RU2638131C1 - Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей - Google Patents
Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2638131C1 RU2638131C1 RU2016150835A RU2016150835A RU2638131C1 RU 2638131 C1 RU2638131 C1 RU 2638131C1 RU 2016150835 A RU2016150835 A RU 2016150835A RU 2016150835 A RU2016150835 A RU 2016150835A RU 2638131 C1 RU2638131 C1 RU 2638131C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- dye
- complex
- tumor
- drug
- Prior art date
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000000298 carbocyanine Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 claims abstract description 41
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 22
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 5
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 claims description 2
- 102000004641 Fetal Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010003471 Fetal Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 15
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 abstract description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 abstract description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 abstract description 9
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract description 8
- 101000827785 Homo sapiens Alpha-fetoprotein Proteins 0.000 abstract description 4
- 101000848653 Homo sapiens Tripartite motif-containing protein 26 Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 102000046101 human AFP Human genes 0.000 abstract description 4
- 230000001443 photoexcitation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 abstract 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 52
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 40
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 33
- 101100452003 Caenorhabditis elegans ape-1 gene Proteins 0.000 description 30
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 15
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 13
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 9
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 9
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 9
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 6
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 5
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 4
- 201000011519 neuroendocrine tumor Diseases 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- QWYZFXLSWMXLDM-UHFFFAOYSA-M pinacyanol iodide Chemical group [I-].C1=CC2=CC=CC=C2N(CC)C1=CC=CC1=CC=C(C=CC=C2)C2=[N+]1CC QWYZFXLSWMXLDM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N anthracene Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C21 MWPLVEDNUUSJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC=NC2=C1 IOJUPLGTWVMSFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- -1 for example Chemical class 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 2
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000002165 photosensitisation Effects 0.000 description 2
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 description 1
- HIYWOHBEPVGIQN-UHFFFAOYSA-N 1h-benzo[g]indole Chemical compound C1=CC=CC2=C(NC=C3)C3=CC=C21 HIYWOHBEPVGIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013585 Bombesin Human genes 0.000 description 1
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 description 1
- XMWRBQBLMFGWIX-UHFFFAOYSA-N C60 fullerene Chemical class C12=C3C(C4=C56)=C7C8=C5C5=C9C%10=C6C6=C4C1=C1C4=C6C6=C%10C%10=C9C9=C%11C5=C8C5=C8C7=C3C3=C7C2=C1C1=C2C4=C6C4=C%10C6=C9C9=C%11C5=C5C8=C3C3=C7C1=C1C2=C4C6=C2C9=C5C3=C12 XMWRBQBLMFGWIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGOSWYKAUGNTMU-UHFFFAOYSA-N Cl.NCCC1=CC=C(CS(F)(=O)=O)C=C1 Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(CS(F)(=O)=O)C=C1 JGOSWYKAUGNTMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N aebsf Chemical compound NCCC1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 MGSKVZWGBWPBTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 150000004036 bacteriochlorins Chemical class 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000004035 chlorins Chemical class 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229910003472 fullerene Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N hypericin Chemical compound C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(C)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940005608 hypericin Drugs 0.000 description 1
- PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N hypericin Natural products Cc1cc(O)c2c3C(=O)C(=Cc4c(O)c5c(O)cc(O)c6c7C(=O)C(=Cc8c(C)c1c2c(c78)c(c34)c56)O)O PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine group Chemical group N1=CCC2=CC=CC=C12 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 150000002678 macrocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical group C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000164 protein isolation Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N pseudohypericin Natural products C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(O)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B23/00—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes
- C09B23/02—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups
- C09B23/06—Methine or polymethine dyes, e.g. cyanine dyes the polymethine chain containing an odd number of >CH- or >C[alkyl]- groups three >CH- groups, e.g. carbocyanines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, в частности к созданию фотосенсибилизаторов для фотодинамической терапии онкологических заболеваний, и может быть использовано для разработки новых препаратов, обладающих высокой селективностью и эффективностью терапевтического воздействия. В качестве нового фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии опухолей предложен нековалентный комплекс, включающий карбоцианиновый краситель 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианина] перхлорат и средство адресной доставки препарата в опухоль, представляющее собой ренатурированный ступенчатым диализом химерный рекомбинантный белок АрЕ1, характеризующийся аминокислотной последовательностью рецептор-связывающего домена альфа-фетопротеина человека с присоединенным к С-концу фрагментом, состоящим из последовательности, включающей 22 остатка глутаминовой кислоты и аффинную метку 6His-таг. Комплекс характеризуется высоким выходом активного триплетного состояния при фотовозбуждении, растворимостью в водных средах и устойчивостью в присутствии сывороточного альбумина человека. 2 табл., 4 ил.
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины, в частности к созданию фотосенсибилизаторов (ФС) для фотодинамической терапии (ФДТ) онкологических заболеваний, и может быть использовано для разработки новых препаратов, обладающих высокой селективностью и эффективностью терапевтического воздействия.
Фотодинамическая терапия представляет собой метод терапии опухолей, основанный на одновременном использовании двух факторов, совместно вызывающих уничтожение раковых клеток: введения фотосенсибилизатора и локального облучения светом определенной длины волны видимого или ИК-диапазона. Поскольку непосредственной причиной смертельного повреждения опухолевой клетки являются активные (синглетные) формы кислорода, эффективность ФДТ напрямую зависит от наличия и концентрации кислорода в опухолевой ткани.
Процедура ФДТ выполняется в виде двух последовательных этапов: на первом этапе внутривенно или местно вводится фотосенсибилизатор, который за счет пассивного биораспределения или энергозависимого транспорта избирательно накапливается в опухоли; на втором этапе проводится облучение источником света с длиной волны, максимально соответствующей спектру поглощения ФС. Эффективный ФС должен хорошо растворяться в водной среде и интенсивно поглощать свет в так называемом фототерапевтическом окне - в области наибольшей спектральной прозрачности тканей (650-850 нм), передавая поглощенную световую энергию на кислород, который в результате переходит в триплетное возбужденное состояние, окисляет биомолекулы и вызывает гибель клеток. Возможен также альтернативный путь генерации активной формы кислорода - супероксиданион-радикала, за счет прямой передачи электрона с триплетного состояния красителя на молекулярный кислород.
При любой из описанных схем эффективный ФС должен давать максимальный выход триплетного возбужденного состояния при фотовозбуждении за счет перехода из первичного короткоживущего синглетного состояния. Красители, не способные переходить в триплетное состояние, рассеивают поглощенную энергию в виде тепловых колебаний и не пригодны для использования в качестве ФС, хотя они могут обладать при этом высоким квантовым выходом флуоресценции [Schaberle F.A. et al., Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2009, 72(4), 863-867]. Предсказать способность красителя переходить в триплетное состояние на основании известного строения молекулы невозможно.
В качестве фотосенсибилизаторов для применения в ФДТ предложено множество препаратов, относящихся к разным классам химических соединений, например фуллерены [Li Q. et al., Nanosci. Nanotechnol. 2016, 16(6): 5592-5597; Yu C. et al. J. Nanosci. Nanotechnol. 2016, 16(1): 171-181], цианины [Shi C. et al., J. Biomed Opt. 2016, 21(5): 50901], гиперицин [Huntosova V. & Stroffekova K. Cancers (Basel) 2016, 8(10), pii: E93], неорганические композиции со свойствами полупроводников (квантовые точки) [Colombeau L. et al., Top Curr. Chem. 2016, 370, 113-134]. Однако в настоящее время в практике ФДТ наиболее широко применяют ФС, в состав которых входят тетрапиррольные макроциклы, в частности порфирины, хлорины, бактериохлорины, фталоцианины. Красители, как правило, используют в форме комплексов с белком-носителем, способствующим повышению биодоступности, специфичности и эффективности терапевтического воздействия препаратов. Один из известных подходов связан с использованием в качестве белка-носителя сывороточного альбумина, который образует с гидрофобными молекулами противоопухолевых агентов растворимые в плазме крови прочные комплексы, обладающие высокой тропностью к опухолям вследствие высокого уровня катаболической активности опухолевых клеток по сравнению с собственными клетками организма. [Mishra P.P. et al., J. Phys. Chem. B. 2006, 110, 21238]. Так, например, в патенте США [US 9211283 В2, опубл. 15.12.2015] описана система, основанная на доставке в опухоль гидрофобного тетрапиррольного фотосенсибилизатора в форме наночастиц, включающих ФС-препарат, стабилизированный человеческим сывороточным альбумином (ЧСА). В публикации [WO 2012006780 А1, опубл. 2012] описан ФС, представляющий собой комплекс фталоцианина с сывороточным альбумином. Использование сывороточного альбумина в композициях с ФС позволяет стабилизировать плохо растворимые в водной среде соединения, а также повысить эффективность их накопления в опухоли, однако при этом не обеспечивается необходимая селективность доставки ФС в опухоль, поскольку ЧСА поглощается не только опухолями, но и здоровыми тканями, хотя и с меньшей, по сравнению с опухолью, скоростью.
Анализ уровня техники показывает, что такой класс фотохимически активных соединений, как карбоцианиновые красители, до сих пор не нашел практического применения в фотодинамической терапии опухолей. В качестве прототипа нами взят практически единственный, известный препарат для диагностики и фотодинамической терапии нейроэндокринных опухолей, содержащий карбоцианиновый краситель, описанный в группе патентов [US 7510700 В2, опубл. 31.03.2009, US 7252815 В2, опубл. 07.08.2007 и др.]. Согласно прототипу опухолеспецифичный фототерапевтический и фотодиагностический препарат представляет собой ковалентный комплекс (биоконъюгат), включающий три различающихся функционально компонента: в качестве визуализирующего компонента он содержит бензиндольный карбоцианиновый краситель, в структуре молекулы которого имеются химически активные электрофильные группы, позволяющие ковалентно присоединять молекулу фотосенсибилизатора для ФДТ и сайт-специфичные средства адресной доставки препарата в опухоль. Следует отметить, что входящий в состав комплекса карбоцианиновый краситель по замыслу авторов предназначен для ковалентной сшивки компонентов между собой, а также для визуализации опухолевого процесса в диагностических исследованиях. Способность карбоцианинового красителя выполнять функцию фотосенсибилизирующего агента авторами не рассматривается. ФС-активность комплекса обеспечивается присутствием в его составе классического фотосенсибилизатора тетрапиррольного типа 2-[1-гексилоксиэтил]-2-дивинилпирофеофорбид-α (НРРН). В качестве средства адресной доставки препарата в опухоль прототип включает синтетический полипептид октреотид или бомбезин - аналоги соматостатина, обладающего сродством к поверхностным рецепторам нейроэндокринных опухолей. Несмотря на то что авторам удалось получить приемлемый выход предложенного ими трехкомпонентного конъюгата, очевидно, что использование в структуре препарата одновременно трех сложных компонентов, включая 8-10-членные пептиды, получаемые твердофазным синтезом, выводит себестоимость его получения на уровень, в десятки раз превышающий затраты на получение любого традиционного ФС тетрапиррольного или фталоцианинового типа. Для синтеза биоконъюгата необходимо получать промежуточные активированные формы компонентов путем введения изотиоцинатной или сукцинимидной групп, необходимых для ковалентной сшивки. Это не только усложняет и удорожает синтез, но и приводит к возникновению небиогенных ковалентных связей в месте сочленения пептида с активированным красителем, что неизбежно повышает побочную токсичность фотосенсибилизатора. К недостаткам этого технического решения также следует отнести высокое сродство НРРН к сывороточному альбумину, которое, как известно, характерно для соединений этого класса. Концентрация альбумина в плазме крови на несколько порядков превышает концентрацию рецепторов опухолеспецифичных пептидов на поверхности клеток нейроэндокринных желез и опухолевых тканей, образующихся при их злокачественном перерождении. Из-за этого практически весь конъюгат при попадании в кровь окажется связанным альбумином, эффективно поглощаемым различными типами нормальных клеток организма человека. В результате специфичность доставки препарата в опухоль на практике будет мало отличаться от специфичности мономерного НРРН, несмотря на существенно более высокую стоимость конъюгата по сравнению с мономерным красителем. Недостатком аналога также является узкий спектр терапевтической активности, ограниченный опухолями нейроэндокринной природы, составляющими около 0,1% от встречающихся на практике онкологических заболеваний [Rose D.B. et al., J. Med. Econ. 2016, 16, 1-19].
Техническая проблема, решение которой обеспечивается данным изобретением - расширение арсенала средств для фотодинамической терапии опухолей за счет введения в практику нового фотосенсибилизатора на основе красителя карбоцианиновой группы.
Сущность изобретения состоит в том, что новый фотосенсибилизатор для фотодинамической терапии опухолей представляет собой комплекс, включающий карбоцианиновый краситель и средство адресной доставки препарата в опухоль, отличающийся тем, что в качестве карбоцианинового красителя комплекс включает 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианина] перхлорат, в качества средства адресной доставки препарата в опухоль комплекс включает ренатурированный ступенчатым диализом рекомбинантный белок АрЕ1, характеризующийся аминокислотной последовательностью рецептор-связывающего домена 3 альфа-фетопротеина человека rhAFP3d с присоединенным к С-концу фрагментом, состоящим из последовательности, включающей 22 остатка глутаминовой кислоты и аффинную метку 6His-таг, при этом комплекс образован за счет нековалентных межмолекулярных взаимодействий между названным карбоцианиновым красителем и названным средством адресной доставки препарата в опухоль.
Соединение 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианина] перхлорат (далее - БКЦ) имеет молекулярную массу 718 г/моль и относится к бискарбоцианиновым полиметиновым красителям. Строение молекулы БКЦ и спектр поглощения в 96% этаноле показаны на Фиг. 1. Молекула БКЦ обладает симметричной структурой, включает хромофоры индоленинового и бензтиазольного типа, сопряженные друг с другом через цепочку метановых групп, и несет два положительных заряда при физиологических значениях рН. БКЦ мало растворим в воде, хорошо растворим в полярных органических растворителях, например 96% этаноле и диметалсульфоксиде (ДМСО). Получение БКЦ описано в работе [Киприанов А.И. и Мушкало И.Л., Журн. Орг. Хим., 1965, 1(4), 744-750]. Известно применение этого соединения в качестве фотосенсибилизатора галогенидов серебра, применяемых в цветной фотографии [Дядюша Е.Е. и соавт., Журн. Научн. Прикл. Фотограф. Кинематограф., 1981, 26, 174].
Проведенные авторами исследования фотохимических свойств красителя БКЦ показали, что при прямом фотовозбуждении раствора красителя БКЦ в этаноле образуется короткоживущий интермедиат триплетной природы с максимумом поглощения при 640 нм, который эффективно тушится кислородом. При концентрации кислорода в этиловом спирте 2×10-3 М это приводит к сокращению времени жизни триплета до 1 мкс. Прямое доказательство способности БКЦ переходить в триплетное состояние получено в экспериментах по Т-Т переносу энергии от донора (антрацен) на молекулу БКЦ при УФ-фотовозбуждении, в которых наблюдалось сенсибилизированное заселение триплетного уровня молекулы красителя с одновременным тушением триплета донора. Эти результаты доказывают, что в гидрофобном окружении молекула БКЦ приобретает способность переходить в триплетное состояние, что является необходимой предпосылкой для возможности использования БКЦ в качестве фотосенсибилизатора. Аналогичные процессы имеют место и при образовании нековалентного комплекса молекулы красителя с белком, что, как будет показано ниже, проявляется в повышении квантового выхода флуоресценции и непосредственно связанного с ним выхода триплетного возбужденного состояния [Schaberle F.A. et al. Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2009, 72(4), 863-867].
Выбор соединения 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианина] перхлорат в качестве потенциального ФС основан также на результатах, описанных в работе [Murakami L.S. et al. Biochim. Biophys. Acta. 2015, 1850(6), 1150-1157], в которой показано, что в среде культивирования опухолевых клеток меланомы in vitro вещество накапливается в них и вызывает их фотоиндуцированную гибель. После инкубирования в течение 5 часов препарата в концентрации 5 мкМ с клетками меланомы в среде, содержащей около 100 мкМ сывороточного альбумина в составе добавленной в нее фетальной сыворотки, и последующего облучения светом с длиной волны 500 нм, фотоиндуцированная гибель клеток составляет 100%. В качестве биологической особенности соединения показана его тропность к митохондриям клеток и его способность накапливаться в перинуклеарном пространстве. В совокупности эти факты показывают принципиальную возможность применения данного соединения в качестве фотосенсибилизатора для разрушения раковых клеток, однако для реализации этой возможности - создания эффективного фотосенсибилизирующего средства для практического применения в ФДТ, требуется преодолеть следующие ограничения:
- растворимость соединения в водных средах составляет менее 1 мкМ, что недостаточно для использования его в свободном виде, поскольку для достижения терапевтического эффекта потребуются высокие дозы препарата;
- соединение показывает незначительный квантовый выход триплетного состояния в водных средах, что определяет его неприемлемо низкую для практического применения фотосенсибилизирующую способность в свободном состоянии;
- необходимо обеспечить специфичность действия препарата in vivo путем адресной доставки соединения в опухолевую ткань.
В отличие от используемых в настоящее время в практике ФДТ фталоцианинов, имеющих четыре циклически расположенные индолениновые группировки, и полностью аналогичных по своим фотохимическим характеристикам тетрапирролам структура карбоцианинов, и БКЦ в частности, характеризуется линейным расположением полиметиновых цепей, соединяющих гетероароматические хромофорные группы. В водной среде полиметиновая цепь чрезвычайно подвижна и не обеспечивает сопряжения хромофоров, необходимого для достижения высокого квантового выхода флуоресценции, и линейно зависящего от него, выхода триплетного состояния (если оно возможно для конкретной структуры). Кроме того, в водных средах из-за высокой гидрофобности происходит димеризация, увеличивающая число степеней свободы тепловых колебаний молекулы красителя и снижающая тем самым квантовый выход флуоресценции и выход триплетного состояния. В окружении растворителей, менее полярных, чем вода, например в этаноле, ДМСО, глицерине, происходит фиксация полиметиновой цепи и разрушение димеров, что приводит к резкому увеличению квантового выхода флуоресценции и триплетного состояния [Schaberle F.A. et al. Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2009, 72(4), 863-867].
В Табл. 1 приведены данные по растворимости и квантовому выходу флуоресценции ϕфл 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианин] перхлората в различных средах. Значения ϕфл определены, как описано в работе [Schaberle F.A. et al. Spectrochim. Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2009, 72(4), 863-867].
Эти данные показывают, что практическое применение БКЦ в свободной форме в качестве фотосенсибилизирующего средства для ФДТ невозможно, поскольку в организме в водной среде он не будет обеспечивать необходимого уровня фотоактивности.
Общеизвестный подход к повышению эффективности и специфичности противоопухолевых средств основан на получении ковалентных комплексов путем химической сшивки молекул действующего вещества с активированными молекулами белков-носителей, обеспечивающих векторную доставку препарата в опухоль. Примером такого подхода для получения фотосенсибилизатора для ФДТ является техническое решение, рассмотренное выше в качестве прототипа. В отличие от прототипа в настоящем изобретении проблема перевода потенциально эффективного в качестве ФС соединения в пригодную для практического применения форму решена путем получения нековалентного комплекса типа «гость - хозяин», в котором молекула красителя образует комплекс с белком-носителем за счет межмолекулярных нековалентных взаимодействий. Наряду с гидрофобными взаимодействиями между молекулой красителя и участком молекулы белка, характеризующимся наличием «гидрофобного кармана», прочность нековалентного комплекса дополнительно обусловлена кулоновским взаимодействием между противоположно заряженными участками молекул красителя и белка.
В качестве белка-носителя взят химерный рекомбинантный белок АрЕ1 (молекулярная масса около 30 кДа), характеризующийся аминокислотной последовательностью рецептор-связывающего домена 3 альфа-фетопротеина (АФП) человека rhAFP3d с присоединенной к С-концу искусственной последовательностью, включающей 22 тандемно расположенных остатка глутаминовой кислоты и аффинную метку 6His-таг. Получение, свойства и аминокислотная последовательность белка АрЕ1, показанная на Фиг. 2, описаны в работе [Pozdniakova N.V. et al., J. Biomed. Biotechnol, 2012, art. ID 469756, 5 pages doi:10.1155/2012/469756]. По данным авторов, белок ApE1, аналогично рецептор-связывающему домену 3 альфа-фетопротеина человека, эффективно связывается рецепторами АФП опухолевых клеток. Наличие в молекуле белка аффинной метки 6His-таг облегчает его очистку металло-хелатной хроматографией, позволяющей получить белок высокой степени очистки, пригодной для парентерального применения. Последовательность из 22 тандемно расположенных остатков глутаминовой кислоты, сообщающая структуре мощный отрицательный заряд, способствует улучшению выхода ренатурации ApE1 in vitro, препятствуя межмолекулярной агрегации. Последовательность альфа-фетопротеина человека, включающая аминокислотные остатки с 404 по 609 полноразмерного белка, депонирована в базе данных NCBI Gene Bank Protein под названием rhAFP.
Белок получают с помощью процедуры ренатурации in vitro телец включения, образующихся в клетках рекомбинантного штамма Е. coli, получаемого путем введения плазмиды pAFP28D3PolyGlu [Pozdniakova N.V. et al., J. Biomed. Biotechnol, 2012, art. ID 469756, 5 pages doi:10.1155/2012/469756] в коммерчески доступный штамм-хозяин BL21 (DE3).
Сведений об использовании белка ApE1 для получения нековалентных комплексов с фотоактивными соединениями карбоцианиновой группы в уровне техники нами не обнаружено.
Нами показано, что при взаимодействии карбоцианинового красителя 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианин] перхлората, растворенного в ДМСО, с водным раствором белка ApE1 образуется растворимый в воде комплекс, характеризующийся резким, 100-кратным по сравнению со свободным красителем, повышением квантового выхода флуоресценции и триплетного состояния. Образующийся комплекс имеет нековалентную природу, т.к. формируется за счет нековалентного связывания гидрофобной молекулы красителя в «гидрофобном кармане», который имеется в структуре белка ApE1, подобно области гидрофобного связывания в молекуле АФП. Дополнительным комплексообразующим фактором может являться кулоновское взаимодействие между отрицательно заряженными остатками Glu и положительно заряженными молекулами красителя. Связывание молекулы красителя белком сопровождается разрушением димеров, существующих в водном окружении, и фиксацией полиметиновой цепи. В совокупности, как и в случае попадания в среду органического растворителя, это приводит к эффективному сопряжению хромофорных циклов в молекуле и, как следствие, к резкому возрастанию квантового выхода флуоресценции и повышению выхода триплетного возбужденного состояния.
Перечень графических изображений, иллюстрирующих изобретения, приведен ниже
Фиг. 1. Строение молекулы красителя 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианин] перхлората (БКЦ) и спектр его поглощения в 96% этаноле (концентрация 12 мкМ).
Фиг. 2. Аминокислотная последовательность белка ApE1 [Pozdniakova N.V. et al., J. Biomed. Biotechnol, 2012, art. ID 469756, 5 pages doi:10.1155/2012/469756].
Фиг. 3. Электрофореграммы фракций клеточного лизата штамма Е. coli В121 (DE3), полученные в ходе препаративной очистки белка ApE1 (диск-электрофорез в 12,5% денатурирующем полиакриламидном геле, окрашенном R-250):
1 - стандарты молекулярных масс (14,4-18,4-25,0-35,0-45,0-66,2-116,0 кДа);
2 - биомасса продуцента до индукции;
3 - биомасса продуцента после индукции;
4 - осветленный лизат перед нанесением на ионообменную смолу;
5 - фракция не связавшихся с ионообменной смолой примесей;
6 - элюат после ионообменной хроматографии;
7 - фракция примесей, не связавшихся с Ni-NTA сефарозой;
8 - элюат после металло-хелатной хроматографии.
Дорожки 2 и 3 нормализованы по оптической плотности биомассы при 600 нм, дорожки 4-8 нормализованы по суммарной концентрации белка, определенной модифицированным методом Лоури с бицинхониновой кислотой.
Фиг. 4. Зависимость доли красителя БКЦ, связанного с белком (θ), от концентрации белка в буферном растворе:
Кривая 1 соответствует комплексу БКЦ с ApE1;
Кривая 2 соответствует комплексу БКЦ с ЧСА.
Изобретение осуществляют следующим образом.
Получение белка ApE1
Получение биомассы рекомбинантного штамма Е. coli BL-21 (DE3), содержащего плазмиду pAFP28D3PolyGlu.
Базовым штаммом для получения белка ApE1 является штамм Е. coli BL-21 (DE3) (New England Biolabs, кат. № C2527). Для получения штамма-продуцента перед каждой препаративной процедурой проводят трансформацию, вводя в базовый штамм BL21 (DE3) коллекционную ДНК плазмиды pAFP28D3PolyGlu. Трансформанты отбирают на агаризованной селективной среде с добавлением 50 мкг/мл канамицина. Колонию трансформанта возрастом не более 24 часов с момента засева чашки после трансформации засевают микробиологической петлей в пробирку с 3 мл среды LB с добавлением 50 мкг/мл канамицина и выращивают в течение 12-16 часов при 37°С при интенсивной аэрации. Выросшую культуру немедленно используют в качестве посевного материала, пересевая ее в теплую питательную среду из расчета 5 мл культуры на 1 литр среды.
Биомассу рекомбинантного штамма получают культивированием в течение 24 часов при комнатной температуре на барботажной установке на среде ZYP5052 состава: триптон 10 г/л; дрожжевой экстракт 5 г/л; добавка 5052 (50×) - глицерин 250 г/л, D-глюкоза 25 г/л, лактоза 100 г/л; добавка NPS (20×) - (NH4)2SO4 66 г/л, KH2PO4 136 г/л, Na2HPO4 142 г/л; MgSO4 1 мМ; раствор смеси микроэлементов; тиамин 2 мкг/мл; канамицин 50 мкг/мл. Внесения индуктора экспрессии не требуется, так как активация синтеза целевого белка в данной системе происходит автоматически при переходе на утилизацию лактозы, как основного источника углерода. После наращивания биомассу собирают центрифугированием и хранят при -20°С.
Для детекции целевого белка в биомассе отбирают образцы для электрофореза в полиакриламидном геле через 3 часа после пересева. Результаты показаны на Фиг. 3: дорожка 2 - до индукции, дорожка 3 - после индукции,
Гомогенизация биомассы
Биомассу (10 мл влажного осадка) лизируют в 50 мл буфера, содержащего 20 мМ Трис-HCl (рН 7,4), 2 мМ AEBSF (4-(2-аминоэтил)бензилсульфонилфторида гидрохлорид), 1 мМ ЭДТА, 0,5 мг/мл лизоцима в течение 1,5 часов при комнатной температуре. Разрушение клеток проводят ультразвуком на ледяной бане при мощности воздействия 350 W в режиме 10 с, 14 раз. Далее лизат замораживают и через сутки повторяют процедуру. Полученный лизат осветляют центрифугированием для освобождения от клеточного дебриса и добавляют навеску мочевины до конечной концентрации 8 М и β-меркаптоэтанол до конечной концентрации 50 мМ, после чего инкубируют 30 мин в денатурирующих условиях при комнатной температуре. После окончания инкубации лизат осветляют центрифугированием, отбирают супернатант и используют его для дальнейшей очистки.
Выделение и очистка белка
Очистку проводят методом ионообменной хроматографии (этап 1), а затем методом металло-хелатной хроматографии (этап 2). Ионообменную хроматографию проводят на колонке со смолой DEAE-сефароза CL-6B (35 мл). Колонку уравновешивают буфером, содержащим 20 мМ Трис-HCl (рН 9,0), 8 М мочевину, 50 мМ β-меркаптоэтанол, 0.1 М NaCl. На колонку наносят 75 мл осветленного лизата при комнатной температуре в течение 1 часа. Колонку промывают 250 мл буфера [20 мМ Трис-HCl 9,0, 8 М мочевина, 50 мМ β-меркаптоэтанол, 0,1 М NaCl], после чего элюируют целевой белок буфером [20 мМ Трис-HCl, рН 9,0, 8 М мочевина, 50 мМ β-меркаптоэтанол, 0,5 М NaCl] (60 мл). Металло-хелатную хроматографию проводят с использованием смолы Ni-NTA Sepharose-FF. Колонку уравновешивают буфером, содержащим 20 мМ Трис-HCl (рН 9,0), 8 М мочевину, 50 мМ β-меркаптоэтанол и 10 мМ имидазол. Элюат (60 мл), полученный на этапе 1, наносят на смолу при комнатной температуре в течение 40 минут. Колонку промывают 250 мл буфера (20 мМ Трис-HCl (рН 9,0), 8 М мочевина, 50 мМ β-меркаптоэтанол, 10 мМ имидазол и 0,3 М NaCl). Элюцию проводят 50 мл буфера (20 мМ Трис-HCl (рН 9,0), 8 М мочевина, 50 мМ β-меркаптоэтанол и 0,5 М имидазол), собирают элюат (общий объем 30 мл).
Ренатурация белка
Ренатурацию белка проводят ступенчатым диализом:
1) элюат, полученный на этапе 2 очистки, диализуют против буфера, содержащего 20 мМ Трис-HCl (рН 9,0), 10 мМ β-меркаптоэтанол, в течение 4 часов при комнатной температуре и в течение 12 часов продолжают диализ против того же буфера при +4°С;
2) проводят диализ против буфера состава: (20 мМ Трис-HCl (рН 8,5), 5 мМ β-меркаптоэтанол) в течение 12 часов при +4°С;
3) проводят диализ против фосфатно-солевого буфера (137 мМ NaCl; 2,7 мМ KCl; 4,3 мМ Na2HPO4; 1,47 мМ KH2PO4) рН 8,0 в течение 24 часов при +4°С;
4) проводят диализ против фосфатно-солевого буфера (137 мМ NaCl; 2,7 мМ KCl; 4,3 мМ Na2HPO4; 1,47 мМ KH2PO4) рН 7,4 в течение 24 часов при +4°С.
Полученный раствор белка с соблюдением требований асептики подвергают стерилизующей фильтрации через мембранные фильтры с диаметром пор 0,22 нм, отбирают аликвоту для анализа и хранят в криопробирках до использования в течение 6 месяцев при температуре минус 20°С. Полноту ренатурации оценивают по исчезновению свободных сульфгидрильных групп в растворе белка, исходя из того, что в нативном состоянии ApE1 содержит 6 дисульфидных связей [Ellman G.L., Arch. Biochem. Biophys., 1959, 82(1), 70-77].
На Фиг. 3 показаны электрофореграммы фракций клеточного лизата, полученные в ходе препаративной очистки белка ApE1 (диск-электрофорез в 12,5% денатурирующем полиакриламидном геле, окрашенном R-250). Концентрацию белка в каждой фракции определяют с помощью модифицированного метода Лоури с использованием бицинхониновой кислоты (Sigma-Aldrich, USA) и бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта согласно [Smith Р.K. et al., Anal Biochem. 1985, 150(1), 76-85]. Количество целевого белка ApE1 на разных стадиях очистки определяют методом денситометрии (Gel Analyzer 2010а) после электрофореза в 12,5% денатурирующем полиакриламидном геле, используя для калибровки стандартные растворы бычьего сывороточного альбумина. Выход целевого белка определяют как отношение доли целевого белка к общему белку отдельно в водорастворимой и водонерастворимой фракциях клеточного лизата. Содержание белка ApE1 в исходной культуре в разных экспериментах составляет 55-60 мг/на литр, выход очищенного целевого белка в пересчете на литр исходной культуры в среднем составляет около 35 мг. Таким образом, ренатурация белка с использованием описанной процедуры ступенчатого диализа позволяет получить выход белка, достигающий 65% от его исходного содержания в биомассе, что существенно превышает показатели выхода продукта, описанные в работе [Pozdniakova N.V. et al., J. Biomed. Biotechnol, 2012, art. ID 469756, 5 pages doi:10.1155/2012/469756].
Краситель БКЦ получен, как описано в работе [Киприанов А.И. и Мушкало И.Л. Журн. Орг. Хим., 1965, 1(4), 744-750].
Нековалентный комплекс красителя с белком-носителем получают простым смешением растворов БКЦ в ДМСО и ApE1 в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) (0,2 М фосфат натрия, рН 7,4, 0,3 М NaCl) в требуемом соотношении. Подбор концентраций растворов белка и красителя осуществляют, исходя из требования обеспечения максимального выхода триплетного состояния при минимальном содержании свободного красителя в растворе.
Для выяснения оптимального количественного соотношения компонентов проведено исследование зависимости квантового выхода флуоресценции образующегося комплекса от концентрации раствора белка при постоянной концентрации раствора красителя.
Для приготовления базового (стокового) раствора красителя 5 мг сухого БКЦ растворяют в 1 мл тщательно осушенного ДМСО квалификации «для спектроскопии» при комнатной температуре. Истинная концентрация стокового раствора, определенная по спектру поглощения (см. Фиг. 1) с использованием величины коэффициента экстинкции 1,1×105 M-1см-1 при 590 нм [Борисевич Ю.Е. и соавт., Доклады Акад. Наук СССР, 1976, 228(2), 375], равна 10 мМ. Стоковый раствор красителя хранят при -20°С в темноте не более 3 месяцев.
К аликвотам стокового раствора красителя объемом 800 мкл при комнатной температуре прибавляют растворы белка ApE1 в ФСБ с концентрацией от 0,1 до 12,8 мкМ. Объем доводят до 1000 мкл добавлением ФСБ, перемешивают в темноте в течение 20 мин, после чего немедленно используют для измерений. Определение квантового выхода флуоресценции ϕфл. проводят на флуориметре Panorama при длине волны возбуждающего света 514 нм с шагом сканирования 2 нм в диапазоне длин волн от 500 до 750 нм. Содержание ДМСО в образцах около 0,8% не оказывает существенного влияния на фотохимическую активность фотосенсибилизатора.
Было показано, что высокое значение квантового выхода флуоресценции ϕфл, напрямую коррелирующее с выходом триплетного состояния красителя, определяющего его эффективность, как потенциального фотосенсибилизатора, достигается при соотношении компонентов в смеси, близком к эквимолярному. Дальнейшее увеличение содержания белка в смеси сопровождается некоторым, относительно невысоким повышением ϕфл, однако использование высоких концентраций растворов белка экономически нецелесообразно, поскольку приведет к существенному удорожанию препарата при незначительном повышении его эффективности.
Поскольку in vivo молекулы фотосенсибилизатора находятся в окружении молекул сывороточного альбумина, содержание которого в крови составляет не менее 50 мг/мл, важное практическое значение приобретает вопрос об относительной устойчивости заявляемого нековалентного комплекса в присутствии ЧСА, конкурирующего с ApE1 за связывание с красителем. Для ответа на этот вопрос определены константы связывания К молекулы БКЦ с молекулами белков конкурентов по методу [Phillips D., Prog. Reaction Kinetics. 1997, 22 (3/4), 17]. На Фиг. 4 показаны зависимости доли красителя, связанного с белком (θ), от содержания в растворе белка при неизменной концентрации исходного раствора красителя. Кривая 1 соответствует комплексу БКЦ с ApE1, кривая 2 - комплексу БКЦ с ЧСА.
θ=K/(1+K),
где K - константа связывания комплекса. Константу связывания К рассчитывают, исходя из того, что
θ=(I-I0)/(I∞-I0),
где I0, I∞ и I - величины интенсивности флуоресценции при нулевом, полном и промежуточном насыщении красителя белком соответственно, измеренные при возбуждении светом длиной волны 514 нм. [Phillips D., Prog. Reaction Kinetics. 1997, 22 (3/4), 17]. Величину I∞ находят экстраполяцией экспериментальных значений к предельному значению при высоких концентрациях белка. Из полученных данных константы связывания К рассчитывают с помощью программного обеспечения GraphPadPrizm 6.0.
Полученные величины констант связывания комплексов БКЦ с ApE1 и с ЧСА сопоставлены в Табл. 2.
Как видно из таблицы, константа связывания красителя БКЦ с белком ApE1 более чем втрое превышает константу связывания красителя с человеческим сывороточным альбумином, что говорит о значительно более высокой прочности заявляемого комплекса по сравнению с комплексом с ЧСА. В составе заявляемого нековалентного комплекса БКЦ с белком-носителем ApE1 молекула красителя, локализованная в «гидрофобном кармане» белка-носителя, защищена от возможности связывания с сыворточным альбумином. Этот факт имеет важное практическое следствие, которое состоит в том, что при введении заявляемого препарата в кровоток in vivo он будет сохранять стабильность в присутствии большого количества сывороточного альбумина, концентрация которого в плазме крови достигает 50 мг/мл. Благодаря способности молекул ApE1 специфически связываться с клетками опухоли, обеспечивается специфичность и адресность доставки фотосенсибилизатора в опухолевую ткань. В результате препарат способен избирательно поглощаться клетками опухоли, а его проникновение в клетки здоровых тканей, имеющих высокое сродство к альбумину, минимизировано.
Изменение квантового выхода ϕфл красителя при образовании комплекса (см. Табл. 2) оценивают величиной отношения интенсивности флуоресценции БКЦ в смеси с белком-носителем к интенсивности флуоресценции свободного красителя в буфере в отсутствие белка при одинаковой интенсивности возбуждающего излучения. Как видно из таблицы, образование нековалентного комплекса БКЦ с белком-носителем ApE1 сопровождается 100-кратным повышением квантового выхода флуоресценции красителя. Для комплекса БКЦ с сывороточным альбумином эта величина почти на 30% ниже. Высокий квантовый выход активного состояния красителя в составе комплекса позволяет снижать терапевтические дозировки фотосенсибилизатора и, как следствие, уменьшать его неспецифическую фотоиндуцированную активность в отношении нормальных клеток и внеклеточных структур организма.
Кинетику флуоресценции красителя в свободном виде и в составе комплекса с белком исследовали, как описано в работе [Phillips D., Prog. Reaction Kinetics. 1997, 22 (3/4), 17]. Время жизни флуоресценции образцов τ1 и τ2 регистрируют на флуориметре FluoTime 300 (PicoQuantGmbH, Германия) с временным разрешением с функцией счета одиночных фотонов. Флуоресценцию возбуждают импульсным лазерным источником с длиной волны 510 нм и частотой импульсов 20 МГц. Сигнал регистрируют на длине волны 640 нм с разрешением 4 пс и накоплением до 10000 индивидуальных событий. Полученные данные обрабатывают с помощью программного обеспечения FluoFit (PicoQuantGmbH, Германия). Данные по динамике затухания флуоресценции, характеризуемой временами жизни флуоресценции τ1 и τ2 (см. Табл. 2), свидетельствуют о существовании двух альтернативных сайтов связывания красителя в молекуле ApE1. Аналогичный результат показывают и данные по временам жизни комплекса красителя с ЧСА. Однако если сайты связывания с более длительным временем жизни активированного состояния в молекулах обоих белков сходны по фотохимическим свойствам комплекса с красителем, то сайты с более коротким временем жизни существенно различны. Это говорит о том, что более высокая устойчивость заявленного комплекса по сравнению с комплексом красителя с ЧСА, по-видимому, достигается за счет высокоаффинного сайта связывания молекулы красителя с белком, тогда как структура низкоаффинного сайта обоих белков оказывается сходной. Вывод о наличии двух различных центров связывания молекулы красителя с белками подтверждается тем, что нарастание флуоресценции комплексов БКЦ с ApE1 и с ЧСА продолжается с разной скоростью при увеличении количества белка в растворе по отношению к содержанию красителя сверх эквимолярного.
Таким образом, приведенные выше результаты показывают, что заявляемый нековалентный комплекс красителя БКЦ с белком-носителем ApE1 обладает совокупностью свойств, позволяющих рассматривать его в качестве нового перспективного фотосенсибилизатора для фотодинамической терапии опухолей:
1. Хорошая растворимость в воде, приближающаяся к растворимости в водных растворах белка-носителя (около 1 мМ), позволяет использовать его для парентерального введения.
2. Достижение высокого выхода триплетного состояния обеспечивает высокую фотосенсибилизирующую и противоопухолевую активность препарата.
3. Обеспечение целенаправленного транспорта фотосенсибилизатора в опухоль за счет сродства белка-носителя ApE1 к АФП-рецепторам на поверхности опухолевых клеток.
4. Высокая специфичность фотосенсибилизатора к опухолевым клеткам в присутствии ЧСА.
5. Низкая побочная токсичность за счет высокой устойчивости комплекса в присутствии ЧСА. Дополнительным фактором, снижающим токсичность, является то, что комплекс, в отличие от известных ковалентных конъюгатов низкомолекулярных биологически активных соединений с белками, не содержит небиогенных, не свойственных живому организму связей, возникающих при химической сшивке активированных молекул белка с молекулами противоопухолевого агента. Отсутствие в составе комплекса таких связей должно способствовать иммунологической совместимости при парентеральном введении препарата в организм.
6. Можно полагать, что препарат должен обладать более широким спектром терапевтической активности в сравнении с прототипом, который позиционируется как средство для фотодинамической терапии опухолей нейроэндокринного характера, поскольку рецептор АФП присутствует на многих типах распространенных опухолей человека [Mizejewski G.J., Tumour Biol., 2013, 34(3), 1317-1336].
7. Получение комплекса не связано с дополнительными затратами труда и средств на синтез химически активированных интермедиатов, что выгодно отличает его от прототипа. Заявляемый нековалентный комплекс получают простым смешением раствора белка-носителя в физиологическом фосфатном буфере с раствором красителя в диметилсульфоксиде, при этом остаточное содержание ДМСО в итоговом растворе составляет не более 0,1%. При необходимости растворитель может быть полностью удален из препарата путем диализа или ультрафильтрации, так как устойчивость нековалентного комплекса в водной среде позволяет провести эту процедуру. Растворитель также может быть полностью удален лиофильной сушкой с получением твердой формы фотосенсибилизатора.
Учитывая лабильность комплекса на свету, о которой упоминалось выше, особенность практического применения предлагаемого фотосенсибилизатора в жидкой форме состоит в том, что заранее расфасованные, устойчивые при хранении растворы красителя и белка, содержащие требуемые количества реагентов, сливают непосредственно перед введением препарата. В случае применения сухой формы раствор фотосенсибилизатора в физиологическом буфере готовят непосредственно перед применением.
Claims (1)
- Фотосенсибилизатор для фотодинамической терапии опухолей, представляющий собой комплекс карбоцианинового красителя и средства адресной доставки препарата в опухоль, отличающийся тем, что в качестве карбоцианинового красителя комплекс включает 2,6-бис-(3,7-ди-N-метил-бенз[1,2-d:4,3-d']бистиазол-)-[N-метил-3,3'-диметил-индокарбоцианина] перхлорат, а в качества средства адресной доставки препарата в опухоль комплекс включает рекомбинантный белок, характеризующийся аминокислотной последовательностью рецептор-связывающего домена 3 альфа-фетопротеина человека с присоединенным к С-концу фрагментом, состоящим из последовательности, включающей 22 остатка глутаминовой кислоты и аффинную метку 6His-Tar, при этом комплекс образован за счет нековалентных межмолекулярных взаимодействий между названным карбоцианиновым красителем и названным средством адресной доставки препарата в опухоль.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016150835A RU2638131C1 (ru) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016150835A RU2638131C1 (ru) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2638131C1 true RU2638131C1 (ru) | 2017-12-11 |
Family
ID=60718687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016150835A RU2638131C1 (ru) | 2016-12-23 | 2016-12-23 | Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2638131C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2025092887A1 (zh) * | 2023-10-31 | 2025-05-08 | 厦门大学 | 一种探针及其在显像和治疗方面的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7510700B2 (en) * | 2001-10-17 | 2009-03-31 | Mallinckrodt Inc | Pathological tissue detection and treatment employing targeted benzoindole optical agents |
-
2016
- 2016-12-23 RU RU2016150835A patent/RU2638131C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7510700B2 (en) * | 2001-10-17 | 2009-03-31 | Mallinckrodt Inc | Pathological tissue detection and treatment employing targeted benzoindole optical agents |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Murakami L.S. et al. Photocytotoxicity of a cyanine dye with two chromophores toward melanoma and normal cells. Biochimica et Biophysica Acta. 2014. P.1-8. * |
| Murakami L.S. et al. Photocytotoxicity of a cyanine dye with two chromophores toward melanoma and normal cells. Biochimica et Biophysica Acta. 2014. P.1-8. Pozdniakova N.V. et al. New protein vector ApE1 for targeted delivery of anticancer drugs. Journal Biomedicine and Biotechnology, 2012. Р.1-5. * |
| Pozdniakova N.V. et al. New protein vector ApE1 for targeted delivery of anticancer drugs. Journal Biomedicine and Biotechnology, 2012. Р.1-5. Луговский А. А. и др. Свойства нового фотосенсибилизатора для лазерной фототерапии злокачественных новообразований. Квантовая электроника: Материалы Х Междунар. науч.-техн. конф., Минск, 2015. С.279-280. * |
| Луговский А. А. и др. Свойства нового фотосенсибилизатора для лазерной фототерапии злокачественных новообразований. Квантовая электроника: Материалы Х Междунар. науч.-техн. конф., Минск, 2015. С.279-280. Самцов М. П. и др. Флуоресцентная диагностика эффективности повреждения патологических тканей при ФДТ с фотосенсибилизатором Фотолон. VII Съезд Российского фотобиологического общества, Материалы съезда, Пущино, 2014. С.70. * |
| Самцов М. П. и др. Флуоресцентная диагностика эффективности повреждения патологических тканей при ФДТ с фотосенсибилизатором Фотолон. VII Съезд Российского фотобиологического общества, Материалы съезда, Пущино, 2014. С.70. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2025092887A1 (zh) * | 2023-10-31 | 2025-05-08 | 厦门大学 | 一种探针及其在显像和治疗方面的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ilina et al. | Squaraine dyes: molecular design for different applications and remaining challenges | |
| Huang et al. | Long wavelength single photon like driven photolysis via triplet triplet annihilation | |
| Sandland et al. | Photosensitizer antibody–drug conjugates: past, present, and future | |
| Wang et al. | Gold nanoshell-linear tetrapyrrole conjugates for near infrared-activated dual photodynamic and photothermal therapies | |
| Bisland et al. | Potentiation of chlorin e6 photodynamic activity in vitro with peptide-based intracellular vehicles | |
| Xiong et al. | Photo-controllable biochemistry: Exploiting the photocages in phototherapeutic window | |
| Qian et al. | A comparison of different photosensitizing dyes with respect to uptake C3H-tumors and tissues of mice | |
| Zheng et al. | Low-density lipoprotein reconstituted by pyropheophorbide cholesteryl oleate as target-specific photosensitizer | |
| Gravier et al. | Improvement of meta-tetra (hydroxyphenyl) chlorin-like photosensitizer selectivity with folate-based targeted delivery. Synthesis and in vivo delivery studies | |
| Bryden et al. | Regioselective and stoichiometrically controlled conjugation of photodynamic sensitizers to a HER2 targeting antibody fragment | |
| Bhatti et al. | Targeted photodynamic therapy with multiply‐loaded recombinant antibody fragments | |
| Spikes | New trends in photobiology: Chlorins as photosensitizers in biology and medicine | |
| Malacarne et al. | BODIPYs in PDT: A Journey through the Most Interesting Molecules Produced in the Last 10 Years | |
| Chen et al. | Bacteriopurpurinimides: highly stable and potent photosensitizers for photodynamic therapy | |
| Li et al. | Size-tunable targeting-triggered nanophotosensitizers based on self-assembly of a phthalocyanine–biotin conjugate for photodynamic therapy | |
| EP1189645B1 (en) | Non-covalent bioconjugates useful for diagnosis and therapy | |
| St Denis et al. | Synthesis, bioanalysis and biodistribution of photosensitizer conjugates for photodynamic therapy | |
| Karges et al. | Synthesis and Characterization of an Epidermal Growth Factor Receptor‐Selective RuII Polypyridyl–Nanobody Conjugate as a Photosensitizer for Photodynamic Therapy | |
| Yu et al. | A biotinylated and endoplasmic reticulum‐targeted glutathione‐responsive zinc (II) phthalocyanine for targeted photodynamic therapy | |
| CN104800855B (zh) | 用于光学成像和光动力治疗的肿瘤靶向融合蛋白药物载体 | |
| US7303926B2 (en) | Methods and compositions for dual phototherapy | |
| Wu et al. | Bovine serum albumin framed activatable NIR AIE photosensitizer for targeted tumor therapy | |
| US6740637B1 (en) | Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them | |
| RU2638131C1 (ru) | Фотосенсибилизатор на основе карбоцианинового красителя для фотодинамической терапии опухолей | |
| JP7191034B2 (ja) | 生体適合性モジュール式テトラジンプラットフォーム |