RU2636527C1 - Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes - Google Patents
Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes Download PDFInfo
- Publication number
- RU2636527C1 RU2636527C1 RU2016142462A RU2016142462A RU2636527C1 RU 2636527 C1 RU2636527 C1 RU 2636527C1 RU 2016142462 A RU2016142462 A RU 2016142462A RU 2016142462 A RU2016142462 A RU 2016142462A RU 2636527 C1 RU2636527 C1 RU 2636527C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- endometrial
- endometrium
- implantation window
- genes
- value
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- 238000002513 implantation Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 claims abstract description 41
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 27
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims abstract description 13
- 101000985653 Homo sapiens Homeobox protein MSX-1 Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 102100028707 Homeobox protein MSX-1 Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 101000908391 Homo sapiens Dipeptidyl peptidase 4 Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 101000866281 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DO beta chain Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 102100031546 HLA class II histocompatibility antigen, DO beta chain Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 229940090124 dipeptidyl peptidase 4 (dpp-4) inhibitors for blood glucose lowering Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000000491 multivariate analysis Methods 0.000 claims description 4
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 abstract description 2
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 12
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 9
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 9
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 7
- 206010046798 Uterine leiomyoma Diseases 0.000 description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 6
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 5
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 5
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 5
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 4
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 3
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029880 Glycodelin Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000585553 Homo sapiens Glycodelin Proteins 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002346 layers by function Substances 0.000 description 2
- 201000010260 leiomyoma Diseases 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 102000004363 Aquaporin 3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000991 Aquaporin 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100026031 Beta-glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102100033053 Glutathione peroxidase 3 Human genes 0.000 description 1
- 101000933465 Homo sapiens Beta-glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 101000871067 Homo sapiens Glutathione peroxidase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101001044094 Homo sapiens Inositol monophosphatase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001081567 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000990912 Homo sapiens Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 101001095308 Homo sapiens Periostin Proteins 0.000 description 1
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 1
- 102100021608 Inositol monophosphatase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027636 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 102100037765 Periostin Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010042573 Superovulation Diseases 0.000 description 1
- 102100031013 Transgelin Human genes 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000032692 embryo implantation Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 231100000502 fertility decrease Toxicity 0.000 description 1
- -1 for example Proteins 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000004547 gene signature Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940088592 immunologic factor Drugs 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229940077150 progesterone and estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
1. Область техники.1. Field of technology.
Изобретение относится к области медицины (в частности, репродуктивной медицины и вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), а также к области науки (в частности, молекулярной биологии и эмбриологии) и может быть использовано для определения персонального «окна имплантации» у женщин в программах экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов в полость матки.The invention relates to the field of medicine (in particular, reproductive medicine and assisted reproductive technologies (ART), as well as to the field of science (in particular, molecular biology and embryology) and can be used to determine the personal “implantation window” in women in in vitro fertilization programs and transfer of embryos into the uterine cavity.
2. Уровень техники.2. The prior art.
Функциональный слой эндометрия при воздействии стероидных гормонов циклически претерпевает процессы регенерации, секреторной трансформации и отторжения в течение менструального цикла. Цель этих физиологических изменений заключается в синхронизации процессов созревания бластоцисты и тканей эндометрия, а также обеспечении рецептивного статуса эндометрия, восприимчивого к имплантации эмбриона. Имплантация бластоцисты осуществляется в строго определенный период «окна имплантации», соответствующий 7-8 дню после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8), у женщин с 28-дневным менструальным циклом это соответствует 19-21 дню МЦ.The functional layer of the endometrium under the influence of steroid hormones cyclically undergoes the processes of regeneration, secretory transformation and rejection during the menstrual cycle. The purpose of these physiological changes is to synchronize the maturation processes of the blastocyst and endometrial tissues, as well as to ensure the receptive status of the endometrium, susceptible to implantation of the embryo. Blastocyst implantation is carried out in a strictly defined period of the “implantation window”, corresponding to 7-8 days after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8), in women with a 28-day menstrual cycle this corresponds to 19-21 days of MC.
Морфологические изменения эндометрия на протяжении менструального цикла описаны Noyes R.W. более 60 лет назад и широко используются до настоящего времени. Критерии Noyes R.W. и соавт. основаны на таких морфологических параметрах, как наличие вакуолей, отек стромы, секреция желез и др. [1, 2]. Однако точность данных критериев поставлена под сомнение в рандомизированных исследованиях [3, 4]. Поэтому в настоящее время гистологическое исследование функционального слоя эндометрия является недостаточным и должно дополняться новыми высокоинформативными методами оценки рецептивности эндометрия.Morphological changes in the endometrium during the menstrual cycle are described by Noyes R.W. more than 60 years ago and are widely used to date. Criteria Noyes R.W. et al. based on morphological parameters such as the presence of vacuoles, stromal edema, secretion of glands, etc. [1, 2]. However, the accuracy of these criteria has been called into question in randomized trials [3, 4]. Therefore, at present, histological examination of the functional layer of the endometrium is insufficient and should be supplemented by new highly informative methods for assessing the receptivity of the endometrium.
В последние годы были проведены исследования глобальных транскрипционных профилей генов при различных заболеваниях, оказывающих влияние на состояние эндометрия. Помимо этого, накоплен большой объем информации о маркерах рецептивности эндометрия и транскрипционном профиле генов в разные стадии менструального цикла.In recent years, studies have been conducted of global transcriptional gene profiles in various diseases that affect the condition of the endometrium. In addition, a large amount of information has been accumulated on endometrial receptivity markers and the transcriptional profile of genes at different stages of the menstrual cycle.
Большинство исследователей изучали транскрипционные профили в тотальной ткани эндометрия без ее разделения на отдельные компоненты. Ponnampalam А.Р. et al. первыми использовали микроматричный анализ для исследования транкрипционных сигнатур (отпечатков) генов на всех стадиях менструального цикла [5]. Они выделили 425 генов, экспрессия которых повышена хотя бы в одной фазе менструального цикла более чем в 2 раза. На основе анализа этих данных они выделили 7 групп генов, имеющих максимальные уровни экспрессии в определенную стадию менструального цикла: менструация, ранняя пролиферация, средняя пролиферация, поздняя пролиферация, ранняя секреция, средняя секреция, поздняя секреция.Most researchers studied transcriptional profiles in total endometrial tissue without dividing it into separate components. Ponnampalam A.R. et al. The first to use microarray analysis to study transcriptional signatures (fingerprints) of genes at all stages of the menstrual cycle [5]. They isolated 425 genes, the expression of which is increased in at least one phase of the menstrual cycle by more than 2 times. Based on the analysis of these data, they identified 7 groups of genes with maximum expression levels at a certain stage of the menstrual cycle: menstruation, early proliferation, medium proliferation, late proliferation, early secretion, middle secretion, late secretion.
Группа исследователей Talbi S. et al. выделили 4 кластера генов с высоким уровнем экспрессии, позволяющих дискриминировать 4 стадии: пролиферация, ранняя, средняя и поздняя секреция [6]. Помимо этого, они описали связь уровня экспрессии этих генов с их функциями и биологическими процессами, характерными для каждой из выделенных стадий.Research Team Talbi S. et al. 4 clusters of genes with a high level of expression were distinguished, which made it possible to discriminate 4 stages: proliferation, early, middle, and late secretion [6]. In addition, they described the relationship of the level of expression of these genes with their functions and biological processes characteristic of each of the selected stages.
Значительная часть публикаций посвящена сравнению глобальных транскрипционных сигнатур генов стадии «окна имплантации» с другими стадиями менструального цикла: со стадией пролиферации [7, 8, 9], ранней секреции [10, 11, 12, 13, 14, 15, 16], поздней секреции [16, 17].A significant part of the publications is devoted to comparing global transcriptional gene signatures of the “implantation window” stage with other stages of the menstrual cycle: with the proliferation stage [7, 8, 9], early secretion [10, 11, 12, 13, 14, 15, 16], late secretion [16, 17].
Помимо накопления информации об особенностях экспрессионных профилей стадии «окна имплантации», некоторые диагностические платформы уже предложены к практическому применению для определения персонального «окна имплантации» у женщин, реализующих репродуктивную функцию в программах ЭКО и ПЭ. В качестве примера можно привести тест «Endometrial Receptivity Array (ERA)», представляющий собой микрочип, содержащий 238 генов. Применение данного теста рекомендовано в естественном цикле на ЛГ+7 день менструального цикла (д.м.ц.) или цикле с применением заместительной гормональной терапии на 5-й день назначения прогестерона (18). Использование данного чипа позволило повысить частоту имплантации эмбрионов по различным оценкам на 10-20% [19].In addition to the accumulation of information about the features of the expression profiles of the “implantation window” stage, some diagnostic platforms have already been proposed for practical use for determining the personal “implantation window” in women implementing reproductive function in IVF and PE programs. An example is the Endometrial Receptivity Array (ERA) test, which is a microchip containing 238 genes. The use of this test is recommended in the natural cycle on LH + the 7th day of the menstrual cycle (MDC) or in the cycle with the use of hormone replacement therapy on the 5th day of the appointment of progesterone (18). The use of this chip made it possible to increase the frequency of implantation of embryos, according to various estimates, by 10–20% [19].
С помощью микроматричного анализа установлено, что у каждой четвертой пациентки с неудачными попытками эктракорпорального оплодотворения происходит смещение окна имплантации на 2 дня, что имеет фатальные последствия для реализации программы вспомогательных репродуктивных технологий [20]. Концепция универсального соответствия стадии «окна имплантации» 19-21 дню менструального цикла оказалась несостоятельной. В связи с этим, определение персонального «окна имплантации» и коррекция времени переноса эмбрионов может быть одним из способов повышения результативности программ ВРТ.Using microarray analysis, it was found that every fourth patient with unsuccessful attempts at in vitro fertilization has a shift of the implantation window by 2 days, which has fatal consequences for the implementation of the assisted reproductive technology program [20]. The concept of universal correspondence of the stage of the “implantation window” to 19-21 days of the menstrual cycle proved to be untenable. In this regard, the definition of a personal “implantation window” and the correction of embryo transfer time can be one of the ways to increase the effectiveness of ART programs.
В силу высокой стоимости исследований на основе микроматричного анализа, включающей стоимость наборов, оборудования и программной поддержки, этот метод в нашей стране не получил широкого распространения. Как альтернатива дорогому и трудоемкому методу микроматричного анализа предлагается метод обратной транскрипции и количественной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) - метод, не уступающий по чувствительности и специфичности микроматричному анализу, но более доступный для рутинного использования. Для определения персонального «окна имплантации» у женщин с неудачными попытками в программе ЭКО и ПЭ в отличие от аналога «Endometrial Receptivity Array (ERA)» предлагается исследование не сотен, а одного-двух десятков генов с помощью метода ОТ-ПЦР в режиме реального времени, а также интегральный критерий оценки транскрипционного профиля по соотношению уровней представленности транскриптов.Due to the high cost of research based on microarray analysis, including the cost of kits, equipment and software support, this method is not widespread in our country. As an alternative to the expensive and laborious method of microarray analysis, a reverse transcription and quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) method is proposed - a method that is not inferior in sensitivity and specificity to microarray analysis, but more affordable for routine use. To determine the personal “implantation window” in women with unsuccessful attempts in the IVF and PE program, in contrast to the Endometrial Receptivity Array (ERA) counterpart, a study is proposed of not one hundred, but one or two dozen genes using real-time RT-PCR method , as well as an integral criterion for assessing the transcriptional profile by the ratio of the levels of transcript representation.
На момент подачи заявки из свободных источников было известно о следующих наиболее близких аналогах:At the time of filing an application from free sources, the following closest analogues were known:
- Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием (патент РФ №2553340). Попов Ю.В., Бурыкина П.Н., Коган Е.А., Демура Т.А., Чупрынин В.Д., Аскольская С.И. Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с миомой матки. Способ заключается в определении количества пиноподий в поверхностном эпителии, уровня экспрессии рецепторов прогестерона и эстрогена-альфа в строме эндометрия, их соотношения, а также уровня экспрессии имплантационного фактора LIF на 21-24 день менструального цикла методом ИФА. Нарушение фертильности, связанное с миомой матки, диагностируется при количестве пиноподий менее 35%, уровне соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия менее 3,5, а также уровне экспрессии LIF менее 2 баллов. Данный метод предусмотрен только для пациенток, планирующих беременность, с миомой матки, не деформирующей полость матки и размерами миоматозных узлов до 5,0 см в диаметре.- A method for diagnosing endometrial receptivity disorders in patients with uterine myoma and infertility (RF patent No. 2553340). Popov Yu.V., Burykina P.N., Kogan E.A., Demura T.A., Chuprynin V.D., Askolskaya S.I. The invention relates to medicine, namely to gynecology, is intended for the diagnosis of reproductive dysfunction in patients with uterine myoma. The method consists in determining the number of pinopodia in the surface epithelium, the level of expression of progesterone and estrogen-alpha receptors in the endometrial stroma, their ratio, as well as the level of expression of the implantation factor LIF on days 21-24 of the menstrual cycle by ELISA. Fertility impairment associated with uterine myoma is diagnosed with pinopodia less than 35%, the expression ratio of progesterone and estrogen receptors in the endometrial stroma is less than 3.5, and the level of LIF expression is less than 2 points. This method is provided only for patients planning a pregnancy with uterine myoma not deforming the uterine cavity and the size of myomatous nodes up to 5.0 cm in diameter.
Описанный способ основан на методах морфологического и иммуногистохимического исследования тканей эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии. Недостатком данного способа диагностики является отсутствие интегрального критерия оценки нарушения фертильности. Не понятной остается интерпретация результатов, когда изменены не все показатели.The described method is based on methods of morphological and immunohistochemical studies of endometrial tissues obtained by pipeliopsy. The disadvantage of this diagnostic method is the lack of an integral criterion for assessing impaired fertility. The interpretation of the results remains unclear when not all indicators are changed.
- Способ прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (патент РФ №2562559). Айламазян Э.К., Джемлиханова Л.Х., Гзгзян A.M., Ниаури Д.А., Коган И.Ю., Шарфи Ю.Н. Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Преимущество данного способа состоит в интегральной оценке нескольких параметров: 1) определении оптической плотности экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) в поверхностном и железистом эпителии эндометрия в период «окна имплантации» в цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, 2) определении содержания сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в цервикальной слизи в день трансвагинальной пункции фолликулов, 3) определении систолодиастолического отношения (S/D) и индекса резистентности (IR) спиральных артерий в день введения триггера овуляции. На основании полученных показателей рассчитывают значение регрессионной функции (Z) по формуле. При значении Z>0 прогнозируют, что эндометрий рецептивен, а при Z<0 - эндометрий не рецептивен.- A method for predicting endometrial receptivity in in vitro fertilization cycles (RF patent No. 2562559). Ailamazyan E.K., Dzhemlikhanova L.Kh., Gzzzyan A.M., Niauri D.A., Kogan I.Yu., Sharfi Yu.N. The invention relates to medicine, namely to a method for predicting endometrial receptivity in in vitro fertilization cycles (IVF). The advantage of this method is the integrated assessment of several parameters: 1) determination of the optical density of expression of leukemia inhibitory factor (LIF) in the surface and glandular epithelium of the endometrium during the “implantation window” in the cycle prior to in vitro fertilization, 2) determination of the content of vascular endothelial growth factor (VEGF) in cervical mucus on the day of transvaginal puncture of the follicles, 3) determination of systolodiastolic ratio (S / D) and spiral resistance index (IR) GOVERNMENTAL arteries on the day of ovulation trigger. Based on the obtained indicators, the value of the regression function (Z) is calculated by the formula. With a value of Z> 0, it is predicted that the endometrium is receptive, and with Z <0, the endometrium is not receptive.
Описанный способ основан на методах допплерометрического исследования кровотока в сосудах матки, иммуногистохимического определения LIF в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии, а также исследования слизи цервикального канала на содержание VEGF методом мультиплексного ИФА-анализа. Предлагаемый способ отличается от данного аналога тем, что исследование может быть проведено в одном образце биологического материала (ткани эндометрия, полученные путем пайпель-биопсии) с использованием одного метода исследования - ОТ-ПЦР в режиме реального времени.The described method is based on the methods of Dopplerometric study of blood flow in the uterine vessels, immunohistochemical determination of LIF in endometrial tissues obtained by pipeliopsy, as well as the study of mucus of the cervical canal for VEGF content by multiplex ELISA analysis. The proposed method differs from this analogue in that the study can be carried out in one sample of biological material (endometrial tissues obtained by pipe-biopsy) using one research method - RT-PCR in real time.
Способ, описанный в аналоге, позволяет прогнозировать рецептивность эндометрия и наступление беременности в результате стимулированного цикла ЭКО. Предлагаемый способ дает возможность определения персонального «окна имплантации» и его последующего использования метода в естественных циклах и циклах заместительной гормональной терапии при переносах криоконсервированных/размороженных эмбрионов, а также коррекции времени переноса эмбриона.The method described in the analogue allows to predict the receptivity of the endometrium and the onset of pregnancy as a result of a stimulated IVF cycle. The proposed method makes it possible to determine a personal “implantation window” and its subsequent use in natural cycles and hormone replacement therapy cycles during transfers of cryopreserved / thawed embryos, as well as correction of the transfer time of the embryo.
3. Описание изобретения.3. Description of the invention.
Предложен способ оценки рецептивности эндометрия у пациенток, проходящих лечение бесплодия в программе ЭКО и ПЭ, по уровню представленности транскриптов отдельных функциональных генов в тканях эндометрия, полученных путем пайпель-биопсии на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8) с целью оптимизации времени переноса эмбрионов в полость матки, в первую очередь, криоконсервированных/размороженных эмбрионов.A method is proposed for evaluating the endometrial receptivity in patients undergoing infertility treatment in the IVF and PE program according to the level of transcripts of individual functional genes in endometrial tissues obtained by pipe-biopsy on days 7-8 after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8) s the goal of optimizing the time of transfer of embryos into the uterine cavity, primarily cryopreserved / thawed embryos.
В ходе исследования 71 образца эндометрия, соответствующих 19-21 дню менструального цикла, были выбраны наиболее информативные маркеры рецептивности эндометрия и предложен способ определения персонального «окна имплантации» у женщин, реализующих репродуктивную функцию в программе вспомогательных репродуктивных технологий, путем измерения уровня мРНК генов прогестаген-ассоциированного эндометриального протеина РАЕР, дипептидилпептидазы DPP4, главного комплекса гистосовместимости II класса DO-бета-цепь HLA-DOB и гомеобокса 7 НОХ7 (MSX1) по сравнению с уровнем представленности референсных генов, например, В2М, GUSB, ТВР.In the course of the study of 71 endometrial samples corresponding to the 19-21 day of the menstrual cycle, the most informative markers of endometrial receptivity were selected and a method was proposed for determining the personal “implantation window” in women implementing reproductive function in the assisted reproductive technology program by measuring the mRNA level of progestogen genes associated endometrial protein RAEP, dipeptidyl peptidase DPP4, major histocompatibility complex class II DO-beta chain HLA-DOB and homeobox 7 HOX7 (MSX1) compared correlation with the level of representation of reference genes, for example, B2M, GUSB, TBP.
В рецептивном эндометрии (эндометрий стадии средней секреции) по сравнению с пререцептивным (эндометрий стадии ранней секреции) экспрессия мРНК генов PAEP и DPP4 повышена в 144 и 46 раз, а экспрессия мРНК генов HLA-DOB и MSX1 снижена в 17,5 и 2,8 раз соответственно (p<0,001).In the receptive endometrium (endometrium of the stage of middle secretion) compared with the prereceptive (endometrium of the stage of early secretion), the expression of PAEP and DPP4 mRNA is increased by 144 and 46 times, and the expression of mRNA of the HLA-DOB and MSX1 genes is reduced by 17.5 and 2.8 times, respectively (p <0.001).
Уровень представленности мРНК предлагаемых генов может служить как дополнительным, так и независимым исследуемым параметром при оценке рецептивности эндометрия в образцах, полученных путем пайпель-биопсии на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8), диагностированного по данным УЗИ и/или мочевому тесту Clear Blue (Unipaht Ltd, Великобритания) в естественных или в циклах заместительной гормональной терапии, предшествующих переносу криоконсервированных/размороженных эмбрионов.The level of mRNA representation of the proposed genes can serve as an additional as well as an independent studied parameter when assessing endometrial receptivity in samples obtained by pipeliopsy on days 7-8 after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8), diagnosed by ultrasound and / or Clear Blue urine test (Unipaht Ltd, UK) in natural or hormone replacement therapy cycles prior to transferring the cryopreserved / thawed embryos.
Для оценки уровня представленности мРНК исследуемых генов в эндометрии можно использовать метод полимерзазной цепной реакции в режиме реального времени с предварительной стадией обратной транскрипции. Полученные значения уровней представленности транскриптов и их соотношения используют для группировки образцов методами кластерного и многофакторного анализа.To assess the level of mRNA representation of the studied genes in the endometrium, the real-time polymerase chain reaction method with a preliminary stage of reverse transcription can be used. The obtained values of transcript representation levels and their ratios are used to group samples by cluster and multivariate analysis methods.
В качестве примера, для выделения кластеров образцов может быть использован метод бинарной логистической регрессии. В этом случае индекс рецептивности эндометрия может быть рассчитан по формуле:As an example, to distinguish clusters of samples, the method of binary logistic regression can be used. In this case, the endometrial receptivity index can be calculated by the formula:
z - значение регрессионной функции, определяется по формуле:z is the value of the regression function, is determined by the formula:
где
Если значение функции р менее или равно пороговому значению (p≤cut off), делают заключение о несоответствии эндометрия стадии «окна имплантации»; если значение p>cut off, делают заключение о хорошей рецептивности эндометрия и его соответствии стадии окна имплантации. Пороговое значение определяют на основе экспериментальных данных с помощью ROC-анализа.If the value of the function p is less than or equal to the threshold value (p≤cut off), conclude that the endometrium does not match the stage of the “implantation window”; if the value p> cut off, a conclusion is made about the good receptivity of the endometrium and its compliance with the stage of the implantation window. The threshold value is determined based on experimental data using ROC analysis.
4. Реализация изобретения4. The implementation of the invention
Взятие материала путем пайпель-биопсии эндометрия на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8 д.м.ц.). Фрагменты тканей помещают в пластиковую пробирку объемом 1,5 мл, в которую предварительно внесено 700 мкл транспортной среды для стабилизации РНК в биопробах (например, IntactRNA, Евроген, Россия, кат № NL001), обрабатывают и хранят согласно Инструкции производителя. Выделение РНК проводят любым стандартным методом, например, согласно Инструкции к Комплекту реагентов для выделения РНК и ДНК «ПРОБА-НК/ПРОБА-НК-ПЛЮС» (ЗАО "НПФ ДНК-Технология", Россия, регистрационное удостоверение № ФСР 2010/08867 от 21.09.2010 г/, ТУ 9398-035-46482062-2009). Полученные препараты РНК желательно сразу использовать для постановки реакции обратной транскрипции.Taking material by endometrial pipe-biopsy on the 7-8th day after the peak of the luteinizing hormone (LH + 7-8 d.m.ts.). Tissue fragments are placed in a 1.5 ml plastic tube into which 700 μl of transport medium is preliminarily added to stabilize RNA in biological samples (for example, IntactRNA, Eurogen, Russia, cat. No. NL001), process and store according to the manufacturer's instructions. RNA isolation is carried out by any standard method, for example, according to the Instruction for the RNA and DNA Isolation Kit “PROBA-NK / PROBA-NK-PLUS” (NPF DNA-Technology CJSC, Russia, registration certificate No. ФСР 2010/08867 dated 21.09 .2010 g /, TU 9398-035-46482062-2009). It is advisable to immediately use the obtained RNA preparations for the formulation of the reverse transcription reaction.
Обратную транскрипцию проводят любым стандартным методом, например, согласно Инструкции к набору реагентов с использованием AMV-обратной транскриптазы (Fermentas, Литва, кат № ЕР0641) в комплектации с 5 х буфером для обратной транскрипции (состав: 250 mM Tris-HCl (рН 8.5 при 25°С), 40 mM MgCl2, 150 mM KCl, 5 mM DTT). В состав ОТ-смеси входят дНТФ в конечной концентрации 0,2 мМ каждого и смесь случайных гексамеров в конечной концентрации 0,5 рМ.Reverse transcription is carried out using any standard method, for example, according to the Instructions for the reagent kit using AMV reverse transcriptase (Fermentas, Lithuania, cat. No. EP0641) in combination with 5 x reverse transcription buffer (composition: 250 mM Tris-HCl (pH 8.5 at 25 ° C), 40 mM MgCl 2 , 150 mM KCl, 5 mM DTT). The composition of the RT mixture includes dNTP in a final concentration of 0.2 mM each and a mixture of random hexamers in a final concentration of 0.5 rM.
Для определения уровня представленности мРНК исследуемых генов используют стандартный метод ПЦР «в реальном времени» в стандартных условиях с праймерами и флуоресцентно-мечеными пробами (зонды), специфичными к последовательностям определяемых РНК. Для избежания обработки образцов ДНКазой лучше использовать олигонуклеотиды, не взаимодействующие с геномной ДНК. Например, на конечный объем реакционной смеси 35 мкл состав реакционной смеси может быть следующим: 66 мМ трис-HCl, рН 8,8, 16,6 мМ аммония сульфат, 0,01% Tween-20, 0,001% желатин, 3 мМ хлористый магний, по 250 мкМ каждого из дНТФ по 12.5 пмоль каждого праймера и зонда, 0,8 единиц Taq-полимеразы.To determine the level of mRNA representation of the studied genes, the standard “real-time” PCR method is used under standard conditions with primers and fluorescently-labeled samples (probes) specific to the sequences of the determined RNAs. To avoid processing the samples with DNase, it is better to use oligonucleotides that do not interact with genomic DNA. For example, for a final reaction volume of 35 μl, the composition of the reaction mixture may be as follows: 66 mM Tris-HCl, pH 8.8, 16.6 mM ammonium sulfate, 0.01% Tween-20, 0.001% gelatin, 3 mM magnesium chloride , 250 μM each of dNTPs 12.5 pmol of each primer and probe, 0.8 units of Taq polymerase.
Для повышения чувствительности и специфичности реакции желательно использовать «горячий» старт, который обеспечивается либо использованием Taq-полимеразы, активируемой при высокой температуре, либо методикой приготовления реакционной смеси, состоящей из двух слоев, разделенных слоем парафина. Нижний слой содержит дНТФ, праймеры и зонд, верхний - матрицу и Taq-полимеразу. Смешение слоев и превращение их в реакционную смесь происходит только при плавлении парафина, что исключает неспецифический отжиг праймеров на ДНК-мишени при начальном прогреве пробирки.To increase the sensitivity and specificity of the reaction, it is desirable to use a “hot” start, which is ensured either by using Taq polymerase activated at high temperature or by the method of preparation of the reaction mixture consisting of two layers separated by a paraffin layer. The lower layer contains dNTP, primers and a probe, the upper layer contains a matrix and Taq polymerase. The layers are mixed and converted into a reaction mixture only when paraffin is melted, which eliminates non-specific annealing of the primers on the target DNA during initial heating of the tube.
Проявку накопления продуктов реакции проводят с помощью флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов (зондов) или интекалирующих красителей. Уровень представленности транскриптов и их соотношение можно рассчитывать с помощью метода ΔCq.The manifestation of the accumulation of reaction products is carried out using fluorescently-labeled oligonucleotides (probes) or intercalating dyes. The level of transcript representation and their ratio can be calculated using the ΔCq method.
Полученные значения уровней представленности транскриптов и их соотношения используют для группировки образцов методами кластерного и многофакторного анализа.The obtained values of transcript representation levels and their ratios are used to group samples by cluster and multivariate analysis methods.
Пример использования изобретенияAn example of using the invention
В амбулаторных условиях с помощью аспирационной кюретки «Pipelle de Cornier» (Laboratorie C.C.D.», Франция) проведена аспирационная пайпель-биопсия эндометрия. Обследовано две группы женщин репродуктивного возраста. Первую группу составили 47 пациенток с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, обратившихся для проведения программы ЭКО и ПЭ, с успешным результатом реализации данной программы. Критериями включения пациенток в исследование были: возраст женщин до 39 лет; регулярный менструальный цикл; трубно-перитонеальный фактор бесплодия; сохраненный овариальный резерв; наличие в анамнезе не более 3-х неудачных попыток ЭКО; отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ; отсутствие противопоказаний к проведению ЭКО и вынашиванию беременности; фертильная или субфертильная сперма супруга; нормальный кариотип обоих супругов. Критерии исключения: бесплодие, обусловленное иммунологическим фактором; бесплодие, связанное с отсутствием овуляции; миома матки любых размеров; острые воспалительные заболевания органов малого таза; хронические заболевания в стадии обострения; олигоастенотератозооспермия (по нормативам ВОЗ, 2010 год); пороки развития внутренних половых органов; соматические и психические заболевания, являющиеся противопоказанием для вынашивания беременности и родов. Биоптат эндометрия получен на 7-8 день после пика лютеинизирующего гормона (ЛГ+7-8 д.м.ц.), диагностированного по данным УЗИ и/или мочевому тесту Clear Blue (Unipath Ltd, Великобритания), основанном на определении уровня ЛГ в моче. Пайпель-биопсия выполнена в цикле, предшествующем стимуляции суперовуляции.On an outpatient basis, using an aspiration curette “Pipelle de Cornier” (Laboratorie C.C.D. ”, France), an endometrial aspiration pipeline biopsy was performed. Two groups of women of reproductive age were examined. The first group consisted of 47 patients with tubal-peritoneal infertility factor who applied for the IVF and PE program, with a successful outcome of this program. The criteria for inclusion of patients in the study were: the age of women under 39; regular menstrual cycle; tubal-peritoneal factor of infertility; stored ovarian reserve; history of no more than 3 unsuccessful IVF attempts; the absence of endometrial pathology according to ultrasound; the absence of contraindications for IVF and gestation; spouse fertile or subfertile sperm; normal karyotype of both spouses. Exclusion criteria: infertility due to an immunological factor; infertility associated with a lack of ovulation; uterine fibroids of any size; acute inflammatory diseases of the pelvic organs; chronic diseases in the acute stage; oligoastenoteratozoospermia (according to WHO guidelines, 2010); malformations of the internal genital organs; somatic and mental diseases, which are a contraindication for gestation of pregnancy and childbirth. An endometrial biopsy was obtained 7-8 days after the peak of luteinizing hormone (LH + 7-8 dm.ts.), diagnosed by ultrasound and / or urine test Clear Blue (Unipath Ltd, UK), based on the determination of LH level in urine. Pipel biopsy was performed in a cycle prior to stimulation of superovulation.
Вторую группу составили 24 условно-здоровые женщины (группа сравнения), обратившихся с целью профилактического осмотра или подбора средств контрацепции. Критерии включения: возраст женщин до 39 лет; регулярный 28-дневный менструальный цикл; наличие детей; отсутствие патологии эндометрия по данным УЗИ, соответствие эндометрия 19-21 дню менструального цикла. Критерии исключения: миома матки любых размеров; острые воспалительные заболевания органов малого таза; хронические заболевания в стадии обострения.The second group consisted of 24 conditionally healthy women (comparison group) who applied for the purpose of a routine examination or selection of contraception. Inclusion criteria: women age up to 39 years; regular 28-day menstrual cycle; the presence of children; the absence of endometrial pathology according to ultrasound, the correspondence of the endometrium to 19-21 days of the menstrual cycle. Exclusion criteria: uterine fibroids of any size; acute inflammatory diseases of the pelvic organs; chronic diseases in the acute stage.
Помимо исследования транскрипционного профиля генов выполнено гистологическое исследование. Биоптаты эндометрия фиксировали в 10%-м нейтральном формалине в течение 24 часов, после соответствующей стандартной обработки заключали в парафин. Срезы толщиной 5 мкн окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование гистологических препаратов проводилось в световом микроскопе при увеличении от ×50 до ×400.In addition to studying the transcriptional profile of genes, a histological study was performed. Endometrial biopsies were fixed in 10% neutral formalin for 24 hours, after appropriate standard processing they were enclosed in paraffin. Sections 5 microns thick were stained with hematoxylin and eosin. The study of histological preparations was carried out under a light microscope at magnifications from × 50 to × 400.
Кластерный анализ результатов исследования транскрипционных профилей генов позволил выделить 2 группы образцов: пререцептивного и рецептивного эндометрия (фиг. 1). На фигуре представлены тепловые карты дерева иерархической классификации 71 образца тканей биоптатов эндометрия на основе исследования уровней экспрессии мРНК функциональных генов с помощью количественной ОТ-ПЦР. Выделено две группы образцов, которые можно охарактеризовать как пререцептивный и рецептивный эндометрий. По градиенту изменения содержания транскриптов темно-серым цветом отмечены образцы с высоким уровнем экспрессии, светло-серым - с низким.Cluster analysis of the results of the study of transcriptional gene profiles allowed us to distinguish 2 groups of samples: prereceptive and receptive endometrium (Fig. 1). The figure shows heat maps of a tree of hierarchical classification of 71 tissue samples of endometrial biopsies based on a study of the levels of mRNA expression of functional genes using quantitative RT-PCR. Two groups of samples were identified that can be described as prereceptive and receptive endometrium. According to the gradient of the transcript content change, samples with a high level of expression are marked with dark gray, light gray with low.
Разделение на группы хорошо соотносилось, однако не во всех случаях совпадало с данными гистологического исследования биоптатов эндометрия. Так, только 27 (77,1%) из 35 образцов стадии средней секреции согласно данным гистологического исследования были определены методом ОТ-ПЦР как «рецептивный эндометрий». 8 образцов, идентифицированных гистологическим методом как стадия средней секреции, функционально были незрелыми и не готовыми к имплантации эмбриона, все они относились к группе женщин с бесплодием.The division into groups was well correlated, but not in all cases it coincided with the data of a histological examination of endometrial biopsies. So, only 27 (77.1%) of 35 samples of the stage of medium secretion according to histological data were determined by RT-PCR as “receptive endometrium”. Eight samples identified by the histological method as the stage of medium secretion were functionally immature and not ready for implantation of the embryo; all of them belonged to the group of women with infertility.
Из 36 образцов стадии ранней секреции согласно данным гистологического исследования 32 (88,9%) были определены методом ОТ-кПЦР как «пререцептивный эндометрий». 4 образца, идентифицированных гистологическим методом как стадия ранней секреции, функционально были готовыми к нидации эмбриона, все они также относились к группе женщин с бесплодием.According to the histological data, 32 out of 36 samples of the stage of early secretion were determined by RT-qPCR as “prereceptive endometrium” according to histological data. Four samples identified by the histological method as the stage of early secretion were functionally ready for nidation of the embryo, all of them also belonged to the group of women with infertility.
Разделения образцов в отдельные кластеры в зависимости от группы обследованных женщин (группа сравнения или женщины с бесплодием) не наблюдалось.Separation of samples into separate clusters was not observed depending on the group of women examined (comparison group or women with infertility).
В рецептивном эндометрии по сравнению с пререцептивным была повышена экспрессия мРНК генов РАЕР в 144 раза (53-663, р=5,8×10-14), GPX3 в 143 (61-299, р=1,5×10-12), IGFBP1 в 52 раза (3,7-3395, р=2,8×10-7), DPP4 в 46 (16-138, р=1,7×10-12), НАВР2 в 26 (14-54, р=4,0×10-11), AQP3 в 5,9 (1,7-8,5, р=1,0×10-7), IMPA2 в 4,7 (3,6-7,8, p=2,5×10-11), TAGLN в 3,3 (2,7-8,1, р=1,5×10-9), ММР7 в 2,4 (1,2-6,4, р=0,03) раз, снижена экспрессия мРНК генов HLA-DOB в 17,5 (9,5-26,5, р=8,2×10-12), MSX1 в 2,8 (1,4-4,2, р=3,4×10-7), POSTN в 1,6 (0,9-3,3, р=0,002) раз (фиг. 2). На фигуре отражено изменение уровня экспрессии мРНК функциональных генов в биоптатах тканей эндометрия женщин в пререцептивном и рецептивном эндометрии. По оси «x» перечислены гены. Значение медианы уровня экспрессии мРНК в пререцептивном эндометрии принято за 1 о.е. По оси «y» отложено значение медианы уровня экспрессии мРНК в тканях рецептивного эндометрия (данная величина показывает во сколько раз количество мРНК выше по сравнению с пререцептивным эндометрием). Столбцы, направленные вверх, свидетельствуют о повышении экспрессии, вниз - о понижении.In the receptive endometrium, as compared with the preceptive one, the expression of mRNA of the RAEP genes was increased by 144 times (53-663, p = 5.8 × 10 -14 ), GPX3 by 143 (61-299, p = 1.5 × 10 -12 ) IGFBP1 52 times (3.7-3395, p = 2.8 × 10 -7 ), DPP4 46 (16-138, p = 1.7 × 10 -12 ), NAVP2 26 (14-54, p = 4.0 × 10 -11 ), AQP3 at 5.9 (1.7-8.5, p = 1.0 × 10 -7 ), IMPA2 at 4.7 (3.6-7.8, p = 2.5 × 10 -11 ), TAGLN at 3.3 (2.7-8.1, p = 1.5 × 10 -9 ), MMP7 at 2.4 (1.2-6.4, p = 0.03) times, decreased mRNA expression of HLA-DOB genes by 17.5 (9.5-26.5, p = 8.2 × 10 -12 ), MSX1 by 2.8 (1.4-4 , 2, p = 3.4 × 10 -7 ), POSTN 1.6 (0.9-3.3, p = 0.002) times (Fig. 2). The figure shows the change in the level of expression of mRNA of functional genes in biopsy samples of endometrial tissues of women in preceptive and receptive endometrium. The x-axis lists genes. The median value of the mRNA expression level in the preceptive endometrium is taken as 1 p.u. The y axis shows the median of the mRNA expression level in the tissues of the receptive endometrium (this value shows how many times the amount of mRNA is higher compared with prereceptive endometrium). Columns directed upwards indicate an increase in expression, downwards indicate a decrease.
На основе многофакторного анализа подобрана дискриминантная функция, позволяющая классифицировать образцы по уровню экспрессии 4 генов: РАЕР, DPP4, MSX1 и HLA-DOB. Уравнение линейной функции имело вид:Based on multivariate analysis, a discriminant function was selected that allows us to classify samples according to the expression level of 4 genes: PAEP, DPP4, MSX1 and HLA-DOB. The equation of the linear function was:
z - классифицирующая дискриминантная функция;z - classifying discriminant function;
Распределение значения ИРЭ в образцах представлено на рисунке (фиг. 3). Оптимальное значение величины порога отсечения (точки cut off) определено с помощью ROC-анализа. Площадь под ROC-кривой составила AUC=1,0 (р=6,6×10-13). Пороговое значение (cut off) ИРЭ составило 62. Значения показателей cut off выше 62 классифицирует образцы как «рецептивный эндометрий». Чувствительность и специфичность предложенного метода оценки рецептивности эндометрия в области порогового значения составила 100% по сравнению с кластерным анализом.The distribution of the IRE value in the samples is shown in the figure (Fig. 3). The optimal value of the cutoff threshold (cut off points) was determined using ROC analysis. The area under the ROC curve was AUC = 1.0 (p = 6.6 × 10 -13 ). The cut-off value of the IRE was 62. The cut off values above 62 classify the samples as “receptive endometrium”. The sensitivity and specificity of the proposed method for assessing endometrial receptivity in the region of the threshold value was 100% compared with the cluster analysis.
ЛИЕРАТУРАLIERATURE
1. Noyes R.W., Hertig AT., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil Steril. 1950; 1: 3-17.1. Noyes R.W., Hertig AT., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Fertil Steril. 1950; 1: 3-17.
2. Noyes R.W., Hertig A.T., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol. 1975; 122: 262-263.2. Noyes R.W., Hertig A.T., Rock J. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol. 1975; 122: 262-263.
3. Murray M.J., Meyer W.R., Zaino R.J., Lessey B.A., Novotny D.B., Ireland K, et al. A critical analysis of the accuracy, reproducibility, and clinical utility of histologic endometrial dating in fertile women. Fertil Steril. 2004; 81: 1333-1343.3. Murray M.J., Meyer W.R., Zaino R.J., Lessey B.A., Novotny D. B., Ireland K, et al. A critical analysis of the accuracy, reproducibility, and clinical utility of histologic endometrial dating in fertile women. Fertil Steril. 2004; 81: 1333-1343.
4. Coutifaris C., Myers E.R., Guzick D.S., Diamond M.P., Carson S.A., Legro R.S., et al. Histological dating of timed endometrial biopsy tissue is not related to fertility status. Fertil Steril. 2004; 82: 1264-1272.4. Coutifaris C., Myers E.R., Guzick D.S., Diamond M.P., Carson S.A., Legro R.S., et al. Histological dating of timed endometrial biopsy tissue is not related to fertility status. Fertil Steril. 2004; 82: 1264-1272.
5. Ponnampalam A.P., Weston G.C., Trajstman A.C., Susil В., Rogers PA. Molecular classification of human endometrial cycle stages by transcriptional profiling. Mol Hum Reprod. 2004; 10 (12): 879-893.5. Ponnampalam A.P., Weston G.C., Trajstman A.C., Susil B., Rogers PA. Molecular classification of human endometrial cycle stages by transcriptional profiling. Mol Hum Reprod. 2004; 10 (12): 879-893.
6. Talbi S., Hamilton A.E., Vo K.C., Tulac S., Overgaard M.T., Dosiou C., Le Shay N., Nezhat C.N., Kempson R., Lessey B.A., Nayak N.R., Giudice L.C. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 2006; 147 (3): 1097-1121.6. Talbi S., Hamilton A.E., Vo K.C., Tulac S., Overgaard M.T., Dosiou C., Le Shay N., Nezhat C.N., Kempson R., Lessey B.A., Nayak N.R., Giudice L.C. Molecular phenotyping of human endometrium distinguishes menstrual cycle phases and underlying biological processes in normo-ovulatory women. Endocrinology. 2006; 147 (3): 1097-1121.
7. Kao L.C., Germeyer A., Tulac S., Lobo S., Yang J.P., Taylor R.N., et al. Expression profiling of endometrium from women with endometriosis reveals candidate genes for disease based implantation failure and infertility. Endocrinology. 2003; 144: 2870-2881.7. Kao L.C., Germeyer A., Tulac S., Lobo S., Yang J.P., Taylor R.N., et al. Expression profiling of endometrium from women with endometriosis reveals candidate genes for disease based implantation failure and infertility. Endocrinology. 2003; 144: 2870-2881.
8. Borthwick J., Charnock-Jones S., Tom B.D., Hull M.L., Teirney R., Phillips S.C., et al. Determination of the transcript profile of human endometrium. Mol Hum Reprod. 2003; 9: 19-33.8. Borthwick J., Charnock-Jones S., Tom B. D., Hull M. L., Teirney R., Phillips S. C., et al. Determination of the transcript profile of human endometrium. Mol Hum Reprod. 2003; 9: 19-33.
9. Kuokkanen S., Chen В., Ojalvo L., Benard L., Santoro N., Pollard J.W. Genomic profiling of microRNAs and messenger RNAs reveals hormonal regulation in microRNA expression in human endometrium. Biol Reprod. 2010; 82 (4): 791-801.9. Kuokkanen S., Chen B., Ojalvo L., Benard L., Santoro N., Pollard J.W. Genomic profiling of microRNAs and messenger RNAs reveals hormonal regulation in microRNA expression in human endometrium. Biol Reprod. 2010; 82 (4): 791-801.
10. Diaz-Gimeno P, Horcajadas JA, Martmez-Conejero JA, Esteban FJ,
11. Carson D., Lagow E., Thathiah A., Al-Shami R., Farach-Carson M.C., Vernon M., et al. Changes in gene expression during the early to mid-luteal (receptive phase) transition in human endometrium detected by high-density microarray screening. Mol Hum Reprod. 2002; 8: 971-979.11. Carson D., Lagow E., Thathiah A., Al-Shami R., Farach-Carson M.C., Vernon M., et al. Changes in gene expression during the early to mid-luteal (receptive phase) transition in human endometrium detected by high density microarray screening. Mol Hum Reprod. 2002; 8: 971-979.
12. Riesewijk A., Martin J., Horcajadas J.A., Polman J., Pellicer A., Mosselman S., et al. Gene expression profiling of human endometrial receptivity on days LH+2 versus LH+7 by microarray technology. Mol Hum Reprod. 2003; 9: .253-264.12. Riesewijk A., Martin J., Horcajadas J.A., Polman J., Pellicer A., Mosselman S., et al. Gene expression profiling of human endometrial receptivity on days LH + 2 versus LH + 7 by microarray technology. Mol Hum Reprod. 2003; 9: .253-264.
13. Mirkin S., Arslan M., Churikov D., Corica A., Diaz J.I., Williams S., et al. In search of candidate genes critically expressed in the human endometrium during the window of implantation. Hum Reprod. 2005; 20: 2104-2117.13. Mirkin S., Arslan M., Churikov D., Corica A., Diaz J.I., Williams S., et al. In search of candidate genes critically expressed in the human endometrium during the window of implantation. Hum Reprod. 2005; 20: 2104-2117.
14. Franchi A., Zaret J., Zhang X., Bocca S., Oehninger S. Expression of immunomodulatory genes, their protein products and specific ligands/receptors during the window of implantation in the human endometrium. Mol Hum Reprod. 2008; 14 (7): 413-421.14. Franchi A., Zaret J., Zhang X., Bocca S., Oehninger S. Expression of immunomodulatory genes, their protein products and specific ligands / receptors during the window of implantation in the human endometrium. Mol Hum Reprod. 2008; 14 (7): 413-421.
15. Haouzi D., Mahmoud K., Fourar M., Bendhaou K., Dechaud H., De Vos J.,
16. Tseng L.H., Chen I., Chen M.Y., Yan H., Wang C.N., Lee C.L. Genome-based expression profiling as a single standardized microarray platform for the diagnosis of endometrial disorder: an array of 126-gene model. Fertil Steril. 2010; 94 (1): 114-119.16. Tseng L.H., Chen I., Chen M.Y., Yan H., Wang C.N., Lee C.L. Genome-based expression profiling as a single standardized microarray platform for the diagnosis of endometrial disorder: an array of 126-gene model. Fertil Steril. 2010; 94 (1): 114-119.
17. Critchley H.O., Robertson K.A., Forster Т., Henderson T.A., Williams A.R., Ghazal P. Gene expression profiling of mid to late secretory phase endometrial biopsies from women with menstrual complaint. Am J Obstet Gynecol. 2006; 195 (2): 406.e1-416.17. Critchley H.O., Robertson K.A., Forster T., Henderson T.A., Williams A.R., Ghazal P. Gene expression profiling of mid to late secretory phase endometrial biopsies from women with menstrual complaint. Am J Obstet Gynecol. 2006; 195 (2): 406.e1-416.
18. Garrido-Gomez Т., Ruiz-Alonso M., Blesa D., Diaz-Gimeno P., Vilella F.,
19. Mahajan N. Endometrial receptivity array: Clinical application. J Hum Reprod Sci. 2015; 8(3): 121-129.19. Mahajan N. Endometrial receptivity array: Clinical application. J Hum Reprod Sci. 2015; 8 (3): 121-129.
20. Ruiz-Alonso M., Galindo N., Pellicer A.,
Описание фигурDescription of figures
Фиг. 1. Тепловые карты дерева иерархической классификацииFIG. 1. Heat maps of the hierarchical classification tree
Фиг. 2. Изменение уровня экспрессии мРНК функциональных генов в биоптатах тканей эндометрия женщин в пререцептивном (стадия средней секреции) и рецептивном эндометрии (стадия средней секреции - окно имплантации).FIG. 2. Change in the level of mRNA expression of functional genes in biopsy specimens of endometrial tissues of women in prereceptive (stage of middle secretion) and receptive endometrium (stage of middle secretion - implantation window).
Фиг. 3. Распределение индекса рецептивности эндометрия в кластерах пререцептивного и рецептивного эндометрия.FIG. 3. Distribution of the endometrial receptivity index in prereceptive and receptive endometrial clusters.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016142462A RU2636527C1 (en) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016142462A RU2636527C1 (en) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2636527C1 true RU2636527C1 (en) | 2017-11-23 |
Family
ID=63853216
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016142462A RU2636527C1 (en) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2636527C1 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2735218C1 (en) * | 2020-02-19 | 2020-10-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of implantation in programs of ancillary reproductive technology in women of senior reproductive age with tuboperitoneal infertility factor |
| WO2020215902A1 (en) * | 2019-04-22 | 2020-10-29 | 苏州亿康医学检验有限公司 | Method of determining endometrial receptivity and application thereof |
| RU2765639C1 (en) * | 2021-06-15 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for estimation of implantation status of endometry based on endometrial expression vdr, hoxa 11 in art programs in elder reproductive women with tube-bodybodyes |
| RU2770288C1 (en) * | 2021-03-24 | 2022-04-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for predicting implantation and childbirth in art programs in women of older reproductive age with tuboperitoneal infertility factor based on the level of endometrial expression of hoxa11 |
| RU2783247C1 (en) * | 2021-08-05 | 2022-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of live birth in ivf programs in women of late reproductive age with tubal-peritoneal infertility factor |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2553340C1 (en) * | 2014-04-21 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Diagnostic technique for disturbed endometrial receptivity in patients suffering uterine myoma and infertility |
| RU2562559C1 (en) * | 2014-05-27 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук | Method for prediction of endometrial receptivity in in vitro fertilisation cycles |
| RU2580629C1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of endometrial receptivity based on evaluation of expression and intracellular localisation of ezrin in sterile women and repeated failures of ivf program |
| RU2597845C1 (en) * | 2015-06-25 | 2016-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Method for improvement of endometrial receptivity in patients suffering from infertility associated with endometriosis |
-
2016
- 2016-10-28 RU RU2016142462A patent/RU2636527C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2553340C1 (en) * | 2014-04-21 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Diagnostic technique for disturbed endometrial receptivity in patients suffering uterine myoma and infertility |
| RU2562559C1 (en) * | 2014-05-27 | 2015-09-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта" Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук | Method for prediction of endometrial receptivity in in vitro fertilisation cycles |
| RU2580629C1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for prediction of endometrial receptivity based on evaluation of expression and intracellular localisation of ezrin in sterile women and repeated failures of ivf program |
| RU2597845C1 (en) * | 2015-06-25 | 2016-09-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Method for improvement of endometrial receptivity in patients suffering from infertility associated with endometriosis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| A.A. ACOSTA et al. Endometrial dating and determination of the window of implantation in healthy fertile women / FERTILITY AND STERILITY, 2000, V. 73, p.788-798. * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020215902A1 (en) * | 2019-04-22 | 2020-10-29 | 苏州亿康医学检验有限公司 | Method of determining endometrial receptivity and application thereof |
| RU2735218C1 (en) * | 2020-02-19 | 2020-10-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of implantation in programs of ancillary reproductive technology in women of senior reproductive age with tuboperitoneal infertility factor |
| RU2770288C1 (en) * | 2021-03-24 | 2022-04-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for predicting implantation and childbirth in art programs in women of older reproductive age with tuboperitoneal infertility factor based on the level of endometrial expression of hoxa11 |
| RU2765639C1 (en) * | 2021-06-15 | 2022-02-01 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for estimation of implantation status of endometry based on endometrial expression vdr, hoxa 11 in art programs in elder reproductive women with tube-bodybodyes |
| RU2783247C1 (en) * | 2021-08-05 | 2022-11-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Южно-Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ЮУГМУ Минздрава России) | Method for prediction of live birth in ivf programs in women of late reproductive age with tubal-peritoneal infertility factor |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lédée-Bataille et al. | Role of the endometrial tripod interleukin-18,-15, and-12 in inadequate uterine receptivity in patients with a history of repeated in vitro fertilization–embryo transfer failure | |
| Makker et al. | Endometrial expression of homeobox genes and cell adhesion molecules in infertile women with intramural fibroids during window of implantation | |
| JP5117852B2 (en) | Prognosis method and kit for breast cancer | |
| Liu et al. | Gene expression profiling of human peri-implantation endometria between natural and stimulated cycles | |
| Baczyk et al. | Complex patterns of GCM1 mRNA and protein in villous and extravillous trophoblast cells of the human placenta | |
| Várkonyi et al. | Microarray profiling reveals that placental transcriptomes of early-onset HELLP syndrome and preeclampsia are similar | |
| US10208350B2 (en) | Methods and systems for assessing infertility and related pathologies | |
| Cuman et al. | Preimplantation human blastocysts release factors that differentially alter human endometrial epithelial cell adhesion and gene expression relative to IVF success | |
| CA2732849C (en) | Gene expression profile as an endometrial receptivity marker | |
| RU2636527C1 (en) | Method of determining personal "implantation window" in women based on analysis of transcryption profile of genes | |
| KR102089559B1 (en) | Biomarker for diagnosing or predicting reactivity to FSH of ovary | |
| Margioula-Siarkou et al. | LIF endometrial expression is impaired in women with unexplained infertility while LIF-R expression in all infertility sub-groups | |
| CN101014720B (en) | Methods and kits for the prognosis of breast cancer | |
| Zeng et al. | Expression of H19 imprinted gene in patients with repeated implantation failure during the window of implantation | |
| O’Brien et al. | Upregulation of PSCDBP, TLR2, TWIST1, FLJ35382, EDNRB, and RGS12 gene expression in human myometrium at labor | |
| US20140206572A1 (en) | Ovarian markers of follicular maturity and uses thereof | |
| Lédée et al. | Endometrial immune profiling and precision therapy increase live birth rate after embryo transfer: a randomised controlled trial | |
| Atia et al. | Azoospermia factor microdeletion in infertile men with idiopathic severe oligozoospermia or non-obstructive azoospermia | |
| Roudebush et al. | Expression of the platelet-activating factor receptor in human spermatozoa: differences in messenger ribonucleic acid content and protein distribution between normal and abnormal spermatozoa | |
| Alfer et al. | Endometrial delay is found to be part of a normal individual dynamic transformation process | |
| CN103958698A (en) | Method for quantification of renal markers by urinalysis | |
| Meng et al. | A combined clinical and specific genes’ model to predict live birth for in vitro fertilization and embryo transfer patients | |
| US20190276890A1 (en) | Gene expression profile as an endometrial receptivity marker | |
| WO2019219811A1 (en) | Kit and method for determining the receptivity status of an endometrium | |
| Schöniger et al. | Expression of toll-like receptors 2, 4 and 6 in the equine chorioallantois |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181029 |