm and 1.0 mm.
RU2016135655A 2016-09-02 2016-09-02 Geroprotector for model animals RU2639500C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016135655A RU2639500C1 (en) 2016-09-02 2016-09-02 Geroprotector for model animals

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016135655A RU2639500C1 (en) 2016-09-02 2016-09-02 Geroprotector for model animals

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2639500C1 true RU2639500C1 (en) 2017-12-21

Family

ID=63857504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016135655A RU2639500C1 (en) 2016-09-02 2016-09-02 Geroprotector for model animals

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2639500C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009093925A1 (en) * 2008-01-23 2009-07-30 United Technologies Ut Ag COSMETIC COMPOSITIONS COMPRISING 5-AMINO-L-β-D- RIBOFURANOSYL-LH-IMIDAZOLE-4-CARBOXAMIDE OR DERIVATIVES, OR SALTS THEREOF
RU2494744C1 (en) * 2012-10-31 2013-10-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") Anticancer therapeutic agent of acadesine

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009093925A1 (en) * 2008-01-23 2009-07-30 United Technologies Ut Ag COSMETIC COMPOSITIONS COMPRISING 5-AMINO-L-β-D- RIBOFURANOSYL-LH-IMIDAZOLE-4-CARBOXAMIDE OR DERIVATIVES, OR SALTS THEREOF
RU2494744C1 (en) * 2012-10-31 2013-10-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") Anticancer therapeutic agent of acadesine

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
АНИСИМОВ В.Н., ЗАБЕЖИНСКИЙ М.А., ПОПОВИЧ И.Г. Модели и методы изучения геропротекторной активности фармакологических препаратов. //Успехи герантологии, 2009, т. 22, N 2, с. 237. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Noma Dynamics of nucleotide metabolism as a supporter of life phenomena
NØRBY A specific nutritional requirement for pyrimidines in rudimentary mutants of Drosophila melanogaster
Shen et al. Genetic interactions due to constitutive and inducible gene regulation mediated by the unfolded protein response in C. elegans
Fraga et al. Glycogen and glucose metabolism are essential for early embryonic development of the red flour beetle Tribolium castaneum
Sinclair Paradigms and pitfalls of yeast longevity research
Elbein et al. New insights on trehalose: a multifunctional molecule
Hibshman et al. Maternal diet and insulin-like signaling control intergenerational plasticity of progeny size and starvation resistance
Hayden et al. The extracytoplasmic stress factor, σE, is required to maintain cell envelope integrity in Escherichia coli
Wilson et al. Inositol pyrophosphates: between signalling and metabolism
Nikel et al. Accumulation of inorganic polyphosphate enables stress endurance and catalytic vigour in Pseudomonas putida KT2440
Frederich et al. AMP-activated protein kinase (AMPK) in the rock crab, Cancer irroratus: an early indicator of temperature stress
Thorat et al. Trehalose as an indicator of desiccation stress in Drosophila melanogaster larvae: a potential marker of anhydrobiosis
Green et al. Characterization of a feedback-resistant phosphoribosylpyrophosphate synthetase from cultured, mutagenized hepatoma cells that overproduce purines
Shiba et al. Inorganic polyphosphate and polyphosphate kinase: their novel biological functions and applications
Föll et al. Anaerobiosis in the nematode Caenorhabditis elegans
Saiardi Cell signalling by inositol pyrophosphates
Morán-Zorzano et al. Escherichia coli AspP activity is enhanced by macromolecular crowding and by both glucose-1, 6-bisphosphate and nucleotide-sugars
Cheers et al. P16 is an essential regulator of skeletogenesis in the sea urchin embryo
Pimkin et al. A regulatory role of the Bateman domain of IMP dehydrogenase in adenylate nucleotide biosynthesis
Hashimoto et al. Nicotinamide adenine dinucleotide extends the lifespan of Caenorhabditis elegans mediated by sir-2.1 and daf-16
Feng et al. Identification of a dTDP-rhamnose biosynthetic pathway that oscillates with the molting cycle in Caenorhabditis elegans
Morley Thermodynamics of miracidial survival and metabolism
Li et al. Identification and functional characterization of the glycogen synthesis related gene glycogenin in Pacific oysters (Crassostrea gigas)
Hand et al. Interrupted development in aquatic organisms: ecological context and physiological mechanisms
Kelsall et al. Disruption of the allosteric phosphorylase a regulation of the hepatic glycogen-targeted protein phosphatase 1 improves glucose tolerance in vivo